PL234086B1

PL234086B1 - 4'-O-β-D-4'''-O-metylo-glukopiranozylo-4,2'-dihydroksy-3'-[3"-metylobutylo]-6'-metoksy-α,β-dihydrochalkon i sposób otrzymywania 4'-O-β-D-4'''-O-metylo-glukopiranozylo-4,2'-dihydroksy-3'-[3"-metylobutylo]-6'-metoksy-α,β-dihydrochalkonu

Info

Publication number: PL234086B1
Application number: PL418558A
Authority: PL
Inventors: Jarosław Popłoński; Sandra Sordon; Tomasz Tronina; Ewa Huszcza
Original assignee: Wrocław University Of Environmental And Life Sciences
Priority date: 2016-09-09
Filing date: 2016-09-09
Publication date: 2020-01-31
Also published as: PL418558A1

Description

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku jest 4'-O-|i-D-4 '-O-metylo-glukopiranozylo-4,2^,-dihydroksy-3'-[3-metyIobutyIo]-6'-metoksy-a,3-dihydrochalkon, o wzorze 2 przedstawionym na rysunku oraz sposób otrzymywania 4'-O-3-

- D- 4 ' ' ' -O-metylo-glukopiranozylo-4,2' -dihydroksy-3' -[3' ' -metylobutylo]-6 ' -metoksy-a^-dihydrochalkonu.

Związek ten jest biologicznie czynny i może mieć zastosowanie w przemyśle spożywczym i farmaceutycznym.

W dostępnej literaturze nie znaleziono doniesień o przedmiotowym związku ani o sposobach jego otrzymywania.

Glukozylacja flawonoidów zwiększa ich hydrofilowość, co można wykorzystać podczas produkcji rozpuszczalnych w wodzie nutraceutyków. Związek według wynalazku jest potencjalnym materiałem wyjściowym dla dalszych strukturalnych modyfikacji, które mogą okazać się użyteczne w produkcji aktywniejszych związków.

Istotą wynalazku jest 4 '-O-|i-D-4'' ' -O-metylo-glukopiranozylo-4,2' -dihydroksy-3'-[3 ' ' -metylobutylo]-6' -

- metoksy-a,3-dihydrochaIkon.

Istotą wynalazku jest także sposób otrzymywania tego związku, polegający na tym, że substrat, którym jest 4,4’,2' -trihydroksy-3'-[3' ' -metylobutylo]-6'-metoksy-a,3-dihydrochalkon, poddaje się transformacji mikrobiologicznej, w wyniku czego otrzymuje się 4 ' -O-3-D-4 ' ' ' -O-metylo-glukopiranozylo-4,2 ' -

- dihydroksy-3'-[3 ' ' -metylobutylo]-6 ' -metoksy-a,3-dihydrochalkon. Grzyby strzępkowe z gatunku Beauveria bassiana namnaża się w płynnym podłożu mikrobiologicznym, przy ciągłym mieszaniu reagentów, w temperaturze 12-40°C. Następnie do narośniętej hodowli dodaje się substrat i dalej prowadzi się proces, aż do całkowitego zużycia substratu. Po zakończeniu transformacji roztwór transformacyjny ekstrahuje się rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą, oddziela frakcję organiczną, osusza bezwodnym siarczanem magnezu, odparowuje rozpuszczalnik i tak otrzymany surowy produkt oczyszcza się za pomocą technik chromatograficznych.

Korzystnie jest, gdy grzybem jest Beauveria bassiana AM278.

Korzystnie także jest, gdy reakcję prowadzi się w temperaturze 26°C.

Postępując zgodnie z wynalazkiem, w wyniku działania układu enzymatycznego zawartego w żywych komórkach kultury Beauveria bassiana następuje reakcja glikozylacji w substracie.

Zasadniczą zaletą wynalazku jest otrzymanie, w łagodnych warunkach 4 ' -O-3-D-4 ' ' ' -O-metylo-

- glukopiranozylo-4,2'-dihydroksy-3'-[3 ' ' -metylobutylo]-6' -metoksy-a,3-dihydrochalkonu, jako głównego produktu reakcji w kulturze Beauveria bassiana. Wydajność reakcji wynosi 60%.

Wynalazek jest bliżej objaśniony w przykładzie wykonania.

P r z y k ł a d 1. Do kolby o pojemności 300 cm³, w której znajduje się 100 cm³ sterylnej pożywki zawierającej 3 g glukozy i 1 g aminobaku na 1 dm³ wody destylowanej, wprowadza się grzyby strzępkowe Beauveria bassiana AM278. Po 6 dniach wzrostu drobnoustrojów w temperaturze 26°C i przy ciągłym wstrząsaniu, dodaje się 15 mg 4,4’,2 ' -trihydroksy-3-[3 ' ' -metylobutylo]-6 ' -metoksy-a,3-dihydrochalkonu, o wzorze 1, rozpuszczonego w 1,5 cm³ dimetylosulfotlenku. Transformację prowadzi się przy ciągłym wstrząsaniu przez 10 dób. Po tym czasie hodowlę zakwasza się 1-molowym kwasem chlorowodorowym do pH 4,5. Następnie, uzyskany roztwór transformacyjny ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu, osusza bezwodnym siarczanem magnezu i odparowuje rozpuszczalnik. Uzyskuje się 19,06 mg surowego ekstraktu, który oczyszcza się chromatograficznie, używając jako eluentu mieszaninę chloroform : metanol w stosunku objętościowym 1:1. Po oczyszczeniu otrzymuje się 13,42 mg 4 '-O-3-D-4 ' ' ' O-metylo-glukopiranozylo-4,2 ' -dihydroksy-3 ' -[3 ' ' -metylobutylo]-6 ' -metoksy-a,3-dihydrochalkonu, o wzorze 2 z wydajnością 60%.

Uzyskany produkt charakteryzuje się następującymi danymi spektralnymi:

¹H NMR (600 MHz, aceton-d6) δ: 0,93 (3H, d, J = 6,6 Hz, H-4’’), 0,94 (3H, d, J = 5,4 Hz, H-5’’), 1,351,42 (2H, m, H-2’’), 1,57 (1H, m, H-3’’), 2,58 (1H, m, 2,68 (1H, m, H-1’’b), 2,86 (2H, m, H-β), 3,28 (2H, m, H-a), 3,13 (1H, m, H-4’”), 3,55 (3H, s, C4’”-OCH3), 3,56 (2H, m, H-2’”, H-5’”), 3,63 (1H, m, H-3’”), 3,67 (1H, m, H-6’’’a), 3,87 (1H, m, H-6’’’b), 3,91 (3H, s, C6’-OCH3), 5,05 (1H, d, J = 7,7 Hz, H-1 ’’’), 6,44 (1H, s, H-5’), 6,75 (2H, m, J = 8,1 Hz, H-3, H-5), 7,08 (2H, m, J = 8,1 Hz, H-2, H-6), 14,03 (C2’-OH);

¹³C NMR (150 MHz, aceton-d6) δ: 20,91 (C-1’’), 22,95 (C-5’’), 23,04 (C-4’’), 28,90 (C-3’’), 30,36 (C-β), 38,95 (C-2’’), 47,20 (C-a), 56,15 (C6’-OCH3), 60,57 (C4’’’-OCH3), 62,33 (C-6’’’), 74,92 (C-2’’’), 77,49 (C-5’’’), 78,41 (C-3’’’), 80,58 (C-4’’’), 91,07 (C-5’), 101,22 (C-1’’’), 106,91 (C-1’), 112,37 (C-3’), 116,03 (C-3, C-5), 130,13 (C-2, C-6), 133,19 (C-1), 156,48 (C-4), 162,01 (C-6’), 162,52 (C-4’), 164,57 (C-2’), 206,27 (C = 0).

PL 234 086 B1

Claims

Zastrzeżenia patentowe

1. 4'-O-3-D-4”'-O-metylo-glukopiranozylo-4,2'-dihydroksy-3'-[3”-metylobutylo]-6'-metoksy-a,3-

- dihydrochalkon, o wzorze 2.
2. Sposób otrzymywania 4'-O-3-D-4'”-O-metylo-glukopiranozylo-4,2'-dihydroksy-3'-[3-metylobutylo]-6'-metoksy-a,3-dihydrochalkonu, znamienny tym, że na drodze reakcji mikrobiologicznej transformacji substratu, którym jest 4,4’,2'-trihydroksy-3'-[3”-metylobutylo]-6'-metoksy-a, β-dihydrochalkon o wzorze 1, otrzymuje się w 4'-O-3-D-4'”-O-metylo-glukopiranozylo-4,2'-dihydroksy-3'-[3”-metylobutylo]-6'-metoksy-a,β-dihydrochalkon o wzorze 2, w taki sposób, że grzyby z gatunku Beauveria bassiana, namnaża się w płynnym podłożu mikrobiologicznym, charakterystycznym dla grzybów strzępkowych, przy ciągłym mieszaniu reagentów, w temperaturze 12-40°C, po czym po upływie od 3 do 7 dni, do narośniętej hodowli dodaje się substrat i dalej prowadzi proces, aż do całkowitego zużycia substratu, po czym po zakończeniu transformacji roztwór transformacyjny ekstrahuje się rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą, oddziela frakcję organiczną, odwadnia, odparowuje rozpuszczalnik i tak otrzymany surowy produkt oczyszcza się za pomocą technik chromatograficznych, w wyniku czego otrzymuje się czysty produkt, którym jest 4'-O-3-D-4”'-O-metylo-

- glukopiranozylo-4,2'-dihydroksy-3'-[3”-metylobutylo]-6'-metoksy-a,β-dihydrochalkon.
3. Sposób według, zastrz. 2, znamienny tym, że grzybem jest Beauveria bassiana AM278.
4. Sposób według, zastrz. 2, znamienny tym, że proces prowadzi się w temperaturze 26°C.

PL 234 086 Β1