CN114224853B - 聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子注射用冻干制剂 - Google Patents

聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子注射用冻干制剂 Download PDF

Info

Publication number
CN114224853B
CN114224853B CN202210002403.4A CN202210002403A CN114224853B CN 114224853 B CN114224853 B CN 114224853B CN 202210002403 A CN202210002403 A CN 202210002403A CN 114224853 B CN114224853 B CN 114224853B
Authority
CN
China
Prior art keywords
freeze
dried
stock solution
drying
injection
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202210002403.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114224853A (zh
Inventor
张贵民
李娜
马鲁南
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shandong New Time Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Shandong New Time Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shandong New Time Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Shandong New Time Pharmaceutical Co Ltd
Priority to CN202210002403.4A priority Critical patent/CN114224853B/zh
Publication of CN114224853A publication Critical patent/CN114224853A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114224853B publication Critical patent/CN114224853B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/193—Colony stimulating factors [CSF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/40—Cyclodextrins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid

Abstract

本发明提供了一种聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子注射用冻干制剂，使用水溶性β环糊精衍生物为冻干保护剂，冻干溶液分装后，通过冷冻干燥的方式得到蓬松干燥的产品，所制备的产品稳定性好，效价高，可以在室温下储存，产品中聚集的高分子蛋白含量低、PEG残留量低、处方中不含表面活性剂吐温20，用药安全性更高；此外，本发明的制备工艺简单，适合规模化生产。

Description

聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子注射用冻干制剂
技术领域
本发明属于蛋白质和多肽药物技术领域，具体涉及一种聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子注射用冻干制剂及其制备方法。
背景技术
嗜中性白细胞减少症及其感染性并发症是细胞毒性化疗和其它肿瘤治疗如放疗、生物治疗和骨髓移植中最为常见和严重的副作用之一。细胞毒性化疗通过找出并破坏快速生长的细胞来发挥作用，由于嗜中性粒细胞前体的高增殖率和血液嗜中性粒细胞的快速代谢回转而引发嗜中性白细胞减少症。化疗患者中，嗜中性白细胞减少症的最常见症状包括发热、口疮和耳感染。显著嗜中性白细胞减少症的患者常发生化脓性感染，例如败血症、皮肤蜂窝组织炎、肝脓肿、疔疮、肺炎、口腔炎、牙龈炎、围直肠炎、结肠炎、鼻窦炎和中耳炎。化疗可能被迫延迟直至身体能产生更多的嗜中性粒细胞，可能必须采用较低的剂量，导致治疗效果较低。
人粒细胞刺激因子(G-CSF)，是一种来源于单核细胞和纤维组织母细胞的长链多肽糖蛋白，可诱导造血干细胞的增值和分化，促进血液中的中性粒细胞数增加；另外还具有刺激成熟中性粒细胞从骨髓中释放出并激活中性粒细胞的功能。重组技术生产的人粒细胞刺激因子(rhG—CSF)是调节骨髓中粒系造血的主要细胞因子之一，选择性作用于粒系造血细胞，促进其增殖、分化，并可增加粒系中末分化细胞的功能。与天然产品相比，生物活性在体内、外基本一致，有助于预防中性粒细胞减少症的发生，减轻中性粒细胞减少的程度，缩短粒细胞缺乏症的持续时间，加速粒细胞数的恢复，从而减少合并感染发热的危险性。天然或重组的G-CSF由于分子量较小，极易被肾小球过滤，在人体内的循环半衰期很短，只有2-4小时，每个化疗周期需要每天注射1-2次，持续注射5-7天。聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子(PEG-rhG-CSF)是将重组人粒细胞刺激因子与聚乙二醇结合而成，由于其N端经20KD单甲氧基聚乙二醇(mPEG)化学修饰，使人粒细胞刺激因子蛋白被人体内蛋白酶接触和酶解的机会大为减少，与常规rhG-CSF相比，血浆清除率减慢，半衰期明显延长，达46-62h，因此临床使用能减少给药次数，避免患者反复接受注射的痛苦，具有长效、不良反应少等优点。
目前美国Amgen公司已有注射液上市，商品名Neulasta，其中含有聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子、山梨醇、吐温20、醋酸、醋酸钠，其中山梨醇用于调节渗透压、醋酸缓冲盐可以维持pH在4.0左右，吐温20可以防止主药聚集，使注射液稳定，然而吐温20有较强的溶血作用，会增加用药的风险。另外，目前上市的重组人粒细胞刺激因子冻干粉针剂(商品名格拉诺赛特)处方为每支含单十二酸聚氧乙烯山梨聚糖0.1mg、L-精氨酸10mg、L-苯丙氨酸10mg、L-蛋氨酸10mg、D-甘露醇25mg，pH值为6.0～7.5，但是重组人粒细胞刺激因子聚乙二醇化后分子结构发生改变，为了保护其在冻干过程中不变性失活，需要摸索新的冻干制剂处方和工艺，对此，中国发明专利CN102028661B公开了一种聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子冻干粉针，该技术方案主要通过在处方中添加冻干保护剂，真空冷冻干燥制备，所述冻干保护剂选自甘露醇、精氨酸、甘氨酸中的一种或多种，所得产品稳定性较好，但经长期或加速存储后效价和纯度降低较为明显，PEG残留量明显增加。
发明内容
长期的研究和临床实践表明聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子注射液和其他蛋白药物一样，存在稳定性差，储存期短等缺点，影响其治疗效果。在储存过程中容易发生聚集、PEG脱落等问题，严重影响其用药安全性和有效性，并且注射液配方中含有吐温20，吐温20有较强的溶血作用，长期使用会对人体产生潜在的危害，另外成品的储存条件比较苛刻，需要2-8℃保存。本发明使用水溶性β环糊精衍生物为赋形剂，冻干原液分装后，通过冷冻干燥的方式得到蓬松干燥的产品。此外，冻干原液可以灌装进双腔预充式注射器进行冻干，冻干完成后在注射器的另一端灌装缓冲液作为专用溶剂，使用时将专用溶剂注入冻干粉中，可以避免药物浪费，保证了注射药物量的准确性。本发明制备的注射用冻干制剂，配方中不含掉吐温20，提高了用药的安全性，所得成品可以储存在25℃条件下，节约了储存成本。
具体而言，本发明是通过如下技术方案实现的：
一种聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子注射用冻干制剂，包含聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子(PEG-rhG-CSF)和水溶性β环糊精衍生物，所述聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子与水溶性环糊精衍生物的重量比为1：5～25。
优选的，所述注射用冻干制剂中聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子与水溶性β环糊精衍生物的用量比为1：15～20。
优选的，所述注射用冻干制剂中水溶性β环糊精衍生物为羟丙基β环糊精、甲基β环糊精、葡萄糖-β-环糊精、磺丁基β环糊精中的一种或其组合；进一步优选为羟丙基β环糊精或磺丁基β环糊精。
优选的，所述注射用冻干制剂的冻干原液中聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的含量为3～20mg/mL；进一步优选的，所述注射用冻干制剂的冻干原液中聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的含量为6～14mg/mL；在一些实施例中，冻干原液中聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的含量为10mg/mL。
优选的，所述注射用冻干制剂的冻干原液中还包括缓冲剂。
优选的，所述注射用冻干制剂的pH为4.0～5.0。
一种聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子注射用冻干制剂的制备方法，包括如下步骤：将水溶性β环糊精衍生物、PEG-rhG-CSF原液加入缓冲液中，搅拌溶解，调节pH至4.0～5.0，用缓冲液定容，得冻干原液，将所得冻干原液液除菌过滤，分装，真空冷冻干燥即得。
优选的，所述缓冲液选自柠檬酸盐缓冲液或醋酸盐缓冲液中的一种。
优选的，所述缓冲液的浓度为10～15mmol/L。优选的，所述真空冷冻干燥曲线如下：
1)预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-40℃～-50℃，并维持180min；
2)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.15±0.02mbar，将样品的温度以10℃/h升至-20℃，维持2～4小时；稍后以5℃/h升至-10℃，维持10h～14h；
3)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度以5℃/h升至15～25℃，持续干燥4～6小时，再极限真空2小时，在真空状态下压塞，出箱。
优选的，所述过滤除菌后的冻干原液可以灌装于双腔预充式注射器中，冷冻干燥完成后，将配制好的缓冲液除菌过滤后，灌装于双腔预充式注射器的另一端，加塞，放置推杆，得制剂成品。
优选的，所述过滤除菌后的冻干原液也可以灌装于西林瓶中进行冻干，冻干结束后真空下压紧胶塞，外轧铝盖，得制剂成品。
本发明采用的技术方案具有如下优点：
(1)产品不使用表面活性剂吐温20，辅料种类少。
(2)产品稳定性好，所得制剂产品可以在室温下储存，长期和加速稳定性考察后，效价、纯度较高。
(3)产品中聚集的高分子蛋白含量较低、PEG残留量低、用药安全性高，药效更好。
(4)产品灌装在双腔预充式注射器中，使用时将专用溶剂注入冻干粉中，避免浪费，保证了注射药物量的准确性；制备工艺简单，适合规模化生产。
具体实施方式
下面通过实施例来进一步说明本发明，应该正确理解的是：本发明的实施例仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，所以，在本发明的方法前提下对本发明的简单改进均属本发明要求保护的范围。
本发明所用聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子可参照专利CN1663962A或其它现有技术制备，其它所用原料均市售可得。
实施例1
处方：
Figure BDA0003455323270000041
制备方法：
将处方量的磺丁基β环糊精、PEG-rhG-CSF原液加入浓度为15mmol/L的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液中，搅拌溶解，用盐酸溶液调节pH至4.0，用柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液定容，得冻干原液，将所得冻干原液除菌过滤后灌装于双腔预充式注射器中，放入冻干机冻干，冻干程序为：
1)预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-40℃，并维持180min；
2)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.15±0.02mbar，将样品的温度以10℃/h升至-20℃，维持2小时；稍后以5℃/h升至-10℃，维持10h；
3)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度以5℃/h升至15℃，持续干燥4小时，再极限真空2小时，在真空状态下压塞，出箱；
将配制好的柠檬酸盐专用溶剂除菌过滤后灌装于双腔预充式注射器的另一端，加塞，放置推杆，得制剂成品。
实施例2
处方：
Figure BDA0003455323270000042
制备方法：
将处方量的羟丙基β环糊精、PEG-rhG-CSF原液加入浓度为15mmol/L的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液中，搅拌溶解，用氢氧化钠溶液调节pH至5.0，用柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液定容，即得冻干原液，将所得冻干原液除菌过滤后灌装于西林瓶中，半加胶塞，放入冻干机冻干，冻干程序为：
1)预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-50℃，并维持180min；
2)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.15±0.02mbar，将样品的温度以10℃/h升至-20℃，维持4小时；稍后以5℃/h升至-10℃，维持14h；
3)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度以5℃/h升至25℃，持续干燥6小时，再极限真空2小时，在真空状态下压塞，出箱。
实施例3
处方：
Figure BDA0003455323270000051
制备方法：
将处方量的羟丙基β环糊精、PEG-rhG-CSF原液加入浓度为15mmol/L的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液中，搅拌溶解，用氢氧化钠溶液调节pH至4.5，用柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液定容，即得冻干原液，将所得冻干原液除菌过滤后灌装于双腔预充式注射器中，放入冻干机冻干，冻干程序为：
1)预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-45℃，并维持180min；
2)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.15±0.02mbar，将样品的温度以10℃/h升至-20℃，维持3小时；稍后以5℃/h升至-10℃，维持12h；
3)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度以5℃/h升至20℃，持续干燥4小时，再极限真空2小时，在真空状态下压塞，出箱；
将配制好的柠檬酸盐专用溶剂除菌过滤后灌装于双腔预充式注射器的另一端，加塞，放置推杆，得制剂成品。
实施例4
处方：
Figure BDA0003455323270000052
Figure BDA0003455323270000061
制备方法：
将处方量的磺丁基β环糊精、PEG-rhG-CSF原液加入浓度为10mmol/L的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液中，搅拌溶解，用盐酸溶液调节pH至4.0，用柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液定容，即得冻干原液，将所得冻干原液除菌过滤后灌装于双腔预充式注射器中，放入冻干机冻干，冻干完成后，将配制好的柠檬酸盐缓冲液除菌过滤后灌装于双腔预充式注射器的另一端，加塞，放置推杆，得制剂成品，冻干程序与实施例3相同。
实施例5
处方：
Figure BDA0003455323270000062
制备方法：
将处方量的磺丁基β环糊精、PEG-rhG-CSF原液加入浓度为15mmol/L的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液中，搅拌溶解，用盐酸溶液调节pH至4.5，用柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液定容，即得冻干原液，将所得冻干原液除菌过滤后灌装于双腔预充式注射器中，放入冻干机冻干，冻干完成后，将配制好的柠檬酸盐缓冲液除菌过滤后灌装于双腔预充式注射器的另一端，加塞，放置推杆，得制剂成品，冻干程序与实施例3相同。
实施例6
处方：
Figure BDA0003455323270000063
制备方法：
将处方量的葡糖基β环糊精、PEG-rhG-CSF原液加入浓度为15mmol/L的醋酸/醋酸钠缓冲液中，搅拌溶解，用盐酸溶液调节pH至4.0，用醋酸/醋酸钠缓冲液定容，即得冻干原液，将所得冻干原液除菌过滤后灌装于双腔预充式注射器中，放入冻干机冻干，冻干程序为：
1)预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-40℃，并维持5h；
2)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.15±0.02mbar，将样品的温度以10℃/h升至-20℃，维持3小时；稍后以5℃/h升至-15℃，维持12h；
3)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度以5℃/h升至20℃，持续干燥8小时，再极限真空2小时，在真空状态下压塞，出箱；
将配制好的醋酸盐缓冲液除菌过滤后灌装于双腔预充式注射器的另一端，加塞，放置推杆，得制剂成品。
实施例7
处方：
Figure BDA0003455323270000071
制备方法：
将处方量的甲基β环糊精、PEG-rhG-CSF原液加入浓度为15mmol/L的磷酸盐缓冲液中，搅拌溶解，用氢氧化钠溶液调节pH至6.0，用磷酸盐缓冲液定容，即得冻干原液，将所得冻干原液除菌过滤后灌装于双腔预充式注射器中，放入冻干机冻干，冻干完成后，将配制好的磷酸盐缓冲液除菌过滤后灌装于双腔预充式注射器的另一端，加塞，放置推杆，得制剂成品，冻干程序与实施例3相同。
对比实施例1
处方：
Figure BDA0003455323270000072
制备方法：
将处方量的羟丙基β环糊精、PEG-rhG-CSF原液加入浓度为15mmol/L的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液中，搅拌溶解，用盐酸溶液调节pH至4.0，用柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液定容，即得冻干原液，将所得冻干原液除菌过滤后灌装于双腔预充式注射器中，放入冻干机冻干，冻干完成后，将配制好的柠檬酸盐缓冲液除菌过滤后灌装于双腔预充式注射器的另一端，加塞，放置推杆，得制剂成品，冻干程序与实施例3相同。
对比实施例2
处方：
Figure BDA0003455323270000081
制备方法：
将处方量的羟丙基β环糊精、PEG-rhG-CSF原液加入浓度为15mmol/L柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液中，搅拌溶解，用盐酸溶液调节pH至4.0，用柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液定容，即得冻干原液，将所得冻干原液除菌过滤后灌装于双腔预充式注射器中，放入冻干机冻干，冻干完成后，将配制好的柠檬酸盐缓冲液除菌过滤后灌装于双腔预充式注射器的另一端，加塞，放置推杆，得制剂成品，冻干程序与实施例3相同。
对比实施例3
1)稀释液配制：所用器皿均经过无热源处理，全过程无菌操作，称取15g甘露醇、20g甘氨酸、0.492g冰醋酸、0.148g醋酸钠，用注射用水准确定容至1000mL，调节稀释液的pH到4.0，0.22μm滤膜除菌过滤，用鲎试剂法测定稀释液内毒素含量应少于0.25EU/mL；
2)半成品制备：取符合质量标准的聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子原液，用0.22μm滤膜除菌过滤，测定蛋白浓度，用新鲜制备的稀释液稀释至聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子浓度为1.0mg/mL，得到半成品；
3)灌装冻干：将半成品灌装入经清洗灭菌的西林瓶中，半加胶塞，放入冻干机冻干，冻干曲线如表1所示，其中真空冷冻干燥过程中预冻阶段降温速率为2.0℃/min；
4)轧盖、目检、包装：冻干结束后，真空下压紧胶塞，破坏冻干机内真空，取出样品，外轧铝盖，目检剔除破瓶、轧盖不良等不合格品，合格品贴标签包装得成品。
表1冻干曲线：
Figure BDA0003455323270000082
Figure BDA0003455323270000091
对比实施例4
制备溶液剂并无菌过滤，其中所含各种组分的含量如表2所示，然后精密取1mL无菌包装与小瓶中冻干。冻干后，严密盖上瓶盖装制备PEG-rhG-CSF冻干制剂。
表2处方：
PEG-rhG-CSF 苯丙氨酸 精氨酸 甲硫氨酸 甘露醇 吐温20 缓冲液pH
100μg 10mg 10mg 1mg 25mg 0.1mg 磷酸盐，pH6.5
验证实施例
将试验样品置于相同条件下(25℃RH60％、40℃RH75％、60℃RH90％)进行稳定性考察，主要考察了溶解后的外观性状、比活性、SEC-HPLC、高分子含量、反相纯度(RP-HPLC)及PEG残留。
1.比活性
照人粒细胞刺激因子生物学活性测定法(NFS-60细胞/MTT比色法)(中国药典2020年版四部通则3525)测定。
2.SEC-HPLC及高分子蛋白含量
参考《Pegfilgrastim Summary Validation ReportSep 17,2012，用HPLC法建立该方法，以TSKgel G3000SWXL(7.8mm,30cm,5μm)为色谱柱；流动相：溶液A-15％乙醇溶液(称取磷酸二氢钾0.272g、磷酸氢二钠0.532g、氯化钠6.43g，加适量水溶解，用磷酸调pH值至7.5，再加水稀释至1L，0.45μm滤膜过滤即得溶液A，取出850ml溶液A，加入150ml色谱乙醇混匀即得流动相)；流速为每分钟1.0ml；柱温：25℃；冷却型自动进样器温度：6℃，波长：214nm洗脱方式：等梯度洗脱45min；进样量：100μl，按面积归一化法计算，PEG-rhG-CSF主峰面积应不低于总面积的95.0％，高分子蛋白质总量应不高于2.0％。
3.反相纯度(RP-HPLC)
色谱柱采用丁烷基硅烷键合硅胶为填充剂(phenomenex Jupiter C4 5μm,250mm×4.6mm，或分离效能相当的色谱柱)；以A相(三氟乙酸-水溶液：量取1.0ml三氟乙酸加水至1000ml，充分混匀)、B相(三氟乙酸-乙腈溶液：量取1.0ml三氟乙酸加色谱纯乙腈至1000ml，充分混匀)为流动相，在室温条件下，梯度洗脱40分钟(A相从60％～0％，B相从40％～100％)，流速为每分钟1.5ml，供试品用水稀释成每1ml中含0.5mg的溶液，进样量20μl，在波长214nm处检测。以PEG-rhG-CSF色谱峰计算的理论板数应不低于5000。按面积归一化法计算，PEG-rhG-CSF主峰面积应不低于总面积的95.0％。
4.PEG残留
用HPLC法建立该方法，以丁烷基硅烷键合硅胶为填充剂(phenomenex Jupiter C45μm，250mm×4.6mm，或分离效能相当的色谱柱)；以A相(0.1％三氟乙酸-水溶液：量取1.0ml三氟乙酸加水至1000ml，充分混匀)、B相(0.1％三氟乙酸-80％乙腈溶液：量取1.0ml三氟乙酸、800ml色谱纯乙腈、加水至1000ml充分混匀)为流动相，流速为每分钟1.0ml，柱温：室温，冷却型自动进样器温度：6℃，检测器ELSD参数：(温度：113.0℃，impactor：off，载气流速为每分钟3.1L)，进样量：100μl，按下表3进行梯度洗脱：
表3：
时间(min) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 80 20
20 20 80
35 20 80
40 80 20
50 80 20
长期稳定性以及加速稳定性的考察结果见表4、表5、表6。
表4长期稳定性实验结果(25℃RH60％)
Figure BDA0003455323270000101
Figure BDA0003455323270000111
Figure BDA0003455323270000121
表5加速稳定性实验结果(40℃RH70％)
Figure BDA0003455323270000122
Figure BDA0003455323270000131
表6加速稳定性实验结果(60℃RH90％)
Figure BDA0003455323270000132
Figure BDA0003455323270000141
由稳定性实验结果可以看出，本发明所制备的聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子注射用冻干制剂经长期储存24个月(25℃60RH％)、加速存储3个月(40℃RH75％)、加速存储2周(60℃RH90％)后的效价、纯度显著高于现有技术，且高分子蛋白含量、脱落的PEG含量明显低于现有技术，稳定性好，安全性高。

Claims (2)

1.一种聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子注射用冻干制剂，其特征在于，包含聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子和水溶性β环糊精衍生物，所述水溶性β环糊精衍生物选自磺丁基β环糊精；所述聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子注射用冻干制剂由以下成分组成：
Figure 457455DEST_PATH_IMAGE001
其中，注射用冻干制剂的pH值为4.5；
所述注射用冻干制剂采用如下方法制备：将处方量的磺丁基β环糊精、PEG-rhG-CSF原液加入浓度为15mmol/L的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液中，搅拌溶解，用盐酸溶液调节pH至4.5，用柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液定容，即得冻干原液，将所得冻干原液除菌过滤后灌装于双腔预充式注射器中，放入冻干机冻干；
其中，所述冻干程序为：1)预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-45℃，并维持180min；2)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.15±0.02mbar，将样品的温度以10℃/h升至-20℃，维持3小时；稍后以5℃/h升至-10℃，维持12h；3)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0 .10±0 .02mbar，将样品的温度以5℃/h升至20℃，持续干燥4小时，再极限真空2小时，在真空状态下压塞，出箱。
2.一种权利要求1所述的注射用冻干制剂，其特征在于，将含有聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子和水溶性β环糊精衍生物的冻干原液，除菌过滤后灌装于双腔预充式注射器中，冷冻干燥完成后，将配制好的缓冲液除菌过滤后，灌装于双腔预充式注射器的另一端，加塞，放置推杆，得制剂成品。
CN202210002403.4A 2022-01-04 2022-01-04 聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子注射用冻干制剂 Active CN114224853B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210002403.4A CN114224853B (zh) 2022-01-04 2022-01-04 聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子注射用冻干制剂

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210002403.4A CN114224853B (zh) 2022-01-04 2022-01-04 聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子注射用冻干制剂

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114224853A CN114224853A (zh) 2022-03-25
CN114224853B true CN114224853B (zh) 2022-09-23

Family

ID=80745722

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210002403.4A Active CN114224853B (zh) 2022-01-04 2022-01-04 聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子注射用冻干制剂

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114224853B (zh)

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1627958A (zh) * 2002-02-06 2005-06-15 默克专利股份有限公司 包含免疫细胞因子的冻干制剂
CN104689333A (zh) * 2007-08-27 2015-06-10 拉蒂奥法姆有限责任公司 G-csf缀合物的液体制剂
CN105273076A (zh) * 2014-06-18 2016-01-27 江苏奥赛康药业股份有限公司 一种聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的制备方法及其药物组合物
CN106986928A (zh) * 2016-04-15 2017-07-28 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的纯化方法
CN107129531A (zh) * 2016-04-15 2017-09-05 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的纯化方法
CN107188952A (zh) * 2016-05-17 2017-09-22 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法
CN108368162A (zh) * 2016-04-15 2018-08-03 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种重组人粒细胞刺激因子的复性及纯化方法
CN112394115A (zh) * 2019-08-19 2021-02-23 鲁南制药集团股份有限公司 一种聚乙二醇化重组粒细胞刺激因子peg俢饰度的检测方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102028661B (zh) * 2010-12-31 2012-05-23 山东新时代药业有限公司 聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子冻干粉针剂及其制备方法
CN102670522B (zh) * 2011-03-16 2015-11-25 江苏泰康生物医药有限公司 含有重组人血清白蛋白-人粒细胞集落刺激因子融合蛋白的药物制剂及其制备
CN104906053B (zh) * 2015-06-12 2018-01-16 北京四环生物制药有限公司 注射用重组人粒细胞刺激因子冻干粉针剂
CN113368063B (zh) * 2020-03-10 2024-03-19 鲁南制药集团股份有限公司 一种注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂及其制备方法
CN112121009B (zh) * 2020-09-24 2022-12-02 科兴生物制药股份有限公司 一种聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂
CN113797171B (zh) * 2021-04-28 2022-06-14 山东新时代药业有限公司 聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子冻干制剂

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1627958A (zh) * 2002-02-06 2005-06-15 默克专利股份有限公司 包含免疫细胞因子的冻干制剂
CN104689333A (zh) * 2007-08-27 2015-06-10 拉蒂奥法姆有限责任公司 G-csf缀合物的液体制剂
CN105273076A (zh) * 2014-06-18 2016-01-27 江苏奥赛康药业股份有限公司 一种聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的制备方法及其药物组合物
CN106986928A (zh) * 2016-04-15 2017-07-28 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的纯化方法
CN107129531A (zh) * 2016-04-15 2017-09-05 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的纯化方法
CN108368162A (zh) * 2016-04-15 2018-08-03 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种重组人粒细胞刺激因子的复性及纯化方法
CN107188952A (zh) * 2016-05-17 2017-09-22 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法
CN112394115A (zh) * 2019-08-19 2021-02-23 鲁南制药集团股份有限公司 一种聚乙二醇化重组粒细胞刺激因子peg俢饰度的检测方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN114224853A (zh) 2022-03-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4496537A (en) Biologically stable alpha-interferon formulations
US20210023011A1 (en) Method and system for producing high purity vancomycin hydrochloride
EA013324B1 (ru) Фармацевтические композиции бендамустина, предназначенные для лиофилизации
JP2008509919A (ja) 安定するｐｅｇ化インターフェロン処方物
EP3218061B1 (en) Carmustine pharmaceutical composition
US20210353719A1 (en) Microparticle Formulations for Delivery to the Lower and Central Respiratory Tract and Methods of Manufacture
CN101578106A (zh) Hgf制剂
ES2905874T3 (es) Formulaciones de óxido de polialquileno-asparaginasa y métodos para elaborar y usar las mismas
EP0391444A2 (en) Interleukin-1 Formulation
CN108379561A (zh) 一种聚乙二醇化尿酸氧化酶冻干粉剂及其制备方法
JP3714951B2 (ja) Ｉｌ−６含有薬剤組成物
CN114224853B (zh) 聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子注射用冻干制剂
CN107028897B (zh) 免疫调节剂胸腺五肽粉针剂药物组合物和质控方法
EP3423042B1 (en) A lyophilised pharmaceutical formulation and its use
EP3040067A1 (en) Chlorogenic acid powder-injection and preparation method thereof
CN113797171B (zh) 聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子冻干制剂
CN102028661B (zh) 聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子冻干粉针剂及其制备方法
CN117651548A (zh) 冻干制剂溶液及冻干制剂、方法和用途
CN113368063B (zh) 一种注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白冻干制剂及其制备方法
EP3054924B1 (en) Stable pharmaceutical formulations of caspofungin
EP3679925A1 (en) Pharmaceutical composition of docetaxel conjugate and preparation method
RU2404797C1 (ru) КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ЧЕЛОВЕЧЕСКИЙ РЕКОМБИНАНТНЫЙ ИНТЕРФЕРОН АЛЬФА-2b, И ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ПРОЛОНГИРОВАННОГО ДЕЙСТВИЯ ДЛЯ ВЕТЕРИНАРИИ НА ЕЕ ОСНОВЕ, ОБЛАДАЮЩЕЕ ПРОТИВОВИРУСНЫМ И ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИМ ДЕЙСТВИЕМ
WO2022116134A1 (zh) 磷苯妥英钠固体组合物、冻干方法、及其用途
CN103877010A (zh) 一种罗米地辛溶液的制备方法
Jonkman-de Vries et al. Pharmaceutical development of a parenteral lyophilized formulation of the investigational antitumor neuropeptide antagonist [Arg6, D-Trp7, 9, MePhe8]-Substance P {6-11}

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant