PL222200B1 - 4'-O-β-D-4''''-metoksy-glukopiranozylo-β-[1'''-hydroksyizopropylo]-4,2'-dihydroksy-6'-metoksy-3'-prenylo-α,β-dihydrochalkon i sposób jego otrzymywania - Google Patents

Description

Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 222200 (13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 405701 ^{(51) Int.Cl.}

C07H 15/203 (2006.01) C12P 19/44 (2006.01) C12R 1/645 (2006.01) (22) Data zgłoszenia: 21.10.2013

4'-O-e-D-4-metoksy-glukopiranozylo-e-[1'-hydroksyizopropylo]-4,2'-dihydroksy-6'-metoksy-3'-prenylo-a,e-dihydrochalkon i sposób jego otrzymywania (73) Uprawniony z patentu:

UNIWERSYTET PRZYRODNICZY WE WROCŁAWIU, Wrocław, PL (43) Zgłoszenie ogłoszono:

23.06.2014 BUP 13/14 (45) O udzieleniu patentu ogłoszono:

29.07.2016 WUP 07/16 (72) Twórca(y) wynalazku:

JAROSŁAW POPŁOŃSKI,

Szklarska Poręba, PL

EWA HUSZCZA, Wrocław, PL (74) Pełnomocnik:

rzecz. pat. Anna Olszewska

PL 222 200 B1

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku jest 4'-O^-D-4””-metoksy-glukopiranozylo^-[1”'-hydroksyizopropylo]-4,2'-dihydroksy-6'-metoksy-3'-prenylo-a,3-dihydrochalkon, o wzorze 2, przedstawionym na rysunku oraz sposób jego otrzymywania.

Związek ten jest biologicznie czynny i może mieć zastosowanie w przemyśle spożywczym i farmaceutycznym.

Dotychczas, w literaturze nie jest znany 4'-O^-D-4””-metoksy-glukopiranozylo^-[1'”-hydroksyizopropylo]-4,2'-dihydroksy-6'-metoksy-3'-prenylo-a,3-dihydrochalkon ani sposób jego wytwarzania.

Istotą wynalazku jest 4'-O^-D-4””-metoksy-glukopiranozylo^-[1-hydroksyizopropylo]-4,2'-dihydroksy-6'-metoksy-3'-prenylo-a,3-dihydrochalkon.

Natomiast istotą sposobu otrzymywania tego związku jest to, że otrzymuje się go na drodze reakcji mikrobiologicznej transformacji substratu, którym jest 3-[1”'-hydroksyizopropylo]-4,2',4'-trihydroksy-6'-metoksy-3'-prenylo-a,3-dihydrochalkon. Grzyby z gatunku Beauveria bassiana, namnaża się w płynnym podłożu mikrobiologicznym, charakterystycznym dla grzybów, przy ciągłym mieszaniu reagentów, w temperaturze 12-40°C. Następnie do narośniętej hodowli dodaje się substrat i dalej prowadzi się proces, aż do całkowitego zużycia substratu. Po zakończeniu transformacji roztwór transformacyjny ekstrahuje się rozpuszczalnikami organicznymi niemieszającymi się z wodą, oddziela frakcję organiczną, osusza bezwodnym siarczanem magnezu, odparowuje rozpuszczalnik i tak otrzymany surowy produkt oczyszcza się za pomocą technik chromatograficznych.

Korzystnie jest, gdy proces namnażania drobnoustroju prowadzi się w temperaturze 30°C.

Postępując zgodnie z wynalazkiem, w wyniku działania układu enzymatycznego zawartego w żywych komórkach kultury Beauveria bassiana, następuje reakcja glikozylacji substratu.

Zasadniczą zaletą wynalazku jest otrzymanie, w łagodnych warunkach, 4'-O^-D-4””-metoksy-glukopiranozylo^-[1'”-hydroksyizopropylo]-4,2'-dihydroksy-6'-metoksy-3'-prenylo-a^-dihydrochalkonu, o wzorze 2, jako głównego produktu reakcji w kulturze Beauveria bassiana z wydajnością 16,1%.

Wynalazek jest bliżej objaśniony w przykładzie wykonania.

P r z y k ł a d: Do kolby o pojemności 300 cm³, w której znajduje się 100 cm³ sterylnej pożywki ₃ zawierającej 3 g glukozy i 1 g aminobaku na 1 dm³ wody destylowanej, wprowadza się grzyby Beauveria bassiana. Po 4 dniach wzrostu drobnoustrojów w temperaturze 30°C i przy ciągłym wstrząsaniu, dodaje się 15 mg 3-[1”'-hydroksyizopropylo]-4,2',4-trihydroksy-6-metoksy-3-prenylo-a,3-dihydrochalkonu, o wzorze 1, rozpuszczonego w 1 cm³ metanolu. Transformację prowadzi się przy ciągłym wstrząsaniu przez 8 dób. Następnie, uzyskany roztwór transformacyjny ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu, osusza bezwodnym siarczanem magnezu i odparowuje rozpuszczalnik. Otrzymuje się 44,6 mg surowego produktu, który oczyszcza się chromatograficznie, używając jako eluentu mieszaninę chloroform:metanol w stosunku objętościowym 9:1.

Po oczyszczeniu otrzymuje się 3,44 mg 4'-O^-D-4””-metoksy-glukopiranozylo^-[1'”-hydroksyizopropylo]-4,2'-dihydroksy-6'-metoksy-3'-prenylo-a^-dihydrochalkonu, o wzorze 2, z wydajnością 16,1%.

Uzyskany produkt charakteryzuje się następującymi danymi spektralnymi:

¹H NMR (300 MHz, aceton-^) δ: 1,11 (3H, s, H-3''''), 1,15 (3H, s, H-2'”’), 1,59 (3H, s, H-4”), 1,71 (3H, s, H-5''), 3,13 (1H, m, H-4'''), 3,14 (1H, m, H-1''d2), 3,33 (1H, m, H-1 ”d1), 3,33 (1H, m, H-β), 3,55 (1H, s, C4'''-OCH3), 3,55 (1H, m, H-2'''), 3,58 (1H, m, H-3'''), 3,63 (1H, m, H-5'''), 3,67 (1H, m, H-6'''d2), 3,67 (2H, m, H-a), 3,88 (1H, m, H-6”’d₁), 3,97 (3H, s, C6'-OCHs), 5,04 (1H, d, J = 7,6 Hz, H-1'''d2), 5,06 (1H, d, J = 7,6 Hz, H-1'''d1), 5,17 (1H, m, H-2''), 6,41 (1H, m, H-5'd2), 6,42 (1H, m, H-5'd1), 6,68 (2H, pd, J = 8,5 Hz, H-3, H-5), 7,10 (2H, pd, J = 8,5 Hz, H-2, H-6).

¹³C NMR (75 MHz, aceton-^) δ: 17,92 (C-5''), 22,10 (C-1''), 25,87 (C-4”), 26,93 (C-3''''), 30,04 (C-2''''), 46,15 (C-ad2), 46,20 (C-ad1), 51,94 (C-β), 56,22 (C6'-OCHs), 60,59 (C4'”-OCHs), 62,34 (C-6'''), 72,56 (C-1''''), 77,50 (C-3'''), 77,92 (C-2'''), 78,31 (C-5'''), 80,57 (C-4'''), 90,95 (C-5'd2), 90,98 (C-5'd1), 101,20 (C-1'''d2), 101,29 (C-1'''d1), 107,48 (C-1'), 110,83 (C-3'), 115,23 (C-3, C-5), 123,97 (C-2''), 130,88 (C-3''), 131,17 (C-2, C-6), 134,23 (C-1), 156,58 (C-4), 161,95 (C-6'), 162,01 (C-4'), 164,12 (C-2'), 206,75 (C=O).

PL 222 200 B1

Claims (3)

1.4'-O-3-D-4””-metoksy-glukopiranozylo-3-[1”'-hydroksyizopropylo]-4,2'-dihydroksy-6'-metoksy-3'-prenylo-a,3-dihydrochalkon, o wzorze 2.

2. Sposób wytwarzania 4'-O-3-D-4””-metoksy-glukopiranozylo-3-[1”'-hydroksyizopropylo]-4,2'-dihydroksy-6'-metoksy-3'-prenylo-a,3-dihydrochalkonu, znamienny tym, że związek ten otrzymuje się na drodze reakcji mikrobiologicznej transformacji substratu, którym jest 3-[1”'-hydroksyizopropylo]-4,2',4'-trihydroksy-6'-metoksy-3'-prenylo-a,3-dihydrochalkon o wzorze 1, polegającej na tym, że grzyby z gatunku Beauveria bassiana, namnaża się w płynnym podłożu mikrobiologicznym, charakterystycznym dla grzybów, przy ciągłym mieszaniu reagentów, w temperaturze 12-40°C, po czym do narośniętej hodowli dodaje się substrat i dalej prowadzi się proces, aż do całkowitego zużycia substratu, po czym po zakończeniu transformacji roztwór transformacyjny ekstrahuje się rozpuszczalnikami organicznymi niemieszającymi się z wodą, oddziela frakcję organiczną, osusza bezwodnym siarczanem magnezu, odparowuje rozpuszczalnik i tak otrzymany surowy produkt oczyszcza za pomocą technik chromatograficznych.

3. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że proces prowadzi się w temperaturze 30°C.