PT1490095E

PT1490095E - Composição farmacêutica estável contendo factor viii

Info

Publication number: PT1490095E
Application number: PT03712418T
Authority: PT
Inventors: Mary White; Paul Webb
Original assignee: Ipsen Pharma
Priority date: 2002-03-26
Filing date: 2003-03-26
Publication date: 2010-10-21
Also published as: IS7458A; MXPA04009275A; JP2013147508A; JP2005530714A; HRP20040882A2; JP5770775B2; US7790680B2; HRP20040882B1; EP2292216A3; AR039123A1; ATE477814T1; DK1490095T3; CN1642570B; EP2292216A2; HK1183446A1; TW200304827A; TWI285106B; BR0308442A; EP1490095B1; IL163849A

Description

1

Descrição "Composição farmacêutica estável contendo factor VIII" A invenção diz respeito a uma nova composição farmacêutica estável contendo factor VIII. 0 Factor VIII é uma conhecida proteína plasmática essencial ao processo de coagulação do sangue, sendo, por isso, utilizada no tratamento da hemofilia.

Foram utilizadas diversas formas de factor VIII ou existem intenções de as utilizar como princípios activos no tratamento da hemofilia. Estas formas incluem o factor VIII humano (como os princípios activos de Humate® P, Monoclate® P, Immunate® ou Hemofil® M) , factor VIII humano recombinante (como a SQ de r-VIII descrita no pedido PCT de patente de invenção WO 91/09122 (princípio activo de ReFacto®) ou os princípios activos de Kogenate® ou

Recombinate®), factor VIII porcino (que é o princípio activo do produto Hyate:C® comercializado pela Ipsen, Inc., EUA) ou factor VIII porcino recombinante (por exemplo, forma modificada sem domínio B de factor VIII porcino como a descrita no pedido de patente de invenção WO 01/68109 e identificada como "POL1212" ou a proteína de SEQ. ID NO. 38 do mesmo pedido de patente de invenção). A estabilidade das formulações tem sido um problema constante para a indústria farmacêutica que lida com as composições farmacêuticas com factor VIII. A albumina foi muitas vezes utilizada para estabilizar estas formulações. No entanto, apesar do seu interessante efeito estabilizante, a albumina apresenta a desvantagem de ser bastante dispendiosa, bem como o risco de transportar 2 espécies infecciosas como os priões. Por estas razões, a indústria farmacêutica tem vindo, nos últimos anos, a procurar substituir a albumina por outros agentes estabilizantes nas composições farmacêuticas com factor VIII. Várias composições farmacêuticas estáveis livres de albumina são já conhecidas dos versados na arte. Por exemplo: a patente de invenção norte-americana n.° 5565427 descreve uma solução estabilizada livre de albumina com factor VIII: actividade C contendo factor VIII:C, um aminoácido ou um dos seus sais ou homólogos e um detergente (como polissorbato 80 ou Tween® 80) ou um polímero orgânico (como polietilenoglicol). a patente de invenção norte-americana n.° 5605884 descreve uma composição estável com factor VIII que inclui factor VIII e um meio de força iónica elevada, preferivelmente constituído por uma solução aquosa que inclui uma mistura de cloreto de sódio, cloreto de cálcio e histidina como ião tampão. - as patentes de invenção norte-americanas n.° 5763401 e 5874408 descrevem uma composição estável com factor VIII recombinante livre de albumina que inclui factor VIII recombinante, glicina, histidina, cloreto de sódio e cloreto de cálcio. a patente de invenção norte-americana n.° 5962650 descreve uma composição estável com factor VIII recombinante livre de albumina que é constituída por uma 3 solução aquosa com uma concentração reduzida de oxigénio que inclui factor VIII recombinante, um sal de cálcio como cloreto de cálcio e preferivelmente um antioxidante, um tensioactivo não iónico, cloreto de sódio ou potássio, um aminoácido e um mono- ou dissacarideo. - a patente de invenção norte-americana n.° 5972885 diz respeito a uma formulação para administração subcutânea, intramuscular ou intradérmica, que inclui factor VII recombinante altamente concentrado (pelo menos 1000 lU/ml) e, preferivelmente, um ou mais elementos seleccionados entre o grupo constituído por cloreto de sódio ou potássio, cloreto de cálcio, um tensioactivo não iónico (por exemplo, um poloxâmero), um mono- ou dissacarideo (preferivelmente sacarose) e antioxidantes (por exemplo, ácido cítrico). o pedido de patente de invenção PCT n.° WO 89/09784 descreve um método para a produção de factor VIII concentrado e estável pelo calor, que inclui filtração em gel de uma solução tampão que contém o referido factor VIII e tris(hidroximetil)metilamina, citrato trisódico, cloreto de sódio e cloreto de cálcio, seguido de liofilização do concentrado obtido. O factor VIII assim obtido é capaz de suportar temperaturas de até 80°C durante até 72 horas. o pedido de patente de invenção PCT n.° WO 94/07510 descreve uma composição com factor VIII que é estabilizada por um tensioactivo não iónico (por exemplo, um poloxâmero como polissorbato 80). Tal composição pode também incluir um ou mais elementos seleccionados entre o grupo constituído por cloreto de sódio ou potássio, cloreto de 4 cálcio, um aminoácido, um mono- ou dissacarídeo como a sacarose. 0 requerente descobriu inesperadamente que uma composição farmacêutica sólida obtida por liofilização de uma solução livre de aminoácidos que inclui os seguintes componentes: (a) factor VIII; (b) um tensioactivo; (c) cloreto de cálcio; (d) sacarose; (e) cloreto de sódio; (f) citrato trisódico; e (g) um tampão livre de aminoácidos; tendo tal composição farmacêutica um pH entre 6 a 8 antes da liofilizaçao e após a reconstituição em água para injecção, também apresenta estabilidade ao longo do tempo. Por factor VIII, pretende-se que se entenda factor VIII humano, factor VIII humano recombinante, factor VIII porcino, factor VIII porcino recombinante ou, de forma mais geral, qualquer outro factor VIII recombinante que possa ser utilizado para substitui-los.

Preferivelmente, o factor VIII incluído nas composições de acordo com a invenção será escolhido entre o factor VIII porcino e o factor VIII porcino recombinante. Ainda mais preferivelmente, o factor VIII incluído nas composições de acordo com a invenção será factor VIII porcino, em especial uma forma sem domínio B do factor VIII porcino, como aquela descrita no pedido de patente de invenção n.° WO 01/68109, 5 i.e., o factor VIII porcino modificado com a sequência de aminoácido SEQ. ID. NO. 1, que se segue: SEQ. ID. NO. 1:

Met 1 Gin Leu Glu Leu 5 Ser Thr Cys Vai Phe 10 Leu Cys Leu Leu Pro 15 Leu Gly Phe Ser Ala 20 Ile Arg Arg Tyr Tyr 25 Leu Gly Ala Vai Glu 30 Leu Ser Trp Asp Tyr Arg 35 Gin Ser Glu Leu 40 Leu Arg Glu Leu His 45 Vai Asp Thr Arg Phe 50 Pro Ala Thr Ala Pro 55 Gly Ala Leu Pro Leu Gly 60 Pro Ser Vai Leu 65 Tyr Lys Lys Thr Vai 70 Phe Vai Glu Phe Thr 75 Asp Gin Leu Phe Ser 80 Vai Ala Arg Pro Arg 85 Pro Pro Trp Met Gly 90 Leu Leu Gly Pro Thr 95 Ile Gin Ala Glu Vai 100 Tyr Asp Thr Vai Vai 105 Vai Thr Leu Lys Asn 110 Met Ala Ser His Pro 115 Vai Ser Leu His Ala 12 0 Vai Gly Vai Ser Phe 12 5 Trp Lys Ser Ser Glu 130 Gly Ala Glu Tyr Glu Asp 135 His Thr Ser Gin Arg 140 Glu Lys Glu 6

Asp Asp 145 Lys Vai Leu Pro 150 Gly Lys Ser Gin Thr 155 Tyr Vai Trp Gin Vai 160 Leu Lys Glu Asn Gly Pro 165 Thr Ala Ser Asp 170 Pro Pro Cys Leu Thr 175 Tyr Ser Tyr Leu Ser 180 His Vai Asp Leu Vai 185 Lys Asp Leu Asn Ser 190 Gly Leu Ile Gly Ala 195 Leu Leu Vai Cys Arg 200 Glu Gly Ser Leu Thr 205 Arg Glu Arg Thr Gin 210 Asn Leu His Glu Phe 215 Vai Leu Leu Phe Ala 220 Vai Phe Asp Glu Gly Lys 225 Ser Trp His Ser 230 Ala Arg Asn Asp Ser 235 Trp Thr Arg Ala Met 240 Asp Pro Ala Pro Ala 245 Arg Ala Gin Pro Ala 250 Met His Thr Vai Asn 255 Gly Tyr Vai Asn Arg 260 Ser Leu Pro Gly Leu 265 Ile Gly Cys His Lys 270 Lys Ser Vai Tyr Trp 275 His Vai Ile Gly Met 280 Gly Thr Ser Pro Glu 285 Vai His Ser Ile Phe 290 Leu Glu Gly His Thr 295 Phe Leu Vai Arg His 300 His Arg Gin Ala Ser 305 Leu Glu Ile Ser Pro 310 Leu Thr Phe Leu Thr 315 Ala Gin Thr Phe Leu 320 Met Asp Leu Gly Gin 325 Phe Leu Leu Phe Cys 330 His Ile Ser Ser His 335 HiS His Gly Gly Met 340 Glu Ala His Vai Arg 345 Vai Glu Ser Cys Ala 350 Glu Glu Pro Gin Leu 355 Arg Arg Lys Ala Asp 360 Glu Glu Glu Asp Tyr 365 Asp Asp Asn Leu Tyr 370 Asp Ser Asp Met Asp 375 Vai Vai Arg Leu Asp 380 Gly Asp Asp Vai Ser 385 Pro Phe lie Gin Ile 390 Arg Ser Vai Ala Lys 395 Lys His Pro Lys Thr 400 Trp Vai His Tyr Ile 405 Ser Ala Glu Glu Glu 410 Asp Trp Asp Tyr Ala 415 Pro Ala Vai Pro Ser 420 Pro Ser Asp Arg Ser 425 Tyr Lys Ser Leu Tyr 43 0 Leu Asn Ser Gly Pro 435 Gin Arg" Ile Gly Arg 440 Lys Tyr Lys Lys Ala 445 Arg Phe Vai Ala Tyr 450 Thr Asp Vai Thr Phe 455 Lys Thr Arg Lys Ala 460 Ile Pro Tyr Glu Ser 465 Gly Ile Leu Gly Pro 470 Leu Leu Tyr Gly Glu 475 Vai Gly Asp Thr Leu 480 Leu Ile Ile Phe Lys Asn Lys Ala Ser Arg Pro Tyr Asn Ile Tyr Pro 7 485 490 495 His Gly Ile Thr 500 Asp Vai Ser Ala Leu His 505 Pro Gly Arg Leu Leu 510 Lys Gly Trp Lys 515 His Leu Lys Asp Met 520 Pro Ile Leu Pro Gly 525 Glu Thr Phe Lys Tyr 530 Lys Trp Thr Vai Thr 535 Vai Glu Asp Gly Pro Thr 540 Lys Ser Asp Pro Arg 545 Cys Leu Thr Arg Tyr 550 Tyr Ser Ser Ser 555 Ile Asn Leu Glu Lys 560 Asp Leu Ala Ser Gly 565 Leu Ile Gly Pro Leu 570 Leu Ile Cys Tyr Lys 575 Glu Ser Vai Asp Gin 580 Arg Gly Asn Gin Met Met 585 Ser Asp Lys Arg Asn 590 Vai Ile Leu Phe 595 Ser Vai Phe Asp Glu 600 Asn Gin Ser Trp Tyr 605 Leu Ala Glu Asn Ile 610 Gin Arg Phe Leu Pro 615 Asn Pro Asp Gly Leu Gin 620 Pro Gin Asp Pro Glu 625 Phe Gin Ala Ser Asn 630 Ile Met His Ser 635 Ile Asn Gly Tyr Vai 640 Phe Asp Ser Leu Gin 645 Leu Ser Vai Cys Leu 650 His Glu Vai Ala Tyr 655 Trp Tyr Ile Leu Ser 660 Vai Gly Ala Gin Thr Asp 665 Phe Leu Ser Vai Phe 670 Phe Ser Gly Tyr 675 Thr Phe Lys His Lys 680 Met Vai Tyr Glu Asp 685 Thr Leu Thr Leu Phe 690 Pro Phe Ser Gly Glu 695 Thr Vai Phe Met Ser Met 700 Glu Asn Pro Gly Leu 705 Trp Vai Leu Gly Cys 710 His Asn Ser Asp 715 Leu Arg Asn Arg Gly 720 Met Thr Ala Leu Leu 725 Lys Vai Tyr Ser Cys 730 Asp Arg Asp Ile Gly Asp 735 Tyr Tyr Asp Asn 740 Thr Tyr Glu Asp Ile Pro 745 Gly Phe Leu Leu Ser 750 Gly Lys Asn Vai 755 Ile Glu Pro Arg Ser 760 Phe Ala Gin Asn Ser 765 Arg Pro Pro Ser Ala 770 Ser Ala Pro Lys Pro 775 Pro Vai Leu Arg Arg His 780 Gin Arg Asp Ile Ser 785 Leu Pro Thr Phe Gin 790 Pro Glu Glu Asp 795 Lys Met Asp Tyr Asp 800 Asp Ile Phe Ser Thr 805 Glu Thr Lys Gly Glu 810 Asp Phe Asp Ile Tyr 815 Gly Glu Asp Glu Asn 820 Gin Asp Pro Arg Ser Phe 825 Gin Lys Arg Thr Arg 830 His 8

Tyr Phe Ile Ala Ala Vai Glu Gin Leu Trp Asp Tyr Gly Met Ser Glu 835 840 845 Ser Pro Arg Ala Leu Arg Asn Arg Ala Gin Asn Gly Glu Val Pro Arg 850 855 860 Phe Lys Lys Vai Vai Phe Arg Glu Phe Ala Asp Gly Ser Phe Thr Gin 865 870 875 880 Pro Ser Tyr Arg Gly Glu Leu Asn Lys His Leu Gly Leu Leu Gly Pro 885 890 895 Tyr Ile Arg Ala Glu Vai Glu Asp Asn Ile Met Val Thr Phe Lys Asn 900 905 910 Gin Ala Ser Arg Pro Tyr Ser Phe Tyr Ser Ser Leu Ile Ser Tyr Pro 915 920 925 Asp Asp Gin Glu Gin Gly Ala Glu Pro Arg His Asn Phe Val Gin Pro 930 935 940 Asn Glu Thr Arg Thr Tyr Phe Trp Lys Val Gin His His Met Ala Pro 945 950 955 960 Thr Glu Asp Glu Phe Asp Cys Lys Ala Trp Ala Tyr Phe Ser Asp Val 965 970 975 Asp Leu Glu Lys Asp Vai His Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile 980 985 990 Cys Arg Ala Asn Thr Leu Asn Ala Ala His Gly Arg Gin Val Thr Val 995 1000 1005 Gin Glu Phe Ala Leu Phe Phe Thr Ile Phe Asp Glu Thr Lys Ser Trp 1010 1015 1020 Tyr Phe Thr Glu Asn Vai Glu Arg Asn Cys Arg Ala Pro Cys His Leu 1025 1030 1035 1040 Gin Met Glu Asp Pro Thr Leu Lys Glu Asn Tyr Arg Phe His Ala Ile 1045 1050 1055 Asn Gly Tyr Vai Met Asp Thr Leu Pro Gly Leu Val Met Ala Gin Asn 1060 1065 1070 Gin Arg Ile Arg Trp Tyr Leu Leu Ser Met Gly Ser Asn Glu Asn Ile 1075 1080 1085 His Ser Ile His Phe Ser Gly HiS Val Phe Ser Val Arg Lys Lys Glu 1090 1095 1100 Glu Tyr Lys Met Ala Vai Tyr Asn Leu Tyr Pro Gly Val Phe Glu Thr 1105 1110 1115 1120 Vai GlU Met Leu Pro. Ser Lys Val Gly Ile Trp Arg Ile Glu cys Leu 1125 1130 113 5 Ile Gly Glu His Leu .Gin Ala Gly Met Ser Thr Thr Phe Leu Val Tyr 1140 1145 1150 Ser Lys Glu Cys Gin Ala Pro Leu Gly Met Ala Ser Gly Arg Ile Arg 1155 1160 1165 Asp Phe Gin Ile Thr Ala Ser Gly Gin Tyr Gly Gin Trp Ala Pro Lys 1170 1175 1180 9

Leu Ala Arg Leu His Tyr Ser Gly Ser Ile Asn Ala Trp Ser Thr Lys 1185 1190 1195 1200 Asp Pro His Ser Trp Ile Lys Val Asp Leu Leu Ala Pro Met Ile Ile 1205 1210 1215 His Gly Ile Met Thr Gin Gly Ala Arg Gin Lys Phe Ser Ser Leu Tyr 1220 1225 1230 Ile Ser Gin Phe Ile Ile Met Tyr Ser Leu Asp Gly Arg Asn Trp Gin 1235 1240 1245 Ser Tyr Arg Gly Asn Ser Thr Gly Thr Leu Met Val Phe Phe Gly Asn 1250 1255 1260 Vai Asp Ala Ser Gly Ile Lys His Asn Ile Phe Asn Pro Pro Ile Val 1265 1270 1275 1280 Ala Arg Tyr Ile Arg Leu His Pro Thr His Tyr Ser Ile Arg Ser Thr 1285 1290 1295 Leu Arg Met Glu Leu Met Gly Cys Asp Leu Asn Ser Cys Ser Met Pro 1300 13 05 1310 Leu Gly Met Gin Asn Lys Ala Ile Ser Asp Ser Gin Ile Thr Ala Ser 1315 1320 1325 Ser His Leu Ser Asn Ile Phe Ala Thr Trp Ser Pro Ser Gin Ala Arg 1330 1335 1340 Leu His Leu Gin Gly Arg Thr Asn Ala Trp Arg Pro Arg Val Ser Ser 1345 1350 1355 1360 Ala Glu Glu Trp Leu Gin Vai Asp Leu Gin Lys Thr Val Lys Val Thr 1365 1370 1375 Gly Ile Thr Thr Gin Gly Val Lys Ser Leu Leu Ser Ser Met Tyr Val 1380 1385 1390 Lys Glu Phe Leu Vai Ser Ser Ser Gin Asp Gly Arg Arg Trp Thr Leu 1395 1400 1405 Phe Leu Gin Asp Gly His, Thr Lys Val Phe Gin Gly Asn Gin Asp Ser 1410 1415 1420 Ser Thr Pro Vai Vai Asn Ala Leu Asp Pro Pro Leu Phe Thr Arg Tyr 1425 1430 1435 1440 Leu Arg Ile His Pro Thr Ser Trp Ala Gin His Ile Ala Leu Arg Leu 1445 1450 1455 Glu Vai Leu Gly Cys Glu Ala Gin Asp Leu Tyr 1460 1465 10

Preferivelmente, o tensioactivo será um tensioactivo não iónico. Os tensioactivos não iónicos incluem polissorbatos e copolimeros de bloco como os poloxâmeros (i.e., copolimeros de polietileno e propilenoglicol). De acordo com uma variante preferida da invenção, o tensioactivo será um polissorbato. Mais preferivelmente, um polissorbato incluído numa composição de acordo com a presente invenção terá um grau de polimerização médio de entre 20 a 100 unidades monoméricas (preferivelmente cerca de 80), e pode, por exemplo, ser polissorbato 80. Também preferivelmente, o polissorbato deverá ser derivado de um vegetal. Preferivelmente, o tampão livre de aminoácidos será tris(hidroximetil)metilamina (adiante designado por "tris").

Também preferivelmente, o pH da composição farmacêutica antes da liofilização e após a reconstituição em água para injecção, será entre 6,5 e 7,5, e mais preferivelmente de cerca de 7,0.

Preferivelmente, uma composição sólida de acordo com a invenção será uma que possa ser obtida através de liofilização de uma solução livre de aminoácidos que inclui: (a) uma concentração de factor VIII variável entre 50 a 10 000 unidades internacionais/ml para o factor VIII humano ou factor VIII humano recombinante ou entre 50 a 10 000 unidades porcinas/ml para o factor VIII porcino ou factor VIII porcino recombinante; (b) uma concentração de tensioactivo variável entre acima da concentração micelar critica até 1% v/v; 11 (c) uma concentração de cloreto de cálcio variável entre 0,5 mM a 10 mM; (d) uma concentração de sacarose variável entre 5 mM e entre 50 mM; (e) uma concentração de cloreto de sódio variável entre 0,15 e entre 0,5 M; (f) uma concentração de citrato trisódico variável entre 1 mM e entre 50 mM; e (g) uma concentração de tampão livre se aminoácidos variável entre 1 mM e 50 mM.

Para avaliar a actividade em termos de unidades internacionais de factor VIII, o produto a testar é ensaiado relativamente ao Concentrado Padrão, como o Padrão do Reino Unido NIBSC 95/608 (NIBSC corresponde ao "National Institute of Biological Standards and Control").

Por "unidade porcina de factor VIII" entende-se a unidade padrão nacional seguida pelo NIBSC, do Reino Unido. Para avaliar a actividade em termos de unidades de factor VIII porcino, o produto a testar é ensaiado relativamente ao padrão porcino nacional do Reino Unido NIBSC 86/514. No que respeita ao factor VIII porcino recombinante, deverá entender-se que 1 unidade de actividade do factor VIII porcino recombinante é equivalente a 1 unidade de actividade do factor VIII porcino.

Mais preferivelmente, uma composição sólida de acordo com a invenção será uma que possa ser obtida através de liofilização de uma solução livre de aminoácidos que inclui, pelo menos, uma das seguintes caracteristicas: 12 • uma concentração de factor VIII variável entre 100 e entre 5000 unidades internacionais/ml para o factor VIII humano ou factor VIII humano recombinante, ou entre 100 e entre 5000 unidades porcinas/ml para o factor VIII porcino ou no factor VIII porcino recombinante; • uma concentração de tensioactivo variável entre 0,002% e entre 0,04% v/v; • uma concentração de cloreto de cálcio variável entre 1 mM e entre 5 mM; • uma concentração de sacarose variável entre 5 e entre 25 mM; • uma concentração de cloreto de sódio variável entre 0,2 M e entre 0,4 M; • uma concentração de citrato trisódico variável entre 1 mM e entre 20 mM; ou • uma concentração de tampão livre de aminoácidos variável entre 1 mM e entre 20 mM.

Ainda mais preferivelmente, uma composição sólida de acordo com a invenção será uma que possa ser obtida através de liofilização de uma solução livre de aminoácidos que inclui, pelo menos, uma das seguintes características: • uma concentração de factor VIII variável entre 200 e entre 2000 unidades internacionais/ml (e em particular, cerca de 1000 unidades internacionais/ml) para o factor VIII humano ou para o factor VIII humano recombinante, ou entre 200 e entre 2000 unidades porcinas/ml (e em particular, 13 cerca de 1000 unidades porcinas/ml) para o factor VIII porcino ou factor VIII porcino recombinante; • uma concentração de tensioactivo variável entre cerca de 0,002% e entre 0,02% v/v (e em particular, cerca de 0,01% v/v); • uma concentração de cloreto de cálcio variável entre 1 mM e entre 3 mM (e em particular cerca de 2 mM); • uma concentração de sacarose variável entre 5 e entre 15 mM (e em particular, entre 5 mM e entre 15 mM (e em particular, cerca de 11,7 mM); • uma concentração de cloreto de sódio variável entre 0,25 M e entre 0,35 M (e em particular, cerca de 0,3 M) ; • uma concentração de citrato trisódico variável entre 1 e entre 20 mM (e em particular, cerca de 10 mM) ; ou • uma concentração de tampão variável entre 5 e entre 15 mM (e em particular, cerca de 10 mM).

As composições sólidas de factor VIII de acordo com a invenção podem ser preparadas através de liofilização de uma solução que inclui quantidades adequadas dos componentes supra identificados como (a), (b) , (c), (d) , (e) , (f) e (g) de acordo com procedimentos padrão de produção (condições de esterilidade, etc.)· A estabilidade da composição ao longo de um determinado período pode ser determinada, por exemplo, através do método descrito na parte intitulada "Métodos analíticos", ou por qualquer outro método que o versado na arte julgue adequado. 14

Uma composição de acordo com a invenção é considerada estável durante um determinado período de tempo se 70% a 130% (e preferivelmente 80% a 120%) da actividade inicial do factor VIII, conforme avaliada usando o método descrito na parte intitulada "Métodos analíticos", for mantida ao longo do referido período de tempo.

Preferivelmente, as composições sólidas desta invenção serão estáveis durante, pelo menos, 6 ou 12 meses sempre que mantidas a uma temperatura de 2°C a 8°C. Mais preferivelmente, serão estáveis durante, pelo menos, 6 ou 12 meses sempre que mantidas a uma temperatura de 30°C a 32 ° C.

As composições sólidas de factor VIII de acordo com a invenção podem ser diluídas com água esterilizada opcionalmente contendo cloreto de sódio, e a composição farmacêutica líquida resultante pode, depois, ser directamente injectada num paciente que dela necessite. A composição farmacêutica líquida resultante, bem como as composições farmacêuticas líquidas obtidas através de diluição das composições sólidas de factor VIII de acordo com a invenção opcionalmente contendo cloreto de sódio, também fazem parte da presente invenção.

A utilização de factor VIII (factor VIII humano, factor VIII humano recombinante, factor VIII porcino, factor VIII porcino recombinante ou, de forma mais geral, qualquer outro factor VIII recombinante) para a preparação de uma composição líquida de acordo com a presente invenção para o tratamento da hemofilia e administração a um paciente que dela necessite. O modo de administração contemplado para as composições líquidas de acordo com a presente invenção será, preferivelmente, a administração intravenosa. A 15 dosagem da composição de acordo com a presente invenção a administrar, será determinada pelo médico ou veterinário responsável, tendo em conta a severidade da doença de cada paciente. 0 termo "cerca de" refere-se a um intervalo próximo do valor considerado. Conforme utilizado neste pedido de patente de invenção, o termo "cerca de X" refere-se a um intervalo entre X menos 10% de X e entre X mais 10% de X, e preferivelmente, um intervalo entre X menos 5% de X e entre X mais 5% de X.

Todos os termos técnicos e científicos utilizados possuem o mesmo significado que aquele conhecido pelos especialistas da área, excepto se definido em contrário.

Os seguintes exemplos são apresentados para ilustrar o supra citado, sem que tal constitua qualquer tipo de limitação ao âmbito da invenção.

EXEMPLOS

Exemplo 1: É preparada uma solução em 0,5 ml de água esterilizada contendo os seguintes componentes:

Factor VIII porcino modificado de SEQ. ID. NO. 1 800 unidades porcinas/ml Polisorbato 80 vegetal 0,01% v/v Cloreto de cálcio 2 mM Sacarose 11,7 mM Cloreto de sódio 0,3 M Citrato trisódico 10 mM 16

Tampão tris 10 mM PH 7,0 A mistura é liofilizada num frasco esterilizado que é depois selado. A composição sólida obtida foi testada e demonstrou ser estável a uma temperatura entre 2°C e 8°C durante pelo menos 12 meses e a uma temperatura entre 30°C e entre 32°C durante pelo menos seis meses sempre que testada quanto à actividade do factor VIII. Não houve qualquer formação agregada conforme avaliado por HPLC de exclusão de tamanho (SEC HPLC) ou fragmentos conforme avaliado por SDS PAGE. A mistura liofilizada obtida será tipicamente reconstituída com 1,0 ml de água esterilizada antes da injecção num paciente.

Exemplo 2: É preparada uma solução em 1,0 ml de água esterilizada contendo os seguintes componentes:

Factor VIII porcino modificado de SEQ. ID. NO. 1 400 unidades porcinas/ml Polisorbato 80 vegetal 0,002% v/v Cloreto de cálcio 2 mM Sacarose 11,7 mM Cloreto de sódio 0,3 M Citrato trisódico 10 mM Tampão tris 10 mM PH 7,0 17 A mistura é liofilizada num frasco esterilizado que é depois selado. A mistura liofilizada obtida será tipicamente reconstituída com 2,0 ml de água esterilizada antes da injecção num paciente.

Exemplo 3: É preparada uma solução em 0,5 ml de água esterilizada contendo os seguintes componentes:

Factor VIII porcino derivado de plasma 100 unidades porcinas/ml Polisorbato 80 vegetal 0,01% v/v Cloreto de cálcio 2 mM Sacarose 11,7 mM Cloreto de sódio 0,3 M Citrato trisódico 10 mM Tampão tris 10 mM PH 7,0 A mistura é liofilizada num frasco esterilizado que é depois selado. A mistura liofilizada obtida será tipicamente reconstituída com 1,0 ml de água esterilizada antes da injecção num paciente. 18

MÉTODOS ANALÍTICOS

Ensaio cromogénico A actividade do factor VIII é determinada através de um ensaio cromogénico modificado (Technochrom PVIII:C Reagent Kit, Technoclone). A geração de factor X activado pelo factor IX é estimulada pelo factor VIII, que actua como um cofactor na reacção. A libertação de p-nitroanilina do substrato cromogénico é catalisada pelo factor X activado. A quantidade de p-nitroanilina libertada é medida a 405 nm e o ensaio fornece uma correlação linear entre a quantidade de p-nitroanilina gerada e o conteúdo de FVIII.

SEC HPLC

Os componentes solúveis de elevado peso molecular e fragmentos foram determinados através de filtração em gel realizada num instrumento de HPLC usando uma coluna TosoHaas TSK G3000 SWXL, com 0,78 x 30 cm, com um detector de fluorescência (Waters LC Module 1 plus). Comprimento de onda de excitação de 280 nm e comprimento de onda de emissão de 340 nm. A avaliação dos resultados foi realizada através de integração das áreas de pico.

Ensaio de SDS PAGE 0 SDS PAGE (electroforese em gel de poliacrilamida usando um sistema de electroforese Multiphor II LKB e géis previamente moldados (EXCELGEL SDS, Pharmacia) foi utilizado para determinar quaisquer produtos decompostos da 19 molécula de FVIII. As bandas de proteínas foram visualizadas através de coloração com azul de Coomassie.

Ensaio de estabilidade A estabilidade pode ser ensaiada através da realização dos ensaios supra descritos em diferentes alturas numa amostra da mesma composição mantida à temperatura escolhida (que pode ser cerca de + 4°C ou + 31 °C) . Logo que a actividade do factor VIII tenha descido mais de 30%, considera-se que a composição perdeu a sua estabilidade.

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS <110> Societé de Conseils de Recherches et d'Applications Scientifiques (S.C.R.A.S.)

<120> Composição farmacêutica estável contendo factor VIII

<130> 44284.WI01/JMD <150> GB 0207092.8 <151> 2003-03-26 <160> 1 <170> Patente versão 3.1 <210> 1 <211> 1467

<212> PRT 20 <213> Porcino <400> 1 Μθΐ Gin Leu Glu Leu Ser'Thr Cys 1 5

Gly Phe Ser Ala ile Arg Arg Tyr

Trp Asp Tyr Arg Gin Ser Glu Leu 35 40

Arg Phe Pro Ala Thr Ala Pro Gly 50 55

Leu Tyr Lys Lys Thr Vai Phe Vai 65 70 val Ala Arg pro Arg Pro Pro Trp 85

Gin Ala Glu Vai Tyr Asp Thr Vai

Vai Phe Leu Cys Leu Leu Pro Leu 10 15

Tyr Leu Gly Ala vai Glu Leu ser 25 30

Leu Arg Glu Leu His Vai Asp Thr 45

Ala Leu Pro Leu Gly Pro Ser Vai 60

Glu Phe Thr Asp Gin Leu Phe Ser 75 80

Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr Ile 90 95 val vai Thr Leu Lys Asn Met Ala 21 100 105 110 ser His Pro vai ser Leu His Ala val Gly val ser Phe Trp Lys Ser 115 120 125 Ser Glu Gly Ala GlU Tyr Glu ASp HiS Thr ser Gin Arg Glu Lys. Glu 130 135 140 Asp Asp Lys Val Leu Pro Gly Lys Ser Gin Thr Tyr val Trp Gin Val 145 150 155 160 Leu Lys Glu Asn Gly Pro thr Ala Ser Asp Pro Pro Cys Leu Thr Tyr 165 170 175 ser Tyr Leu Ser His Val Asp Leu Val Lys Asp Leu Asn Ser Gly Leu 180 185 19U Ile Gly Ala Leu Leu Val Cys Arg Glu Gly Ser Leu Thr Arg Glu Arg 195 200 205 Thr Gin Asn Leu HiS Glu Phe val Leu Leu Phe Ala val Phe Asp Gl u 210 215 220 Gly Lys Ser Trp HiS Ser Ala Arg Asn Asp Ser Trp Thr Arg Ala Met 225 230 235 240 ASp Pro Ala Pro Ala Arg Al a Gin pro Ala Met His Thr Val Asn Gly 245 250 255 Tyr vai Asn Arg ser Leu Pro Gly Leu Ile Gly Cys His Lys Lys Ser 260 265 270 vai Tyr Trp His val ile Gly Met Gly Thr Ser Pro Glu val His Ser 275 280 285 Ile Phe Leu Glu Gly His Thr Phe Leu val Arg His His Arg Gin Al a 290 295 300 Ser Leu Glu ile ser Pro Leu Thr phe Leu Thr Ala Gin Thr Phe Leu 305 310 315 320 Met Asp Leu Gly Gin Phe Leu Leu Phe cys His Ile Ser Ser His His 325 330 335 His Gly Gly Met Glu Ala His Val Arg Val GlU Ser Cys Ala Glu Glu 340 345 350 Pro Gin Leu Arg Arg Lys Ala Asp Glu Glu Glu Asp Tyr Asp Asp Asn 355 360 365 Leu Tyr Asp Ser Asp Met ASp val Val Arg Leu Asp Gly Asp Asp Val 22 22 375 38o Phe ile Gin Ile Arg ser Vai Ala Lys Lys His Pro Lys Thr 390 395 400 HIS Tyr ile ser Ala Glu Glu Glu ASp Trp Asp Tyr Ala Pro 405 410 415 Pro ser Pro ser Asp Arg Ser Tyr Lys Ser Leu Tyr Leu Asn 420 425 430 Pro Gl n Arg Ile Gly Arg Lys Tyr Lys Lys Ala Arg Phe Vai 435 440 445 Thr.. Asp vai Thr Phe 455 Lys Thr Arg Lys Ala 460 Ile Pro Tyr Glu Ile Leu Gly Pro Leu Leu Tyr Gly Gl u Vai Gly Asp Thr Leu 47Ό 475 480 Ile Phe Lys Asn Lys Ala Ser Arg Pro Tyr ASP Ile Tyr Pro 485 490 495 Ile Thr ASp Vai Ser Ala Leu His Pro Gly Arg Leu Leu Lys 500 505 510 Lys His Leu Lys Asp Met Pro ile Leu Pro Gly Glu Thr Phe 515 520 525 Lys Trp Thr Vai Thr 535 Vai Glu ASp Gly Pro 540 Thr Lys Ser Asp Cys Leu Thr Arg Tyr Tyr Ser ser Ser Ile Asn Leu Glu Lys 550 555 560 Ala Ser Gly Leu ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Tyr Lys Glu 565 570 575 ASP Gin Arg Gly Asn Gin Met Met Ser ASp Lys Arg Asn Vai 580 585 590 Phe Ser. vai Phe Asp Glu Asn Gin Ser Trp Tyr Leu Ala Glu 595 600 605 Gl n Arg Phe Leu Pro 615 Asn Pro ASp Gly Leu 620 Gin Pro Gin Asp Phe Gin Ala Ser Asn ile Met HÍS Ser Ile Asn Gly Tyr Val 630 635 640 370 ser Pro 385

Trp vai

Ala vai ser Gly

Ala Tyr 450 ser Gly 465

Leu Ile

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Gly Trp

Lys Tyr 530

Pro Arg 545

Asp Leu

Ser vai 2le Leu

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Pro Glu 625

Phe Asp Ser Leu Gin Leu Ser vai cys Leu His Glu Vai Ala Tyr Trp 23 645 650 655

Tyr ile Leu Ser Vai Gly Ala Gin Thr Asp Phe Leu Ser Val Phe Phe 660 665 670 Ser Gly Tyr Thr Phe Lys His Lys Met Val Tyr Glu ASP Thr Leu Thr 675 680 685 Leu Phe Pro phe ser Gly Glu Thr val Phe Met ser Met Glu Asn pro 690 695 700 Gly Leu Trp vai Leu Gly cys His Asn Ser Asp Leu Arg Asn Arg Gly 705 710 715 720 Met Thr Ala Leu Leu Lys Val Tyr ser Cys ASp Arg Asp Ile Gly ASp 725 730 735 Tyr Tyr Asp Asn Thr Tyr Glu Asp Ile Pro Gly Phe Leu Leu Ser Gly 740 745 750 Lys Asn vai ile Glu pro Arg ser Phe Ala Gin Asn ser Arg Pro pro 755 760 765 Ser Al a Ser Ala Pro Lys Pro Pro Val Leu Arg Arg His Gin Arg Asp 770 775 780 Ile Ser Leu Pro Thr Phe Gin Pro Glu Glu Asp Lys Met Asp Tyr Asp 785 790 795 800 Asp Ile Phe ser Thr Glu Thr Lys Gly Glu Asp phe Asp Ile Tyr Gly 805 810 815 Glu ASp Glu Asn Gin Asp Pro Arg Ser Phe Gin Lys Arg Thr Arg Hi s S20 825 830 Tyr Phe ile Ala Ala vai Glu Gl n Leu Trp Asp Tyr Gly Met ser Glu 835 840 845 Ser Pro Arg Ala Leu Arg Asn Arg Ala Gin Asn Gly Glu Val Pro Arg 850 855 860 Phe Lys Lys Vai vai Phe Arg Glu Phe Ala Asp Gly ser Phe Thr Gin 865 870 875 880 Pro Ser Tyr Arg Gly Glu Leu Asn Lys His Leu Gly Leu Leu Gly Pro 885 890 895 Tyr ile Arg Ala Glu val Glu Asp Asn ile Met val Thr Phe Lys Asn 900 905 910

Gin Ala Ser Arg pro Tyr Ser Phe Tyr Ser Ser Leu Ile Ser Tyr Pro 24 915 920 925

Asp Asp Gin Glu Gin Gly Ala Glu Pro Arg His Asn Phe Vai Gin Pro 930 935 940

Asn Glu Thr Arg Thr T.yr phe Trp Lys Vai Gin His His Met Ala Pro 945 950 955 960

Thr Glu Asp Glu Phe Asp cys Lys Ala Trp Ala Tyr phe ser-Asp vai 965 970 975

Asp Leu Glu Lys Asp Vai His ser Gly Leu ile Gly Pro Leu Leu ile 980 985 990 cys Arg Ala Asn Thr Leu Asn Ala Ala His Gly Arg Gin vai Thr vai 995 1000 1005

Gin Glu Phe Ala Leu Phe Phe Thr Ile Phe Asp Glu Thr Lys Ser 1010 1015 1020

Trp Tyr Phe Thr Glu Asn vai Glu Arg Asn cys Arg Ala Pro cys 1025 1030 1035

His Leu Gin Met Glu Asp Pro Thr Leu Lys Glu Asn Tyr Arg phe 1040 1045 1050

His Ala Ile Asn Gly Tyr vai Met Asp Thr Leu pro Gly Leu vai 1055 1060 1065

Met Ala Gin Asn Gin Arg xle Arg Trp Tyr Leu Leu Ser Met Glv 1070 1075 1080

Ser Asn Glu Asn ile His Ser Ile His Phe Ser Gly His Vai Phe 1085 1090 1095

Ser Val Arg Lys Lys Glu Glu Tyr Lys Met Ala Vai Tyr Asn Leu 1100 1105 mo

Tyr pro Gly val Phe Glu Thr val Glu Met Leu pro Ser Lys Val 1115 1120 H25

Gly ile Trp Arg ile Glu cys Leu ile Gly Glu His Leu Gin Ala 1130 1135 1140

Gly Met ser Thr Thr Phe Leu Val Tyr ser Lys Glu cys Gin Ala 1145 1150 1155 pro Leu Gly Met Ala Ser Gly Arg xle Arg Asp Phe Gin ile Thr 1160 1165 K H70

Ala Ser Gly Gin Tyr Gly Gin Trp Ala pro Lys Leu Ala Arg Leu 25 1175 1180 1185 His Tyr 1190 Ser Gly Ser Ile Asn 1195 Ala Trp Ser Thr Lys 1200 Asp Pro HiS Ser Trp 1205 Ile Lys val Asp Leu 1210 Leu Ala Pro Met Ile 1215 Ile His Gly Ile Met 1220 Thr Gin Gly Ala Arg 1225 Gin Lys Phe Ser Ser 1230 Leu Tyr ile Ser Gin 1235 Phe He Ile Met Tyr 1240 ser Leu Asp Gly Arg 1245 Asn Trp Gin Ser Tyr 1250 Arg Gly Asn Ser Thr 1255 Gly Thr Leu Met val 1260 Phe Phe Gly Asn vai 1265 ASp a1 a Ser Gly Ile 1270 Lys His Asn Ile Phe 1275 Asn Pro Pro ile Val 1280 Ala Arg Tyr Ile Arg 1285 Leu HÍS Pro Thr Hi S 1290 Tyr Ser Ile Arg Ser 1295 Thr Leu Arg Met Glu 1300 Leu Met Gly Cys Asp 1305 Leu Asn Ser cys Ser 1310 Met Pro Leu Gly Met 1315 Gin Asn Lys Ala ile 1320 Ser Asp Ser Gin Ile 1325 Thr Ala Ser Ser His 1330 Leu Ser Asn Ile Phe 1335 Ala Thr Trp Ser Pro 1340 Ser Gl n Ala Arg Leu 1345 His Leu Gin Gly Arg 1350 Thr Asn Ala Trp. Arg 1355 Pro Arg val ser Ser 1360 Ala Glu Glu Trp Leu 1365 Gin val Asp Leu Gin 1370 Lys Thr Val Lys Val 1375 Thr Gly ile Thr Thr 1380 Gin Gly Val Lys Ser 1385 Leu Leu Ser Ser Met 1390 Tyr val Lys Glu Phe 1395 Leu val Ser ser Ser 1400 Gin Asp Gly Arg Arg · 1405 Trp Thr Leu Phe Leu 1410 Gin Asp Gly His Thr 1415 Lys val Phe Gin Gly 1420 Asn Gin Asp Ser Ser 1425 Thr Pro Val vai Asn Ala Leu Asp Pro Pro Leu Phe Thr Arg Tyr Leu Arg Ile 26 1430 1435 1440

His Pro Thr Ser Trp Ala Gin His Ile Ala Leu Arg Leu Glu vai 1445 1450 1455

Leu Gly cys Glu Ala Gin Asp Leu Tyr 1460 1465 27

REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO A presente listagem de referências citadas pela requerente é apresentada meramente por razões de conveniência para o leitor. Não faz parte da patente de invenção europeia. Embora se tenha tomado todo o cuidado durante a compilação das referências, não é possível excluir a existência de erros ou omissões, pelos quais o EPO não assume nenhuma responsabilidade.

Patentes de invenção citadas na descrição

wo 9109122 A wo 0168109 A us 5565427 A us 5605884 A us 5763401 A us 5874408 A us 5962650 A us 5972885 A wo 8909784 A wo 9407510 A GB 0207092 A

[0003] [0003][0009] [0006] [0006] [0006] [0006] [0006] [0006] [0006] [0006]

Lisboa, 13/10/2010 [0041]

Claims

1 Re ivindi cações 1. Composição farmacêutica sólida obtida através de liofilização de uma solução livre de aminoácidos que inclui: (a) factor VIII; (b) um tensioactivo; (c) cloreto de cálcio; (d) sacarose; (e) cloreto de sódio; (f) citrato trisódico; e (g) um tampão livre de aminoácidos; com um pH entre 6 e 8 antes da liofilização e após reconstituição em água para injecção.

2. Composição farmacêutica sólida de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o factor VIII ser seleccionado entre factor VIII porcino ou factor VIII porcino recombinante.

3. Composição farmacêutica sólida de acordo com a reivindicação 2, caracterizada por o factor VIII ser factor VIII porcino recombinante.

4. Composição farmacêutica sólida de acordo com a reivindicação 2, caracterizada por o factor VIII porcino recombinante possuir a sequência de aminoácidos SEQ. ID. NO. 1. 2

5. Composição farmacêutica sólida de acordo com uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada por o tensioactivo ser polisorbato.

6. Composição farmacêutica sólida de acordo com a reivindicação 5, caracterizada por o tensioactivo ser um polisorbato 80.

7. Composição farmacêutica sólida de acordo com uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada por o tampão livre de aminoácidos ser tris(hidroximetil)metilamina.

8. Composição farmacêutica sólida de acordo com uma das reivindicações 1 a 7 que, antes da liofilização e após reconstituição em água para injecção, possui um pH entre 6,5 e entre 7,5.

9. Composição farmacêutica sólida de acordo com uma das reivindicações 1 a 8 que pode ser obtida através de liofilização de uma solução livre de aminoácidos que inclui: (a) uma concentração de factor VIII compreendida entre 50 e 10 000 unidades internacionais/ml para o factor VIII humano ou factor VIII humano recombinante ou entre 50 e 10 000 unidades porcinas/ml para o factor VIII porcino ou factor VIII porcino recombinante; (b) uma concentração de tensioactivo compreendida entre acima da concentração micelar critica até 1% v/v; (c) uma concentração de cloreto de cálcio compreendida entre 0,5 mM e 10 mM; 3 (d) uma concentração de sacarose compreendida entre 5 mM e entre 50 mM; (e) uma concentração de cloreto de sódio compreendida entre 0,15 e entre 0,5 M; (f) uma concentração de citrato trisódico compreendida entre 1 mM e entre 50 mM; e (g) uma concentração de tampão livre de aminoácidos compreendida entre 1 mM e 50 mM.

10. Composição farmacêutica liquida obtida após diluição de uma composição farmacêutica sólida de acordo com uma das reivindicações 1 a 9 com água esterilizada opcionalmente contendo cloreto de sódio. Lisboa, 13/10/2010