PT2246061E - Extracto de brachystemma calycinum para a osteoartrite - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "EXTRACTO DE BRACHYSTEMMA CALYCINUM PARA A OSTEOARTRITE"

CAMPO DO INVENTO 0 presente invento está em geral relacionado com o campo de dietéticos e suplementos de saúde vendidos ao balcão, e produtos botânicos. Em particular, o presente invento relaciona-se com um extracto medicinal de bracinstemma calycinum para a melhoria ou tratamento da dor ou desconforto devido a, ou associado com, osteoartrite.

ANTECEDENTES DO INVENTO

As referências que estão citadas na presente revelação não são necessariamente técnica anterior e portanto a sua citação não constitui uma admissão de que tais referências são técnica anterior em qualquer jurisdição. A planta Brachystemma calycinum D. Don (B. calycinum) é uma planta indígena do sudoeste da China, os Himalaias e o seu habitat estende-se para o sul tanto quanto o sudeste da Ásia. Na China, a planta é conhecida como "duanfan hua". A planta é relativamente desconhecida da comunidade científica e muito pouco foi publicado fora da literatura da taxonomia e sistemática de plantas. 2 ΡΕ2246061

Em 2001, foi publicado um artigo descrevendo quatro peptideos cíclicos menores isolados de extractos metanólicos desta planta (Cheng et al) . Em 2002, Cheng et ai isolaram cinco compostos contendo azoto de um extracto de etanol da planta. Foram também isolados quatro novos alcaloides das raízes da planta por Cheng et ai. É um objectivo do presente invento ensinar um uso para o extracto desta planta.

SUMARIO DO INVENTO

Revelado é o método de preparar o extracto da planta Brachystemma calycinum. O método do presente invento compreende geralmente providenciar a planta, acidificar a planta num ácido adequado, decocção da planta num líquido adequado, filtração da decocção e concentração da decocção para obter um extracto mdicinal que é o segundo aspecto do presente invento.

Também revelado é providenciar a planta seca, acidificar a planta seca embebendo-a em vinagre de arroz, aquecer a planta embebida em ácido à secura, e decocção da planta em água com osso animal, de preferência osso de porco, repetir a decocção, combinar os filtrados destas duas decocções, e concentrar os filtrados para formar um extracto. O extracto medicinal pode ainda ser processado para o tornar mais adequado para administração oral. 3 ΡΕ2246061

Ainda revelada é a aplicação de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um extracto de Brachystemma calycinum preparado pelo método ensinado na melhoria de lesão na articulação e desconforto devido a, ou associado com, osteoartrite. Esta aplicação pode ser para profilaxia ou para terapia da queixa. 0 presente invento é o uso de um extracto de Brachystemma calycinum na manufactura de um medicamento para o tratamento terapêutico e/ou tratamento profiláctico de osteoartrite.

Também revelada é uma formulação para o tratamento de osteoartrite, compreendendo a formulação um extracto da planta acidificada Brachystemma calycinum. 0 presente invento pode também ser usado como um suplemento nutricional ou de saúde.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS FIG. 1 é o cromatograma de HPLC para o extracto preparado como uma amostra aquosa para análise por HPLC. FIG. 2 é o cromatograma de HPLC para o extracto preparado como uma amostra etanólica para análise por HPLC. FIG. 3 é o cromatograma de HPLC a resolução um 4 ΡΕ2246061 para o extracto refluxado com acetato de etilo para análise por HPLC. FIG. 4 é o cromatograma da FIG. 3 representado a uma outra resolução.

DESCRIÇÃO DETALHADA

Como usado na presente especificação e reivindicações, os termos "compreender", "compreende" e "compreendendo" significam "incluindo, mas não necessariamente limitados a". Por exemplo, um método, equipamento, molécula ou outro item que contenha A, B e C pode ser dito de modo exacto compreender A e B. Da mesma forma, um método, equipamento, molécula ou outro item que "compreenda A e B" pode incluir qualquer número de passos, componentes, átomos bem como outros items adicionais.

Também, salvo definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos usados aqui têm o mesmo significado que o correntemente compreendido por um especialista ordinário na técnica da medicina tradicional chinesa (MTC) à qual este invento pertence. Embora quaisquer métodos ou materiais similares àqueles descritos aqui possam ser usados na prática de teste do presente invento, apenas é descrito o modelo de realização preferido. Utilizando a descrição abaixo, um especialista na técnica da preparação e uso de fitoterapia chinesa pode prontamente praticar os métodos do invento reivindicado. 5 ΡΕ2246061

Quando o material seco é tradicionalmente usado e preferido na fitoterapia chinesa, deve ser reconhecido que a secagem dos materiais das plantas facilita o seu armazenamento, transporte e processamento subsequente. A secagem pode não ser um requisito donde derivem os benefícios destas plantas. Como tal, é compreendido que o presente invento pode também ser praticado também com a quantidade correspondente de material fresco da planta. 0 uso de material fresco de planta, suficiente para atingir a quantidade necessária e proporções do extracto usado, vem no âmbito das presentes reivindicações.

Um especialista na técnica apreciará que é possível, com culturas de células e tecidos da planta, cultivar as células e tecido desta planta in vitro e extrair quaisquer componentes activos de interesse destas células e tecido. Assim, enquanto a extracção dos componentes activos das partes de planta seca é preferível e ensinado, a extracção destes componentes desta planta a partir de células e tecido da planta em cultura permanecem dentro do âmbito e espírito das presentes reivindicações.

As técnicas ensinadas incluem reduzir o tamanho do material da planta durante o processamento. Aqui, o processo de redução pode ser atingido por um número de vias incluindo, mas não estando limitado a, cortar, cortar em bocadinhos, picar, triturar, pulverizar, macerar, moer. Enquanto se pode ensinar uma via preferida, podem também ΡΕ2246061 ser usados outros meios de atingir uma redução no tamanho dos materiais. 0 que se segue é um exemplo de como o presente invento pode ser posto em prática.

Provisão da planta

Para usar de acordo com o presente invento, a planta Brachystemma calycinum (a seguir referida como B. calycinum) , é usualmente recolhida na província de Yunnan da China principalmente na Primavera e Verão, e limpa de solo e outro material estranho, lavada e seca. A planta pode ser reduzida, manualmente ou mecanicamente, em bocadinhos de 10-15 mm de comprimento (por exemplo, cortando ou cortando em pedaços) para facilitar a secagem. A secagem da planta pode ser feita ao sol ou em estufa de secagem de temperatura controlada mas a planta é preferencialmente seca à sombra. O fornecimento forçado de ar pode acelerar a secagem da planta. A planta é seca até o seu teor em humidade ser inferior a 10%. A seguir, a planta pode ser ainda triturada, se desejável.

Acidificação da planta

Para realizar a extracção, 100 kg de planta seca triturada (ambas as partes aéreas e subterrâneas) são embebidos em 25 kg de vinagre de arroz chinês num recipiente resistente ao ácido, isto é, uma proporção de 7 ΡΕ2246061 planta para vinagre de 5:1 em peso. 0 valor do pH do vinagre de arroz chinês varia tipicamente entre 2,0 e 4,0. É importante assegurar gue toda a massa de planta seca seja uniformemente embebida no vinagre. A seguir a mistura de plante e vinagre é aquecida a não mais do que 60°C, de preferência num intervalo de temperatura entre 50-60°C, até o liquido do ácido se evaporar completamente e a planta estar novamente substancialmente seca. Isto demora tipicamente um dia e a mistura de planta e vinagre é continuamente agitada e virada ao longo deste tempo para assegurar aquecimento uniforme e secagem da massa de planta. Tipicamente, cerca de 100 kg de planta acidificada podem ser obtidos a partir deste passo. Para obter quantidades maiores, as quantidades de plante e vinagre podem ser aumentadas ou o processo acima repetido consoante for necessário.

Decocção A seguir, 750 kg da planta acidificada são transferidos para um percolador (Multi-Function Percolator, Model N° TQX3, Changshou City Chemical Engineering Machine Manufacturing, Jiangsu Province, China) para decocção. A esta quantidade de planta acidificada, seca, triturada, são adicionados 300 kg de ossos de porco (de preferência os ossos largos da pélvis e ossos longos lavados, limpos, escorridos, e triturados ou esmagados) , para atingir uma proporção de planta acidificada para osso de 2,5:1 em peso. O conteúdo é então espalhado uniformemente no fundo do ΡΕ2246061 perclorador antes de serem adicionados 10 500 L de água, isto é, uma proporção de água para sólido de 10:1 em peso. 0 conteúdo é deixado em repouso durante a hora antes de se elevar a temperatura entre 90-95°C. Os conteúdos são brandamente cozinhados neste intervalo de temperatura com o líquido agitado ou posto em circulação durante cerca de 90 minutos. Em nenhuma altura se deixam os conteúdos ferver. O líquido no perclorador é então decantado e filtrado como um primeiro filtrado. A filtração é feita através de peneiras sucessivas de malha cada vez mais fina até o filtrado estar substancialmente livre de partículas visíveis. A seguir, são então adicionados 8 400 L de água ao resíduo sólido (uma proporção de água para sólido de 8:1 em peso) ao perclorador e o conteúdo novamente cozido entre 90-95°C durante outros 60 minutos com o líquido agitado ou posto em circulação. Novamente, o líquido no perclorador é decantado e filtrado como acima para obter um segundo filtrado. 0 primeiro e segundo filtrados são então combinados como a decocção do presente invento.

Concentração da decocção A decocção é então concentrada (High Efficiency Concentrator, Model N° 941, Hunan Energy-Saving Equipment Manufacturing, Hunan Province, China) sob uma pressão reduzida de 0,06-0,075 MPa abaixo da pressão atmosférica normal e temperatura a ou abaixo de 65°C até ser obtido um extracto com uma densidade relativa entre 1,20 e 1,30 como 9 ΡΕ2246061 determinado por amostragem periódica da decocção durante o processo de concentração.

Secagem por pulverização do extracto liquido

Enquanto o extracto pode então ser seco por um número de métodos tais como secagem em vácuo, é preferível secá-lo por pulverização para obter um pó. A temperatura de entrada é fixa a 200-220°C e a temperatura de saída está a 80-100°C. Este pó pode ainda ser peneirado através de uma peneira de 80 mesh. Podem ser obtidos cerca de 100 kg de extracto a partir das quantidades que se diz serem usadas neste processo. 0 extracto assim obtido é altamente higroscópico. É armazenado num contentor estanque ao ar, de preferência com um dessecante adequado, e a uma temperatura baixa (cerca de 4°C) ou imediatamente processado como se ensina abaixo. 0 extracto pode ser ainda processado ou transformado numa forma adequada para embalar, armazenar ou administrar oralmente.

Caracterização do extracto por HPLC 0 extracto para usar de acordo com o presente invento como obtido pelo processo acima foi sujeito a análise por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) .

Para isto, 2,0 g do extracto foram refluxados com 30 ml de água, ou etanol a 95% ou acetato de etilo separadamente durante uma hora, filtrados e evaporados à 10 ΡΕ2246061 secura. Aos três resíduos assim obtidos, foram adicionados 10 ml de metanol para formar três amostras para análise num HPLC Shimadzu. A coluna cromatográfica tinha 150 mm de comprimento e a matriz foi o octadecilsilano com sílica quimicamente ligada como enchimento. A fase móvel usada foi uma mistura de acetonitrilo-água numa proporção de 30:70 ; o caudal foi de 1 ml/min e a temperatura da coluna foi mantida a 40°C. A detecção da amostra foi a 254 nm. Os cromatogramas obtidos para o extracto obtido por extracção com os três solventes diferentes água, etanol e acetato de etilo são como se mostra nas Figs 1 a 4.

Os perfis de eluição dos componentes detectáveis do extracto medicinal do invento com água, etanol e acetato de etilo mostrados nos cromatograma nas Figs 1 a 4 são típicos e característicos para o processo do presente invento. Os perfis de eluição podem ser visualmente comparados ou alinhados por software adequado para análise de controlo de qualidade.

Controlo de qualidade usando TLC A qualidade do extracto para usar de acordo com o presente invento pode ser verificada comparando componentes proeminentes da planta B. calycinum com os do invento por análise por cromatograf ia em camada fina (TLC) como se segue. 11 ΡΕ2246061 A 5 g do extracto para usar de acordo com 0 presente invento foram adicionados 50 ml de etanol. A mistura foi sonicada durante 30 minutos, filtrada e O filtrado evaporado à secura para obter um resíduo. 0 resíduo foi dissolvido em 50 ml de água e extraído três vezes com álcool n-butílico saturado com água (20 ml, 15 ml e 10 ml respectivamente). As fases orgânicas foram então removidas e juntas e tornou-se a extrair com n-butilico saturado com água (20 ml, 15 ml e 10 ml respectivamente) e as fases orgânicas colectivas foram deixadas a evaporar à secura para formar um segundo resíduo. Foram adicionados dois ml de metanol para dissolver este resíduo e a solução resultante formou a solução estudo. A solução de referência foi obtida adicionando 100 ml de água a 10 g da planta seca que tinha sido reduzida em tamanho para um pó. A planta em pó foi extraída em refluxo e aquecimento durante uma hora. A mistura foi então filtrada e evaporada à secura para obter um resíduo. Então, foram adicionados 100 ml de etanol para dissolver o resíduo e a mistura foi sonicada durante 30 mins e filtrada. 0 filtrado foi evaporado à secura e depois dissolvido em 50 ml de água. Esta solução foi então extraída com álcool n-butílico saturado com água (20 ml, 15 ml e 10 ml, respectivamente) . As fases orgânicas foram removidas e juntas e tornou-se a extrair com n-butílico saturado com água (20 ml, 15 ml e 10 ml respectivamente) . As fases orgânicas colectivas desta segunda extracção foram deixadas a evaporar à secura para formar outro resíduo. Foram adicionados dois ml de metanol para dissolver este 12 ΡΕ2246061 resíduo e a solução resultante formou a solução de referência. A seguir, 50 μΐ de cada uma das soluções estudo e de referência foram colocadas numa placa de sílica gel G. A separação dos componentes principais foi realizada usando éter de petróleo: formato de etilo: ácido fórmico : água (25:5:0,5:0,5) como fase móvel a 30-60°C. Após secagem ao ar, o cromatograma foi visualizado sob luz ultravioleta (254 nm e 365 nm) . Podem ser vistas manchas fluorescentes amarelo-esverdeadas com os mesmos valores de Rf para ambas as soluções indicando que os componentes principais estão presentes nas duas soluções.

Processamento adicional do extracto opcional

Para o processamento ou realização de administração oral, a forma preferida do extracto é a de uma cápsula com excipientes adequados. Numa implementação, Dextrin, amido solúvel e aspartame como excipientes foram misturados com o extracto medicinal numa misturadora. Etanol líquido (75%) suficiente é adicionado como ligante. Esta mistura bem misturada é depois seca em vácuo num secador (Vacuum Dryer Model N° FZGX 15-00, Wuhan Pharmaceutical Machinery Manufacturing, Hunan Province, China). A mistura é então granulada por fragmentação num (Wet Granulator Model N° GHL-120, China Harbin High Technology Company, Heilongjiang Provinc, China) através de 13 ΡΕ2246061 peneiras de abertura número 80 para obter um pó fino. Pode ser adicionado pó de talco para melhorar a fluidez antes de encher cápsulas de tamanho 1 com o extracto em pó para administração oral. O extracto não embalado foi usado para estudos animais enquanto o extracto em cápsulas foi dado aos doentes humanos para as observações clinicas descritas abaixo.

Numa outra implementação, o extracto obtido a partir da primeira implementação é ainda misturado com um ou mais ingredientes para obter uma formulação. Estes ingredientes podem compreender as plantas chinesas Ganoderma, Radix Angelicae Pubescentis. Poria, e Radix Gentianae Macrophyllae.

Estudos Animais

Os estudos seguintes em ratos mediram parâmetros tais como ganho de peso, apetite, painel de análise de sangue (células e marcadores bioquímicos) , ganho de peso visceral, bem como as observações a partir de exames patológicos e histológicos.

Animais

Ratos Sprague-Dawley saudáveis de ambos os géneros entre 57-72 g foram obtidos a partir de Guangdong Provincial Medicai Experiment Animal Center. Os animais foram alimentados com alimento em grão padrão fornecido pelo seu centro de origem. 14 ΡΕ2246061

Design Experimental

Os animais saudáveis foram divididos ao acaso em quatro grupos de 15 machos e 15 fêmeas. Dentro dos grupos, os animais foram segregados em gaiolas separadas por género. Estes quatro grupos foram o de controlo (água destilada), dose baixa (1,51 g/kg de peso corporal), dose média (3,01 g/kg de peso corporal) e dose elevada (6,03 g/kg de peso corporal) . Estas doses são o equivalente de 12,5x, 25x e 50x a dose clínica para humanos por área superficial e 66,6x, 133,3x e 266,7x por peso. A dose clínica humana foi o equivalente a três cápsulas por dia ou 1,35 g.

Ao longo de um período de 90 dias, estes 120 animais foram alimentados ou com água destilada ou com a dose de extracto medicinal em água por sonda esofágica diária de acordo com o seu grupo experimental. Cada semana, os animais foram individualmente pesados e a quantidade de alimento consumido anotada. As doses foram então ajustadas de modo a administrar 1,0 ml de extracto por 100 g de peso corporal.

Após 90 dias, 10 machos e 10 fêmeas de cada grupo foram sacrificados para análise enquanto os tratamentos experimentais e de controlo (consoante aplicável) foram parados para todos os restantes animais para um período de recuperação de 30 dias. 15 ΡΕ2246061

Observações Gerais

Durante os períodos experimental e de recuperação, o apetite dos animais, actividade geral e fezes foram observados.

Dados experimentais e observações

Utilização do alimento 0 ganho médio de peso, a ingestão total de alimento e a taxa de utilização do alimento durante o período de administração de 90 dias estão dados na Tabela 1 abaixo.

Tabela 1-Ganho de peso, ingestão total de alimento e taxa de utilização de alimento durante o período de administração (x±s, n=15)

Sexo Dose (g/kg) Ganho de peso (g/rato) Ingestão Total de Alimento (g/rato) Utilização do alimento (%) 0,00 455,4±46,3 2412,7±35,6 20,6±11,5 Macho 1,51 436,5±45,6 2385,8±34,7 19,8±12, 1 3,01 409,0±39,4 2243,3±27,5 19,5±11,5 6,03 390,0±37,7 2211,3±28,4 19,0±11,4 0,00 251,9±34,7 1988,7±30,7 14,1±12,9 Fêmea 1,51 256,4±25,5 1986,7±24,2 14,1±11,0 3,01 254,7±33,7 1901,8±28,2 14,6±11,1 6,03 248,1±24,4 1687,9±14,3 14,7±11, 6 16 ΡΕ2246061 0 ganho médio de peso, a ingestão total de alimento e a taxa de utilização do alimento durante o período de recuperação de 30 dias estão dados na Tabela 2 abaixo.

Tabela 2-Ganho médio de peso, ingestão total de alimento e taxa de utilização de alimento para o período de recuperação de 30 dias (x±s, n=15)

Sexo Dose (g/kg) Ganho de peso (g/rato) Ingestão Total de Alimento (g/rato) Utilização do alimento (%) 0,00 75,4±12,9 1524,4±58,4 4,7±3,5 Macho 1,51 81,2±41,2 1569,6±63,5 5,2±2,5 3, 01 82,0±50,8 1564,0±81,5 52, ±1,8 6, 03 65,4±23,8 1487,8±76,1 4,1±2,9 0, 00 18,6±17,2 961,0±50,3 2,0±1,0 Fêmea 1,51 20,4±18,4 1021,0±55,3 2,1±0,8 3,01 20,6±7,4 1041,3±56,7 1,9±0,8 6, 03 16,2±3,7 952,6±52,8 1,8±1,4

Painel de Sangue

Após o período de administração e o período de recuperação, foi conduzida uma análise de sangue de rotina num painel de marcadores comuns. O sangue retirado foi analisado pelo analisador de células sanguíneas Beckman 5dif. O painel de marcadores compreendeu contagem de glóbulos brancos (WBC), classificação de leucócitos, contagem de 17 ΡΕ2246061 glóbulos vermelhos (RBC), determinação de hemoglobina (Hb), contagem de plaquetas (PUT) e hematócritos (HCT). Os resultados no final do período de administração estão dados na Tabela 3 e no final do período de recuperação na Tabela 4 respectivamente.

Tabela 3 Marcadores sanguíneos durante o período de administração (x±s, n=10)

Sexo Dose (g/kg) WBC (xlOVL) RBC (xlO^/L) Hb (g/i) PLT (X107L) HCT (L/L) Macho 0,00 9,9±3,7 8,6±0, 5 158,4±8,4 693±90 0,47±0,02 1,51 11,4±3,1 7,7±2,8 161,6±19,8 724±108 0,48+0,01 3,01 12,0±2,1 8,4±0,3 153,0±4,9 737±125 0,45±0,01 6,03 9,9+1,5 7, 8±1, 4 146,4±5,2 697±93 0,44+0,02 Fêmea 0,00 6,4±1,1 8,3±0,5 158,5±6,5 770±106 0,46±0,42 1,51 7, 2±1, 4 8,2±0, 2 154,2±5,8 786+95 0,44+0,02 3,01 8,5±2,8 7,7±0,4 148,9±6,2 711±121 0,44+0,02 6,03 7,3±0,2 7, 8±0, 9 148,9±11,3 736±161 0,45+0,04

Tabela 4 Marcadores sanguíneos durante o período de recuperação (x±s, n=10)

Sexo Dose (g/kg) WBC (xlOVL) RBC (x1012/L) Hb (g/i) PLT (xl09/L) HCT (L/L) 0, 00 10,8±3,0 8,5±1, 1 159,5±10,8 766±89 0,43+0,03 Macho 1, 51 10,5±1,2 8,8+0, 1 163,1±3,4 740±48 0,45+0,01 3, 01 12,0±2,2 9,2±0, 2 162,4±3,8 911±60 0,44+0,01 6, 03 9,8±2,8 8,8±0, 2 162,9±3,9 757±68 0,44+0,01 0, 00 7,3±2,6 8,2±0, 6 152,8±5,0 770±106 0,41+0,01 Fêmea 1, 51 6,6±0,5 8,4±0, 5 158,5±6,2 786±95 0,42+0,02 3, 01 6,8±2,9 8,0±0, 9 153,6±16,8 711±121 0,40+0,04 6, 03 8,3±1,80 8,0±0, 4 149,5±10,7 736±161 0,40+0,03 18 ΡΕ2246061

Bioquímica do Sangue

Os marcadores bioquímicos sanguíneos medidos incluem alanina aminotransferase (ALT), aspartato amino-transferase (AST), azoto da ureia sanguínea (BUN), creatina (Crea), proteína total (TP), albumina (ALB), colesterol total (T-cho), glucose sanguínea (GLu), fosfatase alcalina (ALP), bilirrubina total (TBIL) . Estes marcadores foram examinados usando um instrumento de análise biológica automática Beckman CX5. Os dados estão mostrados na Tabela 5 para o período de administração e na Tabela 6 para o

Tabela 5 Marcadores bioquímicos sanguíneos durante o período de administração (xis)

Sexo Dose (g/kg) ALT (u/1) AST (u/1) BUN (mmol (L) TP (g/i) ALB (g/i) Crea (μπαοΙ/L) 0,00 70,9±7,7 218,5±36,3 9,0±0,5 74,2±3,4 37,0±1,4 104,0±22,2 Macho 1,51 71,2±9,7 184,9±29,6 8,0±0,5 72,6±4,2 36,9±2,0 97,5±32,3 3,01 71,7±10,7 193,1±34,2 7,5±0,6 76,4±3,2 36,4±0,8 ±78,5±32,0 6,03 69,7±8,4 202,3±31,7 7,7+0,6 75,6±3,3 37,3±1,0 87,3±31,2 0,00 71,7±8,4 199,3±38,6 9,8±2,1 74,6±5,0 37,1±3,0 116,6±33,4 Fêmea 1,51 66,5±7,4 172,1±30,4 9,0±1,2 78,7±6,1 39,0±1,8 96,6±33,6 3,01 71,4±7,4 168,4±24,4 8,4±1,2 79,5±4,3 38,7±1,6 115,6±16,8 6,03 63,9±8,0 201,6±26,2 8,0±1,0 81,3±4,0 39,2±1,7 96,9+17,4 19 ΡΕ2246061

Tabela 6 Marcadores bioquímicos sanguíneos durante o período de recuperação (x±s)

Sexo Dose (g/kg) Tcho (mmol/L) Glu (mmol/L) ALP (IU/L) TBIL (u mol/L) Macho 0, 00 1,5±0,3 6,6±0,6 235,1±34,4 34,8±7,4 1,51 1,6±0,3 6,3+0,5 223,6±37,7 34,9±14,3 3, 01 1,5±0,2 7,4±1,0 241,7±28,0 25,8±14,9 6, 03 1,4±0,2 7,8±1,0 229,9±25,8 45,3±20,8 Fêmea 0, 00 1,6±0,4 7,8±1,3 216,6±54,6 22,7±7,0 1,51 1,7±0,2 7,1 + 0,7 216,9±50,6 25,0±4,4 3, 01 2,1+0,2 7,3+0,6 226,7+49,0 24,9+11,2 6, 03 1,8±0,3 7,6±0,6 205,0±39,0 31,1±8,3

Exame das Vísceras

No final de cada período (administração e recuperação) , os animais foram sacrificados e os órgãos (fígado, rim, coração, pulmão, baço, cérebro, glândula adrenal, glândula da próstata, e testículo ou útero) foram removidos, pesados e examinados para quaisquer sinais de patologia manifesta. Os órgãos e seus pesos estão dados na Tabela 7 para o período de administração e na Tabela 8 para o período de recuperação. 20 ΡΕ2246061

Tabela 7 Peso das vísceras no final do período de administração (g, x±s, n=10)

Sexo Dose (g/kg) Coração Fígado Baço Pulmão Rim Macho 0,00 1,59±0,23 17,6±1,9 0,83±0,16 2,29±0,66 2,97±0,40 1,51 1,50+0,19 17,2+2,3 0,96+0,12 2,46+0,48 2,93+0,30 3,01 1,55±0,19 15,4±1,9 087±0,19 2,53±0,64 3,00±0,32 6,03 1,49±0,19 16,4±1,3 0,88±0,15 2,35±0,37 3,10±0,35 Fêmea 0,00 1,09±0,10 9,6±1,7 0,59±0,11 1,91±0,25 1,99±0,23 1,51 1,06±0,08 10,2±1,0 0,62±0,11 1,86±0,32 2,03±0,10 3,01 1,10±0,19 10,1±1,7 0,79±0,28 1,90±0,27 1,97±0,23 6,03 1,05±0,11 3,22±1,0 0,66±0,10 1,92±0,39 2,09±0,16 Sexo Dose (g/kg) Cérebro Glândula adrenal Glândula Próstata Testículo Útero Macho 0,00 1,96±0,16 0,10±0,03 0,62±012 3,54±0,18 1,51 1,94±0,14 0,10±0,02 0,68±0,20 3,52±0,29 3,01 2,00±0,20 0,10±0,03 0,66±0,20 3,52±0,30 6,03 1,97±0,13 0,10±0,04 0,66±0,22 3,59±0,35 Fêmea 0,00 1,65±0,27 0,12±0,04 0,22±0,09 1,51 1,63±0,34 0,10±0,02 0,18±0,08 3,01 1,89±0,11 0,10±0,02 0,20±0,07 6,03 1,91±0,10 0,11±0,03 0,23±0,09 21 ΡΕ2246061

Tabela 8 Peso das vísceras no final do período de recuperação (g, x±s, n=5)

Sexo Dose (g/kg) Coração Fígado Baço Pulmão Rim Macho 0,00 1,65±0,22 20,5±5,7 1,09±0,92 2,52±1,10 3,08±0,62 1,51 1,67±0,30 20,3±5,7 0,89±0,14 2,44±0,59 3,22±0,64 3,01 1,48±0,18 18,6±3,2 1,02±0,24 2,51±0,46 3,10±0,35 6,03 1,53±0,05 17,5±1,4 0,98±0,10 2,26±0,54 2,64±0,11 Fêmea 0,00 1,02+0,16 11,2+1,6 0,72+0,19 1,96+0,70 1,87+0,27 1,51 1,09±0,14 12,2±1,1 0,71±0,09 2,24±0,61 2,01±0,06 3,01 1,13±0,08 11,9±0,4 0,99±0,40 1,84±0,14 2,20±0,16 6,03 0,98±0,08 10,1±0,4 0,72±0,10 1,72±0,25 2,01±0,22 Sexo Dose (g/kg) Cérebro Glândula adrenal Glândula Próstata Testículo Útero Macho 0,00 2,04+0,32 0,08+0,02 1,15+0,08 3,65+0,22 1,51 2,03±0,28 0,07±003 0,97±0,06 3,88±0,20 3,01 1,84±0,27 0,09±0,04 0,76±0,34 3,69±0,37 6,03 1,81±0,29 0,08±0,02 1,09±0,27 3,33±0,50 Fêmea 0,00 1,65±0,27 0,13±0,04 0,21±0,06 1,51 1,63±0,34 0,09±0,02 0,21±0,04 3,01 1,89+0,11 0,08+0,01 0,18+0,04 6,03 1,91±0,10 0,09±0,02 0,24±0,15

Histologia A seguir ao exame visual grosseiro, os tecidos dos órgãos dos animais nos grupos de controlo e de dose elevada foram processados por técnicas histológicas padrão 22 ΡΕ2246061 para exame microscópico. Os tecidos dos órgãos foram fixados em formalina, embebidos em parafina, seccionados com um micrótomo e montados em slides de vidro, tingidos com hematoxilina e cosina (H&E) antes de serem examinados. Não foi observada nenhuma patologia grosseira a olho nu. Como tal, apenas os espécimes histológicos dos grupos de controlo e de dosagem elevada foram sujeitos a exame microscópico. As observações são como se segue.

Figado: Foi observado ao microscópio que a membrana do figado estava intacta, sem aumento na espessura. Não foi vista, nos hepatócitos, degeneração hidrópica, alteração de gordura e necrose. Não existia colestase nítida nos hepatócitos e no dueto biliar. Não foi notada nenhuma dilatação do esfíncter e nenhuma exsudação.

Rim: A estrutura dos glomérulos estava claramente intacta, sem edema óbvio, atrofia ou fibrose. Não foi notado nenhum edema óbvio nos túbulos distai e proximal, nenhuma alteração de gordura, alteração hialina ou necrose. A membrana basal estava intacta. Não foram vistos cálculos nos túbulos colectores.

Coração: 0 pericárdio estava intacto, sem hiperplasia do tecido conectivo. Não foi notada hiperplasia ou atrofia fibrosa no miocárdio. As fibras do miocárdio estavam todas em ordem sem rotura, necrose ou cicatrizes. Não foi encontrado edema nas células do miocárdio. As células do endocárdio estavam intactas, sem alterações de enfarte ou evidência de trombos. 23 ΡΕ2246061

Baço: Não foi vista hiperplasia do tecido conectivo fibroso na membrana do baço e cordões do baço. Sem infiltrações celulares inflamatórias óbvias, sem hiperplasia reactiva nos seios esplénicos. Não foram notados sangue estagnado e exsudatos de inflamação celular na polpa vermelha. Cérebro: Sem infiltração à superfície do cérebro. A estrutura da matéria branca e cinzenta era nítida. Os neurónios não estavam alterados ou necróticos. Não foi encontrada hemorragia, inflamação ou anormalidade no intersticial.

Estômago e Intestinos: A mucosa da membrana superficial estava lisa, e a cor era normal. Não foram encontrados exsudatos, sangramentos, necroses ou ulcerações. A estrutura dos intestinos e estômago estava intacta, e a mucosa superficial da membrana gástrica estava intacta. As glândulas estavam em ordem. Não foi encontrado descolamento epitelial, necrose ou úlcera. Não foram encontradas alterações patológicas anormais na submucosa tais como hiperemia ou edema.

Testículo: A membrana exterior branca estava intacta. Os cordões do lóbulo e epidídimo estavam radialmente dispostos. Não se encontrou atrofia ou descolamento nas células de suporte dos cordões, os espermatoblastos primários; espermatoblastos secundários ou espermatócitos. ΡΕ2246061 - 24 -

Glândula da Próstata: A estrutura do tecido glandular prostático era normal. 0 epitélio glandular estava em ordem. Não se notou necrose no epitélio. Sem cálculos na cavidade da glândula. Sem hiperplasia da intersticia. Não foi observada a infiltração de células inflamatórias.

Ovário: Foliculos primários do óvulo bem estruturados, foliculos secundários do óvulo e foliculos primários foram vistos no tecido dos ovários. A epiderme estava intacta, sem qualquer enfarte ou putrescência presente. Útero: ao microscópio, as glândulas do endométrio uterino e intersticial estavam normais e a estrutura miométrica era normal, sem sangramento ou outra alteração anormal.

Glândula da Tiróide: Ao microscópio, a estrutura folicular da tiróide estava normal, sem deposição do tipo colóide.

Timo: Ao microscópio, a estrutura do timo era normal, sem quaisquer alterações c não usuais.

Glândula Adrenal: Não foi notada alteração pleo-mórfica ou necrose na zona glomerulosa, células reticulares do córtex. Sem alterações patológicas nas células da medula. Nódulos linfáticos. Ao microscópio, o córtex e a medula dos nódulos linfáticos estava normal sem alterações não usuais. 25 ΡΕ2246061

Observações A partir do anterior, durante os períodos de administração (estudo) e recuperação, comparado com o grupo de controlo, os órgãos principais dos diferentes grupos de animais (coração, fígado, pulmão, baço, rim, cérebro, estomago, intestinos, timo, glândula tiróide, pâncreas, glândula adrenal, nódulos linfáticos, testículo, próstata, ovário e útero) estavam normais, sem alterações patológicas óbvias. A partir dos dados experimentais acima, foi mostrado que o extracto medicinal para usar de acordo com o presente invento não tem quaisquer efeitos adversos nos animais. A partir da semana 10, os ratos macho nos grupos de dose média e dose elevada ganharam peso mais lentamente. Esta diferença foi estatisticamente significativa quando comparada com o grupo de controlo (p<=0,05). Não existem outras diferenças significativas entre os grupos experimental e de controlo nos outros índices tais como parâmetros hematológicos, parâmetros bioquímicos e observações patológicas. Não foram observadas reacções tóxicas agudas ou crónicas.

Observações clinicas O extracto para usar de acordo com o presente invento embalado em cápsulas descritas acima, foi dado aos 26 ΡΕ2246061 doentes que se queixavam de problemas nas articulações devido a osteoartrite bem como outras queixas nas articu-ações. Alguns exemplos notáveis estão incluídos abaixo para ilustrar a eficácia do extracto no alívio dos sintomas associados com osteoartrite, e dor e lesão das articulações. A osteoartrite pode ser distinguida da artrite reumatóide como se segue.

Artrite reumatóide A artrite reumatóide (AR) é uma doença sistémica crónica de causa desconhecida. 0 traço característico da AR é uma sinovite inflamatória persistente, envolvendo usualmente articulações periféricas numa distribuição simétrica.

Epidemiologia e Genética: Estudos em famílias indicam uma pré-disposição genética

Patologia e Patogénese: constelação de traços característicos, que incluem hiperplasia e hipertrofia do revestimento sinovial das células; alterações vasculares focais ou segmentárias, incluindo lesão microvascular, trombose, e neovascularização; edema; e infiltração com células mononucleares. 0 sinóvio reumatóide é caracterizado por produção local de citocinas e quimiocinas inflamatórias as quais são responsáveis por muitos dos traços de sinovite reumatóide, incluindo a inflamação do tecido sinovial, a inflamação do fluido sinovial, a proliferação sinovial, e lesão da cartilagem e osso, bem como de manifestações sistémicas de AR. 27 ΡΕ2246061

Manifestações Clinicas. De forma característica, a AR é uma poliartrite crónica especialmente das mãos, pulsos, joelhos, e pés. Dor, inchaço, e fragilidade podem inicialmente estar deficientemente localizados nas articulações. Rigidez matinal é quase invariável. A maioria dos doentes sentirá sintomas constitucionais tais como fraqueza, fadiga, anorexia e perda de peso.

Manifestações Extra-articulares: Estas incluem nódulos reumatóides, vasculite reumatóide, manifestações pleuropulmonares, e sindrome de Felty.

Factos laboratoriais: Factores reumatóides, auto-anticorpos são encontrados em mais de dois terços de adultos com a doença. A taxa de sedimentação de eritrócitos está aumentada em quase todos os doentes com AR activa. Na análise de fluido sinovial predominam os leucócitos polimorfonucleares.

Decurso Clínico e Prognóstico: A maioria dos doentes sente actividade persistente mas flutuante da doença.

Tratamento: Fármacos anti-reumáticos modifica dores da doença, terapia imunossupressora, cirurgia são geralmente prescritos. 28 ΡΕ2246061

Osteoartrite A osteoartrite (AO) representa a falha da articulação diartrodial (móvel, sinovial-revestida). Em AO idiopática (primária), a forma mais comum da doença, nenhum factor de pré-disposição é aparente. A AO secundária é patologicamente indistinguível da AO idiopática mas atribuída a uma causa subjacente que inclui traumatismo, factores metabólicos, endócrinos, etc.

Epidemiologia e Factores de Risco: A AO é a doença das articulações mais comum em humanos. A idade é o factor de risco mais poderoso. Nas mulheres, nas idades de 45 a 64 anos, a prevalência é de 30%. Um traumatismo grande e uso repetitivo da articulação são também factores de risco importantes para AO. A AO secundária pode ser classificada como traumática, metabólica, endócrina, etc. A obesidade é um factor de risco para AO no joelho e AO na mão. A AO é uma doença de um órgão, a articulação sinovial em áreas de suporte de carga da cartilagem articular. A superfície da articulação adelgaça, a cartilagem amolece, a integridade da superfície abre brechas, e desenvolvem-se fissuras verticais.

Características clínicas: A dor na articulação em AO é frequentemente descrita como um dor funda e está localizada na articulação envolvida. Tipicamente, a dor na AO é agravada pelo uso da articulação e aliviada pelo repouso. Fragilidade localizada e inchaço dos tecidos ΡΕ2246061 ósseos ou macios está frequentemente presente. Crepitação óssea é caracteristica.

Factos Laboratoriais e Radiográficos: 0 diagnóstico da AO é clinico e radiográfico, em que o estreitamento do espaço entre os ossos da articulação, esclerose óssea subcondral, cistos subcondrais, e osteofitose são vistos individualmente ou colectivamente. Não existem estudos laboratoriais para diagnosticar a AO.

Terapia da AO com fármacos: Hoje em dia a terapia para a AO é paliativa; nenhum agente farmacológico mostrou prevenir, retardar o seu progresso, ou reverter as alterações patológicas de AO em humanos. 0 que segue são exemplos de doentes tratados com cápsulas da preparação medicinal da planta para usar de acordo com o presente invento.

Doente A (Exemplo Comparativo)

Uma doente feminina de 17 anos de idade tinha traumatismo nos membros e articulações com locomoção limitada dos joelhos. Foi prescrito à doente uma cápsula para ser tomada a cada dia durante cinco dias. Feldene e Hirudoid foram prescritos para as contusões. 0 seu estado melhorou após cinco dias e ficou curada. 30 ΡΕ2246061

Doente B

Um doente masculino, de 85 anos de idade, foi diagnosticado com osteoartrite em ambos os membros inferiores e tinha locomoção e mobilidade limitadas acompanhadas com dor. Foi-lhe prescrito uma cápsula duas vezes por dia. Após 25 dias, ele sentiu uma diminuição significativa na dor e um aumento de suavidade no andar.

Doente C (Exemplo Comparativo)

Uma doente feminina, de 80 anos de idade, tinha artrite severa em ambos os joelhos. Foi-lhe prescrito uma cápsula duas vezes por dia durante 23 dias. A seguir, ele mostrou uma melhoria significativa no andar e sentiu uma diminuição da dor.

Doente D (Exemplo Comparativo)

Um doente masculino, de 27 anos de idade, apresentava inchaço do dedo e artrite das articulações interfalangeanas e cotovelo direito. Foi-lhe prescrito uma cápsula três vezes por dia durante 30 dias. 0 doente recuperou totalmente depois disso.

Doente E (Exemplo Comparativo)

Outra doente feminina de 17 anos de idade queixava-se de inchaço interfalangeano múltiplo e dor 31 ΡΕ2246061 diária. Foi-lhe prescrito uma cápsula uma vez de duas em duas semanas durante nove meses. Os sintomas diminuíram de frequência, de ocorrências diárias para uma vez de duas em duas semanas ou coisa assim.

Doente F (Exemplo Comparativo)

Um doente masculino, de 56 anos de idade, tinha inchaço e dor na articulação da primeira articulação interfalangeana. Recuperou após ter-lhe sido prescrito duas cápsulas diárias durante dois meses.

Doente G (Exemplo comparativo)

Uma doente feminina, de idade 45, foi diagnosticada com artrite no joelho esquerdo e dificuldade em andar. Foi-lhe prescrito uma cápsula duas vezes por dia durante quatro meses. A seguir, a dosagem foi reduzida para uma cápsula por semana durante um ano. A doente mostrou diminuição no inchaço e dor e teve recuperação completa da capacidade de andar.

Sumário das observações clínicas A partir dos exemplos acima, pode ser visto que o extracto medicinal é eficaz para o tratamento de lesões nas articulações e dor em estados associados com osteoartrite e outras lesões relacionadas. Enquanto a eficácia é vista na 32 ΡΕ2246061 aplicação do extracto para terapia, é considerado que o extracto pode também ser usado para a profilaxia destas queixas. É sabido que a osteoartrite é uma doença quase intratável por a terapia para a osteoartrite ser paliativa e nenhum agente farmacológico ter mostrado ser eficaz na prevenção ou adiamento da progressão ou reversão das alterações patológicas de osteoartrite em humanos. Provou- se que o dito extracto medicinal dos exemplos acima é eficaz no alívio dos sintomas e no progresso de osteoartrite bem como na restauração da função dos doentes em sofrimento. Assim, pode ser considerado que este extracto medicinal pode ser capaz de prevenir a osteoartrite em indivíduos susceptíveis, atrasar o aparecimento dos sintomas clínicos em doentes com evidência radiológica ou de MRI de sinais precoces de osteoartrite, suspender o progresso de doentes com osteoartrite clínica, e reverter as alterações patológicas da osteoartrite. Existe evidência que este extracto medicinal pode também ser útil para doentes sofrendo de artrite reumatóide não na suspensão da parte imunológica da artrite reumatóide mas na suspensão do progresso da doença secundário à anomalia surgindo a partir das articulações deformadas e do stress das cartilagens causado pela disfunção. Foi mostrado que o presente invento é eficaz no tratamento ou pelo menos no alívio dos sintomas de osteoartrite. 33 ΡΕ2246061

Variações na prática do invento

Foram seguidos padrões estritos de Boa Prática Farmacêutica (BPF) para os produtos farmacêuticos dos exemplos acima. Isto é uma prática opcional não sendo necessariamente dependente dos requisitos do utilizador.

Enquanto um exemplo de como o presente invento pode ser posto em prática é ensinado acima, um especialista na técnica também reconhecerá que é apenas para ilustração e que são possíveis muitos passos equivalentes e alternativos no método de preparação sem se afastar do âmbito e espírito do invento.

Por exemplo, embora seja utilizada toda a planta, as várias partes da planta (caule, folhas, flores, raízes, etc) podem ser seleccionados dentro do âmbito das reivindicações. Um especialista na técnica apreciará que é possível, com técnicas de cultura de célula e tecido de planta, cultivar células e tecido destas plantas in vitro e extrair os componentes activos de interesse destas células e tecido. Assim, enquanto a extracção destes componentes activos das partes secas da planta é preferível e ensinado, a extracção destes componentes as células e tecidos da planta em cultura é também possível.

Quanto ao passo de acidificação, podem ser usados muitos tipos de ácidos comestíveis para além do vinagre fermentado naturalmente. Por exemplo, ácido acético 34 ΡΕ2246061 sintetizado artificialmente ou sumos de frutos naturais podem ser usados para acidificar a planta. Além disso, enquanto se usou osso de porco no modelo de realização preferido, qualquer osso adequado de outros animais como répteis, mamíferos ou peixe podem ser usados no âmbito do presente invento. Adicionalmente, um especialista na técnica reconhecerá que embora a decocção tenha sido concentrada a pressão reduzida e o extracto obtido por secagem por pulverização, é igualmente exequível obter o extracto por liofilização ou criodessecação.

Enquanto o extracto medicinal foi embalado numa cápsula, outros métodos adequados de preparação para embalagem são igualmente exequíveis. Para administração oral, os extractos podem ser providenciados como um comprimido, suspensão aquosa ou em óleo, pó ou grânulos dispersáveis, emulsão, cápsula dura ou mole, xarope, elixir, ou bebida. Composições pretendidas para uso oral podem ser preparadas de acordo com qualquer método conhecido na técnica para a manufactura de composições farmaceuticamente aceitáveis e tais composições podem conter um ou mais dos agentes seguintes: adoçantes, aromatizantes, corantes e conservantes. Os agentes adoçantes e aromatizantes aumentarão a palatabilidade da preparação. Cápsulas contendo extractos numa mistura com agentes ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos adequados para a manufactura de cápsulas são aceitáveis. Que os agentes sejam "farmaceuticamente aceitáveis" significa que os agentes devem ser aceitáveis no sentido de serem compatíveis com os outros 35 ΡΕ2246061 ingredientes da formulação (bem como não prejudiciais para o doente). Tais excipientes incluem diluentes inertes tais como carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes de granulação e desintegração, tais como amido de milho ou ácido algínico; agentes de ligação tais como amido, gelatina ou acácia; e agentes de lubrificação tais como estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Os comprimidos podem ser não revestidos ou podem ser revestidos por técnicas conhecidas para atrasar a desintegração e absorção no tracto gastrointestinal e providenciar assim uma acção sustida ao longo de um período de tempo mais longo. Por exemplo, pode ser utilizado um material de atraso tal como monoestearato de glicerilo ou diestearato de glicerilo sozinho ou com uma cera.

As formulações para uso oral podem também ser apresentadas como cápsulas de gelatina dura em que o ingrediente activo é misturado com um diluente sólido inerte, por exemplo, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou caulino, ou como cápsulas de gelatina mole em que o ingrediente activo é misturado com água ou um meio oleoso, tal como óleo de amendoim, parafina líquida ou azeite. Nalguns modelos de realização, as suspensões aquosas podem conter um extracto do invento numa mistura com excipientes adequados para a manufactura de suspensões aquosas. Tais excipientes incluem agentes de suspensão, dispersão ou humidif icação, um ou mais conservantes, um ou mais 36 ΡΕ2246061 corantes, um ou mais aromatizantes e um ou mais adoçantes tais como sucrose ou sacarina.

As suspensões oleosas podem ser formuladas suspendendo o ingrediente activo num óleo vegetal, tal como óleo de aráquida, azeite, óleo de sésamo ou óleo de coco, ou nu óleo mineral tal como parafina liquida. A suspensão oleosa pode conter um agente espessante, tal como cera de abelha, parafina sólida ou álcool cetilico. Adoçantes, tais como os expostos acima, e aromatizantes podem ser adicionados para providenciar uma preparação oral saborosa. Estas composições podem ser conservadas através de um anti-oxidante adicionado tal como ácido ascórbico. Pós e grânulos dispersáveis do invento adequados para a preparação de uma suspensão aquosa pela adição de água, providenciam um ou mais extractos numa mistura com um agente de dispersão ou humidificação, um agente de suspensão, e um ou mais conservantes. Excipientes adicionais, por exemplo adoçantes, aromatizantes e corantes, podem também estar presentes.

Xaropes e elixires podem ser formulados com adoçantes, tais como glicerol, sorbitol ou sucrose. Tais formulações podem também conter um demulcente, um conservante ou um corante.

Enquanto a administração oral é preferida, não estão excluídos outros métodos de administração do extracto do presente invento. As preparações do extracto para 37 ΡΕ2246061 administração parentérica podem estar na forma de preparação injectável estéril, tal como uma suspensão aquosa ou oleaginosa injectável estéril. Esta suspensão pode ser formulada de acordo com métodos bem conhecidos na técnica usando agentes de dispersão ou humidificação adequados e agentes de suspensão. A preparação injectável estéril pode também ser uma solução ou suspensão injectável estéril num diluente ou solvente parentericamente aceitável não tóxico, tal como uma solução em 1,3-butanodiol. Diluentes adequados incluem, por exemplo, água, solução de Ringer e cloreto de sódio isotónico. Além disso, óleos fixos estéreis podem ser utilizados convencionalmente como um solvente ou um meio de suspensão. Para este propósito, qualquer óleo fixo brando pode ser utilizado incluindo mono ou diglicerideos sintéticos. Além disso, os ácidos gordos tais como ácido oleico podem ser usados da mesma forma na preparação de preparações injectáveis.

As composições farmacêuticas podem também estar na forma de emulsões óleo-em-água. A fase oleosa pode ser um óleo vegetal, tal como azeite ou óleo de aráquida, um óleo mineral tal como parafina liquida, ou uma mistura destes. Agentes emulsionantes adequados incluem gomas naturais tais como goma de acácia e goma tragacante, fosfatideos naturais, tais como lecitina de soja, ésteres ou ésteres parciais derivados de ácidos gordos e anidridos de hexitol, tais como mono-oleato de sorbitan, e produtos de condensação destes ésteres parciais com óxido de 38 ΡΕ2246061 etileno, tal como polioxietileno mono-oleato de sorbitan. As emulsões também podem conter adoçantes e aromatizantes. A quantidade de extracto que pode ser combinada com o veículo para produzir uma dosagem única variará dependendo do doente a ser tratado e do modo particular de administração.

Referências 1. Cheng Y-X, Zhou J and Tan N-H (2001) Journal of Integrative Plant Biology (Acta Botanica Sinica) 43(7):760-765, New minor cyclic peptides from Brachystemma calycinum. 2. Cheng Y-X, Zhou J, Teng R-W and Tan N-H (2001) Acta Botanica Yunnanica 23(4): 527-530 Nitrogen-containing compounds from Brachystemma calycinum. 3. Cheng YX, Zhou J, Tan NH, Teng RW, Lu Y, Wang C and Zheng QT (2002) Journal of Natural Products 65(5): 750-2 Isolation and characterization of Brachystemidines A-E, novel alkaloids from Brachystemma calycinum.

Lisboa, 9 de setembro de 2013

Claims (2)

1. ΡΕ2246061 1 REIVINDICAÇÕES 1. Uso de um extracto de Brachystemma calycinum na manufactura de um medicamento para tratamento terapêutico e/ou profiláctico de osteoartrite.
2. 2 . composição é 0 uso da reivindicação 1, em que formulada para administração oral. a dita 3 . composição é 0 uso da reivindicação 1, em que a formulada para administração parentérica, dita 4. 0 uso da reivindicação 1, em que a dita composição compreende ainda um veiculo farmaceuticamente aceitável. Lisboa, 9 de setembro de 2013