CN105087728A - 一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽的制备方法 - Google Patents
一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽的制备方法，将金枪鱼鱼骨粉碎后进行预处理，然后酶解，最后加入富硒酵母而制得。本发明的制备方法生产周期短，得率高，产品纯度高，去除了苦腥味，口感好，并利于人体吸收；为补硒保健食品与药物开发提供了一种技术支持，同时也为金枪鱼鱼骨的高值化利用提供了一条新思路。
Description
技术领域
本发明属于水产品精深加工技术领域，尤其涉及一种提高纯度与提取率，去除苦腥味、提高口感、利于人体吸收的金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽的制备方法。
背景技术
金枪鱼（Tunas）又叫鲔鱼、吞拿鱼，属鲈形目鲭科，作为一种深海鱼类，金枪鱼不仅肉味鲜美，而且营养价值非常高，富含蛋白质，不饱和脂肪酸和维生素，以纯天然，营养价值高而享誉国际市场。金枪鱼的主要加工种类有蓝鳍金枪鱼，长鳍金枪鱼，黄鳍金枪鱼和大眼金枪鱼。浙江省是我国金枪鱼加工中心，拥有全国最大的金枪鱼加工基地，金枪鱼除了鲜销外，其加工产品的附加值非常高，一般经过冷冻处理用于制作寿司及罐装食品。金枪鱼在加工过程中占总重量25-30%的鱼骨多数加工成鱼骨粉或者作为废弃物丢掉，浪费了宝贵的渔业资源。
胶原肽以其在医药、保健品、食品和化妆品等应用上的独特功效被越来越多的消费者所青睐，使其成为食品行业和保健品行业、日化行业所竞相关注的焦点。硒有抗癌作用、抗氧化作用，能够增强人体免疫力，科学界研究发现，血硒水平的高低与癌的发生息息相关。大量的调查资料说明，一个地区食物和土壤中硒含量的高低与癌症的发病率有直接关系，例如：此地区的食物和土壤中的硒含量高，癌症的发病率和死亡率就低，反之，这个地区的癌症发病率和死亡率就高，事实说明硒与癌症的发生有着密切关系。同时科学界也认识到硒具有预防癌症作用，是人体微量元素的“防癌之王”。
发明内容
本发明的目的在于为了解决金枪鱼在加工过程中占总重量25-30%的鱼骨多数加工成鱼骨粉或者作为废弃物丢掉，浪费了宝贵的渔业资源的缺陷而提供一种提高纯度与提取率，去除苦腥味、提高口感、利于人体吸收的金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽的制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
a）清理金枪鱼鱼骨上面的鱼肉及污物后清洗、干燥，粗粉碎至2-3cm的颗粒，将鱼骨颗粒浸入浸泡液中，温度45-55℃，浸泡时间2-4h，捞出沥干后超微粉粹至粒径10-20μm的鱼骨粉末，-10℃下保存备用；
b）将步骤a）得到的鱼骨粉末加入至1-3mol/L的柠檬酸溶液中，并加热至55-65℃，超声震荡3-5h，13000-15000r/min离心15min后取上清液，加入添加剂，静置2-4h后15000r/min离心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在-20℃下保存10-12h，得到鱼骨胶原蛋白；
c）向步骤c）得到的鱼骨胶原蛋白中加入去离子水，调节pH至1.3-2.3，再加入胃蛋白酶，酶解反应1-2h后灭酶活，然后调节pH至7.5-8.5，加入胰蛋白酶，酶解反应5-6h，得到酶解产物；
d）将步骤c）得到的酶解产物采用2500Da超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于2500Da部分，得到超滤酶解液；玻璃吸附柱中装填质量比为3:1:2的活性炭、石墨粉与纳米银，超滤酶解液以50-85mL/min的流速进行循环层析，层析次数10-20次，然后以12000-15000r/min离心2-4min，收集上清液，向上清液底部注射富硒酵母粉末，喷雾干燥得到金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽。
在本技术方案中，硒有抗癌作用、抗氧化作用，能够增强人体免疫力，科学界研究发现，血硒水平的高低与癌的发生息息相关。大量的调查资料说明，一个地区食物和土壤中硒含量的高低与癌症的发病率有直接关系，例如：此地区的食物和土壤中的硒含量高，癌症的发病率和死亡率就低，反之，这个地区的癌症发病率和死亡率就高，事实说明硒与癌症的发生有着密切关系。同时科学界也认识到硒具有预防癌症作用，是人体微量元素的“防癌之王”。
本发明以金枪鱼鱼骨为原材料，原料来源广，工艺步骤简单，克服了胶原蛋白传统工艺缺点产品的生产周期长、酶解液除杂不彻底、成品具有苦腥味、口感差、产品分子量分布广，不利于人体吸收的缺点，本发明的制备方法生产周期短，得率高，产品纯度高，去除了苦腥味，口感好，并利于人体吸收。
作为优选，步骤a）中浸泡液由以下重量份的原料组成：生姜45-50份、山楂20-25份、蜂巢14-26份、野菊花1-5份、茶叶30-40份、碳酸氢钠15-18份、海藻酸钠12-15份与水100-150份，鱼骨颗粒与浸泡液的质量比为1:10。在本技术方案中，浸泡液主要是为了去除苦腥味。
作为优选，步骤b）中添加剂由以下重量份的原料组成：食盐6-10份、果糖5-7份、盐酸硫胺素3-5份、天冬酰胺10-15份、蛋氨酸12-15份，添加剂的加入量为鱼骨粉末质量的2-3.5倍，鱼骨粉末与柠檬酸溶液的料液比为1g：30mL。
作为优选，步骤d）中活性炭的粒度为400目、比表面积1450㎡，石墨粉的粒径为15-25μm。
作为优选，循环层析时在外部施加磁场，磁场的强度为0.2-1.8T。
作为优选，胃蛋白酶的酶活力为40万U/克，胰蛋白酶的酶活力为200万U/克，胃蛋白酶的加入量为鱼骨胶原蛋白的0.3-0.8%，胰蛋白酶的加入量为鱼骨胶原蛋白的0.4-0.7%。
作为优选，浸泡液制备时，先将水加热至85℃，加入生姜、山楂、蜂巢、野菊花与茶叶，继续加热至水沸腾5次后降温到45-55℃，然后加入碳酸氢钠与海藻酸钠而制得。
作为优选，步骤b）中超声波功率为55-65kw。
本发明的有益效果是：本发明的制备方法生产周期短，得率高，产品纯度高，去除了苦腥味，口感好，并利于人体吸收；为补硒保健食品与药物开发提供了一种技术支持，同时也为金枪鱼鱼骨的高值化利用提供了一条新思路。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明作进一步的解释：
若未特指，其工艺为现有工艺；本发明所用原料均可从市场购得。
富硒酵母购自武汉能仁医药化工有限公司；胰蛋白酶，胃蛋白酶购自国药集团化学试剂有限公司。
实施例1
一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
a）清理金枪鱼鱼骨上面的鱼肉及污物后清洗、干燥，粗粉碎至2-3cm的颗粒，将鱼骨颗粒浸入浸泡液中，温度45℃，浸泡时间2h，捞出沥干后超微粉粹至粒径10-20μm的鱼骨粉末，-10℃下保存备用；其中，浸泡液由以下重量份的原料组成：生姜45份、山楂20份、蜂巢14份、野菊花1份、茶叶30份、碳酸氢钠15份、海藻酸钠12份与水100份，鱼骨颗粒与浸泡液的质量比为1:10；浸泡液制备时，先将水加热至85℃，加入生姜、山楂、蜂巢、野菊花与茶叶，继续加热至水沸腾5次后降温到45℃，然后加入碳酸氢钠与海藻酸钠而制得；
b）将步骤a）得到的鱼骨粉末加入至1mol/L的柠檬酸溶液中，并加热至55℃，超声震荡3h，13000r/min离心15min后取上清液，加入添加剂，静置2h后15000r/min离心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在-20℃下保存10h，得到鱼骨胶原蛋白；其中，步骤b）中添加剂由以下重量份的原料组成：食盐6份、果糖5份、盐酸硫胺素3份、天冬酰胺10份、蛋氨酸12份，添加剂的加入量为鱼骨粉末质量的2倍；步骤b）中超声波功率为55kw，鱼骨粉末与柠檬酸溶液的料液比为1g：30mL；
c）向步骤c）得到的鱼骨胶原蛋白中加入去离子水，调节pH至1.3，再加入胃蛋白酶，酶解反应1h后灭酶活，然后调节pH至7.5，加入胰蛋白酶，酶解反应5h，得到酶解产物；胃蛋白酶的酶活力为40万U/克，胰蛋白酶的酶活力为200万U/克，胃蛋白酶的加入量为鱼骨胶原蛋白的0.3%，胰蛋白酶的加入量为鱼骨胶原蛋白的0.4%；
d）将步骤c）得到的酶解产物采用2500Da超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于2500Da部分，得到超滤酶解液；玻璃吸附柱中装填质量比为3:1:2的活性炭、石墨粉与纳米银，超滤酶解液以50mL/min的流速进行循环层析，层析次数10次，然后以12000r/min离心2min，收集上清液，向上清液底部注射富硒酵母粉末，喷雾干燥得到金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽；其中，活性炭的粒度为400目、比表面积1450㎡，石墨粉的粒径为15-25μm；循环层析时在外部施加磁场，磁场的强度为0.2T。金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽的得率93%，纯度82%。
实施例2
一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
a）清理金枪鱼鱼骨上面的鱼肉及污物后清洗、干燥，粗粉碎至2-3cm的颗粒，将鱼骨颗粒浸入浸泡液中，温度50℃，浸泡时间2-4h，捞出沥干后超微粉粹至粒径10-20μm的鱼骨粉末，-10℃下保存备用；其中，浸泡液由以下重量份的原料组成：生姜48份、山楂23份、蜂巢18份、野菊花3份、茶叶35份、碳酸氢钠17份、海藻酸钠14份与水130份，鱼骨颗粒与浸泡液的质量比为1:10；浸泡液制备时，先将水加热至85℃，加入生姜、山楂、蜂巢、野菊花与茶叶，继续加热至水沸腾5次后降温到50℃，然后加入碳酸氢钠与海藻酸钠而制得；
b）将步骤a）得到的鱼骨粉末加入至2mol/L的柠檬酸溶液中，并加热至60℃，超声震荡4h，14000r/min离心15min后取上清液，加入添加剂，静置3h后15000r/min离心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在-20℃下保存11h，得到鱼骨胶原蛋白；其中，步骤b）中添加剂由以下重量份的原料组成：食盐8份、果糖6份、盐酸硫胺素4份、天冬酰胺12份、蛋氨酸13份，添加剂的加入量为鱼骨粉末质量的3倍；步骤b）中超声波功率为60kw，鱼骨粉末与柠檬酸溶液的料液比为1g：30mL；
c）向步骤c）得到的鱼骨胶原蛋白中加入去离子水，调节pH至1.8，再加入胃蛋白酶，酶解反应1.5h后灭酶活，然后调节pH至7.9，加入胰蛋白酶，酶解反应5.5h，得到酶解产物；胃蛋白酶的酶活力为40万U/克，胰蛋白酶的酶活力为200万U/克，胃蛋白酶的加入量为鱼骨胶原蛋白的0.5%，胰蛋白酶的加入量为鱼骨胶原蛋白的0.55%；
d）将步骤c）得到的酶解产物采用2500Da超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于2500Da部分，得到超滤酶解液；玻璃吸附柱中装填质量比为3:1:2的活性炭、石墨粉与纳米银，超滤酶解液以60mL/min的流速进行循环层析，层析次数15次，然后以14000r/min离心3min，收集上清液，向上清液底部注射富硒酵母粉末，喷雾干燥得到金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽；其中，活性炭的粒度为400目、比表面积1450㎡，石墨粉的粒径为15-25μm。金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽的得率88%，纯度79%。
实施例3
一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
a）清理金枪鱼鱼骨上面的鱼肉及污物后清洗、干燥，粗粉碎至2-3cm的颗粒，将鱼骨颗粒浸入浸泡液中，温度55℃，浸泡时间2-4h，捞出沥干后超微粉粹至粒径10-20μm的鱼骨粉末，-10℃下保存备用；其中，浸泡液由以下重量份的原料组成：生姜50份、山楂25份、蜂巢26份、野菊花5份、茶叶40份、碳酸氢钠18份、海藻酸钠15份与水150份，鱼骨颗粒与浸泡液的质量比为1:10；浸泡液制备时，先将水加热至85℃，加入生姜、山楂、蜂巢、野菊花与茶叶，继续加热至水沸腾5次后降温到55℃，然后加入碳酸氢钠与海藻酸钠而制得；
b）将步骤a）得到的鱼骨粉末加入至3mol/L的柠檬酸溶液中，并加热至65℃，超声震荡5h，15000r/min离心15min后取上清液，加入添加剂，静置4h后15000r/min离心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在-20℃下保存12h，得到鱼骨胶原蛋白；其中，步骤b）中添加剂由以下重量份的原料组成：食盐10份、果糖7份、盐酸硫胺素5份、天冬酰胺15份、蛋氨酸15份，添加剂的加入量为鱼骨粉末质量的3.5倍；步骤b）中超声波功率为65kw，鱼骨粉末与柠檬酸溶液的料液比为1g：30mL；
c）向步骤c）得到的鱼骨胶原蛋白中加入去离子水，调节pH至2.3，再加入胃蛋白酶，酶解反应2h后灭酶活，然后调节pH至8.5，加入胰蛋白酶，酶解反应6h，得到酶解产物；胃蛋白酶的酶活力为40万U/克，胰蛋白酶的酶活力为200万U/克，胃蛋白酶的加入量为鱼骨胶原蛋白的0.8%，胰蛋白酶的加入量为鱼骨胶原蛋白的0.7%；
d）将步骤c）得到的酶解产物采用2500Da超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于2500Da部分，得到超滤酶解液；玻璃吸附柱中装填质量比为3:1:2的活性炭、石墨粉与纳米银，超滤酶解液以85mL/min的流速进行循环层析，层析次数20次，然后以15000r/min离心4min，收集上清液，向上清液底部注射富硒酵母粉末，喷雾干燥得到金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽；其中，活性炭的粒度为400目、比表面积1450㎡，石墨粉的粒径为15-25μm；循环层析时在外部施加磁场，磁场的强度为1.8T。金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽的得率92%，纯度75%。
本发明的制备方法生产周期短，得率高，产品纯度高，去除了苦腥味，口感好，并利于人体吸收；为补硒保健食品与药物开发提供了一种技术支持，同时也为金枪鱼鱼骨的高值化利用提供了一条新思路。
Claims (8)
1.一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
a）清理金枪鱼鱼骨上面的鱼肉及污物后清洗、干燥，粗粉碎至2-3cm的颗粒，将鱼骨颗粒浸入浸泡液中，温度45-55℃，浸泡时间2-4h，捞出沥干后超微粉粹至粒径10-20μm的鱼骨粉末，-10℃下保存备用；
b）将步骤a）得到的鱼骨粉末加入至1-3mol/L的柠檬酸溶液中，并加热至55-65℃，超声震荡3-5h，13000-15000r/min离心15min后取上清液，加入添加剂，静置2-4h后15000r/min离心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在-20℃下保存10-12h，得到鱼骨胶原蛋白；
c）向步骤c）得到的鱼骨胶原蛋白中加入去离子水，调节pH至1.3-2.3，再加入胃蛋白酶，酶解反应1-2h后灭酶活，然后调节pH至7.5-8.5，加入胰蛋白酶，酶解反应5-6h，得到酶解产物；
d）将步骤c）得到的酶解产物采用2500Da超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于2500Da部分，得到超滤酶解液；玻璃吸附柱中装填质量比为3:1:2的活性炭、石墨粉与纳米银，超滤酶解液以50-85mL/min的流速进行循环层析，层析次数10-20次，然后以12000-15000r/min离心2-4min，收集上清液，向上清液底部注射富硒酵母粉末，喷雾干燥得到金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽。
2.根据权利要求1所述的一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽的制备方法，其特征在于，步骤a）中浸泡液由以下重量份的原料组成：生姜45-50份、山楂20-25份、蜂巢14-26份、野菊花1-5份、茶叶30-40份、碳酸氢钠15-18份、海藻酸钠12-15份与水100-150份，鱼骨颗粒与浸泡液的质量比为1:10。
3.根据权利要求1所述的一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽的制备方法，其特征在于，步骤b）中添加剂由以下重量份的原料组成：食盐6-10份、果糖5-7份、盐酸硫胺素3-5份、天冬酰胺10-15份、蛋氨酸12-15份，添加剂的加入量为鱼骨粉末质量的2-3.5倍，鱼骨粉末与柠檬酸溶液的料液比为1g：30mL。
4.根据权利要求1所述的一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽的制备方法，其特征在于，步骤d）中活性炭的粒度为400目，比表面积1450㎡，石墨粉的粒径为15-25μm。
5.根据权利要求1所述的一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽的制备方法，其特征在于，循环层析时在外部施加磁场，磁场的强度为0.2-1.8T。
6.根据权利要求1所述的一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽的制备方法，其特征在于，胃蛋白酶的酶活力为40万U/克，胰蛋白酶的酶活力为200万U/克，胃蛋白酶的加入量为鱼骨胶原蛋白的0.3-0.8%，胰蛋白酶的加入量为鱼骨胶原蛋白的0.4-0.7%。
7.根据权利要求2所述的一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽的制备方法，其特征在于，浸泡液制备时，先将水加热至85℃，加入生姜、山楂、蜂巢、野菊花与茶叶，继续加热至水沸腾5次后降温到45-55℃，然后加入碳酸氢钠与海藻酸钠而制得。
8.根据权利要求1所述的一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽的制备方法，其特征在于，步骤b）中超声波功率为55-65kw。
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