PL222412B1 - Sposób wytwarzania 3',4',5,7,8-pentahydroksyflawonu - Google Patents

Description

(12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 222412 (13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 403856 ^{(51) Int.Cl.}

C12P 17/06 (2006.01) C12P 7/22 (2006.01) C12R 1/645 (2006.01) (22) Data zgłoszenia: 13.05.2013

Sposób wytwarzania 3',4',5,7,8-pentahydroksyflawonu (73) Uprawniony z patentu:

UNIWERSYTET PRZYRODNICZY WE WROCŁAWIU, Wrocław, PL (43) Zgłoszenie ogłoszono:

07.01.2014 BUP 01/14 (45) O udzieleniu patentu ogłoszono:

29.07.2016 WUP 07/16 (72) Twórca(y) wynalazku:

ANNA MADEJ, Jelcz-Laskowice, PL EWA HUSZCZA, Wrocław, PL AGNIESZKA BARTMAŃSKA, Wrocław, PL JAROSŁAW POPŁOŃSKI,

Szklarska Poręba, PL

TOMASZ TRONINA, Międzybórz, PL (74) Pełnomocnik:

rzecz. pat. Anna Olszewska

PL 222 412 B1

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania 3’,4’,5,7,8-pentahydroksyflawonu, o wzorze 2 przedstawionym na rysunku.

Związek ten jest biologicznie czynny. Wynalazek może więc znaleźć zastosowanie w przemyśle spożywczym i farmaceutycznym do produkcji związku biologicznie czynnego.

Znany 3’,4’,5,7,8-pentahydroksyflawon, o aktywności biologicznej, naturalnie występuje w niewielkich ilościach m.in. gojniku (Sideritis L), został opisany przez Peterska J. i wsp. (Petreska J., Stefova M., Ferneres F., Moreno D. A., Tomas-Barberan F. A., Stefkov G., Kulevanova S., Gil-Izquierdo A.; Potential bioactive phenolics of Macedonian Sideritis species used for medicinal „Mountain Tea”, Food Chemistry, 125:13-20; 2011).

Istota wynalazku polega na tym, że 3’,4’,5,7,8-pentahydroksyflawon otrzymuje się na drodze reakcji mikrobiologicznej hydroksylacji w pozycji 8 w substracie, którym jest luteolina. Drożdże z gatunku Rhodotorula marina, namnaża się w płynnym podłożu mikrobiologicznym, charakterystycznym dla grzybów, przy ciągłym mieszaniu reagentów, w temperaturze 20-30°C. Do narośniętej hodowli dodaje się substrat w stężeniu od 150 mg/L do 350 mg/L i dalej prowadzi się proces, aż do całkowitego zużycia substratu, po czym po zakończeniu transformacji roztwór transformacyjny zakwasza się do pH około 4, zwłaszcza za pomocą kwasu chlorowodorowego, następnie ekstrahuje się rozpuszczalnikami organicznymi niemieszającymi się z wodą, oddziela frakcję organiczną, osusza bezwodnym siarczanem magnezu, odparowuje rozpuszczalnik i tak otrzymany surowy produkt oczyszcza się za pomocą technik chromatograficznych.

Korzystnie jest, gdy proces prowadzi się w temperaturze 28°C.

Korzystnie także jest, gdy do hodowli dodaje się substrat w stężeniu 200 mg/L.

Korzystnie również jest, gdy rozpuszczalnikiem stosowanym do ekstrakcji jest octan etylu.

Zasadniczą zaletą wynalazku jest otrzymanie, w łagodnych warunkach, 3',4',5,7,8-pentahydroksyflawonu, jako głównego produktu reakcji z wydajnością 25,25%.

Wynalazek jest bliżej objaśniony w przykładzie wykonania poniżej.

Przykład

3

Do kolby o pojemności 300 cm , w której znajduje się 100 cm sterylnej pożywki zawierającej 3 g ₃ glukozy i 1 g aminobaku na 1 dm³ wody destylowanej, wprowadza się drożdże Rhodotorula marina.

Po 3 dniach wzrostu drobnoustrojów w temperaturze 28°C i przy ciągłym mieszaniu reagentów, doda₃ je się 20 mg luteoliny, o wzorze 1, rozpuszczonej w 1 cm metanolu. Transformację prowadzi się przy ciągłym wstrząsaniu przez 36 godzin. Następnie, uzyskany roztwór transformacyjny ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu, osusza siarczanem magnezu i odparowuje rozpuszczalnik. Otrzymuje się 23 mg surowego produktu, który oczyszcza się chromatograficznie, używając jako eluentu mieszaniny chloroform - metanol w stosunku 8:2.

Na tej drodze otrzymuje się 5,33 mg 3’,4’,5,7,8-pentahydroksyflawonu o wzorze 2 (wydajność 25,25%).

Uzyskany produkt charakteryzuje się następującymi danymi spektralnymi:

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ [ppm] = 6,26 (1H, s, H-6); 6,63 (1H, s, H-3); 6,89 (1H, d, J = 8,2 Hz, H-5'); 7,49 (2H, d, J = 12,6 Hz, H-2'/6') ¹³C NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ [ppm] = 98,6 (C-6); 102,4 (C-3); 103,4 (C-10); 113,7 (C-2'); 116 (C-5'); 119,2 (C-6'); 121,8 (C-1'); 125,1 (C-8); 145,6 (C-3'); 145,7 (C-5); 149,7 (C-4'); 153 (C-7); 153,3 (C-9);163,8 (C-2); 182 (C-4)

Claims (4)

1. Zastrzeżenia patentowe

   1. Sposób wytwarzania 3',4',5,7,8-pentahydroksyflawonu, o wzorze 2, znamienny tym, że związek ten otrzymuje się na drodze reakcji mikrobiologicznej hydroksylacji w pozycji 8 w substracie, którym jest luteolina o wzorze 1, polegającej na tym, że drożdże z gatunku Rhodotorula marina, namnaża się w płynnym podłożu mikrobiologicznym, charakterystycznym dla grzybów, przy ciągłym mieszaniu reagentów, w temperaturze 20-30°C, po czym do narośniętej hodowli dodaje się substrat w stężeniu od 150 mg/L do 350 mg/L i dalej prowadzi się proces, aż do całkowitego zużycia substratu, po czym po zakończeniu transformacji roztwór transformacyjny zakwasza się do pH około 4, zwłas zcza za pomocą kwasu chlorowodorowego, następnie ekstrahuje się rozpuszczalnikami organicznymi

   PL 222 412 B1 nie mieszającymi się z wodą, oddziela frakcję organiczną, osusza bezwodnym siarczanem magnezu, odparowuje rozpuszczalnik i tak otrzymany surowy produkt oczyszcza się pomocą technik chromatograficznych.
2. 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że proces prowadzi się w temperaturze 28°C.
3. 3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że do hodowli dodaje się substrat w stężeniu 200 mg/L.
4. 4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że rozpuszczalnikiem stosowanym do ekstrakcji jest octan etylu.