CN110628859A - 一种糖基化牡蛎肽及其制备方法 - Google Patents

一种糖基化牡蛎肽及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种糖基化牡蛎肽及其制备方法。步骤包括：将牡蛎肉经匀浆后得到牡蛎匀浆液；再将牡蛎匀浆液经高压均质后得到牡蛎均质液；调节牡蛎均质液的pH至7.0~9.0，经蛋白酶酶解后，得到牡蛎蛋白酶解液；将牡蛎蛋白酶解液离心后取上清；将上清液通过超滤膜后，向超滤液中加入高活性干酵母进行一次脱腥处理，再加入活性炭进行二次脱腥处理，得到脱腥后的牡蛎酶解液；将脱腥后的牡蛎酶解液进行冷冻干燥，过筛后得牡蛎肽粉；将所述牡蛎肽粉与一定比例的还原糖添加到pH 7.0的磷酸盐缓冲液中反应，得糖基化牡蛎肽。有效地减少牡蛎地腥味以及酶解产生的苦味，有效提高了牡蛎肽的消化抗性和肠道菌群调节活性。

Description

一种糖基化牡蛎肽及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种糖基化牡蛎肽，本发明还涉及一种糖基化牡蛎肽的制备方法。
背景技术
牡蛎是世界上第一大养殖贝类，也是我国重要海洋养殖贝类。牡蛎软体干物质中蛋白质含量高达50%，其氨基酸组成完善，超过牛乳和人乳，具有“海底牛奶”的美誉。研究表明，利用不同水解酶及反应条件水解牡蛎蛋白得到的水解产物具有多种生物活性。因此，牡蛎生物活性肽的开发和应用也得到广泛关注。如包卫洋等人在中国专利201811214654.9中公布了一种牡蛎来源的ACE抑制及抗肿瘤活性肽；叶常青等人在中国专利201810127963.6公布了牡蛎活性多肽的制备方法；楼良水等人在中国专利201810171659.1中公布了补肾生精的虫草牡蛎肽复合物的制备方法和应用。
利用美拉德反应对蛋白和肽进行糖基化修饰可增强蛋白和肽的乳化性、溶解性、热稳定性等多种生物活性。孔宝华等人公布了一种糖基化乳清蛋白肽的制备方法（申请号201210085711.4），利用该方法能够显著提高乳清蛋白肽的抗氧化活性。另外，相对于磷酸化作用、脱氨基作用等其他的蛋白质改性方法，糖基化作用过程不需要添加额外的化学试剂，大大增加了产物的可食用性和安全性，因此糖基化修饰作用在食品工业中具有广泛的应用前景。目前，关于糖基化牡蛎多肽对肠道菌群的调节活性未见报道。牡蛎蛋白中含有肌球蛋白、副肌球蛋白、肌动球蛋白等多种非水溶性蛋白，导致蛋白酶解效率低下，蛋白质利用率低。现有专利技术（申请号201711065482.9）公开了一种牡蛎肽提取方法，该方法利用碱溶酸沉蛋白的方法提取牡蛎粗蛋白，利用双频超声与微波辅助酶解，提高了酶解效率，节约了成本。由于碱溶酸沉的方法并不能沉淀出牡蛎中所有的蛋白，因此，利用该方法制备牡蛎肽未能实现牡蛎原料中蛋白利用的最大化。此外，牡蛎本身具有的腥味及其在水解过程中释放出的苦味肽，影响牡蛎肽及其产品的感官性能，是制约牡蛎肽及其相关产品开发的重要因素之一。周艳初公布了一种牡蛎肽的提取方法（申请号201810475406），该方法利用干酵母和β-环糊精对牡蛎匀浆液进行脱腥，但该方法并不能去除牡蛎蛋白水解后释放出的疏水性多肽的苦味，并且β-环糊精的加入会使体系产生一定的焦糊异味。
发明内容
针对上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种糖基化牡蛎肽及其制备方法。该方法得到的牡蛎肽有效的解决腥味和苦味问题。
本发明采用的技术方案如下：
一种糖基化牡蛎肽的制备方法，其特征在于，所述制备方法的步骤包括：
（1）将牡蛎肉经匀浆后得到牡蛎匀浆液；再将牡蛎匀浆液经高压均质后得到牡蛎均质液；
（2）调节牡蛎均质液的pH至7.0~9.0，经蛋白酶酶解后，得到牡蛎蛋白酶解液；
（3）将牡蛎蛋白酶解液离心后取上清；将上清液通过超滤膜后，向超滤液中加入高活性干酵母进行一次脱腥处理，再加入活性炭进行二次脱腥处理，得到脱腥后的牡蛎酶解液；
（4）将脱腥后的牡蛎酶解液进行冷冻干燥，过筛后得牡蛎肽粉；
（5）将所述牡蛎肽粉与一定比例的还原糖添加到pH 7.0的磷酸盐缓冲液中，溶解使其终浓度为80~150 mg/mL，在50-75℃的条件下反应4-8 h，反应结束后将混合液进行浓缩、干燥，过100目筛后得具有肠道菌群调节活性的糖基化牡蛎肽粉。
优选的，步骤（1）中所述高压均质的条件为：将牡蛎匀浆液与蒸馏水混合，压力20~60 MPa，温度25~40 ℃，进行3~5个循环；所述牡蛎匀浆液与蒸馏水重量比例为1:3~5。
优选的，步骤（2）中所述酶解条件为：加入蛋白酶，在40~60 ℃条件下水解2~4 h。
优选的，步骤（2）中所述蛋白酶添加量为300~1000 KU/100g牡蛎蛋白。
优选的，步骤（2）中所述蛋白酶为碱性蛋白酶和风味蛋白酶的混合物，所述碱性蛋白酶和风味蛋白酶的质量比为1~1.5:1。
优选的，步骤（3）中所述超滤膜的截留分子量大小为3~5 kDa。
优选的，步骤（3）中所述一次脱腥处理的条件为：高活性干酵母浓度为0.8~1.6%，温度为25~35 ℃，反应1~2 h。
优选的，步骤（3）中所述二次脱腥处理的条件为：1%~2%的活性炭，反应20~40 min。
优选的，所述牡蛎肽粉与所述还原糖的重量比为2~5:1，其中所述还原糖为低聚半乳糖。
本发明还提供一种糖基化牡蛎肽，采用如上述的制备方法制备得到。
有益效果：
1. 本发明所述制备方法在牡蛎蛋白水解之前 采用超高压对牡蛎匀浆液进行均质处理，提高了蛋白酶的催化活性，提高了牡蛎蛋白利用率和酶解效率。
2. 本发明利用高活性干酵母和活性炭对酶解后的牡蛎肽进行处理，可以有效地减少牡蛎地腥味以及酶解产生的苦味，提高了牡蛎肽的感官接受度。
3. 本发明利用美拉德反应对牡蛎肽进行糖基化修饰，有效提高了牡蛎肽的消化抗性和肠道菌群调节活性。
附图说明
图1为本发明应用例中对小鼠肠道菌群进行多样性分析图。其中图1A为Shannon指数分析图；图1B为Chao指数分析图；图1C为β-多样性用主成分分析图。
图2为本发明应用例中对小鼠肠道菌群的组成及丰度分析图。其中图2A为门水平肠道菌群组成分析图；图2B为拟杆菌门与厚壁菌门比值分析图；图2C为科水平肠道菌群组成分析图；图2D为科水平上肠道菌群的相对丰度分析图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不限定本发明。
实施例1
一种糖基化牡蛎肽的制备方法，其制备过程为：
1）称取500 g新鲜牡蛎肉，去除内脏后，匀浆后加入1500 mL蒸馏水，在压力30 Mpa、温度30 ℃的条件下均质3个循环，得牡蛎均质液；
2）调节牡蛎均质液的pH至8.0，加入300 KU蛋白酶（碱性蛋白酶:风味蛋白酶=1:1），50℃水浴条件下酶解3 h，酶解反应结束后，升高反应体系温度至90 ℃，保持15 min使蛋白酶失活，终止酶解反应，得到牡蛎蛋白酶解液，冷却后利用三硝基苯磺酸法测得其水解度为22.41%；
3）将牡蛎蛋白酶解液在4℃、4000 g的条件下离心15 min，取上清；将上清液通过截留分子量为3000 Da的超滤膜后，向超滤液中加入1%的高活性干酵母，在25℃下作用1 h，然后加入1%的活性炭，20 min后过滤除去活性炭，得到脱腥后的牡蛎酶解液；
4）将脱腥后的牡蛎酶解液进行冷冻干燥，过100目筛后得牡蛎肽粉，对其进行感官评价得其腥味值为4，苦味值为4；
5）称取60 g牡蛎肽粉溶解于2 L磷酸盐缓冲溶液（pH7.0）中，充分搅拌溶解后加入200g低聚半乳糖，在50-90 ℃的条件下反应6 h，反应结束后将混合液进行浓缩、干燥，过100目筛后得具有肠道菌群调节活性的糖基化的牡蛎肽粉。
实施例2
一种糖基化牡蛎肽的制备方法，其制备过程为：
1）称取500 g新鲜牡蛎肉，去除内脏后，匀浆后加入1500 mL蒸馏水，在压力60 MPa，温度30 ℃的条件下均质3个循环，得牡蛎均质液；
2）调节牡蛎均质液的pH至9.0，加入500 KU蛋白酶（碱性蛋白酶:风味蛋白酶=1.5:1），50 ℃水浴条件下酶解2 h，酶解反应结束后，升高反应体系温度至90 ℃，保持15 min使蛋白酶失活，终止酶解反应，得到牡蛎蛋白酶解液，冷却后利用三硝基苯磺酸法测得其水解度为23.3%；
3）将牡蛎蛋白酶解液在4 ℃、4000 g的条件下离心15 min，取上清；将上清液通过截留分子量为3000 Da的超滤膜后，向超滤液中加入1.5%的高活性干酵母，在25 ℃下作用2 h，然后加入1%的活性炭，20 min后过滤除去活性炭，得到脱腥后的牡蛎酶解液；
4）将脱腥后的牡蛎酶解液进行冷冻干燥，过100目筛后得牡蛎肽粉，对其进行感官评价得其腥味值为2，苦味值为4；
5）称取50 g牡蛎肽粉溶解于2 L磷酸盐缓冲溶液（pH7.0）中，充分搅拌溶解后加入100g低聚半乳糖，在80 ℃的条件下反应5 h，反应结束后将混合液进行浓缩、干燥，过100目筛后得具有肠道菌群调节活性的糖基化的牡蛎肽粉。
实施例3
一种糖基化牡蛎肽的制备方法，其制备过程为：
1）称取500 g新鲜牡蛎肉，去除内脏后，匀浆后加入1500 mL蒸馏水，在压力45 MPa，温度30 ℃的条件下均质5个循环，得牡蛎均质液；
2）调节牡蛎均质液的pH至7.5，加入800 KU蛋白酶（碱性蛋白酶:风味蛋白酶=1.5:1），60 ℃水浴条件下酶解4 h，酶解反应结束后，升高反应体系温度至90 ℃，保持15 min使蛋白酶失活，终止酶解反应，得到牡蛎蛋白酶解液，冷却后利用三硝基苯磺酸法测得其水解度为23.56%；
3）将牡蛎蛋白酶解液在4 ℃、4000 g的条件下离心15 min，取上清；将上清液通过截留分子量为10000 Da的超滤膜后，向超滤液中加入1.5%的高活性干酵母，在25 ℃下作用2 h，然后加入1.5%的活性炭，30 min后过滤除去活性炭，得到脱腥后的牡蛎酶解液；
4）将脱腥后的牡蛎酶解液进行冷冻干燥，过100目筛后得牡蛎肽粉，对其进行感官评价得其腥味值为2，苦味值为3；
5）称取30 g牡蛎肽粉溶解于2 L磷酸盐缓冲溶液（pH7.0）中，充分搅拌溶解后加入110g低聚半乳糖，在80 ℃的条件下反应5 h，反应结束后将混合液进行浓缩、干燥，过100目筛后得具有肠道菌群调节活性的糖基化的牡蛎肽粉。
实施例4
一种糖基化牡蛎肽的制备方法，其制备过程为：
1）称取500 g新鲜牡蛎肉，去除内脏后，匀浆后加入1500 mL蒸馏水，在压力50 MPa，温度30 ℃的条件下均质4个循环，得牡蛎均质液；
2）调节牡蛎均质液的pH至7.5，加入800 KU蛋白酶（碱性蛋白酶:风味蛋白酶=1.5:1），60 ℃水浴条件下酶解2.5 h，酶解反应结束后，升高反应体系温度至90 ℃，保持15 min使蛋白酶失活，终止酶解反应，得到牡蛎蛋白酶解液，冷却后利用三硝基苯磺酸法测得其水解度为23.7%；
3）将牡蛎蛋白酶解液在4 ℃、4000 g的条件下离心15 min，取上清；将上清液通过截留分子量为10000 Da的超滤膜后，向超滤液中加入1.5%的高活性干酵母，在25 ℃下作用2 h，然后加入2%的活性炭，40 min后过滤除去活性炭，得到脱腥后的牡蛎酶解液；
4）将脱腥后的牡蛎酶解液进行冷冻干燥，过100目筛后得牡蛎肽粉，对其进行感官评价得其腥味值为2，苦味值为2；
5）称取45 g牡蛎肽粉溶解于2 L磷酸盐缓冲溶液（pH7.0）中，充分搅拌溶解后加入100g低聚半乳糖，在80 ℃的条件下反应5 h，反应结束后将混合液进行浓缩、干燥，过100目筛后得具有肠道菌群调节活性的糖基化的牡蛎肽粉。
对比例1
一种牡蛎肽的制备方法，其制备过程为：
1）称取500 g新鲜牡蛎肉，去除内脏后，匀浆后加入1500 mL蒸馏水，在压力60 MPa，温度30 ℃的条件下均质3个循环，得牡蛎均质液；
2）调节牡蛎均质液的pH至9.0，加入500 KU蛋白酶（碱性蛋白酶:风味蛋白酶=1.5:1），50 ℃水浴条件下酶解2 h，酶解反应结束后，升高反应体系温度至90 ℃，保持15 min使蛋白酶失活，终止酶解反应，得到牡蛎蛋白酶解液，冷却后利用三硝基苯磺酸法测得其水解度为23.3%；
3）将牡蛎蛋白酶解液在4 ℃、4000 g的条件下离心15 min，取上清；将上清液通过截留分子量为3000 Da的超滤膜后，向超滤液中加入1.5%的高活性干酵母，在25 ℃下作用2 h，然后加入1%的活性炭，20 min后过滤除去活性炭，得到脱腥后的牡蛎酶解液；
4）将脱腥后的牡蛎酶解液进行冷冻干燥，过100目筛后得牡蛎肽粉。
应用例
一种糖基化牡蛎肽应用于肠道菌群调节、降糖降脂及增强免疫力。
实验动物为4周龄雄性C56BL/6小鼠，购自于北京维通利华实验动物技术有限公司。
实验方法
1）肥胖模型的建立
60只4周龄的雄性C57BL/6小鼠适应性喂养一周后，随机分为5组，每组10只，分别为正常对照组（简称ND）、模型对照组（简称HFD）、对比例1的牡蛎肽组（简称OP）、实施例2的糖基化牡蛎肽组（简称GOP）。
其中，正常对照组饲喂普通饲料，连续饲喂12周。喂养饲料为常规小鼠饲料，具体可为：每克饲料提供3.01 kcal能量，其中25.75%能量来源于蛋白，14.4%能量来源于脂肪，60.85%能量来源于碳水化合物。
模型对照组饲喂60%的高脂饲料，连续饲喂12周。喂养饲料具体为：每克饲料提供5.24 kcal能量，其中20.05%能量来源于蛋白，60.08%能量来源于脂肪，20.04%能量来源于碳水化合物。
牡蛎肽组饲喂60%的高脂饲料，连续饲喂12周。喂养饲料具体为：每克饲料提供5.24 kcal能量，其中20.05%能量来源于蛋白，60.08%能量来源于脂肪，20.04%能量来源于碳水化合物。
糖基化牡蛎肽组饲喂60%的高脂饲料，连续饲喂12周。喂养饲料具体为：每克饲料提供5.24 kcal能量，其中20.05%能量来源于蛋白，60.08%能量来源于脂肪，20.04%能量来源于碳水化合物。
2）实验设计
按照分组，各组饲喂上述相应的饲料，每天1次，并进行灌胃处理，具体灌胃剂量如表1所示。实验期间小鼠自由摄食、饮水，每3天称一下体重。连续灌胃8周后，对小鼠禁食8-10h，摘眼球取血，收集血清，用于检测血清中糖脂代谢相关生化指标；收集结肠内容物，用于测定小鼠肠道菌群组成及丰度。
表1 动物分组及灌胃剂量
组别 饮食 灌胃物质 灌胃物质剂量（mg/kg b.w.）
正常对照组 普通饲料 蒸馏水 /
模型对照组 高脂饲料 蒸馏水 /
牡蛎肽组 高脂饲料 牡蛎肽 800
糖基化牡蛎肽组 高脂饲料 糖基化牡蛎肽 800
3）糖基化牡蛎肽对肥胖小鼠体重及血糖、血脂的影响按照试剂盒说明书要求，分别检测小鼠血清中葡萄糖、脂多糖（LPS）、甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL-c）、低密度脂蛋白（LDL-c）、IgA、IgG以及IgM含量，其中葡萄糖、甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL-c）、低密度脂蛋白（LDL-c）生化检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所；脂多糖（LPS）、IgA、IgG以及IgM ELISA试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司。表2为体重和血清生化指标表。
表2 体重和血清生化指标
组别 正常对照组 模型对照组 牡蛎肽组 糖基化牡蛎肽组
摄食量（g） 3.67±0.3<sup>a</sup> 3.55±0.21<sup> a</sup> 3.39±0.07<sup> a</sup> 3.61±0.56<sup> a</sup>
体重增加量（g） 8.54±0.71<sup>a</sup> 16.33±0.9<sup>b</sup> 13.24±1.11<sup>c</sup> 10.51±0.96<sup>d</sup>
空腹血糖（mmol/L） 5.81±0.43<sup>a</sup> 8.97±0.77<sup>b</sup> 7.8±0.67<sup>c</sup> 6.02±0.71<sup>d</sup>
LPS（ng/mL） 247±12.5<sup>a</sup> 834±42.1<sup>b</sup> 551±43.7<sup>c</sup> 307±33.1<sup>d</sup>
TC（mmol/L） 3.44±0.41<sup>a</sup> 4.17±0.39<sup>b</sup> 3.86±0.27<sup>b</sup> 3.52±0.42<sup>c</sup>
TG（mmol/L） 0.56±0.04<sup>a</sup> 0.93±0.08<sup>b</sup> 0.77±0.03<sup>c</sup> 0.62±0.04<sup>d</sup>
LDL-c（mmol/L） 0.65±0.05<sup>a</sup> 1.33±0.11<sup>b</sup> 0.9±0.08<sup>c</sup> 0.77±0.04<sup>d</sup>
HDL-c（mmol/L） 2.79±0.31<sup>a</sup> 0.88±0.09<sup>b</sup> 1.37±0.15<sup>c</sup> 2.51±0.3<sup>a</sup>
注：各组数据以平均值±标准差的形式表示；不同字母代表具有显著性差异（p<0.05）
表2结果显示，与正常对照组相比，模型对照组小鼠体重增加量显著升高（p<0.05）；而干预糖基化牡蛎肽后，小鼠体重增加量较模型对照组均显著下降（p<0.05），并且糖基化牡蛎肽效果优于牡蛎肽。
与模型对照组相比，糖基化牡蛎肽组能显著降低肥胖小鼠的空腹血糖、血清中LPS、TC、TG以及LDL-c，并显著增加HDL-c的含量（p<0.05），并且糖基化牡蛎肽效果优于牡蛎肽，说明牡蛎肽的糖基化作用能够显著增强其抗炎、降糖降脂活性。
4）糖基化牡蛎肽对肥胖小鼠肠道菌群的影响
根据 E.Z.N.A.® soil试剂盒 (Omega Bio-tek, Norcross, GA, U.S.)说明书总DNA抽提。根据 Illumina MiSeq 平台 (Illumina, San Diego,USA)标准操作规程将纯化后的扩增片段构建PE 2*300的文库利用 Illumina公司的 Miseq PE300平台进行测序。
如图1所示，通过对小鼠肠道菌群进行α多样性分析（图1A-B，其中图1A为Shannon指数分析图；图1B为Chao指数分析图），结果显示，与正常对照组相比，模型对照组小鼠肠道菌群的Shannon指数显著降低，干预牡蛎肽组、糖基化牡蛎肽组后显著上调了Shannon指数；而Chao指数各组之间无显著性差异。
通过对小鼠肠道菌群进行β多样性分析（图1C，图1C为β-多样性用主成分分析图）发现，正常对照组小鼠肠道菌群与模型对照组之间存在显著性差异，而干预糖基化牡蛎肽组后形成了不同于正常对照组和模型对照组的肠道菌群结构，并且相比于牡蛎肽组干预组，糖基化牡蛎肽组小鼠的肠道菌群结构更接近于正常对照组。以上结果说明，糖基化牡蛎肽能显著调节高脂饮食小鼠的菌群多样性。
如图2所示，通过对小鼠肠道菌群的组成及丰度进行分析发现，在门水平上（图2A-B，其中图2A为门水平肠道菌群组成分析图；图2B为拟杆菌门与厚壁菌门比值分析图），与正常对照组相比，模型对照组小鼠肠道菌群中厚壁菌门丰度显著升高，拟杆菌门丰度显著降低，导致拟杆菌门/厚壁菌门显著下降（p<0.05）；而干预牡蛎肽组、糖基化牡蛎肽组后，能够显著改善高脂饮食导致的拟杆菌门和厚壁菌门的变化，增加拟杆菌门与厚壁菌门的比值（p<0.05），并且糖基化牡蛎肽组的效果显著优于牡蛎肽组。
如图2C-D所示，其中图2C为科水平肠道菌群组成分析图；图2D为科水平上肠道菌群的相对丰度分析图，在属水平上，高脂饮食显著下调了Porphyromonadaceae、Bacteroidaies_S24-7_group的丰度（p<0.05），显著上调了Bacteroidaceae、Rikenellaceae、Ruminococcaceae以及Lachnospiraceae的丰度（p<0.05），而牡蛎肽组、糖基化牡蛎肽组干预后显著逆转了高脂饮食造成的菌群丰度变化（p<0.05），并且糖基化牡蛎肽组小鼠肠道菌群的组成更加接近于正常组小鼠。以上结果说明糖基化牡蛎肽组能够显著改善高脂饮食小鼠的肠道菌群。
5）糖基化牡蛎肽对肥胖小鼠免疫力的影响
表3 血清免疫球蛋白含量
组别 IgA (ng/mL) IgG (ng/mL) IgM (ng/mL)
正常对照组 53.72±6.30<sup>a</sup> 943.55±21.21<sup> a</sup> 3.79±0.17<sup> a</sup>
模型对照组 43.55±0.2<sup>b</sup> 716.33±41.9<sup>b</sup> 2.04±0.11<sup>b</sup>
牡蛎肽组 49.81±5.43<sup>c</sup> 880.07±20.77<sup>c</sup> 2.78±0.15<sup>c</sup>
糖基化牡蛎肽组 49.61±4.21<sup>c</sup> 901.97±33.97<sup>c</sup> 3.09±0.23<sup>c</sup>
注：各组数据以平均值±标准差的形式表示；不同字母代表具有显著性差异（p<0.05）
由表3可知，与正常对照组相比，模型对照组小鼠血清中的IgA、IgG以及IgM的含量均显著下降（p<0.05），说明模型对照组小鼠机体免疫力下降。而干预糖基化牡蛎肽组后，小鼠血清中的IgA、IgG以及IgM的含量均不同程度的显著升高（p<0.05），说明糖基化牡蛎肽能够显著增强高脂饮食小鼠机体的免疫力。
本发明可用其他的不违背本发明的精神或主要特征的具体形式来概述。因此，无论从哪一点来看，本发明的上述实施方案都只能认为是对本发明的说明而不能限制本发明，权利要求书指出了本发明的范围，而上述的说明并未指出本发明的范围，因此，在与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何改变，都应认为是包括在本发明的权利要求书的范围内。

Claims (9)

1.一种糖基化牡蛎肽的制备方法，其特征在于，所述制备方法的步骤包括：
（1）将牡蛎肉经匀浆后得到牡蛎匀浆液；再将牡蛎匀浆液经高压均质后得到牡蛎均质液；
（2）调节牡蛎均质液的pH至7.0~9.0，经蛋白酶酶解后，得到牡蛎蛋白酶解液；
（3）将牡蛎蛋白酶解液离心后取上清；将上清液通过超滤膜后，向超滤液中加入高活性干酵母进行一次脱腥处理，再加入活性炭进行二次脱腥处理，得到脱腥后的牡蛎酶解液；
（4）将脱腥后的牡蛎酶解液进行冷冻干燥，过筛后得牡蛎肽粉；
（5）将所述牡蛎肽粉与一定比例的还原糖添加到pH 7.0的磷酸盐缓冲液中，溶解使其终浓度为80~150 mg/mL，在50-75℃的条件下反应4-8 h，反应结束后将混合液进行浓缩、干燥，过100目筛后得具有肠道菌群调节活性的糖基化牡蛎肽粉。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述高压均质的条件为：将牡蛎匀浆液与蒸馏水混合，压力20~60 MPa，温度25~40 ℃，进行3~5个循环；所述牡蛎匀浆液与蒸馏水重量比例为1:3~5。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述酶解条件为：加入蛋白酶，在40~60 ℃条件下水解2~4 h。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述蛋白酶添加量为300~1000 KU/100g牡蛎蛋白；所述蛋白酶为碱性蛋白酶和风味蛋白酶的混合物，所述碱性蛋白酶和风味蛋白酶的质量比为1~1.5:1。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述超滤膜的截留分子量大小为3~5 kDa。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述一次脱腥处理的条件为：高活性干酵母浓度为0.8~1.6%，温度为25~35 ℃，反应1~2 h。
7.权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述二次脱腥处理的条件为：1%~2%的活性炭，反应20~40 min。
8.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述牡蛎肽粉与所述还原糖的重量比为2~5:1，其中所述还原糖为低聚半乳糖。
9.一种糖基化牡蛎肽，其特征在于，采用如权利要求1-8任一项所述的制备方法制备得到。
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