CN1234410C - 注射用脑蛋白水解物冻干粉针剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明是一种注射用脑蛋白水解物冻干粉针剂及其制备方法。其特征在于是以脑蛋白水解物为主要成份的白色或类白色冻干块状物或粉末，有效成分为小分子脑多肽和游离氨基酸的混合物。本发明的冻干剂型主要用于生物制剂、疫苗和一些不稳定的产品制剂，对产品的稳定性有显著的提高作用。克服了脑蛋白水解物注射液不能冻存的局限性，确保产品的稳定性。由于创新的工艺设计使脑蛋白水解物产品改变剂型后不改变药物性能，在药理作用、适应症、禁忌症、用法用量、不良反应等均同于脑蛋白水解物注射液。

Description

注射用脑蛋白水解物冻干粉针剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及药品技术领域，具体地说是注射用脑蛋白水解物冻干粉针剂及其制备方法。

背景技术

脑蛋白水解物是由健康猪脑组织经现代生物酶降解技术制备的低分子肽类神经营养药。低分子肽具有生物活性，能调节人体脑代谢、神经传递及神经生长，能提高葡萄糖分解酶活性，增加脑对葡萄糖的无氧能量代谢，降低脑内乳酸的浓度，在缺血缺氧时对神经细胞的线粒体有保护作用。临床主要用于颅脑外伤、脑血管病后遗症、老年性痴呆症等。

现有的脑蛋白水解物药物是小容量注射剂，在实际应用中，脑蛋白水解物注射液在产品的储存、运输及销售各个环节要求环境保存温度在0-20℃范围内，不能冻结。由于以上原因，脑蛋白水解物注射液小水针剂型在运输和销售时要解决保温的问题，使环境和保存温度在0-20℃范围内：而实际操作中不能保证每个环节都能解决这一问题。如该剂型在我国的北方、东北和西北绝大部分地区的冬季(3-4个月)就有可能影响药液质量。小容量注射剂剂型包装使用安瓿灌装后熔封，安瓿因玻璃材质易碎导致废品率升高。脑蛋白水解物的水溶液在保存和使用过程中对光敏感，可使药液颜色变深，可使药液的内在质量发生变化。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术存在的不足，提供一种产品质量稳定可控的注射用脑蛋白水解物冻干粉针剂及其制备方法。

本发明的技术方案为：注射用脑蛋白水解物冻干粉针剂的原材料及粗提工艺均同于脑蛋白水解物注射液，为了达到本发明的目的，在生产冻干粉针剂的工艺方面进行了创新性的改进。

本发明的注射用脑蛋白水解物冻干粉针剂是以脑蛋白水解物为主要成份的白色或类白色冻干块状物或粉末。有效成分为小分子脑多肽和游离氨基酸的混合物。是一种不含蛋白质的脑组织水解物，脑多肽分子量小于10000的占15％，游离氨基酸占85％，包括各种必需和非必需氨基酸以及其它特殊氨基酸，其氨基酸彼此恒定的天然比例与脑组织相似。

上述注射用脑蛋白水解物冻干粉针剂的制备方法按以下步骤进行：

一、粗提：按现有的脑蛋白水解物注射液的方法提取粗提物(粗品)。

二、精提：

1、过滤：用超滤器过滤，收集滤过清液；

2、超滤：用超滤器超滤，收集滤过液，定容；超滤压力为：循环进口设为1.0～1.2Kg，出口为0.6～0.8Kg，待超滤原桶内清液只剩1000～2000ml时加5000～10000ml注射用水洗二次，继续超滤，待超滤原桶内液体只剩1000ml时停机；

3、高压灭菌：用玻璃血清瓶，将上述超滤浓缩液(脑蛋白水解物)分装于玻璃血清瓶中，用棉塞封扎瓶口，115～121℃蒸汽高压灭菌30～50分钟；冷却至室温，放置2～8℃冷藏柜中保存备用：

三、调配

1、用HPLC肽图测定法测定脑蛋白水解物(中间体或精品)的肽图，与标准对照品比较峰型，按峰面积计算中间体的稀释倍数，计算方法为：

精品峰面积_1.2/标准品峰面积_1.2＝稀释倍数

脑蛋白水解物×稀释倍数＝药液总量

2、配液：

①浓配：在浓配罐中加入精品原液(中间体)，按药液总量(体积比)加入20～25％的AA(氨基酸)溶液、0.1～20％的右旋糖苷40至浓配罐中，磁力搅拌混匀，经超滤、0.22u滤膜过滤后直接输入稀配罐中；

②稀配：在稀配罐中加入注射用水至药液总量(体积比)的35～38％时，调pH至7～74、测定肽图，定氮、16种AA、内毒素测定等检定合格后，补加注射用水至配液总量。

3、灌装：用西林瓶洗烘灌联动机组灌装；每瓶灌装2.0-5.0ml药液：

4、冷冻干燥：冻干条件为-30～-60℃、冻干18～48小时；冻干完毕，迅速压盖并出箱，扎铝塑盖，放入中存库中(半成品)待检；

5、半成品检定(按企业内控标准全检)：

①肽图HPLC测定应符合企业内控标准(附图1：HPLC标准肽图)：

②肽图峰型与标准品基本一致，杂峰面积＜5％；

③16种AAHPLC测定应符合企业内控标准(附图2：HPLC标准16种AA图)；

④总氮含量测定；

⑤内毒素含量测定：＜1.0EU/ml；

⑥pH测定：7.2±0.2；

⑦微生物检查：应无菌生长：

⑧水分不得过5％。

四、包装

1、贴签；

2、装盒及装箱；

3、入库。

本发明的注射用脑蛋白水解物冻干剂型与脑蛋白水解物注射液比较具有以下优点：

1、本发明的冻干剂型主要用于生物制剂、疫苗和一些不稳定的产品制剂，对产品的稳定性有显著的提高作用。

2、本发明的冻干剂型克服了脑蛋白水解物注射液不能冻存的局限性，确保产品的稳定性。

3、由于创新的工艺设计使脑蛋白水解物产品改变剂型后不改变药物性能，在药理作用、适应症、禁忌症、用法用量、不良反应等均同于脑蛋白水解物注射液。

本发明的药理毒理：

本发明的药品为大脑所特有的肽能神经营养药物，能以多种方式作用于中枢神经，调节和改善神经元的代谢，促进突触的形成，诱导神经元的分化，并进一步保护神经细胞免受各种缺血和神经毒素的损害。本品可通过血脑屏障，促进脑内蛋白质的合成，影响呼吸链，具有抗缺氧的保护能力，改善脑内能量代谢。激活腺苷酸环化酶和催化其它激素系统，提供神经递质、肽类激素及辅酶前体。

药代动力学：本品可透过血脑屏障进入神经细胞，氨基酸在脑内迅速代谢，半衰期(T1/2)由数秒至数小时。

适应症：用于颅脑外伤、脑血管病后遗症伴有记忆减退及注意力集中障碍的症状改善。

用法用量：每一疗程连续注射10～15天。用注射用水或生理盐水3～5ml溶解。肌内注射：每天一次，每次30mg；静脉滴注：一般使用60～180mg，加入250ml生理盐水中缓慢滴注，每天一次，约60～120分钟滴完，或遵医嘱。

具体实施方式

实施例1：

本发明的药品按以下工艺步骤制得：

一、粗提：按现有的脑蛋白水解物注射液的方法提取粗提物(粗品)

1、用健康动物脑组织—新鲜(冻存)牛脑或猪脑，目检无变质、组织有弹性，将冻存的脑组织用自来水先行化冻10小时±2小时，用自来水洗一次，去包膜、血管等，再用超纯水洗二次，沥水称重；

2、匀浆：按1∶1.5的比例，即1kg牛脑加1.5kg水用胶体磨匀浆二次；

3、加热：在发酵罐中隔水蒸汽加热，边搅拌边加热，当温度达85±2℃时保持15分钟，每隔5分钟用温度计测温度一次，并作记录。

3、调酸：边搅拌边降温，夹层中自来水循环降温，当温度降至45℃时调酸，边搅拌边加酸，按1∶40(W/V)比例加6mol/L HCl调pH至1.5±0.1。

4、胃蛋白酶酶解：按猪脑重量的3％的比例称量胃蛋白酶，每公斤胃蛋白酶加2000ml纯化水溶解，边搅拌边加酶，加完胃蛋白酶后，再调pH至1.5-1.7，42℃保温，酶解3小时，前1小时，每隔20分钟调pH一次，测温度一次，以后每隔30分钟测温度一次。

5、离心收集上清：用低速大容量离心机，离心条件：3200rpm、10℃、离心10分钟，用不锈钢桶收集上清液，并定容。

6、调碱：按猪脑重量的2％的比例称量胰蛋白酶，每公斤胰蛋白酶加1000ml纯化水溶解，再加入4g/L CaCl₂；用12mol/L NaOH调pH至7.5～7.8，夹层蒸汽加热至45℃，边搅拌边加热；

7、胰酶酶解：边搅拌边加胰酶，边搅拌边测温，调整温度为42℃，调pH至7.5～7.8，并保持2小时；每隔半小时测温度、调pH一次。

8、加热煮沸：酶解完毕，直接在发酵罐中边搅拌边加热，煮沸后开始计时，保持15分钟：夹层中用自来水循环冷却至30℃左右时开始离心。

9、离心收集上清：用低速大容量离心机，离心条件：3200rpm、10℃、离心10分钟，用不锈钢桶收集上清液，并定容。

二、精提：

1、过滤：用超滤器过滤，收集滤过清液；

2、超滤：10K膜超滤收集透过液＜20℃，用超滤器超滤，收集滤过液，定容；超滤压力为：循环进口设为1.0～1.2Kg，出口为0.6～0.8Kg，待超滤原桶内清液只剩1000ml时加5000ml注射用水洗二次，继续超滤，待超滤原桶内液体只剩1000ml时停机；

3、高压灭菌：用5个1万ml玻璃血清瓶，将上述超滤浓缩液(脑蛋白水解物)分装于玻璃血清瓶中，用棉塞封扎瓶口，115～121℃蒸汽高压灭菌30～50分钟：冷却至室温，放置2～8℃冷藏柜中保存备用；

三、调配

1、用HPLC肽图测定法测定脑蛋白水解物(中间体或精品)的肽图，与标准对照品比较峰型，按峰面积计算中间体的稀释倍数，计算方法为：

精品峰面积_1.2/标准品峰面积_1.2＝稀释倍数

如按峰面积计算出中间体的稀释倍数为11倍，则药液总量为：

脑蛋白水解物×稀释倍数＝药液总量

2、配液：

①浓配：按生产脑蛋白水解物冻干粉针剂1万支计算，药液总量为20000ml(2ml/支)，所需中间体的量为20000÷11＝1818.2ml，在浓配罐中加入中间体，按药液总量(体积比)加入20％的AA(氨基酸)溶液、0.1％的右旋糖苷40至浓配罐中，磁力搅拌混匀，经超滤、0.22u滤膜过滤后直接输入稀配罐中：

②稀配：在稀配罐中加入注射用水至配液总量(体积比)的35％时，调pH至7、测定肽图，定氮、16种AA、内毒素测定等检定合格后，补加注射用水至配液总量。

3、灌装：用西林瓶洗烘灌联动机组灌装，每支灌装2.0ml药液；

4、冷冻干燥：冻干条件为-30℃、冻干48小时：冻干完毕，迅速压盖并出箱，扎铝塑盖，放入中存库中(半成品)待检；

5、半成品检定(按企业内控标准全检)：

①肽图HPLC测定应符合企业内控标准(附图1：HPLC标准肽图)：肽图峰型与标准品基本一致，杂峰面积＜5％；

②16种AA HPLC测定应符合企业内控标准(附图2：HPLC标准16种AA图)；

③总氮含量测定；

④内毒素含量测定：＜1.0EU/ml；

⑤pH测定：7.2±0.2；

⑥微生物检查：应无菌生长；

⑦水分不得过5％。

四、包装

1、贴签；

2、装盒及装箱；

3、入库。

实施例2：

一、粗提：按实施例1的方法制备。

二、精提：

1、同实施例1。

2、同实施例1。

3、同实施例1。

三、调配

1、同实施例1。

2、配液：

①浓配：按生产脑蛋白水解物冻干粉针剂1万支计算，药液总量为20000ml(2ml/支)，所需中间体的量为20000÷11＝1818.2ml，在浓配罐中加入中间体，按药液总量(体积比)加入25％的AA(氨基酸)溶液、20％的右旋糖苷40至浓配罐中，磁力搅拌混匀，经超滤、0.22u滤膜过滤后直接输入稀配罐中；

②稀配：在稀配罐中加入注射用水至配液总量(体积比)的38％时，调pH至74、测定肽图，定氮、16种AA、内毒素测定等检定合格后，补加注射用水至配液总量。

3、同实施例1。

4、冷冻干燥：冻干条件为-60℃、冻干18小时；冻干完毕，迅速压盖并出箱，扎铝塑盖，放入中存库中(半成品)待检；

5、半成品检定同实施例1。

四、包装同实施例1。

Claims (1)

1、一种注射用脑蛋白水解物冻干粉针剂的制备方法，该制备方法包括脑蛋白水解物注射液的粗提方法，其特征在于用健康动物脑组织进行粗提后，按以下步骤制取：

1)、精提：

①、过滤：用超滤器过滤，收集滤过清液；

②、超滤：用超滤器超滤，超滤膜为10K，收集滤过液，定容；超滤压力为：循环进口设为1.0～1.2Kg，出口为0.6～0.8Kg，待超滤原桶内清液只剩1000～2000ml时加5000～10000ml注射用水洗二次，继续超滤，待超滤原桶内液体只剩1000ml时停机；

③、高压灭菌：用玻璃血清瓶，将上述超滤浓缩液分装于玻璃血清瓶中，用棉塞封扎瓶口，115～121℃蒸汽高压灭菌30～50分钟；冷却至室温，放置2～8℃冷藏柜中保存备用；

2)、调配

①、用HPLC肽图测定法测定脑蛋白水解物的中间体或精品的肽图，与标准对照品比较峰型，按峰面积计算中间体的稀释倍数，计算方法为：

精品峰面积1.2/标准品峰面积1.2＝稀释倍数

②、配液

(1)浓配：在浓配罐中加入中间体，按药液总体积加入20～25％的氨基酸溶液、0.1～20％的右旋糖苷40至浓配罐中，磁力搅拌混匀，经超滤、0.22u滤膜过滤后直接输入稀配罐中；

(2)稀配：在稀配罐中加入注射用水至药液总体积的35～38％时，调pH至7～7.4、测定肽图，定氮、16种AA、内毒素测定等检定合格后，补加注射用水至配液总量；

③、用西林瓶洗烘灌联动机组灌装；

④、冷冻干燥：冻干条件为-30～-60℃、冻干18～48小时；冻干完毕，迅速压盖并出箱，扎铝塑盖，放入存库中待检；

⑤、半成品检定后，进行包装。