CN113368063B - 一种注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂及其制备方法 - Google Patents
一种注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113368063B CN113368063B CN202010163271.4A CN202010163271A CN113368063B CN 113368063 B CN113368063 B CN 113368063B CN 202010163271 A CN202010163271 A CN 202010163271A CN 113368063 B CN113368063 B CN 113368063B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- freeze
- drying
- hirudin
- chimeric protein
- preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 108
- 108010007267 Hirudins Proteins 0.000 title claims abstract description 82
- 102000007625 Hirudins Human genes 0.000 title claims abstract description 82
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 82
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 title claims abstract description 82
- 229940006607 hirudin Drugs 0.000 title claims abstract description 82
- WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N hirudin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(OS(O)(=O)=O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N2)=O)CSSC1)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)CSSC1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N 0.000 title claims abstract description 82
- 238000002347 injection Methods 0.000 title claims abstract description 51
- 239000007924 injection Substances 0.000 title claims abstract description 51
- 108010046018 leukocyte inhibitory factor Proteins 0.000 title claims abstract description 34
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 71
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 63
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 63
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 46
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 26
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 25
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 23
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims description 23
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 claims description 22
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims description 22
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 22
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 claims description 22
- 238000003825 pressing Methods 0.000 claims description 22
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 claims description 22
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 claims description 22
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 21
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 21
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 20
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 20
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical group OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 17
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 17
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 17
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 17
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 15
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 12
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 12
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 12
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 11
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000000137 annealing Methods 0.000 claims description 10
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 10
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 10
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 10
- 229940069328 povidone Drugs 0.000 claims description 10
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 10
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 7
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 7
- 239000012931 lyophilized formulation Substances 0.000 claims description 7
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 claims description 7
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 5
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 claims description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 4
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 claims description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 27
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 24
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 12
- 239000012535 impurity Substances 0.000 abstract description 5
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 abstract description 3
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 abstract description 3
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 abstract description 3
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 abstract description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 abstract description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 56
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 38
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 38
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 30
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 19
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 18
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 18
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 18
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 12
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 9
- BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M sodium acetic acid acetate Chemical compound [Na+].CC(O)=O.CC([O-])=O BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 8
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 7
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 6
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 6
- XPFJYKARVSSRHE-UHFFFAOYSA-K trisodium;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O XPFJYKARVSSRHE-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- 201000006474 Brain Ischemia Diseases 0.000 description 5
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 5
- 206010048962 Brain oedema Diseases 0.000 description 4
- 206010008120 Cerebral ischaemia Diseases 0.000 description 4
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 4
- 208000006752 brain edema Diseases 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 4
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 4
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 4
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 4
- LEAHFJQFYSDGGP-UHFFFAOYSA-K trisodium;dihydrogen phosphate;hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].OP(O)([O-])=O.OP([O-])([O-])=O LEAHFJQFYSDGGP-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 3
- 229920003079 Povidone K 17 Polymers 0.000 description 3
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 229920003080 Povidone K 25 Polymers 0.000 description 2
- 229920003081 Povidone K 30 Polymers 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 108010055460 bivalirudin Proteins 0.000 description 2
- 229960001500 bivalirudin Drugs 0.000 description 2
- OIRCOABEOLEUMC-GEJPAHFPSA-N bivalirudin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 OIRCOABEOLEUMC-GEJPAHFPSA-N 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 229940100487 povidone k25 Drugs 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 2
- 238000012430 stability testing Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- JLEXUIVKURIPFI-UHFFFAOYSA-N tris phosphate Chemical compound OP(O)(O)=O.OCC(N)(CO)CO JLEXUIVKURIPFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QZNNVYOVQUKYSC-JEDNCBNOSA-N (2s)-2-amino-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 QZNNVYOVQUKYSC-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Chemical class 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 229920003078 Povidone K 12 Polymers 0.000 description 1
- 206010063837 Reperfusion injury Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 208000029028 brain injury Diseases 0.000 description 1
- 238000010523 cascade reaction Methods 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003960 inflammatory cascade Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 1
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 210000004088 microvessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- SPOMEWBVWWDQBC-UHFFFAOYSA-K tripotassium;dihydrogen phosphate;hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].OP(O)([O-])=O.OP([O-])([O-])=O SPOMEWBVWWDQBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WCTAGTRAWPDFQO-UHFFFAOYSA-K trisodium;hydrogen carbonate;carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].OC([O-])=O.[O-]C([O-])=O WCTAGTRAWPDFQO-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/20—Interleukins [IL]
- A61K38/2093—Leukaemia inhibitory factor [LIF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/55—Protease inhibitors
- A61K38/57—Protease inhibitors from animals; from humans
- A61K38/58—Protease inhibitors from animals; from humans from leeches, e.g. hirudin, eglin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明属于蛋白质和多肽药物技术领域，具体涉及一种重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白的冻干制剂及其制备方法，该冻干粉针包括重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白、赋形剂、冻干保护剂和缓冲体系。本发明通过对不同赋形剂、冻干保护剂、缓冲体系及冻干曲线的研究，提供一种外观良好、复溶性好、活性较高、杂质少、副作用低、安全性高、质量稳定的注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂，解决了蛋白质不稳定、容易聚集变性和活性降低等问题，该制剂使用方便，吸收快，便于储存和运输。
Description
技术领域
本发明属于蛋白质和多肽药物技术领域，具体涉及一种重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白的冻干制剂及其制备方法。
背景技术
脑血管疾病是目前人类疾病三大死亡原因之一，具有高致残率和病死率的特点，严重危害人类的健康，其中缺血性脑血管病(ischemia cerebral vasculardiseases，ICVD)临床较多见，约占全部脑血管病人的60％～70％，可分为全脑缺血和局灶性脑缺血两大类，其发病机制尚不完全清楚。研究表明脑水肿和过度的炎症反应是脑缺血及缺血后再灌注损伤的重要原因。脑缺血后，局部大量凝血酶激活后与细胞膜上的相应受体结合是引起脑水肿的主要原因之一；大量的中性粒细胞在局部微血管内聚集后浸润到脑实质，又可通过产生活性氧自由基、细胞因子、脂质代谢产物、蛋白水解酶等，引发炎症级联反应，炎症反应在急性脑缺血后，尤其是再灌注所引发的继发性脑损伤中起关键作用。因此，积极预防和治疗脑水肿与过度炎症反应，可有效的降低急性缺血性脑血管病的病死率，改善预后。重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白(human recombinant neutrophilinhibitoryfactor and hirulog hybrid，TNHH)是中性粒细胞抑制因子[neutrophilinhibitory factor，NIF，特征表述为NIF-Gly(5～10))]与水蛭肽(hirulog)经基因工程重组表达和纯化等技术形成的重组三功能嵌合蛋白。TNHH不仅能抑制白细胞的黏附、活化，而且还能抑制凝血酶的激活，拟用于治疗急性缺血性脑血管，它的作用机制一方面可能通过抑制白细胞黏附、迁移、激活和释放的功能，治疗急性缺血性脑血管病的炎性损伤；另一方面可能通过与凝血酶非活性区结合，抑制凝血酶引起的脑水肿。目前，重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白制剂鲜少报道，故制备注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白意义重大。
生物大分子分子量大且结构复杂，因此其制剂存在诸多不稳定性因素，例如外消旋化、水解、氧化、脱酰胺等化学不稳定性因素，变性、沉淀、聚集或吸附等物理不稳定性因素，和长途运输过程的剧烈震荡及环境条件变化等外界因素。若蛋白质药物以水溶液、液体制剂或混悬液形式存在，都可因上述化学、物理或外界不稳定性因素导致药物失活，故在一定程度上相比液体制剂来说，冻干制剂能显著提高蛋白药物的稳定性；但在冻干过程中，蛋白质也可发生聚集、变性及结构的破坏，因此选择优良的蛋白保护剂尤其重要，优良的蛋白保护剂不仅能够在冻干过程中对蛋白质药物起到很好的保护作用，而且能够对成品贮藏期内的蛋白质变性起到抑制作用。本发明通过加入蛋白保护剂提高重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白的稳定性并通过冻干工艺的优化得到一种稳定性高、可供临床使用、更适宜储存和运输的冻干制剂。
发明内容
本发明的目的在于提供一种外观良好、复溶性好、活性较高、杂质少、质量稳定的注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂，另一目的在于提供一种重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白的冻干制剂的制备方法。本发明的冻干制剂外观疏松、饱满、完整，相对液体制剂稳定性显著提高，易于生产、贮存和运输，此外，冻干制剂复溶性好，经复溶后蛋白理化性质、活性和杂质无显著变化。
本发明所述的注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂，包括重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白、赋形剂、冻干保护剂和缓冲体系。
优选地，所述重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白的冻干制剂是通过冻干液体制剂制备的，其中冻干前的液体制剂中所含抗体蛋白含量为1～10mg/mL。
更为优选地，所述重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白的冻干制剂，冻干前的液体制剂中所含抗体蛋白含量为3～8mg/mL。
优选地，所述赋型剂选自山梨醇、甘露醇、乳糖和聚维酮中的一种或几种。
进一步优选地，所述赋型剂为甘露醇和聚维酮。
更为优选地，所述赋型剂中的聚维酮型号为K12，K17，K25或K30。
优选地，所述冻干制剂中赋型剂的含量为14～220mg/mL。
进一步优选地，所述赋型剂为40～120mg/mL甘露醇和14～100mg/mL聚维酮。
更为优选地，所述赋型剂为60～100mg/mL甘露醇和14～50mg/mL聚维酮。
优选地，所述冻干保护剂选自蔗糖、海藻糖、甘氨酸或明胶中的一种。
进一步优选地，所述冻干保护剂为蔗糖或海藻糖。
优选地，所述冻干制剂中冻干保护剂的含量为5～60mg/mL。
进一步优选地，所述冻干保护剂的含量为30～50mg/mL。
更为优选地，所述冻干保护剂为30～50mg/mL蔗糖或海藻糖。
优选地，所述缓冲体系为柠檬酸盐缓冲液、组氨酸-盐酸组氨酸缓冲液、Tris缓冲液或醋酸盐缓冲液。
进一步优选地，所述缓冲体系为柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、组氨酸-盐酸组氨酸缓冲液、Tris-磷酸盐缓冲液或醋酸-醋酸钠缓冲液。
更为优选地，所述缓冲体系为柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液或醋酸-醋酸钠缓冲液。
优选地，所述冻干制剂中缓冲体系的含量为5～30mM。
更为优选地，所述冻干制剂中缓冲体系的含量为5～15mM。
优选地，所述冻干制剂冻干前的液体制剂的pH为4.5～6.0。
更为优选地，冻干制剂冻干前的液体制剂的pH为4.5～5.5。
优选地，所述冻干制剂，其冻干前的液体制剂包含：
(1)白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白1～10mg/mL；
(2)赋型剂14～220mg/mL；
(3)冻干保护剂5～60mg/mL；
(4)缓冲体系5～30mM；
(5)pH 4.5～6.0。
进一步优选地，所述冻干制剂，其冻干前的液体制剂包含：
(1)白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白3～8mg/mL；
(2)甘露醇40～120mg/mL；
(3)聚维酮14～100mg/mL；
(4)冻干保护剂30～50mg/mL；
(5)缓冲体系5～15mM；
(6)pH 4.5～5.5。
本发明所述的冻干制剂的制备方法为：将处方量的赋型剂、冻干保护剂和重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白原液加入缓冲体系中，搅拌溶解，用盐酸溶液或氢氧化钠溶液将pH调制4.5～6.0，即为冻干前的液体制剂，然后过0.22μm滤膜后灌装于西林瓶中，半压塞，放入冻干机中冷冻干燥，其冷冻干燥过程包括预冻、升华干燥和解析干燥步骤。
优选地，预冻温度为-40～-50℃，升华干燥温度为-15℃～-20℃，维持2～5h，升温至-5℃～-10℃，维持14～16h；解析干燥温度为25℃～30℃，维持2～6h。
进一步优选地，预冻过程还包括退火步骤，其退火温度为-10℃～-20℃，退火时间维持1～3h。
更为优选地，本发明所述的冻干制剂的制备方法为：将处方量的赋型剂、冻干保护剂和重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白原液加入缓冲体系中，搅拌溶解，用盐酸溶液或氢氧化钠溶液将pH调制4.5～6.0，即为冻干前的液体制剂，然后过0.22μm滤膜后灌装于西林瓶中，半压塞，放入冻干机中冷冻干燥，包括如下步骤：
a.预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-40℃～-50℃，维持1～3h；再以10℃/h升温至-10℃～-20℃，维持1～3h；再以10℃/h降温至-40℃～-50℃，维持维持1～3h；
b.升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.20±0.02mbar，将样品以10℃/h升温至-15℃～-20℃，维持2～5h；稍后以5℃/h升温至-5℃～-10℃，维持14～16h。
c.解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度升至25～30℃，持续干燥2～6h，再极限真空2h，在真空状态下压塞，出箱。
本发明与现有技术相比具有如下突出优点：
1、相比液体制剂，冻干制剂极大的减少了重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白在储存和运输过程中的降解和聚集，显著提高其稳定性，更适合长期储存或运输；
2、本发明的重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白原液属于生物大分子药物，稳定性较差，蛋白质容易发生聚集、变性及结构的破坏，从而导致蛋白质失活，使用本发明的处方所得产品稳定性高；
3、本发明冻干工艺中，在预冻中引入退火，并对退火温度和退火时间进行研究，使用本发明的冻干工艺所得产品，冻干周期缩短，外观性状较好，复溶时间较短，复溶前后蛋白外观形状及活性没有显著变化，适于注射给药；
4、采用本发明制备的注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂纯度较高、杂质少且水分含量低；稳定性高，放置2年，冻干制剂的外观性状、活性、杂质均变化较小；活性高，符合临床用药的要求。
具体实施方式
下面通过实施例来进一步说明本发明，但这些实施例并不构成对本发明的限制，所以，在本发明的方法前提下对本发明的简单改进均属本发明要保护的范围。
白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白原液的获得：参照Novagen公司《pET系统操作手册》(第10版)，按照常规分子克隆技术构建白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白质粒，转入pET3c BL-21(DE3)大肠杆菌表达菌株，获得白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白工程菌，发酵获得重组表达的白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白前体，在100L发酵体积下，OD600达到100，目的蛋白表达率可达到45％；所得发酵液经分离提纯后得白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白原液。
实施例1
(一)处方
(二)注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂的制备：
a.冻干前液体制剂的制备：
将处方量的甘露醇、聚维酮K12、蔗糖和重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白原液加入pH5.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中，搅拌溶解，使混合后各组分的浓度如上表所示，并用0.1mol/L的盐酸溶液或氢氧化钠将其pH调至5.0，将所得药液过0.22μm滤膜灌装于西林瓶中，半压塞，放入冻干机中冻干；
b.注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干粉针的冻干程序为：
(1)预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-40℃，并维持2h；再以10℃/h升温至-15℃，维持2h；再以10℃/h降温至-40℃，维持2h；
(2)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.20±0.02mbar，将样品以10℃/h升温至-15℃，维持4h；稍后以5℃/h升温至-5℃，维持15h；
(3)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度升至25℃，持续干燥4h，再极限真空2h，在真空状态下压塞，出箱。
实施例2
(一)处方
(二)注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂的制备：
a.冻干前液体制剂的制备：
将处方量的甘露醇、聚维酮K17、蔗糖和重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白原液加入pH4.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中，搅拌溶解，使得混合后各组分的浓度如上表所示，并用0.1mol/L的盐酸溶液或氢氧化钠将其pH调至4.5，将所得药液过0.22μm滤膜灌装于西林瓶中，半压塞，放入冻干机中冻干；
b.注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干粉针的冻干程序为：
(1)预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-45℃，并维持1h；再以10℃/h升温至-10℃，维持1h；再以10℃/h降温至-45℃，维持1h；
(2)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.20±0.02mbar，将样品以10℃/h升温至-20℃，维持2h；稍后以5℃/h升温至-10℃，维持14h；
(3)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度升至30℃，持续干燥2h，再极限真空2h，在真空状态下压塞，出箱。
实施例3
(一)处方
(二)注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂的制备：
a.冻干前液体制剂的制备：
将处方量的甘露醇、聚维酮K25、海藻糖和重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白原液加入pH5.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中，搅拌溶解，使混合后各组分的浓度如上表所示，并用0.1mol/L的盐酸溶液或氢氧化钠将其pH调至5.5，将所得药液过0.22μm滤膜灌装于西林瓶中，半压塞，放入冻干机中冻干；
b.注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干粉针的冻干程序为：
(1)预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-50℃，并维持3h；再以10℃/h升温至-20℃，维持3h；再以10℃/h降温至-50℃，维持3h；
(2)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.20±0.02mbar，将样品以10℃/h升温至-20℃，维持5h；稍后以5℃/h升温至-5℃，维持16h；
(3)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度升至30℃，持续干燥6h，再极限真空2h，在真空状态下压塞，出箱。
实施例4
(一)处方
(二)注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂的制备：
a.冻干前液体制剂的制备：
将处方量的甘露醇、聚维酮K25、蔗糖和重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白原液加入pH4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液中，搅拌溶解，使混合后各组分的浓度如上表所示，并用0.1mol/L的盐酸溶液或氢氧化钠将其pH调至4.5，将所得药液过0.22μm滤膜灌装于西林瓶中，半压塞，放入冻干机中冻干；
b.注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干粉针的冻干程序为：
(1)预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-45℃，并维持3h；再以10℃/h升温至-10℃，维持2h；再以10℃/h降温至-45℃，维持1h；
(2)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.20±0.02mbar，将样品以10℃/h升温至-20℃，维持3h；稍后以5℃/h升温至-10℃，维持16h；
(3)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度升至25℃，持续干燥3h，再极限真空2h，在真空状态下压塞，出箱。
实施例5
(一)处方
(二)注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂的制备：
a.冻干前液体制剂的制备：
将处方量的甘露醇、聚维酮K30、海藻糖和重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白原液加入pH6.0的组氨酸-盐酸组氨酸缓冲液中，搅拌溶解，使混合后各组分的浓度如上表所示，并用0.1mol/L的盐酸溶液或氢氧化钠将其pH调至6.0，将所得药液过0.22μm滤膜灌装于西林瓶中，半压塞，放入冻干机中冻干；
b.注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干粉针的冻干程序为：
(1)预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-50℃，并维持1h；再以10℃/h升温至-20℃，维持1h；再以10℃/h降温至-50℃，维持1h；
(2)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.20±0.02mbar，将样品以10℃/h升温至-20℃，维持5h；稍后以5℃/h升温至-10℃，维持14h；
(3)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度升至25℃，持续干燥6h，再极限真空2h，在真空状态下压塞，出箱。
实施例6
(一)处方
(二)注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂的制备：
a.冻干前液体制剂的制备：
将处方量的山梨醇、聚维酮K30、甘氨酸和重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白原液加入pH6.0的醋酸-醋酸钠缓冲液中，搅拌溶解，使混合后各组分的浓度如上表所示，并用0.1mol/L的盐酸溶液或氢氧化钠将其pH调至6.0，将所得药液过0.22μm滤膜灌装于西林瓶中，半压塞，放入冻干机中冻干；
b.注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干粉针的冻干程序为：
(1)预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-50℃，并维持3h；再以10℃/h升温至-18℃，维持1h；再以10℃/h降温至-50℃，维持2h；
(2)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.20±0.02mbar，将样品以10℃/h升温至-18℃，维持4h；稍后以5℃/h升温至-10℃，维持16h；
(3)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度升至28℃，持续干燥5h，再极限真空2h，在真空状态下压塞，出箱。
实施例7
(一)处方
(二)注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂的制备：
a.冻干前液体制剂的制备：
将处方量的甘露醇、乳糖、明胶和重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白原液加入pH5.0的Tris-磷酸盐缓冲液中，搅拌溶解，使混合后各组分的浓度如上表所示，并用0.1mol/L的盐酸溶液或氢氧化钠将其pH调至5.0，将所得药液过0.22μm滤膜灌装于西林瓶中，半压塞，放入冻干机中冻干；
b.注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干粉针的冻干程序为：
(1)预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-50℃，并维持3h；再以10℃/h升温至-12℃，维持2h；再以10℃/h降温至-50℃，维持3h；
(2)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.20±0.02mbar，将样品以10℃/h升温至-15℃，维持3h；稍后以5℃/h升温至-5℃，维持16h；
(3)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度升至25℃，持续干燥4h，再极限真空2h，在真空状态下压塞，出箱。
实施例8
(一)处方
(二)注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂的制备：
a.冻干前液体制剂的制备：
将处方量的甘露醇、蔗糖和重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白原液加入pH4.6的醋酸-醋酸钠缓冲液中，搅拌溶解，使混合后各组分的浓度如上表所示，并用0.1mol/L的盐酸溶液或氢氧化钠将其pH调至4.6，将所得药液过0.22μm滤膜灌装于西林瓶中，半压塞，放入冻干机中冻干；
b.注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干粉针的冻干程序为：
(1)预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-40℃，并维持2h；再以10℃/h升温至-15℃，维持2h；再以10℃/h降温至-40℃，维持2h；
(2)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.20±0.02mbar，将样品以10℃/h升温至-15℃，维持4h；稍后以5℃/h升温至-5℃，维持15h；
(3)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度升至25℃，持续干燥4h，再极限真空2h，在真空状态下压塞，出箱。
实施例9
(一)处方
(二)注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂的制备：
a.冻干前液体制剂的制备：
将处方量的聚维酮K17、蔗糖和重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白原液加入pH6.0的醋酸-醋酸钠缓冲液中，搅拌溶解，使混合后各组分的浓度如上表所示，并用0.1mol/L的盐酸溶液或氢氧化钠将其pH调至6.0，将所得药液过0.22μm滤膜灌装于西林瓶中，半压塞，放入冻干机中冻干；
b.注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干粉针的冻干程序为：
(1)预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-40℃，并维持2h；再以10℃/h升温至-15℃，维持2h；再以10℃/h降温至-40℃，维持2h；
(2)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.20±0.02mbar，将样品以10℃/h升温至-15℃，维持4h；稍后以5℃/h升温至-5℃，维持16h；
(3)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度升至25℃，持续干燥4h，再极限真空2h，在真空状态下压塞，出箱。
实施例10
(一)处方
(二)注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂的制备：
a.冻干前液体制剂的制备：
将处方量的甘露醇、聚维酮K17、蔗糖和重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白加入pH4.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中，搅拌溶解，使混合后各组分的浓度如上表所示，并用0.1mol/L的盐酸溶液或氢氧化钠将其pH调至4.5，将所得药液过0.22μm滤膜灌装于西林瓶中，半压塞，放入冻干机中冻干；
b.注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干粉针的冻干程序为：
(1)预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-45℃，并维持6h；
(2)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.20±0.02mbar，将样品以10℃/h升温至-20℃，维持3h；稍后以5℃/h升温至-10℃，维持15h；
(3)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度升至25℃，持续干燥4h，再极限真空2h，在真空状态下压塞，出箱。
实施例11
(一)处方
(二)注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂的制备：
a.冻干前液体制剂的制备：
将处方量的右旋糖酐、聚维酮C15、蔗糖和重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白原液加入pH3.8的醋酸-醋酸钠缓冲液中，搅拌溶解，使混合后各组分的浓度如上表所示，并用0.1mol/L的盐酸溶液或氢氧化钠将其pH调至3.8，将所得药液过0.22μm滤膜灌装于西林瓶中，半压塞，放入冻干机中冻干；
b.注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干粉针的冻干程序为：
(1)预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-35℃，并维持3h；再以10℃/h升温至-10℃，维持2h；再以10℃/h降温至-35℃，维持1h；
(2)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.20±0.02mbar，将样品以10℃/h升温至-20℃，维持2h；稍后以5℃/h升温至-10℃，维持15h。
(3)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度升至40℃，持续干燥4h，再极限真空2h，在真空状态下压塞，出箱。
实施例12
(一)处方
(二)注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂的制备：
a.冻干前液体制剂的制备：
将处方量的甘露醇、聚维酮C15、山梨糖和重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白原液加入pH6.8的磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液中，搅拌溶解，使混合后各组分的浓度如上表所示，并用0.1mol/L的盐酸溶液或氢氧化钠将其pH调至6.8，将所得药液过0.22μm滤膜灌装于西林瓶中，半压塞，放入冻干机中冻干；
b.注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干粉针的冻干程序为：
(1)预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-45℃，并维持6h；
(2)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.20±0.02mbar，将样品以10℃/h升温至-20℃，维持3h；稍后以5℃/h升温至-10℃，维持15h；
(3)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度升至25℃，持续干燥4h，再极限真空2h，在真空状态下压塞，出箱。
对比实施例1
(一)处方
(二)注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂的制备：
将处方量水蛭肽嵌合蛋白原液加入pH7.5的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液中，稀释，使TNHH蛋白浓度达3mg/mL后，加入处方量的甘露醇，搅拌溶解，使混合后各组分的浓度如上表所示，并用0.1mol/L的盐酸溶液或氢氧化钠将其pH调至7.5，将所得药液过0.22μm滤膜灌装于西林瓶中，半压塞，放入冻干机中冻干；
(1)预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-50℃，并维持15h；
(2)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.20±0.02mbar，将样品升温至-30℃，维持6h；稍后升温至-20℃，维持50h；
(3)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度升至25℃，持续干燥20h，在真空状态下压塞，出箱。
对比实施例2
(一)处方
白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白 3mg/mL
磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液 10mM
pH 7.5
(二)注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂的制备：
将处方量水蛭肽嵌合蛋白原液加入pH7.5的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液中，稀释，使TNHH蛋白浓度达3mg/mL后，并用0.1mol/L的盐酸溶液或氢氧化钠将其pH调至7.5，将所得药液过0.22μm滤膜灌装于西林瓶中，半压塞，放入冻干机中冻干；
(1)预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-50℃，并维持15h；
(2)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.20±0.02mbar，将样品升温至-30℃，维持6h；稍后升温至-20℃，维持50h；
(3)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度升至25℃，持续干燥20h，在真空状态下压塞，出箱。
对比实施例3
(一)处方
(二)注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂的制备：
将处方量水蛭肽嵌合蛋白原液加入pH7.5的乙酸钠-乙酸缓冲液中，稀释，使TNHH蛋白浓度达3mg/mL后，加入处方量的甘油，搅拌溶解，使混合后各组分的浓度如上表所示，并用0.1mol/L的盐酸溶液或氢氧化钠将其pH调至7.5，将所得药液过0.22μm滤膜灌装于西林瓶中，半压塞，放入冻干机中冻干；
(1)预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-50℃，并维持15h；
(2)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.20±0.02mbar，将样品升温至-30℃，维持6h；稍后升温至-20℃，维持50h；
(3)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度升至25℃，持续干燥20h，在真空状态下压塞，出箱。
对比实施例4
(一)处方
(二)注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂的制备：
将处方量水蛭肽嵌合蛋白原液加入pH7.0的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液中，稀释，使TNHH蛋白浓度达3mg/mL后，加入处方量的甘氨酸，搅拌溶解，使混合后各组分的浓度如上表所示，并用0.1mol/L的盐酸溶液或氢氧化钠将其pH调至7.5，将所得药液过0.22μm滤膜灌装于西林瓶中，半压塞，放入冻干机中冻干；
(1)预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-50℃，并维持15h；
(2)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.20±0.02mbar，将样品升温至-30℃，维持6h；稍后升温至-20℃，维持50h；
(3)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度升至25℃，持续干燥20h，在真空状态下压塞，出箱。
对比实施例5
(一)处方
(二)注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂的制备：
将处方量水蛭肽嵌合蛋白原液加入pH5.5的乙酸钠-乙酸缓冲液中，稀释，使TNHH蛋白浓度达3mg/mL后，加入处方量的蔗糖，搅拌溶解，使混合后各组分的浓度如上表所示，并用0.1mol/L的盐酸溶液或氢氧化钠将其pH调至5.5，将所得药液过0.22μm滤膜灌装于西林瓶中，半压塞，放入冻干机中冻干；
(1)预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-50℃，并维持15h；
(2)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.20±0.02mbar，将样品升温至-30℃，维持6h；稍后升温至-20℃，维持50h；
(3)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度升至25℃，持续干燥20h，在真空状态下压塞，出箱。
对比实施例6
(一)处方
(二)注射用白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂的制备：
将处方量水蛭肽嵌合蛋白原液加入pH8.5的碳酸氢钠-碳酸钠缓冲液中，稀释，使TNHH蛋白浓度达9mg/mL后，加入处方量的海藻糖，搅拌溶解，使混合后各组分的浓度如上表所示，并用0.1mol/L的盐酸溶液或氢氧化钠将其pH调至8.5，将所得药液过0.22μm滤膜灌装于西林瓶中，半压塞，放入冻干机中冻干；
(1)预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-50℃，并维持15h；
(2)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.20±0.02mbar，将样品升温至-30℃，维持6h；稍后升温至-20℃，维持50h；
(3)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度升至25℃，持续干燥20h，在真空状态下压塞，出箱。
箱。
验证实施例：
将上述实施例和对比实施例放置于2～8℃进行长期稳定性考察，分别于0个月、3个月、6个月、12个月、24个月末取样检测，结果如表1所示；25℃±2℃条件下进行加速试验，于第0个月、3个月、6个月、12个月末取样检测，结果如表2所示。
表1 2～8℃长期稳定性实验结果
/>
/>
/>
/>
/>
表2 25℃加速稳定性实验结果
/>
/>
/>
/>
由上表1和表2稳定性数据结果可知，实施例1～7的冻干制剂为白色疏松块状物，复溶后澄清透明，水分含量较小、活性较高，长期和加速稳定性考察条件下，SEC-HPLC和RP-HPLC检测的结果与0天的检测数据相比基本保持不变；实施例10、12和对比实施例1～6冻干周期较长，水分含量较大，活性下降，长期和加速稳定性考察条件下，SEC-HPLC和RP-HPLC检测的结果与0天的检测数据相比含量下降；实施例8～12冻干品性状较差，实施例8粉饼有裂纹，实施例9和11粉饼上有气孔，水分含量都增大，长期和加速稳定性考察条件下，活性明显下降，SEC-HPLC与RP-HPLC检测的结果下降较快；实施例10～12、对比实施例1～6，长期和加速稳定性考察条件下，活性明显下降，SEC-HPLC与RP-HPLC检测的结果增大较快。
实施例1～7所得样品在长期稳定性考察放置24个月和加速稳定性考察放置12个月后，与0天取样结果相比无明显变化，说明用本发明制备的样品质量稳定，适合临床用药的要求。
Claims (2)
1.一种注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂，包括重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白、赋型剂、冻干保护剂和缓冲体系，所述的赋型剂为甘露醇和聚维酮，所述的冻干保护剂选自蔗糖或海藻糖中的一种，所述的缓冲体系为柠檬酸盐缓冲液、组氨酸-盐酸组氨酸缓冲液或醋酸盐缓冲液，所述的冻干制剂是通过冻干液体制剂制备的，其中所述冻干前液体制剂包含：
(1)白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白1～10mg/mL；
(2)赋型剂74～180mg/mL；
(3)冻干保护剂5～60mg/mL；
(4)缓冲体系5～30mM；
(5)pH4.5～6.0；
所述冻干制剂的冻干过程包括预冻、升华干燥和解析干燥，其中预冻过程还包括退火步骤，所述退火步骤中退火温度为-10℃～-20℃，退火时间维持1～3h；
所述赋型剂为40～120mg/mL甘露醇和14～100mg/mL聚维酮。
2.一种如权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于，所述冻干制剂的制备方法为：将处方量的赋型剂、冻干保护剂和重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白原液加入缓冲体系中，搅拌溶解，用盐酸溶液或氢氧化钠溶液将pH调至4.5～6.0，即为冻干前的液体制剂，然后过0.22μm滤膜后灌装于西林瓶中，半压塞，放入冻干机中冷冻干燥。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010163271.4A CN113368063B (zh) | 2020-03-10 | 2020-03-10 | 一种注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010163271.4A CN113368063B (zh) | 2020-03-10 | 2020-03-10 | 一种注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113368063A CN113368063A (zh) | 2021-09-10 |
| CN113368063B true CN113368063B (zh) | 2024-03-19 |
Family
ID=77569048
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010163271.4A Active CN113368063B (zh) | 2020-03-10 | 2020-03-10 | 一种注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113368063B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114224853B (zh) * | 2022-01-04 | 2022-09-23 | 山东新时代药业有限公司 | 聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子注射用冻干制剂 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101245110A (zh) * | 2007-02-16 | 2008-08-20 | 鲁南制药集团股份有限公司 | 重组白细胞抑制因子和水蛭原嵌合蛋白及其药物组合物 |
-
2020
- 2020-03-10 CN CN202010163271.4A patent/CN113368063B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101245110A (zh) * | 2007-02-16 | 2008-08-20 | 鲁南制药集团股份有限公司 | 重组白细胞抑制因子和水蛭原嵌合蛋白及其药物组合物 |
| CN101611061B (zh) * | 2007-02-16 | 2011-04-13 | 鲁南制药集团股份有限公司 | 重组中性粒细胞抑制因子和水蛭原嵌合蛋白及其药物组合物 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 姚静等.药物冻干制剂技术的设计及应用.中国医药科技出版社,2007,第251-253页. * |
| 重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白质量标准研究;辛中帅等;中国新药杂志;第第17卷卷(第第21期期);第1865-1868页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113368063A (zh) | 2021-09-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2574011C2 (ru) | Лиофилизированный препарат ботулотоксина | |
| US7138114B2 (en) | Pharmaceutical compositions of fibrinolytic agent | |
| JP2950775B2 (ja) | 尿酸オキシダーゼ含有の安定した液体組成物およびその調製用凍結乾燥組成物 | |
| CN113368063B (zh) | 一种注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂及其制备方法 | |
| CN101578106A (zh) | Hgf制剂 | |
| CN101693016B (zh) | 通用的注射用重组人血清白蛋白融合蛋白制剂配方 | |
| EP0539408B1 (en) | Stable pharmaceutical compositions containing a fibroblast growth factor | |
| WO1993005799A1 (en) | Lyophilized stable pharmaceutical compositions containing a granulocyte macrophage colony stimulating factor | |
| US5714458A (en) | Stable pharmaceutical compositions containing a fibroblast growth factor | |
| EP2954894B1 (en) | Stable and lyophilized pharmaceutical agent containing nocathiacin | |
| CN102028661B (zh) | 聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子冻干粉针剂及其制备方法 | |
| CN107661298B (zh) | 一种注射用硫酸艾沙康唑鎓及其冻干工艺 | |
| CN113797171B (zh) | 聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子冻干制剂 | |
| CN108606955A (zh) | 培化西海马肽的药用组合物及其制备方法 | |
| CN112386575B (zh) | 一种代谢调节融合蛋白的冻干制剂 | |
| JP2023522966A (ja) | 修飾細菌性ヒアルロニダーゼポリペプチド、製造方法、医薬組成物およびそれらの使用 | |
| CN114246944A (zh) | 一种双特异性抗体的药物组合物及其用途 | |
| WO2023142284A1 (zh) | 一种载核酸脂质纳米颗粒冻干制剂及其制备方法与应用 | |
| CN111195349B (zh) | 一种代谢调节融合蛋白的冻干粉制剂 | |
| CN114224853B (zh) | 聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子注射用冻干制剂 | |
| CN113425835B (zh) | 一种生长激素原料药溶液、水针剂及其制备方法 | |
| EA026073B1 (ru) | Состав бычьего гранулоцитарного колониестимулирующего фактора и способ лечения с его использованием | |
| RU2326944C2 (ru) | Способ получения и препарат аналога рекомбинантного интерферона гамма человека | |
| CN116920114A (zh) | 稳定的干扰素融合蛋白制剂及其应用 | |
| CN104107172A (zh) | 西维来司钠注射用冻干粉的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |