PT1813272E - Utilização veterinária de um derivado da pleuromutilina - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "UTILIZAÇÃO VETERINÁRIA DE UM DERIVADO DA PLEUROMUTILINA" A invenção refere-se a derivados da pleuromutilina de fórmula I.

Diz respeito à utilização veterinária do composto de fórmula I: o 0

isto é, 14-0-[1-[(R)-2-amino-3-metilbutirilamino]-2-metil-propan-2-iltioacetil]mutilina, na forma de base livre ou de sal veterinariamente aceitável, na terapia de uma doença veterinária cuja expressão é intensificada por aumento da densidade da criação, daqui em diante brevemente denominada "a utilização da invenção". 0 composto de fórmula I na forma de base livre ou de sal veterinariamente aceitável (Econor®) é daqui em diante brevemente denominado "o agente da invenção". Preferivelmente está na sua forma de sal, especialmente de sal cloridrato. Nessa forma é conhecido pela designação genérica cloridrato de valnemulina. 0 termo "terapia" deve ser entendido como aplicand-seo a tratamento profiláctico, bem como curativo. 2 0 composto de fórmula I, na forma de base livre ou em forma de sal quimioterapêutica ou veterinariamente aceitável, é conhecido, por exemplo, de EP 153 277 e seus equivalentes, por exemplo, USP 4 675 330, especificamente como Exemplo 12 ai apresentado.

Dai é adicionalmente conhecida: uma actividade inibidora contra várias bactérias in vitro, a concentrações de cerca de 0,008 até 25 pg/mL; uma actividade inibidora in vitro contra micoplasmas e clamidia, geralmente a concentrações de cerca de 0,008 até 0,5 pg/mL; uma actividade inibidora in vivo em ratinhos, utilizando várias estirpes bacterianas, e em galinhas, utilizando estirpes de micoplasma, a uma dosagem de cerca de 12 até 50 mg/kg de peso do corpo; uma actividade antiparasitária, em particular in vivo contra coccidea em aves domésticas, a dosagens de 20-150 mg/kg de ração, e actividade promotora do crescimento em galinhas e porcos in vivo, a uma dosagem de 10-50 mg/kg de ração, deste modo tornando o composto útil como antibiótico com actividade antibacteriana em geral, e como agente veterinário em particular para o tratamento quimioterapêutico de coccidioses em aves domésticas, bem como promotor do crescimento em galinhas e porcos. McORIST, 1995, "Antimicrobial susceptibility of ileal symbiont intracellularis isolated from pigs with proliferative enteropathy". J. Clin. Mícrobíol. _33_: 1314-1317, descreve um teste in vitro onde foi avaliada a susceptibilidade de Simbionte Ileal (= Lawsonia) intracellularis a vários 3 agentes antimicrobianos. 0 derivado da pleuromutilina tiamulina exibiu actividade moderada.

Foi agora descoberto, surpreendentemente, que o agente da invenção é particularmente eficaz na terapia da doença veterinária cuja expressão é intensificada por aumento da densidade da criação, ileite em suinos (enteropatia proliferativa porcina; adenomatose intestinal porcina) associada a infecção por Lawsonia intracellularis.

Além disso, ainda mais surpreendente, foi descoberto que a indução de resistência ao fármaco é extremamente baixa.

Assim, a invenção diz respeito à utilização veterinária como definida acima. 0 animal que sofre de doenças veterinárias cuja expressão é intensificada por aumento da densidade da criação pode, por exemplo, não ter sido ainda tratado de modo antibacteriano com o agente da invenção, ou não estar ainda a receber o agente da invenção para promoção do crescimento.

Ileite em suínos associada a infecção por Lawsonia intracellularis A infecção por Lawsonia intracellularis pode ser diagnosticada de modo convencional, por exemplo, como descrito em manuais veterinários, tais como Taylor, D.J., em "Pig Diseases", 6a Edição (1995), Publ. D.J. Taylor, Glasgow, R.U. nas páginas 154-157. A actividade benéfica do agente da invenção nesta utilização é determinada, por exemplo, do modo seguinte. 1. Actividade in vitro 4

Segue-se em geral o método de Lawson, G.H.K. et al., J. Clin. Microbiol. 31 (1993) 1136-1142, com algumas modificações (os métodos comuns de discos de Kirby-Bauer não são aplicáveis a bactérias intracelulares): Células: Monocamadas de culturas de enterócitos de rato IEC-18 (ATCC CRL 1589) são estabelecidas e mantidas por métodos comuns de cultura de células. Monocamadas de células em divisão (aproximadamente 30% de confluência) com um dia de idade são preparadas para infecção no dia 0, em lamelas de vidro em pequenos frascos de cultura (Tracs).

Inoculações: Lotes de três estirpes de Lawsonia intracellularis são utilizados como inoculações. Estes são derivados de porcos afectados com enteropatia proliferativa, das formas enteropatia hemorrágica proliferativa (PHE) e adenomatose intestinal porcina (PIA), preparados a partir de intestinos de porco, e são submetidos a passagem em culturas de células como descrito na referência Lawson acima. As duas estirpes PHE foram parcialmente testadas quanto a patogenicidade em porcos como descrito em McOrist, S. et al., Infect. Immun. 61_ (1993) 4286-4292. Os lotes de inoculações são recolhidos após várias passagens celulares e são armazenados congelados a -70°C em frascos de 1 mL. Ensaios preliminares estabeleceram diluições apropriadas de frascos descongelados que originam infecções celulares facilmente reconhecíveis em ensaios de 5 dias.

Preparam-se antibióticos na forma de soluções mãe lOOx para cada utilização. A actividade de cada lote de antibiótico é 5 confirmada por métodos comuns de discos de Kirby-Bauer com uma estirpe laboratorial de Escherichia coli.

Infecções: No dia 0, um frasco de cada estirpe é descongelado, diluído 1/8 até 1/32 com meio de cultura, para utilização em quatro grupos 1 até 4.

Para o grupo 4 (tratamento contínuo), esta inoculação é inicialmente incubada, durante uma hora a 37°C, em meio de cultura contendo o antibiótico a várias concentrações, antes da adição a células.

Para o grupo 3 (actividade extracelular), esta inoculação é preparada em meio de cultura, contendo o antibiótico a várias concentrações adicionado imediatamente antes do instante da adição a células.

Para os grupos 1 (controlo) e 2 (actividade intracelular), as inoculações são preparadas em meio de cultura sem antibióticos e são adicionadas a células. Frascos de cultura (Tracs) com células com inoculações adicionadas (+/antibióticos) , num total de 0,5 mL de meio, são colocados em jarros de aço, evacuados para 40% de atmosfera (8% de O2), deixados durante 2 minutos, novamente cheios com hidrogénio e, por fim, 10% de CO2. Os Tracs são então removidos destes jarros e são colocados numa incubadora ajustada para proporcionar uma atmosfera humidificada de 8% de O2, 8,8% de CO2 e o restante azoto, a 37°C.

Nos dias 1 e 2, todos os frascos são removidos e nutridos de novo com meio fresco, contendo antibióticos, grupos 2 e 4, ou não, grupos 1 e 3, e são colocados de novo na incubadora. No dia 5, todas as lamelas são removidas e 6 coradas quanto a Lawsonia intracellularis por coloração indirecta com imunoperoxidase incorporando um anticorpo monoclonal específico. 0 número de células em cada lamela fortemente infectadas com Lawsonia intracellularis (> 30 por célula, célula fortemente infectada = CFI) é utilizado como principal medida de infecção. Também são registados o número de focos de CFI e observações gerais das células. As CFI no controlo (grupo 1), ensaio com antibiótico com actividade intracelular (grupo 2), ensaio com antibiótico com actividade extracelular (grupo 3) e ensaio de tratamento contínuo (grupo 4) são comparadas em ensaios em triplicado, até 3 estirpes cada. Alguns ensaios são repetidos para várias potências das inoculações. Calculam-se razões percentuais após derivação da CFI média dos controlos relevantes para o grupo de teste. A CFI de controlo média é o número total de CFI em Tracs de controlo dividido pelo número de Tracs de controlo infectados. Depois calcula-se a razão percentual de Tracs de teste dividindo o seu valor CFI pelo CFI de controlo médio, multiplicado por 100 para se obter uma percentagem. Isto é, os Tracs de teste onde os antibióticos não exercem nenhum efeito têm uma razão percentual perto de 100, e quando os antibióticos inibem completamente o crescimento a razão é 0.

Os resultados obtidos com cloridrato de valnemulina estão apresentados na Tabela 1, que mostra a percentagem de células que permanecem sem infecção após o tratamento.

Tabela 1

Razões percentuais de infecção com Lawsonia intracellularis de culturas de células com valnemulina adicionada 7

Concentração de Grupo de estirpe Grupo de estirpe valnemulina (cl) pg/mL 2 3 4 2 3 4 8 0 0 0 0, 86 0,2 0,5 0 0 0 0 0 1,4 0 0 0 0 1,4 0,2 4 0 0 0,8 0 0,83 2,5 1,7 1,7 2,5 2 0 0 0 0 0 0 0 - 28 cl = cloridrato

Estes resultados indicam que a concentração mínima de cloridrato de valnemulina para causar inibição significativa do crescimento de Lawsonia intracellularis (< 1% de crescimento) é < 2 pg/mL. 2. Estudo de provocação

Trinta e cinco porcos no desmame são provocados no mesmo dia com uma inoculação virulenta de Lawsonia intracellularis (estirpe LR189/5/83), um isolado do agente causador de enteropatia proliferativa porcina obtido por cultura na linha de enterócitos de rato IEC-18 (ATCC CRL 1589), como descrito em Lawson et al., J. Clin. Microbíol. 31 (1993) 1136-1142. Sete porcos de controlo são doseados com uma solução tampão. Sete dos 21 porcos provocados são deixados sem tratamento. Estes sete porcos exibiram ganhos de peso reduzidos e todos desenvolveram lesões de enteropatia proliferativa, detectadas em secções dos intestinos recolhidas na necropsia três semanas após a provocação. Seis destes 7 porcos exibiram lesões amplamente visíveis, três tinham diarreia ligeira a moderada duas semanas após a provocação. Para testar uma estratégia de dosagem de "prevenção", dois outros grupos de porcos provocados são doseados oralmente com cloridrato de valnemulina, às doses de 25 ppm e 75 ppm, respectivamente (isto é, 1,25 mg/kg e 3,7 mg/kg) , via uma pré-mistura administrada dois dias antes da provocação, continuando até à eutanásia. Para testar uma estratégia de "tratamento", dois outros grupos de porcos provocados são doseados oralmente com valnemulina, 25 ppm e 75 ppm, via uma pré-mistura administrada sete dias após a provocação, continuando até à eutanásia. Não foram visíveis lesões de enteropatia proliferativa em secções dos intestinos recolhidas na necropsia em 3 de 7 porcos no grupo de prevenção e em 5 de 7 porcos no grupo de tratamento. Os porcos de controlo permaneceram normais. Em consequência, a valnemulina preveniu ou tratou a doença numa grande proporção de porcos provocados, mesmo às baixas doses actuais de medicação recebidas.

Em consequência, o agente da invenção é útil na terapia de ileíte em suínos associada a infecção por Lawsonia intracellularis. Para esta utilização, a dosagem eficaz irá obviamente variar, dependendo do sal particular empregue, o modo de administração, a estatura e idade do animal e o efeito desejado; por exemplo, para tratamento profiláctico serão administradas doses relativamente baixas durante um longo período de tempo. No entanto, em geral, obtêm-se resultados satisfatórios quando o agente é administrado numa dosagem diária desde cerca de 1,5 mg/kg até cerca de 9 6,5 mg/kg de peso do corpo do animal, adequadamente administrado ad libitum em água ou ração, ou em doses divididas duas até quatro vezes por dia, ou em forma de libertação prolongada. Para a maior parte dos animais, a dosagem diária total vai desde cerca de 10 mg até cerca de 1000 mg, preferivelmente desde cerca de 15 mg até cerca de 500 mg, administrados uma ou duas vezes por dia.

Doses preferidas em água potável vão desde 0,001 até 0,05% peso por volume, particularmente 0,001 até 0,005%, e na ração desde 20 até 400 g/tonelada métrica, particularmente 20 até 200 g/tonelada métrica.

Para esta utilização, o composto pode ser utilizado na forma de base livre ou na forma de sal veterinariamente aceitável, por exemplo, sal quaternário ou, especialmente, forma de sal de adição de ácido. Essas formas de sal exibem a mesma ordem de actividade da forma de base livre. Exemplos de sais de adição de ácidos adequados são o hidrogenofumarato, fumarato, naftalin-1,5-sulfonato e especialmente o cloridrato. O agente da invenção pode ser administrado oral, local ou parentericamente, misturado com diluentes e transportadores convencionais quimiterapeuticamente aceitáveis e, opcionalmente, outros excipientes, e misturado nessas formas como comprimidos, cápsulas ou preparações injectáveis. Também forma um excelente aditivo para misturas de rações (na forma de pré-mistura) ou para áqua potável.

Transportadores preferidos veterinariamente aceitáveis incluem, por exemplo, excipientes farmacêuticos 10 habitualmente utilizados, como açúcar, amido de milho, lactose, celulose, bem como sistemas transportadores em grão e subprodutos em grão, como casca de arroz triturada, farelo de trigo e farinha de soja; além disso, diluentes sólidos, como pedra de cal triturada, sulfato de sódio, carbonato de cálcio e caulino, ou substâncias liquidas, como óleos (óleos vegetais ou óleo mineral) veterinariamente aceitáveis, propilenoglicol e polietilenoglicol. Adequadamente, estas formulações são administradas ao animal oralmente, de preferência misturadas em rações na forma de farinha forrageira medicada ou grânulos medicados.

Para aplicações em água potável são utilizadas soluções em água com ou sem solventes, como etanol, propilenoglicol, polietilenoglicol, surfactantes líquidos aprovados e sorbitol.

Por exemplo, para injecção intramuscular, a formulação é tipicamente preparada na forma de uma solução em água, que pode conter solventes, como etanol ou propilenoglicol, ou num óleo veterinariamente aceitável. Exemplos de óleos aceitáveis são óleo de sésamo, triglicéridos de cadeia média (por exemplo, Miglyol), miristato de isopropilo e oleato de etilo. A formulação pode conter conservantes, tampões e outros excipientes comuns.

Formulações veterinárias para utilização na presente invenção podem ser preparadas por mistura dos ingredientes nas proporções requeridas. A formulação é então embalada num recipiente apropriado pronto para administração. O Exemplo seguinte ilustra a invenção: 11

Ingrediente Quantidade (g/100 mL) cloridrato de valnemulina 10,0 fenol 0,5 Miglyol 840 até 100 mL 0 agente da invenção é bem tolerado. A toxicidade aguda no rato do composto de fórmula I na forma do sal cloridrato foi determinada com doses únicas de 1000 mg/kg e 2000 mg/kg administradas oralmente a 5 ratos machos e 5 fêmeas por grupo de dose. As mortes ocorreram em 1-8 dias. O valor LD50 obtido é > 1000 mg/kg p.o.

Lisboa, 19 de Abril de 2011

Claims (2)

12 REIVINDICAÇÕES 1. Utilização do composto de fórmula I:

na forma de base livre ou sal veterinariamente aceitável, para a preparação de um medicamento destinado à terapia de uma doença veterinária cuja expressão é intensificada por aumento da densidade da criação, caracterizada por a doença veterinária ser ileite em suinos associada a infecção com Lawsonia intracellularis.

2. Utilização de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o composto de fórmula I estar na forma do sal de adição de ácido cloridrato. Lisboa, 19 de Abril de 2011