PL201264B1 - Kompozycja szczepionki przeciwko ludzkiemu papillowirusowi i HPV 16L1VLP i HPV 18LI VLP - Google Patents

Kompozycja szczepionki przeciwko ludzkiemu papillowirusowi i HPV 16L1VLP i HPV 18LI VLP

Info

Publication number
PL201264B1
PL201264B1 PL362069A PL36206900A PL201264B1 PL 201264 B1 PL201264 B1 PL 201264B1 PL 362069 A PL362069 A PL 362069A PL 36206900 A PL36206900 A PL 36206900A PL 201264 B1 PL201264 B1 PL 201264B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
mpl
hpv
antigen
vlp
hbs
Prior art date
Application number
PL362069A
Other languages
English (en)
Inventor
Moncef Mohammed Slaoui
Original Assignee
Smithkline Beecham Biolog
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Smithkline Beecham Biolog filed Critical Smithkline Beecham Biolog
Publication of PL201264B1 publication Critical patent/PL201264B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
    • C07K16/084—Papovaviridae, e.g. papillomavirus, polyomavirus, SV40, BK virus, JC virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/295—Polyvalent viral antigens; Mixtures of viral and bacterial antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/29—Hepatitis virus
    • A61K39/292—Serum hepatitis virus, hepatitis B virus, e.g. Australia antigen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B09—DISPOSAL OF SOLID WASTE; RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09C—RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09C1/00—Reclamation of contaminated soil
    • E—FIXED CONSTRUCTIONS
    • E02—HYDRAULIC ENGINEERING; FOUNDATIONS; SOIL SHIFTING
    • E02D—FOUNDATIONS; EXCAVATIONS; EMBANKMENTS; UNDERGROUND OR UNDERWATER STRUCTURES
    • E02D3/00—Improving or preserving soil or rock, e.g. preserving permafrost soil
    • E02D3/11—Improving or preserving soil or rock, e.g. preserving permafrost soil by thermal, electrical or electro-chemical means
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5258—Virus-like particles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/20011—Papillomaviridae
    • C12N2710/20023—Virus like particles [VLP]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/20011—Papillomaviridae
    • C12N2710/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
    • C12N2730/00011—Details
    • C12N2730/10011—Hepadnaviridae
    • C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
    • C12N2730/10134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

1. Kompozycja szczepionki przeciwko ludzkiemu papillowirusowi, znamienna tym, ze zawiera: HPV 16 L1 VLP, HPV 18 L1 VLP, wodorotlenek glinu i 3D MPL. 2. Kompozycja szczepionki wed lug zastrz. 1, znamienna tym, ze VLP s a formu lowane z wyko- rzystaniem wst epnie zaadsorbowanych du zych ilo sci monowalentnego antygenu lub 3D MPL na wo- dorotlenku glinu. 3. Kompozycja szczepionki wed lug zastrz. 1 albo 2, znamienna tym, ze oczyszczone du ze ilo- sci VLP 16 i VLP 18 dodano do wodorotlenku glinu dla otrzymania stosunku 2g VLP / 10g Al(OH) 3 . 4. Kompozycja szczepionki przeciwko ludzkiemu papillowirusowi, znamienna tym, ze sk lada sie z HPV 16 L1, HPV 18 L1, wodorotlenku glinu i 3D MPL. PL PL PL PL

Description

(12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 201264 (21) Numer zgłoszema: 362069 (22) Data zgłoszenia: 07.09.2000 (62) Numer zgłoszenia, z którego nastąpiło wydzielenie:
354039 (86) Data i numer zgłoszenia międzynarodowego:
07.09.2000, PCT/EP00/08784 (87) Data i numer publikacji zgłoszenia międzynarodowego:
15.03.2001, WO01/17551 PCT Gazette nr 11/01 (51) Int.Cl.
A61K 39/12 (2006.01) A61K 39/29 (2006.01) A61P 35/00 (2006.01)
Opis patentowy przedrukowano ze względu na zauważone błędy
Kompozycja szczepionki przeciwko ludzkiemu papillowirusowi i HPV 16L1VLP i HPV 18LI VLP (30) Pierwszeństwo:
07.09.1999,GB,9921146.8 (43) Zgłoszenie ogłoszono:
15.12.2003 BUP 25/03 (45) O udzieleniu patentu ogłoszono:
31.03.2009 WUP 03/09 (73) Uprawniony z patentu:
SMITHKLINE BEECHAM BIOLOGICALS S.A., Rixensart,BE (72) Twórca(y) wynalazku:
Moncef Mohammed Slaoui,King of Prussia,US (74) Pełnomocnik:
Janina Kossowska, PATPOL Sp. z o.o.
(57) 1 . Komozyceja sczeepionki precciwko luzzkiemu aapillowirssow i , naaminnaa tym, eeaawiera:
HPV 16 L1 VLP, HPV 18 L1 VLP, wodorotlenek glinu i 3D MPL.
2. Kompozycja szczepionki według zastpz. 1, znamienna tym, że VLP są formułowane z wykorzystaniem wstępnie zaaUsopbowanych dużych ilości monowalentnego antygenu lub 3D MPL na wodorotlenku glinu.
3. Kompozycja szczepionki według zastrz. 1 albo 2, znamienna tym, że oczyszczone duże ilości VLP 16 i VLP 18 dodano do wodorotlenku glinu dla otrzymania stosunku 2g VLP / 10g Al(OH)3.
4. Kompozycja szczepionki przeciwko ludzkiemu eaeillowipusowi, znamienna tym, że składa się z HPV 16 L1, HPV 18 L1, wodorotlenku glinu i 3D MPL.
PL 201 264 B1
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest kompozycja szczepionki przeciwko ludzkiemu papillowirusowi i HPV 16L1VLP i HPV 18L1 VLP.
Wynalazek dotyczy nowych formulacji szczepionek przeciwko ludzkiemu papillowirusowi w szczególności do podawania młodzieży.
Papillomawirusy są małymi nowotworowymi wirusami DNA, które są wysoce swoiste gatunkowo. Jak dotąd opisano ponad 70 poszczególnych genotypów ludzkich papillomawirusów (HPV). HPV są zazwyczaj swoiste albo dla skóry (np. HPV-1 i -2) albo powierzchni śluzówkowych (np. HPV-6 i -11) i zwykle wywołują nowotwory łagodne (brodawki), które utrzymują się przez kilka miesięcy lub lat. Takie nowotwory łagodne mogą niepokoić dotknięte nimi osoby, ale z reguły nie stanowią zagrożenia życia, z kilkoma wyjątkami.
Niektóre HPV są również związane z rakami. Najsilniejszy związek między HPV i rakiem ludzkim jest ten, który istnieje między HPV-16 i HPV-18 a rakiem szyjki macicy. Rak szyjki macicy jest najbardziej rozpowszechnionym nowotworem złośliwym w krajach rozwijających się, z co roku występującymi na świecie około 500 000 nowymi przypadkami. Aktywne zwalczanie najważniejszych zakażeń HPV-16, a nawet ustalonych raków zawierających HPV-16, jest technicznie wykonalne za pomocą szczepionek. W celu dokonania przeglądu perspektyw profilaktycznych i terapeutycznych szczepień przeciwko HPV-16 patrz Cason J., Clin. Immunother. 1994; 1(4) 293-306 i Hagenesee M.E., Infections in Medicine 1997 14(7) 555-556,559-564.
Innymi szczególnie interesującymi serotypami HPV są 31,33 i 45.
Obecnie za pomocą systemów klonowania w bakteriach, a ostatnio za pomocą amplifikacji techniką PGR wyizolowano i scharakteryzowano różne typy HPV. Organizację genomów HPV określono na podstawie porównania z dobrze scharakteryzowanym bydlęcym papillowirusem typu l (BPV1).
Choć zdarzają się drobne różnice, wszystkie opisane genomy HPV mają co najmniej siedem genów wczesnych, E1 do E7 i dwa geny późne, L1 i L2. Ponadto region regulatorowy powyżej niesie sekwencje regulatorowe, które wydają się kontrolować najbardziej transkrypcyjne zdarzenia genomu HPV.
Geny E1 i E2 są zaangażowane odpowiednio w replikację i kontrolę transkrypcji wirusa i często są rozrywane przez integrację wirusową. E6 i E7 oraz według ostatnich doniesień również E5 są zaangażowane w transformację wirusa.
W HPV związanych z rakiem szyjki macicy, takich jak HPV 16 i 18, proces onkogenny rozpoczyna się po integracji DNA wirusa. Integracja powoduje inaktywację genów kodujących kapsydowe białka L1 i L2 i ciągłe instalowanie nadekspresji dwóch wczesnych białek E6 i E7, co prowadzi do stopniowej utraty prawidłowego różnicowania komórkowego i rozwoju raka.
Rak szyjki macicy jest powszechny u kobiet i rozwija się przez pośredni stan przedrakowy do raka inwazyjnego, który często prowadzi do śmierci. Stany pośrednie choroby są znane jako śródnabłonkowa neoplazja szyjki macicy i są stopniowane od I do III zgodnie ze zwiększającym się nasileniem.
Klinicznie zakażenie HPV kobiecego układu odbytowo-płciowego manifestują się jako kłykcina płaska szyjki, której cechą charakterystyczną jest koilocytoza, odziaływująca głównie na komórki powierzchniowe i pośrednie szyjkowego łuskowatego nabłonka.
Koilocyty, które są konsekwencją efektu cytopatycznego wirusa, pojawiają się jako komórki wielojądrzaste z okołojądrową przezroczystą obwódką. Nabłonek jest pogrubiony przez nienormalną keratynizację odpowiedzialną za brodawkowaty wygląd zmian chorobowych.
Takie kłykciny płaskie, gdy są dodatnie dla serotypów HPV 16 lub 18, są czynnikami wysokiego ryzyka rozwoju w kierunku śródnabłonkowej neoplazji szyjki macicy (GIN) i raka in situ (CIS), które są uważane za prekursory zmian chorobowych inwazyjnego raka szyjki macicy.
W międzynarodowym zgłoszeniu patentowym WO 96/19496 ujawniono odmiany białek E6 i E7 ludzkiego papilliomawirusa, zwłaszcza białka fuzyjne E6/E7 z delecją w obu białkach E6 i E7. Te delecyjne białka fuzyjne uważa się za immunogenne. Szczepionki na bazie L1 HPV ujawniono w WO 94/00152, WO 94/20137, WO 93/02184 i WO 94/05792. Taka szczepionka może zawierać antygen L1 jako monomer, kapsomer lub cząstkę wirusopodobną. Takie cząstki mogą dodatkowo zawierać białka L2. Szczepionki na bazie L2 opisano na przykład w WO 93/00436. Inne szczepionki HPV są oparte na białkach wczesnych, takich jak E7 lub białkach fuzyjnych, takich jak L2-E7.
Istnieje potrzeba dostarczania skutecznych szczepionek w celu zapobiegania chorobom, na które szczególnie podatna jest młodzież.
PL 201 264 B1
Kompozycja szczepionki przeciwko ludzkiemu papillowirusowi według wynalazku zawiera: HPV
L1 VLP, HPV 18 L1 VLP, wodorotlenek glinu i 3D MPL.
Korzystnie VLP w szczepionce według wynalazku są formułowane z wykorzystaniem wstępnie zaadsorbowanych dużych ilości monowalentnego antygenu lub 3D MPL na wodorotlenku glinu.
Bardziej korzystnie oczyszczone duże ilości VLP 16 i VLP 18 dodano do wodorotlenku glinu dla otrzymania stosunku 2g VLP / 10 g Al(OH)3.
W zakres wynalazku wchodzi też kompozycja szczepionki składająca się z HPV 16 L1, HPV 18 L1, wodorotlenku glinu i 3D MPL.
Wynalazek dotyczy również HPV 16 L1 VLP sformułowanego z alumem (wodorotlenkiem glinu)/3D-MPL z wykorzystaniem wstępnie zaadsorbowanych dużych ilości monowalentnego antygenu lub 3D MPL na wodorotlenku glinu lub AlPO4.
Ponadto w zakres wynalazku wchodzi również HPV 18 L1 VLP sformułowany z alumem (wodorotlenkiem glinu)/3D-MPL z wykorzystaniem wstępnie zaadsorbowanych dużych ilości antygenu lub 3D MPL na wodorotlenku glinu lub AlPO4.
Odpowiedzi immunologiczne można generalnie podzielić na dwie zasadnicze kategorie, którymi są odpowiedź humoralna oraz za pośrednictwem komórek (tradycyjnie charakteryzowana odpowiednio przez mechanizmy ochrony z wytworzeniem przeciwciał i mechanizm komórkowy ochrony). Te kategorie odpowiedzi nazwano odpowiedzią typu TH1 (odpowiedź za pośrednictwem komórek) i odpowiedzią immunologiczną typu TH2 (odpowiedź humoralna).
Zasadnicze odpowiedzi immunologiczne typu TH1 charakteryzują się wytwarzaniem swoistych antygenowo, ograniczonych do haplotypu cytotoksycznych limfocytów T i odpowiedzi naturalnych komórek zabójców. U myszy odpowiedzi typu TH1 charakteryzują się często wytwarzaniem przeciwciał podtypu IgG2a, gdy tymczasem u ludzi odpowiadają one przeciwciałom typu IgG1. Odpowiedzi immunologiczne typu TH2 charakteryzują się wytwarzaniem szerokiego zakresu izotypów immunoglobulin, w tym IgG1 u myszy.
Można uważać, że siłą napędzającą rozwój tych dwóch typów odpowiedzi immunologicznej są cytokiny. Wysokie poziomy cytokin typu TH1 sprzyjają wywoływaniu odpowiedzi immunologicznej na dany antygen za pośrednictwem komórek, podczas gdy wysokie poziomy cytokin typu TH2 sprzyjają wywoływaniu humoralnej odpowiedzi immunologicznej na antygen.
Rozróżnienie typów odpowiedzi immunologicznej TH1 i TH2 nie jest bezwzględne. W rzeczywistości dany osobnik będzie wykazywał odpowiedź immunologiczną opisywaną jako głównie TH1 lub głównie TH2. Jednakże często jest wygodnie rozważać rodziny cytokin w kategoriach opisanych dla klonów limfocytów T mysich CD4 +ve przez Mosmann i Coffman (Mosmann, T. R. i Coffman, R.L. (1989) TH1 and TH2 cells: different patterns of lymphokine secretion lead to different functional properties. Annual Review of Immunology, 7, str. 145-173). Tradycyjnie odpowiedzi typu TH1 są związane z produkcją cytokin INF-γ przez limfocyty T. Inne cytokiny, często wiązane bezpośrednio z indukcją odpowiedzi immunologicznej typu TH1, nie są wytwarzane przez komórki T, tak jak IL-12. Kontrastuje z tym fakt, że odpowiedzi typu TH2 są związane z sekrecją IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 oraz czynnika martwicy nowotworu-β-β (TNF-(e).
Wiadomo, że pewne adiuwanty szczepionkowe nadają się szczególnie do stymulacji odpowiedzi cytokinowej typu TH1 albo TH2. Tradycyjnie najlepsze wskaźniki równowagi TH1:TH2 odpowiedzi immunologicznej po szczepieniu lub infekcji obejmują bezpośredni pomiar produkcji cytokin TH1 i TH2 przez limfocyty T in vitro po ponownej stymulacji antygenem i/lub pomiar (przynajmniej u myszy) stosunku odpowiedzi przeciwciał IgG1:IgG2a swoistych dla antygenu.
Adiuwantem typu TH1 jest zatem ten, który stymuluje wyizolowane populacje limfocytów T do wytwarzania wysokiego poziomu cytokin typu TH1 w wyniku restymulacji antygenem in vitro oraz wywołuje odpowiedź immunoglobulin swoistych dla antygenu, związaną z izotypem typu TH1.
Adiuwanty, które są zdolne do selektywnego stymulowania odpowiedzi komórkowej TH1 opisano w międzynarodowych zgłoszeniach patentowych nr WO 94/00153 i WO 95/17209.
de-O-acylowany monofosforylolipid A (3D-MPL) jest jednym z takich adiuwantów. Jest on znany z patentu GB-V2220211 (Ribi). Chemicznie jest on mieszaniną 3 de-O-acylowanego monofosforylolipidu A z 4, 5 lub 6 acylowanymi łańcuchami i jest wytwarzany przez Ribi Immunochem, Montana. Korzystną formę 3 de-O-acylowanego monofosforylolipidu A ujawniono w patencie europejskim EP-0689454B1 (SmithKline Beecham Biologicals SA).
Korzystnie cząstki 3D-MPL są na tyle małe, aby mogły być sterylnie filtrowane przez membranę 0,22 ąm (jak opisano w patencie europejskim EP-0689454). 3D-MPL będzie zawarty w kompozycji
PL 201 264 B1 w ilości w zakresie 10 ug -100 ug, korzystnie 25-50 ug na dawkę, w której antygen będzie zazwyczaj obecny w zakresie 2-50 ug na dawkę.
W kompozycji szczepionki według wynalazku obecny jest również nośnik. Nośnikiem może być sól glinu, taka jak fosforan glinu lub wodorotlenek glinu.
Antygeny kompozycji szczepionki według wynalazku łączone są z 3D-MPL i alumem.
Typowo w szczepionce do podawania ludziom, 3D-MPL będzie obecny w szczepionce w zakresie 1 ug -200 ug, na przykład 10-100 ug, korzystnie 10 ug - 50 ug na dawkę.
W jednym z korzystnych wykonań antygen HPV w kompozycji szczepionki według wynalazku zawiera L1, główne białko kapsydu HPV, i ewentualnie białko L2, szczególnie z HPV 16 i/lub HPV 18. W tym wykonaniu korzystną formą białka L1 jest skrócone białko L1. Korzystnie L1, ewentualnie fuzja L1-L2, przybiera formę cząstek wirusopodobnych (VLP). L1 można połączyć z innym białkiem HPV, w szczególności E7, co daje fuzję białkową L1-E7. Szczególnie korzystne są chimerowe VLP, zawierające L1-E lub L1-L2-E.
Białka według wynalazku korzystnie wyrażane są w E. coli. W korzystnym wykonaniu białka są wyrażane wraz z ogonem histydynowym, zawierającym od 5 do 9, korzystnie sześć reszt histydyny. Są one pożyteczne ułatwiając oczyszczanie. Opis wytwarzania takich białek jest w pełni przedstawiony w złożonym jednocześnie zgłoszeniu patentowym w Wielkiej Brytanii numer GB 9717953.5. Antygen HPV w kompozycji szczepionki może zostać zaadsorbowany na Al(OH)3.
W jednym z korzystnych aspektów kompozycja szczepionki wynalazku jest szczepionką poliwalentną, na przykład szczepionką cztero- lub pięciowalentną.
Kompozycje według niniejszego wynalazku bardzo skutecznie indukują odporność ochronną, nawet przy bardzo niskich dawkach antygenu (np. zaledwie 5 ug rgD2t).
Dostarczają doskonałej ochrony przeciw głównej infekcji i stymulują, co korzystne, zarówno specyficzną humoralną odpowiedź immunologiczną (przeciwciała neutralizujące), jak i odpowiedź immunologiczną, w której pośredniczą komórki efektorowe (DTH).
Wynalazek w swym kolejnym aspekcie, dostarcza kompozycji szczepionki, jak tu opisana, do stosowania w medycynie, a szczególnie w leczeniu lub profilaktyce infekcji ludzkim papillomawirusem.
Szczepionka według wynalazku będzie zawierała ilość antygenów zapewniającą ochronną odpowiedź immunologiczną i może być wytworzona za pomocą konwencjonalnych technik.
Wytwarzanie szczepionek jest opisane ogólnie w Pharmaceutical Biotechnology, Tom 61 Vaccine Design - the subunit and adjuvant approach, wydane przez Powell i Newman, Plenum Press, 1995. New Trends and Developments in Vaccines, wydane przez Voller i wsp., University Park Press, Baltimore, Maryland, U.S.A. 1978. Zamykanie w liposomach zostało opisane, na przykład, przez Fullerton, patent US-4235877. Dołączanie białek do makrocząsteczek jest ujawnione, na przykład, przez Likhite, patent US-4372945 i przez Armor i wsp., patent US-4474757.
Ilość białka w danej dawce szczepionki dobrano jako ilość, która wywołuje ochronną odpowiedź immunologiczną bez znaczących niekorzystnych efektów ubocznych u typowych osób zaszczepionych. Ilość ta będzie się zmieniać w zależności od zastosowania konkretnego immunogenu. Przewiduje się ogólnie, że każda dawka będzie zawierać 1-1000 ug białka, korzystnie 2-100 ug, najkorzystniej 4-40 ug. Ilość optymalna danej szczepionki może zostać określona w typowych badaniach obejmujących oznaczenie miana przeciwciał i innych odpowiedzi u pacjentów. Pacjenci mogą otrzymać dawkę przypominającą po około 4 tygodniach po szczepieniu początkowym.
Obok szczepienia osób podatnych na zakażenia HPV kompozycje farmaceutyczne według niniejszego wynalazku mogą być stosowane do leczenia, immunoterapeutycznie, pacjentów cierpiących na takie infekcje wirusowe.
Jeśli jest to konieczne, można dodać inne antygeny, w dowolnej kolejności, aby utworzyć poliwalentne kompozycje szczepionek, jak tu opisano.
Następujące przykłady ilustrują, ale nie ograniczają wynalazku.
P r z y k ł a d 1
Porównawcza immunogenność HPV Ags/HBs/gD w szczepionkach monowalentnych albo skojarzonych zawierających AS04
Wstęp
Badania immunogenności przeprowadzono u myszy Balb/C przy zastosowaniu czterech różnych antygenów:
1. Cząstki wirusopodobne HPV16 L1 (VLP-16)
2. Cząstki wirusopodobne HPV18 L1 (VLP18)
PL 201 264 B1
3. antygen gD z HSV-2
4. HBsAg sformułowane z alumem/3D-MPL (AS04) z zastosowaniem monowalentnego antygenu w dużej ilości antygenu albo 3D-MPL wstępnie zaadsorbowanych na Al(OH)3 lub AlPO4.
Kompozycje z 3D-MPL/Al(OH)3 są określane jako AS04D, podczas gdy kompozycje w oparciu o 3D-MPL/AlPO4 są określane jako AS04C.
Testowano następujące szczepionki:
1. VLP16 + VLP18 AS04D;
2. gD AS04D,
3. HBs AS04C i oceniano możliwość łączenia tych szczepionek.
Celem doświadczeń było porównanie immunogenności dwóch różnych kombinacji AS04 wytworzonych z:
1. VLP16 + VLP18 i gD.
2. VLP16 + VLP18 i gD oraz HBsAg
Protokół eksperymentalny jest w pełni opisany w części
Materiały i Metody.
W skrócie, grupy 10 myszy immunizowano domięśniowo dwukrotnie w odstępach 3 tygodni kompozycjami w oparciu o różne Ag. Odpowiedź przeciwciał na VLPs, gD i HBs Ag oraz profil izotypowy indukowany przez szczepienie śledzono w teście ELISA w dniu 14 post II. W tym samym punkcie czasowym analizowano wytwarzanie cytokin (IFNy/IL5) ) po restymulacji in vitro komórek śledziony antygenami VLPs, gD i HBs.
Materiały i metody
Formulacja
Formulacja kompozycji
VLP16, VLP18, gD i HBs sformułowano z 3D-MLP na soli glinu.
Użyte składniki
Składnik Stężenie Bufor
HPV 16 VLP 560 ąg/ml Tris 20 mM/NaCl 500 mM
HPV 18 VLP 550 ąg/ml NaCl 500 mM/NaPO4 20 mM
Al(OH)3 10380 ng/ml H2O
HBs 1219 ąg/ml PO4 10 mM/NaCl 150 mM
gD 443 ąg/ml PBS pH 7,4
3D-MPL 1170 ąg/ml Woda do iniekcji
AlPO4 5 mg/ml NaCl 150 mM
Adsorpcja
a) Adsorpcja VLP
Oczyszczoną partię VLP 16 i VLP 18 dodaje się do Al(OH)3 tak aby otrzymać stosunek 2 ąg VLP/10 ąg Al(OH)3. Mieszaninę przechowuje się w temperaturze między 2-8°C do przygotowania końcowej formulacji.
b) Adsorpcja gD ąg gD miesza się z 10 ąg Al(OH)3. Mieszaninę przechowuje się w temperaturze między 2-8°C do przygotowania końcowej formulacji.
c) Adsorpcja HBs ąg Hbs miesza się z 10 ąg AlPO4. Mieszaninę przechowuje się w temperaturze między 2-8°C do przygotowania końcowej formulacji.
d) Adsorpcja 3D-MPL ąg 3D-MPL miesza się z 10 ąg Al(OH)3. Mieszaninę przechowuje się w temperaturze między 2-8°C do przygotowania końcowej formulacji.
ąg 3D-MPL miesza się z 10 ąg AlPO4. Mieszaninę przechowuje się w temperaturze między 2-8°C aż do przygotowania końcowej formulacji.
PL 201 264 B1
Formulacja
H2O i NaCl miesza się (10 x zatężony) i po 10 minutach mieszania w temperaturze pokojowej dodaje się różne składniki: zaadsorbowany antygen, zaadsorbowany 3D-MPL i Al(OH)3 (patrz tabela poniżej). Wytrząsa się w temperaturze pokojowej przez 10 minut i przechowuje w 4°C aż do użycia do iniekcji.
Antygen (y) Immunostymulatory Nośnik
Grupa Typ μ9 Typ P9 Typ P9
A gD 2 Al(OH)3 10
VLP16 2 Al(OH)3 10
VLP18 2 Al(OH)3 10
3D-MPL 5 Al(OH)3 10
Al(OH)3 10
B gD 2 Al(OH)3 10
VLP16 2 Al(OH)3 10
HPV18 2 Al(OH)3 10
HBs 2 AlPO4 10
3D-MPL 5 Al(OH)3 10
C gD 2 Al(OH)3 10
3D-MPL 5 Al(OH)3 10
Al(OH)3 30
D VLP16 2 Al.(OH)3 10
VLP18 2 Al(OH)3 10
3D-MPL 5 Al(OH)3 10
Al(OH)3 20
E HBs 2 AlPO4 10
3D-MPL 5 Al(OH)3 10
Al(OH)3 30
Serologia myszy
Serologia anty-VLP16 i anty-VLP18
Ocenę ilościową przeciwciał anty-VLP16 i anty-VLP18 przeprowadzono przy zastosowaniu testu ELISA używając jako antygeny opłaszczające VLP16 503/1 (20/12/99) i VLP18 504/2 (25/10/99F). Zastosowano 50 μΙ roztworu antygenu i przeciwciała na studzienkę. Antygen rozcieńczono do stężenia końcowego 0,5 μg/ml w PBS i adsorbowano przez noc w 4°C do ścianek studzienek 96-studzienkowych płytek do mikromiareczkowania (Maxisorb Immuno-plate, Nunc, Dania). Płytki inkubowano następnie przez 1 godzinę w 37°C z PBS zawierającym 1% albuminę z surowicy bydlęcej. Dwukrotne rozcieńczenia surowicy (rozpoczynając od rozcieńczenia 1/400) w buforze wysycającym dodano do opłaszczonych VLP płytek i inkubowano przez 1,5 godziny w 37°C. Płytki przemyto czterokrotnie PBS 0,1% Tween 20 i do każdej studzienki dodano skoniugowane z biotyną anty-mysie Ig (Amersham, UK) rozcieńczone 1/1500 w buforze wysycającym i inkubowano przez 1,5 godziny w 37°C. Po etapie przemywania, dodano kompleks streptawidyna-biotynylowana peroksydaza (Amersham, UK) rozcieńczony 1/1000 w buforze wysycającym na dodatkowe 30 minut w 37°C. Płytki przemyto jak wyżej i inkubowano 20 minut z 0,04% roztworem o-fenylenodiaminy (Sigma), 0,03% H2O2 w 0,05 M buforze cytrynianowym pH 4,5 z 0,1% Tween 20. Reakcję zatrzymano 2N H2SO4 i odczytano przy 490/630 nm. Miana ELISA obliczono względem odnośnika przy użyciu SoftmaxPro (stosując równanie z czterema parametrami) i wyrażono jako EU/ml.
Odpowiedź anty-gD
Ocenę ilościową przeciwciał anty-gD przeprowadzono przy zastosowaniu testu ELISA używając gD (gD 43B318) jako antygenu opłaszczającego. Zastosowano 50 μl roztworu antygenu i przeciwciała na studzienkę. Antygen rozcieńczono do stężenia końcowego 1 μg/ml w PBS i zaadsorbowano przez noc w 4°C do ścianek studzienek 96-studzienkowych płytek do mikromiareczkowania (Maxisorb Immuno-plate, Nunc, Dania). Płytki inkubowano następnie przez 1 godzinę w 37°C z PBS zawierającym 1% albuminę z surowicy bydlęcej i 0,1% Tween 20 (bufor wysycający 100 μl/studzienkę). Dwukrotne rozcieńczenia surowicy (rozpoczynając od rozcieńczenia 1/100) w buforze wysycającym dodano do opłaszczonych gD płytek i inkubowano przez 1,5 godziny w 37°C. Płytki przemyto czterokrotnie PBS
PL 201 264 B1 z 0,1% Tween 20 i do każdej studzienki dodawano skoniugowane z biotyną anty-mysie Ig, IgGl, IgG2a, IgG2b lub Ig (Amersham, UK) rozcieńczone 1/1000 w buforze wysycającym i inkubowano przez 1,5 godziny w 37°C. Po etapie przemywania, dodano kompleks streptawidyna-biotynylowana peroksydaza (Amersham, UK) rozcieńczony 1/1000 w buforze wysycającym na dodatkowe 30 minut w 37°C. Płytki przemyto jak wyżej i inkubowano 20 minut z 0,04% roztworem o-fenylenodiaminy (Sigma), 0,03% H2O2 w 0,05 M buforze cytrynianowym pH 4,5 z 0,1% Tween 20. Reakcję zatrzymano 2N H2SO4 i odczytano przy 490/630 nm. Miana ELISA obliczono względem odnośnika przy użyciu SoftmaxPro (stosując równanie z czterema parametrami) i wyrażono jako EU/ml.
Serologia anty-HBs
Ocenę ilościową przeciwciał anty-HBs przeprowadzono przy zastosowaniu testu ELISA używając HBs (Hep 286) jako antygenu opłaszczającego. Zastosowano 50 μΙ roztworów antygenu i przeciwciała na studzienkę. Antygen rozcieńczono do stężenia końcowego 1 μg/ml w PBS i zaadsorbowano przez noc w 4°C na ściankach studzienek 96-studzienkowych płytek do mikromiareczkowania (Maxisorb Immuno-plate, Nunc, Dania). Płytki inkubowano następnie przez 1 godzinę w 37°C z PBS zawierającym 1% albuminę z surowicy bydlęcej i 0,1% Tween 20 (bufor wysycający). Dwukrotne rozcieńczenia surowicy (rozpoczynając od rozcieńczenia 1/100) w buforze wysycającym dodano do opłaszczonych HBs płytek i inkubowano przez 1,5 godziny w 37°C. Płytki przemyto czterokrotnie PBS z 0,1% Tween 20 i do każdej studzienki dodano skoniugowane z biotyną anty-mysie Ig (Amersham, UK) rozcieńczone 1/1500 lub IgG1, IgG2a, IgG2b (IMTECH, USA) rozcieńczone odpowiednio 1/4000, 1/8000, 1/4000, w buforze wysycającym i inkubowano przez 1,5 godziny w 37°C. Po etapie przemywania, dodano kompleks streptawidyna-biotynylowana peroksydaza (Amersham, UK) rozcieńczony 1/1000 w buforze wysycającym na dodatkowe 30 minut w 37°C. Płytki przemyto jak wyżej i inkubowano 20 minut z 0,04% roztworem o-fenylenodiaminy (Sigma), 0,03% H2O2 w 0,05 M buforze cytrynianowym pH 4,5 z 0,1% Tween 20. Reakcję zatrzymano 2N H2SO4 i odczytano przy 490/630 nm. Miana ELISA obliczono względem odnośnika przy użyciu SoftmaxPro (stosując równanie z czterema parametrami) i wyrażono jako EU/ml.
Wytwarzanie cytokin
Dwa tygodnie po drugiej immunizacji myszy zabito, pobrano aseptycznie śledziony i zgromadzono je w pule. Otrzymano zawiesiny komórkowe w pożywce RPMI 1640 (GIBCO) zawierającej 2 mM L-glutaminę, antybiotyki, 5x105 M 2-merkaptoetanol i 5% płodową surowicę cielęcą. Komórki hodowano przy końcowym stężeniu 5x106 komórek/ml w 1 ml w 24-sudzienkowych płaskodennych płytkach z różnymi stężeniami (10-1 μg/ml) każdego Ag (antygenu VLPs, gD lub HBs).
Supernatanty zebrano 96 godzin później i zamrażono do czasu testowania pod kątem obecności IFNy i IL5 przy zastosowaniu testu ELISA.
IFNy (Genzyme)
Ocenę ilościową IFNy przeprowadzono w teście ELISA stosując odczynniki z firmy Genzyme. Roztwór próbek i przeciwciała zastosowano w objętości 50 μl na studzienkę. 96-studzienkowe płytki do mikromiareczkowania (Maxisorb Immunoplate, Nunc, Dania) opłaszczono przez noc w 4°C 50 μl chomiczego anty-mysiego IFNy rozcieńczonego 1,5 μg/ml w buforze węglanowym pH 9,5. Płytki inkubowano następnie przez 1,5 godziny w 37°C z 100 μl PBS zawierającym 1% albuminę z surowicy bydlęcej i 0,1% Tween 20 (bufor wysycający). Dwukrotne rozcieńczenia supernatantu ze stymulacji in vitro (rozpoczynając od rozcieńczenia 1/2) w buforze wysycającym dodano do opłaszczonych anty-IFNy płytek i inkubowano przez 1,5 godziny w 37°C. Płytki przemyto 4 razy PBS z 0,1% Tween 20 (bufor do przemywania) i do każdej studzienki dodano skoniugowane z biotyną kozie anty-mysie IFNy rozcieńczone w buforze wysycającym do końcowego stężenia 0,5 ng/ml i inkubowano przez 1 godzinę w 37°C. Po etapie przemywania, dodano koniugat AMDEX (Amersham) rozcieńczony 1/10000 w buforze wysycającym na 30 minut w 37°C. Płytki przemyto jak wyżej i inkubowano z 50 μl TMB (Biorad) przez 10 minut. Reakcję zatrzymano 0,4 N H2SO4 i odczytano przy 450/630 nm. Stężenia obliczono przy użyciu krzywej standardowej stosując SoftmaxPro (równanie z czterema parametrami) i wyrażono jako pg/ml.
IL5 (Pharmingen)
Ocenę ilościową IL5 przeprowadzono przy zastosowaniu testu ELISA używając odczynników z firmy Pharmingen. Roztwór próbek i przeciwciała zastosowano w objętości 50 μl na studzienkę. 96-studzienkowe płytki do mikromiareczkowania (Maxisorb Immuno-plate, Nunc, Dania) opłaszczono przez noc w 4°C 50 μl szczurzego przeciwciała anty-mysia IL-5 rozcieńczonego do 1 μg/ml w buforze węglanowym pH 9,5. Płytki inkubowano następnie przez 1 godzinę w 37 C z 100 μl PBS zawierającym 1% albuminę z surowicy bydlęcej i 0,1% Tween 20 (bufor wysycający). Dwukrotne rozcieńczenia su8
PL 201 264 B1 pernatantu ze stymulacji in vitro (rozpoczynając od rozcieńczenia 1/2) w buforze wysycającym dodano do opłaszczonych anty-IL-5 płytek i inkubowano przez 1,5 godziny w 37°C. Płytki przemyto 4 razy PBS z 0,1% Tween 20 (bufor do przemywania) i do każdej studzienki dodano skoniugowane z biotyną szczurze anty-mysie IL5 rozcieńczone w buforze wysycającym do końcowego stężenia 1 ng/ml i inkubowano przez 1,5 godziny w 37°C. Po etapie przemywania, dodano koniugat AMDEX (Amersham) rozcieńczony 1/10000 w buforze wysycającym na 30 minut w 37°C. Płytki przemyto jak wyżej i inkubowano z 50 nl TMB (Biorad) przez 10 minut. Reakcję zatrzymano 0,4 N H2SO4 i odczytano przy 450/630 nm. Stężenia obliczono przy użyciu krzywej standardowej (zrekombinowana mysia IL-5) stosując SoftmaxPro (równanie z czterema parametrami) i wyrażono jako pg/ml.
Grupy
Grupy po 10 myszy Balb/C immunizowano domięśniowo następującymi formulacjami:
T a b e l a 1 Grupy i formulacje
Grupa Formulacja
A VLP16 2 pg / VLP18 2 ng / gD 2 ng / 3D-MPL 5 ng / Al(OH)s 50 ng
B vlp16 2 pg / vlp18 2 pg / HBs 2 pg / gD 2 pg / 3D-mpl 5 pg / ai(oh)3 40 pg / aipo4 10 pg
C gD 2 pg / 3D-MPL 5 pg / Al(OH)a 50 pg
D VLP16 2 pg / VLP18 2 pg / 3D-MPL 5 pg / Al(OH)s
E HBs 2 pg / 3D-MPL 5 pg / AlPO4 10 pg / Al(OH)a 40 pg
Szczegóły formulacji są opisane powyżej w części
Materiały i Metody
Wyniki
1. Serologia
a) Odpowiedź anty-VLP16:
Odpowiedzi humoralne (Ig) mierzono w teście ELISA stosując VLP16 503-1 (20/12/99) jako antygen opłaszczający.
Surowicę zanalizowano dnia 14 post II.
Na fig. 1 pokazano odpowiedzi przeciwciał Ig anty-VLP16 mierzone w poszczególnych surowicach dnia 14 post II.
Miana anty-VLP16 otrzymane po immunizacji kombinacją VLPs, gD i Ag HBs (Grupa B) były nieco niższe niż otrzymane bądź z kombinacją VLPs i gD (Grupa A) bądź monowalentną formulacją VLPs (grupa D) (GMT wynoszące odpowiednio 27578 versus 48105 EU/ml versus 44448 EU/ml). Przed analizą statystyczną wobec każdej populacji zastosowano test T-Grubbs dla wykluczenia danych. Dwie nieodpowiadające myszy w grupach A i D wyeliminowano z analizy.
Wykazano, że stosując test Student Newman Keuls zaobserwowane między grupami różnice nie są statystycznie istotne.
b) Odpowiedź anty-VLP18:
Odpowiedzi humoralne (Ig) mierzono w teście ELISA stosując VLP18 504-2 (25/10/99) jako antygen opłaszczający. Surowicę zanalizowano dnia 14 post II.
Na fig. 2 pokazano odpowiedzi przeciwciał Ig anty-VLP18 mierzone w poszczególnych surowicach z dnia 14 post II.
Miana anty-VLP18 otrzymane po immunizacji kombinacją VLPs, gD i Ag HBs (Grupa B) były tego samego rzędu wielkości co miana otrzymane bądź dla kombinacji VLPs i gD (Grupa A) bądź dla monowalentnej formulacji VLPs (grupa D) (GMT wynoszące odpowiednio 56078 versus 88786 EU/ml versus 76991 EU/ml).
Przed analizą statystyczną wobec każdej populacji zastosowano test T-Grubbs w celu wykluczenia danych. Dwie nieodpowiadające myszy w grupach A i D wyeliminowano z analizy.
Wykazano, że różnice te nie są statystycznie istotne przy zastosowaniu jednokierunkowej analizy wariancji.
c) Odpowiedź anty-gD:
Odpowiedzi humoralne (I g i izotypy) mierzono przy zastosowaniu testu ELISA stosując gD jako antygen opłaszczający. Surowicę analizowano 14 dnia post II.
PL 201 264 B1
Na fig. 3 pokazano odpowiedzi przeciwciał anty-gD mierzone w poszczególnych surowicach z 14 dnia post II.
Odnośnie do odpowiedzi anty-gD zaobserwowano niewielkie zmniejszenie dla GMT otrzymanego z kombinacją VLPs/ gD/HBs (Grupa B) w porównaniu z samym gD (Grupa C) bądź kombinacją VLPs/gD (grupa A) (GMT wynoszące 18631 versus 32675 EU/ml versus 27058 EU/ml). Przed analizą statystyczną wobec każdej populacji zastosowano test T-Grubbs dla wyeliminowania danych. Dwie nieodpowiadające myszy w grupach A i D wyeliminowano z analizy.
Przeprowadzono jednokierunkową analizę wariancji dla mian anty-gD po przekształceniu logarytmicznym danych post II. Nie zaobserwowano istotnych statystycznie różnic pomiędzy trzema kompozycjami.
Analizowany rozkład izotypowy w połączonych w pule surowicach był następujący:
Rozkład izotypowy (%)
IgG1 IgG2a IgG2b
Grupa A 96 3 2
Grupa B 96 3 2
Grupa C 97 1 1
Nie zaobserwowano znaczących różnic w profilu izotypowym indukowanym przez te trzy kompozycje: w tych trzech grupach indukowana była głównie odpowiedź IgG1 (96-97% IgG1) jak przedstawiono w tabeli poniżej.
d) Odpowiedź anty-HBs:
Odpowiedzi humoralne (Ig i izotypy) zmierzono przy zastosowaniu testu ELISA wykorzystując HBsAg (Hep286) jako antygen opłaszczający. Zanalizowano surowicę z dnia 14 post II.
Na fig. 4 pokazano odpowiedzi przeciwciał anty-HBs zmierzone w poszczególnych surowicach dnia 14 post II.
Nieco niższą odpowiedź anty-HBs obserwuje się dla kombinacji z grupy B zawierającej antygeny VLPs, gD i HBs w porównaniu z samym HBs (grupa E) (GMT wynoszące 28996 EU/ml versus 20536 EU/ml).
Przeprowadzono jednokierunkową analizę wariancji dla mian anty-HBs po przekształceniu logarytmicznym danych post II. Nie zaobserwowano różnic statystycznie istotnych między grupą B (VLP/HBs/gD) versus grupa E (HBs AS04C) przy zastosowaniu testu Student Newman Keuls.
Analizowany rozkład izotypowy w połączonych w pule surowicach był następujący i nie wykazywał różnic pomiędzy 2 grupami z proporcją IgG2a zachowaną w szczepionce skojarzonej.
Rozkład izotypowy (%)
IgG1 IgG2a IgG2b
Grupa B 54 24 21
Grupa E 56 23 21
2. Odpowiedź immunologiczna za pośrednictwem limfocytów
Odpowiedzi immunologiczne za pośrednictwem komórek (limfoproliferacja, wytwarzanie IFNy/IL5) oceniono dnia 14 post II po restymulacji komórek in vitro antygenami VLPs, gD lub HBs. Dla każdej grupy myszy utworzono pule z 5 narządów. Procedura eksperymentalna jest w pełni opisana w części
Materiały i Metody.
3. Wytwarzanie cytokin
a) Restymulacja in vitro przez VLP16 i VLP18
Na fig. 5 pokazano wytwarzanie cytokin monitorowane w komórkach śledziony po 96 godz. restymulacji in vitro przez VLP16.
Na fig. 6 pokazano wytwarzanie cytokin monitorowane w komórkach śledziony po 96 godzinach restymulacji in vitro przez VLP18.
Stosując do restymulacji 10 ug i 1 ug Ag dla żadnego z antygenów VLP nie zaobserwowano wyraźnego wpływu wielkości dawki na wytwarzanie obydwu cytokin.
PL 201 264 B1
Dla wszystkich kompozycji zaobserwowano wyraźny profil TH1.
T a b e l a 2
Stosunek IFN-y/IL-5 po restymulacji in vitro przez VLP16 i VLP18.
Stosunek IFN / IL-5 Grupa A Grupa B Grupa D
VLP16 10 ąg/ml 5,2 8,9 11,8
VLP16 1 ąg/ml 15,1 14,3 16,5
Stosunek IFN / IL-5 Grupa A Grupa B Grupa D
VLP18 10 ąg/ml 19,6 11,1 16,1
VLP18 1 ąg/ml 23,2 14,3 18,2
b) Restymulacja in vitro przez gD
Na fig. 7 pokazano wytwarzanie cytokin monitorowane w komórkach śledziony po 96 godzinach restymulacji in vitro przez antygen gD.
Nie zaobserwowano wyraźnego wpływu wielkości dawki przy zastosowaniu dawki 10 ąg i 1 ąg Ag do restymulacji.
IFN-γ jest wytwarzany w znacznie wyższych stężeniach w porównaniu z IL-5 (tabela 3) wskazując na wyraźny profil TH-1 odpowiedzi immunologicznej we wszystkich ocenianych grupach (szczepionka monowalentna versus skojarzona).
T a b e l a 3
Stosunek IFN-y/IL-5 po restymulacji in vitro przez gD.
Stosunek IFN / IL-5 Grupa A Grupa B Grupa C
gD 10 ąg/ml 6,2 7,2 3,1
gD 1 ąg/ml 6,2 11,2 2,3
c) Restymulacja in vitro przez HBs
Na fig. 8 pokazano wytwarzanie cytokin monitorowane w komórkach śledziony po 96 godzinach restymulacji in vitro przez antygen HBs.
Dla grupy B obserwowano znaczący poziom wytwarzania IFN-γ, ale nie IL5. Jak pokazano w tabeli 2 zaobserwowano wyższy poziom wytwarzania IFN-γ dla grupy E w porównaniu z grupą B. Jednakże wyższe wartości tła dla IFNy zaobserwowano w grupie E (monowalentna HBs) dla kontroli bez antygenu przy restymulacji. Bardzo wysoki stosunek IFN-y/IL-5 zaobserwowano dla szczepionki monowalentnej wskazując, że indukowana jest mocna odpowiedź TH1. Podobnie, wysoki stosunek IFN-y/IL-5 zmierzono dla szczepionki skojarzonej potwierdzając zdolność tej kompozycji do indukowania również odpowiedzi TH-1.
T a b e l a 4
Stosunek IFN-y/IL-5 po restymulacji in vitro przez HBs
Stosunek IFN / IL5 Grupa B Grupa E
HBs 10 ąg/ml 15,8 65,3
HBs 1 ąg/ml 7,6 67,6
Wnioski
Wpływ kombinacji Ag VLPs/gD lub Ag VLPs/gD/HBs sformułowanych w AS04 na immunogenność oceniano na myszach Balb/C:
Odnośnie do analizy serologicznej, nie zaobserwowano ujemnego wpływu kombinacji Ag na serologię anty-VLPs, anty-gD i anty-HBs.
Kombinacja antygenów VLPs i gD lub VLPs, gD i HBs nie ma ujemnego wpływu na profil izotypowy i odpowiedzi przeciwciał wykazywane przez szczepionki monowalentne gD i HBs.
Przy ocenie cytokin, profil TH1 (stosunek IFN-y/IL-5) obserwowany dla każdej szczepionki monowalentnej potwierdzono w grupach, gdzie stosowano szczepionki skojarzone.
PL 201 264 B1

Claims (8)

Zastrzeżenia patentowe
1. Kompozycja szczepionki przeciwko ludzkiemu papillowirusowi, znamienna tym, że zawiera: HPV 16 L1 VLP, HPV 18 L1 VLP, wodorotlenek glinu i 3D MPL.
2. Kompozycja szczepionki według zastrz. 1, znamienna tym, że VLP są formułowane z wykorzystaniem wstępnie zaadsorbowanych dużych ilości monowalentnego antygenu lub 3D MPL na wodorotlenku glinu.
3. Komppozcjaszzczeionkiweeług zzstrz.1 albb 2, zznmieenntym. żż ooczszzczne dużż i I ości VLP 16 i VLP 18 dodano do wodorotlenku glinu dla otrzymania stosunku 2g VLP / 10g Al(OH)3.
4. Komppnzyja szzczeionki przzeiwwo Iugdkiemp ppailiowirugzwi, zznmieenn tym, żż ssłaad się z HPV 16 L1, HPV 18 L1, wodorotlenku glinu i 3D MPL.
5. HHV 16 L1 VLP,zznmieeny t ymi, żż j ess sto-mpłowese z θ^ρη! / 3D-MPL z weSonzzstaniem wstępnie zaadsorbowanych dużych ilości monowalentnego antygenu lub 3D MPL na wodorotlenku glinu lub APO4.
6. HHP 11 U WL^.zznmieeny tym, żż j ess Lto-mpłowese z zkju^pm 1 LD-MPL z weSo-zzstaniem wstępnie zaadsorbowanych dużych ilości monowalentnego antygenu lub 3D MPL na wodorotlenku glinu lub APO4.
Rysunki
PL 201 264 Β1
FIG. 2: Odpowiedź anty-VLPl 8 14 dnia post II Wyniki dla poszczególnych surowic (EU/ml)
Grupy
PL 201 264 Β1
FIG. 3: Odpowiedź anty-gD 14 dnia post II Wyniki dla poszczególnych surowic (EU/ml)
Grupy
PL 201 264 Β1
FIG. 4: Odpowiedź anty-HBs 14 dnia post II Wyniki dla poszczególnych surowic (EU/ml)
Grupy
PL 201 264 Β1
FIG. 5. Wyniki dla cytokin - dzień 14 post II
Wytwarzanie IFN-g po stymulacji in vitro przez VLP16
Grupy
Wytwarzanie EL-5 po stymulacji in vitro przez VLP16
PL 201 264 Β1
FIG. 6; Wyniki dla cytokin - dzień 14 post II
Wytwarzanie ŁFN-g po stymulacji in vitro przez VLP18
Grupy
PL 201 264 Β1
FIG.
7: Wyniki dla cytokin - dzień 14 post II
Wytwarzanie IFN-g po stymulacji in yjtro przez gD
Wytwarzanie IL-5 po stymulacji in yitro przez gD
PL 201 264 Β1
FIG.
8. Wyniki dla cytokin - dzień 14 post II
Wytwarzanie IFN-g po stymulacji in vitro przez HBs
E
CO co ź
Ll
Grupy
Wytwarzanie IL-5 po stymulacji in vitro przez HBs
PL362069A 1999-09-07 2000-09-07 Kompozycja szczepionki przeciwko ludzkiemu papillowirusowi i HPV 16L1VLP i HPV 18LI VLP PL201264B1 (pl)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB9921146A GB9921146D0 (en) 1999-09-07 1999-09-07 Novel composition

Publications (1)

Publication Number Publication Date
PL201264B1 true PL201264B1 (pl) 2009-03-31

Family

ID=10860520

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL362069A PL201264B1 (pl) 1999-09-07 2000-09-07 Kompozycja szczepionki przeciwko ludzkiemu papillowirusowi i HPV 16L1VLP i HPV 18LI VLP
PL354039A PL201767B1 (pl) 1999-09-07 2000-09-07 Kompozycja szczepionki przeciwko ludzkim papillomawirusom i wirusowi opryszczki

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL354039A PL201767B1 (pl) 1999-09-07 2000-09-07 Kompozycja szczepionki przeciwko ludzkim papillomawirusom i wirusowi opryszczki

Country Status (33)

Country Link
US (3) US6936255B1 (pl)
EP (3) EP1210113B1 (pl)
JP (2) JP4689910B2 (pl)
KR (2) KR100557665B1 (pl)
CN (2) CN100389824C (pl)
AR (1) AR025502A1 (pl)
AT (2) ATE321569T1 (pl)
AU (1) AU766494B2 (pl)
BR (1) BR0014171A (pl)
CA (2) CA2384064C (pl)
CO (1) CO5280045A1 (pl)
CY (2) CY1107457T1 (pl)
CZ (2) CZ302811B6 (pl)
DE (2) DE60024893T2 (pl)
DK (2) DK1410805T3 (pl)
ES (2) ES2261243T3 (pl)
GB (1) GB9921146D0 (pl)
GC (1) GC0000201A (pl)
HK (2) HK1048435B (pl)
HU (2) HU229099B1 (pl)
IL (3) IL158107A0 (pl)
MX (1) MXPA02002484A (pl)
MY (2) MY142842A (pl)
NO (3) NO332800B1 (pl)
NZ (2) NZ517621A (pl)
PL (2) PL201264B1 (pl)
PT (1) PT1210113E (pl)
SG (1) SG110072A1 (pl)
SI (2) SI1410805T1 (pl)
TR (1) TR200200607T2 (pl)
TW (1) TWI258374B (pl)
WO (1) WO2001017551A2 (pl)
ZA (2) ZA200306402B (pl)

Families Citing this family (73)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US20060029617A1 (en) * 1997-10-03 2006-02-09 Charreyre Catherine E Porcine circovirus and Helicobacter combination vaccines and methods of use
FR2772047B1 (fr) 1997-12-05 2004-04-09 Ct Nat D Etudes Veterinaires E Sequence genomique et polypeptides de circovirus associe a la maladie de l'amaigrissement du porcelet (map), applications au diagnostic et a la prevention et/ou au traitement de l'infection
EP1733735B1 (en) 1998-05-22 2017-03-22 Ottawa Hospital Research Institute Methods and products for inducing mucosal immunity
DE122007000087I1 (de) * 1998-10-16 2008-03-27 Glaxosmithkline Biolog Sa Adjuvanzsysteme und impfstoffe
US20050002958A1 (en) * 1999-06-29 2005-01-06 Smithkline Beecham Biologicals Sa Vaccines
GB9921147D0 (en) * 1999-09-07 1999-11-10 Smithkline Beecham Biolog Novel composition
EP1243655B1 (en) * 2001-03-23 2007-02-21 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Modified HPV E6 and E7 genes and proteins useful for vaccination
GB0110431D0 (en) * 2001-04-27 2001-06-20 Glaxosmithkline Biolog Sa Novel compounds
GB0206360D0 (en) * 2002-03-18 2002-05-01 Glaxosmithkline Biolog Sa Viral antigens
WO2003097673A2 (en) † 2002-05-17 2003-11-27 University Of Cape Town Chimeric human papillomavirus 16 l1 proteins comprising an l2 peptide,virus-like particles prepared therefrom and a method for preparing the particles.
US7528223B2 (en) 2002-07-24 2009-05-05 Intercell Ag Antigens encoded by alternative reading frames from pathogenic viruses
WO2004024182A2 (en) 2002-09-13 2004-03-25 Intercell Ag Method for isolating hepatitis c virus peptides
ZA200503511B (en) 2002-10-29 2006-10-25 Coley Pharmaceutical Group Ltd Use of CPG oligonucleotides in the treatment of hepatitis C virus infection
US7956043B2 (en) 2002-12-11 2011-06-07 Coley Pharmaceutical Group, Inc. 5′ CpG nucleic acids and methods of use
US7858098B2 (en) * 2002-12-20 2010-12-28 Glaxosmithkline Biologicals, S.A. Vaccine
OA13147A (en) * 2002-12-20 2006-12-13 Glaxosmithkline Biolog Sa HPV-16 and -18 L1 VLP vaccine.
UA85377C2 (ru) * 2002-12-20 2009-01-26 Глаксосмітклайн Байолоджикалз Са Применение композиции, содержащей вирусоподобные частички hpv16 і hpv18 при приготовлении медикамента для профилактики инфекции и/или болезни, вызванной группой hpv онкогенных типов, способы индуцирования иммунной реакции, профилактики инфекции и/или болезни, профилактики в популяции субъектов инфекции вызванных одной или несколькими группами онкогенных типов hpv, вакцинная композиция, которая включает hpv16 і нр18
AU2004224746B2 (en) * 2003-03-24 2009-04-23 Valneva Austria Gmbh Improved vaccines
CN100355453C (zh) * 2003-03-24 2007-12-19 英特塞尔股份公司 改进的疫苗
US7758866B2 (en) 2004-06-16 2010-07-20 Glaxosmithkline Biologicals, S.A. Vaccine against HPV16 and HPV18 and at least another HPV type selected from HPV 31, 45 or 52
KR20070029254A (ko) * 2004-06-16 2007-03-13 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. Ｈｐｖ 16과 ｈｐｖ 18 및 적어도 ｈｐｖ 31, 45 또는52로부터 선택된 또 다른 ｈｐｖ 유형에 대한 백신
GB0413510D0 (en) * 2004-06-16 2004-07-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
US7833707B2 (en) 2004-12-30 2010-11-16 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Methods of overexpression and recovery of porcine circovirus type 2 ORF2
NZ560930A (en) * 2005-02-16 2011-06-30 Novartis Vaccines & Diagnostic Hepatitis B virus vaccine comprising a hepatitis B virus surface antigen, aluminium phosphate, 3-O-deacylated monophosphoryl lipid A and a triethylammonium ion
JP4182074B2 (ja) 2005-03-03 2008-11-19 ファナック株式会社 ハンド及びハンドリングロボット
PE20061428A1 (es) * 2005-03-23 2007-01-16 Glaxosmithkline Biolog Sa Formulacion de vacuna que comprende un adyuvante de emulsion aceite en agua y 3d-mpl
WO2006114273A2 (en) * 2005-04-26 2006-11-02 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine
AU2006239422A1 (en) * 2005-04-26 2006-11-02 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine
TWI457133B (zh) 2005-12-13 2014-10-21 Glaxosmithkline Biolog Sa 新穎組合物
US7790203B2 (en) * 2005-12-13 2010-09-07 Lowder Tom R Composition and regimen for the treatment of herpes simplex virus, herpes zoster, and herpes genitalia epidermal herpetic lesions
DK2371385T3 (en) 2005-12-29 2015-11-30 Boehringer Ingelheim Vetmed Use of a PV2 immunogen composition for reduction of clinical symptoms in pigs
EP3320919B1 (en) 2005-12-29 2020-05-27 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Multivalent pcv2 immunogenic compositions and methods of producing such compositions
WO2008027394A2 (en) 2006-08-28 2008-03-06 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Constructs for enhancing immune responses
US20090181078A1 (en) 2006-09-26 2009-07-16 Infectious Disease Research Institute Vaccine composition containing synthetic adjuvant
SI2484375T1 (en) 2006-09-26 2018-08-31 Infectious Disease Research Institute A vaccine composition comprising a synthetic adjuvant
EP1941903A1 (en) 2007-01-03 2008-07-09 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Prophylaxis and treatment of PRDC
EP1958644A1 (en) 2007-02-13 2008-08-20 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Prevention and treatment of sub-clinical pcvd
AU2008226974B2 (en) 2007-03-09 2013-08-15 Merck Sharp & Dohme Llc Papillomavirus vaccine compositions
EP2168977B1 (en) * 2007-06-26 2018-08-08 Japan Health Sciences Foundation Vaccine antigen capable of inducing cross-reacting and neutralizing antibody against high-risk-type human papillomavirus
US7829274B2 (en) 2007-09-04 2010-11-09 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Reduction of concomitant infections in pigs by the use of PCV2 antigen
US9114098B2 (en) 2008-06-04 2015-08-25 The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute Method for using inactivated Japanese encephalitis virus particles as adjuvant
DK2318042T3 (da) * 2008-07-31 2014-11-10 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine mod HPV
NZ597182A (en) 2009-05-22 2014-07-25 Genocea Biosciences Inc Vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response
WO2010141861A1 (en) 2009-06-05 2010-12-09 Infectious Disease Research Institute Synthetic glucopyranosyl lipid adjuvants
TR201802597T4 (tr) * 2009-06-19 2018-03-21 Eyegene Inc Servikal kanseri için aşı.
MA33440B1 (fr) * 2009-06-25 2012-07-03 Glaxosmithkline Biolog Sa Nouvelles compositions
TWI627281B (zh) 2009-09-02 2018-06-21 百靈佳殷格翰家畜藥品公司 降低ｐｃｖ－２組合物殺病毒活性之方法及具有改良免疫原性之ｐｃｖ－２組合物
AU2011259718B2 (en) * 2010-05-28 2016-03-03 Zoetis Belgium S.A. Vaccines comprising cholesterol and CpG as sole adjuvant - carrier molecules
UA112970C2 (uk) * 2010-08-05 2016-11-25 Мерк Шарп Енд Доме Корп. Інактивований вірус вітряної віспи, спосіб його одержання і застосування
BR112013004594B1 (pt) * 2010-08-27 2020-07-28 Intervet International B. V. método para a determinação de um conteúdo de antígeno
CN102008721A (zh) * 2010-11-16 2011-04-13 浙江大学 一种hpv多肽/dc混合疫苗及其制备
WO2012074881A2 (en) 2010-11-24 2012-06-07 Genocea Biosciences, Inc. Vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response
NZ616304A (en) 2011-04-08 2016-01-29 Immune Design Corp Immunogenic compositions and methods of using the compositions for inducing humoral and cellular immune responses
CN102210858B (zh) * 2011-05-18 2013-05-08 北京科兴生物制品有限公司 一种肠道病毒71型与甲型肝炎联合疫苗
KR102049988B1 (ko) 2011-06-24 2019-11-28 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 알루미늄 아주반트를 포함하는 hpv 백신 제제 및 그의 제조 방법
WO2013006569A2 (en) 2011-07-01 2013-01-10 The Regents Of The University Of California Herpes virus vaccine and methods of use
EP2782597B1 (en) 2011-11-23 2022-04-13 Genocea Biosciences, Inc. Nucleic acid vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response
EP3563834A1 (en) 2012-02-07 2019-11-06 Infectious Disease Research Institute Improved adjuvant formulations comprising tlr4 agonists and methods of using the same
AU2013262691B2 (en) 2012-05-16 2018-12-20 Immune Design Corp. Vaccines for HSV-2
US9624510B2 (en) 2013-03-01 2017-04-18 The Wistar Institute Adenoviral vectors comprising partial deletions of E3
AU2014253791B2 (en) 2013-04-18 2019-05-02 Immune Design Corp. GLA monotherapy for use in cancer treatment
US9463198B2 (en) 2013-06-04 2016-10-11 Infectious Disease Research Institute Compositions and methods for reducing or preventing metastasis
EA201691348A1 (ru) 2013-12-31 2016-11-30 Инфекшес Дизиз Рисерч Инститьют Однофлаконные вакцинные составы
EP3490610A4 (en) 2016-08-01 2020-05-20 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology DEFICIENTLY REPLICABLE ADENOVIRAL VECTOR COMPOSITIONS AND METHODS FOR VACCINE APPLICATIONS
WO2018064232A1 (en) 2016-09-28 2018-04-05 Genocea Biosciences, Inc. Methods and compositions for treating herpes
CN107987159B (zh) * 2017-11-28 2021-06-22 上海药明生物医药有限公司 一种使用大剂量dna免疫技术免疫动物使血清中抗体滴度提高的方法
GB201821207D0 (en) * 2018-12-24 2019-02-06 Tcer Ab Immunotherapy therapy
MX2021014363A (es) 2019-05-25 2022-02-21 Infectious Disease Res Inst Composicion y metodo para secar por pulverizacion una emulsion de vacuna adyuvante.
CN110652980B (zh) * 2019-10-09 2020-06-30 北京尚华生态环保科技股份公司 一种土壤原位修复剂
CN110576034B (zh) * 2019-10-09 2020-06-30 北京尚华生态环保科技股份公司 一种土壤原位修复方法
WO2021097347A1 (en) 2019-11-15 2021-05-20 Infectious Disease Research Institute Rig-i agonist and adjuvant formulation for tumor treatment
CN114681602B (zh) * 2020-12-25 2023-12-01 中国食品药品检定研究院 一种双价人乳头瘤病毒疫苗

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH085804B2 (ja) 1988-04-28 1996-01-24 財団法人化学及血清療法研究所 Ａ型及びｂ型肝炎混合アジュバントワクチン
GB9113809D0 (en) * 1991-06-26 1991-08-14 Cancer Res Campaign Tech Papillomavirus l2 protein
DE122007000019I1 (de) * 1991-07-19 2007-07-26 Univ Queensland Impfstoffen gegen Papillomavirus
US5437951A (en) * 1992-09-03 1995-08-01 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Self-assembling recombinant papillomavirus capsid proteins
US5618536A (en) * 1992-09-03 1997-04-08 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Chimeric papillomavirus-like particles
DE69405551T3 (de) * 1993-03-23 2005-10-20 Smithkline Beecham Biologicals S.A. 3-0-deazylierte monophosphoryl lipid a enthaltende impfstoff-zusammensetzungen
GB9326253D0 (en) * 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
GB9409962D0 (en) * 1994-05-18 1994-07-06 Smithkline Beecham Biolog Novel compounds
WO1996026277A1 (en) * 1995-02-24 1996-08-29 Cantab Pharmaceuticals Research Limited Polypeptides useful as immunotherapeutic agents and methods of polypeptide preparation
US6172192B1 (en) * 1996-01-26 2001-01-09 Innogenetics N.V. Toxoplasma gondii antigen Tg20
KR100365986B1 (ko) * 1996-02-09 2003-02-20 스미스클라인 비이참 바이오로지칼즈 에스.에이. 수두대상포진바이러스유전자63생성물에대한백신
GB9711990D0 (en) * 1997-06-11 1997-08-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
GB9717953D0 (en) * 1997-08-22 1997-10-29 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
CA2229955C (en) * 1998-02-20 2003-12-09 Medigene Gmbh Papilloma virus capsomere vaccine formulations and methods of use
BR9908599A (pt) * 1998-03-09 2000-11-14 Smithkline Beecham Biolog Composições combinadas de vacina
US6500284B1 (en) 1998-06-10 2002-12-31 Suraltech, Inc. Processes for continuously producing fine grained metal compositions and for semi-solid forming of shaped articles
GB9819898D0 (en) 1998-09-11 1998-11-04 Smithkline Beecham Plc New vaccine and method of use
DE122007000087I1 (de) 1998-10-16 2008-03-27 Glaxosmithkline Biolog Sa Adjuvanzsysteme und impfstoffe
EP1150712B1 (en) * 1999-02-05 2008-11-05 Merck & Co., Inc. Human papilloma virus vaccine formulations
GB9921147D0 (en) * 1999-09-07 1999-11-10 Smithkline Beecham Biolog Novel composition

Also Published As

Publication number Publication date
NO20021116L (no) 2002-04-30
CA2384064A1 (en) 2001-03-15
AU7775100A (en) 2001-04-10
CN1387443A (zh) 2002-12-25
CN1325117C (zh) 2007-07-11
ZA200201810B (en) 2004-05-26
DE60024893D1 (de) 2006-01-19
HU229099B1 (en) 2013-07-29
US6936255B1 (en) 2005-08-30
NO20033715L (no) 2002-04-30
EP1210113B1 (en) 2006-03-29
HUP0202804A3 (en) 2004-08-30
KR20020027630A (ko) 2002-04-13
PL201767B1 (pl) 2009-05-29
NO331825B1 (no) 2012-04-10
WO2001017551A2 (en) 2001-03-15
ES2261243T3 (es) 2006-11-16
AU766494B2 (en) 2003-10-16
US7101560B2 (en) 2006-09-05
SI1210113T1 (sl) 2006-08-31
IL148456A0 (en) 2002-09-12
ES2253636T3 (es) 2006-06-01
CZ2002843A3 (cs) 2002-08-14
HUP0202804A2 (hu) 2002-12-28
TR200200607T2 (tr) 2002-06-21
PL354039A1 (pl) 2003-12-15
NZ517621A (en) 2003-09-26
DK1210113T3 (da) 2006-07-03
ATE312624T1 (de) 2005-12-15
EP1210113A2 (en) 2002-06-05
SI1410805T1 (sl) 2006-04-30
BR0014171A (pt) 2002-05-21
MXPA02002484A (es) 2002-08-28
DE60027029T2 (de) 2006-10-19
CN1618465A (zh) 2005-05-25
PT1210113E (pt) 2006-07-31
US20060280756A1 (en) 2006-12-14
CO5280045A1 (es) 2003-05-30
NO332800B1 (no) 2013-01-14
MY130084A (en) 2007-05-31
CZ302811B6 (cs) 2011-11-23
NO2012016I1 (no) 2012-10-15
JP2004067696A (ja) 2004-03-04
DE60027029D1 (de) 2006-05-18
IL158107A (en) 2008-11-03
NZ527560A (en) 2004-12-24
CY1106090T1 (el) 2011-06-08
CA2384064C (en) 2010-06-01
CA2443214C (en) 2006-03-21
MY142842A (en) 2011-01-14
GC0000201A (en) 2006-03-29
IL158107A0 (en) 2004-03-28
KR100594668B1 (ko) 2006-06-30
EP1410805B1 (en) 2005-12-14
CA2443214A1 (en) 2001-03-15
HU228687B1 (en) 2013-05-28
HU0303215D0 (en) 2003-11-28
TWI258374B (en) 2006-07-21
NO20033715D0 (no) 2003-08-21
DE60024893T2 (de) 2006-07-06
HK1064958A1 (en) 2005-02-08
US20040126394A1 (en) 2004-07-01
NO2012016I2 (no) 2012-10-08
TW200408405A (en) 2004-06-01
JP4689910B2 (ja) 2011-06-01
ATE321569T1 (de) 2006-04-15
WO2001017551A3 (en) 2001-09-27
AR025502A1 (es) 2002-11-27
GB9921146D0 (en) 1999-11-10
CY1107457T1 (el) 2012-12-19
HK1048435A1 (en) 2003-04-04
ZA200306402B (en) 2004-08-02
KR20030087081A (ko) 2003-11-12
HUP0303215A3 (en) 2008-04-28
EP1769806A3 (en) 2007-10-24
EP1769806A2 (en) 2007-04-04
NO20021116D0 (no) 2002-03-06
US7220551B2 (en) 2007-05-22
DK1410805T3 (da) 2006-04-18
CN100389824C (zh) 2008-05-28
KR100557665B1 (ko) 2006-03-06
EP1410805A1 (en) 2004-04-21
HK1048435B (zh) 2007-01-05
SG110072A1 (en) 2005-04-28
JP2003508495A (ja) 2003-03-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4689910B2 (ja) 新規組成物
JP4510283B2 (ja) 併合ワクチン組成物
JP4694745B2 (ja) 新規組成物
AU2003236490B2 (en) Novel composition