PT1474420E

PT1474420E - Compostos de quinazolina

Info

Publication number: PT1474420E
Application number: PT03700951T
Authority: PT
Inventors: Laurent Francois Andre Hennequin
Original assignee: Astrazeneca Ab
Priority date: 2002-02-01
Filing date: 2003-01-28
Publication date: 2012-05-10
Also published as: ZA200405908B; RU2362774C1; PL371486A1; WO2003064413A1; HK1070367A1; HUP0402588A3; US20050085465A1; MXPA04007459A; NO328731B1; JP4608215B2; CN1625555A; NO20043162L; TW200302727A; NZ534171A; RU2004126612A; RU2008100767A; US8293902B2; RU2365588C2; US7268230B2; SI1474420T1

Description

DESCRIÇÃO "COMPOSTOS DE QUINAZOLINA" A presente invenção refere-se a derivados de quinazolina, processos para a sua preparação, intermediários para a sua preparação, composições farmacêuticas que os contêm como ingrediente activo, à sua utilização como medicamentos e à sua utilização no fabrico de medicamentos para utilização na produção de efeitos antiangiogénicos e/ou de redução da permeabilidade vascular em animais de sangue quente, tal como humanos. A angiogénese normal desempenha um papel importante numa variedade de processos incluindo desenvolvimento embrionário, cicatrização de feridas e vários componentes da função reprodutora feminina. A angiogénese indesejável ou patológica tem sido associada a estados patológicos incluindo retinopatia diabética, psoríase, cancro, artrite reumatóide, ateroma, sarcoma de Kaposi e hemangioma (Fan et ai., 1995, Trends Pharmacol. Sei. 16: 57-66; Folkman, 1995, Nature Medicine 1: 27-31). Julga-se que a alteração da permeabilidade vascular desempenha um papel em processos fisiológicos normais e patológicos (Cullinan-Bove et ai., 1993, Endocrinology 133: 829-837; Senger et ai., 1993, Câncer and Metastasis Reviews, 12: 303-324). Vários polipéptidos com actividade promotora do crescimento de células endoteliais in vitro foram identificados incluindo, os factores de crescimento de fibroblastos ácidico e básico (aFGF & bFGF) e o factor de crescimento do endotélio vascular (VEGF). Em virtude da expressão restringida dos seus 1 receptores, a actividade do factor de crescimento de VEGF, em contraste com as dos FGF, é relativamente especifica para células endoteliais. Prova recente indica que o VEGF é um estimulador importante da angiogénese normal e patológica (Jakeman et al. 1993, Endocrinology, 133: 848-859; Kolch et al., 1995, Breast Câncer Research and Treatment, 36:139-155) e permeabilidade vascular (Connolly et al., 1989, J. Biol. Chem. 264: 20017-20024). O antagonismo da acção do VEGF por sequestração de VEGF com anticorpo pode resultar na inibição do crescimento de tumores (Kim et al., 1993, Nature 362: 841-844) . O FGF básico (bFGF) é um estimulador potente de angiogénese (e. g. Hayek et al., 1987, Biochem. Biophys. Res. Commun. 147: 876-880) e foram encontrados níveis aumentados de FGF no soro (Fujimoto et al., 1991, Biochem. Biophys. Res. Commun. 180: 386-392) e urina (Nguyen et al., 1993, J. Natl. Câncer. Inst. 85: 241-242) de doentes com cancro.

Os receptores tirosina-cinase (RTK) são importantes na transmissão de sinais bioquímicos através da membrana plasmática de células. Estas moléculas transmembranares consistem caracteristicamente de um domínio de ligação a ligando extracelular ligado através de um segmento na membrana plasmática a um domínio tirosina-cinase intracelular. A ligação do ligando ao receptor resulta na estimulação da actividade tirosina-cinase associada ao receptor o que leva à fosforilação de resíduos de tirosina no receptor e noutras moléculas intracelulares. Estas alterações na fosforilação da tirosina iniciam uma cascata de sinalização que leva a uma variedade de respostas celulares. Até à data foram identificadas, pelo menos, dezanove subfamílias de RTK distintas, definidas pela homologia da sequência de aminoácidos. Uma destas subfamílias é presentemente compreendida pelo receptor tirosina-cinase tipo 2 fms, Flt-1, pelo receptor contendo o domínio de inserção de cinase, KDR (também referido como Flk-1) e outro receptor tirosina-cinase tipo fms, Flt-4. Foi demonstrado que dois destes RTKs relacionados, Flt-1 e KDR, se ligam ao VEGF com afinidade elevada (De Vries et al. , 1992, Science 255: 989-991; Terman et ai., 1992, Biochem. Biophys. Res. Comm 1992, 187: 1579-1586). A ligação de VEGF a estes receptores expressos em células heterólogas foi associada a alterações no estado de fosforilação da tirosina de proteínas celulares e fluxos de cálcio. A presente invenção baseia-se na identificação de compostos que inibem surpreendentemente os efeitos de VEGF, uma propriedade valiosa no tratamento de estados patológicos associados a angiogénese e/ou permeabilidade vascular aumentada, tais como cancro, diabetes, psoríase, artrite reumatóide, sarcoma de Kaposi, hemangioma, edema linfático, nefropatias aguda e crónica, ateroma, restenose arterial, doenças auto-imunes, inflamação aguda, formação excessiva de cicatriz e adesões, endometriose, sangramento uterino disfuncional e doenças oculares com proliferação de vasos retinianos incluindo degenerescência macular. 0 VEGF é um estimulo chave para a vasculogénese e angiogénese. Esta citocina induz um fenótipo de desenvolvimento vascular induzindo a proliferação de células endoteliais, a expressão e migração de protease, e organização subsequente das células para formar um tubo capilar (Keck, P.J., Hauser, S.D., Krivi, G., Sanzo, K., Warren, T., Feder, J., e Connolly, D.T., Science (Washington DC) , 246: 1309-1312, 1989; Lamoreaux, W.J., Fitzgerald, M.E., Reiner, A., Hasty, K.A., e Charles, S.T., Microvasc. Res., 55: 29-42, 1998; Pepper, M.S., Montesano, R., Mandroita, S.J., Orei, L. e Vassalli, J.D., Enzyme Protein, 49: 3 138-162, 1996.)· Além disso, o VEGF induz permeabilidade vascular significativa (Dvorak, H.F., Detmar, M., Claffey, K.P., Nagy, J.A., van de Water, L. e Senger, D.R., (Int. Arch. Allergy Immunol, 107: 233-235, 1995; Bates, D.O., healed, R.L, Curry, F.E. e Williams, B. J. Physiol. (Lond.), 533: 263-272, 2001), promovendo a formação de uma rede vascular hiperpermeável, imatura que é característica da angiogénese patológica.

Foi demonstrado que a activação de KDR sozinho é suficiente para promover todas as respostas fenotípicas principais para o VEGF, incluindo a proliferação, migração e sobrevivência de células endoteliais, e a indução de permeabilidade vascular (Meyer, M., Clauss, M., Lepple-Wienhues, A., Waltenberger, J., Augustin, H.G., Ziche, M., Lanz, C., Buttner, M., Rziha, H-J., e

Dehio, C., EMBO J OO \—1 363-374, 1999; Zeng, H., Sanyal, S. e Mukhopadhyay, D., J. Biol . Chem., 276: 32714-32719 , 2001; Gille, H ., Kowalski, J. , Li, B. , LeCouter, J., Moffat, B, Zioncheck, T.F., Pelletier, N. e Ferrara, N., J. Biol. Chem., 276: 3222-3230, 2001) . A Publicação do Pedido de Patente Internacional número WO 00/47212 descreve inibidores de receptor tirosina-cinase de VEGF. Os compostos do documento WO 00/47212 possuem actividade contra o receptor tirosina-cinase (RTK) de VEGF de tal forma que podem ser utilizados numa quantidade suficiente para inibir o RTK de VEGF enquanto não demonstram qualquer actividade significativa contra o RTK de EGF. A sua actividade inibidora de RTK de VEGF é devida à actividade contra o KDR e contra o Flt-1, mas em geral, estes são mais potentes contra o KDR. Geralmente, estes têm farmacocinética plasmática prolongada. Constatou-se que alguns inibidores de RTK de VEGF actuam como bloqueadores do canal de potássio e são positivos num ensaio de hERG; essa 4 actividade pode dar origem a alterações no ECG (electrocardiograma) in vivo. Os compostos do documento WO 00/47212 têm predominantemente cadeias laterais básicas.

Surpreendentemente, a requerente identificou agora que os compostos da presente invenção são inibidores muito potentes de KDR, mas têm menos actividade contra o Flt-1 do que os compostos do documento WO 00/47212, têm uma farmacocinética plasmática menos prolongada do que os compostos do documento WO 00/47212 e são inactivos ou apenas fracamente activos num ensaio de hERG. Os compostos da presente invenção têm predominantemente cadeias laterais neutras. Os compostos da presente invenção têm um perfil toxicológico benéfico em comparação com os compostos do documento WO 00/47212.

Uma vez que o KDR medeia todas as respostas fenotípicas a jusante do VEGF, incluindo a permeabilidade, proliferação, invasão e migração de células endoteliais, a inibição de KDR é desejável para se conseguir um efeito antiangiogénico e/ou de redução da permeabilidade vascular. Assim é desejável especificidade para a inibição de KDR. Os compostos da presente invenção são mais especificamente direccionados contra o KDR e têm menos actividade contra o Flt-1.

De acordo com um aspecto da presente invenção é proporcionado um composto 7-(3-(4-acetilpiperazin-l-il)propoxi)-4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6-metoxiquinazolina e os seus sais.

De acordo com outro aspecto da presente invenção é proporcionado um composto 7-[2-(4-acetilpiperazin-l-il)etoxi]-4- 5 [(4—fluoro-2-metil-lH-indol-5-il)oxi]-β-metoxiquinazolina e os seus sais.

Um composto particular da presente invenção é 7-(3-(4-acetilpiperazin-l-il)propoxi)-4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-β-metoxiquinazolina e os seus sais. Um composto particular da presente invenção é 7-[2-(4-acetilpiperazin-l-il) etoxi] -4- [ (4-fluoro-2-metil-lií-indol-5-il) oxi] -6-metoxiquinazolina e os seus sais.

Para que não restem dúvidas deverá ser entendido que quando nesta descrição um grupo é qualificado como "acima definido" ou "definido acima" o referido grupo abrange a definição que ocorre primeiro e mais ampla, bem como cada e todas as definições preferidas para esse grupo.

Nesta descrição, salvo indicação em contrário, o termo "alquilo" inclui grupos alquilo de cadeia linear e ramificada mas as referências a grupos alquilo individuais, tal como "propilo" são específicas apenas para a versão de cadeia linear. Uma convenção análoga aplica-se a outros termos genéricos. Salvo indicação em contrário, o termo "alquilo" refere-se vantajosamente a cadeias com 1-6 átomos de carbono, de um modo preferido 1-4 átomos de carbono. 0 termo "alcoxilo" como aqui utilizado, salvo indicação em contrário, inclui grupos "alquil"-0-, nos quais "alquilo" é como definido acima. 0 termo "arilo" como aqui utilizado, salvo indicação em contrário, inclui referência a um grupo arilo C6_i0, o qual pode, se desejado, ter um ou mais substituintes seleccionados de halogéneo, alquilo, alcoxilo, nitro, trifluorometilo e ciano (em que alquilo e alcoxilo são como definidos acima). 0 termo "ariloxilo" como aqui utilizado, salvo indicação em contrário, 6 inclui grupos "aril"-0-, nos quais "arilo" é como definido acima. 0 termo "sulfoniloxilo" como aqui utilizado refere-se a grupos alquilsulfoniloxilo e arilsulfoniloxilo nos quais "alquilo" e "arilo" são como definidos acima. 0 termo "alcanoílo" como aqui utilizado, salvo indicação em contrário, inclui grupos formilo e alquilC=0 nos quais "alquilo" é como definido acima, por exemplo, alcanoíloC2 é etanoilo e refere-se a CH3C=0, alcanoíloCi é formilo e refere-se a CHO. Butanoilo refere-se a CH3-CH2-CH2-C (0) , isobutirilo refere-se a (CH3) 2-CH-C(0) . Nesta descrição, salvo indicação em contrário, o termo "alcenilo" inclui grupos alcenilo de cadeia linear e ramificada mas as referências a grupos alcenilo individuais, tal como 2-butenilo são especificas apenas para a versão de cadeia linear. Salvo indicação em contrário, o termo "alcenilo" refere-se vantajosamente a cadeias com 2-5 átomos de carbono, de um modo preferido 3-4 átomos de carbono. Nesta descrição, salvo indicação em contrário, o termo "alcinilo" inclui grupos alcinilo cadeia linear e ramificada mas as referências a grupos alcinilo individuais, tal como 2-butinilo, são especificas apenas para a versão de cadeia linear. Salvo indicação em contrário, o termo "alcinilo" refere-se vantajosamente a cadeias com 2-5 átomos de carbono, de um modo preferido 3-4 átomos de carbono. Salvo indicação em contrário, o termo "haloalquilo" refere-se a um grupo alquilo como definido acima que tem um ou mais grupos halogéneo, tal como, por exemplo, trifluorometilo.

Na presente invenção é para ser entendido que um composto da presente invenção ou um seu sal pode representar o fenómeno de tautomerismo e que as representações das fórmulas nesta descrição podem representar apenas uma das formas tautoméricas possíveis. É para ser entendido que a invenção abrange qualquer forma tautomérica que iniba a actividade do receptor tirosina- 7 cinase de VEGF e não está unicamente limitada a qualquer forma tautomérica utilizada nos desenhos de fórmulas. As representações de fórmulas nesta descrição podem representar apenas uma das formas tautoméricas possíveis e é para ser entendido que a descrição abrange quaisquer formas tautoméricas possíveis dos compostos desenhados e não apenas as formas que foi possível aqui mostrar graficamente.

Também é para ser entendido que determinados compostos da presente invenção e os seus sais podem existir em formas solvatadas bem como não solvatadas, tal como, por exemplo, formas hidratadas. É para ser entendido que a invenção abrange todas essas formas solvatadas que inibam a actividade do receptor tirosina-cinase de VEGF. A presente invenção refere-se aos compostos da presente invenção como acima definidos, bem como aos seus sais. Os sais para serem utilizados nas composições farmacêuticas serão sais farmaceuticamente aceitáveis, mas outros sais podem ser úteis na produção dos compostos da presente invenção e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Os sais farmaceuticamente aceitáveis da invenção podem, por exemplo, incluir os sais de adição de ácido dos compostos da presente invenção como acima definidos que são suficientemente básicos para formarem tais sais. Esses sais de adição de ácido incluem, por exemplo, sais com ácidos inorgânicos ou orgânicos que proporcionam aniões farmaceuticamente aceitáveis, tais como com halogenetos de hidrogénio (especialmente ácido clorídrico ou bromídrico dos quais o ácido clorídrico é particularmente preferido) ou com ácido sulfúrico ou fosfórico, ou com ácido trifluoroacético, cítrico ou maleico. Além disso, quando os compostos da presente invenção são suficientemente ácidos, podem ser preparados sais farmaceuticamente aceitáveis com uma base inorgânica ou orgânica que proporciona um catião farmaceuticamente aceitável. Tais sais com bases inorgânicas ou orgânicas incluem, por exemplo, um sal de metal alcalino, tais como um sal de sódio ou potássio, um sal de metal alcalino-terroso, tais como um sal de cálcio ou magnésio, um sal de amónio ou, por exemplo, um sal com metilamina, dimetilamina, trimetilamina, piperidina, morfolina ou tris-(2-hidroxietil)amina.

Um composto da presente invenção ou o seu sal, e outros compostos da invenção (como aqui definidos) podem ser preparados por qualquer processo conhecido que seja aplicável à preparação de compostos quimicamente relacionados. Tais processos incluem, por exemplo, aqueles ilustrados no Pedido de Patente Internacional Número WO 00/47212 e nas Publicações de Pedido de Patente Europeu n° 0520722, 0566226, 0602851 e 0635498. Tais processos também incluem, por exemplo, a síntese em fase sólida. Tais processos são proporcionados como uma outra característica da invenção e são como descritos a seguir. Os materiais de partida necessários podem ser obtidos por processos correntes de química orgânica. A preparação de tais materiais de partida é descrita nos exemplos não limitativos apensos. Alternativamente, os materiais de partida necessários podem ser obtidos por processos análogos aos ilustrados, os quais estão dentro do conhecimento geral de um químico orgânico.

Assim, os processos (a) a (d) e (i) a (v) seguintes constituem outras características da presente invenção. 9 Síntese de Compostos da Presente Invenção (a) Os compostos da presente invenção e os seus sais podem ser preparados pela reacção de um composto da fórmula III:

(III) (em que R2 é 6-metoxilo il)propoxilo) ou 6-metoxilo il)etoxilo), m é 2 e L1 é uma composto da fórmula IV: , 7-(3-(4-acetilpiperazin-l-, 7-[2-(4-acetilpiperazin-l-unidade substituível) , com um n (R1)

ZH (IV) (em que o anel C é indol-5-ilo, R1 é 4-fluoro, 2-metilo, Z é -0-e n é 2); para obter compostos da presente invenção e os seus sais. Uma unidade substituível L1 conveniente é, por exemplo, um grupo halogéneo, alcoxilo (de um modo preferido alcoxiloCi-4) , ariloxilo, alquilsulfanilo, arilsulfanilo, alcoxialquilsulfanilo ou sulfoniloxilo, por exemplo, um grupo cloro, bromo, metoxilo, fenoxilo, metilsulfanilo, 2-metoxietilsulfanilo, metanossulfoniloxilo ou tolueno-4-sulfoniloxilo. 10 A reacção é vantajosamente efectuada na presença de uma base. Uma tal base é, por exemplo, uma base de amina orgânica, tais como, por exemplo, piridina, 2,6-lutidina, colidina, 4-dimetilaminopiridina, trietilamina, morfolina, iV-metilmorf olina ou diazabiciclo [5.4.0 ] undec-7-eno, tetrametilguanidina ou, por exemplo, um carbonato ou hidróxido de metal alcalino ou metal alcalino-terroso, por exemplo, carbonato de sódio, carbonato de potássio, carbonato de cálcio, carbonato de césio, hidróxido de sódio ou hidróxido de potássio. Alternativamente, uma tal base é, por exemplo, um hidreto de metal alcalino, por exemplo, hidreto de sódio, ou uma amida de metal alcalino ou metal alcalino-terroso, por exemplo, amida de sódio, bis(trimetilsilil)amida de sódio, amida de potássio ou bis(trimetilsilil)amida de potássio. A reacção é, de um modo preferido, efectuada na presença de um solvente ou diluente inerte, por exemplo, um éter tal como tetra-hidrofurano ou 1,4-dioxano, um solvente hidrocarboneto aromático tal como tolueno, ou um solvente dipolar aprótico tal como N, N-dimetilf ormamida, N, IV-dimetilacetamida, IV-metilpirrolidin-2-ona ou dimetilsulfóxido. A reacção é convenientemente efectuada a uma temperatura na gama, por exemplo, de 10 a 150 °C, de um modo preferido na gama de 20 a 90 °C.

Quando R2 contém um anel heterociclico com um substituinte é possível adicionar o substituinte após o processo (a) acima utilizando processos correntes de química orgânica. Assim, por exemplo, um composto de fórmula III como definido acima mas em que R2 contém um anel heterociclico não substituído pode ser feito reagir com um composto de fórmula IV como definido acima para dar um composto intermediário no qual R2 contém um anel heterociclico não substituído. O composto intermediário pode ser então substituído no anel heterociclico em R2 utilizando técnicas 11 correntes de química orgânica para dar um composto final da invenção.

Quando é desejado obter o sal de ácido, a base livre pode ser tratada com um ácido tal como um halogeneto de hidrogénio, por exemplo, cloreto de hidrogénio, ácido sulfúrico, um ácido sulfónico, por exemplo, ácido metanossulfónico, ou um ácido carboxílico, por exemplo, ácido acético ou cítrico, utilizando um processo convencional. (b) A produção de compostos da presente invenção e os seus sais pode ser conseguida pela reacção, convenientemente na presença de uma base (como definida acima no processo (a) ) , de um composto da fórmula V:

H (V) (em que o anel C é indol-5-ilo, Z é -0-, R1 é 4-fluoro, 2-metilo, R2 é 6-metoxilo, n é 2 e X1 é -0- e s é 1) com um composto da fórmula VIb:

(VIb) 12 (em que Q1 é 3-(4-acetilpiperazin-l-il)propilo ou 2-(4-acetilpiperazin-l-il)etilo e L1 é como aqui definido); L1 é um unidade substituível, por exemplo, um grupo

halogéneo ou sulfoniloxilo, tais como um grupo bromo, metanossulfoniloxilo ou tolueno-4-sulfoniloxilo, ou L1 pode ser gerado In situ a partir de um álcool sob condições correntes de Mitsunobu ("Organic Reactions", John Wiley & Sons Inc, 1992, vol 42, capítulo 2, David L Hughes) . A reacção é, de um modo preferido, efectuada na presença de uma base (como definida acima no processo (a) ) e vantajosamente na presença de um solvente ou diluente inerte (como definido acima no processo (a) ) , vantajosamente a uma temperatura na gama, por exemplo, de 10 a 150 °C, convenientemente a cerca de 50 °C. (c) Os compostos da presente invenção e os seus sais podem ser preparados pela reacção de um composto da fórmula VII:

com um composto da fórmula VlIIb: Q1-X1-H (VlIIb) 13 (em que s e L1 são como aqui definidos, o anel C é indol-5-ilo, Z é -0-, R1 é 4-fluoro, 2-metilo, R2 é 6-metoxilo, n é 2, e Q1 é 3-(4-acetilpiperazin-l-il)propilo ou 2-(4-acetilpiperazin-l-il)etilo e X1 é -0-) . A reacção pode ser convenientemente efectuada na presença de uma base (como definida acima no processo (a)) e vantajosamente na presença de um solvente ou diluente inerte (como definido acima no processo (a) ) , vantajosamente a uma temperatura na gama, por exemplo, de 10 a 150 °C, convenientemente a cerca de 100 °C. (d) Os compostos da presente invenção e os seus sais podem ser preparados fazendo reagir um composto da fórmula IX:

(IX) (em que L1 e s são como aqui definidos, X1 é -0-, o indol-5-ilo, Z é -O-, R1 é 4-fluoro, 2-metilo, metoxilo e n é 2) com um composto da fórmula Xb: anel C é R2 é 6- Q2-H (Xb) (em que Q2 é 4-acetilpiperazin-l-ilo); 14 para dar um composto da presente invenção ou o seu sal. A reacção pode ser convenientemente efectuada na presença de uma base (como definida acima no processo (a)) e vantajosamente na presença de um solvente ou diluente inerte (como definido acima no processo (a) ) , e a uma temperatura na gama, por exemplo, 0 a 150 °C, convenientemente a cerca de 50 °C.

Os processos (a) , (b) e (d) são preferidos em relação ao processo (c).

Os processos (a) e (b) são os mais preferidos. Síntese de Intermediários (i) Os compostos de fórmula III e os seus sais nos quais L1 é halogéneo podem ser, por exemplo, preparados halogenando um composto da fórmula XI:

O

(XI) em que R2 e m são como definidos acima). Os agentes de halogenação convenientes incluem os halogenetos de ácidos inorgânicos, por exemplo, cloreto de tionilo, cloreto de fósforo(III), oxicloreto de fósforo(V) e cloreto de fósforo(V). 15 A reacção de halogenação pode ser efectuada na presença de um solvente ou diluente inerte tal como por exemplo, um solvente halogenado tais como cloreto de metileno, triclorometano ou tetracloreto de carbono, ou um solvente hidrocarboneto aromático, tais como benzeno ou tolueno, ou a reacção pode ser efectuada sem a presença de um solvente. A reacção é convenientemente efectuada a uma temperatura na gama, por exemplo, 10 a 150 °C, de um modo preferido na gama 40 a 100 °C.

Os compostos de fórmula XI e os seus sais podem ser, por exemplo, preparados fazendo reagir um composto da fórmula XII:

O

(em que R2, s e L1 são como definidos acima) com um composto de fórmula VlIIb como acima definido. A reacção pode ser convenientemente efectuada na presença de uma base (como definida acima no processo (a) ) e vantajosamente na presença de um solvente ou diluente inerte (como definido acima no processo (a) ) , vantajosamente a uma temperatura na gama, por exemplo, 10 a 150 °C, convenientemente a cerca de 100 °C.

Os compostos de fórmula XI e os seus sais também podem ser, por exemplo, preparados pela reacção de um composto da fórmula XIII: 16

(XIII) (em que R2 e s são como definidos acima e X1 é -0-) com um composto de fórmula VIb como acima definido. A reacção pode ser, por exemplo, efectuada como descrito para o processo (b) acima. 0 grupo pivaloiloximetilo pode ser depois dissociado fazendo reagir o produto com uma base, tais como, por exemplo, amónia aquosa, trietilamina em água, um hidróxido ou alcóxido de metal alcalino ou metal alcalino-terroso, de um modo preferido amónia aquosa, hidróxido de sódio aquoso ou hidróxido de potássio aquoso, num solvente polar prótico, tal como um álcool, por exemplo, metanol ou etanol. A reacção é convenientemente efectuada a uma temperatura na gama 20 a 100 °C, de um modo preferido na gama 20 a 50 °C.

Os compostos de fórmula XI e os seus sais também podem ser preparados ciclizando um composto da fórmula XIV:

(XIV) (em que R2 e m sao como definidos acima, e A1 é um grupo hidroxilo, alcoxilo (de um modo preferido alcoxilo C1-4) ou 17 amino) de acordo com o que se forma um composto de fórmula XI ou um seu sal. A ciclização pode ser efectuada fazendo reagir um composto da fórmula XIV, em que A1 é um grupo hidroxilo ou alcoxilo, com formamida ou um seu equivalente eficaz para originar a ciclização, de acordo com o que é obtido um composto de fórmula XI ou seu sal, tal como cloreto de [3-(dimetilamino)-2-azaprop-2-enilideno]dimetilamónio. A ciclização é convenientemente efectuada na presença de formamida como solvente ou na presença de um solvente ou diluente inerte tal como um éter, por exemplo, 1,4-dioxano. A ciclização é convenientemente efectuada a uma temperatura elevada, de um modo preferido na gama 80 a 200 °C. Os compostos de fórmula XI também podem ser preparados ciclizando um composto da fórmula XIV, em que A1 é um grupo amino, com ácido fórmico ou um seu equivalente eficaz para originar a ciclização, de acordo com o que é obtido um composto de fórmula XI ou seu sal. Os equivalentes de ácido fórmico eficazes para originar a ciclização incluem, por exemplo, um tri-alcoxiCi-4metano, por exemplo, trietoximetano e trimetoximetano. A ciclização é convenientemente efectuada na presença de uma quantidade catalítica de um ácido anidro, tal como um ácido sulfónico, por exemplo, ácido p-toluenossulfónico, e na presença de um solvente ou diluente inerte tal como por exemplo, um solvente halogenado, tais como cloreto de metileno, triclorometano ou tetracloreto de carbono, um éter, tais como éter dietílico ou tetra-hidrofurano, ou um solvente hidrocarboneto aromático tal como tolueno. A ciclização é convenientemente efectuada a uma temperatura na gama, por exemplo, 10 a 100 °C, de um modo preferido na gama 20 a 50 °C.

Os compostos de fórmula XIV e os seus sais podem ser, por exemplo, preparados pela redução do grupo nitro de um composto da fórmula XV: 18 ο

(em que R2, m e A1 são como definidos acima) para produzir um composto de fórmula XIV como acima definido. A redução do grupo nitro pode ser convenientemente efectuada por qualquer dos processos conhecidos para uma tal transformação. A redução pode ser realizada, por exemplo, agitando uma solução do composto nitro sob hidrogénio a 1 a 4 atmosferas de pressão na presença de um solvente ou diluente inerte como definido acima, na presença de um metal eficaz para catalisar reacções de hidrogenação tal como paládio ou platina. Um outro agente de redução é, por exemplo, um metal activado tal como ferro activado (por exemplo, produzido lavando pó de ferro com uma solução diluida de um ácido tal como ácido clorídrico). Assim, por exemplo, a redução pode ser efectuada aquecendo o composto nitro sob hidrogénio a 2 atmosferas de pressão na presença do metal activado e um solvente ou diluente tal como uma mistura de água e álcool, por exemplo, metanol ou etanol, a uma temperatura na gama, por exemplo, 50 a 150 °C, convenientemente a cerca de 70 °C.

Os compostos da fórmula XV e os seus sais podem ser, por exemplo, preparados pela reacção de um composto da fórmula XVI: 19 (XVI) ο

(em que R2, s, L1 e A1 são como definidos acima) com um composto de fórmula VlIIb como definido acima para dar um composto da fórmula XV. A reacção dos compostos de fórmulas XVI e VlIIb é convenientemente efectuada sob condições como descritas para o processo (c) acima.

Os compostos de fórmula XV e os seus sais também podem ser, por exemplo, preparados pela reacção de um composto da fórmula XVII:

O

(XVII) (em que R2, s e A1 são como definidos acima e X1 é -0-) com um composto de fórmula VIb como definido acima para produzir um composto de fórmula XV como definido acima. A reacção dos compostos de fórmulas XVII e VIb é convenientemente efectuada sob condições como descritas para o processo (b) acima. 20

Os compostos de fórmula III e os seus sais também podem ser preparados, por exemplo, fazendo reagir um composto da fórmula XVIII: L2

H (XVIII) (em que R2 e s são como definidos acima, X1 é -0- e L2 representa uma unidade de protecção substituível) com um composto de fórmula VIb como definido acima, de acordo com o que se obtém um composto de fórmula III no qual L1 é representado por L2. É convenientemente utilizado um composto de fórmula XVIII no qual L2 representa um grupo fenoxilo, o qual, se desejado, pode ter até 5 substituintes, de um modo preferido até 2 substituintes, seleccionados de halogéneo, nitro e ciano. A reacção pode ser convenientemente efectuada sob condições como descritas para o processo (b) acima.

Os compostos de fórmula XVIII e os seus sais podem ser, por exemplo, preparados por desprotecção de um composto da fórmula XIX: 21 L2

(XIX) (em que R2, s e L2 são como definidos acima, P1 é um grupo de protecção e X1 é -0-. A escolha do grupo de protecção P1 está dentro do conhecimento corrente de um químico orgânico, por exemplo, aqueles incluídos em textos de referência, tal como "Protective Groups in Organic Synthesis" T.W. Greene e R.G.M.Wuts, 2a Ed. Wiley 1991, incluindo derivados de N-sulfonilo (por exemplo, p-toluenossulfonilo) , carbamatos (por exemplo, t-butilcarbonilo) , derivados de iV-alquilo (por exemplo, 2-cloroetilo, benzilo) e derivados acetais de amino (por exemplo, benziloximetilo) . A remoção desse grupo de protecção pode ser efectuada por qualquer dos processos conhecidos para uma tal transformação, incluindo aquelas condições reaccionais indicadas em textos de referência tal como o indicado acima, ou por um processo relacionado. A desprotecção pode ser efectuada por técnicas bem conhecidas na literatura, por exemplo, quando P1 representa um grupo benzilo, a desprotecção pode ser efectuada por hidrogenólise ou por tratamento com ácido trifluoroacético.

Se desejado, um composto de fórmula III pode ser convertido noutro composto de fórmula III no qual a unidade L1 é diferente. Assim, por exemplo, um composto de fórmula III no qual L1 é diferente de halogéneo, por exemplo, fenoxilo opcionalmente substituído, pode ser convertido num composto de fórmula III em que L1 é halogéneo por hidrólise de um composto de fórmula III 22 (no qual L1 é diferente de halogéneo) para produzir um composto de fórmula XI como definido acima, seguido de introdução de halogeneto no composto de fórmula XI, assim obtido como definido acima, para produzir um composto de fórmula III no qual L1 representa halogéneo. (ii) Os compostos de fórmula IV e os seus sais nos quais o anel C é indolilo podem ser preparados por qualquer dos métodos conhecidos na técnica, tais como por exemplo, aqueles descritos em "índoles Part I", "índoles Part II", 1972 John Wiley & Sons Ltd e "índoles Part III" 1979, John Wiley & Sons Ltd, editado por W. J. Houlihan.

Exemplos da preparação de indoles são dados no Exemplo de Referência I a seguir. (iii) Os compostos de fórmula V como definidos acima e os seus sais podem ser preparados por desprotecção do composto de fórmula XX:

(XX) (em que o anel C, Z, R1, R2, P1, n e s são como definidos acima e X1 é -0-) por um processo, por exemplo, como descrito em (i) acima. 23

Os compostos da fórmula XX e os seus sais podem ser preparados fazendo reagir compostos das fórmulas XIX e IV como definidos acima, sob as condições descritas em (a) acima, para dar um composto da fórmula XX ou o seu sal. (iv) Os compostos da fórmula VII e os seus sais podem ser preparados fazendo reagir um composto da fórmula XXI:

(XXI) (em que R2, s e cada L1 são como definidos acima e o L1 na posição 4 e o outro L1 numa outra posição do anel de quinazolina podem ser o iguais ou diferentes) com um composto da fórmula IV como definido acima, sendo a reacção por exemplo, efectuada por um processo como descrito em (a) acima. (v) Os compostos de fórmula IX como definidos acima e os seus sais podem ser, por exemplo, preparados pela reacção de compostos de fórmula V como definidos acima com compostos da fórmula XXII: I^-alquilCi-s-L1 (XXII) 24 (em que L1 é como definido acima) para dar compostos de fórmula IX ou os seus sais. A reacção pode ser efectuada, por exemplo, por um processo como descrito em (b) acima.

Quando é necessário um sal farmaceuticamente aceitável de um composto da presente invenção, este pode ser obtido, por exemplo, por reacção do referido composto com, por exemplo, um ácido utilizando um processo convencional, possuindo o ácido um anião farmaceuticamente aceitável.

Muitos dos intermediários aqui definidos são novos e estes são proporcionados como uma outra caracteristica da invenção. A preparação destes compostos é como aqui descrita e/ou por métodos bem conhecidos dos especialistas na técnica de química orgânica.

Por exemplo, os intermediários 7-benziloxi-4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6-metoxiquinazolina e 4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-7-hidroxi-6-metoxiquinazolina, os quais são ambos descritos no Exemplo 7, são novos e, cada, pode ser utilizado no fabrico de compostos da presente invenção e de compostos do documento WO 00/47212. A 7-benziloxi-4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6-metoxiquinazolina e a 4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-7-hidroxi-6-metoxiquinazolina podem ser, cada, utilizadas no fabrico de compostos que inibem a angiogénese e/ou permeabilidade vascular aumentada.

De acordo com uma forma de realização da presente invenção é proporcionada 7-benziloxi-4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6-metoxiquinazolina ou um seu sal. 25

De acordo com uma forma de realização da presente invenção é proporcionada 4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-7-hidroxi-6-metoxiquinazolina ou um seu sal.

De acordo com uma forma de realização da presente invenção é proporcionada a utilização de 7-benziloxi-4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6-metoxiquinazolina ou um seu sal no fabrico de um composto da presente invenção ou um composto do documento WO 00/47212.

De acordo com uma forma de realização da presente invenção é proporcionada a utilização de 4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-7-hidroxi-6-metoxiquinazolina ou um seu sal no fabrico de um composto da presente invenção ou um composto do documento WO 00/47212. A identificação de compostos que inibem a anqioqénese e/ou a permeabilidade vascular aumentada, que inibem potencialmente a actividade tirosina-cinase associada ao receptor KDR de VEGF e são selectivos para o KDR em relação ao Flt-1, que têm uma farmacocinética plasmática menos prolongada e que são inactivos ou apenas fracamente activos no ensaio de hERG, é desejável e é o objecto da presente invenção.

Estas propriedades podem ser avaliadas, por exemplo, utilizando um ou mais dos processos descritos abaixo: (a) Ensaio de Inibição do Receptor Tirosina-Cinase In Vitro

Este ensaio determina a aptidão de um composto de ensaio para inibir a actividade tirosina-cinase. O ADN que codifica os 26 domínios citoplasmáticos do receptor de VEGF, FGF ou EGF podem ser obtidos por síntese total de genes (Edwards M, International Biotechnology Lab 5(3), 19-25, 1987) ou por clonagem. Estes podem ser depois expressos num sistema de expressão adequado para obter o polipéptido com actividade tirosina-cinase. Por exemplo, determinou-se que os domínios citoplasmáticos do receptor de VEGF, FGF e EGF, que foram obtidos por expressão da proteína recombinante em células de insecto, exibem actividade tirosina-cinase intrínseca. No caso do receptor de VEGF Flt-1 (número de acesso de Genbank X51602) um fragmento de ADN de 1, 7kb que codifica a maior parte do domínio citoplasmático, que começa com a metionina 783 e que inclui o codão de terminação, descrito por Shibuya et al. (Oncogene, 1990, 5: 519-524), foi isolado a partir de ADNc e clonado num vector de substituição de baculovírus (por exemplo, pAcYMl (ver The Baculovirus Expression System A Laboratory Guide, L.A. King e R. D. Possee, Chapman e Hall, 1992) ou pAc360 ou pBlueBacHis (disponível de Invitrogen Corporation)). Esta construção recombinante foi co-transfectada para células de insecto (por exemplo, Spodoptera frugiperda 21(Sf21)) com ADN virai (e. g., Pharmingen BaculoGold) para preparar baculovírus recombinante. (Os detalhes sobre os métodos para a ligação das moléculas de ADN recombinante e para a preparação e utilização de baculovirus recombinante podem ser encontrados em textos de referência, por exemplo, Sambrook et al. , 1989, Molecular cloning - A Laboratory Manual, 2a edition, Cold Spring Harbour Laboratory Press e 0'Reilly et al., 1992, Baculovirus Expression Vectors - A Laboratory Manual, W. H. Freeman e Co, Nova Iorque). Para outras tirosina-cinases a serem utilizadas nos ensaios, os fragmentos citoplasmáticos que começam na metionina 806 (KDR, número de acesso de Genbank L04947), metionina 668 (receptor de EGF, número de acesso de Genbank X00588) e metionina 399 (receptor RI de FGF, número de 27 acesso de Genbank X51803) podem ser clonados e expressos de um modo semelhante.

Para a expressão da actividade tirosina-cinase de cFlt-1, células St21 foram infectadas com vírus recombinante cFlt-1 puro por placa a uma multiplicidade de infecção de 3 e recolhidas 48 horas depois. As células recolhidas foram lavadas com soro fisiológico tamponado com fosfato gelado (PBS) (fosfato de sódio 10 mM, pH 7,4, cloreto de sódio 138 mM, cloreto de potássio 2,7 mM), em seguida ressuspensas em HNTG/PMSF gelado (Hepes 20 mM, pH 7,5, cloreto de sódio 150 mM, 10% v/v de glicerol, 1% v/v de Triton X100, cloreto de magnésio 1,5 mM, ácido etileno glicol-bis(éter β-aminoetílico)-N,N,N',N'-tetraacético (EGTA) 1 mM, PMSF 1 mM (fluoreto de fenilmetilsulfonilo) ; o PMSF é adicionado imediatamente antes da utilização a partir de uma solução 100 mM em metanol recém-preparada) utilizando 1 mL de HNTG/PMSF por 10 milhões de células. A suspensão foi centrifugada durante 10 minutos a 13000 rpm a 4 °C, o sobrenadante (concentrado de enzima) foi removido e conservado em alíquotas a -70 °C. Cada novo lote de concentrado de enzima foi titulado no ensaio por diluição com diluente de enzima (Hepes 100 mM, pH 7,4, ortovanadato de sódio 0,2 mM, 0,1% v/v de Triton X100, ditiotreitol 0,2 mM). Para um lote típico, o concentrado de enzima é diluído a 1 para 2000 com diluente de enzima e são utilizados 50 pL de enzima diluída para cada poço de ensaio.

Foi preparada uma solução-mãe de substrato a partir de um copolímero aleatório contendo tirosina, por exemplo, Poli (Glu, Ala, Tyr) 6:3:1 (Sigma P3899), conservado como uma solução-mãe a 1 mg/mL em PBS a -20 °C e diluído a 1 para 500 com PBS para revestimento da placa. 28

No dia anterior ao ensaio, 100 pL de solução de substrato diluída foram transferidos para todos os poços das placas de ensaio (imunoplacas de 96 poços Nunc maxisorp) as quais foram seladas e deixadas de um dia para o outro a 4 °C.

No dia do ensaio, a solução de substrato foi rejeitada e os

poços da placa de ensaio foram lavados uma vez com PBST (PBS contendo 0,05% v/v de Tween 20) e uma vez com Hepes 50 mM, pH 7,4.

Os compostos de ensaio foram diluídos com dimetilsulfóxido (DMSO) a 10% e foram transferidos 25 pL do composto diluído para poços nas placas de ensaio lavadas. Os poços de controlo "total" continham DMSO a 10% em vez de composto. Foram adicionados vinte e cinco microlitros de cloreto de manganês(II) 40 mM contendo adenosina-5'-trifosfato (ATP) 8 pM a todos os poços de ensaio com excepção dos poços de controlo "brancos" que continham cloreto de manganês(II) sem ATP. Para começar as reacções foram adicionados 50 pL de enzima recém-diluída a cada poço e as placas foram incubadas à temperatura ambiente durante 20 minutos. O líquido foi então rejeitado e os poços foram lavados duas vezes com PBST. Foram adicionados cem microlitros de anticorpo anti-fosfotirosina de IgG de ratinho (Upstate Biotechnology Inc. produto 05-321), diluído a 1 para 6000 com PBST contendo 0,5% p/v de albumina de soro bovino (BSA) , a cada poço e as placas foram incubadas durante 1 hora à temperatura ambiente, antes de rejeitar o líquido e lavar os poços duas vezes com PBST. Foram adicionados cem microlitros de anticorpo anti-Ig de ratinho de ovelha ligado a peroxidase de rábano silvestre (HRP) (Amersham, produto NXA 931), diluído a 1 para 500 com PBST contendo 0,5% p/v de BSA, e as placas foram incubadas durante 1 hora à temperatura ambiente antes de 29 rejeitar o líquido e lavar os poços duas vezes com PBST. A cada poço foram adicionados cem microlitros de solução de 2,2'-azino-bis(ácido 3-etilbenzotiazolina-6-sulfónico) (ABTS), recém-preparada utilizando um comprimido de 50 mg de ABTS (Boehringer 1204 521) em 50 mL, algum tampão de fosf ato-citrato pH 5,0 + 0,03% de perborato de sódio recém-preparado (feito com 1 cápsula de tampão de fosfato citrato com perborato de sódio (PCSB) (Sigma P4922) por 100 mL de água destilada) . As placas foram em seguida incubadas durante 20-60 minutos à temperatura ambiente até o valor da densidade óptica dos poços de controlo "total", medido a 405 nm utilizando um espectrofotómetro leitor de placas, ser de aproximadamente 1,0. Os valores de controlo "branco" (sem ATP) e "total" (sem composto) foram utilizados para determinar a gama de diluição do composto de ensaio que deu 50% de inibição da actividade enzimática. (b) Ensaio de Proliferação de HUVEC In Vitro

Este ensaio determina a aptidão de um composto de ensaio para inibir a proliferação estimulada pelo factor de crescimento de células endoteliais da veia umbilical humana (HUVEC).

As células HUVEC foram isoladas em MCDB 131 (Gibco BRL) + 7,5% v/v de soro fetal de vitelo (FCS) e foram aplicadas (nas subculturas 2 a 8), em MCDB 131 + 2% v/v de FCS + 3 pg/mL de heparina + 1 pg/mL de hidrocortisona, a uma concentração de 1000 células/poço em placas de 96 poços. Após um mínimo de 4 horas, estas foram administradas com o factor de crescimento apropriado (i. e., VEGF 3 ng/mL, EGF 3 ng/mL ou b-FGF 0,3 ng/mL) e composto. As culturas foram depois incubadas durante 4 dias a 37 °C com 7,5% de CO2. No dia 4 as culturas foram pulsadas com 30 1 pCi/poço de timidina tritiada (Amersham, produto TRA 61) e incubadas durante 4 horas. As células foram recolhidas utilizando um colector de placa de 96 poços (Tomtek) e em seguida analisadas em relação à incorporação de tritio com um contador de placas Beta. A incorporação de radioactividade nas células, expressa como cpm, foi utilizada para medir a inibição da proliferação estimulada pelo factor de crescimento celular pelos compostos. (c) Modelo Patológico de Tumor Sólido In Vivo

Este ensaio mede a capacidade dos compostos para inibir o crescimento de tumores sólidos.

Foram estabelecidos xenoenxertos de tumor CaLu-6 na parte lateral de ratinhos Suíços nu/nu atímicos fêmeas, por injecção subcutânea de lxlO6 células CaLu-6/ratinho em 100 pL de uma solução a 50% (v/v) de Matrigel em meio de cultura isento de soro. Dez dias após o implante celular, os ratinhos foram distribuídos por grupos de 8-10, de modo a conseguir volumes médios de grupo comparáveis. Os tumores foram medidos utilizando paquímetros e os volumes foram calculados como: (1 x w) x V(1 x w) x (jc/6), em que 1 é o diâmetro mais comprido e w o diâmetro perpendicular ao mais comprido. Os compostos de ensaio foram administrados por via oral uma vez por dia durante um mínimo de 21 dias e os animais de controlo receberam diluente do composto. Os tumores foram medidos duas vezes por semana. O nível da inibição do crescimento foi calculado por comparação do volume de tumor médio do grupo de controlo contra o grupo de tratamento utilizando um teste T de Student e/ou um Teste da 31

Soma dos Números de Ordem de Mann-Whitney. O efeito inibidor do tratamento com composto foi considerado significativo quando p<0, 05. (d) Ensaio de Inibição do Canal de Potássio Codificado por

hERG

Este ensaio determina a aptidão de um composto de ensaio para inibir a corrente de cauda que flui através do canal de potássio codificado pelo gene relacionado com ether-a-go-go relacionado humano (hERG). Células de rim embrionário humano (HEK) que expressam o canal codificado por hERG foram cultivadas em Meio Essencial Mínimo de Eagle (EMEM; Sigma-Aldrich número de catálogo M2279), suplementado com 10% de Soro Fetal de Vitelo (Labtech International; número de produto 4-101-500), 10% de suplemento isento de soro (Egg Technologies; número de produto 70916) e 0,4 mg/mL de Geneticina G418 (Sigma-Aldrich; número de catálogo G7034) . Um ou dois dias antes de cada experiência, as células foram desprendidas dos balões de cultura de tecido com Accutase (TCS Biologicals) utilizando métodos correntes de cultura de tecido. Em seguida, elas foram colocadas em lamelas de vidro colocadas em poços de uma placa de 12 poços e cobertas com 2 mL do meio de cultura.

Para cada célula registada, uma lamela de vidro contendo as células foi colocada no fundo de uma câmara de Perspex contendo solução de banho (ver abaixo) à temperatura ambiente (~20 °C) .

Esta câmara foi fixa na plataforma de um microscópio de contraste de fase, invertido. Imediatamente após a colocação da 32 lamela na câmara, a solução de banho foi perfundida para a câmara a partir de um reservatório alimentado por gravidade durante 2 minutos a um velocidade de ~2 mL/min. Após este tempo, a perfusão foi parada.

Uma pipeta adesiva feita de tubo de vidro de borossilicato (GC120F, Harvard Apparatus) utilizando um extractor de micropipetas P-97 (Sutter Instrument Co.) foi enchido com solução de pipeta (ver a seguir) . A pipeta foi ligada ao pré-amplificador do amplificador de contacto hermético (Axopatch 200B, Axon Instruments) através de um fio de prata/cloreto de prata. A terra do pré-amplificador foi ligada ao eléctrodo de terra. Este era constituído por um fio de prata/cloreto de prata embutido em agar a 3% preparado com cloreto de sódio a 0,85%. A célula foi registada na configuração de célula inteira da técnica de contacto hermético. Após "incursão", gue foi feita a um potencial de manutenção de -80 mV (fixo pelo amplificador), e ajuste apropriado de grupos de controlo de resistência e capacitância, foi utilizado o software de electrofisiologia (Clampex, Axon Instruments) para fixar um potencial de manutenção (-80 mV) e para fornecer um protocolo de tensão. Este protocolo foi aplicado a cada 15 segundos e consistia de um passo de 1 s a +40 mV seguido de um passo de 1 s a -50 mV. A resposta de corrente a cada protocolo de tensão imposto foi filtrada através de um filtro passa-baixo pelo amplificador a 1 kHz. O sinal filtrado foi então adquirido, em linha, digitalizando este sinal analógico a partir do amplificador com um conversor analógico-digital. O sinal digitalizado foi então capturado num computador a correr o software Clampex (Axon Instruments). Durante o potencial de manutenção e o passo a +40 mV a corrente foi amostrada a 1 kHz. A velocidade de 33 amostragem foi então fixa em 5 kHz durante o remanescente do protocolo de tensão.

As composições, pH e osmolaridade da solução de banho e pipeta são tabeladas abaixo.

Sal Pipeta (mM) Banho (mM) NaCl - 137 KC1 130 4 MgCl2 1 1 CaCl2 - 1,8 HEPES 10 10 glucose - 10 Na2ATP 5 - EGTA 5 -

Parâmetro Pipeta Banho PH 7,18-7,22 7,40 ajuste de pH com KOH 1 M NaOH 1 M Osmolaridade (mOsm) 275-285 285-295 A amplitude da corrente de cauda do canal de potássio codificado por hERG após o passo de +40 mV a -50 mV foi registada em linha pelo software Clampex (Axon Instruments). Após estabilização da amplitude da corrente de cauda foi aplicada a solução de banho contendo o transportador para a substância de ensaio à célula. Desde que a aplicação de transportador não tivesse qualquer efeito significativo na amplitude da corrente de cauda foi então construída uma curva de efeito de concentração acumulativa para o composto. 34 0 efeito de cada concentração do composto de ensaio foi quantificado exprimindo a amplitude da corrente de cauda na presença de uma dada concentração de composto de ensaio como uma percentagem da mesma na presença de transportador. A potência do composto de ensaio (IC50) foi determinada ajustando os valores de percentagem de inibição que fazem o efeito de concentração a uma equação de Hill de quatro parâmetros utilizando um pacote de ajuste de dados corrente. Se o nível de inibição observado à concentração de ensaio mais elevada não excedesse 50%, não foi produzido qualquer valor de potência e era indicado um valor de percentagem de inibição a essa concentração. A farmacocinética plasmática pode ser avaliada medindo a semivida no plasma in vivo. Quanto maior a semivida no plasma in vivo mais prolongada é a farmacocinética plasmática.

Os compostos da presente invenção têm uma farmacocinética plasmática menos prolongada do que os compostos do documento WO 00/47212. Os compostos da presente invenção têm semividas mais curtas in vivo do que os compostos do documento WO 00/47212. A semivida no plasma in vivo pode ser determinada por métodos correntes que são bem conhecidos na técnica de farmacocinética plasmática. Pode ser utilizada qualquer espécie e a semivida no plasma determinada por metodologia corrente, por exemplo, a semivida no plasma pode ser medida em rato, cão, macaco ou humano.

De acordo com um outro aspecto da invenção é proporcionada uma composição farmacêutica a qual compreende um composto da 35 presente invenção como definido acima ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em associação com um excipiente ou veiculo farmaceuticamente aceitável. A composição pode estar numa forma adequada para administração oral, por exemplo, como um comprimido ou cápsula, para injecção parentérica (incluindo intravenosa, subcutânea, intramuscular, intravascular ou infusão), por exemplo, como uma solução, suspensão ou emulsão estéril, para administração tópica, por exemplo, como um pomada ou creme ou para administração rectal, por exemplo, como um supositório. Em geral, as composições acima podem ser preparadas de um modo convencional utilizando excipientes convencionais.

As composições da presente invenção são vantajosamente apresentadas na forma de dosagem unitária. 0 composto será normalmente administrado a um animal de sangue quente a uma dose unitária na gama 5-5000 mg por metro quadrado de área corporal do animal, i. e. aproximadamente 0,1-100 mg/kg. É considerada uma dose unitária na gama, por exemplo, 1-100 mg/kg, de um modo preferido 1-50 mg/kg e esta proporciona normalmente uma dose terapeuticamente eficaz. Uma forma de dose unitária, tais como um comprimido ou cápsula conterá geralmente, por exemplo, 1-250 mg de ingrediente activo.

De acordo com um outro aspecto da presente invenção é proporcionado um composto da presente invenção ou um seu sal farmaceuticamente aceitável como definido acima para utilização num método de tratamento do corpo humano ou animal por terapia.

A requerente determinou que os compostos da presente invenção inibem a actividade do receptor tirosina-cinase de VEGF 36 e são, por conseguinte, de interesse pelos seus efeitos antiangiogénicos e/ou pela sua aptidão para originar uma redução da permeabilidade vascular.

Uma outra característica da presente invenção é um composto da presente invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para utilização como um medicamento, convenientemente um composto da presente invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para utilização como um medicamento para produzir um efeito antiangiogénico e/ou de redução da permeabilidade vascular num animal de sangue quente tal como um ser humano.

Assim, de acordo com um outro aspecto da invenção, é proporcionada a utilização de um composto da presente invenção, ou um seu sal f armaceuticamente aceitável, no fabrico de um medicamento para utilização na produção de um efeito antiangiogénico e/ou de redução da permeabilidade vascular num animal de sangue quente tal como um ser humano.

Como indicado acima, o tamanho da dose necessária para o tratamento terapêutico ou profiláctico de um estado patológico particular variará necessariamente dependendo do hospedeiro tratado, da via de administração e da gravidade da doença a ser tratada. De um modo preferido é utilizada uma dose diária na gama de 0,1-50 mg/kg. No entanto, a dose diária variará necessariamente dependendo do hospedeiro a ser tratado, da via de administração particular e da gravidade da doença a ser tratada. Por conseguinte, a dosagem óptima pode ser determinada pelo assistente que está a tratar qualquer doente particular. 37 0 tratamento antiangiogénico e/ou de redução da permeabilidade vascular definido acima pode ser aplicado como um terapia única ou pode envolver, além de um composto da invenção, uma ou mais de outras substâncias e/ou tratamentos. Tal tratamento associado, pode ser conseguido por meio da administração simultânea, sequencial ou separada dos componentes individuais do tratamento. No campo da oncologia médica é prática normal utilizar uma associação de formas de tratamento diferentes para tratar cada doente com cancro. Em oncologia médica, o(s) outro(s) componente (s) desse tratamento associado além do tratamento antiangiogénico e/ou de redução da permeabilidade vascular definido acima pode(m) ser: cirurgia, radioterapia ou quimioterapia. Essa quimioterapia pode abranger três categorias principais de agente terapêutico: (i) outros agentes antiangiogénicos tais como aqueles que inibem os efeitos do factor de crescimento do endotélio vascular, (por exemplo, o anticorpo anti-factor de crescimento de células endoteliais vasculares bevacizumab [Avastin™], e aqueles que actuam por mecanismos diferentes daqueles definidos acima (por exemplo, linomida, inibidores da função da integrina ανβ3, angiostatina, razoxina, talidomida) e que incluem os agentes de direccionamento vascular (por exemplo, fosfato de combretastatina e os compostos divulgados nos Pedidos de Patente Internacionais WO00/40529, WO 00/41669, WOOl/92224, WO02/04434 e WO02/0821 e os agentes de deterioração vascular descritos na Publicação do Pedido de Patente Internacional n° WO 99/02166 cuja divulgação completa desse documento é aqui incorporada por referência, (por exemplo, N-acetilcolchinol-O-fosfato)); (ii) agentes citostáticos, tais como antiestrogénios (por exemplo, tamoxifeno, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno, 38 iodoxifeno), reguladores negativos do receptor de estrogénio (por exemplo, fulvestrant), progestogénios (por exemplo, acetato de megestrol), inibidores de aromatase (por exemplo, anastrozole, letrazole, vorazole, exemestano), antiprogestogénios, antiandrogénios (por exemplo, flutamida, nilutamida, bicalutamida, acetato de ciproterona), agonistas e antagonistas de LHRH (por exemplo, acetato de goserrelina, luprolida, buserrelina), inibidores de 5a-redutase (por exemplo, finasterida), agentes anti-invasivos (por exemplo, inibidores de metaloproteinases como o marimastat e inibidores da função do receptor do activador plasminogénico da uroquinase) e inibidores da função do factor de crescimento, (tais factores de crescimento incluem por exemplo, o factor de crescimento derivado de plaquetas e o factor de crescimento de hepatócitos), tais inibidores incluem anticorpos contra o factor de crescimento, anticorpos contra o receptor do factor de crescimento, (por exemplo, o anticorpo anti-erbb2 trastuzumab [Herceptin™] e o anticorpo anti-erbbl cetuximab [C225]), inibidores da farnesil-transferase, inibidores de tirosina-cinase por exemplo, inibidores da família do factor de crescimento epidérmico (por exemplo, inibidores da família EGFR de tirosina-cinase, tais como N- (3-cloro-4-fluorofenil)-7-metoxi-6-(3-morfolinopropoxi)quinazolin-4-amina (gefitinib, AZD1839), N- (3-etinilfenil)-6,7-bis(2-metoxietoxi)quinazolin-4-amina (erlotinib, OSI-774) e 6-acrilamido-N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-(3- morfolinopropoxi)quinazolin-4-amina (Cl 1033)) e inibidores de serina/treonina-cinase); e (iii) fármacos antiproliferativos/antineoplásicos e as suas associações, como utilizados em oncologia médica, tais como antimetabolitos (por exemplo, antifolatos como o 39 metotrexato fluoropirimidinas como o 5-fluorouracilo, tegafur, análogos de purina e adenosina, citosina arabinósida); antibióticos antitumorais (por exemplo, antraciclinas como as adriamicina, bleomicina, doxorrubicina, daunomicina, epirrubicina e idarrubicina, mitomicina-C, dactinomicina, mitramicina); derivados de platina (por exemplo, cisplatina, carboplatina); agentes alquilantes (por exemplo, mostarda de azoto, melfalano, clorambucilo, bussulfano, ciclofosfamida, ifosfamida, nitrosoureias, tiotepa); agentes antimitóticos (por exemplo, alcaloides de vinca como as vincristina, vinblastina, vindesina, vinorelbina e taxóides como taxol, taxotere); inibidores de topoisomerase (por exemplo, epipodofilotoxinas como o etoposido e tenipósido, amsacrina, topotecano, camptotecina e também irinotecano); também as enzimas (por exemplo, asparaginase); e inibidores da timidilato-sintase (por exemplo, raltitrexed); e outros tipos de agente quimioterapêutico incluem: (iv) modificadores da resposta biológica (por exemplo, interferão); (v) anticorpos (por exemplo, edrecolomab); (vi) terapias de antimensageiro, por exemplo, aquelas que são dirigidas aos alvos listados acima, tal como o ISIS 2503, um antimensageiro anti-ras; (vii) abordagens de terapia de genes, incluindo por exemplo, abordagens para substituir genes aberrantes, tais como p53 aberrante ou BRCA1 ou BRCA2 aberrante, abordagens GDEPT (terapia profármaco de enzima orientada por gene), tais como aquelas que utilizam citosina-desaminase, timidina-cinase ou um enzima nitro-redutase bacteriana e abordagens para aumentar tolerância do doente à quimioterapia ou 40 radioterapia tal como a terapia de genes de resistência a múltiplos fármacos; e (viii) abordagens de imunoterapia, incluindo por exemplo, as abordagens ex vivo e in vivo para aumentar a imunogenicidade de células tumorais do doente, tal como transfecção com citocinas tais como interleucina 2, interleucina 4 ou factor de estimulação de colónias de granulócitos-macrófagos, abordagens para diminuir a anergia de células T, abordagens utilizando células imunitárias transfectadas tais como células dendriticas transfectadas com citocinas, abordagens utilizando linhas de células tumorais transfectadas com citocinas e abordagens utilizando anticorpos anti-idiotipicos.

Por exemplo, esse tratamento associado pode ser conseguido por meio de administração simultânea, sequencial ou separada de um composto da presente invenção como definido acima e um agente de direccionamento vascular descrito no documento WO 99/02166 tal como N-acetilcolchinol-O-fosfato (Exemplo 1 do documento WO 99/02166).

Sabe-se a partir do documento WO 01/74360 que os antiangiogénicos podem ser combinados com anti-hipertensores. Um composto da presente invenção também pode ser administrado em associação com um anti-hipertensor. Um anti-hipertensor é um agente que baixa a tensão arterial, ver documento WO 01/74360, o qual é aqui incorporado por referência.

De acordo com uma outra caracteristica da presente invenção é proporcionada a utilização de uma associação de um composto da presente invenção ou um seu sal farmaceuticamente aceitável e um agente anti-hipertensivo para utilização no fabrico de um 41 medicamento para o tratamento de um estado patológico associado a angiogénese num mamífero de sangue quente, tal como um ser humano.

De acordo com uma outra característica da presente invenção é proporcionada uma composição farmacêutica compreendendo um composto da presente invenção ou um seu sal farmaceuticamente aceitável e um agente anti-hipertensivo para o tratamento de um estado patológico associado a angiogénese num mamífero de sangue quente, tal como um ser humano.

De acordo com um outro aspecto da presente invenção é proporcionada a utilização de uma associação de um composto da presente invenção ou um seu sal farmaceuticamente aceitável e um agente anti-hipertensivo para o fabrico de um medicamento para produzir um efeito antiangiogénico e/ou de redução da permeabilidade vascular num mamífero de sangue quente, tal como um ser humano.

Os agentes anti-hipertensivos preferidos são os bloqueadores do canal de cálcio, inibidores da enzima de conversão da angiotensina (inibidores de ACE), antagonistas do receptor de angiotensina II (antagonistas de A-II), diuréticos, bloqueadores do receptor adrenérgico beta (bloqueadores β), vasodilatadores e bloqueadores do receptor adrenérgico alfa (bloqueadores a) . Os agentes anti-hipertensivos particulares são os bloqueadores do canal de cálcio, inibidores da enzima de conversão da angiotensina (inibidores de ACE), antagonistas do receptor de angiotensina II (antagonistas de A-II) e bloqueadores do receptor adrenérgico beta (bloqueadores β), especialmente os bloqueadores do canal de cálcio. 42

Como especificado acima os compostos definidos na presente invenção são de interesse pelos seus efeitos antiangiogénicos e/ou de redução da permeabilidade vascular. Espera-se que tais compostos da invenção sejam úteis numa vasta gama de estados patológicos incluindo cancro, diabetes, psoríase, artrite reumatóide, sarcoma de Kaposi, hemangioma, edema linfático, nefropatias aguda e crónica, ateroma, restenose arterial, doenças auto-imunes, inflamação aguda, formação excessiva de cicatriz e adesões, endometriose, sangramento uterino disfuncional e doenças oculares com proliferação de vasos retinianos incluindo degenerescência macular relacionada com a idade. 0 cancro pode afectar qualquer tecido e inclui leucemia, mieloma múltiplo e linfoma. Em particular, espera-se que tais compostos da invenção abrandem vantajosamente o crescimento de tumores sólidos primários e recorrentes, por exemplo, do cólon, mama, próstata, pulmões e pele. Mais particularmente, espera-se que tais compostos da invenção inibam qualquer forma de cancro associada a VEGF incluindo leucemia, mieloma múltiplo e linfoma e também, por exemplo, o crescimento daqueles tumores sólidos primários e recorrentes que estão associados a VEGF, especialmente aqueles tumores que são significativamente dependentes de VEGF para o seu crescimento e disseminação, incluindo, por exemplo, certos tumores do cólon, mama, próstata, pulmão, vulva e pele.

Além da sua utilização em medicina terapêutica, os compostos da invenção e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis também são úteis como ferramentas farmacológicas no desenvolvimento e padronização de sistemas de ensaio in vitro e in vivo para a avaliação dos efeitos de inibidores da actividade do receptor tirosina-cinase de VEGF em animais de laboratório tais como 43 gatos, cães, coelhos, macacos, ratos e ratinhos, como parte da pesquisa de novos agentes terapêuticos. É para ser entendido que quando é utilizado o termo "éter" em qualquer parte desta descrição, este refere-se a éter dietilico. A invenção será agora ilustrada nos Exemplos seguintes nos quais, salvo indicação em contrário:- (i) as evaporações foram realizadas por evaporação rotativa in vacuo e os procedimentos de processamento foram realizados após remoção de sólidos residuais, tal como agentes de secagem, por filtração; (ii) as operações foram realizadas à temperatura ambiente, isto é na gama de 18-25 °C e sob uma atmosfera de um gás inerte tal como árgon; (iii) a cromatografia em coluna (pelo procedimento flash) e a cromatografia líquida de média pressão (MPLC) foram realizadas em sílica Merck Kieselgel (Art. 9385) ou sílica de fase inversa Merck Lichroprep RP-18 (Art. 9303) obtidas de E. Merck, Darmstadt, Alemanha; (iv) os rendimentos são dados apenas para ilustração e não são necessariamente o máximo possível; (v) os pontos de fusão não são corrigidos e foram determinados utilizando um aparelho de ponto de fusão automático Mettler SP62, um aparelho de banho de óleo ou um aparelho de placa quente Koffler. (vi) as estruturas dos produtos finais da fórmula I foram confirmadas por técnicas de ressonância magnética nuclear (RMN) (geralmente protão) e espectrometria de massa; os valores do desvio químico da ressonância magnética de protão 44 foram medidos na escala delta e as multiplicidades de pico são mostradas como se segue: s, singuleto; d, dupleto; t, tripleto; m, multipleto; 1, largo; q, quarteto, quin, quinteto; (vii) os intermediários não foram geralmente completamente caracterizados e a pureza foi avaliada por análise através de cromatografia em camada fina (TLC), cromatografia liquida de alta eficiência (HPLC), infravermelho (IR) ou RMN; (viii) os HPLC foram corridos sob 2 condições diferentes: 1) numa coluna TSK Gel super ODS de 2 μΜ, 4,6 mm x 5 cm, eluindo com um gradiente de metanol em água (contendo 1% de ácido acético) 20 a 100% em 5 minutos. Caudal 1,4 mL/minuto. Detecção: U.V. a 254 nm e detecções de dispersão de luz; 2) numa coluna TSK Gel super ODS de 2 μΜ, 4,6 mm x 5 cm, eluindo com um gradiente de metanol em água (contendo 1% de ácido acético) 0 a 100% em 7 minutos. Caudal 1,4 mL/minuto. Detecção: U.V. a 254 nm e detecções de dispersão de luz.

(ix) éter de petróleo refere-se à fracção que entra em ebulição entre 40-60 °C (x) foram utilizadas as seguintes abreviaturas:- DMF N, iV-dimetilf ormamida DMSO dimetilsulfóxido TFA ácido trifluoroacético THF tetra-hidrofurano DMA dimetilacetamida DMAP 4-dimetilaminopiridina 45 LC/MS HPLC acoplado a espectrometria de massa

Os exemplos mantidos na descrição sao os Exemplos 7, 28 e 54.

Os exemplos 1, 2 e 4 foram mantidos como Exemplos de

Referência.

Todos os outros exemplos foram apagados.

Exemplo de Referência 1

Foi adicionado azodicarboxilato de dietilo (0,178 g, 1,02 mmol) a uma solução de 4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6-hidroxi-7-metoxiquinazolina (0,267 g, 0,787 mmol),

trifenilfosfina (0,31 g, 1,18 mmol) e 3-(4-acetilpiperazin-lil)propan-l-ol (0,176 g, 0,945 mmol) em cloreto de metileno (10 mL) . Depois de agitar durante 15 minutos à temperatura ambiente, foram adicionados mais trifenilfosfina (0,062 mg, 0,236 mmol) e azodicarboxilato de dietilo (0,041 mg, 0,3 mmol). Depois de agitar durante 1 hora à temperatura ambiente, a mistura foi vertida sobre uma coluna de sílica e eluída com misturas crescentemente polares de acetato de etilo e cloreto de metileno seguidas de cloreto de metileno e metanol. As fracções contendo o produto esperado foram combinadas e evaporadas. O 46 resíduo foi triturado sob éter dietílico e o sólido foi filtrado, lavado com éter e seco sob vácuo para dar 6-(3-(4-acetilpiperazin-1—il)propoxi)-4-(4-fluoro-2-metilindol-5—iloxi)-7-metoxiquinazolina 0,210 g, 60%).

Espectro de RMN de XH : (DMS0d6, CF3COOD) 2,1 (s, 3H) , 2,35 (m, 2H), 2,45 (s, 3H) , 3,0 (m, 2H) , 3,2 (m, 1H) , 3,4 (dd, 2H) , 3,5 (m, 1H), 3,65 (d, 2H), 4,1 (m, 1H), 4,15 (s, 3H), 4,45 (dd, 2H), 4,55 (d, 1H) , 6,3 (s, 0,3 H, parcialmente trocado), 7,05 (dd, 1H) , 7,28 (d, 1H), 7,6 (s, 1H), 7,9 (s, 1H), 9,2 (s, 1H) MS-ESI: 508,5 [M+H]+ O material de partida foi preparado como se segue:

Uma suspensão de 1-acetilpiperazina (3,85 g, 30 mmol), carbonato de potássio (8,3 g, 60 mmol) e 3-bromo-l-propanol (4 mL, 45 mmol) em acetonitrilo (30 mL) foi aquecida e agitada a 80 °C durante 5 horas. Depois de arrefecer, a mistura foi filtrada e o filtrado foi evaporado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna, eluindo com misturas crescentemente polares de cloreto de metileno e etanol. As fracções contendo o produto esperado foram combinadas e evaporadas para dar 3-(4-acetilpiperazin-l-il)propan-l-ol (3,15 g, 56%).

Espectro de RMN de ΤΗ (CDCI3) : 1, 7 (m, 2H) , 2,08 (s, 3H), 2,45 (m, 4H) , 2, 6 (dd, 2H) , , 3, 45 (dd, 2H) , 3,6 (dd, 2H) , 3,78 (dd, 2H) , 4, 6 (s 1—1 1—1 MS-ESI: 187 [M+H]+

Uma solução de 6-benziloxi-4-cloro-7-metoxiquinazolina (0,39 g, 1,3 mmol), (documento EP1153920, exemplos de produção 28-30), 4-fluoro-5-hidroxi-2-metilindole (0,24 g, 1,43 mmol) e carbonato de césio (1,2 g, 4 mmol) em DMF (4 mL) foi agitada a 95 °C durante 45 minutos. Depois de arrefecer, a mistura foi filtrada e o filtrado foi evaporado sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com misturas crescentemente polares de cloreto de metileno e acetato de etilo para dar 6-benziloxi-4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-7- metoxiquinazolina (0,213 g, 37%). 4,05 (s, 3H), 5,3 1H), 7,35-7,6 (m,

Espectro de RMN de 1H: (DMSO de) 2,42 (s, 3H), (s, 2H), 6,25 (s, 1H), 7,0 (dd, 1H) , 7,18 (d, 6H), 7,8 (s, 1H), 8,55 (s, 1H) MS-ESI: 430 [M+H]+

Uma solução de 6-benziloxi-4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-7-metoxiquinazolina (1,32 g, 3 mmol), formato de amónio (1,94 g, 30 mmol) e paládio a 10% sobre carvão (0,2g) em DMF (15 mL)) contendo água (2 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura foi filtrada e o filtrado foi evaporado. O resíduo foi triturado sob éter dietílico, filtrado, lavado com éter dietílico seguido de água e seco sob vácuo sobre P205 de um dia para o outro para dar 4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6-hidroxi-7-metoxiquinazolina (1 g, 100%).

Espectro de RMN de (DMS0d6) 2,3 5 (s, 3H) , 4,0 (s, 3H), 6,25 (s, 1H) , 7,0 (m, 1H), 7,15 (d, 1H) , 7,4 (s, 1H) , 7,6 (S, 1H), O 00 (s, 1H), 8,55 (s, 1H) MS-ESI: 340 [M+H]+ 48 A uma solução de 2-fluoro-4-nitroanisole (9,9 g, 58 mmol) e 4-clorofenoxiacetonitrilo (10,7 g, 64 mmol) em DMF (50 mL) arrefecida a -15 °C foi adicionado terc-butóxido de potássio (14,3 g, 127 mmol) em DMF (124 mL) . Depois de agitar durante 30 minutos a -15 °C, a mistura foi vertida sobre ácido clorídrico 1 N arrefecido. A mistura foi extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com hidróxido de sódio 1 N, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (MgSCg) e evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com cloreto de metileno. As fracções contendo o produto esperado foram combinadas e evaporadas. O resíduo foi dissolvido em etanol (180 mL) e ácido acético (24 mL) contendo 10% paládio sobre carvão (600 mg) e a mistura foi hidrogenada sob 3 atmosferas de pressão durante 2 horas. A mistura foi filtrada e os voláteis foram removidos sob vácuo. O resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e água. A camada orgânica foi separada, e lavada com hidrogenocarbonato de sódio saturado seguida de solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (MgSCg) e evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com cloreto de metileno para dar uma mistura de 4-fluoro-5-metoxiindole e 6-fluoro-5-metoxiindole (5,64 g, 59%) numa proporção de 1/2.

Espectro de RMN de ΤΗ (DMSOd6) 3,85 (s, 3H); 6,38 (s, 1H, 6-Fluoro); 6,45 (s, 1H; 4-Fluoro); 6,9-7,4 (m, 3H)

Uma solução de 4-fluoro-5-metoxiindole e 6-fluoro-5-metoxiindole numa proporção de 1/2 (496 mg, 3 mmol), dicarbonato de di-terc-but ilo ( 720 mg, 3,3 mmol) em acetonitrilo (12 mL) contendo DMAP (18 mg, 0,15 mmol) foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas. Os voláteis foram removidos sob vácuo. O resíduo foi dissolvido em acetato de etilo, lavado com 49 ácido clorídrico 1 N, seguido de água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seco (MgS04) e evaporado para dar uma mistura de 4-fluoro-5-metoxi-l-terc-butoxicarbonilindole e 6-fluoro-5-metoxi-l-terc-butoxicarbonilindole numa proporção de 1/2 (702 mg, 88%) .

Espectro de RMN de (DMSOde) 1,65 (s, 9H); 3 ,9 (s, 3H); 6,6 sT \—1 p 6-fluoro) ; 6,72 (d, 1H, 4-fluoro); 7,2 (t, 1H, 6-fluoro) ; 7,4 (d, 1H, 4-fluoro) ; 7, 62 (d, 1H, 6-fluoro); 7,68 (d, 1H, 4-fluoro) ; 7,78 (s, 1H, 4-fluoro); 7,85 (s, 1H, 6-fluoro) A uma solução de 4-fluoro- 5-metoxi-l-terc- butoxicarbonilindole e 6-fluoro-5-metoxi-l-terc-butoxicarbonilindole numa proporção de 1/2 (8,1 g, 30,5 mmol) em THF (100 mL) arrefecida a -65 °C foi adicionado terc-butil-lítio (1,7 M) (23 mL, 35,7 mmol) . Depois de agitar durante 4 horas a -70 °C, foi adicionado iodeto de metilo (8,66 g, 61 mmol) e a mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente. Foi adicionada água e a mistura foi extraída com éter. A camada orgânica foi lavada com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (MgS04) e evaporada e foi utilizada directamente no passo seguinte. O produto em bruto foi dissolvido em cloreto de metileno (100 mL) e foi adicionado TFA (25 mL) . Depois de agitar durante 1 hora à temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob vácuo. O resíduo foi dissolvido em acetato de etilo e a camada orgânica foi lavada com hidróxido de sódio 1 N, seguido de água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seco (MgS04) e evaporado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna, eluindo com acetato de etilo/éter de petróleo (3/7) para dar 50 6-fluoro-5-metoxi-2-metilindole (1,6 g) e 4-fluoro-5-metoxi-2-metilindole (0,8 g, 48%). 6-fluoro-5-metoxi-2-meti1índole: MS-ESI : 180 [MH]+

Espectro de RMN de 1H: (DMSOdg) 2,35 (s, 3H) ; 3,8 (s, 3H) ; 6,05 (s, 1H); 7,1 (s, 1H) 7,12 (s, 1H); 10,8 (s, 1H) 4-fluoro-5-metoxi-2-meti1indole: MS-ESI: 180 [MH]+

Espectro de RMN de (DMSOdg) 2,35 (s, 3H) ; 3,8 (s, 3H) ; 6,15 (s, 1H) ; 6,9 (t, 1H); 7,05 (d, 1H); 11,0 (s, 1H) A uma solução de 4-fluoro-5-metoxi-2-metilindole (709 mg, 3,95 mmol) em cloreto de metileno (9 mL) arrefecida a -30 °C foi adicionada uma solução de tribrometo de boro (2,18 g, 8,7 mmol) em cloreto de metileno (1 mL). Depois de agitar durante 1 hora à temperatura ambiente, a mistura foi vertida sobre água e foi diluída com cloreto de metileno. O pH da camada aquosa foi ajustado a 6. A camada orgânica foi separada, lavada com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (MgS04) e evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna, eluindo com acetato de etilo/éter de petróleo (3/7) para dar 4-fluoro-5-hidroxi-2-metilindole (461 mg, 70%). 51 MS-ESI: 166 [ΜΗ]

Espectro de RMN de ΧΗ: (DMSOd6) 2,35 (s, 3H); 6,05 (s (dd, 1H); 6,9 (d , 1H) ; 8,75 (s, 1H) ; 10,9 (s, 1H) Espectro de RMN de 13C (DMSOd6) ' 13, 5; 94,0; 106,0; 132; 136; 136,5; 142,5

Alternativamente o 4-fluoro-5-hidroxi-2-metilindole pode ser preparado como se segue: A uma suspensão de hidreto de sódio (5,42 g, 226 itimol) (pré-lavado com pentano) em THF (100 mL) arrefecido a 10 °C foi adicionado acetoacetato de etilo (29,4 g, 226 mmol) enquanto a temperatura foi mantida abaixo de 15 °C. Após a conclusão da adição, a mistura foi ainda agitada durante 15 minutos e arrefecida até 5 °C. Foi adicionada uma solução de 1,2,3-trifluoro-4-foi mantida abaixo de 5 °C. A mistura foi então deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 24 horas. Os voláteis foram removidos sob vácuo e o residuo foi partilhado entre acetato de etilo e ácido clorídrico aquoso 2N. A camada orgânica foi lavada com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (MgS04) e evaporada. O resíduo foi dissolvido em ácido clorídrico concentrado (650 mL) e ácido acético (600 mL) e a mistura foi submetida a refluxo durante 15 horas. Depois de arrefecer, os voláteis foram removidos sob vácuo e o resíduo foi partilhado entre hidrogenocarbonato de sódio aquoso (5%) e acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com hidrogenocarbonato de sódio, água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (MgS04) e evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com acetato 52 de etilo/éter de petróleo (75/25) para dar 3-acetilmetil-l, 2-difluoro-4-nitrobenzeno (17,5 g, 72%).

Espectro de RMN de 2Η: (CDC13) 2,4 (s, 3H) ; 4,25 (s, 2H) ; 7,25 (dd, 1H); 8,0 (dd, 1H)

Uma solução de 3-acetilmetil-l,2-difluoro-4-nitrobenzeno (500 mg, 2,3 mmol) em cloreto de metileno (5 mL) contendo montemorilonite K10 (1 g) e ortoformato de trimetilo (5 mL) foi agitada durante 24 horas à temperatura ambiente. O sólido foi filtrado, lavado com cloreto de metileno e o filtrado foi evaporado para dar 1,2-difluoro-3-(2,2-dimetoxipropil)-4-nitrobenzeno (534 mg, 88%).

Espectro de RMN de ΧΗ: (CDC13) 1,2 (s, 3H) ; 3,2 (s, 6H) ; 3,52 (s, 2H); 7,18 (dd, 1H); 7,6 (m, 1H) A uma solução de álcool benzilico (221 mg, 2,05 inmol) em DMA (1,5 mL) foi adicionado hidreto de sódio a 60% (82 mg, 2,05 mmol). A mistura foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente. Foi adicionada uma solução de 1,2-difluoro-3-(2,2-

dimetoxipropil)-4-nitrobenzeno (534 mg, 2,05 mmol) em DMA (1,5 mL) e a mistura foi agitada durante 3 horas à temperatura ambiente. A mistura foi diluída com ácido clorídrico 1 N (10 mL) e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi evaporada e o resíduo foi dissolvido em THF (2 mL) e foi adicionado ácido clorídrico 6 N (0,3 mL) . A mistura foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente e os solventes foram removidos sob vácuo. O resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e água. A camada orgânica foi separada, lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (MgS04) e evaporada. O sólido foi triturado com éter, filtrado, lavado com éter e seco sob vácuo 53 para dar 3-acetilmetil-l-benziloxi-2-fluoro-4-nitrobenzeno (350 mg, 56%).

Espectro de RMN de (CDC13) 2,35 (s, 3H) ; 4,25 (s, 2H) ; 5,25 (s, 2H); 7,0 (dd, 1H); 7,32-7,5 (m, 5H); 8,0 (dd, 1H)

Uma solução de 3-acetilmetil-l-benziloxi-2-fluoro-4-nitrobenzeno (300 mg, 0,99 mmol) em etanol (10 mL) e ácido acético (1 mL) contendo 10% paládio sobre carvão (30 mg) foi hidrogenada a 2 atmosferas de pressão durante 2 horas. A mistura foi filtrada e o filtrado foi evaporado. O resíduo foi dissolvido em acetato de etilo e a camada orgânica foi lavada com hidrogenocarbonato de sódio aquoso, solução aquosa saturada de cloreto de sódio e evaporada para dar 4-fluoro-5-hidroxi-2-metilindole. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com acetato de etilo/éter de petróleo (3/7) para dar 4-fluoro-5-hidroxi-2-metilindole (63 mg, 30%).

Dados analíticos como acima.

Alternativamente, o 4-fluoro-5-metoxi-2-metilindole pode ser preparado como se segue:

Uma solução de metóxido de sódio (recém-preparada de sódio (l,71g) e metanol (35 mL) ) foi adicionada a uma solução de 1,2-difluoro-3-(2,2-dimetoxipropil)-4-nitrobenzeno (16,2 g, 62 mmol), (preparado como descrito acima), em metanol (200 mL) arrefecida a 5 °C. A mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e foi agitada durante 3 dias. Os voláteis foram removidos sob vácuo e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e ácido clorídrico 2 N (1 mL) . A camada orgânica foi concentrada até um volume total de 100 mL e foram 54 adicionados THF (100 mL) e ácido clorídrico 6 N (25 mL) . A mistura foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente. Os voláteis foram removidos sob vácuo e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e água. A camada orgânica foi separada, lavada com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (MgS04) e evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com acetato de etilo/éter de petróleo (3/7) para dar 3-acetilmetil-2-fluoro-l-metoxi-4- nitrobenzeno (12,7 g, 90%). MS-ESI : 250 [MNa]+

Espectro de RMN de ΤΗ (CDC13) 2,38 (s, 3H); 4,0 (s, 3H); 4,25 (s, 2H); 7,0 (dd, 1H); 8,05 (d, 1H) A uma solução de 3-acetilmetil-2-fluoro-l-metoxi-4- nitrobenzeno (11,36 g, 50 mmol) em acetona (200 mL) foi adicionado acetato de amónio aquoso 4 M (700 mL), seguido de uma solução de tricloreto de titânio (15% em água, 340 mL) gota a gota. A mistura foi agitada durante 10 minutos à temperatura ambiente e a mistura foi extraída com éter. A camada orgânica foi lavada com hidróxido de sódio aquoso 0,5 N, seguido de água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (MgS04) e os voláteis foram removidos sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com cloreto de metileno para dar 4-fluoro-5-metoxi-2-metilindole (8,15 g, 90%).

Espectro de RMN de 1H: (DMSO) 2,35 (s, 3H); 3,8 (s, 3H); 6,1 (s, 1H); 6,85 (dd, 1H); 7,02 (d, 1H) 55 A dissociação de 4-fluoro-5-metoxi-2-metilindole com tribrometo de boro para dar 4-fluoro-5-hidroxi-2-metilindole é descrita acima.

Exemplo de Referência 2

MeSO'

Foi adicionado, gota a gota, azodicarboxilato de dietilo (0,09 g, 0,518 mmol) a uma solução de 4-(7-azaindol-5-iloxi)-6-hidroxi-7-metoxiquinazolina (0,133 g, 0,432 inmol) , trifenilfosfina (0,17 g, 0,647 mmol) e 3-(4-metilsulfonilpiperazin-l-il)propan-l-ol (0,115 g, 0,519 mmol) em DMF (4 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Os voláteis foram removidos sob vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna utilizando misturas crescentemente polares de acetato de etilo e cloreto de metileno, seguidas de cloreto de metileno e metanol. As fracções contendo o produto esperado foram combinadas e evaporadas. O sólido foi então repurificado por LC/MS preparativa eluindo com acetonitrilo/água (contendo 1% de ácido acético). As fracções contendo o produto esperado foram combinadas e evaporadas. O resíduo foi dissolvido em hidrogenocarbonato de sódio aquoso e cloreto de metileno. A fase orgânica foi separada e seca sobre sulfato de magnésio e evaporada. O resíduo foi triturado sob éter dietílico, filtrado, lavado com éter e seco sob vácuo sobre 56 Ρ2Ο5 para dar 4-(7-azaindol-5-iloxi)-7-metoxi-6-(3-(4- metilsulfonilpiperazin-l-il)propoxi)quinazolina (0,09, 40%).

Espectro de RMN de 2Η: ( DMS0d6, CF3COOD) 2,3 (m, 2H) , 3,05 (s 3H) , 3,1 -3,3 (m, 4H), 3, 4 (dd, 2H), 3,7 (d, 2H) , 3, 8 (d, 2H) 4, 1 (s, 3H) , 4,4 (dd, 2H ), 6,6 (d, 1H), 7,55 (s, 1H) , 7, 65 (d 1H) , 7,8 (s, 1H) , 8,1 (s, 1H), 8, r 3 (s, 1H) , 9,0 (s, 1H) MS-ESI: 513 [M+H]+ 0 material de partida foi preparado como se segue:

Foi adicionado, gota a gota, cloreto de metanossulfonilo (2,28 mL) a uma solução de 1-(terc-butoxicarbonil)piperazina (5 g) em cloreto de metileno (90 mL) contendo trietilamina (4,5 mL). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas. A solução foi vertida sobre água arrefecida e extraída com cloreto de metileno. A fase orgânica foi separada, lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e seca sobre sulfato de magnésio e evaporada para dar 4-(metilsulfonil)piperazina-l-carboxilato de terc-butilo (7 g).

Espectro de RMN de ΧΗ : (CDC13) 1,45 (s, 9H) , 2,75 (s, 3H), 3,15 (m, 4H), 3,5 (m, 4H)

Uma solução de 4-(metilsulfonil)piperazina-l-carboxilato de terc-butilo (7 g) em cloreto de metileno (150 mL) contendo TFA (35 mL) foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente. Os voláteis foram removidos sob vácuo e o resíduo resultante foi partilhado entre cloreto de metileno e hidróxido de sódio aquoso 2 N. A fase orgânica foi separada e lavada com solução aquosa 57 saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de magnésio e evaporada para dar 1-(metilsulfonil)piperazina (2,18 g).

Espectro de RMN de 2Η : (CDC13) 2,9 (s, 3H) , 3,0 (m, 4H), 3,2 (m, 2H)

Uma suspensão de 1-(metilsulfonil)piperazina (3 g, 18,3 mmol), 3-bromopropan-l-ol (3,3 g, 23,8 mmol) e carbonato de potássio (3,28 g, 23,8 mmol) em acetonitrilo (20 mL) foi agitada a 70 °C durante 4 horas. Depois de arrefecer, a mistura foi filtrada e o filtrado foi evaporado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com misturas crescentemente polares de metanol e cloreto de metileno para dar 3-(4-metilsulfonilpiperazin-l-il)propan-l-ol (2,93 g, 72%).

Espectro de RMN de ΧΗ: (CDCI3) 1,72 (m, 2H) , 2,55-2,7 (m, 6H) , 2,75 (s, 3H) , 3,25 (m, 4H), 3,75 (dd, 2H) MS-ESI: 223 [M+H]+

Uma solução de 7-azaindole (20,0 g, 169 mmol) em etanol (200 mL) foi tratada com níquel de Raney húmido (4 g, 50% de água) e agitada numa atmosfera de hidrogénio a 5 atmosferas de pressão a 95 °C ao longo de 2 dias. A mistura reaccional foi filtrada através de terra de diatomáceas e o filtrado evaporado sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com acetato de etilo seguido de misturas crescentemente polares de cloreto de metileno e metanol (saturado com amónia) para dar 7-azaindolina (12,1 g, 79%).

Espectro de RMN de ΧΗ : (CDCI3) 3, , 06 (t, 2H), 3 ,61 (t, 2H), 4,48 (s 1, 1H), 6,50 (m, 1H) , 7,25 (m, 1H) , 7,81 (d, 1H) 58

Uma solução de 7-azaindolina (22,7 g, 189 mmol), ácido p-toluenossulfónico mono-hidratado (2,95 g, 15 mmol) e 1,3-dibromo-5,5-dimetil-hidantoína (27,4 g, 96 mmol) em cloreto de metileno (1500 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. A solução reaccional foi então decantada de um material polimérico preto; lavada com tiossulfato de sódio 0,2 M (4 x 250 mL) seguido de solução aquosa saturada de cloreto de sódio e seca sobre sulfato de magnésio. O filtrado foi evaporado sob vácuo para dar um sólido preto que foi extraído com acetato de etilo em ebulição (2 x 800 mL e 2 x 500 mL) . Os extractos combinados foram aquecidos a refluxo durante alguns minutos com carvão descolorante, filtrados e evaporados sob vácuo para dar 5-bromo-7-azaindolina (16,6 g, 44%).

Espectro de RMN de ΧΗ : (CDC13) 3,07 (t, 2H) , 3,64 (t, 2H), 4,52 (s, 1H), 7,31 (d, 1H), 7,84 (d, 1H)

Uma mistura de 5-bromo-7-azaindolina (15,6 g, 78 mmol) e óxido de manganês (IV) activo, precipitado (21,9 g, 252 mmol) em tolueno (300 mL) foi aquecida a 90 °C durante 1 hora e a solução quente filtrada através de uma almofada de terra de diatomáceas. A terra de diatomáceas e os resíduos de manganês foram lavados com acetona e estas lavagens adicionadas ao filtrado de tolueno. A evaporação do filtrado sob vácuo deu 5-bromo-7-azaindole (12,1 g, 78%).

Espectro de RMN de ΧΗ : (CDC13) 6,47 (m, 1H) , 7,36 (m, 1H), 8,08 (d, 1H), 8,35 (d, 1H), 9,89 (s, 1H) 59

Uma solução de 5-bromo-7-azaindole (8,6 g, 44 mmol), brometo de cobre (I) (12,6 g, 88 mmol) e metóxido de sódio (100 g, 1,85 mol) numa mistura de DMF "desgaseifiçada" (260 mL) e metanol (175 mL) foi agitada à temperatura ambiente numa atmosfera de azoto, e em seguida aguecida a refluxo durante 3,5 horas. A mistura foi concentrada até cerca de metade do seu volume original, arrefecida num banho de água fria e tratada, gota a gota, com água originando uma exotérmica. A suspensão resultante foi evaporada sob vácuo para dar um sólido castanho gue foi então tratado com água, seguida de hidróxido de amónio. A fase aguosa foi extraída com acetato de etilo e os extractos combinados foram lavados com hidróxido de amónio diluído até não ser observada cor azul nas lavagens aguosas. A solução de acetato de etilo foi lavada com solução aguosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre MgSCg, filtrada e evaporada sob vácuo. Este sólido em bruto, 5-metoxi-7-azaindole (6,3 g, 97%), foi tomado no passo seguinte sem mais purificação.

Foi adicionado tribrometo de boro (0,506 pL, 5,35 mmol) em cloreto de metileno (1 mL) a uma solução de 5-metoxi-7-azaindole (0,36 g, 2,43 mmol) em cloreto de metileno (25 mL) arrefecida a -30 °C. A mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e foi agitada de um dia para o outro. A mistura foi vertida sobre gelo e água e o pH da fase aquosa foi ajustada a 6. A fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi ainda extraída com acetato de etilo. As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre sulfato de magnésio e evaporadas. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com misturas crescentemente polares de cloreto de metileno e metanol para dar 5-hidroxi-7-azaindole (0,23 g, 71%). 60

Espectro de RMN de ΧΗ: (DMSOde) 6,25 (s, 1H), 7,25 (s, 1H) , 7,35 (s, I H), 7,85 (s, 1H), 9,05 (s 1, 1H) MS-ESI: 135 [M+H]+

Uma solução de 6-benziloxi-4-cloro-7-metoxiquinazolina (0,449 g, 1,49 mmol), (documento EP 1153920, exemplos de produção 28-30), 5-hidroxi-7-azaindole (0,22 g, 1,64 mmol) e carbonato de potássio (0,28 g, 2,02 mmol) em DMF (5 mL) foi agitada a 95 °C durante 3 horas. A mistura foi filtrada e o filtrado foi evaporado e seco de um dia para o outro sob vácuo. O resíduo foi triturado sob cloreto de metileno e acetato de etilo e o sólido foi filtrado e seco sob vácuo para dar 4— (7 — azaindol-5-iloxi)-6-benziloxi-7-metoxiquinazolina (0,36 g, 60%).

Espectro de RMN de ΤΗ (DMSOde) : 4,05 (s, 3H) , 5,35 (s, 2H), 6,5 (s, 1H), 7,35-7,5 (m, 4H), 7, 5-7,6 (m, 3H) , 7,8 (s, 1H), 7, 95 (s, 1H), 8,2 (s, 1H), 8,55 (s, 1H) MS-ESI: 399 [M+H]+

Uma solução de 4-(7-azaindol-5-iloxi)-6-benziloxi-7-metoxiquinazolina (0,36 g, 0,873 mmol), formato de amónio (0,55 g, 8,73 mmol) e paládio a 10% sobre carvão (0,05 g) em DMF (7 mL) contendo água (0,3 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura foi filtrada e o filtrado foi evaporado. O resíduo foi triturado sob éter dietílico e o sólido foi filtrado, lavado com éter e seco sob vácuo. O sólido foi triturado sob água, filtrado, lavado com água e seco sob vácuo sobre P2O5 para dar 4-(7-azaindol-5-iloxi)-6-hidroxi-7-metoxiquinazolina (0,26 g, 85%). 61

Espectro de RMN de ΤΗ: (DMSOde) 4,05 (s, 3H) , 6,5 (d, 1H) , 7,4 (s, 1H), 7,6 (m, 2H), 7,95 (s, 1H), 8,2 (s, I H), 8,5 (s, 1H) MS-ESI: 307 [M-H]- 62

Exemplo de Referência 4

Uma solução de 7-(3-(4-acetilpiperazin-l-il)propoxi)-4- cloro-6-metoxiquinazolina (0,285 g, 0,753 mmol), 5-hidroxi-7-azaindole (0,111 g, 0,828 mmol), (preparado como descrito para o material de partida no Exemplo de Referência 2), e carbonato de potássio (0,114 g, 0, 828 mmol) em DMF (1,6 mL) foi agitada e aquecida a 95 °C sob azoto durante 3 horas. A mistura foi arrefecida e filtrada e o filtrado foi evaporado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com misturas crescentemente polares de cloreto de metileno e metanol (saturado com amónia). As fracções contendo o produto esperado foram combinadas e evaporadas e o resíduo foi triturado sob éter dietílico, filtrado e seco sob vácuo para dar 7-(3-(4-acetilpiperazin-l-il)propoxi)-4-(7-azaindol-5-iloxi)-6-metoxiquinazolina (0,225 g, 62%).

Espectro de RMN de (DMSOde) 1, 98 (s, 3H), 1 ,98 (m, 2H) , 2,35 (dd, 2H) , . 2,4 (dd, 2H), 2, 5 (m , 2H), 3, 41 (m, 4H) , 4,0 (s, 3H) , 4, 25 (dd, , 2H), 6,47 (d, I H) , 7,38 (s, 1H) , 7 , 55 (dd, 1H) , , 7,6 (s, 1H) , 7,9 (d, 1H), 8,18 (d, 1H), 8 ,5 (s, 1H) MS-ESI: 477,6 [M+H]+ O material de partida foi preparado como se segue :

Uma mistura de 2-amino-4-benziloxi-5-metoxibenzamida (10 g, 0,04 mol), (J. Med. Chem. 1977, vol 20, 146-149) e reagente de

Gold (7,4 g, 0,05 mol) em dioxano (100 mL) foi agitada e aquecida a refluxo durante 24 horas. Foram adicionados acetato de sódio (3,02 g, 0,037 mol) e ácido acético (1,65 mL) , 0,029 mol) à mistura reaccional e foi aquecida durante mais 3 63 horas. A mistura foi evaporada, foi adicionada água ao resíduo, o sólido foi filtrado, lavado com água e seco (MgS04) . A recristalização de ácido acético deu 7-benziloxi-6-metoxi-3,4-di-hidroquinazolin-4-ona (8,7 g, 84%).

Foi adicionado paládio a 10% sobre carvão (8,3 g) a uma suspensão de 7-benziloxi-6-metoxi-3,4-di-hidroquinazolin-4-ona (50 g, 0,177 mol) em dimetilformamida (800 mL) sob azoto. Foi então adicionado formato de amónio (111,8 g, 1,77 mol) em porções ao longo de 5 minutos. A mistura reaccional foi agitada durante uma hora à temperatura ambiente, em seguida aquecida até 80 °C durante mais uma hora. A mistura reaccional foi filtrada quente através de terra de diatomáceas e os resíduod lavados com dimetilformamida. O filtrado foi então concentrado e o resíduo suspenso em água. 0 pH foi ajustado a 7,0 utilizando hidróxido de sódio 2 M e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora. O sólido foi filtrado, lavado com água e seco sobre pentóxido de fósforo produzindo 7-hidroxi-6-metoxi-3,4-di-hidroquinazolin-4-ona como um sólido branco (20,52 g, 60%).

Espectro de RMN de ΤΗ: (DMSOd6) 3,85 (s, 3H) , 6,95 (s, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,85 (s, 1H) MS-ESI: 193 [M+H]+

Foi adicionada piridina (20 mL) a uma suspensão de 7-hidroxi-6-metoxi-3,4-di-hidroquinazolin-4-ona (20,5 g, 107 mmol) em anidrido acético (150 mL, 1,6 mol). A mistura reaccional foi aquecida até 120 °C durante três horas, durante as quais o sólido se dissolveu. A mistura reaccional foi deixada arrefecer, em seguida vertida para gelo-água (900 mL) . A mistura 64 reaccional foi agitada durante uma hora, em seguida o sólido foi removido por filtração e seco sobre pentóxido de fósforo produzindo 7-acetoxi-6-metoxi-3,4-di-hidroquinazolin-4-ona como um sólido branco (20,98 g, 84%).

Espectro de RMN de λΕ: (DMSOd6) 2,25 (s, 3H) , 3,85 (s, 3H), 7,40 (s, 1H), 7,60 (s, 1H), 8,00 (s, 1H) MS-ESI: 235 [M+H]+ 7-Acetoxi-6-metoxi-3,4-di-hidroquinazolin-4-ona (1 g, 4,3 mmol) foi suspensa em cloreto de tionilo (10,5 mL). Foi adicionada uma gota de dimetilformamida e a reacção foi aquecida até 80 °C durante duas horas, durante as quais o sólido se dissolveu. A mistura reaccional foi arrefecida e o cloreto de tionilo foi removido in vacuo. O resíduo foi submetido a evaporação azeotrópica com tolueno antes de ser suspenso em cloreto de metileno. Foi adicionada uma solução de amónia a 10% em metanol (40 mL) e a mistura reaccional foi aquecida até 80 °C durante 15 minutos. Depois de arrefecer os solventes foram removidos in vacuo e o resíduo redissolvido em água (10 mL) e o pH ajustado a 7,0 com ácido clorídrico 2v. O sólido resultante foi filtrado, lavado com água e seco sobre pentóxido de fósforo produzindo 4-cloro-7-hidroxi-6-metoxiquinazolina como um sólido branco (680 mg, 75%).

Espectro de RMN de 1H: (DMSOd6) 4,00 (s, 3H) , 7,25 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 8,75 (s, 1H) MS-ESI: 211-213 [M+H]+ 65

Foi adicionado, gota a gota, azodicarboxilato de dietilo (0,243 g, 1,396 mmol) a uma solução de 4-cloro-7-hidroxi-6-metoxiquinazolina (0,245 g, 1,16 mmol), trifenilfosfina (0,396 g, 1,51 mmol) e 3-(4-acetilpiperazin-l-il)propan-l-ol (0,238 g, 1,28 mmol), (preparado como descrito para o material de partida no Exemplo de Referência 1 ou Exemplo 7) . Depois de agitar à temperatura ambiente durante 1 hora, a mistura foi vertida sobre sílica e eluída com misturas crescentemente polares de cloreto de metileno e metanol para dar 7-(3-(4- acetilpiperazin -l-il)propoxi)-4-cloro-6- metoxiquinazolina (0,29 g, 66%). Espectro de RMN de (DMSOde) 2, 0 (s, 3H), 2,0 (m, 2H), 2,35 (dd, 2 H) , 2,4 (dd, 2H) , 2,5 (dd, 2H) , 3,45 (m, 4H) , 4,02 (s, 3H) , 4,3 (dd, 2H), 7,4 (s,1H), 7,5 (s, 1H), 8,9 (s, 1H ) MS-ESI: 379-381 [M+H]+ 66

Exemplo 7

Uma solução de 7-(3-bromopropoxi)-4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6-metoxiquinazolina (0,25 g, 0,543 mmol) e 1-acetilpiperazina (0,208 g, 1,63 mmol) em DMF (4 mL) foi agitada a 80 °C durante 2,5 horas. Os voláteis foram removidos sob vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com misturas crescentemente polares de cloreto de metileno e metanol. As fracções contendo o produto esperado foram combinadas e evaporadas. O resíduo foi triturado sob éter dietílico e o sólido resultante foi filtrado, lavado com éter dietílico e seco sob vácuo para dar 7-(3-(4-acetilpiperazin-l-il)propoxi)—4—(4—fluoro—2—metilindol—5—iloxi)-6-metoxiquinazolina (0,25 g, 0,543 mmol).

Espectro de RMN de ΤΗ : (DMSOde) to 00 Oh 1-1 3H), 2,0 (m, 2H) , 2,4 (s, 3H) , 2,4 (m, 4H) , 2,55 (t, 2H), 3,45 (dd, 4H) , 4,0 (s, 3H) , 4,3 (t, 2H) , 6,22 (s, 1H) , 6, 98 (dd, 1H), 7,15 (d, 1H) ( 7, 4 (s, 1H) , 7,62 (s# I H) , 8, 48 (s, 1H) , 10,98 (s 1, 1H) MS-ESI: 508 [M+H]+ 67 0 material de partida foi preparado como se segue:

Uma mistura de 7-benziloxi-6-metoxi-3,4-di-hidroquinazolin-4-ona (2,82 g, 0,01mol), (preparada como descrito para o material de partida no Exemplo de Referência 4), cloreto de tionilo (40 mL) e DMF (0,28 mL) foi agitada e aquecida a refluxo durante 1 hora. A mistura foi evaporada, o resíduo foi retomado em tolueno e evaporado até à secura para dar cloridrato de 7-benziloxi-4-cloro-6-metoxiquinazolina (3,45 g). O cloridrato de 7-benziloxi-4-cloro-6-metoxiquinazolina (3,35 g) foi dissolvido em cloreto de metileno (250 mL) e lavado com hidrogenocarbonato de sódio aquoso até o pH da solução aquosa ter sido ajustado a pH 8. A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (MgSCg) e evaporada para dar 7-benziloxi-4-cloro-6-metoxiquinazolina, base livre (2,9 g, 96%).

Uma suspensão de 7-benziloxi-4-cloro-6-metoxiquinazolina, base livre (10 g, 33,2 mmol), 4-fluoro-5-hidroxi-2-metilindole (5,9 g, 35,7 mmol), (preparado como descrito para o material de partida no Exemplo de Referência 1), e carbonato de potássio (9,2 g, 66,6 mmol) em NMP (100 mL) foi agitada a 95 °C durante 1 hora. Depois de arrefecer, a mistura foi partilhada entre acetato de etilo e hidrogenocarbonato de sódio aquoso. A camada orgânica foi separada, lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e seca sobre sulfato de magnésio e evaporada sob vácuo. O resíduo foi triturado sob acetonitrilo e a suspensão foi arrefecida. O precipitado foi filtrado e seco sob vácuo para dar 7-benziloxi-4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6-metoxiquinazolina (8,2 g, 57%). 68

Espectro de RMN de 1H: (DMSOde) : 2,4 (s, 3H) , 4,0 (s, 3H), 5,35 (s, 2H), 6,22 (s, 1H), 6,95 (dd, 1H), 7,15 (d, 1H), 7,3-7,55 (m, 6H) , 7,51 (s, 1H), 8,5 (s, 1H)

Uma suspensão de 7-benziloxi-4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6-metoxiquinazolina (8,2 g, 19,1 mmol), formato de amónio (12 g, 190 mmol) em DMF (5 0 mL) contendo paládio a 10% sobre carvão (2 g) foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 horas. A mistura foi diluída com acetato de etilo e filtrada sobre terra de diatomáceas. Um sólido precipitou do filtrado. O sólido foi filtrado. O filtrado foi lavado com hidrogenocarbonato de sódio aquoso, seguido de solução aquosa saturada de cloreto de sódio e seco sobre sulfato de magnésio. Os voláteis foram removidos sob vácuo. O sólido residual foi combinado com o sólido previamente isolado a partir do filtrado e foi então triturado com acetonitrilo sob arrefecimento. O precipitado foi filtrado, lavado com acetonitrilo seguido de éter dietílico e seco sob vácuo para dar 4-(4-fluoro-2- metilindol-5-iloxi)-7-hidroxi-6-metoxiquinazolina (6,48 g, quant. ) . (s, 3H), 6,22 7,58 (s, 1H),

Espectro de RMN de 1R: (DMSOd6) 2,4 (s, 3H), 3,98 (s, 1H), 6,95 (dd, 1H), 7,15 (d, 1H), 7,2 (s, 1H), 8,38 (s, 1H)

Foi adicionado azodicarboxilato de dietilo (557 pL, 3,53 mmol) a uma solução de 4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-7-hidroxi-6-metoxiquinazolina (1 g, 2,95 mmol), trifenilfosfina (1,15 g, 4,42 mmol) e 3-bromo-l-propanol (293 pL, 3,24 mmol) em cloreto de metileno (25 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com misturas crescentemente 69 polares de cloreto de metileno e metanol. As fracções contendo o produto esperado foram combinadas e evaporadas. 0 resíduo foi triturado sob éter dietílico e o sólido foi filtrado, lavado com éter dietílico e evaporado para dar 7-(3-bromopropoxi)-4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6-metoxiquinazolina (1,35 g, 100%).

Espectro de RMN de (DMSOde) 2,4 (m, 2H) , 2,45 (s, 3H) , 3, 75 (dd, 2H) , r 4, 05 (s, 3 H) , 4,35 (dd, 2H) , 6,25 (s, 1H), 7,0 (dd, 1H) , 7,2 (d, 1H) , 7 , 45 (s, 1H) , 7,65 (s, - 1H) , 8,55 (s, 1H) , . 9,0 (s 1, 1H) MS-ESI: 460-462 [M+H]+

Alternativamente, a 7-[3-(4-acetilpiperazin-l-il)propoxi]-4-[(4-fluoro-2-metil-lH-indol-5-il)oxi]-6-metoxiquinazolina pode ser preparada como se segue:

4- [ (4-Fluoro-2-metil-lfí-indol-5-il) oxil-7-hidroxi-6-metoxiquinazolina (14 g, 41,3 mmol), (preparada como descrito para o material de partida neste exemplo acima), 3-(4-acetilpiperazin-l-il)propan-l-ol (9,2 g, 49,5 mmol) e trifenilfosfina (12,9 g, 49,5 mmol) foram agitados em conjunto em cloreto de metileno (210 mL) . Foi adicionado, gota a gota, azodicarboxilato de diisopropilo (9,75 mL, 49,5 mmol) e foi utilizado um banho de gelo/água para manter a temperatura da mistura reaccional entre 15 e 18 °C. Depois do final da adição, 70 a mistura reaccional foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 3 horas. A mistura foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida e o óleo viscoso resultante dissolvido em acetona (280 mL) e agitado durante 45 minutos. O sólido que se formou foi filtrado e seco sob vácuo. O sólido foi purificado por cromatografia eluindo com cloreto de metileno/metanol (saturado com amónia) (96/4) para dar 7- [3- (4-acetilpiperazin-l-il) propoxi] -4- [ (4-fluoro-2-metil-lJí-indol-5-il)oxi]-6-metoxiquinazolina (12,5 g, 60%) como um sólido branco. Os detalhes de MS e RMN são dados acima. 71 0 material de partida foi preparado como se segue: 1-Acetilpiperazina (15,0 g, 117 mmol) foi dissolvida em acetonitrilo (200 mL) e foi adicionado carbonato de potássio (40,4 g, 293 mmol) seguido de 3-bromo-l-propanol (10,6 mL, 117 mmol). A mistura foi aquecida a refluxo durante 2,5 horas, arrefecida, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O óleo viscoso resultante foi arrefecido em gelo durante 3 horas e o produto cristalino que se formou foi suspenso em éter dietilico e filtrado. O sólido higroscópico foi seco sob vácuo (P2O5) de um dia para o outro para dar 3-(4-acetilpiperazin-l-il)propan-l-ol (17,3 g, 90%) como um sólido amarelo pálido. (s, 3H) ; 2,51 2H); 3,82 (t,

Espectro de RMN de 1H: (CDCI3) 1,75 (m, 2H); 2,08 (m, 4H) ; 2,65 (t, 2H) ; 3,47 (t 1, 2H) ; 3,64 (t 1, 2H) MS-ESI: 187 [M+H]+

Alternativamente, a 7-[3-(4-acetilpiperazin-l-il)propoxi]-4 - [ (4-f luoro-2-meti 1-1 ií-indol-5-il) oxi ] -6-metoxiquinazolina pode ser preparada como se segue:

Uma mistura de 7- [3-(4-acetilpiperazin-l-il)propoxi]-4-cloro-6-metoxiquinazolina (20,0 g, 52,3 mmol), 4-fluoro-5- 72 hidroxi-2-metilindole (10,5 g, 63,3 mmol), (preparado como descrito para o material de partida no Exemplo de Referência 1), e carbonato de césio (34,4 g, 106 mmol) em acetona (500 mL) foi aquecida a refluxo durante 4 horas. A mistura foi arrefecida e deixada em repouso de um dia para o outro. A mistura foi filtrada e o sólido suspenso em água e refiltrado e seco sob vácuo. O sólido foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com cloreto de metileno/metanol (saturado com amónia) (95/5) para dar 7-[3-(4-acetilpiperazin-l-il)propoxi]-4-[(4-fluoro-2-metil-l.ff-indol-5-il)oxi]-6-metoxiquinazolina (20,4 g, 77%) como um sólido branco.

Os detalhes de MS e RMN são dados acima. O material de partida foi preparado como se segue: 4-Cloro-7-hidroxi-6-metoxiquinazolina (3 g, 14,2 mmol), (preparada como descrito para o material de partida no Exemplo de Referência 4), 3-(4-acetilpiperazin-l-il)propan-l-ol (3,2 g, 17.1 mmol), (preparado como descrito para o material de partida neste exemplo acima), e trifenilfosfina (4,5 g, 17,1 mmol) foram agitados em conjunto em diclorometano (140 mL) . Foi adicionado, gota a gota, azodicarboxilato de diisopropilo (3,4 mL, 17.1 mmol) e utilizado um banho de gelo/água para manter a temperatura da mistura reaccional abaixo de 10 °C. Após a adição, a mistura reaccional foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada de um dia para o outro. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. A cromatografia em coluna do resíduo (iso-hexano:acetato de etilo 2:1, em seguida 3% - 5% metanol/diclorometano) deu 7-[3-(4-acetilpiperazin-l- il )propoxi]-4-cloro-6-metoxiquinazolina (3,96 g, 74%) como um sólido branco. 73

Espectro de RMN de 1h: (DMSOde) 1,98 (m, 5H) ; 2,34 (m, 2H); 2,40 (m, 2H); 2,46 (t, 2H); 3,43 (m, 4H); 4,01 (s, 3H); 4,29 (t, 2H) ; 7,40 (s, 1H); 7,46 (s, 1H); 8,87 (s, 1H) MS-ESI 379,1 e 381,1 [MH]+

Alternativamente, a 7-[3-(4-acetilpiperazin-l-il)propoxi]-4- [ (4-f luoro-2-metil-lfí-indol-5-il) oxi] -6-metoxiquinazolina pode ser preparada como se segue:

4- [ ( 4-Fluoro-2-metil-lfí-indol-5-il) oxi] -7-hidroxi-6-metoxiquinazolina (250 mg, 0,74 mmol), (preparada como descrito para o material de partida neste exemplo acima), e carbonato de potássio (112 mg, 0,81 mmol) foram agitados em conjunto em N-metilpirrolidinona (3 mL) . Foi adicionada 1-acetil-4-(3- cloropropoxi)piperazina (166 mg, 0,81 mmol) em N-metilpirrolidinona (1 mL) e a mistura aquecida a 90 °C durante 3 horas. A mistura foi arrefecida, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O residuo foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com cloreto de metileno/metanol (saturado com amónia) (97/3) para dar 7-[3-(4-acetilpiperazin-l-il)propoxi]-4-[(4-fluoro-2-metil-lJí-indol-5-il)oxi]-6-metoxiquinazolina (268 mg, 71%) como um sólido branco.

Os detalhes de MS e RMN são dados acima. 74 0 material de partida foi preparado como se segue:

Uma mistura de 1-acetilpiperazina (1,0 g, 7,8 mmol), l-bromo-3-cloropropano (772 pL, 7,8 mmol) e carbonato de potássio (2,7 g, 19,5 mmol) em acetonitrilo (150 mL) foi aquecida a refluxo durante 2 horas. A mistura foi arrefecida, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com cloreto de metileno/metanol (98/2) para dar l-acetil-4-(3- cloropropoxi)piperazina (656 mg, 41%) como um óleo incolor.

Espectro de RMN de 1H: (CDCI3) 1,95 (m. 2H) ; 2,08 (s, 3H) ; 2,42 (m, 4H), 2,51 (t, 2H); 3,46 (t, 2H); 3,61 (t, 4H)

Exemplo 28

Uma mistura de 7-[ 2-(4-acetilpiperazin-l-il)etoxi]-4-cloro-6-metoxiquinazolina (12,24 g, 33,5 mmol), 4-fluoro-5-hidroxi-2-metilindole (5,54 g, 33,5 mmol), (preparado como descrito para o material de partida no Exemplo de Referência 1), e carbonato de potássio (4,64 g, 33,5 mmol) foi aquecida em N, N- dimet ilacetamida (150 mL) a 85 °C durante 4 horas. Foram adicionados 4-fluoro-5-hidroxi-2-metilindole (33 mg, 0,2 mmol) e carbonato de potássio (108 mg, 57%) e a mistura aquecida durante 75 mais 1 hora a 85 °C e em seguida agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida. 0 residuo foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com cloreto de metileno/metanol (95/5) para dar um sólido branco que foi suspenso em acetona (150 mL) e aquecido a refluxo durante 1 hora. Depois de arrefecer a mistura foi filtrada e o sólido seco ao ar para dar 7-[2-(4-acetilpiperazin-l-il) etoxi] -4- [ (4-fluoro-2-metil-lJí-indol-5-il) oxi] -6-metoxiquinazolina (10 g, 60%) como um sólido branco.

Espectro de RMN de ΧΗ: (DMS0d6) 2,00 (s, 3H); 2,42 (s, 3H) ; 2,52 (t, 2H); 2,56 (t 1, 2H); 2,85 (t, 2H); 3, 45 (m, 4H) ; 4, 00 (s, 3H) ; 4,35 (t, 2H) ; 6,2 5 (s, 1H), 6,99 (t , 1H); 7,17 (d, 1H) ; 7,45 (s, 1H); 7,62 (s, 1H); 8,51 (s, 1H); 11,32 (s 1, 1H) MS-ESI: 494,3 [M+H]+ O material de partida foi preparado como se segue :

Uma suspensão de 4-cloro-7-hidroxi-6-metoxiquinazolina (222 mg, 1,05 mmol), (preparada como descrito para o material de partida no Exemplo de Referência 4), em cloreto de metileno (12 mL) foi tratada com trifenilfosfina (389 mg, 1,48 mmol), 2-(4-acetilpiperazin-l-il)etanol (200 mg, 1,16 mmol) e azodicarboxilato de diisopropilo (255 mg, 1,26 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 2,5 horas. A mistura reaccional em bruto foi transferida para uma coluna de sílica e eluída utilizando cloreto de metileno/metanol (saturado com amoníaco) (92/8). As fracções relevantes foram combinadas e evaporadas sob vácuo para dar um resíduo, o qual foi triturado com acetona, filtrado e seco. Isto deu 7-[2-(4-acetilpiperazin- 76 1-il)etoxi]-4-cloro-6-metoxiquinazolina como um sólido branco (240 mg, 62%).

Espectro de RMN de 1H: (DMSOde) 1,97 (s, 3H) , 2,50 (m, 4H), 2,82 (t, 2H), 3,41 (m, 4H), 3,98 (s, 3H), 4,32 (t, 2H), 7,38 (s, 1H), 7,48 (s, 1H), 8,85 (s, 1H) MS-ESI: 365 (MH)+

Alternativamente, a 7-[2-(4-acetilpiperazin-l-il)etoxi]-4-( (4-f luoro-2-metil-li7-indol-5-il) oxi] -β-metoxiquinazolina pode ser preparada como se segue: I o 8r^~o

Uma mistura de 7-(2-bromoetoxi)-4-[(4-fluoro-2-metil-lfí-indol-5-il)oxi]-6-metoxiquinazolina (310 mg de uma amostra contendo óxido de trifenilfosfina (aprox. 12% p/p), 0,61 mmol) e 1-acetilpiperazina (258 mg, 2,02 mmol) em N, iV-dimetilf ormamida (5 mL) foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro e em seguida concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com cloreto de metileno/metanol (95/5) para dar 7-[2-(4-acetilpiperazin-l-il) etoxi] -4- [ (4-fluoro-2-metil-lJí-indol-5-il) oxi] -6-metoxiquinazolina (202 mg, 67%) como um sólido branco.

Os detalhes de MS e RMN são dados acima. 77 0 material de partida foi preparado como se segue:

Uma suspensão de 4-[ ( 4-f luoro-2-metil-lfí-indol-5-il) oxi ]-7-hidroxi-6-metoxiquinazolina (530 mg, 1,56 mmol), (preparada como descrito para o material de partida no Exemplo 7), em cloreto de metileno (15 mL) foi tratada com trifenilfosfina (570 mg, 2,18 mmol), 2-bromoetanol (300 mg, 2,40 mmol) e azodicarboxilato de diisopropilo (380 mg, 1,88 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura reaccional em bruto foi transferida para uma coluna de sílica e eluída utilizando acetato de etilo como solvente. As fracções relevantes foram combinadas e evaporadas sob vácuo para dar um resíduo, o qual foi triturado com éter, filtrado e seco. Isto deu 7- (2-bromoetoxi) -4- [ (4-f luoro-2-metil-lfí-indol-5-i 1) oxi ] -6-metoxiquinazolina como um sólido branco (546 mg, 78%).

Espectro de RMN de (DMSOd6) 2,40 (s, 3H) , 3,90 (t, 2H) , 3,99 (s, 3H), 4,56 (t, 2H), 6,21 (s, 1H), 6,97 (t, 1H), 7,16 (d, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 11,29 (s, 1H) MS (ESI) : 446 e 448 (MH)+ 78

Alternativamente, a 7-[2-(4-acetilpiperazin-l-il)etoxi]-4-[ (4-tluoro-2-metil-lfí-indol-5-il) oxi] -β-metoxiquinazolina pode ser preparada como se segue:

4 - [ (4-Fluoro-2-metil-líí-indol-5-il) oxi ] -7-hidroxi-6-metoxiquinazolina (300 mg, 0,88 mmol), (preparada como descrito para o material de partida no Exemplo 7), 2-(4-acetilpiperazin- l-il)etanol (183 mg, 1,06 mmol) e trifenilfosfina (278 mg, 1,06 mmol) foram agitados em conjunto em diclorometano (10 mL) e a mistura arrefecida num banho de gelo/água. Foi adicionado azodicarboxilato de diisopropilo (209 pL, 1,06 mmol) e a mistura agitada durante 1,5 horas. Foram adicionados mais um equivalente molar de 2-(4-acetilpiperazin-l-il)etanol (172 mg, 1 mmol), trifenilfosfina (262 mg, 1 mmol) e azodicarboxilato de diisopropilo (197 pL, 1 mmol) e a mistura agitada durante mais 1 hora. Os voláteis foram removidos sob vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com cloreto de met ileno/metanol (95/5) para dar um sólido em bruto que foi ainda purificado por HPLC preparativa para dar 7- [2- (4-acetilpiperazin-l-il) etoxi] -4- [ (4-fluoro-2-metil-l.ff-indol-5-il)oxi]-6-metoxiquinazolina (75 mg, 17%).

Os detalhes de MS e RMN são dados acima. O material de partida foi preparado como se segue: 79

Uma mistura de 1-acetilpiperazina (2,5 g, 19,5 mmol), 2-bromoetanol (1,38 mL, 19,5 mmol) e carbonato de potássio (6,7 g, 48,8 mmol) em acetonitrilo (30 mL) foi aquecida a refluxo durante 3 horas. A mistura foi arrefecida, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O residuo foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com cloreto de metileno/metanol (9/1) para dar 2-(4-acetilpiperazin-l-il)etanol (1,89 g, 56%) como um óleo incolor.

Espectro de RMN de ΧΗ: (CDC13) 2,09 (s, 3H) ; 2,50 (m, 4H) ; 2,57 (t, 2H); 3,48 (t, 2H); 3,63 (m, 4H)

Alternativamente, a 7-[2-(4-acetilpiperazin-l-il)etoxi]-4-[ (4-f luoro-2-metil-lfí-indol-5-il) oxi] -6-metoxiquinazolina pode ser preparada como se segue:

Uma mistura de 4-[(4-fluoro-2-metil-l.ff-indol-5-il)oxi]-7-hidroxi-6-metoxiquinazolina (250 mg, 0,74 mmol), 1-acetil-4-(2-cloroetil)piperazina (144 mg, 0,81 mmol) e carbonato de potássio (112 mg, 0,81 mmol) em iV-metilpirrolidinona (6 mL) foi aquecida a 90 °C durante 2 horas. A mistura foi arrefecida e adicionada água. Após 30 minutos, o sólido foi filtrado e seco sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com cloreto de metileno/metanol (saturado com amoníaco) (96/4) para dar 7- [2- (4-acetilpiperazin-l-il) etoxi] -4- [ (4-fluoro-2-metil-l.ff-indol-5-il)oxi]-6-metoxiquinazolina (310 mg, 58%) como um sólido branco.

Os detalhes de MS e RMN são dados acima. O material de partida foi preparado como se segue: 80 2-(4-Acetilpiperazin-l-il)etanol (500 mg, 2,90 mmol), (preparado como descrito para o material de partida neste exemplo acima), foi dissolvido em cloreto de metileno (10 mL) e foram adicionados trietilamina (445 pL, 3,19 mmol) e cloreto de 4-toluenossulfonilo (609 mg, 3,19 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (MgSCq) e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com cloreto de metileno/metanol (98/2) para dar l-acetil-4-(2- cloroetil)piperazina (300 mg, 54%) como um óleo.

Espectro de RMN de 1R: (CDC13) 2,08 (s, 3H); 2,48 (t 1, 2H); 2,52 (t 1, 2H) ; 2,75 (t, 2H) ; 3,48 (t 1, 2H) ; 3,59 (t, 2H) ; 3,63 (t 1, 2H)

Exemplo 54

Os seguintes ilustram formas de dosagem farmacêuticas representativas contendo um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável (daqui em diante composto X) , para utilização terapêutica ou profiláctica em humanos: (a)

Comprimido I mg/comprimido

Composto X 100

Lactose Ph.Eur 182,75

Croscarmelose sódica 12,0

Pasta de amido de milho (pasta a 5% p/v) 2,25 81

Comprimido I mg/comprimido Estearato de magnésio 3,0 (b) Comprimido II mg/comprimido Composto X 50 Lactose Ph.Eur 223,75 Croscarmelose sódica 6,0 Amido de milho 15, 0 Polivinilpirrolidona (pasta a 5% p/v) 2,25 Estearato de magnésio 3,0 (c) Comprimido III mg/comprimido Composto X 1,0 Lactose Ph.Eur 93,25 Croscarmelose sódica 4,0 Pasta de amido de milho (pasta a 5% p/v) 0, 75 Estearato de magnésio 1,0 (d) Cápsula mg/cápsula Composto X 10 Lactose Ph.Eur 488,5 Estearato de magnésio 1,5 82 (e)

Injecçao I (5 0 mg/ mL) Composto X 5,0% p/v Solução de hidróxido de sódio 1 M 15,0% v/v Ácido clorídrico 0,1 M (para ajustar o pH a 7,6) Polietilenoglicol 400 4,5% p/v Água para preparação injectável até 100% (f) Injecção II (10 mg/ mL) Composto X 1,0% p/v Fosfato de sódio BP 3,6% p/v Solução de hidróxido de sódio 0,1 M 15,0% v/v Água para preparação injectável até 100% (g) Injecção III (lmg/mL, tamponada a pH6) Composto X 0,1 % p/v Fosfato de sódio BP 2,26% p/v Ácido cítrico 0,38% p/v Polietileno glicol 400 3,5% p/v Água para preparaçao injectável até 100% Nota

As formulações acima podem ser obtidas por processos convencionais bem conhecidos na técnica farmacêutica. Os 83 por um comprimidos (a)-(c) podem ser revestidos de modo entérico meios convencionais, por exemplo, para proporcionar revestimento de ftalato acetato de celulose.

Lisboa, 26 de Abril de 2012 84

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Composto 7-(3-(4-acetilpiperazin-l-il)propoxi)-4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6-metoxiquinazolina e os seus sais.
2. Composto 7-[2-(4-acetilpiperazin-l-il)etoxi]-4-[(4-fluoro-2-metil-lff-indol-5-il) oxi] -β-metoxiquinazolina e os seus sais.
3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2 na forma de um sal farmaceuticamente aceitável.
4. Processo para a preparação de um composto de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2 ou o seu sal, o qual compreende: (a) a reacção de um composto da fórmula III: L

H (III) (em que R2 é 6-metoxilo, 7-(3-(4-acetilpiperazin-l-il )propoxilo) ou 6-metoxilo, 7-[2-(4-acetilpiperazin-l-il) etoxilo], m é 2 e L1 é uma unidade substituível), com um composto da fórmula IV: 1 (IV)

(*)„ ΖΗ (em que o anel C é indol-5-ilo, R1 é 4-fluoro, 2-metilo, Z é -0- e n é 2); (b) um composto de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2 e os seus sais pode ser preparado pela reacção de um composto da fórmula V:

H (V) (em que o anel C é indol-5-ilo, Z é -0-, R1 é 4-fluoro, 2-metilo, R2 é 6-metoxilo, n é 2 e X1 é -0- e s é 1) com um composto da fórmula VIb: (VIb) (em que Q1 é 3-(4-acetilpiperazin-l-il)propilo ou 2-(4-acetilpiperazin-l-il)etilo e L1 é como aqui definido); 2 (c) um composto de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2 e os seus sais pode ser preparado pela reacção de um composto da fórmula VII:

(VII) com um composto da fórmula VlIIb: Q1-X1-H (VlIIb) (em que s e L1 são como aqui definidos, o anel C é indol-5-ilo, Z é -0-, R1 é 4-fluoro, 2-metilo, R2 é 6-metoxilo, n é 2, e Q1 é 3-(4-acetilpiperazin-l-il)propilo ou 2-(4-acetilpiperazin-l-il)etilo e X1 é -0-) ; (d) um composto de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2 e os seus sais pode ser preparado fazendo reagir um composto da fórmula IX: 3

(IX) (em que L1 e s são como aqui definidos, X1 é -0-, o anel C é indol-5-ilo, Z é -0-, R1 é 4-fluoro, 2-metilo, R2 é β-metoxilo e n é 2) com um composto da fórmula Xb: Q2-H (Xb) (em que Q2 é 4-acetilpiperazin-l-ilo); e quando é necessário um sal de um composto de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2, reacção do composto obtido com um ácido ou base de acordo com o que se obtém o sal desejado.
5. Composição farmacêutica, a qual compreende como ingrediente activo um composto de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável em associação com um excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitável.
6. Utilização de um composto de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2 ou um seu sal f armaceuticamente aceitável no fabrico de um medicamento para utilização na 4 produção de um efeito antiangiogénico e/ou de redução da permeabilidade vascular num animal de sangue quente.
7. Composto 7-benziloxi-4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6-metoxiquinazolina ou um seu sal.
8. Composto 4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-7-hidroxi-6- metoxiquinazolina ou um seu sal. Lisboa, 26 de Abril de 2012 5