PT2081955E

PT2081955E - Derivados de metastina e sua utilização

Info

Publication number: PT2081955E
Application number: PT78309036T
Authority: PT
Inventors: Taiji Asami; Naoki Nishizawa
Original assignee: Takeda Pharmaceutical
Priority date: 2006-10-25
Filing date: 2007-10-24
Publication date: 2015-07-10
Also published as: JP5686825B2; HK1130500A1; MA30887B1; NO341584B1; AR063367A1; AU2007309969A2; JO3048B1; BRPI0717441B8; TWI404726B; JP2010507565A; US8765909B2; HRP20150819T1; IL198046A0; KR20090090315A; JP2013075913A; US20090215700A1; MY145975A; CA2667537C; PE20081469A1; EP2081955B1

Description

DESCRIÇÃO "DERIVADOS DE METASTINA E SUA UTILIZAÇÃO"

CAMPO TÉCNICO A presente invenção refere-se a derivados de metastina e à sua utilização.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Conhece-se a metastina de origem humana (também designada péptido KiSS-1) (documento WO00/24890) e a metastina de origem em ratinho ou rato (documento W00175104). Conhece-se também preparações de libertação sustentada contendo metastina (documento WO02/85399).

Alegadamente, a metastina tem um efeito de supressão de metástases de cancros e é assim eficaz para prevenir/tratar cancros (por exemplo, cancro do pulmão, cancro gástrico, cancro do figado, cancro pancreático, cancro colorretal, cancro retal, cancro do cólon, cancro da próstata, cancro do ovário, cancro cervical, cancro da mama, cancro renal, cancro da bexiga, tumor cerebral, etc.); a metastina tem também um efeito de controlo da função pancreática e é eficaz para prevenir/tratar doenças pancreáticas (e. g. , pancreatite aguda ou crónica, cancro pancreático, etc.); e a metastina tem ainda um efeito de controlo da função placentária e é eficaz para prevenir/tratar coriocarcinoma, mola hidatiforme, mola invasiva, aborto espontâneo, hipoplasia fetal, metabolismo anormal da glucose, metabolismo anormal ou distribuição anormal de lípidos (documentos WO00/24890, W001/75104, WO02/85399).

DIVULGAÇÃO DA INVENÇÃO A presente invenção tem como objetivo proporcionar derivados de metastina estáveis possuindo excelentes atividades biológicas (uma atividade de supressão de metástases de cancros, uma atividade de supressão de crescimento de cancros, uma atividade de estimulação de secreção da hormona gonadotrófica, atividade de estimulação de secreção de hormonas sexuais, uma atividade de supressão de secreção da hormona gonadotrófica, atividade de supressão de secreção de hormonas sexuais, etc.) A presente requerente realizou estudos extensos para resolver os problemas anteriores e, como consequência, constatou inesperadamente que ao substituir aminoácidos constituintes da metastina por aminoácidos específicos, a estabilidade, solubilidade, etc. sanguíneas são melhoradas, a tendência de gelificação é reduzida, a farmacocinética é também melhorada, e é apresentada uma excelente atividade de supressão de metástases de cancros ou uma atividade de supressão de crescimento de cancros. A presente requerente constatou ainda inesperadamente que estes derivados de metastina têm um efeito de supressão de secreção da hormona gonadotrófica, um efeito de supressão de secreção de hormonas sexuais, etc., os quais são completamente diferentes dos efeitos conhecidos até agora. Com base nestas constatações, a presente requerente realizou mais investigações e realizou a presente invenção.

Isto é, a presente invenção proporciona as seguintes características, e semelhantes.

[1] Um composto selecionado de:

Ac-D-Tyr-Hyp-Alb-Thr-Cha-Gly¥((E)CH=CH)Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto N2 903),

Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Cha-Gly¥((E)CH=CH)Leu-Arg-Trp-NH2 (Composto N2 926), e

Ac-D-Tyr-Hyp-Alb-Thr-Cha-Gly¥((E)CH=CH)Leu-Arg-Trp-NH2 (Composto N2 927), ou um seu sal.

[2] O composto de acordo com [1], o qual é

Ac-D-Tyr-Hyp-Alb-Thr-Cha-Gly¥((E)CH=CH)Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 ou um seu sal.

[3] O composto de acordo com [1], o qual é

Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Cha-Gly¥((E)CH=CH)Leu-Arg-Trp-NH2 ou um seu sal.

[4] O composto de acordo com [1], o qual é

Ac-D-Tyr-Hyp-Alb-Thr-Cha-Gly¥((E)CH=CH)Leu-Arg-Trp-NH2 ou um seu sal.

[5] Um medicamento compreendendo o composto de acordo com [1] ou um seu sal. A presente invenção proporciona ainda as seguintes caracteristicas, e semelhantes.

[6] 0 composto de acordo com [1], ou um seu sal, para utilização em terapia.

[7] 0 composto de acordo com [1], ou um seu sal, para utilização como um agente para suprimir a metástase de cancros ou um agente para suprimir o crescimento de cancros.

[8] 0 composto de acordo com [1], ou um seu sal, para utilização como um agente para prevenir/tratar cancro.

[9] 0 composto de acordo com [1], ou um seu sal, para utilização como um agente para a regulação negativa da hormona gonadotrófica ou hormonas sexuais.

[10] O composto de acordo com [1], ou um seu sal, para utilização como um agente para prevenir/tratar cancro hormonodependente. O derivado de metastina da presente invenção e os seus sais têm excelente estabilidade sanguínea, além de excelente ação de inibição de metástases de cancros ou ação de supressão de crescimento de cancros e são úteis como agentes para prevenir/tratar cancros (e. g. , cancro do pulmão, cancro gástrico, cancro do fígado, cancro pancreático, cancro colorretal, cancro retal, cancro do cólon, cancro da próstata, cancro do ovário, cancro cervical, cancro da mama, etc.). O derivado de metastina da presente invenção e os seus sais têm efeitos de regulação de funções do pâncreas e são úteis como medicamentos para prevenir/tratar doenças pancreáticas (e. g., pancreatite aguda ou crónica, cancro pancreático, etc.). 0 derivado de metastina da presente invenção e os seus sais têm efeitos de regulação de funções da placenta e são úteis como medicamentos para prevenir/tratar coriocarcinoma, mola hidatiforme, mola invasiva, aborto espontâneo, hipoplasia fetal, metabolismo anormal da glucose, metabolismo anormal de lipidos ou indução de parto.

De igual modo, o derivado de metastina da presente invenção e sais, têm efeitos de aumento do nivel de açúcar, promoção da secreção de glucagina pancreática e promoção da formação de urina, e são úteis como agentes para prevenir/tratar obesidade, hiperlipemia, diabetes mellitus de tipo II, hipoglicemia, hipertensão, neuropatia diabética, nefropatia diabética, retinopatia diabética, edema, perturbações urinárias, resistência à insulina, diabetes mellitus instável, atrofia gordurosa, alergia à insulina, insulinoma, arteriosclerose, distúrbios trombóticos ou lipotoxicidade.

Além disso, o derivado de metastina da presente invenção e sais, têm excelentes atividades de estimulação de secreção da hormona gonadotrófica, estimulação de secreção de hormonas sexuais, indução de ovulação ou estimulação de ovulação, e são úteis como agentes pouco tóxicos e estáveis, e. g., agentes para melhorar a função gonadal, agentes para prevenir/tratar cancro hormonodependente (e. g., cancro da próstata, cancro da mama, etc.), infertilidade, endometriose, puberdade precoce, mioma do útero, etc., agentes para induzir ou estimular a ovulação, agentes secretagogos da hormona gonadotrófica, contracetivos, agentes secretagogos de hormonas sexuais, ou semelhantes. 0 derivado de metastina da presente invenção e sais, são úteis como agentes para suprimir a secreção da hormona gonadotrófica ou suprimir a secreção de hormonas sexuais; agentes para a regulação negativa da hormona gonadotrófica ou hormonas sexuais; agentes para a regulação negativa da proteína OT7T175 humana (recetor de metastina) que consiste da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 9; agentes para prevenir/tratar cancros hormonodependentes (e. g. , cancro da próstata, cancro da mama, etc.; particularmente, cancro da próstata hormonossensível, cancro da mama hormonossensível, etc.); agentes para prevenir/tratar endometriose; agentes para inibir maturação folicular ovariana; agentes de suspensão do ciclo menstrual; agentes para tratar mioma do útero; agentes para tratar puberdade precoce; contracetivos, etc.

Além disso, o derivado de metastina da presente invenção e sais são úteis como agentes para potenciar a imunidade (e. g., agentes profiláticos de infeção após transplante de medula óssea, agentes para potenciar a imunidade pretendida ao cancro, etc); imunoestimulantes (e. g. , regeneração do timo, novo crescimento do timo, melhoria do desenvolvimento de células T, etc); agentes para prevenir/tratar a atrofia muscular bulboespinal; agentes para proteger o ovário; agentes para prevenir/tratar a hipertrofia prostática benigna (BPH); agentes para prevenir/tratar o distúrbio de identidade de género; ou agentes para fertilização in vitro (IVF). Além disso, estes são também úteis como agentes para prevenir/tratar infertilidade, hipogonadismo, oligospermia, azoospermia, aspermia, astenospermia ou necrospermia. Além do mais, estes são úteis para doenças hormonodependentes (e. g., cancro dependente de hormonas sexuais, tais como cancro da próstata, cancro do útero, cancro da mama, tumor hipofisário, etc.), aumento da glândula da próstata, endometriose, fibroma uterino, puberdade precoce, dismenorreia, amenorreia, sindrome menstrual, sindrome do ovário multilocular, recidiva pós-operatória dos cancros supramencionados, metástase dos cancros supramencionados, hipopituitarismo, nanismo (o caso em que a secreção da hormona do crescimento foi comprometida pela hipossecreção da hormona pituitária, etc.), distúrbio menopáusico, queixa indefinida, distúrbios dependentes de hormonas sexuais, tais como os distúrbios metabólicos ósseos de cálcio e fósforo. É também aplicável à contraceção (ou infertilidade quando são utilizados efeitos de recaída após cessação do fármaco), etc.

Além do mais, a metastina per se ou o ADN codificando a metastina, etc. são também úteis como agentes para suprimir a secreção da hormona gonadotrófica ou secreção de hormonas sexuais; agentes de regulação negativa da hormona gonadotrófica ou supressão de hormonas sexuais; agentes de regulação negativa da proteína OT7T175 humana (recetor de metastina) consistindo da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 9; agentes para prevenir/tratar cancros hormonodependentes (e. g., cancro da próstata, cancro da mama, etc.; particularmente, cancro da próstata hormonossensível, cancro da mama hormonossensível, etc.); agentes para prevenir/tratar endometriose; agentes para inibir a maturação folicular ovariana; agentes de suspensão do ciclo menstrual; agentes para tratar mioma do útero; agentes para tratar puberdade precoce; contracetivos, etc.

Nos derivados de metastina da presente invenção são preferidos os seguintes compostos.

(Composto N1 903) des (1)-Ac-[D-Tyr2,Hyp3,Alb4,Thr5,Cha6,Gly7¥((E)CH=CH)Leu8, Arg(Me)9,Trpl0]MS10

Ac-D-Tyr-Hyp-Alb-Thr-Cha-Gly¥( (E)CH=CH)Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto N1 926) des (1)-Ac-[D-Tyr2,Hyp3,Thr5,Cha6,Gly7¥((E)CH=CH)Leu8,

Trpl0]MS10

Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Cha-Gly¥( (E)CH=CH)Leu-Arg-Trp-NH2 (Composto N2 927) des(1)-Ac-[D-Tyr2,Hyp3,Alb4,Thr5,Cha6,Gly7¥((E)CH=CH)Leu8, Trpl0]MS10

Ac-D-Tyr-Hyp-Alb-Thr-Cha-GlyT7 ( (E) CH=CH) Leu-Arg-Trp-NH2

As fórmulas estruturais destes compostos são mostradas na TABELA 1.

1

Os derivados de metastina da presente invenção podem ser preparados por métodos publicamente conhecidos para a síntese de péptidos. Como métodos para a síntese de péptidos podem ser, por exemplo, utilizados a síntese em fase sólida ou síntese em fase líquida. Isto é, o péptido parcial ou os aminoácidos que podem constituir o péptido da presente invenção são repetidamente condensados com a parte remanescente para dar o produto tendo uma sequência desejada. Quando o produto tem grupos de proteção, estes grupos de proteção são removidos para dar o péptido desejado. Os métodos publicamente conhecidos para a condensação e remoção dos grupos de proteção incluem aqueles, e. g., descritos em (1) a (5) abaixo. 1 2 1 M. Bodanszky & M.A. Ondetti: Peptide Synthesis,

Interscience Publishers, Nova Iorque (1966) 2

Schroeder & Luebke: The Peptide, Academic Press, Nova

Iorque (1965) (3) Nobuo Izumiya, et ai.: Peptide Gosei-no-Kiso to Jikken (Basics and experiments of peptide synthesis), publicado por Maruzen Co. (1975) (4) Haruaki Yajima & Shunpei Sakakibara: Seikagaku Jikken Koza (Biochemical Experiment) 1, Tanpakushitsu no Kagaku (Chemistry of Proteins) IV, 205 (1977) (5) Haruaki Yajima, ed.: Zoku Iyakuhin no Kaihatsu (A sequel to Development of Pharmaceuticals), Vol. 14, Peptide Synthesis, publicado por Hirokawa Shoten

Após conclusão da reação, o produto pode ser purificado e isolado por uma combinação de métodos de purificação convencionais tais como extração com solvente, destilação, cromatografia em coluna, cromatografia liquida e recristalização para dar o péptido da presente invenção. Quando o péptido obtido pelos métodos acima está numa forma livre, o péptido pode ser convertido num sal apropriado por um método publicamente conhecido; reciprocamente, quando o péptido é obtido numa forma de sal, este pode ser convertido na sua forma livre por métodos publicamente conhecidos.

Para condensação dos aminoácidos ou péptidos protegidos, pode utilizar-se uma variedade de reagentes de ativação para a síntese de péptidos, mas são particularmente preferidos os sais de trisfosfónio, sais de tetrametilurónio, carbodiimidas, etc. Os exemplos de sais de trisfosfónio incluem hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxitris(pirrolidino)fosfónio (PyBOP), hexafluorofosfato de bromotris(pirrolidino)fosfónio (PyBroP) e hexafluorofosfato de 7-azabenzotriazol-l-iloxitris(pirrolidino)-fosfónio (PyAOP), os exemplos de sais de tetrametilurónio incluem 2-(lH-benzotriazol-l-il)-1,1,3,3-hexafluorofosfato (HBTU) , 2-(7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-hexafluorofosfato (HATU), tetrafluoroborato de 2-(lH-benzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametilurónio (TBTU), tetrafluoroborato de 2-(5-norborneno- 2,3-dicarboxiimido)-1,1,3,3-tetrametilurónio (TNTU) e tetrafluoroborato de 0-(N-succinimidil)-1,1,3,3-tetrametilurónio (TSTU); os exemplos de carbodiimidas incluem DCC, N,N'-diisopropilcarbodiimida (DIPCDI) e cloridrato de N-etil-N'-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDCI.HC1); etc. Para condensação utilizando estes reagentes é preferida a adição de inibidores de racemização (e. g., HONB, HOBt, HOAt, HOOBt, etc.). Os solventes utilizados em condensação podem ser apropriadamente escolhidos de solventes que são conhecidos como sendo utilizáveis para condensação. Por exemplo, são utilizadas amidas de ácidos tais como N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, N-metilpirrolidona, etc. anidras ou hidratadas, hidrocarbonetos halogenados, tais como cloreto de metileno, clorofórmio, etc., álcoois, tais como trifluoroetanol, fenol, etc., sulfóxidos, tal como dimetilsulfóxido, etc., aminas terciárias, tal como piridina, etc., éteres, tais como dioxano, tetra-hidrofurano, etc., nitrilos, tais como acetonitrilo, propionitrilo, etc., ésteres, tais como acetato de metilo, acetato de etilo, etc., ou misturas adequadas dos mesmos, etc.. A temperatura de reação é apropriadamente escolhida da gama conhecido como sendo aplicável a reações de ligações peptídicas e é normalmente escolhida de modo adequado da gama de cerca de -20 °C a 50 °C. Os derivados de aminoácidos ativados são geralmente utilizados num excesso de 1,5 a 6 vezes. No caso de síntese em fase sólida, a condensação é examinada utilizando a reação de ninidrina; quando a condensação é insuficiente, a condensação pode ser concluída repetindo a reação de condensação sem remoção dos grupos de proteção. Quando a condensação é ainda insuficiente mesmo após repetição da reação, os aminoácidos por reagir são acilados com anidrido acético ou acetilimidazole para cancelar qualquer efeito adverso na reação seguinte.

Os exemplos dos grupos de proteção utilizados para proteger grupos amino nos aminoácidos de partida incluem Z, Boc, terc-pentiloxicarbonilo, isoborniloxicarbonilo, 4-metoxibenziloxicarbonilo, Cl-Z, Br-Z, adamantiloxicarbonilo, trifluoroacetilo, ftaloilo, formilo, 2-nitrofenilsulfenilo, difenilfosfinotioilo, Fmoc, tritilo, etc. Os exemplos de grupos de proteção para um grupo carboxilo incluem, além do grupo alquilo Ci-5, grupo cicloalquilo C3-8 e grupo aralquilo C7-i4 para R descrito acima, o grupo alilo, 2-adamantilo, 4-nitrobenzilo, 4-metoxibenzilo, 4-clorobenzilo, fenacilo, hidrazida de benziloxicarbonilo, hidrazida de terc-butoxicarbonilo, hidrazida de tritilo, etc. 0 grupo hidroxilo de serina e treonina pode ser protegido, por exemplo, por esterificação ou eterificação. Os exemplos de grupos adequados para esta esterificação incluem um grupo derivado de ácido orgânico tal como um grupo alcanoilo inferior (02-4) tal como um grupo acetilo, um grupo aroilo tal como um grupo benzoilo, etc. Os exemplos de um grupo adequado para a eterificação incluem grupo benzilo, grupo tetra-hidropiranilo, grupo terc-butilo, grupo tritilo (Trt), etc.

Os exemplos de grupos para proteger o grupo hidroxilo fenólico da tirosina incluem Bzl, 2,6-diclorobenzilo (Cl2-Bzl), 2-nitrobenzilo, Br-Z, terc-butilo, etc.

Os exemplos de grupos utilizados para proteger a unidade imidazole da histidina incluem Tos, 4-metoxi-2,3,6-trimetilbenzenossulfonilo (Mtr) , DNP, Bom, Bum, Boc, Trt, Fmoc, etc. Os exemplos de grupos de proteção para o grupo guanidino da arginina incluem Tos, Z, 4-metoxi-2,3, 6- trimetilbenzenossulfonilo (Mtr), p-metoxibenzenossulfonilo (MBS), 2,2,5,7,8-pentametilcromano-6-sulfonilo (Pmc), mesitileno-2-sulfonilo (Mts), 2,2,4,6,7-pentametildi- hidrobenzofurano-5-sulfonilo (Pbf), Boc, Z, NO2, etc. Os exemplos de grupos de proteção para o grupo amino da cadeia lateral da lisina incluem Z, Cl-Z, trifluoroacetilo, Boc, Fmoc, Trt, Mtr, 4,4-dimetil-2,6-dioxociclo-hexilidenoilo (Dde), etc.

Os exemplos de grupos de proteção para o indolilo do triptofano incluem formilo (For), Z, Boc, Mts, Mtr, etc.

Os exemplos de grupos de proteção para a asparagina e glutamina incluem Trt, xantilo (Xan), 4,4'-dimetoxibenzidrilo (Mbh), 2,4,6-trimetoxibenzilo (Tmob), etc.

Os exemplos dos grupos carboxilo ativados no material de partida incluem os anidridos de ácido correspondentes, azidas, ésteres ativados [ésteres com álcoois (e. g., pentaclorofenol, 2,4,5-triclorofenol, 2,4-dinitrofenol, álcool cianometílico, p-nitrofenol, HONB, N-hidroxissuccimida, 1-hidroxibenzotriazole (HOBt) ou l-hidroxi-7-azabenzotriazole (HOAt)], etc. Os exemplos de formas ativadas dos grupos amino no material de partida incluem as amidas de fósforo correspondentes.

Para eliminar (dissociar) os grupos de proteção, utiliza-se redução catalítica sob fluxo de hidrogénio gasoso na presença de um catalisador tais como negro de Pd ou Pd-carbono; um tratamento ácido com fluoreto de hidrogénio anidro, ácido metanossulfónico, ácido trifluorometanossulfónico, ácido trifluoroacético, brometo de trimetilsilano (TMSBr), trifluorometanossulfonato de trimetilsililo, ácido tetrafluorobórico, tris(trifluoro)boro, tribrometo de boro ou uma solução mista dos mesmos, um tratamento básico com diisopropiletilamina, trietilamina, piperidina, piperazina, etc., e redução com sódio em amónia líquida. A eliminação dos grupos de proteção pelo tratamento ácido descrito acima é geralmente realizada a uma temperatura de, aproximadamente, 20 °C a 40 °C. No tratamento ácido, é eficaz adicionar uma armadilha de catiões, tais como anisole, fenol, tioanisole, m-cresol, p-cresol, etc., sulfureto de dimetilo, 1.4- butanoditiol, 1,2-etanoditiol, etc. Além disso, o grupo 2.4- dinitrofenilo utilizado como o grupo de proteção para o imidazole da histidina é removido por um tratamento com tiofenol. O grupo formilo utilizado como o grupo de proteção do indole do triptofano é removido pelo tratamento ácido supramencionado na presença de 1,2-etanoditiol, 1.4- butanoditiol, etc. bem como por um tratamento com um alcali, tais como uma solução diluída de hidróxido de sódio, amónia diluída, etc. A proteção de grupos funcionais que não devem estar envolvidos na reação dos materiais de partida, grupos de proteção, remoção dos grupos de proteção e ativação dos grupos funcionais envolvidos na reação podem ser apropriadamente escolhidos de grupos publicamente conhecidos e meios publicamente conhecidos.

Os métodos para se obter a amida do péptido incluem, por exemplo, síntese em fase sólida utilizando resinas para a formação de amidas de péptidos. Noutro método para se obter as amidas de péptidos, por exemplo, o grupo a-carboxilo do aminoácido da extremidade carboxilo é primeiro protegido por amidação; a cadeia peptídica é, em seguida, prolongada a partir do lado do grupo amino até um comprimento desejado. Depois disso, são preparados um péptido no qual apenas o grupo de proteção do grupo α-amino N-terminal na cadeia peptídica foi removido a partir do péptido e um péptido (ou um aminoácido) no qual foi eliminado apenas o grupo de proteção do grupo carboxilo C-terminal. Os dois péptidos são condensados numa mistura dos solventes descritos acima. Os detalhes da reação de condensação são os mesmos como descritos acima. Depois do péptido protegido obtido pela condensação ser purificado, todos os grupos de proteção são removidos pelo método descrito acima para dar o péptido em bruto desejado. Este péptido em bruto é purificado por vários meios de purificação conhecidos. A liofilização da fração principal dá a amida do péptido desejado.

Quando o derivado de metastina da presente invenção está presente na forma de um isómero configuracional, um diastereómero, um confórmero, ou semelhantes, cada um pode ser isolado pelo meio de separação e purificação descrito acima, se desejado. Além disso, quando o composto da presente invenção é racémico, ele pode ser separado num isómero S e num isómero R pelos meios de resolução ótica convencionais.

Quando existem isómeros estéricos no derivado de metastina da presente invenção, a presente invenção inclui ambos estes isómeros sozinhos e os isómeros presentes como uma mistura dos mesmos.

Além disso, o derivado de metastina da presente invenção pode estar também hidratado ou não hidratado. 0 derivado de metastina da presente invenção pode estar também marcado com um isótopo (e. g., 3H, 14C, 35S) , etc.

Ao longo da descrição, os péptidos são representados de acordo com o modo convencional de descrição de péptidos, isto é, a extremidade N-terminal (extremidade amino) do lado esquerdo e a extremidade C-terminal (extremidade carboxilo) do lado direito. Nos péptidos, a extremidade C-terminal está geralmente na forma de uma amida (-CONH2) , um grupo carboxilo (-COOH), um carboxilato (-C00-) , uma alquilamida (-CONHR) ou um éster (-COOR), sendo particularmente preferida a amida (-CONH2) . Os exemplos de R no éster ou alquilamida incluem um grupo alquilo Ci-6 tal como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, etc.; um grupo cicloalquilo C3-8, tal como ciclopentilo, ciclo-hexilo, etc.; um grupo arilo C6-i2, tal como fenilo, a-naftilo, etc.; um grupo aralquilo C7-14 tal como um grupo fenil-alquilo-Ci-2, e. g., benzilo, fenetilo, etc., ou um grupo a-naftil-alquilo-Ci_2 tal como a-naftilmetilo, etc.; grupo pivaloiloximetilo, os quais são amplamente utilizados como um éster para utilização oral, e semelhantes.

Os exemplos de sais do derivado de metastina da presente invenção incluem um sal de metal, um sal de amónio, um sal com uma base orgânica, um sal com ácido inorgânico, um sal com ácido orgânico, um sal com aminoácido básico ou ácido, e semelhantes. Os exemplos preferidos dos sais de metais incluem sais de metais alcalinos tais como sais de sódio, sais de potássio, etc.; sais de metais alcalinoterrosos tais como sais de cálcio, sais de magnésio, sais de bário, etc.; sais de alumínio; e semelhantes. Os exemplos preferidos dos sais com bases orgânicas incluem sais com trimetilamina, trietilamina, piridina, picolina, 2,6-lutidina, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, ciclo-hexilamina, diciclo-hexilamina, N,N'-dibenziletilenodiamina, etc. Os exemplos preferidos dos sais com ácidos inorgânicos incluem sais com ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido nítrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, etc. Os exemplos preferidos de sais com ácidos orgânicos incluem sais com ácido fórmico, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido ftálico, ácido fumárico, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido maleico, ácido cítrico, ácido succínico, ácido málico, ácido metanossulfónico, ácido benzenossulfónico, ácido p-toluenossulfónico, etc. Os exemplos preferidos de sais com aminoácidos básicos incluem sais com arginina, lisina, ornitina, etc., e os exemplos preferidos de sais com aminoácidos ácidos incluem sais com ácido aspártico, ácido glutâmico, etc.

Destes sais são preferidos os sais farmaceuticamente aceitáveis. Por exemplo, quando o composto tem um grupo funcional ácido são preferidos os sais inorgânicos, tais como os sais de metais alcalinos (e. g., sais de sódio, sais de potássio, etc.), sais de metais alcalinoterrosos (e. g., sais de cálcio, sais de magnésio, sais de bário, etc.), sais de amónio, e semelhantes. Quando o composto tem um grupo funcional básico são preferidos os sais com ácidos inorgânicos com ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido nítrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, etc., e sais com ácidos orgânicos, tais como ácido acético, ácido ftálico, ácido fumárico, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido maleico, ácido cítrico, ácido succínico, ácido metanossulfónico, ácido p-toluenossulfónico, etc.. 0 composto da presente invenção tem efeitos de regulação de funções do pâncreas e é útil como agentes terapêuticos/profiláticos para várias doenças pancreáticas (e. g., pancreatite aguda ou crónica, cancro pancreático, etc.).

De igual modo, o composto da presente invenção tem efeitos de aumento do nível de açúcar, promoção de secreção de glucagina pancreática e promoção da formação de urina, e, é útil como um agente hiperglicémico, um agente secretagogo de glucagina pancreática ou um agente de promoção da formação de urina, e. g. , como medicamentos incluindo agentes para prevenir ou tratar, obesidade, hiperlipemia, diabetes mellitus de tipo II, hipoglicemia, hipertensão, neuropatia diabética, nefropatia diabética, retinopatia diabética, edema, perturbações urinárias, resistência à insulina, diabetes mellitus instável, atrofia gordurosa, alergia à insulina, insulinoma, arteriosclerose, distúrbios trombóticos ou lipotoxicidade.

Além disso, o composto da presente invenção tem efeitos de estimulação da secreção da hormona gonadotrófica (e. g. , FSH, LH, etc.), estimulação da secreção de hormonas sexuais [e. g., androgénios (e. g., testosterona, androstenodiona, etc.), estrogénios (e. g. , estradiol, estrona, etc.), progesteronas, etc.], melhoramento da função gonadal e indução ou estimulação da ovulação, bem como um efeito de maturação sexual, etc., e pode ser assim utilizado como um agente para melhorar a função gonadal, um agente para induzir ou estimular a ovulação, um agente secretagogo da hormona gonadotrófica ou um agente secretagogo de hormonas sexuais, ou um agente para prevenir/tratar cancros hormonodependentes [e. g. , cancro da próstata, cancro da mama, etc.], infertilidade [e. g., menstruação irregular, dismenorreia, amenorreia, amenorreia induzida por perda de peso, amenorreia secundária, anovulação, hipoovarianismo, hipogonadismo, insuficiência espermatogenética, hipogonadismo (e. g., impotência, etc.), atrofia genital, atrofia testicular, distúrbio da função testicular, azoospermia, hipoandrogenemia, etc.], endometriose, puberdade precoce, mioma do útero, etc. 0 composto da presente invenção é também útil como: um agente para prevenir/tratar hiperlipemia, diabetes mellitus de tipo II, hipertensão, neuropatia diabética, nefropatia diabética ou retinopatia diabética; um agente antiansiedade; um agente anti-stress; um agente anti-insónia; um agente antimaníaco-depressivo; um agente para prevenir/tratar hipertensão (e. g. , hipertensão essencial, hipertensão renal, hipertensão sensível a sais, etc.), angina de peito (e. g., angina estável, angina instável, etc.), enfarte do miocárdio, distúrbios cerebrovasculares (e. g., distúrbio cerebrovascular assintomático, ataque isquémico transitório, apoplexia, demência cerebrovascular, encefalopatia hipertensiva, enfarte cerebral, etc.), insuficiência venosa, distúrbios circulatórios periféricos obliterantes, doença de Raynaud, arteriosclerose incluindo aterosclerose (e. g., aneurisma, arteriosclerose coronária, arteriosclerose cerebral, arteriosclerose periférica, etc.), espessamento vascular ou oclusão e deficiências de órgãos após intervenção (e. g. , intervenção coronária percutânea, colocação de endoprótese, terapia trombolítica coronária, etc.), hipertensão portal, distúrbios respiratórios (e. g., asma, hipertensão pulmonar, etc.); um agente para prevenir/tratar a tolerância reduzida à glucose (IGT); um secretagogo de insulina, um inibidor da transição de IGT para diabetes; um agente para prevenir/tratar complicações diabéticas [e. g., neuropatia, nefropatia, retinopatia, catarata, macroangiopatia, osteopenia, coma diabético hiperosmolar, doenças infecciosas (e. g., infeção respiratória, infeção do aparelho urinário, infeção do aparelho digestivo, infeção da pele e dos tecidos moles, infeção da perna inferior), gangrena diabética, xerostomia, hipoacusia, distúrbio cerebrovascular, distúrbio circulatório periférico], osteoporose, caquexia (e. g. , caquexia associada ao cancro, caquexia tuberculosa, caquexia associada à diabetes, caquexia associada a doença sanguínea, caquexia associada a doenças endócrinas, caquexia associada a doenças infecciosas ou caquexia devido a síndrome da imunodeficiência adquirida), fígado gordo, síndrome do ovário policístico, doenças renais (e. g. , nefropatia diabética, glomerulonefrite, glomerulosclerose, síndrome nefrótica, nefroesclerose hipertensiva, doença renal de fase terminal), distrofia muscular, enfarte cardíaco, angina de peito, distúrbios cerebrovasculares (e. g., enfarte cerebral, apoplexia), doença de Alzheimer, doença de Parkinson, demência, síndrome de resistência à insulina, X Síndrome X, síndrome metabólica, hiperinsulinemia, distúrbios sensoriais induzidos por hiperinsulinemia, tumores (e. g., leucemia, cancro da pele), síndrome do intestino irritável, diarreia aguda ou crónica, doenças inflamatórias (e. g., espondilite deformante, artrite deformante, lumbago, gota, inflamação pós-operatória ou pós-traumática, tumefação, nevralgia, faringolaringite, cistite, hepatite (incluindo esteato-hepatite não alcoólica), pneumonia, enterite, distúrbio inflamatório do intestino (incluindo doenças inflamatórias do intestino), colite ulcerosa, dano da mucosa gástrica (incluindo dano da mucosa gástrica induzido por aspirina)), danos da mucosa do intestino delgado, malabsorção, distúrbio da função testicular, sindrome de obesidade visceral, etc.;

Os compostos descritos no documento W02004/063221, os compostos descritos no documento W02006/001499 e os compostos descritos no documento W02007/072997, ou os seus sais, são também úteis como agentes para prevenir/tratar doenças reumáticas (e. g., artrite reumatoide, osteoartrite, gota, etc.) ou semelhantes.

Os compostos da presente invenção podem ser utilizados em associação com fármacos, e. g., agentes quimioterapêuticos para tratar cancro, agentes terapêuticos hormonais, agentes imunoterapêuticos, fármacos para inibir as ações dos fatores de crescimento celular e seus recetores, etc. (a seguir referidos simplesmente como agentes simultâneos) . Os exemplos do "agentes quimioterapêuticos" incluem agentes alquilantes, antimetabolitos, antibióticos anticancerigenos, agentes anticancerigenos de origem vegetal, etc. Especificamente, podem ser utilizados os fármacos descritos em último lugar.

Além disso, o composto da presente invenção tem excelente estabilidade sanguínea, solubilidade e estabilidade em solução, em comparação com a metastina nativa tal como metastina 54 (1-54) ou metastina 10 (45-54). 0 derivado de metastina da presente invenção ou seu sal ou profármaco, metastina per se, ou ADN codificando metastina, etc. é útil como um agente para suprimir a secreção da hormona gonadotrófica (e. g. , FSH, LH) ou secreção de hormonas sexuais [e. g., androgénio (e. g., testosterona, androstenodiona), estrogénio (e. g., estradiol, estrona), progesterona]; etc.; em particular, é útil para suprimir a secreção da hormona gonadotrófica ou secreção de hormonas sexuais através da regulação negativa da hormona gonadotrófica ou hormonas sexuais (em que, a regulação negativa da hormona gonadotrófica ou hormonas sexuais pode ser a perda de impulso de LHRH ou depleção de LHRH) ou regulação negativa da proteína OT7T175 humana (recetor de metastina) que consiste da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 9; particularmente útil como um agente para prevenir ou tratar cancros hormonodependentes (e. g., cancro da próstata, cancro da mama, etc.; especialmente um cancro da próstata, cancro da próstata hormonossensível, etc.); um agente para prevenir ou tratar endometriose; um agente para inibir a maturação folicular ovariana; um agente de suspensão do ciclo menstrual; um agente para tratar mioma do útero; um agente para tratar puberdade precoce; ou como um contracetivo, etc. Quando o derivado de metastina da presente invenção ou seu sal ou profármaco, metastina per se, ou ADN codificando metastina, etc. tem atividade agonista normal, uma dose eficaz do derivado de metastina suficiente para suprimir a secreção da hormona gonadotrófica ou hormonas sexuais é administrada no sítio ou tecido onde se pretende que sejam exercidos os efeitos terapêuticos, para que o derivado de metastina esteja presente numa dose mais do que necessária (i. e., o derivado de metastina é administrado num excesso em relação à dose eficaz normal, à qual o derivado de metastina exerce os efeitos de supressão da metástase de cancros, supressão do crescimento de cancros, etc.; ou o efeito de promoção de secreção da hormona gonadotrófica, o efeito de promoção de secreção de hormonas sexuais, etc.) para exibir os efeitos de supressão da secreção da hormona gonadotrófica ou secreção de hormonas sexuais. Os exemplos específicos incluem a administração sustentada ou contínua da dose eficaz normal (incluindo uma técnica de administração para libertar gradualmente os ingredientes farmacêuticos por administração bolus); e semelhantes. Além do mais, quando o derivado de metastina da presente invenção ou seu sal ou o seu profármaco, etc. tem uma atividade agonista suficiente mais do que necessária (uma atividade superagonista), torna-se possível manter as atividades a um nível superior às apresentadas pela dose necessária no sítio ou tecido onde é para ser exibido o efeito terapêutico. Por conseguinte, é suficiente mesmo através da administração de doses eficazes normais suprimir a secreção da hormona gonadotrófica ou hormonas sexuais, pelo que é exibido o efeito de supressão de secreção da hormona gonadotrófica ou secreção de hormonas sexuais.

Por outras palavras, uma dose eficaz do derivado de metastina da presente invenção ou o seu sal ou profármaco, metastina per se, ou ADN codificando metastina, etc. suficiente para suprimir a secreção da hormona gonadotrófica ou hormonas sexuais é administrada para que o derivado de metastina esteja presente numa dose mais do que necessária no sítio ou tecido onde se pretende que sejam exercidos os efeitos terapêuticos, ou as suas atividades podem ser mantidas mais do que necessárias, o que permite que exiba os efeitos de supressão da secreção da hormona gonadotrófica ou supressão da secreção de hormonas sexuais. 0 medicamento compreendendo o composto da presente invenção é pouco tóxico. Por conseguinte, o composto da presente invenção pode ser administrado de modo seguro, diretamente tal e qual ou como uma mistura com veículos farmacologicamente aceitáveis, por via oral ou por via parentérica (e. g., por via tópica, retal, intravenosa, etc.), na forma de preparações farmacêuticas tais como comprimidos (incluindo drageias e comprimidos revestidos com película), formas de dosagem em pó, granulados, cápsulas (incluindo cápsulas moles), formas de dosagem líquidas, injeções, supositórios, formas de dosagem de libertação sustentada, etc., de acordo com meios publicamente conhecidos geralmente utilizados em processos de produção de preparações farmacêuticas. 0 composto da presente invenção está contido na preparação farmacêutica da presente invenção em cerca de 0,01 a cerca de 100% em peso, com base no peso total da preparação.

Uma dose do composto da presente invenção pode variar dependendo do indivíduo a ser administrado, órgão alvo, condições, via de administração, etc., e na administração oral, o composto é geralmente administrado ao doente (com 60 kg de peso corporal) com cancro numa dose diária de cerca de 0,01 a cerca de 100 mg, de um modo preferido, cerca de 0,1 a cerca de 50 mg e, de um modo mais preferido, cerca de 0,1 a cerca de 20 mg. Na administração parentérica, uma dose única do composto pode variar dependendo do indivíduo a ser administrado, órgão alvo, condições, via de administração, etc., e na forma de uma forma de dosagem injetável, é vantajoso administrar o composto ao doente (com 60 kg de peso corporal) com cancro geralmente numa dose diária de cerca de 0,001 a cerca de 30 mg, de um modo preferido cerca de 0,01 a cerca de 20 mg e de um modo mais preferido cerca de 0,01 a cerca de 10 mg. Para outras espécies animais, pode administrar-se a dose correspondente como convertida por 60 kg de peso.

Os veículos farmacologicamente aceitáveis que podem ser utilizados no fabrico da preparação farmacêutica da presente invenção incluem várias substâncias transportadoras orgânicas ou inorgânicas convencionalmente utilizadas como materiais para preparações farmacêuticas. Estas substâncias incluem, e. g., um excipiente, um lubrificante, um aglutinante e um desintegrante numa forma de dosagem sólida, e um solvente, um auxiliar de dissolução, um agente de suspensão, um agente isotonizante, um tampão, um agente calmante, etc. numa forma de dosagem líquida. Além disso, aditivos convencionais, tais como um conservante, um antioxidante, um corante, um edulcorante, um adsorvente, um humectante, etc., podem ser apropriadamente utilizados em quantidades adequadas, se for necessário. Os exemplos de excipientes incluem lactose, sacarose, D-manitol, amido, amido de milho, celulose cristalina, ácido silícico anidro leve, etc. Os exemplos de lubrificantes incluem estearato de magnésio, estearato de cálcio, talco, sílica coloidal, etc.

Os exemplos de aglutinantes incluem celulose cristalina, sacarose, D-manitol, dextrina, hidroxipropilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, polivinilpirrolidona, amido, sacarose, gelatina, metilcelulose, carboximetilcelulose sódica, etc.

Os exemplos de desintegrantes incluem amido, carboximetilcelulose, carboximetilcelulose cálcica, carboximetilamido de sódio, L-hidroxipropilcelulose, etc.

Os exemplos de solventes incluem água para preparação injetável, álcool, propilenoglicol, Macrogol, óleo de sésamo, óleo de milho, azeite, etc.

Os exemplos de auxiliares de dissolução incluem polietilenoglicol, propilenoglicol, D-manitol, benzoato de benzilo, etanol, trisaminometano, colesterol, trietanolamina, carbonato de sódio, citrato de sódio, etc.

Os exemplos de agentes de suspensão incluem tensioativos tais como esteariltrietanolamina, laurilsulfato de sódio, aminopropionato de laurilo, lecitina, cloreto de benzalcónio, cloreto de benzetónio, monoestearato de glicerina, etc.; polímeros hidrófilos, tais como poli(álcool vinílico), polivinilpirrolidona, carboximetilcelulose sódica, metilcelulose, hidroximetilcelulose, hidroxietilcelulose, hidroxipropilcelulose, etc.

Os exemplos de agentes isotonizantes incluem glucose, D-sorbitol, cloreto de sódio, glicerina, D-manitol, etc.

Os exemplos de tampões incluem soluções tampão de um fosfato, acetato, carbonato, citrato, etc.

Os exemplos de agentes calmantes incluem álcool benzílico, etc.

Os exemplos de conservantes incluem p-hidroxibenzoatos, clorobutanol, álcool benzílico, álcool fenetílico, ácido desidroacético, ácido sórbico, etc.

Os exemplos de antioxidantes incluem um sulfito, ácido ascórbico, α-tocoferol, etc.

Além disso, o composto da presente invenção pode ser utilizado em associação com fármacos diferentes do composto da presente invenção.

Os exemplos de fármacos que podem ser utilizados em associação com o composto da presente invenção (a seguir por vezes referidos simplesmente como fármacos simultâneos) incluem agentes quimioterapêuticos para tratar cancro, agentes terapêuticos hormonais, agentes imunoterapêuticos, fármacos para inibir as ações dos fatores de crescimento celular e seus recetores, etc. (a seguir referido simplesmente como agentes simultâneos) .

Os exemplos de "agentes quimioterapêuticos" incluem agentes alquilantes, antimetabolitos, antibióticos anticancerígenos, agentes anticancerígenos de origem vegetal, etc.

Os exemplos de "agentes alquilantes" incluem mostarda de azoto, cloridrato de N-óxido de mostarda de azoto, clorambutilo, ciclofosfamida, ifosfamida, tiotepa, carboquona, tosilato de improssulfano, bussulfano, cloridrato de nimustina, mitobronitol, melfalano, dacarbazina, ranimustina, fosfato de estramustina de sódio, trietilenomelamina, carmustina, lomustina, estreptozocina, pipobromano, etoglucida, carboplatina, cisplatina, miboplatina, nedaplatina, oxaliplatina, altretamina, ambamustina, cloridrato de dibrospidio, fotemustina, prednimustina, pumitepa, ribomustina, temozolomida, treossulfano, trofosfamida, estimalâmero de zinostatina, carboquona, adozelesina, cistemustina, bizelesina, etc .

Os exemplos de "antimetabolitos" incluem mercaptopurina, 6-mercaptopurina ribosidea, tioinosina, metotrexato, enocitabina, citarabina, ocfosfato de citarabina, cloridrato de ancitabina, fármacos de 5-FU (e. g., fluorouracilo, tegafur, UFT, doxifluridina, carmofur, galhocitabina, emitefur, etc.), aminopterina, leucovorina cálcica, tabloide, butocina, folinato de cálcio, levofolinato de cálcio, cladribina, emitefur, fludarabina, gencitabina, hidroxicarbamida, pentostatina, piritrexim, idoxuridina, mitoguazona, tiazofrina, ambamustina, etc .

Os exemplos de "antibióticos anticancerigenos" incluem actinomicina D, actinomicina C, mitomicina C, cromomicina A3, cloridrato de bleomicina, sulfato de bleomicina, sulfato de peplomicina, cloridrato de daunorrubicina, cloridrato de doxorrubicina, cloridrato de aclarrubicina, cloridrato de pirarrubicina, cloridrato de epirrubicina, neocarzinostatina, mitramicina, sarcomicina, carzinofilina, mitotano, cloridrato de zorrubicina, cloridrato de mitoxantrona, cloridrato de idarrubicina, etc.

Os exemplos de "agentes anticancerigenos de origem vegetal" incluem etoposido, fosfato de etoposido, sulfato de vinblastina, sulfato de vincristina, sulfato de vindesina, teniposido, paclitaxel, docetaxel, vinorrelbina, etc.

Os exemplos de "agentes terapêuticos hormonais" incluem fosfestrol, dietilestilbestrol, clorotrianiseno, acetato de medroxiprogesterona, acetato de megestrol, acetato de clormadinona, acetato de ciproterona, danazol, alilestrenol, gestrinona, mepartricina, raloxifeno, ormeloxifeno, levormeloxifeno, anti-estrogénios (e. g., citrato de tamoxifeno, citrato de toremifeno, etc.), formas de dosagem em pílulas, mepitiostano, testrolactona, aminoglutetimida, agonistas de LH-RH (e. g., acetato de goserrelina, buserrelina, leuprorrelina, etc.), droloxifeno, epitiostanol, sulfonato de etinilestradiol, inibidores de aromatase (e. g. , cloridrato de fadrozole, anastrozole, retrozole, exemestano, vorozole, formestano, etc.), antiandrogénios (e. g. , flutamida, bicartamida, nilutamida, etc.), inibidores de 5a-redutase (e. g., finasterida, epristerida, etc.), fármacos da hormona adrenocorticotrópica (e. g. , dexametasona, prednisolona, betametasona, triancinolona, etc.), inibidores da síntese de androgénios (e. g. , abiraterona, etc.), retinoides e fármacos que retardam o metabolismo de retinoides (e. g., liarozole, etc.) e, entre outros, são preferidos os agonistas de LH-RH (e. g. , acetato de goserrelina, buserrelina, leuprorrelina, etc.).

Os exemplos de "agentes imunoterapêuticos (BRM)" incluem picibanil, crestina, sizofirano, lentinano, ubenimex, interferões, interleucinas, fator de estimulação de colónias de macrófagos, fator de estimulação de colónias de granulócitos, eritropoietina, linfotoxina, vacina de BCG, Corynebacterium parvum, levamisol, polissacárido K, procodazole, etc.

Os "fatores de crescimento celular" nos "fármacos para inibir as ações dos fatores de crescimento celular e os seus recetores" podem ser qualquer substância desde que seja um material que estimule o crescimento de células e, normalmente, os péptidos que têm um peso molecular de 20000 ou menos e que se ligam aos seus recetores para exibir as ações a um nivel mais baixo podem ser utilizados como fatores. Os exemplos específicos são (1) EGF (fator de crescimento epidérmico) ou substâncias possuindo substancialmente a mesma atividade que o EGF [e. g., EGF, hereglina, etc.], (2) insulina ou substâncias que têm substancialmente a mesma atividade que a insulina [e. g., insulina, IGF (fator de crescimento análogo a insulina)-1, IGF-2, etc.], (3) FGF (fator de crescimento de fibroblastos) ou substâncias que têm substancialmente a mesma atividade que o FGF [e. g., FGF ácido, FGF básico, KGF (fator de crescimento de queratinócitos), FGF-10, etc.], (4) outros fatores de crescimento celular [e. g. , CSF (fator de estimulação de colónias), EPO (eritropoietina), IL-2 (interleucina-2), NGF (fator de crescimento de tecido nervoso), PDGF (fator de crescimento derivado de plaquetas), TGFp (fator de crescimento transformante β), HGF (fator de crescimento de hepatócitos),VEGF (fator de crescimento do endotélio vascular), etc.] e semelhantes.

Os "recetores dos fatores de crescimento celular" podem ser qualquer recetor desde que seja capaz de se ligar aos fatores de crescimento celular descritos acima e os exemplos específicos são recetor de EGF, recetor de hereglina (HER2), recetor de insulina, recetor de IGF, recetor de FGF-1 ou recetor de FGF-2, etc.

Como o "agente que inibe o efeito do fator de crescimento celular" inclui o anticorpo HER2 (trastuzumab (Herceptina (marca registada)), etc.), mesilato de imatinib, ZD1839 ou anticorpo contra o EGFR (cetuximab (Erbitux (marca registada)), etc.), anticorpo contra o VEGF (e. g., Bevacizumab (Avastin (marca registada))), anticorpo contra o VEGFR, inibidor de VEGFR, inibidor de EGFR (erlotinib (Tarceva (marca registada)), gefitinib (Iressa (marca registada)), etc.)

Além dos agentes supramencionados, utiliza-se também L-asparginase, aceglatona, cloridrato de procarbazina, complexo de protoporfirina-cobalto, mercúrio-hematoporfirina sódica, inibidor de topoisomerase I (e. g., Irinotecano, Topotecano, etc.), inibidor de topoisomerase II (e. g., Sobzoxan, etc.), agente de indução da diferenciação (e. g., retinoide, grupo da vitamina D, etc.), inibidor da angiogénese (e. g., talidomida, SU11248, etc.), bloqueador a (e. g. , cloridrato de tansulosina, naftopidil, urapidil, alfuzosina, terazosina, prazosina, silodosina, etc.), inibidor de serina-treonina-cinase, antagonista do recetor de endotelina (e. g., atrasentan, etc.), inibidor de proteassoma (e. g., bortezomib, etc.), inibidor de HSP90 (e. g., 17-AAG, etc.), espironolactona, minoxidil, 1Ια-hidroxiprogesterona, inibidor da reabsorção óssea/supressor de metástases ósseas (e. g., ácido zoledrónico, ácido alendrónico, ácido pamidrónico, ácido etidrónico, ácido ibandrónico, ácido clodrónico), etc. A utilização associada do composto da presente invenção e de um fármaco simultâneo exibe os seguintes efeitos excelentes. (1) A dose pode ser reduzida em comparação com a dose quando o composto da presente invenção ou um fármaco simultâneo é administrado sozinho. (2) Um fármaco administrado concomitantemente com o composto da presente invenção pode ser escolhido dependendo da condição (ligeira, grave, etc.) de um doente. (3) Um fármaco simultâneo, cujo mecanismo funcional é diferente daquele do composto da presente invenção, pode ser escolhido para que possa ser estabelecido um intervalo de tratamento mais prolongado. (4) Um fármaco simultâneo, cujo mecanismo funcional é diferente daquele do composto da presente invenção, pode ser escolhido para que possam ser conseguidos efeitos terapêuticos sustentados. (5) Pode ser obtido um efeito sinérgico pela utilização simultânea do composto da presente invenção e de um fármaco simultâneo.

Além disso, o composto da presente invenção pode reduzir os valores de testosterona para efeminar o nivel imediatamente após medicação. Assim, quando o fármaco simultâneo, tal como o agonista de LH-RH (e. g., acetato de goserrelina, buserrelina, leuprorrelina, etc.; de um modo preferido leuprorrelina) é utilizado em associação com o composto da presente invenção, os valores de testosterona podem ser reduzidos para efeminar o nível imediatamente após medicação do composto da presente invenção. Além disso, uma vez que a utilização associada do fármaco simultâneo tal como o agonista de LH-RH (e. g. , acetato de goserrelina, buserrelina, leuprorrelina, etc.; de um modo preferido leuprorrelina) e do composto da presente invenção resulta numa conservação prolongada do período hormonodependente, ela pode ser vantajosamente utilizada. A seguir, a utilização combinada do composto da presente invenção e do fármaco simultâneo é referida como "a preparação de associação da presente invenção".

Quando é utilizada a preparação de associação da presente invenção, o período de administração do composto da presente invenção e do fármaco simultâneo não está restringido; o composto da presente invenção ou a sua composição farmacêutica e o fármaco simultâneo ou a sua composição farmacêutica podem ser administrados ao indivíduo a ser administrado simultaneamente ou em certos intervalos de tempo. A dose do fármaco simultâneo pode ser modificada de acordo com a dose utilizada clinicamente e pode ser apropriadamente escolhida dependendo do indivíduo a ser administrado, via para administração, doença, associação, etc. 0 modo de administração da preparação de associação da presente invenção não está particularmente limitado, mas é suficiente que o composto da presente invenção seja utilizado em associação com o fármaco simultâneo na altura de administração. Como um tal modo de administração, existe, por exemplo, a (1) administração de uma única forma de dosagem obtida misturando o composto da presente invenção e o fármaco simultâneo em conjunto ao mesmo tempo, (2) administração simultânea de duas formas de dosagem preparadas separadamente a partir do composto da presente invenção e do fármaco simultâneo através da mesma via de administração, (3) administração de duas formas de dosagem preparadas separadamente a partir do composto da presente invenção e do fármaco simultâneo em certos intervalos de tempo através da mesma via de administração, (4) administração simultânea de duas formas de dosagem preparadas separadamente a partir do composto da presente invenção e do fármaco simultâneo através de diferentes vias de administração, (5) administração de duas formas de dosagem preparadas separadamente a partir do composto da presente invenção e do fármaco simultâneo em certos intervalos de tempo (e. g., administração do composto da presente invenção e do fármaco simultâneo por esta ordem ou administração pela ordem inversa) através de diferentes vias de administração, etc. A preparação de associação da presente invenção é pouco tóxica e, desse modo, pode ser administrada de forma segura pela via oral ou parentérica (e. g. , por via tópica, retal, intravenosa, etc.) na forma de preparações farmacêuticas, tais como comprimidos (incluindo drageias e comprimidos revestidos com película), formas de dosagem em pó, granulados, cápsulas (incluindo cápsulas moles), formas de dosagem líquidas, injeções, supositórios, formas de dosagem de libertação sustentada, etc., as quais são obtidas misturando o composto da presente invenção ou (e) o fármaco simultâneo descrito acima com veículos farmacologicamente aceitáveis pelos métodos publicamente conhecidos. As formas de dosagem injetáveis podem ser administradas por via intravenosa, por via intramuscular ou por via subcutânea, no órgão, ou diretamente no foco.

Os veículos farmacologicamente aceitáveis, os quais podem ser utilizados para fabricar a preparação de associação da presente invenção, incluem várias substâncias veículo orgânicas ou inorgânicas convencionalmente utilizadas como materiais para preparações farmacêuticas. Estas substâncias incluem, e. g., um excipiente, um lubrificante, um aglutinante e um desintegrante numa forma de dosagem sólida, e um solvente, um auxiliar de dissolução, um agente de suspensão, um agente isotonizante, um tampão, um agente calmante, etc. numa forma de dosagem líquida. Além disso, se for necessário, aditivos convencionais, tais como um conservante, um antioxidante, um corante, um edulcorante, um adsorvente, um humectante, etc., podem ser apropriadamente utilizados em quantidades adequadas.

Os exemplos de excipientes incluem lactose, sacarose, D-manitol, amido, amido de milho, celulose cristalina, ácido silícico anidro leve, etc.

Os exemplos de lubrificantes incluem estearato de magnésio, estearato de cálcio, talco, sílica coloidal, etc.

Os exemplos de agentes calmantes incluem álcool benzílico, etc.

Os exemplos de antioxidantes incluem um sulfito, ácido ascórbico, a-tocoferol, etc.

Na preparação de associação da presente invenção, a proporção do composto da presente invenção para o fármaco simultâneo pode ser apropriadamente escolhida dependendo do indivíduo a ser administrado, via de administração, doença, etc.

Por exemplo, a quantidade do composto da presente invenção contida na preparação de associação da presente invenção varia dependendo da forma de dosagem da preparação, mas é geralmente de cerca de 0,01 a 100% em peso, de um modo preferido, cerca de 0,1 a 50% em peso e, de um modo mais preferido, cerca de 0,5 a 20% em peso, com base no peso total da preparação. A quantidade do fármaco simultâneo contida na preparação de associação da presente invenção varia dependendo da forma de dosagem da preparação, mas é geralmente de cerca de 0,01 a 100% em peso, de um modo preferido, cerca de 0,1 a 50% em peso e, de um modo mais preferido, cerca de 0,5 a 20% em peso, com base no peso total da preparação. A quantidade de aditivos tal como um veículo, etc. contida na preparação de associação da presente invenção varia dependendo da forma de dosagem da preparação e é geralmente de cerca de 1 a 99, 99% em peso, de um modo preferido, cerca de 10 a 90% em peso, com base no peso total da preparação.

Estas quantidades podem ser iguais, mesmo quando o composto da presente invenção e o fármaco simultâneo são preparados separadamente, respetivamente.

Estas preparações podem ser fabricadas por métodos publicamente conhecidos per se convencionalmente utilizados em geral.

Por exemplo, o composto da presente invenção ou o fármaco simultâneo pode ser preparado numa forma de dosagem injetável por formulação com um dispersante (e. g. , Tween 80 (fabricado por Atlas Powder Company, EUA), HCO 60 (fabricado por Nikko Chemicals Co. , Ltd.), polietilenoglicol, carboximetilcelulose, alginato de sódio, hidroxipropilmetilcelulose, dextrina, etc.), um estabilizante (e. g., ácido ascórbico, pirossulfito sódico), um tensioativo (e. g. , polissorbato 80, macrogol, etc.), um solubilizante (e. g., glicerina, etanol, etc.), um agente tampão (e. g., ácido fosfórico ou seu sal de metal alcalino, ácido cítrico ou seu sal de metal alcalino, etc.), um agente isotonizante (e. g., cloreto de sódio, cloreto de potássio, manitol, sorbitol, glucose, etc.), um agente de ajuste de pH (e. g., ácido clorídrico, hidróxido de sódio, etc.), um conservante (e. g., p-oxibenzoato de etilo, ácido benzoico, metilparabeno, propilparabeno, álcool benzílico, etc.), um solubilizante (e. g. , glicerina concentrada, meglumina, etc.), um auxiliar de dissolução (e. g., propilenoglicol, sacarose, etc.), um agente calmante (e. g., glucose, álcool benzílico, etc.), para preparar numa injeção aquosa; ou por dissolução, suspensão ou emulsificação com um óleo vegetal, tais como azeite, óleo de sésamo, óleo de semente de algodão, óleo de milho, etc., um auxiliar de dissolução, tal como propilenoglicol ou semelhantes para preparar numa injeção oleosa.

Uma forma de dosagem oral pode ser produzida de um modo convencional adicionando ao composto da presente invenção ou ao fármaco simultâneo, por exemplo, um excipiente (e. g. , lactose, sacarose, amido, etc.), um desintegrante (e. g., amido, carbonato de cálcio, etc.), um aglutinante (e. g., amido, goma-arábica, carboximetilcelulose, polivinilpirrolidona, hidroxipropilcelulose, etc.), um lubrificante (e. g., talco, estearato de magnésio, polietilenoglicol 6000, etc.) e outros aditivos, comprimindo a mistura resultante e, se for necessário, revestindo o produto comprimido para efeitos de dissimulação do sabor, degradação entérica ou libertação sustentada por técnicas publicamente conhecidas per se. Os agentes de revestimento para este efeito incluem, por exemplo, hidroxipropilmetilcelulose, etilcelulose, hidroximetilcelulose, hidroxipropilcelulose, polioxietileno glicol, Tween 80, Prulonic F68, acetato ftalato de celulose, ftalato de hidroxipropilmetilcelulose, acetato succinato de hidroximetilcelulose, Eudragit (fabricado por Rohm Company, Alemanha, copolimero de ácido metacrilico/ácido acrílico) e corantes (e. g., óxido de ferro, dióxido de titânio) . A forma de dosagem oral pode ser uma forma de dosagem de libertação imediata ou uma forma de dosagem de libertação sustentada.

Por exemplo, num supositório, o composto da presente invenção ou o fármaco simultâneo é preparado numa composição sólida, semissólida ou líquida oleosa ou aquosa por técnicas publicamente conhecidas per se. As bases oleosas utilizadas para a composição descrita acima incluem glicéridos de ácidos gordos superiores [e. g., manteiga de cacau, witepsols (fabricados por Dynamite Nobel Company, Alemanha), etc.], ácidos gordos médios [e. g. , miglyols (fabricados por Dynamite Nobel Company, Alemanha), etc.], óleos vegetais (e. g., óleo de sésamo, óleo de soja, óleo de semente de algodão, etc.), e semelhantes. As bases aquosas incluem, por exemplo, polietileno glicóis e propilenoglicol. As bases para geles aquosos incluem, por exemplo, borrachas naturais, derivados de celulose, polímeros de vinilo, polímeros acrílicos, etc.

Os exemplos da forma de dosagem de libertação sustentada acima incluem microcápsulas de libertação sustentada, e semelhantes.

As microcápsulas de libertação sustentada podem ser obtidas por métodos publicamente conhecidos per se e são, de um modo preferido, preparadas na forma de, e. g. , uma forma de dosagem de libertação sustentada pelo método [2] mostrado abaixo e administradas.

De um modo preferido, o composto da presente invenção é preparado numa forma de dosagem para administração oral, tal como uma forma de dosagem sólida (e. g., forma de dosagem em pó, granulados, comprimidos, cápsulas) ou numa forma de dosagem para administração retal, tal como um supositório, etc. É particularmente preferida uma forma de dosagem para administração oral. 0 fármaco simultâneo pode ser preparado numa forma de dosagem descrita acima, dependendo do tipo de fármaco. A seguir será especificamente descrita [1] uma preparação injetável do composto da presente invenção ou do fármaco simultâneo e a sua produção, [2] uma preparação de libertação sustentada ou libertação imediata do composto da presente invenção ou do fármaco simultâneo e a sua produção e [3] uma preparação sublingual, bucal ou de desintegração oral rápida do composto da presente invenção ou do fármaco simultâneo e a sua produção.

[1] Preparação Injetável e sua Produção É preferida uma preparação injetável obtida dissolvendo o composto da presente invenção ou o fármaco simultâneo em água. A preparação injetável pode conter um benzoato e/ou um salicilato. A preparação injetável é obtida dissolvendo o composto da presente invenção ou o fármaco simultâneo e opcionalmente um benzoato e/ou um salicilato em água.

Os exemplos do benzoato e/ou salicilato descrito acima incluem um sal de metal alcalino tais como sais de sódio e potássio, etc., um sal de metal alcalinoterroso, tais como sais de cálcio e magnésio, etc., um sal de amónio, um sal de meglumina, um sal de um ácido orgânico, tal como trometamol, e semelhantes.

A concentração do composto da presente invenção ou do fármaco simultâneo na preparação injetável é cerca de 0,05 a 50% p/v, de um modo preferido, cerca de 0,3 a 20% p/v. A concentração do benzoato e/ou salicilato é 0,5 a 50% p/v, de um modo preferido, 3 a 20% p/v.

Além disso, aditivos geralmente utilizados numa preparação injetável, tais como um estabilizante (ácido ascórbico, pirossulfito sódico, etc.), um tensioativo (polissorbato 80, macrogol, etc.), um solubilizante (glicerina, etanol, etc.), um agente tampão (ácido fosfórico e seu sal de metal alcalino, ácido cítrico e o seu sal de metal alcalino, etc.), um agente isotonizante (cloreto de sódio, cloreto de potássio, etc.), um dispersante (hidroxipropilmetilcelulose, dextrina), um agente de ajuste de pH (ácido clorídrico, hidróxido de sódio, etc.), um conservante (p-oxibenzoato de etilo, ácido benzoico, etc.), um solubilizante (glicerina concentrada, meglumina, etc.), um auxiliar de dissolução (propilenoglicol, sacarose, etc.), um agente calmante (glucose, álcool benzílico, etc.) são apropriadamente adicionados à preparação. Qualquer um destes aditivos é adicionado numa quantidade geralmente utilizada numa preparação injetável. A preparação injetável é ajustada a pH 2 a 12, de um modo preferido, 2,5 a 8,0 adicionando um agente de ajuste de pH. A preparação injetável é obtida dissolvendo o composto da presente invenção ou o fármaco simultâneo e opcionalmente um benzoato e/ou salicilato e, se for necessário, os aditivos acima em água. Estes componentes podem ser dissolvidos por qualquer ordem de acordo com o mesmo modo que numa preparação injetável convencional.

Uma solução aquosa para injeção é, de um modo preferido, aquecida e utilizada como uma preparação injetável após esterilização por filtração ou autoclavada como numa preparação injetável convencional para proporcionar uma preparação injetável.

Uma preparação injetável aquosa é, de um modo preferido, autoclavada, e. g., a 100 a 121 °C durante 5 a 30 minutos.

Além do mais, a preparação pode estar numa forma de solução à qual é conferida atividade antibacteriana para ser utilizada como uma forma de dosagem múltipla em administração dividida.

[2] Preparação de Libertação Sustentada ou Libertação Imediata e a sua Produção

Uma preparação de libertação sustentada preferida compreende um núcleo compreendendo o composto da presente invenção ou o fármaco simultâneo, o qual está opcionalmente revestido com um material insolúvel em água ou um polímero de dilatação. Por exemplo, é preferida uma preparação de libertação sustentada para a administração oral de uma forma de dosagem numa toma diária.

Os exemplos do material insolúvel em água utilizado para o agente de revestimento incluem éteres de celulose, tais como etilcelulose, butilcelulose, etc., ésteres de celulose, tais como acetato de celulose, propionato de celulose, etc., ésteres de polivinilo tais como poli(acetato de vinilo), poli(butirato de vinilo), etc., polímeros de ácido acrílico, tais como um copolímero de ácido acrílico/ácido metacrílico, um copolímero de metacrilato de metilo, um copolímero de metacrilato de etoxietilo/metacrilato de cinamoetilo/metacrilato de aminoalquilo, um poli(ácido acrílico), um poli(ácido metacrílico) , um copolímero de alquilamida de ácido metacrílico, um poli(metacrilato de metilo), um polimetacrilato, um copolímero de metacrilato de aminoalquilo, um poli(anidrido metacrílico), um copolímero de metacrilato de glicidilo, em particular, uma série de Eudragits (Rohm & Pharma), tais como Eudragit RS-100, RL-100, RS-30D, RL-30D, RL-PO e RS-PO (copolímero de acrilato de etilo/metacrilato de metilo/metacrilato de clorotrimetilo/etilamónio) e Eudragit NE-30D (copolímero de metacrilato de metilo/acrilato de etilo), etc., óleos hidrogenados, tal como óleo de rícino hidrogenado (e. g., LUBRI WAX (Freund Industrial Co., Ltd.), etc.), ceras tal como cera de carnaúba, um éster de glicerina de ácidos gordos, parafina, etc., poli(ésteres de glicerina de ácidos gordos), etc. 0 polímero de dilatação é, de um modo preferido, um polímero com um grupo ácido removível e que apresenta uma dilatação dependente de pH e é preferido um polímero tendo um grupo ácido removível, o qual sofre uma menor dilatação a um pH ácido, tal como no estômago, mas é consideravelmente dilatado a um pH neutro, tais como nos intestinos delgado e grosso.

Os exemplos de um tal polímero tendo um grupo ácido removível e que apresenta dilatação dependente de pH incluem um polímero de poli (ácido acrílico) reticulado, tais como os Carbómeros 934P, 940, 941, 974P, 980, 1342, etc., policarbófilo e policarbófilo de cálcio (todos fabricados por BF Goodrich

Chemicals), Hivis Wakos 103, 104, 105 e 304 (todos fabricados por Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), etc. O agente de revestimento utilizado na preparação de libertação sustentada pode conter ainda um material hidrófilo.

Os exemplos do material hidrófilo incluem um polissacárido que pode ter um grupo sulfato, tais como pululano, dextrina, alginatos de metais alcalinos, etc., um polissacárido possuindo um grupo hidroxialquilo ou um grupo carboxialquilo, tais como hidroxipropilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, carboximetilcelulose sódica, etc., metilcelulose, polivinilpirrolidona, poli(álcool vinilico), polietilenoglicol, etc. A quantidade de material insolúvel em água contida no agente de revestimento da preparação de libertação sustentada é de cerca de 30 a cerca de 90% (p/p), de um modo preferido, cerca de 35 a cerca de 80% (p/p) , de um modo mais preferido, cerca de 40 a cerca de 75% (p/p) e o teor de polímero de dilatação é cerca de 3 a cerca de 30% (p/p) , de um modo preferido, cerca de 3 a cerca de 15% (p/p) . O agente de revestimento pode conter ainda um material hidrófilo e a quantidade do material hidrófilo contida no agente de revestimento é cerca de 50% (p/p) ou menos, de um modo preferido cerca de 5 a cerca de 40% (p/p), de um modo mais preferido, cerca de 5 a cerca de 35% (p/p) . Como aqui utilizada, a % (p/p) acima é utilizada para significar uma % em peso com base na composição do agente de revestimento, a qual é o remanescente da solução de agente de revestimento após remoção de qualquer solvente (e. g., água, um álcool inferior, tais como metanol, etanol, etc.). A preparação de libertação sustentada é fabricada preparando um núcleo contendo um fármaco como ilustrado abaixo, seguida do revestimento do núcleo resultante com uma solução de agente de revestimento obtida por fusão a quente de um material insolúvel em água ou um polímero de dilatação ou por dissolução ou dispersão de um material desse tipo num solvente. I. Produção do Núcleo Contendo o Fármaco A forma do núcleo contendo um fármaco a ser revestido com um agente de revestimento (a seguir por vezes referido simplesmente como um núcleo) não está especificamente limitada, mas é, de um modo preferido, preparada numa forma em partículas, tais como grânulos, grânulos finos ou semelhantes.

Quando o núcleo é grânulos ou grânulos finos, estes têm um tamanho de partícula médio, de um modo preferido, de cerca de 150 a cerca de 2 000 pm, de um modo mais preferido, de cerca de 500 a cerca de 1 400 pm. O núcleo pode ser preparado de um modo convencional. Por exemplo, um fármaco é misturado com um excipiente, aglutinante, desintegrante, lubrificante, estabilizante, etc. adequado, e em seguida submetido a granulação por extrusão a húmido, granulação em leito fluidizado, ou semelhantes. O teor de fármaco no núcleo é de cerca de 0,5 a cerca de 95% (p/p) , de um modo preferido, cerca de 5,0 a cerca de 80% (p/p) , de um modo mais preferido, cerca de 30 a cerca de 70% (p/p) ·

Os exemplos do excipiente contido no núcleo incluem um sacárido, tais como sacarose, lactose, manitol, glucose, etc., amido, celulose cristalina, fosfato de cálcio, amido de milho, etc. Entre outros, são preferidos a celulose cristalina e o amido de milho.

Os exemplos do aglutinante utilizado incluem poli(álcool vinilico), hidroxipropilcelulose, polietilenoglicol, polivinilpirrolidona, Plurónico F68, goma-arábica, gelatina, amido, etc. Os exemplos do desintegrante incluem carboximetilcelulose cálcica (ECG505), croscarmelose sódica (Ac-Di-Sol), polivinilpirrolidona reticulada (crospovidona), hidroxipropilcelulose pouco substituída (L-HPC), etc. Entre outras, são preferidas a hidroxipropilcelulose, a polivinilpirrolidona e a hidroxipropilcelulose pouco substituída. Os exemplos do lubrificante e do anticoagulante incluem talco, estearato de magnésio e o seus sais inorgânicos, e os exemplos do lubrificante incluem polietilenoglicol, etc. Os exemplos do estabilizante incluem um ácido, tais como ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido maleico, etc.

Além da técnica descrita acima, o núcleo pode ser preparado utilizando outras técnicas, tais como uma técnica de granulação por rotação em tambor, uma técnica de revestimento em panela, uma técnica de revestimento em leito fluidizado e uma técnica de granulação por fusão, em gue um fármaco ou uma mistura do fármaco com um excipiente, um lubrificante, etc., é adicionado em porções a partículas de veículo inerte como sementes do núcleo com a pulverização de um aglutinante dissolvido num solvente adequado, tais como água, um álcool inferior (e. g., metanol, etanol, etc.) ou semelhantes. Os exemplos de partículas de veículo inerte incluem aquelas preparadas a partir de sacarose, lactose, amido, celulose cristalina e ceras, e, de um modo preferido, estes veículos têm um tamanho de partícula médio de cerca de 100 ym a cerca de 1 500 ym. A fim de separar o fármaco contido no núcleo de um agente de revestimento, a superfície do núcleo pode ser coberta com um material protetor. Os exemplos do material protetor incluem o material hidrófilo descrito acima e material insolúvel em água. O material protetor preferido é polietilenoglicol ou um polissacárido possuindo um grupo hidroxialquilo ou um grupo carboxialquilo, de um modo mais preferido, hidroxipropilmetilcelulose e hidroxipropilcelulose. O material protetor pode conter, como um estabilizante, um ácido, tais como ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido maleico, etc., e um lubrificante, tal como talco. Quando é utilizado um material protetor, a quantidade deste a ser revestida é cerca de 1 a cerca de 15% (p/p) , de um modo preferido, cerca de 1 a cerca de 10% (p/p) , de um modo mais preferido, cerca de 2 a cerca de 8% (p/p) com base no núcleo. O material protetor pode ser revestido por um método de revestimento convencional e, especificamente, o núcleo é revestido por pulverização com o material protetor por uma técnica de revestimento em leito fluidizado, uma técnica de revestimento em panela, etc. II. Revestimento do Núcleo com Agente de Revestimento 0 núcleo obtido em I acima é revestido com uma solução do agente de revestimento preparada aquecendo até à fusão o material insolúvel em água e o polímero de dilatação dependente de pH descrito acima e um material hidrófilo, ou dissolvendo-os ou dispersando-os num solvente para obter uma preparação de libertação sustentada.

Como um método de revestimento do núcleo com a solução do agente de revestimento, existe, por exemplo, o revestimento por pulverização, etc. A proporção de composição do material insolúvel em água, polímero de dilatação e material hidrófilo na solução do agente de revestimento pode ser apropriadamente escolhida para estar dentro das quantidades dos respetivos componentes contidos no revestimento. A quantidade do agente de revestimento é cerca de 1 a cerca de 90% (p/p) , de um modo preferido, cerca de 5 a cerca de 50% (p/p) , de um modo mais preferido, cerca de 5 a cerca de 35% (p/p) com base no núcleo (excluindo o revestimento de material protetor).

Como um solvente para a solução do agente de revestimento, pode ser utilizado água e um solvente orgânico isoladamente ou como uma mistura dos mesmos. Quando se utiliza uma mistura, a proporção de água e do solvente orgânico (água/solvente orgânico: uma proporção em peso) pode variar dentro da gama de 1 a 100% e é, de um modo preferid,o de 1 a cerca de 30%. O solvente orgânico não está particularmente limitado desde que possa dissolver o material insolúvel em água e os exemplos do solvente incluem um álcool inferior, tais como álcool metílico, álcool etílico, álcool isopropílico, álcool n-butílico, etc., uma alcanona inferior, tais como acetona, acetonitrilo, clorofórmio, cloreto de metileno, etc. Em particular, é preferido um álcool inferior, sendo mais preferidos o álcool etílico e o álcool isopropílico. A água e uma mistura de água e um solvente orgânico são utilizadas, de um modo preferido, como solventes para a solução do agente de revestimento. Neste caso, se for necessário, pode adicionar-se à solução do agente de revestimento um ácido, tais como ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido maleico, etc., para estabilizar a solução do agente de revestimento.

Para realizar o revestimento através de revestimento por pulverização, o revestimento pode ser feito utilizando um método de revestimento convencional. Especificamente, o núcleo é pulverizado com uma solução do agente de revestimento por uma técnica de revestimento em leito fluidizado, uma técnica de revestimento em panela, ou semelhantes. Nesta altura, pode ser também adicionado um lubrificante, tais como talco, óxido de titânio, estearato de magnésio, estearato de cálcio, anidrido silícico leve, etc., e um plastif icante, tais como um éster gordo de glicerina, óleo de rícino endurecido, citrato de trietilo, álcool cetílico, álcool estearílico, etc.

Após revestimento com um agente de revestimento pode ser também misturado, se for necessário, um agente antiestático tal como talco. A preparação de libertação imediata pode ser um líquido (solução, suspensão, emulsão, etc.) ou um sólido (partículas, pílulas, comprimidos, etc.). Pode ser utilizada uma preparação oral e uma preparação parentérica, tal como uma preparação injetável e é preferida uma preparação oral. A preparação de libertação imediata pode geralmente conter um veículo, aditivos e um excipiente (a seguir por vezes abreviados como excipientes) que são convencionalmente utilizados no campo farmacêutico, além de um fármaco que é um ingrediente ativo. Os excipientes farmacêuticos não estão especificamente limitados desde que sejam excipientes convencionalmente utilizados no campo farmacêutico. Os exemplos do excipiente para uma preparação sólida oral incluem lactose, amido, amido de milho, celulose cristalina (Avicel PH101, fabricado por Asahi Kasei Corporation, etc.), açúcar em pó, açúcar granulado, manitol, anidrido silícico leve, carbonato de magnésio, carbonato de cálcio, L-cisteína, etc., sendo preferidos o amido de milho e o manitol. Qualquer um destes excipientes pode ser utilizado sozinho ou em combinação uns com os outros. As quantidades dos excipientes são, por exemplo, cerca de 4,5 a cerca de 99,4% p/p, de um modo preferido, cerca de 20 a cerca de 98,5% p/p, de um modo mais preferido, cerca de 30 a cerca de 97% p/p, com base no peso total da preparação de libertação imediata. O teor de fármaco na preparação de libertação imediata pode ser apropriadamente selecionado da gama de cerca de 0,5% a cerca de 95%, de um modo preferido, cerca de 1% a cerca de 60% relativamente à quantidade total da preparação de libertação imediata.

Quando a preparação de libertação imediata é uma preparação sólida oral, a preparação contém um desintegrante além dos componentes descritos acima. Os exemplos do desintegrante incluem carboximetilcelulose cálcica (ECG505 fabricada por GOTOKU CHEMICAL Co. , Ltd.), croscarmelose sódica (por exemplo, Ac-Di-Sol fabricada por Asahi Kasei Corporation), crospovidona (por exemplo, COLIDON CL fabricada por BASF), hidroxipropilcelulose pouco substituída (Shin-Etsu Chemical Co., Ltd.), carboximetilamido (MATSUTANI CHEMICAL INDUSTRY Co., Ltd.), carboximetilamido de sódio (EXORITAB fabricado por KIMURA SANGYO), amido α parcial (PCS fabricado por Asahi Kasei Corporation), etc. Por exemplo, pode utilizar-se um desintegrante que desintegra os grânulos por absorção de água ou dilatação em contacto com a água ou por formação de um canal entre o componente ativo compreendendo o núcleo e um excipiente. Qualquer um destes desintegrantes pode ser utilizado sozinho ou em combinação uns com os outros. A quantidade do desintegrante utilizado pode ser apropriadamente escolhida dependendo do tipo e da quantidade do fármaco utilizado ou da conceção de preparação particular para o desempenho de libertação pretendido. Por exemplo, a quantidade é de cerca de 0,05 a cerca de 30% p/p, de um modo preferido cerca de 0,5 a cerca de 15% p/p com base no peso total da preparação de libertação imediata.

Quando a preparação de libertação imediata é uma preparação sólida oral, a preparação sólida oral pode conter opcionalmente aditivos convencionalmente utilizados numa preparação sólida, além dos componentes descritos acima. Os exemplos dos aditivos incluem aglutinantes (por exemplo, sacarose, gelatina, goma-arábica em pó, metilcelulose, hidroxipropilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, carboximetilcelulose, polivinilpirrolidona, Pullran, dextrina, etc.)/· lubrificantes (polietilenoglicol, estearato de magnésio, talco, anidrido silicico leve (por exemplo, aerosil (NIPPON AEROSIL)) , tensioativos (por exemplo, tensioativos aniónicos tal como alquilsulfato de sódio, tensioativos não iónicos, tais como o éster gordo de polioxietileno, éster gordo de polioxietileno sorbitano, derivados de óleo de rícino e polioxietileno, etc.), corantes (por exemplo, corantes de alcatrão, caramelo, colcotar, óxido de titânio, riboflavinas), se for necessário, corretivos (por exemplo, edulcorantes, aromas, etc.), adsorventes, conservantes, humectantes, agentes antiestáticos, etc. Além disso, pode ser também adicionado um ácido orgânico, tais como ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico, ácido fumárico ou semelhantes como um estabilizante.

Como o aglutinante acima são, de um modo preferido, utilizados hidroxipropilcelulose, polietilenoglicol e polivinilpirrolidona, etc.. A preparação de libertação imediata pode ser preparada misturando os componentes descritos acima e amassando a mistura, se for necessário e moldando, em seguida, de acordo com uma técnica convencional para preparar preparações farmacêuticas. A mistura anterior pode ser realizada de uma maneira convencional, e. g., mistura, amassamento, etc. Especificamente, quando a preparação de libertação imediata está na forma de partículas, a preparação pode ser preparada misturando os componentes utilizando um granulador vertical, um amassador de uso múltiplo (fabricado por HATA IRON WORKS CO., LTD), um granulador de leito fluidizado FD-5S (fabricado por POWREX CORPORATION) ou semelhantes e granulando, em seguida, o produto resultante através de granulação por extrusão a húmido ou granulação em leito fluidizado por uma técnica semelhante àquela para preparar o núcleo da preparação de libertação sustentada descrita acima. A preparação de libertação imediata e a preparação de libertação sustentada assim obtidas podem ser formuladas separadamente, tal qual, ou, em conjunto, com excipientes farmacêuticos apropriados, em preparações farmacêuticas para preparar, de um modo convencional, as respetivas preparações a serem administradas em associação uma com a outra simultaneamente ou em certos intervalos de tempo. Alternativamente, ambas as preparações podem ser formuladas numa única forma de dosagem para administração oral (e. g., granulados, granulados finos, comprimidos, cápsulas) tal qual, ou, em conjunto com excipientes farmacêuticos apropriados. Ambas as preparações na forma de granulados ou granulados finos podem ser também introduzidas numa única cápsula para administração oral.

[3] Preparação de Desintegração Sublingual, Bucal ou Oral Rápida e sua Produção

Uma preparação de desintegração sublingual, bucal ou oral rápida pode estar na forma de uma preparação sólida, tal como um comprimido ou pode estar na forma de um adesivo (película) para aplicação na mucosa oral ou película de desintegração oral. A preparação de desintegração sublingual, bucal ou oral rápida é, de um modo preferido, uma preparação contendo o composto da presente invenção ou o fármaco simultâneo e um excipiente. A preparação pode conter também agentes auxiliares tais como um lubrificante, um agente isotonizante, um veiculo hidrófilo, um polímero dispersível em água, um estabilizante, etc. Além disso, a fim de promover a absorção e melhorar a biodisponibilidade, a preparação pode conter também β-ciclodextrina ou derivados de β-ciclodextrina (e. g., hidroxipropil^-ciclodextrina, etc.), e semelhantes.

Os exemplos do excipiente acima incluem lactose, sacarose, D-manitol, amido, celulose cristalina, anidrido silícico leve, etc. Os exemplos do lubrificante incluem estearato de magnésio, estearato de cálcio, talco, sílica coloidal, etc., sendo preferidos o estearato de magnésio e sílica coloidal. Os exemplos do agente isotonizante incluem cloreto de sódio, glucose, frutose, manitol, sorbitol, lactose, sacarose, glicerina e ureia, sendo particularmente preferido o manitol. Como veículo hidrófilo, existe, por exemplo, um veículo hidrófilo de dilatação tais como celulose cristalina, etilcelulose, polivinilpirrolidona reticulada, anidrido silícico leve, ácido silícico, fosfato dicálcico, carbonato de cálcio, etc., sendo preferida a celulose cristalina (e. g., celulose microcristalina, etc.). Como polímero dispersível em água, há, por exemplo, uma goma (e. g. , goma de tragacanta, goma-arábica, goma de guar), alginato (e. g., alginato de sódio), derivados de celulose (e. g., metilcelulose, carboximetilcelulose, hidroximetilcelulose, hidroxipropilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose), gelatina, amido solúvel em água, poli(ácido acrílico) (e. g. , carbómero), poli(ácido metacrílico), poli (álcool vinílico), polietilenoglicol, polivinilpirrolidona, policarbófilo, sal de ascorbato palmitato, etc., sendo preferidos a hidroxipropilmetilcelulose, poli(ácido acrílico) , alginato, gelatina, carboximetilcelulose, polivinilpirrolidona e polietilenoglicol. A hidroxipropilmetilcelulose é particularmente preferida. Como estabilizante, existe, por exemplo, cisteína, tiossorbitol, ácido tartárico, ácido cítrico, carbonato de sódio, ácido ascórbico, glicina, sulfito de sódio, etc., sendo particularmente preferidos o ácido cítrico e o ácido ascórbico. A preparação de desintegração sublingual, bucal ou oral rápida pode ser preparada misturando o composto da presente invenção ou o fármaco simultâneo e um excipiente por um método conhecido per se. Além disso, se desejado, os agentes auxiliares descritos acima, tais como o lubrificante, agente isotonizante, veículo hidrófilo, polímero dispersível em água, estabilizante, corante, edulcorante, conservante, etc. podem ser também misturados. Depois de misturar os componentes descritos acima simultaneamente ou em determinados intervalos de tempo, a mistura é prensada em comprimidos para obter o comprimido de desintegração sublingual, bucal ou oral rápida. A fim de obter uma dureza adequada, pode utilizar-se um solvente, tais como água, um álcool, etc., para hidratar ou humedecer os componentes antes ou após transformação em comprimidos, seguida de secagem.

Ao preparar o adesivo (película) para aplicação na mucosa oral, o composto da presente invenção ou o fármaco simultâneo e o polímero dispersível em água (de um modo preferido, hidroxipropilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose), excipiente, etc. descritos acima são dissolvidos num solvente, tal como água, etc. e, em seguida, a solução resultante é moldada numa película. Além disso, aditivos, tais como um plastificante, um estabilizante, um antioxidante, um conservante, um corante, um agente tampão, um edulcorante, etc. podem ser adicionados à preparação. Um glicol, tais como polietilenoglicol, propilenoglicol, etc. pode ser adicionado para conferir uma elasticidade apropriada a uma película, e um polímero bioadesivo (e. g., policarbófilo, carbopol) pode ser também adicionado para melhorar a adesão da película ao revestimento da mucosa oral. A moldagem pode ser realizada vertendo uma solução sobre uma superfície não aderente, espalhando a solução utilizando um aplicador, tal como uma lâmina raspadora, numa espessura uniforme (de um modo preferido, aproximadamente 10 a 1000 mícrones) e secando, em seguida, a solução para formar uma película. A película assim formada é seca à temperatura ambiente ou por aquecimento e, em seguida, cortada em pedaços possuindo cada uma área superficial desejada.

Uma preparação de desintegração oral rápida preferida é, por exemplo, uma preparação de difusão rápida numa forma de rede sólida, a qual compreende o composto da presente invenção ou o fármaco simultâneo e um veículo inerte, solúvel em água ou difusível em água, para o composto da presente invenção ou o fármaco simultâneo. A rede é preparada sublimando um solvente a partir da composição sólida compreendendo uma solução do composto da presente invenção ou do fármaco simultâneo num solvente adequado.

Além do composto da presente invenção ou do fármaco simultâneo, a composição da preparação de desintegração oral rápida pode, de um modo preferido, conter uma agente de formação de matriz e componentes secundários.

Os exemplos do agente de formação de matriz incluem gelatinas, dextrinas e proteínas animais ou vegetais de soja, trigo, semente de psílio, etc.; materiais gomosos tais como goma-arábica, goma de guar, ágar, goma xantana, etc.; polissacáridos; alginatos; carboximetilceluloses; carrageninas; dextranos; pectinas; polímeros sintéticos, tal como polivinilpirrolidonas; materiais derivados de complexos de gelatina-goma-arábica, etc. 0 agente de formação de matriz inclui ainda sacáridos, tais como manitol, dextrose, lactose, galactose, trealose, etc.; sacáridos cíclicos, tal como ciclodextrinas, etc.; sais inorgânicos, tais como fosfato de sódio, cloreto de sódio, silicato de alumínio, etc.; aminoácidos possuindo 2 a 12 átomos de carbono, tais como glicina, L-alanina, ácido L-aspártico, ácido L-glutâmico, L-hidroxiprolina, L-isoleucina, L-leucina, L-fenilalanina, etc.

Um ou mais agentes de formação de matriz podem ser incorporados numa solução ou suspensão antes da solidificação. Os agentes de formação de matriz podem estar presentes em simultâneo com um tensioativo ou podem estar presentes na ausência de um tensioativo. Os agentes de formação de matriz servem não só para formar a própria matriz, mas também ajudam a manter a difusão do composto da presente invenção ou do fármaco simultâneo em solução ou suspensão. A composição pode conter um componente secundário tal como um conservante, um antioxidante, um tensioativo, um espessante, um corante, agente de ajuste de pH, um aroma, um edulcorante, um agente de dissimulação do sabor, etc. Como corante adequado, existe, por exemplo, óxido de ferro vermelho, preto e amarelo, corantes FD & C disponíveis de ERIS & EVERALD, tais como Azul N- 2 FD S C e Vermelho N2 40 FD & C, etc. Os exemplos de aromas adequados incluem aroma de hortelã-pimenta, framboesa, alcaçuz, laranja, limão, toranja, caramelo, baunilha, cereja, uva e uma combinação destes. Os exemplos do agente de ajuste de pH adequado incluem ácido cítrico, ácido tartárico, ácido fosfórico, ácido clorídrico e ácido maleico. Os exemplos do edulcorante adequado incluem aspartame, acessulfame K e taumatina. Os exemplos do agente de dissimulação do sabor adequado incluem bicarbonato de sódio, resinas de troca iónica, compostos de inclusão de ciclodextrina, adsorventes e apomorfina microencapsulada. A preparação contém geralmente o composto da presente invenção ou o fármaco simultâneo numa quantidade cerca de 0,1 a cerca de 50% em peso, de um modo preferido cerca de 0,1 a cerca de 30% em peso e, de um modo preferido, a preparação (o comprimido sublingual, bucal, etc., descrito acima) permite que 90% ou mais do composto da presente invenção ou do fármaco simultâneo seja dissolvido (em água) num intervalo de tempo cerca de 1 a cerca de 60 minutos, de um modo preferido cerca de 1 minuto a cerca de 15 minutos, de um modo mais preferido, cerca de 2 minutos a cerca de 5 minutos ou é uma preparação de desintegração oral rápida que se desintegra em cerca de 1 a cerca de 60 segundos, de um modo preferido, cerca de 1 a cerca de 30 segundos, de um modo mais preferido cerca de 1 a cerca de 10 segundos, depois de ter sido colocado na cavidade oral. A quantidade do excipiente acima é cerca de 10 a cerca de 99% em peso, de um modo preferido cerca de 30 a cerca de 90% em peso com base no peso total da preparação. A quantidade de β-ciclodextrina ou derivado de β-ciclodextrina é de cerca de 0 a cerca de 30% em peso com base no peso total da preparação. A quantidade do lubrificante é cerca de 0,01 a cerca de 10% em peso, de um modo preferido cerca de 1 a cerca de 5% em peso com base no peso total da preparação. A quantidade do agente isotonizante é cerca de 0,1 a cerca de 90% em peso, de um modo preferido, cerca de 10 a cerca de 70% em peso com base no peso total da preparação. A quantidade do veículo hidrófilo é de cerca de 0,1 a cerca de 50% em peso, de um modo preferido, cerca de 10 a cerca de 30% em peso com base no peso total da preparação. A quantidade do polímero dispersível em água é de cerca de 0,1 a cerca de 30% em peso, de um modo preferido, cerca de 10 a cerca de 25% em peso com base no peso total da preparação. A quantidade do estabilizante é cerca de 0,1 a cerca de 10% em peso, de um modo preferido, cerca de 1 a cerca de 5% em peso com base no peso total da preparação. Se for necessário, a preparação descrita acima pode conter ainda aditivos tais como um corante, um edulcorante, um conservante, etc.

Uma dose das preparações de associação da presente invenção varia dependendo do tipo de composto da presente invenção, idade, peso corporal, condições, forma de dosagem, via de administração, período de administração, etc.

Uma dose do composto da presente invenção pode variar dependendo do indivíduo a ser administrado, órgão alvo, condições, via de administração, etc., e na administração oral, o composto é geralmente administrado ao doente (com 60 kg de peso corporal) com cancro numa dose diária cerca de 0,01 a cerca de 100 mg, de um modo preferido, cerca de 0,1 a cerca de 50 mg e de um modo mais preferido, cerca de 0,1 a cerca de 20 mg. Na administração parentérica, uma dose única do composto pode variar dependendo do indivíduo a ser administrado, órgão alvo, condições, via de administração, etc., e na forma de um forma de dosagem injetável, é vantajoso administrar por via intravenosa o composto ao doente (com 60 kg de peso corporal) com cancro geralmente numa dose diária cerca de 0,001 a cerca de 30 mg, de um modo preferido, cerca de 0,01 a cerca de 20 mg, e de um modo mais preferido, cerca de 0,01 a cerca de 10 mg. Para outra espécie animal, pode administrar-se a dose correspondente como convertida por 60 kg de peso. Evidentemente, a dose pode variar dependendo das condições individuais como descritas acima; em nesse caso, pode ser suficiente uma dose inferior à dose dada acima, ou pode ser utilizada uma dose superior à gama acima. É possível definir qualquer gama para uma dose do fármaco simultâneo, desde que não origine efeitos secundários adversos. Uma dose diária do fármaco simultâneo pode variar dependendo da gravidade da doença, da idade, género, peso corporal e suscetibilidade do indivíduo, períodos e intervalos de administração, características, formulação, tipo e componentes ativos da preparação farmacêutica, etc., e não está particularmente limitada. Por exemplo, na administração oral, a dose é cerca de 0,001 a 2000 mg, de um modo preferido, cerca de 0,01 a 500 mg e, de um modo mais preferido, cerca de 0,1 a 100 mg por kg de peso corporal do mamífero em termos de um fármaco; em geral, esta dose é administrada dividida em 1 a 4 vezes por dia.

Quando são administradas preparações farmacêuticas da presente invenção, elas podem ser administradas simultaneamente. Alternativamente, o fármaco simultâneo é administrado primeiro e, em seguida, é administrado o composto da presente invenção ou 0 composto da presente invenção é administrado primeiro e, em seguida, é administrado o fármaco simultâneo. Quando são administrados em certos intervalos de tempo, os intervalos variam dependendo do componente ativo a ser administrado, forma de dosagem e via de administração; por exemplo, quando o fármaco simultâneo é administrado primeiro, o composto da presente invenção pode ser administrado dentro de 1 minuto a 3 dias, de um modo preferido, 10 minutos a 1 dia, de um modo mais preferido, 15 minutos a 1 hora após administração do fármaco simultâneo. Quando o composto da presente invenção é administrado primeiro, o fármaco simultâneo pode ser administrado dentro de 1 minuto a 1 dia, de um modo preferido, 10 minutos a 6 horas, de um modo mais preferido, 15 minutos a 1 hora após administração do composto da presente invenção.

Como um método preferido de administração, por exemplo, cerca de 0,001 a 200 mg/kg do fármaco simultâneo na forma de uma preparação de administração oral é administrado por via oral e, após cerca de 15 minutos, cerca de 0,005 a 0,5 mg/kg do composto da presente invenção na forma de uma preparação parentérica é administrado por via parentérica como uma dose diária.

Como metastinas são utilizadas, por exemplo, a metastina humana descrita no documento WO 00/24890, as metastina de ratinho ou rato descrita no documento WO 01/75104, etc.

Os exemplos específicos de metastina humana incluem um péptido que compreende a sequência do 472-542 aminoácidos N-terminais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 1 e que consiste de 8 a 54 resíduos de aminoácidos, e semelhantes. 0 "péptido que compreende a sequência do 472-542 aminoácidos N-terminais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 1 e consistindo de 8 a 54 resíduos de aminoácidos" pode ser qualquer péptido, desde que seja um péptido que compreende a sequência do 472-542 aminoácidos N-terminais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 1 e que consista de 8 a 54 resíduos de aminoácidos, mas significa que estes péptidos têm substancialmente a mesma atividade fisiológica (e. g., um atividade de ligação ao recetor, uma ação de transdução de sinal, uma ação de aumento do nível de açúcar, uma ação estimulante da secreção de glucagina pancreática, uma ação promotora da formação de urina, etc.). Especificamente, são utilizados (i) um péptido possuindo a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 1, (ii) um péptido que compreende a sequência do 472-542 aminoácidos N-terminais na extremidade C-terminal na sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 1 e consistindo de 8 a 15 resíduos de aminoácidos, etc.

Mais especificamente, a metastina humana utilizada inclui (i) um péptido consistindo na sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 1 (metastina humana 54 (1-54)), (ii) um péptido consistindo na sequência do 402-542 aminoácidos N-terminais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 1 (metastina humana 15 (40-54); SEQ ID N2: 15), (iii) um péptido consistindo na sequência do 452-542 aminoácidos N-terminais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 1 (metastina humana 10 (45-54); SEQ ID N2: 16), (iv) um péptido consistindo na sequência do 462-542 aminoácidos N terminais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N-: 1 (metastina humana 9 (46-54); SEQ ID N2: 17), (v) um péptido que consiste na sequência do 472-542 aminoácidos N-terminais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 1 (metastina humana 8 (47-54); SEQ ID N2: 18), etc.

Como metastina de ratinho (A) é utilizado, por exemplo, (i) um péptido que compreende a sequência do 1342-1412 aminoácidos N-terminais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 3 e consistindo de 8 a 52 resíduos de aminoácidos. Os exemplos específicos de metastina de ratinho (A) utilizada incluem (i) um péptido consistindo na sequência do 902-1412 aminoácidos N-terminais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 3, (ii) um péptido que consiste na sequência do 1322-1412 aminoácidos N-terminais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 3, (iii) um péptido que consiste na sequência do 1272-1412 aminoácidos N-terminais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 3, e semelhantes.

Como metastina de ratinho (B) é utilizado, por exemplo, (i) um péptido que compreende a sequência do 1382-1452 aminoácidos N-terminais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 5 e consistindo de 8 a 52 resíduos de aminoácidos. Os exemplos específicos da metastina de ratinho (B) utilizada incluem um péptido que consiste na sequência do 942-1452 aminoácidos N-terminais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 5, e semelhantes. Como metastina de rato é utilizado, por exemplo, (i) um péptido compreendendo a sequência do 1122-1192 aminoácidos N-terminais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 7 e consistindo de 8 a 52 resíduos de aminoácidos. Os exemplos específicos de metastina de rato utilizada incluem (i) um péptido consistindo na sequência do 682-1192 aminoácidos N-terminais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 7, (ii) um péptido que consiste na sequência do 1102-1192 aminoácidos N-terminais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 7, (iii) um péptido que consiste na sequência do 1052-1192 aminoácidos N-terminais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 7, e semelhantes.

Ao longo da descrição, as metastinas são representadas de acordo com a forma convencional de descrição de péptidos, ou seja, a extremidade N-terminal (extremidade amino) do lado esquerdo e a extremidade C-terminal (extremidade carboxilo) do lado direito. No péptido representado pela SEQ ID N2: 1, a extremidade C-terminal pode estar em qualquer forma de um grupo carboxilo (-COOH), um carboxilato (-C00-) , uma amida (-CONH2) e um éster (-COOR) . Aqui, os exemplos de R do grupo éster ou alquilamida incluem um grupo alquilo Ci-6, tais como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, etc.; um grupo cicloalquilo C3-8, tais como ciclopentilo, ciclo-hexilo, etc.; um grupo arilo C6-i2 tal como fenilo, a-naftilo, etc.; um aralquilo C7-14 tal como um grupo fenil-alquilo C1-2, e. g., benzilo, fenetilo, benzidrilo, etc., ou um grupo α-naftil-alquilo Ci-2 tal como a-naftilmetilo, etc.; grupo pivaloiloximetilo, os quais são amplamente utilizados como um éster para utilização oral, e semelhantes.

Além disso, as metastinas incluem péptidos, em que o grupo amino no resíduo de metionina N-terminal está protegido com um grupo de proteção (e. g., um grupo acilo C1-6 tal como um grupo alcanoílo C2-6f e. g. , grupo formilo, grupo acetilo, etc.); aqueles em que a região N-terminal é dissociada in vivo e o grupo glutamilo assim formado é piroglutaminado; aqueles em que um substituinte (e. g., -OH, -SH, grupo amino, grupo imidazole, grupo indole, grupo guanidino, etc.) na cadeia lateral de um aminoácido na molécula está protegido com um grupo de proteção adequado (e. g. , um grupo acilo Ci-6, tal como um grupo alcanoilo C2-6r e. g. , grupo formilo, grupo acetilo, etc.), ou péptidos conjugados tais como glicopéptidos ligados a cadeias de açúcar.

Para os sais de metastina da presente invenção são preferidos os sais com bases (e. g., sais de metais alcalinos) ou ácidos (e. g., ácidos orgânicos ou ácidos inorgânicos) fisiologicamente aceitáveis, etc., e são especialmente preferidos os sais de adição de ácido fisiologicamente aceitáveis. Os exemplos desses sais incluem sais com, por exemplo, ácidos inorgânicos (e. g. , ácido clorídrico, ácido fosfórico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico); sais com ácidos orgânicos (e. g., ácido acético, ácido fórmico, ácido propiónico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido succínico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido málico, ácido oxálico, ácido benzoico, ácido metanossulfónico, ácido benzenossulfónico) e semelhantes.

Como ADN codificandom metastinas são utilizados, por exemplo, ADN codificandom a metastina humana descrita no documento WO 00/24890, ADN codificando a metastina de ratinho ou rato descrita no documento WO 01/75104, etc.

Os ADN codificandom as metastinas podem ser qualquer um de ADN genómico, biblioteca de ADN genómico, ADNc proveniente das células e tecidos descritos acima, biblioteca de ADNc proveniente das células e tecidos descritos acima e ADN sintético. 0 vetor a ser utilizado na biblioteca pode ser qualquer um de bacteriófago, plasmideo, cosmideo e fagomideo. 0 ADN pode ser também diretamente amplificado por reação em cadeia da polimerase associada a transcriptase inversa (a seguir abreviada como RT-PCR) utilizando o ARN total ou fração de ARNm preparada a partir das células e tecidos descritos acima. 0 ADN codificando a metastina humana, o precursor da metastina de ratinho (A) , o precursor da metastina de ratinho (B) ou o precursor da metastina de rato pode ser qualquer ADN, desde que seja, cada, um ADN contendo uma sequência de bases representada pela SEQ ID N2 : 2, SEQ ID N2 : 4, SEQ ID N2: 6 ou SEQ ID N2: 8, ou um ADN possuindo uma sequência de bases hibridizável com a sequência de bases representada por qualquer uma das sequências de bases representadas pela SEQ ID N2: 2, SEQ ID N2: 4, SEQ ID N2: 6 ou SEQ ID N2: 8 sob condições extremamente restringentes e que codificam a metastina humana, metastina de ratinho (A), metastina de ratinho (B) ou metastina de rato descrita acima.

Os exemplos específicos do ADN hibridizável com a sequência de bases representada por qualquer das SEQ ID N2: 2, SEQ ID N2: 4, SEQ ID N2: 6 ou SEQ ID N2: 8 incluem ADNs que contêm uma sequência de bases possuindo, pelo menos, cerca de 70% de homologia, de um modo preferido, pelo menos, cerca de 80% de homologia, de um modo mais preferido, pelo menos, cerca de 90% de homologia e de um modo muito preferido, pelo menos, cerca de 95% de homologia, com a sequência de bases representada por qualquer da SEQ ID N2: 2, SEQ ID N2: 4, SEQ ID N2: 6 ou SEQ ID N2: 8 . A homologia da sequência de bases pode ser medida utilizando o algoritmo de classificação de homologia NCBI BLAST (National Center for Biotechnology Information Basic Local

Alignment Search Tool) nas seguintes condições (um valor esperado = 10; são deixadas lacunas; filtração = LIGADA; pontuação por coincidência = 1; pontuação por desemparelhamento = -3). A hibridação pode ser realizada por métodos publicamente conhecidos per se ou por modificações destes métodos, por exemplo, de acordo com o método descrito em Molecular Cloning, 2a (J. Sambrook et al. , Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989) . Pode utilizar-se também uma biblioteca comercialmente disponível de acordo com as instruções do protocolo anexado pelo fabricante. De um modo preferido, a hibridação pode ser realizada sob condições extremamente restringentes.

As condições extremamente restringentes aqui utilizadas são, por exemplo, aquelas numa concentração de sódio cerca de 19 a 40 mM, de um modo preferido, cerca de 19 a 20 mM a uma temperatura de cerca de 50 a 70 °C, de um modo preferido, cerca de 60 a 65 °C. Em particular, são muito preferidas as condições de hibridação numa concentração de sódio de cerca de 19 mM, a uma temperatura de cerca de 65 °C.

Especificamente, como ADN codificando a metastina humana consistindo da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 1, é utilizado o ADN consistindo da sequência de bases representada pela SEQ ID Ns: 2. Por conseguinte, para a sequência de bases que codifica a metastina humana consistindo das várias sequências de aminoácidos descritas acima, pode escolher-se uma sequência de bases correspondente a cada uma das sequências de aminoácidos parciais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 1, a partir da sequência de bases representada pela SEQ ID N2: 2.

Como ADN codificando o precursor da metastina de ratinho (A) compreendendo a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 3, utiliza-se um ADN consistindo da sequência de bases representada pela SEQ ID N2: 4, e semelhantes. Por conseguinte, para a sequência de bases que codifica o precursor da metastina de ratinho (A) consistindo das várias sequências de aminoácidos descritas acima, pode escolher-se uma sequência de bases correspondente a cada uma das sequências de aminoácidos parciais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 3, a partir da sequência de bases representada pela SEQ ID N2: 4.

Como ADN codificando o precursor da metastina de ratinho (B) compreendendo a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 5, utiliza-se um ADN consistindo da sequência de bases representada pela SEQ ID N2: 6, e semelhantes. Por conseguinte, para a sequência de bases que codifica o precursor da metastina de ratinho (B) compreendendo as várias sequências de aminoácidos descritas acima, pode escolher-se uma sequência de bases correspondente a cada uma das sequências de aminoácidos parciais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 5 a partir da sequência de bases representada pela SEQ ID N2: 6.

Como ADN codificando a metastina de rato compreendendo a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 7, utiliza-se um ADN consistindo da sequência de bases representada pela SEQ ID N2: 8, e semelhantes. Por conseguinte, para a sequência de bases que codifica a metastina de rato consistindo das várias sequências de aminoácidos descritas acima, pode escolher-se uma sequência de bases correspondente a cada uma das sequências de aminoácidos parciais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 7, a partir da sequência de bases representada pela SEQ ID N2: 8.

Mais especificamente, para o péptido consistindo na sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 1 (metastina humana 54 (1-54)) é utilizado um ADN contendo a sequência de bases representada pela SEQ ID N2: 2, etc..

Para o péptido consistindo na sequência do 402-542 aminoácidos N-terminais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 1 (metastina humana 15 (40-54); SEQ ID N2 : 15), é utilizado um ADN contendo a sequência de bases representada pela SEQ ID N2: 19, etc..

Para o péptido consistindo na sequência do 452-542 aminoácidos N-terminais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 1 (metastina humana 10 (45-54); representada pela SEQ ID N2: 16), é utilizado um ADN contendo a sequência de bases representada pela SEQ ID N2: 20, etc..

Para o péptido consistindo na sequência do 462-542 aminoácidos N-terminais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 1 (metastina humana 9 (46-54); representada pela SEQ ID N2: 17), é utilizado um ADN contendo a sequência de bases representada pela SEQ ID N2: 21, etc..

Para o péptido consistindo na sequência do 472-542 aminoácidos N-terminais da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 1 (metastina humana 8 (47-54); representada pela SEQ ID N2: 18), é utilizado um ADN contendo a sequência de bases representada pela SEQ ID N2: 22, etc.

Como recetor de metastina, seus péptidos parciais ou os seus sais, são utilizados, por exemplo, um recetor de metastina humano, seus péptidos parciais ou os seus sais descritos no documento WO 00/24890, um recetor de metastina humano de ratinho ou rato, seus péptidos parciais ou os seus sais descritos no documento WO 01/75104, etc.

Especificamente, uma proteína compreendendo a mesma ou substancialmente a mesma sequência de aminoácidos que a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 9, SEQ ID N2: 11 ou SEQ ID N2 : 13, etc., é utilizada como recetor de metastina. A sequência de aminoácidos que é substancialmente a mesma sequência de aminoácidos que a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2 : 9, SEQ ID N2 : 11 ou SEQ ID N2: 13 inclui, por exemplo, uma sequência de aminoácidos tendo, pelo menos, cerca de 70% de homologia, de um modo preferido, pelo menos, cerca de 80% de homologia, de um modo mais preferido, pelo menos, cerca de 90% de homologia e, de um modo muito preferido, pelo menos, cerca de 95% de homologia, com a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 9, SEQ ID N2: 11 ou SEQ ID N2: 13. A homologia das sequências de aminoácidos pode ser determinada utilizando o algoritmo de classificação de homologia NCBI BLAST (National Center for Biotechnology Information Basic Local Alignment Search Tool) nas seguintes condições (um valor esperado = 10; são deixadas lacunas; matriz = BLOSUM62; filtração = DESLIGADA).

Como uma proteína compreendendo substancialmente a mesma sequência de aminoácidos que a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2 : 9, SEQ ID N2 : 11 ou SEQ ID N2 : 13, é preferida uma proteína tendo substancialmente a mesma sequência de aminoácidos que a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 9, SEQ ID N2: 11 ou SEQ ID N2: 13 e tendo uma atividade da mesma natureza que essa proteína possuindo a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 9, SEQ ID N2: 11 ou SEQ ID N2: 13, etc.

Como a atividade substancialmente da mesma natureza, existe, por exemplo, uma atividade de ligação a ligando, uma atividade de transdução de sinal, e semelhantes. A "substancialmente a mesma natureza" é utilizada para significar que a natureza destas atividades é equivalente em termos de qualidade. Assim, as atividades, tais como uma atividade de ligação a ligando, uma atividade de transdução de sinal, etc., são de um modo preferido, equivalentes (e. g. , cerca de 0,01 a 100 vezes, de um modo preferido cerca de 0,5 a 10 vezes, de um modo mais preferido, 0,5 a 2 vezes), mas podem existir e ser permitidas diferenças em fatores quantitativos, tal como o nivel dessas atividades, ou tal como o peso molecular da proteína.

As atividades, tais como a atividade de ligação a ligando, a atividade de transdução de sinal, etc. podem ser analisadas por métodos publicamente conhecidos per se com modificações e podem ser determinadas de acordo com métodos de determinação de um ligando ou métodos de triagem descritos, e. g., no documento WO 00/24890 ou WO 01/75104.

Os exemplos do recetor de metastina utilizado incluem proteínas compreendendo (i) a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2 : 9, SEQ ID N2 : 11 ou SEQ ID N2 : 13, na qual estão suprimidos, pelo menos, 1 ou 2 (de um modo preferido, cerca de 1 a cerca de 30, de um modo mais preferido, cerca de 1 a cerca de 10 e, de um modo muito preferido, vários (1 ou 2)) aminoácidos; (ii) a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2 : 9, SEQ ID N2 : 11 ou SEQ ID N2 : 13, na qual são adicionados, pelo menos, 1 ou 2 (de um modo preferido, cerca de 1 a cerca de 30, de um modo mais preferido, cerca de 1 a cerca de 10 e, de um modo muito preferido, vários (1 ou 2)) aminoácidos; (iii) a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2 : 9, SEQ ID N2 : 11 ou SEQ ID N2 : 13, na qual estão substituídos, pelo menos, 1 ou 2 (de um modo preferido, cerca de 1 a cerca de 30, de um modo mais preferido, cerca de 1 a cerca de 10 e, de um modo muito preferido, vários (1 ou 2)) aminoácidos por outros aminoácidos; ou (iv) uma associação destas sequências de aminoácidos; e semelhantes.

Ao longo da descrição, os recetores de metastina são representados de acordo com a forma convencional de descrição de péptidos, ou seja, a extremidade N-terminal (extremidade amino) do lado esquerdo e a extremidade C-terminal (extremidade carboxilo) do lado direito. Nos recetores de metastina, incluindo o recetor de metastina representado pela SEQ ID N2: 9, SEQ ID N2: 11 ou SEQ ID N2 : 13, a extremidade C-terminal pode estar em qualquer forma de um grupo carboxilo (-COOH), um carboxilato (-C00-), uma amida (-CONH2) e um éster (-COOR). Aqui, os exemplos de R do grupo éster incluem um grupo alquilo Ci-6, tais como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, etc.; um grupo cicloalquilo C3-8, tais como ciclopentilo, ciclo-hexilo, etc.; um grupo arilo C6-i2f tais como fenilo, a-naftilo, etc.; um aralquilo C7-i4 tal como um grupo fenil-alquilo C2-2, e. g., benzilo, fenetilo, etc., ou um grupo α-naftil-alquilo C2-2, tais como a-naftilmetilo, etc.; e grupo pivaloiloximetilo, os quais são amplamente utilizados como um éster para utilização oral, e semelhantes.

Quando os recetores de metastina contêm um grupo carboxilo (ou um carboxilato) numa posição diferente da extremidade C-terminal, o grupo carboxilo pode ser amidado ou esterificado e tais amidas ou ésteres estão também incluídos dentro da proteína recetora da presente invenção. Neste caso, o grupo éster utilizado pode ser o mesmo grupo que os ésteres C-terminais descritos acima.

Além disso, os recetores de metastina incluem aqueles em que o grupo amino no resíduo de metionina N-terminal está protegido com um grupo de proteção (e. g. , um grupo acilo Ci-6 tal como um grupo alcanoílo C2-6, e. g., grupo formilo, grupo acetilo, etc.); aqueles em que a região N-terminal é dissociada in vivo e o grupo glutamilo assim formado é piroglutaminado; aqueles em que um substituinte (e. g., -OH, -SH, grupo amino, grupo imidazole, grupo indole, grupo guanidino, etc.) na cadeia lateral de um aminoácido na molécula está protegido com um grupo de proteção adequado (e. g. , um grupo acilo Ci_6, tais como um grupo alcanoílo C2-6, e. g. , grupo formilo, grupo acetilo, etc.), ou proteínas conjugadas, tais como glicoproteínas ligadas a cadeias de açúcar.

Os exemplos específicos dos recetores de metastina incluem o recetor de metastina humano consistindo da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 9, recetor de metastina de rato consistindo da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 11, recetor de metastina de ratinho consistindo da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 13, etc.

Os péptidos parciais do recetor de metastina (a seguir por vezes referido simplesmente como o péptido parcial) podem ser quaisquer péptidos, desde que sejam péptidos parciais do recetor de metastina descrito acima; como aqueles são utilizadas moléculas de proteína do recetor de metastina, as quais são os sítios expostos fora da membrana celular e tendo uma atividade de ligação a ligando.

Especificamente, o péptido parcial do recetor de metastina consistindo da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 9, SEQ ID N2: 11 ou SEQ ID N2: 13 é um péptido contendo as partes analisadas como sendo domínios extracelulares (domínios hidrófilos) na análise gráfica hidrofóbica. Pode ser também utilizado um péptido contendo numa parte um domínio hidrófobo. Além disso, o péptido pode conter cada domínio separadamente ou uma multiplicidade de domínios em conjunto.

No recetor de metastina, os péptidos parciais preferidos são aqueles tendo um número de aminoácidos de pelo menos 20, de um modo preferido, pelo menos, 50 e, de um modo mais preferido, pelo menos 100, na sequência de aminoácidos descrita acima, a qual constitui o recetor de metastina. O péptido parcial pode ser um péptido tendo a sequência de aminoácidos descrita acima, na qual estão suprimidos pelo menos 1 ou 2 (de um modo preferido, cerca de 1 a cerca de 10 e, de um modo mais preferido, vários (1 ou 2)) aminoácidos; à qual são adicionados, pelo menos, 1 ou 2 (de um modo preferido, cerca de 1 a cerca de 10 e, de um modo mais preferido, vários (1 ou 2)) aminoácidos; ou, na qual estão substituídos, pelo menos, 1 ou 2 (de um modo preferido, cerca de 1 a cerca de 10 e, de um modo mais preferido, vários (1 ou 2)) aminoácidos por outros aminoácidos. No péptido parcial, a extremidade C-terminal pode ser qualquer forma de um grupo carboxilo (-COOH), um carboxilato (-COO), uma amida (-CONH2) e um éster (-COOR), como no recetor de metastina descrito acima.

Além disso, os péptidos parciais incluem péptidos, em que o grupo amino no resíduo de metionina N-terminal está protegido com um grupo de proteção; aqueles em que a região N-terminal é dissociada in vivo e o grupo glutamilo assim formado é piroglutaminado; aqueles em que um substituinte na cadeia lateral de um aminoácido na molécula está protegido com um grupo de proteção adequado, ou péptidos conjugados, tais como glicopéptidos ligados a cadeias de açúcar, como nos recetores de metastina descritos acima.

Para os sais do recetor de metastina ou do péptido parcial são preferidos sais com ácidos fisiologicamente aceitáveis, especialmente sais de adição de ácido fisiologicamente aceitáveis. Os exemplos dos sais incluem sais com, por exemplo, ácidos inorgânicos (e. g., ácido clorídrico, ácido fosfórico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico); sais com ácidos orgânicos (e. g., ácido acético, ácido fórmico, ácido propiónico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido succínico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido málico, ácido oxálico, ácido benzoico, ácido metanossulfónico, ácido benzenossulfónico) e semelhantes.

Como ADN codificando o recetor de metastina ou seus péptidos parciais são utilizados, por exemplo, um ADN codificando o recetor de metastina humano ou os seus péptidos parciais descritos no documento WO 00/24890, um ADN codificando o recetor de metastina de ratinho ou rato ou seus péptidos parciais descritos no documento WO 01/75104, etc.

Os ADN codificando o recetor de metastina ou seus péptidos parciais podem ser qualquer um de ADN genómico, biblioteca de ADN genómico, ADNc proveniente das células e tecidos descritos acima, biblioteca de ADNc proveniente das células e tecidos descritos acima e ADN sintético. O vetor a ser utilizado na biblioteca pode ser qualquer um de bacteriófago, plasmídeo, cosmídeo e fagomídeo. O ADN pode ser também diretamente amplificado por reação em cadeia da polimerase associada a transcriptase inversa (a seguir abreviada como RT-PCR) utilizando o ARN total ou a fração de ARNm preparada a partir das células e tecidos descritos acima.

Especificamente, o ADN codificando o recetor de metastina humano, recetor de metastina de ratinho ou recetor de metastina de rato pode ser qualquer ADN, desde que seja um ADN que compreende, cada, a sequência de bases representada pela SEQ ID N2: 10, SEQ ID N2 : 12 ou SEQ ID N2: 14, ou um ADN compreendendo uma sequência de bases hibridizável com a sequência de bases representada pela SEQ ID N2: 10, SEQ ID N2: 12 ou SEQ ID N2: 14 sob condições extremamente restrinqentes e codificando um recetor possuindo uma atividade substancialmente da mesma natureza (e. g., uma atividade de ligação a ligando, uma atividade de transdução de sinal, etc.) que a do recetor de metastina humano, recetor de metastina de ratinho ou recetor de metastina de rato consistindo da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 10, SEQ ID N2: 12 ou SEQ ID N2: 14.

Os exemplos do ADN hibridizável com a sequência de bases representada por qualquer uma das SEQ ID N2: 10, SEQ ID N2: 12 ou SEQ ID N2: 14, incluem ADN compreendendo uma sequência de bases possuindo, pelo menos, cerca de 70% de homologia, de um modo preferido, pelo menos, cerca de 80% de homologia, de um modo mais preferido, pelo menos, cerca de 90% de homologia e, de um modo muito preferido, pelo meno,s cerca de 95% de homologia, com a sequência de bases representada por qualquer uma das SEQ ID N2: 10, SEQ ID N2: 12 ou SEQ ID N2: 14. A homologia da sequência de bases pode ser medida utilizando o algoritmo de classificação de homologia NCBI BLAST (National Center for Biotechnology Information Basic Local

Alignment Search Tool) nas seguintes condições (um valor esperado = 10; são deixadas lacunas; filtração = LIGADA; pontuação por coincidência = 1; pontuação por desemparelhamento = -3) . A hibridação pode ser realizada através de métodos publicamente conhecidos per se ou por modificações destes métodos, por exemplo, de acordo com o método descrito em Molecular Cloning, 2a (J. Sambrook et ai., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989), etc. Pode ser também utilizada uma biblioteca comercialmente disponível de acordo com as instruções do protocolo anexado pelo fabricante. De um modo preferido, a hibridação pode ser realizada sob condições extremamente restringentes.

As condições extremamente restringentes aqui utilizadas são, por exemplo, aquelas numa concentração de sódio de cerca de 19 a 4 0 mM, de um modo preferido cerca de 19 a 2 0 mM a uma temperatura de cerca de 50 a 70 °C, de um modo preferido cerca de 60 a 65 °C. Em particular, são muito preferidas as condições de hibridação numa concentração de sódio de cerca de 19 mM a uma temperatura de cerca de 65 °C.

Mais especificamente, como ADN codificando o recetor de metastina humano consistindo da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 9, é utilizado o ADN consistindo da sequência de bases representada pela SEQ ID N2: 10.

Como ADN codificando o recetor de metastina de rato consistindo da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 11, é utilizado o ADN consistindo da sequência de bases representada pela SEQ ID N2: 12.

Como ADN codificando o recetor de metastina de ratinho consistindo da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID N2: 13, é utilizado o ADN consistindo da sequência de bases representada pela SEQ ID N2: 14.

Os recetores de metastina, seus péptidos parciais ou seus sais e os ADN codificando os recetores de metastina ou seus péptidos parciais podem ser obtidos ou produzidos pelos métodos descritos no documento WO 00/24890 ou WO 01/75104. A presente invenção será descrita em pormenor por referência aos EXEMPLOS, EXEMPLOS DE FORMULAÇÃO E EXEMPLOS DE ENSAIO, mas não é considerada como estando limitada aos mesmos, e pode ser feita qualquer modificação sem se sair do âmbito da presente invenção.

Nos EXEMPLOS seguintes, a expressão "temperatura ambiente" significa normalmente uma temperatura de cerca de 10 °C a cerca de 35 °C. Nas percentagens, o rendimento é apresentado em % molar e o solvente utilizado em cromatografia em % em volume e os restantes em % em peso. Nos espetros de RMN de protão, os dados dos protões de OH, NH, etc. que são largos e não identificados, não são apresentados.

As outras abreviaturas utilizadas na descrição significam como se segue.

Abreviatura Descrição ÍOIÇCSNH: O CONH2 C-terminal na posição 10 está substituído por -CSNH2.

Abreviatura Descrição (continuação) 1Ψ2,ΟΗ2ΝΗ: A ligação -CONH- entre as posições 1 e 2 está substituída pela ligação -CH2NH-. 2Ψ3,ΟΗ2ΝΗ: A ligação -CONH- entre as posições 2 e 3 está substituída pela ligação -CH2NH-. 3Ψ4,ΟΗ2ΝΗ: A ligação -CONH- entre as posições 3 e 4 está substituída pela ligação -CH2NH-. 4Ψ5,ΟΗ2ΝΗ: A ligação -CONH- entre as posições 4 e 5 está substituída pela ligação -CH2NH-. 6¥7,CSNH: A ligação -CONH- entre as posições 6 e 7 está substituída pela ligação -CSNH-. 6Ψ7,ΝΗΟΟ: A ligação -CONH- entre as posições 6 e 7 está substituída pela ligação -NHCO-. 6Ψ7,ΟΗ2ΝΗ: A ligação -CONH- entre as posições 6 e 7 está substituída pela ligação -CH2NH-. 6Ψ7,0Η20: A ligação -CONH- entre as posições 6 e 7 está substituída pela ligação -CH20-. 7Ψ8,ΟΗ2ΝΗ: A ligação -CONH- entre as posições 7 e 8 está substituída pela ligação -CH2NH-. 8Ψ9,ΟΗ2ΝΗ: A ligação -CONH- entre as posições 8 e 9 está substituída pela ligação -CH2NH-. 9Ψ10,ΟΗ2ΝΗ: A ligação -CONH- entre as posições 9 e 10 está substituída pela ligação -CH2NH-.

Aad : ácido 2-aminoadípico

Abu : ácido 2-aminobutanóico

Abz(2) : ácido 2-aminobenzóico

Abz (3) : ácido 3-aminobenzóico

Ac : acetilo

AcONB : N-acetoxi-5-norborneno-2,3-dicarboximida

Acp : ácido 6-aminocapróico

Abreviatura Descrição (continuação)

AcOEt : acetato de etilo

AcOH : ácido acético

Aib : ácido a-aminoisobutanóico

Ala(2-Qui) : 2-quinolilalanina

Ala(3-Bzt) : 3-benzotienilalanina

Ala (cBu) : ciclobutilalanina

Ala(cPr) : ciclopropilalanina

Ala (Pip) : (4-piperidin-l-il)alanina

Alb : Albiziina ácido 2-amino-3-ureidopropiónico

Ambz(4) : 4-aminometilbenzoilo

Arg(Ac) : N“-acetilarginina

Arg (Boc2, Me) : N“'“'-bis-terc-butoxicarbonilo-N“- metilarginina

Arg(Et) : N“-etilarginina

Arg(Me) : N“-metilarginina

Arg(asyMe2) ou : Νω,ω -dimetilarginina assimétrica

Arg (Me2) asym

Arg(symMe2) ou : N“'“'-dimetilarginina simétrica

Arg (Me2) sym

Arg(N02) : N“-nitroarginina

Arg(Pbf) : Νω-2,2,4,6,7-pentametildi- hidrobenzofuranossulfonilarginina Arg(n-Pr) : N“-propilarginina

Arg(Tos) : N“-tosilarginina

Asp(NHMe) : N“-metilasparagina

Asp (NMe2) : N“'“-dimetilasparagina

Asp (NHPen) : N“-pentilasparagina

Asp (NHcPr) : N“-ciclopropilasparagina

Asp(NHBzl) : N“-benzilasparagina

Abreviatura Descrição (continuação)

AzaGly : azaglicina

AzaPhe : azafenilalanina

Aze(2) : ácido azetidina-2-carboxílico β-Ala : β-alanina

Boc : terc-butoxicarbonilo

Boc20 : dicarbonato de di-terc-butilo

Br-Z : 2-bromobenziloxicarbonilo

Bu1 : terc-butilo

Bzl : benzilo CDI : 1,1'-carbonildiimidazole

Cha : ciclo-hexilalanina CIP : tetrafluoroborato de 2-cloro-l,3- dimetilimidazólio Cit : citrulina resina de Cit : resina de 2-clorotritilo

Cl—Z : 2-clorobenziloxicarbonilo

Dab : ácido 2,4-diaminobutanóico

Dap : ácido 2,3-diaminopropiónico

Dap (Ac) : ácido N^-acetil^-diaminopropiónico

Dap (For) : ácido Np-formil^-diaminopropiónico

Dap (Gly) : ácido N^-glicil^-diaminopropiónico

Dap (GnGly) : ácido Np-(N-guanidinoglicil)-β- diaminopropiónico DCM : diclorometano DEA : dietilamina DIEA : N,N-diisopropiletilamina DIPCDI : 1,3-diisopropilcarbodiimida DMAP : 4-dimetilaminopiridina DMF : N,N-dimetilformamida

Abreviatura Descrição (continuação) EDC : 1-etilo-3-(3-dimetilaminopropilo) - carbodiimida EDT : 1,2-etanoditiol

Fmoc : 9-fluorenilmetoxicarbonilo

For : formilo γ-Abu : ácido 4-aminobutanóico γ-MeLeu,Leu (Me) : γ-metil-leucina

Gly¥((E)CH=CH)Leu: 0 -CONH- entre a Gly e a Leu está substituído por um alceno de tipo (E).

Gly¥(CH2CH2)Leu: 0 -CONH- entre a Gly e a Leu está substituído pela ligação -CH2CH2-.

Gly¥ (CH2S)Leu: 0 -CONH- entre a Gly e a Leu está substituído pela ligação -CH2S-.

Gn : guanidino

GuAmb : 4-guanidinometilbenzoílo

Har : homoarginina

Har(Me) : N“-metil-homoarginina

His (3Me) : 3-metil-histidina π-metil-histidina HOAt : l-hidroxi-7-azabenzotriazole HOBt : 1-hidroxibenzotriazole HOOBt : 3,4-di-hidro-3-hidroxi-4-oxo-l, 2,3- benzotriazina HONB : N-hidroxi-5-norborneno-2,3-dicarboximida

Hph : homofenilalanina

Hyp : trans-4-hidroxiprolina

Hyp(Bzl) : 0-benzilo-trans-4-hidroxiprolina

IndPr : 3- (indole-3-il)propionilo

Izc : ácido imidazolidina-2-carboxílico

Lys (Me2) : Νε'£-dimetil-lisina

Abreviatura Descrição (continuação) MBHA : p-metilbenzidrilamina

MeOH : metanol

Mtt : 4-metiltritilo N ( (CH2)3Gn)Gly : N-(3-guanidinopropil)glicina

Nal(l) : 1-naftilalanina

Nal(2) : 2-naftilalanina

Nar : norarginina

Nar(Me) : N“-metilnorarginina

Nle : norleucina NMeAla : Na-metilalanina NMeArg : Na-metilarginina NMeAsn : Na-metilasparagina NMeLeu : Na-metil-leucina NMePhe : Na-metilfenilalanina NMeSer : Na-metilserina NMeTrp : Na-metiltriptofano NMeTyr : Na-metiltirosina

Nva : norvalina OBu1 : terc-butoxilo

Orn : ornitina

Orn(Mtt) : Νδ-(4-metiltritil)ornitina PAL : ácido 5-(4-(9- fluorenilmetoxicarbonilo)aminometil-3,5-dimetoxifenoxi)valérico

Pbf : 2,2,4,6,7-pentametildi-hidrobenzofurano-5- sulfonilo pGlu : ácido piroglutâmico

Phe(2Cl) : 2-clorofenilalanina

Phe (2F) : 2-fluorofenilalanina

Abreviatura Descrição (continuação)

Phe(3,4CÍ2) : 3,4-diclorofenilalanina

Phe(3,4F2) : 3,4-difluorofenilalanina

Phe (3CF3) : 3-trifluorometilfenilalanina

Phe(3Cl) : 3-clorofenilalanina

Phe (3F) : 3-fluorofenilalanina

Phe(4Cl) : 4-clorofenilalanina

Phe(4CN) : 4-cianofenilalanina

Phe (4F) : 4-fluorofenilalanina

Phe (4Gn) : 4-guanidinofenilalanina

Phe(4NH2) : 4-aminofenilalanina

Phe(4N02) : 4-nitrofenilalanina

Phe(4CN) : 4-cianofenilalanina

Phe (F5) : pentafluorofenilalanina

Phe(2Me) : 2-metilfenilalanina

Phe(3Me) : 3-metilfenilalanina

Phe(4Me) : 4-metilfenilalanina

Phe¥(CH2CH2)AzaGly: 0 -CONH- entre a Phe e a AzaGly está substituído pela ligação -CH2CH2-.

Phe¥ ( (E) CH=CH) Gly: A ligação -CONH- entre a Phe e a Gly está substituída pelo alceno de tipo (E).

Phe¥ (CH2CH2) Gly: A ligação -CONH- entre a Phe e a Gly está substituída pela ligação -CH2CH2-.

Phe¥ (CH2S) Gly: A ligação -CONH- entre a Phe e a Gly está substituída pela ligação -CH2S-.

Abreviatura Descrição (continuação) ΡϊιθΨ ( (R) CH (OH) - A ligação -CONH- entre a Phe e a Gly está (E)CH=)Gly: substituída pela ligação -CH(OH)-CH-, a unidade -CH(OH)- adquire a configuração (R) e a unidade entre o átomo de carbono na unidade -CH- e o átomo de carbono α da Gly é alceno de tipo (E). ΡϊιθΨ ( (S) CH (OH) - A ligação -CONH- entre a Phe e a Gly está (E)CH=)Gly: substituída pela ligação -CH(OH)-CH-, a unidade -CH(OH)- adquire a configuração (S) e a unidade entre o átomo de carbono na unidade -CH- e o átomo de carbono α da Gly é alceno de tipo (E).

Phe¥ ( (R) CH (OH) - A ligação -CONH- entre a Phe e a Gly está CH2)Gly: substituída pela ligação -CH (OH)-CH2- e a unidade -CH (OH)- adquire a configuração (R) . Phe¥ ( (S) CH (OH) - A ligação -CONH- entre a Phe e a Gly está CH2)Gly: substituída pela ligação -CH (OH)-CH2- e a unidade -CH (OH)- adquire a configuração (S) . Phe¥ (CH20) Gly: A ligação -CONH- entre a Phe e a Gly está substituída pela ligação -CH20-.

Phe¥ (COCH2) Gly: A ligação -CONH- entre a Phe e a Gly está substituída pela ligação -COCH2-.

Phe¥(CSNH)-NH2: A fenilalanilamida C-terminal está substituída por fenilalaniltioamida.

Phg : fenilglicina

PhOH : fenol

PhSMe : tioanisole

Pic(2) : ácido pipecolínico

Abreviatura Descrição (continuação)

Pic(3) : ácido 3-piperidinacarboxílico

Pip : ácido pipecolinico

Pro : prolina

Pro (4F) : trans-4-fluoroprolina

Pro (4NH2) : cis-4-aminoprolina

Pya(2) : 2-piridilalanina

Pya(3) : 3-piridilalanina

Pya(4) : 4-piridilalanina

PyAOP : hexafluorofosfato de (7-azabenzotriazole-l- iloxi)-tris(pirrolidino)fosfónio PyBOP : hexafluorofosfato de (benzotriazol-1- iloxi)-tris(pirrolidino)fosfónio PyBrop : hexafluorofosfato de bromo- tris(pirrolidino)fosfónio

Pzc(2) : ácido de piperazina-2-carboxílico

Sar : N-metilglicina

Ser(Ac) : O-acetilserina

Ser(Me) : O-metilserina

Thi : 2-tienilalanina

Thz : tioprolina

Tie : ácido 1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina-2- carboxilico TIS : triisopropilsilano

Tie : terc-leucina

Tos : tosilo

Trp (For) : Nin-formiltriptofano

Trt : tritilo

Tyr(Me) : O-metiltirosina

Tyr (P03H2) : 0-fosfotirosina

Abreviatura Descrição (continuação)

Tyr¥ (CH2NH)Asn: 0 -CONH- entre a Tyr e a Asn está substituído pela ligação -CH2NH-. TFA : ácido trifluoroacético TFE : trifluoroetanol Z : benziloxicarbonilo

Na descrição e desenhos, quando os códigos das bases e aminoácidos são indicados por abreviaturas, estas baseiam-se nas abreviaturas de acordo com a Commission on Biochemical Nomenclature da IUPAC-IUB ou nos códigos comuns na técnica. Para aminoácidos que podem ter isómeros óticos, é apresentada a forma L salvo indicação em contrário.

Os números de identificação de sequências na lista de sequências da descrição indicam as seguintes sequências, respetivamente.

[SEQ ID Ns: 1]

Esta mostra a sequência de aminoácidos da metastina de origem humana (Metastina).

[SEQ ID Nh 2]

Esta mostra a sequência de bases de ADN codificando a metastina humana.

[SEQ ID Nh 3]

Esta mostra a sequência de aminoácidos do precursor da metastina de ratinho (A).

[SEQ ID N2 : 4]

Esta mostra a sequência de bases de ADN codificando o precursor da metastina de ratinho (A), a qual é a sequência de bases do plasmideo pCMV-mKiSS-1 alojado na Escherichia coli transformante DH10B/pCMV-mKiSS-l.

[SEQ ID Ns: 5]

Esta mostra a sequência de aminoácidos do precursor da metastina de ratinho (B) .

[SEQ ID Ns: 6]

Esta mostra a sequência de bases de ADN codificando o precursor da metastina de ratinho (B), a qual é a sequência de bases do plasmideo pCR2.1-mKiSS-l.4A alojado na Escherichia coli transformante DH5a/pCR2.1-mKiSS-l.4A.

[SEQ ID Ns: 7]

Esta mostra a sequência de aminoácidos do precursor de metastina proveniente de rato.

[SEQ ID Ns: 8]

Esta mostra a sequência de bases de ADN codificando o precursor de metastina de rato.

[SEQ ID Ns: 9]

Esta mostra a sequência de aminoácidos da OT7T175 humana (recetor de metastina).

[SEQ ID N2 : 10]

Esta mostra a sequência de bases de ADN codificando a OT7T175 humana (recetor de metastina).

[SEQ ID N2: 11]

Esta mostra a sequência de aminoácidos da OT7T175 de rato (recetor de metastina).

[SEQ ID N2: 12]

Esta mostra a sequência de bases de ADN codificando a OT7T175 de rato (recetor de metastina).

[SEQ ID N2: 13]

Esta mostra a sequência de aminoácidos da OT7T175 de ratinho (recetor de metastina).

[SEQ ID N2: 14]

Esta mostra a sequência de bases de ADN codificando a OT7T175 de ratinho (recetor de metastina).

[SEQ ID N2: 15]

Esta mostra a sequência de aminoácidos da metastina humana 15 (40-54) .

[SEQ ID Nh 16]

Esta mostra a sequência de aminoácidos da metastina humana 10 (45-54) (MS 10) .

[SEQ ID N2: 17]

Esta mostra a sequência de aminoácidos da metastina humana 9 (46-54) .

[SEQ ID N2 : 18]

Esta mostra a sequência de aminoácidos da metastina humana 8 (47-54) .

[SEQ ID Ns: 19]

Esta mostra a sequência de bases de ADN codificando a metastina humana 15 (40-54).

[SEQ ID N2: 20]

Esta mostra a sequência de bases de ADN codificando a metastina humana 10 (45-54).

[SEQ ID N2: 21]

Esta mostra a sequência de bases de ADN codificando a metastina humana 9 (46-54).

[SEQ ID N2: 22]

Esta mostra a sequência de bases de ADN codificando a metastina humana 8 (47-54) A Escherichia coli transformante DH1OB/pCMV-mKiSS-1 encontra-se depositada desde 24 de janeiro de 2000 no International Patent Organisms Depository, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (o antigo Ministry of International Trade and Industry, Agency of Industrial Science and Technology, National Institute of Bioscience and Human Technology (NIBH)), localizado no Central 6, 1-1-1 Higashi,

Tsukuba, Ibaraki (código postal 305-8566), Japão, como o Número de Acesso FERM BP-7003 e desde 16 de dezembro de 1999 no Institute for Fermentation (IFO), localizado em 2-17-85, Juso-

Honmachi, Yodogawa-ku, Osaka-shi, Osaka, Japão, com o Número de

Acesso IFO 16348. A Escherichia coli transformante DH5a/pCR2.1-mKiSS-l.4A encontra-se depositada desde 6 de março de 2000 no International Patent Organisms Depository, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (o antigo Ministry of International Trade and Industry, Agency of Industrial Science and Technology, National Institute of Bioscience and Human Technology (NIBH)), localizado no Central 6, 1-1-1 Higashi,

Tsukuba, Ibaraki (código postal 305-8566), Japão, como o Número de Acesso FERM BP-7073 e desde 16 de fevereiro de 2000 no Institute for Fermentation (IFO), localizado em 2-17-85, Juso-Honmachi, Yodogawa-ku, Osaka-shi, Osaka, Japão, com o Número de

Acesso IFO 16360. EXEMPLO DE REFERÊNCIA 1

Produção de N-metil-N,N'-Bis-Boc-l-guanilpirazole

Numa atmosfera de azoto, 720 mg de NaH a 60% em óleo foi dissolvido em 20 mL de DMF seca e, à solução a 0 °C, foram adicionados 20 mL de uma solução de 5,59 g de N, N'-Bis-Boc-1-guanilpirazole em DMF seca comercialmente disponível, seguida de agitação durante 10 minutos. Depois de terem sido ali adicionados 1,68 mL de iodeto de metilo, a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas. Depois do solvente ter sido removido por destilação, o resíduo foi dissolvido em AcOEt e a solução foi lavada com solução aq. de HC1 1 N, solução aq. saturada de NaHC03 e, em seguida, solução aq. saturada de NaCl.

Após secagem sobre Na2S04, o solvente foi concentrado e o concentrado foi purificado por cromatografia em coluna flash (acetato de etilo/n-hexano = 1/4) utilizando sílica gel 60 (200 mL) para dar 5,35 g (rendimento 91,6%) de N-metil-N,N'-bis-Boc-l-guanilpirazole. RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13) : δ 8,00 (s 1, 1H) , 7,69 (s 1, 1H) , 6,42 (dd, 1H, J = 2,7, 1,5 Hz), 3,25 (s, 3H), 1,53 (s, 9H), 1,30 (s, 9H)

Análise elementar para C15H24N4O4

Calculado: C, 55,54; H, 7,46; N, 17,27 Encontrado: C, 55,36; H, 7,48; N, 17,06

Rfl: 0,64, Rf2: 0,79

Solvente de desenvolvimento para TLC:

Rfl (acetato de etilo/n-hexano = 1/2), Rf2 (metanol/clorofórmio = 2/98)

Tempo de eluição no HPLC: 26,7 min.

Condições de eluição:

Coluna: Wakosil-II 5C18 HG (4,6 χ 100 mm)

Eluente: Eluição gradiente de densidade linear com eluentes A/B = 100/0-20/80, utilizando eluente A: 0,1% de TFA-água e eluente B: acetonitrilo contendo 0,1% de TFA (40 min.)

Caudal: 1,0 mL/min. EXEMPLO DE REFERÊNCIA 2

Produção de N-metil-N,N'-Bis-Z-l-guanilpirazole

Numa atmosfera de árgon, 40 mg de NaH a 60% em óleo foi dissolvido em 5 mL de DMF seca e, à solução a 0 °C, foram adicionados 5 mL de solução de 380 mg de N, N'-Bis-Z-l-guanilpirazole em DMF seca comercialmente disponível, seguida de agitação durante 10 minutos. Depois de terem sido ali adicionados 125 pL de iodeto de metilo, a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 15 horas. Depois do solvente ter sido destilado, o resíduo foi dissolvido em AcOEt e a solução foi lavada com solução aq. de HC1 1 N, solução aq. saturada de NaHC03 e em seguida solução aq. saturada de NaCl. Após secagem sobre Na2SC>4, o solvente foi concentrado para dar 393 mg do produto em bruto. A partir do produto em bruto foi purificado 170 mg por cromatografia em coluna flash (acetato de etilo/n-hexano = 1/4) utilizando sílica gel 60 (75 mL) para dar 152 mg (rendimento 89,5%) de N-metil-N,N'-bis-Z-1-guanilpirazole. RMN de (300 MHz, CDC13) : δ 7,97 (s 1, 1H) , 7,61 (d, 1H, J = 1,0 Hz), 7,37-7,32 (m, 4H), 7,29-7,26 (m, 4H), 7,16-7,13 (m, 2H), 6,36 (dd, 1H, J = 2,8, 1,6 Hz), 5,18 (s, 2H), 5,04 (s, 2H), 3,22 (s, 3H)

Análise elementar para C21H20N4O4

Calculado: C, 64,28; H, 5,14; N, 14,28 Encontrado: C, 64,09; H, 5,24; N, 14,43

Rfl: 0,50, Rf2: 0,86

Solvente de desenvolvimento para TLC:

Rfl (acetato de etilo/n-hexano = 1/2)

Rf2 (metanol/clorofórmio = 2/98)

Tempo de eluição no HPLC: 28,9 min.

Condições de eluição:

Coluna: Wakosil-II 5C18 HG (4,6 x 100 mm)

Caudal: 1,0 mL/min. EXEMPLO DE REFERÊNCIA 3 (Síntese C) : Produção de des(1)-Ac-[D-

Tyr2,Hyp3,Thr5, Phe6'Y(CH2CH2)Gly7,Arg(Me)9,Trpl0]MSI0 (Composto N2 850)

Depois de ter sido expandido 4,44 g (0,45 mmol/g) de resina MBHA de Amida de Rink comercialmente disponível em DMF, a resina foi tratada com 50 mL de solução de 20% de piperidina/DMF durante 20 minutos para remover o grupo Fmoc. A resina resultante foi lavada com DMF e tratada em DMF com 4,21 g (8 mmol) de Fmoc-Trp(Boc)-OH, 1,27 mL (8 mmol) de DIPCDI e 1,31 g (8 mmol) de HOOBt à temperatura ambiente durante 90 minutos, pelo que foi introduzido Trp(Boc) para dar Fmoc-Trp(Boc)-resina MBHA de Amida de Rink. De um modo semelhante foi introduzida Orn(Mtt) para dar 2 mmol da Fmoc-Orn (Mtt) -Trp (Boc) -resina MBHA de Amida de Rink. Depois da resina obtida ter sido lavada e expandida em tolueno foram adicionados 30 mL de TFA/TIS/TFE/tolueno (1/5/47/47), seguidos de agitação durante 30 minutos e remoção da solução por filtração. Este procedimento foi repetido até a cor amarela provocada pelo grupo Mtt livre numa solução de TFA/TIS/TFE/tolueno (1/5/47/47) desaparecer quando era adicionada solução; assim o grupo Mtt foi removido. A Fmoc-Orn-Trp(Boc)-resina MBHA de Amida de Rink resultante foi neutralizada com solução de 5%-DIEA/tolueno. Depois de lavar com tolueno foram adicionados à resina 15 mL de tolueno-TFE (4:1) e 1,95 g (6 mmol) de N-metil-N,N'-bis-Boc-l-guanilpirazole obtidos no EXEMPLO DE REFERÊNCIA 1. Foi adicionada DIEA à mistura para ajustar o pH da solução a 10. A solução foi agitada durante 15 horas para dar Fmoc-Arg (B0C2, Me) -Trp (Boc) -resina MBHA de Amida de Rink (2 mmol). Depois da resina obtida ter sido seca em MeOH,

foram pesados 0,03 mmol e novamente dilatados em DMF. A Leu foi introduzida do mesmo modo como descrito acima para dar 0,03 mmol de Fmoc-Leu-Arg (Boc2,Me)-Trp (Boc)-resina MBHA de Amida de Rink. Após desproteção do Fmoc em solução de 20% de piperidina/DMF, a resina foi tratada em DMF com 51,5 mg (0,12 mmol) de Fmoc-Phe-Ψ (CH2CH2)-Gly-OH obtida no EXEMPLO DE REFERÊNCIA 4, 19,1 pL (0,12 mmol) de DIPCDI e 240 pL de solução de HOAt 0,5 M/DMF à temperatura ambiente durante 150 minutos. A resina foi lavada com DMF e, em seguida, tratada com 10,9 pL (0,12 mmol) de AC2O e 20,9 pL (0,12 mmol) de DIEA para terminação dos grupos amino residuais. Subsequentemente, a resina foi agitada, de um dia para o outro, em 2 mL de solução de Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-OH em DMF (0,06 mmol) sintetizado de um modo convencional num processo em fase liquida, 31,2 mg (0,06 mmol) de PyAOP, 120 pL (0,06 mmol) de solução de HOAt 0,5 M/DMF e 10,5 pL (0,06 mmol) de DIEA para dar Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe-Ψ (CH2CH2)-Gly-Leu-Arg(Boc2, Me)-Trp(Boc)-resina MBHA de Amida de Rink. Após secagem foram adicionados 1,5 mL de TFA/PhSMe/m-cresol/H20/TIS/EDT (80/5/5/5/2,5/2,5) à resina e agitados durante 90 minutos.

Foi adicionado éter dietilico a cada solução reacional para dar o precipitado e, após centrifugação, o sobrenadante foi removido; este procedimento foi repetido duas vezes para lavar. O resíduo foi extraído com uma solução aquosa de ácido acético e o extrato foi filtrado para remover a resina. Depois disso, foi realizada uma eluição gradiente de densidade linear (60 minutos) A/B: 71,5/28,5-61,5/38,5 a um caudal de 15 mL/min utilizando eluente A: 0,1% de TFA-água e eluente B: acetonitrilo contendo 0,1% de TFA em HPLC preparativa utilizando uma coluna YMC Pack R&D-ODS-5-B S-5, 120A (30 χ 250 mm) . As frações contendo o produto foram recolhidas e liofilizadas para dar 5,5 mg de pós brancos.

Espetro de massa (M+H)+ 1209,7 (calculado 1209,6)

Tempo de eluição no HPLC: 12,2 min.

Condições de eluição:

Coluna: SHISEIDO CAPCELL PAR C18 MGII (4,6 x 100 mm)

Eluente: Eluição gradiente de densidade linear com eluentes A/B = 80/20-30/70, utilizando eluente A: 0,1% de TFA-água e eluente B: acetonitrilo contendo 0,1% de TFA (25 min.)

Caudal: 1,0 mL/min. EXEMPLO DE REFERÊNCIA 4

Síntese de Fmoc-Phe-Ψ(CH2CH2)-Gly-OH

Depois de dissolver 97,4 mg (0,269 mmol) de Boc-Phe-Ψ [ (E) CH=CH]-Gly-OBu1, o qual é um composto conhecido na literatura, em 10 mL de AcOEt, foi adicionado 10 mg de Pd a 10%/C e a mistura foi agitada num fluxo de hidrogénio gasoso à temperatura ambiente durante 4 horas. O catalisador de Pd foi removido por filtração através de celite e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. Subsequentemente, o resíduo foi dissolvido em 4 mL de TFA e a solução foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. O TFA foi destilado sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em 2,25 mL de acetonitrilo:H20 (2:1). Sob arrefecimento com gelo, foi adicionada sequencialmente, gota a gota, uma solução de 236 pL (1,69 mmol) de TEA e 95,1 mg (0,282 mmol) de Fmoc-OSu em acetonitrilo (3 mL) e a mistura foi agitada à mesma temperatura durante 2 horas. Depois de terem sido adicionados 20 mL de HC1 aq. 0,1 N, a totalidade foi extraída com AcOEt. A camada orgânica foi lavada duas vezes com HC1 aq. 0,1 N e em seguida seca sobre MgS04 anidro. Após concentração sob pressão reduzida, o produto foi purificado por cromatografia em coluna flash (acetato de etilo/n-hexano = 3/2) utilizando Wakosil C-300 para dar 118 mg (quantitativo) de Fmoc-Phe-Ψ(CH2CH2)-Gly-OH. EXEMPLO DE REFERÊNCIA 5 (Síntese G) : Produção de des(1)-Ac-[D-

Tyr2,Hyp3,Thr5,Gly¥((E)CH=CH)Leu8,Arg(Me)9,Trpl0]MSI 0 (Composto N2 892) HC1. H-Ser-OMe, 3,5 g (22,6 mmol) , foi suspenso em (40 mL) de clorofórmio. Sob arrefecimento com gelo, foram sequencialmente adicionados DIEA (8,7 mL, 49,7 mmol) e Pbf-Cl (5,86 g, 20,3 mmol) e agitados de um dia para o outro, enquanto eram gradualmente aumentados até à temperatura ambiente. Depois da reação ter sido parada adicionando solução aquosa saturada de ácido cítrico, o clorofórmio foi destilado sob pressão reduzida e a totalidade foi extraída com AcOEt. A camada orgânica foi lavada sequencialmente com solução aquosa saturada de ácido cítrico, solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e solução aquosa saturada de cloreto de sódio e, em seguida, seca sobre MgS04 anidro. Após concentração sob pressão reduzida, foi realizada cromatografia flash utilizando AcOEt : n-hexano = 1:1 para dar Pbf-Ser-OMe (6,94 g, 82,7%) .

Numa atmosfera de árgon sob arrefecimento com gelo, foram adicionados 923 pL (2,03 mmol) de uma solução de azodicarboxilato de dietilo 2,2 M em tolueno a uma solução de 500 mg (1,35 mmol) de Pbf-Ser-OMe, 522 mg (2,03 mmol) de PPh3 em THF (20 mL) . A mistura foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente e, em seguida, o THF foi destilado sob pressão reduzida. A cromatografia flash foi realizada utilizando AcOEt: n-hexano = 1:1 para dar 481 mg de éster metilico de aziridina (quantitativo).

Numa atmosfera de árgon foram adicionados, gota a gota, 429 pL (0,644 mmol) de uma solução de DIBAL-H 1,5 M em tolueno a uma solução de éster metilico de aziridina (198 mg, 0,56 mmol) em tolueno (10 mL) a -78 °C. Depois dagitar durante 20 minutos à mesma temperatura, a reação foi parada com solução aquosa de HC1 0,1 N. A totalidade foi extraída com éter dietílico e a camada orgânica foi lavada sequencialmente com solução aquosa de HC1 0,1 N e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Após secagem sobre MgSCq anidro, a mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida para dar o aldeído como uma substância oleosa. Por outro lado, foram sequencialmente adicionados 146 pL (0,84 mmol) de DIEA e 197 pL (0,84 mmol) de (EtO) 2P (O) CtpCCpBu1 sob arrefecimento com gelo, a uma suspensão de 35, 6 mg (0,84 mmol) de LiCl anidro em acetonitrilo (2 mL). A mistura foi agitada à mesma temperatura durante 20 minutos e, em seguida, foi ali adicionada, gota a gota, uma solução do aldeído obtido acima em acetonitrilo (4 mL), seguida de agitação a 0 °C durante 3 horas. Depois da totalidade ter sido extraída com AcOEt, a camada orgânica foi lavada sequencialmente com solução aquosa saturada de ácido cítrico, solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e solução aquosa saturada de cloreto de sódio e, em seguida, seca sobre MgS04 anidro. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida e o concentrado foi recristalizado de éter diet í lico/n-hexano para dar 86,5 mg do enoato de aziridina alvo. As águas-mães foram concentradas sob pressão reduzida e submetidas a cromatografia flash utilizando

AcOEt:n-hexano = 1:19 para dar mais 82,4 mg do enoato de aziridina alvo (rendimento total: 71,5%) .

Numa atmosfera de árgon, foram adicionados gota a gota 1,59 mL (3,17 mmol) de uma solução de i-BuMgCl 2,0 M em THF a -78 °C a uma solução de 284 mg (3,17 mmol) de CuCN e 269 mg (6,34 mmol) de LiCl anidro em THF anidro (6 mL) . A temperatura foi aumentada até 0 °C e a mistura foi agitada durante 10 minutos. A mistura foi novamente arrefecida até -78 °C e foram adicionados sequencialmente, gota a gota, 402 pL (3,17 mmol) de BF3.Et20 e uma solução de 334 mg (0,792 mmol) de enoato de aziridina em THF anidro (6 mL) . A mistura foi agitada à mesma temperatura durante 20 minutos. Após desativação com solução aquosa saturada de cloreto de amónio:solução aquosa de amónia a 28% (1:1), a mistura foi agitada à temperatura ambiente até a solução reacional ficar azul. A totalidade foi extraída com éter dietílico. A camada orgânica foi lavada com água e seca sobre MgSCp anidro. Após concentração sob pressão reduzida, o resíduo foi dissolvido em solução aquosa de TFA a 95% (10 mL) e agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. O TFA foi removido por destilação sob pressão reduzida e destilado azeotropicamente duas vezes com éter dietílico. O resíduo foi recristalizado de éter diet í lico/n-hexano para dar 254 mg de Pbf-GlyT7 [ (E)-CH=CH] Leu-OH como pós brancos (75,7%).

Depois de dissolver 180 mg (0,425 mmol) de Pbf-GlyT7 [ (E) -CH=CH]Leu-OH e 352 pL (3 mmol) de tioanisole em TFA (2,65 mL), a

solução foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas. O TFA foi destilado sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi dissolvido em acetonitrilo:H20 (2:1, 9 mL). Sob arrefecimento com gelo, foi adicionada trietilamina até a solução ficar básica e foi ali adicionado mais 168 mg (0,446 mmol) de Fmoc-OSu. Enquanto era aumentada até à temperatura ambiente, a mistura foi agitada durante 4 horas e a totalidade foi extraída com AcOEt. A camada orgânica foi lavada sequencialmente com solução aquosa de HC1 0,1 N e solução aquosa saturada de cloreto de sódio e seca sobre MgS04 anidro. Após concentração sob pressão reduzida foi realizada cromatografia flash utilizando AcOEt:n-hexano =3,5 : 6,5 para dar 145 mg de Fmoc-Gly¥[(E)-CH=CH]Leu-OH (89%).

Depois de expandir 287 mg (0,1 mmol) de Fmoc-Arg (Boc2,Me) -Trp(Boc)-resina MBHA de Amida de Rink (0,349 mmol/g) em DMF, a mistura foi tratada com solução de 20% de piperidina/DMF para dissociar o grupo Fmoc. Subsequentemente, a resina foi tratada em DMF com 133 mg (0,338 mmol) de Fmoc-Gly¥[ (E)-CH=CH]Leu-OH, 58,9 pL (0,338 mmol) de DIEA, 676 pL (0,338 mmol) de solução de HOAt 0,5 M/DMF e 176 mg (0,338 mmol) de PyAOP à temperatura ambiente durante 12 horas. Depois da resina ter sido lavada com DMF, o péptido N-terminal foi prolongado por síntese de fase sólida com Fmoc para dar Ac-D-Tyr (Bu1)-Hyp (OBu1)-Asn (Trt)-

Thr (Bu1) -Phe-Gly¥[ (E) CH=CH]Leu-Arg(Boc2, Me)-Trp(Boc)-resina MBHA de Amida de Rink. Depois da resina ter sido seca, foram ali adicionados 4 mL de TFA/PhSMe/m-cresoi/H20/TIS/EDT (80/5/5/5/2,5/2,5) e a mistura foi agitada durante 180 minutos. Foi adicionado éter dietílico a cada solução reacional para dar o precipitado e, após centrifugação, o sobrenadante foi removido; este procedimento foi repetido duas vezes para lavar. O resíduo foi extraído com uma solução aquosa de ácido acético e o extrato foi filtrado para remover a resina. Depois disso, foi realizada eluição gradiente de densidade linear (60 minutos) A/B: 71,5/28,5-61,5/38,5 a um caudal de 15 mL/min utilizando eluente A: 0,1% de TFA-água e eluente B: acetonitrilo contendo 0,1% de TFA por HPLC preparativa utilizando uma coluna YMC Pack R&D-ODS-5-B S-5, 120A (30 χ 250 mm) . As frações contendo o produto foram recolhidas e liofilizadas para dar 19,6 mg de pós brancos.

Espetro de massa (M+H)+ 1207,5 (calculado 1207,6)

Tempo de eluição no HPLC: 14,6 min.

Condições de eluição:

Coluna: SHISEIDO CAPCELL PAR C18 MGII (4,6 x 100 mm) Eluente: Eluição gradiente de densidade linear com eluentes A/B = 80/20-30/70, utilizando eluente A: 0,1% de TFA-água e eluente B: acetonitrilo contendo 0,1% de TFA (25 min.)

Caudal: 1,0 mL/min. EXEMPLO 1

Produção de des(1)-Ac-[D-Tyr2,Hyp3,Alb4,Thr5,Cha6,

Gly7¥((E)CH=CH)Leu8,Arg(Me)9,Trpl0]M S10 (Composto N2 903)

Depois de se ter divido em três partes iguais 4,32 g (1,5 mmol) de Fmoc-Arg (B0C2, Me) -Trp(Boc)-resina MBHA de Amida de Rink (0,347 mmol/g) e expandido em DMF, a mistura foi tratada com solução de 20% de piperidina/DMF para dissociar o grupo Fmoc. Subsequentemente, cada resina foi tratada em DMF com 590 mg (1,5 mmol) de Fmoc-GlyT7 [ (E) -CH=CH] Leu-OH, 261 pL (1,5 mmol) de DIEA, 3,0 mL (1,5 mmol) de solução de HOAt 0,5 M/DMF e 782 mg (1,5 mmol) de PyAOP à temperatura ambiente durante 12 horas. Depois da resina ter sido lavada com DMF e combinada, foram introduzidos Cha, ThríBu1), Alb, HypíBu1) e D-TyríBu1) por esta ordem na resina obtida, por síntese em fase sólida com Fmoc utilizando Fmoc-aminoácido/DIPCDI/HOAt para dar Fmoc-D-Tyr(Bu1)-Hyp (OBu1) -Asn (Trt) -Thr (Bu1) -Cha-Gly¥[ (E) CH=CH] Leu-Arg (Boc2,Me) -Trp (Boc)-resina MBHA de Amida de Rink. A resina assim obtida foi desprotegida por tratamento com 20% de piperidina/DMF, e lavada. A resina foi em seguida suspensa em DMF, e foram adicionados 548 pL (6,0 mmol) de Ac20 e 1,04 mL (6,0 mmol) de DIEA, respetivamente, seguidos de agitação durante 20 minutos. A resina foi lavada com DMF. Depois de ter sido confirmado que a reação tinha ocorrido, a resina foi lavada em MeOH e seca para dar Ac-D-Tyr (Bu1) -Hyp (Bu1) -Alb-Thr (Bu1) -Cha-Gly¥ [ (E) CH=CH] Leu-

Arg (Boc2, Me)-Trp (Boc)-resina MBHA de Amida de Rink. A resina resultante foi dividida em 1 g, 2 g e 2,2 g, às quais foram adicionados 25 mL, 50 mL e 50 mL de TFA: tioanisole: m-cresol: H20:EDT:TIS (80:5:5:5:2,5:2,5), respetivamente. Depois dagitar durante 180 minutos à temperatura ambiente, a solução reacional foi adicionada gota a gota sobre éter gelado, enquanto a resina era removida fazendo passar através de um filtro de vidro, para preparar desse modo o pó branco do péptido em bruto. O péptido em bruto obtido foi purificado separadamente 10 vezes sobre HPLC preparativa utilizando uma coluna SHISEIDO CAPCELL PAK MGII (50 x 250 mm) . A eluição gradiente de densidade linear (60 minutos) A/B: 68/32-58/42 foi realizada a um caudal de 45 mL/min utilizando eluente A: 0,1% de TFA-água e eluente B: acetonitrilo contendo 0,1% de TFA por HPLC preparativa. O produto eluído foi fracionado em tubos de ensaio com cerca de 14 mL cada. Ao monitorizar cada fração por HPLC foram identificadas apenas as frações que continham o produto. As frações foram agrupadas e liofilizadas para dar 352,2 mg de pós brancos.

Foi dissolvido 352,2 mg (286,7 pmol) da amostra purificada obtida em AcCN-água e foram adicionados 1,195 mL (1,433 mmol equivalente) de resina AG 1x8 AcCT à solução. Enquanto era agitada ocasionalmente de modo manual, a solução foi deixada depositar durante uma hora e filtrada através de um filtro de membrana em PTFE possuindo um diâmetro de poro de 3 pm. 0 filtrado foi transferido para um balão de recuperação e o solvente foi destilado. Em seguida, foram adicionados 3 mL de ácido acético ao resíduo. Depois da mistura ter sido submetida a ultrassons durante 5 minutos com um equipamento de ultrassons, foram adicionados 12 mL de água à solução. Enquanto era arrefecida num banho de gelo seco, a solução em ácido acético a 20% resultante foi liofilizada para dar 321,8 mg de pós brancos.

Espetro de massa (M+H)+ 1228,4 (calculado 1228,7)

Tempo de eluição no HPLC: 20,2 min.

Condições de eluição:

Coluna: SHISEIDO CAPCELL PAR C18 MGII (4,6 x 100 mm) Eluente: Eluição gradiente de densidade linear com eluentes A/B = 95/5-45/55, utilizando eluente A: 0,1% TFA-água e eluente B: acetonitrilo contendo 0,1% de TFA (25 min.)

Caudal: 1,0 mL/min.

Análise de aminoácidos (ácido clorídrico a 20% contendo 4% de ácido tioglicólico, 110 °C, hidrólise durante 24 horas; os números entre parênteses mostram valores teóricos.): Thr 0,95 (1); Tyr 0,95 (1); Cha 1,00 (1) EXEMPLO 2

Produção de des(1)-Ac-[D-Tyr2,Hyp3,Thr5,Cha6,Gly7¥((E) CH=CH)Leu8,Trpl0]MSI0 (Composto N2 926)

Utilizando como um material de partida 3,33 g (1,5 mmol) de Fmoc-resina MBHA de Amida de Rink (0,45 mmol/g) foi realizada síntese em fase sólida com Fmoc para dar Fmoc-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-resina MBHA de Amida de Rink. Depois da Fmoc-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-resina MBHA de Amida de Rink ter sido expandida em DMF, a mistura foi tratada com solução de 20% de piperidina/DMF para dissociar o grupo Fmoc. Subsequentemente, a resina foi tratada em DMF com 1,57 g (4,0 mmol) de Fmoc-GlyT7 [ (E) -CH=CH] Leu-OH, 1,39 mL (8,0 mmol) de DIEA, 8,0 mL (4,0 mmol) de solução de HOAt 0,5 M/DMF e 2,09 g (4,0 mmol) de PyAOP à temperatura ambiente durante 24 horas. Depois da resina ter sido lavada com DMF, o péptido N-terminal foi prolongado por síntese em fase sólida com Fmoc para dar Fmoc-Cha-GlyT7 [ (E) CH=CH] Leu-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -resina MBHA de Amida de Rink. Após desproteção do grupo Fmoc N-terminal por tratamento com 20% de piperidina/DMF, a resina foi tratada em DMF com Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-OH 2,48 g (4,5 mmol), 7 34 mg (4,5 mmol) de HOOBt e 716 mL (4,5 mmol) de DIPCDI durante 60 horas. A Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Cha-Gly¥[(E)CH=CH]Leu-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-resina MBHA de Amida de Rink resultante foi lavada em MeOH e seca. À totalidade da resina resultante foram adicionados 60 mL de TFA: tioanisole:m-cresol:H20:EDT:TIS (80:5:5:5:2,5:2,5). Depois dagitar durante 90 minutos à temperatura ambiente, a solução reacional foi adicionada gota a gota sobre éter gelado, enquanto a resina era removida passando através de um filtro de vidro, para desse modo preparar os pós brancos de péptido em bruto. O péptido em bruto obtido foi purificado separadamente cinco vezes por HPLC preparativa utilizando uma coluna SHISEIDO CAPCELL PAK MGII (50 χ 250 mm). A eluição gradiente de densidade linear (60 minutos) A/B: 69/31-59/41 ou 68/32-58/42 foi realizada a um caudal de 45 mL/min utilizando eluente A: 0,1 % de TFA-água e eluente B: acetonitrilo contendo 0,1% de TFA por HPLC preparativa. O produto eluido foi fracionado em tubos de ensaio com cerca de 14 mL cada. Ao monitorizar cada fração por HPLC foram identificadas apenas as frações contendo o produto. As frações foram agrupadas e liofilizadas para dar pós brancos. A totalidade foi dissolvida em acetonitrilo-água e foram adicionados 0,824 mL (equivalente a 1,005 mmol) de resina AG 1x8 AcO” à solução. Enquanto era agitada ocasionalmente modo manual, a solução foi deixada depositar durante uma hora e filtrada através de um filtro de membrana em PTFE possuindo um diâmetro de poro de 3 pm. O filtrado foi transferido para um balão de recuperação e o solvente foi destilado. Em seguida, foram adicionados 2 mL de ácido acético ao resíduo. Depois da mistura ter sido submetida a ultrassons durante 5 minutos com um equipamento de ultrassons, foram adicionados 8 mL de água à solução. Enquanto era arrefecida num banho de gelo seco, a solução em ácido acético a 20% resultante foi liofilizada para dar 304,7 mg de pós brancos.

Espetro de massa (M+H)+ 1199,6 (calculado 1199,7)

Tempo de eluição no HPLC: 20,2 min.

Condições de eluição:

Coluna: SHISEIDO CAPCELL PAK C18 MGII (4,6 x 100mm) Eluente: Eluição gradiente de densidade linear com eluentes A/B = 95/5-45/55, utilizando eluente A: 0,1% de TFA-água e eluente B: acetonitrilo contendo 0,1% de TFA (25 min.)

Caudal: 1,0 mL/min.

Análise de aminoácidos (ácido clorídrico a 20% contendo 4% de ácido tioglicólico, 110 °C, hidrólise durante 24 horas; os números entre parênteses mostram valores teóricos.): Asp:0,93 (1); Thr 0,89 (1); Tyr 0,96 (1); Cha 1,00 (1); Arg 0,98 (1) EXEMPLO 3

Produção de des(1)-Ac-[D-Tyr2,Hyp3,Alb4,Thr5,Cha6,Θ1γ7Ψ((E) CH=CH)Leu8,Trpl0]MSI0 (Composto N2 927)

Depois de se ter expandido 3,66 g (0,55 mmol) de Fmoc-resina MBHA de Amida de Rink em DMF, a cadeia do péptido foi prolongada por síntese em fase sólida com Fmoc. O grupo Fmoc N-terminal de Fmoc-D-Tyr (Bu1) -Hyp (Bu1) -Alb-Thr (Bu1) -Cha-Gly¥ [(E) — CH=CH]Leu-Arg(Pbf)-Trp ( Boc)-resina MBHA de Amida de Rink assim obtida, foi desprotegido por tratamento com 20% de piperidina/DMF e lavado. A resina foi, em seguida, suspensa em cerca de 10 mL de DMF e foram adicionados 208 pL (2,2 mmol) de AC2O e 383 pL (2,2 mmol) de DIEA, respetivamente, seguidos de agitação durante 20 minutos. A resina foi lavada com DMF. Depois de ter sido confirmado que a reação tinha ocorrido, a resina foi lavada em MeOH e seca. A 5,9695 g da resina resultante foram adicionados 50 mL de TFA: tioanisole: m-cresol: H20: EDT: TIS (80:5:5:5:2,5:2,5) e a mistura foi agitada durante 90 minutos à temperatura ambiente. Enquanto a resina era removida passando através de um filtro de vidro, a solução reacional foi adicionada, gota a gota, a éter gelado sob agitação para preparar os pós brancos de péptido em bruto. A resina foi exaustivamente lavada com uma solução de desproteção e, em seguida, retornada à solução reacional. A resina foi novamente tratada com o mesmo volume de solução de desproteção à temperatura ambiente durante 20 horas e foi adicionado do mesmo modo, gota a gota, éter para preparar os pós brancos do produto. A mistura dos pós brancos e éter foi separada por centrifugação, respetivamente. O éter foi removido por decantação e este procedimento foi repetido duas vezes para remover o ácido e a armadilha. O resíduo foi seco e extraído com solução aquosa de ácido acético. O extrato foi feito passar através de um filtro de disco de 0,45 pm para remover partículas finas, seguido de concentração com um evaporador. O resíduo foi diluído em acetonitrilo-solução aquosa e liofilizado para dar um total de 1,646 g de pós brancos a castanhos. 0 péptido em bruto obtido foi purificado separadamente seis vezes por HPLC preparativa utilizando uma coluna SHISEIDO CAPCELL PAK MGII (50 χ 250 mm). A eluição gradiente de densidade linear (60 minutos) de AB: 68/32-58/42 foi realizada a um caudal de 45 mL/min utilizando eluente A: 0,1% de TFA-água e eluente B: acetonitrilo contendo 0,1% de TFA por HPLC preparativa. O produto eluido foi fracionado em tubos de ensaio com cerca de 14 mL cada. Ao monitorizar cada fração por HPLC foram identificadas apenas as frações contendo o produto. As frações foram agrupadas e liofilizadas para dar 436,9 mg de pós brancos. A 416,9 mg (343,3 pmol) da amostra purificada obtida em AcCN-água, foram adicionados 1,430 mL (equivalente a 1,717 mmol) de resina AG 1x8 AcO” à solução. Enquanto era agitada ocasionalmente de modo manual, a solução foi deixada depositar durante uma hora e filtrada através de um filtro de membrana em PTFE possuindo um diâmetro de poro de 3 pm. O filtrado foi transferido para uma balão de recuperação e o solvente foi destilado. Em seguida, foram adicionados 4 mL de ácido acético ao resíduo. Depois da mistura ter sido submetida a ultrassons durante 5 minutos com um equipamento de ultrassons, foram adicionados 16 mL de água à solução. Enquanto era arrefecida num banho de gelo seco, a solução em ácido acético a 20% resultante foi liofilizada para dar 368,4 mg de pós brancos.

Espetro de massa (M+H)+ 1214,6 (calculado 1214,7)

Tempo de eluição no HPLC: 20,1 min.

Condições de eluição:

Coluna: SHISEIDO CAPCELL PAR C18 MGII (4,6 x 100 mm) Eluente: Eluição gradiente de densidade linear com eluentes A/B = 95/5-45/55, utilizando eluente A: 0,1% de TFA-água e eluente B: acetonitrilo contendo 0,1% de TFA (25 min.)

Caudal: 1,0 mL/min.

Análise de aminoácidos (ácido clorídrico a 20% contendo 4% de ácido tioglicólico, 110 °C, hidrólise durante 24 horas; os números entre parênteses mostram valores teóricos.): Thr 0,95 (1); Tyr 0,97 (1); Cha 1,00 (1); Arg 0,99 (1)

Os compostos sintetizados nos EXEMPLOS 1 a 3 são mostrados na TABELA 2 abaixo, em termos das suas estruturas, propriedades físico-químicas, etc. A descrição "Síntese" na tabela indica que: os compostos descritos nos EXEMPLOS 1-3 foram sintetizados pela Síntese G descrita na coluna "Síntese". A descrição "Condições de HPLC" na tabela indica que: os compostos descritos nos EXEMPLOS 1-3 podem ser eluídos nas condições d descritas na coluna "Condições de HPLC".

EXEMPLO DE ENSAIO 1

Medição da Atividade Agonista Analisando as Alterações no Nivel de Iões Cálcio Intracelulares 1) Preparação de linhas de células de expressão estável de metastina humana e metastina de rato

As linhas de células de expressão estável de metastina humana e metastina de rato foram obtidas transfectando o plasmideo de expressão para células animais em células CHO/dhfr~ utilizando o Kit de Transfeção CellPhect (fabricado por GE Healthcare) . Primeiro, 240 pL de Tampão A (incluído no Kit de Transfeção CellPhect) foram adicionados a 9,6 pg de ADN de plasmideo dissolvido em 240 pL de água destilada, seguido de agitação. Depois da mistura ter repousado durante 10 minutos, foram adicionados 480 yL de Tampão B (incluído no Kit de Transfeção CellPhect) à mistura, a qual foi vigorosamente agitada para formar lipossomas contendo o ADN. Em seguida, 4 χ 105 células CHO/dhfr~ (obtidas de ATCC) foram inoculadas numa placa Petri de 60 mm. Depois de cultivar as células em meio F-12 de Ham (fabricado por Nissui Seiyaku Co., Ltd.) suplementado com 10% de soro fetal bovino (fabricado por BIO WHITTAKER, Inc.) a 37 °C durante 2 dias em dióxido de carbono gasoso a 5%, foram adicionados gota a gota 480 mL dos lipossomas às células na placa de Petri. Depois de cultivar as células numa incubadora de CO2 (5% de CO2, 37 °C) durante 6 horas, as células foram lavadas duas vezes com meio F-12 de Ham isento de soro e foram adicionados 3 mL de glicerol a 15% às células na placa de Petri, seguidos de tratamento durante 2 minutos. As células foram novamente lavadas duas vezes com meio F12 de Ham isento de soro, seguidas de incubação em meio F12 de Ham suplementado com 10% de soro fetal bovino numa incubadora de C02 (5% de C02, 37 °C) durante 15 horas. As células foram dispersas por tratamento com tripsina para serem recuperadas a partir da placa de Petri. As células recuperadas foram inoculadas numa placa de 6 poços a 1,25 χ 104 células cada/poço e a incubação foi iniciada numa incubadora de C02 (5% de C02, 37 °C) em meio de Eagle

modificado por Dulbecco (DMEM, fabricado por Nissui Seiyaku) contendo 10% de soro fetal bovino submetido a diálise (fabricado por JRH BIOSCIENCES, Inc.). Os transformantes de CHO transfectado com o plasmídeo cresceram no meio, mas as células não transfectadas morreram gradualmente, pelo que o meio foi trocado nos Dias 1 e 2 após o início da incubação para remover as células mortas. Foram isoladas, aproximadamente, 20 colónias dos transformantes de CHO que continuavam a crescer nos Dias 8 a 10 após a incubação. A partir das células nestas colónias, as células que apresentavam alta reatividade com o péptido ligando metastina (a seguir apenas referidas como estirpes hl75KB19 e hl75KB29) foram selecionadas para realizar a experiência seguinte. 2) Aplicação das células A linha de células CHO de expressão de metastina humana (a estirpe hl75KB19 é descrita numa secção separada) e a linha de células CHO de expressão de metastina de rato (a estirpe hl75KB29 é descrita numa secção separada) foram aplicadas numa placa de 96 poços (tipo 3904, fabricada por Corning) a 3 x 101 2 células/poço, seguida de incubação numa incubadora de C02 (5% de C02, 37 °C) durante 24 horas. Como meio foi utilizado meio MEMa (isento de ácidos nucleicos, fabricado por Nikken Bio Medical Laboratory) suplementado com 10% de soro fetal bovino (fabricado por Thermo, MultiSer) submetido a diálise. 1

Carga com Fluo-4 NW nas células 2

Como um tampão de ensaio foi preparada uma solução salina equilibrada de Hanks lx (HBSS, fabricada por GIBCO) suplementada com 0,1% de BSA, HEPES 20mM (pH 7,4, fabricado por GIBCO) e Probenecida 1 mM (fabricada por Molecular Probes) . O meio nos poços da placa aplicados com células foi removido e foram adicionados 100 pL do tampão de ensaio (mantido quente a 37 °C) a cada poço. Depois de 10 mL do tampão de ensaio (o volume para analisar duas placas) terem sido introduzidos num frasco da mistura corante Fluo-4NW (Componente A, kit de ensaio de cálcio

Fluo-4 NW (pacote de arranque), fabricado por Molecular Probes), a mistura foi agitada suavemente para preparar a solução de carga de Fluo-4 NW. Esta solução de carga foi introduzida em cada poço em 50 pL cada e feita reagir numa incubadora de C02 (5% de C02, 37 °C) durante 30 minutos para carregar as células com Fluo-4 NW. Subsequentemente, as células foram deixadas em repouso à temperatura ambiente (25 °C) durante 15 minutos e, em seguida, utilizadas para ensaio. 4) Medição da atividade agonista

Para monitorizar a atividade agonista de um composto de ensaio, o composto de ensaio diluído no tampão de ensaio descrito acima foi fornecido a uma placa de 96 poços (tipo 3363, fabricado por Corning) a 80 pL cada/poço para preparar a placa de compostos. A placa de células carregadas com Fluo-4 NW e a placa de compostos foram colocadas num Leitor de Placas para Imagiologia Fluorimétrica (FLIPR, fabricado por Molecular Devices) e 50 pL de cada foram fornecidos a cada poço através de uma pipeta automática do FLIPR. A resposta agonista quando estimulada com o composto foi monitorizada através da câmara CCD no FLIPR em termos de alterações nos níveis de iões cálcio intracelulares (alterações na fluorescência de Fluo-4 NW). A atividade agonista específica da metastina humana (45-54)* refere-se ao valor obtido subtraindo a alteração de fluorescência no grupo de controlo sem qualquer aditivo da alteração de fluorescência induzida pela Metastina (45-54) . A atividade agonista específica de um composto de ensaio refere-se ao valor obtido subtraindo a alteração de fluorescência observada no grupo de controlo na ausência de qualquer composto de ensaio da alteração de fluorescência observada quando adicionada com o composto de ensaio. 0 nível de composto que apresenta uma atividade de resposta agonista de 50% (valor EC50) foi calculado a partir da curva dose-resposta. Quando a resposta máxima da atividade agonista específica da metastina humana (45-54) foi feita a 100%, a EC50 foi calculada num composto de ensaio que apresenta 70% ou mais da atividade máxima em comparação com a resposta máxima. * O péptido utilizado e sintetizado a partir do 452 ao 542 na sequência de aminoácidos para a metastina humana [metastina humana (45-54)] é o produto sintético do Peptide Institute, Inc. A atividade agonista de cada composto de ensaio [expressa pela atividade específica da EC50 de um composto de ensaio com base na EC50 da Metastina (45-54)] é mostrada na TABELA 3. Os dados revelam que os compostos da presente invenção têm excelentes atividades agonistas nos recetores de metastina.

EXEMPLO DE ENSAIO 2

Avaliação do Efeito de Redução do Nivel de Testosterona no Sangue de Derivados Peptídicos de Metastina Utilizando Ratos Machos Maduros

Nos derivados peptídicos de metastina listados nas TABELAS 1 e 2 foram avaliados os efeitos de redução do nível de testosterona no sangue dos compostos.

Um derivado peptídico de metastina (a seguir referido como péptido) foi dissolvido em solução aquosa de DMSO a 50% (DMSO: Sigma-Aldrich, água destilada para preparação injetável: Otsuka Pharmaceutical) para preparar uma solução do péptido com a concentração de 0,1, 0,03 ou 0,01 mM. Esta solução do péptido foi introduzida em cinco bombas osmóticas ALZET (Modelo 2001, 0,2 mL de volume, velocidade de libertação: 0,001 mL/h, DURECT Corporation). A bomba ALZET cheia com a solução do péptido foi implantada por via subcutânea em 5 ratos machos CD(SD)IGS com 9 semanas de idade após parto (Charles River Japan, Inc.) no dorso sob anestesia etérea em uma bomba/animal. Para controlo negativo, uma solução aquosa de DMSO a 50% foi introduzida em 5 bombas osmóticas ALZET, que foram igualmente implantadas em 5 ratos machos CD(SD)IGS (Charles River Japan, Inc.), respetivamente. Estes ratos foram alimentados durante 6 dias sob condições de alimentação normal. Depois de ser pesado, o animal foi decapitado para recolher o sangue. Depois de ter sido adicionada ao sangue uma solução de aprotinina (Trasilol, Bayer) contendo 0,1 g/mL de EDTA.2Na a 0,03 mL/mL de sangue, o plasma foi separado e recuperado por centrifugação a 1 800 χ g durante 30 minutos. A partir do plasma obtido, 0,05 mL foram aplicados no radioimunoensaio (Kit de Testosterona DPC.Total, Diagnostic Products Corporation) para medir o nivel de testosterona no plasma de cada rato. Os péptidos são listados na TABELA 4, quando o número de ratos que apresentaram o nivel de testosterona abaixo do limite de medição (0,04 ng/mL de nivel no plasma) no radioimunoensaio foi de 3 ou mais nos 5 ratos que receberam os péptidos.

APLICABILIDADE INDUSTRIAL

De acordo com a presente invenção, são proporcionados derivados de metastina estáveis possuindo excelentes atividades biológicas (uma atividade de supressão de metástases de cancros, uma atividade de supressão de crescimento de cancros, uma atividade de estimulação de secreção da hormona gonadotrófica, atividade de estimulação de secreção de hormonas sexuais, uma atividade de supressão de secreção da hormona gonadotrófica, atividade de supressão de secreção de hormonas sexuais, etc.

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS <110> Takeda Pharmaceutical Company Limited <120> Derivados de Metastina e Sua Utilização <130> PCT07-0053 <150> JP2007-221911 <151> 2007-08-28 <150> JP2007-021387 <151> 2007-01-31 <150> JP2006-290536 <151> 2006-10-25 <160> 22

<210> 1 <211> 54 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 1

Gly Thr Ser Leu Ser Pro Pro Pro Glu Ser Ser Gly Ser Arg Gin Gin 15 10 15

Pro Gly Leu Ser Ala Pro His Ser Arg Gin He Pro Ala Pro Gin Gly 20 25 30

Ala Vai Leu Vai Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn 35 40 45

Ser Phe Gly Leu Arg Phe 50

<210> 2 <211> 162 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 2 ggtacttctc tgtctccgcc gccggaatct tctggttctc gtcagcagcc gggtctgtct 60 gctccgcact ctcgtcagat cccggctccg cagggtgctg ttctggttca gcgtgaaaaa 120 gacctgccga actacaactg gaactctttc ggtctgcgtt tc 162

<210> 3 <211> 152 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 3

Met Tyr Leu Arg Phe Gly Vai Asp Vai Cys Ser Leu Ser Pro Trp Lys 5 10 15

Glu Thr Vai Asp Leu Pro Leu Pro Pro Arg Met lie Ser Met Ala Ser 20 25 30

Trp Gin Leu Leu Leu Leu Leu Cys Val Ala Thr Tyr Gly Glu Pro Leu 35 40 45

Ala Lys Val Ala Pro Gly Ser Thr Gly Gin Gin Ser Gly Pro Gin Glu 50 55 60

Leu Val Asn Ala Trp Glu Lys Glu Ser Arg Tyr Ala Glu Ser Lys Pro 65 70 75 80

Gly Ser Ala Gly Leu Arg Ala Arg Arg Ser Ser Pro Cys Pro Pro Val 85 90 95

Glu Gly Pro Ala Gly Arg Gin Arg Pro Leu Cys Ala Ser Arg Ser Arg 100 105 110

Leu He Pro Ala Pro Arg Gly Ala Vai Leu Vai Gin Arg Glu Lys Asp 115 120 125

Leu Ser Thr Tyr Asn Trp Asn Ser Phe Gly Leu Arg Tyr Gly Arg Arg 130 135 140

Gin Ala Ala Arg Ala Ala Arg Gly 145150

<210> 4 <211> 456 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 4 atgtatctga gatttggcgt tgatgtctgc agcctgagtc cctggaagga gactgtagac 60 ctgccccttc ctcccagaat gatctcaatg gcttcttggc agctgctgct tctcctctgt 120 gtcgccacct atggggagcc gctggcaaaa gtgaagcctg gatccacagg ccagcagtcc 180 ggaccccagg aactcgttaa tgcctgggaa aaggaatcgc ggtatgcaga gagcaagcct 240 gggtctgcag ggctgcgcgc tcgtaggtcg tcgccatgcc cgccggttga gggccccgcg 300 gggcgccagc ggcccctgtg tgcctcccgc agtcgcctga tccctgcgcc ccgcggagcg 360 gtgctggtgc agcgggagaa ggacctgtcc acctacaact ggaactcctt cggcctgcgc 420 tacggcagga ggcaggcggc gcgggcagca cggggc 456

<210> 5 <211> 156 <212> PRT <213> Mus musculus <4Ο0> 5

Met Tyr Leu Arg Phe Gly Val Asp Val Cys Ser Leu Ser Pro Trp Lys 5 10 15

Glu Thr Val Asp Leu Pro Leu Pro Pro Arg Met lie Ser Met Ala Ser 20 25 30

Trp Gin Leu Leu Leu Leu Leu Cys Val Ala Thr Tyr Gly Glu Pro Leu 35 40 45

Ala Lys Val Ala Pro Leu Val Lys Pro Gly Ser Thr Gly Gin Gin Ser 50 55 60

Gly Pro Gin Glu Leu Val Asn Ala Trp Glu Lys Glu Ser Arg Tyr Ala 65 70 75 80

Glu Ser Lys Pro Gly Ser Ala Gly Leu Arg Ala Arg Arg Ser Ser Pro 85 90 95

Cys Pro Pro Val Glu Gly Pro Ala Gly Arg Gin Arg Pro Leu Cys Ala 100 105 110

Ser Arg Ser Arg Leu lie Pro Ala Pro Arg Gly Ala Val Leu Val Gin 115 120 125

Arg Glu Lys Asp Leu Ser Thr Tyr Asn Trp Asn Ser Phe Gly Leu Arg 130 135 140

Tyr Gly Arg Arg Gin Ala Ala Arg Ala Ala Arg Gly 145150155

<210> 6 <211> 468 <212> ADN <213> Mus musculus <4Ο0> 6 atgtatctga gatttggcgt tgatgtctgc agcctgagtc cctggaagga gactgtagac 60 ctgccccttc ctcccagaat gatctcaatg gcttcttggc agctgctgct tctcctctgt 120 gtcgccacct atggggagcc gctggcaaaa gtggcacctt tggtgaagcc tggatccaca 180 ggccagcagt ccggacccca ggaactcgtt aatgcctggg aaaaggaatc gcggtatgca 240 gagagcaagc ctgggtctgc agggctgcgc gctcgtaggt cgtcgccatg cccgccggtt 300 gagggccccg cggggcgcca gcggcccctg tgtgcctccc gcagtcgcct gatccctgcg 360 ccccgcggag cggtgctggt gcagcgggag aaggacctgt ccacctacaa ctggaactcc 420 ttcggcctgc gctacggcag gaggcaggcg gcgcgggcag cacggggc 468 <210> 7 <211> 130 <212> PRT <213> Rattus sp. <400> 7

Met Thr Ser Leu Ala Ser Trp Gin Leu Leu Leu Leu Leu Cys Val Ala 5 10 15

Ser Phe Gly Glu Pro Leu Ala Lys Met Ala Pro Val Val Asn Pro Glu 20 25 30

Pro Thr Gly Gin Gin Ser Gly Pro Gin Glu Leu Val Asn Ala Trp Gin 35 40 45

Lys Gly Pro Arg Tyr Ala Glu Ser Lys Pro Gly Ala Ala Gly Leu Arg 50 55 60

Ala Arg Arg Thr Ser Pro Cys Pro Pro Val Glu Asn Pro Thr Gly His 65 70 75 80

Gin Arg Pro Pro Cys Ala Thr Arg Ser Arg Leu He Pro Ala Pro Arg 85 90 95

Gly Ser Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Met Ser Ala Tyr Asn Trp 100 105 110

Asn Ser Phe Gly Leu Arg Tyr Gly Arg Arg Gin Val Ala Arg Ala Ala 115 120 125

Arg Gly 130 <210> 8 <211> 390 <212> ADN <213> Rattus sp. <400> 8 atgacctcgc tggcttcttg gcagctgctg cttctcctct gtgtggcctc ttttggggag 60 ccactggcaa aaatggcacc tgtggtgaac cctgaaccca caggccaaca gtccggaccc 120 caggaactcg ttaatgcctg gcaaaagggc ccgcggtatg cagagagcaa gcctggggct 180 gcaggactgc gcgctcgccg aacatcgcca tgcccgccgg tggagaaccc cacggggcac 240 cagcggcccc cgtgtgccac ccgcagtcgc ctgatccctg cgccccgcgg atcggtgctg 300 gtgcagcgcg agaaggacat gtcagcctac aactggaact cctttggcct gcgctacggc 360 aggaggcagg tggcgcgggc ggcacggggc390

<210> 9 <211> 398 <212> PRT <213> Homo sapiens <4Ο0> 9

Met His Thr Val Ala Thr Ser Gly Pro Asn Ala Ser Trp Gly Ala Pro 5 10 15

Ala Asn Ala Ser Gly Cys Pro Gly Cys Gly Ala Asn Ala Ser Asp Gly 20 25 30

Pro Val Pro Ser Pro Arg Ala Val Asp Ala Trp Leu Val Pro Leu Phe 35 40 45

Phe Ala Ala Leu Met Leu Leu Gly Leu Val Gly Asn Ser Leu Val He 50 55 60

Tyr Val lie Cys Arg His Lys Pro Met Arg Thr Val Thr Asn Phe Tyr 65 70 75 80

He Ala Asn Leu Ala Ala Thr Asp Val Thr Phe Leu Leu Cys Cys Val 85 90 95

Pro Phe Thr Ala Leu Leu Tyr Pro Leu Pro Gly Trp Val Leu Gly Asp 100 105 110

Phe Met Cys Lys Phe Val Asn Tyr lie Gin Gin Val Ser Val Gin Ala 115 120 125

Thr Cys Ala Thr Leu Thr Ala Met Ser Val Asp Arg Trp Tyr Val Thr 130 135 140

Vai Phe Pro Leu Arg Ala Leu His Arg Arg Thr Pro Arg Leu Ala Leu 145 150 155 160

Ala Val Ser Leu Ser lie Trp Val Gly Ser Ala Ala Val Ser Ala Pro 165 170 175

Val Leu Ala Leu His Arg Leu Ser Pro Gly Pro Arg Ala Tyr Cys Ser 180 185 190

Glu Ala Phe Pro Ser Arg Ala Leu Glu Arg Ala Phe Ala Leu Tyr Asn 195 200 205

Leu Leu Ala Leu Tyr Leu Leu Pro Leu Leu Ala Thr Cys Ala Cys Tyr 210 215 220

Ala Ala Met Leu Arg His Leu Gly Arg Val Ala Val Arg Pro Ala Pro 225 230 235 240

Ala Asp Ser Ala Leu Gin Gly Gin Val Leu Ala Glu Arg Ala Gly Ala 245 250 255

Val Arg Ala Lys Val Ser Arg Leu Val Ala Ala Val Val Leu Leu Phe 260 265 270

Ala Ala Cys Trp Gly Pro lie Gin Leu Phe Leu Val Leu Gin Ala Leu 275 280 285

Gly Pro Ala Gly Ser Trp His Pro Arg Ser Tyr Ala Ala Tyr Ala Leu 290 295 300

Lys Thr Trp Ala His Cys Met Ser Tyr Ser Asn Ser Ala Leu Asn Pro 305 310 315 320

Leu Leu Tyr Ala Phe Leu Gly Ser His Phe Arg Gin Ala Phe Arg Arg 325 330 335

Val Cys Pro Cys Ala Pro Arg Arg Pro Arg Arg Pro Arg Arg Pro Gly 340345350 Pro Ser Asp Pro Ala Ala Pro His Ala Glu Leu His Arg Leu Gly Ser 355 360 365

His Pro Ala Pro Ala Arg Ala Gin Lys Pro Gly Ser Ser Gly Leu Ala 370 375 380

Ala Arg Gly Leu Cys Val Leu Gly Glu Asp Asn Ala Pro Leu 385 390 395

<210> 10 <211> 1194 <212> ADN <213> Homo sapiens <4 0 0> 10 atgcacaccg tggctacgtc cggacccaac gcgtcctggg gggcaccggc caacgcctcc 60 ggctgcccgg gctgtggcgc caacgcctcg gacggcccag tcccttcgcc gcgggccgtg 120 gacgcctggc tcgtgccgct cttcttcgcg gcgctgatgc tgctgggcct ggtggggaac 180 tcgctggtca tctacgtcat ctgccgccac aagccgatgc ggaccgtgac caacttctac 240 atcgccaacc tggcggccac ggacgtgacc ttcctcctgt gctgcgtccc cttcacggcc 300 ctgctgtacc cgctgcccgg ctgggtgctg ggcgacttca tgtgcaagtt cgtcaactac 360 atccagcagg tctcggtgca ggccacgtgt gccactctga ccgccatgag tgtggaccgc 420 tggtacgtga cggtgttccc gttgcgcgcc ctgcaccgcc gcacgccccg cctggcgctg 480 gctgtcagcc tcagcatctg ggtaggctct gcggcggtgt ctgcgccggt gctcgccctg 540 caccgcctgt cacccgggcc gcgcgcctac tgcagtgagg ccttccccag ccgcgccctg 600 gagcgcgcct tcgcactgta caacctgctg gcgctgtacc tgctgccgct gctcgccacc 660 tgcgcctgct atgcggccat gctgcgccac ctgggccggg tcgccgtgcg ccccgcgccc 720 gccgatagcg ccctgcaggg gcaggtgctg gcagagcgcg caggcgccgt gcgggccaag 780 gtctcgcggc tggtggcggc cgtggtcctg ctcttcgccg cctgctgggg ccccatccag 840 ctgttcctgg tgctgcaggc gctgggcccc gcgggctcct ggcacccacg cagctacgcc 900 gcctacgcgc ttaagacctg ggctcactgc atgtcctaca gcaactccgc gctgaacccg 960 ctgctctacg ccttcctggg ctcgcacttc cgacaggcct tccgccgcgt ctgcccctgc 1020 gcgccgcgcc gcccccgccg cccccgccgg cccggaccct cggaccccgc agccccacac 1080 gcggagctgc accgcctggg gtcccacccg gcccccgcca gggcgcagaa gccagggagc 1140 agtgggctgg ccgcgcgcgg gctgtgcgtc ctgggggagg acaacgcccc tctc 1194 <210> 11 <211> 396 <212> PRT <213> Rattus sp. <4 0 0> 11

Met Ala Ala Glu Ala Thr Leu Gly Pro Asn Val Ser Trp Trp Ala Pro 5 10 15

Ser Asn Ala Ser Gly Cys Pro Gly Cys Gly Val Asn Ala Ser Asp Gly 20 25 30

Pro Gly Ser Ala Pro Arg Pro Leu Asp Ala Trp Leu Val Pro Leu Phe 35 40 45

Phe Ala Ala Leu Met Leu Leu Gly Leu Val Gly Asn Ser Leu Val lie 50 55 60

Phe Val lie Cys Arg His Lys His Met Gin Thr Val Thr Asn Phe Tyr 65 70 75 80 lie Ala Asn Leu Ala Ala Thr Asp Val Thr Phe Leu Leu Cys Cys Val 85 90 95

Pro Phe Thr Ala Leu Leu Tyr Pro Leu Pro Thr Trp Val Leu Gly Asp 100 105 110

Phe Met Cys Lys Phe Val Asn Tyr lie Gin Gin Val Ser Val Gin Ala 115 120 125

Thr Cys Ala Thr Leu Thr Ala Met Ser Val Asp Arg Trp Tyr Val Thr 130 135 140

Val Phe Pro Leu Arg Ala Leu His Arg Arg Thr Pro Arg Leu Ala Leu 145 150 155 160

Thr Val Ser Leu Ser lie Trp Val Gly Ser Ala Ala Val Ser Ala Pro 165 170 175

Vai Leu Ala Leu His Arg Leu Ser Pro Gly Pro His Thr Tyr Cys Ser 180 185 190

Glu Ala Phe Pro Ser Arg Ala Leu Glu Arg Ala Phe Ala Leu Tyr Asn 195 200 205

Leu Leu Ala Leu Tyr Leu Leu Pro Leu Leu Ala Thr Cys Ala Cys Tyr 210 215 220

Gly Ala Met Leu Arg His Leu Gly Arg Ala Ala Val Arg Pro Ala Pro 225 230 235 240

Thr Asp Gly Ala Leu Gin Gly Gin Leu Leu Ala Gin Arg Ala Gly Ala 245 250 255

Val Arg Thr Lys Val Ser Arg Leu Val Ala Ala Val Val Leu Leu Phe 260 265 270

Ala Ala Cys Trp Gly Pro lie Gin Leu Phe Leu Val Leu Gin Ala Leu 275 280 285

Gly Pro.Ser Gly Ala Trp His Pro Arg Ser Tyr Ala Ala Tyr Ala Leu 290 295 300

Lys He Trp Ala His Cys Met Ser Tyr Ser Asn Ser Ala Leu Asn Pro 305 310 315 320

Leu Leu Tyr Ala Phe Leu Gly Ser His Phe Arg Gin Ala Phe Cys Arg 325 330 335

Val Cys Pro Cys Gly Pro Gin Arg Gin Arg Arg Pro His Ala Ser Ala 340 345 350

His Ser Asp Arg Ala Ala Pro His Ser Val Pro His Ser Arg Ala Ala 355 360 365

His Pro Val Arg Val Arg Thr Pro Glu Pro Gly Asn Pro Val Val Arg 370 375 380

Ser Pro Ser Val Gin Asp Glu His Thr Ala Pro Leu 385390395 <210> 12 <211> 1188 <212> ADN <213> Rattus sp. <4 0 0> 12 atggccgcag aggcgacgtt gggtccgaac gtgagctggt gggctccgtc caacgcttcg 60 ggatgcccgg gctgcggtgt caatgcctcg gatggcccag gctccgcgcc aaggcccctg 120 gatgcctggc tggtgcccct gtttttcgct gccctaatgt tgctggggct agtcgggaac 180 tcactggtca tcttcgttat ctgccgccac aagcacatgc agaccgtcac caatttctac 240 atcgctaacc tggcggccac agatgtcact ttccttctgt gctgcgtacc cttcaccgcg 300 ctcctctatc cgctgcccac ctgggtgctg ggagacttca tgtgcaaatt cgtcaactac 360 atccagcagg tctcggtgca agccacatgt gccactttga cagccatgag tgtggaccgc 420 tggtacgtga ctgtgttccc gctgcgtgca cttcaccgcc gcactccgcg cctggccctg 480 actgtcagcc ttagcatctg ggtgggttcc gcagctgttt ccgccccggt gctggctctg 540 caccgcctgt cgcccgggcc tcacacctac tgcagtgagg cgtttcccag ccgtgccctg 600 gagcgcgctt tcgcgctcta caacctgctg gccctatacc tgctgccgct gctcgccacc 660 tgcgcctgct acggtgccat gctgcgccac ctgggccgcg ccgctgtacg ccccgcaccc 720 actgatggcg ccctgcaggg gcagctgcta gcacagcgcg ctggagcagt gcgcaccaag 780 gtctcccggc tggtggccgc tgtcgtcctg ctcttcgccg cctgctgggg cccgatccag 840 ctgttcctgg tgcttcaagc cctgggcccc tcgggggcct ggcaccctcg aagctatgcc 900 gcctacgcgc tcaagatctg ggctcactgc atgtcctaca gcaattctgc gctcaacccg 960 ctgctctatg ccttcctggg ttcccacttc agacaggcct tctgccgcgt gtgcccctgc 1020 ggcccgcaac gccagcgtcg gccccacgcg tcagcgcact cggaccgagc cgcaccccat 1080 agtgtgccgc acagccgggc tgcgcaccct gtccgggtca ggacccccga gcctgggaac 1140 cctgtggtgc gctcgccctc tgttcaggat gaacacactg ccccactc 1188

<210> 13 <211> 396 <212> PRT <213> Mus musculus <4 Ο 0> 13

Met Ala Thr Glu Ala Thr Leu Ala Pro Asn Val Thr Trp Trp Ala Pro 15 10 15

Ser Asn Ala Ser Gly Cys Pro Gly Cys Gly Val Asn Ala Ser Asp Asp 20 25 30

Pro Gly Ser Ala Pro Arg Pro Leu Asp Ala Trp Leu Val Pro Leu Phe 35 40 45

Phe Ala Thr Leu Met Leu Leu Gly Leu Val Gly Asn Ser Leu Val lie 50 55 60

Tyr Val lie Cys Arg His Lys His Met Gin Thr Val Thr Asn Phe Tyr 65 70 75 80 lie Ala Asn Leu Ala Ala Thr Asp Val Thr Phe Leu Leu Cys Cys Val 85 90 95

Pro Phe Thr Ala Leu Leu Tyr Pro Leu Pro Ala Trp Val Leu Gly Asp 100 105 110

Phe Met Cys Lys Phe Val Asn Tyr lie Gin Gin Val Ser Val Gin Ala 115 120 125

Thr Cys Ala Thr Leu Thr Ala Met Ser Val Asp Arg Trp Tyr Val Thr 130 135 140

Val Phe Pro Leu Arg Ala Leu His Arg Arg Thr Pro Arg Leu Ala Leu 145 150 155 160

Ala Val Ser Leu Ser lie Trp Val Gly Ser Ala Ala Val Ser Ala Pro 165 170 175

Val Leu Ala Leu His Arg Leu Ser Pro Gly Pro Arg Thr Tyr Cys Ser 180 185 190

Glu Ala Phe Pro Ser Arg Ala Leu Glu Arg Ala Phe Ala Leu Tyr Asn 195 200 205

Leu Leu Ala Leu Tyr Leu Leu Pro Leu Leu Ala Thr Cys Ala Cys Tyr 210 215 220

Gly Ala Met Leu Arg His Leu Gly Arg Ala Ala Val Arg Pro Ala Pro 225 230 235 240

Thr Asp Gly Ala Leu Gin Gly Gin Leu Leu Ala Gin Arg Ala Gly Ala 245 250 255

Val Arg Thr Lys Val Ser Arg Leu Val Ala Ala Val Val Leu Leu Phe 260 265 270

Ala Ala Cys Trp Gly Pro lie Gin Leu Phe Leu Val Leu Gin Ala Leu 275 280 285

Gly Pro Ser Gly Ala Trp His Pro Arg Ser Tyr Ala Ala Tyr Ala Val 290 295 300

Lys lie Trp Ala His Cys Met Ser Tyr Ser Asn Ser Ala Leu Asn Pro 305 310 315 320

Leu Leu Tyr Ala Phe Leu Gly Ser His Phe Arg Gin Ala Phe Cys Arg 325 330 335

Val Cys Pro Cys Cys Arg Gin Arg Gin Arg Arg Pro His Thr Ser Ala 340 345 350

His Ser Asp Arg Ala Ala Thr His Thr Val Pro His Ser Arg Ala Ala 355 360 365

His Pro Val Arg lie Arg Ser Pro Glu Pro Gly Asn Pro Val Val Arg 370 375 380

Ser Pro Cys Ala Gin Ser Glu Arg Thr Ala Ser Leu 385390395

<210> 14 <211> 1188 <212> ADN <213> Mus musculus <4 Ο 0> 14 atggccaccg aggcgacatt ggctcccaat gtgacctggt gggctccgtc caacgcttca 60 ggatgcccag gctgcggtgt caacgcctcg gatgacccag gctctgcgcc aaggcccctg 120 gatgcctggc tggttcccct gtttttcgct acactcatgt tgcttgggct ggtcggaaac 180 tcattggtca tctacgttat ctgccgccac aagcacatgc agacagttac caacttctac 240 atcgctaacc tggctgccac agacgtcact ttcctactgt gctgcgtgcc cttcaccgca 300 ctcctctacc cgctgcccgc ctgggtgctg ggagacttca tgtgcaaatt cgtcaactac 360 atccagcagg tctcggtgca agccacatgt gccactctga cggccatgag tgtggaccgc 420 tggtatgtga ctgtgttccc gctgcgtgca cttcaccgcc gcactccgcg cctggccctg 480 gctgtcagcc tcagcatctg ggtggggtca gcagctgtgt ccgccccggt gctggccctg 540 caccgcctgt cgccagggcc tcgcacctac tgcagcgagg cgtttcccag ccgcgccctg 600 gagcgcgcct tcgcgctcta caacctgctg gctctatatc tgctgccgct gctcgccacc 660 tgcgcctgct acggcgccat gctgcgccac ctgggccgtg cggctgtacg ccccgcaccc 720 actgacggcg ccctgcaggg acagctgcta gcacagcgcg ccggagcagt gcgcaccaag 780 gtctcccggc tggtggccgc tgtcgtcctg ctcttcgccg cctgctgggg cccgatccag 840 ctgttcctgg tgcttcaagc cctgggcccc tcgggggcct ggcaccctcg aagctatgcc 900 gcctacgcgg tcaagatctg ggctcactgc atgtcctaca gcaactcggc gctcaatccg 960 ctgctctatg ccttcctggg ttcacacttc agacaggcct tctgccgcgt gtgcccctgc 1020 tgccggcaac gccagcgccg gccccacacg tcagcgcact cggaccgagc tgcaactcac 1080 actgtgccgc acagccgtgc tgcgcaccct gtgcggatca ggagcccgga gcctgggaac 1140 cctgtggtgc gctcgccctg cgctcagagt gaacgcactg cctcactc 1188 <210> 15 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> a extremidade C-terminal do polipéptido é a forma amida (-CONH2) <4 Ο 0> 15

Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn Ser Phe Gly Leu Arg Phe 15 10 15 <210> 16 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> a extremidade C-terminal do polipéptido é a forma amida (-CONH2) <4 0 0> 16

Tyr Asn Trp Asn Ser Phe Gly Leu Arg Phe 1 5 10 <210> 17 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> a extremidade C-terminal do polipéptido é a forma amida (-CONH2) <4 0 0> 17

Asn Trp Asn Ser Phe Gly Leu Arg Phe 1 5 9 <210> 18 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> a extremidade C-terminal do polipéptido é a forma amida (-C0NH2) <4 0 0> 18

Trp Asn Ser Phe Gly Leu Arg Phe 1 5 8

<210> 19 <211> 45 <212> ADN <213> Homo sapiens <4 0 0> 19 aaggacctgc cgaactacaa ctggaactcc ttcggcctgc gcttc 45

<210> 20 <211> 30 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 20 tacaactgga actccttcgg cctgcgcttc 30 <210> 21 <211> 27

<212> ADN <213> Homo sapiens <400> 21 aactggaact ccttcggcct gcgcttc 27

<210> 22 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 22 tggaactcct tcggcctgcg cttc 24

Lisboa, 4 de junho de 2015

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Composto selecionado de: Ac-D-Tyr-Hyp-Alb-Thr-Cha-Gly¥( (E)CH=CH)Leu-Arg(Me)-Trp-NH2, Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Cha-Gly¥( (E)CH=CH)Leu-Arg-Trp-NH2 e Ac-D-Tyr-Hyp-Alb-Thr-Cha-Gly¥((E)CH=CH)Leu-Arg-Trp-NH2 ou um seu sal, em que Alb significa Albiziína ácido 2-amino-3-ureidopropiónico e Gly¥((E)CH=CH)Leu significa que o -CONH- entre a Gly e a Leu está substituído por alceno de tipo (E).
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, o qual é Ac-D-Tyr-Hyp-Alb-Thr-Cha-Gly¥((E)CH=CH)Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 ou um seu sal.
3. Composto de acordo com a reivindicação 1, o qual é Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Cha-Gly¥((E)CH=CH)Leu-Arg-Trp-NH2 ou um seu sal.
4. Composto de acordo com a reivindicação 1, o qual é Ac-D-Tyr-Hyp-Alb-Thr-Cha-Gly¥((E)CH=CH)Leu-Arg-Trp-NH2 ou um seu sal.
5. Medicamento compreendendo o composto de acordo com a reivindicação 1, ou um seu sal.
6. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou um seu sal para utilização em terapia.
7. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou um seu sa, para utilização como um agente para suprimir metástase de cancros ou como um agente para suprimir o crescimento de cancros.
8. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou um seu sal para utilização como um agente para prevenir/tratar cancro.
9. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou um seu sal para utilização como um agente para a regulação negativa da hormona gonadotrófica ou das hormonas sexuais.
10. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou um seu sal para utilização como um agente para prevenir/tratar cancro hormonodependente. Lisboa, 4 de Junho de 2015