CN110218756A - 一种具有抗衰作用的富硒鲟鱼骨肽提取方法及产品 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种富硒鲟鱼骨肽的提取方法，包括(1)将鲟鱼鱼骨原料，进行粉碎过160至300目筛，得到鱼骨粉；(2)将步骤(1)中获得的鱼骨粉进行第一次酶解，降解鱼骨胶原蛋白骨架，获得酶解粗产物；(3)将步骤(2)中获得的酶解粗产物进行第二次酶解，获得酶解精产物，使得富硒糖蛋白降解为小分子多肽，其中分子量小于250Da的多肽质量比例超过80％；(4)将步骤(3)中获得的酶解精产物，进行脱盐处理，获得脱盐后的酶解精产物；(5)将步骤(4)中获得的脱盐后的酶解精产物固液分离后，取液相干燥，即制得所述鲟鱼骨肽。实验显示，本发明提供的富硒鲟鱼骨肽产品，吸收效果良好，具有明显的抗衰效果。

Description

一种具有抗衰作用的富硒鲟鱼骨肽提取方法及产品
技术领域
本发明属于生物技术领域，更具体地，涉及一种具有抗衰作用的富硒鲟鱼骨肽提取方法及产品。
背景技术
鲟鱼是世界上唯一生活在水中的活化石，是所有鱼类中营养价值最高的一种鱼类。鲟鱼富含人体必需的八种氨基酸：鲟鱼富含人体必需的八种氨基酸：赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、色氨酸及苯柄氨酸和缬氨酸，而人体只要缺少了这八种氨基酸之一，就会造成代谢紊乱。因此目前对鲟鱼产品的开发主要集中在氨基酸的吸收和利用上，包括对鲟鱼鱼肉和与鱼皮组织的蛋白利用。
然而鲟鱼的食用价值不仅是作为氨基酸来源，有说法认为鲟鱼软骨和骨髓(俗称“龙筋”)具有抗癌效果。可以明确地，而鲟鱼鱼骨富含硫酸软骨素、蛋白质，更令人惊讶的是富含有机硒，其营养价值甚至高于鲟鱼鱼肉和鱼皮。然而目前对于鲟鱼鱼骨的利用方法，基本是直接食用，由于消化和吸收效率等方面的原因，直接食用并不能发挥其成分优势和保健功效。尚没有合适的方法利用鲟鱼鱼骨开发为具有保健功效的产品，提高鲟鱼鱼骨中有机硒的利用率，发挥鲟鱼鱼骨价值。
发明内容
针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明提供了一种具有抗衰作用的鲟鱼骨肽的提取方法及产品，其目的在于，通过酶解工艺水解鲟鱼骨粉得到鲟鱼骨肽，作为有机硒源，具有明显的抗衰作用，由此解决现有技术不能很好的利用和开发鲟鱼鱼骨的技术问题。
为实现上述目的，按照本发明的一个方面，提供了一种富硒鲟鱼骨肽的提取方法，包括以下步骤：
(1)将鲟鱼鱼骨原料，进行粉碎过160至300目筛，得到鱼骨粉；
(2)将步骤(1)中获得的鱼骨粉进行第一次酶解，降解鱼骨胶原蛋白骨架，获得酶解粗产物；
(3)将步骤(2)中获得的酶解粗产物进行第二次酶解，获得酶解精产物，使得富硒糖蛋白降解为小分子多肽，其中分子量小于250Da的多肽质量比例超过80％；
(4)将步骤(3)中获得的酶解精产物，进行脱盐处理，获得脱盐后的酶解精产物；
(5)将步骤(4)中获得的脱盐后的酶解精产物固液分离后，取液相干燥，即制得所述鲟鱼骨肽。
优选地，所述硒鲟鱼骨肽的提取方法，其步骤(2)具体步骤如下：
将步骤(1)中获得的鱼骨粉按照固液比1:1至1:2加水制成悬浊液，再加入胶原酶和纤维素酶进行酶解，其中胶原酶质量为鱼骨粉质量的0.3％至0.5％，纤维素酶质量为鱼骨粉质量的0.1％至0.4％，酶解0.5小时至1.5小时，期间持续搅拌维持温度在25至30℃；加热至90℃以上，维持30以上分钟灭酶。
优选地，所述硒鲟鱼骨肽的提取方法，其步骤(3)具体步骤如下：
将步骤(2)中获得的酶解粗产物，加入碱液调节pH值在7.5至8.0，加入质量分数在3％至5％的聚乙二醇，加入鱼骨粉质量0.5％至1.0％的混合蛋白酶，酶解2小时以上，期间每0.5小时至2小时搅拌一次维持体系均匀，并监测pH值，使得pH值维持在7.5至8.0之间。
优选地，所述硒鲟鱼骨肽的提取方法，其步骤(3)所述混合蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶、胰酶、以及菠萝蛋白酶按照质量比1:1～2.5:0.8～1.2的混合。
优选地，所述硒鲟鱼骨肽的提取方法，其步骤(3)所述混合蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶、胰酶、以及菠萝蛋白酶按照质量比为1:2.5:1。
优选地，所述硒鲟鱼骨肽的提取方法，其步骤(4)所述脱盐处理为反渗透脱盐处理。
优选地，所述硒鲟鱼骨肽的提取方法，其所述步骤(4)反渗透脱盐处理参数为：压力1MP至1.5MP，温度25℃，醋酸纤维膜，脱盐率70％或以上。
按照本发明的另一个方面，提供了一种富硒鲟鱼骨肽的提取产品，按照本发明提供的富硒鲟鱼骨肽的提取方法提取。
优选地，所述富硒鲟鱼骨肽的提取产品，其硒含量在0.7mg/kg至0.9mg/kg之间。
优选地，所述富硒鲟鱼骨肽的提取产品，其分子量小于或等于243Da的多肽质量分数在80％以上。
总体而言，通过本发明所构思的以上技术方案与现有技术相比，能够取得下列有益效果：
本发明提供富硒鲟鱼骨肽的提取方法，将鲟鱼鱼骨有小分解为小分子多肽，250Da的多肽质量分数在80％以上，且含有较高的有机硒蛋白。临床实验显示，本发明提供的富硒鲟鱼骨肽产品，吸收效果良好，具有明显的抗衰效果。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
有机硒一般以硒蛋氨酸形式存在，依循蛋氨酸代谢途径代谢，参与蛋白的合成，容易在组织内储存、吸收；被人体吸收后可迅速的被人体利用，有效改善人体内血硒状况。根据中国军事医学科学院硒研究小组研究资料显示，如今许多号称有机硒的产品质量差别极大，并非有机硒产品都具有类似的品质及效果。
经检测：鲟鱼骨中有机硒以富硒糖蛋白为主，含量在0.7mg/kg至0.9mg/kg之间，十分适合作为有机硒源食品，具有极高的营养价值。而一般鲟鱼鱼骨作为食品直接食用用量太低且加工复杂，而粗加工的鲟鱼骨粉，有机硒的吸收率较低，不能被人体充分利用。
本发明提供的富硒鲟鱼骨肽的提取方法，包括以下步骤：
(1)将鲟鱼鱼骨原料，进行粉碎过160至300目筛，得到鱼骨粉；实验显示对于鱼骨原料的粉碎细度，影响提取过程的整体效果，细度过细导致最终得到的产品多肽活性不佳，而细度过粗导致酶解不完全，导致有机硒的溶出率、吸收率以及酶解后肽的分子量较大，整体营养价值下降。
(2)将步骤(1)中获得的鱼骨粉进行第一次酶解，降解鱼骨胶原蛋白骨架，暴露富硒糖蛋白，获得酶解粗产物；
具体步骤如下：
将步骤(1)中获得的鱼骨粉按照固液比(质量比)1:1至1:2加水制成悬浊液，再加入胶原酶和纤维素酶进行酶解，其中胶原酶质量为鱼骨粉质量的0.3％至0.5％，纤维素酶质量为鱼骨粉质量的0.1％至0.4％，酶解0.5小时至1.5小时，期间持续搅拌维持温度在25至30℃；加热至90℃以上，维持30分钟灭酶。
(3)将步骤(2)中获得的酶解粗产物进行第二次酶解，获得酶解精产物，使得富硒糖蛋白降解为小分子多肽，其中分子量小于250Da的多肽质量比例超过80％，成为富硒多肽，从而提高硒元素的吸收率。
具体步骤如下：
将步骤(2)中获得的酶解粗产物，加入碱液调节pH值在7.5至8.0，加入质量分数在3％至5％的聚乙二醇、以及入鱼骨粉质量0.5％至1.0％的混合蛋白酶，酶解2小时以上，期间每0.5小时至2小时搅拌一次维持体系均匀，并监测pH值，使得pH值维持在7.5至8.0之间；
所述混合蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶、胰酶、以及菠萝蛋白酶按照质量比1:1～2.5:0.8～1.2的混合，优选1:2.5:1。
其中混合蛋白酶的选择、配比、以及酶解环境，决定了酶切的位点和效率，从而决定了肽段的活性不同，不同配比的混合蛋白酶对于鱼骨中复杂蛋白的酶切结果差异很大。同时酶切结果还决定着硒元素的吸收利用程度，不同的含硒肽段抗衰活性差异明显。因此混合蛋白酶的选择及相应酶解条件具有不可预知性，即使是相同的蛋白酶，由于酶解环境的不同，包括酶解体系的pH值以及溶剂极性的不同，会导致酶构象发生变化，而使得特异性的酶切位点产生不确定性。优选方案，采用枯草杆菌蛋白酶、胰酶、以及菠萝蛋白酶按照质量比1:1～2.5:0.8～1.2的混合进行混合酶解，添加聚乙二醇改变了溶液极性和固液接触面，酶解产物小于243道尔顿的多肽含量超过80％且具备卓越的活性，实验显示出优秀的抗衰效果。
(4)将步骤(3)中获得的酶解精产物，进行脱盐处理，获得脱盐后的酶解精产物，优选反渗透脱盐处理。
所述反渗透脱盐处理参数：压力1MP至1.5MP，温度25℃，醋酸纤维膜，脱盐率70％或以上。
(5)将步骤(4)中获得的脱盐后的酶解精产物固液分离后，取液相干燥，即制得所述鲟鱼骨肽。
本发明提供的富硒鲟鱼骨肽的提取产品，按照本发明提供的具有抗衰作用的鲟鱼骨肽的提取方法制备。
按照国标GB5009.93—2017检测所述富硒鲟鱼骨肽的提取产品，硒含量在0.7mg/kg至0.9mg/kg之间。
其中小于250道尔顿的肽含量超过80％。
以下为实施例：
实施例1
本发明提供的具有抗衰作用的鲟鱼骨肽的提取方法，包括以下步骤：
(1)将鲟鱼鱼骨原料，进行粉碎过160目筛，得到鱼骨粉；
(2)将步骤(1)中获得的鱼骨粉进行第一次酶解，降解鱼骨胶原蛋白骨架，暴露富硒糖蛋白，获得酶解粗产物；
具体步骤如下：
将步骤(1)中获得的鱼骨粉按照固液比(质量比)1:1加水制成悬浊液，再加入胶原酶和纤维素酶进行酶解，其中胶原酶质量为鱼骨粉质量的0.5％，纤维素酶质量为鱼骨粉质量的0.4％，酶解1.5小时，期间持续搅拌维持温度在25至30℃；加热至90℃以上，维持30分钟灭酶。
(3)将步骤(2)中获得的酶解粗产物进行第二次酶解，获得酶解精产物，使得富硒糖蛋白降解为小分子，成为富硒多肽，从而提高硒元素的吸收率。
具体步骤如下：
将步骤(2)中获得的酶解粗产物，加入碱液调节pH值在7.5至8.0，加入质量分数在3％的聚乙二醇4000，加入鱼骨粉质量0.5％的混合蛋白酶，酶解3小时，期间每1小时搅拌一次维持体系均匀，并监测pH值，使得pH值维持在7.5至8.0之间；
所述混合蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶、胰酶、以及菠萝蛋白酶按照质量比1:2.5:1。
(4)将步骤(3)中获得的酶解精产物，反渗透脱盐处理，获得脱盐后的酶解精产物。
所述反渗透脱盐处理参数：压力1MP，温度25℃，脱盐率70％，醋酸纤维素膜。
(5)将步骤(4)中获得的脱盐后的酶解精产物固液分离后，取液相干燥，即制得所述鲟鱼骨肽。
本实施例制备的富硒鲟鱼骨肽的提取产品按照国标GB5009.93—2017检测所述富硒鲟鱼骨肽的提取产品，硒含量为0.71mg/kg。委托北京中科光析化工技术研究所(食品实验室)进行多肽含量及分子量分布检测结果如下，显示分子量小于243的多肽含量为87.27：
检测项目 检测结果 单位
肽总量 89.17 ％
分子量分布 242 Da
分子量分布(Da) 百分比(％)
＞2300 0.0
2300-1200 0.42
1199-580 5.62
579-242 6.69
＜243 87.27
实施例2
本发明提供的具有抗衰作用的鲟鱼骨肽的提取方法，包括以下步骤：
(1)将鲟鱼鱼骨原料，进行粉碎过200目筛，得到鱼骨粉；
(2)将步骤(1)中获得的鱼骨粉进行第一次酶解，降解鱼骨胶原蛋白骨架，暴露富硒糖蛋白，获得酶解粗产物；
具体步骤如下：
将步骤(1)中获得的鱼骨粉按照固液比(质量比)1:1.5加水制成悬浊液，再加入胶原酶和纤维素酶进行酶解，其中胶原酶质量为鱼骨粉质量的0.4％，纤维素酶质量为鱼骨粉质量的0.1％，酶解1小时，期间持续搅拌维持温度在25至30℃；加热至90℃以上，维持30分钟灭酶。
(3)将步骤(2)中获得的酶解粗产物进行第二次酶解，获得酶解精产物，使得富硒糖蛋白降解为小分子，成为富硒多肽，从而提高硒元素的吸收率。
具体步骤如下：
将步骤(2)中获得的酶解粗产物，加入碱液调节pH值在7.5至8.0，加入质量分数在4％的聚乙二醇4000，加入鱼骨粉质量0.8％的混合蛋白酶，酶解2小时，期间每0.5小时搅拌一次维持体系均匀，并监测pH值，使得pH值维持在7.5至8.0之间；
所述混合蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶、胰酶、以及菠萝蛋白酶按照质量比1:2:0.8。
(4)将步骤(3)中获得的酶解精产物，反渗透脱盐处理，获得脱盐后的酶解精产物。
所述反渗透脱盐处理参数：压力1MP，温度25℃，脱盐率70％，醋酸纤维素膜。
(5)将步骤(4)中获得的脱盐后的酶解精产物固液分离后，取液相干燥，即制得所述鲟鱼骨肽。
本实施例制备的富硒鲟鱼骨肽的提取产品按照国标GB5009.93—2017检测所述富硒鲟鱼骨肽的提取产品，硒含量为0.77mg/kg。委托北京中科光析化工技术研究所(食品实验室)进行多肽含量及分子量分布检测结果如下，显示分子量小于243的多肽含量为81.03：
检测项目 检测结果 单位
肽总量 90.20 ％
分子量分布 312 Da
实施例3
本发明提供的具有抗衰作用的鲟鱼骨肽的提取方法，包括以下步骤：
(1)将鲟鱼鱼骨原料，进行粉碎过300目筛，得到鱼骨粉；
(2)将步骤(1)中获得的鱼骨粉进行第一次酶解，降解鱼骨胶原蛋白骨架，暴露富硒糖蛋白，获得酶解粗产物；
具体步骤如下：
将步骤(1)中获得的鱼骨粉按照固液比(质量比)1:2加水制成悬浊液，再加入胶原酶和纤维素酶进行酶解，其中胶原酶质量为鱼骨粉质量的0.3％，纤维素酶质量为鱼骨粉质量的0.1％，酶解1.5小时，期间持续搅拌维持温度在25至30℃；加热至90℃以上，维持30分钟灭酶。
(3)将步骤(2)中获得的酶解粗产物进行第二次酶解，获得酶解精产物，使得富硒糖蛋白降解为小分子，成为富硒多肽，从而提高硒元素的吸收率。
具体步骤如下：
将步骤(2)中获得的酶解粗产物，加入碱液调节pH值在7.5至8.0，加入质量分数在5％的聚乙二醇4000，加入鱼骨粉质量1.0％的混合蛋白酶，酶解2小时，期间每1小时搅拌一次维持体系均匀，并监测pH值，使得pH值维持在7.5至8.0之间；
所述混合蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶、胰酶、以及菠萝蛋白酶按照质量比1:1:1.2。
(4)将步骤(3)中获得的酶解精产物，反渗透脱盐处理，获得脱盐后的酶解精产物。
所述反渗透脱盐处理参数：压力1MP，温度25℃，脱盐率70％，醋酸纤维素膜。
(5)将步骤(4)中获得的脱盐后的酶解精产物固液分离后，取液相干燥，即制得所述鲟鱼骨肽。
本实施例制备的富硒鲟鱼骨肽的提取产品按照国标GB5009.93—2017检测所述富硒鲟鱼骨肽的提取产品，硒含量为0.80mg/kg，进行多肽含量及分子量分布检测结果如下，显示分子量小于243的多肽含量为80.73。
对比例1
本发明提供的具有抗衰作用的鲟鱼骨肽的提取方法，包括以下步骤：
(1)将鲟鱼鱼骨原料，进行粉碎过400目筛，得到鱼骨粉；
(2)将步骤(1)中获得的鱼骨粉进行第一次酶解，降解鱼骨胶原蛋白骨架，暴露富硒糖蛋白，获得酶解粗产物；
具体步骤如下：
将步骤(1)中获得的鱼骨粉按照固液比(质量比)1:1加水制成悬浊液，再加入胶原酶和纤维素酶进行酶解，其中胶原酶质量为鱼骨粉质量的0.5％，纤维素酶质量为鱼骨粉质量的0.4％，酶解1.5小时，期间持续搅拌维持温度在25至30℃；加热至90℃以上，维持30分钟灭酶。
(3)将步骤(2)中获得的酶解粗产物进行第二次酶解，获得酶解精产物，使得富硒糖蛋白降解为小分子，成为富硒多肽，从而提高硒元素的吸收率。
具体步骤如下：
将步骤(2)中获得的酶解粗产物，加入碱液调节pH值在7.5至8.0，加入质量分数在3％的聚乙二醇4000，加入鱼骨粉质量0.5％的混合蛋白酶，酶解3小时，期间每1小时搅拌一次维持体系均匀，并监测pH值，使得pH值维持在7.5至8.0之间；
所述混合蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶、胰酶、以及菠萝蛋白酶按照质量比1:2.5:1。
(4)将步骤(3)中获得的酶解精产物，反渗透脱盐处理，获得脱盐后的酶解精产物。
所述反渗透脱盐处理参数：压力1MP，温度25℃，脱盐率70％，醋酸纤维素膜。
(5)将步骤(4)中获得的脱盐后的酶解精产物固液分离后，取液相干燥，即制得对比产品1。
本实施例制备的富硒鲟鱼骨肽的提取对比产品1按照国标GB5009.93—2017检测所述富硒鲟鱼骨肽的提取产品，硒含量为0.58mg/kg。
对比例2
本发明提供的具有抗衰作用的鲟鱼骨肽的提取方法，包括以下步骤：
(1)将鲟鱼鱼骨原料，进行粉碎过300目筛，得到鱼骨粉；
(2)加入碱液调节pH值在7.5至8.0，加入质量分数在3％的聚乙二醇4000,加入鱼骨粉质量1.0％的混合蛋白酶，酶解2小时，期间每1小时搅拌一次维持体系均匀，并监测pH值，使得pH值维持在7.5至8.0之间；
所述混合蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶、胰酶、以及菠萝蛋白酶按照质量比1:1:1.2。
(3)将步骤(2)中获得的酶解精产物，反渗透脱盐处理，获得脱盐后的酶解精产物。
所述反渗透脱盐处理参数：压力1MP，温度25℃，脱盐率70％，醋酸纤维素膜。
(4)将步骤(3)中获得的脱盐后的酶解精产物干燥，即制得对比产品2。
本实施例制备的富硒鲟鱼骨肽的提取对比产品2按照国标GB5009.93—2017检测所述富硒鲟鱼骨肽的提取产品，硒含量为0.40mg/kg。
对比例3
(1)将鲟鱼鱼骨原料，进行粉碎过160目筛，得到鱼骨粉；
(2)将步骤(1)中获得的鱼骨粉进行第一次酶解，降解鱼骨胶原蛋白骨架，暴露富硒糖蛋白，获得酶解粗产物；
具体步骤如下：
将步骤(1)中获得的鱼骨粉按照固液比(质量比)1:1加水制成悬浊液，再加入胶原酶和纤维素酶进行酶解，其中胶原酶质量为鱼骨粉质量的0.5％，纤维素酶质量为鱼骨粉质量的0.4％，酶解1.5小时，期间持续搅拌维持温度在25至30℃；加热至90℃以上，维持30分钟灭酶。
(3)将步骤(2)中获得的酶解粗产物进行第二次酶解，获得酶解精产物，使得富硒糖蛋白降解为小分子，成为富硒多肽，从而提高硒元素的吸收率。
具体步骤如下：
将步骤(2)中获得的酶解粗产物，加入碱液调节pH值在7.5至8.0，加入鱼骨粉质量0.5％的混合蛋白酶，酶解3小时，期间每1小时搅拌一次维持体系均匀，并监测pH值，使得pH值维持在7.5至8.0之间；
所述混合蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶、胰酶、以及菠萝蛋白酶按照质量比1:2.5:1。
(4)将步骤(3)中获得的酶解精产物，反渗透脱盐处理，获得脱盐后的酶解精产物。
所述反渗透脱盐处理参数：压力1MP，温度25℃，脱盐率70％，醋酸纤维素膜。
(5)将步骤(4)中获得的脱盐后的酶解精产物固液分离后，取液相干燥，即制得所述对比产品3。
本实施例制备的富硒鲟鱼骨肽的提取对比产品3按照国标GB5009.93—2017检测所述富硒鲟鱼骨肽的提取产品，硒含量为0.77mg/kg。
对比例1、2显示，鲟鱼鱼骨原料粉碎细度、粗酶解步骤都显著影响了最终产品中的硒含量。
体外抗氧化测试：·OH抑制率测试
在样品管中一次加入0.4ml 50mmol/L pH7.5的磷酸二氢钾-氢氧化钾缓冲液，分别加入实施例1至3、以及对比例1至3的产品100ug/mL，0.1mL 1.04mmol/L EDTA溶液，0.1mL10mmol/L双氧水，0.1mL 60mmol/L DR(对照不加)，0.1mL 2mmol/L维生素C、以及0.1mL1mmol/L氯化铁溶液，样品管测试体系体积1.0mL。37℃保温1小时后取出，加入1mL 25％稀盐酸终止反应，再加入1.0ml 1％TBA溶液，将样品管中反应体系混匀，沸水浴15min，冷却离心(3000rpm)。在532nm波长处测试吸光度，并计算抑制率：
其中A0、A1、A2分别代表对照、样品及样品空白的吸光度。
测试结果如下：
超氧阴离子自由基的清除作用测试：
反应体系3mL：pH值为7.5的磷酸缓冲液，含核黄素3×10-6mol/L，甲硫氨酸浓度1×10-2mol/L，25摄氏度光照20min，产生超氧阴离子自由基O2 ·-；光照强度4000lx。
在上述体系中加入氯化硝基四氮唑兰(NBT)，浓度1×10-4mol/L，光照核黄素产生的O2 ·-能将NBT还原为蓝色，以无光照体系做校正，在560nm处侧其吸光度A，表征O2 ·-含量，加入实施例1至3、对比例1至3的产品100ug/mL，测定反应体系吸光度并计算抑制率如下；
其中A1为加入产品后吸光读，A为反应体系以无光照体系校正的吸光度。
结果如下：
·OH抑制率、超氧阴离子自由基抑制率的体外抗氧化测试结果显示，不同工艺生产的鲟鱼骨肽粉抗氧化有着较大影响，其中酶解步骤影响较大，无粗酶解步骤或者精酶解步骤的反应条件改变，都会较大的降低鲟鱼骨肽粉抗氧化能力。其可能是由于粗酶解过程，影响了骨结构的解构过程，从而影响了有机硒蛋白从骨结构中溶出；精酶解过程，将有机硒蛋白分解为小分子多肽，其肽段活性不同，直接影响抗氧化能力。
果蝇生存实验：
空白培养基及药物培养基制备：用于玉米粉34g，蔗糖26g，干酵母粉3g，丙酸2.0ml，琼脂3.0g，蒸馏水400ml，制成不含药物的空白培养基，药物培养基则在基础培养基中加入实施例1至实施例3的产品、以及对比例1至对比例3的产品10mg/100g。取培养管，收集10h孵出的果蝇成虫，乙醚麻醉，称体重分为7组，每组100只果蝇，每只培养管内放2ml培养基，用双层纱布封口。各组果蝇均放入25±1℃、适度为45％至75％的培养箱中，前四周均喂养基础培养基，29天后各实验组开始给药物培养基，每天上午10:00观察并记录死蝇数目，4天更换一次培养基，观察果蝇至完全死亡位置。记录每组果蝇的存活时间及半数存活时间。以每组最后10只死亡果蝇的平均寿命为该组果蝇的平均最高寿命。共计各组果蝇的平均寿命(组内个个果蝇生存天数的代数和初一果蝇数目)以及最高寿命天数。
对于雄性果蝇寿命的影响结果如下：
对于雌性果蝇寿命的影响结果如下：
人群实验测试：
对143例志愿者进行试用，将受试者分为7组，分别接收实施例1至3、对比例1至3的对比产品1至3、以及安慰剂，冲服，一日3次，一次3g。至少3周或直至患者能正常进食每日能量需要量的半数时，停止产品服用。对所有患者分别在接受产品服用前、后用生物电子阻抗分析仪(BIA-101型，RJL系统)测量身体构成指数测定身体总含水量、细胞外液量。
结果显示，接受实施例1至3的鲟鱼骨肽受试者氮平衡改善显著，接收对比产品1至2的受试者氮平衡改善，接收对比产品3的受试者与安慰剂组对比氮平衡改善不显著，身体总含水量等变化结果如下表所示。
表1监测结果
以上实验显示，实施例1至3提供的鲟鱼骨肽产品，在体外抗氧化实验中均表现出良好的抗氧化能力，对比例1至3提供的鲟鱼骨肽产品，也表现出一定的抗氧化能力，其中尤其以实施例1提供的鲟鱼骨肽产品的抗氧化能力为优异。然而在果蝇生存实验中，实施例1提供的鲟鱼骨肽产品与对照组相比，具有极显著差异，说明实施例1提供的鲟鱼骨肽产品具有延长果蝇寿命的作用；实施例2至3提供的鲟鱼骨肽产品，与对照组相比，差异显著，说明实施例2至3提供的鲟鱼骨肽产品具有一定的延长果蝇寿命的作用；对比例3在雌性果蝇和雄性果蝇的实验中表现出不同的能力；而对比例1和2在延长果蝇寿命的效果均不显著。人群实验显示，实施例1至3对能明显的影响受试人群的含水量肌细胞外液量，影响氮平衡和人体代谢。综上所述，实施例1至3提供的鲟鱼骨肽产品，具有确切的抗衰老的效果。
本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种富硒鲟鱼骨肽的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将鲟鱼鱼骨原料，进行粉碎过160至300目筛，得到鱼骨粉；
(2)将步骤(1)中获得的鱼骨粉进行第一次酶解，降解鱼骨胶原蛋白骨架，获得酶解粗产物；
(3)将步骤(2)中获得的酶解粗产物进行第二次酶解，获得酶解精产物，使得富硒糖蛋白降解为小分子多肽，其中分子量小于250Da的多肽质量比例超过80％；
(4)将步骤(3)中获得的酶解精产物，进行脱盐处理，获得脱盐后的酶解精产物；
(5)将步骤(4)中获得的脱盐后的酶解精产物固液分离后，取液相干燥，即制得所述鲟鱼骨肽。
2.如权利要求1所述的富硒鲟鱼骨肽的提取方法，其特征在于，步骤(2)具体步骤如下：
将步骤(1)中获得的鱼骨粉按照固液比1:1至1:2加水制成悬浊液，再加入胶原酶和纤维素酶进行酶解，其中胶原酶质量为鱼骨粉质量的0.3％至0.5％，纤维素酶质量为鱼骨粉质量的0.1％至0.4％，酶解0.5小时至1.5小时，期间持续搅拌维持温度在25至30℃；加热至90℃以上，维持30以上分钟灭酶。
3.如权利要求1所述的富硒鲟鱼骨肽的提取方法，其特征在于，步骤(3)具体步骤如下：
将步骤(2)中获得的酶解粗产物，加入碱液调节pH值在7.5至8.0，加入质量分数在3％至5％的聚乙二醇，加入鱼骨粉质量0.5％至1.0％的混合蛋白酶，酶解2小时以上，期间每0.5小时至2小时搅拌一次维持体系均匀，并监测pH值，使得pH值维持在7.5至8.0之间。
4.如权利要求3所述的富硒鲟鱼骨肽的提取方法，其特征在于，步骤(3)所述混合蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶、胰酶、以及菠萝蛋白酶按照质量比1:1～2.5:0.8～1.2的混合。
5.如权利要求4所述的富硒鲟鱼骨肽的提取方法，其特征在于，步骤(3)所述混合蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶、胰酶、以及菠萝蛋白酶按照质量比为1:2.5:1。
6.如权利要求1所述的富硒鲟鱼骨肽的提取方法，其特征在于，步骤(4)所述脱盐处理为反渗透脱盐处理。
7.如权利要求6所述的富硒鲟鱼骨肽的提取方法，其特征在于，所述步骤(4)反渗透脱盐处理参数为：压力1MP至1.5MP，温度25℃，醋酸纤维膜，脱盐率70％或以上。
8.一种富硒鲟鱼骨肽的提取产品，其特征在于，按照如权利要求1至7任意一项所述的富硒鲟鱼骨肽的提取方法提取。
9.如权利要求8所述的富硒鲟鱼骨肽的提取产品，其特征在于，硒含量在0.7mg/kg至0.9mg/kg之间。
10.如权利要求8或9所述的富硒鲟鱼骨肽的提取产品，其特征在于，分子量小于或等于243Da的多肽质量分数在80％以上。
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