ES2381781T3 - Compuestos de quinazolina - Google Patents

Abstract

Un compuesto 7- (3- (4-acetilpiperazin-1-il) propoxi) -4- (4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi) -6-metoxiquinazolina y una de sus sales.

Description

Compuestos de quinazolina

La presente invenci6n se refiere a derivados de quinazolina, a los procedimientos para su preparaci6n, a los compuestos intermedios para su preparaci6n, a las composiciones farmaceuticas que los contienen como

5 ingrediente activo, a su utilizaci6n como medicamentos y a su utilizaci6n en la preparaci6n de medicamentos para su utilizaci6n en la producci6n de efectos reductores de permeabilidad antiangiogenica y/o vascular en animales de sangre caliente tales como los humanos.

La angiogenia normal desempena una funci6n importante en diversos procesos, incluyendo el desarrollo embrionario, la curaci6n de heridas y varios componentes de la funci6n reproductiva femenina. La angiogenia 10 indeseable o patol6gica se ha asociado a enfermedades incluyendo la retinopatia diabetica, la psoriasis, el cancer, la artritis reumatoide, el ateroma, el sarcoma de Kaposi y el hemangioma (Fan et al., 1995, Trends Pharmacol. Sci., 16: 57-66; Folkman, 1.995, Nature Medicine 1: 27-31). Se cree que la alteraci6n de la permeabilidad vascular juega un papel tanto en procesos fisiol6gicos normales como patol6gicos (Cullinan-Bove et al., 1993, Endocrinology 133: 829837; Senger et al., 1993, Cancer and Metastasis Reviews, 12: 303-324). Se han identificado varios polipeptidos con 15 actividad estimuladora del crecimiento celular endotelial in vitro, incluyendo factores de crecimiento de fibroblastos acidos y basicos (aFGF y bFGF) y el factor A de crecimiento endotelial vascular (VEGF). En virtud de la expresi6n restringida de sus receptores, la actividad de factor de crecimiento del VEGF, en contraste con la de los FGF, es relativamente especifica de las celulas endoteliales. Pruebas recientes indican que el VEGF es un importante estimulador tanto de la angiogenia normal como patol6gica (Jakeman et al., 1993, Endocrinology, 133: 848-859; 20 Kolch et al., 1995, Breast Cancer Research and Treatment, 36:139-155) y de la permeabilidad vascular (Connolly et al., 1989, J. Biol. Chem. 264: 20017-20024). El antagonismo de la acci6n del VEGF por secuestro del VEGF con anticuerpo puede dar como resultado la inhibici6n del crecimiento tumoral (Kim et al., 1993, Nature 362: 841-844). El FGF basico (bFGF) es un potente estimulador de angiogenia (p. ej. Hayek et al., 1987, Biochem. Biophys. Res. Commun. 147: 876-880) y el aumento de las concentraciones de FGF se ha encontrado en el suero (Fujimoto et al.,

25 1991, Biochem. Biophys. Res. Commun. 180: 386-392) y en la orina (Nguyen et al., 1993, J. Natl. Cancer. Inst. 85: 241-242) de pacientes con cancer.

Las tirosina cinasas receptoras (RTK, por sus siglas en ingles) son importantes para la transmisi6n de senales bioquimicas a traves de la membrana plasmatica de las celulas. Estas moleculas transmembranarias consisten de manera caracteristica en un dominio extracelular de uni6n al ligando conectado a traves de un segmento en la 30 membrana plasmatica a un dominio intracelular con actividad de tirosina cinasa. La uni6n del ligando al receptor da como resultado la estimulaci6n de la actividad de la tirosina cinasa asociada al receptor, que conduce a la fosforilaci6n de los restos de tirosina tanto en el receptor como en otras moleculas intracelulares. Estos cambios en la fosforilaci6n de la tirosina inician una cascada de senales que conduce a una serie de respuestas celulares. Hasta la fecha, se han identificado al menos diecinueve subfamilias diferenciadas de RTK, definidas por la homologia de la 35 secuencia de aminoacidos. Una de estas subfamilias esta actualmente comprendida por el receptor de tirosina cinasa de tipo fms, Flt-1, el receptor que contiene el dominio de inserci6n de cinasa, KDR -1 (tambien referido como Flk-1) y otro receptor de tirosina cinasa de tipo fms, Flt-4. Se ha demostrado que dos de estas RTK relacionadas, Flt1 y KDR, se unen a VEGF con gran afinidad (De Vries et al., 1992, Science 255: 989-991; Terman et al., 1.992, Biochem. Biophys. Res. Comm. 1992, 187: 1579-1586). La fijaci6n del VEGF a estos receptores expresados en

40 celulas heter6logas se ha asociado a cambios en el estado de fosforilaci6n de la tirosina de las proteinas celulares y en los flujos de calcio.

La presente invenci6n se basa en el descubrimiento de compuestos que sorprendentemente inhibe los efectos del VEGF, una propiedad valiosa en el tratamiento de enfermedades asociado a la angiogenia y/o al aumento de la permeabilidad vascular tales como el cancer, la diabetes, la psoriasis, la artritis reumatoide, el sarcoma de Kaposi, el

45 hemangioma, el linfoedema, las nefropatias aguda y cr6nica, el ateroma, la restenosis arterial, las enfermedades autoinmunitarias, la inflamaci6n aguda, la formaci6n excesiva de cicatrices y adherencias, endometriosis, hemorragia uterina disfuncional y enfermedades oculares con proliferaci6n de vasos retinianos incluyendo la degeneraci6n macular.

El VEGF es un estimulo clave para la vasculogenia y la angiogenia. Esta citocina induce un fenotipo de crecimiento

50 vascular rapido induciendo la proliferaci6n de celulas endoteliales, la expresi6n y migraci6n de la proteasa, y la posterior organizaci6n de las celulas para formar un tubo capilar (Keck, P.J., Hauser, S.D., Krivi, G., Sanzo, K., Warren, T., Feder, J., y Connolly, D.T., Science (Washington DC), 246: 1309-1312, 1989; Lamoreaux, W.J., Fitzgerald, M.E., Reiner, A., Hasty, K.A., y Charles, S.T., Microvasc. Res., 55: 29-42, 1998; Pepper, M.S., Montesano, R., Mandroita, S.J., Orci, L. y Vassalli, J.D., Enzyme Protein, 49: 138-162, 1996.). Ademas, VEGF

55 induce permeabilidad vascular significativa (Dvorak, H.F., Detmar, M., Claffey, K.P., Nagy, J.A., van de Water, L. y Senger, D.R., (Int. Arch. Allergy Immunol., 107: 233-235, 1995; Bates, D.O., Heald, R.L, Curry, F.E. y Williams, B. J. Physiol. (Lond.), 533: 263-272, 2001), estimulando la formaci6n de una red vascular inmadura, hiperpermeable, que es caracteristica de la angiogenia patol6gica.

Se ha demostrado que la activaci6n solo del KDR es suficiente para estimular todas las respuestas fenotipicas principales al VEGF, incluyendo la proliferaci6n, la migraci6n y la supervivencia de las celulas endoteliales, y la inducci6n de la permeabilidad vascular (Meyer, M., Clauss, M., Lepple-Wienhues, A., Waltenberger, J., Augustin, H.G., Ziche, M., Lanz, C., Buttner, M., Rziha, H-J. y Dehio, C., EMBO J., 18: 363-374, 1999; Zeng, H., Sanyal, S. y

5 Mukhopadhyay, D., J. Biol. Chem., 276: 32714-32719, 2001; Gille, H., Kowalski, J., Li, B., LeCouter, J., Moffat, B, Zioncheck, T.F., Pelletier, N. y Ferrara, N., J. Biol. Chem., 276: 3222-3230, 2001).

La publicaci6n de la solicitud de patente Internacional numero WO 00/47212 describe los inhibidores de tirosina cinasa receptores de VEGF. Los compuestos del documento WO 00/47212 posee actividad contra el receptor VEGF de tirosina cinasa (RTK) de modo que puede utilizarse en una cantidad suficiente para inhibir VEGF RTK mientras 10 que no demuestran ninguna actividad significativa contra EGF RTK. Su actividad inhibidora de VEGF RTK es debida tanto a la actividad contra KDR como contra Flt-1, pero generalmente son mas potentes contra KDR. Generalmente han ampliado la farmacocinetica del plasma. Se ha descubierto que algunos inhibidores RTK de VEGF actuan como bloqueadores del canal de potasio y son positivos en un ensayo de hERG; dicha actividad puede dar lugar a cambios del ECG (electrocardiograma) in vivo. Los compuestos del documento WO 00/47212 tienen

15 predominantemente cadenas laterales basicas.

Inesperadamente los inventores han descubierto ahora los compuestos de la presente invenci6n son inhibidores de KDR muy potentes pero que tienen menos actividad contra Flt-1 que los compuestos del documento WO 00/47212, que tienen farmacocinetica del plasma menos extendida que los compuestos del documento WO 00/47212 y que son inactivos o solamente muy poco activos en un ensayo de hERG. Los compuestos de la presente invenci6n

20 tienen predominantemente cadenas laterales neutras. Los compuestos de la presente invenci6n tienen un perfil toxicol6gico beneficioso en comparaci6n con los compuestos del documento WO 00/47212.

Dado que KDR media todas las respuestas fenotipicas a VEGF aguas abajo incluyendo la permeabilidad , la proliferaci6n, invasi6n y migraci6n de las celulas endoteliales, la inhibici6n de KDR es deseable con objeto de conseguir un efecto reductor antiangiogenico y/o de permeabilidad vascular. Asi la especificidad para la inhibici6n de

25 KDR es deseable. Los compuestos de la presente invenci6n se dirigen de manera mas especifica contra KDR y tienen menos actividad contra Flt-1.

Segun un aspecto de la presente invenci6n se proporciona un compuesto 7-(3-(4-acetilpiperazin-1-il)propoxi)-4-(4fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6-metoxiquinazolina y una de sus sales.

Segun otro aspecto de la presente invenci6n se proporciona un compuesto 7-[2-(4-acetilpiperazin-1-il)etoxi]-4-[(430 fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi]-6-metoxiquinazolina y una de sus sales.

Un compuesto especifico es la 7-(3-(4-acetilpiperazin-1-il)propoxi)-4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6-metoxiquinazolina y una de sus sales. Un compuesto especifico de la presente invenci6n es la 7-[2-(4-acetilpiperazin-1il)etoxi]-4-[(4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi]-6-metoxiquinazolina y una de sus sales.

Para evitar dudas, se debe entender que cuando en esta memoria descriptiva se califica un grupo como

35 'anteriormente definido en este documento' o 'definido anteriormente en este documento', dicho grupo abarca el primero que aparece y la definici6n mas amplia, asi como cada una y todas las definiciones preferidas para ese grupo.

En esta memoria descriptiva, a menos que se indique lo contrario el termino "alquilo" incluye tanto los grupos alquilo de cadena lineal como ramificada, si bien las referencias a grupos alquilo individuales, tales como "propilo" son 40 especificas unicamente para la versi6n de cadena lineal. Se aplica un convenio analogo a otras terminologias genericas. A no ser que se establezca de otra manera, el termino "alquilo" se refiere ventajosamente a cadenas con 1 a 6 atomos de carbono, preferiblemente 1 a 4 atomos de carbono. La terminologia "alcoxi" como se usa en la presente memoria, a menos que se indique de otro modo, incluye grupos "alquil"-O-en los que "alquilo" es como se defini6 anteriormente. La terminologia "arilo" Tal como se utiliza en la presente memoria a menos que se indiquee de 45 otra manera incluye la referencia a un grupo arilo C6-10 que puede, si se desea, llevar uno o mas sustituyentes seleccionados de hal6geno, alquilo, alcoxi, nitro, trifluorometilo y ciano, (en el que alquilo y alcoxi son como se definieron anteriormente en la presente memoria). La terminologia "ariloxi" como se usa en la presente memoria, a menos que se indique de otro modo, incluye grupos "aril"-O-en los que "arilo" es como se defini6 anteriormente. La terminologia "sulfoniloxi" tal como se utiliza en la presente memoria se refiere a grupos alquilsulfoniloxi e 50 arilsulfoniloxi en los que "alquilo" y "arilo" son como se definieron anteriormente en la presente memoria. La terminologia "alcanoilo" como se usa en la presente memoria, a menos que se indique de otro modo, incluye grupos formilo y alquilC=O en los que "alquilo" es como se defini6 anteriormente, por ejemplo alcanoilo C2 es etanoilo y se refiere a CH3C=O, alcanoilo C1 es formilo y se refiere a CHO. Butanoilo se refiera a CH3-CH2-CH2-C(O), isobutirilo se refiera a (CH3)2.CH-C(O). En esta memoria descriptiva, a menos que se indique de otro modo, la terminologia 55 "alquenilo" incluye grupos alquenilo tanto de cadena tanto lineal como ramificada, pero las referencias a grupos alquenilo individuales tales como 2-butenilo son especificas de la versi6n de cadena lineal s6lo. A no ser que se indique de otra manera, el termino "alquenilo" se refiere ventajosamente a cadenas con 2 a 5 atomos de carbono, preferentemente de 3 a 4 atomos de carbono. En esta memoria descriptiva, a menos que se indique de otro modo, la terminologia "alquinilo" incluye grupos alquinilo de cadena tanto lineal como ramificada, pero las referencias a

grupos alquinilo individuales tales como 2-butinilo son especificas de la versi6n de cadena lineal s6lo. A no ser que se indique de otra manera, el termino "alquinilo" se refiere ventajosamente a cadenas con 2 a 5 atomos de carbono, preferentemente de 3 a 4 atomos de carbono. A menos que se exprese de otra manera el termino "haloalquilo" se refiere a un grupo alquilo como se defini6 anteriormente en la presente memoria que lleva uno o mas grupos

5 hal6geno, tales como por ejemplo trifluorometilo.

En la presente invenci6n debe entenderse que un compuesto de la presente invenci6n o una sal de este puede exhibir el fen6meno de tautomeria y que los dibujos de las f6rmulas en esta memoria pueden representar s6lo una de las posibles formas taut6meras. Debe entenderse que la invenci6n comprende cualquier forma taut6mera que inhibe la actividad de la tirosina cinasa receptora de VEGF y no debe estar limitada unicamente a cualquier forma

10 taut6mera utilizada en los dibujos de las f6rmulas. Los dibujos de las f6rmulas en esta memoria descriptiva pueden representar unicamente una de las posibles formas taut6meras, y se sobreentiende que la memoria descriptiva incluye todas las posibles formas taut6meras de los compuestos representados y no s6lo aquellas formas que ha sido posible representar graficamente en la presente memoria.

Tambien se sobreentiende que determinados compuestos de la presente invenci6ny sus sales pueden existir en

15 formas solvatadas asi como no solvatadas, tales como por ejemplo, formas hidratadas. Se sobreentiende que la invenci6n incluye comprende todas esas formas solvatadas que inhiben la actividad de la tirosina cinasa receptora de VEGF.

La presente invenci6n se refiere a los compuestos de la presente invenci6n como se definieron anteriormente en la presente memoria asi como a sus sales. Las sales para utilizaci6n en composiciones farmaceuticas seran sales 20 farmaceuticamente aceptables, pero pueden ser de utilidad otras sales en la producci6n de los compuestos de la presente invenci6n y sus sales farmaceuticamente aceptables. Las sales farmaceuticamente aceptables de la invenci6n pueden incluir, por ejemplo, sales de adici6n de acido de los compuestos de la presente invenci6n, tal como se han definido anteriormente en la presente memoria, y que son suficientemente basicas para formar tales sales. Estas sales de adici6n de acido incluyen, por ejemplo, sales con acidos inorganicos u organicos que 25 proporcionan aniones farmaceuticamente aceptables tales como con haluros de hidr6geno (en especial, acido clorhidrico o bromhidrico, de los que se prefiere, en especial, el acido clorhidrico), o con acido sulfurico o fosf6rico, o con acido trifluoroacetico, citrico o maleico. Ademas, cuando los compuestos de la presente invenci6n son suficientemente acidos, pueden formarse sales farmaceuticamente aceptables con una base inorganica u organica, que proporcione un cati6n farmaceuticamente aceptable. Estas sales con bases inorganicas u organicas incluyen,

30 por ejemplo, una sal de metal alcalino, tal como una sal de sodio o de potasio, una sal de metal alcalinoterreo tal como una sal de calcio o de magnesio, una sal de amonio o, por ejemplo, una sal con metilamina, dimetilamina, trimetilamina, piperidina, morfolina o tris-(2-hidroxietil)amina.

Un compuesto de la presente invenci6n o una de sus sales y otros compuestos de la invenci6n (tal como se definen en la presente memoria) pueden prepararse por cualquier proceso conocido por ser aplicable a la preparaci6n de 35 compuestos quimicamente relacionados. Dichos procedimientos incluyen, por ejemplo, los ilustrados en la solicitud de patente internacional numero WO 00/47212 y en la Publicaci6n de las solicitudes de patente europeas nO 0520722, nO 0566226, nO 0602851 y nO 0635498. Dichos procedimientos tambien incluyen, por ejemplo, sintesis en fase s6lida. Dichos procedimientos, se proporcionan como una caracteristica mas de la invenci6n y son como se describen mas adelante en la presente memoria. Los materiales de partida necesarios pueden obtenerse por

40 procedimientos convencionales de quimica organica. La preparaci6n de dichos materiales de partida se describe en los Ejemplos adjuntos no restrictivos. Como alternativa, los materiales de partida necesarios pueden obtenerse por procedimientos analogos a los ilustrados, que estan dentro de la experiencia habitual de un quimico organico.

Por lo tanto, los procedimientos (a) a (d) siguientes y (i) a (v) constituyen adicionales caracteristicas de la presente invenci6n.

45 Sintesis�de�compuestos�de�la�presente�invencian

(a) Los compuestos de la presente invenci6n y una de sus sales pueden prepararse mediante la reacci6n de un compuesto de f6rmula III:

(en la que R2 es 6-metoxi, 7-(3-(4-acetilpiperazin-1-il)propoxi) o 6-metoxi, 7-[2-(4-acetilpiperazin-1-il)etoxi), m es 2 y 50 L1 es un resto desplazable), con un compuesto de f6rmula IV:

(en la que el anillo C es indol-5-il, R1 es 4-fluoro, 2-metilo, Z es -O-y n es 2); para obtener compuestos de la presente invenci6n y una de sus sales. Un resto L1 desplazable conveniente es, por ejemplo, un hal6geno, un grupo alcoxi (preferentemente alcoxi C1-4 ), ariloxi, alquilsulfanil, arilsulfanil, alcoxialquilsulfanil o sulfoniloxi, por ejemplo un

5 cloro, bromo, un grupo metoxi, fenoxi, metilsulfanil, 2-metoxietilsulfanil, metansulfoniloxi o tolueno-4-sulfoniloxi.

La reacci6n se efectua ventajosamente en presencia de una base. Dicha base es, por ejemplo, una base de amina organica tal como, por ejemplo, piridina, 2,6-lutidina, colidina, 4-dimetilaminopiridina, trietilamina, morfolina, Nmetilmorfolina o diazabiciclo[5.4.0]undec-7-ena, tetrametilguanidina o por ejemplo, un carbonato o hidr6xido de metal alcalino o alcalinoterreo, por ejemplo carbonato de sodio, carbonato de potasio, carbonato de calcio, carbonato de 10 cesio, hidr6xido de sodio o hidr6xido de potasio. Alternativamente, dicha base es, por ejemplo, un hidruro de metal alcalino, por ejemplo hidruro de sodio o una amida de metal alcalino o de metal alcalinoterreo, por ejemplo amida de sodio, bis(trimetilsilil)amida de sodio, amida de potasio o bis(trimetilsilil)amida de potasio. La reacci6n se realiza preferentemente en presencia de un disolvente o diluyente inerte, por ejemplo un eter tal como tetrahidrofurano o 1,4-dioxano, un disolvente hidrocarbonado aromatico tal como tolueno, o un disolvente apr6tico dipolar tal como

15 N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, N-metilpirrolidin-2-ona o sulf6xido de dimetilo. La reacci6n se efectua convenientemente a una temperatura en el intervalo, por ejemplo, 10 a 150°C, preferentemente en el intervalo 20 a 90°C.

En la que R2 contiene un anillo heterociclico con un sustituyente es posible anadir el sustituyente tras el procedimiento (a) anterior utilizando procedimientos estandar de quimica organica. Asi por ejemplo un compuesto de

20 f6rmula III como se defini6 anteriormente en la presente memoria pero en la que R2 contiene un anillo heterociclico no sustituido puede hacerse reaccionar con un compuesto de f6rmula IV definido anteriormente en la presente memoria para dar un compuesto intermedio en el que R2 contiene un anillo heterociclico no sustituido. El compuesto intermedio puede sustituirse a continuaci6n en el anillo heterociclico en R2 utilizando tecnicas estandar de quimica organica para dar un compuesto final de la invenci6n.

25 Cuando se desea obtener la sal del acido, la base libre puede tratarse con un acido tal como un haluro de hidr6geno, por ejemplo cloruro de hidr6geno, acido sulfurico, un acido sulf6nico, por ejemplo acido metansulf6nico, o un acido carboxilico, por ejemplo un acido acetico o citrico, utilizando un procedimiento convencional.

(b) Producci6n de compuestos de la presente invenci6n y sales de los mismos pueden conseguirse por la reacci6n,

convenientemente en presencia de una base (como se defini6 anteriormente en la presente memoria en el 30 procedimiento (a)) de un compuesto de f6rmula V:

(en la que el anillo C es indol-5-il, Z es -O-, R1 es 4-fluoro, 2-metil, R2 es 6-metoxi, n es 2 y X1 es -O-y s es 1) con un compuesto de f6rmula VIb:

Q1-L1 (VIb)

35 (en la que Q1 es 3-(4-acetilpiperazin-1-il)propilo o 2-(4-acetilpiperazin-1-il)etilo y L1 es como se defini6 en la presente memoria);L1 es un resto displazable por ejemplo un hal6geno o un grupo sulsulfoniloxi tal como bromo, un grupo metansulfoniloxi o tolueno-4-sulfoniloxi, o L1 pueden ser generado in situ a partir de un alcohol en condiciones estandar de Mitsunobu ("Organic Reactions", John Wiley & Sons Inc, 1992, vol. 42, capitulo 2, David L Hughes). La reacci6n se efectua preferentemente en presencia de una base (como se defini6 anteriormente en la presente memoria en el procedimiento (a)) y ventajosamente en presencia de un disolvente o diluyente inerte (como se defini6 anteriormente en la presente memoria en el procedimiento (a)), ventajosamente a una temperatura en el intervalo, por ejemplo de 10 a 150°C, convenientemente a t aproximadamente 50°C.

(c) Los compuestos de la presente invenci6n y una de sus sales pueden prepararse por reacci6n de un compuesto 5 de f6rmula VII:

con un compuesto de f6rmula VIIIb:

Q1-X1-H (VIIIb)

(en la que s y L1 son como se define en la presente memoria, el anillo C es indol-5-il, Z es -O-, R1 es 4-fluoro, 2

10 metilo, R2 es 6-metoxi, n es 2, y Q1 es 3-(4-acetilpiperazin-1-il)propilo o 2-(4-acetilpiperazin-1-il)etilo y X1 es -O-). La reacci6n puede efectuarse convenientemente en presencia de una base (como se defini6 anteriormente en el procedimiento (a)) y ventajosamente en presencia de un disolvente o diluyente inerte (como se defini6 anteriormente en la presente memoria en el procedimiento (a)), ventajosamente a una temperatura en el intervalo, por ejemplo de 10 a 150°C, convenientemente a aproximadamente 100°C.

15 (d) Los compuestos de la presente invenci6n y las sales de los mismos pueden prepararse haciendo reaccionar un compuesto de f6rmula IX:

(en la que L1 y s son como se definieron anteriormente en la presente memoria, X1 es anillo con, -O-, C es indol-5-il, Z es -O-, R1 es 4-fluoro, 2-metil, R2 es 6-metoxi y n es 2) con un compuesto de f6rmula Xb:

20 Q2-H (Xb)

(en la que Q2 es 4-acetilpiperazin-1-il); para dar un compuesto de la presente invenci6n o una una de sus sales. La reacci6n puede efectuarse convenientemente en presencia de una base (como se defini6 anteriormente en el procedimiento (a)) y ventajosamente en presencia de un disolvente o diluyente inerte (como se defini6 anteriormente en la presente memoria en el procedimiento (a)), y a una temperatura en el intervalo, por ejemplo de 0 a 150°C,

25 convenientemente a aproximadamente 50°C.

Los procedimientos (a), (b) y (d) se prefieren sobre el procedimiento (c).

Los procedimientos (a) y (b) son los mas preferidos.

Sintesis de compuestos intermedios

(i) Los compuestos de f6rmula III y las sales de los mismos en los que L1 es hal6geno pueden prepararse por 30 ejemplo por halogenaci6n de un compuesto de f6rmula XI:

en la que R2 y m son como se definieron anteriormente en la presente memoria)

Los agentes de halogenaci6n convenientes comprenden haluros de acidos inorganicos, por ejemplo cloruro de tionilo, cloruro de f6sforo(III), oxicloruro de f6sforo(V) y cloruro de f6sforo(V).

5 La reacci6n de halogenaci6n puede efectuarse en presencia de un disolvente o diluyente inerte tal como por ejemplo un disolvente halogenado tal como cloruro de metileno, triclorometano o tetracloruro de carbono, o un disolvente de hidrocarburo aromatico tal como benceno o tolueno, o la reacci6n puede efectuarse sin la presencia de un disolvente. La reacci6n se efectua convenientemente a una temperatura en el intervalo, por ejemplo de 10 a 150°C, preferentemente en el intervalo de 40 a 100°C.

10 Los compuestos de formula XI y las sales de los mismos, por ejemplo, pueden prepararse haciendo reaccionar un compuesto de f6rmula XII:

(en la que R2, s y L1 son como se definieron anteriormente en la presente memoria) con un compuesto de f6rmula VIIIb como se defini6 anteriormente en la presente memoria. La reacci6n puede efectuarse convenientemente en

15 presencia de una base (como se defini6 anteriormente en el procedimiento (a)) y ventajosamente en presencia de un disolvente o diluyente inerte (como se defini6 anteriormente en la presente memoria en el procedimiento (a)), ventajosamente a una temperatura en el intervalo, por ejemplo de 10 a 150°C, convenientemente a aproximadamente 100°C.

Los compuestos de formula XI y las sales de los mismos, por ejemplo, pueden prepararse tambien mediante la 20 reacci6n de un compuesto de f6rmula XIII:

(en la que R2 y s son como se definieron anteriormente en la presente memoria y X1 es -O-con un compuesto de f6rmula VIb como se defini6 anteriormente en la presente memoria. La reacci6n puede efectuarse por ejemplo como se describe anteriormente en la presente memoria para el procedimiento (b). El grupo pivaloiloximetil puede

25 escincirse a continuaci6n haciendo reaccionar el producto con una base tal como, por ejemplo, amoniaco acuoso, trietilamina en agua, un hidr6xido o alc6xido de metal alcalino o metal alcalinoterreo, preferentemente amoniaco acuoso, hidr6xido de sodio acuoso o hidr6xido de potasio acuoso, en un disolvente pr6tico polar tal como un alcohol, por ejemplo metanol o etanol. La reacci6n se efectua convenientemente a una temperatura en el intervalo de 20 a 100°C, preferentemente en el intervalo de 20 a 50°C.

30 Los compuestos de formula XI y las sales de los mismos pueden prepararse tambien ciclando un compuesto de f6rmula XIV:

(en la que R2 y m, son como se definieron anteriormente en la presente memoria, y A1 es un grupo hidroxi, alcoxi (preferentemente alcoxi C1-4) o amino ) con lo que para formar un compuesto de f6rmula XI o una de sus sales. La ciclaci6n puede efectuarse haciendo reaccionar un compuesto de f6rmula XIV, en la que A1 es un grupo hidroxi o 5 alcoxi, con formamida o uno de sus equivalentes eficaces para producir ciclaci6n con lo que se obtiene un compuesto de f6rmula XI o una de sus sales, tal como el cloruro de [3-(dimetilamino)-2-azaprop-2enilideno]dimetilamonio. La ciclaci6n se efectua convenientemente en presencia de formamida como disolvente o en presencia de un disolvente o diluyente inerte tal como un eter, por ejemplo, 1,4-dioxano. La ciclaci6n se efectua convenientemente a una temperature elevada, preferentemente en el intervalo de 80 a 200°C. Los compuestos de 10 f6rmula XI pueden tambien prepararse ciclando un compuesto de f6rmula XIV, en la que A1 es un grupo amino, con acido f6rmico o uno de sus equivalentes eficaz para producir ciclaci6n por lo que se obtiene un compuesto de f6rmula XI o una de sus sales. Equivalentes de acido f6rmico eficaz para producir ciclaci6n comprenden, por ejemplo, un tri-alcoxi C1-4-metano, por ejemplo, trietoximetano y trimetoximetano. La ciclaci6n se efectua convenientemente en presencia de una cantidad catalitica de un acido anhidro, tal como un acido sulf6nico por

15 ejemplo acido p-toluensulf6nico, y en presencia de un disolvente o diluyente inerte tal como por ejemplo un disolvente halogenado tal como cloruro de metileno, triclorometano o tetracloruro de carbono, un eter tal como eter dietilico o tetrahidrofurano, o un disolvente hidrocarburo aromatico tal como tolueno. La ciclaci6n se efectua convenientemente a una temperatura en el intervalo, por ejemplo, de 10 a 100°C, preferentemente en el intervalo de 20 a 50°C.

20 Pueden prepararse compuestos de f6rmula XIV y sales de los mismos, por ejemplo, por reducci6n del grupo nitro en un compuesto de f6rmula XV:

(en la que R2, m y A1 son como se definieron anteriormente en la presente memoria) para dar un compuesto de f6rmula XIV como se defini6 anteriormente en la presente memoria. La reducci6n del grupo nitro se puede 25 efectuarse convenientemente por cualquiera de los procedimientos conocidos para dicha transformaci6n. La reducci6n puede llevarse a cabo, por ejemplo, agitando una soluci6n del compuesto nitro en hidr6geno a una presi6n de 1 a 4 atm6sferas en presencia de un disolvente o diluyente inerte como se defini6 anteriormente en la presente memoria en presencia de un metal eficaz para catalizar reacciones de hidrogenaci6n tal como paladio o platino. Un agente reductor adecuado adicional es, por ejemplo, un metal activado tal como hierro activado (producido, por

30 ejemplo, lavando polvo de hierro con una disoluci6n diluida de un acido tal como acido clorhidrico). Asi, por ejemplo, la reducci6n puede efectuarse calentando el nitrocompuesto bajo hidr6geno a 2 atm6sferas de presi6n en presencia de un metal activado y un disolvente o diluyente tal como una mezcla de agua y un alcohol, por ejemplo, metanol o etanol, a una temperatura en el intervalo, por ejemplo, de 50 a 150OC, convenientemente a aproximadamente 70OC.

Los compuestos de formula XV y las sales de los mismos, por ejemplo, pueden prepararse por reacci6n de un 35 compuesto de f6rmula XVI:

(en la que R2, s, L1 y A1 son como se definieron anteriormente en la presente memoria) con un compuesto de f6rmula VIIIb como se defini6 anteriormente en la presente memoria para dar un compuesto de f6rmula XV. La reacci6n de los compuestos de f6rmulas XVI y VIIIb se efectua convenientemente en condiciones como las descritas para el procedimiento (c) anteriormente en la presente memoria.

5 Los compuestos de formula XV y las sales de los mismos, por ejemplo, pueden prepararse tambien por reacci6n de un compuesto de f6rmula XVII:

(en la que R2, s y A1 son como se defini6 anteriormente en la presente memoria y X1 es -O- con un compuesto de f6rmula VIb como se defini6 anteriormente en la presente memoria para dar un compuesto de f6rmula XV como se

10 defini6 anteriormente en la presente memoria. La reacci6n de los compuestos de f6rmulas XVII y VIb se efectua convenientemente en condiciones como las descritas para el procedimiento (b) anteriormente en la presente memoria.

Los compuestos de formula III y las sales de los mismos pueden prepararse, por ejemplo, haciendo reaccionar un compuesto de f6rmula XVIII:

(en la que R2 y s son como se definieron anteriormente en la presente memoria, X1 es -O-y L2 representa un resto protector desplazable) con un compuesto de f6rmula VIb como se defini6 anteriormente en la presente memoria, con lo que obtener un compuesto de f6rmula III en el que L1 esta representado por L2.

Se utiliza convenientemente un compuesto de f6rmula XVIII en el que L2 representa un grupo fenoxi que puede

20 llevar si se desea hasta 5 sustituyentes, preferentemente hasta 2 sustituyentes, seleccionados de hal6geno, nitro y ciano. La reacci6n puede efectuarse convenientemente en condiciones como las descritas anteriormente en la presente memoria para el procedimiento (b).

Los compuestos de formula XVIII y las sales de los mismos pueden prepararse, por ejemplo, desprotegiendo un

compuesto de f6rmula XIX:

(en la que R2, s y L2 son como se definieron anteriormente en la presente memoria, P1 es un grupo protector y X1 es -O-. La selecci6n del grupo protector P1 esta dentro del conocimiento habitual de un quimico organico, por ejemplo, los incluidos en textos habituales tal como "Protective Groups in Organic Synthesis" T.W. Greene y R.G.M.Wuts, 2a Ed. Wiley 1991, incluyendo derivados de N-sulfonilo (por ejemplo, p-toluensulfonilo), carbamatos (por ejemplo, t-butil 30 carbonilo), derivados de N-alquilo (por ejemplo, 2-cloroetilo, bencilo) y derivados de amino acetal (por ejemplo

benciloximetil). La eliminaci6n de dicho grupo protector puede efectuarse por cualquiera de los procedimientos conocidos para tal transformaci6n, incluyendo aquellas condiciones de reacci6n indicadas en los textos habituales tales como las indicadas anteriormente en la presente memoria, o por un procedimiento relacionado. La desprotecci6n puede efectuarse por tecnicas bien conocidas en la bibliografia, por ejemplo en la que P1 representa

5 una desprotecci6n del grupo bencilo que puede efectuarse por hidrogen6lisis o por tratamiento con acido trifluoroacetico.

Un compuesto de f6rmula III puede convertirse si se desea en otro compuesto de f6rmula III en la que el resto L1 es diferente. Asi por ejemplo un compuesto de f6rmula III en la que L1 es distinto de hal6geno, por ejemplo opcionalmente fenoxi sustituido, puede convertirse en un compuesto de f6rmula III en la que L1 es hal6geno por

10 hidr6lisis de un compuesto de f6rmula III (en la que L1 es distinto de hal6geno) para dar un compuesto de f6rmula XI como se defini6 anteriormente en la presente memoria, seguido de introducci6n del haluro al compuesto de f6rmula XI, asi obtenido como se defini6 anteriormente en la presente memoria, para dar un compuesto de f6rmula III en la que L1 representa hal6geno.

(ii) Los compuestos de f6rmula IV y las sales de los mismos en los que el anillo C es indolilo pueden prepararse por

15 cualquiera de los metodos conocidos en la materia, tales como por ejemplo los descritos en "Indoles Parte I", "Indoles Parte II", 1972 John Wiley & Sons Ltd e "Indoles Parte III" 1979, John Wiley & Sons Ltd, editados por W. J. Houlihan.

Ejemplos de preparaci6n de indoles son los dados en el Ejemplo de Referencia I en lo sucesivo.

(iii) Los compuestos de f6rmula V como los definidos anteriormente en la presente memoria y las sales de los 20 mismos pueden prepararse desprotegiendo el compuesto de f6rmula XX:

(en la que el anillo C, Z, R1, R2, P1, n y s son como se defini6 anteriormente en la presente memoria y X1 es -O-por un procedimiento, por ejemplo, como se describi6 en (i) anteriormente.

Los compuestos de f6rmula XX y las sales de los mismos pueden prepararse haciendo reaccionar compuestos de 25 las f6rmulas XIX y IV como se defini6 anteriormente en la presente memoria, en las condiciones descritas en (a) anteriormente en la presente memoria, para dar un compuesto de f6rmula XX o una sal del mismo.

(iv) Los compuestos de f6rmula VII y las sales de los mismos pueden prepararse haciendo reaccionar un compuesto de f6rmula XXI:

30 (en la que R2, s y cada L1 son como se defini6 anteriormente en la presente memoria y el L1 en la posici6n 4 y el otro L1 en otra posici6n en el anillo de quinazolina puede ser igual o diferente) con un compuesto de f6rmula IV como se defini6 anteriormente en la presente memoria, efectuandose la reacci6n por ejemplo por un procedimiento como se describe en (a) anteriormente.

(v) Los compuestos de f6rmula IX definidos anteriormente en la presente memoria y las sales de los mismos pueden por ejemplo prepararse por la reacci6n de los compuestos de f6rmula V como se defini6 anteriormente en la presente memoria con los compuestos de f6rmula XXII:

L1-alquilo C1-5 -L1 (XXII)

5 (en la que L1 es como se defini6 anteriormente en la presente memoria) para dar los compuestos de f6rmula IX o sales de los mismos. La reacci6n puede efectuarse por ejemplo por un procedimiento como se describe en (b) anteriormente.

Cuando se requiere una sal farmaceuticamente aceptable de un compuesto de la presente invenci6n, puede obtenerse, por ejemplo, por reacci6n de dicho compuesto, por ejemplo, con un acido utilizando un procedimiento

10 convencional, teniendo el acido un ani6n farmaceuticamente aceptable.

Muchos de los compuestos intermedios definidos en este documento son nuevos y se proporcionan como una caracteristica adicional de la invenci6n. La preparaci6n de estos compuestos es como se describe en la presente memoria y/o es por metodos bien conocidos por expertos en la materia de quimica organica.

Por ejemplo los compuestos intermedios 7-benciloxi-4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6-metoxiquinazolina y 4-(4

15 fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-7-hidroxi-6-metoxiquinazolina, que se describen en el Ejemplo 7, son nuevos y cada uno puede utilizarse en la preparaci6n de los compuestos de la presente invenci6n y de los compuestos del documento WO 00/47212. 7-benciloxi-4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6-metoxiquinazolina y 4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-7hidroxi-6-metoxiquinazolina pueden utilizarse cada uno en la preparaci6n de compuestos que inhiben la angiogenia y/o el aumento de permeabilidad vascular.

20 Segun una realizaci6n de la presente invenci6n se proporciona 7-benciloxi-4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6metoxiquinazolina o una de sus sales.

Segun una realizaci6n de la presente invenci6n se proporciona 4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-7-hidroxi-6metoxiquinazolina o una de sus sales.

Segun una realizaci6n de la presente invenci6n se proporciona la utilizaci6n de 7-benciloxi-4-(4-fluoro-2-metilindol-5

25 iloxi)-6-metoxiquinazolina o una de sus sales en la preparaci6n de un compuesto de la presente invenci6n o un compuesto del documento WO 00/47212.

Segun una realizaci6n de la presente invenci6n se proporciona la utilizaci6n de 4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-7hidroxi-6-metoxiquinazolina o una de sus sales en la preparaci6n de un compuesto de la presente invenci6n o un compuesto del documento WO 00/47212.

30 La identificaci6n de los compuestos que inhiben la angiogenia y/o el aumento de permeabilidad vascular, que inhiben potentemente la actividad de tirosina cinasa asociada con el receptor KDR de VEGF y son selectivos para KDR sobre Flt-1, que tienen farmacocinetica del plasma menos extendida y que son inactivos o solamente poco activos en el ensayo de hERG, es deseable y es el asunto de la presente invenci6n.

Se pueden valorar estas propiedades, por ejemplo, usando uno o mas de los procedimientos senalados a 35 continuaci6n:

Ca) Ensayo de inhibician del receptor de tirosina cinasa in vitro

Este ensayo determina la capacidad de un compuesto de ensayo para inhibir la actividad de la tirosina cinasa. El ADN que codifica los dominios citoplasmicos del receptor VEGF, FGF o EGF se puede obtener por sintesis de genes total (Edwards M., International Biotechnology Lab. 5(3), 19-25, 1987) o por clonaci6n. Estos pueden

40 expresarse luego en un sistema de expresi6n adecuado para obtener polipeptido con actividad de tirosina cinasa. Por ejemplo, se hall6 que los dominios citoplasmicos del receptor VEGF, FGF y EGF, que se obtuvieron por expresi6n de proteina recombinante en celulas de insectos presentan actividad de tirosina cinasa intrinseca. En el caso del receptor de VEGF Flt-1 (numero de registro X51602 en Genbank), un fragmento de ADN de 1,7kb que codifica la mayor parte del dominio citoplasmico, comenzando en la metionina 783 e incluyendo el cod6n de

45 terminaci6n, descrito por Shibuya et al., (Oncogene, 1990, 5: 519-524), se aisl6 de ADNc y se clon6 en un vector baculovirus de trasplante (por ejemplo pAcYM1 (vease The Baculovirus Expression System A Laboratory Guide, L.A. King y R. D. Possee, Chapman and Hall, 1992) r pAc360 o pBlueBacHis (disponible de Invitrogen Corporation)). Este montaje recombinante se cotransfect6 en celulas de insecto (por ejemplo Spodoptera frugiperda 21(Sf21)) con ADN virico (p. ej., Pharmingen BaculoGold) para preparar baculovirus recombinante. (Los detalles de los metodos para el

50 ensamble de moleculas de ADN recombinante y la preparaci6n y utilizaci6n de baculovirus recombinante pueden hallarse en los textos convencionales, por ejemplo, Sambrook et al., 1989, Molecular cloning -A Laboratory Manual, 2a edici6n, Cold Spring Harbour Laboratory Press y O'Reilly et al., 1992, Baculovirus Expression Vectors -A Laboratory Manual, W. H. Freeman and Co, Nueva York). para otras tIrosina cinasas para su utilizaci6n en ensayos, fragmentos citoplasmicos partiendo del metionina 806 (KDR, numero de registro L04947 de Genbank), metionina 668 (receptor de EGF, numero de registro X00588 de Genbank) y metionina 399 (receptor R1 de FGF, numero de registro X51803 de Genbank) puede clonarse y expresarse de manera similar.

Para la expresi6n de la actividad de tirosina cinasa cFlt-1, se infectaron celulas St21 con virus recombinante cFlt-1 puro en placa a una multiplicidad de infecci6n de 3 y se recolectaron 48 horas despues. Las celulas cosechadas se 5 lavaron con disoluci6n salina tamponada con fosfato enfriada con hielo (PBS) (fosfato s6dico 10 mM pH 7,4, cloruro de sodio 138 mM, cloruro de potasio 2,7 mM), luego se volvieron a poner en suspensi6n en HNTG/PMSF enfriado con hielo (Hepes 20 mM pH 7,5, cloruro de sodio 150 mM, glicerol al 10% v/v, Triton X100 al 1% v/v, cloruro de magnesio 1,5 mM, etilenglicol-bis 1 mM (eter �-aminoetilico) acido N,N,N',N'-tetraacetico (EGTA), PMSF 1 mM (fluoruro de fenilmetilsulfonilo); el PMSF se anade justo antes de la utilizaci6n en una disoluci6n 100 mM recien 10 preparada en metanol) utilizando 1 ml de HNTG/PMSF por 10 millones de celulas. La suspensi6n se centrifug6 durante 10 minutos a 13.000 rpm a 4°C, se elimin6 el sobrenadante (soluci6n madre enzimatica) y se conserv6 en alicuotas a -70°C. Cada nueva partida de enzima de la soluci6n madre se valor6 en el ensayo por diluci6n con diluyente de enzimas (Hepes 100 mM pH 7,4, ortovanadato s6dico 0,2 mM, Triton X100 al 0,1% v/v, ditiotreitol 0,2 mM). Para un lote tipico, la enzima de la soluci6n madre se diluye 1 en 2000 con diluyente enzimatico y se

15 utilizan 50 Il de enzima diluida para cada pocillo de ensayo.

Se prepar6 una soluci6n madre de disoluci6n de sustrato a partir de un copolimero aleatorio que contenia tirosina, por ejemplo Poly (Glu, Ala, Tyr) 6:3:1 (Sigma P3899), conservado como 1 mg/ml de soluci6n madre en PBS a -20°C y se diluy6 1 en 500 con PBS para recubrimiento de placas.

El dia anterior al ensayo, se distribuyeron 100 Il de disoluci6n de sustrato diluida en todos los pocillos de las placas 20 de ensayo (inmunoplacas de 96 pocillos Nunc maxisorp), que se sellaron y dejaron durante la noche a 4°C.

El dia del ensayo, la disoluci6n del sustrato se desech6 y los pocillos de las placas de ensayo se lavaron una vez con PBST (PBS que contenia Tween 20 al 0,05% v/v) y una vez con Hepes 50 mM pH 7,4.

Se diluyeron los compuestos de ensayo con sulf6xido de dimetilo al 10% (SODM) y se transfirieron 25 Il de compuesto diluido a los pocillos en las placas de ensayo lavadas. Los pocillos de referencia "totales" contenian 25 SODM al 10% en lugar del compuesto. Se anadieron 25 microlitros de cloruro de manganeso (II) 40 mM que contenian adenosina-5'-trifosfato (ATP) 8 IM a todos los pocillos de ensayo excepto a los pocillos de referencia "blancos" que contenian cloruro de manganeso (II) sin ATP. Para empezar las reacciones, se anadieron a cada pocillo 50Il de enzima recien diluida y las placas se incubaron a temperatura ambiente durante 20 minutos. El liquido se desech6 despues y los pocillos se lavaron dos veces con PBST. Se anadieron cien microlitros de 30 anticuerpo IgG anti-fosfotirosina de rat6n (Upstate Biotechnology Inc. producto 05-321), diluido en 1 en 6000 con PBST que contenia 0,5% p/v albumina de suero bovino (BSA), a cada pocillo y las placas se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente antes de desechar el liquido y lavar los pocillos dos veces con PBST. Se anadieron cien microlitros de anticuerpo Ig anti-rat6n de oveja unido a (HRP) de peroxidasa de rabano picante (producto NXA 931 de Amersham), diluido en 1 en 500 con PBST que contenia BSA al 0,5% p/v, y las placas se incubaron durante 35 1 hora a temperatura ambiente antes de desechar el liquido y lavar los pocillos dos veces con PBST. A cada pocillo se anadieron cien microlitos de soluci6n de 2,2'-azino-bis(acido 3-etilbenzotiazolina-6-sulf6nico) (ABTS), recien preparada utilizando un comprimido de ABTS (Boehringer 1204 521) en 50 ml de tamp6n de fosfato-citrato mM recien preparado pH 5,0 + perborato s6dico al 0,03% (preparado con una capsula de tamp6n de fosfato-citrato con perborato s6dico (PCSB) (Sigma P4922) por 100ml de agua destilada). Las placas se incubaron luego durante 20 a

40 60 minutos a temperatura ambiente hasta que el valor de la densidad 6ptica de los pocillos de referencia "totales", medida a 405 nm utilizando un espectrofot6metro para lectura de placas, fue aproximadamente 1,0. Los valores de referencia "blanco" (sin ATP) y "total" (sin compuesto) se utilizaron para determinar el intervalo de diluci6n del compuesto de ensayo que proporcionaba un 50% de inhibici6n de la actividad enzimatica.

Cb) Ensayo in vitro de proliferacian HUVEC

45 Este ensayo determina la capacidad de un compuesto de ensayo de inhibir la proliferaci6n estimulada por el factor de crecimiento de celulas endoteliales de la vena umbilical humana (HUVEC).

Se aislaron celulas HWEC en MCDB 131 (Gibco BRL) + suero de ternero fetal (FCS) al 7,5% v/v y se colocaron en placas (en el paso 2 a 8), en MCDB 131 + FCS al 2% v/v + 3 Ig/ml de heparina + 1Ig/ml de hidrocortisona, a una concentraci6n de 1000 celulas/pocillo en placas de 96 pocillos. Despues deun minimo de 4 horas se medicaron con 50 el factor de crecimiento apropiado (es decir 3 ng/ml de VEGF, 3 ng/ml de EGF o 0,3 ng/ml de b-FGF) y compuesto. Los cultivos se incubaron luego durante 4 dias a 37°C con 7,5% de CO2. En el dia 4, los cultivos se pulsaron con 1 ICi/pocillo de timidina tritiada (producto Amersham TRA 61) y se incubaron durante 4 horas. Las celulas se cosecharon usando un recolector de placas de 96 pocillos (Tomtek) y luego se ensayaron para incorporaci6n de tritio con un contador de placas Beta. Se utiliz6 la incorporaci6n de radiactividad en celulas, expresada en cpm, para

55 medir la inhibici6n de la proliferaci6n estimulada por el factor de crecimiento por los compuestos.

Cc) Modelo de enfermedad de tumor salido in vivo

Este ensayo mide la capacidad de los compuestos para inhibir el crecimiento de tumores s6lidos.

Se crearon xenotrasplantes con tumor CaLu-6 en el costado de ratones hembra atimicos Swiss nu/nu, por inyecci6n subcutanea de 1x106 celulas CaLu-6 /rat6n en 100 Il de una soluci6n al 50% (v/v) de Matrigel en medio de cultivo exento de suero. Diez dias despues del implante celular, los ratones se ubicaron en grupos de 8-10, para conseguir volumenes medios de grupos comparables. Los tumores se midieron usando calibres vernier y se calcularon los 5 volumenes como: (l x w) x �(l x w) x (n/6), donde l es el diametro mas largo y w el diametro perpendicular al mas largo. Los compuestos de ensayo se administraron por via oral una vez al dia durante un minimo de 21 dias, y los animales de referencia recibieron el diluyente del compuesto. Los tumores se midieron dos veces por semana. El nivel de inhibici6n del crecimiento se calcul6 por comparaci6n del volumen de tumor promedio del grupo de referencia frente al grupo de tratamiento, utilizando una prueba de la T de Student y/o una prueba del orden de la

10 suma de Mann-Whitney. El efecto inhibidor del tratamiento con el compuesto se consideraba significativo si p<0,05.

(d) Ensayo de inhibician del canal de potasio codificado por hERG

Este ensayo determina la capacidad de un compuesto de ensayo de inhibir la corriente de cola que fluye a traves del canal de potasio codificado por el gen humano relacionado con eter-a-go-go (hERG).

Se cultivaron celulas del rin6n embrionario humano (HEK) que expresan el canal codificado por hERG en Medio

15 Eagle Minimo Esencial (EMEM; Sigma-Aldrich, numero de catalogo M2279), enriquecido con suero de ternero fetal al 10% (Labtech International; numero de producto 4-101-500), suplemento sin suero M1 al 10% (Egg Technologies; numero de producto 70916) y 0,4 mg/ml de Geneticina G418 (Sigma-Aldrich; numero de catalogo G7034). Uno o dos dias antes de cada experimento, las celulas se despegaron de los matraces de cultivo tisular con Accutase (TCS Biologicals) usando metodos convencionales de cultivo tisular. Despues se pusieron sobre cubreobjetos de vidrio

20 descansando en los pocillos de una placa de 12 pocillos y se cubrieron con 2 ml del medio de crecimiento.

Para cada celula registrada, se coloc6 un cubreobjetos de vidrio que contenia las celulas en el fondo de una camara Perspex que contenia soluci6n de bano (vease mas adelante) a temperatura ambiente (-20°C). Esta camara se fij6 a la fase principal de un microscopio de contraste de fases, invertido. Inmediatamente despues de colocar el cubreobjetos en la camara, se perfundi6 la disoluci6n del bano en la camara desde un dep6sito alimentado por

25 gravedad durante 2 minutos a una velocidad de -2 ml/min. Despues de este periodo se interrumpi6 la perfusi6n.

Una pipeta de fijaci6n de membranas de vidrio de borosilicato (GC120F, Harvard Apparatus), que utilizaba un embolo de micropipeta P-97 (Sutter Instrument Co.), se llen6 con soluci6n para pipetas (vease mas adelante). La pipeta se conect6 a la fase principal del amplificador de fijaci6n de membranas (Axopatch 200B, Axon Instruments) mediante un electrodo de plata/cloruro de plata. La tierra del cabezal de fases se conect6 al electrodo de tierra. Este

30 consistia en un electrodo de plata/cloruro de plata empapado en agar-agar al 3% preparado por cloruro s6dico al 0,85%.

La celula se registr6 en la configuraci6n celular completa de la tecnica de fijaci6n de membranas. Despues de la "interrupci6n", que se hizo a un potencial de mantenimiento de -80 mV (ajustado por el amplificador), y un ajuste apropiado de controles de resistencia y capacitancia en serie, se us6 un programa informatico de electrofisiologia 35 (Clampex, Axon Instruments) para fijar un potencial de mantenimiento (-80 mV) y para entregar un protocolo de voltaje. Este protocolo se aplic6 cada 15 segundos y consisti6 en una etapa de 1 s a +40 mV seguido de una etapa de 1 s a -50 mV. La respuesta de corriente a cada protocolo de voltaje impuesto se filtr6 en paso bajo por el amplificador a 1 kHz. Despues, la senal filtrada se adquiri6, en linea, digitalizando esta senal anal6gica del amplificador con un convertidor anal6gico a digital. Despues, la senal digitalizada fue capturada en un ordenador que 40 ejecutaba el programa informatico Clampex (Axon Instruments). Durante el potencial de mantenimiento y la etapa a

+ 40 mV la corriente se muestre6 a 1 kHz. Despues la velocidad de muestreo se fij6 a 5 kHz para el resto del protocolo de voltaje.

Las composiciones, pH y osmolaridad de la soluci6n del bano y de la pipeta se tabulan a continuaci6n.

Sal

Pipeta CmM) Bano�CmM)

NaCl

- 137

KCl

130 4

Mucha

1 1

CaCl2

- 1,8

HEPES

10 10

glucosa

- 10

Sal

Pipeta CmM) Bano�CmM)

NaCl

- 137

Na2ATP

5 -

EGTA

5 -

Parametro

Pipeta Bano

pH

7,18-7,22 7,40

ajuste de pH con

KOH 1 M NaOH 1 M

Osmolaridad (mOsm)

275-285 285-295

La amplitud de la corriente de cola del canal de potasio codificada por hERG despues de la etapa de +40 mV a -50 mV se registr6 en linea mediante el canal informatico Clampex (Axon Instruments). Despues de la estabilizaci6n de la amplitud de la corriente de cola, se aplic6 a la celda la disoluci6n del bano que contenia el vehiculo para la

5 sustancia de ensayo. Suponiendo que la aplicaci6n del vehiculo no tenia efecto significativo sobre la amplitud de la corriente de cola, se construy6 despues una curva del efecto acumulativo de la concentraci6n para el compuesto.

Se cuantifico el efecto de cada concentraci6n de compuesto de ensayo expresando la amplitud de la corriente de cola en presencia de una concentraci6n dada de compuesto de ensayo como porcentaje del de en presencia de vehiculo.

10 La potencia del compuesto de ensayo (IC50) se determin6 ajustando los valores de porcentaje de inhibici6n que constituyen la concentraci6n-efecto a una ecuaci6n Hill de cuatro parametros usando un paquete convencional de ajuste de datos. Si el nivel de inhibici6n observado a la concentraci6n mas alta de ensayo no excedia del 50%, no se producia ningun valor de potencia y se hacia referencia a un valor de porcentaje de inhibici6n a esa concentraci6n.

La farmacocinetica del plasma puede evaluarse midiendo la vida media del plasma in vivo. Cuanto mayor es la vida 15 media del plasma in vivo mas extendidas estan las farmacocineticas del plasma.

Los compuestos de la presente invenci6n tienen farmacocineticas del plasma menos extendidas que los compuestos del documento WO 00/47212. Los compuestos de la presente invenci6n tienen vidas medias mas cortas in vivo que los compuestos del documento WO 00/47212.

La vida media del plasma in vivo puede determinarse por metodos convencionales que son muy conocidos en

20 materia de farmacocinetica del plasma. Puede utilizarse cualquier especie y determinarse la vida media del plasma por metodologia convencional, por ejemplo la vida media del plasma puede medirse en ratas, perros, monos o seres humanos.

Segun un aspecto adicional de la invenci6n se proporciona una composici6n farmaceutica que comprende un compuesto de la presente invenci6n o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, como se ha definido en la

25 presente memoria anteriormente, junto con un excipiente o vehiculo farmaceuticamente aceptable.

La composici6n puede estar en una forma adecuada para administraci6n oral, por ejemplo, como un comprimido o una capsula, para inyecci6n parenteral (incluyendo intravenosa, subcutanea, intramuscular, intravascular o infusi6n), por ejemplo, como una soluci6n, suspensi6n o emulsi6n esteril, para administraci6n t6pica, por ejemplo, como una pomada o crema o para administraci6n rectal, por ejemplo, como un supositorio. En general las composiciones

30 anteriores se pueden preparar de una forma convencional usando excipientes convencionales.

Las composiciones de la presente invenci6n se presentan de forma ventajosa en forma de dosis unitaria. El compuesto normalmente se administrara a un animal de sangre caliente en una dosis unitaria que varia en el intervalo de 5-5000 mg por metro cuadrado de superficie corporal del animal, es decir, aproximadamente 0,1-100 mg/kg. Se preve una dosis unitaria en el intervalo de, por ejemplo, 1-100 mg/kg, preferiblemente 1-50 mg/kg y esto

35 normalmente proporciona una dosis terapeuticamente eficaz. Una forma de dosis unitaria tal como un comprimido o capsula normalmente contendra, por ejemplo, 1-250 mg de ingrediente activo.

Segun un aspecto adicional de la presente invenci6n, se proporciona un compuesto de la presente invenci6n, o una sal aceptable farmaceuticamente del mismo, como se ha definido anteriormente para su utilizaci6n en un metodo de tratamiento del cuerpo humano o animal mediante terapia.

Los autores han descubierto que los compuestos de la presente invenci6n inhiben la actividad de tirosina cinasa del receptor de VEGF y por consiguiente son de interes por sus efectos antiangiogenicos y/o su capacidad para producir una reducci6n en la permeabilidad vascular.

Una caracteristica mas de la presente invenci6n es un compuesto de la presente invenci6n, o una de sus sales

5 farmaceuticamente aceptable, para su utilizaci6n como medicamento, convenientemente un compuesto de la presente invenci6n, o una de sus sales farmaceuticamente aceptable, para su utilizaci6n como medicamento para producir un efecto antiangiogenico y/o reductor de permeabilidad vascular en un animal de sangre caliente tal como un ser humano.

Asi segun otro aspecto de la presente invenci6n se proporciona la utilizaci6n de un compuesto de la presente

10 invenci6n o de una de sus sales farmaceuticamente aceptables en la preparaci6n de un medicamento para su utilizaci6n en la producci6n de un efecto antiangiogenico y/o reductor de la permeabilidad vascular en un animal de sangre caliente tal como un ser humano.

Como se ha indicado anteriormente, el tamano de la dosis requerido para el tratamiento terapeutico o profilactico de una enfermedad concreta variara necesariamente dependiendo del hospedador tratado, de la via de administraci6n

15 y de la gravedad de la enfermedad que se esta tratando. Con preferencia, se emplea una dosis diaria en el intervalo de 0,1 a 50 mg/kg. No obstante, la dosis diaria variara necesariamente dependiendo del hospedador tratado, de la via particular de administraci6n y de la gravedad de la enfermedad que se esta tratando. Por consiguiente, el medico que esta tratando a un paciente concreto puede determinar la dosis 6ptima.

El tratamiento antiangiogenico y/o reductor de la permeabilidad vascular definido anteriormente en la presente 20 memoria puede aplicarse como terapia exclusiva o puede implicar, ademas de a un compuesto de la invenci6n, una

o mas sustancias y/o tratamientos. Dicho tratamiento conjunto puede conseguirse mediante la administraci6n simultanea, sucesiva o independiente de cada uno de los componentes del tratamiento. En el campo de la oncologia medica es practica normal utilizar una combinaci6n de diferentes formas de tratamiento para tratar cada paciente con cancer. En oncologia medica el/los otro(s) componente(s) de dicho tratamiento conjunto ademas del tratamiento

25 antiangiogenico y/o reductor de la permeabilidad vascular definido anteriormente puede ser: cirugia, radioterapia o quimioterapia. Dicha quimioterapia puede abarcar tres categorias principales de agente terapeutico:

(i) otros agentes antiangiogenicos tales como aquellos que inhiben los efectos del factor de crecimiento endotelial vascular, (por ejemplo el anticuerpo de factor de crecimiento de celulas endoteliales antivasculares [AvastinT], y aquellos que funcionan por mecanismos diferentes de aquellos definidos anteriormente en este documento (por

30 ejemplo linomida, inhibidores de la funci6n de integrina av 3, angiostatina, razoxina, talidomida), incluyendo agentes de direccionamiento vascular (por ejemplo fosfato de combretastatina y los compuestos descritos en las solicitudes de patentes internacionales WO 00/40529, WO 00/41669, WO01/92224, WO02/04434 y WO02/0821, y los agentes vascular perjudiciales descritos en la publicaci6n de solicitud de patente internacional n° WO 99/02166, cuya descripci6n completa se incorpora a la presente memoria por referencia, (por ejemplo N-acetilcolquinol-O-fosfato));

35 (ii) agentes citostaticos tales como antiestr6genos (por ejemplo tamoxifeno, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno, yodoxifeno), agentes reguladores por disminuci6n del receptor de estr6genos (por ejemplo fulvestrant), progest6genos (por ejemplo acetato de megestrol), inhibidores de aromatasa (por ejemplo anastrozol, letrazol, vorazol, exemestano), antiprogest6genos, antiandr6genos (por ejemplo flutamida, nilutamida, bicalutamida, acetato de ciproterona), agonistas y antagonistas de LHRH (por ejemplo acetato de goserelin, luprolida, buserelin),

40 inhibidores de 5a-reductasa (por ejemplo finasterida), agentes anti-invasi6n (por ejemplo inhibidores de metaloproteinasa como marimastat e inhibidores de la funci6n del receptor activador de plasmin6geno urocinasa) e inhibidores de la funci6n del factor de crecimiento, (dichos factores de crecimiento incluyen, por ejemplo, factor de crecimiento derivado de plaquetas y factor de crecimiento de hepatocitos), dichos inhibidores incluyen anticuerpos del factor de crecimiento, anticuerpos del receptor del factor de crecimiento, (por ejemplo el anticuerpo anti-erbb2

45 trastuzumab [HerceptinT] y el anticuerpo anti-erbb1 cetuximab [C225]), inhibidores de farnesil transferasa, inhibidores de tirosina cinasa, por ejemplo inhibidores de la familia del factor de crecimiento epidermico (por ejemplo inhibidores de la familia de tirosina cinasa EGFR tales como N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-metoxi-6-(3morfolinopropoxi)quinazolin-4-amina (gefitinib, AZD1839), N-(3-etinilfenil)-6,7-bis(2-metoxietoxi)quinazolin-4-amina (erlotinib, OSI-774) y 6-acrilamido-N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-(3-morfolinopropoxi)quinazolin-4-amina (CI 1033)) e

50 inhibidores de serina/treonina cinasa); y

(iii) farmacos antiproliferantes/antineoplasicos y sus combinaciones, utilizados en oncologia medica, tales como antimetabolitos (por ejemplo antifolatos como metotrexato, fluoropirimidinas como 5-fluorouracilo, tegafur, purina y analogos de adenosina, arabin6sido de citosina); antibi6ticos antitumorales (por ejemplo antraciclinas como: adriamicina, bleomicina, doxorrubicina, daunomicina, epirrubicina, idarrubicina, mitomicina-C, dactinomicina y 55 mitramicina); derivados de platino (por ejemplo cisplatino, carboplatino); agentes alquilantes (por ejemplo mostazas nitrogenadas, melfalan, clorambucilo, busulfan, ciclofosfamida, ifosfamida, nitrosoureas, tiotepa); agentes antimit6ticos (por ejemplo vinca-alcaloides como vincristina, vinblastina, vindesina y vinorrelbina y taxoides como taxol, tax6tero); inhibidores de la topoisomerasa (por ejemplo epipodofilotoxinas como etop6sido y tenip6sido, amsacrina, topotecan, camptotecina y tambien irinotecan); tambien enzimas (por ejemplo asparaginasa); e

60 inhibidores de timidilato sintasa (por ejemplo raltitrexed); y tipos adicionales de agente quimioterapeutico incluyen:

(iv)

modificadores de la respuesta biol6gica (por ejemplo, interfer6n);

(v)

anticuerpos (por ejemplo edrecolomab);

(vi)

terapias complementarias, por ejemplo aquellas que se dirigen a las dianas listadas anteriormente, tal como ISIS 2503, una anti-ras complementaria;

5 (vii) metodos de terapia genica, incluyendo por ejemplo metodos para remplazar genes aberrantes tales como p53 aberrante o BRCA1 aberrante o BRCA2, GDEPT (terapia profarmaco con enzima dirigida al gen), metodos tales como los que utilizan citosina desaminasa, timidina cinasa o una enzima bacteriana nitrorreductasa y metodos para aumentar la tolerancia del paciente a la quimioterapia o radioterapia tal como la politerapia genica; y

(viii) metodos de inmunoterapia, incluyendo por ejemplo metodos ex-vivo e in-vivo para aumentar la

10 inmunogenicidad de las celulas tumorales del paciente, tal como la transfecci6n con citocinas como por ejemplo la interleucina 2, la interleucina 4 o el factor estimulante de colonias de granulocitos-macr6fagos, metodos para disminuir anergia de los la linfocitos T, metodos que utilizan inmunocitos transfectados tales como los dendrocitos transfectados con citocina, metodos que utilizan lineas celulares tumorales transfectadas con citocina y metodos que utilizan anticuerpos antidiotipicos.

15 Por ejemplo dicho tratamiento conjunto se puede lograr mediante administraci6n simultanea, sucesiva o independiente de un compuesto de la presente invenci6n segun se defini6 anteriormente en la presente memoria y un agente de direccionamiento vascular descrito en el documento WO 99/02166 tal como N-acetilcolquinol-O-fosfato (Ejemplo 1 del documento WO 99/02166).

Se sabe del documento WO 01/74360 que los antiangiogenicos pueden combinarse con antihipertensivos. Un

20 compuesto de la presente invenci6n tambien se puede administrar en combinaci6n con un antihipertensor. Un antihipertensivo es un agente que reduce la presi6n arterial, vease el documento WO 01/74360 que se incorpora a la presente por referencia.

Segun un aspecto adicional de la presente invenci6n, se proporciona la utilizaci6n de una combinaci6n de un compuesto de la presente invenci6n o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo y un agente antihipertensor

25 en la preparaci6n de un medicamento para su utilizaci6n en la preparaci6n de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad asociada a la angiogenia en un mamifero de sangre caliente, tal como un ser humano.

Segun un aspecto adicional de la presente invenci6n, se proporciona una composici6n farmaceutica que comprende un compuesto de la presente invenci6n o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo y un agente antihipertensor para el tratamiento de una enfermedad asociada a la angiogenia en un mamifero de sangre caliente,

30 tal como un ser humano.

Segun un aspecto adicional de la presente invenci6n, se proporciona la utilizaci6n de una combinaci6n de un compuesto de la presente invenci6n o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo y un agente antihipertensor para la preparaci6n de un medicamento para producir un efecto antiangiogenico y/o reductor de la permeabilidad vascular en un mamifero de sangre caliente, tal como un ser humano.

35 Los agentes antihipertensores preferidos son bloqueadores del canal de calcio, inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina (inhibidores ACE), antagonistas del receptor de angiotensina II (antagonistas de A-II), diureticos, bloqueadores del receptor beta-adrenergico ( -bloqueadores), vasodilatadores y bloqueadores del receptor alfa-adrenergico (a-bloqueadores). Los agentes antihipertensivos particulares son bloqueadores del canal de calcio, inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina (inhibidores de ACE), antagonistas del receptor de

40 angiotensina II (antagonistas de A-II) y bloqueadores del receptor beta-adrenergico ( -bloqueadores), especificamente bloqueadores del canal de calcio.

Como se afirm6 anteriormente, los compuestos definidos en la presente invenci6n son de interes por sus efectos antiangiogenicos y/o reductores de la permeabilidad vascular. Dichos compuestos de la invenci6n es de esperar que sean utiles en una amplia gama de enfermedades que incluyen el cancer, la diabetes, psoriasis, artritis reumatoide, 45 sarcoma de Kaposi, hemangioma, linfoedema, nefropatias agudas y cr6nicas, ateroma, restenosis arterial, enfermedades autoinmunitarias, inflamaci6n aguda, formaci6n excesiva de cicatrices y adherencias, endometriosis, hemorragia uterina disfuncional y enfermedades oculares con proliferaci6n de vasos retinianos incluyendo la degeneraci6n macular por la edad. El cancer puede afectar a cualquier tejido e incluye la leucemia, el mieloma multiple y el linfoma. En particular, es de esperar que dichos compuestos de la invenci6n ralenticen ventajosamente 50 el crecimiento de tumores s6lidos primarios y recurrentes, por ejemplo, de colon, mama, pr6stata, pulm6n y piel. Mas especificamente, dichos compuestos de la invenci6n es de esperar que inhiban cualquier forma de cancer asociado con VEGF incluyendo leucemia, mieloma multiple y linfoma y tambien, por ejemplo, inhiban el crecimiento de los tumores s6lidos primarios y recurrentes que estan asociados a VEGF, especialmente los tumores que dependen significativamente de VEGF respecto a su crecimiento y difusi6n, incluyendo por ejemplo, ciertos tumores del colon,

55 mama, cerebro, pr6stata, pulm6n, vulva y piel.

Ademas de su utilizaci6n en medicina terapeutica, los compuestos de la invenci6n y sus sales farmaceuticamente aceptables son de utilidad tambien como herramientas farmacol6gicas en el desarrollo y estandarizaci6n de sistemas de ensayo in vitro e in vivo para la evaluaci6n de los efectos de los inhibidores de la actividad de tirosina cinasa receptora de VEGF en animales de laboratorio, tales como gatos, perros, conejos, monos, ratas y ratones, como parte de la investigaci6n de nuevos agentes terapeuticos.

Se sobreentiende que cuando se usa el termino "eter" en cualquier lugar de esta memoria descriptiva, se esta haciendo referencia a eter dietilico.

La invenci6n se ilustrara ahora con los ejemplos siguientes en los que, a no ser que se indique de otro modo:

(i)

las evaporaciones se llevaron a cabo por evaporaci6n rotativa a vacio y los procedimientos de preparaci6n se llevaron a cabo despues de retirar los s6lidos residuales, tales como agentes de secado, por filtraci6n;

(ii)

las operaciones se llevaron a cabo a temperatura ambiente, es decir en el intervalo 18-25°C y en una atm6sfera de un gas inerte tal como arg6n;

(iii) la cromatografia en columna (por el procedimiento ultrarrapido) y la cromatografia liquida a media presi6n (MPLC) se llevaron a cabo en silice Kieselgel de Merck (art. 9385) o en silice de fase inversa de Merck Lichroprep RP-18 (Art. 9303) adquirida en E. Merck, Darmstadt, Alemania;

(iv)

los rendimientos se proporcionan s6lo para ilustrar y no son necesariamente los maximos que se pueden conseguir;

(v)

los puntos de fusi6n estan sin corregir y se determinaron utilizando un aparato automatico de punto de fusi6n Mettler SP62, un bano de aceite o una placa calefactora Koffler.

(iv)

las estructuras de los productos finales de f6rmula I se confirmaron por resonancia magnetica nuclear (RMN) (generalmente de protones) y tecnicas de espectroscopia de masas; los valores de los desplazamientos quimicos de resonancia magnetica de protones se determinaron en la escala delta y las multiplicidades de los picos se muestran de la forma siguiente: s, singlete; d, doblete; t, triplete; m, multiplete; a, ancho; c, cuarteto, quin, quinteto;

(v)

los productos intermedios no se caracterizaron generalmente de forma completa, y la pureza se evalu6 por analisis de cromatografia en capa fina TLC), cromatografia liquida de alto rendimiento (HPLC), infrarrojo (IR) o RMN;

(viii) Las HPLC se realizan en 2 condiciones diferentes:

1) en una columna TSK Gel super ODS 2 IM de 4,6 mm x 5 cm, que eluye con un gradiente de metanol en agua (que contiene acido acetico al 1%) 20 a 100% en 5 minutos. Caudal 1,4 ml/minuto. Detecci6n: U.V. a 254 nm y detecciones de dispersi6n de la luz;

2) en una columna TSK Gel super ODS 2 IM de 4,6 mm x 5 cm, que eluye con un gradiente de metanol en agua (que contiene acido acetico al 1%) 0 a 100% en 7 minutos. Caudal 1,4 ml/minuto. Detecci6n: U.V. a 254 nm y detecciones de dispersi6n de la luz;

(ix)

eter de petr6leo hace referencia a la fracci6n que hierve entre 40 y 60°C

(x)

se han utilizado las siguientes abreviaturas: DMF N,N-dimetilformamida; SODM sulf6xido de dimetilo TFA , acido trifluoroacetico THF tetrahidrofurano DMA dimetilacetamida DMAP 4-dimetilaminopiridina HPLC de LC/MS acoplada a espectrometria de masas Los ejemplos mantenidos en la memoria son los ejemplos 7, 28 y 54. Los ejemplos 1, 2 y 4 se han mantenido como ejemplos de referencia. Todos los demas ejemplos se han eliminado.

Ejemplo de referencia 1

Se anadi6 azodicarboxilato de dietilo (0,178 g, 1,02 mmol) a una soluci6n de 4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6hidroxi-7-metoxiquinazolina (0,267g, 0,787 mmol), trifenilfosfina (0,31g, 1,18mmol) y 3-(4-acetilpiperazin-lil)propan-15 ol (0,176g, 0,945 mmol) en cloruro de metileno (10 ml). Despues de agitar durante 15 minutos a temperatura ambiente, se anadi6 mas trifenilfosfina (0,062 mg, 0,236 mmol) y azodicarboxilato de dietilo (0,041 mg, 0,3 mmol). Despues de agitar durante 1 hora a temperatura ambiente, la mezcla se verti6 sobre una columna de silice y se eluy6 con mezclas cada vez mas polares de acetato de etilo y cloruro de metileno seguido de cloruro de metileno y metanol. Se combinaron las fracciones que contenian el producto esperado y se evaporaron. El residuo se disgreg6

10 en eter dietilico y el s6lido se filtr6, se lav6 con eter y se sec6 al vacio para dar 6-C3-C4-acetilpiperazin-1-il)propoxi)4-C4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-7-metoxiquinazolina�0,210 g, 60%). Espectro RMN de 1H: (SODM d6, CF3COOD) 2,1 (s, 3H), 2,35 (m, 2H), 2,5 (s, 3H), 3,0 (m, 2H), 3,2 (m, 1H), 3,4 (dd, 2H), 3,5 (m, 1H), 3,65 (d, 2H), 4,1 (m, 1H), 4,15 (s, 3H), 4.45 (dd, 2H), 4,55 (d, 1H), 6,3 (s, 0,3 H, parcialmente intercambiado), 7,05 (dd, 1H, 7,28 (d, 1H), 7,6 (s, 1H), 7,9 (s, 1H), 9,2 (s, 1H) MS-ESI: 508,5 [M+H]+

15 El material de partida se prepar6 de la forma siguiente:

Una suspensi6n de 1-acetilpiperazina (3,85 g, 30 mmol), carbonato de potasio (8,3 g, 60 mmol) y 3-bromo-1propanol (4 ml, 45 mmol) en acetonitrilo (30 ml) se calent6 y se agit6 a 80°C durante 5 horas. Despues de enfriar, la mezcla se filtr6 y el filtrado se evapor6. El residuo se purific6 por cromatografia en columna, eluyendo con mezclas cada vez mas polares de cloruro de metileno y etanol. Las fracciones que contienen el producto esperado se

20 combinaron y se evaporaron para dar 3-(4-acetilpiperazin-1-il)propan-1-ol (3,15g, 56%). Espectro de RMN de 1H (CDCl3): 1,7 (m, 2H), 2,08 (s, 3H), 2,45 (m, 4H), 2,6 (dd, 2H), 3,45 (dd, 2H), 3,6 (dd, 2H), 3,78 (dd, 2H), 4,6 (s a, 1H)MS-ESI: 187 [M+H]+

Una soluci6n de 6-benciloxi-4-cloro-7-metoxiquinazolina (0,39 g, 1,3 mmol), (patenteEP 1153920 ejemplos de producci6n 28-30), 4-fluoro-5-hidroxi-2-metilindol (0,24 g, 1,43 mmol) y carbonato de cesio (1,2 g, 4 mmol) en DMF

25 (4 ml) se agit6 a 95°C durante 45 minutos. Despues de enfriar, la mezcla se filtr6 y el filtrado se evapor6 al vacio. El residuo se purific6 por cromatografia en columna eluyendo con mezclas cada vez mas polares de cloruro de metileno y acetato de etilo para dar 6-benciloxi-4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-7-metoxiquinazolina (0,213 g, 37%). Espectro de RMN de 1H: (SODM d6) 2,42 (s, 3H), 4,05 (s, 3H), 5,3 (s, 2H), 6,25 (s, 1H), 7,0 (dd, 1H), 7,18 (d, 1H), 7,35-7,6 (m, 6H), 7,8 (s, 1H), 8,55 (s, 1H)MS-ESI: 430 [M+H]+

30 Una soluci6n de 6-benciloxi-4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-7-metoxiquinazolina (1,32 g, 3 mmol), formiato am6nico (1,94 g, 30 mmol) y paladio al 10% sobre carbono (0,2 g) en DMF (15 ml)) que contenia agua (2 ml) se agit6 a temperatura ambiente durante 1 hora. Se filtr6 la mezcla y se evapor6 el filtrado. El residuo se disgreg6 en eter dietilico, el s6lido se filtr6, se lav6 con eter dietilico seguido de agua y se sec6 al vacio sobre P2O5 durante la noche para dar 4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6-hidroxi-7-metoxiquinazolina (1 g, 100%). Espectro RMN de 1H: (SODMd6)

35 2,35 (s, 3H), 4,0 (s, 3H), 6,25 (s, 1H), 7,0 (m, 1H), 7,15 (d, 1H), 7,4 (s, 1H), 7,6 (s, 1H), 8,0 (s, 1H), 8,55 (s, 1H). MS-ESI: 340 [M+H]+

A una soluci6n de 2-fluoro-4-nitroanisol (9,9 g, 58 mmol) y 4-clorofenoxiacetonitrilo (10,7 g, 64 mmol) en DMF (50 ml) enfriada a -15°C se anadi6 terc-but6xido de potasio (14,3 g, 127 mmol) en DMF (124 ml). Despues de agitar durante 30 minutos a -15°C, la mezcla se verti6 sobre acido clorhidrico 1 N enfriado. La mezcla se extrajo con acetato de 40 etilo. Se lav6 la capa organica lav6 con hidr6xido de sodio 1 N, salmuera, se sec6 (MgSO4) y se evapor6. El residuo se purific6 por cromatografia en columna eluyendo con cloruro de metileno. Se combinaron las fracciones que contenian el producto esperado y se evaporaron. El residuo se disolvi6 en etanol (180 ml) y acido acetico (24 ml) que contenia paladio al 10% sobre carb6n activado (600 mg) y la mezcla se hidrogen6 bajo 3 atm6sferas de presi6n durante 2 horas. Se filtr6 la mezcla, y se eliminaron las sustancias volatiles al vacio. Se dividi6 el residuo entre

45 acetato de etilo y agua. Se separ6 la capa organica y se lav6 con bicarbonato de sodio saturado seguido de salmuera, se sec6 (MgSO4) y se evapor6. Se purific6 el residuo por cromatografia en columna eluyendo con cloruro de metileno para dar una mezcla de 4-fluoro-5-metoxiindol y 6-fluoro-5-metoxiindol (5,64 g, 59%) en una proporci6n 1/2. Espectro de RMN de 1H (SODMd6) 3,85 (s, 3H); 6,38 (s, 1H, 6-fluoro); 6,45 (s, 1H; 4-fluoro); 6,9-7,4 (m, 3H)

Una soluci6n de 4-fluoro-5-metoxiindol y 6-fluoro-5-metoxiindol en una proporci6n 1/2 (496 mg, 3 mmol), dicarbonato

50 de di-tercbutilo (720 mg, 3,3 mmol) en acetonitrilo (12 ml) que contenia DMAP (18 mg, 0,15 mmol) se agit6 a temperatura ambiente durante 24 horas. Los componentes volatiles se eliminaron al vacio. Se disolvi6 el residuo en acetato de etilo, se lav6 con acido clorhidrico 1 N, seguido de agua, salmuera, se sec6 (MgSO4) y se evapor6 para dar una mezcla de 4-fluoro-5-metoxi-1-terc-butoxicarbonilindol y 6-fluoro-5-metoxi-1-terc-butoxicarbonilindol en una proporci6n 1/2 (702 mg, 88%). Espectro de RMN de 1H: (SODMd6) 1,65 (s, 9H); 3,9 (s, 3H); 6,6 (d, 1H, 6-fluoro); 6,72 (d, 1H, 4-fluoro); 7,2 (t, 1H, 6-fluoro); 7,4 (d, 1H, 4-fluoro); 7,62 (d, 1H, 6-fluoro); 7,68 (d, 1H, 4-fluoro); 7,78 (s, 1H, 4-fluoro); 7,85 (s, 1H, 6-fluoro)

5 A una soluci6n de 4-fluoro-5-metoxi-1-terc-butoxicarbonilindol y 6-fluoro-5-metoxi-1-terc-butoxicarbonilindol en una proporci6n 1/2 (8,1 g, 30,5 mmol) en THF (100 ml) enfriada a -65°C se anadi6 terc-butil-litio (1,7 M) (23 ml, 35,7 mmol). Despues de agitar durante 4 horas a -70°C, se anadi6 yoduro de metilo (8,66 g, 61 mmol) y la mezcla se dej6 calentar a temperatura ambiente. Se anadi6 agua y la mezcla se extrajo con eter. Se lav6 la capa organica con agua, salmuera, se sec6 (MgSO4), se evapor6 y se utiliz6 directamente en la etapa siguiente.

10 El producto en bruto se disolvi6 en cloruro de metileno (100 ml) y se anadi6 TFA (25 ml). Despues de agitar durante 1 hora a temperatura ambiente, las sustancias volatiles s eliminaron al vacio. Se disolvi6 el residuo en acetato de etilo y se lav6 la capa organica con hidr6xido de sodio 1 N, seguido de agua, salmuera, se sec6 (MgSOa) y se evapor6. Se purific6 el residuo por cromatografia en columna, eluyendo con acetato de etilo/eter de petr6leo (3/7) para dar 6-fluoro-5-metoxi-2-metilindol (1,6 g) y 4-fluoro-5-metoxi-2-metilindol (0,8 g, 48%). 6-fluoro-5-metoxi-2

15 metilindol:MS-ESI : 180 [MH]+. Espectro de RMN de 1H: (SODMd6) 2,35 (s, 3H); 3,8 (s, 3H); 6,05 (s, 1H); 7,1 (s, 1H); 7,12 (s, 1H); 10,8 (s, 1H)4-fluoro-5-metoxi-2-metilindol:MS-ESI: 180 [MH]+. Espectro de RMN de 1H: (SODMd6) 2,35 (s, 3H); 3,8 (s, 3H); 6,15 (s, 1H); 6,9 (t, 1H); 7,05 (d, 1H); 11,0 (s, 1H)

A una soluci6n de 4-fluoro-5-metoxi-2-metilindol (709 mg, 3,95 mmol) en cloruro de metileno (9 ml) enfriada a -30°C se anadi6 una soluci6n de tribromuro de boro (2,18 g, 8,7 mmol) en cloruro de metileno (1 ml). Despues de agitar 20 durante 1 hora a temperatura ambiente, la mezcla se verti6 sobre agua y se diluy6 con cloruro de metileno. Se ajust6 el pH de la capa acuosa a 6. Se separ6 la capa organica, se lav6 con agua, salmuera, se sec6 (MgSO4) y se evapor6. El residuo se purific6 por cromatografia en columna, eluyendo con acetato de etilo/eter de petr6leo (3/7) para dar 4-fluoro-5-hidroxi-2-metilindol (461 mg, 70%). EM-ESI: 166 [MH]+. Espectro de RMN de +1H: (SODMd6) 2,35 (s, 3H); 6,05 (s, 1H); 6,65 (dd, 1H); 6,9 (d, 1H); 8,75 (s, 1H); 10,9 (s, 1H). Espectro de RMN de 13C (SODMd6) 13,5;

25 94,0; 106,0; 112; 118,5, 132; 136, 136,5; 142,5 Alternativamente el 4-fluoro-5-hidroxi-2-metilindol puede prepararse de la manera siguiente:

A una suspensi6n de hidruro de sodio (5,42 g, 226 mmol) (prelavado con pentano) en THF (100 ml) enfriada a 10°C se anadi6 acetoacetato de etilo (29,4 g, 226 mmol) mientras se mantiene la temperatura por debajo de 15°C. Una vez terminada la adici6n, la mezcla se agit6 mas durante 15 minuto y se enfri6 a 5°C. Una soluci6n de 1,2,3-trifluoro30 4-nitrobenceno (20 g, 113 mmol) en THF (150 ml) se anadi6 mientras se mantenia la temperatura por debajo de 5°C. Se dej6 calentar la mezcla luego a temperatura normal y se agit6 durante 24 horas. Las sustancias volatiles se eliminaron al vacio y el residuo se dividi6 entre acetato de etilo y acido clorhidrico acuoso 2 N. Se lav6 la capa organica con agua, salmuera, se sec6 (MgSO4) y se evapor6. Se disolvi6 el residuo en acido clorhidrico concentrado (650 ml) y acido acetico (600 ml) y la mezcla se calent6 a reflujo durante 15 horas. Tras el enfriamiento, las

35 sustancias volatiles se eliminaron al vacio y el residuo se dividi6 entre bicarbonato s6dico acuoso (5%) y acetato de etilo. Se lav6 la capa organica lav6 con bicarbonato de sodio, agua, salmuera, se sec6 (MgSO4) y se evapor6. El residuo se purific6 por cromatografia en columna eluyendo con acetato de etilo/eter de petr6leo (75/25) para dar 3acetilmetil-1,2-difluoro-4-nitrobenceno (17,5 g, 72%).Espectro de RMN de 1H: (CDCl3) 2,4 (s, 3H); 4,25 (s, 2H); 7,25 (dd, 1H); 8,0 (dd, 1H)

40 Una soluci6n de 3-acetilmetil-1,2-difluoro-4-nitrobenceno (500 mg, 2,3 mmol) en cloruro de metileno (5 ml) que contenia montmorillonita K10 (1 g) y ortoformiato de trimetilo (5 ml) se agit6 durante 24 horas a temperatura ambiente. Se filtr6 el s6lido, se lav6 con cloruro de metileno y el filtrado se evapor6 para dar 1,2-difluoro-3-(2,2dimetoxipropil)-4-nitrobenceno (534 mg, 88%). Espectro de RMN de 1H: (CDCl3) 1,2 (s, 3H); 3,2 (s, 6H); 3,52 (s, 2H); 7,18 (dd, 1H); 7,6 (m, 1H)

45 A una soluci6n de alcohol bencilico (221 mg, 2,05 mmol) en DMA (1,5 ml) 60se anadi6 hidruro s6dico (82 mg, 2,05 mmol). La mezcla se agit6 durante 1 hora a temperatura ambiente. Se anadi6 una soluci6n de 1,2-difluoro-3-(2,2dimetoxipropil)-4-nitrobenceno (534 mg, 2,05 mmol) en DMA (1,5 ml) y la mezcla se agit6 durante 3 horas a temperatura ambiente. La mezcla se diluy6 con acido clorhidrico 1 N (10 ml) y se extrajo con acetato de etilo. Se evapor6 la capa organica y el residuo se disolvi6 en THF (2 ml) y se anadi6 acido clorhidrico 6 N (0,3 ml). Se agit6 la

50 mezcla durante 1 hora a temperatura ambiente y los disolventes se eliminaron al vacio. El residuo se dividi6 entre acetato de etil y agua. Se separ6 la capa organica, se lav6 con salmuera, se sec6 (MgSO4) y se evapor6. El s6lido se disgreg6 con eter, se filtr6, se lav6 con eter y se sec6 al vacio para dar 3-acetilmetil-1-benciloxi-2-fluoro-4nitrobenceno (350 mg, 56%). Espectro de RMN de 1H: (CDCl3) 2,35 (s, 3H); 4,25 (s, 2H); 5,25 (s, 2H); 7,0 (dd, 1H); 7,32-7,5 (m, 5H); 8,0 (dd, 1H)

55 Una soluci6n de 3-acetilmetil-1-benciloxi-2-fluoro-4-nitrobenceno (300 mg, 0,99 mmol) en etanol (10 ml) y acido acetico (1 ml) que contenia paladio al 10% cobre carb6n activado (30 mg) se hidrogen6 a una presi6n de 2 atm6sferas durante 2 horas. La mezcla se filtr6 y el filtrado se evapor6. El residuo se disolvi6 en acetato de etilo y la capa organica se lav6 con bicarbonato s6dico acuoso, salmuera y se evapor6 para dar 4-fluoro-5-hidroxi-2metilindol. El residuo se purific6 por cromatografia en columna, eluyendo con acetato de etilo/eter de petr6leo (3/7)

60 para dar 4-fluoro-5-hidroxi-2-metilindol (63 mg, 30%).

Datos analiticos como anteriormente.

Alternativamente el 4-fluoro-5-metoxi-2-metilindol puede prepararse de la manera siguiente:

Una soluci6n de met6xido de sodio (recien preparada a partir de sodio (1,71g) y metanol (35ml)) se anadi6 a una soluci6n de 1,2-difluoro-3-(2,2-dimetoxipropil)-4-nitrobenceno (16,2 g, 62 mmol), (preparada como se describi6 5 anteriormente), en metanol (200 ml) enfriado a 5°C. La mezcla se dej6 calentar a temperatura ambiente y se agit6 durante 3 dias. Las sustancias volatiles se eliminaron al vacio y el residuo se dividi6 entre acetato de etilo y acido clorhidrico 2 N (1 ml). La capa organica se concentr6 hasta un volumen total de 100 ml y se anadieron THF (100 ml) y acido clorhidrico 6 N (25ml). La mezcla se agit6 durante 1 hora a temperatura ambiente. Se eliminaron las sustancias volatiles al vacio y el residuo se reparti6 entre acetato de etilo y agua. Se separ6 la capa organica, se

10 lav6 con agua, salmuera, se sec6 (MgSO4) y se evapor6. El residuo se purific6 por cromatografia en columna eluyendo con acetato de etilo/eter de petr6leo (3/7) para dar 3-acetilmetil-2-fluoro-1metoxi--4-nitrobenceno (12,7 g, 90%). MS-ESI: 250 [MNa]+. Espectro de RMN de 1H (CDCl3) 2,38 (s, 3H); 4,0 (s, 3H); 4,25 (s, 2H); 7,0 (dd, 1H); 8,05 (d, 1H)

A una soluci6n de 3-acetilmetil-2-fluoro-1-metoxi-4-nitrobenceno (11,36 g, 50 mmol) en acetona (200 ml) se anadi6

15 acetato am6nico acuoso 4 M (700 ml) seguido de una soluci6n de tricloruro de titanio (15% en agua, 340 ml) gota a gota. Se agit6 la mezcla durante 10 minutos a temperatura ambiente y se extrajo la mezcla con eter. La capa organica se lav6 con hidr6xido de sodio acuoso 0,5 N seguido de agua, salmuera, se sec6 (MgSO4) y las sustancias volatiles se eliminaron al vacio. El residuo se purific6 por cromatografia en columna eluyendo con cloruro de metileno para dar 4-fluoro-5-metoxi-2-metilindol (8,15g, 90%). Espectro de RMN de 1H: (SODM) 2,35 (s, 3H); 3,8 (s,

20 3H); 6,1 (s, 1H); 6,85 (dd, 1H); 7,02 (d, 1H)

La escisi6n de 4-fluoro-5-metoxi-2-metilindol con tribromuro de boro para dar 4-fluoro-5-hidroxi-2-metilindol esta descrita anteriormente.

Ejemplo de Referencia 2

25 Se anadi6 gota a gota azodicarboxilato de dietilo (0,09 g, 0,518 mmol) a una soluci6n de 4-(7-azaindol-5-iloxi)-6hidroxi-7-metoxiquinazolina (0,133 g, 0,432 mmol), trifenilfosfina (0,17 g, 0,647 mmol) y 3-(4-metilsulfonilpiperazin-1il)propan-1-ol (0,115 g, 0,519 mmol) en DMF (4 ml) y la mezcla se agit6 a temperatura ambiente durante 1 hora. Se eliminaron las sustancias volatiles al vacio y el residuo se purific6 por cromatografia en columna utilizando mezclas cada vez mas polares de acetato de etilo y cloruro de metileno seguido de cloruro de metileno y metanol. Se

30 combinaron las fracciones que contenian el producto esperado y se evaporaron. El s6lido se volvi6 a purificar a continuaci6n por LC de preparaci6n/MS eluyendo con acetonitrilo/agua (que contenia acido acetico al 1%). Se combinaron las fracciones que contenian el producto esperado y se evaporaron. El residuo se disolvi6 en bicarbonato s6dico acuoso y cloruro de metileno. La fase organica se separ6 y se sec6 sobre sulfato de magnesio y se evapor6. El residuo se disgreg6 en eter dietilico, se filtr6, se lav6 con eter y se sec6 al vacio sobre P2O5 para dar

35 4-C7-azaindol-5-iloxi)-7-metoxi-6-C3-C4-metilsulfonilpiperazin-1-il)propoxi)quinazolina (0,09, 40%). Espectro de RMN de 1H: (SODMd6, CF3COOD) 2,3 (m, 2H), 3,05 (s, 3H), 3,1-3,3 (m, 4H), 3,4 (dd, 2H), 3,7 (d, 2H), 3,8 (d, 2H), 4,1 (s, 3H), 4,4 (dd, 2H), 6,6 (d, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,65 (d, 1H), 7,8 (s, 1H), 8,1 (s, 1H), 8,3 (s, 1H), 9,0 (s, 1H) MS-ESI: 513 [M+H]+

El material de partida se prepar6 de la forma siguiente:

40 Se anadi6 gota a gota cloruro de metansulfonilo (2,28ml) a una soluci6n de 1-(terc-butoxicarbonil)piperazina (5 g) en cloruro de metileno (90 ml) que contenia trietilamina (4,5 ml). La soluci6n se agit6 a temperatura ambiente durante 24 horas. Se verti6 la soluci6n sobre agua enfriada y se extrajo con cloruro de metileno. Se separ6 la fase organica, se lav6 con salmuera y se sec6 sobre sulfato de magnesio y se evapor6 para dar 4-(metilsulfonil)piperazina-1carboxilato de terc-butilo (7g). Espectro de RMN de 1H: (CDCl3) 1,45 (s, 9H), 2,75 (s, 3H), 3,15 (m, 4H), 3,5 (m, 4H)

45 Una soluci6n de 4-(metilsulfonil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (7 g) en cloruro de metileno (150 ml) que contenia TFA (35 ml) se agit6 durante 2 horas a temperatura ambiente. Las sustancias volatiles se eliminaron al vacio y el residuo resultante se dividi6 entre cloruro de metileno e hidr6xido s6dico acuoso 2 N. Se separ6 la fase organica y se lav6 con salmuera, se sec6 sobre sulfato de magnesio y se evapor6 para dar 1(metilsulfonil)piperazina (2,18 g). Espectro de RMN de 1H: (CDCl3) 2,9 (s, 3H), 3,0 (m, 4H), 3,2 (m, 2H)

Una suspensi6n de 1-(metilsulfonil)piperazina (3 g, 18,3 mmol), 3-bromopropan-1-ol (3,3 g, 23,8 mmol) y carbonato de potasio (3,28 g, 23,8 mmol) en acetonitrilo (20 ml) se agit6 a 70°C durante 4horas. Despues de enfriar, se filtr6 la mezcla y se evapor6 el filtrado. Se purific6 el residuo por cromatografia en columna eluyendo con mezclas cada vez mas polares de metanol y cloruro de metileno para dar 3-(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)propan-1-ol (2,93 g, 72%).

5 Espectro de RMN de 1H: (CDCl3) 1,72 (m, 2H), 2,55-2,7 (m, 6H), 2,75 (s, 3H), 3,25 (m, 4H), 3,75 (dd, 2H). MS-ESI: 223 [M+H]+

Una soluci6n de 7-azaindol (20,0 g, 169 mmol) en etanol (200 ml) se trat6 con niquel Raney humedo (4 g, 50% de agua) y se agit6 en una atm6sfera de hidr6geno a 5 atm6sferas de presi6n a 95°C durante 2 dias. Se filtr6 la mezcla de reacci6n a traves de tierra de diatomeas y se evapor6 el filtrado al vacio. Se purific6 el residuo por cromatografia

10 en columna eluyendo con acetato de etilo seguido de mezclas cada vez mas polares de cloruro de metileno y metanol (saturado con amoniaco) para dar 7-azaindolina (12,1 g, 79%). Espectro de RMN de 1H: (CDCl3) 3,06 (t, 2H), 3,61 (t, 2H), 4,48 (s a, 1H), 6,50 (m, 1H), 7,25 (m, 1H), 7,81 (d, 1H)

Una soluci6n de 7-azaindolina (22,7 g, 189 mmol), acido p-toluensulf6nico monohidratado (2,95 g, 15 mmol) y 1,3dibromo-5,5-dimetilhidantoina (27,4 g, 96 mmol) en cloruro de metileno (1500 ml) se agit6 a temperatura ambiente 15 durante 3 horas. La soluci6n de reacci6n se decant6 a continuaci6n en un material polimerico negro; se lav6 con tiosulfato s6dico 0,2 M (4 x 250 ml) seguido de salmuera y se sec6 sobre sulfato de magnesio. El filtrado se evapor6 al vacio para dar un s6lido negro que se extrajo con acetato de etilo a ebullici6n (2 x 800 ml y 2 x 500 ml). Los extractos combinados se calentaron a reflujo durante unos pocos minutos con carb6n activado decolorante, se filtraron y se evaporaron al vacio para dar 5-bromo-7-azaindolina (16,6 g, 44%). Espectro de RMN de 1H: (CDCl3)

20 3,07 (t, 2H), 3,64 (t, 2H), 4,52 (s, 1H), 7,31 (d, 1H), 7,84 (d, 1H)

Una mezcla de 5-bromo-7-azaindolina (15,6 g, 78 mmol) y 6xido de manganeso (IV) activo, precipitatado (21,9 g, 252 mmol) en tolueno (300 ml) se calent6 a 90°C durante 1 hora y la soluci6n caliente se filtr6 a traves de una capa de tierra de diatomeas. La tierra de diatomeas y los residuos de manganeso se lavaron con acetona y estos lavados se anadieron al filtrado de tolueno. La evaporaci6n del filtrado al vacio di6 5-bromo-7-azaindol (12,1 g, 78%).

25 Espectro de RMN de 1H: (CDCl3) 6,47 (m, 1H), 7,36 (m, 1H), 8,08 (d, 1H), 8,35 (d, 1H), 9,89 (s, 1H)

Una soluci6n de 5-bromo-7-azaindol (8,6 g, 44 mmol), bromuro de cobre (I) (12,6 g, 88 mmol) y met6xido de sodio (100 g, 1,85 moles) en una mezcla de " DMF" desgaseada (260 ml) y metanol (175 ml) se agit6 a temperatura ambiente en una atm6sfera de nitr6geno, y a continuaci6n se calent6 a reflujo durante 3,5 horas. La mezcla se concentr6 a aproximadamente la mitad de su volumen original, se enfri6 en un bano de agua fria y se trat6 gota a 30 gota con agua que produce una exoterma. La suspensi6n resultante se evapor6 al vacio para dar un s6lido marr6n que se trat6 a continuaci6n con agua seguido de hidr6xido de amonio. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo y los extractos combinados se lavaron con hidr6xido de amonio diluido hasta que no se apreci6 color azul en los lavados acuosos. La soluci6n de acetato de etilo se lav6 con salmuera, se sec6 sobre MgSO4, se filtr6 y se evapor6 al vacio. Este s6lido en bruto, 5-metoxi-7-azaindol (6,3 g, 97%), se tom6 a traves de la etapa siguiente sin mas

35 purificaci6n.

Se anadi6 tribromuro de boro (0,506 Il, 5,35 mmol) en cloruro de metileno (1 ml) a una soluci6n de 5-metoxi-7azaindol (0,36 g, 2,43 mmol) en cloruro de metileno (25 ml) enfriada a -30°C. Se dej6 calentar la mezcla a temperatura ambiente y se agit6 durante la noche. Se verti6 la mezcla sobre hielo y agua y el pH de la fase acuosa se ajust6 a 6. La fase organica se separ6 y la fase acuosa se extrajo mas con acetato de etilo. Las fases organicas

40 se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron. Se purific6 el residuo por cromatografia en columna eluyendo con mezclas cada vez mas polares de cloruro de metileno y metanol para dar 5-hidroxi-7-azaindol (0,23 g, 71%). Espectro de RMN de 1H: (SODMd6) 6,25 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,35 (s, I H), 7,85 (s, 1H), 9,05 (s a, 1H)MS-ESI: 135 [M+H]+

Una soluci6n de 6-benciloxi-4-cloro-7-metoxiquinazolina (0,449 g, 1,49 mmol), (patenteEP 1153920 ejemplos de

45 producci6n 28-30), 5-hidroxi-7-azaindol (0,22 g, 1,64 mmol) y carbonato de potasio (0,28 g, 2,02 mmol) en DMF (5 ml) se agit6 a 95°C durante 3 horas. La mezcla se filtr6 y el filtrado se evapor6 y se sec6 durante la noche al vacio. El residuo se disgreg6 en cloruro de metileno y acetato de etilo y el s6lido se filtr6 y se sec6 al vacio para dar 4-(7azaindol-5-iloxi)-6-benciloxi-7-metoxiquinazolina (0,36g, 60%). Espectro de RMN de 1H (SODM d6): 4,05 (s, 3H), 5,35 (s, 2H), 6,5 (s, 1H), 7,35-7,5 (m, 4H), 7,5-7,6 (m, 3H), 7,8 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 8,2 (s, 1H), 8,55 (s, 1H)MS-ESI:

50 399 [M+H]+

Una soluci6n de 4-(7-azaindol-5-iloxi)-6-benciloxi-7-metoxiquinazolina (0,36 g, 0,873 mmol), formiato de amonio (0,55 g, 8,73 mmol) y paladio al 10% sobre carbono (0,05 g) en DMF (7 ml) que contiene agua (0,3 ml) se agit6 a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se filtr6 y el filtrado se evapor6. El residuo se disgreg6 en eter dietilico y el s6lido se filtr6, se lav6 con eter y se sec6 al vacio. El s6lido se disgreg6 en agua, se filtr6, se lav6 con

55 agua y se sec6 al vacio sobre P2O5 para dar 4-(7-azaindol-5-iloxi)-6-hidroxi-7-metoxiquinazolina (0,26 g, 85%). Espectro de RMN de 1H: (SODMd6) 4,05 (s, 3H), 6,5 (d, 1H), 7,4 (s, 1H), 7,6 (m, 2H), 7,95 (s, 1H), 8,2 (s, I H), 8,5 (s, 1H)MS-ESI: 307 [M-H]

Ejemplo de referencia 4

Una soluci6n de 7-(3-(4-acetilpiperazin-1-il)propoxi)-4-cloro-6-metoxiquinazolina (0,285 g, 0,753 mmol), 5-hidroxi-7azaindol (0,111g, 0,828 mmol), (preparada segun se describe para el material de partida en el ejemplo de reference 2), y carbonato potasico (0,114 g, 0,828 mmol) en DMF (1,6 ml) se agit6 y se calent6 a 95°C bajo nitr6geno durante 5 3 horas. La mezcla se enfri6, se filtr6 y el filtrado se evapor6. El residuo se purific6 por cromatografia en columna eluyendo con mezclas cada vez mas polares de cloruro de metileno y metanol (saturada con amoniaco). Las fracciones que contenian el product esperadoo se combinaron y se evaporaron y el residuo se disgreg6 en eter dietilico, se filtraron y se secaron al vacio para dar 7-C3-C4-acetilpiperazin-1-il)propoxi)-4-C7-azaindol-5-iloxi)-6metoxiquinazolina (0,225 g, 62%).Espectro de RMN de 1H: (SODMd6) 1,98 (s, 3H), 1,98 (m, 2H), 2,35 (dd, 2H), 2,4

10 (dd, 2H), 2,5 (m, 2H), 3,41 (m, 4H), 4,0 (s, 3H), 4,25 (dd, 2H), 6,47 (d, I H), 7,38 (s, 1H), 7,55 (dd, 1H), 7,6 (s, 1H), 7,9 (d, 1H), 8,18 (d, 1H), 8,5 (s, 1H) MS-ESI: 477,6 [M+H]+

El material de partida se prepar6 de la forma siguiente:

Una mezcla de 2-amino-4-benciloxi-5-metoxibenzamida (10 g, 0,04 moles), (J. Med. Chem. 1977, vol. 20, 146-149), y reactivo de Gold (7,4 g, 0,05 moles) en dioxano (100 ml) se agit6 y se calent6 a reflujo durante 24 horas. Se

15 anadieron acetato de sodio (3,02 g, 0,037 mol) y acido acetico (1,65 ml, 0,029 mol) a la mezcla de reacci6n, y se calent6 durante 3 horas mas. La mezcla se evapor6, se anadi6 agua al residuo, se filtr6 el s6lido, se lav6 con agua y se sec6 (MgSO4). La recristalizaci6n en acido acetico di6 7-benciloxi-6-metoxi-3,4-dihidroquinazolin-4-ona (8,7 g, 84%).

Se anadi6 paladio al 10% sobre carbono (8,3 g) a una suspensi6n de 7-benciloxi-6-metoxi-3,4-dihidroquinazolin-4

20 ona (50 g, 0,177 moles) en dimetilformamida (800 ml) bajo nitr6geno. A continuaci6n se anadi6 en porciones formiato am6nico (111,8 g, 1,77 moles) durante 5 minutos. La mezcla de reacci6n se agit6 durante una hora a temperatura ambiente a continuaci6n se calent6 a 80°C durante una hora mas. La mezcla de reacci6n se filtr6 caliente a traves de tierra de diatomeas y los restos se lavaron con dimetilformamida. El filtrado se concentr6 a continuaci6n y el residuo se puso en suspensi6n en agua. Se ajust6 el pH a 7,0 utilizando hidr6xido de sodio 2 M y la

25 mezcla resultante se agit6 a temperatura ambiente durante una hora. El s6lido se filtr6, se lav6 con agua y se sec6 sobre pent6xido de f6sforo proporcionando 7-hidroxi-6-metoxi-3,4-dihidroquinazolin-4-ona como un s6lido blanco (20,52 g, 60%). Espectro de RMN de 1H: (SODMd6) 3,85 (s, 3H), 6,95 (s, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,85 (s, 1H) MS-ESI: 193 [M+H]+

Se anadi6 piridina (20 ml) a una suspensi6n de 7-hidroxi-6-metoxi-3,4-dihidroquinazolin-4-ona (20,5 g, 107 mmol) en

30 anhidrido acetico (150 ml, 1,6 moles). La mezcla de reacci6n se calent6 a 120°C durante tres horas, durante cuyo tiempo se disolvi6 el s6lido. Se dej6 enfriar la mezcla de reacci6n y a continuaci6n se verti6 en agua con hielo (900 ml). La mezcla de reacci6n se agit6 durante una hora a continuaci6n el s6lido se elimin6 por filtraci6n y se sec6 sobre pent6xido de f6sforo proporcionando 7-acetoxi-6-metoxi-3,4-dihidroquinazolin-4-ona como un s6lido blanco (20,98 g, 84%). Espectro de RMN de 1H: (SODMd6) 2,25 (s, 3H), 3,85 (s, 3H), 7,40 (s, 1H), 7,60 (s, 1H), 8,00 (s, 1H)

35 MS-ESI: 235 [M+H]+

7-acetoxi-6-metoxi-3,4-dihidroquinazolin-4-ona (1 g, 4,3 mmol) se puso en suspensi6n en cloruro de tionilo (10,5 ml). Se anadi6 una gota de dimetilformamida y la reacci6n se calent6 a 80°C durante dos horas, durante las cuales se disolvi6 el s6lido. Se enfri6 la mezcla de reacci6n y se elimin6 al vacio el cloruro de tionilo. El residuo se azeotrop6 con tolueno antes de ponerse en suspensi6n en cloruro de metileno. Se anadi6 una soluci6n de amoniaco al 10% en

40 metanol (40 ml) y se calent6 la reacci6n a 80 °C durante 15 minutos. Despues de enfriar los disolventes se eliminaron al vacio y el residuo se volvi6 a disolver en agua (10 ml) y el pH se ajust6 a 7,0 con acido clorhidrico 2 M. El s6lido resultante se filtr6, se lav6 con agua y se sec6 sobre pent6xido de f6sforo proporcionando 4-cloro-7-hidroxi6-metoxiquinazolina como un s6lido blanco (680 g, 75%). Espectro de RMN de 1H: (SODMd6) 4,00 (s, 3H), 7,25 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 8,75 (s, 1H) MS-ESI: 211-213 [M+H]+

45 Se anadi6 gota a gota azodicarboxilato de dietilo (0,243 g, 1,396 mmol) a una soluci6n de 4-cloro-7-hidroxi-6metoxiquinazolina (0,245 g, 1,16 mmol), trifenilfosfina (0,396 g, 1,51 mmol) y 3-(4-acetilpiperazin-1-il)propan-1-ol (0,238 g, 1,28 mmol) (preparada segun se describe para el material de partida en el ejemplo de referencia 1 o en el ejemplo 7). Despues de agitar a temperatura ambiente durante 1 hora, se verti6 la mezcla sobre silice y se eluy6 con mezclas de cloruro de metileno y metanol cada vez mas polares para dar 7-(3-(4-acetilpiperazin-1-il)propoxi)-4-cloro

50 6-metoxiquinazolina (0,29 g, 66%). Espectro de RMN de 1H: (SODMd6) 2,0 (s, 3H), 2,0 (m, 2H), 2,35 (dd, 2H), 2,4 (dd, 2H), 2,5 (dd, 2H), 3,45 (m, 4H), 4,02 (s, 3H), 4,3 (dd, 2H), 7,4 (s,1H), 7,5 (s, 1H), 8,9 (s, 1H) MS-ESI: 379-381 [M+H]+

Ejemplo7

Una soluci6n de 7-(3-bromopropoxi)-4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6-metoxiquinazolina (0,25 g, 0,543 mmol) y 1acetilpiperazina (0,208 g, 1,63 mmol) en DMF (4 ml) se agit6 a 80°C durante 2,5 horas. Las sustancias volatiles se 5 eliminaron al vacio y el residuo se purific6 por cromatografia en columna eluyendo con mezclas de cloruro de metileno y metanol cada vez mas polares. Se combinaron las fracciones que contenian el producto esperado y se evaporaron. El residuo se disgreg6 en eter dietilico y el s6lido resultante se filtr6, se lav6 con eter dietilico y se sec6 al vacio para dar 7-C3-C4-acetilpiperazin-1-il)propoxi)-4-C4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6-metoxiquinazolina (0,25 g, 0.543%). Espectro RMN de 1H: (SODMd6) 1,98 (s, 3H), 2,0 (m, 2H), 2,4 (s, 3H), 2,4 (m, 4H), 2,55 (t, 2H), 3,45 (dd,

10 4H), 4,0 (s, 3H), 4,3 (t, 2H), 6,22 (s, 1H), 6,98 (dd, 1H), 7,15 (d, 1H), 7,4 (s, 1H), 7,62 (s, I H), 8,48 (s, 1H), 10,98 (s a, 1H)MS-ESI: 508 [M+H]+

El material de partida se prepar6 de la forma siguiente:

Una mezcla de 7-benciloxi-6-metoxi-3,4-dihidroquinazolin-4-ona (2,82 g, 0,01 moles), (preparada como se describi6 para el material de partida en el ejemplo de referencia 4), cloruro de tionilo (40 ml) y DMF (0,28 ml) se agit6 y se

15 calent6 a reflujo durante 1 hora. La mezcla se evapor6, el residuo se absorbi6 en tolueno y se evapor6 a sequedad para dar hidrocloruro de 7-benciloxi-4-cloro-6-metoxiquinazolina (3,45 g).

Se disolvi6 hidrocloruro de 7-benciloxi-4-cloro-6-metoxiquinazolina (3,35 g) en cloruro de metileno (250 ml) y se lav6 con bicarbonato s6dico acuoso hasta que el pH de la soluci6n acuosa se ajust6 a pH 8. La capa organica se lav6 con salmuera, se sec6 (MgSO4) y se evapor6 para dar la base libre 7-benciloxi-4-cloro-6-metoxiquinazolina (2,9 g,

20 96%).

Una suspensi6n de base libre 7-benciloxi-4-cloro-6-metoxiquinazolina (10 g, 33,2 mmol), 4-fluoro-5-hidroxi-2metilindol (5,9 g, 35,7 mmol), (preparada como se describi6 para el material de partida en el ejemplo de referencia 1), y carbonato de potasio (9,2 g, 66,6 mmol) en NMP (100 ml) se agit6 a 95°C durante 1 hora. Despues de enfriar, la mezcla de reacci6n se reparti6 entre acetato de etilo y bicarbonato de sodio acuoso. La capa organica se separ6,

25 se lav6 con salmuera y se sec6 sobre sulfato de magnesio y se evapor6 al vacio. El residuo se disgreg6 en acetonitrilo y la suspensi6n se enfri6. El precipitado se filtr6 y se sec6 al vacio para dar 7-benciloxi-4-(4-fluoro-2metilindol-5-iloxi)-6-metoxiquinazolina (8,2 g, 57%). Espectro de RMN de 1H: (SODMd6) : 2,4 (s, 3H), 4,0 (s, 3H), 5,35 (s, 2H), 6,22 (s, 1H), 6,95 (dd, 1H), 7,15 (d, 1H), 7,3-7,55 (m, 6H), 7,51 (s, 1H), 8,5 (s, 1H)

Una suspensi6n de 7-benciloxi-4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6-metoxiquinazolina (8,2 g, 19,1 mmol), formiato

30 am6nico (12 g, 190 mmol) en DMF (50 ml)que contenia paladio al 10% sobre carbono (2 g) se agit6 a temperatura ambiente durante 1,5 horas. La mezcla se diluy6 con acetato de etilo y se filtr6 sobre tierra de diatomeas. Precipit6 un s6lido del filtrado. Se filtr6 el s6lido. Se lav6 el filtrado con bicarbonato s6dico acuoso, seguido de salmuera y se sec6 sobre sulfato de magnesio. Los componentes volatiles se eliminaron al vacio. El s6lido residual se combin6 con el s6lido previamente aislado del filtrado y a continuaci6n se disgreg6 con acetonitrilo con enfriamiento. Se filtr6

35 el precipitado, se lav6 con acetonitrilo seguido de eter dietilico y se sec6 al vacio para dar 4-(4-fluoro-2-metilindol-5iloxi)-7-hidroxi-6-metoxiquinazolina (6,48 g, cuant.). Espectro de RMN de 1H: (SODMd6) 2,4 (s, 3H), 3,98 (s, 3H), 6,22 (s, 1H), 6,95 (dd, 1H), 7,15 (d, 1H), 7,2 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 8,38 (s, 1H)

Se anadi6 azodicarboxilato de dietilo (557 Il, 3,53 mmol) a una soluci6n de 4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-7-hidroxi6-metoxiquinazolina (1g, 2,95 mmol), trifenilfosfina (1,15g, 4,42mmol) y 3-bromo-1-propanol (293 Il, 3,24 mmol) en 40 cloruro de metileno (25 ml). Se agit6 la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora y el residuo se purific6 por cromatografia en columna eluyendo con mezclas de cloruro de metileno y metanol cada vez mas polares. Se combinaron las fracciones que contenian el producto esperado y se evaporaron. El residuo se disgreg6 en eter dietilico y el s6lido se filtr6, se lav6 con eter dietilico y se evapor6 para dar 7-(3-bromopropoxi)-4-(4-fluoro-2metilindol-5-iloxi)-6-metoxiquinazolina (1,35g, 100%). Espectro RMN de 1H: (SODMd6) 2,4 (m, 2H), 2,45 (s, 3H), 3,75

45 (dd, 2H), 4,05 (s, 3H), 4,35 (dd, 2H), 6,25 (s, 1H), 7,0 (dd, 1H), 7,2 (d, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,65 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 9,0 (s a, 1H) MS-ESI: 460-462 [M+H]+

Alternativamente puede prepararse 7-[3-(4-acetilpiperazin-1-il)propoxi]-4-[(4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi]-6metoxiquinazolina de la manera siguiente:

5 4-[(4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxil-7-hidroxi-6-metoxiquinazolina (14 g, 41,3 mmol), (preparada segun se describe para el material de partida en este ejemplo anteriormente en la presente memoria), 3-(4-acetilpiperazin-1-il)propan-1ol (9,2 g, 49,5 mmol) y trifenilfosfina (12,9 g, 49,5 mmol) se agitaron conjuntamente en cloruro de metileno (210 ml). Se anadi6 gota a gota azodicarboxilato de diisopropilo (9,75 ml, 49,5 mmol) y se utiliz6 un bano de agua con hielo para mantener la temperatura de la mezcla de reacci6n entre 15 y 18°C. Al final de la adici6n, la mezcla de reacci6n

10 se dej6 calentar a temperatura ambiente y se agit6 durante 3 horas. La mezcla se filtr6 y se concentr6 a presi6n reducida y el aceite viscoso resultante se disolvi6 en acetona (280 ml) y se agit6 durante 45 minutos. El s6lido que se form6 se filtr6 y se sec6 al vacio. El s6lido se purific6 por cromatografia eluyendo con cloruro de metileno/metanol (saturado con amoniaco) (96/4) para dar 7-[3-C4-acetilpiperazin-1-il)propoxi]-4-[C4-fluoro-2-metil-1H-indol-5il)oxi]-6-metoxiquinazolina (12,5 g, 60%) como un s6lido blanco. Los detalles sobre MS y RMN se dan

15 anteriormente en la presente memoria .

El material de partida se prepar6 de la forma siguiente:

Se disolvi6 1-acetilpiperazina (15,0 g, 117 mmol) en acetonitrilo (200 ml) y se anadi6 carbonato potasico (40,4 g, 293 mmol) seguido de 3-bromo-1-propanol (10,6 ml, 117 mmol). La mezcla se calent6 a reflujo durante 2,5 horas, se enfri6, se filtr6 y se concentr6 a presi6n reducida. El aceite viscoso resultante se enfri6 en hielo durante 3 horas y el

20 producto cristalino que se form6 se puso en suspensi6n en eter dietilico y se filtr6. El s6lido higrosc6pico se sec6 al vacio (P2O5) durante la noche para dar 3-(4-acetilpiperazin-1-il)propan-1-ol (17,3 g, 90%) como un s6lido palido amarillo. Espectro RMN de 1H: (CDCl3) 1,75 (m, 2H); 2,08 (s, 3H); 2,51 (m, 4H); 2,65 (t, 2H); 3,47 (t a, 2H); 3,64 (t a, 2H); 3,82 (t, 2H) MS-ESI: 187 [M+H]+

Alternativamente puede prepararse 7-[3-(4-acetilpiperazin-1-il)propoxi]-4-[(4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi]-625 metoxiquinazolina de la manera siguiente:

Una mezcla de 7-[3-(4-acetilpiperazin-1-il)propoxi]-4-cloro-6-metoxiquinazolina (20,0 g, 52,3 mmol), 4-fluoro-5hidroxi-2-metilindol (10,5 g, 63,3 mmol), (preparada como se describe para el material de partida en el ejemplo de referencia 1) y carbonato de cesio (34,4 g, 106 mmol) en acetona (500 ml) se calent6 a reflujo durante 4 horas. La

30 mezcla se enfri6 y se dej6 reposar durante la noche. La mezcla se filtr6 y el s6lido se puso en suspensi6n en agua y se volvi6 a filtrar y se sec6 al vacio. El s6lido se purific6 por cromatografia en columna eluyendo con cloruro de metileno/metanol (saturado con amoniaco) (95/5) para dar 7-[3-C4-acetilpiperazin-1-il)propoxi]-4-[C4-fluoro-2metil-1H-indol-5-il)oxi]-6-metoxiquinazolina (20,4 g, 77%) como un s6lido blanco. Detalles de MS y RMN se dan anteriormente en la presente memoria.

35 El material de partida se prepar6 de la forma siguiente:

4-cloro-7-hidroxi-6-metoxiquinazolina (3 g, 14,2 mmol), (preparada segun se describe para el material de partida en el ejemplo de referencia 4), 3-(4-acetilpiperazin-1-il)propan-1-ol (3,2 g, 17,1 mmol), (preparada segun se describe para el material de partida en este ejemplo en la presente memoria anteriormente) y trifenilfosfina (4,5 g, 17,1 mmol) se agitaron conjuntamente en dicloromeano (140 ml). Se anadi6 gota a gota azodicarboxilato de diisopropilo (3,4 ml, 5 17,1 mmol) y se utiliz6 un bano de agua con hielo para mantener la temperatura de la mezcla de reacci6n por debajo de 10°C. Al final de la adici6n, la mezcla de reacci6n se dej6 calentar a temperatura ambiente y se agit6 durante la noche. La mezcla se concentr6 a presi6n reducida. La cromatografia en columna del residuo (2:1 iso-hexano:acetato de etilo despues 3% - 5% metanol/diclorometano) di6 7-[3-(4-acetilpiperazin-1-il)propoxi]-4-cloro-6-metoxiquinazolina (3,96 g, 74%) como un s6lido blanco. Espectro RMN de 1H: (SODM-d6) 1,98 (m, 5H), 2,34 (m, 2H); 2,40 (m, 2H);

10 2,46 (t, 2H); 3,43 (m, 4H); 4,01 (s, 3H); 4,29 (t, 2H); 7,40 (s, 1H); 7,46 (s, 1H); 8,87 (s, 1H) MS-ESI 379,1 y 381,1 [MH]+

Alternativamente puede prepararse 7-[3-(4-acetilpiperazin-1-il)propoxi]-4-[(4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi]-6metoxiquinazolina de la manera siguiente:

15 4-[(4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi]-7-hidroxi-6-metoxiquinazolina (250 mg, 0,74 mmol), (preparada como se describe para el material de partida en este ejemplo anteriormente en la presente memoria), y de carbonato de potasio (112 mg, 0,81 mmol) se agitaron conjuntamente en N-metilpirrolidinona (3 ml). Se anadi6 1-acetil-4-(3cloropropoxi)piperazina (166 mg, 0,81 mmol) en N-metilpirrolidinona (1 ml) y la mezcla se calent6 a 90°C durante 3 horas. La mezcla se enfri6, se filtr6 y se concentr6 a presi6n reducida. El residuo se purific6 por cromatografia en

20 columna eluyendo con cloruro de metileno/metanol (saturado con amoniaco) (97/3) para dar 7-[3-C4-acetilpiperazin1-il)propoxi]-4-[C4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi]-6-metoxiquinazolina (268 mg, 71%) como un s6lido blanco. Detalles de MS y RMN se dan anteriormente en la presente memoria.

El material de partida se prepar6 de la forma siguiente:

Se calent6 a reflujo durante 2 horas una mezcla de 1-acetilpiperazina (1,0 g, 7,8 mmol), 1-bromo-3-cloropropano

25 (772 Il, 7,8 mmol) y carbonato de potasio (2,7 g, 19,5 mmol) en acetonitrilo (150 ml). La mezcla se enfri6, se filtr6 y se concentr6 a presi6n reducida. El residuo se purific6 por cromatografia en columna eluyendo con cloruro de metileno/metanol (98/2) para dar 1-acetil-4-(3-cloropropoxi)piperazina (656 mg, 41%) como un aceite incoloro. Espectro RMN de 1H: (CDCl3) 1,95 (m, 2H); 2,08 (s, 3H); 2,42 (m, 4H), 2,51 (t, 2H); 3,46 (t, 2H); 3,61 (t, 4H)

Ejemplo�28

Una mezcla de 7-[2-(4-acetilpiperazin-1-il)etoxi]-4-cloro-6-metoxiquinazoline (12,24 g, 33,5 mmol), 4-fluoro-5-hidroxi2-metilindol (5,54 g, 33,5 mmol), (preparada como se describe para el material de partida en el ejemplo de referencia 1), y carbonato de potasio (4,64 g, 33,5 mmol) se calent6 en N,N-dimetilacetamida (150 ml) a 85°C durante 4 horas. Se anadieron 4-fluoro-5-hidroxi-2-metilindol (33 mg, 0,2 mmol) y carbonato potasico (108 mg, 57%) y la mezcla se 35 calent6 durante una 1 hora mas a 85°C y a continuaci6n se agit6 a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se enfri6 y concentr6 a presi6n reducida. Se purific6 el residuo por cromatografia en columna eluyendo con cloruro de metileno/metanol (95/5) para dar un s6lido blanco que se puso en suspensi6n en acetona (150 ml) y se calent6 a reflujo durante 1 hora. Despues de enfriar se filtr6 la mezcla y se sec6 el s6lido al aire para dar 7-[2-C4acetilpiperazin-1-il)etoxi]-4-[C4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi]-6-metoxiquinazolina (10 g, 60%) como un s6lido

40 blanco. Espectro RMN de 1H: (SODMd6) 2,00 (s, 3H); 2,42 (s, 3H); 2,52 (t, 2H); 2,56 (t a, 2H); 2,85 (t, 2H); 3,45 (m, 4H); 4,00 (s, 3H); 4,35 (t, 2H); 6,25 (s, 1H), 6,99 (t, 1H); 7,17 (d, 1H); 7,45 (s, 1H); 7,62 (s, 1H); 8,51 (s, 1H); 11,32 (s a, 1H) MS-ESI: 494,3 [M+H]+

El material de partida se prepar6 de la forma siguiente: Una suspensi6n de 4-cloro-7-hidroxi-6-metoxiquinazolina (222 mg, 1,05 mmol), (preparada como se describe para el material de partida en el ejemplo de referencia 4), en cloruro de metileno (12 ml) se trat6 con trifenilfosfina (389 mg, 1,48 mmol), 2-(4-acetilpiperazin-1-il)etanol (200 mg, 1,16 mmol) y azodicarboxilato de diisopropilo (255 mg, 1,26 mmol) y la mezcla se agit6 a temperatura ambiente durante 2,5 horas. La mezcla de reacci6n en bruto se carg6

5 sobre una columna de silice y se eluy6 utilizando cloruro de metileno/metanol (saturado con amoniaco) (92/8). Las fracciones relevantes se combinaron y se evaporaron al vacio para dar un residuo, que se disgreg6 con acetona, se filtr6 y se sec6. Esto di6 7-[2-(4-acetilpiperazin-1-il)etoxi]-4-cloro-6-metoxiquinazolina como un s6lido blanco (240 mg, 62%). Espectro RMN de 1H: (SODMd6) 1,97 (s, 3H), 2,50 (m, 4H), 2,82 (t, 2H), 3,41 (m, 4H), 3,98 (s, 3H), 4,32 (t, 2H), 7,38 (s, 1H), 7,48 (s, 1H), 8,85 (s, 1H)MS-ESI: 365 (MH)+

10 Alternativamente 7-[2-(4-acetilpiperazin-1-il)etoxi]-4-[(4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi]-6-metoxiquinazolina puede prepararse de la manera siguiente:

Una mezcla de 7-(2-bromoetoxi)-4-[(4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi]-6-metoxiquinazolina (310 mg de una muestra que contenia 6xido de trifenilfosfina (approx. 12% p/p), 0,61 mmol) y 1-acetilpiperazina (258 mg, 2,02 mmol) en N,N

15 dimetilformamida (5 ml) se agit6 a temperatura ambiente durante la noche y a continuaci6n se concentr6 a presi6n reducida. Se purific6 el residuo por cromatografia en columna eluyendo con cloruro de metileno/metanol (95/5) para dar 7-[2-C4-acetilpiperazin-1-il)etoxi]-4-[C4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi]-6-metoxiquinazolina (202 mg, 67%) como un s6lido blanco. Los detalles de MS y RMN se dan anteriormente en la presente memoria.

El material de partida se prepar6 de la forma siguiente:

20 Una suspensi6n de 4-[(4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxy]-7-hidroxi-6-metoxiquinazolina (530 mg, 1,56 mmol), (preparada como se describe para el material de partida en el ejemplo 7), en cloruro de metileno (15 ml) se trat6 con trifenilfosfina (570 mg, 2,18 mmol), 2-bromoetanol (300 mg, 2,40 mmol) y azodicarboxilato de diisopropilo (380 mg, 1,88 mmol) y la mezcla se agit6 a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacci6n en bruto se carg6 sobre una columna de silice y se eluy6 utilizando acetato de etilo como disolvente. Las fracciones relevantes se

25 combinaron y se evaporaron al vacio para dar un residuo, que se disgreg6 con eter, se filtr6 y se sec6. Esto di6 7-(2bromoetoxi)-4-[(4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi]-6-metoxiquinazolina como un s6lido blanco (546 mg, 78%). %). Espectro RMN de 1H: (SODMd6) 2,40 (s, 3H), 3,90 (t, 2H), 3,99 (s, 3H), 4,56 (t, 2H), 6,21 (s, 1H), 6,97 (t, 1H), 7,16 (d, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 11,29 (s, 1H) MS (ESI) : 446 y 448 (MH)+

Alternativamente 7-[2-(4-acetilpiperazin-1-il)etoxi]-4-[(4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi]-6-metoxiquinazolina puede 30 prepararse de la manera siguiente:

4-[(4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxil-7-hidroxi-6-metoxiquinazolina (300 g, 0,88 mmol), (preparada segun se describe para el material de partida en el ejemplo 7), 2-(4-acetilpiperazin-1-il)etanol (183 g, 1,06 mmol) y trifenilfosfina (278 g, 1,06 mmol) se agitaron conjuntamente en diclorometano (10 ml) y la mezcla se enfri6 en un bano de agua con hielo. 35 Se anadi6 gota a gota azodicarboxilato de diisopropilo (209 ml, 1,06 mmol) y la mezcla se agit6 durante 1,5 horas. Un equivalente molar mas de 2-(4-acetilpiperazin-1-il)etanol (172 mg, 1 mmol), trifenilfosfina (262 mg, 1 mmol) y azodicarboxilato de diisopropilo (197 Il, 1 mmol) se anadieron y la mezcla se agit6 durante 1 hora mas. Las sustancias volatiles se eliminaron al vacio y el residuo se purific6 por cromatografia en columna eluyendo con cloruro de metileno/metanol (95/5) para dar un s6lido en bruto que se purific6 mas por HPLC de preparaci6n para

40 dar 7-[2-C4-acetilpiperazin-1-il)etoxi]-4-[C4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi]-6-metoxiquinazolina (75 mg, 17%). Los detalles de MS y RMN se dan anteriormente en la presente memoria.

El material de partida se prepar6 de la forma siguiente:

Se calent6 a reflujo durante 3 horas una mezcla de 1-acetilpiperazina (2,5 g, 19,5 mmol), 2-bromoetanol (1.38 ml, 19,5 mmol) y carbonato de potasio (6,7 g, 48,8 mmol) en acetonitrilo (30 ml). La mezcla se enfri6, se filtr6 y se concentr6 a presi6n reducida. El residuo se purific6 por cromatografia en columna eluyendo con cloruro de metileno/metanol (9/1) para dar 2-(4-acetilpiperazin-1-il)etanol (1.89 mg, 56%) como un aceite incoloro. Espectro RMN de 1H: (CDCl3) 2,09 (s, 3H); 2,50 (m, 4H); 2,57 (t, 2H); 3,48 (t, 2H); 3,63 (m, 4H)

Alternativamente puede prepararse 7-[2-(4-acetilpiperazin-1-il)etoxi]-4-[(4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi]-6-metoxi5 quinazolina de la manera siguiente:

Se calent6 a 90°C durante 2 horas una mezcla de 4-[(4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi]-7-hidroxi-6-metoxiquinazolina (250 mg, 0,74 mmol), 1-acetil-4-(2-cloroetil)piperazina (144 mg, 0,81 mmol) y carbonato potasico (112 mg, 0,81 mmol) en N-metilpirrolidinona (6 ml). Se enfri6 la mezcla y se anadi6 agua. Despues de 30 minutos se filtr6 el s6lido y se sec6 al vacio. El residuo se purific6 por cromatografia en columna eluyendo con cloruro de metileno/metanol

10 (saturado con amoniaco) (96/4) para dar 7-[2-C4-acetilpiperazin-1-il)etoxi]-4-[C4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi]-6metoxiquinazolina (310 mg, 58%) como un s6lido blanco. Detalles de MS y RMN se dan anteriormente en la presente memoria.

El material de partida se prepar6 de la forma siguiente:

2-(4-acetilpiperazin-1-il)etanol (500 mg, 2,90 mmol), (preparado como se describe para el material de partida en este

15 ejemplo anteriormente en la presente memoria), se disolvi6 en cloruro de metileno (10 ml) y se anadieron trietilamina (445 Il, 3,19 mmol) y cloruro de 4-toluensulfonilo (609 mg, 3,19 mmol) y la mezcla se agit6 a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se lav6 con salmuera, se sec6 (MgSO4) y se concentr6 a presi6n reducida. El residuo se purific6 por cromatografia en columna eluyendo con cloruro de metileno/metanol (98/2) para dar 1-acetil-4-(2cloroetil)piperazina (300 mg, 54%) como un aceite incoloro. Espectro RMN de 1H: (CDCl3) 2,08 (s, 3H); 2,48 (t a,

20 2H); 2,52 (t a, 2H); 2,75 (t, 2H); 3,48 (t a, 2H); 3,59 (t, 2H); 3,63 (t a, 2H)

Ejemplo�54

A continuaci6n se ilustran presentaciones farmaceuticas representativas que contienen un compuesto de la invenci6n, o una de sus sales farmaceuticamente aceptables (en adelante en la presente memoria compuesto X), para utilizaci6n terapeutica o profilactica en seres humanos:

25 (a)

Comprimido I

mg/comprimido

Compuesto X

100

Lactosa Ph. Eur

182,75

Croscarmelosa de sodio

12,0

Pasta de almid6n de maiz (pasta al 5% p/v)

2,25

Estearato de magnesio

3,0

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

(g)

Comprimido II

mg/comprimido

Compuesto X

50

Lactosa Ph. Eur

223,75

Croscarmelosa de sodio

6,0

Almid6n de maiz

15,0

Polivinilpirrolidona (pasta al 5% p/v)

2,25

Estearato de magnesio

3,0

Comprimido III

mg/comprimido

Compuesto X

1,0

Lactosa Ph.Eur

93,25

Croscarmelosa de sodio

4,0

Pasta de almid6n de maiz (pasta al 5% p/v)

0,75

Estearato de magnesio

1,0

Capsula

mg/capsula

Compuesto X

10

Lactosa Ph. Eur

488,5

Estearato de magnesio

1,5

Inyecci6n I

(50 mg/ml)

Compuesto X

5,0% p/v

Disoluci6n de hidr6xido s6dico 1 M

15,0% v/v

Acido clorhidrico 0,1 M

(para ajustar el pH a 7,6)

Polietilenglicol 400

4,5% p/v

Agua para inyecci6n hasta 100%.

Inyecci6n II

10 mg/ml)

Compuesto X

1,0% p/v

Fosfato s6dico BP

3,6% p/v

Disoluci6n de hidr6xido s6dico 0,1 M

15,0% v/v

Agua para inyecci6n hasta 100%.

Inyecci6n III

(1 mg/mL, tamponado hasta pH 6)

Compuesto X

0,1% p/v

Fosfato s6dico BP

2,26% p/v

Inyecci6n III

(1 mg/mL, tamponado hasta pH 6)

Acido citrico

0,38% p/v

Polietilenglicol 400

3,5% p/v

Agua para inyecci6n hasta 100%.

Nota

Las formulaciones anteriores se pueden obtener mediante procedimientos convencionales bien conocidos en la tecnica farmaceutica. Los comprimidos (a)-(c) pueden ser entericos recubiertos por medios convencionales, por ejemplo, que proporcione un recubrimiento de ftalato acetato de celulosa.

Claims (7)

1. REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto 7-(3-(4-acetilpiperazin-1-il)propoxi)-4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6-metoxiquinazolina y una de sus sales.
2. 2. Un compuesto de 7-[2-(4-acetilpiperazin-1-il)etoxi]-4-[(4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi]-6-metoxiquinazolina y una 5 de sus sales.

3. 3.

   Un compuesto segun la reivindicaci6n1 o 2, en forma de una sal farmaceuticamente aceptable.

4. 4.

   Un procedimiento para la preparaci6n de un compuesto segun la reivindicaci6n 1 o la reivindicaci6n 2 o una de sus sales que comprende:

   (a) la reacci6n de un compuesto de la f6rmula III:

   (en la que R2 es 6-metoxi, 7-(3-(4-acetilpiperazin-1-il)propoxi) o 6-metoxi, 7-[2-(4-acetilpiperazin-1-il)etoxi, m es 2 y L1 es un resto desplazable), con un compuesto de f6rmula IV:

   (en la que el anillo C es indol-5-il, R1 es 4-fluoro, 2-metilo, Z es -O-y n es 2);

   15 (b) un compuesto segun la reivindicaci6n 1 o la reivindicaci6n 2 y una de sus sales pueden prepararse por reacci6n de un compuesto de f6rmula V:

   (en la que el anillo C es indol-5-il, Z es -O-, R1 es 4-fluoro, 2-metil, R2 es 6-metoxi, n es 2 y X1 es -O-y s es 1) con un compuesto de f6rmula VIb:

   Q1-L1 (VIb)

   (en la que Q1 es 3-(4-acetilpiperazin-1-il)propilo o 2-(4-acetilpiperazin-1-il)etil y L1 es como se define en la presente memoria);

   (c) un compuesto segun la reivindicaci6n 1 o la reivindicaci6n 2 y una de sus sales pueden prepararse por reacci6n de un compuesto de f6rmula VII:

   con un compuesto de f6rmula VIIIb: Q1-X1-H (VIIIb) (en la que s y L1 son como se definen en la presente memoria, el anillo C es indol-5-il, Z es -O-, R1 es 4-fluoro, 25 metilo, R2 es 6-metoxi, n es 2, y Q1 es 3-(4-acetilpiperazin-1-il)propilo o 2-(4-acetilpiperazin-1-il)etilo y X1 es -O-).

   (d) un compuesto segun la reivindicaci6n 1 o la reivindicaci6n 2 y una de sus sales pueden prepararse haciendo reaccionar un compuesto de f6rmula IX:

   (en la que L1 y s son como se definieron anteriormente en la presente memoria, X1 es -O-, el anillo C es indol-5-il, Z 10 es -O-, R1 es 4-fluoro, 2-metil, R2 es 6-metoxi y n es 2) con un compuesto de f6rmula Xb:

   Q2-H (Xb)

   (en la que Q2 es 4-acetilpiperazin-1-il); y cuando se requiere una sal de un compuesto segun la reivindicaci6n 1 o la reivindicaci6n 2, la reacci6n del compuesto obtenido con un acido o base mediante la cual se obtiene la sal deseada.
5. 5. Una composici6n farmaceutica que comprende como ingrediente activo un compuesto segun la reivindicaci6n 1 o

   15 la reivindicaci6n 2 o una de sus sales farmaceuticamente aceptable junto con un excipiente o vehiculo farmaceuticamente aceptable.
6. 6. Utilizaci6n de un compuesto segun las reivindicaciones 1 o 2 o de una de sus sales farmaceuticamente aceptables en la preparaci6n de un medicamento para su utilizaci6n en la producci6n de un efecto antiangi6geno y/o reductor de la permeabilidad vascular en un animal de sangre caliente.

   20 7. El compuesto 7-benciloxi-4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-6-metoxiquinazolina o una de sus sales.
7. 8. El compuesto 4-(4-fluoro-2-metilindol-5-iloxi)-7-hidroxi-6-metoxiquinazolina o una de sus sales.