PL234136B1

PL234136B1 - 7-O-β-D-4'''-O-metylo-glukopiranozylo-5,4'-dihydroksyflawon i sposób otrzymywania 7-O-β-D-4'''-O-metylo-glukopiranozylo-5,4'-dihydroksyflawonu

Info

Publication number: PL234136B1
Application number: PL418556A
Authority: PL
Inventors: Sandra Sordon; Jarosław Popłoński; Tomasz Tronina; Ewa Huszcza
Original assignee: Wrocław University Of Environmental And Life Sciences
Priority date: 2016-09-05
Filing date: 2016-09-05
Publication date: 2020-01-31
Also published as: PL418556A1

Description

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku jest 7-O-3-D-4'-O-metylo-glukopiranozylo-5,4'-dihydroksyflawon, o wzorze 2 przedstawionym na rysunku.

Przedmiotem wynalazku jest również sposób otrzymywania 7-O-3-D-4'-O-metylo-glukopiranozylo-5,4'-dihydroksyflawonu.

Związek ten jest biologicznie czynny i może mieć zastosowanie w przemyśle spożywcz ym i farmaceutycznym.

W dostępnej literaturze nie znaleziono doniesień o przedmiotowym związku ani o sposobach jego otrzymywania.

Glukozylacja flawonoidów zwiększa ich hydrofilowość, co można wykorzystać podczas produkcji rozpuszczalnych w wodzie nutraceutyków. Związek według wynalazku jest potencjalnym materiałem wyjściowym dla dalszych strukturalnych modyfikacji, które mogą okazać się użyteczne w produkcji aktywniejszych związków.

Istotą wynalazku jest 7-O-3-D-4'-O-metylo-glukopiranozylo-5,4'-dihydroksyflawon.

Istotą wynalazku jest także sposób otrzymywania tego związku, polegający na tym, że substrat, którym jest 4',5,7-trihydroksyflawon, poddaje się transformacji mikrobiologicznej, w wynik u czego otrzymuje się 7-O-3-D-4'-O-metylo-glukopiranozylo-5,4'-dihydroksyflawon. Grzyby strzępkowe z gatunku Beauveria bassiana namnaża się w płynnym podłożu mikrobiologicznym, przy ciągłym mieszaniu reagentów, w temperaturze 12-40°C. Następnie do narośniętej hodowli dodaje się substrat i dalej prowadzi się proces, aż do całkowitego zużycia substratu. Po zakończeniu transformacji roztwór transformacyjny ekstrahuje się rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą, oddziela frakcję organiczną, osusza bezwodnym siarczanem magnezu, odparowuje rozpuszczalnik i tak otrzymany surowy produkt oczyszcza się za pomocą technik chromatograficznych.

Korzystnie jest, gdy grzybem strzępkowym jest Beauveria bassiana AM278.

Korzystnie również jest gdy reakcję prowadzi się w temperaturze 26°C.

Postępując zgodnie z wynalazkiem, w wyniku działania układu enzymatycznego zawartego w żywych komórkach kultury Beauveria bassiana następuje reakcja glikozylacji w substracie.

Zasadniczą zaletą wynalazku jest otrzymanie, w łagodnych warunkach 7-O-3-D-4'-O-metylo-glukopiranozylo-5,4'-dihydroksyflawonu, jako głównego produktu reakcji w kulturze Beauveria bassiana. Wydajność reakcji osiąga poziom ponad 15%.

Wynalazek jest bliżej objaśniony w przykładzie wykonania.

P r z y k ł a d 1

Do kolby o pojemności 300 cm³, w której znajduje się 100 cm³ sterylnej pożywki zawierającej 3 g glukozy i 1 g aminobaku na 1 dm³ wody destylowanej, wprowadza się grzyby strzępkowe Beauveria bassiana AM278. Po 6 dniach wzrostu drobnoustrojów w temperaturze 26°C i przy ciągłym wstrząsaniu, dodaje się 15 mg 4',5,7-trihydroksyflawonu, o wzorze 1, rozpuszczonego w 1,5 cm³dimetylosulfotlenku. Transformację prowadzi się przy ciągłym wstrząsaniu przez 10 dó b. Po tym czasie hodowlę zakwasza się 1-molowym kwasem chlorowodorowym do pH 4,5.

Następnie, uzyskany roztwór transformacyjny ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu, osusza bezwodnym siarczanem magnezu i odparowuje rozpuszczalnik. Uzyskuje się 4,52 mg surowego ekstraktu, który oczyszcza się chromatograficznie, używając jako eluentu mieszaninę chloroform : metanol w stosunku objętościowym 9:1. Po oczyszczeniu otrzymuje się 3,75 mg 7-O-3-D-4'-O-metylo-glukopiranozylo-5,4'-dihydroksyflawonu, o wzorze 2 z wydajnością 15,1%.

Uzyskany produkt charakteryzuje się następującymi danymi spektralnymi:

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 3,06 (1H, m, H-4), 3,27 (1H, m, H-2), 3,44 (1H, m, H-3), 3,47 (3H, s, 4-OCH3), 3,50 (1H, m, H-5), 3,52 (1H, m, Ha-6), 3,66 (1H, m, Hb-6), 5,09 (1H, d, J=7,8 Hz, H-1), 6,44 (1H, m, J=2,2 Hz, H-8), 6,82 (1H, m, J=2,2 Hz, H-6), 6,86 (1H, s, H-3), 6,94 (2H, m, J=8,8 Hz, H-3', H-5'), 7,95 (2H, m, J=8,8 Hz, H-2', H-6'), 12,97 (1H, s, 5-OH);

¹³C NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 60,16 (C-6), 73,29 (C-2), 75,69 (C-5), 76,12 (C3), 78,84 (C-4), 94,77 (C-6), 99,48 (C-8), 99,54 (C-1), 103,11 (C-3), 105,37 (C-10), 116,03 (C-3', 5'),

121,00 (C-1'), 128,64 (C-2', 6'), 156,97 (C-5), 161,15 (C-9), 161,44 (C-4'), 162,87 (C-7), 164,29 (C-2), 182,02 (C-4).

PL 234 136 B1

Claims

Zastrzeżenia patentowe;

1. 7-O-3-D-4'-O-metylo-glukopiranozylo-5,4'-dihydroksyflawon, o wzorze 2.
2. Sposób otrzymywania 7-O-3-D-4'-O-metylo-glukopiranozylo-5,4'-dihydroksyflawonu, zna- mienny tym, że na drodze reakcji mikrobiologicznej transformacji substratu, którym jest 4',5,7-trihydroksyflawon o wzorze 1, otrzymuje się 7-O-3-D-4'-O-metylo-glukopiranozylo-5,4'-dihydroksyflawon o wzorze 2, w taki sposób, że grzyby z gatunku Beauveria bassiana, namnaża się w płynnym podłożu mikrobiologicznym, charakterystycznym dla grzybów strzępkowych, przy ciągłym mieszaniu reagentów, w temperaturze 12-40°C, po czym po upływie od 3 do 7 dni, do narośniętej hodowli dodaje się substrat i dalej prowadzi proces, aż do całkowitego zużycia substratu, po czym po zakończeniu transformacji roztwór transformacyjny ekstrahuje się rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą, oddziela frakcję organiczną, odwadnia, odparowuje rozpuszczalnik i tak otrzymany surowy produkt oczyszcza się za pomocą technik chromatograficznych, w wyniku czego otrzymuje się czysty produkt, którym jest 7-O-3-D-4'-O-metylo-glukopiranozylo-5,4'-dihydroksyflawon.
3. Sposób według, zastrz. 2, znamienny tym, że grzybem strzępkowym jest Beauveria bassiana AM278.
4. Sposób według, zastrz. 2, znamienny tym, że proces prowadzi się w temperaturze 26°C.

PL 234 136 Β1