PL234137B1

PL234137B1 - 7-O-β-D-4''-O-metylo-glukopiranozylo-5-hydroksy-4'-metoksyizoflawon i sposób otrzymywania 7-O-β-D-4''-O-metylo-glukopiranozylo-5-hydroksy-4'-metoksyizoflawonu

Info

Publication number: PL234137B1
Application number: PL418561A
Authority: PL
Inventors: Sandra Sordon; Jarosław Popłoński; Tomasz Tronina; Ewa Huszcza
Original assignee: Wrocław University Of Environmental And Life Sciences
Priority date: 2016-09-05
Filing date: 2016-09-05
Publication date: 2020-01-31
Also published as: PL418561A1

Description

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku jest 7-O-^-D-4-O-metylo-glukopiranozylo-5-hydroksy-4'-metoksyizoflawon, o wzorze 2 przedstawionym na rysunku oraz sposób otrzymywania 7-O-^-D-4-O-metylo-glukopiranozylo-5-hydroksy-4'-metoksyizoflawonu.

Związek ten jest biologicznie czynny i może mieć zastosowanie w przemyśle spożywczym i farmaceutycznym.

W dostępnej literaturze nie znaleziono doniesień o przedmiotowym związku ani o sposobach jego otrzymywania.

Glukozylacja flawonoidów zwiększa ich hydrofilowość, co można wykorzystać podczas produkcji rozpuszczalnych w wodzie nutraceutyków. Związek według wynalazku jest potencjalnym materiałem wyjściowym dla dalszych strukturalnych modyfikacji, które mogą okazać się użyteczne w produkcji aktywniejszych związków.

Istotą wynalazku jest 7-O-^-D-4-O-metylo-glukopiranozylo-5-hydroksy-4'-metoksyizoflawon.

Istotą wynalazku jest także sposób otrzymywania tego związku, polegający na tym, że substrat, którym jest 5,7-dihydroksy-4'-metoksyizoflawon, poddaje się transformacji mikrobio logicznej, w wyniku czego, otrzymuje się 7-O-^-D-4-O-metylo-glukopiranozylo-5-hydroksy-4'-metoksyizoflawon. Grzyby strzępkowe z gatunku Beauveria bassiana namnaża się w płynnym podłożu mikrobiologicznym, przy ciągłym mieszaniu reagentów, w temperaturze 12-40°C, Następnie do narośniętej hodowli dodaje się substrat i dalej prowadzi się proces, aż do całkowitego zużycia substratu. Po zakończeniu transformacji roztwór transformacyjny ekstrahuje się rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą, oddziela frakcję organiczną, osusza bezwodnym siarczanem magnezu, odparowuje rozpuszczalnik i tak otrzymany surowy produkt oczyszcza się za pomocą technik chromatograficznych.

Korzystnie jest, gdy reakcję prowadzi się w temperaturze 26‘C.

Postępując zgodnie z wynalazkiem, w wyniku działania układu enzymatycznego zawartego w żywych komórkach kultury Beauveria bassiana następuje reakcja glikozylacji w substracie.

Zasadniczą zaletą wynalazku jest otrzymanie, w łagodnych warunkach 7-O-/>-D-4-O-metylo-glukopiranozylo-5-hydroksy-4'-metoksyizoflawonu, jako głównego produktu reakcji w kulturze Beauveria bassiana. Wydajność reakcji osiąga poziom ponad 30%.

Wynalazek jest bliżej objaśniony w przykładzie wykonania.

P r z y k ł a d 1

Do kolby o pojemności 300 cm³, w której znajduje się 100 cm³ sterylnej pożywki zawierającej 3 g glukozy i 1 g aminobaku na 1 dm³ wody destylowanej, wprowadza się grzyby strzępkowe Beauveria bassiana AM278. Po 6 dniach wzrostu drobnoustrojów w temperaturze 26’C i przy ciągłym wstrząsaniu, dodaje się 15 mg 5,7-dihydroksy-4'-metoksyizoflawonu, o wzorze 1, rozpuszczonego w 1,5 cm³dimetylosulfotlenku. Transformację prowadzi się przy ciągłym wstrząsaniu przez 10 dób. Po tym czasie hodowlę zakwasza się 1-molowym kwasem chlorowodorowym do pH 4,5. Następnie, uzyskany roztwór transformacyjny ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu, osusza bezwodnym siarczanem magnezu i odparowuje rozpuszczalnik. Uzyskuje się 19,33 mg surowego ekstraktu, który oczyszcza się chromatograficznie, używając jako eluentu mieszaninę chloroform : metanol w stosunku objętościowym 9:1. Po oczyszczeniu otrzymuje się 13,3 mg 7-O-^-D-4-O-metylo-glukopiranozylo-5-hydroksy-4'-metoksyizoflawonu, o wzorze 2 z wydajnością 30,8%.

Uzyskany produkt charakteryzuje się następującymi danymi spektralnymi:

¹H NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 3.21 (1H, m, H-4), 3.46-3.53 (2H, m, H-2, H-5), 3.60 (1H, m, H-3), 3.60 (3H, s, 4-OCH3), 3.72 (1H, m, Hb-6), 3.83 (3H, s, 4'-OCH3), 3.87 (1H, m, Ha-6), 5.03 (1H, d, J=7.7 Hz, H-1), 6.52 (1H, m, H-6), 6.70 (1H, m, H-8), 6.99 (2H, m, H-3', H-5'), 7.49 (2H, m, H-2', H-6'), 8.17 (1H, s, H-2);

¹³C NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 55.8 (C-4'OCH3), 60,9 (C-4OCH3), 62.0 (C-6), 74.8 (C-2), 77.4 (C-5), 77.9 (C3), 80.5 (C-4), 95.9 (C-8), 101.1 (C-6), 101.5 (C-1), 108.1 (C-10), 115.0 {C-3', 5'), 124.4 (C-1), 124.9 (C-3), 131.4 (C-2', 6'), 155.5 (C-2), 157.3 (C-9), 161.4 (C-4'), 163.6 (C-5), 164.8 (C-7), 182.4 (C-4).

PL 234 137 B1

Claims

Zastrzeżenia patentowe

1. 7-O-^-D-4-O-metylo-glukopiranozylo-5-hydroksy-4'-metoksyizoflawon, o wzorze 2.
2. Sposób otrzymywania 7-O-^-D-4-O-metylo-glukopiranozylo-5-hydroksy-4'-metoksyizoflawonu, znamienny tym, że na drodze reakcji mikrobiologicznej transformacji substratu, którym jest 5,7-dihydroksy-4'-metoksyizoflawon o wzorze 1, otrzymuje się 7-O-^-D-4-O-metylo-glukopiranozylo-5-hydroksy-4'-metoksyizoflawon o wzorze 2, w taki sposób, że grzyby z gatunku Beauveria bassiana, namnaża się w płynnym podłożu mikrobiologicznym, charakterystycznym dla grzybów strzępkowych, przy ciągłym mieszaniu reagentów, w temperaturze 12-40°C, po czym po upływie od 3 do 7 dni, do narośniętej hodowli dodaje się substrat i dalej prowadzi proces, aż do całkowitego zużycia substratu, po czym po zakończeniu transformacji roztwór transformacyjny ekstrahuje się rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą, oddziela frakcję organiczną, odwadnia, odparowuje rozpuszczalnik i tak otrzymany surowy produkt oczyszcza się za pomocą technik chromatograficznych, w wyniku czego otrzymuje się czysty produkt, którym jest 7-O-^-D-4-O-metylo-glukopiranozylo-5-hydroksy-4'-metoksyizoflawon.
3. Sposób według, zastrz. 1, znamienny tym, że proces prowadzi się w temperaturze 26“C.

PL 234 137 Β1

O r