PT652766E

PT652766E - Formulacao aquosa de hormona do crescimento humana

Info

Publication number: PT652766E
Application number: PT93918499T
Authority: PT
Inventors: Barbara H O'connor; James Q Oeswein
Original assignee: Genentech Inc
Priority date: 1992-07-31
Filing date: 1993-07-29
Publication date: 2001-04-30
Also published as: CA2489978A1; GR3035144T3; DK0652766T3; MX9304613A; IL106524A; AU4792793A; DE69334134T2; CA2337745A1; DE69329651D1; EP0955062B1; DE69334134D1; DK0955062T3; CA2337745C; EP0652766A1; DE69329651T2; ATE359824T1; NZ255158A; AU686567C; JP2007045841A; ES2153385T5

Description

ΕΡ Ο 652 766/ΡΤ

DESCRICÃO “Formulação aquosa de hormona do crescimento humana”

Campo do Invento O presente invento refere-se a formulações farmacêuticas contendo hormona do crescimento humana (hGH) e a processos para a preparação e utilização de tais formulações. Mais particularmente, o presente invento refere-se a tais formulações farmacêuticas que possuem uma estabilidade aumentada em formulação aquosa.

Antecedentes do Invento

As formulações de hormona do crescimento humana, conhecidas na arte, são todas preparações liofilizadas que requerem reconstituição. Por frasco, a hGH Protopin consiste em 5 mg de hGH, 40 mg de manitol, 0,1 mg de fosfato de sódio monobásico, 1,6 mg de fosfato de sódio dibásico, reconstituídos a pH 7,8 (Phvsician’s Desk Reference. Medicai Economics Co., Orawell, NJ, p. 1049, 1992). Por frasco, a hGH Humatrope consiste em 5 mg de hGH, 25 mg de manitol, 5 mg de glicina, 1,13 mg de fosfato de sódio dibásico, reconstituídos a pH 7,5 (Phvsician's Desk Reference. p. 1266, 1992).

Para revisão geral quanto a formulações de hormona do crescimento, ver Pearlman et ai.. Current Communications in Molecular Bioloav. eds. D. Marshak e D. Liu, pág. 23-30, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989. Seguem-se outras publicações com interesse no que se refere à estabilização de proteínas.

Em U.S. 4 297 344 revela-se a estabilização de factores de coagulação II e VIII, antitrombina III e plasminogénio, contra o calor por adição de aminoácidos seleccionados tais como glicina, alanina, hidroxiprolina, glutamina e ácido aminobutírico e de um hidrato de carbono tal como um monossacárido, um oligossacárido ou um alditol.

Em U.S. 4 783 441 revela-se um processo para a prevenção da desnaturação de proteínas tais como insulina, em solução aquosa em interfaces, 2 85 961 ΕΡ Ο 652 766/ΡΤ pela adição de até 500 ppm de substâncias superficialmente activas compreendendo uma cadeia de zonas fracamente hidrófilas e fracamente hidrófobas, alternadas, a pH 6,8-8,0.

Em U.S. 4 812 557 revela-se um método de estabilização da interleucina-2 que utiliza albumina do soro humano. O Pedido de Patente Europeia Publicação No. 0 303 746 revela a estabilização de hormonas promotoras do crescimento com polióis consistindo em açúcares não redutores, alditóis, ácidos derivados de açúcares, pentaeritritol, lactose, dextranos solúveis em água e Ficoll, aminoácidos, polímeros de aminoácidos com um grupo lateral carregado a pH fisiológico e sais de colina. O Pedido de Patente Europeia Publicação No. 0 211 601 revela a estabilização de hormonas promotoras do crescimento numa matriz em gel formada por um copolímero de blocos contendo unidades de polioxietileno-polioxipropileno e tendo um peso molecular médio de cerca de 1100 a cerca de 40000. O Pedido de Patente Europeia Publicação No. 0 193 917 revela uma composição biologicamente activa para libertação lenta caracterizada por ser uma solução aquosa de um complexo entre uma proteína e um hidrato de carbono. O Pedido de Patente Australiana No. AU-A-30771/89 revela a estabilização da hormona do crescimento utilizando glicina e manitol. W091/18621 revela misturas de hormona do crescimento e IGF-I formuladas em tampão a pH 6 com um tensioactivo.

Em WO89/09614 revela-se uma formulação de hGH para liofilização contendo glicina, manitol, um tensioactivo não iónico e um tampão. O presente invento proporciona uma formulação aquosa inesperadamente estabilizada na ausência de glicina. A hGH sofre várias vias degradativas, especialmente desamidação, agregação, corte do esqueleto do péptido e oxidação de resíduos metionina. Muitas destas reacções podem ser significativamente retardadas por remoção da água da proteína. No entanto, o desenvolvimento de uma formulação aquosa de hGH tem 3 85 961 ΕΡ Ο 652 766/ΡΤ as vantagens de eliminar os erros de reconstituição, aumentando assim a precisão de dosagem, bem como simplificando a utilização clínica do produto, aumentando assim a aceitação pelo doente. Por conseguinte, é um ohjectivo deste invento proporcionar uma formulação aquosa de hGH que proporcione um controlo aceitável dos produtos de degradação, seja estável a agitação forte (que induz agregação) e seja resistente à contaminação microbiana (que permite acondicionamento para utilização múltipla).

Sumário do Invento O presente invento proporciona formulações farmacêuticas líquidas aquosas estáveis de hormona do crescimento humana para armazenamento durante 6-18 meses a 2-8°C. Tal pode ser proporcionado por uma formulação farmacêutica líquida aquosa estável para armazenamento durante 6-18 meses a 2-8°C, compreendendo hormona do crescimento humana, um tampão que proporcione um pH na gama de 5,5 a 7, 0,1 a 1% em peso de um tensioactivo não iónico, um sal neutro e um conservante.

Numa outra concretização, tal é proporcionado por uma formulação farmacêutica líquida aquosa estável para armazenamento durante 6-18 meses a 2-8°C, contendo hormona do crescimento humana como o único ingrediente activo, compreendendo a formulação, em adição a um tampão que proporcione um pH no intervalo de 5,5 a 7, 0,1 a 1% em peso de um tensioactivo não iónico e um sal neutro mas isento de glicina.

Descrição das Figuras A Figura 1 é um cromatograma de exclusão por tamanhos de uma formulação aquosa de hormona do crescimento armazenada durante 28 dias a 40°C (/.©., sob tensão térmica) e durante um ano a 5°C (i.e., em condições de armazenamento recomendadas). A Figura 2 é um gráfico da análise da velocidade de Arrhenius da agregação da hormona do crescimento em formulação aquosa. A Figura 3 é um cromatograma de permuta aniónica que compara uma amostra de uma formulação aquosa de hGI I sob tensão térmica (40°C) com uma 4 85 961 ΕΡ Ο 652 766/ΡΤ amostra de uma formulação aquosa de hGH armazenada sob as condições recomendadas (2-8°C) durante um ano. A Figura 4 é um gráfico da análise da velocidade de Arrhenius da desamidação da hGH em formulação aquosa. A Figura 5 é um gráfico da percentagem de monómero presente nas várias formulações onde o manitol foi substituído por um sal neutro.

Descrição Detalhada do Invento A. Definições

Os termos seguintes destínam-se a ter os significados indicados, abaixo mencionados, utilizados na descrição e reivindicações.

As expressões “hormona do crescimento humana” ou “hGH” significam hormona do crescimento humana produzida por métodos que incluem a extracção a partir de uma fonte natural e a purificação, e por sistemas de cultura de células recombinantes. A sua sequência e características são descritas, por exemplo, em Hormone Druas. Gueriguian et al., U.S.P. Convention, Rockville, MD (1982). Similarmente, os termos abrangem equivalentes de hormona do crescimento humana biologicamente activos, por exemplo, que diferem num ou mais aminoácidos na sequência global. Além disso, os termos utilizados neste pedido destinam-se a abranger a substituição, deleção e inserção de variantes de aminoácidos de hGH, ou modificações pós-traducionais. As duas espécies com importância são a espécie nativa de 191 aminoácidos (somatropina) e a espécie com metionina (met) no terminal N de 192 aminoácidos (somatrem) normalmente obtidas por recombinação. A expressão “quantidade farmaceuticamente eficaz” de hGH refere-se à quantidade que proporciona efeito terapêutico num regime de administração. As presentes composições são preparadas de forma a conter quantidades de hGH de, pelo menos, cerca de 0,1 mg/ml, até cerca de 10 mg/ml, de preferência de cerca de 1 mg/ml a cerca de 20 mg/ml, mais preferivelmente de cerca de 1 mg/ml a cerca de 5 mg/ml. De forma a utilizar estas composições na administração a doentes humanos que sofrem de nanismo hipopituitário, por exemplo, estas composições 5 85 961 ΕΡ Ο 652 766/ΡΤ contêm de cerca de 0,1 mg/ml a cerca de 10 mg/ml, correspondendo ao regime de dosagens actualmente contemplado para o tratamento pretendido. A gama de concentrações não é crítica para o invento podendo ser alterada pelo médico. B. Métodos Gerais O presente invento não necessita de glicina. A glicina é um componente opcional da formulação aquosa, embora com menos vantagens nas presentes formulações aquosas quando comparadas com as formulações que são liofilizadas para posterior reconstituição. As quantidades de glicina variarão de 0 mg/ml a cerca de 7 mg/ml.

Os tensioactivos não tónicos incluem um polissorbato, tal como polissorbato 20 ou 80, etc., e os poloxâmeros, tais como poloxâmero 184 ou 188, polióis Pluronic e outros polímeros de blocos de etileno/polipropileno, etc. Serão utilizadas quantidades eficazes para proporcionar uma formulação aquosa estável, normalmente na gama de 0,1% (p/v) a 1% (p/v). A utilização de tensioactivos não iónicos permite que a formulação seja exposta a tensões tangencial e superficial sem causar a desnaturação da proteína. Por exemplo, tais formulações contendo tensioactivo são empregues em dispositivos de aerossol tais como aqueles utilizados em administração pulmonar e em pistolas injectoras de jactos sem agulha.

Os tampões incluem tampões de fosfato, Tris, citrato, succinato, acetato ou histidina. Mais vantajosamente, o tampão está na gama de cerca de 2 mM a cerca de 50 mM. O tampão preferido é um tampão de citrato de sódio.

Inclui-se na formulação um conservante para retardar o crescimento microbiano e permitir assim acondicionamento para “utilização múltipla” da hGH. Os conservantes incluem fenol, álcool benzílico, meta-cresol, metilparabeno, propilparabeno, cloreto de benzalcónio, e cloreto de benzetónio. Os conservantes preferidos incluem fenol a 0,2-0,4% (p/v) e álcool benzílico a 0,7-1% (p/v).

As gamas de pH adequadas, ajustadas com tampão, para formulação aquosa de hGH são mais preferivelmente de 5,5 a 7, mais vantajosamente 6,0. A gama de concentrações de tampão é, de preferência, escolhida para minimizar a desamidação, a agregação e a precipitação de hGH. 6 85 961 ΕΡ Ο 652 766/ΡΤ Ο manitol pode ser opcionalmente incluído na formulação aquosa de hGH. A quantidade preferida de manitol é de cerca de 5 mg/ml a cerca de 50 mg/ml. Como alternativa ao manitol, são utilizados outros açúcares ou alditóis, tais como lactose, tre-halose, estaquiose, sorbitol, xilitol, ribitol, mio-inositol, galactitol e semelhante.

Podem ser utilizados sais neutros tais como cloreto de sódio ou cloreto de potássio. A concentração de sal é ajustada para próximo da isotonicidade, dependendo dos outros ingredientes presentes na formulação. Por exemplo, a gama de concentrações do NaCI pode ser 50-200 mM, dependendo dos outros ingredientes presentes.

Numa concretização preferida, a formulação do presente invento compreende os seguintes componentes a pH 6,0.

Ingrediente Quantidade (mg) hGH 5 Cloreto de Sódio 8,8 Polissorbato 20 2,0 Citratos de sódio 2,5 Fenol 2,5 Água esterilizada 1 ml

Deve-se compreender que as quantidades acima são um pouco flexíveis dentro das gamas, como descrito acima com mais detalhe, e que os materiais são intermutáveis dentro das categorias de componentes. Isto é, o polissorbato 80, ou um poloxâmero, podem ser substituídos por polissorbato 20, alternativamente pode-se empregar um tampão succinato ou acetato podendo-se utilizar conservantes alternativos e valores de pH diferentes. Adicionalmente, pode-se utilizar mais do que um agente tampão, conservante, açúcar, sal neutro ou tensioactivo não iónico. A formulação é, de preferência, isotónica e estéril.

Em geral, as formulações do presente invento podem conter outros componentes em quantidades não prejudiciais da preparação de formas estáveis e em quantidades adequadas para administração farmacêutica segura, eficaz. Por exemplo, podem fazer parte das presentes composições outros excipientes

85 961 ΕΡ Ο 652 766/ΡΤ farmaceuticamente aceitáveis bem conhecidos dos peritos na arte. Estes incluem, por exemplo, vários agentes avolumantes, agentes de tamponamento adicionais, agentes quelantes, antioxidantes, cossolventes e semelhantes; exemplos específicos destes podiam incluir sais de trimetilamina (“tampão Tris”) e edetato dissódico. EXEMPLOS EXPERIMENTAIS A. Métodos de Ensaio A cromatografia de permuta aniónica (HPIEC) foi realizada numa coluna TSK DEAE 5PW (1,0 x 7,5 cm) a 45°C, com um caudal de 0,5 ml/min. A coluna foi equilibrada em fosfato de potássio 50 mM, pH 5,5 contendo acetonitrilo a 10% (p/v). A eluição foi realizada utilizando-se um gradiente de 25 minutos de fosfato de potássio 50-100 mM, pH 5,5, com acetonitrilo a 10% (p/v) constante. A carga da coluna foi de 83 pg de proteína. A detecção foi a 230 nm. A cromatografia de exclusão por tamanhos não desnaturante foi realizada numa coluna TSK 2000 SWXL em fosfato de potássio 50 mM, pH 7,2, contendo cloreto de sódio 150 mM. O caudal foi de 1 ml/min com uma carga da coluna de 50-75 pg e a detecção a 214 e 280 nm. A cromatografia de exclusão por tamanhos desnaturante foi realizada numa coluna Zorbax GF250 em fosfato de sódio 200 mM, pH 6,8-7,2/SDS a 0,1%. O caudal foi de 1,0 ml/minuto com uma carga da coluna de 50-75 pg e detecção a 214 e 280 nm. B. Preparação da Formulação

De um modo geral, as amostras de formulação aquosa de hGH para análise, nestes exemplos experimentais, foram preparadas por troca do tampão numa coluna de filtração em gel. O tampão de eluição continha ou cloreto de sódio ou manitol, tampão e o tensioactivo não iónico nas suas proporções finais. Esta solução resultante foi diluída até uma concentração desejada de hGH tendo-se adicionado o conservante. A solução foi esterilizada por filtração utilizando um filtro de membrana esterilizado (tamanho de poro de 0,2 micra ou equivalente) e introduzida em frascos de vidro tipo 1 de 3 cc estéreis, tapados e selados com 8 85 061 ΕΡ 0 652 766/ΡΤ rolhas de borracha de butilo tipo aquoso e tampas de alumínio do tipo de encaixe (“flip-off”). A formulação aquosa de hGH utilizada nos exemplos experimentais consistiu em 5,0 mg de somatropina (Genentech, Inc.), 45,0 mg de manitol, 2,5 mg de fenol, 2,0 mg de polissorbato 20 e 2,5 mg de citrato de sódio, pH 6,0, por ml de solução. A formulação liofilizada, utilizada como referência para comparação nos exemplos, consistiu em 5,0 mg de somatropina, 1,7 mg de glicina, 45,0 mg de manitol, 1,7 mg de fosfato de sódio, 9 mg de álcool benzílico por ml de solução estéril após reconstituição.

C. Exemplo I

Estabilidade Química da Formulação Aquosa

Os frascos da formulação aquosa de hGH (lotes 12738/55-102 e 12738/55-105) foram incubados a qualquer uma das temperaturas de armazenamento recomendadas de 2-8°C, ou a temperaturas de armazenamento elevadas de 15°C ou 25°C e depois foram removidos em vários pontos temporais e analisados quanto às alterações no pH, cor e aspecto e concentração de proteínas. Adicionalmente, as amostras foram incubadas a 40°C de forma a estudar os padrões de degradação sob condições extremas de tensão. Os padrões de degradação para a formulação aquosa foram também comparados com os padrões de degradação conhecidos para a hormona de crescimento liofilizada.

Após armazenamento a 2-8°C durante um ano a formulação aquosa apresentou alterações insignificantes no pH, cor e aspecto e concentração de proteínas. A HPLC de exclusão por tamanhos não desnaturante realizada em amostras armazenadas durante um ano a 2-8°C não apresentou agregação significativa do fármaco (Figura 1). Este resultado é inesperado tendo em vista os ensinamentos de U.S. 5 096 885 de que a glicina contribui para evitar a agregação na preparação liofilizada. A temperaturas superiores a 8°C, observaram-se ao longo do tempo poucas ou nenhumas alterações no pH ou na concentração de proteínas. O exame visual revelou um aumento na opalescência com o tempo para as amostras armazenadas

85 961 ΕΡ Ο 652 766/ΡΤ 9 a 40°C. Esta alteração foi mínima durante o armazenamento a 15-25°C e não foi observada durante o armazenamento a 2-8°C. A quantidade de produto de degradação foi calculada como uma percentagem de área da área total de hGH do cromatograma. A constante de velocidade para cada reacção foi então calculada por subtracção da percentagem de produto de degradação de 100%, tomando o log10, e registando-o num gráfico em função do tempo em dias. O declive da linha recta que se ajusta a estes dados foi utilizado como a constante de reacção (k). A análise de Arrhenius foi realizada por registo do logaritmo natural (In) do valor absoluto de cada constante de velocidade de reacção calculada a 15, 25 e 40°C em função do inverso da temperatura absoluta e depois extrapolação para 5°C. A análise de Arrhenius e da velocidade de tempo real (Figura 2) dos dados obtidos por HPLC de exclusão por tamanhos indicam que a quantidade de agregação de hormona de crescimento após 18 meses de armazenamento será inferior a 1 % (p/v). A análise por HPLC de permuta aniónica realizada à formulação aquosa de hGH armazenada a 40°C indicou um aumento nos picos ácidos ao longo de 28 dias (Figura 3). Três destes picos que eluíram a cerca de 16, 17,5 e 26 minutos, foram produzidos por desamidação da hGH nas posições 149, 152 e 149 mais 152. A análise de Arrhenius e da velocidade de tempo real (Figura 4) dos dados deste método, foram registadas como acima descrito, e indicam que a quantidade de hGH desamidada nestes lotes após 18 meses de armazenamento a 2-8°C será de aproximadamente 9% (p/v). Isto inclui uma quantidade inicial de cerca de 2,4% (p/v) de hGH desamidada ao tempo zero. Foram descritos para outros produtos de hGH, valores até 15% (p/v) de desamidação (Larhammar, H. et al.. (1985), Int. J. Pharmaceutics 23:13-23). Embora a velocidade de desamidação seja maior no estado aquoso, esta velocidade é minimizada a pH 6,0 e inferior.

D. Exemplo II

Estabilidade Física da Formulação Aquosa

Cada um dos seis frascos de hormona de crescimento liofilizada foi reconstituído com 1 ml de água bacteriostática para injecção (BWFI) U.S.P.. Após dissolução, os conteúdos foram transferidos para frascos de 3 cc, tapados e encapsulados para proporcionar a mesma configuração da formulação aquosa. Os

85 961 ΕΡ Ο 652 766/ΡΤ seis frascos da formulação aquosa de hGH e os seis frascos de hGH liofilizada reconstituída foram fortemente agitados transversalmente na horizontal, num dispositivo agitador Shaker-in-the-Round Glas-Col, a 240 movimentos por minuto, utilizando uma regulação de batida de 2,5, e com um deslocamento horizontal de 8 ± 1 cm, durante 24 horas à temperatura ambiente, para se avaliar os efeitos da agitação na estabilidade física da formulação aquosa de hGH. Todas as doze amostras foram colocadas em linha recta no agitador, para assegurar que estas eram todas expostas à mesma força para cada formulação. Removeram-se para análise dois frascos aos 30 minutos, 6 horas e 24 horas.

Os resultados são apresentados na Tabela I. A agitação produziu uma alteração muito pequena na limpidez visual da formulação aquosa. Não houve alteração no conteúdo de monómero de hormona de crescimento total, como verificado por análise por HPLC de exclusão por tamanhos não desnaturante. Esta análise detecta agregados não covalentes, que são completamente dispersos em SDS numa análise por HPLC de exclusão por tamanhos desnaturante.

Por comparação, estes resultados demonstraram também que o produto liofilizado reconstituído era mais sensível ao tratamento, mesmo passados apenas 30 minutos de agitação. Esta sensibilidade é típica de todas as formulações de hGH actualmente disponíveis, para além da formulação aquosa do presente invento. A inclusão de tensioactivo não iónico é o factor mais importante na prevenção da ocorrência deste fenómeno.

Tabela I. Efeitos da Agitação à Temperatura Ambiente na Formulação Aquosa de hGH vs. Formulação Liofilizada Reconstituída

Amostra Cor/Aspecto Monómero HPSEC, % Proteína Solúvel, % Monómero Total, %1 Não agi tada Aquosa Límpida/incolor 99,7 ND ND Aquosa Límpida/inc olor 99,9 ND ND Liofilizada Límpida/incolor 99,0 100 99,0 Liofilizada Límpida/incolor ND ND ND 85 961 ΕΡ Ο 652 766/ΡΤ 11

Tabela I. (continuação)

Amostra Cor/Aspecto Monómero Proteína Monómero HPSEC, % Solúvel, % Total, % 1

Agitada 0,5 h

Aquosa Muito ligeiramente opalescente/incolor 99,9 100 99,9 Aquosa Muito ligeiramente opalescente/incolor 100,0 100 100,0 Liofilizada Ligeiramente opalescente/incolor 93,6 100 93,6 Liofilizada Límpida/incolor 92,8 100 92,8

Agitada 6 h

Aquosa Ligeiramente opalescente/ incolor 99,9 100 99,9 Aquosa Opalescente/incolor 99,8 100 99,8 Liofilizada Muito opalescente/amarel a a castanha 80,5 73 58,8 Liofilizada Muito opalescente/amarel a a castanha 72,7 61,7 44,9

Agitada 24 h

Aquosa Ligeiramente opalescente/ incolor 99,8 100 99,8 Aquosa Límpida/incolor 99,8 ND ND Liofilizada Muito turva/amarela a castanha 60,6 21,5 13,0 Liofilizada Muito turva/amarela a castanha 56,7 14,8 8,4 1 Monómero total = (% monómero X % proteína solúvel)/100 12 85 061 ΕΡ 0 652 766/ΡΤ

Ε. Exemplo III

Eficácia Conservante na Formulação Aquosa

Submeteram-se amostras de formulação aquosa de hGH a desafio bacteriano de acordo com um desafio abreviado que utiliza o teste U.S.P. padrão. Neste teste, adiciona-se uma suspensão de E. coli ou de S. aureus a uma alíquota de formulação aquosa de hGH para obter uma concentração final em bactérias entre 105 a 106 UFC/ml. As bactérias viáveis remanescentes nos tubos foram contadas imediatamente e 4 e 24 horas após a incubação a 20-25°C. A percentagem de alteração na concentração dos microrganismos durante o desafio foi calculada de acordo com a equação seguinte: % de título inicial = título a T= X horas x 100 título a T=0

Os resultados desta experiência indicam que para as duas espécies de bactérias, as concentrações de bactérias viáveis foram reduzidas para menos de 0,01% das concentrações iniciais, após 24 horas.

F. Exemplo IV

Substituição do Manitol por Sal

Nesta experiência compararam-se as formulações aquosas de hGH a várias concentrações de sal, manitol e tensioactivo não iónico. Todas as formulações continham 5 mg/ml de hGH/fenol a 0,25% (p/v)/citrato de sódio 10 mM, pH 6,0. As amostras foram armazenadas durante 3-4 meses a 2-8°C. A Figura 5 indica a percentagem de monómero presente nas formulações indicadas. A Tabela abaixo indica a composição de cada formulação. Estes resultados demonstram a estabilidade inesperada da hGH numa formulação na qual o manitol foi substituído por um sal neutro na presença de um tensioactivo. 13 ΕΡ Ο 652 766/ΡΤ

Tabela 3

Formulações Testadas na Figura 5 Formulação # Composição 42 Polissorbato 20 0,1% (p/v) manitol 50 mM 47 Poloxâmero 188 0,1% (p/v) NaCI 0,1 M 51 Polissorbato 20 0,5% (p/v) manitol 50 mM 52 Poloxâmero 188 0,1% (p/v) manitol 50 mM 53 Poloxâmero 184 0,1% (p/v) manitol 50 mM 60 Polissorbato 20 0,2% (p/v) NaCI 0,1 M 61 Polissorbato 20 0,2% (p/v) NaCI 0,05 M 62 Polissorbato 20 0,2% (p/v) NaCI 0,15 M 63 Polissorbato 20 0,2% (p/v) manitol 50 mM

Lisboa, .-tf. FBI. 2Μ1

Por GENENTECH, INC. - O AGENTJ

Claims

ΕΡ Ο 652 766/ΡΤ 1/2 REIVINDICAÇÕES 1. Formulação farmacêutica líquida aquosa estável para armazenamento durante 6-18 meses a 2-8°C, compreendendo hormona do crescimento humana, um tampão que proporciona um pH na gama de 5,5 a 7, 0,1 a 1% em peso de um tensioactivo não iónico, um sal neutro e um conservante.
2. Formulação farmacêutica líquida aquosa estável para armazenamento durante 6-18 meses a 2-8°C, contendo hormona do crescimento humana como o único ingrediente activo, compreendendo a formulação, adicionalmente, um tampão que proporciona um pH na gama de 5,5 a 7, 0,1 a 1% em peso de um tensioactivo não iónico e um sal neutro, mas isenta de glicina.
3. Formulação de acordo com a reivindicação 2, compreendendo adicionalmente um conservante.
4. Formulação de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 3, em que o conservante é fenol, álcool benzílico, meta-cresol, metilparabeno, propilparabeno, cloreto de benzalcónio e cloreto de benzetónio.
5. Formulação de acordo com a reivindicação 4, em que o conservante é fenol.
6. Formulação de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que o sal neutro é cloreto de sódio.
7. Formulação de acordo com a reivindicação 6, em que o cloreto de sódio está presente entre 50 e 200 mM.
8. Formulação de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, que compreende também manitol.
9. Formulação de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que a concentração da hormona do crescimento humana é de 1 a 20 mg/ml. ΕΡ Ο 652 766/ΡΤ 2/2
10. Formulação de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que o tampão é um tampão de citrato, fosfato, Tris, succinato, acetato ou histidina.
11. Formulação de acordo com a reivindicação 10, em que o tampão é citrato.
12. Formulação de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que a concentração de tampão é de cerca de 2 mM a 50 mM.
13. Formulação de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que o tensioactivo não iónico é poloxâmero ou polissorbato.
14. Formulação de acordo com a reivindicação 13, em que o poloxâmero é poloxâmero 188 ou poloxâmero 184 ou o polissorbato é polissorbato 20 ou polissorbato 80.
15. Formulação de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, que é isotónica.
18. Formulação de acordo com a reivindicação 1, compreendendo 5 mg/ml de hGH, 8,8 mg/ml de cloreto de sódio, 2,0 mg/ml de polissorbato 20, 2,5 mg/ml de citrato de sódio e 2,5 mg/ml de fenol a pH 6,0. Lisboa, -*6. FEV. 2001 Por GENENTECH, INC. - O AGENTE OFICIAL -

ENG.' ANTÓNIO iOAO DA CUNRA FERREIRA Ag. Of. fr. Ind. Rua das Fleres, 74 - 4.* 1ΕΟΟ LISBOA