CN1197482C - 苷肽组合物、其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种苷肽组合物,包含核苷酸和细胞活性多肽,其比例为1∶99-99∶1。本发明苷肽组合物的制备方法包括将微生物菌种经液体培养后作发酵培养,发酵物用碱抽提后进行核酸酶水解制成核苷酸;将动物脏腑破碎、匀浆后用蛋白酶水解,热处理,上清液经过滤、透析后冷冻浓缩,制成细胞活性多肽;二者按一定比例混合。本发明的苷肽组合物能营养和修复细胞,促进细胞代谢,清除自由基,有利于各种疾病的预防和康复。用本发明的苷肽组合物制备方法可进行产业化生产,满足日益增进的市场需求。
Description
技术领域
本发明涉及营养品领域,具体涉及含核苷酸和多肽的营养品及其制备方法和应用。
背景技术
现代医学认为,众多慢性病是细胞功能异常、代谢低下导致的一系列功能性障碍。传统的中西医药大多是不能被机体彻底分解的化学物质,它们只能调控一步或几步生化反应,而不能解决一系列生物化学问题,有些对肝、肾具有毒副作用或累积损害。因此,需要用全新的观念来增进健康,促进慢性病患者的康复。
近年来,动物试验和临床试验日趋表明,核酸在特定的生理条件下是不可缺少的营养成分,具有如下作用:促进营养素的利用,利于肝脏再生和受损小肠恢复功能,抗氧化,抗疲劳,增强机体免疫力和对寒暑的抵抗力(佟晓永等,核苷酸营养及其对免疫的影响,中华预防医学杂志,1999,33(3):180-181)。大量资料证明,每天从外界摄取1500mg核酸,可预防疾病,延缓衰老,使机体处于良好的“自然治愈状态”(常敏毅,具有生命力的核酸疗法,中国医药报,1994,11:3)。但是,单纯摄入核酸,因其分子量大而不易被机体吸收,因此可补充核苷酸作为合成核酸的原料。
细胞活性多肽是细胞产生的各种具有生理活性的多肽类物质。其中,临床使用的转移因子是致敏T淋巴细胞再次遇到抗原后释放的一种小分子免疫调节剂。它可激发其它非淋巴细胞发挥免疫作用(何勤国等,人淋巴细胞转移因子对银屑病患者自然杀伤细胞活性的影响,皮肤病与性病,1997:19(3):2-4),诱导淋巴细胞释放干扰素,促进机体抗感染的防御机能,临床上除了作为免疫增强剂用于治疗免疫缺陷病和自身免疫性疾病,还可应用于各种病原体引起的感染性疾病,如治疗乙型肝炎和肝硬化(霍保来主编:《转移因子与临床应用》,中国科技出版社,第1版,1990:278),小儿反复呼吸道感染(郑明平等,锌、转移因子治疗儿童反复呼吸道感染的临床和免疫功能研究,现代诊断与治疗,1998,9(4):214-215),肿瘤疾病(楼跃飞等,转移因子与免疫核糖核酸对LAK细胞抗肿瘤活性的影响,上海免疫学杂志,1995,15(1):14-17)等。
核苷酸、细胞活性多肽是机体内天然存在的化学物质,对机体不产生毒性,如果解决了产业化生产的问题,可望成为新一代的营养保健品。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种苷肽组合物。
本发明的另一个目的是提供苷肽组合物的制备方法。
本发明的再一个目的是提供苷肽组合物的应用。
本发明所提供的苷肽组合物包含核苷酸和细胞活性多肽,其比例为1∶99-99∶1。
本发明的苷肽组合物中,所述核苷酸由微生物(较佳为HB202酵母菌)制得,所述细胞活性多肽由动物脏腑(较佳为脾)制得,细胞活性多肽较佳为转移因子。根据需要,本发明的苷肽组合物中还包含多种必需氨基酸。
本发明所提供的苷肽组合物的制备方法包括如下步骤:
(1)核苷酸的制备:将选定的微生物菌种经液体培养后作发酵培养,发酵物用碱抽提后进行核酸酶水解;
(2)细胞活性多肽的制备:将动物脏腑破碎、制成匀浆后用蛋白酶水解,热处理,上清液经过滤、透析后冷冻浓缩;
(3)将(1)所得水解液和(2)所得浓缩液混合。
上述步骤(1)中的酶解采用核酸酶,步骤(2)的酶解采用胶蛋白酶。
上述步骤(3)还可以是在将混合液与玉米淀粉均匀混合后干燥,或分别将(1)所得水解液和(2)所得浓缩液干燥后混合。
本发明还提供苷肽组合物作为营养保健品的应用。
本发明的苷肽组合物能营养和修复细胞,促进细胞代谢,清除自由基,有利于各种疾病的预防和康复。用本发明的苷肽组合物制备方法可进行产业化生产,满足日益增进的市场需求。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步阐述,但这些实施例绝不是对本发明的任何限制。
实施例1核苷酸的制备
1.培养和分离:将法国HB202高效酵母菌种接种于50ml LB培养基,培养3天后作500ml扩增培养,再用雪花10万毫升发酵罐作大容量发酵培养,然后将发酵物离心、真空干燥,得干粉2kg。
2.碱抽提:在干粉中加入1%NaOH 2万毫升,充分搅拌,1小时后用6N HCl调节pH至中性。
3.虹吸离心:将步骤2中和后的碱抽提液于90℃加热10分钟,冷却后虹吸上清液,剩余物离心(3000转/分),取上清液,用0.22μm膜过滤。
4.酶解:在步骤3的滤液中加入核酸酶水解6小时,使核酸水解成核苷酸。
5.浓缩:冷却干燥,浓缩,得干粉200g。
实施例2 转移因子的制备
1.原料处理:新鲜的小猪脾于-20℃保存,用时取1kg脾加无菌蒸馏水清洗干净,切成小块。
2.细胞破碎:在脾碎块中加入蒸馏水2000ml,用组织匀浆机于1000转/分(或球磨机磨6小时)进行细胞粉碎,镜检观察细胞粉碎是否完全。
3.水解离心:将组织匀浆按10U/ml加胶蛋白酶进行水解,6小时后加6N HCl终止反应,反应液于90℃加热搅拌20分钟,冷却至室温后离心。
4.过滤透析:取上清液,用滤纸、0.45μm膜、0.22μm膜相继过滤,装入10000D透析袋于2倍无菌水中透析24小时。
5.浓缩:过滤透析后,加20%NaOH调节pH至中性,冷冻浓缩10倍。
实施例3苷肽组合物的制备
将实施例1所得的核苷酸和实施例2所得的转移因子按1∶1的比例混合,加入优质玉米淀粉,混合物经超微均质化后,于100℃干燥灭菌2小时。
实施例4胶囊剂的制备
按常规方法装填胶囊,每粒胶囊含100mg核苷酸、100mg转移因子,以及药学上可接受的载体。胶囊经含量检测后包装入库。
实施例5苷肽组合物的检测
一.感官指标
检查项目 检查结果
色泽 白色
气味 无味
组织状态 粉末
杂质 无
二.理化指标
检查项目 检查结果
水分 5.80
铅(以Pb计),mg/kg 0.80
砷(以As计),mg/kg 0.14
汞(以Hg计),mg/kg 0.007
pH 6-7
核苷酸含量(紫外法) 100mg/kg
转移因子含量 100mg/kg
三.微生物指标
检查项目 检查结果
菌落总数 <10
大肠杆菌 <30
霉菌 <10
酵母菌 <10
沙门氏菌 未检出
志贺氏菌 未检出
金黄色葡萄球菌 未检出
乙型溶血性链球菌 未检出
四.氨及氨基酸含量(用氨基酸测定仪测定)
检查项目 检查结果(mg/kg)
天冬氨酸(Asp) 353
丝氨酸(Ser) 2226
脯氨酸(Pro) 2065
丙氨酸(Ala) 3207
缬氨酸(Val) 2758
异亮氨酸(Ile) 1629
酪氨酸(Tyr) 424
组氨酸(His) 898
氨 607
色氨酸(Trp) 1680
苏氨酸(Thr) 888
谷氨酸(Glu) 10862
甘氨酸(Gly) 2579
胱氨酸(Cys) 1001
蛋氨酸(Met) 797
亮氨酸(Leu) 2929
苯丙氨酸(Phe) 1889
赖氨酸(Lys) 2867
精氨酸(Arg) 2175
实施例6苷肽组合物治疗例
苷肽组合物胶囊一般的服用量是成人每次2-3粒,每天2-3次。首次最好空腹服用,有失眠、嗜睡、记忆力减退、疲劳综合症及脑力劳动者以晚饭后服用为佳,糖尿病、消化系统疾病等以早饭前服用为佳。
病例一 华姓90岁老翁,冠心病,24小时动态心电图检测早博达5900多次,双束枝传导阻滞,在稳定出院后开始服用苷肽胶囊,第一周每天两次,每次2粒,第二周每次增加一粒,第三周每次再增加一粒。一个月后早博消失,胸闷好转,三个月后血脂正常,半年后糖尿病好转,十个月后脑血管硬化、头昏症状明显减轻,一年半后,24小时动态心电图为偶见早博。
病例二 上海杨浦区陈女士,服用苷肽胶囊期间作了三次心血管功能检查,结果如下:
检查日期 服用苷肽 检查项目 异常项目 分析判断结论
2001.11.2 服用前 48 30 动脉硬化
2002.1.23 服2个月 48 22 心血管功能大致正常
2002.4.11 服5个月 48 14 心血管功能正常
患者自诉头昏、失眠等自觉症状也缓解了。
病例三 上海静安区华医师,因胰腺炎曾三次下病危通知,94年手术根治,但需终身服药以防胆汁返流并防止功能、感染。作为医师,当然知道“凡药三分毒”,于是坚持用自然疗法一细胞代谢疗法和反射疗法,几年来根本没有服药。服用苷肽一年后,头发开始由白变黑,老年斑由深变浅,颈部血管由硬变软,精力更加充沛。
病例四 上海卢湾区管药师,糖尿病患者,其老战友老沈更是30年的糖尿病患者,二人同时服用苷肽,管药师的糖尿病很快稳定,血糖在6mmol/L左右,虽然老沈因病史长见效稍慢些,但服用后血糖稳定在12mmol/L不再上升,6个月后血糖稳定在10mmol/L,10个月后又下降到8.5mmol/L,仍继续服用。
病例五 宁波俞先生,患乙型肝炎4年,大三阳,血清转氨酶时好时坏,双胁疼痛,全身乏力,精神不振,服用苷肽每天4粒,一周后精神明显好转,疲劳感消失,三周后双胁疼痛消失,e抗原消失,肝功能恢复正常。
以上的实施例仅仅是举例说明本发明苷肽组合物的制备方法和临床个例,本领域的技术人员可以对苷肽的制备和使用方法作出种种修改和变化,而不背离本发明的精神和范围,所附的权利要求书覆盖本发明范围内的所有这些修改。
Claims (10)
1、苷肽组合物,包含从动物脏腑提取的细胞活性多肽和另外加入的核苷酸,其重量比为1∶99-99∶1。
2、如权利要求1所述的苷肽组合物,其中所述核苷酸由微生物制得。
3、如权利要求1所述的苷肽组合物,其中所述核苷酸由HB202酵母菌制得,所述细胞活性多肽由动物脾制得。
4、如权利要求1所述的苷肽组合物,其中所述细胞活性多肽为转移因子。
5、如权利要求1所述的苷肽组合物,其中还包含多种必需氨基酸。
6、如权利要求1所述苷肽组合物的制备方法,其特征在于包括以下步聚:
(1)核苷酸的制备:将微生物菌种经液体培养后作发酵培养,发酵物用碱抽提后进行核酸酶水解;
(2)细胞活性多肽的制备:将动物脏腑破碎、制成匀浆后用蛋白酶水解,热处理,上清液经过滤、透析后冷冻浓缩;
将(1)所得水解液和(2)所得浓缩液混合。
7、如权利要求6所述的苷肽组合物的制备方法,其中,步骤(2)的酶解采用胶蛋白酶。
8、如权利要求6所述的苷肽组合物的制备方法,其中,还包括步骤(3),步骤(3)为在将步骤(1)所得水解液和步骤(2)所得浓缩液混合而成的混合物与玉米淀粉均匀混合后干燥,或步骤(3)为分别将(1)所得水解液和(2)所得浓缩液干燥后混合。
9、如权利要求1所述苷肽组合物作为营养保健品的应用。
10、如权利要求9所述苷肽组合物的应用,其中所述营养保健品是胶囊剂。
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