CN110973640A - 一种黑鱼骨肽口服剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及营养制品技术领域，尤其是一种黑鱼骨肽口服剂的制备方法，以黑鱼鱼骨为原料，经过清洗、晾干、粉碎、过筛、调浆、酶解、灭酶、冷却接菌、高温杀菌、脱盐、除腥脱苦、分子量筛选、喷雾干燥一系列过程，制得有生物活性的黑鱼骨肽口服剂。本发明的一种黑鱼骨肽口服剂的制备方法，将黑鱼鱼骨中丰富的胶原蛋白通过蛋白酶酶解、有益菌发酵等适当处理，获得的黑鱼骨肽口服剂具有分子量小，易于吸收，促进新骨生成的显著优势，喷雾干燥技术实现缩短处理时间，利于产品的保藏。
Description
技术领域
本发明涉及营养制品技术领域，尤其是一种黑鱼骨肽口服剂的制备方法。
背景技术
我国是一个渔业大国，自1989年起水产品总产量一直居世界首位，2007年我国水产品总产量达4747.52万t，约占世界渔业总产量的1/3。随着渔业生产的迅猛发展、水产品消费的快速增长，以鱼骨为主的下脚料数量也在不断增加。然而，由于人们对鱼骨的剩余价值缺乏足够的认识，加上产业链的不够完善，以鱼骨为主的鱼类下脚料通常被直接丢弃或经过粗加工作为低值鱼粉用在饲料行业，造成环境污染或是资源浪费。面对以上突出问题，充分利用好鱼骨资源对当下发展的意义重大。进一步研究出科技含量高、附加值高的鱼骨资源新型产品是水产品行业推进其相关副产品开发的热门方向。
发明内容
为了克服现有的鱼骨剩余价值利用率低的不足，本发明提供了一种黑鱼骨肽口服剂的制备方法，以黑鱼鱼骨为原料，经过清洗、晾干、粉碎、过筛、调浆、酶解、灭酶、冷却接菌、高温杀菌、脱盐、除腥脱苦、分子量筛选、喷雾干燥一系列过程，制得有生物活性的黑鱼骨肽口服剂。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种黑鱼骨肽口服剂的制备方法，其特征是，包括以下的步骤：（1）、将清洗好的黑鱼鱼骨原料自然晾干，使用高速粉碎机处理后过筛，得到黑鱼骨粉；（2）、将步骤（1）中获得的黑鱼骨粉按照固液比1:1加水制成悬浊液，用蛋白酶进行预实验，选择降解黑鱼骨粉的蛋白酶；（3）将步骤（1）中获得的黑鱼骨粉按照固液比1:1~1:3加水制成悬浊液，加入碱液调节pH值在7.5~8.0之间，加入质量分数在3%~5%的聚乙二醇，再加入0.4%~0.6%混合酶，酶解2.0h~4.0h，期间采用间歇式搅拌，维持温度在50℃~55℃，酶解结束后灭酶；（4）、将步骤（3）中获得的产物，取样接入乳杆菌分解黑鱼骨粉中胶原蛋白；（5）、将步骤（3）中获得的产物，接入2%~4%的混合菌，维持37℃保温发酵12h~16h，分解骨胶原蛋白，发酵结束后杀菌；（6）、将步骤（5）中获得的产物，采用反渗透法进行脱盐处理，获得脱盐后的产物；（7）、将步骤（6）中获得的产物，采用活性炭吸附方式进行除腥脱苦处理，然后离心处理取上清液；（8）、将步骤（7）中获得的上清液，使用TSK GELG2000SWXL色谱柱，通过高效液相色谱来测定黑鱼骨肽的分子量范围，收集流出液，除去流动相的有机溶剂得到黑鱼骨肽提取液；9）将步骤（8）中得到的黑鱼骨肽提取液，通过喷雾干燥处理，获得黑鱼骨肽口服剂。
进一步的，包括步骤（1）中的过筛是通过200目~300目筛。
进一步的，包括步骤（2）中的蛋白酶是木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、菠萝蛋白酶和胰酶其中任意一种。
进一步的，包括步骤（3）中的混合酶是中性蛋白酶、胰酶、风味蛋白酶3种蛋白酶的混合酶；灭酶条件是温度加热至75℃~85℃，维持10min~15min。
进一步的，包括步骤（5）中的混合菌是干酪乳杆菌、植物乳杆菌和蜡样芽孢杆菌；杀菌条件是温度加热至75℃~85℃，维持10min~15min。
进一步的，包括步骤（6）中的反渗透脱盐处理参数为：压力1MPa~2MPa，温度25℃~30℃，醋酸纤维膜，脱盐率达到65%以上。
进一步的，包括步骤（7）中的吸附过程，活性炭的用量1.5g/L~2.5g/L，时间20min~60min，温度30℃~60℃；离心处理设定转速3000r/min~5000r/min，时间5min~10min。
进一步的，包括步骤（8）中的流出液分子量为2000D~3000D。
进一步的，包括步骤（9）中的喷雾干燥条件为进风温度控制在110℃~150℃，出风温度控制在60℃~80℃。
本发明的有益效果是，一种黑鱼骨肽口服剂的制备方法，以黑鱼鱼骨为原料，经过清洗、晾干、粉碎、过筛、调浆、酶解、灭酶、冷却接菌、高温杀菌、脱盐、除腥脱苦、分子量筛选、喷雾干燥一系列过程，制得有生物活性的黑鱼骨肽口服剂。本发明的一种黑鱼骨肽口服剂的制备方法，将黑鱼鱼骨中丰富的胶原蛋白通过蛋白酶酶解、有益菌发酵等适当处理，获得的黑鱼骨肽口服剂具有分子量小，易于吸收，促进新骨生成的显著优势，喷雾干燥技术实现缩短处理时间，利于产品的保藏。
具体实施方式
本发明提供一种黑鱼骨肽口服剂的制备方法，包括下述的关键步骤：粉碎过筛、调浆、酶解、灭酶、冷却接菌、高温杀菌、脱盐、除腥脱苦、分子量筛选、喷雾干燥。
（1）将洗净的黑鱼鱼骨原料自然晾干，使用高速粉碎机处理后过200目~300目筛，得到黑鱼骨粉。
（2）将步骤（1）中获得的黑鱼骨粉按照固液比1:1加水制成悬浊液，选择木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、菠萝蛋白酶和胰酶7种蛋白酶，分别在其最适工艺条件下对黑鱼骨粉进行酶解试验，酶解结束后75℃~85℃，维持10min~15min。茚三酮法分别测定每一反应的水解度，利用南京建成生物工程研究所的碱性磷酸酶试剂盒检测细胞中碱性磷酸酶( AKP) 活力。以水解度大小和 AKP 活力为指标，确定每种蛋白酶的酶解能力，来筛选适合的蛋白酶。
（3）将步骤（1）中获得的黑鱼骨粉按照固液比1:1~1:3加水制成悬浊液，加入碱液调节pH值在7.5~8.0之间，加入质量分数在3%~5%的聚乙二醇，再加入0.4%~0.6%混合酶进行酶解（通过步骤（2）中酶解最适蛋白酶的筛选，选择综合成效较显著的中性蛋白酶、胰酶、风味蛋白酶3种蛋白酶，其中，中性蛋白酶：胰酶：风味蛋白酶=1:1:2），每间隔0.5h测定酶解液的pH值，使得pH值维持在7.5~8.0之间，酶解2.0h~4.0h，期间采用间歇式搅拌，维持温度在50℃~55℃；酶解结束后加热至75℃~85℃，维持10min~15min。
（4）将步骤（3）中获得的产物，部分取样接入乳杆菌（干酪乳杆菌或植物乳杆菌）进一步来分解黑鱼骨粉胶原蛋白，探究发酵温度、发酵时间、接种量等对获得产物的影响。具体实验如下：
微生物发酵单因素试验
1.发酵温度的影响：在发酵时间为12h、接种量为4%的条件下，分别在31℃、34℃、37℃、40℃的发酵温度下对乳杆菌（干酪乳杆菌或植物乳杆菌）进行发酵，考察不同发酵温度对微生物发酵的影响。
2.发酵时间的影响：在发酵温度为34℃、接种量为4%的条件下，分别在10h、12h、14h、16h的发酵时间下对乳杆菌（干酪乳杆菌或植物乳杆菌）进行发酵，考察不同发酵时间对微生物发酵的影响。
3.接种量的影响：在发酵温度为34℃、发酵时间为12h的条件下，分别在接种量为2%、3%、4%、5%时对乳杆菌（干酪乳杆菌或植物乳杆菌）进行发酵，考察不同接种量对微生物发酵的影响。
（5）结合相关研究，分离的蜡样芽胞杆菌具有较好发酵骨胶原蛋白的能力，根据步骤（4）试验结果，将步骤（3）中获得的产物，接入2%~4%的混合菌（其中，干酪乳杆菌：植物乳杆菌：蜡样芽孢杆菌=1:1:2），维持37℃保温发酵12h~16h，进一步来分解黑鱼骨粉的胶原蛋白；发酵结束后加热至75℃~85℃，维持10min~15min。
（6）将步骤（5）中获得的产物，采用反渗透法进行脱盐处理，获得脱盐后的产物，反渗透脱盐处理参数为：压力1MP~2MP，温度25℃~30℃，醋酸纤维膜，脱盐率65%以上。
（7）将步骤（6）中获得的产物，采用活性炭吸附方式进行除腥脱苦处理，活性炭的用量1.5g/L~2.5g/L，时间20min~60min，温度30℃~60℃，进而改善提取液的澄清度和风味，离心转速3000r/min~5000r/min时间5min~10min，结束取上清液。
（8）将步骤（7）中获得的上清液，使用TSK GEL G2000SWXL色谱柱，通过高效液相色谱测定黑鱼骨肽的分子量范围。检测条件为以体积比1:1的乙腈与0.2%三氟乙酸混合溶液为流动相，按0.5 mL/min 的流速过柱，紫外检测波长为225 nm。结果通过 GPC 软件进行分析，选择分子量在2000D~3000D的流出液，除去流动相的有机溶剂即得到黑鱼骨肽提取液。
（9）将步骤（8）中得到的提取液，通过喷雾干燥处理，进风温度控制在110℃~150℃，出风温度控制在60℃~80℃，获得黑鱼骨肽口服剂。
本发明在步骤（4）单因素试验中，由于两个菌种同时稳定在37℃时发酵效果较好，故设定正交试验的发酵温度为37℃，对混合菌发酵设计正交试验，来选取最佳混合微生物发酵条件。
结果表明，各因素对混合菌发酵黑鱼骨肽降解物的主次关系为时间>菌种比例>接种量，其中时间具有显著性影响，发酵比例、接种量不具显著影响，故可取低水平值。考虑到实际生产，最佳组合为发酵比例为干酪乳杆菌：植物乳杆菌=1:1，接种量为2%，时间14h，发酵温度37℃。
总体而言，通过本发明所构思的以上技术方案与现有技术相比，能够取得下列有益效果：
本发明提供一种黑鱼骨肽口服剂的制备方法，将黑鱼鱼骨中富含的胶原蛋白由大分子逐步转变为小分子短肽，2000D~3000D分子量的短肽占据提取液的绝大部分；活性炭的物理吸附尽可能的减少对提取物的影响，实现基本无异味，生物活性高，有利于吸收，促进新骨生成；喷雾干燥技术对产物有一定程度的热破坏，但缩短处理时间，且粉状物利于保藏。
一种黑鱼骨肽口服剂的制备方法，其特征是，包括以下的步骤：（1）、将清洗好的黑鱼鱼骨原料自然晾干，使用高速粉碎机处理后过筛，得到黑鱼骨粉；（2）、将步骤（1）中获得的黑鱼骨粉按照固液比1:1加水制成悬浊液，用蛋白酶进行预实验，选择降解黑鱼骨粉的蛋白酶；（3）将步骤（1）中获得的黑鱼骨粉按照固液比1:1~1:3加水制成悬浊液，加入碱液调节pH值在7.5~8.0之间，加入质量分数在3%~5%的聚乙二醇，再加入0.4%~0.6%混合酶，酶解2.0h~4.0h，期间采用间歇式搅拌，维持温度在50℃~55℃，酶解结束后灭酶；（4）、将步骤（3）中获得的产物，取样接入乳杆菌分解黑鱼骨粉中胶原蛋白；（5）、将步骤（3）中获得的产物，接入2%~4%的混合菌，维持37℃保温发酵12h~16h，分解骨胶原蛋白，发酵结束后杀菌；（6）、将步骤（5）中获得的产物，采用反渗透法进行脱盐处理，获得脱盐后的产物；（7）、将步骤（6）中获得的产物，采用活性炭吸附方式进行除腥脱苦处理，然后离心处理取上清液；（8）、将步骤（7）中获得的上清液，使用TSK GEL G2000SWXL色谱柱，通过高效液相色谱来测定黑鱼骨肽的分子量范围，收集流出液，除去流动相的有机溶剂得到黑鱼骨肽提取液；9）将步骤（8）中得到的黑鱼骨肽提取液，通过喷雾干燥处理，获得黑鱼骨肽口服剂。
进一步的，包括步骤（1）中的过筛是通过200目~300目筛。
进一步的，包括步骤（2）中的蛋白酶是木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、菠萝蛋白酶和胰酶其中任意一种。
进一步的，包括步骤（3）中的混合酶是中性蛋白酶、胰酶、风味蛋白酶3种蛋白酶的混合酶；灭酶条件是温度加热至75℃~85℃，维持10min~15min。
进一步的，包括步骤（5）中的混合菌是干酪乳杆菌、植物乳杆菌和蜡样芽孢杆菌；杀菌条件是温度加热至75℃~85℃，维持10min~15min。
进一步的，包括步骤（6）中的反渗透脱盐处理参数为：压力1MPa~2MPa，温度25℃~30℃，醋酸纤维膜，脱盐率达到65%以上。
进一步的，包括步骤（7）中的吸附过程，活性炭的用量1.5g/L~2.5g/L，时间20min~60min，温度30℃~60℃；离心处理设定转速3000r/min~5000r/min，时间5min~10min。
进一步的，包括步骤（8）中的流出液分子量为2000D~3000D。
进一步的，包括步骤（9）中的喷雾干燥条件为进风温度控制在110℃~150℃，出风温度控制在60℃~80℃。
具体实施例一、将洗净的黑鱼鱼骨原料自然晾干，使用高速粉碎机进行处理，过200目筛，得到黑鱼骨粉。从中称取200g按照固液比1:1加水制成悬浊液，加入碱液调节pH值为7.5，加入质量分数3%的聚乙二醇，再加入0.4%混合酶，按照中性蛋白酶：胰酶：风味蛋白酶=1:1:2的比例进行酶解，时间2.0h，期间采用间歇式搅拌，维持温度在50℃。酶解结束后升温至85℃维持10min，冷却至室温。接入2%的混合菌，按照干酪乳杆菌：植物乳杆菌：蜡样芽孢杆菌=1:1:2的比例进行发酵，维持37℃条件下保温发酵14h，发酵结束后升温至85℃维持10min，冷却至室温25℃。控制压力1MP，发酵液透过醋酸纤维膜进行脱盐处理，再与活性炭混合，其用量2g/L，时间40min，温度55℃，使用离心机设定转速5000r/min，时间10min，结束移取上清液。使用TSK GEL G2000SWXL色谱柱，通过高效液相色谱测定，选择分子量在2000D~3000D的流出液，去除流动相中有机溶剂，进行喷雾干燥处理，进风温度控制在110℃，出风温度控制在70℃，收集的干粉即为所要的黑鱼骨肽口服剂。
具体实施例二、将洗净的黑鱼鱼骨原料自然晾干，使用高速粉碎机进行处理，过250目筛，得到黑鱼骨粉。从中称取200g按照固液比1:1加水制成悬浊液，加入碱液调节pH值为7.5，加入质量分数4%的聚乙二醇，再加入0.5%混合酶，按照中性蛋白酶：胰酶：风味蛋白酶=1:1:2的比例进行酶解，时间3.0h，期间采用间歇式搅拌，维持温度在50℃。酶解结束后升温至75℃维持15min，冷却至室温。接入3%的混合菌，按照干酪乳杆菌：植物乳杆菌：蜡样芽孢杆菌=1:1:2的比例进行发酵，维持37℃条件下保温发酵16h，发酵结束后升温至75℃维持15min，冷却至室温25℃。控制压力1MP，发酵液透过醋酸纤维膜进行脱盐处理，再与活性炭混合，其用量1.5g/L，时间60min，温度50℃，使用离心机设定转速4000r/min，时间8min，结束移取上清液。使用TSK GEL G2000SWXL色谱柱，通过高效液相色谱测定，选择分子量在2000D~3000D的流出液，去除流动相中有机溶剂，进行喷雾干燥处理，进风温度控制在120℃，出风温度控制在60℃，收集的干粉即为所要的黑鱼骨肽口服剂。
具体实施例三、将洗净的黑鱼鱼骨原料自然晾干，使用高速粉碎机进行处理，过300目筛，得到黑鱼骨粉。从中称取200g按照固液比1:1加水制成悬浊液，加入碱液调节pH值为7.5，加入质量分数5%的聚乙二醇，再加入0.6%混合酶，按照中性蛋白酶：胰酶：风味蛋白酶=1:1:2的比例进行酶解，时间2.0h，期间采用间歇式搅拌，维持温度在55℃。酶解结束后升温至75℃维持15min，冷却至室温。接入4%的混合菌，按照干酪乳杆菌：植物乳杆菌：蜡样芽孢杆菌=1:1:2的比例进行发酵，维持37℃条件下保温发酵14h，发酵结束后升温至75℃维持15min，冷却至室温25℃。控制压力1.5MP，发酵液透过醋酸纤维膜进行脱盐处理，再与活性炭混合，其用量2.5g/L，时间30min，温度50℃，使用离心机设定转速4000r/min，时间10min，结束移取上清液。使用TSK GEL G2000SWXL色谱柱，通过高效液相色谱测定，选择分子量在2000D~3000D的流出液，去除流动相中有机溶剂，进行喷雾干燥处理，进风温度控制在120℃，出风温度控制在65℃，收集的干粉即为所要的黑鱼骨肽口服剂。
具体实施例四、将洗净的黑鱼鱼骨原料自然晾干，使用高速粉碎机进行处理，过200目筛，得到黑鱼骨粉。从中称取200g按照固液比1:2加水制成悬浊液，加入碱液调节pH值为8.0，加入质量分数3%的聚乙二醇，再加入0.4%混合酶，按照中性蛋白酶：胰酶：风味蛋白酶=1:1:2的比例进行酶解，时间4.0h，期间采用间歇式搅拌，维持温度在55℃。酶解结束后升温至80℃维持15min，冷却至室温。接入2%的混合菌，按照干酪乳杆菌：植物乳杆菌：蜡样芽孢杆菌=1:1:2的比例进行发酵，维持37℃条件下保温发酵12h，发酵结束后升温至80℃维持15min，冷却至室温25℃。控制压力1.5MP，发酵液透过醋酸纤维膜进行脱盐处理，再与活性炭混合，其用量2.0g/L，时间60min，温度55℃，使用离心机设定转速3000r/min，时间10min，结束移取上清液。使用TSK GEL G2000SWXL色谱柱，通过高效液相色谱测定，选择分子量在2000D~3000D的流出液，去除流动相中有机溶剂，进行喷雾干燥处理，进风温度控制在150℃，出风温度控制在80℃，收集的干粉即为所要的黑鱼骨肽口服剂。
具体实施例五、将洗净的黑鱼鱼骨原料自然晾干，使用高速粉碎机进行处理，过250目筛，得到黑鱼骨粉。从中称取200g按照固液比1:3加水制成悬浊液，加入碱液调节pH值为8.0，加入质量分数5%的聚乙二醇，再加入0.5%混合酶，按照中性蛋白酶：胰酶：风味蛋白酶=1:1:2的比例进行酶解，时间3.0h，期间采用间歇式搅拌，维持温度在55℃。酶解结束后升温至85℃维持15min，冷却至室温。接入4%的混合菌，按照干酪乳杆菌：植物乳杆菌：蜡样芽孢杆菌=1:1:2的比例进行发酵，维持37℃条件下保温发酵16h，发酵结束后升温至85℃维持15min，冷却至室温25℃。控制压力2MP，发酵液透过醋酸纤维膜进行脱盐处理，再与活性炭混合，其用量1.5g/L，时间60min，温度55℃，使用离心机设定转速5000r/min，时间5min，结束移取上清液。使用TSK GEL G2000SWXL色谱柱，通过高效液相色谱测定，选择分子量在2000D~3000D的流出液，去除流动相中有机溶剂，进行喷雾干燥处理，进风温度控制在130℃，出风温度控制在70℃，收集的干粉即为所要的黑鱼骨肽口服剂。
具体实施例六、将洗净的黑鱼鱼骨原料自然晾干，使用高速粉碎机进行处理，过300目筛，得到黑鱼骨粉。从中称取200g按照固液比1:1加水制成悬浊液，加入碱液调节pH值为8.0，加入质量分数4%的聚乙二醇，再加入0.6%混合酶，按照中性蛋白酶：胰酶：风味蛋白酶=1:1:2的比例进行酶解，时间2.0h，期间采用间歇式搅拌，维持温度在55℃。酶解结束后升温至75℃维持10min，冷却至室温。接入3%的混合菌，按照干酪乳杆菌：植物乳杆菌：蜡样芽孢杆菌=1:1:2的比例进行发酵，维持37℃条件下保温发酵14h，发酵结束后升温至75℃维持10min，冷却至室温25℃。控制压力1MP，发酵液透过醋酸纤维膜进行脱盐处理，再与活性炭混合，其用量2.5g/L，时间20min，温度50℃，使用离心机设定转速3000r/min，时间10min，结束移取上清液。使用TSK GEL G2000SWXL色谱柱，通过高效液相色谱测定，选择分子量在2000D~3000D的流出液，去除流动相中有机溶剂，进行喷雾干燥处理，进风温度控制在140℃，出风温度控制在60℃，收集的干粉即为所要的黑鱼骨肽口服剂。
在本实施例中，除腥脱苦采用活性炭吸附，利于分离、更好的保持原料本身的活性、污染程度小、去异味较好。
在本实施例中，复合酶共同酶解能更好的发挥蛋白酶各自的肽链作用部位，一定程度上提高酶解能力，获得小分子量的短肽。
在本实施例中，混合菌共同发酵在满足自身生长代谢过程，产生分解酶，发酵条件温和，进一步降解肽段，实现肽的分子量平衡。
在本实施例中，采用喷雾干燥不可避免的对产品造成一定的热破坏，但缩短处理时间，同时制得的粉状物利于产品的长期保藏，可提升经济效益。
以上说明对本发明而言只是说明性的，而非限制性的，本领域普通技术人员理解，在不脱离所附权利要求所限定的精神和范围的情况下，可做出许多修改、变化或等效，但都将落入本发明的保护范围内。
Claims (9)
1.一种黑鱼骨肽口服剂的制备方法，其特征是，包括以下的步骤：
（1）、将清洗好的黑鱼鱼骨原料自然晾干，使用高速粉碎机处理后过筛，得到黑鱼骨粉；
（2）、将步骤（1）中获得的黑鱼骨粉按照固液比1:1加水制成悬浊液，用蛋白酶进行预实验，选择降解黑鱼骨粉的蛋白酶；
（3）、将步骤（1）中获得的黑鱼骨粉按照固液比1:1~1:3加水制成悬浊液，加入碱液调节pH值在7.5~8.0之间，加入质量分数在3%~5%的聚乙二醇，再加入0.4%~0.6%混合酶，酶解2.0h~4.0h，期间采用间歇式搅拌，维持温度在50℃~55℃，酶解结束后灭酶；
（4）、将步骤（3）中获得的产物，取样接入乳杆菌分解黑鱼骨粉中胶原蛋白；
（5）、将步骤（3）中获得的产物，接入2%~4%的混合菌，维持37℃保温发酵12h~16h，分解骨胶原蛋白，发酵结束后杀菌；
（6）、将步骤（5）中获得的产物，采用反渗透法进行脱盐处理，获得脱盐后的产物；
（7）、将步骤（6）中获得的产物，采用活性炭吸附方式进行除腥脱苦处理，然后离心处理取上清液；
（8）、将步骤（7）中获得的上清液，使用TSK GEL G2000SWXL色谱柱，通过高效液相色谱来测定黑鱼骨肽的分子量范围，收集流出液，除去流动相的有机溶剂得到黑鱼骨肽提取液；
（9）将步骤（8）中得到的黑鱼骨肽提取液，通过喷雾干燥处理，获得黑鱼骨肽口服剂。
2.根据权利要求1所述的一种黑鱼骨肽口服剂的制备方法，其特征是，所述步骤（1）中的过筛是通过200目~300目筛。
3.根据权利要求1所述的一种黑鱼骨肽口服剂的制备方法，其特征是，所述步骤（2）中的蛋白酶是木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、菠萝蛋白酶和胰酶其中任意一种。
4.根据权利要求1所述的一种黑鱼骨肽口服剂的制备方法，其特征是，所述步骤（3）中的混合酶是中性蛋白酶、胰酶、风味蛋白酶3种蛋白酶的混合酶；灭酶条件是温度加热至75℃~85℃，维持10min~15min。
5.根据权利要求1所述的一种黑鱼骨肽口服剂的制备方法，其特征是，所述步骤（5）中的混合菌是干酪乳杆菌、植物乳杆菌和蜡样芽孢杆菌；杀菌条件是温度加热至75℃~85℃，维持10min~15min。
6.根据权利要求1所述的一种黑鱼骨肽口服剂的制备方法，其特征是，所述步骤（6）中的反渗透脱盐处理参数为：压力1MPa~2MPa，温度25℃~30℃，醋酸纤维膜，脱盐率达到65%以上。
7.根据权利要求1所述的一种黑鱼骨肽口服剂的制备方法，其特征是，所述步骤（7）中的吸附过程，活性炭的用量1.5g/L~2.5g/L，时间20min~60min，温度30℃~60℃；离心处理设定转速3000r/min~5000r/min，时间5min~10min。
8.根据权利要求1所述的一种黑鱼骨肽口服剂的制备方法，其特征是，所述步骤（8）中的流出液分子量为2000D~3000D。
9.根据权利要求1所述的一种黑鱼骨肽口服剂的制备方法，其特征是，所述步骤（9）中的喷雾干燥条件为进风温度控制在110℃~150℃，出风温度控制在60℃~80℃。
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