PL201767B1 - Kompozycja szczepionki przeciwko ludzkim papillomawirusom i wirusowi opryszczki - Google Patents

Kompozycja szczepionki przeciwko ludzkim papillomawirusom i wirusowi opryszczki

Info

Publication number
PL201767B1
PL201767B1 PL354039A PL35403900A PL201767B1 PL 201767 B1 PL201767 B1 PL 201767B1 PL 354039 A PL354039 A PL 354039A PL 35403900 A PL35403900 A PL 35403900A PL 201767 B1 PL201767 B1 PL 201767B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
antigen
hpv
vaccine composition
mpl
group
Prior art date
Application number
PL354039A
Other languages
English (en)
Other versions
PL354039A1 (pl
Inventor
Martine Anne Cecile Wettendorff
Original Assignee
Smithkline Beecham Biolog
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Smithkline Beecham Biolog filed Critical Smithkline Beecham Biolog
Publication of PL354039A1 publication Critical patent/PL354039A1/pl
Publication of PL201767B1 publication Critical patent/PL201767B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
    • C07K16/084—Papovaviridae, e.g. papillomavirus, polyomavirus, SV40, BK virus, JC virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/295—Polyvalent viral antigens; Mixtures of viral and bacterial antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/29—Hepatitis virus
    • A61K39/292—Serum hepatitis virus, hepatitis B virus, e.g. Australia antigen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B09—DISPOSAL OF SOLID WASTE; RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09C—RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09C1/00—Reclamation of contaminated soil
    • E—FIXED CONSTRUCTIONS
    • E02—HYDRAULIC ENGINEERING; FOUNDATIONS; SOIL SHIFTING
    • E02D—FOUNDATIONS; EXCAVATIONS; EMBANKMENTS; UNDERGROUND OR UNDERWATER STRUCTURES
    • E02D3/00—Improving or preserving soil or rock, e.g. preserving permafrost soil
    • E02D3/11—Improving or preserving soil or rock, e.g. preserving permafrost soil by thermal, electrical or electro-chemical means
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5258—Virus-like particles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/20011—Papillomaviridae
    • C12N2710/20023—Virus like particles [VLP]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/20011—Papillomaviridae
    • C12N2710/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
    • C12N2730/00011—Details
    • C12N2730/10011—Hepadnaviridae
    • C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
    • C12N2730/10134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Environmental & Geological Engineering (AREA)
  • Soil Sciences (AREA)
  • Structural Engineering (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • General Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Mining & Mineral Resources (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Civil Engineering (AREA)
  • Paleontology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Niniejszy wynalazek dotyczy kompozycji szczepionki odpowiedniej do stosowania do leczenia lub profilaktyki infekcji ludzkim papillomawirusem i wirusem opryszczki zawieraj acej: (a) antygen wiru- sa opryszczki pospolitej (HSV)2gD; oraz (b) antygen papillomawirusa (HPV)L1 w kombinacji z adiu- wantem, który jest selektywnym stymulatorem odpowiedzi komórkowej TH1, przy czym kompozycja nie zawiera antygenu zapalenia w atroby typu B. PL PL PL PL

Description

Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest kompozycja szczepionki przeciwko ludzkim papillomawirusom i wirusowi opryszczki.
Wynalazek dotyczy nowych formulacji szczepionek skojarzonych w szczególności do podawania młodzieży.
Papillomawirusy są małymi nowotworowymi wirusami DNA, które są wysoce swoiste gatunkowo. Jak dotąd opisano ponad 70 poszczególnych genotypów ludzkich papillomawirusów (HPV). HPV są zazwyczaj swoiste albo dla skóry (np. HPV-1 i -2) albo dla powierzchni śluzówkowych (np. HPV-6 i -11) i zwykle wywołują nowotwory łagodne (brodawki), które utrzymują się przez kilka miesięcy lub lat. Takie nowotwory łagodne mogą niepokoić dotknięte nimi osoby, ale z reguły nie stanowią zagrożenia życia, z kilkoma wyjątkami.
Niektóre HPV są również związane z rakami. Najsilniejszy związek między HPV i rakiem ludzkim jest ten, który istnieje między HPV-16 i HPV-18 a rakiem szyjki macicy. Rak szyjki macicy jest najbardziej rozpowszechnionym nowotworem złośliwym w krajach rozwijających się, z co roku występującymi na świecie około 500 000 nowymi przypadkami. Aktywne zwalczanie najważniejszych zakażeń HPV-16, a nawet ustalonych raków zawierających HPV-16, jest technicznie wykonalne za pomocą szczepionek. W celu dokonania przeglądu perspektyw profilaktycznych i terapeutycznych szczepień przeciwko HPV-16 patrz Cason J., Clin. Immunother. 1994; 1(4) 293-306 i Hagenesee M.E., Infections in Medicine 1997 14 (7) 555-556, 559-564.
Innymi szczególnie interesującymi serotypami HPV są 31, 33 i 45.
Obecnie za pomocą systemów klonowania w bakteriach, a ostatnio za pomocą amplifikacji techniką PCR wyizolowano i scharakteryzowano różne typy HPV. Organizacja cząsteczkowa genomów HPV została określona na podstawie porównania z dobrze scharakteryzowanym bydlęcym papillowirusem typu 1 (BPV1).
Chociaż występują różnice o mniejszym znaczeniu, to wszystkie opisane genomy HPV mają co najmniej siedem wczesnych genów, E1 do E7 i dwa późne geny L1 i L2. Ponadto region regulatorowy powyżej niesie sekwencje regulatorowe, które wydają się kontrolować najbardziej transkrypcyjne zdarzenia genomu HPV.
Geny E1 i E2 są zaangażowane odpowiednio, w replikację wirusów i kontrolę transkrypcyjną i często są rozrywane przez integrację wirusową. E6 i E7, a ostatnie dane pokazują, że również E5, są zaangażowane w transformację wirusa.
W HPV zwią zanych z rakiem szyjki macicy, takich jak HPV 16 i 18, proces onkogenny rozpoczyna się po integracji DNA wirusa. Integracja powoduje inaktywację genów kodujących kapsydowe białka L1 i L2 i ciągłe instalowanie nadekspresji dwóch wczesnych białek E6 i E7, co prowadzi do stopniowej utraty prawidłowego różnicowania komórkowego i rozwoju raka.
Rak szyjki macicy jest powszechny u kobiet i rozwija się przez pośredni stan przedrakowy do raka inwazyjnego, który często prowadzi do śmierci. Stany pośrednie choroby są znane jako śródnabłonkowa neoplazja szyjki macicy i są stopniowane od I do III zgodnie ze zwiększającym się nasileniem.
Klinicznie zakażenie HPV żeńskich dróg odbytowo-płciowych manifestują się jako szyjkowa kłykcina płaska, której cechą jest to, że koilocytoza oddziaływuje głównie na komórki powierzchniowe i poś rednie nabł onka ł uskowatego szyjki.
Koilocyty, które są konsekwencją efektu cytopatycznego wirusa, występują jako wielojądrzaste komórki z okołojądrową przezroczystą obwódką. Nabłonek jest pogrubiony o nienormalnej keratynizacji odpowiedzialnej za brodawkowaty wygląd zmian chorobowych.
Takie kłykciny płaskie, gdy są dodatnie dla serotypów HPV 16 lub 18, są czynnikami wysokiego ryzyka rozwoju w kierunku śródnabłonkowej neoplazji szyjki macicy (cervical intraepithelial neoplasia - CIN) i raka in situ (CIS), które są uważane za prekursory zmian chorobowych inwazyjnego raka szyjki macicy.
W międzynarodowym zgłoszeniu patentowym WO 96/19496 ujawniono odmiany białek papilliomawirusa E6 i E7, zwłaszcza białka fuzyjne E6/E7 z delecją w obu białkach E6 i E7. Te delecyjne białka fuzyjne uważa się za immunogenne. Szczepionki na bazie L1 HPV ujawniono w WO 94/00152, WO 94/20137, WO 93/02184 i WO 94/05792. Taka szczepionka może zawierać antygen L1 jako monomer, kapsomer lub cząstkę wirusopodobną. Takie cząstki mogą dodatkowo zawierać białka L2. Szczepionki na bazie L2 opisano na przykład w WO 93/00436. Inne szczepionki HPV są oparte na białkach wczesnych, takich jak E7 lub białkach fuzyjnych, takich jak L2-E7.
PL 201 767 B1
HSV-2 jest pierwotnym czynnikiem etiologicznym opryszczki narządów płciowych. HSV-2 i HSV-1 (czynnik sprawczy opryszczki warg) charakteryzują się zarówno zdolnością do wywoływania schorzeń ostrych, jak i do utrwalania infekcji latentnych, przede wszystkim w komórkach zwojów nerwowych.
Ocenia się, że opryszczka narządów płciowych pojawia się u około 5 milionów ludzi w USA, z 500 000 przypadkami klinicznymi notowanymi co roku (infekcje pierwotne i nawracaj ące). Infekcje pierwotne zachodzą zazwyczaj po osiągnięciu dojrzałości płciowej i charakteryzują się występowaniem bolesnych zmian skórnych, które trwają przez okres 2 do 3 tygodni. W ciągu sześciu miesięcy następujących po infekcji pierwotnej 50% pacjentów doświadcza nawrotu choroby. Około 25% pacjentów może doświadczać corocznie między 10 a 15 powracających epizodów choroby. U pacjentów z osł abionym ukł adem immunologicznym wystę powanie wysokiej czę stotliwoś ci nawrotów jest statystycznie częstsze niż w normalnej populacji pacjentów.
Zarówno wirus HSV-1, jak i HSV-2 mają szereg składników glikoproteinowych zlokalizowanych na powierzchni wirusa. Znane są one jako gB, gC, gD i gE itd.
Istnieje potrzeba dostarczenia skutecznych szczepionek skojarzonych w celu zapobiegania chorobom, na które szczególnie podatna jest młodzież.
Kompozycja szczepionki według wynalazku odpowiednia do stosowania do leczenia lub profilaktyki infekcji ludzkim papillomawirusem i wirusem opryszczki zawiera:
(a) antygen wirusa opryszczki pospolitej (HSV)2gD; oraz (b) antygen papillomawirusa (HPV)L1 w kombinacji z adiuwantem, który jest selektywnym stymulatorem odpowiedzi komórkowej TH1, przy czym kompozycja nie zawiera antygenu zapalenia wątroby typu B.
Korzystnie kompozycja szczepionki dodatkowo zawiera nośnik.
Korzystnie selektywny stymulator odpowiedzi komórkowej TH1 jest wybrany z grupy adiuwantów obejmujących: 3 de-O-acylowany monofosforylolipid A (3D-MPL, 3D-MPL) o rozmiarze cząstek 3D-MPL wynoszącym korzystnie około albo mniej niż 100 nm, QS21, mieszaninę QS21 i cholesterolu oraz oligonukleotyd CpG. Bardziej korzystnie wybiórczym stymulatorem odpowiedzi komórkowej TH1 jest 3D-MPL.
Korzystnie kompozycja szczepionki dodatkowo zawiera wodorotlenek glinu.
Korzystnym antygenem HSV w szczepionce według wynalazku jest skrócony HSV-2 gD.
Korzystnie w szczepionce według wynalazku antygen papillomawirusa pochodzi od HPV6 lub HPV 11 lub HPV 16 lub HPV 18.
Korzystnie nośnik w kompozycji szczepionki według wynalazku jest wybrany z grupy składającej się z wodorotlenku glinu, fosforanu glinu i tokoferolu oraz emulsji oleju w wodzie.
Kompozycja szczepionki według wynalazku daje wielkie korzyści przy podawaniu ludziom młodym, którzy mogą być szczególnie narażeni na infekcję HSV i/lub HPV.
Stwierdzono, że kompozycje szczepionki według wynalazku nieoczekiwanie nie wykazują niekorzystnych oddziaływań, to znaczy że odpowiedź immunologiczna na każdy z antygenów w kompozycji według wynalazku jest zasadniczo taka sama, jak odpowiedź uzyskana osobno dla każdego z antygenów podanego w połączeniu z adiuwantem, który jest selektywnym stymulatorem odpowiedzi komórkowej TH1.
Odpowiedzi immunologiczne można generalnie podzielić na dwie zasadnicze kategorie, którymi są odpowiedź humoralna oraz odpowiedź za pośrednictwem komórek (tradycyjnie charakteryzowana odpowiednio przez mechanizmy ochrony z wytworzeniem przeciwciał i mechanizm komórkowy). Te kategorie odpowiedzi nazwano odpowiedzią typu TH1 (odpowiedź za pośrednictwem komórek) i odpowiedzią immunologiczną typu TH2 (odpowiedź humoralna).
Zasadnicze odpowiedzi immunologiczne typu TH1 charakteryzują się wytwarzaniem swoistych antygenowo, ograniczonych do haplotypu cytotoksycznych limfocytów T i odpowiedzi naturalnych komórek zabójców. U myszy odpowiedzi typu TH1 charakteryzują się często wytwarzaniem przeciwciał podtypu IgG2a, gdy tymczasem u ludzi odpowiadają one przeciwciałom typu IgG1. Odpowiedzi immunologiczne typu TH2 charakteryzują się wytwarzaniem szerokiego zakresu izotypów immunoglobulin, w tym IgG1 u myszy.
Można uważać, że siłą napędzającą rozwój tych dwóch typów odpowiedzi immunologicznej są cytokiny. Wysokie poziomy cytokin typu TH1 sprzyjają wywoływaniu odpowiedzi immunologicznej na dany antygen za pośrednictwem komórek, podczas gdy wysokie poziomy cytokin typu TH2 sprzyjają wywoływaniu humoralnej odpowiedzi immunologicznej na antygen.
PL 201 767 B1
Rozróżnienie typów odpowiedzi immunologicznej TH1 i TH2 nie jest bezwzględne. W rzeczywistości dany osobnik będzie wykazywał odpowiedź immunologiczną opisywaną jako głównie TH1 lub głównie TH2. Jednakże często jest wygodnie rozważać rodziny cytokin w kategoriach opisanych dla klonów limfocytów T mysich CD4 +ve przez Mosmann i Coffman (Mosmann, T. R. i Coffman, R.L. (1989) TH1 and TH2 cells: different patterns of lymphokine secretion lead to different functional properties. Annual Review of Immunology, 7, str. 145-173). Tradycyjnie odpowiedzi typu TH1 są związane z produkcją cytokin INF-γ przez limfocyty T. Inne cytokiny, często wiązane bezpośrednio z indukcją odpowiedzi immunologicznej typu TH1, nie są wytwarzane przez limfocyty T, tak jak IL-12. Przeciwnie, odpowiedzi typu TH2 są związane z sekrecją IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 oraz czynnika martwicy nowotworu-β (TNF-β).
Wiadomo, że pewne adiuwanty szczepionkowe nadają się szczególnie do stymulacji odpowiedzi cytokinowej typu TH1 albo TH2. Tradycyjnie najlepsze wskaźniki równowagi TH1:TH2 odpowiedzi immunologicznej po szczepieniu lub po infekcji obejmują bezpośredni pomiar produkcji cytokin TH1 i TH2 przez limfocyty T in vitro po ponownej stymulacji antygenem i/lub pomiar (przynajmniej u myszy) stosunku odpowiedzi przeciwciał IgG1:IgG2a swoistych dla antygenu.
Adiuwantem typu TH1 jest zatem ten, który stymuluje wyizolowane populacje limfocytów T do wytwarzania wysokiego poziomu cytokin typu TH1 w wyniku ponownej stymulacji antygenem in vitro oraz wywołuje odpowiedź immunoglobulin swoistych dla antygenu, związaną z izotypem typu TH1.
Adiuwanty, które są zdolne do selektywnego stymulowania odpowiedzi komórkowej TH1 opisano w międzynarodowych zgłoszeniach patentowych nr WO 94/00153 i WO 95/17209.
de-O-acylowany monofosforylolipid A (3D-MPL) jest jednym z takich adiuwantów. Jest on znany z patentu GB-2220211 (Ribi). Chemicznie jest on mieszaniną 3 de-O-acylowanego monofosforylolipidu A z 4, 5 lub 6 acylowanymi łańcuchami i jest wytwarzany przez Ribi Immunochem, Montana. Korzystną formę 3 de-O-acylowanego monofosforylolipidu A ujawniono w patencie europejskim EP-0689454B1 (SmithKline Beecham Biologicals SA).
Korzystnie cząstki 3D-MPL są na tyle małe, że mogą być sterylnie filtrowane przez membranę 0,22 μm (jak opisano w patencie EP-0689454).
3D-MPL będzie zawarty w kompozycji w ilości w zakresie 10 μg -100 μg, korzystnie 25-50 μg na dawkę, w której antygen będzie zazwyczaj obecny w zakresie 2-50 μg na dawkę.
Inny korzystny adiuwant stanowi QS21, oczyszczona za pomocą HPLC, nietoksyczna frakcja otrzymana z kory Quillaja Saponaria Molina. Ewentualnie można go zmieszać z 3 de-O-acylowanym monofosforylolipidem A (3D-MPL), ewentualnie razem z nośnikiem.
Sposób wytwarzania QS21 ujawniono w patencie US-5057540.
Niereaktogenne formulacje adiuwanta zawierające QS21 zostały wcześniej opisane (WO 96/33739). Wykazano, że takie formulacje zawierające QS21 i cholesterol, gdy są sformułowane razem z antygenem, są skutecznymi adiuwantami stymulującymi TH1.
A zatem kompozycje szczepionek według wynalazku mogą zawierać kombinację QS21 i cholesterolu.
Inne adiuwanty, które są selektywnymi stymulatorami odpowiedzi limfocytów TH-1 obejmują immunomodulujące oligonukleotydy, na przykład niemetylowane sekwencje CpG, jak ujawnione w WO 96/02555.
Jako adiuwant, który jest selektywnym stymulatorem odpowiedzi Th-1 jest rozważana kombinacja różnych adiuwantów stymulujących TH-1, takich jak wyżej wspomniane. Na przykład QS21 może być formułowany razem z 3D-MPL. Stosunek QS21:3D-MPL zazwyczaj jest rzędu 1:10 do 10:1, korzystnie 1:5 do 5:1, a często zasadniczo 1:1. Korzystnym zakresem 3D-MPL:QS21 dla optymalnego synergizmu jest 2,5:1 do 1:1.
Korzystnie w kompozycji szczepionki według wynalazku obecny jest również nośnik. Nośnikiem może być emulsja oleju w wodzie, lub sól glinu, taka jak fosforan glinu lub wodorotlenek glinu.
Korzystna emulsja olej w wodzie zawiera metabolizowany olej taki jak skwalen, tokoferol alfa i Tween 80. Dodatkowo emulsja olej w wodzie może zawierać Span 85 i/lub lecytynę i/lub trikaprylinę. Szczególnie korzystnie antygeny kompozycji szczepionki łączone są z 3D-MPL i alumem (wodorotlenkiem glinu).
Typowo w szczepionce do podawania ludziom, QS21 i 3D-MPL występują w zakresie 1 μg -200 μg, na przykład 10-100 μg, korzystnie 10 μg - 50 μg na dawkę. Typowo emulsja olej w wodzie składa się z 2 do 10% skwalenu, z 2 do 10% alfa tokoferolu oraz z 0,3 do 3% Tween 80. Korzystnie stosunek skwalen: alfa tokoferol jest równy lub mniejszy niż 1, ponieważ taki stosunek daje bardziej stabilną emulsję Span 85 może być również obecny w ilości 1%. W niektórych przypadkach może być korzystne, aby szczepionki według wynalazku ponadto zawierały stabilizator.
PL 201 767 B1
Nietoksyczne emulsje olej w wodzie korzystnie zawierają nietoksyczny olej, np. skwalan ,emulgator, np. Tween 80, w nośniku wodnym. Nośnikiem wodnym może być, na przykład sól fizjologiczna buforowana fosforanem.
Szczególnie silną kompozycję adiuwantową zawierającą QS21, 3D-MPL i tokoferol w emulsji olej w wodzie opisano w WO 95/17210.
Antygen HPV w kompozycji według wynalazku korzystnie pochodzi z HPV 16 i/lub 18, lub z HPV 6 i/lub 11.
W jednym z korzystnych wykonań antygen HPV w kompozycji szczepionki wedł ug wynalazku zawiera L1, główne białko kapsydu HPV, i ewentualnie białko L2, szczególnie z HPV 16 i/lub HPV 18. W tym wykonaniu korzystną formą L1 jest skrócone białko L1. Korzystnie L1, ewentualnie fuzja L1-L2, przybiera formę cząstek wirusopodobnych (VLP). L1 można połączyć z innym białkiem HPV, w szczególności E7, co daje białko fuzyjne L1-E7. Szczególnie korzystne są chimerowe VLP, zawierające L1-E lub L1-L2-E.
Antygen HPV w kompozycji szczepionki może być zaadsorbowany na Al(OH)3.
Antygen HSV w składzie kompozycji wynalazku, korzystnie pochodzi z HSV-2 z glikoproteiny D. Glikoproteina D jest umiejscowiona na błonie wirusowej, a także występuje w cytoplazmie zainfekowanych komórek (Eisenberg R.J. i in., J. of Virol. 1980, 35 428-435). Obejmuje ona 393 aminokwasy, w tym, sygnałowe białko i ma masę cząsteczkową w przybliżeniu 60 kD. Ze wszystkich otoczkowych glikoprotein HSV glikoproteina D jest prawdopodobnie najlepiej scharakteryzowana (Cohen i in., J. Virology, 60, 157-166). Na podstawie badań in vivo wiadomo, że odgrywa ona główną rolę w przyczepianiu wirusa do błon komórkowych. Ponadto, wykazano, że glikoproteina D jest zdolna do wywoływania neutralizujących przeciwciał in vivo (Eing i in., J. Med. Virology 127: 59-65).
Jednakże latentny wirus HSV-2 wciąż może ulec reaktywacji i wywołać nawrót choroby pomimo obecności wysokiego miana przeciwciał neutralizujących w surowicach pacjentów.
W korzystnym wykonaniu wynalazku antygenem HSV jest skrócona glikoproteina HSV-2 D, składająca się z 308 aminokwasów, która zawiera aminokwasy 1 do 306 glikoproteiny występującej w przyrodzie z dodatkiem asparaginy i glutaminy na C koń cu skróconego białka, pozbawionego regionu kotwiczącego do błony. Ta postać białka zawiera peptyd sygnałowy, który ulega odcięciu, dając dojrzałe białko składające się z 283 aminokwasów. Wytwarzanie takiego białka w komórkach jajnika chomika chińskiego opisano w patencie europejskim EP-B-139 417 firmy Genentech.
Zrekombinowana dojrzała glikoproteina D HSV-2 w formie skróconej jest stosowana korzystnie w kompozycjach szczepionki według wynalazku i jest oznaczana rgD2t.
Kombinację tego antygenu HSV-2 z adiuwantem 3D-MPL opisano w WO 92/16231.
Kompozycje według niniejszego wynalazku są bardzo skuteczne w wywoływaniu odporności ochronnej, nawet przy bardzo niskich dawkach antygenu (np. zaledwie 5 μg rgD2t).
Dostarczają doskonałej ochrony przeciw głównej infekcji i korzystnie stymulują zarówno specyficzną humoralną odpowiedź immunologiczną (przeciwciała neutralizujące), jak również odpowiedź immunologiczną, w której pośredniczą komórki efektorowe (DTH).
Szczepionka według wynalazku będzie zawierała ilość antygenów zapewniającą ochronną odpowiedź immunologiczną i może być wytworzona za pomocą konwencjonalnych technik.
Wytwarzanie szczepionek jest opisane ogólnie w Pharmaceutical Biotechnology, Vol 61 Vaccine Design - the subunit and adjuvant approach, wydane przez Powell i Newman, Plenurn Press, 1995. New Trends and Developments in Vaccines, wydane przez Voller i wsp., University Park Press, Baltimore, Maryland, USA 1978. Kapsułkowanie w liposomach opisał, na przykład Fullerton, w patencie US 4235877. Koniugację protein z makrocząsteczkami ujawnił, na przykład Likhite, w patencie US 4372945 i Armor i in., w patencie US 4474757.
Ilość białka w danej dawce szczepionki dobrano jako ilość, która wywołuje ochronną odpowiedź immunologiczną bez istotnych szkodliwych działań ubocznych w typowych szczepionkach. Taka ilość będzie zmieniać się w zależności od tego, jaki specyficzny immunogen został zastosowany. Na ogół oczekuje się, że każda dawka będzie zawierała 1-1000 μg białka, korzystnie 2-100 μg, najbardziej korzystnie 4-40 μg. Optymalną ilość dla poszczególnej szczepionki można określić przez standardowe badania obejmujące obserwację mian przeciwciał i inne odpowiedzi osobników. Pacjenci mogą otrzymać dawkę przypominającą po około 4 tygodniach po szczepieniu początkowym.
Obok szczepienia osób podatnych na zakażenia HPV lub HSV kompozycje farmaceutyczne według niniejszego wynalazku mogą być stosowane do leczenia, immunoterapeutycznie, pacjentów cierpiących na takie infekcje wirusowe.
PL 201 767 B1
Następujące przykłady ilustrują, ale nie ograniczają wynalazku.
P r z y k ł a d 1
Porównawcza immunogenność HPV Ags/HBs/gD w szczepionkach monowalentnych albo skojarzonych zawierających AS04
Wstęp
Badania immunogenności przeprowadzono u myszy Balb/C przy zastosowaniu czterech różnych antygenów:
1. Cząstki wirusopodobne HPV16 L1 (VLP-16)
2. Cząstki wirusopodobne HPV18 L1 (VLP-18)
3. antygen gD z HSV-2
4. HBsAg sformułowane z alumem/3D-MPL (AS04) z zastosowaniem jednorodnych partii antygenu albo
3D-MPL zaadsorbowanych na Al(OH)3 lub AlPO4.
Formulacje z 3D-MPL/Al(OH)3 są określane jako AS04D, podczas gdy kompozycje bazujące na
3D-MPL/AlPO4 są określane jako AS04C.
Testowano następujące szczepionki:
1. VLP16 + VLP18 AS04D;
2. gD AS04D,
3. HBs AS04C i oceniano moż liwość łączenia tych szczepionek.
Celem doświadczeń było porównanie immunogenności dwóch różnych kombinacji AS04 wytworzonych z:
1. VLP16 + VLP18 i gD.
2. VLP16 + VLP18 i gD oraz HBsAg
Protokół eksperymentalny jest w pełni opisany w części Materiały i Metody.
W skrócie, grupy 10 myszy immunizowano domięśniowo dwukrotnie w odstę pach 3 tygodni formulacjami w oparciu o różne Ag. Odpowiedź przeciwciał na VLPs, gD i HBs Ag oraz profil izotypowy indukowany przez szczepienie śledzono w teście ELISA w dniu 14 post II. W tym samym punkcie czasowym analizowano wytwarzanie cytokin (IFNy/IL5)) po restymulacji in vitro komórek śledziony antygenami VLPs, gD i HBs.
Materiały i metody Formulacja kompozycji
VLP16, VLP18, gD i HBs sformułowano z 3D-MLP na soli glinu.
Użyte składniki
Składnik Stężenie Bufor
HPV 16 VLP 560 gg/ml Tris 20 mM/NaCl 500 mM
HPV 18 VLP 550 gg /ml NaCl 500 mM/NaPO4 20 mM
AL(OH)3 10380 gg/ml H2O
HBs 1219 gg/ml PO4 10 mM/NaCl 150 mM
gD 443 gg /ml PBS pH 7, 4
3D-MPL 1170 gg/ml Woda do iniekcji
AlPO4 5 mg /ml NaCl 150 mM
Adsorpcja
a) Adsorpcja VLP
Oczyszczoną partię VLP 16 i VLP 18 dodaje się do Al(OH)3 tak aby otrzymać stosunek 2 μg VLP/10 gg Al(OH)3. Mieszaninę przechowuje się w temperaturze między 2-8°C do przygotowania końcowej formulacji.
b) Adsorpcja gD gg gD miesza się z 10 μg Al(OH)3. Mieszaninę przechowuje się w temperaturze między 2-8°C do przygotowania końcowej formulacji.
c) Adsorpcja HBs
PL 201 767 B1 μ g Hbs miesza się z 10 μ g AlPO4. Mieszaninę przechowuje się w temperaturze mię dzy 2-8° C do przygotowania końcowej formulacji.
d) Adsorpcja 3D-MPL μg 3D-MPL miesza się z 10 μg Al(OH)3. Mieszaninę przechowuje się w temperaturze między 2-8°C do przygotowania końcowej formulacji.
μg 3D-MPL miesza się z 10 μg AlPO4. Mieszaninę przechowuje się w temperaturze między 2-8°C aż do przygotowania końcowej formulacji.
Formulacja
H2O i NaCl miesza się (10 x zatężony) i po 10 minutach mieszania w temperaturze pokojowej dodaje się różne składniki: zaadsorbowany antygen, zaadsorbowany 3D-MPL i Al(OH)3 (patrz tabela poniżej). Wytrząsa się w temperaturze pokojowej przez 10 minut i przechowuje w 4°C aż do użycia do iniekcji.
Antygen (y) Immunostymulatory Nośnik
Grupa Typ μ9 Typ μ9 Typ μ9
gD 2 Al (OH)3 10
VLP16 2 Al (OH)3 10
A VLP18 2 Al (OH)3 10
3D-MPL 5 Al (OH)3 10
Al (OH)3 10
gD 2 Al (OH)3 10
VLP16 2 Al (OH)3 10
B VLP18 2 Al (OH)3 10
HBs 2 Al PO4 10
3D-MPL 5 Al (OH )3 10
gD 2 Al (OH)3 10
C 3D-MPL 5 Al (OH)3 10
Al (OH)3 30
VLP16 2 Al (OH)3 10
D VLP18 2 Al (OH)3 10
3D-MPL 5 Al (OH)3 10
Al (OH)3 20
HBs 2 Al PO4 10
E 3D-MPL 5 Al (OH)3 10
Al (OH)3 30
Serologia myszy
Serologia anty-VLP16 i anty-VLP18
Ocenę ilościową przeciwciał anty-VLP16 i anty-VLP18 przeprowadzono przy zastosowaniu testu ELISA używając jako antygeny opłaszczające VLP16 503/1 (20/12/99) i VLP18 504/2 (25/10/99F). Zastosowano 50 μl roztworów antygenu i przeciwciała na studzienkę. Antygen rozcieńczono do stężenia końcowego 0,5 μg/ml w PBS i zaadsorbowano przez noc w 4°C do ścianek studzienek 96-studzienkowych płytek do mikromiareczkowania (Maxisorb Immuno-plate, Nunc, Dania). Płytki inkubowano następnie przez 1 godzinę w 37°C z PBS zawierającym 1% albuminę z surowicy bydlęcej. Dwukrotne rozcieńczenia surowicy (rozpoczynając od rozcieńczenia 1/400) w buforze wysycającym dodano do opłaszczonych VLP płytek i inkubowano przez 1,5 godziny w 37°C. Płytki przemyto czterokrotnie PBS 0,1% Tween 20 i do każdej studzienki dodano skoniugowane z biotyną anty-mysie Ig (Amersham, UK) rozcieńczone 1/1500 w buforze wysycającym i inkubowano przez 1,5 godziny w 37°C. Po etapie przemywania, dodano kompleks streptawidyna-biotynylowana peroksydaza (Amersham,
PL 201 767 B1
UK) rozcieńczony 1/1000 w buforze wysycającym na dodatkowe 30 minut w 37°C. Płytki przemyto jak wyżej i inkubowano 20 minut z 0,04% roztworem o-fenylenodiaminy (Sigma), 0,03% H2O2 w 0,05 M buforze cytrynianowym pH 4,5 z 0,1% Tween 20. Reakcję zatrzymano 2N H2SO4 i odczytano przy 490/630 nm. Miana testu ELISA obliczono względem odnośnika przy użyciu SoftmaxPro (stosując równanie z czterema parametrami) i wyrażono jako EU/ml.
Odpowiedź anty-gD
Ocenę ilościową przeciwciał anty-gD przeprowadzono przy zastosowaniu testu ELISA używając gD (gD 43B318) jako antygenu opłaszczającego. Zastosowano 50 μl roztworów antygenu i przeciwciała na studzienkę. Antygen rozcieńczono do stężenia końcowego 1 μg/ml w PBS i zaadsorbowano przez noc w 4°C na ściankach studzienek 96-studzienkowych płytek do mikromiareczkowania (Maxisorb Immunoplate, Nunc, Dania). Płytki inkubowano następnie przez 1 godzinę w 37°C z PBS zawierającym 1% albuminę z surowicy bydlęcej i 0,1% Tween 20 (bufor wysycający 100 μl/studzienkę). Dwukrotne rozcieńczenia surowicy (rozpoczynając od rozcieńczenia 1/100) w buforze wysycającym dodano do opłaszczonych gD płytek i inkubowano przez 1,5 godziny w 37°C. Płytki przemyto czterokrotnie PBS z 0,1% Tween 20 i do każdej studzienki dodano skoniugowane z biotyną anty-mysie, IgG1, IgG2a, IgG2b lub Ig (Amersham, UK) rozcieńczony 1/1000 w buforze wysycającym i inkubowano przez 1,5 godziny w 37°C. Po etapie przemywania, dodano kompleks streptawidyna-biotynylowana peroksydaza (Amersham, UK) rozcieńczony 1/1000 w buforze wysycającym na dodatkowe 30 minut w 37°C. Płytki przemyto jak wyżej i inkubowano 20 minut z 0,04% roztworem o-fenylenodiaminy (Sigma), 0,03% H2O2 w 0,05 M buforze cytrynianowym pH 4,5 z 0,1% Tween 20. Reakcję zatrzymano 2N H2SO4 i odczytano przy 490/630 nm. Miana ELISA, obliczono względem odnośnika przy użyciu SoftmaxPro (stosując równanie z czterema parametrami) i wyrażono jako EU/ml.
Serologia anty-HBs
Ocenę ilościową przeciwciał anty-HBs przeprowadzono przy zastosowaniu testu ELISA używając HBs (Hep 286) jako antygenu opłaszczającego. Zastosowano 50 μl roztworów antygenu i przeciwciała na studzienkę. Antygen rozcieńczono do stężenia końcowego 1 μg/ml w PBS i zaadsorbowano przez noc w 4°C na ściankach studzienek 96-studzienkowych płytek do mikromiareczkowania (Maxisorb Immuno-plate, Nunc, Dania). Płytki inkubowano następnie przez 1 godzinę w 37°C z PBS zawierającym 1% albuminę z surowicy bydlęcej i 0,1% Tween 20 (bufor wysycający). Dwukrotne rozcieńczenia surowicy (rozpoczynając od rozcieńczenia 1/100) w buforze wysycającym dodano do opłaszczonych HBs płytek i inkubowano przez 1,5 godziny w 37°C. Płytki przemyto czterokrotnie PBS z 0,1% Tween 20 i do każdej studzienki dodano skoniugowane z biotyną anty-mysie Ig (Amersham, UK) rozcieńczone 1/1500 lub IgG1, IgG2a, IgG2b (IMTECH, USA) rozcieńczone odpowiednio 1/4000, 1/8000, 1/4000, w buforze wysycającym i inkubowano przez 1,5 godziny w 37°C. Po etapie przemywania, dodano kompleks streptawidyna-biotynylowana peroksydaza (Amersham, UK) rozcieńczony 1/1000 w buforze wysycającym na dodatkowe 30 minut w 37°C. Płytki przemyto jak wyżej i inkubowano 20 minut z 0,04% roztworem o-fenylenodiaminy (Sigma), 0,03% 0,05 M buforze cytrynianowym pH 4,5 z 0,1% Tween 20. Reakcję zatrzymano 2N H2SO4 i odczytano przy 490/630 nm. Miana ELISA obliczono względem odnośnika przy użyciu SoftmaxPro (stosując równanie z czterema parametrami) wyrażono jako EU/ml.
Wytwarzanie cytokin
Dwa tygodnie po drugiej immunizacji myszy zabito, pobrano aseptycznie śledziony i zgromadzono je w pule. Otrzymano zawiesiny komórkowe w pożywce RPMI 1640 (GIBCO) zawierającej mM L-glutaminę, antybiotyki, 5x10-5 M 2-merkaptoetanol i 5% płodową surowicę cielęcą. Komórki hodowano przy końcowym stężeniu 5x106 komórek/ml w 1 ml w 24-studzienkowych płaskodennych płytkach z różnymi stężeniami (10-1 μg/ml) każdego Ag (antygenu VLPs, gD lub HBs). Supernatanty zebrano 96 godzin później i zamrożono do czasu testowania pod kątem obecności IFNy i IL5 przy zastosowaniu testu ELISA.
IFNy (Genzyme)
Ocenę ilościową IFNy przeprowadzono testem ELISA stosując odczynniki z firmy Genzyme. Roztwory próbek i przeciwciała zastosowano w objętości 50 μl na studzienkę. 96-studzienkowe płytki do mikromiareczkowania (Maxisorb Immuno-plate, Nunc, Dania) opłaszczono przez noc w 4°C 50 μl chomiczego anty-mysiego IFNy rozcieńczonego 1,5 μg/ml w buforze węglanowym pH 9,5. Płytki inkubowano następnie przez 1 godzinę w 37°C z 100 μl PBS zawierającego 1% albuminę z surowicy bydlęcej i 0,1% Tween 20 (bufor wysycający). Dwukrotne rozcieńczenia supernatantu ze stymulacji in vitro (rozpoczynając od rozcieńczenia 1/2) w buforze wysycającym dodano do płytek opłaszczonych
PL 201 767 B1 anty-IFNY i inkubowano przez 1,5 godziny w 37°C. Płytki przemyto 4 razy PBS z 0,1% Tween 20 (bufor do przemywania) i do każdej studzienki dodano skoniugowane z biotyną kozie anty-mysie IFNy rozcieńczone w buforze wysycającym do końcowego stężenia 0,5 μg/ml i inkubowano przez 1,5 godziny w 37°C. Po etapie przemywania, dodano koniugat AMDEX (Amersham) rozcieńczony 1/10000 w buforze wysycającym na 30 minut w 37°C. Płytki przemyto jak wyżej i inkubowano z 50 μl TMB (Biorad) przez 10 minut. Reakcję zatrzymywano 0,4 N H2SO4 i odczytano przy 450/630 nm. Stężenia obliczono przy użyciu krzywej standardowej (wzorzec mysiego IFN-γ) stosując SoftmaxPro (równanie z czterema parametrami) i wyrażono jako pg/ml.
IL5 (Pharmingen)
Ocenę ilościową IL5 przeprowadzono przy zastosowaniu testu ELISA używając odczynników z firmy Pharmingen. Roztwory próbek i przeciwciała zastosowano w objętości 50 μΐ na studzienkę. 96-studzienkowe płytki do mikromiareczkowania (Maxisorb Immuno-plate, Nunc, Dania) opłaszczono przez noc 50 pl szczurzego przeciwciała anty-mysia IL5 rozcieńczonego do 1 μg/ml w buforze węglanowym pH 9,5 w 4 C. Płytki inkubowano następnie przez 1 godzinę w 37°C z 100 μΐ PBS zawierającego 1% albuminę z surowicy bydlęcej i 0,1 % Tween 20 (bufor wysycający). Dwukrotne rozcieńczenia supernatantu ze stymulacji in vitro (rozpoczynając od rozcieńczenia 1/2) w buforze wysycającym dodano do płytek opłaszczonych anty-IL5 i inkubowano przez 1,5 godziny w 37°C. Płytki przemyto 4 razy PBS z 0,1% Tween 20 (bufor do przemywania) i do każdej studzienki dodano skoniugowane z biotyną szczurze anty-mysie IL5 rozcieńczone w buforze wysycającym do końcowego stężenia 1 μg/ml i inkubowano przez 1,5 godziny w 37°C. Po etapie przemywania, dodano koniugat AMDEX (Amersham) rozcieńczony 1/10000 w buforze wysycającym na 30 minut w 37°C. Płytki przemyto jak wyżej i inkubowano z 50 μl TMB (Biorad) przez 10 minut. Reakcję zatrzymano 0,4 N H2SO4 i odczytano przy 450/630 nm. Stężenia obliczono stosując krzywą standardową (zrekombinowana mysia IL-5)z SoftmaxPro (równanie z czterema parametrami) i wyrażono jako pg/ml.
Grupy
Grupy po 10 myszy Balb/C immunizowano domięśniowo następującymi kompozycjami:
T a b e l a 1: Grupy i formulacje
Grupa Formulacja
A VLP16 2 pg/VLP18 2 pg/gD 2 pg/3D-MPL 5 pg/Al(OH)a 50 pg
B VLP16 2 pg/VLP18 2 pg/HBs 2 pg/gD 2pg/3D-MPL 5 pg/Al(OH)3 40 pg/AlPO4 10 pg
C gD 2 pg 3D-MPL 5 pg/Al(OH)3 50 pg
D VLP16 2 pg/VLP18 2 pg/3D-MPL 5 pg/Al(OH)3 50 pg
E HBs 2 pg/3D-MPL 5 pg/AlPO4 10 pg/Al (OHjs 40 pg
Szczegóły formulacji są opisane powyżej w części
Materiały i Metody
Wyniki
1. Serologia
a) Odpowiedź anty-VLP16:
Odpowiedzi humoralne (Ig) mierzono testem ELISA stosując jako antygen opłaszczajacy VLP16
503- 1 (20/12/99). Surowicę analizowano dnia 14 post II.
Na fig. 1 pokazano odpowiedzi przeciwciał Ig anty-VLP16 mierzone w poszczególnych surowicach dnia 14 post II.
Miana anty-VLP16 otrzymane po immunizacji kombinacją VLPs, gD i Ag HBs (Grupa B) były nieco niższe niż otrzymane bądź z kombinacją VLPs i gD (Grupa A) bądź z monowalentną formulacją VLPs (grupa D) (GMT wynoszące odpowiednio 27578 versus 48105 EU/ml versus44448 EU/ml). Przed analizą statystyczną wobec każdej populacji zastosowano test T-Grubbs dla wykluczenia danych. Dwie nieodpowiadające myszy w grupach A i D wyeliminowano z analizy.
Wykazano, że stosując test Student Newman Keuls zaobserwowane między grupami różnice nie są statystycznie istotne.
b) Odpowiedź anty-VLP18:
Odpowiedzi humoralne (Ig) mierzono testem ELISA stosując jako antygen opłaszczający VLP18
504- 2 (25/10/99). Surowicę zanalizowano dnia 14 post II.
PL 201 767 B1
Na fig. 2 pokazano odpowiedzi przeciwciał Ig anty-VLP18 mierzone w poszczególnych surowicach dnia 14 post II.
Miana anty-VLP18 otrzymane po immunizacji kombinacją VLPs, gD i Ag HBs (Grupa B) były tego samego rzędu wielkości co miana otrzymane bądź dla kombinacji VLPs i gD (Grupa A) bądź dla monowalentnej formulacji VLPs (grupa D) (GMT wynoszące odpowiednio 56078 versus 88786 EU/ml versus 76991 EU/ml).
Przed analizą statystyczną wobec każdej populacji zastosowano test T-Grubbs w celu wykluczenia danych. Dwie nieodpowiadające myszy w grupach A i D wyeliminowano z analizy.
Wykazano, że różnice te nie są statystycznie istotne przy zastosowaniu jednokierunkowej analizy wariancji.
c) Odpowiedź anty-gD:
Odpowiedzi humoralne (Ig i izotypy) mierzono w teście ELISA stosując gD jako antygen opłaszczający. Surowicę analizowano dnia 14 post II.
Na fig. 3 pokazano odpowiedzi przeciwciał anty-gD mierzone w poszczególnych surowicach dnia 14 post II.
Odnośnie do odpowiedzi anty-gD zaobserwowano niewielkie zmniejszenie dla GMT otrzymanego z kombinacją VLPs/ gD/HBs (Grupa B) w porównaniu z samym gD (Grupa C) bądź kombinacją VLPs/gD (grupa A) (GMT wynoszące odpowiednio 18631 versus 32675 EU/ml versus 27058 EU/ml).
Przed analizą statystyczną wobec każdej populacji zastosowano test T-Grubbs dla wyeliminowania danych. Dwie nieodpowiadające myszy w grupach A i D wyeliminowano z analizy.
Przeprowadzono jednokierunkową analizę wariancji dla mian anty-gD po przekształceniu logarytmicznym danych post II. Nie zaobserwowano różnic statystycznie istotnych między trzema kompozycjami.
Analizowany rozkład izotypowy w pulowanych surowicach był następujący:
Rozkład izotypowy (%)
igGi IgG2a IgG2b
Grupa A 96 3 2
Grupa B 96 3 2
Grupa C 97 1 1
Nie zaobserwowano znaczących różnic w profilu izotypowym indukowanym przez te trzy formulacje: w tych trzech grupach indukowana była głównie odpowiedź IgGl (96-97% IgG1) jak przedstawiono w tabeli poniżej.
d) Odpowiedź anty-HBs:
Odpowiedzi humoralne (Ig i izotypy) mierzono w teście ELISA stosując HBsAg (Hep286) jako antygen opłaszczający. Analizowano surowicę z dnia 14 post II.
Na fig. 4 pokazano odpowiedzi przeciwciał anty-HBs mierzone w poszczególnych surowicach dnia 14 post II.
Nieco niższą odpowiedź przeciwciał anty-HBs obserwuje się dla kombinacji z grupy B zawierającej antygeny VLPs, gD i HBs w porównaniu z samym HBs (grupa E) (GMT wynoszące 28996 EU/ml w stosunku do 20536 EU/ml).
Przeprowadzono jednotorową analizę wariancji dla mian anty-HBs po przekształceniu logarytmicznym danych post II. Nie zaobserwowano istotnych statystycznie różnic między grupą B (VLP/HBs/gD) versus grupa E (HBs AS04C) przy zastosowaniu testu Student Newman Keuls.
Analizowany rozkład izotypowy w pulowanych surowicach był następujący i nie wykazywał różnic pomiędzy 2 grupami z ilością IgG2a zachowaną w szczepionce skojarzonej.
Rozkład izotypowy (%)
IgG1 IgG2a IgG2b
Grupa B 54 24 21
Grupa E 56 23 21
PL 201 767 B1
2. Odpowiedź immunologiczna za pośrednictwem komórek
Odpowiedzi immunologiczne za pośrednictwem komórek (wytwarzanie IFNy/IL5) oceniano dnia 14 post II po restymulacji komórek śledziony in vitro antygenami VLPs, gD lub HBs. Dla każdej grupy myszy utworzono pule z 5 narządów.
Procedura eksperymentalna jest w pełni opisana w Materiałach i Metodach.
3. Wytwarzanie cytokin
a) Restymulacja in vitro przez VLP16 i VLP18
Na fig. 5 pokazano wytwarzanie cytokin monitorowane w komórkach śledziony po 96 godzinach restymulacji in vitro przez VLP16.
Na fig. 6 pokazano wytwarzanie cytokin monitorowane w komórkach śledziony po 96 godzinach restymulacji in vitro przez VLP18.
Dla żadnego z antygenów VLP nie zaobserwowano wyraźnego wpływu wielkości dawki na wytwarzanie obydwu cytokin stosując do restymulacji 10 μg i 1 μg Ag. Dla wszystkich formulacji zaobserwowano wyraźny profil TH1.
T a b e l a 2:
Stosunek IFN-y/IL-5 po restymulacji in vitro przez VLP16 i VLP18.
Stosunek IFN/IL-5 Grupa A Grupa B Grupa D
VLP16 10 pg/ml 5,2 8,9 11,8
VLP16 1 pg/ml 15,1 14,3 16,5
Stosunek IFN/IL-5 Grupa A Grupa B Grupa D
VLP18 10 pg /ml 19,6 11,1 16,1
VLP18 1 pg/ml 23,2 14,3 18,2
b) Restymulacja in vitro przez gD
Na fig. 7 pokazano wytwarzanie cytokin monitorowane w komórkach śledziony po 96 godzinach restymulacji in vitro przez antygen gD.
Nie zaobserwowano wyraźnego wpływu wielkości dawki przy zastosowaniu dawki 10 μg i 1 μg Ag do restymulacji.
IFN-γ jest wytwarzany w znacznie wyższych stężeniach w porównaniu z IL-5 (Tabela 3) wskazując na wyraźny profil TH-1 odpowiedzi immunologicznej we wszystkich ocenianych grupach (szczepionka monowalentna w stosunku do skojarzonej).
T a b e l a 3:
Stosunek IFN-y/IL-5 po restymulacji in vitro przez gD
Stosunek IFN/IL-5 Grupa A Grupa B Grupa C
gD 10 pg/ml 6,2 7,2 3,1
gD 1 pg/ml 6,2 11,2 2,3
c) Restymulacja in vitro przez HBs
Na fig. 8 pokazano wytwarzanie cytokin monitorowane w komórkach śledziony po 96 godzinach restymulacji in vitro przez antygen HBs.
Dla grupy B obserwowano znaczący poziom wytwarzania IFN-γ, ale nie IL5. Jak pokazano w tabeli 2 obserwowano wyższy poziom wytwarzania IFN-γ dla grupy E w porównaniu z grupą B. Jednakże wyższe wartości tła dla IFNy obserwowano w grupie E (monowalentnej HBs) dla kontroli bez antygenu przy restymulacji. Bardzo wysoki stosunek IFN-y/IL-5 obserwowano dla szczepionki monowalentnej wskazując, że indukowana jest mocna odpowiedź TH1. Podobnie, wysoki stosunek IFN-y/IL-5 zmierzono dla szczepionki skojarzonej potwierdzając zdolność tej formulacji do indukowania również odpowiedzi TH-1
T a b e l a 4:
Stosunek IFN-y/IL-5 po restymulacji in vitro przez HBs.
Stosunek IFN/IL5 Grupa B Grupa E
HBs 10 pg/ml 15,8 65,3
HBs 1 pg/ml 7,6 67,6
PL 201 767 B1
Wnioski
Wpływ kombinacji Ag VLPs/gD lub Ag VLPs/gD/HBs sformułowanych w AS04 na immunogenność oceniano na myszach Balb/C:
Odnośnie do analizy serologicznej, nie zaobserwowano ujemnego wpływu kombinacji Ag na serologię anty-VLPs, anty-gD i anty-HBs.
Kombinacja antygenów VLPs i gD lub VLPs, gD i HBs nie ma ujemnego wpływu na profil izotypowy i odpowiedzi przeciwciał wykazywane przez szczepionki monowalentne gD i HBs.
Przy ocenie cytokin, profil TH1 (stosunek IFN-y/IL-5) obserwowany dla każdej szczepionki monowalentnej potwierdzono w grupach, gdzie stosowano szczepionki skojarzone.

Claims (11)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Kompozycja szczepionki odpowiednia do stosowania do leczenia lub profilaktyki infekcji ludzkim papillomawirusem i wirusem opryszczki, znamienna tym, że zawiera:
    (a) antygen wirusa opryszczki pospolitej (HSV)2gD; oraz (b) antygen papillomawirusa (HPV)L1 w kombinacji z adiuwantem, który jest selektywnym stymulatorem odpowiedzi komórkowej TH1, przy czym kompozycja nie zawiera antygenu zapalenia wątroby typu B.
  2. 2. Kompozycja szczepionki według zastrz. 1, znamienna tym, że dodatkowo zawiera nośnik.
  3. 3. Kompozycja szczepionki według zastrz. 1 albo 2, znamienna tym, że selektywny stymulator odpowiedzi komórkowej TH1 jest wybrany z grupy adiuwantów obejmujących: 3 de-O-acylowany monofosforylolipid A (3D-MPL, 3D-MPL) o rozmiarze cząstek wynoszącym korzystnie około albo mniej niż 100 nm, QS21, mieszaninę QS21 i cholesterolu oraz oligonukleotyd CpG.
  4. 4. Kompozycja szczepionki według zastrz. 3, znamienna tym, że selektywnym stymulatorem odpowiedzi komórkowej TH1 jest 3D-MPL.
  5. 5. Kompozycja szczepionki według zastrz. 4, znamienna tym, że dodatkowo zawiera alum.
  6. 6. Kompozycja szczepionki według zastrz. 1-5, znamienna tym, że antygenem HSV jest skrócony HSV-2 gD.
  7. 7. Kompozycja szczepionki według zastrz. 1-6, znamienna tym, że antygen ludzkiego papillomawirusa pochodzi od HPV 6.
  8. 8. Kompozycja szczepionki według zastrz. 1-6, znamienna tym, że antygen ludzkiego papillomawirusa pochodzi od HPV 11.
  9. 9. Kompozycja szczepionki według zastrz. 1-6, znamienna tym, że antygen ludzkiego papillomawirusa pochodzi od HPV 16.
  10. 10. Kompozycja szczepionki według zastrz. 1-6, znamienna tym, że antygen ludzkiego papillomawirusa pochodzi od HPV 18.
  11. 11. Kompozycja szczepionki według zastrz. 2-10, znamienna tym, że nośnik jest wybrany z grupy składającej się z wodorotlenku glinu, fosforanu glinu i tokoferolu oraz emulsji oleju w wodzie.
PL354039A 1999-09-07 2000-09-07 Kompozycja szczepionki przeciwko ludzkim papillomawirusom i wirusowi opryszczki PL201767B1 (pl)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB9921146A GB9921146D0 (en) 1999-09-07 1999-09-07 Novel composition

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL354039A1 PL354039A1 (pl) 2003-12-15
PL201767B1 true PL201767B1 (pl) 2009-05-29

Family

ID=10860520

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL362069A PL201264B1 (pl) 1999-09-07 2000-09-07 Kompozycja szczepionki przeciwko ludzkiemu papillowirusowi i HPV 16L1VLP i HPV 18LI VLP
PL354039A PL201767B1 (pl) 1999-09-07 2000-09-07 Kompozycja szczepionki przeciwko ludzkim papillomawirusom i wirusowi opryszczki

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL362069A PL201264B1 (pl) 1999-09-07 2000-09-07 Kompozycja szczepionki przeciwko ludzkiemu papillowirusowi i HPV 16L1VLP i HPV 18LI VLP

Country Status (33)

Country Link
US (3) US6936255B1 (pl)
EP (3) EP1410805B1 (pl)
JP (2) JP4689910B2 (pl)
KR (2) KR100557665B1 (pl)
CN (2) CN100389824C (pl)
AR (1) AR025502A1 (pl)
AT (2) ATE312624T1 (pl)
AU (1) AU766494B2 (pl)
BR (1) BR0014171A (pl)
CA (2) CA2443214C (pl)
CO (1) CO5280045A1 (pl)
CY (2) CY1107457T1 (pl)
CZ (2) CZ302811B6 (pl)
DE (2) DE60027029T2 (pl)
DK (2) DK1210113T3 (pl)
ES (2) ES2261243T3 (pl)
GB (1) GB9921146D0 (pl)
GC (1) GC0000201A (pl)
HK (1) HK1048435B (pl)
HU (2) HU228687B1 (pl)
IL (3) IL158107A0 (pl)
MX (1) MXPA02002484A (pl)
MY (2) MY130084A (pl)
NO (3) NO332800B1 (pl)
NZ (2) NZ527560A (pl)
PL (2) PL201264B1 (pl)
PT (1) PT1210113E (pl)
SG (1) SG110072A1 (pl)
SI (2) SI1210113T1 (pl)
TR (1) TR200200607T2 (pl)
TW (1) TWI258374B (pl)
WO (1) WO2001017551A2 (pl)
ZA (2) ZA200306402B (pl)

Families Citing this family (74)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US20060029617A1 (en) * 1997-10-03 2006-02-09 Charreyre Catherine E Porcine circovirus and Helicobacter combination vaccines and methods of use
FR2772047B1 (fr) 1997-12-05 2004-04-09 Ct Nat D Etudes Veterinaires E Sequence genomique et polypeptides de circovirus associe a la maladie de l'amaigrissement du porcelet (map), applications au diagnostic et a la prevention et/ou au traitement de l'infection
ES2628744T3 (es) 1998-05-22 2017-08-03 Ottawa Hospital Research Institute Métodos y productos para inducir inmunidad en mucosas
CZ301212B6 (cs) * 1998-10-16 2009-12-09 Smithkline Beecham Biologicals S. A. Vakcinacní prostredek
US20050002958A1 (en) * 1999-06-29 2005-01-06 Smithkline Beecham Biologicals Sa Vaccines
GB9921147D0 (en) * 1999-09-07 1999-11-10 Smithkline Beecham Biolog Novel composition
ES2284559T3 (es) 2001-03-23 2007-11-16 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung Des Offentlichen Rechts Genes y proteinas e6 y e7 modificados del vph utiles como vacuna.
GB0110431D0 (en) * 2001-04-27 2001-06-20 Glaxosmithkline Biolog Sa Novel compounds
GB0206360D0 (en) 2002-03-18 2002-05-01 Glaxosmithkline Biolog Sa Viral antigens
PT1506222E (pt) † 2002-05-17 2009-06-12 Univ Cape Town Proteínas l1 quiméricas do papilomavírus humano 16 incluindo um péptido l2, partículas semelhantes a vírus preparadas a partir daquelas e um método de preparação das partículas
CA2484941A1 (en) 2002-07-24 2004-02-05 Intercell Ag Antigens encoded by alternative reading frame from pathogenic viruses
EP1537418A2 (en) 2002-09-13 2005-06-08 Intercell AG Method for isolating hepatitis c virus peptides
JP2006515277A (ja) 2002-10-29 2006-05-25 コーリー ファーマシューティカル グループ， リミテッド Ｃ型肝炎ウィルス感染の処置および予防に関する方法および製品
AU2003300919A1 (en) 2002-12-11 2004-06-30 Coley Pharmaceutical Gmbh 5' cpg nucleic acids and methods of use
US7858098B2 (en) * 2002-12-20 2010-12-28 Glaxosmithkline Biologicals, S.A. Vaccine
EA009179B1 (ru) * 2002-12-20 2007-12-28 Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. Вакцина на основе вирусоподобных частиц вируса папилломы человека 16 и вируса папилломы человека 18 l1
UA85377C2 (ru) * 2002-12-20 2009-01-26 Глаксосмітклайн Байолоджикалз Са Применение композиции, содержащей вирусоподобные частички hpv16 і hpv18 при приготовлении медикамента для профилактики инфекции и/или болезни, вызванной группой hpv онкогенных типов, способы индуцирования иммунной реакции, профилактики инфекции и/или болезни, профилактики в популяции субъектов инфекции вызванных одной или несколькими группами онкогенных типов hpv, вакцинная композиция, которая включает hpv16 і нр18
CA2519922A1 (en) * 2003-03-24 2004-10-07 Intercell Ag Use of alum and a th1 immune response inducing adjuvant for enhancing immune responses
EP2345420B1 (en) * 2003-03-24 2016-01-06 Valneva Austria GmbH Use of a TH1 immune response inducing adjuvant for enhancing immune responses
US7758866B2 (en) * 2004-06-16 2010-07-20 Glaxosmithkline Biologicals, S.A. Vaccine against HPV16 and HPV18 and at least another HPV type selected from HPV 31, 45 or 52
PL1758609T3 (pl) * 2004-06-16 2013-02-28 Glaxosmithkline Biologicals Sa Szczepionka przeciw HPV16 i HPV18 oraz co najmniej jednemu HPV innego typu wybranemu spośród HPV 31, 45 lub 52
GB0413510D0 (en) * 2004-06-16 2004-07-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
US7833707B2 (en) 2004-12-30 2010-11-16 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Methods of overexpression and recovery of porcine circovirus type 2 ORF2
NZ560930A (en) * 2005-02-16 2011-06-30 Novartis Vaccines & Diagnostic Hepatitis B virus vaccine comprising a hepatitis B virus surface antigen, aluminium phosphate, 3-O-deacylated monophosphoryl lipid A and a triethylammonium ion
JP4182074B2 (ja) 2005-03-03 2008-11-19 ファナック株式会社 ハンド及びハンドリングロボット
NZ561822A (en) * 2005-03-23 2010-04-30 Glaxosmithkline Biolog Sa Multivalent influenza virus vaccine
MX2007013475A (es) * 2005-04-26 2008-04-02 Glaxosmithkline Biolog Sa Vacuna.
EA013326B1 (ru) * 2005-04-26 2010-04-30 Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. Вакцина
TWI457133B (zh) 2005-12-13 2014-10-21 Glaxosmithkline Biolog Sa 新穎組合物
US7790203B2 (en) * 2005-12-13 2010-09-07 Lowder Tom R Composition and regimen for the treatment of herpes simplex virus, herpes zoster, and herpes genitalia epidermal herpetic lesions
SG170792A1 (en) 2005-12-29 2011-05-30 Boehringer Ingelheim Vetmed Use of a pcv2 immunogenic composition for lessening clinical symptoms in pigs
DK1968630T5 (en) 2005-12-29 2018-08-13 Boehringer Ingelheim Vetmedica Inc MULTIVALENT PCV2 IMMUNOGENIC COMPOSITIONS.
WO2008027394A2 (en) 2006-08-28 2008-03-06 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Constructs for enhancing immune responses
US20090181078A1 (en) 2006-09-26 2009-07-16 Infectious Disease Research Institute Vaccine composition containing synthetic adjuvant
SI2484375T1 (en) 2006-09-26 2018-08-31 Infectious Disease Research Institute A vaccine composition comprising a synthetic adjuvant
EP1941903A1 (en) 2007-01-03 2008-07-09 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Prophylaxis and treatment of PRDC
EP1958644A1 (en) 2007-02-13 2008-08-20 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Prevention and treatment of sub-clinical pcvd
US7709010B2 (en) 2007-03-09 2010-05-04 Merck Sharp & Dohme Corp. Papillomavirus vaccine compositions
MX2009014246A (es) * 2007-06-26 2010-03-31 Japan Health Science Found Antigeno de vacuna con la capacidad de inducir anticuerpo de neutralizacion y reaccion cruzada contra virus de papiloma humano del tipo de alto riesgo.
US7829274B2 (en) 2007-09-04 2010-11-09 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Reduction of concomitant infections in pigs by the use of PCV2 antigen
ES2588913T3 (es) 2008-06-04 2016-11-07 The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute Uso de una partícula vírica de encefalitis japonesa como adyuvante
NZ590919A (en) * 2008-07-31 2012-10-26 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine against hpv
NZ597182A (en) 2009-05-22 2014-07-25 Genocea Biosciences Inc Vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response
HRP20161585T1 (hr) 2009-06-05 2016-12-30 Infectious Disease Research Institute Sintetski glukopiranozilni lipidi kao adjuvansi i cjepivni pripravci koji ih sadrže
JP5758385B2 (ja) 2009-06-19 2015-08-05 アイジェン インコーポレーテッド 子宮頸がんワクチン
BRPI1014718A2 (pt) * 2009-06-25 2016-04-12 Glaxonsmithkline Biolog S A polipeptídeo do papiloma vírus humano, capsômero, partícula tipo vírus, composição imunogência, molécula de ácido nucléico, e, métodos para produzir o polipeptídeo, e, para preparar uma composição imunogênica
AR078253A1 (es) 2009-09-02 2011-10-26 Boehringer Ingelheim Vetmed Metodos para reducir la actividad antivirica en composiciones pcv-2 y composiciones pcv-2 con mejor inmunogenicidad
HRP20181039T1 (hr) * 2010-05-28 2018-08-24 Zoetis Belgium S.A. Cjepiva koja sadrže kolesterol i cpg kao jedine molekule koje nose adjuvans
UA112970C2 (uk) * 2010-08-05 2016-11-25 Мерк Шарп Енд Доме Корп. Інактивований вірус вітряної віспи, спосіб його одержання і застосування
EP2609428B1 (en) * 2010-08-27 2016-02-10 Intervet International B.V. Potency test for vaccine formulations
CN102008721A (zh) * 2010-11-16 2011-04-13 浙江大学 一种hpv多肽/dc混合疫苗及其制备
JP6055776B2 (ja) 2010-11-24 2016-12-27 ジェノセア バイオサイエンシーズ， インコーポレイテッド 単純ヘルペスウイルス２型に対するワクチン：免疫応答を誘発する組成物及び方法
CA2832307A1 (en) 2011-04-08 2012-10-18 Immune Design Corp. Immunogenic compositions and methods of using the compositions for inducing humoral and cellular immune responses
CN102210858B (zh) * 2011-05-18 2013-05-08 北京科兴生物制品有限公司 一种肠道病毒71型与甲型肝炎联合疫苗
US20140127260A1 (en) 2011-06-24 2014-05-08 Ramesh V. Chintala Hpv vaccine formulations comprising aluminum adjuvant and methods of producing same
EP2726097A4 (en) * 2011-07-01 2015-03-11 Univ California HERPES VIRUS VACCINE AND METHOD OF USE
WO2013078299A1 (en) 2011-11-23 2013-05-30 Genocea Biosciences, Inc. Nucleic acid vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response
EP2811981B1 (en) 2012-02-07 2019-05-08 Infectious Disease Research Institute Improved adjuvant formulations comprising tlr4 agonists and methods of using the same
ES2673556T3 (es) 2012-05-16 2018-06-22 Immune Design Corp. Vacunas para el VHS-2
US9624510B2 (en) 2013-03-01 2017-04-18 The Wistar Institute Adenoviral vectors comprising partial deletions of E3
EP3711768A1 (en) 2013-04-18 2020-09-23 Immune Design Corp. Gla monotherapy for use in cancer treatment
US9463198B2 (en) 2013-06-04 2016-10-11 Infectious Disease Research Institute Compositions and methods for reducing or preventing metastasis
JP6741580B2 (ja) 2013-12-31 2020-08-19 インフェクシャス ディズィーズ リサーチ インスティチュート 単一バイアルのワクチン製剤
SG11201900808SA (en) 2016-08-01 2019-02-27 Wistar Inst Compositions and methods of replication deficient adenoviral vectors for vaccine applications
EP3519427A4 (en) 2016-09-28 2020-03-11 Genocea Biosciences Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF HERPES
CN107987159B (zh) * 2017-11-28 2021-06-22 上海药明生物医药有限公司 一种使用大剂量dna免疫技术免疫动物使血清中抗体滴度提高的方法
GB201821207D0 (en) 2018-12-24 2019-02-06 Tcer Ab Immunotherapy therapy
MX2021014363A (es) 2019-05-25 2022-02-21 Infectious Disease Res Inst Composicion y metodo para secar por pulverizacion una emulsion de vacuna adyuvante.
CN110652980B (zh) * 2019-10-09 2020-06-30 北京尚华生态环保科技股份公司 一种土壤原位修复剂
CN110576034B (zh) * 2019-10-09 2020-06-30 北京尚华生态环保科技股份公司 一种土壤原位修复方法
EP4058581A1 (en) 2019-11-15 2022-09-21 Infectious Disease Research Institute Rig-i agonist and adjuvant formulation for tumor treatment
CN114681602B (zh) * 2020-12-25 2023-12-01 中国食品药品检定研究院 一种双价人乳头瘤病毒疫苗
CN114796479B (zh) * 2022-06-02 2026-02-10 金宇保灵生物药品有限公司 一种畜类动物疫苗用水包油包水佐剂及其制备方法和应用

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH085804B2 (ja) 1988-04-28 1996-01-24 財団法人化学及血清療法研究所 Ａ型及びｂ型肝炎混合アジュバントワクチン
GB9113809D0 (en) * 1991-06-26 1991-08-14 Cancer Res Campaign Tech Papillomavirus l2 protein
ES2279020T3 (es) * 1991-07-19 2007-08-16 The University Of Queensland Vacuna contra el papilomavirus humano.
US5618536A (en) * 1992-09-03 1997-04-08 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Chimeric papillomavirus-like particles
US5437951A (en) * 1992-09-03 1995-08-01 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Self-assembling recombinant papillomavirus capsid proteins
AU685443B2 (en) 1993-03-23 1998-01-22 Smithkline Beecham Biologicals (Sa) Vaccine compositions containing 3-O deacylated monophosphoryl lipid A
GB9326253D0 (en) * 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
GB9409962D0 (en) * 1994-05-18 1994-07-06 Smithkline Beecham Biolog Novel compounds
JP3958360B2 (ja) * 1995-02-24 2007-08-15 キャンタブ ファーマシューティカルズ リサーチ リミティド 免疫治療剤として役立つポリペプチド及びポリペプチド調製の方法
EP0877809A1 (en) * 1996-01-26 1998-11-18 Innogenetics N.V. TOXOPLASMA GONDII ANTIGEN Tg20
ATE390146T1 (de) * 1996-02-09 2008-04-15 Smithkline Beecham Biolog Vakzine gegen das varicella zostervirus produkt von gen 63
GB9711990D0 (en) * 1997-06-11 1997-08-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
GB9717953D0 (en) * 1997-08-22 1997-10-29 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
CA2229955C (en) * 1998-02-20 2003-12-09 Medigene Gmbh Papilloma virus capsomere vaccine formulations and methods of use
CA2324289C (en) * 1998-03-09 2010-07-13 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Combined vaccine compositions
US6500284B1 (en) 1998-06-10 2002-12-31 Suraltech, Inc. Processes for continuously producing fine grained metal compositions and for semi-solid forming of shaped articles
GB9819898D0 (en) 1998-09-11 1998-11-04 Smithkline Beecham Plc New vaccine and method of use
CZ301212B6 (cs) 1998-10-16 2009-12-09 Smithkline Beecham Biologicals S. A. Vakcinacní prostredek
ES2313881T3 (es) * 1999-02-05 2009-03-16 MERCK & CO., INC. Formulaciones de vacunas frente al papilomavirus humano.
GB9921147D0 (en) * 1999-09-07 1999-11-10 Smithkline Beecham Biolog Novel composition

Also Published As

Publication number Publication date
ZA200201810B (en) 2004-05-26
CN1618465A (zh) 2005-05-25
AU766494B2 (en) 2003-10-16
SG110072A1 (en) 2005-04-28
KR100557665B1 (ko) 2006-03-06
EP1769806A2 (en) 2007-04-04
MY130084A (en) 2007-05-31
KR100594668B1 (ko) 2006-06-30
CO5280045A1 (es) 2003-05-30
TW200408405A (en) 2004-06-01
NO331825B1 (no) 2012-04-10
NO20033715L (no) 2002-04-30
HK1048435A1 (en) 2003-04-04
CA2384064C (en) 2010-06-01
CN1387443A (zh) 2002-12-25
BR0014171A (pt) 2002-05-21
US20060280756A1 (en) 2006-12-14
GC0000201A (en) 2006-03-29
DK1210113T3 (da) 2006-07-03
CY1107457T1 (el) 2012-12-19
MXPA02002484A (es) 2002-08-28
CA2384064A1 (en) 2001-03-15
KR20020027630A (ko) 2002-04-13
HK1048435B (en) 2007-01-05
JP2003508495A (ja) 2003-03-04
NZ527560A (en) 2004-12-24
HU229099B1 (en) 2013-07-29
TWI258374B (en) 2006-07-21
DE60024893D1 (de) 2006-01-19
CY1106090T1 (el) 2011-06-08
HUP0202804A2 (hu) 2002-12-28
US6936255B1 (en) 2005-08-30
DE60027029D1 (de) 2006-05-18
NO20033715D0 (no) 2003-08-21
EP1210113A2 (en) 2002-06-05
TR200200607T2 (tr) 2002-06-21
DK1410805T3 (da) 2006-04-18
EP1410805A1 (en) 2004-04-21
NO20021116D0 (no) 2002-03-06
ZA200306402B (en) 2004-08-02
AU7775100A (en) 2001-04-10
US7220551B2 (en) 2007-05-22
AR025502A1 (es) 2002-11-27
EP1769806A3 (en) 2007-10-24
EP1410805B1 (en) 2005-12-14
CZ2002843A3 (cs) 2002-08-14
CZ302811B6 (cs) 2011-11-23
PT1210113E (pt) 2006-07-31
MY142842A (en) 2011-01-14
US20040126394A1 (en) 2004-07-01
HK1064958A1 (en) 2005-02-08
NO2012016I1 (no) 2012-10-15
NZ517621A (en) 2003-09-26
HUP0202804A3 (en) 2004-08-30
NO2012016I2 (no) 2012-10-08
HU228687B1 (en) 2013-05-28
SI1210113T1 (sl) 2006-08-31
PL354039A1 (pl) 2003-12-15
DE60027029T2 (de) 2006-10-19
NO332800B1 (no) 2013-01-14
PL201264B1 (pl) 2009-03-31
IL158107A0 (en) 2004-03-28
EP1210113B1 (en) 2006-03-29
CA2443214C (en) 2006-03-21
WO2001017551A3 (en) 2001-09-27
JP2004067696A (ja) 2004-03-04
IL158107A (en) 2008-11-03
ES2253636T3 (es) 2006-06-01
WO2001017551A2 (en) 2001-03-15
ATE321569T1 (de) 2006-04-15
CA2443214A1 (en) 2001-03-15
GB9921146D0 (en) 1999-11-10
HU0303215D0 (en) 2003-11-28
US7101560B2 (en) 2006-09-05
SI1410805T1 (sl) 2006-04-30
NO20021116L (no) 2002-04-30
ATE312624T1 (de) 2005-12-15
CN1325117C (zh) 2007-07-11
JP4689910B2 (ja) 2011-06-01
CN100389824C (zh) 2008-05-28
IL148456A0 (en) 2002-09-12
HUP0303215A3 (en) 2008-04-28
KR20030087081A (ko) 2003-11-12
DE60024893T2 (de) 2006-07-06
ES2261243T3 (es) 2006-11-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1210113B1 (en) Combined vaccine compositions
JP4510283B2 (ja) 併合ワクチン組成物
JP4694745B2 (ja) 新規組成物
AU2003236490B2 (en) Novel composition
HK1107519A (en) Vaccine against hpv
HK1099204A (en) Vaccine against hbv and hpv

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Decisions on the lapse of the protection rights

Effective date: 20140907