CN100391476C - 一种延缓衰老、提高免疫力的药物组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种由羊胎盘冻干粉和蝙蝠蛾拟青霉菌粉制成的药物组合物，该药物组合物具有延缓衰老、提高免疫力的作用。实验结果表明该药物组合物提高足跖肿胀度、提高PFC数量、提高血清溶血素、提高碳廓清指数、提高血清SOD活力、提高谷胱甘肽过氧化物酶活力或降低心肌脂褐素含量或降低丙二醛含量。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物组合物及其制备工艺，特别涉及一种延缓衰老、提高免疫力的药物组合物及其制备工艺。
背景技术
衰老是任何多细胞生物随着时间的推移而产生的一种自发性的必然过程，一般是指随着年龄的增长，而产生的一系列生理学和解剖学方面的变化，表现为：皱纹、色斑(老年斑)、皮肤松弛、眼袋出现、肤色晦暗、脱发白发、失眠、疲劳、头晕心慌、便秘、血脂血糖升高、关节炎、视力退化、性功能下降等等，由于衰老使人体代谢功能和免疫力下降，引发各种疾病的危险性大大增加，如感冒、中风、老年痴呆、心脏病、高血压、内分泌失调、癌症等。
人体自身有一套免疫系统，当遇到病毒入侵时，就会自发产生抗体(抗病因子)来杀灭病毒，使人体有一定的抗病能力，这就是人体免疫力。每个人的免疫力是不同的，免疫力强的人不易生病，而免疫力弱的人一遇到病毒侵袭，就易诱发各种病症。免疫功能低下极易招致细菌、病毒、真菌等感染，因此免疫力低下最直接的表现就是容易生病。因经常患病，加重了机体的消耗，所以一般有体质虚弱、营养不良、精神萎靡、疲乏无力、食欲降低、睡眠障碍等表现，生病、打针吃药便成了家常便饭。每次生病都要很长时问才能恢复，而且常常反复发作。长此以往会导致身体和智力发育不良，还易诱发重大疾病。
人们为实现延缓衰老、延长寿命、提高免疫力的目的，采用了各种方法，除经常运动外，采用最多的方法就是服用各种具有延缓衰老、提高免疫力功能的食品及保健食品。随着人们对生活质量的不断提高，市场对具有延缓衰老、免疫调节功能保健食品的需求与日俱增，研制开发一种效果显著、无任何毒副作用的具有延缓衰老、提高免疫力功能的保健食品已势在必行。
发明内容
本发明目的在于公开一种药物组合物及其制备工艺。
本发明目的是通过如下技术方案实现：
本发明药物组合物的原料药组成为：羊胎盘冻干粉1-10重量份，蝙蝠蛾拟青霉菌粉1重量份。
上述两味原料药优选重量配比如下：
羊胎盘冻干粉2重量份，蝙蝠蛾拟青霉菌粉1重量份；
羊胎盘冻干粉5重量份，蝙蝠蛾拟青霉菌粉1重量份；
或羊胎盘冻干粉9重量份，蝙蝠蛾拟青霉菌粉1重量份。
取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床可接受的剂型，如：颗粒剂、胶囊剂、滴丸剂、片剂、口服液体制剂等。
本发明的羊胎盘冻干粉原料可直接从市场购得，或将羊胎盘经超低温冷冻工艺制成。超低温冷冻干燥依照冻干曲线操作，冷冻温度低温在零下20℃以下，高温在50℃以下。
本发明药物组合物具有延缓衰老、提高免疫力的作用。实验结果表明本发明药物组合物提高足跖肿胀度、提高抗体生成细胞(PFC)数量、提高血清溶血素、提高碳廓清指数、提高血清超氧化物歧化酶(SOD)活力、提高谷胱甘肽过氧化物酶活力、降低心肌脂褐素含量或降低丙二醛含量；延长果蝇最高寿命，且本发明药物组合物无毒副作用。
下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1本药物组合物胶囊的免疫调节作用实验
实验动物：昆明2个龄雌性二级小鼠，体重18-22g，按体重随机分为4组，组间体重经T检验无显著差异(p＞0.05)。剂量选择：受试物是人体推荐剂量为每日1.98g/60kg.bw的定型产品(本发明实施例1制备)，小鼠的等效剂量相当于人体推荐剂量的10倍。分别以人体推荐5倍、10倍和30倍作为低(0.165g/kg.bw)、中(0.33g/kg.bw)、高(0.990g/kb.bw)剂量。采取灌胃法，每日灌胃一次，对照组灌同等体积的蒸馏水。各组小鼠连续给予受试物4周后，测定以下各项指标。
迟发型变态反应(DTH)(足跖增厚法)
腹腔注射0.2mL2％(V/V)SRBC免疫每只小鼠。免疫4d后，用螺旋测微器测量左后足跖厚度，然后在测量部位皮下注射0.020mL20％(V/V)SRBC，24h后测量左后足跖厚度。同一部位测量三次，取平均值。以攻击前后足跖厚度的差值来表示DTH的程度。
表1对正常小鼠迟发型变态反应的影响(X±SD)
*：与空白对照组比较有显著性差异(p＜0.05)
**：与空白对照组比较有非常显著性差异(p＜0.01)
由上表可见，经口给予小鼠不同剂量的受试物4周后，与空白对照组比较，低、中、高剂量组足跖肿胀度分别提高25％(p＜0.05)、27％(p＜0.01)、25％(p＜0.01)。
抗体生成细胞(PFC)检测
腹腔注射0.2mL20％(V/V)SRBC免疫每只小鼠。5d后，取小鼠脾脏制成细胞浓度为5×106个/mL的脾细胞液。溶解琼脂糖制成1％的溶液，于48.0℃水浴保温，与等量2倍浓度的Hank’s液混合，分装至小试管中。每管0.50mL，加入0.050mL10％SRBC和0.010mL脾细胞悬液，迅速混匀，倾倒在玻片上，于37.0℃恒温箱中温育1h，将补体加在玻片槽中，再温育1.5h。计数空斑。
表2对正常小鼠抗体生成细胞(PFC)的影响(X±SD)
单位：log10空斑数/全脾
*：与空白对照组比较有显著性差异(p＜0.05)
**：与空白对照组比较有非常显著性差异(p＜0.01)
由上表可见，经口给予小鼠不同剂量的受试物4周后，与空白对照组比较，低、中、高剂量组的抗体生成细胞(PFC)数量分别提高8％(p＜0.01)、6％(p＜0.05)和7％(p＜0.01)。
血清溶血素的测定
腹腔注射0.2mL20％(V/V)SRBC免疫每只小鼠。5d后，摘眼球取血于离心管内，放置1h，2000r/min离心10min，收集血清。小鼠血清SA液稀释400倍，依次加入稀释的小鼠血清1.00mL、10％(V/V)的SRBC0.50mL、补体(用SA液1∶10稀释)1.00mL。另设不加血清的对照管(SA液代替)。置37.0℃水浴20min后冰水浴终止反应。2000r/min。离心10min。取上清液1.00mL，都氏试剂3.00ml于试管内，同时取10％(V/V)的SRBC0.25mL加都试剂4.00mL作为半数溶血管。放置10min后，540nm波长处测定光密度值。试验结果以半数溶血值(HC50)表示。
表3对正常小鼠血清溶血素的影响(X±SD)
*：与空白对照组比较有显著性差异(p＜0.05)
由上表可见，经口给予小鼠不同剂量的受试物4周后，与空白对照组比较，低、高剂量组的HC50分别提高64％(p＜0.05)和61％(p＜0.05)。
小鼠碳廓清实验
对每只小鼠尾静脉注射稀释5倍的印度墨汁，0.1mL/10g体重。待墨汁注入后立即记时。分别于注入墨汁后1、10min取血0.020mL加至2.00mL碳酸钠溶液中，600nm波长处测定光密度值，以碳酸钠溶液作对照。另取肝脏脾脏称重。以吞噬指数来表示巨噬细胞吞噬功能。
表4对正常小鼠的碳廓清的影响(X±SD)
*：与空白对照组比较有显著性差异(p＜0.05)
由上表可见，经口给予小鼠不同剂量的受试物4周后，与空白对照组比较，高剂量组的碳廓清指数提高7％(p＜0.05)。
实验例2本药物组合物胶囊的延缓衰老作用实验
实验动物：健康二级昆明种10月龄雌性小鼠，随机分为4组，组间体重经t检验无显著差异。美国野生型黑腹果蝇(Origen K)。剂量选择：受试物是人体推荐剂量为每日1.98g/60kg.bw的定型产品(本发明实施例2制备)。小鼠的等效剂量相当于人体推荐剂量的10倍。分别以人体推荐剂量的5倍、10倍和30倍作为低(0.165g/kg.bw)、中(0.330g/kg.bw)、高剂量(0.990g/kg.bw)。采取灌胃法，每日灌胃一次，对照组灌蒸馏水。各组小鼠连续给予受试物56天后，测定以下各项指标。
受试物对老龄小鼠心肌脂褐素的影响
取出心肌，去除结缔组织和脂肪后，称重，在匀浆器中加入氯仿甲醇提取液(2∶1)匀浆，提取指褐质2-3次，将几次提取液合并起来，定容至7.0mL。将提取液以3000转分钟离心10分钟，取上清液用于测定荧光强度，激发波长360nm，放射波长450nm，以硫酸奎宁(1μg/mL，0.1mol/L硫酸)为标准对照，其荧光强度定为50单位(Is)。在该条件下测定样品荧光强度(Ix)，氯仿甲醇溶液为空白对照。
表5受试物对老龄小鼠心肌脂褐素的影响(X±SD)
*：与空白对照组比较有显著性差异(p＜0.05)
上表表明，经口给予老龄小鼠不同剂量受试物56天后，与空白对照组相比，中剂量组心肌脂褐素含量降低44％(p＜0.05)
受试物对老龄小鼠血清丙二醛含量的影响
表6血清丙二醛含量的测定
混匀后，95℃水浴(开盖煮沸)40分钟，取出后3500-4000r/min离心10min，蒸馏水调零，532nm处比色。
表7受试物对老龄小鼠血清丙二醛含量的影响(X±SD)
**：与空白对照组比较有非常显著差异(p＜0.01)
***：与空白对照组比较有极显著性差异(p＜0.001)
上表证明，经口给予老龄小鼠不同剂量受试物56天后，与空白对照组相比，低、中和高剂量组血清丙二醛含量分别降低37％(p＜0.01)、46％.(p＜0.001)和42％(p＜0.001)。
受试物对老龄小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活力的影响
表8血清超氧化物歧化酶活力测定
每mL反应液中超氧化物歧化酶(SOD)抑制率达50％时所对应的超氧化物歧化酶(SOD)量为一个单位。
表9受试物对老龄小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活力的影响(X±SD)
*：与空白对照组比较有显著差异(p＜0.05)
经口给予老龄小鼠不同剂量受试物56天后，与空白对照组相比，中剂量组血清超氧化物歧化酶(SOD)活力提高10％(p＜0.05)。
受试物对老龄小鼠全血谷胱甘肽过氧化物酶活力的影响
取鼠血10μl加入到1mL双蒸水中，充分振摇，制成血样稀释液。
表10全血中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力测定
全血GSH-Px活力单位：规定1mL全血在1min内，扣除非酶反应的1g[GSH]降低后，使1g[GSH]降低1为一个活力单位。
表11受试物对老龄小鼠全血谷胱甘肽过氧化物酶活力的影响(X±SD)
*：与空白对照组比较有显著差异(p＜0.05)
**：与空白对照组比较有非常显著差异(p＜0.01)
经口给予老龄小鼠不同剂量受试物56天后，与空白对照组相比，中、高剂量组小鼠全血谷胱甘肽过氧化物酶活力分别提高12％(p＜0.01)和9％(p＜0.05)。
实验例3果蝇寿命实验
实验材料：上海铁道大学医学院提供的美国野生型黑腹果蝇(Origen K)。剂量选择：设一个空白对照组和4个剂量组(本发明实施例6制备)，各剂量组饲料含受试物浓度分别为：0％、0.02％、0.06％、0.18％、0.54％。检测方法：卵、幼虫、蛹及成虫均培养在25±1℃，相对湿度40-70(％)的生化培养箱中。将常用基础饲料煮成粥后，分装于无菌培养试管中，每支培养管用无菌海绵塞封口。成虫基础饲料第4天更换一次，将培养管平放在培养箱内饲养。收集6小时内孵出的成虫进行分组。在此时间范围内孵化的果蝇均未交配。用乙醚麻醉后称重分组。选择个体大小相近的果蝇。每管20只，雌雄分养。每组雌雄果蝇各200只。在成虫期给受试物，受试物掺入到预先溶化的50℃基础饲料中，并保持各组PH值一致，每天定时统计果蝇存活数和死亡数。直至全部死亡。每组最后死亡的20只果蝇存活的天数的平均数为该组的最高寿命，实验结果，计算平均寿命和最高寿命以及半数死亡时间。
表12受试物对果蝇半数死亡时间的影响
表13受试物对果蝇寿命的影响(X±SD)
*：与空白对照组比较有显著差异(p＜0.05)
***：与空白对照组比较有极显著差异(p＜0.001)
与空白对照组相比(受试物浓度0％)，受试物浓度0.02％的雌性果蝇最高寿命延长2％(p＜0.05)。受试物浓度0.06％的雌性果蝇半数死亡时间延长7天，平均寿命延长12％(p＜0.001)，最高寿命延长了2％(p＜0.001)；雄性果蝇半数死亡时间延长7天，平均寿命延长12％(p＜0.001)，最高寿命延长了2％(p＜0.05)。受试物浓度0.18％的雌性果蝇半数死亡时间延长8天，平均寿命延长15％(p＜0.001)，最高寿命延长4％(p＜0.001)；雄性果蝇半数死亡时间延长10天，平均寿命延长17％(p＜0.001)，最高寿命延长4％(p＜0.001)。受试物浓度0.54％的雌性果蝇半数死亡时间延长3天，平均寿命延长6％(p＜0.001)，最高寿命延长了3％(p＜0.001)；雄性果蝇半数死亡时间延长13天，平均寿命延长23％(p＜0.001)，最高寿命延长了3％(p＜0.001)。
实验例4本药物组合物制剂与单味原料药免疫调节作用对比
实验动物：昆明种小鼠由河北省实验动物中心提供，合格证号冀动字04056号，试验观察期间，饲以该中心提供的固体饲料，自由饮水。剂量选择：受试物是人体推荐剂量为每日1.98g/60kg.bw的定型产品，小鼠的等效剂量相当于人体推荐剂量的10倍，以人体推荐5倍(0.165g/kg.bw)，其他对照组均采用此剂量。
对小鼠溶血素锈生能力的影响
取小鼠60只，体重为30±3g，雌雄各半，随机分为5组：正常组、模型组、羊胎盘冻干粉组、蝙蝠蛾拟青霉菌粉组、本药物组(本发明实施例7制备)。正常组、模型组灌胃给与等体积的蒸馏水，其余3组灌胃给药量均为0.165g/kg，每天1次，连续11天。除正常组外，其余4组小鼠按40mg/kg.d腹腔注射环磷酰胺，连续3天。第6天，各组小鼠均腹腔注射5％鸡红细胞悬液(0.2ml/只)。第12天，各组小鼠摘眼球取血，离心取血清，用生理盐水将血清稀释100倍，取稀释血清1ml，与5％鸡红细胞悬液0.5ml，10％豚鼠血清0.5ml混合。在37℃恒温箱中温育30min后，置于0℃冰箱中止反应，离心。取上清液于Lambdal2型分光光度计于605nm比色，测定吸光度，另设不加小鼠血清测定结果的空白对照品调零。进行t检验。
表14对小鼠溶血素水平的影响(n＝12，X±S)
注：模型组与正常组比较△△△P＜0.001，△△P＜0.01，△P＜0.05
各药物组与模型组比较▲▲▲P＜0.001，▲▲P＜0.01，▲P＜0.05
本药物组与单味药物组比较★★★P＜0.001，★★P＜0.01，★P＜0.05
与正常组比较，模拟组的血清溶血素水平显著降低，表示造模成功。受试药物各组的血清溶血素水平明显高于模拟组，说明各组受试药物均有提高免疫力低下小鼠的锈生溶血素能力，本药物组较其他单味药组效果显著。
小鼠碳粒廓清试验
取小鼠60只，体重为30±3g，雌雄各半，随机分为5组：正常组、模型组、羊胎盘冻干粉组、蝙蝠蛾拟青霉菌粉组、本药物组(本发明实施例1制备)。正常组、模型组灌胃给与等体积的蒸馏水，其余3组灌胃给药量均为0.165g/kg，每天1次，连续7天。除正常组外，其余4组小鼠按40mg/kg.d腹腔注射环磷酰胺，连续3天。第7天，灌胃给药0.5h后，各组小鼠尾静脉注射印度墨水(1∶4稀释，0.1mol/10g)，注射后2min及10min，于眼眶后静脉丛分别采血20μl(用20μl自控式微量吸管吸取)，溶于2μl的0.1％Na2CO3溶液中，于604nm处比色测定吸光度，以不加血的0.1％Na2CO3溶液调零。取肝肾脾称重，计算校正炭粒廓清指数α。结果以炭粒廓清指数(K)和校正炭粒廓清指数(α)为指标，进行t检验。
表15对小鼠炭粒廓清指数及校正指数的影响(X±SD)
注：模型组与正常组比较△△△P＜0.001，△△P＜0.01，△P＜0.05
各药物组与模型组比较▲▲▲P＜0.001，▲▲P＜0.01，▲P＜0.05
本药物组与单味药物组比较★★★P＜0.001，★★P＜0.01，★P＜0.05
与正常组比较，模型组的炭粒廓清指数(K)及校正炭粒廓清指数(α)降低(P＜0.001)。受试药物各组均能显著升高炭粒廓清指数(K)及校正炭粒廓清指数(α)，说明均有提高免疫力功能，本药物组较单味药物组效果显著。
实验例5本药物组合物制剂与单味原料果蝇寿命实验对比
实验材料：上海铁道大学医学院提供的美国野生型黑腹果蝇(Origen K)。剂量选择：随机分为4组：空白对照组、羊胎盘冻干粉组、蝙蝠蛾拟青霉菌粉组、本药物组(本发明实施例5制备)。饲料含受试物浓度均为0.06％。检测方法：卵、幼虫、蛹及成虫均培养在25±1℃，相对湿度40-70(％)的生化培养箱中。将常用基础饲料煮成粥后，分装于无菌培养试管中，每支培养管用无菌海绵塞封口。成虫基础饲料第4天更换一次，将培养管平放在培养箱内饲养。收集6小时内孵出的成虫进行分组。在此时间范围内孵化的果蝇均未交配。用乙醚麻醉后称重分组。选择个体大小相近的果蝇。每管20只，雌雄分养。每组雌雄果蝇各200只。在成虫期给受试物，受试物掺入到预先溶化的50℃基础饲料中，并保持各组PH值一致，每天定时统计果蝇存活数和死亡数。直至全部死亡。每组最后死亡的20只果蝇存活的天数的平均数为该组的最高寿命，实验结果，计算平均寿命和最高寿命。进行t检验。
表16受试物对果蝇寿命的影响(X±SD)
注：空白组与药物组比较△△△P＜0.001，△△P＜0.01，△P＜0.05
本药物组与单味药物组比较★★★P＜0.001，★★P＜0.01，★P＜0.05
与空白对照组相比，受试药物各组均明显延长果蝇平均寿命、最高寿命。本药物组较其他单味药组相比显著性差异，表明本药物组延缓衰老作用强于单味药物组。
具体实施方式
实施例1：片剂的制备
羊胎盘冻干粉2kg，蝙蝠蛾拟青霉菌粉1kg
取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成片剂。
实施例2：胶囊的制备
羊胎盘冻干粉5kg，蝙蝠蛾拟青霉菌粉1kg
取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成胶囊。
实施例3：颗粒剂的制备
羊胎盘冻干粉9kg，蝙蝠蛾拟青霉菌粉1kg
取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成颗粒剂。
实施例4：口服液的制备
羊胎盘冻干粉5kg，蝙蝠蛾拟青霉菌粉1kg
取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成口服液。
实施例5：片剂的制备
羊胎盘冻干粉1kg，蝙蝠蛾拟青霉菌粉1kg
取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成片剂。
实施例6：滴丸的制备
羊胎盘冻干粉3kg，蝙蝠蛾拟青霉菌粉1kg
取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成滴丸。
实施例7：注射剂的制备
羊胎盘冻干粉7kg，蝙蝠蛾拟青霉菌粉1kg
取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成注射剂。
实施例8：口服液的制备
羊胎盘冻干粉9kg，蝙蝠蛾拟青霉菌粉1kg
取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成口服液。
Claims (9)
1.一种延缓衰老，提高免疫的药物组合物，其特征在于该药物组合物由如下原料药组成：羊胎盘冻干粉1-10重量份，蝙蝠蛾拟青霉菌粉1重量份。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物由由如下原料药组成：羊胎盘冻干粉2重量份，蝙蝠蛾拟青霉菌粉1重量份。
3.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物由由如下原料药组成：羊胎盘冻干粉5重量份，蝙蝠蛾拟青霉菌粉1重量份。
4.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物由由如下原料药组成：羊胎盘冻干粉9重量份，蝙蝠蛾拟青霉菌粉1重量份。
5.如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物制成片剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液体制剂、滴丸或注射剂。
6.如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物在制备具有延缓衰老、提高免疫力作用的药物中的应用。
7.如权利要求5所述的药物组合物在制备具有延缓衰老、提高免疫力作用的药物中的应用。
8.如权利要求6所述的应用，其中延缓衰老、提高免疫力是指药物组合物提高足跖肿胀度、提高抗体生成细胞数量、提高血清溶血素、提高碳廓清指数、提高血清超氧化物歧化酶活力、提高谷胱甘肽过氧化物酶活力、降低心肌脂褐素含量或降低丙二醛含量。
9.如权利要求7所述的应用，其中延缓衰老、提高免疫力是指药物组合物提高足跖肿胀度、提高抗体生成细胞数量、提高血清溶血素、提高碳廓清指数、提高血清超氧化物歧化酶活力、提高谷胱甘肽过氧化物酶活力、降低心肌脂褐素含量或降低丙二醛含量。
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2006
- 2006-08-07 CN CNB2006101097211A patent/CN100391476C/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1252280A (zh) * | 1999-09-23 | 2000-05-10 | 重庆润康药业有限公司 | 一种具有免疫调节功能的生物保健品 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 羊胎盘免疫调节因子对60Co-γ射线辐射损伤小鼠免疫功能影响的研究. 方廖琼等.食品科学，第27卷第1期. 2006 |
| 羊胎盘免疫调节因子对60Co-γ射线辐射损伤小鼠免疫功能影响的研究. 方廖琼等.食品科学，第27卷第1期. 2006 * |
| 虫草真菌对机体的免疫调节作用. 丁宝金等.中国临床药理学与治疗学，第9卷第1期. 2004 |
| 虫草真菌对机体的免疫调节作用. 丁宝金等.中国临床药理学与治疗学，第9卷第1期. 2004 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1887297A (zh) | 2007-01-03 |
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