CN113425835B - 一种生长激素原料药溶液、水针剂及其制备方法 - Google Patents
一种生长激素原料药溶液、水针剂及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113425835B CN113425835B CN202010207583.0A CN202010207583A CN113425835B CN 113425835 B CN113425835 B CN 113425835B CN 202010207583 A CN202010207583 A CN 202010207583A CN 113425835 B CN113425835 B CN 113425835B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- growth hormone
- solution
- sodium chloride
- concentration
- buffer solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 title claims abstract description 70
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 title claims abstract description 69
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 title claims abstract description 68
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 56
- 239000000243 solution Substances 0.000 title claims abstract description 54
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims abstract description 45
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 238000002347 injection Methods 0.000 title claims description 35
- 239000007924 injection Substances 0.000 title claims description 35
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 17
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 52
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 34
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims abstract description 27
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 27
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 26
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 12
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 claims description 52
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 claims description 52
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 claims description 50
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims description 27
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 25
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 25
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 20
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 19
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 12
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims description 10
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 9
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 9
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 7
- XMWGSPLTTNCSMB-UHFFFAOYSA-M sodium;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;chloride Chemical compound [Na+].[Cl-].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O XMWGSPLTTNCSMB-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 7
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 3
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 claims description 2
- 239000012527 feed solution Substances 0.000 claims 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 abstract description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 17
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 9
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 9
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 3
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 3
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 3
- 206010056438 Growth hormone deficiency Diseases 0.000 description 2
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 2
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 2
- 210000000579 abdominal fat Anatomy 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 208000010392 Bone Fractures Diseases 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 206010012374 Depressed mood Diseases 0.000 description 1
- 241000234642 Festuca Species 0.000 description 1
- 206010017076 Fracture Diseases 0.000 description 1
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 1
- 206010019196 Head injury Diseases 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 208000020221 Short stature Diseases 0.000 description 1
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- 206010061577 Ulcer haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000011038 discontinuous diafiltration by volume reduction Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- 230000008451 emotion Effects 0.000 description 1
- 238000002270 exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 238000009578 growth hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 231100000001 growth retardation Toxicity 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000005414 inactive ingredient Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007108 local immune response Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004630 mental health Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 201000000585 muscular atrophy Diseases 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 1
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/27—Growth hormone [GH] (Somatotropin)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/02—Inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/08—Solutions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
Abstract
本发明涉及一种生长激素原料药溶液,包括生长激素,所述的生长激素原料药溶液还包括缓冲液,所述的缓冲液中包括8.3~9.1g/L的氯化钠、9.5~10.5mM的柠檬酸钠,所述的缓冲液的pH为5.7~6.3。本发明的原料药溶液可以在冷冻状态下稳定保存和运输,且可在复溶后保持产品的纯度和质量,且本发明的制备方法方便、节能、高效,适合工业化生产。
Description
技术领域
本发明属于基因重组技术领域,具体涉及一种生长激素原料药溶液、水针剂及其制备方法。
背景技术
重组人生长激素,是由基因工程方法制备的基因工程药物,具有与天然人脑垂体前叶嗜酸性细胞分泌的人生长激素完全一致的蛋白质序列和结构,含有191个氨基酸,是一种非糖基化的单链水溶性蛋白。人生长激素作用广泛,对人体多数组织(除神经组织外)起促生长功能,并能促使脂肪、糖类的降解,增进蛋白质和核酸的合成。
重组人生长激素传统上可以用于治疗儿童身材矮小、生长发育迟缓,每年可促进青少年身高增长5-10cm,使生长激素缺乏的儿童获得更好的成年身高,安全有效。还可治疗成人的生长激素缺乏症,如经历脑垂体手术、垂体前叶功能减退症、头部外伤、感染或脑部放疗及其他原因造成生长激素缺乏,患者出现肥胖、腹部脂肪堆积、肌肉体积减少、乏力、记忆力下降、骨质疏松和情绪低落等症状。给予适量重组人生长激素治疗,就可纠正上述症状,如减少腹部脂肪堆积,增加身体肌肉含量,降低心血管疾病的风险。长期用药还可改善自我感觉,提高情绪,从而全面提升患者的身心健康水平。此外,重组人生长激素还可辅助治疗烧伤、骨折、创伤、出血性溃疡、组织坏死、肌肉萎缩、骨质疏松、肥胖等疾病。生长激素在美容和抗衰老的临床应用也在不断开发中。
从1985年美国FDA首次批准重组人生长激素用于临床以来,全球重组人生长激素的需求量和销售额在基因工程药物中一直名列前茅。目前,重组人生长激素已被载入多国药典,全球年销售收入超过30亿美元。全球已上市销售的生长激素有粉针剂型和水针剂型两种。粉针制备过程需要加入赋形剂并经冷冻干燥处理,容易形成多聚体和高聚体,导致临床上出现全身或局部的免疫反应,降低药效和带来副作用,不利于患者长期使用。而且粉针剂需要复溶和混匀,混匀不当会形成浑浊,影响药物的取用和吸收,并会进一步增加药物的空间结构破坏和导致更多聚体的形成,对于患者而言,不仅使用不便,还可能出现给药量的不准确性。此外,由于冻干和复溶所添加非活性成分赋形剂体积占比高,导致患者注射体积较水针剂多,增加注射给药的不便性和更容易引起注射部位的局部不良反应。国内外已有临床数据显示,水针剂的免疫原性反应率极低,并可降低患者因使用冻干制剂而引起的抗药抗体水平,长期使用水针剂更加安全。
重组人生长激素国际主流产品是水针剂型,而我国已有的重组人生长激素产品多数是冻干粉针。开发稳定的适合商业化大规模生产的水针剂生产工艺,对于推进重组人生长激素产品的成功上市具有重要的意义。常规的生长激素水针剂或是不透露原料药溶液的成分、工艺和保存条件,或是将原料药制备成相同成分的溶液,保存在2-8℃(如美国专利5763394,5981485,6448225)。但是原料药生产完成后,各项检测尤其是微生物检测就需要2-3周,如果在原料药检测结果完成之前就进行制剂的制备,具有一定的风险,而在原料药检测放行后制备,已经接近原料药保存期,而且大体积的原料药溶液保存和转运不便,以这种方式生产和保存的原料药用于制剂的制备,不利于保证更高的制剂产品质量,也不利于方便的工业化生产。因此,需要一种更加简易、便利并且可以延长原料药保存期的方法来进行生长激素水针剂制剂的生产。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种能够延长原料药保存期的生长激素原料药溶液、水针剂及其制备方法。
发明人经研究发现生长激素水针剂需要保存在2-8℃的原因主要是由于水针剂一旦冻融会发生严重的浑浊,形成沉淀,二聚体和高聚体含量增加,产品纯度下降。为了解决上述问题,发明人研究了生长激素水针剂冻融后产生浑浊的原因,并发现了一种有效的可冻存型生长激素原料药,解决了生长激素原料药冻存的问题。通过该方法制备的生长激素水针剂,不仅具有和常规非冻存型原料药制备的生长激素水针剂一致的产品质量和稳定性,而且该生长激素原料药在-20℃可稳定保存2年,稳定性优于常规非冻存型原料药。
为解决以上技术问题,本发明采取如下技术方案:
本发明一方面提供一种生长激素原料药溶液,包括生长激素,所述的生长激素原料药溶液还包括缓冲液,所述的缓冲液中包括8.3~9.1g/L的氯化钠、9.5~10.5mM的柠檬酸钠,所述的缓冲液的pH为5.7~6.3。
本发明的缓冲液中不含有苯酚,若缓冲液中含有苯酚,则冻融后,原料药溶液将产生浑浊。
根据一种实施方式,所述的缓冲液中还包括1.9~2.1g/L的吐温20。
优选地,所述的生长激素的浓度为6~10g/L。
优选地,所述的生长激素为重组人生长激素、重组牛生长激素、重组猪生长激素中的一种或多种。
根据一种具体且优选实施方式,所述的缓冲液的成分为8.7g/L的氯化钠以及10mM的柠檬酸钠。
根据另一种具体且优选实施方式,所述的缓冲液的成分为8.7g/L的氯化钠、10mM的柠檬酸钠以及2g/L的吐温20。
本发明另一方面提供一种所述的生长激素原料药溶液的制备方法,将所述的生长激素加入所述的缓冲液中制得所述的生长激素原料药溶液。
优选地,将所述的生长激素加入所述的缓冲液中后,通过超滤将所述的生长激素的浓度浓缩到7~8g/L,然后再用所述的缓冲液将所述的生长激素的浓度稀释至6.2~6.8g/L。
优选地,所述的生长激素可通过大肠杆菌、酵母或哺乳动物细胞等发酵表达,经过收集、分离、粗纯和精纯获得。生长激素的具体制备方法采用本领域常规方法即可。
本发明通过将纯化后的生长激素置换到缓冲液中制成液体原料药,使其可以在冷冻状态下稳定保存和运输,并可在复溶后保持产品纯度和质量,制剂生产前将液体原料药融化后加入防腐剂,混匀分装成液体制剂。
本发明的第三方面提供一种所述的生长激素原料药溶液的储存方法,将所述的生长激素原料药溶液冻存。
优选地,所述的冻存温度为-15℃及以下。
本发明的第四方面是提供一种所述的生长激素原料药溶液或者所述的冻存后的原料药溶液在制备生长激素水针剂中的应用。
本发明的第五方面是提供一种生长激素水针剂的制备方法,包括如下步骤:
(1)将所述的储存方法冻存后的生长激素原料药溶液融化,或者,取所述的生长激素原料药溶液;
(2)加入含95~105g/L吐温的氯化钠-柠檬酸盐溶液,搅拌混匀;
(3)加入含浓度≤15g/L苯酚的氯化钠-柠檬酸盐溶液,搅拌混匀;
(4)选择性地采用氯化钠-柠檬酸盐溶液调整生长激素的浓度至所需浓度。
优选地,氯化钠-柠檬酸盐溶液与制备原料药的缓冲液相同。
本发明中,生长激素水针剂中生长激素的浓度根据具体规格调整,例如5.0g/L。
本发明中的水针剂在2~8℃下保存。
由于以上技术方案的实施,本发明与现有技术相比具有如下优点:
本发明的原料药溶液可以在冷冻状态下稳定保存和运输,且可在复溶后保持产品的纯度和质量,且本发明的制备方法方便、节能、高效,适合工业化生产。
附图说明
图1为实施例7的重组人生长激素原料药和制剂的分子排阻色谱法(SE C-HPLC)纯度分析结果图,其中上方的曲线为重组人生长激素原料药,纯度99.93%,下方的曲线为重组人生长激素制剂,纯度99.75%,标1的峰为重组人生长激素,标2的峰为柠檬酸钠,标3的峰为苯酚。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步详细的说明,但本发明并不限于以下实施例。实施例中采用的实施条件可以根据具体使用的不同要求做进一步调整,未注明的实施条件为本行业中的常规条件。
下文以重组人生长激素为例介绍本发明的技术方案,本发明所述工艺过程和成分也同样适用于其他类型重组生长激素,如重组牛生长激素、重组猪生长激素等。
实施例1
重组人生长激素通过大肠杆菌发酵表达,经收集、分离、粗纯和精纯,得到纯度不低于96%的重组人生长激素。
取纯化的重组人生长激素,将其置换至含有8.7g/L氯化钠,10mM柠檬酸钠,2.0g/L吐温20,pH6.0缓冲液中,使蛋白终浓度分别为6.0g/L、7.5g/L和10.0g/L。将各浓度蛋白溶液分别冻存在-20℃,冻存后取出室温融化,各重复5次,每次融化后取样进行澄清度和分子排阻色谱法(SE C-HPLC)检测,其中,澄清度检测采用目视法。
不同冻融次数的原料药澄清度检测结果见表1,由表1可知:在8.7g/L氯化钠,10mM柠檬酸钠,2.0g/L吐温20,pH6.0缓冲液中冻融5次后澄清度仍无变化,在0-0.5级之间,说明该缓冲液适合作为重组人生长激素液体原料药缓冲液,并可以耐受5次冻融。
表1
分子排阻色谱法检测不同冻融次数的原料药纯度的结果见表2,由分子排阻色谱法结果可知,在8.7g/L氯化钠,10mM柠檬酸钠,2.0g/L吐温20,pH6.0缓冲液(缓冲液1)中原料药可耐受5次冻融,二聚体不会明显增多。说明该缓冲液适合作为重组人生长激素液体原料药缓冲液,并可以耐受5次冻融。
表2
实施例2
重组人生长激素蛋白前体通过大肠杆菌发酵表达,经收集、分离、粗纯和精纯,得到纯度不低于96%的重组人生长激素。
取纯化的重组人生长激素,将其置换至含有8.7g/L氯化钠,10mM柠檬酸钠,2.5g/L苯酚,pH6.0缓冲液(缓冲液2)中,使蛋白终浓度分别为6.0g/L、7.5g/L和10.0g/L。将各浓度蛋白溶液分别冻存在-20℃,冻存后取出室温融化,各重复5次,每次融化后取样进行澄清度和分子排阻色谱法检测。
根据澄清度检测结果,在8.7g/L氯化钠,10mM柠檬酸钠,2.5g/L苯酚中冻融1次即出现浑浊,浊度>Ⅳ,故该缓冲液不适合作为液态原料药的保存溶液。
实施例3
重组人生长激素蛋白前体通过大肠杆菌发酵表达,经收集、分离、粗纯和精纯,得到纯度不低于96%的重组人生长激素。
取纯化的重组人生长激素,将其置换至含有8.7g/L氯化钠,10mM柠檬酸钠,pH6.0缓冲液(缓冲液3)中,使蛋白终浓度分别为6.0g/L、7.5g/L和10.0g/L。将各浓度蛋白溶液分别冻存在-20℃,冻存后取出室温融化,各重复5次,每次融化后取样进行澄清度和分子排阻色谱法检测。
不同冻融次数的原料药澄清度检测结果见表3,由表3可知:在8.7g/L氯化钠,10mM柠檬酸钠,pH6.0缓冲液中冻融5次后澄清度仍无变化,在0.5-Ⅰ级之间。说明该缓冲液适合作为重组人生长激素液体原料药缓冲液,并可以耐受5次冻融。
分子排阻色谱法检测不同冻融次数的原料药纯度的结果见表4,由分子排阻色谱法结果可知:在8.7g/L氯化钠,10mM柠檬酸钠,pH6.0缓冲液中冻融5次后二聚体并未明显增多,说明该缓冲液适合作为重组人生长激素液体原料药缓冲液,并可以耐受5次冻融。
表3
表4
实施例4
按实施例3制备重组人生长激素原料药溶液,将蛋白浓度分别调整为5.56g/L、6.0g/L、7.5g/L和10.0g/L,取样检测澄清度。将吐温20加入8.7g/L氯化钠,10mM柠檬酸钠,pH6.0缓冲液中,制成浓度为稀释到4g/L,6g/L,12g/L,20g/L的吐温20溶液。将苯酚分别加入吐温20溶液中,分别制成苯酚浓度为5g/L,7.5g/L,15g/L,25g/L的苯酚/吐温20溶液。向各浓度的生长激素溶液中分别加入所需浓度的苯酚/吐温20溶液,搅拌混匀,制备成重组人生长激素水针剂,生长激素、吐温20和苯酚终浓度分别为5.0g/L、2.0g/L和2.5g/L,取样进行澄清度检测。
澄清度检测结果见表5,由澄清度结果可知,制备苯酚/吐温20溶液时,当苯酚浓度大于15g/L时会产生浑浊,而且浊度随着苯酚浓度的增大而增加,之后再将苯酚/吐温20溶液加入到生长激素溶液中浊度会减弱并可在过滤后恢复澄清度,但是浑浊可能会对生长激素的质量产生影响,造成纯度的降低,因此,苯酚/吐温-20里的苯酚浓度不应高于15g/L。
表5
分子排阻色谱法分析结果见表6,由分子排阻色谱法结果可知,苯酚浓度≤15g/L,加入前后纯度基本一致,当苯酚浓度为25g/L时,纯度略有下降。
表6
实施例5
按实施例3制备重组人生长激素原料药溶液,将蛋白浓度分别调整为5.56g/L、5.80g/L、6.00g/L、6.12g/L和7.5g/L,取样检测澄清度。将吐温20加入8.7g/L氯化钠,10mM柠檬酸钠,pH6.0缓冲液中,制成浓度为100g/L的吐温20溶液。将苯酚加入8.7g/L氯化钠,10mM柠檬酸钠,pH6.0缓冲液中,分别制成浓度为7.5g/L,15g/L,16.7g/L,20.8g/L和25g/L的苯酚溶液。
向各浓度的生长激素溶液中分别加入100g/L的吐温20溶液,搅拌混匀。然后再分别加入不同浓度的苯酚溶液,搅拌混匀,制备成重组人生长激素水针剂,生长激素、吐温20和苯酚终浓度分别为5.0g/L、2.0g/L和2.5g/L,取样进行澄清度检测和分子排阻色谱法分析。
分子排阻色谱法分析结果见表7,当加入含7.5g/L苯酚的缓冲时,纯度基本无变化,到15g/L时纯度略有下降,随着加入苯酚浓度的增大,纯度进一步降低。
表7
实施例6
将层析纯化后得到的重组人生长激素溶液通过超滤置换到8.7g/L氯化钠,10mM柠檬酸钠,pH 6.0的缓冲液中,浓缩到7-8g/L,然后用8.7g/L氯化钠,10mM柠檬酸钠,pH 6.0的缓冲液将蛋白质浓度稀释到6.5g/L,0.22μm过滤后,分装至5mL西林瓶中,-20℃冻存。
将冻存的生长激素原料药溶液从-20℃中取出,分别在冰水混合物、2-8℃和30℃融化,记录完全融化所需要的时间。取样进行澄清度和纯度分析,分析结果见表8(不同条件下原料药融化所需时间及澄清度和分子排阻色谱法纯度),从结果可见原料药融化温度对澄清度和纯度的影响不明显。
表8
实施例7
按实施例6制备重组人生长激素原料药溶液,无菌过滤后分装1L冻存瓶中,0.5L/瓶,-20℃保存。取样进行澄清度和分子排阻色谱法纯度等各项检测。经检测澄清度为0-0.5,其他各项指标均符合药典要求,纯度分析结果见图1。
将吐温20加入8.7 g/L氯化钠,10 mM柠檬酸钠,pH6.0缓冲液中,制成浓度为100g/L的吐温20溶液。将苯酚加入8.7 g/L氯化钠,10 mM柠檬酸钠,pH6.0缓冲液中,制成浓度为15g/L的苯酚溶液。
将生长激素原料药溶液从-20℃冻存后取出,2-8℃使之完全融化(约36小时);分别加入100 g/L的吐温20溶液,200-300 rpm搅拌混匀;然后再加入苯酚溶液,200-300 rpm搅拌混匀;最后用8.7 g/L氯化钠,10 mM柠檬酸钠,pH 6.0的缓冲液将生长激素浓度稀释到5.0 g/L,制备成重组人生长激素水针剂,生长激素、吐温20和苯酚终浓度分别为5.0 g/L、2.0 g/L和2.5 g/L。取样进行澄清度检测和分子排阻色谱法纯度等各项检测。经检测澄清度为0-0.5,其他各项指标均符合药典要求,纯度分析结果见图1。
实施例8
按实施例6制备重组人生长激素原料药溶液,分别置于-20±5℃、5±3℃进行稳定性考察。运用目视观察法、分子排阻色谱法和反相高效液相色谱法检测重组人生长激素原料药原液在不同存储条件下澄清度、高分子量蛋白质和相关蛋白含量的变化。在-20±5℃和5±3℃条件下,所得稳定性数据分别如表9(原料药-20±5℃稳定性数据)和表10(原料药5±3℃稳定性数据)所示。稳定性数据表明,重组人生长激素原料药原液在-20±5℃条件下可稳定存放24个月,在5±3℃条件下可稳定存放1个月。
表9
表10
5±3℃时间点(月) | 可接受标准 | 0 | 1 | 3 | 6 | 12 |
澄清度 | 澄清或微浊 | 澄清 | 澄清 | 澄清 | 澄清 | 澄清 |
高分子量蛋白含量(%) | ≤4.0 | 0.1 | 0.2 | 0.4 | 0.5 | 0.5 |
相关蛋白含量(%) | ≤6.0 | 2.4 | 3.1 | 5.6 | 6.5 | 6.4 |
按实施例7制备重组人生长激素水针剂,分别置于5±3℃、25±2℃进行稳定性考察。运用目视观察法、分子排阻色谱法和反相高效液相色谱法检测重组人生长激素制剂在不同存储条件下澄清度、高分子量蛋白质和相关蛋白含量的变化。5±3℃、25±2℃所得稳定性数据分别如表11(制剂5±3℃稳定性数据)和表12(制剂25±2℃稳定性数据)所示,稳定性数据表明,重组人生长激素制剂在5±3℃条件下可稳定存放24个月,在25±2℃条件下可稳定存放1个月。
表11
表12
本发明通过对不同溶液中重组人生长激素原料药的冻融稳定性考察,确定了一种可以耐受冻融的重组人生长激素原料药,其成分为6.5±0.3g/L重组人生长激素,8.7g/L氯化钠,10mM柠檬酸钠,pH6.0或6.5g/L重组人生长激素,8.7g/L氯化钠,10mM柠檬酸钠,2.0g/L吐温20,pH6.0。常规制备方法的原料药溶液需要保存在2-8℃并需要在1个月内用于制剂生产,而采用本发明方法制备的重组人生长激素原料药溶液可以稳定保存在-20℃,稳定性达到2年,进一步将该原料药溶液融化后,通过本发明的程序制备成重组人生长激素水针剂,产品质量可以满足欧洲、美国和中国药典的质量指标及稳定性要求。
以上对本发明做了详尽的描述,其目的在于让熟悉此领域技术的人士能够了解本发明的内容并加以实施,并不能以此限制本发明的保护范围,凡根据本发明的精神实质所作的等效变化或修饰,都应涵盖在本发明的保护范围内。
Claims (5)
1.一种生长激素原料药溶液的储存方法,其特征在于:将所述的生长激素原料药溶液冻结保存,所述的冻结保存温度为-15℃及以下,所述生长激素原料药溶液由生长激素和缓冲液组成,所述的缓冲液的成分为8.3~9.1 g/L的氯化钠以及9.5~10.5 mM的柠檬酸钠,或者,所述缓冲液的成分为8.3~9.1 g/L的氯化钠、9.5~10.5 mM的柠檬酸钠以及1.9~2.1 g/L的吐温20,所述的缓冲液的pH为5.7~6.3,所述的生长激素为重组人生长激素,所述的生长激素的浓度为6~10 g/L。
2.根据权利要求1所述的生长激素原料药溶液的储存方法,其特征在于:所述的缓冲液的成分为8.7 g/L的氯化钠以及10 mM的柠檬酸钠;或者,所述的缓冲液的成分为8.7 g/L的氯化钠、10 mM的柠檬酸钠以及2 g/L的吐温20。
3.根据权利要求1所述的生长激素原料药溶液的储存方法,其特征在于:将所述的生长激素加入所述的缓冲液中制得所述的生长激素原料药溶液。
4.根据权利要求3所述的生长激素原料药溶液的储存方法,其特征在于:将所述的生长激素加入所述的缓冲液中后,通过超滤将所述的生长激素的浓度浓缩到7~8 g/L,然后再用所述的缓冲液将所述的生长激素的浓度稀释至6.2~6.8 g/L。
5.一种生长激素水针剂的制备方法,其特征在于:包括如下步骤:
(1)使用如权利要求1至4中任一项所述的储存方法对所述生长激素原料药溶液进行冻结保存;
(2)将步骤(1)冻结保存后的生长激素原料药融化;
(3)加入含95~105 g/L吐温的氯化钠-柠檬酸盐溶液,搅拌混匀;
(4)加入含浓度≤15 g/L苯酚的氯化钠-柠檬酸盐溶液,搅拌混匀;
(5)选择性地采用氯化钠-柠檬酸盐溶液调整生长激素的浓度至所需浓度。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010207583.0A CN113425835B (zh) | 2020-03-23 | 2020-03-23 | 一种生长激素原料药溶液、水针剂及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010207583.0A CN113425835B (zh) | 2020-03-23 | 2020-03-23 | 一种生长激素原料药溶液、水针剂及其制备方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN113425835A CN113425835A (zh) | 2021-09-24 |
CN113425835B true CN113425835B (zh) | 2024-03-19 |
Family
ID=77753248
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202010207583.0A Active CN113425835B (zh) | 2020-03-23 | 2020-03-23 | 一种生长激素原料药溶液、水针剂及其制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN113425835B (zh) |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1994003198A1 (en) * | 1992-07-31 | 1994-02-17 | Genentech, Inc. | Human growth hormone aqueous formulation |
KR20050023875A (ko) * | 2003-09-03 | 2005-03-10 | 한미약품 주식회사 | 인간 성장 호르몬의 안정화된 액상 제제용 조성물 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DK2486916T3 (en) * | 2006-12-18 | 2015-06-15 | Ajinomoto Althea Inc | Formulations of Human Growth Hormone |
-
2020
- 2020-03-23 CN CN202010207583.0A patent/CN113425835B/zh active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1994003198A1 (en) * | 1992-07-31 | 1994-02-17 | Genentech, Inc. | Human growth hormone aqueous formulation |
KR20050023875A (ko) * | 2003-09-03 | 2005-03-10 | 한미약품 주식회사 | 인간 성장 호르몬의 안정화된 액상 제제용 조성물 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN113425835A (zh) | 2021-09-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11672865B2 (en) | Viscosity-reducing excipient compounds for protein formulations | |
CN1273187C (zh) | 稳定性提高的无锌或低锌胰岛素制剂 | |
JP3268557B2 (ja) | 成長ホルモンから成る蛋白調合物 | |
US20100069292A1 (en) | Insulin with a basal release profile | |
CN107952064B (zh) | 含有聚乙二醇洛塞那肽的药物制剂及其制备方法 | |
CN103893744B (zh) | 一种治疗糖尿病的药物制剂及其制备方法 | |
WO2022178737A1 (zh) | 一种稳定利拉鲁肽药物制剂的处理方法 | |
CN112237571B (zh) | 一种提高艾塞那肽人血清白蛋白融合蛋白稳定性的冻干粉 | |
CN101693016B (zh) | 通用的注射用重组人血清白蛋白融合蛋白制剂配方 | |
CN113425835B (zh) | 一种生长激素原料药溶液、水针剂及其制备方法 | |
CN108606955A (zh) | 培化西海马肽的药用组合物及其制备方法 | |
Brange | Insulin preparations | |
CN102512384B (zh) | 一种冻干剂型蛋白组合物及其制备方法 | |
CN114053217B (zh) | 一种Exendin-4-Fc融合蛋白注射制剂及其制备方法 | |
CN112933216B (zh) | 同时含有胰岛素和地塞米松磷酸钠的稳定的药物组合物 | |
CN113368063B (zh) | 一种注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂及其制备方法 | |
US11957758B2 (en) | Pharmaceutical composition of docetaxel conjugate and preparation method | |
EP3287140A1 (en) | Nerve growth factor composition and powder injection | |
CN101703466A (zh) | 冰片注射剂及其制剂方法 | |
JP5143784B2 (ja) | 糖タンパク質ホルモン組成物 | |
CN101129374B (zh) | 长春氟宁药物组合物及其制备方法与应用 | |
CN111195349B (zh) | 一种代谢调节融合蛋白的冻干粉制剂 | |
CN1234410C (zh) | 注射用脑蛋白水解物冻干粉针剂及其制备方法 | |
CN114685581B (zh) | 一种注射用曲克芦丁及其制备工艺 | |
WO2011156476A2 (en) | Insulin with a basal release profile |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |