PT100472B

PT100472B - Sequencias genomicas do virus da hepatite c e composicoes farmaceuticas que as contem, para diagnostico e terapeutica da hepatite c

Info

Publication number: PT100472B
Application number: PT100472A
Authority: PT
Inventors: Tai-An Cha; Michael S Urdea; Eilene Beall; Bruce Irvine; Janice Kolberg
Original assignee: Chiron Corp
Priority date: 1991-05-08
Filing date: 1992-05-08
Publication date: 1999-08-31
Also published as: KR100193801B1; JP2004290204A; PT100472A; CZ288722B6; EP1394256A2; BG62142B1; JP2003009893A; DE69233234T2; RU2155228C2; FI115725B; BG64627B1; FI934937A0; HUT69609A; BG101876A; SK284205B6; CZ288720B6; JP2003024090A; FI934937A; EP1394256A3; BG98200A

Description

SEQUÊNCIAS GENOMICAS DO VÍRUS DA HEPATITE C E

COMPOSIÇOES FARMACÊUTICAS QUE AS CONTEM, PARA DIAGNÓSTICO E

TERAPÊUTICA DA HEPATITE C

O presente pedido de patente de invenção constitui uma continuação em parte da patente de invenção norte-americana Série n^e 07/697 326 intitulada Sondas Polinucleotídicas Uteis para a Sondagem de Vírus da Hepatite C, requerida a 8 de Maio de 1991.

ÂMBITO TÉCNICO

A presente invenção refere-se a composições e métodos para a detecção e tratamento de vírus de hepatite C, infecção HCV, normalmente designada como infecção por vírus de hepatite 'do sangue não A e não B (NANBV). Mais especificamente, os aspectos da presente invenção proporcionam composições e métodos para a detecção de HCV e para o desenvolvimento de vacinas para tratamento profiláctico de infecções de HCV e desenvolvimento de produtos de anticorpos para conferir imunidade passiva a HCV.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO protótipo isolado de vírus de hepatite C foi caracterizado no pedido de patente de invenção norte-americano Série N^s 122 714 (ver ainda a Publicação EPO n⁹ 318 216). Como aqui se refere, o termo HCV inclui isolados novos das mesmas espécies

2virais. 0 termo HCV-1 é referido no pedido de patente de invenção norte-americana Série n^e 122 714.

A doença transmissível provocada por vírus de hepatite C distingue-se de outras formas de doenças hepáticas associadas a vírus, incluindo as provocadas por vírus de hepatite conhecidos, isto é, vírus de hepatite A (HAV), vírus de hepatite B(HBV) e vírus de hepatite delta (HDV), assim como a hepatite induzida por citomegalovírus (CMV) ou por vírus de Epstein-Barr (HBV). 0 vírus de hepatite C foi primeiramente identificado nos indivíduos que tinham recebido transfusões de sangue.

A busca de métodos sensíveis e específicos para a sondagem e identificação de veículos de HCV e de sangue ou produtos sanguíneos contaminados por HCV é significativa. A hepatite post-transfusão (PTH) ocorre em aproximadamente 10% dos doentes que receberam transfusões e o vírus de hepatite C contribui para cerca de 90% destes casos. A doença frequentemente progride para um dano hepático crónico (25% a 55%).

cuidado com o doente assim como a prevenção da transmissão de HCV pelo sangue ou por produtos derivados do sangue ou pelo contacto íntimo pessoal requer instrumentos de rastreio, diagnóstico e de prognóstico seguros para detectar ácidos nucleicos, antigénios e anticorpos relacionados com HCV.

A informação neste tipo de patente de invenção sugere que o vírus da hepatite C apresenta diversos genótipos. Isto é, a informação genética sobre o vírus da hepatite C pode não ser totalmente idêntica para todos os vírus de hepatite C mas abrange grupos com informação genética diversa.

A informação genética está armazenada em moléculas de ADN e ARN semelhantes a filamentos. 0 ADN consiste em cadeias desoxirribonucleótidos ligadas por covalência e o ARN consiste em cadeias de ribonucleótidos ligadas por covalência. Cada nucleótido é caracterizado por uma de quatro bases: adenina (A), guanina (G), timina (T) e citosina (C). As bases são complementares no sentido de que devido à orientação dos grupos funcionais, certos pares de bases atraem-se e ligam-se entre si através de ligações de hidrogénio e de interacções de empi lhamento-Tf.

A adenina é uma cadeia de ADN que emparelha com timina em uma cadeia de oposição complementar. A guanina é uma cadeia de ADN que emparelha com citosina em uma cadeia de oposição complementar. No ARN, a base timina está substituída por uracilo (U) que emparelha com adenina em uma cadeia de oposição complementar. 0 código genético de organismos vivos é transportado na sequência de pares de bases. As células vivas interpretam, transcrevem e traduzem a informação do ácido nucleico para formarem proteínas e péptidos.

genoma do vírus de hepatite C é constituído por uma única cadeia positiva de ARN. 0 genoma de HCV possui um quadro (frame) de leitura aberto de tradução contínua (ORF) que codifica uma poliproteína com cerca de 3 000 aminoácidos. No quadro de leitura aberto, as proteínas estruturais parecem ser codificadas em aproximadamente a primeira quarta parte da região N-terminal, com a maioria da poliproteína responsável por proteínas não estruturais.

A poliproteína de HCV contém desde o terminal amino até ao terminal carboxi, a proteína da cápside do núcleo (C), a proteí na do invólucro (E) e as proteínas não estruturais (NS) 1, 2, (b), 3, 4, (b), e 5.

Vírus de hepatite C de genótipos diferentes podem codificar para proteínas que apresentam uma resposta alterada dos sistemas imunológicos do hospedeiro. 0 vírus da hepatite C de genótipos diferentes podem ser de difícil detecção por técnicas de imunodiagnóstico e técnicas de soáidagem de ácido nucleico que nao são especificamente dirigidas para esse genótipo.

Definições para termos escolhidos utilizados no pedido de patente de invenção são indicadas em seguida para facilitar a compreensão da presente invenção.

termo correspondente refere-se a uma sequência particular de ácido nucleico homóloga ou complementar. Como entre ácidos nucleicos e péptidos, correspondente refere-se a aminoácidos de um péptido em uma ordem derivada da sequência de um ácido nucleico ou de um seu complemento.

termo ácido nucleico de ocorrência não natural refere-se a uma porção de ácido nucleico genómico, ADNc, ácido nucleico semi-sintético ou ácido nucleico de origem sintética que, devido à sua origem ou manipulação: (1) não é associado com o todo de um ácido nucleico com que se associa naturalmente; (2) está ligada a um ácido nucleico ou outro agente quimico diferente daquele a que se liga na natureza; ou (3) não ocorre naturalmente.

Identicamente a designação de péptido de ocorrência não

-5natural refere-se a uma porção de uma proteína ou um péptido de ocorrência natural frequente ou a um péptido semi-sintético ou sintético que, em virtude da sua origem ou manipulação: (1) não está associado ao total de um péptido ao qual se associa na natureza; (2) está ligado a péptidos, grupos funcionais ou outros agentes químicos diferentes daqueles a que se liga naturalmente; ou (3) não ocorre naturalmente.

A designação iniciador (primer) refere-se a um ácido nucleico que é capaz de iniciar a síntese de um ácido nucleico maior quando colocado sob condições apropriadas. 0 iniciador deverá ser completa ou substancialmente complementar de uma região de ácido nucleico a ser copiada. Deste modo, sob condições que conduzem a hidridação, o iniciador efectuará a renaturação (annealing) de uma região complementar de um ácido nucleico maior. Após a adição de reagentes apropriados, o iniciador é ampliado pelo agente de polimerização para formar uma cópia desse ácido nucleico maior.

A designação par de ligação (binding pair) refere-se a qualquer par de moléculas que exibam afinidade mútua ou capacidade de ligação. Para fins do presente pedido de patente de invenção, a designação ligando refere-se a uma molécula do par de ligação e o termo anti 1 igando ou receptor ou alvo referir-se-à à molécula oposta do par de ligação. Por exemplo, no que se refere a ácidos nucleicos, um par de ligação pode conter dois ácidos nucleicos complementares. Um dos ácidos nucleicos pode ser designado por ligando, sendo a outra cadeia designada por receptor antiligando ou alvo. A designação de ligando ou de permite a detecção de um produto de hibridação.

19. - Composições farmacêuticas de acordo com a reivindicação 1, caracterizadas pelo facto de o ácido nucleico de ocorrência não natural citado antes conter um suporte para a se paração de um produto de hibridação de uma solução.

20. - Composições farmacêuticas de acordo com a reivindicação 1, caracterizadas pelo facto de o ácido nucleico de ocorrência não natural citado antes impedir a transcrição ou a translação de ácido nucleico virai.

21. - Método para a formação de um produto de hibridação contendo um ácido nucleico do vírus da hepatite C, caracterizado pelo facto de consistir nas fases seguintes:

a) colocação de um ácido nucleico de ocorrência não natural contendo uma sequência nucleotídica com oito ou mais nucleótidos correspondendo a uma sequência não-HCV-1 do genoma virai da hepatite C, sob condições em que as condições de hibridação podem impor que o ácido nucleico de ocorrência não natural citado antes seja capaz de formar um produto de hibridação com o ácido nucleico do vírus da hepatite C citado antes sob condições de hibridação; e

b) estabelecimento de condições de hibridação para se formar um produto de hibridação na presença de ácido nucleico do vírus da hepatite C.

22. - Método de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo facto de a sequência nucleotídica citada antes, que cor responde a uma sequência não-HCV-1 do genoma do vírus da hepatite C corresponder a uma sequência em pelo menos uma das regiões que consistem essencialmente na região NS5, região 1 do invólucro, região 5' UT.e região do núcleo.

23. - Método de acordo com a reivindicação 21, carac-

terizado pelo facto de a sequência nucleotídica citada antes, que corresponde a uma sequência não-HCV-1, corresponder a uma sequência na região NS5.

24. - Método de acordo com a reivindicação 23, cara£ terizado pelo facto de a sequência nucleotídica citada antes, que corresponde a uma sequência não-HCV-1, corresponder a uma sequência compreendida nas sequências números 2 a 22.

25. - Método de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo facto de a sequência nucleotídica citada antes, que corresponde a uma sequência não-HCV-1, corresponder a uma sequência na região 1 do invólucro.

26. - Método de acordo com a reivindicação 25, carac terizado pelo facto de se escolher a sequência nucleotídica citada antes, que corresponde a uma sequência não-HCV-1, de uma sequência entre as sequências números 24 a 32.

27. - Método de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo facto de a sequência nucleotídica citada antes, que corresponde a uma sequência não-HCV-1, corresponder a uma sequência na região 5'UT.

28.- Método de acordo com a reivindicação 27, carac8

terizado pelo facto de se escolher a sequência nucleotídica ci tada antes, que corresponde a uma sequência não-HCV-1, entre as sequências números 34 a 51.

29. - Método de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo facto de a sequência nucleotídica citada antes, que corresponde a uma sequência não-HCV-1, corresponder a uma sequência na região do núcleo.

30. - Método de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo facto de se escolher a sequência nucleotídica ci tada antes, que corresponde a uma sequência não-HCV-1, entre as sequências números 53 a 66.

31. - Método de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo facto de a sequência nucleotídica citada antes, que corresponde a uma sequência não-HCV-1, corresponder a um ou mais genotipos do vírus da hepatite C.

32. - Método de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo facto de o ácido nucleico de ocorrência não natu ral citado antes, conter uma sequência que corresponde a uma sequência de um primeiro genotipo substancialmente definido pe las sequências números 1 a 6 na região NS5, 23 a 25 na região 1 do invólucro, 33 a 38 na região 5’UT e 52 a 57 na região do ¢- núcleo.

33. - Método de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo facto de o ácido nucleico de ocorrência não natu ral citado antes, conter uma sequência que corresponde a uma sequência de um segundo genotipo substancialmente definido pelas sequências números 7 a 12 na região NS5, 26 a 28 na região 1 do invólucro, 39 a 45 na região 5’UT e 58 a 64 na região do núcleo.

34. - Método de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo facto de o ácido nucleico de ocorrência não natural citado antes, conter uma sequência que corresponde a uma sequência de um terceiro genotipo substancialmente definida pe las sequências números 13 a 17 na região NS5, 32 na região 1 do invólucro, 46 a 47 na região 5’UT e 65 e 66 na região do núcleo.

35. - Método de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo facto de o ácido nucleico de ocorrência não natural citado antes, conter uma sequência que corresponde a uma sequência de um quarto genotipo substancialmente definido pelas sequências números 20 a 22 na região NS5, 29 a 31 na região 1 do invólucro e 48 a 49 na região 5’UT.

c

Μ

36. - Método de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo facto de o ácido nucleico de ocorrência não natu ral citado antes, conter uma sequência que corresponde a uma sequência de um quinto genotipo substancialmente definido pelas sequências números 18 e 19 da região NS5 e 50 e 51 da região 5'UT.

37. - Método de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo facto de o produto de hibridação ser capaz de iniciar uma reacçao para a síntese do ácido nucleico.

38. - Método de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo facto de o ácido nucleico de ocorrência não natural citado antes, conter um meio marcador para a detecção de um produto de hibridação.

39. - Método de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo facto de o ácido nucleico de ocorrência não natural citado antes, conter um meio de suporte para a separação do produto de hibridação da solução.

40. - Método de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo facto de o ácido nucleico de ocorrência não natural citado antes impedir a transcrição ou a tradução do ácido nucleico virai.

¢-

41. - Composições farmacêuticas, caracterizadas pelo facto de conterem um polipeptido de ocorrência não natural que corresponde a uma sequência nucleotídica não-HCV-1 com nove ou mais nucleótidos correspondente a uma sequência das sequências genómicas do vírus da hepatite C.

42. - Composições de acordo com a reivindicação 41, caracterizadas pelo facto de se escolher a sequência não-HCV-1 citada antes entre uma das regiões constituídas pela região NS5, a região 1 do invólucro e a região do núcleo.

43. - Composições de acordo com a reivindicação 41, caracterizadas pelo facto de a sequência nucleotídica não-HCV-1 citada antes corresponder a uma sequência na região NS5.

44. - Composições de acordo com a reivindicação 43, caracterizadas pelo facto de se escolher a sequência não-HCV-1 citada antes entre as sequências números 2 a 22.

45. - Composições de acordo com a reivindicação 41, caracterizadas pelo facto de a sequência não-HCV-1 citada antes corresponder a uma sequência na região 1 do invólucro.

46.- Composições de acordo com a reivindicação 45, ς

* caracterizadas pelo facto de se escolher a sequência não-HCV-1 citada antes entre as sequências números 24 a 32.

47. - Composições de acordo com a reivindicação 41, caracterizadas pelo facto de a sequência não-HCV-1 citada antes corresponder a uma sequência na região 1 do núcleo.

48. - Composições de acordo com a reivindicação 47, caracterizadas pelo facto de se escolher a sequência não-HCV-1 citada antes entre as sequências números 52 a 56.

49. - Composições de acordo com a reivindicação 41, caracterizadas pelo facto de a sequência nucleotídica não-HCV-1 citada antes conter uma sequência nucleotídica que corresponde a um ou mais genotipos do vírus da hepatite C.

50. - Composições de acordo com a reivindicação 41, caracterizadas pelo facto de a sequência nucleotídica não-HCV-1 citada antes conter uma sequência que corresponde a uma sequência de um primeiro genotipo substancialmente definido pelas sequências números 1 a 6 na região NS5, 23 a 25 na região 1 do invólucro e 52 a 57 na região do núcleo.

51. - Composições de acordo com a reivindicação 41, caracterizadas pelo facto de a sequência nucleotídica não-HCV-1 citada antes conter uma sequência que corresponde a uma sequência de um segundo genotipo substancialmente definido pelas sequências números 7 a 12 na região NS5, 26 a 28 na região 1 do invólucro e 58 a 64 na região do núcleo.

52. - Composições de acordo com a reivindicação 41, caracterizadas pelo facto de a sequência nucleotídica não-HCV-1 citada antes conter uma sequência que corresponde a uma sequência de um terceiro genotipo substancialmente definido pelas sequências números 13 a 17 na região NS5, 32 na região 1 do invólucro e 65 a 66 na região do núcleo.

53. - Composições de acordo com a reivindicação 41, caracterizadas pelo facto de a sequência nucleotídica não-HCV-1 citada antes conter uma sequência que corresponde a uma sequência de um quarto genotipo substancialmente definido pelas sequências números 20 a 22 na região NS5, 29 a 31 na região 1 do invólucro e 48 a 49 na região 5’UT.

54. - Composições de acordo com a reivindicação 41, caracterizadas pelo facto de a sequência nucleotídica não-HCV-1 citada antes conter uma sequência que corresponde a uma sequência de um quinto genotipo substancialmente definido pelas sequências números 18 a 19 na região NS5 e 50 a 51 na região 5’UT.

·%

55. - Composições de acordo com a reivindicação 41, caracterizadas pelo facto de o polipéptido citado antes ser capaz de provocar uma reacção imunológica em um hospedeiro.

56. - Anticorpos, caracterizados pelo facto de se li garem selectivamente a uma composição como definida na reivin dicação 41.

57. - Método para detectar um ou mais genotipos do vírus da hepatite C, caracterizado pelo facto de consistir nas fases seguintes:

a) colocação de um ácido nucleico de ocorrência não natural, contendo uma sequência nucleotídica com oito ou mais nucleótidos correspondendo a um ou mais genotipos do vírus da hepatite C, sob condições em que as condições de hibridação podem ser impostas;

b) estabelecimento de condições de hibridação para se formar um produto de hibridação na presença de ãcido nucleico de vírus da hepatite C; e

c) controlo do ácido nucleico de ocorrência não natural para a formação de um produto de hibridação indicador da presença do genotipo do vírus da hepatite C.

58. - Método de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo facto de o ácido nucleico de ocorrência não natu ral citado antes conter uma sequência que corresponde a uma se quência de um primeiro genotipo substancialmente definido pelas sequências números 1 a 6 na região NS5, 23 a 25 na região 1 do invólucro, 33 a 38 na região 5'UT e 52 a 57 na região do núcleo.

59. - Método de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo facto de o ácido nucleico de ocorrência não natural citado antes conter uma sequência que corresponde a uma sequência de um segundo genotipo.substancialmente definido pelas sequências números 7 a 12 na região NS5, 26 a 28 na região 1 do invólucro, 39 a 45 na região 5'UT e 58 a 64 na região do núcleo.

60. - Método de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo facto de o acido nucleico de ocorrência não natural citado antes conter uma sequência que corresponde a uma sequência de um terceiro genotipo substancialmente definido pelas sequências números 13 a 17 na região NS5, 32 na região do invólucro, 46 a 47 na região 5'UT e 65 a 66 na região do núcleo.

61.- Método de acordo com a reivindicação 57, carac-

terizado pelo facto de o acido nucleico de ocorrência não natural citado antes conter uma sequência que corresponde a uma sequência de um quarto genotipo substancialmente definido pelas sequências números 20 a 22 na região NS5, 29 a 31 na região 1 do invólucro e 48 a 49 na região 5’UT.

62. - Método de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo facto de o ácido nucleico de ocorrência não natural citado antes conter uma sequência que corresponde a uma sequência de um quinto genotipo substancialmente definido pelas sequências números 18 e 19 na região NS5.

63. - Método de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo facto de o ácido nucleico de ocorrência não natural citado antes conter uma sequência que corresponde a uma sequência números 67 a 145.

64. - Método de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo facto de o ácido nucleico de ocorrência não natural conter uma sequência que corresponde a uma sequência números 69, 71, 73 e 81 a 99 para identificar genotipos de Grupo I no núcleo e região do genoma de HCV.

65. - Método de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo facto de o ácido nucleico de ocorrência não na-

tural conter uma sequência que corresponde a uma sequência números 70, 72, 70 e 100 a 118 para identificar genotipos de Gru po II nas regiões do núcleo e do invólucro do genoma de HCV.

V

66. - Método de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo facto de o ácido nucleico de ocorrência não natural conter uma sequência que corresponde a uma sequência número 77 para identificar genotipos de Grupo III na região

5'UT do genoma de HCV.

67. - Método de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo facto de o ácido nucleico de ocorrência não natural conter uma sequência que corresponde a uma sequência número 79 para identificar genotipos de Grupo IV na região 5’UT do genoma DE HCV.

O Agente Oficial da Propriedade Industrial

invenção com os números 1 a 22 sugerem pelo menos cinco genótipos de uma região NS5. As sequências números 1 a 22 são apresentadas na Figura 2 assim como na lista de sequências. Cada sequência com o número de 1 a 22 é derivada de ácido nucleico contendo 340 nucleótidos da região NS5.

Os cinco genótipos são definidos por agrupamentos de sequências definidas pela sequência numerada 1-22. Por comodidade, no presente pedido de patente de invenção, os diferentes genótipos serão designados por numerações romanas e a letra G primeiro genótipo, GI, é exemplificado pelas sequências numeradas 1-6. 0 segundo genótipo, GII, é exemplificado pelas sequências numeradas de 7 a 12. 0 terceiro genótipo, GIII, é exemplificado pelas sequênias numeros 13 a 17. 0 quarto genótipo, GIV, é exemplificado pelas sequências números 20 a 22. 0 quinto genótipo, GV, é exemplificado pelas sequências numeros 18 e 19.

As sequências indicadas no presente pedido de patente de invenção como sequências números 23 a 32 sugerem pelo menos quatro genótipos da região do invólucro 1 de HCV. As sequências números 23 a 32 estão descritas na Figura 3 assim como na lista de sequências. Cada uma das sequências números 23 a 32 é derivada de ácido nucleico contendo 100 nucleótidos da região do invólucro 1.

primeiro grupo de genótipo do invólucro 1, GI, é exemplificado nas sequências 23 a 25. Uma segunda região do genótipo do invólucro 1, GII, é exemplificada pelas sequências números 26 a 28. Um terceiro genótipo do invólucro 1, GIII, é exem/

-19-ί

V;

plificado pelas sequências entre as sequências número 32. Um quarto genótipo do invólucro 1, GIV, é exemplificado pelas sequências entre as sequências 29 a 31.

As sequências indicadas no presente pedido de patente de invenção com os números 33 a 51 sugerem pelos menos 3 genótipos na região 5'UT do vírus de hepatite C. As sequências números 33 a 51 estão descritas na Figura 4 assim como na lista de sequências. Cada uma das sequências números 33 a 51 é derivada de ácido nucleico com 252 nucleótidos provenientes da região 5'UT ainda que as sequências 50 e 51 sejam um pouco mais pequenas em 180 nucleótidos aproximadamente.

O primeiro genótipo 5'UT, GI, é exemplificado pelas sequências números 33 a 38. Um segundo genótipo 5'UT, GII, ê exemplificado pelas sequências entre as sequências números 39 a 45. Um terceiro genótipo 5'UT, GIII, é exemplificado pelas sequências entre as sequências numeros 46 a 47. Um quarto genótipo 5'UT, GIV, é exemplificado pelas sequências entre as sequências números 48 e 49 . Um quinto genotipo 5'UT, GV, é exemplificado pelas sequências entre as sequências números 50 e 51.

A sequências número 48 a 62 sugerem pelo menos três genótipos na região do núcleo de HCV. As sequências números 52 a 66 são descritas na Figura 5 assim como na lista de sequências.

primeiro genótipo da região do núcleo, GI, ê exemplificado pelas sequências entre as sequências números 52 a 57. 0 segundo genótipo da região do núcleo, GII, é exemplificado pelas sequências nas sequências números 58 a 64. 0 terceiro genótipo da região do núcleo, GIII, é exemplificado pelas sequências números 65 e 66. As sequências números 52 a 65 são constituídas

por 549 nucleótidos. A sequência número 66 contém 510 nucleó tidos.

Os diversos genótipos descritos para cada região são consistentes. Isto é, vírus de hepatite C contendo aspectos do primeiro genótipo no que diz respeito à região NS5 será substancialmente conforme os aspectos do primeiro genótipo da região do invólucro 1, da região 5'UT e da região do núcleo.

ácido nucleico isolado ou sintetizado de acordo com as sequências numeradas de 1 a 66 é utilizável como sondas, iniciadores, ligandos de fixação e agentes anti-sentido. Com sondas, iniciadores, ligandos de fixação e agentes anti-sentido, o ácido nucleico conterá, normalmente, oito ou mais nucleótidos, aproximadamente, com especificidade e ainda com capacidade para formar produtos de hibridação estáveis.

SONDAS

Um ácido nucleico isolado ou sintetizado de acordo com uma sequência que define um genótipo particular de uma região do genoma de HCV pode ser utilizado como uma sonda para a detecção desse genótipo ou em associação com outras sondas de ácido nucleico para a detecção de praticamente todos os genótipos de HCV.

Com a informação de sequência indicada no presente pedido de patente de invenção, as sequências com 8 ou mais nucleótidos estão identificadas e proporcionam a inclusividade e exclusividade pretendida no que se refere aos vários genótipos de HCV. e ás sequências de ácidos nucleicos estranhos que é provável encontrar durante as condições de hibridação.

Os especialista na matéria facilmente reconhecerão que a< sequências de ácido nucleico para utilização como sondas podem ser providas de um marcador para facilitar a detecção de um produto de hibridação.

LIGANDO DE FIXAÇAO

Para utilização como ligando de fixação, o ácido nucleico escolhido da maneira descrita anteriormente no que se refere a sondas, pode ser facilmente associado a suportes. 0 modo pelo qual o ácido nucleico se associa a suportes é conhecido. 0 ácido nucleico contendo as sequências que correspondem a uma sequência entre as sequências números 1 a 66 tem utilidade para preparar ácido nucleico virai do genótipo de um ácido nucleico de HCV de um genótipo diferente. 0 ácido nucleico isolado ou sintetizado de acordo com as sequências situadas entre as sequências números 1 a 66, utilizado em associações, tem aplicação para fixar praticamente todos os ácidos nucleicos de todos os genótipos de HCV.

INICIADORES ácido nucleico isolado ou sintetizado de acordo com as sequências aqui descritas tem aplicação como iniciadores para a amplificação de sequências de HCV. No que se refere às técnicas de reacção de cadeia de polimerase (PCR), as sequências de ácido nucleico com 8 ou mais nucleótidos que correspondem a uma ou mais sequências das sequências números 1 a 66 têm aplicação na conjunção com enzimas e reagentes apropriados para a criação de cópias do ácido nucleico virai. Pode utilizar-se uma diversidade de iniς-22 ciadores contendo diferentes sequências correspondentes a um ou mais genótipos para se criarem cópias de ácido nucleico virai desses genótipos.

As cópias podem ser utilizadas em ensaios de diagnóstico para a detecção do vírus da hepatite C. As cópias podem ainda ser incorporadas em vectores de clonagem e de expressão, para gerarem polipéptidos correspondendo ao ácido nucleico sintetizado por PCR como se descreverá em pormenor posteriormente.

ANTI-SENTIDO ácido nucleico isolado ou sintetizado de acordo com as sequências aqui descritas tem aplicação como genes anti-sentido para impedir a expressão de HCV.

ácido nucleico que corresponde a um genótipo de HCV é introduzido num veículo apropriado como , por exmeplo, num lipossoma, para introdução numa célula infectada por HCV. Um ácido nucleico contendo 8 ou mais nucleótidos é capaz da ligação com o ácido nucleico virai ou com ARN mensageiro virai. De preferência, o ácido nucleico anti-sentido contém 30 ou mais nucleótidos de forma a proporcionar a estabilidade necessária de um produto de hibridação de ácido nucleico virai ou de ARN mensageiro virai. Os métodos para a introdução do ácido nucleico anti-sentido são convencionais e estão exemplificados por exemplo na patente de invenção norte-americana 4 241 046, concedida a 23 de Dezembro de 1980 a Papahadjopoulos et al.

SÍNTESE PEPTIDICA

ácido nucleico isolado ou sintetizado de acordo com as sequências escritas aqui tem aplicação como gerador de péptidos. As sequências exemplificadas pelas sequências números 1 a 32 e 52 a 66 podem ser clonadas em vectores apropriados ou utilizadas para isolamento de ácido nucleico. 0 ácido nucleico isolado é associado a adaptadores de ADN apropriados e clonado em um vector apropriado. 0 vector pode ser utilizado para transformar um organismo hospedeiro apropriado como, por exemplo, E. coli sendo o péptido codificado pelas sequências isolado.

As técnicas de clonagem molecular estão descritas em Maniatis et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual Coldspring Harbor Laboratory, 1982.

Os péptidos isoladostêm aplicação como substâncias antigénicas para o desenvolvimento de vacinas e anticorpos dirigidos para um genótipo particular de vírus de hepatite C.

VACINA E ANTICORPOS

Os materiais peptídicos da presente invenção têm aplicação para o desenvolvimento de anticorpos e vacinas.

A capacidade das sequências de ADNc ou de sequências nucleótidicas derivadas deste (incluindo segmentos e modificações da sequência) permitem a construção de vectores de expressão que codificam regiões antigenicamente activas do péptido codificado em qualquer cadeia . As regiões com actividade antigénica podem ser derivadas da região NS5, das regiões do invólucro 1 e da região do núcleo.

Os fragmentos que codificam os péptidos pretendidos são derivados de clones de ADNc utilizando-se digestão de restrição convencional ou métodos de síntese e são ligados em vectores que podem, por exemplo, conter fracçóes de sequências de fusão tais como a beta-galactosidase ou a superóxido dismutase (SOD), de preferência SOD. Os métodos e vectores que são úteis para a produção de polipéptidos contendo sequências de fusão de SOD estão descritos em European Patent Office publication número 0196056, publicada a 1 de Outubro de 1986.

Qualquer fracção pretendida de ADNc de HCV contendo um quadro de leitura aberto, em qualquer cadeia de sentido, pode obter-se sob a forma de um péptido recombinante, tal como uma proteína madura ou proteína de fusão. Alternativamente, um péptido codificado no ADNc pode ser proporcionado por síntese química.

ADN que codifica o péptido pretendido, quer na forma fundida quer na forma madura e contendo eventualmente uma sequência sinal para permitir a secreção, pode ser ligado em vectores de expressão apropriados para qualquer hospedeiro conveniente. Presentemente são utilizados sistemas de hospedeiros eucarióticos ou procarióticos na formação de péptidos recombinantes. Os péptidos são isolados em seguida a partir das células lisadas ou do meio de cultura e purificados até ao grau necessário para o uso a que se destinam. A purificação pode fazer-se por técnicas convencionais, por exemplo, extracção diferencial, fraccionamento por sais, cromatografia em resinas de permuta iónica, cromatografia de afinidade, centrifugação, etc. Consultar, por

-25exemplo, Methods in Enzymology para uma diversidade de métodos de purificação de proteínas. Estes péptidos podem ser utilizados como diagnóstico ou aqueles que dão origem a anticorpos neutralizantes, podem ser formulados em vacinas. Os anticorpos que surgem contra estes péptidos podem também ser utilizados no diagnóstico ou para imunoterapêutica passiva ou isolamento e identificação do vírus da hepatite C.

Uma região antigénica de um péptido é geralmente relativamente pequena, habitualmente 8 a 10 aminoácidos ou menos no seu comprimento. Fragmentos com apenas 5 aminoácidos podem caracterizar uma região antigénica. Estes segmentos podem corresponder à região NS5, à região do invólucro 1 e à região do núcleo do genoma de HCV. A região 5'UT não é conhecida como sendo traduzida. Deste modo, utilizando os ADNc destas regiões, os ADN que codificam segmentos pequenos de péptidos de HCV correspondendo a estas regiões podem ser expressos de forma recombinante como proteínas de fusão ou como péptidos isolados. Em adição, as sequências com poucos aminoácidos podem ser obtidas de forma conveniente, por síntese química. Nos casos em que o péptido sintetizado está correctamente configurado de forma a proporcionar o epítode correcto, mas que é demasiado pequeno para criar imunidade, pode ligar-se o péptido a um veículo apropriado.

As diferentes técnicas de obtenção desta ligação são conhecidas, incluindo a formação de ligações dissulfureto utilizando 3-(2-piridiltio)-propionato de N-succinimidi1 o (SPDP) e 4-(N-maleimido-meti1)-ciclo-hexano-1-carboxilato de succinimidilo (SMCC) obtido em Pierce Company, Rockford, Illinois ( se o pép-

tido tem a falta de um grupo sulfidrilo, este pode ser proporcionado pela adição de um resíduo de cisteína). Estes reagentes criam uma ligação dissulfureto entre si e os resíduos de cisteína peptídica em uma proteína e uma ligação através do epsilon-amin.o em uma lisina ou outro grupo amino livre na outra. E conhecida uma diversidade destes agentes que formam dissulfureto/ /amida. Ver, por exemplo, Immun Rev., 62 (1982) 185. Outros agentes de acoplamento bifuncionais formam um tioéter preferencialmente a uma ligação dissulfureto. Muitos destes agentes formadores de ligação tioéter estão comercializados e incluem ésteres reactivos de ácido 6-maleimidocapróico, ácido 2-bromoacético, ácido 2-iodoacético, ácido 4-N-maleimido-meti1)-ciclo-hexano-1-carboxí1ico, etc. Os grupos carboxílicos podem ser activados por assoei ação com succinimida ou com ácido 1-hidroxi-2-nitro-4-sulfónico, sob a forma de sal de sódio.

Outros métodos de acoplamento de antigénios utilizam os sistemas retrovírus/péptido descritos na patente de invenção publicada EPO N^Q 259 149, que aqui se cita como referência. A lista que se segue não pretende ser exaustiva podendo evidentemente utilizar-se modificações dos compostos nomeados.

Qualquer veículo pode ser utilizado desde que não induza ele próprio a produção de anticorpos prejudiciais para o hospedeiro. Os veículos apropriados são habitualmente grandes macromoléculas lentamente metabolizadas, tais como as proteínas; polissacáridos, como o látex funcionalizado, sefarose, agarose, celulose, contas de celulose, etc; aminoácidos poliméricos, tais como, por exemplo, ácido poliglutâmico, polilisina, etc; copolímeros de aminoácidos; e partículas de vírus inactivos. São subs tratos proteínicos especialmente úteis as sero-albuminas, a hemocianina de lapa, moléculas de imunogobulina, tiroglobulina, ovalbumina, toxóide tetânico e outras proteínas convencionais conhecidas. Os péptidos contendo sequências de aminoácidos de HCV que codificam pelo menos um epítope virai derivado da região NS5, região do invólucro 1 ou da região do núcleo são úteis como reagentes imunológicos. A região 5’UT não é conhecida como sendo traduzida. Por exemplo, péptidos contendo estas sequências truncadas podem ser utilizados como reagentes em ensaios de imunidade. Estes péptidos sao também antigénios de subunidades candidatas para composições na produção de anti-soros ou vacinas. Embora as sequências truncadas possam ser produzidas mediante diversos tratamentos conhecidos de proteína virai natural, prefere-se, de um modo geral, preparar péptidos de síntese ou recombinantes contendo a sequência de HCV. Os péptidos contendo estas sequências de HCV truncadas podem preparar-se totalmente de sequências de HCV ( um ou mais epítopes contíguos ou não) ou de sequências de HCV e sequências heterólogas numa proteína de fusão. As sequências heterólogas utilizáveis incluem as sequências que proporcionam a secreção de um hospedeiro recombinante, aumentam a reactividade imunológica do(s) etítope(s) de HCV ou facilitam o acoplamento dos polipéptidos a um suporte de ensaios de imunidade ou a um veículo de vacina. Ver, por exemplo, a patente de invenção publicada EPO N² 116 201, patente de invenção norte-americana N² 4 722 840, patente de invenção publicada EPO N²259 149, patente de invenção norte-americana N² 4 629 783.

A dimensão dos péptidos contendo sequência de HCV truncadas

-28pode ser muito variável, sendo a dimensão mínima uma sequên- * cia de dimensão suficiente para proporcionar um epítope de HCV, não sendo crítica a dimensão máxima. Por comodidade, usualmente o tamanho máximo não é substancialmente superior ao necessário para proporcionar os epitopes de HCV pretendidos e a função ou funções da sequência heteróloga, caso exista. Habitualmente, a sequência de aminoácidos de HCV truncada variará entre cerca de 5 e 100 aminoácidos no seu comprimento. Mais correntemente, contudo, a sequência de HCV apresentará um comprimento máximo de cerca de 50 aminoácidos, de preferência um comprimento máximo de 30 aminoácidos, aproximadamente. Ê habitualmente conveniente escolher as sequências de HCV com pelo menos cerca de 10, 12 ou 15 aminoácidos até um comprimento máximo de 20 ou 25 aminoácidos, aproximadamente.

As sequências de aminoácidos de HCV contêm epitopes que podem ser identificados por numerosas vias. Por exemplo, a sequência proteínica completa que corresponde a cada uma das regiões NS5, do invólucro 1 e do núcleo pode ser sondada pela preparação de uma série de pequenos péptidos que no conjunto abrangem a sequência proteínica completa dessas regiões. A partir de, por exemplo, péptidos com aproximadamente 100 aminoâcidos, será rotineiro testar cada péptido relativamente à presença de epitope ou epitopes que exibem uma reactividade pretendida e em seguida testar fragmentos progressivamente menores de sobreposição de um péptido identificado com 100 aminoácidos para mapear o epítope com interesse. A sondagem destes péptidos no ensaio de imunidade é um atributo dos técnicos nesta matéria.

”C ζ Também é conhecido realizar-se uma análise computorizada de uma sequência proteínica para a identificação de epitopes potenciais e em seguida prepararem-se péptidos contendo as regiões identificadas para sondagem.

A imunogenicidade dos epitopes de HCV pode ainda ser reforçada preparando-os em sistemas de mamíferos ou de leveduras fundidos ou reunidos com proteínas que formam partículas, tais como, por exemplo, as que se associam com o antigénio de superfície da hepatite B. Consultar, por exemplo, a patente de invenção norte-americana N⁹ 4 722 840. As construções em que o epitope de HCV está ligado directamente a uma proteína formadora de partículas que codifica sequências, produzem híbridos que são imungénicos relativamente ao epitope de HCV. Além disso, todos os vectores preparados incluem epitopes específicos para HBV exibindo vários graus de imunogenicidade, tais como, por exemplo, o péptido pré-S. Assim, as partículas construídas a partir de proteínas formadoras de partículas que incluem sequências de HCV são imunogénicas relativamente a HCV e HBV.

Verificou-se que o antigénio de superfície da hepatite (HBSAg) é formado e reunido em partículas em S. cerevisiae (P. Valenzuela et al. (1982), assim como, por exemplo, em células de mamífero (P. Valenzuela et al. (1984). Provou-se que a formação dessas partículas reforça a imunogenicidade da sub-unidade monomérica. As construções podem ainda incluir um epitope imunodominante de HBSAg, contendo 55 aminoácidos da região de pré-superfície (pré-S) (Neurath et al. (1984) ). As construções da partícula de pre-S-HBSAg exprimivel em leveduras estão descritas τ na patente de invenção EPO 174 444, publicada a 19 de Março de 1986; os hibridos que incluem sequências virais heterólogas para expressão de leveduras estão descritos na patente de invenção EPO 175 261, publicada a 26 de Março de 1966. Estas construções podem também ser expressas em células de mamíferos, tais como as células do ovário do hamster chinês (CHO) que utilizam no vector SV40-di-hidrofolato redutase (michelle et al. (1984)).

Além disso, porções das proteínas formadoras de partículas que codificam sequências podem ser substituídas com codões codificadores de um epitope HCV. Nesta substituição, as regiões que não são necessárias para mediarem a agregação das unidades para a formação de partículas imunogénicas na levedura de mamíferos, podem ser suprimidas, eliminando-se, deste modo, sítios antigénicos de HBV adicionais de competição com o epitope de HCV.

VACINAS

Podem preparar-se vacinas com um ou mais péptidos imunogénicos derivados de HCV. A homologia observada entre HCV e Flavivírus proporciona informação respeitante a péptidos que são provavelmente os mais eficazes como vacinas, assim como as regiões do genoma em que estes são codificados.

As vacinas multivalentes contra HCV podem conter um ou mais epitopes de uma ou mais proteínas derivadas das regiões NS5, do invólucro 1 e do núcleo. Em particular, consideram-se vacinas contendo uma ou mais proteínas de HCV ou antigénios de sub-unidades derivados da região NS5, da região do invólucro 1

e da região do núcleo. Desconhece-se se a região 5'UT é traduzida.

A preparação de vacinas que contêm um péptido imunogénico como componente activo é conhecida. Habitualmente, estas vacinas são preparadas sob formas injectáveis, quer sob a forma de soluções líquidas quer de suspensões; podem também preparar-se formas sólidas apropriadas para solução ou suspensão em líquido antes da injecção. A preparação pode também ser emulsionada ou a proteína encapsulada em lipossomas. Os componentes imunogénicos activos são frequentemente misturados com excipientes que são aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico e compatíveis com o componente activo. Excipientes apropriados são, por exemplo, água, solução de cloreto de sódio, dextrose, glicerol, etanol e outros e suas associações. Além disso, se apropriado, a vacina pode conter quantidades menores de substâncias auxiliares tais como agentes humectantes ou ernulsionantes, agentes tampão de pH e/ou agentes adjuvantes, os quais reforçam a eficácia da vacina. Os exemplos de agentes adjuvantes que podem ser eficazes incluem mas não se limitam a: hidróxido de alumínio, N-acetil-muramil-L-teronil-D-isoglutamina (thr-MDP), N-acetil-nor-muramil-L-alanil-D-isoglutamina (CGP 11637, referido como nor-MDP), N-acetilmuramil-L-alanil-D-isoglutaminil-L-alanina-2-(1-2-dipalmitoil-sn-glicero-3-hidroxifosfori 1ox i)-etilamina (CGP 19835A, referido como MTP-PE) e RIBI, que contém 3 componentes extraídos de bactérias, monofosfori1-1ípido A, dimicolato de tre-halose e esqueleto da parede de células (MPL+TDM+CWS) em uma emulsão de esqualeno a 2%/Tween 80. A eficácia de um agente adjuvante pode determinar-se avaliando-se a quantidade de anticorpos dirigidos contra um péptido imunogénico que contém uma sequência antigénica de HCV resultando da administração deste péptido em vacinas que também contém os diversos adjuvantes.

As vacinas são convenientemente administradas por via parentérica, por injecção por exemplo, por via subcutânea ou intramuscular. Outras composições que são apropriadas para outras formas de administração incluem os supositórios e, em alguns casos, composições orais. Para supositórios, podem incluir-se agentes de ligação tradicionais, por exemplo, polialquilenoglicóis ou triglicéridos. estes supositórios podem ser formados por misturas que contêm o componente activo numa quantidade compreendida entre 0% e 5% até 10%, de preferência entre 1% e 2%. As composições orais incluem este tipo de excipientes normalmente utilizados como, por exemplo, manitol lactose, amido, estearato de magnésio, sacarina sódica, celulose, carbonato de magnésio, etc. de grau farmacêutico.

Os exemplos que se seguem são apresentados com fins ilustrativos e não se consideram como limitativos no âmbito da presente invenção.

I. DETECÇÃO DE ARN DE HCV NO SORO

Extraiu-se ARN do soro utilizando um sal de guanidínio, fenol e clorofórmio de acordo com as instruções do fabricante do conjunto (RNAzol B kit, Cinna/Biotecx). Precipitou-se o ARN extraído com isopropanol e lavou-se com etanol. Processaram-se um total de 25 ^il de soro para isolamento do ARN e purificou-se o ARN por re-suspensão em 5 ul de âgua tratada com pi

-33“ rocarbonato de dietilo para síntese subsequente de ADNc.

II. SÍNTESE DE ADNc E AMPLIFICAÇÃO DE REACÇÃO DE CADEIA DE

POLIMERASE (PCR) quadro 1 apresenta uma lista da sequência e posição (referencialmente a HCV1) de todos os iniciadores de PCR e sondas utilizados nestes exemplos. As designações por letras para os nucleótidos são consistentes com 37 C.F.R. §§1 821-1 825. Portanto, as letras A, C, G, T e U são utilizadas no sentido comum de designação da adenina, eitosina, guanina, timina e uracilo. A letra M significa A ou C; R representa A ou G; W representa A ou T/U; S representa C ou G; Y representa C ou T/U; K representa G ou T/U; V representa A ou C ou G e não T/U; H representa A ou C ou T/U mas não G; D representa A ou G ou T/U mas não C; B representa C ou G ou T/U, não A; N representa A ou C ou G ou T/U ou outro desconhecido. 0 quadro 1 estã representado em seguida:

QUADRO 1

.No.	Sequência (5'-3')	Posição do nucleotido
67	CAAACGTAACACCAACCGRCGCCCACAGG	374-402
68	ACAGAYCCGCAKAGRTCCCCCACG	1192-1169
69	GCAACCTCGAGGTAGACGTCAGCCTATCCC	509-538
70	GCAACCTCGTGGAAGGCGACAACCTATCCC	509-538
71	GTCACCAATGATTGCCCTAACTCGAGTATT	948-977
72	GTCACGAACGACTGCTCCAACTCAAG	948-973
73	TGGACATGATCGCTGGWGCYCACTGGGG	1375-1402
74	TGGAYATGGTGGYGGGGGCYCACTGGGG	1375-1402
75	ATGATGAACTGGTCVCCYAC	1308-1327
76	ACCTTVGCCCAGTTSCCCRCCATGGA	1453-1428
77	AACCCACTCTATGYCCGGYCAT	205-226
78	GAATCGCTGGGGTGACCG	171-188
79	CCATGAATCACTCCCCTGTGAGGAACTA	30-57
80	TTGCGGGGGCACGCCCAA	244-227

Para a síntese de ADNc e amplificação PCR foi utilizado um protocolo desenvolvido por Perkin-Elmer/Cetus (GeneAmp^ RNA PCR kit). Os hexómeros e os iniciadores escolhidos ao acaso com sequências complementares específicas para HCV foram utilizados para iniciarem a reacção de transcrição inversa (RT). Todos os processos excepto na adição e mistura dos componentes reaccionais foram realizados num ciclador térmico (MJ Research, Inc.) 0 meio reaccionai de síntese da primeira cadeia de ADNc foi inactivado a temperatura de 90°C durante 5 minutos e em seguida arrefecido a 50°C durante 5 minutos antes da adição dos componentes da reacção para subsequente amplificação. Após 5 ciclos iniciais à temperatura de 97°C durante 1 minuto, 50°C durante 2 minutos e 72°C durante 3 minutos, seguiram-se 30 ciclos à temperatura de 94°C durante 1 minuto, a 55°C durante 2 minutos e a 72°C durante 3 minutos e finalmente 7 minutos para enlongação à temperatura de 72°C.

Para a análise do genotipo, utilizaram-se as sequências 67 e 68 como iniciadores numa reacção PCR. Estes iniciadores amplificaram um segmento correspondendo às regiões do núcleo e do invólucro. Após cada amplificação, separaram-se os produtos da reacção em gel de agarose e em seguida transferiram-se para uma membrana de nylon. Deixaram-se os produtos da reacção imobili0 0 zados a hibridar com um ácido nucleico marcado com P correspondendo ao Genótipo I (núcleo ou invólucro 1) ou ao Genotipo II (núcleo ou invólucro 1). 0 ácido nucleico correspondente ao Genótipo I continha as sequências números 69 (núcleo) 71 (invólucro) e 73 (invólucro). 0 ácido nucleico correspondente ao

Genótipo II continha as sequências números 70 (núcleo), 72 (invólucro), e 74 (invólucro).

As sondas de Genotipo I apenas hibridaram com o produto amplificado proveniente de isolados que tinham a sequência do Genótipo I.

Identicamente as sondas do Genótipo II apenas hibridaram com o produto amplificado proveniente de isolados que tinham a sequência do Genótipo II.

Numa outra experiência os produtos de reacção em cadeia de polimerase (PCR) foram gerados utilizando as sequências 79 e 80. Os produtos foram analisados do modo descrito anetriormente, excepto que se utilizou a sequência número 73 para detectar o Genótipo I, a sequência número 74 para detectar o Genótipo II, a sequência número 77 (5'UT) para detectar o Genótipo III e a sequência número 78 (5'UT) para detectar o Genótipo IV. Cada sequência hibridou com o genótipo de forma específica.

III. DETECÇAO DE GI-GIV DE VIRUS DE HEPATITE C UTILIZANDO UM

ENSAIO DE HIDRIDAÇAO SANDWICH PARA ARN DE HCV

Neste exemplo descreve-se um ensaio de hibridação em sandwich de ácido nucleico em fase de solução amplificada. 0 ensaio utiliza várias sondas de ácido nucleico para efectuar a fixação é capaz de associar uma sonda complementar ligada a um suporte sólido e o ácido nucleico de HCV para efectuar a fixação. Um áci✓ do nucleico sonda de detecção tem um primeiro segmento (A) que se liga ao ácido nucleico de HCV e um segundo segmento (B) que hibri-

da com um segundo amplificador de ácido nucleico. 0 ácido nucleico amplificador tem um primeiro segmento (B*) que hibrida com o segmento (B) do ácido nucleico sonda e também contém 15 repetições de um segmento (C). 0 segmento C do ácido nucleico amplificador é capaz de hibridar com três ácidos nucleicos marcados.

As sequências de ácido nucleico correspondem às sequências nucleotídicas do gene do invólucro 1 dos isolados de HCV do Grupo I estão indicadas como sequências números 81 a 99. No Quadro 2 indica-se a área do genoma de HCV a que correspondem as sequências de ácido nucleico e uma utilização preferida das sequências.

QUADRO 2

Tipo de sonda Sequência No. N-s dos conplemantos do nucleotido

Marcador	81	879-911
Marcador	82	912-944
Fixação	83	945-977
Marcador	84	978-1010
Marcador	85	1011-1043
Marcador	86	1044-1076
Marcador	87	1077-1109
Fixação	88	1110-1142
Marcador	89	1143-1175
Marcador	90	1176-1208
Marcador	91	1209-1241
Marcador	92	1242-1274
Fixação	93	1275-1307
Marcador	94	1308-1340
Marcador	95	1341-1373
Marcador	96	1374-1406
Marcador	97	1407-1439
Fixação	98	1440-1472
Marcador	99	1473-1505

-3'

As sequências de ácido nucleico que correspondem às sequências nucleotidicas do gene do invólucro I dos isolados de HCV do

Grupo II encontram-se nas sequências 100 118. No Quadro 3 indica-se a área do genoma de HCV a que corresponde o ácido nucleico e a utilização preferida das sequências.

QUADRO 3

Tipo de Sonda	Sequência No.	N³s dos complemntos do nucleotido
Marcador	100	879-911
Marcador	101	912-944
Fixação	102	945-977
Mare ador	103	978-1010
Marcador	104	1011-1043
Marcador	105	1044-1076
Marcador	106	1077-1109
Fixação	107	1110-1142
Marcador	108	1143-1175
Marcador	109	1176-1208
Marcador	110	1209-1241
Marcador	111	1242-1274
Fixação	112	1275-1307
Marcador	113	1308-1340
Marcador	114	1341-1373
Marcador	115	1374-1406
Marcador	116	1407-1439
Fixação	117	1440-1472
Marcador	118	1473-1505

As sequências de ácido nucleico que correspondem às sequências nucleotidicas da região do gene C e da região 5'UT estão situadas entre as sequências 119 e 145. 0 Quadro 4 identifica a sequência com uma utilizanão preferida.

//

QUADRO 4

Tipo de Sonda

Sequência No.

F i xação	119
Marcador	120
Marcador	121
Marcador	122
Fixação	123
Marcador	124
Marcador	125
Marcador	126
Fixação	127
Marcadar	128
Marcador	129
Marcador	130
F i xação	131
Marcador	132
Marcador	133
Marcador	134
Marcador	135
Fixação	136
Marcador	137
Marcador	138
Marcador	139
Fixação	140
Marcador	141
Marcador	142
Marcador	143
Fixação	144
Marcador	145

A sonda de detecção e fixação dos segmentos específicos de HCV e suas respectivas designações tais como utilizadas neste ensaio foram as seguintes: As sequências de fixação são sequências com os números 119-122 e 141-144·. As sequências de detecção são sequências com os números 119-140.

Cada sequência de detecção continha, além de sequências substancialmente complementares às sequências de HCV, uma extensão (B) da extremidade 5', sendo essa extensão (B) complementar de um segmento do segundo ácido nucleico amplificador. A sequência da extensão B está identificada na lista de sequências como sequência número 146, reproduzindo-se em seguida:

AGGCATAGGACCCGTGTCTT

Cada sequência de fixação continha, além das sequências substancialmente complementares das sequências de HCV, uma sequência complementar de ADN ligado a uma fase sólida. A sequência complementar do ADN ligado a um suporte sólido foi transportada para jusante da sequência de fixação. A sequência complementar do ADN ligado ao suporte é representada como a sequência número 147 que se reproduz em seguida:

CTTCTTTGGAGAAAGTGGTG

Prepararam-se microplacas tituladoras do seguinte modo: Adquiriram-se à Dynatech Inc. tiras brancas Microlite 1 Removawell (placas microtituladoras de poliestireno com 96 cavidades por placa) .

Cada cavidade foi preenchida com 200 yjl de ácido clorídrico 1 N e incubada à temperatura ambiente durante 15 a 20 minutos.

-40?

Em seguida, lavaram-se as placas quatro vezes com PBS 1X e aspiraram-se para retirar o líquido. As cavidades foram depois preenchidas com 200 yjl de hidróxido de sódio 1N e incubadas à temperatura ambiente durante 15 a 20 minutos. De novo se lava ram as placas quatro vezes com PBS 1X aspirando-se as cavidades para retirar o líquido.

Adquiriu-se à Sigma Chemicals Inc. poly(phe-lys). Esse polipéptido tem uma relação molar de 1:1 de phe:lys e um peso molecular médio de 47 900 g/mole. 0 seu comprimento médio é de 309 aminoácidos contendo 155 aminas por mole. Misturou-se uma solução de 1 mg/ml de polipéptido com NaCl 2M/PBS 1X até uma concentração final de 0,1 mg/ml (pH 6,0). Adicionou-se a cada cavidade 200 ^ul desta solução. A placa foi envolvida em plástico para impedir a secagem e incubou-se à temperatura de 30°C durante a noite. Em seguida, lavou-se a placa quatro vezes com PBS 1X e aspiraram-se as cavidades para retirar o líquido.

Utilizou-se o procedimento seguinte para ligar o ácido nucleico, uma sequência complementar para a sequência número 147, às placas, referido daqui em diante como ácido nucleico imobilizado. A síntese do ácido nucleico imobilizado que apresentava uma sequência complementar da sequência número 133 e está descrita na patente de invenção europeia EPA N⁵ 883096976. Dissolveram-se 20 mg de suberato de dissuccinimidilo em 300 pl de dimetilformamida. Adicionou-se uma quantidade de 26 unidades de ΟΟ₂θο de ácido nucleico imobilizado a 100 yjl de tampão de ligação (solução de fosfato de sódio 50 mM, pH 7,8).

Em seguida, adicionou-se a mistura de ligação à solução ' de suberato de dissuccinimidilo-dimetilformamida e agitou-se com um agitador magnético durante 30 minutos. Equilibrou-se uma coluna NAP-25 com solução de fosfato de sódio 10 mM, pH 6,5. A mistura de ligação, a solução de suberato de dissuccinimidilo-dimetilformamida, foi adicionada a 2 ml de solução de fosfato de sódio 10 mM, pH 6,5, à temperatura de 4°C. A mistura foi submetida a um vórtex e introduzida na coluna NAP-25 equilibrada. 0 ADN de ácido nucleico imobilizado activado com o suberato de dissuccinimidilo foi eluído da coluna com 3,5 ml de solução de sulfato de sódio 10 mM, pH 6,5. Adicionaram-se 5,6 unidades ^D0260 de ADN de ácido nucleico imobilizado e activado com su berato de dissuccinimidilo eluído a 1500 ml de solução de fosfato de sódio 50 mM, pH 7,8. Adicionou-se um volume de 50 yul desta solução;acada cavidade e incubaram-se as placas durante a noite. As placas foram em seguida lavadas por quatro vezes com PBS 1X e as cavidades aspiradas para remover o líquido.

As placas foram completadas (final stripping) do seguinte modo, adicionou-se a cada cavidade um volume de 200 ^il de hidróxido de sódio 0,2 N contendo 0,5% de SDS p/v. Envolveram-se as placas em plástico e incubaram-se à temperatura de 65°C durante 60 minutos. Em seguida, lavaram-se as placas por quatro vezes com PBS 1 X e aspiraram-se para remover o líquido. A placa terminada (stripped) foi conservada com contas exsicadoras a uma temperatura compreendida entre 2^o e 8°C.

Amostras de soro destinadas ao ensaio foram analisadas por meio de reacção em cadeia de polimerase seguida de análise

de sequência para determinação do genótipo.

A preparação da amostra consistiu em adicionar 50 yjl da amostra de soro e 150 jjl de tampão P-K ( 2 mg/ml de proteínase K em Tris-HCl 53 mM, pH 8,0/NaCl 0,6 M/ citrato de sódio 0,06 M/EDTA 8 mM, pH 8,0/1,3% de SDS/ 16 jjg/ml de ADN de esperma de salmão sonicado/7% de formamida/50 fmoles de sondas de fixação/160 fmoles de sondas de detecção). Agitaram-se as placas para misturar o conteúdo das cavidades, cobriram-se e incubaram-se durante 16 horas à temperatura de 62°C.

Decorridos 10 minutos, à temperatura ambiente, aspirou-se o conteúdo de cada cavidade para remover todo o líquido e lavaram-se as cavidades com tampão de lavagem por duas vezes (0,1% de SDS/NaCl 0,015 M/citrato de sódio 0,015 M. Em seguida adicionou-se ácido nucleico amplificador a cada cavidade ( 50 ^il de solução 0,7 fmole/yjl em NaCl 0,48 M/citrato de sódio 0,048 M/SDS 0,1%/ reagente de bloqueio 0,5% (Boehringer Mannheim, n⁹ de catálogo 1096176)). Após cobrirem-se as placas e agitarem-se para misturar o conteúdo das cavidades incubaram-se as placas durante 30 minutos à temperatura de 52°C.

Após um período de mais 10 minutos à temperatura ambiente lavaram-se as cavidades como descrito anteriormente. Em seguida, adicionou-se ácido nucleico marcado com fosfatase alcalina, descrito na patente de invenção europeia EP 883096976, a cada cavi-

dade (50

H/cavidade de 2,66 fmole/jul). Após a incubação à tem-

peratura de 52°C durante 15 minutos e 10 minutos à temperatura ambiente, lavaram-se as cavidades por duas vezes, como descrito

-43anteriormente e em seguida por três vezes com NaCl 0,015 M/citrato de sódio 0,0015M.

Utilizou-se uma enzima provocada com dioxetano (Schaap et al., Tet Lett., 28 (1987) 1159-1162 e EPA Pub. N^s 0254051) que se obteve na Lumigen Inc. Adicionou-se uma quantidade de 50 de Lumiphos 530 (Lumigen) a cada cavidade. Sacudiram-se muito ligeiramente as cavidades de forma a fazer chegar ao fundo da cavidade o reagente e agitaram-se cuidadosamente para distribuir o reagente uniformente por todo o fundo da cavidade. Cobri ram-se as cavidades e incubaram-se à temperatura de 37°C durante 20 a 40 minutos. Em seguida, leram-se as placas num luminómetro Dynatech ML 1000. 0 rendimento foi considerado como o total da luz produzida durante a reacção.

ensaio detectou positivamente cada uma das amostras do soro, independentemente do genótipo.

IV. EXPRESSÃO DE POLIPÉPTIDO CODIFICADO EM SEQUÊNCIAS

DEFINIDAS POR GENOTIPOS DIFERENTES

Polipéptidos de HCV codificados por uma sequência compreendida entre as sequências 1 e 66 foram expressos sob a forma de um polipéptido de fusão com superóxido dismutase (SOD). Um ADNc transportando estas sequências foi subclonado no vector de expressão pSODcfl (Steimer et al., (1986)).

Tratou-se primeiro o ADN isolado de pSODcfl com BamHI e EcoRI e em seguida ligou-se o adaptador em ADN linear criado pelas enzimas de restrição:

GAT CCT GGA ATT CTG ATA AGA

CCT TAA GAC TAT TTT AA

-44Após a clonagem isolou-se o plasmídeo contendo a inserção.' plasmídeo contendo a inserção foi restringido com EcoRI. Ligou-se o ADNc de HCV neste ADN plasmídico linearizado por EcoRI. A mistura de ADN foi utilizada para transformar E. coli da estirpe D1210 (Sadler et al. (1980)). Os polipéptidos foram isolados em geles.

V. ΑΝΤΙGENICIDADE DE POLIPÉPTIDOS

Avaliou-se a antigenicidade dos polipéptidos obtidos na Secção IV do seguinte modo: Prepararam-se agulhas (pins) de polietileno distribuídas num bloco num conjunto 8 12 (Coselco Mimetopes, Victoria, Austrália) colocando as agulhas em um banho (piperidina a 20% v/v em dimetilformamida) durante 30 minutos à temperatura ambiente. Retiraram-se as agulhas , lavaram-se com dimetilformamida durante 5 minutos e em seguida com metanol quatro vezes ( 2 minutos cada lavagem). Estas agulhas permaneceram a secar ao ar durante pelo menos 10 minutos e em seguida lavaram-se por uma última vez com dimetilformamida durante 5 minutos. Dissolveram-se 367 mg de 1-hidroxibenzotriazol em 80 jil de dimetilformamida para se utilizar na ligação dos polipéptidos protegidos com Fmoc, preparados como descrito na Secção IV.

Colocaram-se os aminoácidos protegidos nas cavidades de placas microtituladoras com 1-hidroxibenzotriazol e colocou-se sobre a placa o bloco de agulhas mergulhando-se as agulhas nas cavidades. 0 conjunto foi depois selado numa bolsa de plástico e permaneceu em reacção à temperatura de 25°C durante 18 horas

-45-Χ para ligar os primeiros aminoácidos às agulhas. Em seguida, re- ·* tirou-se o bloco e lavaram-se as agulhas com dimetilformamida durante 2 minutos, metanol 4 vezes durante 2 minutos e de novo com dimetilformamida durante 2 minutos para limpar e desproteger os aminoácidos ligados. Repetiu-se o processo para cada adição de aminoácido ligado até estarem preparados todos os octâmeros.

Em seguida, acetilaram-se os terminais N livres para compensar a amida livre, de modo a que a maior parte dos epitopes não se encontrassem no N terminal e, deste modo, não houvesse uma carga positiva associada. Realizou-se a acilação por enchimento das cavidades de uma placa microtituladora com dimetilformamida/anidrido acético/trietilamina (5:2:1, v/v/v) e permaneceram as agulhas a reagir nas cavidades durante 90 minutos à temperatura de 20°C. Em seguida, as agulhas foram lavadas com dimetilformamida durante 2 minutos e com metanol por 4 vezes durante 2 minutos, e secas ao ar durante pelo menos 10 minutos.

Os grupos protectores da cadeia lateral foram removidos por tratamento das agulhas com ácido trifluoroacético/fenol/ditioetano (95:2,5:1,5, v/v/v) em bolsas de polipropileno, durante 4 horas à temperatura ambiente. As agulhas foram depois lavadas por duas vezes com diclorometano, durante 2 minutos, duas vezes durante 5 minutos com diisopropiletilamina a 5%/diclorometano, 5 minutos com diclorometano e secas ao ar durante pelo menos 10 minutos. As agulhas foram depois lavadas durante 2 minutos com água, metanol durante 18 horas. Secas sob vácuo e conservadas em bolsas de plástico fechadas sobre gel de silica. IV.B.15.b

Ensaio de Péptidos.

As agulhas contendo octâmero foram tratadas por sonicação durante 30 minutos num tampão de fragmentação (dodecilsulfato de sódio a 1%, 2-mercaptoetanol a 0,1%, di-hidrogeno-fosfato de sódio 0,1 M) à temperatura de 60°C. Em seguida, mergulharam-se as agulhas várias vezes em água (60°C) seguido de ebulição durante 2 minutos em metanol e secagem ao ar.

Em seguida, pré-resvestiram-se as agulhas durante 1 hora' à temperatura de 25°C em cavidades microtituladoras contendo 200 ji1 de tampão de bloqueio (albumina de ovo a 1%, BSA a 1%, Tween a 0,1% e azoteto de sódio a 0,05% em PBS), sob agitação. Em sequida, mergulharam-se as agulhas em cavidades microtituladoras contendo 175 jil de anti-soro obtido de doentes humanos diagnosticados como portadores de vírus de hepatite C, permanecendo a incubar durante a noite à temperatura de 4°C. A formação do complexo entre os anticorpos monoclonais dos soros e o polipéptido indiciava que os péptidos originavam uma resposta imunológica in vivo. Estes péptidos são candidatos para o desenvolvimento de vacina.

Deste modo, tendo sido descrita e ilustrada a presente invenção, será evidente para um técnico nesta matéria que é possível efectuar muitas variações modificações sem afastamento do âmbito das reivindicações e dos ensinamentos da presente inven ção .

LISTA DE SEQUÊNCIAS (1) INFORMAÇÕES GERAIS:

(i) REQUERENTE: Tai-An Cha (ii) TITULO DA INVENÇÃO: Sequências genómicas de HCV para diagnóstico e terapêutica (iii) NUMERO DE SEQUÊNCIAS: 147 (iv) DIRECÇÃO PARA CORRESPONDÊNCIA:

(A) ENDEREÇO: Wolf, Greenfield & Sacks, P.C.

(B) LOCAL : 600 Atlantic Avenue

(C) CIDADE: Boston

(D) ESTADO: Massachusetts

(E) PAIS : USA

(F) CODIGO: 02210

(V) CONDIÇOES PARA COMPUTADOR:

(A)	TIPO DE MEIO: Disquete, 5.25	i nch
(B)	COMPUTADOR: IBM compatível
(C)	SISTEMA OPERATIVO: Versão MS-	DOS 3.3
(D)	SOFTWARE : WordPerfect 5.1

(vi) DADOS DE REQUISIÇÃO USUAIS:

(A) NUMERO ATRIBUÍDO: Não atribuído (B) DATA DO PEDIDO: idem (C) CLASSIFICAÇAO : idem (vií) DADOS DE PEDIDO ANTERIOR:

(A) NUMERO ATRIBUÍDO: 07/697,326 (B) DATA DO PEDIDO: 8 Maio 1991 (viii) ATTORNEY/AGENTE INFORMADOR: ^íZ * (A) NOME: Janiuk, Anthony J.

(B) NÚMERO DE REGISTO: 29,809 (C) NÚMERO DE REFERENCIA: C0772/7000 (ix) TELECOMUNICAÇÃO: :

(A) TELEFONE: (617) 720-3500 (B) TELEFAX : (617) 720-2441 (C) TELEX: EZEKIEL (2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ ID NO: 1:

(i) CARACTERISTICAS DE SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 340 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA : simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) ESPÉCIE DE MOLÉCULA: ADN (vi) FONTE ORIGINAL: (ATCC # 40394) (C) ISOLADO INDIVIDUAL : ns5hcvl

(xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO:	1
CTCCACAGTC ACTGAGAGCG ACATGCGTAC GGAGGAGGCA	40
ATCTACCAAT GTTGTGACCT CGACCCCCAA GCCCGCGTGG	80
CCATCAAGTC GCTCACCGAG AGGCTTTATG TTGGGGGCCC	120
TCTTACCAAT TCAAGGGGGG AGAACTGGGG CTATCGCAGG	160
TGCCGCGCGA GCGGCGTACT GACAACTAGC TGTGGTAACA	200
CCCTCACTTG CTACATCAAG GCCCGGGCAG CGTGTCGAGC	240
CGCAGGGCTC CAGGACTGCA CCATGGTCGT GTGTGGCGAG	280
GACTTAGTCG TTATCTGTGA AAGCGGGGGG GTCCAGGAGG	320

ACGCGGCGAG CCTGAGAGCC

340

(2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ ID NO: 2:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 340 nucleótidos (B) TIPO : ácido nucleico (C) CADEIA : simples (D) TOPOLOGIA : linear .

I (ii) ESPECIE DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: ns5i21 (Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA : SEQ ID NO: 2

CTCCACAGTC

ACTGAGAGCG

ACATCCGTAC

GGAGGAGGCA

ATCTACCAAT

GTTGTGATCT

GGACCCCCAA

GCCCGCGTGG

CCATCAAGTC

CCTCACTGAG

AGGCTTTACG

TTGGGGGCCC

120

TCTTACCAAT

TCAAGGGGGG

AGAACTGCGG

CTACCGCAGG

160

TGCCGGGCGA

GCGGCGTACT

GACAACTAGC

TGTGGTAATA

200

CCCTCACTTG

CTACATCAAG

GCCCGGGCAG

CCTGTCGAGC

240

CGCAGGGCTC

CGGGACTGCA

CCATGCTCGT

GTGTGGTGAC

280

GACTTGGTCG

TTATCTGTGA

GAGTGCGGGG

GTCCAGGAGG

320

ACGCGGCGAG

CCTGAGAGCC

340 (2) INFORMAÇÃO PARA A SEQUENCIA ID NO: 3:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 340 nucleótidos (B) TIPO : ácido nucleico (C) CADEIA : Simples (D) TOPOLOGIA : linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM :

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: ns5ptl (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 3

CTCCACAGTC ATCTACCAAT CCATCAAGTC TCTTACCAAT TGCCGGGCGA CCCTCACTTG CGCAGGGCTC GACTTGGTCG ACGCGGCGAG

ACTGAGAGCG GTTGTGATCT CCTCACTGAG TCAAGGGGGG GCGGCGTACT CTACATCAAG CGGGACTGCA TTATCTGTGA CCTGAGAGCC

ACATCCGTAC GGACCCCCAA AGGCTTTACG, AGAACTGCGG GACAACTAGC GCCCGGGCAG CCATGCTCGT GAGTGCGGGG

GGAGGAGGCA GCCCGCGTGG TTGGGGGCCC CTACCGCAGG TGTGGTAATA CCTGTCGAGC GTGTGGTGAC GTCCAGGAGG

120

160

200

240

280

320

340 (2)

INFORMAÇÃO PARA A SEQUÊNCIA ID NO: 4 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL : ns5gm2

(xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 4

CCATCAAGTC CCTCACTGAG AGGCTTTATG TTGGGGGCCC CCTTACCAAT TCAAGGGGGG AAAACTGCGG CTATCGCAGG' TGCCGCGCGA GCGGCGTACT GACAACTAGC-ffGTGGTAACA CCCTCACTTG CTACATTAAG GCCCGGGCAG CCTGTCGAGC CGCAGGGCTC CAGGACTGCA CCATGCTCGT GTGTGGCGAC GACTTAGTCG TTATCTGTGA GAGTGCGGGA GTCCAGGAGG ACGCGGCGAA CTTGAGAGCC

120

160

20.0

240

280

320

340 (2) INFORMAÇÃO PARA A SEQUÊNCIA ID NO: 5 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 340 nucleótidos (B) TIPO : ácido nucleico (C) CADEIA : s ,mples (D) TOP.OLOG-IA:. Linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA : ADN (vi) ORIGEM :

(C) ISOLADO INDIVIDUAL : ns5usl7 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 5

CTCCACAGTC ATCTACCAGT CCATCAAGTC TCTTACCAAT TGCCGCGCAA

ACTGAGAGCG GTTGTGACCT CCTCACCGAG TCAAGGGGGG GCGGCGTACT

GGAGGAGGCA GCCCGCGTGG TCGGGGGCCC CTATCGCAGG TGTGGTAACA

120

160

200

ATATCCGTAC

GGACCCCCAA

AGGCTTTATG

AAAACTGCGG

GACAACTAGC

CCCTCACTTG TTACATCAAG GCCCAAGCAG CCTGTCGAGC240

CGCAGGGCTC CGGGACTGCA CCATGCTCGT GTGTGGCGAC280

GACTTAGTCG TTATCTGTGA AAGTCAGGGA GTCCAGGAGG320

ATGCAGCGAA CCTGAGAGCC (2) INFORMAÇÃO PARA A SEQUENCIA ID NO: 6 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 340 nucleótidos (B) TIPO ácido nucleico (C) CADEIA : simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM :

(C) ISOLADO INDIVIDUAL : ns5sp2 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 6

CTCTACAGTC ACTGAGAGCG ATATCCGTAC GGAGGAGGCA40

ATCTACCAAT GTTGTGACCT GGACCCCGAA GCCCGTGTGG80

CCATCAAGTC CCTCACTGAG AGGCTTTATG TTGGGGGCCC120

TCTTACCAAT TCAAGGGGGG AGAACTGCGG CTACCGCAGG160

TGCCGCGCAA GCGGCGTACT GACGACTAGC TGTGGTAATA200

CCCTCACTTG TTACATCAAG GCCCGGGCAG CCTGTCGAGC240

CGCAGGGCTC CAGGACTGCA CCATGCTCGT GTGTGGCGAC280

GACCTAGTCG TTATCTGCGA AAGTGCGGGG GTCCAGGAGG320

ACGCGGCGAG CCTGAGAGCC.340 (2) INFORMAÇÃO PARA A SEQUENCIA ID NO: 7 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO : 340 nucleótidos (B) TIPO : ácido nucleico (C) CADEIA : simples (D) TOPOLOGIA : linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM :

(C) ISOLADO INDIVIDUAL : nsSjl

(xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 7

CTCCACAGTC ACTGAGAATG ATTTACCAAT GTTGTGACTT CCATAAGGTC GCTCACAGAG TATGACTAAC TCCAAAGGGC TGCCGCGCGA GCGGCGTGCT CCCTCACATG CTACCTGAAG TGCCAAGCTC CAGGACTGCA GACCTTGTCG TTATCTGTGA ACGCGGCAAG CCTACGAGCC

ACACCCGTGT TGAGGAGTCA GGCCCCCGAA GCCAGACAGG CGGCTCTATG TCGGGGGTCC AGAACTGCGG CTATCGCCGG GACGACTAGC TGCGGTAATA GCCACAGCGG CCTGTCGAGC CGATGCTCGT GAACGGAGAC AAGCGCGGGG AACCAAGAGG

120

160

200

240

280

320

340 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 8 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 340 nucleótidos (B) TIPO : ácido nucleico (C) CADEIA : simples (D) TOPOLOGIA : linear

(ii) TIPO DE MOLÉCULA : ADN (vi) ORIGEM :

(C) ISOLADO INDIVIDUAL : ns5kl (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO:8

CTCAACGGTC

ACTGAGAATG

ACATCCGTGT

TGAGGAGTCA

ATTTACCAAA

GTTGTGACTT

GGCCCCCGAG

GCCAGACAAG

CCATAAGGTC

GCTCACAGAG

CGGCTTTACA

TCGGGGGCCC

120

CCTGACTAAT

TCAAAAGGGC

AGAACTGCGG

CTATCGCCGA

160

TGCCGCGCCA

GCGGTGTGCT

GACGACTAGC

TGCGGTAATA

200

CCCTCACATG

TTACTTGAAG

GCCACTGCGG

CCTGTAGAGC

240

TGCGAAGCTC

CAGGACTGCA

CGATGCTCGT

GTGCGGAGAC

280

GACCTTGTCG

TTATCTGTGA

AAGCGCGGGA

ACCCAGGAGG

320

ATGCGGCGAG

CCTACGAGTC

340 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO:9 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO : 340 nucleótidos (B) TIPO : ácido nucleico (C) CADEIA : simples (D) TOPOLOGIA : linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN

-55(ví) ORIGEM : ^f (C) ISOLADO INDIVIDUAL: ns5kl.1 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 9 ·' ι7

CTCAACGGTC ACCGAGAATG ACATCCGTGT TGAGGAGTCA40

ATTTATCAAT GTTGTGCCTT GGCCCCCGAG pÇTAGACAGG80

CCATAAGGTC GCTCACAGAG CGGCTTTATA TCGGGGGCCC120

CCTGACCAAT TCAAAGGGGC AGAACTGCGG-TTATCGCCGG160

TGCCGCGCCA GCGGCGTACT GACGACCAGC TGCGGTAATA200

CCCTTACATG TTACTTGAAG GCCTCTGCAG CCTGTCGAGC240

CGCGAAGCTC CAGGACTGCA CGATGCTCGT GTGTGGGGAC280

GACCTTGTCG TTATCTGTGA AAGCGCGGGA ACCCAGGAGG320

ACGCGGCGAA CCTACGAGTC340 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO:10 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 340 nucleótidos (B) TIPO : ácido nucleico (C) CADEIA : simples (D) TOPOLOGIA : linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL : ns5gh6

F (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 10

CTCAACGGTC

ACTGAGAGTG

ACATCCGTGT

CGAGGAGTCG

ATTTACCAAT

GTTGTGACTT

GGCCCCCGAA

GCCAGGCAGG

CCATAAGGTC

GCTCACCGAG

CGACTTTATA

TCGGGGGCCC

120

CCTGACTAAT

TCAAAAGGGC

TGCCGCGCGA

GCGGCGTGCT

AGAACTGCGG TTATCGCCGG GACGACTAGC

TGCGGTAATA

160

200

CCCTCACATG

TTACTTGAAG

GCCTCTGCAG

CCTGTCGAGC

...240

TGCAAAGCTC

CAGGACTGCA

CGATGCTCGT

GAACGGGGAC

280

GACCTTGTCG

TTATCTGCGA

GAGCGCGGGA-ACCCAAGAGG

320

ACGCGGCGAG

CCTACGAGTC

340 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 11 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: ns5spl (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 11

CTCCACAGTC ACTGAGAGTG ACATCCGTGT TGAGGAGTCA40

ATTTACCAAT GTTGTGACTT GGCCCCCGAA GCCAGACAGG80

CTATAAGGTC GCTCACAGAG CGGCTGTACA TCGGGGGTCC120

CCTGACTAAT TCAAAAGGGC AGAACTGCGG CTATCGCCGG160

TGCCGCGCAA GCGGCGTGCT GACGACTAGC TGCGGTAACA

CCCTCACATG TTACTTGAAG GCCTCTGCGG CCTGTCGAGC

TGCGAAGCTC CAGGACTGCA CGATGCTCGT GTGCGGTGAC

GACCTTGTCG TTATCTGTGA GAGCGCGGGA ACCCAAGAGG

ACGCGGCGAG CCTACGAGTC

200

240

280

320

340 (2)

INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID N0: 12* (i) CARACTERISTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 340 nucleótidos - (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA : simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: ns5sp3 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 12

CTCAACAGTC ATCTACCAAT CTATAAGGTC CCTGACTAAT TGCCGCGCAA CCCTCACATG TGCGAAGCTC GACCTTGTCG ACGCGGCGAG

ACTGAGAGTG GTTGTGACTT GCTCACAGAG TCAAAAGGGC GCGGCGTGCT TTACCTGAAG CAGGACTGCA TTATCTGTGA CCTACGAGTC

ACATCCGTGT GGCCCCCGAA CGGCTTTACA AGAACTGCGG GACGACTAGC GCCAGTGCGG CAATGCTCGT GAGCGCGGGG

TGAGGAGTCA GCCAGACAGG TCGGGGGTCC CTATCGCCGG TGCGGTAATA CCTGTCGAGC GTGCGGTGAC ACCCAAGAGG

120

160

200

240

280

320

340

(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 13 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA;

(A) COMPRIMENTO: 340 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear - (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: ns5k2 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 13

CTCAACCGTC

ACTGAGAGAG

ACATCAGAAC

TGAGGAGTCC

ATATACCGAG

CCTGCTCCCT

GCCTGAGGAG

GCTCACATTG

CCATACACTC

GCTGACTGAG

AGGCTCTACG

TGGGAGGGCC

120

CATGTTCAAC

AGCAAGGGCC

AGACCTGCGG

GTACAGGCGT

160

TGCCGCGCCA

GCGGGGTGCT

CACCACTAGC

ATGGGGAACA

200

CCATCACATG

CTATGTAAAA

GCCCTAGCGG

CTTGCAAGGC

240

TGCAGGGATA

GTTGCACCCT

CAATGCTGGT

ATGCGGCGAC

280

GACTTAGTTG

TCATCTCAGA

AAGCCAGGGG

ACTGAGGAGG

320

ACGAGCGGAA

CCTGAGAGCT

340 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NQ: 14 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 340 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA : simples (D) TOPOLOGIA: linear (il) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: ns5arg8

(xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO; 14

CTCTACAGTC ACGTAAAAGG ATCTACCAGT CCTGTTCACT CTATACACTC ACTGACTGAG CA.TGACAAAC AGCAAGGGCC TGCCGCGCGA GCGCAGTGCT CACTCACGTG CTACGTAAAA CGCGGGGATT GTTGCTCCCA GACCTGGTCG TCATCTCAGA ACGAGCAGAA CCTGAGAGTC

ACATCACÃTC‘CTAGGAGTCC ’ ^40

GCCCGAGGAG GCTCGAACTG80

AGACTATACG TAGGGGGGCC120

AATCCTGCGG GTACAGGCGT160

CACCACCAGC ATGGGCAACA200

GCCAGGGCGG CGTGTAACGC240

CCATGCTGGT GTGCGGTGAC280

GAGTCAAGGG GCTGAGGAGG320

340 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 15 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA;

(A) COMPRIMENTO: 340 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: ns5i10

(xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 15

CTCTACAGTC ACAGAGAGGG ACATCAGAAC CGAGGAGTCC40

ATCTATCTGT CCTGCTCACT GCCTGAGGAG GCCCGAACTG80

CTATACACTC ACTGACTGAG AGACTGTACG TAGGGGGGCC120

CATGACAAAC AGCAAGGGGC AATCCTGCGG GTACAGGCGT160

TGCCGCGCGA GCGGAGTGCT CACCACCAGC ATGGGCAACA200

CGCTCACGTG CTACGTGAAA GCCAGAGCGG'CGTGTAACGC . . 240

CGCGGGCATT GTTGCTCCCA CCATGTTGGT GTGCGGCGAC280

GACCTGGTTG TCATCTCAGA GAGTCAGGGG GTCGAGGAAG320

ATGAGCGGAA CCTGAGAGTC340 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 16 (í) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 340 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM :

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: ns5arg6 (xi) DESCRIÇÃO-DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 16

CTCTACAGTC ACGGAGAGGG ACATCAGAAC CGAGGAGTCC40

ATCTATCTGT CCTGTTCACT GCCTGAGGAG GCTCGAACTG80

CCATACACTC ACTGACTGAG AGGCTGTACG TAGGGGGGCC

120

CATGACAAAC AGCAAAGGGC AATCCTGCGG GTACAGGCGT160

TGCCGCGCGA GCGGAGTGCT CACCACCAGC ATGGGTAACA200

CACTCACGTG CTACGTGAAA GCTAAAGCGG CATGTAACGC240

CGCGGGCATT GTTGCCCCCA CCATGTTGGT GTGCGGCGAC280

GACCTAGTCG TCATCTCAGA GAGTCAAGGG GTCGAGGAGG320

ATGAGCGAAA CCTGAGAGCT

340

-61(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: .17 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 340 nucleótidos (B) TIPO : ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear . _f

(iiJ.TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: ns5k2b (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 17

CTCAACCGTC

ACGGAGAGGG

ACATAAGAAC

AGAAGAATCC

ATATATCAGG

GTTGTTCCCT

GCCTCAGGAG

GCTAGAACTG

CTATCCACTC

GCTCACTGAG

AGACTCTACG

TAGGAGGGCC

120

CATGACAAAC

AGCAAGGGAC

AATCCTGCGG

TTACAGGCGT

160

TGCCGCGCCA

GCGGGGTCTT

CACCACCAGC

ATGGGGAATA

200

CCATGACATG

CTACATCAAA

GCCCTTGCAG

CGTGCAAAGC

240

TGCAGGGATC

GTGGACCCTA

TCATGCTGGT

GTGTGGAGAC

280

GACCTGGTCG

TCATCTCGGA

GAGCGAAGGT

AACGAGGAGG

320

ACGAGCGAAA

CCTGAGAGCT

340 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA:ID NO: 18 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 340 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (C) TOPOLOGIA: linear

-62(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: ns5sa283 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 18

CTCGACCGTT ACCGAACATG ACATAATGAC TGAAGAGTCT40

ATTTACCAAT CATTGTACTT GCAGCCTGAG GCGCGTGTGG80

CAATACGGTC ACTCACCCAA CGCCTGTACT GTGGAGGCCC120

CATGTATAAC AGCAAGGGGC AACAATGTGG TTATCGTAGA160

TGCCGCGCCA GCGGCGTCTT CACCACTAGT ATGGGCAACA200

CCATGACGTG CTACATTAAG GCTTTAGCCT CCTGTAGAGC240

CGCAAAGCTC CAGGACTGCA CGCTCCTGGT GTGTGGTGAT320

GATAAAGCGA CCTGAGAGCC340 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 19 (i) CARACTERISTICAS DA SEQUENCIA (A) COMPRIMENTO: 340 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: ns5sa!56

-63(2) (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 19

CTCGACCGTT ACCGAACATG ACATAATGAC TGAAGAGTCC ATTTACCAAT CATTGTACTT GCAGCCTGAG GCACGCGCGG CAATACGGTC ACTCACCCAA CGCCTGTACT GTGGAGGCCC CATGTATAAC AGCAAGGGGC AACAATGTGG^TACCGTAGA

I

TGCCGCGCCA GCGGCGTCTT CACCACCAGT ATGGGCAACA CCATGACGTG CTACATCAAG GCTTCAGCCG CCTGTAGAGC TGCAAAGCTC CAGGACTGCA CGCTCCTGGT GTGTGGTGTG ACCTTGGTGG CCATTTGCGA GAGCCAAGGG ACGCACGAGG ATGAAGCGTG CCTGAGAGTC

120 ιεα

200

240

280

320

340

INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 20 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: ns5i11 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID ΝΘ: 20

CTCTACTGTC ACTGAACAGG ACATCAGGGT GGAAGAGGAG ATATACCAGT GCTGTAACCT TGAACCGGAG GCCAGGAAAG TGATCTCCTC CCTCACGGAG CGGCTTTACT GCGGGGGCCC TATGTTCAAC AGCAAGGGGG CCCAGTGTGG TTATCGCCGT TGCCGTGCTA GTGGAGTCCT GCCTACCAGC TTCGGCAACA CAATCACTTG TTACATCAAG GCTAGAGCGG CTTCGAAGGC CGCAGGCCTC CGGAACCCGG ACTTTCTTGT CTGCGGAGAT GATCTGGTCG TGGTGGCTGA GAGTGATGGC GTCGACGAGG ATAGAGCAGC CCTGAGAGCC

120

160

200

240

280

320

340

-64(2) IN.F.ORMAÇAO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 21 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: ns5i4 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 21

CTCGACTGTC ACTGAACAGG ATATACCAAT GCTGTAACCT TGATCTCCTC CCTCACGGAG TATGTTCAAT AGCAAGGGGG TGCCGTGCTA GTGGAGTTCT CAATCACTTG TTACATCAAG

ACATCAGGGT GGAAGAGGAG40

TGAACCGGAG GCCAGGAAAG80

CGGCTTTACT GCGGGGGCCC120

CCCAGTGTGG TTATCGCCGT160

GCCTACCAGC TTCGGCAACA200

GCTAGAGCGG CTGCGAAGGC240

CGCAGGGCTC CGGACCCCGG ACTTTCTCGT CTGCGGAGAT

280

GATCTGGTTG TGGTGGCTGA GAGTGATGGC GTCGACGAGG 320

ATAGAACAGC CCTGCGAGCC340 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 22 (í) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 340 nucleótidos (B) TIPO : ácido nucleico (C) : CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear

(ii) TIPO DE MQLECULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL:

ns5gh8 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 22

CTCAACTGTC ACTGAACAGG ACATCAGGGT GGAAGAGGAG 40 ATATACCAAT GCTGTAACCT TGAACCGGAG GCCAGGAAAG 80 TGATCTCCTC CCTCACGGAA CGGCTTTACT GCGGGGGCCC 120 TATGTTCAAC AGCAAGGGGG CCCAGTGTGG TTATCGCCGT’ 160 TGCCGTGCCA GTGGAGTTCT GCCTACCAGC TTCGGCAACA 200 CAATCACTTG TTACATCAAA GCTAGAGCGG CTGCCGAAGC 240 CGCAGGCCTC CGGAACCCGG ACTTTCTTGT CTGCGGAGAT 280 GATCTGGTTG TGGTGGCTGA GAGTGATGGC GTCAATGAGG 320 ATAGAGCAGC CCTGGGAGCC 340 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 23 (i) CARACTERISTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: TOO nucleotidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM: (ATCC # 40394) (C) ISOLADO INDIVIDUAL: hcvl

-66(xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA.: SEQ ID MO: 23

GACGGCGTTG GTAATGGCTC AGCTGCTCCG GATCCCACAA40

GCCATCTTGG ACATGATCGC TGGTGCTCAC TGGGGAGTCC80

TGGCGGGCAT AGCGTATTTC100 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 24.·, (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 100 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

ISOLADO INDIVIDUAL: US5 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 24

GACGGCGTTG GTGGTAGCTC AGGTACTCCG GATCCCACAA40

GCCATCATGG ACATGATCGC TGGAGCCCAC TGGGGAGTCC80

TGGCGGGCAT AGCGTATTTC100 (2) INFORMAÇAQ SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 25 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 100 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN . .

(vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: AUS5 (xí) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 25

AACGGCGCTG GTAGTAGCTC AGCTGCTCAG · GGTCCCGCAA _4O

GCCATCGTGG ACATGATCGC TGGTGCCCAC TGGGGAGTCC ‘80

TAGCGGGCAT AGCGTATTTT 100 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 26 (i) CARACTESRISTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 100 nucleótidos (B) TIPO; ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: US4 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 26

GACAGCCCTA GTGGTATCGC AGTTACTCCG GATCCCACAA40

GCCGTCATGG ATATGGTGGC GGGGGCCCAC TGGGGAGTCC80

TGGCGGGCCT TGCCTACTAT100 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 27 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 100 nucleótidos

(B) TIPO : ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: ARG2 (xi) DESCRIÇÃO DA ^EJQUENCIA: SEQ ID .NO: 27

AGCAGCCCTA GTGGTGTCGC AGTTACTCCG'GATCCCACAA40

AGCATCGTGG ACATGGTGGC GGGGGCCCAC TGGGGAGTCC80

TGGCGGGCCT TGCTTACTAT100 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 28 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 100 nucleotidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: 115 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 28

GGCAGCCCTA GTGGTGTCGC AGTTACTCCG GATCCCGCAA GCTGTCGTGG ACATGGTGGC GGGGGCCCAC TGGGGAATCC

TAGCGGGTCT TGCCTACTAT

-69(2) INFORMAÇÃO SOBRE .A SEQULENCIA ID NO: 29 (i) CARACTERISTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 100 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear -_t| (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: GH8 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA SEQ ID NO: 29

TGTGGGTATG GTGGTGGCGC ACGTCCTGCG TTTGCCCCAG40

ACCTTGTTCG ACATAATAGC CGGGGCCCAT TGGGGCATCT80

TGGCGGGCTT GGCCTATTAC100 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 30 (i) CARACTERISTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 100 nucleótidos (B) TIPO : ácido nucleico (C) CADEIA : simples (D) TOPOLOGIA : linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM :

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: 14 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID. NO: 30

TGTGGGTATG

ACCTTGTTCG

TGGCAGGCCT

TCTGCCCCAG

TGGGGCATCT

GTGGTAGCAC

ACATAATAGC

AGCCTATTAC

ACGTCCTGCG

CGGGGCCCAT (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 31 * 4 i

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: 111 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 31

TGTGGGTATG

GTGGTGGCGC AAGTCCTGCG TTTGCCCCAG

ACCTTGTTCG

ACGTGCTAGC

CGGGGCCCAT TGGGGCATCT

TGGCGGGCCT

GGCCTATTAC

100 (2)

INFORMAÇÃO SOBRE

A SEQUENCIA ID.NO: 32 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 100 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA : simples (D) TOPOLOGIA: line'ar

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: 110 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID ΝΘ: 32

TACCACTATG CTCCTGGCAT ACTTGGTGCG^CATCCCGGAG

GTCATCCTGG ACATTATCAC GGGAGGACAC TGGGGCGTGA

TGTTTGGCCT GGCTTATTTC

-4.0

100 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID N0: 33 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 252 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM: (ATCC # 40394) (C) ISOLADO INDIVIDUAL: hcvl (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 33

GTTAGTATGA GTGTCGTGCA CGGGAGAGCC ATAGTGGTCT GGAATTGCCA GGACGACCGG GCTCAATGCC TGGAGATTTG CTAGCCGAGT AGTGTTGGGT TGCCTGATAG GGTGCTTGCG AGACCGTGCA CC

GCCTCCAGGA	CCCCCCCTCC	40
GCGGAACCGG	TGAGTACACC	80
GTCCTTTCTT	GGATCAACCC	120
GGCGTGCCCC	CGCAAGACTG	160
CGCGAAAGGC	CTTGTGGTAC	200
AGTGCCCCGG	GAGGTCTCGT	240
		252

-72(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 34

CARACTESRISTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A)

COMPRIMENTO:

252 nucleótidos (δ)

TIPO: ácido nucleico (C)

CADEIA: simples (D)

TOPOLOGIA: linear

TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi)

ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: us5

DESCRIÇÃO DA

SEQUÊNCIA : SEQ ID NO: 34

GTTAGTATGA

GTGTCGTGCA

GCCTCCAGGA

CCCCCCCTCC

CGGGAGAGCC

ATAGTGGTCT

GCGGAACCGG

TGAGTACACC

GGAATTGCCA

GGACGACCGG

GTCCTTTCTT

GGATCAACCC

120

GCTCAATGCC

TGGAGATTTG

GGCGTGCCCC

CGCAAGACTG

160

CTAGCCGAGT

AGTGTTGGGT

CGCGAAAGGC

CTTGTGGTAC

200

TGCCTGATAG

GGTGCTTGCG

AGTGCCCCGG

GAGGTCTCGT

240

AGACCGTGCA

CC

252 (2)

INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA

ID NO: 35 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 252 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE.MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: ausl (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID ΝΘ: 35

GTTAGTATGA GTGTCGTGCA GCCTCCAGGA CCCCCCCTCC CGGGAGAGCC ATAGTGGTCT GCGGAACCGG TGAGTACACC GGAATTGCCA GGACGACCGG GTCCTTTCTT GGATCAACCC GCTCAATGCC TGGAGATTTG GGCACGCCCC CGCAAGATCA CTAGCCGAGT AGTGTTGGGT CGCGAAAGGC CTTGTGGTAC TGCCTGATAG GGTGCTTGCG AGTGCCCCGG GAGGTCTCGT AGACCGTGCA CC

120

160

200

240

252 (2) INFORMAÇ.AO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 36 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 252 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: sp2 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 36

GTTAGTATGA GTGTCGTGCA GCCTCCAGGA CCCCCCCTCC CGGGAGAGCC ATAGTGGTCT GCGGAACCGG TGAGTACACC GGAATTGCCA GGACGACCGG GTCCTTTCTT GGATAAACCC GCTCAATGCC TGGAGATTTG GGCGTGCCCC CGCGAGACTG

120

160

CTAGCCGAGT AGTGTTGGGT CGCGAAAGGC CTTGTGGTAC TGCCTGATAG GGTGCTTGCG AGTGCCCCGG GAGGTCTCGT AGACCGTGCA CC (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 37 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: gm2 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID N0:37

200

240

252

GTTAGTATGA GTGTCGTGCA GCCTCCAGGA CCCCCCCTCC

CGGGAGAGCC ATAGTGGTCT GCGGAACCGG TGAGTACACC

GGAATTGCCA GGACGACCGG GTCCTTTCTT GGATCAACCC

GCTCAATGCC TGGAGATTTG GGCGTGCCCC CGCAAGACTG

CTAGCCGAGT AGTGTTGGGT CGCGAAAGGC CTTGTGGTAC

TGCCTGATAG GGTGCTTGCG AGTGCCCCGG GAGGTCTCGT AGACCGTGCA CC (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 38 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 252 nucleótidos (B) TIPO: .ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear

120

160

200

240

252

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: i21 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 38

GTTAGTATGA

GTGTCGTGCA

GCCTCCAGGA

CCCCCCCTCC

CGGGAGAGCC

ATAGTGGTCT

GCGGAACCGG

TGAGTACACC

GGAATTGCCA

GGACGACCGG

GTCCTTTCTT

GGATAAACCC

120

GCTCAATGCC

TGGAGATTTG

GGCGTGCCCC

CGCAAGACTG

160 't

CTAGCCGAGT

AGTGTTGGGT

CGCGAAAGGC

CTTGTGGTAC

200

TGCCTGATAG

GGTGCTTGCG

AGTGCCCCGG

GAGGTCTCGT

240

AGACCGTGCA

CC

252 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID N0: 39 (i) CARACTERISTICAS DA SEQUENCIA:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: us4 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO:39

GTTAGTATGA GTGTCGTGCA GCCTCCAGGA CCCCCCCTCC40

CGGGAGAGCC ATAGTGGTCT GCGGAACCGG TGAGTACACC80

GGAATTGCCA GGACGACCGG GTCCTTTCTT GGATCAACCC120

GCTCAATGCC TGGAGATTTG GGCGTGCCCC CGCGAGACTG160

CTAGCCGAGT AGTGTTGGGT CGCGAAAGGC CTTGTGGTAC200

TGCCTGATAG GGTGCTTGCG AGTGCCCCGG GAGGTCTCGT240

AGACCGTGCA CC252

-76(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 40 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: jhl (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 40

GTTAGTATGA

GTGTCGTGCA

GCCTCCAGGA

CCCCCCCTCC

CGGGAGAGCC

ATAGTGGTCT

GCGGAACCGG

TGAGTACACC

GGAATTGCCA

GGACGACCGG

GTCCTTTCTT

GGATCAACCC

120

GCTCAATGCC

TGGAGATTTG

GGCGTGCCCC

CGCGAGACTG

160

CTAGCCGAGT

AGTGTTGGGT

CGCGAAAGGC

CTTGTGGTAC

200

TGCCTGATAG

GGTGCTTGCG

AGTGCCCCGG

GAGGTCTCGT

240

AGACCGTGCA

TC

252 (2) INFORMAÇÃO SOBRE

SEQUÊNCIA ID N0:

(i) CARACTERÍSTICAS	DA SEQUENCIA:
(A)	COMPRIMENTO	: 252 nucleótidos
(B)	TIPO: ácido	nucleico
(C)	CADEIA: simples
(D)	TOPOLOGIA:	1inear

(ií) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: nac5 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 41

GTTAGTATGA GTGTCGTGCA GCCTCCAGGA CCCCCCCTCC40

CGGGAGAGCC ATAGTGGTCT GCGGAACCGG TGAGTACACC80

GGAATTGCCA GGACGACCGG GTCCTTTCTT GGATCAACCC120

GCTCAATGCC TGGAGATTTG GGCGTGCCCC CGCGAGACTG160

CTAGCCGAGT AGTGTTGGGT CGCGAAAGGC CTTGTGGTAC200

TGCCTGATAG GGTGCTTGCG AGTGCCCCGG GAGGTCTCGT240

AGACCGTGCA CC252 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 42 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: arg2

DESCRIÇÃO DA	SEQUENCIA:	SEQ ID N@:	42
GTTAGTATGA	GTGTCGTGCA	GCCTCCAGGA	CCCCCCCTCC	40
CGGGAGAGCC	ATAGTGGTCT	GCGGAACCGG	TGAGTACACC	80
GGAATTGCCA	GGACGACCGG	GTCCTTTCTT	GGATCAACCC	120
GCTCAATGCC	TGGAGATTTG	GGCGTGCCCC	CGCGAGACTG	160
CTAGCCGAGT	AGTGTTGGGT	CGCGAAAGGC	CTTGTGGTAC	200
TGCCTGATAG	GGTGCTTGCG	AGTGCCCCGG	GAGGTCTCGT	240
AGACCGTGCA	CC			252

(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 43 (í) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: spl (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 43

GTTAGTATGA GTGTCGTGCA CGGGAGAGCC ATAGTGGTCT GGAATTGCCA GGACGACCGG GCTCAATGCC TGGAGATTTG CTAGCCGAGT AGTGTTGGGT TGCCTGATAG GGTGCTTGGG AGACCGTGCA CC

GCCTCCAGGA CCCCCCCTCC40

GCGGAACCGG TGAGTACACC30

GTCCTTTCTT GGATCAACCC120

GGCGTGCCCC CGCGAGACTG160

CGCGAAAGGC CTTGTGGTAC200

AGTGCCCCGG GAGGTCTCGT240

252 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 44 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 252 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: ghl (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 44

GTTAGTATGA GTGTCGTGCA GCCTCCAGGA CCCCCCCTCC40

CGGGAGAGCC ATAGTGGTCT GCGGAACCGG TGAGTACACC80

GGAATTGCCA GGACGACCGG GTCCTTTCTT GGATCAACCC120

GCTCAATGCC TGGAGATTTG GGCGTGCCCC CGCGAGACTG160

CTAGCCGAGT AGTGTTGGGT CGCGAAAGGC CTTGTGGTAC200

TGCCTGATAG GGTGCTTGCG AGTGCCCCGG GAGGTCTCGT240

AGACCGTGCA CC252 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 45 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: il5 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 45

GTTAGTATGA GTGTCGTGCA GCCTCCAGGA CCCCCCCTCC40

CGGGAGAGCC ATAGTGGTCT GCGGAACCGG TGAGTACACC80

GGAATTGCCA GGACGACCGG GTCCTTTCTT GGATCAACCC120

GCTCAATGCC TGGAGATTTG GGCGTGCCCC CGCGAGACTG160

CTAGCCGAGT AGTGTTGGGT CGCGAAAGGC CTTGTGGTAC200

TGCCTGATAG GGTGCTTGCG AGTGCCCCGG GAGGTCTCGT.240

AGACCGTGCA CC252 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 46

-80ς (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: 110 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID N0:46

GCTAGTATCA GTGTCGTACA GCCTCCAGGC CCCCCCCTCC40

CGGGAGAGCC ATAGTGGTCT GCGGAACCGG TGAGTACACC80

GGAATTGCCG GGAAGACTGG GTCCTTTCTT GGATAAACCC120

ACTCTATGCC CGGCCATTTG GGCGTGCCCC CGCAAGACTG160

CTAGCCGAGT AGCGTTGGGT TGCGAAAGGC CTTGTGGTAC200

TGCCTGATAG GGTGCTTGCG AGTGCCCCGG GAGGTCTCGT240

AGACCGTGCA TC252 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 47 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: arg6 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID ΝΘ: 47

GTTAGTATGA GTCTCGTACA GCCTCCAGGC CCCCCCCTCC CGGGAGAGCC ATAGTGGTCT GCGGAACCGG TGAGTACACC GGAATTGCTG GGAAGACTGG GTCCTTTCTT GGATAAACCC ACTCTATGCC CAGCCATTTG GGCGTGCCCC CGCAAGACTG CTAGCCGAGT AGCGTTGGGT TGCGAAAGGC CTTGTGGTAC TGCCTGATAG GGTGCTTGCG AGTGCCCCGG GAGGTCTCGT AGACCGTGCA TC

120

160

200

240

252 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 48 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: s21 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 48

GTTAGTACGA GTGTCGTGCA CGGGAGAGCC ATAGTGGTCT GGAATCGCTG GGGTGACCGG GCTCAATACC CAGAAATTTG CTAGCCGAGT AGTGTTGGGT TGCCTGATAG GGTGCTTGCG

GCCTCCAGGA CTCCCCCTCC40

GCGGAACCGG TGAGTACACC80

GTCCTTTCTT GGAGCAACCC120

GGCGTGCCCC CGCGAGATCA160

CGCGAAAGGC CTTGTGGTAC200

AGTGCCCCGG GAGGTCTCGT240

AGACCGTGCA AC

252 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 49 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: gj61329 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 49

GTTAGTACGA GTGTCGTGCA GCCTCCAGGA CCCCCCCTCC40

CGGGAGAGCC ATAGTGGTCT GCGGAACCGG TGAGTACACC80

GGAATCGCTG GGGTGACCGG GTCCTTTCTT GGAGTAACCC120

GCTCAATACC CAGAAATTTG GGCGTGCCCC CGCGAGATCA160

CTAGCCGAGT AGTGTTGGGT CGCGAAAGGC CTTGTGGTAC200

TGCCTGATAG GGTGCTTGCG AGTGCCCCGG GAGGTCTCGT240

AGACCGTGCA AC252 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 50 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA (A) COMPRIMENTO: 180 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: sa3 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 50

GTTAGTATGA GTGTCGAACA CGGGAGAGCC ATAGTGGTCT GGAATTGCCG GGATGACCGG GCTCAATGCC CGGAGATTTG CTAGCCGAGT AGTGTTGGGT

GCCTCCAGGA CCCCCCCTCC	40
GCGGAACCGG TGAGTACACC	8.0
GTCCTTTCTT GGATAAACCC	120
GGCGTGCCCC CGCGAGACTG	160
	180

(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 51 (i) CARACTERISTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 180 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: sa4 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID MO: 51

GTTAGTATGA GTGTCGAACA GCCTCCAGGA CCCCCCCTCC

CGGGAGAGCC ATAGTGGTCT GCGGAACCGG TGAGTACACC

GGAATTGCCG GGATGACCGG GTCCTTTCTT GGATAAACCC120

GCTCAATGCC CGGAGATTTG GGCGTGCCCC CGCGAGACTG160

CTAGCCGAGT AGTGTTGGGT180

-84(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 52 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 549 nucleôtidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM: (ATCC # 40394) (C) ISOLADO INDIVIDUAL: hcvT (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 52

ATGAGCACGA ATCCTAAACC ACACCAACCG TCGCCCACAG CGGTCAGATC GTTGGTGGAG GGCCCTAGAT TGGGTGTGCG AGCGGTCGCA ACCTCGAGGT GGCTCGTCGG CCCGAGGGCA TACCCTTGGC CCCTCTATGG CGGGATGGCT CCTGTCTCCC GGGCCCCACA GACCCCCGGC AAGGTCATCG ATACCCTTAC TGGGGTACAT ACCGCTCGTC TGCCAGGGCC CTGGCGCATG

TCAAAAAAAA AACAAACGTA40

GACGTCAAGT TCCCGGGTGG80

TTTACTTGTT GCCGCGCAGG120

CGCGACGAGA AAGACTTCCG160

AGACGTCAGC CTATCCCCAA200

GGACCTGGGC TCAGCCCGGG240

CAATGAGGGC TGCGGGTGGG280

CGTGGCTCTC GGCCTAGCTG320

GTAGGTCGCG CAATTTGGGT360

GTGCGGCTTC GCCGACCTCA400

GGCGCCCCTC TTGGAGGCGC440

GCGTCCGGGT TCTGGAAGAC480

GGCGTGAACT ATGCAACAGG GAACCTTCCT GGTTGCTCTT 520

TCTCTATCTT CCTTCTGGCC CTGCTCTCT549

-85(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 53 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 549 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: us5 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA : SEQ ID NO: 53

ATGAGCACGA ÁTCCTAAACC

ACACCAACCG TCGCCCACAG CGGTCAGATC GTTGGTGGAG GGCCCTAGAT TGGGTGTGCG AGCGGTCGCA ACCTCGAGGT GGCGCGTCGG CCCGAGGGCA TACCCTTGGC CCCTCTATGG CGGGATGGCT CCTGTCTCCC GGGCCCCACA GACCCCCGGC AAGGTCATCG ATACCCTTAC TGGGGTACAT ACCGCTCGTC TGCCAGGGCT CTGGCGCATG GGCGTGAACT ATGCAACAGG TCTCTATCTT CCTTCTGGCC

TCAAAGAAAA ACCAAACGTA40

GACGTCAAGT TCCCGGGTGG80

TTTACTTGTT GCCGCGCAGG120

CGCGACGAGG AAGACTTCCG160

AGACGTCAGC CTATCCCCAA200

GGACCTGGGC TCAGCCCGGG240

CAATGAGGGT TGCGGGTGGG280

CGTGGCTCTC GGCCTAGTTG320

GTAGGTCGCG CAATTTGGGT360

GTGCGGCTTC GCCGACCACA400

GGCGCCCCTC TTGGAGGCGC440

GCGTCCGGGT TCTGGAAGAC480

GAACCTTCCT GGTTGCTCTT520

CTGCTCTCT549

-86(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID N0: 54 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 549 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

( C) ISOLADO INDIVIDUAL: ausl (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA. SEQ ID NO: 54 a

ATGAGCACGA ATCCTAAACC TCAAAGAAAA ACCAAACGTA ACACCAACCG TCGCCCACAG. GACGTTAAGT TCCCGGGTGG	40 80
CGGTCAGATC GTTGGTGGAG TTTACTTGTT GCCGCGCAGG	• 120
GGCCCTAGAT TGGGTGTGCG CGCGACGAGG AAGACTTCCG	160
AGCGGTCGCA ACCTCGAGGT AGACGTCAGC CTATCCCTAA	200
GGCGCGTCGG CCCGAGGGCA GGACCTGGGC TCAGCCCGGG	240
TACCCCTGGC CCCTCTATGG TAATGAGGGT TGCGGATGGG	280
CGGGATGGCT CCTGTCCCCC CGTGGCTCTC GGCCTAGTTG	320
GGGCCCTACA GACCCCCGGC GTAGGTCGCG CAATTTGGGT	360
AAGGTCATCG ATACCCTCAC GTGCGGCTTC GCCGACCACA	400
TGGGGTACAT TCCGCTCGTT GGCGCCCCTC TTGGGGGCGC	440
TGCCAGGGCC CTGGCGCATG GCGTCCGGGT TCTGGAAGAC	480
GGCGTGAACT ATGCAACAGG GAATCTTCCT GGTTGCTCTT	520
TCTCTATCTT CCTTCTGGCC CTTCTCTCT	549

(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 55 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: sp2 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID ΝΘ : 55

ATGAGCACGA ATCCTAAACC TCAAAGAAAA ACCAAACGTA

ACACCAACCG. TCGCCCACAG GACGTCAAGT TCCCGGGTGG

CGGTCAGATC

GTTGGTGGAG

TTTACTTGTT

GCCGCGCAGG

120

GGCCCTAGAT

TGGGTGTGCG

CACGACGAGG

AAGACTTCCG

160

AGCGGTCGCA

ACCTCGAGGT

AGACGTCAGC

CCATCCCCAA

200

GGCTCGTCGA

CCCGAGGGCA

GGACCTGGGC

TCAGCCCGGG

240

TACCCTTGGC

CCCTCTATGG

CAATGAGGGC

TGCGGGTGGG

280

CGGGATGGCT

CCTGTCTCCC

CGTGGCTCTC

GGCCTAGCTG

320

GGGCCCCACA

GACCCCCGGC

GTAGGTCGCG

CAATTTGGGT

360

AAGGTCATCG

ATACCCTTAC

GTGCGGCTTC

GCCGACCTCA

400

TGGGGTACAT

ACCGCTCGTC

GGCGCCCCTC

TTGGAGGCGC

440

TGCCAGAGCC

CTGGCGCATG

GCGTCCGGGT

TCTGGAAGAC

480

GGCGTGAACT

ATGCAACAGG

GAACCTTCCC

GGTTGCTCTT

520

TCTCTATCTT

CCTTCTGGCC

CTGCTCTCT

549

(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 56 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: gm2 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 56

ATGAGCACGA	ATCCTAAACC	TCAAAGAAGA	ACCAAACGTA	40
ACACCAACCG	TCGCCCACAG	GACGTCAAGT	TCCCGGGTGG	80
CGGTCAGATC	GTTGGTGGAG	TTTACTTGTT	GCCGCGCAGG	120
GGCCCTAGAT	TGGGTGTGCG	CGCGACGAGG	AAGACTTCCG	160
AGCGGTCGCA	ACCTCGAGGT	AGACGTCAGC	CTATCCCCAA	200
GGCACGTCGG	CCCGAGGGTA	GGACCTGGGC	TCAGCCCGGG	240
TACCCTTGGC	CCCTCTATGG	CAATGAGGGT	TGCGGGTGGG	280
CGGGATGGCT	CCTGTCTCCC	CGCGGCTCTC	GGCCTAACTG	320
GGGCCCCACA	GACCCCCGGC	GTAGGTCGCG	CAATTTGGGT	360
AAGGTCATCG	ATACCCTTAC	GTGCGGCTTC	GCCGACCTCA	400
TGGGGTACAT	ACCGCTCGTC	GGCGCCCCTC	TTGGAGGCGC	440
TGCCAGGGCC	CTGGCGCATG	GCGTCCGGGT	TCTGGAAGAC	480
GGCGTGAACT	ATGCAACAGG	GAACCTTCCT	GGTTGCTCTT	520
TCTCTATCTT	CCTTCTGGCC	CTGCTCTCT		549

-89(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 57 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: i21 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 57

ATGAGCACGA ATCCTAAACC TCAAAGAAAA ACCAAACGTA ACACCAACCG TCGCCCACAG GACGTCAAGT TCCCGGGTGG	40 80
CGGTCAGATC GTTGGTGGAG TTTACTTGTT GCCGCGCAGG	120
GGCCCTAGAT TGGGTGTGCG CGCGACGAGG AAGACTTCCG	160
AGCGGTCGCA ACCTCGTGGT AGACGCCAGC CTATCCCCAA	200
GGCGCGTCGG CCCGAGGGCA GGACCTGGGC TCAGCCCGGG	240
TACCCTTGGC CCCTCTATGG CAATGAGGGT TGCGGGTGGG	280
CGGGATGGCT CCTGTCTCCC CGTGGCTCTC GGCCTAGCTG	320
GGGCCCCACA GACCCCCGGC GTAGGTCGCG CAATTTGGGT	360
AAGGTCATCG ATACCCTTAC GTGCGGCTTC GCCGACCTCA	400
TGGGGTACAT ACCGCTCGTC GGCGCCCCTC TTGGAGGCGC	440
TGCCAGGGCC CTGGCGCATG GCGTCCGGGT TCTGGAAGAC	480
GGCGTGAACT ATGCAACAGG GAACCTTCCT GGTTGCTCTT	520
TTTCTATTTT CCTTCTGGCC CTGCTCTCT	549

(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 58

* (i) CARACTERISTICAS DA SEQUÊNCIA:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: us4 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA. SEQ ID NO: 58

ATGAGCACGA	ATCCTAAACC	TCAAAGAAAA	ACCAAACGTA	40
ACACCAACCG	CCGCCCACAG	GACGTTAAGT	TCCCGGGCGG	80
TGGCCAGGTC	GTTGGTGGAG	TTTACCTGTT	GCCGCGCAGG	120
GGCCCCAGGT	TGGGTGTGCG	CGCGACTAGG	AAGACTTCCG	160
AGCGGTCGCA	ACCTCGTGGA	AGGCGACAAC	CTATCCCCAA	200
GGCTCGCCAG	CCCGAGGGCA	GGGCCTGGGC	TCAGCCCGGG	240
TACCCTTGGC	CCCTCTATGG	CAATGAGGGT	ATGGGGTGGG	280
CAGGATGGCT	CCTGTCACCC	CGTGGCTCTC	GGCCTAGTTG	320
GGGCCCCACG	GACCCCCGGC	GTAGGTCGCG	TAATTTGGGT	360
AAGGTCATCG	ATACCCTCAC	ATGCGGCTTC	GCCGACCTCA	400
TGGGGTACAT	TCCGCTCGTC	GGCGCCCCCC	TTAGGGGCGC	440
TGCCAGGGCC	TTGGCGCATG	GCGTCCGGGT	TCTGGAGGAC	480
GGCGTGAACT	ACGCAACAGG	GAATCTGCCC	GGTTGCTCCT	520
TTTCTATCTT	CCTCTTGGCT	CTGCTGTCC		549

(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 59'

(i) CARACTERISTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 549 nucleotidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: jhl (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 59

ATGAGCACAA ATCCTAAACC ACACCAACCG CCGCCCACAG TGGTCAGATC GTTGGTGGAG GGCCCCAGGT TGGGTGTGCG AGCGGTCGCA ACCTCGTGGA GGCTCGCCAG CCCGAGGGCA TACCCTTGGC CCCTCTATGG CAGGATGGCT CCTGTCACCC GGGCCCCACG GACCCCCGGC AAGGTCATCG ATACCCTCAC TGGGGTACAT TCCGCTTGTC TGCCAGGGCC CTGGCACATG GGCGTGAACT ATGCAACAGG

TCAAAGAAAA ACCAAACGTA40

GACGTCAAGT TCCCGGGCGG80

TTTACCTGTT GCCGCGCAGG120

CGCGACTAGG AAGACTTCCG160

AGGCGACAAC CTATCCCCAA200

GGGCCTGGGC TCAGCCCGGG240

CAACGAGGGT ATGGGGTGGG280

CGTGGCTCTC GGCCTAGTTG320

GTAGGTCGCG TAATTTGGGT360

ATGCGGCTTC GCCGACCTCA400

GGCGCCCCCC TAGGGGGCGC440

GTGTCCGGGT TCTGGAGGAC480

GAATTTGCCC GGTTGCTCTT520

-92(2)

INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 60 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 549 nucleótidos (B) TIPO: acido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN

T”* * (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: nac5 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 60

ATGAGCACAA ATCCTAAACC CCAAAGAAAA ACCAAACGTA

ACACCAACCG TCGCCCACAG GACGTCAAGT TCCCGGGCGG

TGGTCAGATC GTTGGTGGAG TTTACCTGTT GCCGCGCAGG

GGCCCCAGGT TGGGTGTGCG CGCGACTAGG AAGACTTCCG

AGCGGTCGCA ACCTCGTGGA AGGCGACAAC CTATCCCCAA

GGCTCGCCGG CCCGAGGGCA GGTCÇTGGGC TCAGCCCGGG

TACCCTTGGC CCCTCTATGG CAACGAGGGT ATGGGGTGGG

CAGGATGGCT CCTGTCACCC CGCGGCTCCC GGCCTAGTTG

GGGCCCCACG GACCCCCGGC GTAGGTCGCG TAATTTGGGT

AAGGTCATCG ATACCCTCAC ATGCGGCTTC GCCGACCTCA

120

160

200

240

280

320

360

400 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 61

-93ς (í) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 549 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN .— (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: arg2 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 61

ATGAGCACGA ATCCTAAACC TCAAAGAAAA ACCAAACGTA40

ACACCAACCG CCGCCCACAG GACGTCAAGT TCCCGGGCGG80

TGGTCAGATC GTTGGTGGAG TTTACTTGTT GCCGCGCAGG120

GGCCCCAGGT TGGGTGTGCG CGCGACTAGG AAGACTTCCG160

AGCGGTCGCA ACCTCGTGGA AGGCGACAAC CTATCCCCAA200

GGCTCGCCAG CCCGAGGGTA GGGCCTGGGC TCAGCCCGGG240

TACCCTTGGC CCCTCTATGG CAATGAGGGT ATGGGGTGGG280

CAGGGTGGCT CCTGTCCCCC CGÇGGCTCCC GGCCTAGTTG320

GGGCCCCACA GACCCCCGGC GTAGGTCGCG TAATTTGGGT360

AAGGTCATCG ATACCCTCAC ATGCGGCTTC GCCGACCTCA400

TGGGGTACAT TCCGCTCGTC GGCGCCCCCC TAGGGGGCGC440

TGCCAGGGCC CTGGCGCATG GCGTCCGGGT TCTGGAGGAC480

GGCGTGAACT ATGCAACAGG GAATCTGCCC GGTTGCTCTT520

TCTCTATCTT CCTCTTGGCT TTGCTGTCC549

(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID ND: 62 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 549 nucleótidos (B) TIPO: ãcido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:, (C) ISOLADO INDIVIDUAL: spl (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 62

ATGAGCACGA

ATCCTAAACC

TCAAAGAAAA

ACCAAACGTA

ACACCAACCG

CCGCCCACAG

GACGTCAAGT

TCCCGGGCGG

TGGTCAGATC

GTTGGTGGAG

TTTACCTGTT

GCCGCGCAGG

120

GGCCCCAGGT

TGGGTGTGCG

CGCGACTAGG

AAGACTTCCG

160

AGCGGTCGCA

ACCTCGTGGA

AGGCGACAAC

CTATCCCCAA

200

GGCTCGCCGG

CCCGAGGGCA

GGGCCTGGGC

TCAGCCCGGG

240

TATCCTTGGC

CAGGATGGCT

CCCTCTATGG

CCTGTCACCC

CAATGAGGGT

CGCGGCTCTC

CTGGGGTGGG

GGCCTAGCTG

280

320

GGGCCCTACC

GACCCCCGGC

GTAGGTCGCG

CAACTTGGGT

360

AAGGTCATCG

ATACCCTTAC

GTGCGGCTTC

GCCGACCTCA

400

TGGGGTACAT

TCCGCTCGTC

GGCGCCCCCC

TTAGGGGCGC

440

TGCCAGGGCC

CTGGCGCATG

GCGTCCGGGT

TCTGGAGGAC

480

GGCGTGAACT

ATGCAACAGG

GAATTTGCCC

GGTTGCTCTT

520

TCTCTATCTT

CCTCTTGGCT

TTGCTGTCC

549

(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 63 (i) CARACTERISTICAS DA SEQUÊNCIA:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: ghl (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 63

ATGAGCACGA ATCCTAAACC ACACCAACCG CCGCCCACAG TGGTCAGATC GTTGGTGGAG GGCCCCAGGT TGGGTGTGCG AGCGGTCGCA ACCTCGTGGA GGCTCGCCGG CCCGAGGGCA TACCCTTGGC CCCTCTATGG CAGGATGGCT CCTGTCACCC GGGCCCCACG GACCCCCGGC AAGATCATCG ATACCCTCAC TGGGGTACAT TCCGCTCGTC TGCCAGGGCC CTGGCGCATG GGCGTGAACT ATGCAACAGG

TCAAAGAAAA ACCAAACGTA40

GACGTCAAGT TCCCGGGCGG80

TTTACTTGTT GCCGCGCAGG120

CGCGACTAGG AAGACTTCCG160

AGGCGACAAC CTATCCCCAA200

GGGCCTGGGC TCAGCCCGGG240

CAATGAGGGT ATGGGGTGGG280

CGTGGTTCTC GGCCTAGTTG320

GTAGGTCGCG CAATTTGGGT360

GTGCGGCTTC GCCGACCTCA400

GGCGCCCCCC TAGGGGGCGC440

GCGTCCGGGT TCTGGAGGAC480

GAATCTGCCC GGTTGCTCCT520

TTTCTATCTT CCTTCTGGCT TTGCTGTCC

549 (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 64 z

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: il5 (^χ i) ^{: :} AêêAAACGTA 4 O

ACACCAACCG CCGCCCACAG GACGTCAAGT TCCCGGGCGG80

TGGTCAGATC GTTGGTGGAG TTTACCTGTT GCCGCGCAGG120

GGCCCCAGGT TGGGTGTGCG CGCGACTÃGG AAGACTTCCG160

AGCGGTCGCA ACCTCGTGGA AGGCGACAAC CTATCCCCAA200

GGCTCGCCAG CCCGAGGGCA GGGCCTGGGC TCAGCCCGGG240

TACCCCTGGC CCCTCTATGG CAATGAGGGT ATGGGGTGGG280

CAGGATGGCT CCTGTCACCC CGCGGCTCCC GGCCTAGTTG320

GGGCCCCAAA GACCCCCGGC GTAGGTCGCG TAATTTGGGT360

AAGGTCATCG ATACCCTCAC ATGCGGCTTC GCCGACCTCA400

TGGGGTACAT TCCGCTCGTC GGCGCCCCCT TAGGGGGCGC440

TGCCAGGGCC CTGGCGGATG GCGTCCGGGT TCTGGAGGAC480

GGCGTGAACT ATGCAACAGG GAATCTACCC GGTTGCTCTT520

TCTCTATCTT CCTCTTGGCT TTGCTGTCC549

(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 65 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL : ilO (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 65

ATGAGCACAA ATCCTAAACC TCAAAGAAAA ACCAAAAGAA 40 ACACTAACCG CCGCCCACAG GACGTCAAGT TCCCGGGCGG 80 TGGCCAGATC GTTGGCGGAG TATACTTGCT GCCGCGCAGG 120 GGCCCGAGAT TGGGTGTGCG CGCGACGAGG AAAACTTCCG 160 AACGATCCCA GCCACGCGGA AGGCGTCAGC CCATCCCTAA 200 AGATCGTCGC ACCGCTGGCA AGTCCTGGGG AAGGCCAGGA 240 TATCCTTGGC CCCTGTATGG GAATGAGGGT CTCGGCTGGG 280 CAGGGTGGCT CCTGTCCCCC CGTGGCTCTC GCCCTTCATG 320 GGGCCCCACT GACCCCCGGC ATAGATCGCG CAACTTGGGT 360 AAGGTCATCG ATACCCTAAC GTGCGGTTTT GCCGACCTCA 400 TGGGGTACAT TCCCGTCATC GGCGCCCCCG TTGGAGGCGT 440 TGCCAGAGCT CTCGCCCAÇG GAGTGAGGGT TCTGGAGGAT 480 GGGGTAAATT ATGCAACAGG GAATTTGCCC GGTTGCTCTT 520 TCTCTATCTT TCTCTTAGCC CTCTTGTCT 549

-98(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 66 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 510 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (vi) ORIGEM:

(C) ISOLADO INDIVIDUAL: arg6 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 66

ATGAGCACAA ATCCTCAACC ACACTAACCG CCGCCCACAG TGGTCAGATC GTTGGCGGAG GGCCCCAGGT TGGGTGTGCG AACGGTCCCA GCCACGTGGG AGATCGGCGC ACCACTGGCA TACCCTTGGC CCCTGTATGG CAGGGTGGCT CCTGTCCCCC GGGCCCCACT GACCCCCGGC AAGGTCATCG ATACCCTAAC TGGGGTACAT TCCCGTCGGT CGCCAGAGCC CTTGCCCATG GGGATAAATT ATGCAACAGG

TCAAAGAAAA. ACCAAAAGAA 40 GACGTCAAGT TCCCGGGCGG 80 TATACTTGTT GCCGCGCAGG 120 CGCGACGAGG AAAACTTCCG 160 AGGCGCCAGC CCATCCCCAA 200 AGTCCTGGGG GAAGCCAGGA 240 GAATGAGGGT CTCGGCTGGG 280 CGCGGTTCTC GCCCTTCATG . 320 ATAGATCACG CAACTTGGGT 360 GTGTGGTTTT GCCGACCTCA 400 GGTGCCCCCG TTGGTGGTGT 440 GGGTGAGGGT TCTGGAAGAC 480 GAATCTGCCC 510

-99(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 67

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 29 nucleotidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 67

CAAACGTAAC ACCAACCGRC GCCCACAGG (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 68 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 24 nucleotidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 68

ACAGAYCCGC AKAGRTCCCC CACG (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 69 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 30 nucleotidos (B) TIPO ácido nucleico

(C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID N0:69

CGAACCTCGA GGTAGACGTC AGCCTATCCC (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID N0:70 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 30 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 70

GCAACCTCGT GGAAGGCGAC AACCTATCCC (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 71 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA (A) COMPRIMENTO: 30 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 71

GTCACCAATG ATTGCCCTAA CTCGAGTATT

-101(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID Ν'Θ: 72 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 26 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 72

GTCACGAACG ACTGCTCCAA CTCAAG (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 73 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 28 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 73

TGGACATGAT CGCTGGWGCY CAFTGGGG (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 74 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 28 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear

-102-

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO:

TGGAYATGGT GGYGGGGGCY CACTGGGG (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 75 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 20 nucleótidos (B) TIPO: ãcido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 75

ATGATGAACT GGTCVCCYAC (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 76 (i, USTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 26 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA : simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 76

ACCTTVGCCC AGTTSCCCRC CATGGA (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 77

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 22 nucleotidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA MOLÉCULA: SEQ ID NO: 77

AACCCACTCT ATGYCCGGYC AT (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID MO: 78 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 18 nucleotidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID N©:78

GAATCGCTGG GGTGACCG (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 79 (í) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 28 nucleotidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 79

CCATGAATCA CTCCCCTGTG AGGAACTA

(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 80 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 18 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO 80

TTGCGGGGGC ACGCCCAA (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 81 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 81

YGAAGCGGGC ACAGTCARRC AAGARAGCAG GGC

-105(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 82 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID ΝΘ: 82

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi

DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ

ID NO:

RATACTCGAG TTAGGGCAAT CATTGGTGAC RTG (2)

INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ

ID N0: 84

AGYRTGCAGG ATGGYATCRK BCGYCTCGTA

CAC (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA:ID NO:

CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A)

COMPRIMENTO: 33 nucleótidos

TIPO: ácido nucleico (C)

CADEIA: simples

TOPOLOGIA: linear (ii)

TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi)

DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 85

GTTRCCCTCR CGAACGCAAG GGACRCACCC CGG (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 86 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 86

CGTRGGGGTY AYCGCCACCC AACACCTCGA GRC (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 87 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 87

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N0: 88

CCCGACAAGC AGATCGATGT GACGTCGAAG CTG (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 89 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 89

CCCCACGTAG ARGGCCGARC AGAGRGTGGC GCY (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID N0: 90 (i)

CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A)

COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B)

TIPO: ácido nucleico (C)

CADEIA: simples (D)

TOPOLOGIA: linear (ii)

TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi)

DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID

N0: 90

YTGRCCGACA AGAAAGACAG ACCCGCAYAR GTC (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID N0:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A)

COMPRIMENTO: 33 nucleótidos

TIPO: ácido nucleico

CADEIA: simples (D)

TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ

CGTCCAGTGG YGCCTGGGAG AGAAGGTGAA

ID

CAG (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 92 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleotidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 92

GCCGGGATAG ATRGARCAAT TGCARYCTTG CGT (2) INFORMAÇÃO DA SEQUENCIA ID NO: 93 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleotidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA : SEQ ID NO: 93

CATATCCAT GCCATGCGGT GACCCGTTAY ATG (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO; 94 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleotidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN

(xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 94

YACCAAYGCC GTCGTAGGGG ACCARTTCAT CAT (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID N0: 95 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 95

GATGGCTTGT GGGATCCGGA GYASCTGAGC YAY (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 96 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N0: 96

GACTCCCCAG TGRGCWCCAG CGATCATRTC CAW (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 97 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N0: 97

CCCCACCATG GAGAAATACG CTATGCCCGC YAG (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 98 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 98

TAGYAGCAGY ACTAACYARGA CCTTCGCCCA GTT (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID Mg: 99 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA :

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID ΝΘ: 99

GSTGACGTGR GTKTCYGCGT CRACGCCGGC RAA

(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 100 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID N0: 100

GGAAGYTGGG ATGGTYARRC ARGASAGCAR AGC (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 101 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: simples (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID N©: 101

GTAYAYYCCG GACRCGTTGC GCACTTCRTA AGC (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID N@: 102 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

-113-

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID MD: 102

AATRCTTGMG TTGGAGCART CGTTYGTGAC ATG (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 103 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleotidos (B) TIPO: ácido nucleico^- (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA : SEQ ID ΝΘ: 103

RGYRTGCATG ATCAYGTCCG YYGCCTCATA CAC (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 104 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleotidos (B) TIPO: acido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 104

RTTGTYYTCC CGRACGCARG GCACGCACCC RGG

(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 105 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleotidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 105

CGTGGGRGTS AGCGCYACCC AGCARCGGGA GSW (2) INFORMAÇÃO DA SEQUENCIA: ID N0: 106 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleotidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID N@: 106

YGTRGTGGGG AYGCTGKHRT TCCTGGCCGC VAR (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID N@: 107 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 107

CCCRACGAGC AARTCGACRT GRCGTCGTAW TGT (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID ΜΘ: 108 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 108

YCCCACGTAC ATAGCSGAMS AGARRGYAGC CGY (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID MO: 109 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA :

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 109

CTGGGAGAYR AGRAAAACAG ATCCGCARAG RTC (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID Nê: 110 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

-116-

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N0: 110

YGTCTCRTGC CGGCCAGSBG AGAAGGTGAA YAG (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID N0: 111 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID N0: 111

GCCGGATAG AKKGAGCART TGCAKTCCTG YAC (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID ΝΘ: 112 (i) CARACETRISTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN

-117(xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 112 CATATCCCAA GCCATRCGRT GGCCTGAYAC CTG

(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID N^Q: 113 (í) CARACTERISTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 n Lleotidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 113

CACTARGGCT GYYGTRGGYG ACCAGTTCAT CAT (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID N@: 114 (i) CARACTERISTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleotidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID ΝΘ: 114

GACRGCTTGT GGGATCCGGA GTAACTGCGA YAC (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID ΝΘ: 115 (i) CARACTERISTICAS DA SEQUENCIA :

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleotidos

-118-

(B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID N©: 115

GACTCCCCAG TGRGCCCCCG CCACCATRTC CAT (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID N0: 116 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 116

SCCCACCATG GAWWAGTAGG CAAGGCCCGC YAG (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 117 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 117

GAGTAGCATC ACAATCAADA CCTTAGCCCA GTT

(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 118 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 118

YGWCRYGYRG GTRTKCCCGT CAACGCCGGC AAA (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 119 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID ΝΘ: 119

TCCTCACAGG GGAGTGATTC ATGGTGGAGT GTC (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID ΜΘ: 120 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 120

ATGGCTAGAC GCTTTCTGCG TGAAGACAGT AGT (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID MO: 121 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 121

GCCTGGAGGC TGCACGRCAC TCATACTAAC GCC (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 122 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID ΝΘ: 122

CGCAGACCAC TATGGCTCTY CCGGGAGGGG GGG

(2) INFORMAÇÃO DA SEQUENCIA ID NO: 123 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 123

TCRTCCYGGC AATTCCGGTG TACTCACCGG TTC (2) INFORMAÇÃO DA SEQUENCIA ID NO: 124 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NQ: 124

GCATIGAGCG GGTTDATCCA AGAAAGGACC CGG (2) INFORMAÇÃO DA SEQUENCIA ID NO: 125 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

-122 ΐ

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 125

AGCAGTCTYG CGGGGGCACG CCCAARTCTC CAG (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 126 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleotidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 126

ACAAGGCCTT TCGCGACCCA ACACTACTCG GCT (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID N@: 127 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleotidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA : SEQ ID NO: 127

GGGGCACTCG CAAGCACCCT ATCAGGCAGT ACC (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID N0: 128 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleotidos

(B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID ND: 128

YGTGCTCATG RTGCACGGTC TACGAGACCT CCC (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID N0: 129 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 129

GTTACGTTTG KTTYTTYTTT GRGGTTTRGG AWT (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 130 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 130

CGGGAACTTR ACGTCCTGTG GGCGRCGGTT GGT (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 131 (i) CARACTERISTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 131

CARGTAAACT CCACCRACGA TCTGRCCRCC RCC (2)

INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO:

132 (i) CARACTERISTICAS DA SEQUÊNCIA (A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 132

RCGCACACCC AAYCTRGGGC CCCTGCGCGG CAA (2)

INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NQ:

133 (i) CARACTERISTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos

(B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 133

AGGTTGCGAC CGCTCGGAAG TCTTYCTRGT CGC (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID NO: 134 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 134

RCGHRCCTTG GGGATAGGCT GACGTCWACC TCG (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUÊNCIA ID N0: 135 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

-126

(xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID N®: 135

RCGHRCCTTG GGGATAGGTT GTCGCCWTCC ACG (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NU: 136 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleotidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID ΝΘ: 136

YCCRGGCTGR GCCCAGRYCC TRCCCTCGGR YYG (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID ΝΘ: 137 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA :

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleotidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NU: 137

BSHRCCCTCR TTRCCRTAGA GGGGCCADGG RTA (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 138 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleotidos (B) TIPO: ácido nucleico

(C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 138

GCCRCGGGGW GACAGGAGCC ATCCYGCCCA CCC (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 139 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO; ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA ID NO: 139

CCGGGGGTCY GTGGGGCCCC AYCTAGGCCG RGA (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 140 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 140

ATCGATGACC TTACCCAART TRCGCGACCT RCG

-128-

(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID ND: 141 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 141

CCCCATGAGR TCGGCGAAGC CGCAYGTRAG GGT (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 142 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 142

GCCYCCWARR GGGGCGCCGA CGAGCGGWAT RTA (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 143 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA:SEQ ID N0: 143

AACCCGGACR CCRTGYGCCA RGGCCCTGGC AGC (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID ΝΘ: 144 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA; ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 144

RTTCCCTGTT GCATAGTTCA CGCCGTCYTC CAG (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID N0; 145 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 33 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID N©: 145

CARRAGGAAG AKAGAGAAAG AGCAACCRGG MAR

(2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID NO: 146 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA:

(A) COMPRIMENTO: 20 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID NO: 146

AGGCATAGGA CCCGTGTCTT (2) INFORMAÇÃO SOBRE A SEQUENCIA ID ΝΘ: 147 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 20 nucleótidos (B) TIPO: ácido nucleico (C) CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID Nô: 147

CTTCTTTGGA GAAAGTGGTG

Claims

1. - Composiçoes farmacêuticas, caracterizadas pelo facto de conterem ácido nucleico de ocorrência não natu ral com uma sequência nucleotídica não-HCV-1 comportando oito ou mais nucleótidos correspondendo a uma sequência nucle<> tídica do genoma do vírus da hepatite C.

2. - Composições farmacêuticas de acordo com a reivindicação 1, caracterizadas pelo facto de a sequência nu cleotídica citada antes, que corresponde a uma sequência nucleotídica não-HCV-1 do genoma do vírus da hepatite C, ser escolhida entre as regiões que consistem na região NS5, região-1 do invólucro, região S'UT e região nuclear.

3. - Composições farmacêuticas de acordo com a reivindicação 1, caracterizadas pelo facto de a sequência nu cleotídica citada antes, que corresponde a uma sequência não-HCV-1 do genoma do vírus da hepatite C, corresponder a uma sequência da região NS5.

. 2

4. - Composições farmacêuticas de acordo com a reivindicação 3, caracterizadas pelo facto de a sequência nu cleotídica citada antes, correspondendo a uma sequência não-HCV-1 do genoma do vírus da hepatite C, ser escolhida en tre as sequências numeradas de 2 a 22.

5. - Composiçoes farmacêuticas de acordo com a reivindicação 1, caracterizadas pelo facto de a sequência nu cleotídica citada antes, que corresponde a uma sequência nucleotídica não-HCV-1 do genoma do vírus da hepatite C, corres, ponder a uma sequência na região-1 do invólucro.

6. - Composições farmacêuticas de acordo com a reivindicação 5, caracterizadas pelo facto de a sequência nu cleotídica citada antes, que corresponde a uma sequência nucleotídica não-HCV-1 do genoma do vírus da hepatite C, corres, ponder a uma sequência entre as sequências números 24-32.

7. - Composições farmacêuticas de acordo com a reivindicação 1, caracterizadas pelo facto de pelo menos uma sequência que corresponde a uma sequência nucleotídica não-HCV-1 do genoma do vírus da hepatite C, cprresponder a uma sequência da região 5'UT.

8. - Composições farmacêuticas de acordo com a reivindicação 7, caracterizadas pelo facto de a sequência nucleotídica citada antes, que corresponde a uma sequência não-HCV-1 do genoma do vírus da hepatite C, corresponder a uma sequência entre as sequências números 34 a 51.

9. - Composições farmacêuticas de acordo com a reivindicação 1, caracterizadas pelo facto de a sequência nucleotídica citada antes, que corresponde a uma sequência nucleotídica-não-HCV-1 do genoma do vírus da hepatite B corres ponder a uma sequência na região do núcleo.

10. - Composições farmacêuticas de acordo com a reivindicação 9, caracterizadas pelo facto de a referida sequência nucleotídica, que corresponde a uma sequência não-HCV-1 do genoma do vírus da hepatite C, corresponder a uma sequência entre as sequências números 53 a 66.

11. - Composições farmacêuticas de acordo com a reivindicação 1, caracterizadas pelo facto de o referido ácido nucleico de ocorrência não natural, conter uma sequência nucleotídica que corresponde a um ou mais genotipos do vírus da hepatite C.

12, - Composições farmacêuticos de acordo com a reivindicação 11, caracterizadas pelo facto de o ácido nucleico citado antes de ocorrência não natural conter uma sequência que corresponde a uma sequência de um primeiro genotipo defini, do substancialmente pelas sequências números 1 a 6 na região NS5, sequências 23 a 25 na região 1 do invólucro, sequências

33 a 38 na região 5'UT e sequências 52 a 57 na região do núcleo.

13, - Composições farmacêuticas de acordo com a reivindicação 11, caracterizadas pelo facto de o ãcido nucleico de ocorrência não natural citado antes conter uma sequência que corresponde a uma sequência de um segundo genotipo que ê substancialmente definido pelas sequências números 7 a 12 na região NS5, sequências 26 a 28 na região 1 do invólucro, sequências números 39 a 45 na região 5'UT e sequências 58 a 64 na região do núcleo.

14, - Composições farmacêuticas de acordo com a reivindicação 11, caracterizadas pelo facto de o ácido nucleico de ocorrência não natural citado antes conter uma sequência que corresponde a uma sequência de um terceiro genotipo definido substancialmente pelas sequências números 3 a 17 na região NS5, sequência 32 na região 1 do invólucro, sequências

46 a 47 na região 5'UT e sequências 65 a 66 na região do núcleo.

15. - Composições farmacêuticas de acordo com a reivindicação 11, caracterizadas pelo facto de o ácido nucleico de ocorrência não natural citado antes conter uma sequência que corresponde a uma sequência do quarto genotipo definido substancialmente pelas sequências numeros 20 a 22 na região NS5, sequências 29 a 31 na região 1 do invólucro e sequências 48 a 49 na região 5'UT.

16. - Composições farmacêuticas de acordo com a reivindicação 11, caracterizadas pelo facto de o ácido nuclei co de ocorrência não natural citado antes conter uma sequência que corresponde a uma sequência de um quinto genotipo que è substancialmente definido pelas sequências numeros 18 a 19 na região WS5 e 50 a 51 na região 5’UT.

17. - Composições farmacêuticas de acordo com a reivindicação 1, caracterizadas pelo facto de o ácido nucleico de ocorrência não natural citado antes ser capaz de iniciar uma reacção para a síntese de ácido nucleico para formar um ãci do nucleico contendo uma sequência nucleotídica correspondente ao vírus da hepatite C.

18. - Composições farmacêuticas de acordo com a reivindicação 1, caracterizadas pelo facto de o ácido nucleico de ocorrência não natural citado antes conter um marcador que

V ta permite a detecção de um produto de hibridação.

19. ~ Composições farmacêuticas de acordo com a reivindicação 1, caracterizadas pelo facto de o ácido nuclei_ co de ocorrência não natural citado antes conter um suporte para a separação de um produto de hibridação de uma solução.

20. - Composições farmacêuticas de acordo com a reivindicação 1, caracterizadas pelo facto de o ãcido nucleji co de ocorrência não natural citado antes impedir a transcrição ou a translação de ácido nucleico virai.

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