PT1578933E - Composições e métodos para inibição si-arn de angiogénese - Google Patents

Composições e métodos para inibição si-arn de angiogénese Download PDF

Info

Publication number
PT1578933E
PT1578933E PT03765708T PT03765708T PT1578933E PT 1578933 E PT1578933 E PT 1578933E PT 03765708 T PT03765708 T PT 03765708T PT 03765708 T PT03765708 T PT 03765708T PT 1578933 E PT1578933 E PT 1578933E
Authority
PT
Portugal
Prior art keywords
sirna
dna
artificial sequence
small interfering
ribonucleic acid
Prior art date
Application number
PT03765708T
Other languages
English (en)
Inventor
Michael J Tolentino
Samuel Jotham Reich
Original Assignee
Univ Pennsylvania
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univ Pennsylvania filed Critical Univ Pennsylvania
Publication of PT1578933E publication Critical patent/PT1578933E/pt

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1136—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against growth factors, growth regulators, cytokines, lymphokines or hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1138—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against receptors or cell surface proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C12N2310/111—Antisense spanning the whole gene, or a large part of it
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/50—Physical structure
    • C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/50—Physical structure
    • C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
    • C12N2310/531—Stem-loop; Hairpin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/50—Methods for regulating/modulating their activity
    • C12N2320/51—Methods for regulating/modulating their activity modulating the chemical stability, e.g. nuclease-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)

Description

Descrição
COMPOSIÇÕES E MÉTODOS PARA INIBIÇÃO SI-ARN DE ANGIOGÉNESE
Referência Cruzada com Aplicação Relacionada
Esta aplicação reivindica o beneficio do pedido de patente provisória U.S. n° 60/398, 417, registada em 24 de Julho de 2002 e o pedido de patente não provisória U.S. n° 10/294,228, registada em 14 Novembro de 2002.
Referência à Bolsa do Governo A invenção aqui descrita foi apoiada, em parte, pela bolsa NIH/NEI n° R01-EY10820, EY-13410 e EY12156. O Governo dos E.U. tem alguns direitos nesta invenção.
Campo da Invenção A invenção relaciona-se com a regulação de uma expressão do gene por pequeno ARN de interferência, em particular para tratamento de doenças que envolvam a angiogénese.
Antecedentes da Invenção A angiogénese, definida como o crescimento de novos vasos sanguíneos capilares ou "neovascularização", assume um papel fundamental no crescimento e desenvolvimento. Em humanos adultos, a capacidade de iniciar a angiogénese está presente em todos os tecidos, mas está sob estrito controlo. Um regulador chave de angiogénese é o factor de crescimento vascular endotelial ("FCVE"), também chamado de factor de permeabilidade vascular ("FPV"). O FCVE existe em pelo menos quatro formas splice alternativas em humanos (FCVE121, FCVE165, FCVE189 e FCVE206 ), as quais todas exercem actividades biológicas semelhantes. A angiogénese é iniciada quando o FCVE segregado se une aos receptores Flt-1 e Flk-l/KDR (também chamados de receptor FCVE 1 e receptor FCVE 2), os quais estão presentes na superfície de células endoteliais. O Flt-1 e Flk-l/KDR são proteínas cinases de tirosina transmembranares, e a aglutinação de FCVE inicia uma cascata de sinais celulares que resultam na neovascularização do tecido circundante. A angiogénese aberrante, ou o crescimento patogénico de novos vasos sanguíneos, encontra-se implicada em várias de doenças. Entre estas doenças estão as retinopatias diabéticas, psoríases, degeneração macular relacionada com a idade exsudativa ou "molhada"("DMRI"), artrite reumatóide e outras doenças inflamatórias, e a maioria dos cancros. Os tecidos doentes ou tumores associados a estas doenças demonstram níveis elevados de FCVE, e mostram um alto grau de vascularização ou permeabilidade vascular. A DMRI em particular é uma doença angiogénica clinicamente importante. Esta doença é caracterizada pela neovascularização 1/188 coroidal em um ou ambos os olhos em indivíduos mais idosos, e é a maior causa de cegueira em países industrializados.
Existe um número de estratégias terapêuticas para inibir a angiogénese aberrante, a qual tenta reduzir a produção ou efeitos do FCVE. Por exemplo, anti-FCVE ou anticorpos receptores anti-FCVE (Kim ES et al. (2002), PNAS EUA 99; 11399-11404), e “armadilhas" FCVE solúveis, as quais competem com receptores de células endoteliais para aglutinação FCVE (Holash J et al. (2002), PNAS EUA 99; 11393-11398) têm sido desenvolvidas. FCVE clássico "anti-sentido" ou terapias aptamer dirigidas contra a presença do gene FCVE foram também propostos (Pedido E.U. publicado 2001/0021772 de Uhlmann et al. ) . Contudo, os agentes anti-angiogénicos usados nestas terapias podem produzir apenas uma redução estequiométrica em FCVE ou receptor FCVE, e os agentes são normalmente assoberbados pela anormal alta produção de FCVE pelo tecido doente. Os resultados conseguidos com terapias anti-angiogénicas disponíveis têm então sido insatisfatórios. A interferência ARN (daqui para a frente "ARNi") é um método de regulação do gene pós-transcricional que é conservado através de muitos organismos eucarióticos. O ARNi é induzido por ARN pequeno (isto é, <30 nucleótidos) de cadeia dupla ("dsARN"), moléculas que estão presentes na célula (Fire A et al., (1998), Nature 391: 806-811). Estas moléculas dsARN pequenas, chamadas "pequeno ARN de interferência" ou "siARN", causa a destruição de ARNs mensageiros ("mARNs") os quais partilham homologia de sequência com o siARN até uma resolução de um nucleótido (Elbashir SM et al. (2001), Genes Dev, 15: 188-200). Acredita-se que o siARN e o mARN alvo se aglutinam a um "complexo silenciador induzido por ARN" ou "CSIR", o qual cliva o mARN alvo. O siARN é aparentemente reciclado muito como uma enzima de múltiplo turnover, com 1 molécula siARN capaz de induzir clivagem de aproximadamente 1000 moléculas mARN. A degradação ARNi mediada por siARN de um mARN é então mais eficaz do que as tecnologias actualmente disponíveis para inibir a expressão de um gene alvo.
Elbashir SM et al. (2001), supra, mostrou que siARNs sintéticos de 21 e 22 nucleótidos em comprimento, e os quais têm extremidades 3' curtas, são capazes de induzir ARNi do mARN alvo numa célula Drosophila lisada. As células mamíferas cultivadas também exibem degradação de ARNi com siARN sintético (Elbashir SM et al. (2001), Nature 411: 494-498), e degradação ARNi induzida por siARN sintético foi recentemente mostrado em ratos vivos (McCaffrey AP et al. (2002), Nature 418:38-39; Xia H et al. (2002), Nat. Biotech. 20: 1006-1010). O potencial terapêutico da degradação ARNi induzida por siARN foi demonstrado em vários estudos recentes in vitro, incluindo a inibição dirigida ao siARN da infecção HIV-1 (Novina CD et al. (2002), Nat. Med. 8: 681-686) e redução da expressão da proteína da doença de poliglutamina neurotóxica (Xia H et al. (2002), supra). 2/188
Por conseguinte, são necessários agentes que inibam selectivamente a expressão de FCVE ou receptores FCVE em quantidades catalíticas ou sub-estequiométricas.
Sumário da Invenção A presente invenção é dirigida a siARNs tendo a sequência mostrada em SEQ ID NO 47, 48, 50, 51, 52, 56 a qual tem especificamente como alvo e causa a degradação induzida por ARNi de mARN de genes FCVE, Flt-1 e Flk-l/KDR. Os compostos siARN e composições da invenção são usados para inibir a angiogénese, em particular para o tratamento de tumores cancerosos, degeneração macular relativa à idade e outras doenças angiogénicas.
Desta forma, a invenção fornece um siARN isolado o qual tem como alvo mARN FCVE humano, mARN Flt-1 humano, mARN Flk-l/KDR humano, ou forma splice alternativa, mutante ou cognato da mesma. O siARN compreende uma cadeia de ARN sentido e uma cadeia de ARN anti-sentido o qual forma um duplex ARN. A cadeia de ARN sentido compreende uma sequência de nucleótidos idêntica à sequência alvo em cerca de 19 a 25 nucleótidos contíguos no mARN alvo. A invenção também fornece plasmídios recombinantes e vectores virais os quais expressam o siARN da invenção, assim como composições farmacêuticas que compreendem o siARN da invenção e um transportador farmaceuticamente aceitável. A invenção fornece ainda um método de inibir a expressão de mARN FCVE humano, mARN Flt-1 humano, mARN Flk-l/KDR humano, ou uma forma splice alternativa, mutante ou cognato da mesma, compreendendo a administração a um sujeito de uma quantidade eficaz de siARN da invenção, de tal modo que o alvo mARN é degradado. A invenção fornece ainda um método de inibição da angiogénese num sujeito, compreendendo a administração a um sujeito de uma quantidade eficaz de um siARN direccionado a mARN FCVE humano, mARN Flt-1 humano, mARN Flt-1/KDR humano, ou uma forma splice alternativa, mutante ou cognato da mesma. A invenção fornece ainda um método de tratamento de uma doença angiogénica, compreendendo a administração a um sujeito de tal tratamento de uma quantidade eficaz de um siARN direccionado a mARN FCVE humano, mARN Flt-1 humano, mARN Flk-l/KDR humano, ou uma forma splice alternativa, mutante ou cognato da mesma, de modo que a angiogénese associada à doença angiogénica é inibida.
Breve Descrição dos Desenhos
As FIGS. IA e 1B são histogramas da concentração FCVE (em pg/ml) em células 293 hipóxicas e HeLa tratadas sem siARN ("-") ; siARN não específico ("não específico"); ou siARN direccionado a mARN FCVE humano ("FCVE"). A concentração FCVE (em pg/ml) em células 293 não-hipóxicas e HeLa é também mostradas. Cada barra representa a média de quatro experiências, e o erro é o desvio-padrão do meio. 3/188 A FIG 2 é um histograma da concentração FCVE de murina (em pg/ml) em células NIH 3T3 hipóxicas tratadas sem siARN ("-"); siARN não especifico ("não especifico") ; ou siARN direccionado a mARN FCVE humano ("FCVE") . Cada barra representa a média de seis experiências e o erro é o desvio-padrão do meio. A FIG 3 é um histograma da concentração FCVE humana (pg/total proteína) em retinas de ratos injectados com adenovírus expressando FCVE humano ("AdFCVE") na presença de GFP siARN (barra cinza-escuro) ou siARN FCVE humano (barra cinza-claro). Cada barra representa a média de 5 olhos e as barras de erro representam o erro padrão do meio. A FIG 4 é um histograma que representa a área do meio (em mm2) de CNV induzido por laser em olhos de controlo dando injecções subret inianas de GFP siARN (N=9; "GFP siARN"), e em olhos dando injecções subret inianas de siARN FCVE de rato (N=7; "siARN FCVE de rato") . As barras de erro representam o erro padrão do meio. A FIG 5 é uma representação esquemática de pAAVsiARN, um plasmídio intramolecular usado para gerar um vector virai AAV recombinante da invenção. "ITR": repetições de terminal invertido AAV; "U6": Promotores ARN U6; "Sentido": Sequência de codificação de sentido siARN; "Anti": Sequência de codificação anti-sentido siARN; "PoliT": Sinais de terminação politimidina. A FIG 6 mostra histogramas da área do meio (em mm2) de CNV induzido por laser no tratamento de olhos de rato injectados (A) subretinalmente ou (B) intravitrealmente com um siARN anti-FCVE de rato ("mFCVEI.siARN") ou siARN controlo ("GFP1. siARN") . A barra de erro representa o erro padrão do meio. (C) é um histograma da área do meio (em mm2) do CNV induzido por laser em olhos de rato injectados intravitrealmente com: soro fisiológico com solução tampão fosfatos sem siARN a 1 dia após indução com laser ("PBS; área CNV medida aos 14 dias após indução com laser); siARN controlo aos 14 dias após indução com laser ("GFP1. siARN"; área CNV medida aos 21 dias após indução com laser); ou um siARN anti-FCVE do rato aos 14 dias após indução com laser ("mFCVEI.siARN"; área CNV medida aos 21 dias após indução com laser). A barra de erro representa o erro padrão do meio. A FIG 7 é um gráfico da percentagem da proteína FCVE ("%FCVE") em olhos de ratos injectados subretinalmente com siARN anti-FCVE humano ("Cand5") e siARN de controlo ("GFP1.siARN") em 0 (n=2; injecção pré-siARN) , 6 (n=3) , 10 (n=3) e 14 (n=3) dias após a injecção. %FCVE = ([FCVE] no olho Cand5/[FCVE] no olho GFP1.siARN)*100.
Descrição Detalhada da Invenção A não ser de outro modo indicado, todas as sequências de ácido nucleico aqui descritas são dadas na direcção 5' a 3'. A invenção relaciona-se especificamente com a SEQ ID NO. 47, 48, 50, 51, 52, 56. Todas as referências a outros n°s de SEQ ID são ilustrativas e não definem a invenção. Também, todos os desoxirribonucleótidos numa sequência de ácido nucleico são 4/188 representados por letras maiúsculas (por exemplo, desoxitimidina é "T"), e os ribonucleótidos numa sequência de ácido nucleico são representados por letras minúsculas (por exemplo, uridina é "u") .
Composições e métodos que compreendem siARN direccionado a FCVE, mARN Flt-1 ou Flk-l/KDR são vantajosamente usados para inibir a angiogénese, em particular para o tratamento de doença angiogénica. Pensa-se que o siARN da invenção causa a degradação destes mARNs por intermédio do ARNi, de modo que o produto proteico dos genes FCVE, Flt-1 ou FLK-l/KDR não é produzido ou é produzido em quantidades reduzidas. Devido à junção do FCVE aos receptores Flt-1 ou Flk-l/hDR é necessário para iniciar e manter a angiogénese, a degradação de FCVE, Flt-1 ou Flk-l/KDR mARN mediada por siARN inibe o processo angiogénico.
Por conseguinte, a invenção fornece siARN isolado compreendendo ARN de dupla cadeia curta com cerca de 17 nucleótidos até cerca de 29 nucleótidos em comprimento, de preferência cerca de 19 a 25 nucleótidos em comprimento, que são direccionados ao mARN alvo. 0 siARN compreende uma cadeia de ARN sentido e uma cadeia de ARN anti-sentido complementar unidos por interacções de par de bases padrão Watson-Crick (daqui para a frente ("par de bases") . Como é descrita com mais detalhe abaixo, a cadeia sentido compreende uma sequência de ácido nucleico a qual é idêntica a uma sequência alvo contida no mARN alvo.
As cadeias sentido e anti-sentido do presente siARN podem compreender duas moléculas ARN de cadeia simples complementares ou podem compreender uma única molécula na qual duas porções complementares são par de bases e são covalentemente ligadas por uma área “hairpin" de cadeia simples. Sem querer estar preso por qualquer teoria, acredita-se que a área hairpin do último tipo de molécula siARN é intracelularmente clivada pela proteína "Dicer" (ou o seu equivalente) para formar um siARN com duas moléculas de ARN com pares de bases individuais (ver Tuschl, T. (2002), supra).
Como aqui usado, "isolado" significa alterado ou removido do estado natural através da intervenção humana. Por exemplo, um siARN naturalmente presente num animal vivo não é "isolado", mas um siARN sintético, ou um siARN parcial ou completamente separado dos materiais coexistentes do seu estado natural é "isolado". Um siARN isolado pode existir numa forma substancialmente purificada, ou pode existir num ambiente não-nativo como, por exemplo, uma célula para dentro da qual o siARN foi introduzido.
Como aqui usado, "mARN alvo" significa mARN FCVE, Flt-1 ou Flk-l/KDR humano, mutante ou formas splice alternativas de mARN FCVE, Flt-1 ou Flk-l/KDR humano, ou mARN de genes FCVE, Flt-1 ou Flk-l/KDR cognato.
Como aqui usado, um gene ou mARN o qual é "cognato" para FCVE, Flt-1 ou Flk-l/KDR humano é um gene ou mARN de outras espécies mamíferas as quais são homólogas para FCVE, Flt-1 ou Flk-l/KDR humano. Por exemplo, o mARN FCVE cognato do rato é dado na SEQ ID NO: 1. 5/188 São conhecidas variantes splice de FCVE humano, incluindo FCVE121 (SEQ ID NO: 2), FCVEies (SEQ ID NO: 3), FCVEi89 (SEQ ID NO: 4) e FCVE206 (SEQ ID NO: 5) . O mARN transcrito do FCVE humano, Flt-1 (SEQ ID NO: 6) ou genes Flk-l/KDR (SEQ ID NO: 7) podem ser analisados para outras alternativas splice usando técnicas bem conhecidas da técnica. Tais técnicas incluem reacções em cadeia de trancrição-polimerase reversa (RT-PCR), northern blotting e hibridação in-situ. As técnicas para analisar as sequências de mARN são descritas, por exemplo, em Bustin SA (2000), J. Mol. Endocrinol. 2_5 : 169-193, sendo que a totalidade está aqui incluida como referência. As técnicas representativas para identificar alternativamente mARNs substituídos são também descritas abaixo.
Por exemplo, bases de dados que contenham sequências de nucleótidos relacionadas com um dado gene de doença podem ser usadas para identificar mARN alternativamente substituídos. Tais bases de dados incluem GenBank, Embase, e a base de dados do Projecto da Anatomia do Genoma do Cancro (PAGC). A base de dados PAGC, por exemplo, contém marcas de sequência expressas (ESTs) a partir de vários tipos de cancros humanos. Uma sequência de mARN ou gene a partir de genes FCVE, Flt-1 ou Flk-l/KDR pode ser usada para pesquisar uma base de dados para determinar se os ESTs que representam os mARNs alternativamente substituídos foram encontrados para estes genes.
Uma técnica chamada "protecção ARNse" pode também ser usada para identificar mARNs FCVE, Flt-1 ou Flk-l/KDR alternativamente substituídos. A protecção ARNse envolve a tradução de uma sequência de gene para ARN sintético, o qual é hibridado para ARN derivado de outras células, por exemplo, células do tecido na ou perto da neovascularização. 0 ARN hibridado é então incubado com enzimas que reconhecem híbridos ARN:ARN desemparelhados. Fragmentos mais pequenos do que o esperado podem indicar a presença de mARNs alternativamente substituídos. Os mARNs putativos alternativamente substituídos podem ser clonados e sequenciados por métodos bem conhecidos dos especialistas. 0 RT-PCR pode também ser usado para identificar mARNs FCVE, Flt- 1 ou Flk-l/KDR alternativamente substituídos. Em RT-PCR, o mARN do tecido morto é convertido em cDNA pela transcriptase reversa da enzima, usando métodos bem conhecidos dos especialistas. Toda a sequência de codificação do cDNA é então amplificada via PCR usando um promotor reencaminhador localizado na região não traduzida 3', e um reversor localizado na região não traduzida 5'. Os produtos amplificados podem ser analisados em termos de formas splice alternativas, por exemplo ao comparar o tamanho dos produtos amplificados com o tamanho do produto esperado a partir do mARN substituído, por exemplo por electroforese em gel de agarose. Qualquer alteração no tamanho do produto amplificado pode indicar splicing alternativo.
0 mARN produzido a partir de genes FCVE, Flt-1 ou Flk-l/KDR mutantes pode também ser prontamente identificado através das técnicas acima descritas para identificar formas splice alternativas. Como aqui usado, genes ou mARN FCVE, Flt-1 ou Flk-l/KDR "mutantes" incluem genes ou mARN FCVE, Flt-1 ou Flk-l/KDR 6/188 humanos os quais diferem em sequência das sequências FCVE, Flt-1 ou Flk-l/KDR presentes neste documento. Assim, as formas alélicas destes genes, e o mARN produzido a partir delas, são considerados "mutantes" para os propósitos desta invenção. É compreendido que o mARN FCVE, Flt-1 ou Flk-l/KDR humano pode conter sequências alvo em comum com as suas formas splice alternativas respectivas, cognatos ou mutantes. Um único siARN que compreenda uma sequência alvo tão comum pode então induzir a degradação mediada por ARNi de diferentes tipos de ARN os quais contêm a sequência alvo comum. 0 siARN da invenção pode compreender ARN parcialmente purificado, ARN substancialmente puro, ARN sintético, ou ARN produzido recombinantemente, assim como ARN alterado que difere do ARN que ocorre naturalmente pela adição, remoção, substituição e/ou alteração de um ou mais nucleótidos. Tais alterações podem incluir a adição de material não-nucleótido, tal como no final (ais) do siARN ou para um ou mais nucleótidos internos do siARN, incluindo modificações que tornam o siARN resistente à digestão de nuclease.
Uma ou ambas as cadeias do siARN da invenção também compreende uma extremidade 3'. Como aqui usado, uma "extremidade 3'" refere-se a pelo menos um nucleótido não emparelhado que se estende a partir da extremidade 3' de ARN de cadeia dupla.
Assim nesta realização, o siARN da invenção compreende pelo menos uma extremidade 3' de 1 até cerca de 6 nucleótidos (os quais incluem ribonucleótidos ou deoxinucleótidos) em comprimento, preferencialmente de 1 até cerca de 5 nucleótidos em comprimento, mais preferencialmente de 1 até quatro nucleótidos em comprimento, e particularmente de preferência de 2 até cerca de 4 nucleótidos em comprimento.
Na realização na qual ambas as cadeias da molécula siARN compreendem uma extremidade 3', o comprimento das extremidades pode ser o mesmo ou diferente para cada cadeia. Numa realização mais preferida, a extremidade 3' está presente em ambas as cadeias do siARN, e tem 2 nucleótidos de comprimento. Por exemplo, cada cadeia do siARN da invenção pode compreender extremidades 3' de ácido ditimidilico ("TT") ou ácido diuridilico ("uu").
De modo a melhorar a estabilidade do presente siARN, as extremidades 3' podem também ser estabilizadas contra a degradação. Numa realização, as extremidades são estabilizadas ao incluir nucleótidos purina, tais como nucleótidos adenosina ou guanosina. Alternativamente, a substituição de nucleótidos pirimidina pelos análogos modificados, por exemplo, substituição de nucleótidos uridina nas extremidades 3' com 2'-timidina, é tolerada e não afecta a eficiência da degradação ARNi. Em particular, a ausência de um 2' hidroxilo no 2'-deoxitimidina melhora significativamente a resistência da nuclease da extremidade 3' no meio de cultura do tecido.
Em certas realizações, o siARN da invenção compreende a sequência AA (N19) TT ou ΝΑ (N21), onde N é um qualquer nucleótido. Estes siARN compreendem aproximadamente 30-70% de GC, 7/188 e preferencialmente compreendem aproximadamente 50% G/C. A sequência da cadeia de siARN sentido corresponde a (N19) TT ou N21 (isto é, posições 3 a 23), respectivamente. No último caso, a terminação 3' do siARN sentido é convertido em TT. A razão para esta conversão de sequência é gerar um duplex simétrico relativamente à composição da sequência das extremidades 3' de cadeia sentido e anti-sentido. A cadeia de ARN anti-sentido é então sintetizada como o complemento às posições 1 a 21 da cadeia sentido.
Porque a posição 1 da cadeia sentido 23-nt nestas realizações não é reconhecida de uma maneira específica quanto a sequência pela cadeia anti-sentido, o resíduo nucleótido 3' da cadeia anti-sentido pode ser escolhido deliberadamente. Contudo, o penúltimo nucleótido da cadeia anti-sentido (complementarmente à posição 2 da cadeia sentido 23-nt em qualquer realização) é geralmente complementar à sequência alvo.
Noutra realização, o siARN da invenção compreende a sequência NAR (N17)YNN, em que R é uma purina (por exemplo, A ou G) e Y é uma pirimidina (por exemplo, C ou U/T) . As respectivas cadeias de ARN sentido 21-nt e anti-sentido desta realização começam então com um nucleótido purina. Tal siARN pode ser expresso a partir de vectores de expressão pol III sem uma alteração do sítio alvo, como expressão de ARNs a partir de promotores pol III acredita-se apenas ser eficiente quando o primeiro nucleótido transcrito é uma purina. O siARN da invenção pode ser dirigido a qualquer parte de aproximadamente 19-25 nucleótidos contíguos em qualquer uma das sequências alvo mARN (a "sequência alvo") . As técnicas para seleccionar sequências alvo para siARN são dadas, por exemplo, em Tuschl T et al., "The siARN User Guide", revisto a 11 de Outubro de 2002, o qual é aqui incorporado para referência. "The siARN User Guide" está disponível na internet num website mantido pelo Dr. Thomas Tuschl, Departamento de Bioquímica Celular, AG 105, Max-Planck-Institute para Química Biofísica, 37077 Gõttingen, Alemanha, e pode ser encontrado ao aceder ao website do Instituto Max Plank e ao pesquisar pela palavra "siARN". Assim, a cadeia sentido do presente siARN compreende uma sequência de nucleótido idêntica a qualquer parte contígua de cerca de 19 a cerca de 25 nucleótidos no mARN alvo.
Geralmente, a sequência alvo no mARN alvo pode ser seleccionada a partir de uma dada sequência cDNA correspondente ao mARN alvo, de preferência começando em 50 a 100 nt downstream (isto é, na direcção 3') a partir do codão inicial. Contudo, a sequência alvo pode estar localizada nas regiões não traduzidas 5' ou 3', ou na região perto do codão inicial (ver, por exemplo, as sequências alvo da SEQ ID NOS: 73 e 74 na Tabela 1 abaixo, as quais estão entre 100 nt da extremidade 5' do cDNA FCVE121.
Por exemplo, uma sequência alvo adequada na sequência cDNA FCVE121 é: TCATCACGAAGTGGTGAAG (SEQ ID NO: 8) 8/188
Deste modo, um siARN da invenção direccionado a esta sequência, e o qual tem extremidades 3' uu em cada cadeia (extremidades mostradas a negrito), é: 5'-ucaucacgaaguggugaaguu-3' (SEQ ID NO: 9) 3'-uuaguagugcuucaccacuuc-5' (SEQ ID NO: 10)
Um siARN da invenção direccionado a esta sequência, mas tendo extremidades 3' TT em cada cadeia (extremidades mostradas a negrito), é: 5'-ucaucacgaaguggugaagTT-3'(SEQ ID NO: 11) 3'-TTaguagugcuucaccacuuc-5' (SEQ ID NO: 12)
Outras sequências alvo FCVE121, a partir das quais o siARN da invenção pode ser derivado, são dadas na Tabela 1. É compreendido que todas as sequências alvo FCVE121 listadas na Tabela 1 estão dentro daquela porção da forma splice alternativa FCVE121 a qual é comum a todas as formas splice alternativas FCVE humanas. Assim, as sequências alvo FCVE121 na Tabela 1 podem também ser direccionadas a mARN FCVEi65, FCVEi89 e FCVE206 · As sequências alvo direccionadas a um especifico isoforme FCVE podem também ser prontamente identificadas. Por exemplo, uma sequência alvo que esteja direccionada a mARN FCVEi65 mas não a mARN FCVE121 é AACGTACTTGCAGATGTGACA (SEQ ID NO: 13) . As sequências alvo exemplificativas para Flt-1 humano são dadas em SEQ ID NOS: 91-504 e sequências alvo exemplificativas para Flk-1/KDR são dadas em SEQ ID NOS: 505 - 864.
Tabela 1 Sequências Alvo FCVE
Sequência alvo SEQ ID NO: Sequência alvo SEQ ID NO: GTTCATGGATGTCTATCAG 14 TCCCTGTGGGCCTTGCTCA 30 TCGAGACCCTGGTGGACAT 15 GCATTTGTTT GTACAAGAT 31 TGACGAGGGCCTGGAGTGT 16 GATCCGCAGACGTGTAAAT 32 TGACGAGGGCCTGGAGTGT 17 ATGTTCCTGCAAAAACACA 33 CATCACCATGCAGATTATG 18 TGTTCCTGCAAAAACACAG 34 ACCTCACCAAGGCCAGCAC 19 AAACACAGACTCGCGTTGC 35 GGCCAGCACATAGGAGAGA 20 A AC AC AG ACTCGCGTTGC A 36 CAAATGTGAATGCAGACCA 21 ACACAGACTCGCGTTGCAA 37 ATGTGAATGCAGACCAAAG 22 CACAGACTCGCGTTGCAAG 38 TGCAGACCAAAGAAAGATA 23 GGCGAGGCAGCTTGAGTTA 39 AGAAAGATAGAGCAAGACA 24 ACGAACGTACTTGCAGATG 40 GAAAGATAGAGCAAGACAA 25 CGAACGTACTTGCAGATGT 41 GATAGAGCAAGACAAGAAA 26 CGTACTTGCAGATGTGACA 42 GACAAGAAAATCCCTGTGG 27 GTGGTCCCAGGCTGCACCC 43 GAAAATCCCTGTGGGCCTT 28 GGAGGAGGGCAGAATCATC 44 AATCCCTGTGGGCCTTGCT 29 GTGGTGAAGTTCATGGATG 45 AATCATCACGAAGTGGTGAAG 46 AAGCATTTGTTTGTACAAGATCC 62 AAGTTCATGGATGTCTATCAG 47 AAGATCCGCAGACGTGTAAATGT 63 AATCGAGACCCTGGTGGACAT 48 AAATGTTCCTGCAAAAACACAGA 64 AATGACGAGGGCCTGGAGTGT 49 AATGTTCCTGCAAAAACACAGAC 65 AACATCACCATGCAGATTATG 50 AAAAACACAGACTCGCGTTGCAA 66 AAACCTCACCAAGGCCAGCAC 51 AAAACACAGACTCGCGTTGCAAG 67 AAGGCCAGCACATAGGAGAGA 52 AAACACAGACTCGCGTTGCAAGG 68 AACAAATGTGAATGCAGACCA 53 AACACAGACTCGCGTTGCAAGGC 69 AAATGTGAATGCAGAC CAAAG 54 AAGGCGAGGCAGCTTGAGTTAAA 70 AATGCAGACCAAAGAAAGATA 55 AAACGAACGTACTTGCAGATGTG 71 AAAGAAAGATAGAGCAAGACA 56 AACGAACGTACTTGCAGATGTGA 72 AAGAAAGATAGAGCAAGACAA 57 AAGTGGTCCCAGGCTGCACCCAT 73 9/188 AAGATAGAG CAAGACAAGAAAAT 58 AAGGAGGAGGGCAGAATCATCAC 74 AAGACAAGAAAATCCCTGTGGGC 59 AAGTGGTGAAGTTCATGGATGTC 75 AAGAAAATCCCTGTGGGCCTTGC 60 AAAATCCCTGTGGGCCTTGCTCA 76 AATCCCTGTGGGCCTTGCTCAGA 61 GGCAGAATCATCACGAAGTGG 81 CCTGGTGGACATCTTCCAGGA 82 CACACACTCGCGTTGCAAGGC 87 GAGATCGAGTACATCTTCAAG 83 TCACCATGCAGATTATGCGGA 88 TGGAGTGTGTGCCCACTGAGG 84 TAGAGCAAGACAAGAAAATCC 89 GAGCTTCCTACAGCACAACAA 85 CCGCAGACGTGTAAATGTTCC 90 TTGCTCAGAGCGGAGAAAGCA 86 0 siARN da invenção pode ser obtido usando um número de técnicas conhecidas para os especialistas da área. Por exemplo, o siARN pode ser quimicamente sintetizado ou produzido recombinantemente usando métodos conhecidos na técnica, tais como o sistema in vitro Drosophila descrito no Pedido E.U. publicado 2002/0086356 de Tuschl et al., toda a publicação é aqui incorporada como referência.
Preferencialmente, os siARN da invenção são quimicamente sintetizados usando adequadamente fosforamiditas ribonucleósidas protegidas e um sintetizador DNA/ARN convencional. O siARN pode ser sintetizado como duas moléculas ARN complementares separadas, ou como uma única molécula ARN com duas regiões complementares. Fornecedores comerciais de moléculas ARN sintéticas ou reagentes de síntese incluindo Proligo (Hamburgo, Alemanha), Dharmacon Research (Lafayette, CO, EUA), Pierce Chemical (parte de Perbio Science, Rockford, IL, EUA), Glen Research (Sterling, VA, EUA), ChemGenes (Ashland, MA, EUA) e Cruachem (Glasgow, UK).
Alternativamente, o siARN pode também ser expresso a partir de plasmídios DNA linear ou circular recombinante usando qualquer promotor adequado. Os promotores adequados para expressar o siARN da invenção a partir de um plasmídio incluem, por exemplo, as sequências promotoras ARN U6 ou Hl pol III ou o promotor citomegalovírus. A selecção de outros promotores adequados está dentro da competência da técnica. Os plasmídios recombinantes da invenção podem também compreender promotores induzíveis ou reguláveis para a expressão do siARN num tecido em particular ou num ambiente intracelular particular. O siARN expressado a partir de plasmídios recombinantes pode ser isolado a partir de sistemas de expressão de células cultivadas através de técnicas Standard, ou pode ser expressado intracelularmente em ou numa área perto da neovascularização in vivo. O uso de plasmídios recombinantes para entregar o siARN da invenção às células in vivo é discutida com mais detalhe abaixo. O siARN da invenção pode ser expressado a partir de plasmídios recombinantes, quer como duas moléculas ARN separadas complementares, ou como uma única molécula ARN com duas regiões complementares. A selecção de plasmídios adequados para expressar o siARN da invenção, métodos para inserir sequências de ácido nucleico para expressar o siARN no plasmídio, e métodos de entrega do plasmídio recombinante para as células de interesse, estão inseridos na competência da arte. Ver, por exemplo, Tuschl, T. (2002), Nat. Biotechnol, 20: 446-448; Brummelkamp TR et al. 10/188 (2002), Science 296: 550-553; Miyagishi M et al. (2002), Nat. Biotechnol. 20: 497-500; Paddison PJ et al.(2002), Genes Dev. 16: 948-958; Lee NS et al. (2002), Nat. Biotechnol. 20: 500-505; e Paul CP et al. (2002), Nat. Biotechnol. 20: 505-508, sendo que a totalidade está incorporada aqui como referência.
Um plasmidio que compreende sequências de ácido nucleico para expressar um siARN da invenção é descrito no Exemplo 7 abaixo. Esse plasmidio, chamado pAAVsiARN compreende uma sequência de codificação de cadeia de ARN sentido em condição operável com uma sequência de terminação poliT sob o controlo de um promotor ARN U6 humano, e uma sequência de codificação de cadeia de ARN anti-sentido em condição operável com uma sequência de terminação poliT sob o controlo de um promotor ARN U6 humano. O plasmidio pAAVsiARN é ultimamente pretendido para usar na produção de um vector virai adeno-associado recombinante compreendendo as mesmas sequências de ácido nucleico para expressar um siARN da invenção.
Como aqui usado, "em condição operável com uma sequência de terminação poliT" significa que as sequências de ácido nucleico que codificam as cadeias sentido e anti-sentido são imediatamente adjacentes ao sinal da terminação poliT na direcção 5' . Durante a transcrição das sequências sentido ou anti-sentido a partir do plasmidio, os sinais de terminação poliT actuam para terminar a transcrição.
Como aqui usado, "sob o controlo" de um promotor significa que as sequências de ácido nucleico que codificam as cadeias sentido ou anti-sentido estão localizadas 3' do promotor, de modo a que o promotor possa iniciar a transcrição das sequências de codificação do sentido ou anti-sentido. O siARN da invenção pode também ser expresso a partir de vectores virais recombinantes intracelularmente em ou perto das áreas de neovascularização in vivo. Os vectores virais recombinantes da invenção compreendem sequências que codificam o siARN da invenção e qualquer promotor adequado para expressar as sequências siARN. Promotores adequados incluem, por exemplo, as sequências promotoras de ARN pol III U6 ou Hl e o promotor do citomegalovirus. A selecção de outros promotores adequados está inserida na competência da técnica. Os vectores virais recombinantes da invenção podem também compreender promotores induziveis ou reguláveis para a expressão de siARN num tecido em particular ou num ambiente intracelular particular. O uso de vectores virais recombinantes para entregar o siARN da invenção às células in vivo é discutido abaixo com mais detalhe. O siARN da invenção pode ser expresso a partir de vectores virais recombinantes como duas moléculas ARN separadas complementares ou como uma única molécula ARN com duas regiões complementares.
Qualquer vector virai capaz de aceitar as sequências de codificação para a(s) molécula(s) siARN ser(em) expressa(s) pode ser usado, por exemplo vectores derivados de adenovírus (AV) ; vírus adeno-associados (AAV); retrovírus (por exemplo, lentivírus (LV), Rhabdovírus, vírus da leucemia murina); vírus do herpes, e semelhantes. O tropismo dos vectores virais pode 11/188 também ser modificado ao pseudotipar os vectores com envelopes proteicos ou outros antigenos de superfície de outro vírus. Por exemplo, um vector AAV da invenção pode ser pseudotipado com proteínas de superfície a partir do vírus da estomatite vesicular (VSV), raiva, Ébola, Mokola, e semelhantes. A selecção de vectores virais recombinantes adequados para uso na invenção, métodos para inserir sequências de ácido nucleico para expressar o siARN no vector, e métodos de entregar o vector virai às células de interesse estão inseridos na competência da técnica. Ver, por exemplo, Dornburg R (1995), Gene Therap. 2: 301-310; Eglitis MA (1988), Biotechniques 6: 608-614; Miller AD (1990), Hum Gene Therap. 1: 5-14; e Anderson WF (1998), Nature 392: 25-30, sendo que a totalidade está aqui incorporada como referência.
Vectores virais preferidos são aqueles derivados de AV e AAV. Numa realização particularmente preferida, o siARN da invenção é expresso como duas moléculas ARN separadas de cadeia simples complementares de um vector AAV recombinante que compreende, por exemplo, promotores ARN U6 e Hl, ou o promotor (CMV) citomegalovírus.
Um vector AV adequado para expressar o siARN da invenção, um método para construir o vector AV recombinante, e um método para entregar o vector nas células alvo, são descritos em Xia H et al. (2002), Nat. Biotech. 20:1006-1010.
Vectores AVV adequados para expressar o siARN da invenção, métodos para construir o vector AVV recombinante, e métodos para entregar os vectores para as células alvos, são descritos em Samulski R et al. , (1987), J. Virol. 61: 3096-3101; Fisher KJ et al. (1996), J. Virol., 70: 520-532; Samulski R et al. (1989), J. Virol. 63: 3822-3826; a patente E.U N° 5,252,479; Patente E.U. N° 5,139,941; Pedido de Patente Internacional N° WO 94/13788; e o Pedido de Patente Internacional N° WO 93/24641, estão incluídos aqui na totalidade como referência. Um método exemplar para gerar um vector AAV recombinante da invenção é descrito no Exemplo 7 abaixo. A capacidade de um siARN conter uma dada sequência alvo para causar a degradação mediada por ARNi do mARN alvo pode ser avaliada usando técnicas Standard para medir os níveis de ARN ou proteína nas células. Por exemplo, o siARN da invenção pode ser entregue a células cultivadas, e os níveis do mARN alvo podem ser medidos através de Northern blot ou técnicas de dot blotting, ou por RT-PCR quantitativo. Alternativamente, os níveis de proteína receptora FCVE, Flt-1 ou Flk-l/KDR nas células cultivadas podem ser medidos por ELISA ou Western blot. Um sistema de cultivo de células adequado para medir o efeito do siARN presente no mARN alvo ou níveis proteicos é descrito no Exemplo 1 abaixo. A degradação mediada por ARNi do mARN alvo por um siARN contendo uma dada sequência alvo pode também ser avaliada com modelos animais de neovascularização, tais como os ratos modelos ROP ou CNV. Por exemplo, áreas de neovascularização num rato ROP ou CNV podem ser medidas antes e depois da administração de um siARN. Uma redução, nas áreas de neovascularização nestes modelos após 12/188 administraçao do siARN indica a regulaçao por diminuição do mARN alvo (ver Exemplo 6 abaixo).
Como discutido acima, o siARN da invenção tem como alvo e causa a degradação mediada por ARNi do mARN FCVE, Flt-1 ou Flk-l/KDR ou formas splice alternativas, mutantes ou cognatos dos mesmos. A degradação do mARN alvo pelo presente siARN reduz a produção do gene funcional, produto dos genes FCVE, Flt-1 ou Flk-l/KDR. Deste modo, a invenção fornece um método de inibir a expressão de FCVE, Flt-1 ou Flk-l/KDR num sujeito, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um siARN da invenção ao sujeito, tal como o mARN alvo é degradado. À medida que os produtos dos genes FCVE, Flt-1 e Flk-l/KDR são necessários para iniciar e manter a angiogénese, a invenção também fornece um método para inibir a angiogénese num sujeito através da degradação mediada por ARNi do mARN alvo pelo siARN presente.
Como aqui usado, um “sujeito" inclui um ser humano ou um animal não-humano. De preferência, o sujeito é um ser humano.
Como aqui usado, "uma quantidade eficaz"de siARN é uma quantidade suficiente para causar a degradação mediada por ARNi do mARN alvo, ou uma quantidade suficiente para inibir a progressão da angiogénese num sujeito. A degradação mediada por ARNi do mARN alvo pode ser detectada medindo níveis de mARN alvo ou proteína nas células de um sujeito, usando técnicas Standard para isolar e quantificar mARN ou proteína como acima descrito. A inibição de angiogénese pode ser avaliada medindo directamente o progresso da angiogénese patogénica ou não-patogénica num sujeito; por exemplo, ao observar o tamanho de uma área neovascularizada antes e após o tratamento com o siARN da invenção. É indicada uma inibição de angiogénese se o tamanho de uma área neovascularizada se mantém igual ou é reduzida. Técnicas para observar e medir o tamanho de áreas neovascularizadas num sujeito estão inseridas na competência da técnica; por exemplo, áreas de neovascularização coroidal podem ser observadas através de oftalmoscopia. A inibição de angiogénese pode também ser inferida ao observar uma mudança ou reversão numa condição patogénica associada com a angiogénese. Por exemplo, em ARMD, uma diminuição, pausa ou reversão da perca de visão indica uma inibição da angiogénese na coróide. Para tumores, uma diminuição, pausa ou reversão do crescimento do tumor, indica uma inibição da angiogénese em ou perto do sitio do tumor. A inibição da angiogénese não patogénica pode também ser inferida a partir, por exemplo, da perca de gordura ou uma redução nos níveis de colesterol após a administração do siARN da invenção. É compreendido que o siARN da invenção pode degradar o mARN alvo (e assim inibir a angiogénese) em quantidade sub-estequiométrica. Sem desejar estar ligado a qualquer teoria, é acreditado que o siARN da invenção provoque a degradação do mARN alvo de um modo catalítico. Deste modo, comparado com as terapias anti-angiogénicas Standard, é necessário significativamente 13/188 menos siARN em ou perto do sítio de neovascularização de modo a obter um efeito terapêutico.
Um especialista da área pode prontamente determinar uma quantidade eficaz do siARN da invenção a ser administrado a um dado sujeito, tendo em conta factores tais como o tamanho e peso do sujeito; a extensão da neovascularização ou penetração da doença; a idade, saúde e género do sujeito; a forma de administração; e se a administração é regional ou sistémica. Geralmente, uma quantidade eficaz do siARN da invenção compreende uma concentração intercelular em ou perto do sítio da neovascularização de cerca de 1 nanomolar (nM) até cerca de 100 nM, preferencialmente de cerca de 2 nM até cerca de 50 nM, mais preferencialmente de cerca de 2.5 nM até cerca de 10 nM. É contemplado que quantidades maiores ou menores de siARN possam ser administradas.
Os métodos presentes podem ser usados para inibir a angiogénese a qual não é patogénica; isto é, angiogénese a qual resulta de processos normais no sujeito. Exemplos de angiogénese não-patogénica incluem neovascularização endometrial, e processos envolvidos na produção de tecidos gordos ou colesterol. Deste modo, a invenção fornece um método para inibir a angiogénese não-patogénica, por exemplo, para controlar o peso ou promover a perca de gordura, para reduzir níveis de colesterol, ou como um abortivo.
Os presentes métodos podem também inibir a angiogénese a qual é associada a uma doença angiogénica; isto é, uma doença na qual a patogenicidade é associada a uma angiogénese inapropriada ou não controlada. Por exemplo, a maioria dos tumores cancerosos sólidos geram uma quantidade de sangue adequada para eles mesmos induzindo angiogénese em e em redor do local do tumor. Esta angiogénese induzida pelo tumor é frequentemente necessária para o crescimento do tumor, e também permite que células metásticas entrem na corrente sanguínea.
Outras doenças angiogénicas incluem retinopatia diabética, degeneração macular relacionada com a idade (ARMD), psoríase, artrite reumatóide e outras doenças inflamatórias. Estas doenças são caracterizadas pela destruição do tecido normal por vasos sanguíneos novos na área de neovascularização. Por exemplo, em ARMD, a coróide é invadida e destruída por capilares. A destruição pela angiogénese da coróide no ARMD leva, eventualmente, a cegueira parcial ou total.
Preferencialmente, um siARN da invenção é usado para inibir o crescimento ou metástases de tumores sólidos associados com neoplasias; por exemplo neoplasia mamária, neoplasia pulmonar, neoplasia da cabeça e pescoço, neoplasia cerebral, neoplasia abdominal, neoplasia do cólon, neoplasia colorectal, neoplasia do esófago, neoplasia gastrointestinal, glioma, neoplasia do fígado, neoplasia da língua, neuroblastoma, osteosarcoma, neoplasia dos ovários, neoplasia pancreático, neoplasia da próstata, retinoblastoma, tumor de Wilm, mieloma múltiplo, neoplasia da pele (por exemplo, melanoma), linfomas e neoplasia hematológica. 14/188
Mais preferencialmente, um siARN da invenção é usado para inibir a neovascularização coroidal em degeneração macular relacionada com a idade.
Para tratar doenças angiogénicas, o siARN da invenção pode ser administrado a um sujeito em combinação com um agente farmacêutico o qual é diferente do siARN presente. Alternativamente, o siARN da invenção pode ser administrado a um sujeito em combinação com outro método terapêutico designado para tratar doenças angiogénicas. Por exemplo, o siARN da invenção pode ser administrado em combinação com os métodos terapêuticos actualmente usados para tratar o cancro ou prevenir as metástases tumorais (por exemplo, radioterapia, quimioterapia, e cirurgia). Para tratar tumores, o siARN da invenção é preferencialmente administrado a um sujeito em combinação com radioterapia, ou em combinação com agentes quimioterapêuticos, tais como cisplatina, carboplatina, ciclofosfamida, 5-fluorouracil, adriamicina, daunorrubicina ou tamoxifeno.
Nos métodos actuais, o presente siARN pode ser administrado a um sujeito quer como siARN "naked" em conjunção com um reagente de entrega, quer como um plasmidio recombinante ou vector virai o qual expressa o siARN.
Reagentes de entrega adequados para administração em conjunto com o presente siARN incluem o reagente lipofilico Mirus Transit TKO; lipofectina; lipofectamina; cellfectina; ou policatiões (por exemplo, polilisina), ou liposomas. Um agente de entrega preferido é a liposoma.
As liposomas podem ajudar na administração do siARN a um tecido particular, tal como tecido retinal ou tumoral, e podem também aumentar a meia vida do siARN no sangue. Os liposomas adequados para este uso na invenção são formados a partir de lipidos Standard que foram vesículas, os quais geralmente incluem fosfolípidos neutros ou negativamente carregados e um esterol, tal como o colesterol. A selecção de lipidos é geralmente guiada por consideração de factores tais como o tamanho desejado do liposoma e a meia vida dos liposomas no sangue. Uma variedade de métodos é conhecida por preparar liposomas, por exemplo, como descrito em Szoka et al. (1980), Ann. Rev. Biophys. Bioeng. 9: 467; e as Patentes E.U.A. n°s 4,235,871, 4,501,728, 4,837,028 e 5,019,369, que estão aqui incluídas para referência.
Preferencialmente, os liposomas que encapsulam o presente siARN compreendem uma molécula ligante que pode ter como alvo o liposoma de uma célula ou tecido em particular em ou perto do sítio da angiogénese. Os ligantes que se ligam a receptores prevalentes em células tumorais ou vasculares endoteliais, tais como anticorpos monoclonais para aglutinar a antigénios tumorais ou antigénios de superfície de célula endotelial, são preferidos.
Particularmente preferível, os liposomas que encapsulam o presente siARN são modificados de modo a evitar depuração pelo macrófago mononuclear e sistemas reticuloendoteliais, por exemplo tendo partes de células para inibição de opsonização 15/188 aglutinada à superfície da estrutura. Numa realização, um liposoma da invenção pode compreender ambas as partes da molécula de inibição de opsonização e um ligante.
Partes da molécula para inibição de opsonização para uso na preparação de liposomas da invenção são normalmente grandes polímeros hidrofílicos que estão ligados à membrana do liposoma. Como aqui usado, uma parte da molécula de inibição de opsonização é "ligada" a uma membrana do liposoma quando é quimicamente ou fisicamente ligada à membrana, por exemplo, pela intercalação de uma âncora lipossolúvel na membrana, ou por ligar directamente aos grupos activos dos lípidos da membrana. Estes polímeros hidrofílicos inibidores de opsonização formam uma camada de superfície protectora a qual diminui significativamente a entrada de liposomas pelo sistema macróf ago-monócito ("MMS") e sistemas reticuloendotelial ("RES") ; por exemplo, como descrito na Patente E.U.A. N° 4,920,016, a qual está incorporada como referência. Os liposomas modificados com partes de molécula de inibição de opsonização permanecem assim em circulação durante muito mais tempo do que liposomas não modificados. Por esta razão, os ditos liposomas são por vezes chamados de liposomas "stealth".
Os liposomas stealth são conhecidos por se acumularem em tecidos alimentados por microvasculatura porosa ou "com fugas". Assim, o tecido alvo caracterizado pelos tais defeitos da microvasculatura, por exemplo tumores sólidos, vai acumular eficientemente estes liposomas; ver Gabizon, et al. (1988), P.N.A.S, USA, 18: 6949-53. Adicionalmente, a reduzida entrada pelo RES baixa a toxicidade dos liposomas stealth prevenindo a acumulação significativamente no fígado e baço. Assim, os liposomas da invenção são modificados com partes de moléculas inibidoras de opsonização podem entregar o presente siARN às células tumorais.
As partes de moléculas inibidoras de opsonização adequadas para modificar liposomas são preferencialmente polímeros hidrosolúveis com um peso molecular médio de cerca de 500 a cerca de 40,000 daltons, e mais preferencialmente de cerca de 2,000 a cerca de 20,000 daltons. Tais polímeros incluem derivados de glicol polietileno (PEG) ou glicol polipropileno (PPG); por exemplo, PEG metóxi ou PPG, e estirato de PEG ou PPG; polímeros sintéticos como poliacrilamida ou poli N-vinil pirrilidona; linear; ramificados, ou poliamidoaminas dendrimericas; ácidos poliacrílicos; poliálcoois, por exemplo, polivinilalcool e polixilitol aos quais são unidos quimicamente grupos amino ou carboxílico, assim como gangliosídeos, tais como gangliosídeo GMi. Os copolímeros de PEG, metóxi PEG, ou metroxi PPG, ou derivados destes, são também adequados. Adicionalmente, o polímero inibidor de opsonização pode ser um copolímero de bloqueio de PEG e um ácido poliamino, poliamidoamona polissacarídea, polietileneamina, ou polinucleotídeo. Os polímeros de inibição de opsonização podem também ser polissacarídeos naturais contendo aminoácidos ou ácidos carboxílicos, por exemplo ácido galactorónico, ácido manurónico, ácido hialurónico, ácido péctico, ácido neuramínico, ácido algínico, carragenina, polissacarídeos aminado ou oligossacarídeos (lineares ou ramificados); ou polissacarídeos ou oligossacarídeos carboxilados, por exemplo, reagidos com 16/188 derivados de ácidos carbónicos resultando na ligação de grupos carboxilicos.
Preferencialmente, a parte da molécula inibidora de opsonização é uma PEG, PPG, ou derivados destas. Os liposomas modificados com derivados de PEG ou PEG são por vezes chamados de "liposomas PEGilados". A parte de molécula inibidora da opsonização pode ser ligada à membrana do liposoma por qualquer uma de uma variedade de técnicas bem conhecidas. Por exemplo, um éster N-hidroxisuccinimida de PEG pode ser ligado a uma âncora lipossolúvel fosfatidiletanolamina, e depois ligado a uma membrana. Similarmente, um polímero dextrano pode ser derivado com uma âncora lipossolúvel estearilamina através da aminação redutiva usando Na(CN)BH3 e uma mistura de solvente tal como tetrahidrofurano e água num rácio de 30:12 a 60°C.
Os plasmídios recombinantes que expressam siARN da invenção são acima discutidos. Os tais plasmídios recombinantes podem também ser administrados directamente ou em conjunção com um reagente de entrega adequado, incluindo o reagente lipofílico Mirus Transit LT1; lipofectina, lipofectamina, cellfectina, policatiões (por exemplo, polilisina) ou liposomas. Os vectores recombinantes virais, os quais expressam o siARN da invenção são também acima discutidos, e métodos para entregar tais vectores para uma área de neovascularização num paciente estão inseridas nas competências da técnica. O siARN da invenção pode ser administrado ao sujeito através de qualquer meio adequado para entregar o siARN às células do tecido em ou perto da área de neovascularização. Por exemplo, o siARN pode ser administrado por gene gun, electroporação, ou por outro meio parental ou enteral de administração.
As formas de administração adequadas incluem a administração oral, rectal ou intra-nasal.
As formas de administração parental adequadas incluem administração intravascular (por exemplo, injecção bólus intravenosa, infusão intravenosa, injecção bólus intra-arterial, infusão intra-arterial e instilação de cateter na vasculatura) ; administração peri- e intra-tecido (por exemplo, injecção peri-tumoral e intra-tumoral, injecção intra-retinal ou subretiniana); injecção subcutânea ou deposição incluindo infusão subcutânea (tal como por bombas osmóticas); aplicação directa (por exemplo, tópica) na área em ou perto do sítio da neovascularização, por exemplo, por um cateter ou outro dispositivo de colocação (por exemplo, um pellet corneai ou um supositório, gotas oculares, ou um implante que compreende um material poroso, não poroso ou gelatinoso); e inalação. Os dispositivos adequados de colocação, incluem os implantes oculares descritos na Patente E.U.A. N°s 5,902,598 e 6,375,972, e os implantes oculares biodegradáveis descritos na Patente E.U.A. N° 6,331,313, os quais estão aqui incorporados para referência. Tais implantes oculares estão disponíveis pela Control Delivery Systems, Inc (Watertown, MA) e a Oculex Pharmaceuticals, Inc. (Sunnyvale, CA). 17/188
Numa realização preferida, injecções ou infusões do siARN são dadas em ou perto do sítio de neovascularização. Mais preferencialmente, o siARN é administrado topicamente no olho, por exemplo, em forma líquida ou gel na pálpebra inferior ou cul-de-sac conjuntival, assim como é reconhecido pela técnica (ver, por exemplo, Acheampong AA et al, 2002, Drug Metabol. and Disposition 30:-421-429, sendo que está incluída aqui como referência).
Normalmente, o siARN da invenção é administrado topicamente no olho em quantidades de cerca de 5 microlitros até cerca de 75 microlitros, por exemplo, desde cerca de 7 microlitros até cerca de 50 microlitros, preferencialmente de cerca de 10 microlitros até cerca de 30 microlitros. É compreendido que a instilação tópica de siARN no olho em volumes maiores que 75 microlitros pode resultar em perda de siARN do olho devido a derrames e perdas. Assim, é preferencial administrar uma concentração alta de siARN (por exemplo, 100-1000 nM) num volume o mais pequeno possível.
Uma forma de administração particularmente preferida é a administração intra-ocular. É compreendido que a administração intra-ocular do presente siARN pode ser conseguida por injecção ou administração directa (por exemplo, tópica) no olho, desde que a forma de administração permita que o siARN entre no olho. Adicionalmente às formas tópicas de administração no olho descritas acima, formas de administração intra-oculares adequadas incluem administração intravítrea, intra-retiniana, subretiniana, subtenoniana, peri- e retro-orbital, transcorneal e transescleral. Estas administrações intra-oculares estão dentro do âmbito da técnica; ver, por exemplo Acheampong AA et al, 2002, supra; e Bennett et al. (1996), Hum. Gene Ther. 7: 1763-1769 e Ambati J et al., 2002, Progress in Retinal and Eye Res. 21: 145-151, sendo que a totalidade está incorporada aqui como referência. O siARN da invenção pode ser administrado numa dose única ou em múltiplas doses. Onde a administração do siARN da invenção é por infusão, a infusão pode ser uma dose única ou pode ser administrada através de múltiplas infusões. A injecção do agente directamente no tecido está em ou perto do sítio de neovascularização preferida. As múltiplas injecções do agente no tecido em ou perto do sítio de neovascularização são particularmente preferidas.
Um especialista da técnica pode também facilmente determinar um regime de dosagem apropriada para administrar o siARN da invenção a um dado sujeito. Por exemplo o siARN pode ser administrado ao sujeito uma vez, tal como por uma única injecção ou deposição em ou perto do sítio de neovascularização. Alternativamente, o siARN pode ser administrado a um sujeito várias vezes ao dia ou semanalmente. Por exemplo, o siARN pode ser administrado a um sujeito uma vez por semana durante um período de cerca de vinte e oito semanas, mais preferencialmente cerca de sete a dez semanas. Num regime de dosagem preferido, o siARN é injectado em ou perto do sítio de neovascularização (por exemplo, intravitrealmente) uma vez por semana durante sete semanas. É compreendido que administrações periódicas do siARN da invenção por um período indefinido de tempo podem ser 18/188 necessárias para sujeitos que sofram de uma doença de neovascularização crónica, tal como ARMD molhado ou retinopatia diabética.
Onde um regime de dosagem compreende múltiplas administrações, é compreendido que a quantidade eficaz de siARN administrado ao sujeito pode compreender a quantidade total de siARN administrado ao longo do regime de dosagem total. 0 siARN da invenção é preferencialmente formulado como composições farmacêuticas antes de serem administradas a um sujeito, de acordo com técnicas conhecidas na arte. As composições farmacêuticas da presente invenção são caracterizadas como sendo pelo menos estéreis e isentas de pirogénio. Como aqui usado, "formulações farmacêuticas" incluem formulações para uso humano e veterinário. Métodos para preparar composições farmacêuticas da invenção estão dentro da competência da arte, por exemplo como descrito em Remington's Pharmaceutical Science, 17a ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa. (1985), que está aqui incorporado como referência.
As formulações farmacêuticas actuais compreendem um siARN da invenção (por exemplo, 0.1 a 90% por peso), ou um sal fisiologicamente aceitável do mesmo, misturado com um meio de transporte fisiologicamente aceite. Os meios de transporte fisiologicamente aceites preferidos são a água, água com solução padrão, soluções de soro fisiológico (por exemplo, soluções de soro fisiológico normais ou equilibradas tais como soluções de sal de Hank ou Earle) , 0.4% soro fisiológico, 0.3% glicina, ácido hialurónico e semelhantes.
As composições farmacêuticas da invenção podem também compreender excipientes farmacêuticos convencionais e/ou aditivos. Excipientes farmaceuticamente adequados incluem estabilizadores, antioxidantes, agentes de ajuste de osmolaridade, solução-padrão, e agentes de ajuste de pH. Aditivos adequados incluem soluções-padrão fisiologicamente biocompativeis (por exemplo, cloridrato de trometamina), adições de quelatos (tais como, por exemplo, DTPA ou DTPA-bisamida) ou complexos de quelato de cálcio (como por exemplo, cálcio DTPA, CaNaDTPA-bisamida), ou, opcionalmente adições de cálcio ou sais de sódio (por exemplo, cloro de cálcio, ascorbato de cálcio, gluconato de cálcio ou lactato de cálcio). As composições farmacêuticas da invenção podem ser embaladas para usar em forma liquida, ou podem ser liofilizadas.
Para administrações tópicas no olho, podem ser usados reagentes de entrega intra-ocular. Por exemplo, composições farmacêuticas da invenção para entrega intra-ocular tópica podem compreender soluções de soro fisiológico como acima descrito, melhoradores de penetração córnea, partículas insolúveis, vaselina ou outros unguentos baseados em gel, polímeros que aumentam de viscosidade após instilação no olho, ou polímeros mucoadesivos. Preferencialmente, o reagente de entrega intra-ocular aumenta a penetração corneai, ou prolonga a retenção pré-ocular do siARN através de efeitos de viscosidade ou por estabelecer interacções físico-químicas com a camada de mucina que cobre o epitélio corneai. 19/188
As partículas insolúveis adequadas para entrega intra-ocular tópica incluem partículas de fosfato de cálcio descritas na Pat. E.U.A. N°. 6,355, 271 de Bell et al., a qual está aqui incorporada como referência. Os polímeros adequados que experienciem um aumento de viscosidade após a instilação no olho incluem copolímeros de bloco polietileno polioxipropileno tal como poloxamer 407 (por exemplo, a uma concentração de 25%), acetoftalato de celulose (por exemplo, a uma concentração de 30%) , ou uma goma gelana de baixo acetil tal como Gelrite® (disponível a partir de CP Kelco, Wilmington, DE). Os polímeros mucoadesivos adequados incluem hidrocolóides com múltiplos grupos funcionais tais como carboxil, hidroxil, amido e/ou grupos sulfato; por exemplo hidroxipropilcelulose, ácido poliacrílico, glicóis polietileno de alto peso molecular (por exemplo,> 200,000 de peso molecular médio), dextranos, ácido hialurónico, ácido poligalacturónico, e xilocano. Os melhoradores de penetração corneai adequados incluem ciclodextrinas, cloretos de benzalcónio, éter lauril glicol polioxietileno (por exemplo, Brij® 35), éter estearil glicol polioxietileno (por exemplo, Brij® 78), éter oleílico glicol polioxietileno (por exemplo, Brij® 98), ácido tetraacético diamina etileno (EDTA), digitonina, taurocolato de sódio, saponinas e óleo de rícino polioxietilado, tal como Cremaphor EL.
Para composições sólidas, transportadores sólidos não tóxicos convencionais podem ser usados; por exemplo, manitol de tipo farmacêutico, lactose, amido, estearato de magnésio, sódio de sacarina, talco, celulose, glucose, sacarose, carbonato de magnésio, e semelhantes.
Por exemplo, uma composição farmacêutica sólida para administração oral pode compreender qualquer um dos transportadores e excipientes listados acima e 10-95%, preferencialmente 25%-75%, de um ou mais siARN da invenção. Uma composição farmacêutica para administração por aerossol (para inalação) pode compreender 0.01-20% por peso, preferencialmente 1%-10% por peso, de um ou mais siARN da invenção encapsulado num liposoma como descrito acima, e propelante. Um transportador também pode ser incluído como desejado; por exemplo, lecitina para administração intra-nasal. A invenção será agora ilustrada com os seguintes exemplos não limitativos. As experiências em animais descritas nos Exemplos 4-6 e 8-9 foram realizadas usando as guias institucionais da Universidade da Pensilvânia para o cuidado e uso de animais na pesquisa. A experiência animal descrita no Exemplo 10 será executada de acordo com os Procedimentos Operativos Padrão da Sierra Biomedical, 587 Dunn Circle, Sparks, NV, 89431.
Exemplo 1- Transfecção e Indução de Hipoxia In Vitro de siARN. siARN Design - Uma sequência 19 nt localizada em 329 nt a partir da terminação 5' do mARN FCVE humano foi escolhida como uma sequência alvo. AAACCTCACCAAGGCCAGCAC (SEQ ID NO: 51). Para assegurar que não foi contida no mARN de quaisquer outros genes, esta sequência alvo colocada no motor de pesquisa BLAST fornecido pelo NCBI. O uso do algoritmo BLAST é descrito em Altschul et al. (1990), J. Mol. Biol. 215: 403-410 and Altschul et al. (1997), Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402, sendo que a 20/188 totalidade está aqui incorporada como referência. Como não foi encontrado outro mARN contendo uma sequência alvo, um duplex siARN foi sintetizado para ter como alvo esta sequência (Dharmacon Research, Inc., Lafayette, CO). 0 duplex siARN tem as sequintes cadeias sentido e anti-sentido. sentido: 5'-accucaccaaggccagcacTT-3' (SEQ ID NO: 77). anti-sentido: 5'-gugcuggccuuggugagguTT-3' (SEQ ID NO: 78).
Em conjunto, as cadeias de siARN sentido e anti-sentido formaram um siARN de cadeia dupla 19 nt com extremidades 3' TT (mostradas em negrito) em cada cadeia. Este siARN foi denominado "Candidato 5" ou "Cand5." Outro siARN que tem como alvo mARN FCVE humano foi designado e testado como descrito para Cand5.
Um siARN cujo alvo é a seguinte sequência com mARN proteína fluorescente verde (GFP) foi usado com um controlo não específico. GGCTACGTCCAGCGCACC (SEQ ID NO: 79). 0 siARN foi comprado da Dharmacon (Lafayette, CO).
Transfecção siARN e Indução de Hipoxia In Vitro - As linhas de células humanas (293; Hela e ARPE19) foram separadamente cultivadas em 24 placas em 250 microlitros de meio completo DMEM um dia antes da transfecção, para que as células fossem -50% confluentes em todo o momento da transfecção. As células foram transfectadas com 2.5 nM SiARN Cand5, e sem siARN ou siARN não específico de 2.5 nM (com alvo GFP) como controlos. As transfecções foram realizadas em todas as linhas de células com o reagente "Transit TKO Transfection", como recomendado pelo fabricante (Mirus).
Vinte e quatro horas após a transfecção, foi induzida hipoxia nas células pela adição de mesilato de desferoxamina numa concentração final de 130 micromolar em cada poço. Vinte e quatro horas após a transfecção, o meio de cultivo das células foi removido de todos os poços, e um ELISA de FCVE humano (R&D Systems, Minneapolis, MN) foi realizado no meio de cultivo como descrito no protocolo ELISA FCVE humano Quantikine disponível a partir do fabricante, que está aqui incorporado na sua totalidade como referência.
Como pode ser visto na Fig. 1, a degradação de ARNi induzida pelo siARN Cand5 reduz significativamente a concentração de FCVE produzido pelo 293 hipóxico e células HeLa. Não houve essencialmente diferença na quantidade de FCVE produzido pelas células hipóxicas tratadas quer sem siARN ou o controlo de siARN não específico. Resultados semelhantes foram também vistos com células ARPE19 humanas tratadas sob as mesmas condições. Assim, a interferência do ARN com o siARN direccionado a FCVE interrompe a regulação ascendente do patogénio do FCVE em células humanas cultivadas in vitro. A experiência acima descrita foi repetida nas células NIH 3T3 do rato usando um siARN FCVE específico para rato (ver Exemplo 6 em baixo), e a produção de FCVE foi quantificada com um ELISA FCVE de um rato (R&D systems, Minneapolis, MN) como descrito no protocolo ELISA do FCVE do rato Quantikine disponível no fabricante, o qual está aqui incluído na sua totalidade como 21/188 referência. Foram obtidos resultados de forma similar àqueles reportados na Fig. 1 para as linhas de células humanas.
Exemplo 2 - Efeito de Aumentar a Concentração de siARN na
Produção de FCVE em Células Humanas Cultivadas. A experiência definida no Exemplo 1 foi repetida com células humanas 293, HeLa e ARPE19 usando um leque de concentrações de siARN de 10 nM a 50 nM. A capacidade do siARN Cand5 regular descendentemente a produção de FCVE aumentou moderadamente até perto de 13 nM siARN, mas foi visto um efeito de planalto acima desta concentração. Estes resultados mostram a natureza catalítica da degradação do ARNi mediado por siARN à medida que o efeito de planalto aparece para reflectir a produção de FCVE a partir das poucas células não transfectadas com o siARN. Para a maioria das células que foram transfectadas com o siARN, a produção de mARN FCVE aumentada induzida pela hipoxia é ultrapassada pela degradação induzida pelo siARN do mARN alvo em concentrações de siARN maiores do que cerca de 13 nM.
Exemplo 3- Especificidade da Direcção do siARN.
Os fibroblastos NIH 3T3 de rato foram cultivados em 24 placas sob condições padrão, de modo a que as células fossem -50%
confluentes um dia antes da transfecção. O siARN Cand5 FCVE humano foi transfectado para os fibroblastos NIH 3T3 de rato como no Exemplo 1. Foi então introduzida a hipóxia nas células transfectadas, e as concentrações de murina foram medidas por ELISA como no Exemplo 1. A sequência alvo do siARN Cand5 FCVE humano difere do mARN FCVE murina por um nucleótido. Como pode ser visto na Fig. 2, o siARN FCVE humano não tem efeito na capacidade das células do rato efectuarem uma regulação ascendente do FCVE de rato após hipóxia. Estes resultados mostram que a degradação do ARNi induzida por siARN é específica da sequência para dentro da resolução de um nucleótido.
Exemplo 4 - Entrega In Vitro do siARN em Células Epiteliais do Pigmento Retinal Murina
O FCVE é regulado ascendentemente nas células epiteliais do pigmento retinal (RPE) de pacientes humanos com degeneração macular relacionada com a idade (ARMD) . Para mostrar que o siARN funcional pode ser entregue às células RPE in vivo, o GFP foi expresso em retinas de rato com um adenovírus recombinante, e a expressão GFP foi silenciada com siARN. A experiência foi realizada da seguinte forma.
Um olho de cada cinco ratos adultos C57/Black6 (Jackson Labs, Bar Harbor, ME) foi injectado subretinalmente como descrito em Bennet et al. (1996), supra., com uma mistura que contém -lxlO8 partículas de adenovírus contendo eGFP accionado pelo promotor CMV e 2 0 picomoles de siARN direccionado a eGFP conjugado com reagente TKO transit (Mirus). 22/188
Como controlo positivo, os olhos contra-laterais foram injectados com uma mistura que contém ~lxl08 partículas de adenovírus com eGFP accionado pelo promotor CMV e 20 picomoles de siARN cujo alvo é FCVE humano conjugado com reagente TKO transit (Mirus). A expressão do GFP foi detectada por fundoscopia 48 horas e 60 horas após a injecção. Os animais foram sacrificados às 48 horas ou 60 horas após a injecção. Os olhos foram enucleados e fixados em 4% de paraf ormaldeído, e foram preparados como lâminas planas ou processados em criosecções de 10 mícron para microscopia fluorescente. Não foi detectada qualquer fluorescência GFP através de oftalmoscopia nos olhos que receberem o siARN cujo alvo foi o mARN GFP em 4 de 5 ratos, enquanto a fluorescência GFP foi detectada no olho contralateral o qual recebe o siARN não específico de controlo. Uma quantidade representativa única analisada por microscopia fluorescente mostrou uma falta de fluorescência GFP no olho que recebeu o siARN GFP em comparação com um olho que recebeu o siARN não-específico de controlo. As criosecções de outra retina mostraram que o adenovírus recombinante atinge eficientemente as células RPE, e quando o adenovírus é acompanhado pelo siARN direccionado ao mARN GFP, a expressão do transgene GFP é parada.
Enquanto houver alguma fluorescência GFP detectável por microscopia de fluorescência em olhos que receberam siARN direccionado a mARN GFP, a fluorescência é grandemente suprimida comparativamente aos controlos que receberam o siARN não-específico. Estas informações demonstram que o siARN funcional pode ser entregue in vivo às células RPE.
Exemplo 5 Expressão e Degradação do ARNi induzida por siARN In Vivo de FCVE Humano em Retinas Murina.
De modo a demonstrar que o siARN direccionado a FCVE funcionou in vivo, uma cassette de FCVE humano exógeno foi entregue às células RPE de rato através de um adenovírus por injecção subretiniana, como no Exemplo 4. Um olho recebeu siARN Cand5, e o olho contralateral recebeu siARN direccionado a mARN GFP. Os animais foram sacrificados 60 horas após a injecção, e os olhos injectados foram removidos e colocados em N2 líquido após enucleação. Os olhos foram então homogeneizados em solução tampão de lise, e a totalidade das proteínas foram medidas usando um teste de proteína Bradford padrão (Roche, Alemanha). As amostras foram normalizadas para o total de proteínas antes de executar o teste para FCVE humano através do ELISA, como descrito no
Exemplo 1. A expressão de FCVE foi de algum modo variável de animal para animal. A variabilidade de níveis FCVE correlacionado bem àqueles observados nas experiências GFP do Exemplo 4, e pode ser atribuído a algum erro de injecção, e capacidade diferencial do adenovírus para entregar o gene alvo em cada animal. Contudo, houve uma atenuação significante da expressão de FCVE em cada olho que recebeu siARN FCVE, como comparado aos olhos que receberam o siARN de controlo não específico (Figura 4) . Esta informação indica que o siARN Cand5 foi potente e eficaz em 23/188 silenciar a expressão de FCVE humano em células murina RPE in vivo.
Exemplo 6 - Inibição de Neovascularização Coroidal no Rato
Modelo CNV
Existem provas que a neovascularização coroidal em ARMD devido a uma regulação ascendente de FCVE nas células RPE: Esta condição patológica humana pode ser modelada no rato usando um laser para queimar um ponto na retina ("fotocoagulação por laser" ou "indução por laser"). Durante o processo de cura, acredita-se que o FCVE é regulado ascendentemente nas células RPE das regiões queimadas, levando à revascularização da coróide. Este modelo é chamado de modelo de neovascularização coroidal do rato ("CNV").
Para resgate do rato modelo CNV, o siARN de um rato foi criado de modo a incorporar uma alteração de um nucleótido a partir do siARN "Cand5" humano do Exemplo 1. 0 siARN do rato apontava especif icamente o mARN FCVE do rato na sequência AAACCUCACCAAAGCCAGCAC (SEQ ID NO: 80) . Outros siARN cujo alvo é o FCVE do rato foram também criados e testados. O siARN GFP usado num controlo não-especifico no Exemplo 1 foi também usado aqui como um controlo não-especifico.
Vinte e quatro horas após a indução por laser, um olho de cada um dos onze ratos adultos C57/Black6 (Jackson Labs, Bar Harbor, ME) foi injectado subretinalmente com uma mistura que contém ~lxl08 partículas de adenovírus com LacZ accionado pelo promotor CMV e 20 picomoles de siARN cujo alvo é FCVE de rato conjugado com reagente TKO transit (Mirus), como no Exemplo 4. Como um controlo, os olhos contra-laterais receberam uma mistura que contém ~lxl08 partículas de adenovírus contendo LacZ accionado pelo promotor CMV e 20 picomoles de siARN cujo alvo é GFP conjugado com reagente TKO transit (Mirus).
Catorze dias após o tratamento a laser, os ratos foram perfusados com fluoresceína e a área de neovascularização foi medida em redor dos pontos queimados. As áreas queimadas no olho contralateral foram usadas como controlo. O sítio de neovascularização em redor das zonas queimadas em animais que receberam siARN cujo alvo era FCVE de rato foram, em média, H da área das áreas de controlo. Esta informação suporta o uso de siARN dirigido a FCVE (também chamado de "siARN anti-FCVE" para terapia de ARMD.
Exemplo 7 - Geração de um Vector Virai Adeno-Associado para Expressão de siARN
Um plasmídio "intramolecular" que actua na mesma molécula para gerar um vector AAV recombinante para entregar um siARN da invenção foi gerado por subclonagem baseada em PCR, essencialmente como descrito em Samulski R et al. (1987), supra. O plasmídio intramolecular foi chamado de "pAAVsiARN."
Os genes rep e cap do psub201 foram substituídos com as seguintes sequências nesta ordem: Uma sequência de codificação de cadeia de ARN sentido 19 nt em conexão operável com uma sequência de terminação poliT sob o controlo de um promotor ARN 24/188 U6 humano, e uma sequência de codificação de cadeia de ARN anti-sentido 19 nt em conexão operável com uma sequência de terminação poliT sob o controlo de um promotor ARN U6 humano. Uma representação esquemática do pAAVsiARN é dada na Fig. 5.
Um vector siARN AAV recombinante foi obtido por transfectar pAAVsiARN em células 293 humanas previamente infectadas com adenovírus com EI eliminado, como descrito em Fisher KJ et al. (1996), supra. As funções rep e cap AAV foram fornecidas por um plasmídio intermolecular pAAV/Ad como descrito em Samulski R et al. (1989), supra. Os lotes de produção do vector siARN AAV recombinante foram titulados de acordo com o número de cópias de genoma/ml, como descrito em Fisher KL et al. (1996), supra.
Exemplo 8 - siARN Direccionado a FCVE Inibe a Neovascularização Coroidal Experimental A capacidade do siARN dirigido a FCVE murina para inibir a neovascularização coroidal experimental induzida por laser (CNV) em ratos foi testada do seguinte modo.
As retinas de ratos adultos fêmeas C57BL/6 foram fotocoaguladas por laser usando um díodo laser 810 nm (75 um, 140 mw, 0.10 segundos) (OcuLight Six; IRIS Medicai, Mountain View, CA). Três pontos laser foram aplicados em ambos os olhos de cada rato. Trinta e seis horas após a fotocoagulação por laser, um siARN cujo alvo é o FCVE de rato ("mFCVEl. siARN") , foi administrado subretinalmente ou intravitrealmente a um olho de cada rato. Para injecção subretinal, o siARN foi conjugado com reagente de transfecção TKO transit (Mirus) e misturado com adenovírus recombinante (rAdenovirus). Por injecção intravítrea, o siARN foi administrado na ausência do reagente de transfecção e rAdenovirus. Como um controlo, os olhos contra-laterais de cada rato receberam injecções subretinianas ou intravítreas de formulações idênticas com um siARN cujo alvo é GFP ("GFP1.siARN"), a qual não tem homologia ao FCVE de rato.
Catorze dias após o tratamento a laser, todos os animais foram perfusados com dextrano-FITC de alto peso molecular, foram preparadas lâminas planas coroidais como descrito acima, e as mesmas foram fotografadas e analisadas microscopicamente de um modo dissimulado. A área de CNV em cada lâmina plana foi medida com software Openlab (Improvision, Boston, MA) . As áreas médias de CNV nos olhos tratados com mFCVEl. siARN foram significativamente menores que aquelas áreas de olhos tratados com GFP1.siARN para administração subretiniana (Fig. 6A; P<0.003) e intravítrea (Fig. 6B; P<0.04).
Numa segunda experiência, as retinas de ratos fêmeas adultos C57BL/6 foram fotocoagulados a laser como descrito acima, e os animais foram divididos em grupos de controlo e teste. Um dia após a fotocoagulação a laser, foi administrado intravitrealmente soro fisiológico com tampão fosfatado aos animais do grupo de controlo, os quais foram perfusados com fluoresceína-dextrano 14 dias após o tratamento a laser. Foram então preparadas lâminas planas coroidais e as áreas de CNV em cada lâmina plana foram medidas como dito acima. 25/188
Catorze dias após a fotocoagulação a laser, o mFCVEl.siARN foi administrado por injecção intravitrea para um olho em cada rato no grupo de teste. Os olhos contra-laterais foram injectados com GFPl.siARN como um controlo. Os animais do grupo de teste foram perfusados com fluoresceina-dextrano de alto peso molecular 21 dias após o tratamento a laser. As lâminas planas coroidais foram então preparadas e as áreas de CNV em cada lâmina plana foram medidas como dito acima.
Nesta última experiência, o siARN anti-FCVE foi administrado durante o crescimento CNV, como oposto ao anterior crescimento CNV, e assim é mais representativo da condição de pacientes humanos que se apresentam com AMD molhado. Como pode ser visto na Fig. 6, as áreas médias de CNV nos olhos tratados com mFCVEl.siARN foram significativamente menores do que aquelas áreas medidas em olhos tratados com GFPl.siARN (Fig. 6C; P>0.05). As áreas médias de CNV em olhos tratados com mFCVEl.siARN ao dia 21 e olhos de controlo ("PBS") ao dia 14 não foram significativamente diferentes (Fig. 6C; P=0.469).
Os resultados destas experiências indicam que a degeneração macular relacionada com a idade pode ser tratada com siARN anti-FCVE.
Exemplo 9 - Interferência de ARN em FCVE Humano In Vivo Induzido por siARN anti-FCVE em Células RPE Murina. A capacidade do Cand5 siARN induzir ARNi de FCVE in vivo ao longo do tempo foi avaliada do seguinte modo. AAV.CMV.FCVE, os quais expressam o FCVE humano do vector virai adeno-associado, foram generosamente fornecidos pelo Dr. A. Auricchio. AAV.CMV.FCVE foi injectado subretinalmente e bilateralmente em olhos de cinco ratos C57B1/6. Vinte e oito dias após a injecção de AAV.CMV.FCVE, o siARN Cand5 foi administrado por injecção intravitrea em um olho e o GFPl.siARN de controlo foi administrado por injecção intravitrea no olho contralateral de cada animal.
No dia 0 (pré-injecção de siARN), e aos dias 6, 10 e 14 após a injecção de siARN, os ratos foram sacrificados e os olhos foram colocados em nitrogénio liquido após enucleação. Os olhos foram então homogeneizados em tampão de lise (Roche, Basel, Suiça), e a totalidade da proteína foi medida usando um teste Bradford, como no Exemplo 5 acima. Dois ratos foram usados para o dia 0 ponto temporal (n=2), e três ratos foram usados para os dias 6, 10 e 14 pontos temporais(n=3). As amostras foram normalizadas para o total de proteínas antes de testar a presença de FCVE humano através do ELISA, de acordo com as recomendações do fabricante (R&D Systems, Minneapolis, Minnesota). Uma percentagem de FCVE (%FCVE) para cada rato foi calculada como a concentração de FCVE ("[FCVE]") no olho injectado com Cand5 dividido pelo [FCVE] no olho injectado com GFPl.siARN multiplicado por 100.
Como pode ser visto na Figura 7, uma única injecção de Cand5 induziu uma diminuição mediada por ARNi nos níveis de FCVE de aproximadamente 70% ao dia 6 após a injecção de siARN, com uma redução da produção de FCVE de aproximadamente 35% continuando 26/188 até pelo menos ao dia 14 após a injecção de siARN. Estes resultados indicam que o siARN dirigido contra o FCVE humano é capaz de induzir o ARNi de FCVE humano in vivo durante um período continuado de tempo.
Exemplo 10 - Interferência ARN In Vivo de FCVE em Macacos com siARN Anti-FCVE É esperado que 10 macacos cynomolgus naive (Macaca fascicularis) sejam sujeitos a fotocoagulação a laser da retina de ambos os olhos para induzir a neovascularização coroidal ("CNV"). O seguinte representa o plano experimental pretendido para avaliar a capacidade do siARN Cand5 para reduzir a área de CNV nos macacos. Como a sequência ARN FCVE alvo do Cand5 é idêntica ao Homo sapiens e M. fascicularis, é esperado que o Cand5 induza ARNi de ARN FCVE M. fascicularis. A experiência será levada a cabo pela Sierra Biomedical ("SBi"), 587 Dunn Circle, Sparks, NV, 89431, de acordo com os Procedimentos Operacionais Padrão da SBi. Todos os macacos serão alvo de um pré-estudo de condição de saúde que consiste num exame físico, avaliações hematológica e oftalmológica, química de soro, e electroretinografia ("ERG") . Um pré-estudo de angiografia fluoresceínica dos olhos dos macacos também será executado, e a pressão intra-ocular será medida antes do estudo e em dois pontos temporais durante o período de estudo.
No dia zero, ambos os olhos de 10 macacos serão fotocoagulados por laser para induzir neovascularização coroidal. Os animais serão alvo de observações fora da jaula duas vezes ao dia e uma avaliação qualitativa uma vez ao dia em termos de consumo de alimentos ao longo da experiência. Aos 14 dias após indução a laser, os macacos receberão via intravítrea uma dose de 50 microlitros de uma formulação de Tratamento ou Controlo (ver em baixo) em cada olho, de modo aleatório. Por exemplo, um dado animal poderia receber uma dose de Tratamento 1 no olho direito, e uma dose de Controlo no olho esquerdo. Outro animal poderia receber uma dose de Tratamento 1 no olho direito, e uma dose de Tratamento 3 no olho esquerdo. É esperado que quatro olhos recebam cada formulação, para um total de 1 controlo e quatro grupos de tratamento de quatro olhos cada.
As formulações serão: Controlo - só solução de soro balanceada ("BSS"); Tratamento 1-1 mg/ml de Cand5 em BSS; Tratamento 2 -2.5 mg/ml de Cand5 em BSS; Tratamento 3-5 mg/ml Cand5 em BSS; e Tratamento 4-10 mg/ml Cand5 em BSS. Antes da injecção é esperado que o pH, osmolaridade, e a absorção a 260 mm de cada formulação sejão medidos.
Após a indução a laser, uma angiografia fluoresceínica será executada em ambos os olhos de cada macaco, semanalmente até à sétima semana após a indução a laser. Os macacos serão depois sacrificados, e uma necropsia completa será executada com uma recolha total do tecido (~45 tecido incluindo uma amostra vítrea) e avaliação histopatológica dos tecidos recolhidos. Será feita uma pré-necropsia a ERG. 27/188 É esperado que as áreas induzidas a laser do CNV sejam reduzidas após a administração do siARN Cand5, com as áreas CNV diminuindo com uma dose crescente de Candó. Contudo, um efeito de planalto, tal como é descrito acima no Exemplo 2, pode ser observado. Não é esperado que o siARN Cand5 afecte qualquer outro órgão ou tecido, excepto a coróide no olho.
LISTAGEM DA SEQUENCIA <110> The Trustees of the University of Pennsylvania Tolentino, Michael J.
Reich, Samuel Jotham
<120> Composições e Métodos para Inibição de siRNA de Angiogénese <130> 43826-1 PC <150> US 60/398,417 <151> 2002-07-24 <150> US 10/294,228 <151> 2002-11-14 <160> 864 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 2250
<212> DNA <213> Mus muscuius <400> 1 28/188 tgagccaggc tggcaggaag gagcctccct cagggtttcg ggaaccagac ctctcaccgg 60 aaagaccgat taaccatgtc accaccacgc catcatcgtc accgttgaca gaacagtcct 120 taatccagaa agcctgacat gaaggaagag gagactcttc gaggagcact ttgggtccgg 180 agggcgagac tccggcagac gcattcccgg gcaggtgacc aagcacggtc cctcgtggga 240 ctggattcgc cattttctta tatctgctgc taaatcgcca agcccggaag attagggttg 300 tttctgggat tcctgtagac acacccaccc acatacacac atatatatat attatatata 360 taaataaata tatatgtttt atatataaaa tatatatata ttcttttttt taaattaact 420 ctgctaatgt tattggtgtc ttcactggat atgtttgact gctgtggact tgtgttggga 480 ggaggatgtc ctcactcgga tgccgacatç ggagacaatg ggatgaaagg cttcagtgtg 540 gtctgagaga ggccgaagtc cttttgcctg ccggggagca agcaaggcca gggcacgggg 600 gcacattggc tcacttccag aaacacgaca aacccattcc tggccctgag tcaagaggac 660 agagagacag atgatgacac agaaagagat aaagatgccg gttccaacca gaagtttggg 720 gagcctcagg acatggcatg ctttgtggat ccccatgata gtctacaaaa gcaccccgcc 780 cctctgggca ctgcctggaa gaatcgggag cctggccagc cttcagctcg ctcctccact 840 tctgaggggc ctaggaggcc tcccacaggt gtcccggcaa gagaagacac ggtggtggaa 900 gaagaggcct ggtaatggcc cctcctcctg ggaccccttc gtcctctcct taccccacct 960 cctgggtaca gcccaggagg accttgtgtg atcagaccat tgaaaccact aattctgtcc 1020 ccaggagact tggctctgtg tgtgagtggc ttacccttcc tcatcttccc ttcccaaggc 1080 acagagcaat ggggcaggac ccgcaagccc ctcacggagg cagagaaaag agaaagtgtt 1140 ttatatacgg tacttattta atagcccttt ttaattagaa attaaaacag ttaatttaat 1200 taaagagtag ggtttttttc agtattcttg gttaatattt aatttcaact atttatgaga 1260 tgtatctctc gctctctctt atttgtactt atgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt 1320 gtgtgtgtgt gtatgaaatc tgtgtttcca atctctctct cccagatcgg tgacagtcac 1380 tagcttgtcc tgagaagata tttaattttg ctaacactca gctctgccct cccttgtccc 1440 caccacacat tcctttgaaa taaggtttca atatacattt acatactata tatatatttg 1500 gcaacttgtg tttgtatata aatatatata tatatatatg tttatgtata tatgtgattc 1560 tgataaaata gacattgcta ttctgttttt tatatgtaaa aacaaaacaa gaaaaatagâ 1620 gaattctaca tactaaatct ctctcctttt ttaattttaa tatttgttat catttattta 1680 ttggtgctac tgtttatccg taataattgt gggggaaaaa gatattaaca tcacgtcttt 1740 gtctctagag cagttttccg agatattccg tagtacatat ttatttttaa acagcaacaa 1800 agaaatacag atatatctta aaaaaaaagc attttgtatt aaagaattga attctgatct 1860 caaagctctc cctggtctct ccttctctcc tgggccctcc tgtctcgctt tccctcctcc 1920 tttggggtac atagtttttg tcttaggttt gagaagcagt ccctggagta gaatatgggg 1980 tgacccatcc attcctgggc ggaggggaga tggctccttt gccaagggtc ctcacactac 2040 gtggtactct gttccttgtc agacaaggat gggggcatgt ctccaggtgc taactggaga 2100 tcggagagag ctgttggctg cagctggcca ggatttgggc atgccgggga catgggaggc 2160 tgtgagccca gcatgcagtt tacttctggg tgctaaatgg aagagtccag taaaaagagt 2220 cttgcccatg ggattccatt ccgctttgtg 2250 <210> 2 <211> 444
<212> DNA <213> Homo sapiens ggtgcattgg agccttgcct acccatggca gaaggaggag tcagcgcagc tactgccatc tgagatcgag tacatcttca caatgacgag ggcctggagt gcggatcaaa cctcaccaag atgtgaatgc agaccaaaga gtga <400> 2 atgaactttc tgctgtcttg gccaagtggt cccaggctgc gtgaagttca tggatgtcta atcttccagg agtaccctga atgcgatgcg ggggctgctg aacatcacca tgcagattat agcttcctac agcacaacaa aaatgtgaca agccgaggcg tgctgctcta cctccaccat 60 ggcagaatca tcacgaagtg 120 caatcgagac cctggtggac 180 agccatcctg tgtgcccctg 240 gtgtgcccac tgaggagtcc 300 gccagcacat aggagagatg 360 aagatagagc aagacaagaa 420 444 29/188 < 210 > 3 <211> 576 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 atgaactttc tgctgtcttg ggtgcattgg gccaagtggt cccaggctgc acccatggca gtgaagttca tggatgtcta tcagcgcagc atcttccagg agtaccctga tgagatcgag atgcgatgcg ggggctgctg caatgacgag aacatcacca tgcagattat gcggatcaaa agcttcctac agcacaacaa atgtgaatgc aatccctgtg ggccttgctc agagcggaga tgtaaatgtt cctgcaaaaa cacagactcg gaacgtactt gcagatgtga caagccgagg agccttgcct tgctgctcta cctccaccat 60 gaaggaggag ggcagaatca tcacgaagtg 120 tactgccatc caatcgagac cctggtggac 180 tacatcttca agccatcctg tgtgcccctg 240 ggcctggagt gtgtgcccac tgaggagtcc 300 cctcaccaag gccagcacat aggagagatg 360 agaccaaaga aagatagagc aagacaagaa 420 aagcatttgt ttgtacaaga tccgcagacg 480 cgttgcaagg cgaggcagct tgagttaaac 540 cggtga 576 <210>4 <211>648
<212> DNA <213> Homo sapiens <400> 4 atgaactttc tgctgtcttg ggtgcattgg gccaagtggt cccaggctgc acccatggca gtgaagttca tggatgtcta tcagcgcagc atcttccagg agtaccctga tgagatcgag atgcgatgcg ggggctgctg caatgacgag aacatcacca tgcagattat gcggatcaaa agcttcctac agcacaacaa atgtgaatgc aaaaaatcag ttcgaggaaa gggaaagggg aagtcctgga gcgttccctg tgggccttgc gatccgcaga cgtgtaaatg ttcctgcaaa cttgagttaa acgaacgtac ttgcagatgt agccttgcct tgctgctcta cctccaccat 60 gaaggaggag ggcagaatca tcacgaagtg 120 tactgccatc caatcgagac cctggtggac 180 tacatcttca agccatcctg tgtgcccctg 240 ggcctggagt gtgtgcccac tgaggagtcc 300 cctcaccaag gccagcacat aggagagatg 360 agaccaaaga aagatagagc aagacaagaa 420 caaaaacgaa agcgcaagaa atcccggtat 480 tcagagcgga gaaagcattt gtttgtacaa 540 aacacagact cgcgttgcaa ggcgaggcag 600 gacaagccga ggcggtga 648 <210> 5 <211> 670 <212> DNA <213> Homo sapiens <400>5 30/188 gccttgctgc tctacctcca ccatgccaag tggtcccagg ctgcacccat ggcagaagga 60 ggagggcaga atcatcacga agtggtgaag ttcatggatg tctatcagcg cagctactgc 120 catccaatcg agaccctggt ggacatcttc caggagtacc ctgatgagat cgagtacatc 180 ttcaagccat cctgtgtgcc cctgatgcga tgcgggggct gctgcaatga cgagggcctg 240 gagtgtgtgc ccactgagga gtccaacatc accatgcaga ttatgcggat caaacctcac 300 caaggccagc acataggaga gatgagcttc ctacagcaca acaaatgtga atgcagacca 360 aagaaggata gagcaagaca agaaaaaaaa tcagttcgag gaaagggaaa ggggcaaaaa 420 cgaaagcgca agaaatcccg gtataagtcc tggagcgttt acgttggtgc ccgctgctgt 480 ctaatgccct ggagcctccc tggcccccat ccctgtgggc cttgctcaga gcggagaaag 540 catttgtttg tacaagatcc gcagacgtgt aaatgttcct gcaaaaacac agactcgcgt 600 tgcaaggcga ggcagcttga gttaaacgaa cgtacttgca gatgtgacaa gccgaggcgg 660 tgatgaatga 670 <210>6 <211> 1137 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 6 atgctcattg tccagactgg ggtcagatca gcaaacaaag ggcctctgat ggtgattgtt 60 gaatattgca aatatggaaa tctatccaac tacctcaaga gcaaatatga cttatttttt 120 ctcgacaagg atgtggcatc acacatggag cgtaagaaag aaaaaâtggâ gccaggcctg 180 gaacaaggca agaaaccaaa actagatagc atcaccagca gcgagagctt tgggagctcc 240 aagtttcagg aagataaaaa tctgagtgat gttgaggaag aggaggattc tgatggtttc 300 taccaggagc ccatcactat ggaagatctg atttcttaca gttttcaagt ggccagaggc 360 atgaagtttc tgtcttccag aaagtgcatt cattgggacc tggcagcaag aaacattctt 420 ttatctgaga acaatgtggt gaagatttgt gattttggcc ttgcccagga tatttacaag 480 aacgccgatt atgtgagaaa aggaggtggg tctccatacc caggagtgca aatggatgag 540 cacttctgca gttgcctgag ggaaggcatg aggatgagag ctgctgagta ctccactcct 600 gaaatctatc agatcatgct ggactgcagg cacaaagacc caaaagaaag gccaagattt 660 gcagaacttg tggaaaaact agaaaatagt gggtttacat actcaactcc tgccttctct 720 gaggacttct tcaaggaagg tatttcagct cccaagttta gttcaggaag ctctgatgat 780 gtcagatacg taaatgcttt caagttcatg agcctggaaa gaatcaaaac ctttgaagaa 840 cttttgccaa atgccacctc catgtttgat gactaccagg gggacagcag cgctctgctg 900 gcctctccca tgctgaagcg cttcaccagg actgacagca aacccaaggc ctcgctcaag 960 attgacttga gactaactag caaaagtaag aagtcggggc tttctgatgt cagcaggccc 1020 agtttctgcc attccaacag tgggcacatc agcaaaggca agggcaggtt cacctacgac 1080 aacgccgagc tggaaaggaa gacggcgtgc tgctccccgc ccctctggga gttgtag 1137 <210> 7 <211>5830
<212>DNA <213> Homo sapiens <400> 7 31/188 actgagtccc gggaccccgg gagagcggtc cgccgggcat cacttgcgcg ccgcagaaag ccggcacccg cagacgcccc tgcagccgcc gctcaactgt cctgcgctgc ggggtgccgc caggcgctgg gagaaagaac cggctcccga aggatgcaga gcaaggtgçt gctggccgtc gcctctgtgg gtttgcctag tgtttctctt atacttacaa ttaaggctaa tacaactctt gactggcttt ggcccaataa tcagagtggc agcgatggcc tcttctgtaa gacactcaca gcctacaagt gcttctaccg ggaaactgac gattacagat ctccatttat tgcttctgtt gagaacaaaa acaaaactgt ggtgattcca agtgtgtggt cgctgcgttt cctctgcctg 60 tccgtctggc agcctggata tcctctccta 120 ggtcggcgcc cgggctccct agccctgtgc 180 gagttccacc tccgcgcctc cttctctaga 240 gttctgggca tttcgcccgg ctcgaggtgc 300 gccctgtggc tctgcgtgga gacccgggcc 360 gatctgccca ggctcagcat acaaaaagac 420 caaattactt gcaggggaca gagggacttg 480 agtgagcaaa gggtggaggt gactgagtgc 540 attccaaaag tgatcggaaa tgacactgga 600 ttggcctcgg tcatttatgt ctatgttcaa 660 agtgaccaac atggagtcgt gtacattact 720 tgtctcgggt ccatttcaaa tctcaacgtg 780 32/188 tcactttgtg caagataccc agaaaagaga tttgttcctg atggtaacag aatttcctgg 840 gacagcaaga agggctttac tattcccagc tacatgatca gctatgctgg catggtcttc 900 tgtgaagcaa aaattaatga tgaaagttac cagtctatta tgtacatagt tgtcgttgta 960 gggtatagga tttatgatgt ggttctgagt ccgtctcatg gaattgaact atctgttgga 1020 gaaaagcttg tcttaaattg tacagcaaga actgaactaa atgtggggat tgacttcaac 1080 tgggaatacc cttcttcgaa gcatcagcat aagaaacttg taaaccgaga cctaaaaacc 1140 cagtctggga gtgagatgaa gaaatttttg agcaccttaa ctatagatgg tgtaacccgg 1200 agtgaccaag gattgtacac ctgtgcagca tccagtgggc tgatgaccaa gaagaacagc 1260 acatttgtca gggtccatga aaaacctttt gttgcttttg gaagtggcat ggaatctctg 1320 gtggaagcca cggtggggga gcgtgtcaga atccctgcga agtaccttgg ttacccaccc 1380 ccagaaataa aatggtataa aaatggaata ccccttgagt ccaatcacac aattaaagcg 1440 gggcatgtac tgacgattat ggaagtgagt gaaagagaca caggaaatta cactgtcatc 1500 cttaccaatc ccatttcaaa ggagaagcag agccatgtgg tctctctggt tgtgtatgtc 1560 ccaccccaga ttggtgagaa atctctaatc tctcctgtgg attcctacca gtacggcacc 1620 actcaaacgc tgacatgtac ggtctatgcc attcctcccc cgcatcacat ccactggtat 1680 tggcagttgg aggaagagtg cgccaacgag cccagccaag ctgtctcagt gacaaaccca 1740 tacccttgtg aagaatggag aagtgtggag gacttccagg gaggaaataa aattgaagtt 1800 aataaaaatc aatttgctct aattgaagga aaaaacaaaa ctgtaagtac ccttgttatc 1860 caagaggcaa atgtgtcagc tttgtacaaa tgtgaagcgg tcaacaaagt cgggagagga 1920 gagagggtga tctccttcca cgtgaccagg ggtcctgaaa ttactttgca acctgacatg 1980 cagcccactg agcaggagag cgtgtctttg tggtgcactg cagacagatc tacgtttgag 2040 aacctcacat ggtacaagct tggcccacag cctctgccaa tccatgtggg agagttgccc 2100 .acacctgttt gcaagaactt ggatactctt tggaaattga atgccaccat gttctctaat 2160 agcacaaatg acattttgat catggagctt aagaatgcat ccttgcagga ccaaggagac 2220 tatgtctgcc ttgctcaaga caggaagacc aagaaaagac attgcgtggt caggcagctc 2280 acagtcctag agcgtgtggc acccacgatc aeaggaaacc tggagaatca gacgacaagt 2340 attggggaaa gcatcgaagt ctcatgcacg gcatctggga atccccctcc acagatcatg 2400 tggtttaaag ataatgagac ccttgtagaa gactcaggca ttgtattgaa ggatgggaac 2460 cggaacctca ctatccgcag agtgaggaag gaggacgaag gcctctacac ctgccaggca 2520 tgcagtgttc ttggctgtgc aaaagtggag gcatttttca taatagaagg tgcccaggaa 2580 aagacgaact tggaaatcat tattctagta ggcacggcgg tgattgccat gttcttctgg 2640 ctacttcttg tcatcatcct acggaccgtt aagcgggcca atggagggga actgaagaca 2700 ggctacttgt ccatcgtcat ggatccagat gaactcccat tggatgaaca ttgtgaacga 2760 ctgccttatg atgccagcaa atgggaattc cccagagacc ggctgaagct aggtaagcct 2820 cttggccgtg gtgcctttgg ccaagtgatt gaagcagatg cctttggaat tgacaagaca 2880 gcaacttgca ggacagtagc agtcaaaatg ttgaaagaag gagcaacaca cagtgagcat 2940 cgagctctca tgtctgaact caagatcctc attcatattg gtcaccatct caatgtggtc 3000 aaccttctag gtgcctgtac caagccagga gggccactca tggtgattgt ggaattctgc 3060 aaatttggaa acctgtccac ttacctgagg agcaagagaa atgaatttgt cccctacaag 3120 accaaagggg cacgattccg tcaagggaaa gactacgttg gagcaatccc tgtggatctg 3180 aaacggcgct tggacagcat caccagtagc cagagctcag ccagctctgg atttgtggag 3240 gagaagtccc tcagtgatgt agaagaagag gaagctcctg aagatctgta taaggacttc 3300 ctgaccttgg agcatctcat ctgttacagc ttccaagtgg ctaagggcat ggagttcttg 3360 gcatcgcgaa agtgtatcca cagggacctg gcggcacgaa atatcctctt atcggagaag 3420 aacgtggtta aaatctgtga ctttggcttg gcccgggata tttataaaga tccagattat 3480 gtcagaaaag gagatgctcg cctccctttg aaatggatgg ccccagaaac aatttttgac 3540 agagtgtaca caatecagag tgacgtctgg tcttttggtg ttttgctgtg ggaaatattt 3600 tccttaggtg cttctccata tcctggggta aagattgatg aagaattttg taggcgattg 3660 aaagaaggaa ctagaatgag ggcccctgat tatactacac cagaaatgta ccagaccatg 3720 ctggactgct ggcacgggga gcccagtcag agacccacgt tttcagagtt ggtggaacat 3780 ttgggaaatc tcttgcaagc taatgctcag caggatggca aagactacat tgttcttccg 3840 atatcagaga ctttgagcat ggaagaggat tctggactct ctctgcctâC ctcacctgtt 3900 tcctgtatgg aggaggagga agtatgtgac cccaaattcc attatgacaa cacagcagga 3960 atcagtcagt atctgcagaa cagtaagcga aagagccggc ctgtgagtgt aaaaacattt 4020 gaagatatcc cgttagaaga accagaagta aaagtaatcc cagatgacaa ccagacggac 4080 agtggtatgg ttcttgcctc agaagagctg aaaactttgg aagacagaac caaattatct 4140 ccatcttttg gtggaatggt gcccagcaaa agcagggagt ctgtggcatc tgaaggctca 4200 aaccagacaa gcggctacca gtccggatat cactccgatg acacagacac caccgtgtac 4260 tccagtgagg aagcagaact tttaaagctg atagagattg gagtgcaaac cggtagcaca 4320 gcccagattc tccagcctga ctcggggacc acactgagct ctcctcctgt ttaaaaggaa 4380 gcatccacac cccaactccc ggacatcaca tgagaggtct gctcagattt tgaagtgttg 4440 33/188 ttctttccac cagcaggaag tagccgcatt tgattttcat ttcgacaaca gaaaaaggac 4500 ctcggactgc agggagccag tcttctaggc atatcctgga agaggcttgt gacccaagaa 4560 tgtgtctgtg tcttctccca gtgttgacct gatcctcttt tttcattcat ttaaaaagca 4620 ttatcatgcc cctgctgcgg gtctcaccat gggtttagaa caaagagctt caagcaatgg 4680 ccccatcctc aaagaagtag cagtacctgg ggagctgaca cttctgtaaa actagaagat 4740 aaaccaggca acgtaagtgt tcgaggtgtt gaagatggga aggatttgca gggctgagtc 4800 tatccaagag gctttgttta ggacgtgggt cccaagccaa gccttaagtg tggaattcgg 4860 attgatagaa aggaagacta acgttacctt gctttggaga gtactggagc ctgcáaatgc 4920 attgtgtttg ctctggtgga ggtgggcatg gggtctgttc tgaaatgtaa agggttcaga 4980 cggggtttct ggttttagaa ggttgcgtgt tcttcgagtt gggctaaagt agagttcgtt 5040 gtgctgtttc tgactcctaa tgagagttcc ttccagaccg ttagctgtct ccttgccaag 5100 ccccaggaag aaaatgatgc agctctggct ccttgtctcc caggctgatc ctttattcag 5160 aataccacaa agaaaggaca ttcagctcaa ggctccctgc cgtgttgaag agttctgact 5220 gcacaaacca gcttctggtt tcttctggaa tgaataccct catatctgtc ctgatgtgat 5280 atgtctgaga ctgaatgcgg gaggttcaat gtgaagctgt gtgtggtgtc aaagtttcag 5340 gaaggatttt acccttttgt tcttccccct gtccccaacc cactctcacc ccgcaaccca 5400 tcagtatttt agttatttgg cctctactcc agtaaacctg attgggtttg ttcactctct 5460 gaatgattat tagccagact tcaaaattat tttatagccc aaattataac atctattgta 5520 ttatttagac ttttaacata tagagctatt tctactgatt tttgcccttg ttctgtcctt 5580 tttttcaaaa aagaaaatgt gttttttgtt tggtaccata gtgtgaaatg ctgggaacaa 5640 tgactataag acatgctatg gcacatatat ttatagtctg tttatgtaga aacaaatgta 5700 atatattaaa gccttatata taatgaactt tgtactattc acattttgta tcagtattat 5760 gtagcataac aaaggtcata atgctttcag caattgatgt cattttatta aagaacattg 5820 aaaaacttga 5830
<210> 8 <211> 19 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 8 tcatcacgaa gtggtgaag 19
<210> 9 <211> 21 <212> RNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 9 ucaucacgaa guggugaagu u 21
<210> 10 <211> 21 <212> RNA <213> Sequência artificial <22G> <223> Sequência de direccionamento <400> 10 cuucaccacu ucgugaugau u 21 34/188
<210>11 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <221> misc_RNA <222> (1) . . . ¢19) <223> ribonucieótido <221> misc feature <222> (20)... (21) <223> deoxiribonucieótido <400> 11 ucaucacgaa guggugaagt t 21 <210>12 <211>21
<212>DNA <213>Sequência artificial <220>
<223> Sequência de direccionamento <221> misc_RNA <222> (1) · .. (19) <223> ribonucleótidos <221> misc feature <222> (20) ... (21) <223> deoxiribonucieótidos <400> 12 cuucaccacu ucgugaugat t 21 <210>13 <211>21
<212>DNA <213>Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 13 aacgtacttg cagatgtgac a 21 <210>14 <211>19
<212>DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 14 gttcatggat gtctatcag 19 <210>15 <211>19
<212>DNA <213>Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 15 35/188 tcgagaccct ggtggacat 19 <210>16 <211>19
<212>DNA <213>Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 16 tgacgagggc ctggagtgt 19
<210>17 <211>19 <212>DNA <213>Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 17 tgacgagggc ctggagtgt 19 <210>18 <211>19
<212>DNA <213>Sequência artificial <220> <223>Sequência de direccionamento <400> 18 catcaccatg cagattatg 19
<210>19 <211>19 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 19 acctcaccaa ggccagcac 19
<210> 20 <211> 19 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 20 ggccagcaca taggagaga 19 <210>21 <211>19
<212>DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 21 caaatgtgaa tgcagacca 19 36/188 <210>22 <211>19
<212>DNA <213>Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 22 atgtgaatgc agaccaaag 19 <210>23 <211>19
<212>DNA <213>Sequência artificial <220> <223>Sequência de direccionamento <400> 23 tgcagaccaa agaaagata 19 <210> <211> 24 19 <212> <213> DNA Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 24 agaaagatag agcaagaca 19 <210> <211> 25 19 <212> <213> DNA Sequência artificial <400> 25 gaaagataga gcaagacaa 19 <210> <211> 26 19 <212> <213> DNA Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 26 gatagagcaa gacaagaaa 19 <210> <211> 27 19 <212> <213> DNA Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 27 gacaagaaaa tccctgtgg 19 <210>28 <211>19 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 28 gaaaatccct gtgggcctt 19 <210>29
<211>19 <212> DNA 37/188 <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 29 aatccctgtg ggccttgct 19 <210>30 <211>19 <212> DNA <213> Sequência artificial <400> 30 tccctgtggg ccttgctca 19 <210>31 <211>19 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 31 gcatttgttt gtacaagat 19 <210>32 <211>19 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 32 19 gatccgcaga cgtgtaaat 19 <210>33 <211>19 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 33 19 atgttcctgc aaaaacaca 19 <210>34 <211>19 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 34 19 tgttcctgca aaaacacag 19 38/188 <210>35 <211>19 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 35 19 aaacacagac tcgcgttgc 19
<210>36 <211>19 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 36 19 aacacagact cgcgttgca 19
<210>3 7 <211>19 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 37 acacagactc gcgttgcaa 19
<210>38 <211>19 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 38 cacagactcg cgttgcaag 19
<210>39 <211>19 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 39 ggcgaggcag cttgagtta 19
<210>40 <211>19 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 40 acgaacgtac ttgcagatg 19 <210> <211> 41 19 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 41 cgaacgtact tgcagatgt 19 39/188 <210>42 <211>19 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 42 cgtacttgca gatgtgaca 19 <210>43 <211>19 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 43 gtggtcccag gctgcaccc 19 <210>44 <211>19 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 44 ggaggagggc agaatcatc 19 <210>45 <211>19 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 45 gtggtgaagt tcatggatg 19 <210>46 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 46 aatcatcacg aagtggtgaa g 21
<210>47 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 47 40/188 21 aagttcatgg atgtctatca g <210>48 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 48 aatcgagacc ctggtggaca t 21
<210>49 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 49 21 aatgacgagg gcctggagtg t 21
<210>50 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 50 21 aacatcacca tgcagattat g 21
<210>51 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 51 21 aaacctcacc aaggccagca c 21 <210> 52 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 52 21 aaggccagca cataggagag a 21 <210>53 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 53 21 aacaaatgtg aatgcagacc a 21
<210>54 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial 41/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 54 aaatgtgaat gcagaccaaa g 21 <210>55 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 55 aatgcagacc aaagaaagat a 21 <210>56 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 56 aaagaaagat agagcaagac a 21 <210> 57 <211> 21 <212> <213> DNA Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 57 aagaaagata gagcaagaca a 21
<210>58 <211>23 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 58 aagatagagc aagacaagaa aat 23
<210>59 <211>23 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 59 aagacaagaa aatccctgtg ggc 23
<210>60 <211>23 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 60 aagaaaatcc ctgtgggcct tgc 23
<210>61 <211>23 <212> DNA 42/188 <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 61 aatccctgtg ggccttgctc aga 23
<210>62 <211>23 <212> DNA <213> Sequência artificial 43/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 62 aagcatttgt ttgtacaaga tcc 23 <210>63 <211>23 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 63 aagatccgca gacgtgtaaa tgt 23 <210>64 <211>23 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 64 aaatgttcct gcaaaaacac aga 23 <210>65 <211>23 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 65 aatgttcctg caaaaacaca gac 23 <210>66 <211>23 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 66 aaaaacacag actcgcgttg caa 23 <210>6 7 <211>23 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 67 aaaacacaga ctcgcgttgc aag 23 <210> 68 44/188 <211> 23 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 68 aaacacagac tcgcgttgca agg 23 <210> 69 <211> 23 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 69 aacacagact cgcgttgcaa ggc 23 <210>70 <211>23 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 70 aaggcgaggc agcttgagtt aaa 23 <210>71 <211>23 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 71 aaacgaacgt acttgcagat gtg 23 <210>72 <211>23 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 72 aacgaacgta cttgcagatg tga 23
<210>73 <211>23 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 73 aagtggtccc aggctgcacc cat 23 45/188 <210>74 < 211 > 2 3 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 74 aaggaggagg gcagaatcat cac 23
<210>75 <211>23 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 75 aagtggtgaa gttcatggat gtc 23
<210>76 <211>23 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 76 aaaatccctg tgggccttgc tca 23
<210>77 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <22G> <223> Sequência de direccionamento <221> <222> <223> misc_RNA (1)...(19) ribonúcleotidos <221> <222> <223> misc feature (20)... (21) deoxiribonucleótidos <400> 77 accucaccaa ggccagcact t 21 <210>78 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <221> misc_RNA <222> (D - - - (19) <223> ribonucleótidos <221> misc_feature <222> (20) ... (21) <223> deoxiribonucleótidos <400> 78 gugcuggccu uggugaggut t 21 46/188 <210>79 <211>18 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 79 ggctacgtcc agcgcacc 18 <210>80 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 80 aaaccucacc aaagccagca c 21 <210>81 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 81 ggcagaatca tcacgaagtg g 21 <210> <211> 82 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 82 cctggtggac atcttccagg a 21 <210>83 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 83 gagatcgagt acatcttcaa g 21 <210>84 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> 47/188 <223> Sequência de direccionamento <400> 84 tggagtgtgt gcccactgag g 21 <210>85 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 85 gagcttccta cagcacaaca a 21 <210>86 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 86 ttgctcagag cggagaaagc a 21 <210> 87 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 87 cacacactcg cgttgcaagg c 21 <210> 88 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 88 tcaccatgca gattatgcgg a 21 <210>89 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 89 tagagcaaga caagaaaatc c 21 48/188 <210>90 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 90 ccgcagacgt gtaaatgttc c 21 <210>91 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 91 aagcaggcca gacactgcat c 21 <210>92 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 92 aatgcagggg ggaagcagcc c 21 <210>93 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 93 aagcagccca taaatggtct t 21 <210>94 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 94 aaatggtctt tgcctgaaat g 21 <210>95 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento 49/188 <400> 95 aatggtcttt gcctgaaatg g 21 <210>96 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 96 aaatggtgag taaggaaagc g 21 <210>9 7 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 97 aatggtgagt aaggaaagcg a 21
<210>98 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 98 aaggaaagcg aaaggctgag c 21 <210>99 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 99 aaagcgaaag gctgagcata a 21 <210> 100 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 100 aagcgaaagg ctgagcataa c 21 <210> 101 <211> 21
<212> DNA 50/188 <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 101 aaaggctgag cataactaaa t 21 <210> 102 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 102 aaggctgagc ataactaaat c 21 <210> <211> 103 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 103 aactaaatct gcctgtggaa g 21 <210> 104 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 104 aaatctgcct gtggaagaaa t 21 <210> 105 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 105 aatctgcctg tggaagaaat g 21 <210> 106 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 106 51/188 21 aagaaatggc aaacaattct g <210> 107 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 107 aaatggcaaa caattctgca g 21 <210> 108 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 108 aatggcaaac aattctgcag t 21 <210> 109 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 109 aaacaattct gcagtacttt a 21 <210> 110 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 110 aacaattctg cagtacttta a 21 <210> 111 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 111 aattctgcag tactttaacc t 21 <210> 112 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 52/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 112 aaccttgaac acagctcaag c 21 <210> 113 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 113 aacacagctc aagcaaacca c 21 <210> 114 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 114 aagcaaacca cactggcttc t 21 <210> 115 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 115 aaaccacact ggcttctaca g 21 <210> 116 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 116 aaccacactg gcttctacag c 21 <210> 117 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 117 aaatatctag ctgtacctac t 21 53/188 <210> 118 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 118 aatatctagc tgtacctact t 21 <210> <211> 119 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 119 aaagaagaag gaaacagaat c 21 <210> 120 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 120 aagaagaagg aaacagaatc t 21 <210> 121 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 121 aagaaggaaa cagaatctgc a 21 <210> 122 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 122 aaggaaacag aatctgcaat c 21 <210> 123 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 54/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 123 aaacagaatc tgcaatctat a 21 <210> 124 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 124 aacagaatct gcaatctata t 21 <210> 125 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 125 aatctgcaat ctatatattt a 21 <210> 126 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 126 aatctatata tttattagtg a 21 <210> 127 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 127 aaatccccga aattatacac a 21 <210> 128 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 128 aatccccgaa attatacaca t 21 55/188 <210> 129 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 129 aaattataca catgactgaa g 21 <210> 130 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 130 aattatacac atgactgaag g 21 <210> 131 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 131 aaggaaggga gctcgtcatt c 21 <210> 132 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 132 aagggagctc gtcattccct g 21 <210> 133 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 133 aacatcactg ttactttaaa a 21 <210> 134 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 56/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 134 aaaaaagttt ccacttgaca c 21
<210>135 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 135 21 aaaaagtttc cacttgacac t 21 <210> 136 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 136 aaaagtttcc acttgacact t 21 <210> 137 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 137 aaagtttcca cttgacactt t 21 <210> 138 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 138 aagtttccac ttgacacttt g 21 <210> 139 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 139 aaaacgcata atctgggaca g 21 <210> 140 <211> 21
<212>DNA <213> Sequência artificial 57/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 140 aaacgcataa tctgggacag t 21 <210> 141 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 141 aacgcataat ctgggacagt a 21 <210> 142 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 142 aatctgggac agtagaaagg g 21 <210> 143 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 143 aaagggcttc atcatatcaa a 21 <210> 144 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 144 aagggcttca tcatatcaaa t 21 <210> 145 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 145 aaatgcaacg tacaaagaaa t 21 <210> 146 <211> 21 58/188
<212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 146 aatgcaacgt acaaagaaat a 21 <210> 147 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 147 21 aacgtacaaa gaaatagggc t 21 <210> 148 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 148 21 aaagaaatag ggcttctgac c 21 <210> 149 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 149 21 aagaaatagg gcttctgacc t 21 <210> 150 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 150 21 aaatagggct tctgacctgt g 21 <210> 151 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 151 21 aatagggctt ctgacctgtg a 21 59/188 <210> 152 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 152 aagcaa .cagt caatgggcat t 21 <210> 153 <211 > 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 153 aacagtcaat gggcatttgt a 21 <210> 154 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 154 aatgggcatt tgtataagac a 21 <210> 155 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 155 aagacaaact atctcacaca t <210> 156 <211> <212> <213> 21 DNA Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 156 aaactatctc acacatcgac a 21 < 210 > 157 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento 60/188 <400> 157 aactatctca cacatcgaca a 21 <210> 158 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 158 aaaccaatac aatcatagat g 21 <210> 159 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 159 aaccaataca atcatagatg t 21 <210> 160 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 160 aatacaatca tagatgtcca a 21 <210> 161 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 161 aatcatagat gtccaaataa g 21 <210> 162 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 162 aaataagcac accacgccca g 21 61/188 <210> 163 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 163 aataagcaca ccacgcccag t 21 <210> 164 <211 > 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 164 aagcacacca cgcccagtca a 21 <210> 165 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 165 aaattactta gaggccatac t 21 <210> 166 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 166 aattac :ttag aggccatact c 21 <210> 167 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 167 aattgtactg ctaccactcc c 21 <210> 168 <211 > 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento 62/188 <400> 168 aacacgagag ttcaaatgac c 21 <210> 169 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 169 aaatgacctg gagttaccct g 21 <210> 170 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 170 aatgacctgg agttaccctg a 21 <210> 171 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 171 aaaaaaataa gagagcttcc g 21 <210> 172 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 172 aaaaaataag agagcttccg t 21 <210> 173 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 173 aaaaataaga gagcttccgt a 21 63/188 <210> 174 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 174 aaaataagag agcttccgta a 21 <210> 175 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 175 aaataagaga gcttccgtaa g 21 <210> 176 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 176 aataagagag cttccgtaag g 21 <210> 177 <211> 21
<212>DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 177 aagagagctt ccgtaaggcg a 21 <210> 178 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 178 aaggcgacga attgaccaaa g 21 <210> 179 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento 64/188 <400> 179 aattgaccaa agcaattccc a 21 <210> 180 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 180 aaagcaattc ccatgccaac a 21 <210> 181 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 181 aagcaattcc catgccaaca t 21 <210> 182 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 182 aattcccatg ccaacatatt c 21 <210> 183 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 183 aacatattct acagtgttct t 21 <210> 184 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 184 aaaatgcaga acaaagacaa a 21 65/188 <210> 185
<211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 185 aatgcagaac aaagacaaag g 21 <210> 186 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 186 aacaaagaca aaggacttta t 21 <210> 187 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 187 aaagac :aaag gactttatac t 21 <210> 188 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 188 aagacaaagg actttatact t 21 <210> 189 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 189 aaaggacttt atacttgtcg t 21
<210> 190 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> 66/188 <223> Sequência de direccionamento <400> 190 aaggacttta tacttgtcgt g 21 <210> 191 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 191 aaggagtgga ccatcattca a 21 <210> 192 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 192 aaatctgtta acacctcagt g 21 <210> <211> <212> 193 21 DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 193 aatctgttaa cacctcagtg c 21 <210> 194 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 194 aacacctcag tgcatatata t 21 <210> 195 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 195 aaagcattca tcactgtgaa a 21 67/188 <210> 196 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 196 aagcattcat cactgtgaaa c 21 <210> 197 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 197 aaacatcgaa aacagcaggt g 21 <210> 198 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 198 aacatcgaaa acagcaggtg c 21 <210> 199 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 199 aaaacagcag gtgcttgaaa c 21 <210> 200 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 200 aaacagcagg tgcttgaaac c 21 <210> 201 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> 68/188 <223> Sequência de direccionamento <400> 201 aacagcaggt gcttgaaacc g 21 <210> 202 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 202 aaaccgtagc tggcaagcgg t 21 <210> 203 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 203 aaccgtagct ggcaagcggt c 21 <210> 204 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 204 aaccgtagct ggcaagcggt c 21 <210> 205 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 205 aaagtgaagg catttccctc g 21 <210> 206 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 206 aagtgaaggc atttccctcg c 21 69/188 <210> 207 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 207 aaggcatttc cctcgccgga a 21 <210> 208 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 208 aagttgtatg gttaaaagat g 21 <210> <211> 209 21 <212> DNA <213> <220> Sequência artificial <223> Sequência de direccionamento <400> 209 aaaagatggg ttacctgcga c 21 <210> 210 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 210 aaagatgggt tacctgcgac t 21 <210> 211 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 211 aagatgggtt acctgcgact g 21 <210> 212 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento 70/188 <400> 212 aaatctgctc gctatttgac t 21 <210> 213 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 213 aatctgctcg ctatttgact c 21 <210> <211> 214 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 214 aattatcaag gacgtaactg a 21 <210> 215 <211> 21 <212> DNA <213> <220> Sequência artificial <223> Sequência de direccionamento <400> 215 aaggacgtaa ctgaagagga t 21 <210> 216 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 216 aactgaagag gatgcaggga a 21 <210> 217 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 217 aagaggatgc agggaattat a 21 <210> 218 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 71/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 218 aattatacaa tcttgctgag c 21 <210> 219 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 219 aatcttgctg agcataaaac a 21 <210> 220 <211> 21 <212> <213> DNA Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 220 aaaacagtca aatgtgttta a 21 <210> 221 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 221 aaacagtcaa atgtgtttaa a 21 <210> 222 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 222 aacagtcaaa tgtgtttaaa a 21 <210> 223 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 223 aaatgtgttt aaaaacctca c 21 72/188 <210> 224 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 224 aatgtgttta aaaacctcac t 21 <210> 225 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 225 aaaaacctca ctgccactct a 21 <210> 226 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 226 aaaacctcac tgccactcta a 21 <210> 227 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 227 aaacctcact gccactctaa t 21 <210> 228 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 228 aacctcactg ccactctaat t 21 <210> 229 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 229 73/188 21 aattgtcaat gtgaaacccc a <210>230 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 230 aatgtgaaac cccagattta c 21 <210> 231 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 231 aaaccccaga tttacgaaaa g 21 <210> 232 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 232 aaccccagat ttacgaaaag g 21 <210> 233 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 233 aaaaggccgt gtcatcgttt c 21 <210> 234 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 234 aaaggccgtg tcatcgtttc c 21 <210> 235 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> 74/188 <223> Sequência de direccionamento <400> 235 aaggccgtgt catcgtttcc a 21 <210> 236 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 236 aaatcctgac ttgtaccgca t 21 <210> 237 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 237 aatcctgact tgtaccgcat a 21 <210> 238 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 238 aacctacaat caagtggttc t 21 <210> 239 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 239 aatcaagtgg ttctggcacc c 21 <210> 240 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 240 aagtggttct ggcacccctg t 21
<210> 241 <211> 21 <212> DNA 75/188 <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 241 aaccataatc attccgaagc a 21 <210> 242 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 242 aatcattccg aagcaaggtg t 21 <210> 243 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 243 aagcaaggtg tgacttttgt t 21 <210> 244 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 244 aaggtgtgac ttttgttcca a 21 <210> 245 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 245 aataatgaag agtcctttat c 21 <210> 246 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 246 76/188 21 aatgaagagt cctttatcct g
<210> 247 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 247 aagagtcctt tatcctggat g 21 <210> 248 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 248 aacatgggaa acagaattga g 21 <210> 249 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 249 aaacagaatt gagagcatca c 21 <210> 250 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 250 aacagaattg agagcatcac t 21 <210> 251 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 251 aattgagagc atcactcagc g 21
<210> 252 <211> 21 <212> DNA 77/188 <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 252 aataatagaa ggaaagaata a 21 <210> 253 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 253 aatagaagga aagaataaga t 21 <210> 254 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 254 aaggaaagaa taagatggct a 21 <210> 255 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 255 aaagaataag atggctagca c 21 <210> 256 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 256 aagaataaga tggctagcac c 21 <210> 257 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 257 aataagatgg ctagcacctt g 21 78/188 <210> 258 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 258 aagatggcta gcaccttggt t 21 <210> 259 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 259 aatttctgga atctacattt g 21 <210> 260 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 260 aatctacatt tgcatagctt c 21 <210> 261 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 261 aataaagttg ggactgtggg a 21 <210> 262 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 262 aaagttggga ctgtgggaag a 21 <210> 263 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 79/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 263 aagttgggac tgtgggaaga a 21 <210> 264 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 264 aagaaacata agcttttata t 21 <210> 265 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 265 aaacataagc ttttatatca c 21 <210> 266 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 266 aacataagct tttatatcac a 21 <210> 267 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 267 aagcttttat atcacagatg t 21 <210> 268 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 268 aaatgggttt catgttaact t 21 80/188 <210> 269 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 269 aatgggtttc atgttaactt g 21 <210> 270 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 270 aacttggaaa aaatgccgac g 21 <210> 271 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 271 aaaaaatgcc gacggaagga g 21 <210> 272 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 272 aaaaatgccg acggaaggag a 21 <210> 273 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 273 aaaatgccga cggaaggaga g 21 <210> 274 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> 81/188 <223> Sequência de direccionamento <400> 274 aaatgccgac ggaaggagag g 21 <210> 275 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 275 aatgccgacg gaaggagagg a 21 <210> 276 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 276 aaggagagga cctgaaactg t 21 <210> 277 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 277 aaactgtctt gcacagttaa c 21 <210> 278 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 278 aactgtcttg cacagttaac a 21 <210> 279 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 279 aacaagttct tatacagaga c 21 82/188 <210> 280 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 280 aagttcttat acagagacgt t 21 <210> 281 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 281 aataacagaa caatgcacta c 21 <210> 282 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 282 aacagaacaa tgcactacag t 21 <210> 283 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 283 aacaatgcac tacagtatta g 21 <210> 284 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 284 aatgcactac agtattagca a 21 <210> 285 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> 83/188 <223> Sequência de direccionamento <400> 285 aagcaaaaaa tggccatcac t 21 <210> 286 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 286 aaaaaatggc catcactaag g 21 <210> 287 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 287 aaaaatggcc atcactaagg a 21 <210> 288 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 288 aaaatggcca tcactaagga g 21 <210> 289 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 289 aaatggccat cactaaggag c 21 <210> 290 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 290 aatggccatc actaaggagc a 21 84/188 <210> 291 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 291 aaggagcact ccatcactct t 21 <210> 292 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 292 aatcttacca tcatgaatgt t 21 <210> 293 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 293 aatgtttccc tgcaagattc a 21 <210> 294 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 294 aagattcagg cacctatgcc t 21 <210> 295 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 295 aatgtataca caggggaaga a 21 <210> 296 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento 85/188 <400> 296 aagaaatcct ccagaagaaa g 21
<210> 297 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 297 aaatcctcca gaagaaagaa a 21 <210> 298 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 298 aatcctccag aagaaagaaa t 21 <210> 299 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 299 aagaaagaaa ttacaatcag a 21 <210> 300 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 300 aaagaaatta caatcagaga t 21 <210> 301 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 301 aagaaattac aatcagagat c 21 86/188 <210> 302 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 302 aaattacaat cagagatcag g 21 <210> 303 <211 > 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 303 aattacaatc agagatcagg a 21 <210> 304 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 304 aatcagagat caggaagcac c 21 <210> 305 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 305 aagcac :cata cctcctgcga a 21 <210> 306 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 306 aaacctcagt gatcacacag t 21 <210> 307 <211> 20 <212> DNA <213> Sequência artificial 87/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 307 aacctcagtg atcacacagt 20 <210> 308 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 308 aatggtgtcc ccgagcctca g 21 <210> 309 <211> 21 <212> DNA <213> <220> Sequência artificial <223> Sequência de direccionamento <400> 309 aaaaacaacc acaaaataca a 21 <210> 310 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 310 aaaacaacca caaaatacaa c 21 <210> 311 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 311 aaacaaccac aaaatacaac a 21 <210> 312 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 312 aacaaccaca aaatacaaca a 21
<210> 313 <211> 21 <212> DNA 88/188 <213> Sequência artificial <2 2 0 > <223> Sequência de direccionamento <400> 313 aaccacaaaa tacaacaaga g 21 <210> 314 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 314 aaaatacaac aagagcctgg a 21 <210> 315 <211> 21 < 212 > DNA <213> <220> Sequência artificial <223> Sequência de direccionamento <400> 315 aaatacaaca agagcctgga a 21 <210> 316 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <4 00> 316 aatacaacaa gagcctggaa t 21 <210> 317 <211> 21 <212> DNA < 213 > Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 317 aacaagagcc tggaattatt t 21 <210> 318 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 318 89/188 21 aagagcctgg aattatttta g <210> 319 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 319 aattatttta ggaccaggaa g 21 <210> 320 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 320 aagcagcacg ctgtttattg a 21 <210> 321 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 321 aaagagtcac agaagaggat g 21 <210> 322 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 322 aagagtcaca gaagaggatg a 21 <210> 323 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 323 aagaggatga aggtgtctat c 21 <210> 324 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 90/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 324 aaggtgtcta tcactgcaaa g 21 <210> 325 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 325 aaagccacca accagaaggg c 21 <210> 326 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 326 aagccaccaa ccagaagggc t 21 <210> 327 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 327 aaccagaagg gctctgtgga a 21 <210> 328 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 328 aagggctctg tggaaagttc a 21 <210> 329 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 329 aaagttcagc atacctcact g 21 <210> 330 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 91/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 330 aagttcagca tacctcactg t 21 <210> 331 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 331 aaggaacctc ggacaagtct a 21 <210> 332 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 332 aacctcggac aagtctaatc t 21 <210> 333 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 333 aagtctaatc tggagctgat c 21 <210> 334 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 334 aatctggagc tgatcactct a 21 <210> 335 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 335 aacatgcacc tgtgtggctg c 21 92/188 <210> 336 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 336 aaccctcttt atccgaaaaa t 21 <210> 337 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 337 aaaaatgaaa aggtcttctt c 21 <210> 338 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 338 aaaatgaaaa ggtcttcttc t 21 <210> 339 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 339 aaatgaaaag gtcttcttct g 21 <210> 340 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 340 aatgaaaagg tcttcttctg a 21 <210> 341 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> 93/188 <223> Sequência de direccionamento <400> 341 aaaaggtctt cttctgaaat a 21 <210> 342 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 342 aaaggtcttc ttctgaaata a 21 <210> 343 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 343 aaggtcttct tctgaaataa a 21 <210> 344 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 344 aaataaagac tgactaccta t 21 <210> 345 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 345 aataaagact gactacctat c 21 <210> 346 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 346 aaagactgac tacctatcaa t 21
<210> 347 <211> 21 <212> DNA 94/188 <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 347 aagactgact acctatcaat t 21 <210> 348 <211> 21 <212> DNA <213> <220> Sequência artificial <223> Sequência de direccionamento <400> 348 aattataatg gacccagatg a 21 <210> 349 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 349 aatggaccca gatgaagttc c 21 <210> 350 <211> 21 <212> DNA <213> <220> Sequência artificial <223> Sequência de direccionamento <400> 350 aagttccttt ggatgagcag t 21 <210> 351 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 351 aagtgggagt ttgcccggga g 21 <210> 352 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 352 aaactgggca aatcacttgg a 21 95/188 <210> 353 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 353 aactgggcaa atcacttgga a 21 <210> 354 <211 > 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 354 aaatcacttg gaagaggggc t 21 <210> 355 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 355 aatcacttgg aagaggggct t 21 <210> 356 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 356 aagaggggct tttggaaaag t 21 <210>357 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 357 aaaagtggtt caagcatcag c 21 <210> 358 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 358 aaagtggttc aagcatcagc a 21 96/188 <210> 359 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 359 aagtggttca agcatcagca t 21 <210> 360 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 360 aagcatcagc atttggcatt a 21 <210> 361 <211 > 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 361 aagaaatcac ctacgtgccg g 21 <210> 362 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 362 aaatcaccta cgtgccggac t 21 <210> 363 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 363 aatcacctac gtgccggact g 21 <210> 364 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento 97/188 <400> 364 aaaatgctga aagagggggc c 21 <210> 365 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 365 aaatgctgaa agagggggcc a 21 <210> 366 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 366 aatgctgaaa gagggggcca c 21 <210> 367 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 367 aaagaggggg ccacggccag c 21 <210> 368 <211> 21 <212> DNA <213> <220> Sequência artificial <223> Sequência de direccionamento <400> 368 aagagggggc cacggccagc g 21 <210> 369 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 369 aaagctctga tgactgagct a 21
<210> 370 <211> 21 <212> DNA 98/188 <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 370 aagctctgat gactgagcta a 21 <210> 371 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 371 aaaaatcttg acccacattg g 21 <210> 372 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 372 aaaatcttga cccacattgg c 21 <210> 373 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 373 aaatcttgac ccacattggc c 21 <210> 374 <211> 21 <212> DNA <213> <220> Sequência artificial <223> Sequência de direccionamento <400> 374 aatcttgacc cacattggcc a 21 <210> 375 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 375 aacgtggtta acctgctggg a 21 99/188 <210> 376 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 376 aacctgctgg gagcctgcac c 21 <210> 377 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 377 aagcaaggag ggcctctgat g 21 <210> 378 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 378 aaggagggcc tctgatggtg a 21 <210> 379 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 379 aatactgcaa atatggaaat c 21 <210> 380 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 380 aaatatggaa atctctccaa c 21 <210> 381 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <22G> <223> Sequência de direccionamento 100/188 <400> 381 aatatggaaa tctctccaac t 21 <210> 382 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 382 aaatctctcc aactacctca a 21 <210> 383 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 383 aatctc :tcca actacctcaa g 21 <210> 384 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 384 aactacctca agagcaaacg t 21 <210> 385 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 385 aagagcaaac gtgacttatt t 21 <210> 386 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 386 aaacgtgact tattttttct c 21
<210> 387 <211> 21 <212> DNA 101/188 <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 387 aacgtgactt attttttctc a 21 <210> 388 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 388 aacaaggatg cagcactaca c 21 <210>389 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 389 aaggatgcag cactacacat g 21 <210> 390 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 390 aagaaagaaa aaatggagcc a 21 <210> 391 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 391 aaagaaaaaa tggagccagg c 21
<210> 392 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 392 aagaaaaaat ggagccaggc c 21 102/188 <210> 393 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 393 aaaaaatgga gccaggcctg g 21 <210> 394 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 394 aaaaatggag ccaggcctgg a 21 <210> 395 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 395 aaaatggagc caggcctgga a 21 <210> 396 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 396 aaatggagcc aggcctggaa c 21 <210> 397 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 397 aatggagcca ggcctggaac a 21 <210> 398 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> 103/188 <223> Sequência de direccionamento <400> 398 aacaaggcaa gaaaccaaga c 21 <210> 399 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 399 aaggcaagaa accaagacta g 21 <210> 400 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 400 aagaaaccaa gactagatag c 21 <210> 401 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 401 aaaccaagac tagatagcgt c 21 <210> 402 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 402 aaccaagact agatagcgtc a 21 <210> 403 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 403 aagactagat agcgtcacca g 21 104/188 <210> 404 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 404 aaagctttgc gagctccggc t 21 <210> 405 <211> 20 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 405 aagctttgcg agctccggct 20 <210> 406 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 406 aagataaaag tctgagtgat g 21 <210> 407 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 407 aaaagtctga gtgatgttga g 21 <210> 408 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 408 aaagtctgag tgatgttgag g 21 <210> 409 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> 105/188 <223> Sequência de direccionamento <400> 409 aagtctgagt gatgttgagg a 21 <210> 410 <211> 21 <212> DNA <213> <220> Sequência artificial <223> Sequência de direccionamento <400> 410 aagaggagga ttctgacggt t 21 <210> 411 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 411 aaggagccca tcactatgga a 21 <210> 412 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 412 aagatctgat ttcttacagt t 21 <210> 413 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 413 aagtggccag aggcatggag t 21 <210> 414 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 414 aaagtgcatt catcgggacc t 21 106/188 <210> 415 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 415 aagtgcattc atcgggacct g 21 <210> 416 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 416 aaacattctt ttatctgaga a 21 <210> 417 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 417 aacattcttt tatctgagaa c 21 <210> 418 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 418 aacaacgtgg tgaagatttg t 21 <210> 419 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 419 aacgtggtga agatttgtga t 21 <210> 420 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> 107/188 <223> Sequência de direccionamento <400> 420 aagatttgtg attttggcct t 21 <210> 421 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 421 aagaaccccg attatgtgag a 21 <210> 422 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 422 aaccccgatt atgtgagaaa a 21 <210> 423 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 423 aaaaggagat actcgacttc c 21 <210> 424 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 424 aaaggagata ctcgacttcc t 21 <210> 425 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 425 aaggagatac tcgacttcct c 21
<210> 426 <211> 21 <212> DNA 108/188 <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 426 aaatggatgg ctcctgaatc t 21 <210> 427 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 427 aatggatggc tcctgaatct a 21 <210> 428 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 428 aatctatctt tgacaaaatc t 21 <210> 429 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 429 aaaatctaca gcaccaagag c 21 <210> 430 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 430 aaatctacag caccaagagc g 21 <210> 431 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento 109/188 <400> 431 aatctacagc accaagagcg a 21 <210> 432 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 432 aagagcgacg tgtggtctta c 21 <210> 433 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 433 aaatcttctc cttaggtggg t 21 <210> 434 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 434 aatcttctcc ttaggtgggt c 21 <210> 435 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 435 aaatggatga ggacttttgc a 21 <210> 436 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 436 aatggatgag gacttttgca g 21 <210> 437 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 110/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 437 aaggcatgag gatgagagct c 21 <210> 438 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 438 aaatctatca gatcatgctg g 21 <210> 439 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 439 aatctatcag atcatgctgg a 21 <210> 440 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 440 aaaagaaagg ccaagatttg c 21 <210> 441 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 441 aaagaaaggc caagatttgc a 21
<210>442 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 442 aagaaaggcc aagatttgca g 21 111/188 <210> 443 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 443 aaaggccaag atttgcagaa c 21 <210> 444 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 444 aaggccaaga tttgcagaac t 21 <210> 445 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 445 aagatttgca gaacttgtgg a 21 <210> 446 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 446 aacttgtgga aaaactaggt g 21 <210> 447 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 447 aaaaactagg tgatttgctt c 21 <210> 448 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 448 112/188 21 aaaactaggt gatttgcttc a <210> 449 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 449 aaactaggtg atttgcttca a 21 <210> 450 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 450 aactaggtga tttgcttcaa g 21 <210> 451 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 451 aagcaaatgt acaacaggat g 21 <210> 452 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 452 aaatgtacaa caggatggta a 21 <210> 453 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 453 aatgtacaac aggatggtaa a 21 <210> 454 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 113/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 454 aacaggatgg taaagactac a 21 <210> 455 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 455 aaagactaca tcccaatcaa t 21 <210> 456 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 456 aagactacat cccaatcaat g 21 <210> 457 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 457 aatcaatgcc atactgacag g 21 <210> 458 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 458 aatgccatac tgacaggaaa t 21 <210> 459 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 459 aaatagtggg tttacatact c 21 114/188 <210> 460 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 460 aatagtgggt ttacatactc a 21 <210> 461 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 461 aactcctgcc ttctctgagg a 21 <210> 462 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 462 aaggaaagta tttcagctcc g 21 <210> 463 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 463 aaagtatttc agctccgaag t 21 <210> 464 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 464 aagtatttca gctccgaagt t 21 <210> 465 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> 115/188 <223> Sequência de direccionamento <400> 465 aagtttaatt caggaagctc t 21 <210> 466 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 466 aattcaggaa gctctgatga t 21 <210> 467 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 467 aagctctgat gatgtcagat a 21 <210> 468 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 468 aaatgctttc aagttcatga g 21 <210> 469 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 469 aatgctttca agttcatgag c 21 <210> 470 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 470 aagttcatga gcctggaaag a 21 116/188 <210> 471
<211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 471 aaagaatcaa aacctttgaa g 21 <210> 472 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 472 aagaatcaaa acctttgaag a 21 <210> 473 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 473 aatcaaaacc tttgaagaac t 21 <210> 474 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 474 aaaacctttg aagaactttt a 21
<210> 475 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 475 aaacctttga agaactttta c 21 <210> 476
<211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> 117/188 <223> Sequência de direccionamento <400> 476 aacctttgaa gaacttttac c 21 <210> 477 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 477 aagaactttt accgaatgcc a 21 <210> 478 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 478 aacttttacc gaatgccacc t 21
<210>479 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 479 aatgccacct ccatgtttga t 21 <210> 480 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 480 aaacccaagg cctcgctcaa g 21 <210> 481 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 481 aaacccaagg cctcgctcaa g 21
<210> 482 <211> 21 <212> DNA 118/188 <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 482 aacccaaggc ctcgctcaag a 21 <210> 483 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 483 aaggcctcgc tcaagattga c 21 <210> 484 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 484 aagattgact tgagagtaac c 21 <210> 485 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 485 aaccagtaaa agtaaggagt c 21 <210> 486 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 486 aaaagtaagg agtcggggct g 21 <210> 487 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 487 119/188 21 aaagtaagga gtcggggctg t <210> 488 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 488 aagtaaggag tcggggctgt c 21 <210> 489 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 489 aaggagtcgg ggctgtctga t 21 <210> 490 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 490 aaggcaagcg caggttcacc t 21 <210> 491 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 491 gcacccagca catcatgcaa g 21 <210> 492 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 492 ggctgagcat aactaaatct g 21 <210> 493 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 120/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 493 gcttctacag ctgcaaatat c 21 <210> 494 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 494 gagctcgtca ttccctgccg g 21 <210> 495 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 495 ccaaagcaat tcccatgcca a 21 <210> 496 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 496 tgctgagcat aaaacagtca a 21 <210> 497 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 497 ttgcatagct tccaataaag t 21 <210> 498 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 498 agtgatcaca cagtggccat c 21 121/188 <210> 499 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 499 gatgaagttc ctttggatga g 21 <210> 500 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 500 tacacatgga gcctaagaaa g 21 <210> 501 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 501 gagctccggc tttcaggaag a 21 <210> 502 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 502 tctacagcac caagagcgac g 21 <210> 503 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 503 tctgatgatg tcagatatgt a 21 <210> 504 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento 122/188 <223> <400> 504 gcctcgctca agattgactt g 21 <210> 505 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 505 aaaaagacat acttacaatt a 21 <210> 506 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 506 aaaagacata cttacaatta a 21 <210> 507 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 507 aaagacatac ttacaattaa g 21 <210> 508 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 508 aagacatact tacaattaag g 21 <210> 509 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 509 aattaaggct aatacaactc t 21 123/188 <210> 510 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 510 aaggctaata caactcttca a 21 <210> 511 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 511 aatacaactc ttcaaattac t 21 <210> 512 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 512 aactcttcaa attacttgca g 21 <210> 513 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 513 aaattacttg caggggacag a 21 <210> 514 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 514 aattacttgc aggggacaga g 21 <210> 515 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento 124/188 <400> 515 aataatcaga gtggcagtga g 21
<210> 516 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 516 aatcagagtg gcagtgagca a 21 <210> 517 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 517 aaagggtgga ggtgactgag t 21 <210> 518 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 518 aagggtggag gtgactgagt g 21 <210> 519 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 519 aagacactca caattccaaa a 21 <210> 520 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 520 aattccaaaa gtgatcggaa a 21
<210> 521 <211> 21 <212> DNA 125/188 <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 521 aaaagtgatc ggaaatgaca c 21 <210> 522 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 522 aaagtgatcg gaaatgacac t 21 <210> 523 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 523 aagtgatcgg aaatgacact g 21 <210> 524 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 524 aaatgacact ggagcctaca a 21 <210> 525 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 525 aatgacactg gagcctacaa g 21 <210> 526 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento 126/188 <400> 526 aagtgcttct accgggaaac t 21 <210> 527 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 527 aaactgactt ggcctcggtc a 21 <210> 528 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 528 aactgacttg gcctcggtca t 21 <210> 529 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 529 aagattacag atctccattt a 21 <210> 530 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 530 aacatggagt cgtgtacatt a 21 <210> 531 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 531 aacaaaaaca aaactgtggt g 21 <210> 532 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 127/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 532 aaaaacaaaa ctqtqqtqat t 21
<210> 533 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 533 aaaacaaaac tqtqqtqatt c 21 <210> 534 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 534 aaacaaaact gtggtgattc c 21 <210> 535 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 535 aacaaaactg tggtgattcc a 21
<210> 536 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 536 aaaactgtgg tgattccatg t 21
<210> 537 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 537 aaactgtggt gattccatgt c 21 <210> 538 128/188 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 538 aact.gt.ggt.g at.t.ccat.gtc t. 21 <210> 539 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 539 aaatctcaac gtgtcacttt g 21 <210> 540 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 540 aatctcaacg tgtcactttg t 21 <210> 541 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 541 aacgtgtcac tttgtgcaag a 21 <210> 542 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 542 aagataccca gaaaagagat t 21 <210> 543 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento 129/188 <400> 543 aaaagagatt tgttcctgat g 21 <210> 544 <211> 21 <212> DNA <213> <220> Sequência artificial <223> Sequência de direccionamento <400> 544 aaagagattt gttcctgatg g 21 <210> 545 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 545 aagagatttg ttcctgatgg t 21 <210> 546 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 546 aacagaattt cctgggacag c 21 <210> 547 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 547 aatttcctgg gacagcaaga a 21 <210>548 <211>21 130/188 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 548 aagaagggct ttactattcc c 21 <210> 549 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 549 aagggcttta ctattcccag c 21 131/188 <210> 550 <211> 21 <212> DNA <213> <220> Sequência artificial <223> Sequência de direccionamento <400> 550 aagcaaaaat taatgatgaa a 21 <210> 551 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 551 aaaaattaat gatgaaagtt a 21 <210> 552 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 552 aaaattaatg atgaaagtta c 21 <210> 553 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 553 aaattaatga tgaaagttac c 21 <210> 554 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 554 aattaatgat gaaagttacc a 21 <210> 555 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 555 3.3.1ga t Ο'ά.ά.ά. gtta< ccagtc t 21 <210> 556 <211 > 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 556 aaagttacca gtctattatg t 21 <210> 557 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 557 aagtta iccag tctattatgt a 21 <210> 558 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 558 aattga .acta tctgttggag a 21 <210> 559 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 559 aactat ctgt tggagaaaag c 21 <210> 560 <211 > 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 132/188 <223> Sequência de direccionamento <400> 560 aaaagcttgt cttaaattgt a 21 <210> 561 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 561 aaagcttgtc ttaaattgta c 21 <210> 562 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 562 aagcttgtct taaattgtac a 21 <210> 563 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 563 aaattgtaca gcaagaactg a 21
<210>564 <211>21 <212> DNA 133/188 <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 564 aattgtacag caagaactga a 21 <210> 5 6 5 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 5 6 5 aagaactgaa ctaaatgtgg g 21 <210> 566 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 566 aactgaacta aatgtgggga t 21 <210> 567 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 567 aactaaatgt ggggattgac t 21 <210> 568 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 568 aaatgtgggg attgacttca a 21 <210> 569 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 569 aatgtgggga ttgacttcaa c 21 <210> 570 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 570 aactgggaat acccttcttc g 21 <210> 571 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento 134/188 <400> 571 aatacccttc ttcgaagcat c 21 135/188 <210> 572 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 572 aagcatcagc ataagaaact t 21 <210> 573 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 573 aagaaa .cttg taaaccgaga c 21 <210> 574 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 574 aaacttgtaa accgagacct a 21 <210> 575 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 575 aacttgtaaa ccgagaccta a 21 <210> 576 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 576 aaaccgagac ctaaaaaccc a 21 <210> 577 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 577 aaccgagacc taaaaaccca g 21 <210> 578 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 578 aaaaacccag tctgggagtg a 21 <210> 579 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 579 136/188 21 aaaacccagt ctgggagtga g
<210> 580 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 580 aaacccagtc tgggagtgag a 21 <210> 581 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 581 aacccagtct gggagtgaga t 21 <210> 582 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 582 aagaaatttt tgagcacctt a 21 <210> 583 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 583 aaatttttga gcaccttaac t 21
<210> 584 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 584 aatttttgag caccttaact a 21
<210> 585 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 137/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 585 aactatagat ggtgtaaccc g 21 <210> 586 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 586 aacccggagt gaccaaggat t 21 <210> 587 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 587 aaggattgta cacctgtgca g 21 <210> 588 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 588 aagaagaaca gcacatttgt c 21 <210> 589 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 589 aagaacagca catttgtcag g 21 <210> 590 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 590 aacagcacat ttgtcagggt c 21 138/188 <210> 591 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 591 aaaaaccttt tgttgctttt g 21 <210> 592 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 592 aaaacctttt gttgcttttg g 21 <210> 593 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 593 aaaccttttg ttgcttttgg a 21 <210> 594 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 594 aaccttttgt tgcttttgga a 21 <210> 595 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 595 aagtggcatg gaatctctgg t 21 <210> 596 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento 139/188 <400> 596 aatctctggt ggaagccacg g 21 <210> 597 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 597 aagccacggt gggggagcgt g 21 <210> 598 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 598 aatccctgcg aagtaccttg g 21 <210> 599 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 599 aagtaccttg gttacccacc c 21 <210> 600 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 600 aaataaaatg gtataaaaat g 21 <210> 601 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 601 aataaaatgg tataaaaatg g 21 140/188 <210> 602 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 602 aaaatggtat aaaaatggaa t 21 <210> 603 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 603 aaatggtata aaaatggaat a 21 <210> 604 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 604 aatggtataa aaatggaata c 21 <210> 605 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 605 aaaaatggaa taccccttga g 21 <210> 606 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 606 aaaatggaat accccttgag t 21 <210> 607 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento 141/188 <400> 607 aaatggaata ccccttgagt c 21 <210> 608 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 608 aatggaatac cccttgagtc c 21 <210> 609 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 609 aatacccctt gagtccaatc a 21 <210> 610 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 610 aatcacacaa ttaaagcggg g 21 <210> 611 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 611 aattaaagcg gggcatgtac t 21 <210> 612 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 612 aaagcggggc atgtactgac g 21 142/188 <210> 613 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 613 aagcggggca tgtactgacg a 21 <210> 614 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 614 aagtgagtga aagagacaca g 21 <210> 615 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 615 aaagagacac aggaaattac a 21 <210> 616 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 616 aagagacaca ggaaattaca c 21 <210> 617 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 617 aaattacact gtcatcctta c 21 <210> 618 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> 143/188 <223> Sequência de direccionamento <400> 618 aattacactg tcatccttac c 21
<210> 619 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 619 aatcccattt caaaggagaa g 21 <210> 620 <211> 21 <212> DNA <213> <220> Sequência artificial <223> Sequência de direccionamento <400> 620 aaaggagaag cagagccatg t 21 <210> 621 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 621 aaggagaagc agagccatgt g 21 <210> 622 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 622 aagcagagcc atgtggtctc t 21
<210> 623 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 623 aaatctctaa tctctcctgt g 21
<210> 624 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 144/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 624 aatctctaat ctctcctgtg g 21 <210> 625 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 625 aatctctcct gtggattcct a 21 <210> 626 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 62 6 aaacgctgac atgtacggtc t 21 <210> 627 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 627 aacgctgaca tgtacggtct a 21 <210> 628 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 628 aagagtgcgc caacgagccc a 21 <210> 629 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 629 aacgagccca gccaagctgt c 21 145/188 <210> 630 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 630 aagctgtctc agtgacaaac c 21 <210> 631 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 631 aaacccatac ccttgtgaag a 21 <210> 632 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 632 aacccatacc cttgtgaaga a 21 <210> 633 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 633 aagaatggag aagtgtggag g 21 <210> 634 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 634 aatggagaag tgtggaggac t 21 <210> 635 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 146/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 635 aagtgtggag gacttccagg g 21 <210> 636 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 636 aaataaaatt gaagttaata a 21 <210> 637 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 637 aataaaattg aagttaataa a 21 <210> <211> 638 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 638 aaaattgaag ttaataaaaa t 21 <210> 639 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 639 aaattgaagt taataaaaat c 21 <210> 640 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 640 aattgaagtt aataaaaatc a 21 147/188 <210> 641 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 641 aagttaataa aaatcaattt g 21 <210> 642 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 642 aataaaaatc aatttgctct a 21 <210> 643 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 643 aaaaatcaat ttgctctaat t 21 <210> 644 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 644 aaaatcaatt tgctctaatt g 21 <210> 645 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 645 aaatcaattt gctctaattg a 21 <210> 646 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento 148/188 <400> 646 aatcaatttg ctctaattga a 21 <210> 647 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 647 aatttgctct aattgaagga a 21 <210> 648 <211> 21 <212> DNA <213> Seguência artificial <220> <223> Seguência de direccionamento <400> 648 aattgaagga aaaaacaaaa c 21 <210> 649 <211> 21 <212> DNA <213> Seguência artificial <220> <223> Seguência de direccionamento <400> 649 aaggaaaaaa caaaactgta a 21 <210> 650 <211> 21 <212> DNA <213> Seguência artificial <220> <223> Seguência de direccionamento <400> 650 aaaaaacaaa actgtaagta c 21 <210> 651 <211> 21 <212> DNA <213> Seguência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 651 aaaaacaaaa ctgtaagtac c 21
<210> 652 <211> 21 <212> DNA 149/188 <213> Sequência artificial <22G> <223> Sequência de direccionamento <400> 652 aaaacaaaac tgtaagtacc c 21 <210> 653 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 653 aaacaaaact gtaagtaccc t 21 <210> 654 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 654 aacaaaactg taagtaccct t 21 <210> 65 5 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 65 5 aaaactgtaa gtacccttgt t 21 <210> 656 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 656 aaactgtaag tacccttgtt a 21
<210> 657 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 657 150/188 21 aactgtaagt acccttgtta t <210> 658 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 658 aagtaccctt gttatccaag c 21 <210> 659 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 659 aagcggcaaa tgtgtcagct t 21 <210> 660 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 660 aaatgtgtca gctttgtaca a 21 <210> 661 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 661 aatgtgtcag ctttgtacaa a 21 <210> 662 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 662 aaatgtgaag cggtcaacaa a 21 <210> 663 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 151/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 663 aatgtgaagc ggtcaacaaa g 21 <210> 664 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 664 aagcggtcaa caaagtcggg a 21 <210> 665 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 665 aacaaagtcg ggagaggaga g 21 <210> 666 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 666 aaagtcggga gaggagagag g 21 <210> 667 <211> 21 <212> DNA <213> <220> Sequência artificial <223> Sequência de direccionamento <400> 667 aagtcgggag aggagagagg g 21 <210> 668 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 668 aaattacttt gcaacctgac a 21 152/188 <210> 669 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 669 aattactttg caacctgaca t 21 <210> 670 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 670 aacctgacat gcagcccact g 21 <210> 671 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 671 aacctcacat ggtacaagct t 21 <210> 672 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 672 aagcttggcc cacagcctct g 21 <210> 673 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 673 aatccatgtg ggagagttgc c 21 <210> 674 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento 153/188 <400> 674 aagaacttgg atactctttg g 21 <210> <211> 675 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 675 aacttggata ctctttggaa a 21 <210> 676 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 676 aaattgaatg ccaccatgtt c 21 <210> 677 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 677 aattgaatgc caccatgttc t 21 <210> 678 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 678 aatgccacca tgttctctaa t 21 <210> 679 <211> 21 <212> DNA <213> <220> Sequência artificial <223> Sequência de direccionamento <400> 679 aatagcacaa atgacatttt g 21 <210> 680 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 154/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 680 aaatgacatt ttgatcatgg a 21 <210> 681 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 681 aatgacattt tgatcatgga g 21 <210> 682 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 682 aagaatgcat ccttgcagga c 21 <210> 683 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 683 aatgcatcct tgcaggacca a 21 <210> 684 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 684 aaggagacta tgtctgcctt g 21 <210> 685 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 685 aagacaggaa gaccaagaaa a 21 155/188 <210> 686 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 686 aagaccaaga aaagacattg c 21 <210> 687 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 687 aagaaaagac attgcgtggt c 21 <210> 688 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 688 aaaagacatt gcgtggtcag g 21 <210> 689 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 689 aaagacattg cgtggtcagg c 21 <210> 690 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 690 aagacattgc gtggtcaggc a 21 <210> 691 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 156/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 691 21 aaacctggag aatcagacga c 21 <210> 692 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 692 aacctggaga atcagacgac a 21 <210> 693 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 693 aatcagacga caagtattgg g 21 <210> 694 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 694 aagtattggg gaaagcatcg a 21 <210> 695 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 695 aaagcatcga agtctcatgc a 21 <210> 696 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 696 aagcatcgaa gtctcatgca c 21 157/188 <210> 697 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 697 aatccccctc cacagatcat g 21 <210> 698 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 698 aaagataatg agacccttgt a 21 <210> 699 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 699 aagataatga gacccttgta g 21 <210> 700 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 700 aatgagaccc ttgtagaaga c 21 <210> 701 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 701 aagactcagg cattgtattg a 21 <210> 702 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 158/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 702 aaggatggga accggaacct c 21 <210> 703 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 703 aaccggaacc tcactatccg c 21 <210> 704 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 704 aacctcacta tccgcagagt g 21 <210> 705 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 705 aaggaggacg aaggcctcta c 21 <210> 706 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 706 aaggcctcta cacctgccag g 21 <210> 707 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 707 aaaagtggag gcatttttca t 21 159/188 <210> 708 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 708 aaagtggagg catttttcat a 21 <210> 709 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 709 aagtggaggc atttttcata a 21 <210> 710 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 710 aatagaaggt gcccaggaaa a 21 <210> 711 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 711 aaggtgccca ggaaaagacg a 21
<210>712 <211>21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 712 aaaagacgaa cttggaaatc a 21 <210> 713 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento 160/188 <400> 713 aaagacgaac ttggaaatca t 21 <210> 714 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 714 aagacgaact tggaaatcat t 21 <210> 715 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 715 aacttggaaa tcattattct a 21 <210> 716 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 716 aaatcattat tctagtaggc a 21 <210> 717 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 717 aatcattatt ctagtaggca c 21 <210> 718 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 718 aagcgggcca atggagggga a 21 <210> 719 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> 161/188 <223> Sequência de direccionamento <400> 719 aatggagggg aactgaagac a 21 <210> 720 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 720 aactgaagac aggctacttg t 21 <210> 721 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 721 aagacaggct acttgtccat c 21 <210> 722 <211> 21 <212> DNA <213> <220> Sequência artificial <223> Sequência de direccionamento <400> 722 aactcccatt ggatgaacat t 21 <210> 723 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 723 aacattgtga acgactgcct t 21 <210> 724 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 724 aacgactgcc ttatgatgcc a 21 <210> 725 162/188 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 725 aaatgggaat tccccagaga c 21 <210> 726 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 726 aatgggaatt ccccagagac c 21 <210> 727 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 727 aattccccag agaccggctg a 21 <210> 728 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 728 aagctaggta agcctcttgg c 21 <210> 729 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 729 aagcctcttg gccgtggtgc c 21 <210> 730 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento 163/188 <400> 730 aagtgattga agcagatgcc t 21 <210> 731 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 731 aagcagatgc ctttggaatt g 21 <210> 732 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 732 aattgacaag acagcaactt g 21 <210> 733 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 733 aagacagcaa cttgcaggac a 21 <210> 734 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 734 aacttgcagg acagtagcag t 21 <210> 735 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 735 aaaatgttga aagaaggagc a 21 <210> 736 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 164/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 736 aaatgttgaa agaaggagca a 21 <210> 737 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 737 aatgttgaaa gaaggagcaa c 21 <210> 738 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 738 aaagaaggag caacacacag t 21 <210> 739 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 739 aagaaggagc aacacacagt g 21 <210> 740 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 740 aaggagcaac acacagtgag c 21 <210> 741 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 741 aacacacagt gagcatcgag c 21 165/188 <210> 742 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 742 aactcaagat cctcattcat a 21 <210> 743 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 743 aagatcctca ttcatattgg t 21 <210> 744 <211> 21 <212> DNA <213> <220> Sequência artificial <223> Sequência de direccionamento <400> 744 aatgtggtca accttctagg t 21 <210> 745 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 745 aaccttctag gtgcctgtac c 21 <210> 746 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 746 aagccaggag ggccactcat g 21 <210> 747 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento 166/188 <400> 747 aattctgcaa atttggaaac c 21 <210> 748 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 748 aaatttggaa acctgtccac t 21 <210> <211> 749 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 749 aatttggaaa cctgtccact t 21 <210> 750 <211> 21 <212> DNA <213> <220> Sequência artificial <223> Sequência de direccionamento <400> 750 aaacctgtcc acttacctga g 21 <210> 751 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 751 aacctgtcca cttacctgag g 21 <210> 752 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 752 aagagaaatg aatttgtccc c 21 <210> 753 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 167/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 753 aaatgaattt gtcccctaca a 21 <210> 754 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 754 aatgaatttg tcccctacaa g 21 <210> 755 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 755 aatttgtccc ctacaagacc a 21 <210> 756 <211> 21 <212> DNA <213> <220> Sequência artificial <223> Sequência de direccionamento <400> 756 aagaccaaag gggcacgatt c 21 <210> 757 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 757 aaaggggcac gattccgtca a 21 <210> 758 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 758 aaggggcacg attccgtcaa g 21 168/188 <210> 759 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 759 aagggaaaga ctacgttgga g 21 <210> 760 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 760 aaagactacg ttggagcaat c 21 <210> 761 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 761 aagactacgt tggagcaatc c 21 <210> 762 <211> 21 <212> DNA <213> <220> Sequência artificial <223> Sequência de direccionamento <400> 762 aatccctgtg gatctgaaac g 21 <210> 763 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 763 aaacggcgct tggacagcat c 21 <210> 764 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento 169/188 <400> 764 aacggcgctt ggacagcatc a 21 <210> 765 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 765 aagtcc 'ctca gtgatgtaga a 21 <210> 766 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 766 aagaagagga agctcctgaa g 21 <210> 767 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 767 aagaggaagc tcctgaagat c 21 <210> 768 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 768 aagctc 'ctga agatctgtat a 21 <210> 769 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 769 aagatc 'tgta taaggacttc c 21 <210> 770 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 170/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 770 aaggacttcc tgaccttgga g 21 <210> 771 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 771 aagtggctaa gggcatggag t 21 <210> 772 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 772 aagggcatgg agttcttggc a 21 <210> 773 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 773 aaagtgtatc cacagggacc t 21 <210> 774 <211> 21 <212> DNA <213> <220> Sequência artificial <223> Sequência de direccionamento <400> 774 aagtgtatcc acagggacct g 21 <210> 775 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 775 aaatatcctc ttatcggaga a 21 171/188 <210> 776 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 776 aatatcctct tatcggagaa g 21 <210> 777 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 777 aatatcctct tatcggagaa g 21 <210> 778 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 778 aagaacgtgg ttaaaatctg t 21 <210> 779 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 779 aacgtggtta aaatctgtga c 21 <210> 780 <211> 21 <212> DNA <213> <220> Sequência artificial <223> Sequência de direccionamento <400> 780 aaaatctgtg actttggctt g 21 <210> 781 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento 172/188 <400> 781 aaatctgtga ctttggcttg g 21 <210> 782 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 782 aatctgtgac tttggcttgg c 21 <210> 783 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 783 aaagatccag attatgtcag a 21 <210> 784 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 784 aagatccaga ttatgtcaga a 21 <210> 785 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 785 aaaaggagat gctcgcctcc c 21 173/188 <210> 786 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 786 aaaggagatg ctcgcctccc t 21 <210> 787 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 787 aaggagatgc tcgcctccct t 21 <210> 788 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 788 aaatggatgg ccccagaaac a 21 <210> 789 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 789 aatggatggc cccagaaaca a 21 <210> 790 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 790 aaacaatttt tgacagagtg t 21 <210> 791 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> 174/188 <223> Sequência de direccionamento <400> 791 aacaattttt gacagagtgt a 21 <210> 792 <;211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 792 aatttttgac agagtgtaca c 21 <210> 793 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 793 aatccagagt gacgtctggt c 21 <210> 794 c211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 794 aaatattttc cttaggtgct t 21 <210> 795 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 795 aatattttcc ttaggtgctt c 21 <210> 796 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 796 aaagattgat gaagaatttt g 21 175/188 <210> 797 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 797 aagattgatg aagaattttg t 21 <210> 798 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 798 aagaattttg taggcgattg a 21 <210> 799 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 799 aattttgtag gcgattgaaa g 21 <210> 800 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 800 aaagaaggaa ctagaatgag g 21 <210> 801 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 801 aagaaggaac tagaatgagg g 21 <210> 802 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento 176/188 <400> 802 aaggaactag aatgagggcc c 21 <210> 803 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 803 aactagaatg agggcccctg a 21 <210> 804 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 804 aatgagggcc cctgattata c 21 <210> 805 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 805 aaatgtacca gaccatgctg g 21 <210> 806 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 806 aatgtaccag accatgctgg a 21 <210> 807 <211> 21 <212> DNA <213> <220> Sequência artificial <223> Sequência de direccionamento <400> 807 aacatttggg aaatctcttg c 21
<210> 808 <211> 21 <212> DNA 177/188 <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 808 aaatctcttg caagctaatg c 21 <210> 809 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 809 aatctcttgc aagctaatgc t 21 <210> 810 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 810 aagctaatgc tcagcaggat g 21 <210> 811 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 811 aatgctcagc aggatggcaa a 21 <210> 812 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 812 aaagactaca ttgttcttcc g 21 <210> 813 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 813 aagactacat tgttcttccg a 21 178/188 <210> 814 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 814 aagaggattc tggactctct c 21 <210> 815 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 815 aagtatgtga ccccaaattc c 21 <210> 816 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 816 aaattccatt atgacaacac a 21 <210> 817 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 817 aattccatta tgacaacaca g 21 <210> 818 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 818 aacacagcag gaatcagtca g 21 <210> 819 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 179/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 819 aatcagtcag tatctgcaga a 21 <210> 820 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 820 aacagtaagc gaaagagccg g 21 <210> 821 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 821 aagcgaaaga gccggcctgt g 21 <210> 822 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 822 aaagagccgg cctgtgagtg t 21 <210> 823 <211> 21 <212> DNA <213> <220> Sequência artificial <223> Sequência de direccionamento <400> 823 aagagccggc ctgtgagtgt a 21 <210> 824 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 824 aaaaacattt gaagatatcc c 21 180/188 <210> 825 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 825 aaaacatttg aagatatccc g 21 <210> 826 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 826 aaacatttga agatatcccg t 21 <210> 827 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 827 aacatttgaa gatatcccgt t 21 <210> 828 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 828 aagatatccc gttagaagaa c 21 <210> 829 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 829 aagaaccaga agtaaaagta a 21 <210> 830 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> 181/188 <223> Sequência de direccionamento <400> 830 aaccagaagt aaaagtaatc c 21 <210> 831 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 831 aagtaaaagt aatcccagat g 21 <210> 832 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 832 aaaagtaatc ccagatgaca a 21 <210> 833 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 833 aaagtaatcc cagatgacaa c 21 <210> 834 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 834 aagtaatccc agatgacaac c 21 <210> 835 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 835 aatcccagat gacaaccaga c 21 182/188 <210> 836 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 836 aaccagacgg acagtggtat g 21 <210> 837 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 837 aagagctgaa aactttggaa g 21 <210> 838 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 838 aaaactttgg aagacagaac c 21 <210> 839 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 839 aaactttgga agacagaacc a 21 <210> 840 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 840 aactttggaa gacagaacca a 21 <210> 841 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento 183/188 <400> 841 aagacagaac caaattatct c 21 <210> 842 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 842 aaccaaatta tctccatctt t 21 <210> 843 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 843 aaattatctc catcttttgg t 21 <210> 844 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 184/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 844 aattatctcc atcttttggt g 21 <210> 845 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 845 aatggtgccc agcaaaagca g 21 185/188 <210> 846 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 846 aaaagcaggg agtctgtggc a 21 <210> 847 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 847 aaagcaggga gtctgtggca t 21 <210> 848 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 848 aagcagggag tctgtggcat c 21 <210> 849 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 849 aaggctcaaa ccagacaagc g 21 186/188 <210> 850 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 850 aaaccagaca agcggctacc a 21 <210> 851 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 851 aaccagacaa gcggctacca g 21 <210> 852 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 852 aagcggctac cagtccggat a 21 <210> 853 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 853 aagcagaact tttaaagctg a 21 <210> 854 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 854 gacatactta caattaaggc t 21 <210> 855 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 855 gatttgttcc tgatggtaac a 21 <210> 856 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 856 ttttgagcac cttaactata g 21 <210> 857 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 857 gagccatgtg gtctctctgg t 21 <210> 858 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 858 ggtgatctcc ttccacgtga c 21 <210> 859 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 859 gtggtcaggc agctcacagt c 21 <210> 860 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial 187/188 <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 860 cggtgattgc catgttcttc t 21 <210> 861 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 861 ttctaggtgc ctgtaccaag c 21 <210> 862 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 862 tgtatccaca gggacctggc g 21 <210> 863 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 863 taccagacca tgctggactg c 21 <210> 864 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Sequência de direccionamento <400> 864 ttatctccat cttttggtgg a 21
Lisboa, 09 de Junho de 2010 188/188

Claims (4)

  1. Reivindicações 1. Um pequeno ácido ribonucleico de interferência isolado (siARN) que compreende uma cadeia de ARN sentido de cerca de 19 a cerca de 25 nucleótidos em comprimento e uma cadeia de ARN anti-sentido de cerca de 25 nucleótidos em comprimento, em que as cadeias de ARN sentido e anti-sentido formam um duplex ARN, e em que a cadeia de ARN sentido compreende uma sequência de nucleótidos idêntica a uma sequência alvo no ARNm do factor de crescimento vascular endotelial humano (FCVE) em que a dita sequência alvo é seleccionada de SEQ ID N° 47, SEQ ID N° 48, SEQ ID N° 50, SEQ ID N° 51, SEQ ID N° 52 e SEQ ID N° 56.
  2. 2. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 1, em que o ARNm FCVE humano é seleccionado a partir do grupo constituído por ARNm FCVE121 (SEQ ID NO: 2); ARNm FCVEi65 SEQ ID NO: 3); ARNm FCVEi89 (SEQ ID NO: 4) e ARNm FCVE206 (SEQ ID NO: 5) .
  3. 3. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 1, em que a cadeia de ARN sentido compreende a SEQ ID NO: 77, e a cadeia de anti-sentido compreende a SEQ ID NO: 78.
    4. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 1, em que a cadeia de ARN sentido compreende uma molécula ARN, e a cadeia de ARN anti-sentido compreende uma molécula ARN:
    5. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 1, em que as cadeias de ARN sentido e anti-sentido que formam o duplex ARN são covalentemente ligadas por um hairpin de cadeia simples.
    6. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 1, em que o siARN compreende ainda material não-nucleótido.
    7. O pequeno ácido ribonucleico de interferência(siARN) da reivindicação 1, em que as cadeias de ARN sentido e anti-sentido são estabilizadas contra a degradação da nuclease.
    8. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 1 compreende ainda uma extremidade 3'.
    9. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 8, em que a extremidade 3' compreende de 1 até cerca de 6 nucleótidos.
    10. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 8, em que a extremidade 3' compreende cerca de 2 nucleótidos. 1/9 11. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 4, em que a cadeia de ARN sentido compreende uma primeira extremidade 3', e a cadeia de ARN anti-sentido compreende uma segunda extremidade 3'. 12. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 11, em que a primeira e segunda extremidade 3' compreende separadamente de 1 até cerca de 6 nucleótidos. 13. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 12, em que a primeira extremidade 3' compreende um dinucleótido e a segunda extremidade 3' compreende um dinucleótido. 14. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 13, em que o dinucleótido que compreende a primeira e segunda extremidade 3' é ácido ditimidílico (TT) ou ácido diuridilico (uu). 15. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 8, em que a extremidade 3 ' está estabilizada contra a degradação da nuclease.
    16. Uma célula epitelial de pigmento retinal que compreende o pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 1.
    17. Um plasmidio recombinante que compreende sequências de ácido nucleico para expressar um pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) que compreende uma cadeia de ARN sentido e uma cadeia de ARN anti-sentido, em que as cadeias de ARN sentido e anti-sentido formam um duplex ARN, e no qual a cadeia de ARN sentido compreende uma sequência de nucleótido idêntica para uma sequência alvo no ARNm do factor de crescimento vascular endotelial humano (FCVE) no qual a dita sequência alvo é seleccionada de SEQ ID No. 47, SEQ ID No. 48, SEQ ID No. 50, SEQ ID No. 51, SEQ ID No. 52 e SEQ ID No. 56. 18. 0 plasmidio recombinante da reivindicação 17 em que as sequências de ácido nucleico expressam um pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) em que a cadeia de ARN sentido compreende a SEQ ID NO: 77, e a cadeia de ARN anti-sentido compreende a SEQ ID NO: 78.
    19. O plasmidio recombinante da reivindicação 17, em que as sequências de ácido nucleico para expressar o pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) compreende um promotor induzivel ou regulável.
    20. O plasmidio recombinante da reivindicação 17, em que as sequências de ácido nucleico para expressar o pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) compreende uma sequência de codificação de cadeia de ARN sentido em conexão operativa com uma sequência de terminação poliT sob o controlo de um promotor U6 ARN humano, e uma sequência de 2/9 codificação cadeia de ARN anti-sentido em conexão operativa com uma sequência de terminação poliT sob o controlo de um promotor U6 ARN humano. 21. 0 plasmidio recombinante da reivindicação 18, em que o plasmidio é pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) pAAV.
    22. Um vector virai recombinante que compreende sequências de ácido nucleico para expressar um pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) que compreende uma cadeia de ARN sentido e uma cadeia de ARN anti-sentido, em que as cadeias de ARN sentido e anti-sentido formam um duplex ARN, e no qual a cadeia de ARN sentido compreende uma sequência de nucleótido idêntica a uma sequência alvo no ARNm do factor de crescimento vascular endotelial humano (FCVE) no qual a dita sequência alvo é seleccionada de SEQ ID No. 47, SEQ ID No. 48, SEQ ID No. 50, SEQ ID No. 51, SEQ ID No. 52 e SEQ ID No. 56.
    23. O vector virai recombinante da reivindicação 22 em que as sequências de ácido nucleico expressam um pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) em que a cadeia de ARN sentido compreende a SEQ ID NO: 77, e a cadeia de ARN anti-sentido compreende a SEQ ID NO: 78.
    24. O vector virai recombinante da reivindicação 22, em que as sequências de ácido nucleico para expressar o pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) compreendem um promotor induzivel ou regulável.
    25. O vector virai recombinante da reivindicação 22, em que as sequências de ácido nucleico para expressar o pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) compreendem uma sequência de codificação de cadeia de ARN sentido em conexão operativa com uma sequência de terminação poliT sob o controlo de um promotor U6 ARN humano, e uma sequência de codificação cadeia de ARN anti-sentido em conexão operativa com uma sequência de terminação poliT sob o controlo de um promotor U6 ARN humano.
    26. O vector virai recombinante da reivindicação 22, em que o vector virai recombinante é seleccionado a partir do grupo consistido por um vector adenoviral, um vector virai adeno-associado, um vector lentiviral, um vector retroviral, e um vector de vírus herpes.
    27. O vector virai recombinante da reivindicação 22, em que o vector virai recombinante é pseudotipado com proteínas de superfície a partir do vírus de estomatite vesicular, vírus da raiva, vírus Ébola, ou vírus Mokola.
    28. O vector virai recombinante da reivindicação 27, em que o vector virai recombinante compreende um vector virai adeno-associado. 3/9
    29. Uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade eficaz de um pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) e um portador farmaceuticamente aceitável, em que o siARN compreende uma cadeia de ARN sentido e uma cadeia de ARN anti-sentido, em que as cadeias de ARN sentido e anti-sentido formam um duplex ARN, e onde a cadeia de ARN sentido compreende uma sequência de nucleótido idêntica a uma sequência alvo no ARNm do factor de crescimento vascular endotelial humano (FCVE) em que a dita sequência alvo é seleccionada de SEQ ID No. 47, SEQ ID No. 48, SEQ ID No. 50, SEQ ID No. 51, SEQ ID No. 52 e SEQ ID No. 56.
    30. A composição farmacêutica como reivindicado na reivindicação 29 em que a cadeia de ARN sentido compreende a SEQ ID NO: 77, e a cadeia de ARN anti-sentido compreende a SEQ ID NO: 78.
    31. A composição farmacêutica da reivindicação 29 que compreende ainda lipofectina, lipofectamina, cellfectina, policatiões, ou liposomas.
    32. Uma composição farmacêutica que compreende o plasmídio da reivindicação 17, ou um sal fisiologicamente aceitável do mesmo, e um portador farmaceuticamente aceitável.
    33. A composição farmacêutica da reivindicação 32 compreende ainda lipofectina, lipofectamina, cellfectina, policatiões, ou liposomas.
    34. Uma composição farmacêutica que compreende o vector virai da reivindicação 22 e um portador farmaceuticamente aceitável.
    35. Uma quantidade eficaz de um pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) que compreende uma cadeia de ARN sentido e uma cadeia de ARN anti-sentido, em que as cadeias de ARN sentido e anti-sentido formam um duplex ARN, e no qual a cadeia de ARN sentido compreende uma sequência de nucleótido idêntica a uma sequência alvo no ARNm do factor de crescimento vascular endotelial humano (FCVE) para uso na inibição de expressão do ARNm do ARNm do factor de crescimento vascular endotelial humano (FCVE) num sujeito em que a dita sequência alvo é seleccionada da SEQ ID No. 47, SEQ ID No. 48, SEQ ID No. 50, SEQ ID No. 51, SEQ ID No. 52 e SEQ ID No. 56.
    36. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 35, em que a cadeia de ARN sentido compreende a SEQ ID NO: 77, e a cadeia de ARN anti-sentido compreende a SEQ ID NO: 78. 4/9 37. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 35, em que o sujeito é um ser humano. 38. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 35, em que a expressão do ARNm do factor de crescimento vascular endotelial humano (FCVE) é inibida em um ou ambos os olhos do sujeito. 39. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 35, em que a expressão de ARNm do factor de crescimento vascular endotelial humano (FCVE) é inibida nas células epiteliais de pigmento retinal do sujeito. 40. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 35, em que a quantidade eficaz do pequeno ARN de interferência (siARN) é de cerca de 1 nM até cerca de 100 nM.
    41. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 35, em que o pequeno ARN de interferência (siARN) é administrado em conjunto com um agente de entrega.
    42. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 41, em que o agente de entrega é seleccionado do grupo consistido por lipofectina, lipofectamina, cellfectina, policatiões, e liposomas. 43. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 42, em que o agente de entrega é um liposoma. 44. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 43, em que o liposoma compreende um ligante que tem como alvo o liposoma para as células em ou perto do sitio de angiogénese.
    45. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 44, em que o ligante liga-se aos receptores em células tumorais ou células endoteliais vasculares.
    46. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 45, em que o ligante compreende um anticorpo monoclonal.
    47. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 44, em que o liposoma é modificado com uma parte de molécula de inibição de opsonização.
    48. O pequeno ARN de interferência (siARN) da reivindicação 47, em que a parte da molécula de inibição de opsonização compreende um PEG, PPG, ou derivativos destes. 5/9 49. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 36, em que o pequeno ARN de interferência (siARN) é expresso a partir de um plasmídio recombinante. 50. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 36, em que o pequeno ARN de interferência (siARN) é expresso a partir de um vector virai recombinante. 51. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 50 52. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 51, em que o vector virai recombinante é pseudotipado com proteínas de superfície de vírus de estomatite vesicular, vírus da raiva, vírus Ébola, ou vírus Mokola.
    53. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 36, em que o siARN é administrado por uma via de administração enteral.
    54. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 53, em que a via de administração enteral é seleccionada a partir do grupo consistido de oral, rectal, e intra-nasal.
    55. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 36, em que o pequeno ARN de interferência (siARN) é administrado por uma via de administração parental.
    56. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 55, em que a via de administração parental é seleccionada do grupo que consiste de administração intra-ocular, administração intravascular, injecção peri e intra tecido, injecção subcutânea ou deposição, infusão subcutânea, e aplicação directa em ou perto do sítio de neovascularização. 57. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 56, em que a administração intravascular é seleccionada a partir do grupo que consiste de injecção bólus intravenosa, infusão intravenosa, injecção bólus intra-arterial, infusão intra-arterial e instalação de cateter na vasculatura. 58. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 56, em que a injecção peri e intra tecido compreende a injecção peri-tumoral ou injecção intra-tumoral.
    59. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 56, em que a administração intra-ocular compreende administração intravítrea, intra-retiniana, 6/9 subretinal, subtenoniana, peri e retro orbital, transcorneal ou transescleral.
    60. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 56, em que a aplicação directa em ou perto do sitio de neovascularização compreende a aplicação por cateter, pellet corneai, gotas, supositórios, um implante de compreende um material poroso, um implante que compreende um material não poroso, ou um implante que compreende um material gelatinoso. 61. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 56, em que o sítio de neovascularização é no olho, e a aplicação directa em ou perto do sítio de neovascularização compreende a aplicação por um implante ocular. 62. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 61, em que o implante ocular é biodegradável.
    63. Uma quantidade eficaz de pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) que compreende uma cadeia de ARN sentido e uma cadeia de ARN anti-sentido, em que as cadeias de ARN sentido e anti-sentido formam um duplex ARN, e no qual a cadeia de ARN sentido compreende uma sequência de nucleótido idêntica a uma sequência alvo no ARNm do factor de crescimento vascular endotelial humano (FCVE) na qual a dita sequência alvo é seleccionada de SEQ ID No. 47, SEQ ID No. 48, SEQ ID No. 50, SEQ ID No. 51, SEQ ID No. 52 e SEQ ID No. 56 para uso na prevenção da angiogénese.
    64. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 63, em que a cadeia de ARN sentido compreende a SEQ ID NO: 77, e a cadeia de ARN anti-sentido compreende a SEQ ID NO: 78.
    65. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 63, em que a angiogénese é patogénica.
    66. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 63, em que a angiogénese não é patogénica. 67. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 66, em que a angiogénese não-patogénica é associada com a produção de tecidos gordos ou produção de colesterol.
    68. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 66, em que a angiogénese não-patogénica compreende neovascularização endometrial.
    69. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 63, em que a angiogénese é inibida em um ou ambos os olhos do sujeito. 7/9
    70. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 63, em que a angiogénese é inibida em células epiteliais do pigmento retinal do sujeito.
    71. Uma quantidade eficaz de pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) que compreende uma cadeia de ARN sentido e uma cadeia de ARN anti-sentido, em que as cadeias de ARN sentido e anti-sentido formam um duplex ARN, e no qual a cadeia de ARN sentido compreende uma sequência de nucleótido idêntica a uma sequência alvo no ARNm do factor de crescimento vascular endotelial humano (FCVE) na qual a dita sequência alvo é seleccionada da SEQ ID No. 47, SEQ ID No. 48, SEQ ID No. 50, SEQ ID No. 51, SEQ ID No. 52 e SEQ ID No. 56 para uso no tratamento da doença angiogénica de tal modo que a angiogénese associada com a doença angiogénica é inibida.
    72. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 71, em que a cadeia de ARN sentido compreende a SEQ ID NO: 77, e a cadeia de ARN anti-sentido compreende a SEQ ID NO: 78.
    73. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 71, em que a doença angiogénica compreende um tumor associado a um cancro.
    74. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 73, em que o cancro é seleccionado do grupo consistido por neoplasia da mama, neoplasia pulmonar, neoplasia da cabeça e pescoço, neoplasia cerebral, neoplasia abdominal, neoplasia do cólon, neoplasia colorectal, neoplasia do esófago, neoplasia gastrointestinal, glioma, neoplasia do fígado, neoplasia da língua, neuroblastoma, osteosarcoma, neoplasia dos ovários, neoplasia pancreático, neoplasia da próstata, retinoblastoma, tumor de Wilm, múltiplo mieloma, neoplasia da pele, linfoma, e neoplasia do sangue. 75. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 71, em que a doença angiogénica é seleccionada a partir do grupo consistido por retinopatia diabética, degeneração macular relacionada com a idade, e doenças inflamatórias.
    76. Este pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 75, a doença inflamatória é psoríase ou artrite reumatóide.
    77. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 71, em que o pequeno ARN de interferência (siARN) é administrado em combinação com um agente farmacêutico para tratar a doença angiogénica, sendo que o tal agente farmacêutico é diferente do pequeno ARN de interferência (siARN).
    78. O pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 77, em que a doença angiogénica é cancro, 8/9 e o agente farmacêutico compreende um agente quimioterapêutico. 79. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 78, em que o agente de quimioterapia é seleccionado do grupo consistido por cisplatina, carboplatina, ciclofosfamida, 5-fluorouracil, adriamicina, daunorrubicina, e tamoxifeno. 80. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 71, em que o pequeno ARN de interferência (siARN) é administrado a um sujeito em combinação com outro método terapêutico designado para tratar a doença angiogénica. 81. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 80, em que a doença angiogénica é cancro, e o pequeno ARN de interferência (siARN) é administrado em combinação com radioterapia, quimioterapia ou cirurgia. 82. 0 pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) da reivindicação 1, em que o pequeno ácido ribonucleico de interferência (siARN) compreende ainda ARN alterado. Lisboa, 09 de Junho de 2010 9/9 pg/ml C4Mm 22$
    FIG 1 S 8'
    Cêiuim ΗθΙο
    FIG. 1 1/6 Cé!vlas$T3
    FIG 2 p<0.0013
    FIG. 3 2/6 ÁMA de CNY
    Çfp 1'CVE siARts s*ARR dO RofO FIG.4 PoiiT Pelít
    FÍG. 5 3/6
    UJLU) AND »P (^UJUl) AND®P»»*y FIG,
    riu
  4. 4/6 0.12
    FIG. 6C
    FÍG.7 5/6 6/6
PT03765708T 2002-07-24 2003-07-18 Composições e métodos para inibição si-arn de angiogénese PT1578933E (pt)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US39841702P 2002-07-24 2002-07-24
US10/294,228 US7148342B2 (en) 2002-07-24 2002-11-14 Compositions and methods for sirna inhibition of angiogenesis

Publications (1)

Publication Number Publication Date
PT1578933E true PT1578933E (pt) 2010-06-17

Family

ID=30772633

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PT03765708T PT1578933E (pt) 2002-07-24 2003-07-18 Composições e métodos para inibição si-arn de angiogénese

Country Status (16)

Country Link
US (13) US7148342B2 (pt)
EP (3) EP1578933B9 (pt)
JP (1) JP5337337B2 (pt)
KR (2) KR20110063597A (pt)
AT (1) ATE460500T1 (pt)
AU (1) AU2003253995B2 (pt)
CA (1) CA2493499C (pt)
CY (1) CY1110141T1 (pt)
DE (1) DE60331683D1 (pt)
DK (1) DK1578933T3 (pt)
ES (1) ES2340843T3 (pt)
IL (3) IL166274A0 (pt)
MX (1) MXPA05001000A (pt)
NZ (1) NZ537833A (pt)
PT (1) PT1578933E (pt)
WO (1) WO2004009769A2 (pt)

Families Citing this family (277)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030216335A1 (en) * 2001-11-30 2003-11-20 Jennifer Lockridge Method and reagent for the modulation of female reproductive diseases and conditions
US6346398B1 (en) * 1995-10-26 2002-02-12 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Method and reagent for the treatment of diseases or conditions related to levels of vascular endothelial growth factor receptor
DK1295611T3 (da) * 2000-06-20 2010-10-04 Dainippon Sumitomo Pharma Co Oligonukleotid-transformerende forbindelser
US7517864B2 (en) * 2001-05-18 2009-04-14 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050222066A1 (en) * 2001-05-18 2005-10-06 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US9994853B2 (en) 2001-05-18 2018-06-12 Sirna Therapeutics, Inc. Chemically modified multifunctional short interfering nucleic acid molecules that mediate RNA interference
US20050148530A1 (en) * 2002-02-20 2005-07-07 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050054596A1 (en) * 2001-11-30 2005-03-10 Mcswiggen James RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
ES2324525T3 (es) * 2001-06-20 2009-08-10 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. Metodo para promover transferencia de acidos nucleicos.
FR2832154B1 (fr) * 2001-11-09 2007-03-16 Centre Nat Rech Scient Oligonucleotides inhibiteurs et leur utilisation pour reprimer specifiquement un gene
US20040138163A1 (en) * 2002-05-29 2004-07-15 Mcswiggen James RNA interference mediated inhibition of vascular edothelial growth factor and vascular edothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050075304A1 (en) * 2001-11-30 2005-04-07 Mcswiggen James RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20070203333A1 (en) * 2001-11-30 2007-08-30 Mcswiggen James RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US9657294B2 (en) 2002-02-20 2017-05-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
US9181551B2 (en) 2002-02-20 2015-11-10 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
US20050222061A1 (en) 2002-04-18 2005-10-06 Schulte Ralf W Means and methods for the specific inhibition of genes in cells and tissue of the cns and/or eye
US7148342B2 (en) * 2002-07-24 2006-12-12 The Trustees Of The University Of Pennyslvania Compositions and methods for sirna inhibition of angiogenesis
EP1527176B2 (en) 2002-08-05 2017-03-22 Silence Therapeutics GmbH Further novel forms of interfering rna molecules
US20060211637A1 (en) * 2002-08-06 2006-09-21 Intradigm Corporation Methods of down regulating target gene expression in vivo by introduction of interfering rna
WO2006006948A2 (en) 2002-11-14 2006-01-19 Dharmacon, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR SELECTING siRNA OF IMPROVED FUNCTIONALITY
DK2284266T3 (da) * 2002-11-14 2014-01-13 Thermo Fisher Scient Biosciences Inc sIRNA-MOLEKYLE MOD TP53
US7605249B2 (en) * 2002-11-26 2009-10-20 Medtronic, Inc. Treatment of neurodegenerative disease through intracranial delivery of siRNA
US8796235B2 (en) * 2003-02-21 2014-08-05 University Of South Florida Methods for attenuating dengue virus infection
US8969543B2 (en) 2003-04-03 2015-03-03 Bioneer Corporation SiRNA-hydrophilic polymer conjugates for intracellular delivery of siRNA and method thereof
AU2003219576A1 (en) 2003-04-03 2004-10-25 Korea Advanced Institute Of Science And Technology Conjugate for gene transfer comprising oligonucleotide and hydrophilic polymer, polyelectrolyte complex micelles formed from the conjugate, and methods for preparation thereof
AU2004263830B2 (en) * 2003-06-13 2008-12-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Double-stranded ribonucleic acid with increased effectiveness in an organism
US20050019927A1 (en) * 2003-07-13 2005-01-27 Markus Hildinger DECREASING GENE EXPRESSION IN A MAMMALIAN SUBJECT IN VIVO VIA AAV-MEDIATED RNAi EXPRESSION CASSETTE TRANSFER
AU2004267425B2 (en) * 2003-08-13 2010-10-21 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Silencing of TGF-beta receptor type II expression by sIRNA
US7480382B2 (en) * 2003-09-30 2009-01-20 Microsoft Corporation Image file container
WO2005056021A1 (en) 2003-12-04 2005-06-23 University Of South Florida Polynucleotides for reducing respiratory syncytial virus gene expression
JPWO2005063984A1 (ja) * 2003-12-30 2007-07-19 澁谷　正史 遺伝子発現を抑制する二本鎖ｒｎａ
US20050164271A1 (en) * 2004-01-20 2005-07-28 Sanjay Bhanot Modulation of glucocorticoid receptor expression
JP4755113B2 (ja) 2004-01-30 2011-08-24 クアーク・ファーマスーティカルス、インコーポレイテッド 線維性状態およびその他の疾患の治療のための、オリゴリボヌクレオチドおよびその使用方法
CN101052644A (zh) * 2004-02-05 2007-10-10 因特拉迪格姆公司 治疗眼新生血管化疾病的RNAi治疗药物
EP2295604B1 (en) 2004-02-09 2015-04-08 Thomas Jefferson University Diagnosis and treatment of cancers with microRNA located in or near cancer-associated chromosomal features
US7309487B2 (en) * 2004-02-09 2007-12-18 George Inana Methods and compositions for detecting and treating retinal diseases
WO2005089224A2 (en) 2004-03-12 2005-09-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. iRNA AGENTS TARGETING VEGF
US20050202075A1 (en) * 2004-03-12 2005-09-15 Pardridge William M. Delivery of genes encoding short hairpin RNA using receptor-specific nanocontainers
US20070265220A1 (en) 2004-03-15 2007-11-15 City Of Hope Methods and compositions for the specific inhibition of gene expression by double-stranded RNA
AU2005222965B8 (en) 2004-03-15 2010-07-01 City Of Hope Methods and compositions for the specific inhibition of gene expression by double-stranded RNA
US20050272682A1 (en) * 2004-03-22 2005-12-08 Evers Bernard M SiRNA targeting PI3K signal transduction pathway and siRNA-based therapy
US20050244869A1 (en) * 2004-04-05 2005-11-03 Brown-Driver Vickie L Modulation of transthyretin expression
US20050244472A1 (en) * 2004-04-30 2005-11-03 Allergan, Inc. Intraocular drug delivery systems containing excipients with reduced toxicity and related methods
US10508277B2 (en) 2004-05-24 2019-12-17 Sirna Therapeutics, Inc. Chemically modified multifunctional short interfering nucleic acid molecules that mediate RNA interference
US8101350B1 (en) * 2004-05-24 2012-01-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of exportin 5 expression
EP2399924B1 (en) 2004-05-27 2015-01-28 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant double-stranded ribonucleic acid
CA2569664C (en) * 2004-06-07 2013-07-16 Protiva Biotherapeutics, Inc. Lipid encapsulated interfering rna
WO2006007712A1 (en) * 2004-07-19 2006-01-26 Protiva Biotherapeutics, Inc. Methods comprising polyethylene glycol-lipid conjugates for delivery of therapeutic agents
GB0418172D0 (en) * 2004-08-13 2004-09-15 Ic Vec Ltd Vector
JP2008509205A (ja) * 2004-08-13 2008-03-27 アイシー・ベック・リミテッド ポリマー修飾ｓｉＲＮＡリポソームを含むベクター
ATE555202T1 (de) 2004-08-16 2012-05-15 Immune Disease Inst Inc Verfahren zur lieferung von rna-interferenz und verwendungen damit
US8138161B2 (en) 2004-10-01 2012-03-20 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Modified small interfering RNA molecules and methods of use
US8765704B1 (en) 2008-02-28 2014-07-01 Novartis Ag Modified small interfering RNA molecules and methods of use
US7901711B1 (en) * 2006-04-17 2011-03-08 Gp Medical, Inc. Nanoparticles for protein/peptide delivery and delivery means thereof
EP1807514A1 (en) * 2004-10-22 2007-07-18 Benitec, Inc. Therapeutic rnai agents for treating psoriasis
US20060105979A1 (en) * 2004-11-08 2006-05-18 Hybridon, Inc. Synergistic inhibition of VEGF and modulation of the immune response
US8138327B2 (en) * 2004-11-23 2012-03-20 City Of Hope Inducible systems and methods for controlling siRNA expression
TWI401316B (zh) * 2004-12-23 2013-07-11 Alcon Inc 用於治療青光眼之血清澱粉樣蛋白Ａ的ＲＮＡｉ抑制作用
WO2006086681A2 (en) * 2005-02-09 2006-08-17 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Methods of inhibiting smooth muscle cell migration and proliferation
US20100196509A1 (en) 2005-02-28 2010-08-05 Jonathan Braun Methods for Diagnosis and Treatment of Endometrial Cancer
KR100627377B1 (ko) 2005-03-04 2006-09-25 한국생명공학연구원 뇌하수체 종양-형질전환 유전자 1 단백질의 합성을 차단할수 있는 작은 간섭 ｒｎａ 및 이를 발현하는 벡터를 이용한 암의 유전자 치료
ATE523591T1 (de) * 2005-04-12 2011-09-15 Univ Bruxelles Verwendung eines ansatzes auf rnai-basis mit galectin-1 als ziel zur krebsbehandlung
JP2008537752A (ja) * 2005-04-12 2008-09-25 イントラディグム コーポレイション がんおよび他の新血管形成疾患を処置するためのＲＮＡｉ治療用の組成物および方法
US7893244B2 (en) * 2005-04-12 2011-02-22 Intradigm Corporation Composition and methods of RNAi therapeutics for treatment of cancer and other neovascularization diseases
US8648052B2 (en) * 2005-04-15 2014-02-11 The Regents Of The University Of California Prevention of chlamydia infection using SIRNA
US8318906B2 (en) 2005-04-15 2012-11-27 The Regents Of The University Of California EMP2 antibodies and their therapeutic uses
WO2006113526A2 (en) 2005-04-15 2006-10-26 The Regents Of The University Of California Prevention of chlamydia infection using a protective antibody
US20060246143A1 (en) * 2005-04-28 2006-11-02 Hilmi Ege Targeted therapy via targeted delivery of energy susceptible nanoscale magnetic particles
WO2007011819A2 (en) * 2005-07-15 2007-01-25 The Penn State Research Foundation Ferritin as a therapeutic target in abnormal cells
CA2619533C (en) * 2005-08-17 2014-02-04 Bioneer Corporation Sirna-hydrophilic polymer conjugates for intracellular delivery of sirna and method thereof
TWI268357B (en) * 2005-09-13 2006-12-11 Sunplus Technology Co Ltd Synchronous method and system of data bits for global positioning system with a data buffer used to receive and store data bits of the satellite signal
WO2007033058A2 (en) * 2005-09-13 2007-03-22 Trustees Of Dartmouth College Compositions and methods for regulating rna translation via cd154 ca-dinucleotide repeat
US8278107B2 (en) * 2005-09-13 2012-10-02 Trustees Of Dartmouth College Compositions and methods for regulating RNA translation via CD154 CA-dinucleotide repeat
US8168584B2 (en) 2005-10-08 2012-05-01 Potentia Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating age-related macular degeneration by compstatin and analogs thereof
KR100749859B1 (ko) * 2005-10-18 2007-08-16 연세대학교 산학협력단 ＶＥＧＦ―Ａ 특이적 ｓｉＲＮＡ를 발현하는 개선된 종양살상 효과를 나타내는 재조합 아데노바이러스
CN101374408A (zh) * 2005-12-15 2009-02-25 目标栽培公司 通过在早期胚胎发育期间生长和/或发育相关基因的转基因过量表达来增加种子大小和种子数目
NZ569368A (en) * 2005-12-22 2011-11-25 Exegenics Inc D B A Opko Health Inc siRNA compositions and methods for regulating the C3 protein in the complement system
US8288354B2 (en) * 2005-12-28 2012-10-16 The Scripps Research Institute Natural antisense and non-coding RNA transcripts as drug targets
ES2465600T3 (es) 2006-01-05 2014-06-06 The Ohio State University Research Foundation Métodos basados en microARN y composiciones para el diagnóstico y tratamiento de cánceres sólidos del páncreas
EP2586454B1 (en) 2006-01-05 2014-10-08 The Ohio State University Research Foundation MicroRNA expressions abnormalities in pancreatic endocrine and acinar tumors
ES2554531T3 (es) 2006-01-05 2015-12-21 The Ohio State University Research Foundation Procedimientos basados en los microARN para el diagnóstico, pronóstico y tratamiento del cáncer de pulmón
JPWO2007080902A1 (ja) * 2006-01-11 2009-06-11 協和発酵キリン株式会社 眼球において標的遺伝子の発現を抑制する組成物および眼球における疾患の治療剤
JO2660B1 (en) 2006-01-20 2012-06-17 نوفارتيس ايه جي Pi-3 inhibitors and methods of use
EP1993584B1 (en) * 2006-02-02 2012-05-30 Allergan, Inc. Inhibitors of CXCR4 activity for use in the treatment of ocular disorders
CA2638844C (en) 2006-03-02 2016-05-03 Thomas D. Schmittgen Microrna expression profile associated with pancreatic cancer
WO2007109236A2 (en) 2006-03-20 2007-09-27 The Ohio State University Research Foundation Microrna fingerprints during human megakaryocytopoiesis
JP5704741B2 (ja) 2006-03-31 2015-04-22 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． Ｅｇ５遺伝子発現の抑制のための組成物および方法
TW200808739A (en) 2006-04-06 2008-02-16 Novartis Vaccines & Diagnostic Quinazolines for PDK1 inhibition
US20070281900A1 (en) * 2006-05-05 2007-12-06 Nastech Pharmaceutical Company Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR LIPID AND POLYPEPTIDE BASED siRNA INTRACELLULAR DELIVERY
CA2652349A1 (en) * 2006-05-15 2007-11-22 University Of Kentucky Research Foundation Toll-like receptor (tlr) stimulation for ocular angiogenesis and macular degeneration
US20090130212A1 (en) * 2006-05-15 2009-05-21 Physical Pharmaceutica, Llc Composition and improved method for preparation of small particles
US8598333B2 (en) * 2006-05-26 2013-12-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. SiRNA silencing of genes expressed in cancer
PT2029746E (pt) * 2006-06-12 2012-10-15 Exegenics Inc D B A Opko Health Inc Composições e métodos para a inibição do sirna de angiogenese
KR100794705B1 (ko) * 2006-06-13 2008-01-14 (주)바이오니아 선택적 스플라이싱을 고려한 ｓｉＲＮＡ를 이용하여 표적ｍＲＮＡ의 발현을 억제하는 방법
US7572618B2 (en) 2006-06-30 2009-08-11 Bristol-Myers Squibb Company Polynucleotides encoding novel PCSK9 variants
CN101657547B (zh) 2006-07-13 2016-04-27 俄亥俄州立大学研究基金会 用于诊断和治疗结肠癌相关疾病的基于微小rna的方法和组合物
US8138160B2 (en) * 2006-08-03 2012-03-20 Warsaw Orthopedic, Inc. Reagents, methods and systems to suppress pro-inflammatory cytokines
US7872118B2 (en) * 2006-09-08 2011-01-18 Opko Ophthalmics, Llc siRNA and methods of manufacture
WO2008045576A2 (en) * 2006-10-12 2008-04-17 Yijia Liu Compositions and methods of rnai therapeutics for treatment of cancer and other neovascularization diseases
US20100119474A1 (en) * 2007-03-06 2010-05-13 Cornell University Chronic obstructive pulmonary disease susceptibility and related compositions and methods
WO2008115387A2 (en) * 2007-03-15 2008-09-25 University Hospitals Of Cleveland Screening, diagnosing, treating and prognosis of pathophysiologic states by rna regulation
PE20090064A1 (es) * 2007-03-26 2009-03-02 Novartis Ag Acido ribonucleico de doble cadena para inhibir la expresion del gen e6ap humano y composicion farmaceutica que lo comprende
US20090226525A1 (en) * 2007-04-09 2009-09-10 Chimeros Inc. Self-assembling nanoparticle drug delivery system
AU2008262252B2 (en) 2007-06-08 2013-09-12 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Methods for determining hepatocellular carcinoma subtype and detecting hepatic cancer stem cells
EP2172226A4 (en) * 2007-06-29 2010-06-30 Stelic Institute Regenerative Medicine METHOD FOR FIXING AND EXPRESSING A PHYSIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCE
WO2009012263A2 (en) * 2007-07-18 2009-01-22 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Tissue-specific micrornas and compositions and uses thereof
EP2808398A1 (en) 2007-07-31 2014-12-03 The Ohio State University Research Foundation Methods for reverting methylation by targeting DNMT3A and DNMT3B
ES2627059T3 (es) 2007-08-03 2017-07-26 The Ohio State University Research Foundation Regiones ultraconservadas que codifican ARNnc
US7960336B2 (en) 2007-08-03 2011-06-14 Pharmain Corporation Composition for long-acting peptide analogs
US8563527B2 (en) 2007-08-20 2013-10-22 Pharmain Corporation Oligonucleotide core carrier compositions for delivery of nucleic acid-containing therapeutic agents, methods of making and using the same
CA2926831A1 (en) 2007-08-22 2009-02-26 The Ohio State University Research Foundation Methods and compositions for inducing deregulation of epha7 and erk phosphorylation in human acute leukemias
KR100810034B1 (ko) * 2007-08-23 2008-03-05 주식회사 바이오폴리메드 세포 증식 및 이동 억제를 위한 ＮＦ-ＫＢ ｐ105의ｓｉＲＮＡ 및 이를 함유하는 조성물
US8183221B2 (en) * 2007-09-05 2012-05-22 Medtronic, Inc. Suppression of SCN9A gene expression and/or function for the treatment of pain
EP2183393B1 (en) 2007-09-06 2014-06-11 The Ohio State University Research Foundation Microrna signatures in human ovarian cancer
CA2698812A1 (en) 2007-09-14 2009-03-19 Nitto Denko Corporation Drug carriers
US8129356B2 (en) * 2007-10-01 2012-03-06 Vanderbilt University Bmx mediated signal transduction in irradiated vascular endothelium
US7973019B1 (en) 2007-10-03 2011-07-05 Alcon Research, Ltd. Transferrin/transferrin receptor-mediated siRNA delivery
WO2011063161A2 (en) 2009-11-20 2011-05-26 The Regents Of The University Of California Epithelial membrane protein-2 (emp2) and proliferative vitreoretinopathy (pvr)
CN103937876B (zh) 2007-10-11 2016-08-17 俄亥俄州立大学研究基金会 用于诊断和治疗食管腺癌的方法和组合物
WO2009065077A1 (en) * 2007-11-16 2009-05-22 Pharmain Corporation Cationic-core carrier compositions for delivery of therapeutic agents, methods of making and using the same
US20100204305A1 (en) * 2007-12-11 2010-08-12 Lorus Therapeutics Inc. Small interfering rna molecules against ribonucleotide reductase and uses thereof
CA2710122A1 (en) 2007-12-20 2009-07-02 Novartis Ag Thiazole derivatives used as pi 3 kinase inhibitors
US20090186835A1 (en) * 2008-01-15 2009-07-23 Gross Richard A Treatment and prophylaxis of cancer
EA019531B1 (ru) * 2008-03-05 2014-04-30 Элнилэм Фармасьютикалз, Инк. КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ИНГИБИРОВАНИЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ Eg5 И VEGF
US20090226531A1 (en) * 2008-03-07 2009-09-10 Allergan, Inc. Methods and composition for intraocular delivery of therapeutic sirna
US7902166B2 (en) * 2008-04-03 2011-03-08 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Compositions comprising inhibitors of RNA binding proteins and methods of producing and using same
US8936941B2 (en) 2008-04-03 2015-01-20 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Compositions useful for cancer detection and treatment, a cancer stem cell model, and methods of production and use thereof
US8198255B2 (en) * 2008-05-16 2012-06-12 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma SiRNA-mediated inhibition of doublecortin and Ca2+/calmodulin-dependent kinase-like-1
US7956044B1 (en) 2008-04-03 2011-06-07 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Compositions comprising inhibitors of RNA binding proteins and methods of producing and using same
GB0807018D0 (en) * 2008-04-17 2008-05-21 Fusion Antibodies Ltd Antibodies and treatment
US9663585B2 (en) 2008-05-16 2017-05-30 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Anti-DCLK1 monoclonal antibodies and methods of production and use thereof
WO2010008562A2 (en) 2008-07-16 2010-01-21 Recombinetics Methods and materials for producing transgenic animals
US8119129B2 (en) 2008-08-01 2012-02-21 Bristol-Myers Squibb Company Combination of anti-CTLA4 antibody with dasatinib for the treatment of proliferative diseases
EP2323667A4 (en) * 2008-08-07 2012-07-25 Isis Pharmaceuticals Inc MODULATION OF TRANSTHYRETIN EXPRESSION BY TREATMENT OF CNS DISEASES
EP2949752B1 (en) 2008-09-22 2017-12-20 RXi Pharmaceuticals Corporation Reduced size self-delivering rnai compounds
EP3067359A1 (en) 2008-09-23 2016-09-14 Scott G. Petersen Self delivering bio-labile phosphate protected pro-oligos for oligonucleotide based therapeutics and mediating rna interference
EP2352830B1 (en) * 2008-10-03 2019-01-16 CuRNA, Inc. Treatment of apolipoprotein-a1 related diseases by inhibition of natural antisense transcript to apolipoprotein-a1
WO2010065834A1 (en) * 2008-12-04 2010-06-10 Opko Ophthalmics, Llc Compositions and methods for selective inhibition of pro-angiogenic vegf isoforms
EP2370579B1 (en) 2008-12-04 2017-03-29 CuRNA, Inc. Treatment of erythropoietin (epo) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to epo
MX2011005912A (es) * 2008-12-04 2011-06-17 Opko Curna Llc Tratamiento de enfermedades relacionadas con factor de crecimiento endotelial vascular por inhibicion de transcrito antisentido natural para factor de crecimiento endotelial vascular.
KR20110091796A (ko) 2008-12-04 2011-08-12 오피케이오 큐알엔에이, 엘엘씨 종양 억제 유전자에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의해 종양 억제 유전자 관련된 질환의 치료
US20100233172A1 (en) 2008-12-16 2010-09-16 Bristol-Myers Squibb Company Methods of inhibiting quiescent tumor proliferation
US9745574B2 (en) 2009-02-04 2017-08-29 Rxi Pharmaceuticals Corporation RNA duplexes with single stranded phosphorothioate nucleotide regions for additional functionality
KR101682735B1 (ko) 2009-02-12 2016-12-06 큐알엔에이, 인크. 뇌 유래된 신경영양성 인자 (ｂｄｎｆ)에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 뇌 유래된 신경영양성 인자 (ｂｄｎｆ) 관련된 질환의 치료
CN102482677B (zh) 2009-03-16 2017-10-17 库尔纳公司 通过抑制nrf2的天然反义转录物治疗核因子(红细胞衍生2)‑样2(nrf2)相关疾病
JP5904935B2 (ja) 2009-03-17 2016-04-20 クルナ・インコーポレーテッド デルタ様１ホモログ（ｄｌｋ１）に対する天然アンチセンス転写物の抑制によるｄｌｋ１関連疾患の治療
EP2756845B1 (en) * 2009-04-03 2017-03-15 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the specific inhibition of KRAS by asymmetric double-stranded RNA
WO2010120874A2 (en) 2009-04-14 2010-10-21 Chimeros, Inc. Chimeric therapeutics, compositions, and methods for using same
CA2761152A1 (en) 2009-05-06 2010-11-11 Opko Curna, Llc Treatment of lipid transport and metabolism gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a lipid transport and metabolism gene
CA2761142C (en) 2009-05-06 2021-06-08 Opko Curna, Llc Treatment of tristetraproline (ttp) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ttp
ES2618572T3 (es) 2009-05-08 2017-06-21 Curna, Inc. Tratamiento de enfermedades relacionadas con la familia de la distrofina mediante inhibición de un transcrito antisentido natural para la familia de dmd
KR101749356B1 (ko) 2009-05-18 2017-07-06 큐알엔에이, 인크. 재편성 인자에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 재편성 인자 관련된 질환의 치료
KR101703695B1 (ko) 2009-05-22 2017-02-08 큐알엔에이, 인크. 전사 인자 ｅ3(ｔｆｅ3)에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의해 ｔｆｅ3 및 인슐린 수용체 기질 2(ｉｒｓ2)의 치료
EP2435571B1 (en) 2009-05-28 2016-12-14 CuRNA, Inc. Treatment of antiviral gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to an antiviral gene
KR101801404B1 (ko) 2009-06-16 2017-12-20 큐알엔에이, 인크. 콜라겐 유전자에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 콜라겐 유전자 관련된 질환의 치료
KR101702689B1 (ko) 2009-06-16 2017-02-06 큐알엔에이, 인크. Ｐｏｎ1에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 파라옥소나제 1(ｐｏｎ1) 관련된 질환의 치료
ES2618894T3 (es) 2009-06-24 2017-06-22 Curna, Inc. Tratamiento de enfermedades relacionadas con el receptor del factor de necrosis tumoral 2 (tnfr2) por inhibición del transcrito natural antisentido para tnfr2
CN102482672B (zh) 2009-06-26 2016-11-09 库尔纳公司 通过抑制唐氏综合征基因的天然反义转录物治疗唐氏综合征基因相关疾病
WO2011000106A1 (en) 2009-07-01 2011-01-06 Protiva Biotherapeutics, Inc. Improved cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents
US9018187B2 (en) 2009-07-01 2015-04-28 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents
US8293753B2 (en) 2009-07-02 2012-10-23 Novartis Ag Substituted 2-carboxamide cycloamino ureas
SI2769737T1 (sl) 2009-07-20 2017-06-30 Bristol-Myers Squibb Company Kombinacija anti-ctla4 protitelesa z etoposidom za sinergistično zdravljenje proliferativnih bolezni
JP2013500017A (ja) 2009-07-24 2013-01-07 カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド サ−チュイン（ｓｉｒｔ）への天然アンチセンス転写物の阻止によるサ−チュイン（ｓｉｒｔ）関連疾患の治療
CN102762731B (zh) 2009-08-05 2018-06-22 库尔纳公司 通过抑制针对胰岛素基因(ins)的天然反义转录物来治疗胰岛素基因(ins)相关的疾病
JP6189594B2 (ja) 2009-08-11 2017-08-30 クルナ・インコーポレーテッド アディポネクチン（ａｄｉｐｏｑ）に対する天然アンチセンス転写物の抑制によるアディポネクチン（ａｄｉｐｏｑ）関連疾患の治療
EP2982755B1 (en) 2009-08-21 2020-10-07 CuRNA, Inc. Treatment of 'c terminus of hsp70-interacting protein' (chip) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to chip
EP2470657B1 (en) 2009-08-25 2019-10-23 CuRNA, Inc. Treatment of 'iq motif containing gtpase activating protein' (iqgap) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to iqgap
WO2011023413A1 (en) 2009-08-31 2011-03-03 Alcedo Biotech Gmbh Microrna-based methods and compositions for reprogramming cells
NO2480669T3 (pt) 2009-09-25 2018-04-07
WO2011053774A1 (en) 2009-10-30 2011-05-05 Alcon Research, Ltd. Single nucleotide polymorphisms and genes associated with age-related macular degeneration
CA2782728A1 (en) * 2009-12-04 2011-06-09 Opko Ophthalmics, Llc Compositions and methods for inhibition of vegf
RU2639550C2 (ru) 2009-12-16 2017-12-21 Курна, Инк. Лечение заболеваний, связанных с сайт-1 мембраносвязанной пептидазой транскрипционных факторов (mbtps1), путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта к mbtps1
EP2515947B1 (en) 2009-12-23 2021-10-06 CuRNA, Inc. Treatment of uncoupling protein 2 (ucp2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ucp2
RU2609631C2 (ru) 2009-12-23 2017-02-02 Курна, Инк. Лечение заболеваний, связанных с фактором роста гепатоцитов (фрг), посредством ингибирования природного антисмыслового транскрипта к фрг
KR101838305B1 (ko) 2009-12-29 2018-03-13 큐알엔에이, 인크. ＮＲＦ1(Ｎｕｃｌｅａｒ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｆａｃｔｏｒ 1)에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 핵 호흡 인자 1 관련된 질환의 치료
CN102770540B (zh) 2009-12-29 2017-06-23 库尔纳公司 通过抑制肿瘤蛋白63(p63)的天然反义转录物而治疗p63相关疾病
US20120289583A1 (en) 2009-12-31 2012-11-15 Curna, Inc. Treatment of insulin receptor substrate 2 (irs2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to irs2 and transcription factor e3 (tfe3)
CN102906264B (zh) 2010-01-04 2017-08-04 库尔纳公司 通过抑制干扰素调节因子8(irf8)的天然反义转录物而治疗irf8相关疾病
WO2011085066A2 (en) 2010-01-06 2011-07-14 Curna, Inc. Treatment of pancreatic developmental gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a pancreatic developmental gene
US9200277B2 (en) 2010-01-11 2015-12-01 Curna, Inc. Treatment of sex hormone binding globulin (SHBG) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to SHBG
JP5212849B2 (ja) * 2010-01-14 2013-06-19 株式会社三和化学研究所 眼内血管新生及び／又は眼内血管透過性亢進を伴う疾患の予防又は治療のための医薬
ES2671877T3 (es) 2010-01-25 2018-06-11 Curna, Inc. Tratamiento de enfermedades relacionadas con la RNASA (H1) mediante inhibición del transcrito antisentido natural a RNASA H1
KR101838308B1 (ko) 2010-02-22 2018-03-13 큐알엔에이, 인크. 피롤린-5-카르복실레이트 환원효소 1(ｐｙｃｒ1)에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 ｐｙｃｒ1과 관련된 질환의 치료
WO2011109427A2 (en) 2010-03-01 2011-09-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Improving the biological activity of sirna through modulation of its thermodynamic profile
CN101942441A (zh) * 2010-03-08 2011-01-12 江其生 一种抑制人肺癌细胞增殖转移的siRNA的结构及用途
RU2615143C2 (ru) 2010-03-24 2017-04-04 Адвирна Самодоставляющие PHKi соединения уменьшенного размера
CN106074591B (zh) 2010-03-24 2020-01-14 菲奥医药公司 眼部症候中的rna干扰
RU2612884C2 (ru) 2010-04-02 2017-03-13 Курна, Инк. Лечение заболеваний, связанных с колониестимулирующим фактором 3 (csf3), путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта k csf3
KR101900962B1 (ko) 2010-04-09 2018-09-20 큐알엔에이, 인크. 섬유아세포 성장 인자 21 (ｆｇｆ21)에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 섬유아세포 성장 인자 21 (ｆｇｆ21) 관련된 질환의 치료
JP5835699B2 (ja) * 2010-04-28 2015-12-24 サンディープ キャスジュ 瘢痕化抑制と線維症治療を目的とする組成物と方法
PT2563920T (pt) 2010-04-29 2017-05-26 Ionis Pharmaceuticals Inc Modulação da expressão de transtirretina
US9089588B2 (en) 2010-05-03 2015-07-28 Curna, Inc. Treatment of sirtuin (SIRT) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a sirtuin (SIRT)
TWI531370B (zh) 2010-05-14 2016-05-01 可娜公司 藉由抑制ｐａｒ４天然反股轉錄本治療ｐａｒ４相關疾病
DK2576783T3 (en) 2010-05-26 2018-03-12 Curna Inc TREATMENT OF ATONAL HOMOLOGY 1- (ATOH1) RELATED DISEASES BY INHIBITION OF NATURAL ANTISENCE TRANSCRIPTS AT ATOH1
RU2620978C2 (ru) 2010-05-26 2017-05-30 Курна, Инк. Лечение заболеваний, связанных с метионинсульфоксидредуктазой а (msra), путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта гена msra
PL2585596T3 (pl) 2010-06-23 2021-06-28 Curna, Inc. Leczenie chorób związanych z podjednostką alfa kanału sodowego bramkowanego napięciem (SCNA) poprzez hamowanie naturalnego transkryptu antysensownego SCNA
EP2593547B1 (en) 2010-07-14 2017-11-15 CuRNA, Inc. Treatment of discs large homolog (dlg) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to dlg
US8546349B2 (en) * 2010-07-28 2013-10-01 Thermo Fisher Scientific Biosciences Inc. siRNA targeting VEGFA and methods for treatment in vivo
AR082418A1 (es) 2010-08-02 2012-12-05 Novartis Ag Formas cristalinas de 1-(4-metil-5-[2-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-piridin-4-il]-tiazol-2-il)-amida de 2-amida del acido (s)-pirrolidin-1,2-dicarboxilico
US8993533B2 (en) 2010-10-06 2015-03-31 Curna, Inc. Treatment of sialidase 4 (NEU4) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to NEU4
WO2012051567A2 (en) 2010-10-15 2012-04-19 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Obesity-related genes and their proteins and uses thereof
CA2815212A1 (en) 2010-10-22 2012-04-26 Curna, Inc. Treatment of alpha-l-iduronidase (idua) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to idua
EP3766975A1 (en) 2010-10-29 2021-01-20 Sirna Therapeutics, Inc. Rna interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (sina)
US9198911B2 (en) 2010-11-02 2015-12-01 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for treating hair loss disorders
JP5948337B2 (ja) 2010-11-02 2016-07-06 ザ トラスティース オブ コロンビア ユニバーシティ インザ シティ オブ ニューヨーク 脱毛症の治療方法
WO2012068340A2 (en) 2010-11-18 2012-05-24 Opko Curna Llc Antagonat compositions and methods of use
KR102010598B1 (ko) 2010-11-23 2019-08-13 큐알엔에이, 인크. Nanog에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 nanog 관련된 질환의 치료
CA2819635A1 (en) 2010-12-01 2012-06-07 Spinal Modulation, Inc. Directed delivery of agents to neural anatomy
US9150926B2 (en) 2010-12-06 2015-10-06 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Diagnosis and treatment of adrenocortical tumors using human microRNA-483
PL2670753T3 (pl) 2011-01-31 2017-05-31 Novartis Ag Nowe pochodne heterocykliczne
JP6072772B2 (ja) 2011-04-22 2017-02-01 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 変異体キャプシドを有するアデノ関連ウイルスビリオンおよびその使用方法
CA2831572C (en) 2011-05-02 2019-11-26 Immunomedics, Inc. Ultrafiltration concentration of allotype selected antibodies for small-volume administration
EP2714906A1 (en) 2011-06-01 2014-04-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for adjusting expression of mitochondrial genome by microrna
JP6188686B2 (ja) 2011-06-09 2017-08-30 カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド フラタキシン（ｆｘｎ）への天然アンチセンス転写物の阻害によるｆｘｎ関連疾患の治療
AU2012301617A1 (en) 2011-09-02 2014-04-17 Salk Institute For Biological Studies CaMKII, IP3R, calcineurin, p38 and MK2/3 inhibitors to treat metabolic disturbances of obesity
EA029151B1 (ru) 2011-09-06 2018-02-28 Курна, Инк. ЛЕЧЕНИЕ ЗАБОЛЕВАНИЙ, СВЯЗАННЫХ С АЛЬФА-СУБЪЕДИНИЦАМИ ПОТЕНЦИАЛЗАВИСИМЫХ НАТРИЕВЫХ КАНАЛОВ (SCNxA), С ПОМОЩЬЮ МАЛЫХ МОЛЕКУЛ
CA2847888A1 (en) 2011-09-09 2013-03-14 Biomed Realty, L.P. Methods and compositions for controlling assembly of viral proteins
US20130072854A1 (en) 2011-09-19 2013-03-21 General Electric Company Microbubble complexes and methods of use
CN104364390B (zh) 2011-10-14 2016-08-24 俄亥俄州立大学 与卵巢癌相关的方法和材料
AU2012328680A1 (en) 2011-10-25 2014-05-01 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of GCCR expression
WO2013060894A1 (en) 2011-10-27 2013-05-02 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the treatment and diagnosis of atherosclerosis
MX340452B (es) 2011-10-28 2016-07-08 Novartis Ag Novedosos derivados de purina y su uso en el tratamiento de enfermedades.
TWI496583B (zh) * 2012-02-15 2015-08-21 Univ Nat Chiao Tung 製備抑制血管新生之醫藥載體及醫藥組成物之用途
DK2825648T3 (en) 2012-03-15 2018-10-15 Curna Inc TREATMENT OF BRAIN-DERIVATIVE NEUROTROPHIC FACTOR (BDNF) -related DISEASES BY INHIBITATION OF NATURAL ANTISENCE TRANSCRIPTION TO BDNF
JP6212107B2 (ja) 2012-03-29 2017-10-11 ザ トラスティース オブ コロンビア ユニバーシティ イン ザ シティ オブ ニューヨーク 脱毛障害を処置するための方法
EP2836219A1 (en) 2012-04-10 2015-02-18 INSERM - Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for the treatment of nonalcoholic steatohepatitis
WO2013153139A1 (en) 2012-04-11 2013-10-17 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the treatment and diagnosis of acute leukemia
WO2013173283A1 (en) 2012-05-16 2013-11-21 Novartis Ag Dosage regimen for a pi-3 kinase inhibitor
US9315567B2 (en) 2012-08-14 2016-04-19 Ibc Pharmaceuticals, Inc. T-cell redirecting bispecific antibodies for treatment of disease
US9096853B2 (en) * 2012-09-24 2015-08-04 U.S. Department Of Veterans Affairs Modified siRNA molecules incorporating 5-fluoro-2′-deoxyuridine residues to enhance cytotoxicity
US20150259690A1 (en) 2012-10-05 2015-09-17 Bioneer Corporation Amphiregulin-specific double-helical oligo-rna, double-helical oligo-rna structure comprising double-helical oligo-rna, and composition for preventing or treating respiratory diseases containing same
ES2879430T3 (es) 2012-11-15 2021-11-22 Apellis Pharmaceuticals Inc Análogos de compstatina de acción prolongada y composiciones y métodos relacionados
US10036015B2 (en) * 2013-01-04 2018-07-31 Sandeep Kathju Composition and methods for reduced scarring and treatment of fibrosis
US10000753B2 (en) * 2013-01-08 2018-06-19 Benitec Biopharma Limited Age-related macular degeneration treatment
CA2907152A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Fusion proteins and methods thereof
WO2014152391A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Apellis Pharmaceuticals, Inc. Cell-penetrating compstatin analogs and uses thereof
WO2015006543A1 (en) 2013-07-10 2015-01-15 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Method for predicting and detecting tumor metastasis in kidney cancer
CA2918858A1 (en) * 2013-08-05 2015-02-12 Vib Vzw Carnitine palmitoyltransferase 1 inhibitors for inhibition of pathological angiogenesis
CA2959482A1 (en) 2013-10-02 2015-04-09 Albert Einstein College Of Medicine, Inc. Methods and compositions to inhibit metastasis
EP3055426B1 (en) 2013-10-09 2019-06-19 The United States of America as represented by The Secretary Department of Health and Human Services Detection of hepatitis delta virus (hdv) for the diagnosis and treatment of sjögren's syndrome and lymphoma
AU2014348184B2 (en) 2013-11-18 2020-08-27 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Microsphere-based delivery and ex vivo manipulation of dendritic cells for autoimmune therapies
CN106061488B (zh) 2013-12-02 2021-04-09 菲奥医药公司 癌症的免疫治疗
CA2930359C (en) 2013-12-06 2022-03-01 Novartis Ag Dosage regimen for an alpha-isoform selective phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor
US9682123B2 (en) 2013-12-20 2017-06-20 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods of treating metabolic disease
GB201403684D0 (en) 2014-03-03 2014-04-16 King S College London Vector
CA2937236C (en) 2014-02-21 2023-03-07 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Disease therapy by inducing immune response to trop-2 expressing cells
EP3110445A4 (en) 2014-02-25 2017-09-27 Immunomedics, Inc. Humanized rfb4 anti-cd22 antibody
CN106459974A (zh) 2014-04-04 2017-02-22 柏业公司 新颖的双链寡rna和包含它的用于预防或治疗纤维化或呼吸系统疾病的药物组合物
US11279934B2 (en) 2014-04-28 2022-03-22 Phio Pharmaceuticals Corp. Methods for treating cancer using nucleic acids targeting MDM2 or MYCN
US9840553B2 (en) 2014-06-28 2017-12-12 Kodiak Sciences Inc. Dual PDGF/VEGF antagonists
US10900039B2 (en) 2014-09-05 2021-01-26 Phio Pharmaceuticals Corp. Methods for treating aging and skin disorders using nucleic acids targeting Tyr or MMP1
CN104393185B (zh) * 2014-11-25 2017-05-24 京东方科技集团股份有限公司 一种叠层有机电致发光器件及其制作方法
EP3925979A3 (en) 2014-12-23 2022-03-23 The Trustees of Columbia University in the City of New York Fgfr-tacc fusion proteins and methods thereof
KR101880790B1 (ko) * 2015-04-07 2018-08-16 서강대학교산학협력단 망막질병 치료를 위한 효과 지속성(Long-term) siRNA 기반 나노메디슨 및 이의 제조방법
EP3347486A4 (en) 2015-09-09 2019-06-19 The Trustees of Columbia University in the City of New York REDUCTION OF ER-MAM-LOCALIZED APP-C99 AND METHOD FOR THE TREATMENT OF ALZHEIMER DISEASE
ES2974107T3 (es) 2015-10-07 2024-06-25 Apellis Pharmaceuticals Inc Regímenes de dosificación
WO2017077445A1 (en) 2015-11-02 2017-05-11 Novartis Ag Dosage regimen for a phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor
GB2544330B (en) * 2015-11-13 2018-07-04 Cat International Ltd Apparatus for filtering molten metal and method of manufacturing the same
AU2016381964B2 (en) 2015-12-30 2024-02-15 Kodiak Sciences Inc. Antibodies and conjugates thereof
CA3016592A1 (en) 2016-03-04 2017-09-08 Rhode Island Hospital Targeting microrna for cancer treatment
EP3448437B1 (en) 2016-04-29 2021-12-29 Adverum Biotechnologies, Inc. Evasion of neutralizing antibodies by a recombinant adeno-associated virus
WO2018023126A1 (en) * 2016-07-29 2018-02-01 Kaspar Roger L Methods of treating osmidrosis
CN114672516A (zh) 2016-07-29 2022-06-28 加利福尼亚大学董事会 具有变异衣壳的腺相关病毒病毒体和其使用方法
WO2018060833A1 (en) 2016-09-27 2018-04-05 Novartis Ag Dosage regimen for alpha-isoform selective phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor alpelisib
EP3528785A4 (en) 2016-10-19 2020-12-02 Adverum Biotechnologies, Inc. MODIFIED AAV CASPIDS AND USES THEREOF
JP2020516607A (ja) 2017-04-07 2020-06-11 アペリス・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＡｐｅｌｌｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． 投与レジメンならびに関連組成物および方法
US20210187023A1 (en) 2017-06-27 2021-06-24 The Trustees Of Princeton University Compositions And Methods For Enhancing Immunotherapy
KR102262260B1 (ko) * 2018-02-08 2021-06-09 주식회사 시선테라퓨틱스 엔도좀 탈출능을 갖는 펩티드 핵산 복합체 및 이의 용도
CN112203679A (zh) 2018-03-02 2021-01-08 科达制药股份有限公司 Il-6抗体及其融合构建体和缀合物
WO2019204302A2 (en) * 2018-04-16 2019-10-24 Baylor College Of Medicine Chimeric rna-driven genomic rearrangement in mammalian cells
US20220193205A1 (en) * 2019-01-07 2022-06-23 Foghorn Therapeutics Inc. Methods of treating cancer
WO2020212586A1 (en) 2019-04-18 2020-10-22 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the treatment and prognosis of cancer
CN114786731A (zh) 2019-10-10 2022-07-22 科达制药股份有限公司 治疗眼部病症的方法
EP4138929A1 (en) 2020-04-24 2023-03-01 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Methods for preventing induction of immune responses to the transduced cells expressing a transgene product after ocular gene therapy
US11459567B2 (en) * 2020-06-24 2022-10-04 Patricia Virginia Elizalde Specific siRNA molecules, composition and use thereof for the treatment of triple negative breast cancer
AU2022214429A1 (en) 2021-02-01 2023-09-14 Regenxbio Inc. Gene therapy for neuronal ceroid lipofuscinoses
JP2024519888A (ja) 2021-05-28 2024-05-21 上海瑞宏迪医薬有限公司 カプシド変異を有する組換えアデノ随伴ウイルス及びその応用

Family Cites Families (119)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4394448A (en) * 1978-02-24 1983-07-19 Szoka Jr Francis C Method of inserting DNA into living cells
US4235871A (en) 1978-02-24 1980-11-25 Papahadjopoulos Demetrios P Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles
US4670388A (en) * 1982-12-30 1987-06-02 Carnegie Institution Of Washington Method of incorporating DNA into genome of drosophila
US4501728A (en) 1983-01-06 1985-02-26 Technology Unlimited, Inc. Masking of liposomes from RES recognition
US5019369A (en) 1984-10-22 1991-05-28 Vestar, Inc. Method of targeting tumors in humans
US5545412A (en) * 1985-01-07 1996-08-13 Syntex (U.S.A.) Inc. N-[1, (1-1)-dialkyloxy]-and N-[1, (1-1)-dialkenyloxy]-alk-1-yl-n,n,n-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor
US5139941A (en) 1985-10-31 1992-08-18 University Of Florida Research Foundation, Inc. AAV transduction vectors
US4837028A (en) 1986-12-24 1989-06-06 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US4920016A (en) 1986-12-24 1990-04-24 Linear Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US5712257A (en) 1987-08-12 1998-01-27 Hem Research, Inc. Topically active compositions of mismatched dsRNAs
IE72103B1 (en) 1987-08-12 1997-03-12 Hem Res Inc Promotion of host defense by systemic dsRNA treatment
US5683986A (en) 1987-08-12 1997-11-04 Hemispherx Biopharma Inc. Elaboration of host defense mediators into biological fluids by systemic dsRNA treatment
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
US5498521A (en) 1990-01-24 1996-03-12 President And Fellows Of Harvard College Diagnosis of hereditary retinal degenerative diseases
US5843738A (en) 1990-08-14 1998-12-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide modulation of cell adhesion
US5252479A (en) 1991-11-08 1993-10-12 Research Corporation Technologies, Inc. Safe vector for gene therapy
US5322933A (en) 1992-05-07 1994-06-21 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Crystal structure of TGF-β-2
US5587308A (en) 1992-06-02 1996-12-24 The United States Of America As Represented By The Department Of Health & Human Services Modified adeno-associated virus vector capable of expression from a novel promoter
AU692423B2 (en) 1992-09-25 1998-06-11 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Adenovirus vectors for the transfer of foreign genes into cells of the central nervous system, particularly in brain
US6177401B1 (en) * 1992-11-13 2001-01-23 Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften Use of organic compounds for the inhibition of Flk-1 mediated vasculogenesis and angiogenesis
US5478745A (en) 1992-12-04 1995-12-26 University Of Pittsburgh Recombinant viral vector system
GB9308271D0 (en) 1993-04-21 1993-06-02 Univ Edinburgh Method of isolating and/or enriching and/or selectively propagating pluripotential animal cells and animals for use in said method
WO1994029469A2 (en) 1993-06-07 1994-12-22 Vical Incorporated Plasmids suitable for gene therapy
US5639872A (en) * 1993-07-27 1997-06-17 Hybridon, Inc. Human VEGF-specific oligonucleotides
US5731294A (en) * 1993-07-27 1998-03-24 Hybridon, Inc. Inhibition of neovasularization using VEGF-specific oligonucleotides
US6410322B1 (en) * 1993-07-27 2002-06-25 Hybridon Inc Antisense oligonucleotide inhibition of vascular endothelial growth factor expression
US5624803A (en) 1993-10-14 1997-04-29 The Regents Of The University Of California In vivo oligonucleotide generator, and methods of testing the binding affinity of triplex forming oligonucleotides derived therefrom
US6037329A (en) * 1994-03-15 2000-03-14 Selective Genetics, Inc. Compositions containing nucleic acids and ligands for therapeutic treatment
US5505700A (en) 1994-06-14 1996-04-09 Cordis Corporation Electro-osmotic infusion catheter
US5728068A (en) * 1994-06-14 1998-03-17 Cordis Corporation Multi-purpose balloon catheter
US6057119A (en) 1994-06-17 2000-05-02 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Crystal structure and mutants of interleukin-1β converting enzyme
EP0769552A4 (en) * 1994-06-27 1997-06-18 Toagosei Co Ltd ANTISENSE NUCLEIC ACID COMPOUND
US5882914A (en) * 1995-06-06 1999-03-16 The Johns Hopkins University School Of Medicine Nucleic acids encoding the hypoxia inducible factor-1
CA2225460A1 (en) 1995-06-23 1997-01-09 Winston Campbell Patterson Transcriptional regulation of genes encoding vascular endothelial growth factor receptors
US20030216335A1 (en) * 2001-11-30 2003-11-20 Jennifer Lockridge Method and reagent for the modulation of female reproductive diseases and conditions
WO1997018855A1 (en) 1995-11-21 1997-05-29 Eduard Naumovich Lerner Device for enhanced delivery of biologically active substances and compounds in an organism
GB9524807D0 (en) 1995-12-05 1996-02-07 Smithkline Beecham Plc Novel compounds
US5843016A (en) * 1996-03-18 1998-12-01 Physion S.R.L. Electromotive drug administration for treatment of acute urinary outflow obstruction
US6444650B1 (en) * 1996-10-01 2002-09-03 Geron Corporation Antisense compositions for detecting and inhibiting telomerase reverse transcriptase
DE59703449D1 (de) 1996-11-01 2001-05-31 Christian Stern Spritzgussdüse
US7033598B2 (en) * 1996-11-19 2006-04-25 Intrabrain International N.V. Methods and apparatus for enhanced and controlled delivery of a biologically active agent into the central nervous system of a mammal
US6165709A (en) * 1997-02-28 2000-12-26 Fred Hutchinson Cancer Research Center Methods for drug target screening
US20050096282A1 (en) 1997-04-21 2005-05-05 Lewin Alfred S. Adeno-associated virus-delivered ribozyme compositions and methods for the treatment of retinal diseases
CA2287508A1 (en) 1997-04-21 1998-10-29 The University Of Florida Materials and methods for ribozyme treatment of retinal diseases
JP3778575B2 (ja) 1997-06-13 2006-05-24 ナノデル テヒノロギーズ ゲーエムベーハー 薬剤標的化システム、その調製方法およびその使用
US5902598A (en) 1997-08-28 1999-05-11 Control Delivery Systems, Inc. Sustained release drug delivery devices
US6440933B1 (en) 1997-09-10 2002-08-27 University Of Florida Compounds and method for the prevention and treatment of diabetic retinopathy
US6506559B1 (en) 1997-12-23 2003-01-14 Carnegie Institute Of Washington Genetic inhibition by double-stranded RNA
US20030096775A1 (en) 2001-10-23 2003-05-22 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of complement component C3 expression
US6433145B1 (en) 1998-07-21 2002-08-13 Human Genome Sciences, Inc. Keratinocyte derived interferon
EP0979869A1 (en) 1998-08-07 2000-02-16 Hoechst Marion Roussel Deutschland GmbH Short oligonucleotides for the inhibition of VEGF expression
US6219557B1 (en) * 1998-12-11 2001-04-17 Ericsson Inc. System and method for providing location services in parallel to existing services in general packet radio services architecture
EP1147204A1 (en) 1999-01-28 2001-10-24 Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. Composition and method for in vivo and in vitro attenuation of gene expression using double stranded rna
DE19956568A1 (de) 1999-01-30 2000-08-17 Roland Kreutzer Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens
ATE276199T1 (de) 1999-02-03 2004-10-15 Biosante Pharmaceuticals Inc Methoden zur herstellung von therapeutische kalzium-phosphat partikeln
US6121000A (en) * 1999-02-11 2000-09-19 Genesense Technologies, Inc. Antitumor antisense sequences directed against R1 and R2 components of ribonucleotide reductase
JP3455709B2 (ja) * 1999-04-06 2003-10-14 株式会社大和化成研究所 めっき方法とそれに用いるめっき液前駆体
WO2000063364A2 (en) 1999-04-21 2000-10-26 American Home Products Corporation Methods and compositions for inhibiting the function of polynucleotide sequences
US6331313B1 (en) 1999-10-22 2001-12-18 Oculex Pharmaceticals, Inc. Controlled-release biocompatible ocular drug delivery implant devices and methods
GB9927444D0 (en) 1999-11-19 2000-01-19 Cancer Res Campaign Tech Inhibiting gene expression
DE10160151A1 (de) 2001-01-09 2003-06-26 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Zielgens
DE10100586C1 (de) 2001-01-09 2002-04-11 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines Ziegens
EP1252308A2 (en) * 2000-01-19 2002-10-30 Parkash S. Gill Pharmaceutical compositions and methods of treatment based on vegf antisense oligonucleotides
WO2001057206A2 (en) 2000-02-03 2001-08-09 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Method and reagent for the inhibition of checkpoint kinase-1 (chk 1) enzyme
JP2003526367A (ja) * 2000-03-16 2003-09-09 ジェネティカ インコーポレイテッド Ｒｎａ干渉の方法とｒｎａ干渉組成物
AU2001249622B2 (en) * 2000-03-30 2007-06-07 Massachusetts Institute Of Technology RNA sequence-specific mediators of RNA interference
AU2001253255A1 (en) 2000-04-07 2001-10-23 Large Scale Biology Corporation Compositions and methods for inhibiting gene expression
EP1146441A1 (en) * 2000-04-11 2001-10-17 BRITISH TELECOMMUNICATIONS public limited company Changing hypermedia content of a web site
US6372250B1 (en) 2000-04-25 2002-04-16 The Regents Of The University Of California Non-invasive gene targeting to the brain
US6375972B1 (en) 2000-04-26 2002-04-23 Control Delivery Systems, Inc. Sustained release drug delivery devices, methods of use, and methods of manufacturing thereof
EP1280929A2 (en) 2000-05-01 2003-02-05 Novartis AG Vectors for ocular transduction and use thereof for genetic therapy
CA2413556A1 (en) 2000-06-23 2001-12-27 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University In Jerusale M Positively-charged peptide nucleic acid analogs with improved properties
US6852510B2 (en) * 2000-07-03 2005-02-08 Gala Design Inc Host cells containing multiple integrating vectors
EP1309603A4 (en) 2000-07-21 2004-07-28 Univ Columbia NUCLEIC ACIDS COMPRISING PEG-3 PROMOTER REGIONS OF RAT AND USES THEREOF
IL137672A0 (en) 2000-08-03 2001-10-31 Dpharm Ltd Derivatives of branched-chain lipophilic molecules and uses thereof
US6443145B1 (en) * 2000-08-25 2002-09-03 Learning Legacy Solar seeker
US20020132788A1 (en) * 2000-11-06 2002-09-19 David Lewis Inhibition of gene expression by delivery of small interfering RNA to post-embryonic animal cells in vivo
US20020173478A1 (en) * 2000-11-14 2002-11-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Post-transcriptional gene silencing by RNAi in mammalian cells
WO2002044321A2 (en) * 2000-12-01 2002-06-06 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Rna interference mediating small rna molecules
EP1229134A3 (en) 2001-01-31 2004-01-28 Nucleonics, Inc Use of post-transcriptional gene silencing for identifying nucleic acid sequences that modulate the function of a cell
US20020165158A1 (en) * 2001-03-27 2002-11-07 King George L. Methods of modulating angiogenesis
JP2002305193A (ja) 2001-04-05 2002-10-18 Sony Corp 半導体装置とその製造方法
US20030045830A1 (en) 2001-04-17 2003-03-06 De Bizemont Therese Gene therapy with chimeric oligonucleotides delivered by a method comprising a step of iontophoresis
US7517864B2 (en) 2001-05-18 2009-04-14 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050148530A1 (en) 2002-02-20 2005-07-07 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050048529A1 (en) * 2002-02-20 2005-03-03 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of intercellular adhesion molecule (ICAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
WO2003070910A2 (en) 2002-02-20 2003-08-28 Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated INHIBITION OF VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR (VEGF) AND VEGF RECEPTOR GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US20050187174A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-25 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of intercellular adhesion molecule (ICAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050159380A1 (en) 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of angiopoietin gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
WO2002096957A1 (en) 2001-05-29 2002-12-05 Union Carbide Chemicals & Plastics Technology Corporation Olefin polymerization catalyst compositions and method of preparation
JP2005500025A (ja) 2001-05-29 2005-01-06 サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッド 女性生殖疾病及び状態の核酸に基づく調節
US20040028613A1 (en) 2001-06-25 2004-02-12 Nastech Pharmaceutical Company Inc Dopamine agonist formulations for enhanced central nervous system delivery
JP2005508306A (ja) * 2001-07-23 2005-03-31 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ リーランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティ 哺乳類における遺伝子発現のＲＮＡｉによる阻害に関する方法および組成物
DE60235761D1 (de) 2001-08-01 2010-05-06 Univ Bristol Clifton Isoform des vegfs
AU2002348163A1 (en) * 2001-11-02 2003-05-19 Intradigm Corporation Therapeutic methods for nucleic acid delivery vehicles
EP1450863A4 (en) * 2001-11-07 2009-01-07 Imcor Pharmaceutical Company PROCESS FOR IMAGING VESSELS WITH NANOTEHTIC CONTAINERS
AU2002343792A1 (en) 2001-11-28 2003-06-10 Center For Advanced Science And Technology Incubation, Ltd. siRNA EXPRESSION SYSTEM AND PROCESS FOR PRODUCING FUNCTIONAL GENE-KNOCKDOWN CELLS AND THE LIKE USING THE SAME
US7176303B2 (en) 2003-11-06 2007-02-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of STAT5 expression
HUE037352T2 (hu) * 2002-04-05 2018-08-28 Roche Innovation Ct Copenhagen As A HIF-1alfa expresszálódását módosító oligomer vegyületek
US20050222061A1 (en) * 2002-04-18 2005-10-06 Schulte Ralf W Means and methods for the specific inhibition of genes in cells and tissue of the cns and/or eye
US7199107B2 (en) 2002-05-23 2007-04-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of kinesin-like 1 expression
AU2003237686A1 (en) 2002-05-24 2003-12-12 Max-Planck Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. Rna interference mediating small rna molecules
US20040115640A1 (en) * 2002-12-11 2004-06-17 Isis Pharmaceuticals Inc. Modulation of angiopoietin-2 expression
US7148342B2 (en) 2002-07-24 2006-12-12 The Trustees Of The University Of Pennyslvania Compositions and methods for sirna inhibition of angiogenesis
US20060211637A1 (en) 2002-08-06 2006-09-21 Intradigm Corporation Methods of down regulating target gene expression in vivo by introduction of interfering rna
US7521431B2 (en) 2002-11-01 2009-04-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for siRNA inhibition of HIF-1 alpha
DK2284266T3 (da) 2002-11-14 2014-01-13 Thermo Fisher Scient Biosciences Inc sIRNA-MOLEKYLE MOD TP53
ATE477337T1 (de) * 2003-01-16 2010-08-15 Univ Pennsylvania Zusammensetzungen und verfahren zur sirna-hemmung von icam-1
JP2006523464A (ja) 2003-04-18 2006-10-19 ザ・トラスティーズ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・ペンシルバニア アンジオポエチン１、２、及びそれらの受容体ＴＩＥ２のｓｉＲＮＡ阻害のための組成物及びその方法
US20050019927A1 (en) * 2003-07-13 2005-01-27 Markus Hildinger DECREASING GENE EXPRESSION IN A MAMMALIAN SUBJECT IN VIVO VIA AAV-MEDIATED RNAi EXPRESSION CASSETTE TRANSFER
US7468431B2 (en) 2004-01-22 2008-12-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of eIF4E-BP2 expression
WO2005089224A2 (en) 2004-03-12 2005-09-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. iRNA AGENTS TARGETING VEGF
US20060182783A1 (en) * 2004-04-30 2006-08-17 Allergan, Inc. Sustained release intraocular drug delivery systems
JP2008537752A (ja) 2005-04-12 2008-09-25 イントラディグム コーポレイション がんおよび他の新血管形成疾患を処置するためのＲＮＡｉ治療用の組成物および方法
NZ569368A (en) 2005-12-22 2011-11-25 Exegenics Inc D B A Opko Health Inc siRNA compositions and methods for regulating the C3 protein in the complement system
EP1982176A1 (en) * 2006-01-30 2008-10-22 Dako Denmark A/S High-speed quantification of antigen specific t-cells in whole blood by flow cytometry
PT2029746E (pt) 2006-06-12 2012-10-15 Exegenics Inc D B A Opko Health Inc Composições e métodos para a inibição do sirna de angiogenese
US7872118B2 (en) 2006-09-08 2011-01-18 Opko Ophthalmics, Llc siRNA and methods of manufacture
GB0704678D0 (en) 2007-03-09 2007-04-18 Univ Bristol Pro- and anti-angiogenic treatments

Also Published As

Publication number Publication date
US20080188437A1 (en) 2008-08-07
JP2006505251A (ja) 2006-02-16
US7674895B2 (en) 2010-03-09
ATE460500T1 (de) 2010-03-15
AU2003253995A1 (en) 2004-02-09
EP1578933B9 (en) 2010-09-15
IL166274A (en) 2010-05-31
CA2493499C (en) 2016-04-12
NZ537833A (en) 2010-08-27
EP2345718A2 (en) 2011-07-20
US8946403B2 (en) 2015-02-03
AU2003253995B2 (en) 2007-12-13
US7345027B2 (en) 2008-03-18
US20070037761A1 (en) 2007-02-15
ES2340843T3 (es) 2010-06-10
IL196798A0 (en) 2011-07-31
US9150863B2 (en) 2015-10-06
EP1578933A4 (en) 2007-09-19
US7750143B2 (en) 2010-07-06
EP2192187A3 (en) 2010-08-25
IL196798A (en) 2012-02-29
EP1578933B1 (en) 2010-03-10
KR20110063597A (ko) 2011-06-10
US20070037760A1 (en) 2007-02-15
IL166274A0 (en) 2006-01-15
EP2192187A2 (en) 2010-06-02
US20070149471A1 (en) 2007-06-28
CA2493499A1 (en) 2004-01-29
EP2345718A3 (en) 2011-11-16
US20040018176A1 (en) 2004-01-29
US20100168207A1 (en) 2010-07-01
DK1578933T3 (da) 2010-07-12
EP1578933A2 (en) 2005-09-28
US8541384B2 (en) 2013-09-24
JP5337337B2 (ja) 2013-11-06
US20090104259A1 (en) 2009-04-23
US20060292120A1 (en) 2006-12-28
US20140056969A1 (en) 2014-02-27
US8546345B2 (en) 2013-10-01
WO2004009769A3 (en) 2006-04-13
US20070037762A1 (en) 2007-02-15
KR101280269B1 (ko) 2013-07-15
WO2004009769A2 (en) 2004-01-29
US20070003523A1 (en) 2007-01-04
US7148342B2 (en) 2006-12-12
US20060286073A1 (en) 2006-12-21
CY1110141T1 (el) 2012-05-23
MXPA05001000A (es) 2005-05-16
EP2192187B1 (en) 2013-04-17
KR20050056944A (ko) 2005-06-16
US20150110861A1 (en) 2015-04-23
DE60331683D1 (de) 2010-04-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101280269B1 (ko) 신생혈관형성의 ｓｉＲＮＡ 저해를 위한 조성물 및 방법
US7521431B2 (en) Compositions and methods for siRNA inhibition of HIF-1 alpha
PT2029746E (pt) Composições e métodos para a inibição do sirna de angiogenese
KR20110094323A (ko) 향-혈관신생성 ｖｅｇｆ 이소형의 선택적 억제를 위한 조성물 및 방법
US8227444B2 (en) Compositions and methods for inhibition of VEGF