PL200926B1 - Stabilny ciekły preparat zawierający toksynę jadu kiełbasianego oraz zastosowanie stabilnego ciekłego preparatu zawierającego toksynę jadu kiełbasianego - Google Patents
Stabilny ciekły preparat zawierający toksynę jadu kiełbasianego oraz zastosowanie stabilnego ciekłego preparatu zawierającego toksynę jadu kiełbasianegoInfo
- Publication number
- PL200926B1 PL200926B1 PL347069A PL34706999A PL200926B1 PL 200926 B1 PL200926 B1 PL 200926B1 PL 347069 A PL347069 A PL 347069A PL 34706999 A PL34706999 A PL 34706999A PL 200926 B1 PL200926 B1 PL 200926B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- botulinum toxin
- formulation
- units
- toxin
- type
- Prior art date
Links
- 108030001720 Bontoxilysin Proteins 0.000 title claims abstract description 106
- 229940053031 botulinum toxin Drugs 0.000 title claims abstract description 102
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 90
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 58
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title abstract description 24
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 title abstract description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims abstract description 87
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 34
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 6
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims description 76
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims description 76
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 60
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 claims description 51
- 108010074523 rimabotulinumtoxinB Proteins 0.000 claims description 43
- 206010044074 Torticollis Diseases 0.000 claims description 40
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 27
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 18
- 108010057266 Type A Botulinum Toxins Proteins 0.000 claims description 17
- 229940094657 botulinum toxin type a Drugs 0.000 claims description 16
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 15
- 208000005392 Spasm Diseases 0.000 claims description 12
- 208000010118 dystonia Diseases 0.000 claims description 12
- 239000008362 succinate buffer Substances 0.000 claims description 12
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 11
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 11
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 11
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 claims description 9
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 claims description 9
- 208000018197 inherited torticollis Diseases 0.000 claims description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 9
- 208000014094 Dystonic disease Diseases 0.000 claims description 8
- 208000004350 Strabismus Diseases 0.000 claims description 8
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 8
- 201000002849 spasmodic dystonia Diseases 0.000 claims description 8
- 208000008238 Muscle Spasticity Diseases 0.000 claims description 7
- 206010005159 blepharospasm Diseases 0.000 claims description 7
- 230000000744 blepharospasm Effects 0.000 claims description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 7
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 6
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 6
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 6
- 208000018198 spasticity Diseases 0.000 claims description 6
- 208000008454 Hyperhidrosis Diseases 0.000 claims description 5
- 206010008129 cerebral palsy Diseases 0.000 claims description 5
- 230000001713 cholinergic effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000001148 spastic effect Effects 0.000 claims description 5
- 206010003591 Ataxia Diseases 0.000 claims description 4
- 208000019695 Migraine disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000036071 Rhinorrhea Diseases 0.000 claims description 4
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 claims description 4
- 206010067672 Spasmodic dysphonia Diseases 0.000 claims description 4
- 230000002917 arthritic effect Effects 0.000 claims description 4
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 claims description 4
- 210000001061 forehead Anatomy 0.000 claims description 4
- 206010027599 migraine Diseases 0.000 claims description 4
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 4
- 208000004296 neuralgia Diseases 0.000 claims description 4
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 claims description 4
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 claims description 4
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 claims description 4
- 210000005070 sphincter Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 claims description 4
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 claims description 4
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 claims description 4
- 208000008035 Back Pain Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000112 Myalgia Diseases 0.000 claims description 3
- 206010033078 Otitis media Diseases 0.000 claims description 3
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 claims description 3
- 208000030886 Traumatic Brain injury Diseases 0.000 claims description 3
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 claims description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 3
- 210000001097 facial muscle Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 3
- 208000013465 muscle pain Diseases 0.000 claims description 3
- 208000020431 spinal cord injury Diseases 0.000 claims description 3
- 230000037315 hyperhidrosis Effects 0.000 claims description 2
- 210000004211 gastric acid Anatomy 0.000 claims 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 17
- 238000003860 storage Methods 0.000 abstract description 10
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 abstract description 7
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 70
- 201000002866 cervical dystonia Diseases 0.000 description 27
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 22
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 22
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 241000193155 Clostridium botulinum Species 0.000 description 14
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 14
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 14
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 13
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 13
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 11
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- 230000036515 potency Effects 0.000 description 10
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 10
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 8
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 8
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 8
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 description 8
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 8
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 7
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 101710117542 Botulinum neurotoxin type A Proteins 0.000 description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940089093 botox Drugs 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 5
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical compound CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960004373 acetylcholine Drugs 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 4
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 4
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 4
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 4
- -1 hydride ions Chemical class 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 230000016978 synaptic transmission, cholinergic Effects 0.000 description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 231100000911 LD50 test Toxicity 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010039424 Salivary hypersecretion Diseases 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 231100000654 protein toxin Toxicity 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 230000035900 sweating Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000012905 visible particle Substances 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 208000003508 Botulism Diseases 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000012661 Dyskinesia Diseases 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 208000007101 Muscle Cramp Diseases 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 208000008630 Sialorrhea Diseases 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 2
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 2
- 238000002567 electromyography Methods 0.000 description 2
- 238000003372 electrophysiological method Methods 0.000 description 2
- 210000000744 eyelid Anatomy 0.000 description 2
- 230000027119 gastric acid secretion Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 201000002851 oromandibular dystonia Diseases 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 235000013580 sausages Nutrition 0.000 description 2
- 210000001991 scapula Anatomy 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000005062 synaptic transmission Effects 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 2
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004507 Abelmoschus esculentus Species 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012935 Averaging Methods 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108010009685 Cholinergic Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000186542 Clostridium baratii Species 0.000 description 1
- 241000193171 Clostridium butyricum Species 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N L-Homoarginine Natural products OC(=O)C(N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N L-homoarginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 201000005190 Meige syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000029578 Muscle disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021642 Muscular disease Diseases 0.000 description 1
- 206010028391 Musculoskeletal Pain Diseases 0.000 description 1
- MXNRLFUSFKVQSK-QMMMGPOBSA-O N(6),N(6),N(6)-trimethyl-L-lysine Chemical compound C[N+](C)(C)CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O MXNRLFUSFKVQSK-QMMMGPOBSA-O 0.000 description 1
- PQNASZJZHFPQLE-UHFFFAOYSA-N N(6)-methyllysine Chemical compound CNCCCCC(N)C(O)=O PQNASZJZHFPQLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFOQDQDVYIEHN-ZETCQYMHSA-N N,N-Dimethyllysine Chemical compound CN(C)[C@H](C(O)=O)CCCCN RYFOQDQDVYIEHN-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- 206010029315 Neuromuscular blockade Diseases 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005141 Otitis Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 235000014676 Phragmites communis Nutrition 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010005730 R-SNARE Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000875 Spinal Curvatures Diseases 0.000 description 1
- 102000002215 Synaptobrevin Human genes 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 1
- 108010079650 abobotulinumtoxinA Proteins 0.000 description 1
- 102000034337 acetylcholine receptors Human genes 0.000 description 1
- 229940091179 aconitate Drugs 0.000 description 1
- GTZCVFVGUGFEME-UHFFFAOYSA-N aconitic acid Chemical compound OC(=O)CC(C(O)=O)=CC(O)=O GTZCVFVGUGFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 230000001078 anti-cholinergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000573 anti-seizure effect Effects 0.000 description 1
- 230000002921 anti-spasmodic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 229940088623 biologically active substance Drugs 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035606 childbirth Effects 0.000 description 1
- 239000000812 cholinergic antagonist Substances 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002498 deadly effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000003291 dopaminomimetic effect Effects 0.000 description 1
- 229940098753 dysport Drugs 0.000 description 1
- 208000019258 ear infection Diseases 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009499 grossing Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004678 hydrides Chemical class 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229960004716 idoxuridine Drugs 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000005414 inactive ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004941 influx Effects 0.000 description 1
- 238000011221 initial treatment Methods 0.000 description 1
- 230000030214 innervation Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000003158 myorelaxant agent Substances 0.000 description 1
- 210000004237 neck muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000001640 nerve ending Anatomy 0.000 description 1
- 210000000715 neuromuscular junction Anatomy 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004279 orbit Anatomy 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 238000001139 pH measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002559 palpation Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000032696 parturition Effects 0.000 description 1
- 210000002640 perineum Anatomy 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000007981 phosphate-citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000003518 presynaptic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- ZLIBICFPKPWGIZ-UHFFFAOYSA-N pyrimethanil Chemical compound CC1=CC(C)=NC(NC=2C=CC=CC=2)=N1 ZLIBICFPKPWGIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 208000026451 salivation Diseases 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 201000002899 segmental dystonia Diseases 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L sodium succinate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CCC([O-])=O ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 210000000225 synapse Anatomy 0.000 description 1
- 210000002504 synaptic vesicle Anatomy 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 239000007143 thioglycolate medium Substances 0.000 description 1
- 210000003813 thumb Anatomy 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000007888 toxin activity Effects 0.000 description 1
- 230000024033 toxin binding Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 229960001005 tuberculin Drugs 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003668 tyrosines Chemical class 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- ATCJTYORYKLVIA-SRXJVYAUSA-N vamp regimen Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1.C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1.O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1.C([C@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C(C45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C=O)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 ATCJTYORYKLVIA-SRXJVYAUSA-N 0.000 description 1
- 239000002435 venom Substances 0.000 description 1
- 231100000611 venom Toxicity 0.000 description 1
- 210000001048 venom Anatomy 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- A61K38/4886—Metalloendopeptidases (3.4.24), e.g. collagenase
- A61K38/4893—Botulinum neurotoxin (3.4.24.69)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/06—Anti-spasmodics, e.g. drugs for colics, esophagic dyskinesia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/06—Anti-spasmodics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/02—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for disorders of the vagina
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/04—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for inducing labour or abortion; Uterotonics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/06—Antiabortive agents; Labour repressants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
- A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/06—Antimigraine agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/16—Otologicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Immunology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Psychology (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Birds (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Otolaryngology (AREA)
Abstract
Stabilny, gotowy do u zycia, ciek ly preparat zawieraj acy toksyn e jadu kie lbasianego do terapeu- tycznego u zytku dla ludzi zawiera dopuszczalny w farmacji buforowy roztwór soli zdolny do buforowa- nia w zakresie pH pomi edzy 5 i 6, terapeutyczny koncentrat oczyszczonej, izolowanej toksyny jadu kie lbasianego do u zytku dla ludzi oraz albumin e z surowicy krwi. Preparat jest stabilny jako ciecz w ci agu co najmniej jednego roku w temperaturze pomi edzy 0°C i 10°C oraz w ci agu co najmniej 6 miesi ecy w temperaturze pomi edzy 10°C i 30°C. Zastosowanie stabilnego, gotowego do u zycia, ciek lego preparatu zawieraj acego toksyn e jadu kie lbasianego do wytwarzania preparatu do hamowa- nia bod zca cholinergicznego do wybranego mi esnia, grupy miesni, gruczo lu lub narz adu, polega na tym, ze do wybranego mi esnia, grupy miesni, gruczo lu lub narz adu pacjenta podaje si e skuteczn a farmaceutycznie ilo sc ciek lego preparatu zawieraj acego toksyn e jadu kie lbasianego. PL PL PL PL PL PL PL
Description
Stan techniki
Toksyna jadu kiełbasianego jest polipeptydowym produktem wytwarzanym przez bakterie Clostridium botulinum. Toksyna ta wywołuje paraliż mięśni u ssaków przez blokowanie uwalniania presynaptycznego neurotransmiitera acetylocholiny w miejscu połączeń neuro-mięśniowych. Chociaż toksyna była przez długie lata kojarzona ze śmiertelnym zatruciem jadem kiełbasianym, to w ostatnich latach stosowana jest terapeutycznie do leczenia pewnych zaburzeń związanych z mimowolnymi ruchami mięśnia, (takich jak zez, samoistny kurcz powiek i skurcz połowy twarzy) oraz segmentowe dystonie (takie jak kręcz szyi kurczowy, dystonia ustno-żuchwowa i dystonia spazmatyczna). Toksyna znalazła również zastosowanie w różnych wskazaniach kosmetycznych, takich jak nie chirurgiczne zmniejszanie „linii zmarszczkowych na twarzy oraz w traktowaniu nadmiernego pocenia.
Aktualnie, znane i zaakceptowane są do stosowania terapeutycznego u ludzi dwa preparaty zawierające toksynę (typu A) jadu kiełbasianego, a mianowicie „BOTOX® (Oculinum®., Allergan Inc., Irvine, CA) oraz „DYSPORT® (Spexwood Pharmaceuticals, Ltd, Zjednoczone Królestwo). Oba te preparaty są dostępne dla lekarzy w postaci liofilizatu, który rozpuszcza się bezpośrednio przed użyciem.
Z uwagi na róż nice w wymaganiach dawkowania dla różnych pacjentów, wielkości dawek dla indywidualnych pacjentów mogą się znacznie różnić. Ponadto, dla pewnych wskazań lekarz musi podawać jedynie małą część zawartości fiolki w ciągu przedłużonego okresu czasu, który może wynosić kilkanaście godzin. Chociaż jedno opublikowane badanie podaje, że ciekłe preparaty zawierające jad kiełbasiany mogą być powtórnie zamrażane i rozmrażane ze znacznym zachowaniem aktywności (Schantz i Kautter, 1978), to bardziej współczesne badania aktywności powtórnie rozpuszczonej toksyny wykazały, że „BOTOKS® traci co najmniej 44% aktywności po rozpuszczeniu i przechowywaniu w standardowej chłodni (około 4°C) w ciągu 12 godzin. Co więcej, gdy rozpuszczony preparat przechowywano w zamrażarce w temperaturze -70°C nastąpił około 70% spadek aktywności po dwóch tygodniach (Gartlan i Hoffman, 1993). Z tego powodu zaleca się aby taki preparat nie był stosowany później niż po upływie 4 godzin od rozpuszczenia. Może to prowadzić do znacznego marnowania leku i zwię kszania wydatków pacjenta.
Występuje więc potrzeba posiadania gotowego do użycia ciekłego preparatu zawierającego toksynę jadu kiełbasianego, którą można by dogodnie przewozić, przechowywać i stosować zgodnie z potrzebami lekarza. Niniejszy wynalazek dotyczy takiego preparatu.
Istota wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest stabilny, gotowy do użycia, ciekły preparat zawierający toksynę jadu kiełbasianego do terapeutycznego użytku dla ludzi, który zawiera dopuszczalny w farmacji buforowy roztwór soli zdolny do buforowania w zakresie pH pomiędzy 5 i 6, korzystnie pomiędzy 5,4 i 5,8, terapeutyczny koncentrat oczyszczonej, izolowanej toksyny jadu kiełbasianego do użytku dla ludzi oraz albuminę z surowicy krwi. Preparat ten jest stabilny jako ciecz w ciągu co najmniej jednego roku, korzystnie w ciągu co najmniej dwóch lat, w temperaturze pomiędzy 0°C i 10°C oraz w ciągu co najmniej 6 miesięcy w temperaturze pomiędzy 10°C i 30°C, korzystnie w temperaturze 25°C.
Korzystnie preparat według wynalazku jest stabilny w postaci ciekłej w ciągu co najmniej jednego roku w temperaturze w zakresie od 2°C do 8°C, korzystniej 5°C.
Preparat według wynalazku jest stabilny w postaci ciekłej w ciągu co najmniej jednego roku w temperaturze korzystnie w zakresie od 2°C do 6°C, bardziej korzystnie 4°C.
W korzystnym wykonaniu preparatu wed ł ug wynalazku toksyną jadu kieł basianego jest toksyna serotypu wybranego z grupy składającej się z serotypów A, B, C1, C2, D, E, F i G, korzystnie toksyna typu B, obecna w stężeniu 100-20.000 jednostek/ml, korzystnie w stężeniu 1.000-5.000 jednostek/ml.
Korzystnie, toksyna jadu kiełbasianego typu B jest obecna w postaci kompleksu o wysokiej masie cząsteczkowej wynoszącej około 700.000 daltonów (D), to jest około 700.000 x 1,6605387313 x 10-27 kg.
W kolejnym korzystnym wykonaniu preparatu toksyną jadu kieł basianego jest toksyna typu A, obecna w stężeniu 20 - 2.000 jednostek/ml, korzystnie w stężeniu 100 - 1.000 jednostek/ml.
Korzystnie, dopuszczalny w farmacji buforowy roztwór soli zawiera bufor wybrany z grupy, do której należą bufor fosforanowy, bufor fosforanowo-cytrynowy i bufor bursztynianowy.
PL 200 926 B1
Preparat według wynalazku zawiera korzystnie 100 mM chlorku sodowego, 10 mM buforu bursztynianowego o stężeniu 5,6 pH, albuminę z surowicy ludzkiej o stężeniu 0,5 mg/mL oraz toksynę jadu kiełbasianego typu B o stężeniu 4.000 - 6.000 jednostek/ml, korzystnie około 5.000 jednostek/ml.
W preparacie według wynalazku, albuminę z surowicy krwi stanowi korzystnie rekombinowana ludzka albumina z surowicy.
Preparat według wynalazku zawiera korzystnie 0,5 mg/ml albuminę ludzką, toksynę jadu kiełbasianego typu B o stężeniu 4.000 - 6.000 jednostek/ml, korzystnie 5.000 jednostek/ml, oraz dopuszczalny w farmacji buforowy roztwór soli, zawierający 100 mM chlorku sodowego i 10 mM buforu bursztynianowego, zdolny do utrzymywania pH 5,6, który to preparat jest stabilny jako ciecz w ciągu co najmniej 6 miesięcy w temperaturze pomiędzy 10°C i 30°C.
Według wynalazku, zastosowanie stabilnego, gotowego do użycia, ciekłego preparatu zawierającego toksynę jadu kiełbasianego, według wynalazku, do wytwarzania preparatu do hamowania bodźca cholinergicznego do wybranego mięśnia, grupy mięśni, gruczołu lub narządu, polega na tym, że do wybranego mięśnia, grupy mięśni, gruczołu lub narządu pacjenta podaje się skuteczną farmaceutycznie ilość ciekłego preparatu zawierającego toksynę jadu kiełbasianego, przy czym zastosowanie preparatu jest korzystne w przypadkach, jeśli powyższy pacjent cierpi na zaburzenie z grupy, do której należy spastyczność, kurcz powiek, zez, kurcz połowy twarzy, zapalenie ucha środkowego, spastyczne zapalenie okrężnicy, skurcz zwieracza odbytu, ataksja moczowego wypychacza-zwieracza, ścisk szczęk, wygięcie kręgosłupa.
W szczególności, zastosowanie preparatu jest korzystne w przypadkach, jeśli powyższy pacjent cierpi na spastyczność związaną z jedną lub kilkoma grupami chorób, takich jak udar, uszkodzenie rdzenia kręgowego, uszkodzenia wewnątrzczaszkowe, porażenie mózgowe, stwardnienie rozsiane i choroba Parkinsona, a nadto je ś li pacjent cierpi na dystonię zwią zaną z jedną lub kilkoma grupami chorób, takich jak kręcz szyi kurczowy (dystonia szyjna), dystonia spazmatyczna, dystonia kończyn, dystonia krtaniowa, oraz dystonia ustno-żuchwowa (Meige'a).
Szczególnie korzystne zastosowanie według wynalazku preparatu według wynalazku ma miejsce, jeśli powyższe mięśnie lub grupy mięśni wywołują zmarszczki lub bruzdy na czole, bądź też powyższym mięśniem jest mięsień kroczowy a powyższa pacjentka rodzi dziecko.
Inne korzystne zastosowanie według wynalazku preparatu według wynalazku ma miejsce w przypadku, gdy pacjent cierpi na zaburzenia wybrane z grupy, do której należą ból mięśni twarzy, ból głowy związany z migreną, zaburzenia naczyniowe, nerwoból, neuropatia, ból artretyczny, ból pleców, nadmierne pocenie się, wyciek z nosa, astma, nadmierne wydzielanie śliny oraz nadmierne wydzielanie soku żołądkowego.
W korzystnym zastosowaniu toksyną jadu kiełbasianego jest toksyna serotypu wybranego z grupy składającej się z serotypów A, B, C1, C2, D, E, F i G, korzystnie jest nią toksyna typu B, obecna w stężeniu 100 - 20.000 jednostek/ml, korzystnie obecna w stężeniu 1.000 - 5.000 jednostek/ml, korzystnie obecna w postaci kompleksu o masie cząsteczkowej około 700.000 daltonów (D), to jest około 700.000 x 1,6605387313 x 10-27 kg.
W innym korzystnym zastosowaniu preparatu, toksyną jadu kiełbasianego jest toksyna typu A, obecna w stężeniu 20 - 2.000 jednostek/ml, korzystnie w stężeniu 100 -1.000 jednostek/ml.
Jeśli pacjent jest odporny na toksynę jadu kiełbasianego typu A, w zastosowaniu według wynalazku toksyna jadu kiełbasianego w preparacie jest wybrana z grupy, do której należą serotypy B, C1, C2, D, E, F i G toksyny jadu kiełbasianego, przy czym toksyna jadu kiełbasianego jest w tym preparacie korzystnie toksyną typu B.
Jeśli, natomiast, pacjent jest odporny na toksynę jadu kiełbasianego typu B, w zastosowaniu według wynalazku toksyna jadu kiełbasianego w preparacie jest wybrana z grupy, do której należą serotypy A, C1, C2, D, E, F i G toksyny jadu kiełbasianego, przy czym toksyna jadu kiełbasianego jest w tym preparacie korzystnie toksyną typu A.
Tak więc, stabilne ciekłe preparaty zawierające toksynę jadu kiełbasianego, przeznaczone do stosowania w środkach farmaceutycznych zgodne z wynalazkiem mają tę przewagę, że w przeciwieństwie do dostępnych aktualnie są bardziej stabilne w postaci ciekłej w ciągu przedłużonego okresu czasu (1 rok lub dłużej) w standardowych temperaturach w lodówce (około 4±2°C lub około 2-8°C, albo bardziej ogólnie w zakresie 0-10°C). Preparaty są stabilne w postaci ciekłej podczas przechowywania w pokojowej temperaturze (około 25°C, lub bardziej ogólnie w zakresie 10-30°C) w ciągu co najmniej sześciu miesięcy. Takie preparaty są szczególnie użyteczne w stanach, w których redukcja lub hamowanie wejścia cholinergicznego bodźca nerwowego do obszaru, w szczególności do mięśnia
PL 200 926 B1 lub grupy mięśni, gruczołu lub narządu ma korzystny wpływ. Przykłady takich stanów podano w dalszej części opisu.
W jednym aspekcie, w zakres wynalazku wchodzi stabilny, ciek ły preparat farmaceutyczny zawierający wyizolowaną toksynę jadu kiełbasianego i środek buforujący pozwalający na utrzymanie wartości pH pomiędzy około 5 i 6. Zgodnie z tą ogólną odmianą, toksynę miesza w buforowanej cieczy tworząc ciekły preparat o pH pomiędzy 5 i 6, zwłaszcza pomiędzy około 5,4 i 5,8, korzystnie około 5,5-5,6. Otrzymany preparat jest stabilny w ciągu co najmniej jednego roku lub tak długo jak co najmniej dwa lata, w zakresie temperatury od około 0 do 10°C, lub co najmniej 6 miesięcy w wyższych temperaturach, jak to opisano uprzednio. Generalnie, zgodnie z wynalazkiem każdy ze znanych sero typów toksyny jadu kiełbasianego (np. serotypy A, B, C1, C2, D, E, F lub G) albo inne serotypy wykazujące równoważną aktywność biologiczną mogą być włączane do preparatów według wynalazku. W korzystnej odmianie, toksyn ą jadu kieł basianego stosowaną w preparacie jest serotyp A lub B toksyny izolowany z hodowli Clostridium botulinum.
W korzystnych odmianach, toksyna jadu kieł basianego typu B jest obecna w preparacie w postaci kompleksu o masie cząsteczkowej 700 kilodaltonów (kD), w stężeniu około 100-20.000 jednostek/ml, w szczególności pomiędzy około 1.000-5.000 jednostek/ml. Gdy stosowany jest typ A, to generalnie w stężeniu pomiędzy około 20-2000, korzystnie 100-1.000 jednostek/ml. Jeśli stosuje się kombinacje różnych serotypów, wówczas pożądaną wielkość ich dawki i zakresy stężeń można wyznaczać proporcjonalnie do podanych przykładowo powyżej, zgodnie z ich aktywnością biologiczną.
Buforami, które można stosować są bufory fizjologiczne uważane za bezpieczne do wstrzykiwania do tkanki ssaków, szczególnie ludzi. Reprezentatywnymi buforami są, ale nie tylko, fosforanowe, fosforanowo-cytrynianowe, bursztynianowe, octanowe, cytrynianowe, jabłczanowe i węglanowe układy buforujące. Korzystnie, preparat zawiera także dodatkowo białko, takie jak ludzka albumina z osocza lub żelatyna. Należy pokreślić, że mogą być przez specjalistów rozpoznane i stosowane równoważniki powyżej wymienionych przykładowych buforów i dodatkowych białek. Preparat zawierający toksynę może być załadowywany do dowolnych znanych różnych pojemników lub fiolek, w których utrzymuje swoją aktywność.
W zbliżonym aspekcie, wynalazek dotyczy metody leczenia pacjenta wymagającego hamowania transmisji cholinergicznej. Wynalazek dotyczy również zastosowania preparatów według wynalazku do wytwarzania leku do stosowania w takich wskazaniach.
Przykładami wskazań terapeutycznych i kosmetycznych, w przypadku których można stosować preparat zawierający toksynę jadu kiełbasianego są, ale nie wyłącznie, kurcz powiek, zez, kurcz połowy twarzy, zapalenie ucha środkowego, spastyczne zapalenie okrężnicy, skurcz zwieracza odbytu, ataksja moczowego wypychacza-zwieracza, ścisk szczęk, wygięcie kręgosłupa, spastyczność, taka jak spastyczność związana z jedna lub kilkoma grupami chorób, takich jak udar, uszkodzenie rdzenia kręgowego, uszkodzenia wewnątrzczaszkowe, porażenie mózgowe, stwardnienie rozsiane i choroba
Parkinsona, oraz dystonia (np. kręcz szyi kurczowy (dystonia szyjna), dystonia spazmatyczna, dystonia kończyn, dystonia krtaniowa, dystonia ustno-żuchwowa (Meige'a)). Preparat można także podawać do mięśni kroczowych pacjentce podczas porodu w celu rozluźnienia tych mięśni. Przykładem zastosowań kosmetycznych preparatu jest podawanie do mięśni odpowiedzialnych za tworzenie się zmarszczek lub bruzd na czole. Do innych zastosowań preparatu należą takie jak ból mięśni twarzy, ból głowy związany z migreną, zaburzenia naczyniowe, nerwoból, neuropatia, ból artretyczny, ból pleców, nadmierne pocenie, wyciek z nosa, astma, nadmierne wydzielanie śliny oraz nadmierne wydzielanie soku żołądkowego.
Do szczególnie specyficznych dróg podawania preparatu według wynalazku należy podawanie domięśniowe, podskórne lub jontoforeza. Na przykład, w badaniach prowadzonych w związku z wynalazkiem stwierdzono, że toksyna jadu kiełbasianego typu B wykazuje skuteczność w leczeniu dystonii szyjnej przy podawaniu domięśniowym w podzielonej lub pojedynczej dawce dziennej od 5.000 do 10.000 jednostek.
W innym zbliżonym aspekcie wynalazek dotyczy metod traktowania pacjentów, którzy wykazują uczulenie lub oporność na specyficzny serotyp toksyny jadu kiełbasianego stabilnym ciekłym preparatem zawierającym inny serotyp. Np., pacjent oporny na toksynę jadu kiełbasianego typu A może być traktowany stabilnym preparatem zawierającym serotyp B, C1, C2, D, E, F lub G, albo też pacjentowi opornemu na serotyp B można podawać stabilny preparat zawierający któryś z serotypów A, C1, C2, D, E i F, uzyskując w ten sposób wznowienie skuteczności.
PL 200 926 B1
Powyższe i inne aspekty i cechy wynalazku będą bardziej w pełni widoczne po przeczytaniu poniższego szczegółowego opisu z załączonymi rysunkami.
Szczegółowy opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku są stabilne ciekłe preparaty zawierające toksynę jadu kiełbasianego oraz ich zastosowanie. Chociaż obecnie są dostępne handlowo preparaty zawierające toksynę jadu kiełbasianego, przeznaczone do różnych zastosowań terapeutycznych i kosmetycznych, to ze względu na niestabilność w roztworze aktywnej toksyny muszą być one otrzymywane przez rozpuszczenie liofilizowanych substancji, które mają ściśle określone wymagania dotyczące przechowywania. Np., preparat „BOTOX® ma postać sproszkowanego liofilizatu, który musi być transportowany i przechowywany w zamrażarce w temperaturze nie wyższej niż -5°C i następnie bezpośrednio przed użyciem rozpuszczany w odmierzonej ilości roztworu soli. Po rozpuszczeniu zaleca się podanie preparatu pacjentowi w ciągu do 4 godzin i oziębianie przechowywanie roztworu w tym czasie (PDR, 1997). Zamrażanie i odmrażanie rozpuszczonego produktu nie jest zalecane (Hoffman, 1993).
Niniejszy wynalazek przedstawia stabilny ciekły preparat zawierający toksynę jadu kiełbasianego, który jest trwały w ciekłej postaci co najmniej przez jeden rok w standardowych temperaturach chłodziarki oraz co najmniej przez sześć miesięcy w pokojowej temperaturze. Taki preparat jest korzystny, gdyż nie wymaga specjalnych warunków przechowywania lub transportu. Zmniejszona jest również możliwość występowania błędów podczas rozcieńczania toksyny mogących doprowadzić do przedawkowania.
1. Definicje
Stosowane określenie „stabilny odnosi się do utrzymywania aktywności lub mocy biologicznej przez biologicznie czynną substancję, konkretnie toksynę jadu kiełbasianego, w ciągu określonego lub nie określonego okresu czasu.
Określenie „toksyna jadu kiełbasianego odnosi się do biologicznie czynnego białka lub kompleksu białkowego, zwykle pochodzącego od bakterii Clostridium botulinum. Określenie obejmuje każdą z co najmniej ośmiu znanych, różniących się serologicznie toksyn (A, B, C1, C2, D, E, F i G) jak również każdą dodatkowa toksynę jadu kiełbasianego o takiej samej ogólnie zdolności do hamowania cholinegicznego przekaźnictwa nerwowego, która tworzy aktywną cząsteczkę. Określenie powyższe obejmie także ewentualne białko nośnikowe pochodzące również od C. botulinum i w skompleksowane z aktywną cząsteczką, jak to opisano poniżej w sekcji IIA. Serotypy toksyny jadu kiełbasianego są, jak to się dyskutuje w dalszej części opisu, spokrewnione farmakologicznie ale immunologicznie odróżnialne. Generalnie, cząsteczka aktywnej toksyny ma masę około od 145 do 170 kilodaltonów (kD). W odniesieniu do niniejszego wynalazku jest zrozumiałe, że do toksyn białkowych zaliczane są białka nośnikowe zarówno izolowane ze źródeł naturalnych jak i wytwarzane drogą rekombinacji znanymi metodami. Ponadto, określenie „toksyna jadu kiełbasianego dotyczy także białek posiadających sekwencje aminokwasowe, w skład których wchodzą konserwatywne podstawienia aminokwasowe, w tym delecje, w porównaniu ze znanymi sekwencjami w toksynie jadu kiełbasianego, jak to opisano w dalszej części.
Określenie „aktywność biologiczna toksyny jadu kiełbasianego odnosi się do jej zdolności do blokowania przekaźnictwa nerwowego w złączach nerwowych posiadających receptory acetylocholiny poprzez blokowanie uwalniania acetylocholiny z zakończeń nerwów. Określenie powyższe stosuje się zamiennie z określeniami „hamowanie transmisji cholinergicznej, „hamowanie dopływu bodźca cholinergicznego lub ich odmianami. Do badań nad oceną in vitro aktywności biologicznej należy oznaczanie LD50 u myszy, jak to opisano poniżej. Jednostka aktywności w tym badaniu jest zdefiniowana jako ilość toksyny białkowej potrzebna do zabicia 50% testowanych określoną dawką myszy. Funkcjonalna definicja tego określenia jest podana w przykładzie 2.
Zwykłe aminokwasy są opisywane jedno- lub trzyliterowymi skrótami jak następuje: alanina (A, Ala), cysteina (C, Cys), kwas asparaginowy (D, Asp), kwas glutaminowy (E, Glu), fenyloalanina (F, Phe), glicyna (G, Gly), histydyna (H, His), izoleucyna (I, Ile), lizyna (K, Lys), leucyna (L, Leu), metionina (M, Met), asparagina (N, Asn), prolina (P, Pro), glutamina (Q, Glu), arginina (R, Arg), seryna (S, Ser), treonina (T, Thr), valina (V, Val), tryptopfan (W, Trp, tyrozyna (Y, Tyr).
Określenie „ciekły preparat farmaceutyczny odnosi się do aktywnego farmaceutycznie preparatu zawierającego lek lub związek biologiczny, który to preparat nadaje się do przechowywania w farmaceutycznym medium, takim jak buforowany roztwór soli lub bufor fizjologiczny w ciągu długiego okresu czasu. Preparat może być koncentratem, który rozcieńcza się podobną lub inną cieczą przed użyciem.
PL 200 926 B1
W Określenie „bufor odnosi się do związku, zwykle soli, który po rozcieńczeniu w wodnym środowisku służy do utrzymywania stężenia wolnych jonów wodorkowych w roztworze w określonym zakresie pH po dodaniu lub zobojętnianiu jonów wodorkowych w roztworze. Mówi się, że sól lub roztwór mają „pojemność buforującą lub „buforują roztwór w takim zakresie, w jakim jest to określone. Generalnie, bufor ma odpowiednią pojemność buforującą w zakresie ±1 pH. Jako „bufor fizjologiczny określa się bufor nie wykazujący toksyczności w stosunku do ssaków, szczególnie ludzi, gdy jest podawany jako część preparatu farmaceutycznego. Przykłady takich fizjologicznych buforów w kontekście wynalazku są podane w dalszej części opisu.
Określenie „dopuszczalna w farmacji ciecz dotyczy cieczy uważanej za bezpieczną dla ssaków, w szczególności ludzi, podczas konsumpcji lub iniekcji.
Określenie „dodatkowe białko dotyczy, w znaczeniu stosowanym w opisie, białka dodawanego do farmaceutycznie aktywnego preparatu ale nie zwiększającego w sposób znaczący aktywności biologicznej tego preparatu. Do takich białek należą przykładowo, ale nie wyłącznie, albuminy z surowicy krwi, w szczególności albuminy z krwi ludzkiej, oraz żelatyna. Takie białka są korzystnie stosunkowo nie immunogeniczne dla ssaków, którym preparat farmaceutyczny jest poddawany.
Określenie „obejmujący, w znaczeniu stosowanym w opisie a w szczególności w zastrzeżeniach, ma takie same znaczenie jak „włączony, „zawierający lub „znamienny tym. Preparat lub metoda, która „obejmuje elementy A, B i C może zawierać poza A, B i C także inne nie wymienione elementy, takie jak X i Y.
Określenie „około w znaczeniu stosowanym w opisie wynalazku, a w szczególności w zastrzeżeniach, jest tym samym co „w przybliżeniu lub „blisko. W kontekście wartości liczbowych, bez konstruowania ścisłej definicji liczbowej, termin ten może być stosowany dla podawania wartości różniących się o ± 10% od wartości deklarowanej.
Wszystkie inne określenia stosowane tutaj mają zwykłe znaczenia znane specjalistom lub takie, które są cytowane w standardowych słownikach medycznych lub naukowych.
II. Toksyna jadu kiełbasianego
Jak wspomniano uprzednio, toksyna jadu kiełbasianego jest polipeptydem wytwarzanym przez szczepy Clostridium botulinum. Szczepy te produkują co najmniej osiem znanych różniących się serologicznie toksyn (A, B, C1, C2, D, E, F i G). Każdy ze szczepów C. barati i C. butyricum produkuje pojedynczy serotyp, podobny odpowiednio do serotypów E i F (Simpson 1993). Generalnie, cząsteczka toksyny ma masę cząsteczkową około od 145 do 170 kilodaltonów (kD). W niektórych przypadkach, cząsteczka aktywnej toksyny składa się z dwóch połączonych mostkiem disiarczkowym łańcuchów utworzonych z macierzystego polipeptydu. Np., toksyna jadu kiełbasianego typu B jest produkowana z jednego prekursorowego polipeptydu o masie 150 kD, który po rozcięciu tworzy dwa połączone mostkiem disiarczkowym fragmenty - większy łańcuch (łańcuch H) o masie cząsteczkowej 100 kD oraz mniejszy łańcuch (łańcuch L) o masie 50 kD, co zapewnia maksymalną aktywność. Naturalnie występujące toksyny są związane nie kowalencyjnie z nietoksycznym białkiem nośnikowym także produkowanym przez C. botulinum. Te białka nośnikowe wiążą się z łańcuchami toksyny tworząc duże kompleksy o masie 900 kD (typ A), korzystnie o masie 700 kD (typ B). Powyższe białka nośnikowe są współizolowane z toksyną i optymalnie tworzą część opisywanych preparatów.
Różne serotypy toksyny jadu kiełbasianego wykazują różną specyficzność wiązania w komórkach. Np., toksyny typu A i typu E wydają się wiązać do tych samych synaptosomalnych miejsc wiązania, natomiast toksyna typu B wiąże się do innego miejsca wiążącego i nie współzawodniczy w wiązaniu się z miejscem typu A/E (Melling, 1988). Przyjmuje się, aczkolwiek bez wiązania się z partykularną teorią lub mechanizmem działania, że łańcuch H toksyny odpowiada za wiązanie z komórkami neuronowymi i zdolność penetrowania do komórek, natomiast łańcuch L hamuje uwalnianie acetylocholiny w złączach nerwowych. Ponadto, przyjmuje się, że toksyny jadu kiełbasianego typów A i B wykorzystują nieco inny mechanizm powodowania hamowania uwalniania acetylocholiny; typ A rozrywa Synapsę Associated Protein-25 (SNAP-25), zaś typ B rozrywa esicle Associated Membranę Protein (VAMP lub synaptobrewina). Oba te białka są składnikami uwalnianych ze złączy nerwowych pęcherzyków synaptycznych.
Wszystkie serotypy toksyn z C. botulinum dają wspólne fizjologiczne rezultaty u ssaków. Wszystkie one hamują lub blokują aktywność cholinergiczną w złączach nerwowych, co prowadzi do częściowego lub całkowitego paraliżu mięśni lub blokady albo hamowania funkcji narządu lub gruczołów, w zależności od miejsca podania. Zgodnie z tym, preparat według wynalazku może zawierać
PL 200 926 B1 serotypy toksyny jadu kiełbasianego produkowane przez C. botulinum charakteryzujące się opisanymi uprzednio aktywnościami biologicznymi. Sekwencje aminokwasowe większości znanych obecnie serotypów są znane lub mogą być ustalone znanymi metodami. Jest zrozumiałe, że w zgodnie z niniejszym wynalazkiem można sporządzać preparaty zawierające toksynę skonstruowaną metodą rekombinacji, która to toksyna ma konserwatywne podstawienia aminokwasów w stosunku do znanych sekwencji. Generalnie, takie podstawienia mogą być wykonywane standardowymi klasami naturalnych aminokwasów. Np., standardowymi klasami podstawienia może być sześć klas opartych na wspólnych właściwościach łańcucha bocznego i największej częstości podstawiania w homologicznych naturalnych białkach, jak to wynika ze znanych standardowych matryc częstości wymiany, takich jak Dayhoffa matryca częstości wymiany.
Do omawianych klas, zgodnie z matrycą Deyhoffa należą następujące: klasa I: Cys; klasa II: Ser, Thr, Pro, Hyp, Ala i Gly, reprezentujące małe alifatyczne łańcuchy boczne i grupę -OH; klasa III: Asn, Asp, Glu i Gln, reprezentujące obojętne i zawierające ujemny ładunek łańcuchy boczne zdolne do tworzenia wiązań wodorowych; klasa IV: His, Arg i Lys, reprezentujące polarne zasadowe łańcuchy boczne; klasa V: Ile, Val i Leu, reprezentujące alifatyczne łańcuchy boczne o rozgałęzionym łańcuchu, oraz Met; oraz klasa VI: Phe, Tyr i TRp, reprezentujące aromatyczne łańcuchy boczne. Ponadto, do każdej grupy spokrewnione analogi aminokwasów, takie jak ornityna, homoarginina, N-metylolizyna, dimetylolizyna lub trimetylolizyna w klasie IV, oraz chlorowcowana tyrozyna w grupie VI. Dalej, do poszczególnych klas należą oba stereoizomery L i D, chociaż L-aminokwasy są korzystne dla podstawienia. Przykładowo, podstawienie Asp w miejsce innej reszty z grupy III, takiej jak Asn, Glu lub Gln, jest podstawieniem konserwatywnym.
Chociaż aktywność toksyny jadu kiełbasianego można oznaczać znanymi metodami elektrofizjologicznymi, to generalnie pomiar aktywności wykonuje się wstrzykując toksynę małym zwierzątkom, takim jak myszy, i oznaczając wielkość dawki wymaganą dla zabicia przeciętnie 50% testowanych zwierząt. Taką dawkę określa się jako „dawkę śmiertelną 50 lub jako LD50, i definiuje jako jednostkę aktywności biologicznej. Dawki do podawania terapeutycznego są umownie określane w takich jednostkach. Jak to omówiono szczegółowo w Sekcji IIIB poniżej, różne serotypy mogą wykazywać różne moce terapeutyczne oznaczane w jednostkach LD50. Dawki terapeutyczne można ustalać z tych informacji, stosując znane metody.
III. Wytwarzanie toksyny jadu kiełbasianego
W tej sekcji opisano metody wytwarzania toksyny jadu kiełbasianego stosowanej w preparacie według wynalazku.
A. Izolowanie toksyny jadu kiełbasianego z C. botulinum
W tej sekcji przedstawiono ogólne metody wytwarzania oczyszczonej toksyny jadu kiełbasianego T. C. botulinum na przykładzie toksyny jadu kiełbasianego typu B. Poza metodami przedstawionymi w tym opisie znane są alternatywne metody wytwarzania toksyn jadu kiełbasianego typu A i B, jak również innych znanych serotypów.
Jak wspomniano uprzednio, aktywnym składnikiem preparatów według wynalazku jest białkowy komponent ekstraktów z hodowli C. botulinum znany jako toksyna jadu kiełbasianego. Aktywny składnik toksyny ma masę cząsteczkową około 145-170 kD i jest zwykle obecny w natywnym kompleksie białkowym mającym o wiele wyższą masę cząsteczkową. W tej sekcji przedstawiono przykładowe metody izolowania różnych toksyn jadu kiełbasianego, skupiając się na serotypach A i B toksyny jadu kiełbasianego. Jest zrozumiałe, że literatura naukowa daje ogólne wskazówki dla alternatywnych metod izolowania i oczyszczania toksyn, na podstawie których specjaliści będą zdolni do wyboru takich metod i zastosowania ich do oczyszczania konkretnej toksyny pożądanej do stosowania w preparatach wytwarzanych według wynalazku.
Generalnie, toksyna jadu kiełbasianego typu B jest izolowana w postaci kompleksu z fermentacji C. botulinum o wysokim mianie, przy użyciu bardzo dobrze znanych metod. Szczepy muzealne mogą być otrzymywane w Stanach Zjednoczonych przez instytucje posiadające licencję Center for Disease Control (CDC), a w innych krajach zgodnie z narodowymi regulacjami dotyczącymi dystrybucji tego organizmu. Do wykorzystania w procesie oczyszczania toksyny jadu kiełbasianego typu B szczepy C. botulinum Okra lub Bean B są odpowiednimi materiałami wyjściowymi. Zamrożone szczepy bakterii są wykorzystywane do zaszczepiania w probówkach zawierających pożywkę hodowlaną, taką jak pożywka tioglikolanowa lub pożywka tryptykazo-peptonowa a hodowlę i przerób prowadzi się zgodnie ze sposobem opisanym poniżej a szczegółowo w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki 5.096.077, włączonym tutaj jako odnośnik.
PL 200 926 B1
Ujmując rzecz skrótowo, szczepy hoduje się znanymi sposobami w celu uzyskania dostatecznej ilości wyjściowego materiału bakteryjnego dla wyprodukowania pożądanej ilości toksyny. Generalnie, potrzeba około 20 litrów hodowli bakteryjnej do otrzymania 0,5 g toksyny. Temperaturę brzeczki doprowadza się do pokojowej i następnie pH koryguje do 3,5 za pomocą kwasu siarkowego lub innego odpowiedniego kwasu. Wytrącony osad pozostawia się do osadzenia i dekantuje klarowny supernatant. Do osadu dodaje się podczas mieszania chlorek wapniowy a następnie wodę destylowana do stężenia CaCl2 wynoszącego około 150 mM, po czym pH podnosi się do poziomu bliskiego odczynowi obojętnemu (pH 6,5) i roztwór toksyny klaruje się za pomocą odwirowania. Toksynę wytrąca się ponownie doprowadzając pH do 3,7. Po osadzeniu toksyczny precypitat odwirowuje się, znów rozpuszcza w buforze o pH 5,5 i wyczerpująco dializuje w ciągu nocy wobec tego samego buforu. Dializowaną toksynę odwirowuje się i otrzymany supernatant chromatografuje się na kolumnie z wymieniaczem anionowym (DEAE). Zbiera się frakcję nie związaną i testuje na obecność toksyny. Z tej frakcji strąca się kompleksy toksyny dodając siarczan amonu do około 60% wysycenia. Pastylkę rozpuszcza się buforze fosforanowym i dializuje wobec tego samego buforu (pH 7,9). Tę oczyszczoną toksynę można stosować do sporządzania preparatu.
Metody wytwarzania toksyny jadu kiełbasianego typu A są również dobrze znane. Np., Hambleton i wsp. (1981) i Melling i wsp. (1988), których prace są tutaj włączone jako odnośniki, opisują produkowanie i oczyszczanie toksyny jadu kiełbasianego typu A w hodowli Clostridium botulinum typu A NCTC 2916. W hodowli stosuje się szczepy bakterii hodowane ze zweryfikowanego materiału posiewowego i szczepi do 30 litrowego fermentom pracującego w znanych standardowych warunkach hodowli beztlenowej. Zawartość toksyny monitoruje się w sposób ciągły (np. za pomocą oznaczania LD50) i po osiągnięciu maksymalnego poziomu ( około 2 x 106 LD50/ml dla myszy) hodowlę zakwasza się 3N kwasem siarkowym do pH 3,5 i toksynę oddziela drogą odwirowywania. Wytrąconą surową toksynę rozpuszcza się ponownie i ekstrahuje 0,2 M buforem fosforanowym (pH 6,0), traktuje rybonukleazą (100 μg/ml w temperaturze 34°C) i wytrąca stosując NH4SO4 (60% nasycenie, temperatura 25°C). Precypitat zawiesza się i poddaje chromatografii jonowymiennej na DEAE-Sephacelu przy pH 5,5. Frakcje monitoruje się na aktywność i aktywne frakcje ponownie wytrąca stosując NH4SO4 (60% nasycenie w temperaturze 25°C). Osad może być przechowywany i powtórnie rozpuszczany w celu wytworzenia preparatu według wynalazku, jak to opisano poniżej.
Preparaty według wynalazku zawierają kompleks wiążący toksynę, taki jaki jest otrzymywany metodami opisanymi powyżej dla toksyny jadu kiełbasianego typów A i B, albo wykorzystuje się równoważne postaci toksyny jadu kiełbasianego typów C1, C2, D, E, F lub G wytwarzane znanymi metodami. Miano toksyny jest oznaczane metodą kolejnych rozcieńczeń powtórnie rozpuszczonego kompleksu w dodatkowym białku, takim jak albumina z surowicy ludzkiej. Unika się tworzenia pęcherzyków i silnego mieszania, takiego jak mieszanie wirowe. Przyjęto umownie, że miano oznacza się stosując badanie na śmiertelność myszy, takie jak oznaczanie LD50, jak to opisano w przykładzie 2. Roztwór roboczy rozcieńcza się, dzieli na próbki i liofilizuje. Taki roztwór podstawowy testuje się w badaniach, w których oznacza się stężenie białka, LD50, czystość i przydatność farmaceutyczną, stosując dobrze znane metody, opisane przykładowo w przykładzie 2.
IV. Stabilne preparaty zawierające toksynę jadu kiełbasianego
Odkryto, że toksynę jadu kiełbasianego można otrzymywać i przechowywać w postaci stabilnych ciekłych preparatów, które utrzymują swoją moc w ciągu przedłużonego okresu czasu, np. w ciągu co najmniej 1-2 lat w temperaturze chłodni (to jest w temperaturze około 5±3°C, bardziej dokładnie około 4±2°C, a bardziej ogólnie 0-10°C) albo co najmniej w ciągu 6 miesięcy w temperaturze pokojowej (to znaczy w temperaturze około 25°C, bardziej ogólnie 10-30°C). Taki preparat może być dogodnie podawany przez lekarza ludziom lub innym gatunkom ssaków jako farmaceutyk bez rozpuszczania. Preparat charakteryzuje się pH około 5-6, korzystnie 5,5-5,6, utrzymywanym przez odpowiedni układ buforujący. Preparat może także zawierać jedno lub kilka dodatkowych białek.
W przykładzie 1 opisano szczegółowo sporządzanie preparatu zawierającego toksynę jadu kiełbasianego typu B o stężeniu 5.000 jednostek/ml. Jest zrozumiałe, że opisany sposób może być użyty do otrzymywania preparatów zawierających inne serotypy toksyny jadu kiełbasianego, takie jak typ A, w stężeniach wymaganych dla tych serotypów, dla otrzymywania stabilnych preparatów w odpowiednich dawkach i opakowaniach.
W skrócie, stężony preparat toksyny jadu kiełbasianego, taki jak preparaty oczyszczonej toksyny opisane powyżej dla typów A i B, miesza się z rozcieńczalnikiem, takim jak bufor bursztynianowy o pH 5-6, korzystnie około 5,6. W przypadku toksyny jadu kiełbasianego typu B pożądane jest stężenie
PL 200 926 B1 około 5.000 jednostek/ml, oznaczane na podstawie badania LD50 dla myszy, chociaż może być potrzebne lub pożądane stężenie w zakresie 100-20.000 lub nawet większe, w zależności od podawanej dawki. W przypadku toksyny jadu kiełbasianego typu A mogą być dogodne stężenia 20-2.000, korzystnie około 100-1.000 jednostek/ml. Preparat przeznaczony do produkcji farmaceutycznej dzieli się na porcje i testuje na możliwą obecność zanieczyszczeń mikrobiologicznych i następnie sączy przez filtr wyjaławiający do szklanych lub polipropylenowych fiolek przeznaczonych dla pacjentów. Produkt finalny może być przechowywany w postaci cieczy w ciągu co najmniej jednego roku, korzystnie dłużej niż dwa lata, w temperaturze 0-10°C, bez znaczącego spadku mocy biologicznej, jak to udowadnia < 20% spadek aktywności w teście na LD50 na myszach (przykład 2).
Rozcieńczalnikiem może być dowolna dopuszczalna farmaceutycznie ciecz, która nie oddziałuje szkodliwie na stabilność kompleksu i która podtrzymuje trwale pH w zakresie około 5 do 6. Przykładami szczególnie odpowiednich buforów są bufory bursztynianowy i fosforanowy, chociaż specjaliści wiedzą, że preparaty według wynalazku nie są ograniczone szczególnym buforem, o ile wybrany zapewnia dopuszczalny stopień stabilności pH lub pojemność buforującą, we wskazanym zakresie. Generalnie, bufor wykazuje odpowiednią pojemność buforującą w zakresie 1 jednostki pH. (Lachman i wsp., 1986). W niniejszym wynalazku dotyczy to buforów o pK w zakresie okoł o 4,5 - 6,5. Przydatność buforu można oceniać na podstawie opublikowanych tablic wartości pK lub oznaczać doświadczalnie znanymi metodami. Poza wspomnianymi powyżej buforami bursztynianowym i fosforanowym, do innych użytecznych farmaceutycznie buforów należą takie jak octanowy, cytrynianowy, akonitynianowy, jabłkowy i węglanowy (Lachman). Wartość pH roztworu można korygować do pożądanego punktu końcowego za pomocą dowolnego dopuszczalnego farmaceutycznie kwasu, np. solnego lub siarkowego, albo zasady, np. wodorotlenku sodowego.
Białkiem dodatkowym dodawanym do preparatu może być jedno z wielu dopuszczalnych farmaceutycznie białek lub peptydów. Korzystnie, wybierane jest takie dodatkowe białko, które może być podawane ssakom bez wywoływania reakcji immunologicznej. Np., albumina z surowicy ludzkiej nadaje się dobrze do stosowania w preparatach podawanych ludziom, natomiast albumina z surowicy wołowej może być wybierana do stosowania u bydła. Do omawianych celów może być stosowane Inne znane dodatkowe białko, np. żelatyna. Dodatkowe białko jest włączane w skład preparatu w stężeniu wystarczającym do zapobiegania adsorpcji kompleksu białkowej toksyny do ścianek pojemnika lub fiolki. Stężenie tego białka może być różne w zależności od jego charakteru i stężenia kompleksu toksyny w preparacie. Przykładowo, w badaniach związanych z niniejszym wynalazkiem stwierdzono, że stężenie 0,5 mg/ml albuminy z surowicy ludzkiej jest wystarczające dla preparatu zawierającego 5.000 jednostek/ml toksyny jadu kiełbasianego typu B. i nie wywołuje znaczących reakcji immunologicznych lub alergicznych u większości ludzi. Generalnie, stężenia wynoszące około 0,05 do 1 mg/1.000 jednostek toksyny jadu kiełbasianego B powinny dawać wystarczają c ą ochronę .
Stężenie dodatkowego białka odpowiednie dla stabilizacji toksyny jadu kiełbasianego typu A jest także opisane. Np., „BOTOX® jest stabilizowany dodatkiem 0,5 mg albuminy na 100 jednostek toksyny (PDR).
V. Zastosowanie
A. Zastosowanie terapeutyczne i kosmetyczne preparatów zawierających toksynę jadu kiełbasianego
Preparaty farmaceutyczne według wynalazku mogą być stosowane w wielu wskazaniach, w których jest pożądane hamowanie lub blokowanie neurotransmisji cholinergicznej, w szczególności, ale nie tylko, transmisji cholinergicznej związanej z kontrolą mięśni gładkich lub szkieletowych. W tej sekcji podane są przykłady zaburzeń, w których preparaty według wynalazku mogą być stosowane do celów terapeutycznych, jednak przykłady te nie ograniczają zakresu wynalazku. Reprezentatywne wielkości dawek i drogi podawania w niektórych z tych wskazań są opisane poniżej w części B.
Stwierdzono, że toksyna jadu kiełbasianego, w szczególności toksyna typu A, skutecznie leczy spastyczne zaburzenia mięśni. Jednorazowy schemat leczenia (który może się składać z wielokrotnego podawania domięśniowego) przynosi ulgę w niekontrolowanych kurczach mięśnia nawet w przeciągu kilku miesięcy. Np., „BOTOX® (toksyna jadu kiełbasianego typu B) została zaaprobowana przez U.S. Food and Drug Administrations do miejscowych iniekcji do oczodołu w leczeniu kurczu powiek. Do innych wskazań należą inne ogniska dystonii, takie jak dystonia krtaniowa, zespół Meige'a (dystonia ustno-żuchwowa, dyskineza ustno-twarzowa), dystonia szyjna (Hardman i wsp., 1996), dystonia kończyn, skurcz zwieracza odbytu oraz ataksja moczowego wypychacza-zwieracza, kurcz powiek, zez, kurcz połowy twarzy, a także wyciek z nosa, zapalenie ucha środowego, nadmierne
PL 200 926 B1 wydzielanie śliny, spastyczne zapalenie okrężnicy, nadmierne wydzielanie kwasu żołądkowego (patrz np. przykład w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 5.766.005), ból głowy związany z migreną, zaburzenia naczyniowe, nerwoból lub neuropatia (opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 5.714.468; opis patentowy WO 953041, ból artretyczny (opis WO 9517904), zaburzenia przewodu żołądkowo-jelitowego, rozluźnienie mięśni kroczowych podczas porodu (opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 5.562.899) lub usuwanie ścisku szczęk (opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 5.298.019).Toksynę jadu kiełbasianego typu A wstrzykuje się także miejscowo dla uzyskania kosmetycznego zmniejszenia napięcia mięśniowego tworzącego linie zmarszczkowe na twarzy co skutkuje „wygładzeniem czoła (Frankel, 1998). Stwierdzono także, że toksyna ta jest użyteczna przy wstrzykiwaniu śródskórnym do traktowania miejsc nadmiernego pocenia się (opis WO 9528171, opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 5.766.605), młodzieńczego skrzywienia kręgosłupa (opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 5.053.005), porażenia mózgowego u dorosłych lub młodzieży (opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 5.298.019, opis WO 9305800), skurczu i bezwiednych skurczów wywoływanych porażeniem mózgowym, stwardnienia rozsianego lub choroby Parkinsona (opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 5.183.462). Wszystkie cytowane tutaj odnośniki są tutaj włączone w całości.
W doświadczeniach prowadzonych w związku z wynalazkiem, stabilne ciekłe preparaty zawierające toksynę jadu kiełbasianego typu B testowano i stwierdzono ich skuteczność w leczeniu dystonii szyjnej, znanej także jako kręcz szyi, stanu w którym osobnicy doświadczają mimowolnych skurczów mięśni głowy, karku i kręgosłupa co prowadzi z kolei do ruchów polegających na obracaniu lub pochylaniu głowy. Towarzyszą temu często drżenie i bóle mięśniowo-szkieletowe. Na ogół, etiologia zaburzenia nie jest znana ale przyjmuje się, że jest wynikiem dysfunkcji ośrodkowego układu nerwowego prowadzącej do nadczynności umięśnienia. Stosowane obecnie reżimy leczenia polegające na podawaniu leków o działaniu antycholinergicznym, dopaminergicznym, rozluźniającym mięśnie, antyspazmatycznym i przeciw-drgawkowym, nie dają przedłużonej ulgi. Toksyna jadu kiełbasianego typu B jest skuteczna w leczeniu powyższych zaburzeń drogą powodowania lokalnego porażenia albo parezy, które w typowo rozpoczynają się po około 1 tygodniu i trwają około 1-4 miesięcy.
Preparaty zawierające inne serotypy jadu kiełbasianego są użyteczne w początkowym traktowaniu zaburzeń uprzednio opisanych w odniesieniu do typu A. Ponadto, jak wspomniano uprzednio, toksyny jadu kiełbasianego typów B-G są także użyteczne w leczeniu pacjentów z nabytą odpornością na toksynę jadu kiełbasianego typu A ze względu występowanie reakcji immunologicznej na toksynę. Odwrotnie, serotyp A może być podawany pacjentom, którzy stali się oporni na serotyp B lub inne serotypy toksyny. Preparaty zawierające jeden lub kilka serotypów jadu kiełbasianego można wytwarzać i stosować zgodnie z opisanym wynalazkiem.
Ogólnie uznaje się, że ze względu na podobne działanie biologiczne różne typy toksyn jadu kiełbasianego mogą być stosowane w leczeniu rozmaitych zaburzeń, szczególnie związanych ze spastycznością mięśni. Jednak, jak to opisano dalej w odniesieniu do typów A i B, efektywne dawki (wyrażone w wartościach LD50 lub jednostkach biologicznych) mogą się dla różnych serotypów znacznie różnić. Ustalenie równoważnych dawek może być oparte na znanych wielkościach dawek dla testowanych toksyn.
B. Dawkowanie i sposoby podawania
Toksyna jadu kiełbasianego jest znana jako silna i czasami śmiertelna trucizna dla zwierząt. Nie mniej jednak, przy zachowaniu należytej ostrożności w dostosowaniu sposobu podawania i dawkowania lek może być stosowany bezpiecznie przez ludzi.
Dawkowanie dla różnych postaci toksyny jadu kiełbasianego jest różne w zależności od stosowanego serotypu toksyny. Np., w doświadczeniach prowadzonych w związku wynalazkiem stwierdzono na podstawie porównania LD50 na myszach, że toksyna jadu kiełbasianego typu A („BOTOX®) wykazuje około 4-6 razy silniejsze działanie niż toksyna typu B w wywoływaniu porażenia u małp, co oceniano za pomocą elektrofizjologicznych pomiarów wybranych mięśni szkieletowych. Powyższa obserwacja jest zgodna z wynikami doświadczeń na szczurach, które wykazały duże różnice w ilościach tych dwóch toksyn wymaganych dla wywoływania paraliżu kończyn szczurów (Sellin, Jackson). Na podstawie tych obserwacji odpowiednie równoważne dawkowania mogą być ustalane lub wyznaczane doświadczalnie przez doświadczonego praktyka.
Zalecane dawkowanie może również ulegać zmianie w zależności od historii choroby pacjenta. Zgodnie z doniesieniami, pacjenci, którzy otrzymywali powtarzające się dawki np. toksyny jadu kiełbasianego typu A stali się „opornymi na dalsze leczenie, wymagając większych dawek dla uzyskania
PL 200 926 B1 równoważnego efektu w tym samym czasie. Nie związując się z żadnym szczególnym mechanizmem działania, przyjmuje się, że to zjawisko jest związane z rozwojem u pacjenta reakcji immunologicznej specyficznej względem danego serotypu. Donosi się o przypadkach występowania przeciwciał u około 3 do 57% pacjentów poddawanych powtarzającej terapii toksyną jadu kiełbasianego typu A. W związku z powyższym, zaleca się, w przypadku gdy lekarz zamierza zmienić serotyp podczas przebiegu kuracji, aby początkowa dawka nowego serotypu była obliczana raczej jak dla początkującego pacjenta niż na podstawie historii jego dawkowania.
Do odpowiednich metod podawania należą takie, które pozwalają na dostarczenie aktywnego składnika toksyny do pożądanej tkanki, bez powodowania poważnych działań ubocznych u pacjenta. Do takich metod należą, ale nie tylko, takie jak podawania domięśniowe, podawanie miejscowe, podawanie podskórne, podawanie okołonerwowe, jontoforeza, i podobne. Do znanych specyficznych procedur stosowanych do podawania toksyny jadu kiełbasianego należą takie, które ograniczają rozprzestrzenianie ogólnoustrojowe składników aktywnych. Do identyfikacji i bardziej precyzyjnej lokalizacji specyficznych grup mięśni, w szczególności traktowania mięśni trudnych do identyfikacji, takich jak mięśnie oczodołu, krtani i obszaru skrzydłowatego oraz mięśni u otyłych pacjentów, można stosować elektromiografię.
W leczeniu dystonii zwykle podaje się toksynę w pobliżu stref unerwienia dotkniętego zaburzeniem mięśnia, zazwyczaj drogą iniekcji domięśniowej za pomocą strzykawki podskórnej. Typowo, wywołane porażenie miejscowe może przynieść pacjentowi ulgę na 3 do 4 miesięcy. Pacjenci mogą być testowani rozpoczynając od niższych dawek aż do ustalenie optymalnej. Ma to na celu uzyskanie wystarczającej blokady nerwowo-mięśniowej dla korygowania jakiejkolwiek dysfunkcji bez powodowania wyraźnego porażenia. Zmiany wielkości dawek mogą być wskazane w przypadku gdy pacjent staje się oporny na toksynę. Zaletą sposobu według wynalazku jest to, że pozwala unikać powszechnego problemu dawkowania związanego z nietrwałością toksyny w roztworze, co może prowadzić do dalszych wątpliwości co do odpowiedniego dawkowania.
Zalecane dawki toksyny jadu kiełbasianego typu A są znane i zostały ustalone dla wielu wskazań. Np., do traktowania zeza zalecana jest dawka 1,25-2,5 jednostek toksyny jadu kiełbasianego typu A do podawania do mięśni pionowych i do zeza poziomego mniejszego niż 20 dioptrii, natomiast w przypadku zeza poziomego większego od 20 dioptrii pryzmatycznych zalecana jest dawka 2,5-5 jednostek (Physician's Desk Reference, 51st Editiori).
Toksyna jadu kiełbasianego typu A jest także stosowana do leczenia kurczu powiek w dawce wynoszącej 1,25-2,5 jednostek, wstrzykiwanej igłą kalibru 27-30 do środkowego i bocznego przedtarczkowego pierścienia oka pod górną powieką i w tych samych miejscach dolnej powieki. Podawanie może trwać około 3 miesięcy, przy czym w kolejnych sesjach podawania dawka może być zwiększana do dwukrotnej, w zależności od reakcji pacjenta. Zalecane jest aby skumulowana dawka nie przekraczająca 200 jednostek toksyny jadu kiełbasianego typu A była podawana w ciągu 30 dni (Physician's Desk Reference, 51st Editiori).
W przykładzie 3 przedstawiono przykładowe badania zakresu dawkowania toksyny jadu kiełbasianego typu B w leczeniu dystonii szyjnej (kręczu szyi) przy zastosowaniu preparatu według wynalazku. W tych badaniach, przedstawionych także poniżej, ciekły preparat według wynalazku zawierający toksynę jadu kiełbasianego był dostarczany klinicystom razem z instrukcją przechowywania w lodówce szpitalnej w kontrolowanej temperaturze pomiędzy 2 i 8°C. Generalnie, preparat był dostarczany z serii wytwarzanych i przechowywanych w zalecanej temperaturze w ciągu 6-12 miesięcy. Klinicyści otrzymywali około sześciomiesięczny zapas preparatu.
Pacjentom podawano iniekcyjnie różne dawki toksyny w 2-4 grupy powierzchniowych mięśni karku i/lub barku, wybranych drogą klinicznego badania mięśni zaangażowanych w zaburzenie. W jednym badaniu podawana indywidualna dawka wynosiła 100-1.200 jednostek dawka skumulowana 270-2.280 jednostek w ciągu do 398 dni. Podczas badania u wszystkich pacjentów stwierdzano poprawę a moc preparatu nie ulegała zmniejszeniu.
Dalsze badania prowadzone w związku z wynalazkiem wykazały, że pacjentom którzy nabyli oporność na toksynę jadu kiełbasianego typu A można podawać toksynę typu B. Tak więc, tacy pacjenci uczestniczący w badaniach i wykazujący obniżoną wrażliwość na toksynę jadu kiełbasianego typu A byli uważani za z powodzeniem leczeni, u których stwierdzano co najmniej 25% zmniejszoną punktację (to znaczy poprawę) według Toronto Western Spasmodic Torticollis Rating Scale (TWSTRS, Consky, 1994), w odniesieniu do punktacji podstawowej. Podawano indywidualne dawki toksyny jadu kiełbasianego typu B wynoszące 150-1.430 jednostek a skumulowane 300-12.000
PL 200 926 B1 jednostek, w ciągu do 117 dni, co szczegółowo opisano w przykładzie 3. Stan wszystkich pacjentów uczestniczących w tych badaniach ulegał poprawie, w szczególności przy podawaniu wyższych dawek, i nie znaleziono oznak pojawiania się przeciwciał blokujących toksynę jadu kiełbasianego typu B. Nie stwierdzono również oznak zmniejszenia mocy preparatu. W dalszych badaniach podawano okresowo indywidualne dawki preparatu zawierające 0,400, 1.200 i 2.400 jednostek toksyny jadu kiełbasianego typu B, w ciągu aż 203 dni i odniesiono sukces w leczeniu kręczu szyi, jak to opisano uprzednio.
Przedstawione poniżej przykłady ilustrują wynalazek nie ograniczając w żaden sposób jego zakresu.
PRZYKŁADY
Materiały
Jeśli nie podano inaczej, wszystkie wymieniane odczynniki można otrzymywać od wiarygodnych dostawców sprzedających odczynniki do stosowania w przemyśle chemicznym, biochemicznym, biotechnologicznym i farmaceutycznym.
P r z y k ł a d 1: Otrzymywanie stabilnych preparatów zawierających toksynę jadu kiełbasianego
A. Przygotowywanie buforu bursztynianowego
Bufor bursztynianowy przygotowywano w porcjach po 3 litry, stosując 2,7 mg/ml bursztynianu disodowego, 5,8 mg/ml chlorku sodowego oraz dodatkowo 0,5 mg/ml albuminy z surowicy ludzkiej (Michigan Biological Products Institute). Wartość pH buforu doprowadzano do 5,6 za pomocą stężonego kwasu solnego. Roztwór buforowy sączono przez filtr 0,2 μm do autoklawowanego, zamykanego pojemnika. Przed użyciem, próbki buforu badano na pH, obecność endotoksyn bakteryjnych i czystość biologiczną.
B. Przygotowywanie preparatów zawierających toksynę jadu kiełbasianego
Porcję stężonej toksyny jadu kiełbasianego typu B rozcieńczano około 1000-krotnie buforem bursztynianowym o pH 5,6, otrzymując roztwór o mocy 5.000 ± 1.000 j/ml. Rozcieńczony roztwór toksyny przechowywano w 2-litrowych zamykanych pojemnikach szklanych. Określano go jako „roztwór podstawowy i przechowywano w temperaturze 5 + 3°C do czasu przesłania do rozdozowania.
Przed rozlaniem roztworu podstawowego pobierano próbki i testowano na obecność zanieczyszczeń mikrobiologicznych stosując znane standardowe metody. Roztwór następnie przesyłano za pomocą pompy perystaltycznej przez rurkę odpowiadającą wymaganiom medycznym i sączono przez filtr wyjaławiający (0,2 μm) do sterylnego odbieralnika umieszczonego w pokoju do rozlewu. Otrzymany jałowy roztwór podstawowy dozowano do fiolek o pojemności 3,5 ml w porcjach po 0,5 ml (2.500 jednostek), 1 ml (5.000 jednostek) lub 2 ml (10.000 jednostek). Skład końcowego roztworu w pojemniku podano w tablicy 1.
T a b l i c a 1
Skład preparatu jadu kiełbasianego
| Składnik aktywny | Składnik nieaktywny | Stężenie |
| Toksyna jadu kiełbasianego typu B | - | 500011 000 LD50 j/ml |
| - | Bursztynian, USP | 10 mM |
| - | Chlorek sodowy, USP | 100 mM |
| - | Albumina ludzka, FDA | 0,5 mg/ml |
| - | Kwas solny, NF | Korekcja pH |
P r z y k ł a d 2: Test na stabilność preparatów zawierających toksynę jadu kiełbasianego
A. Wyniki badań stabilności
Wytworzoną toksynę jadu kiełbasianego typu B rozcieńczono jak to opisano uprzednio do stężenia 2.500 jednostek/ml i przetrzymywano w próbkach po 1 ml w 5 ml szklanych fiolkach w temperaturze 5°C w ciągu 30 miesięcy. W czasie zerowym i następnie po 1,3, 6, 9, 12, 18, 24 i 30 miesiącach próbki wybierano losowo i testowano na aktywność w badaniach LD50 u myszy. Roztwory także oceniano wizualnie i oznaczano pH za pomocą standardowych metod.
W tablicy 2 przedstawiono wyniki testów dla różnych punktów czasowych. Wyniki te wykazują, że preparaty wytwarzane sposobem według wynalazku są stabilne, gdyż ich moc mieści się w zakresie podanym dla czasu zerowego w ciągu co najmniej 30 miesięcy przetrzymywania w temperaturze 5°C.
PL 200 926 B1
T a b l i c a 2
Stabilność preparatu w temperaturze 5°C
| Czas przechowywania (miesięcy) | Moc (średnia, j/ml) | pH | Wygląd3 |
| 0 | 1750-3250 | 5,5 | Odpowiedni |
| 1 | 1941 | NDb | ND |
| 3 | 2541 | 5,6 | ND |
| 6 | 2020 | 5,6 | Odpowiedni |
| 9 | 2357 | 5,6 | Odpowiedni |
| 12 | 2064 | 5,6 | Odpowiedni |
| 18 | 2318 | 5,4 | Odpowiedni |
| 24 | 1799 | 5,6 | Odpowiedni |
| 30 | 2101 | 5,6 | Odpowiedni |
a Odpowiedni = bezbarwny do jasnożółtego roztwór, praktycznie nie zawierający widzialnych cząstek b Testu nie przeprowadzano
W tablicy 3 przedstawiono wyniki testowania próbek toksyny jadu kiełbasianego typu B, wytworzonych i pobieranych w sposób opisany uprzednio ale przetrzymywanych w temperaturze 25°C. Uzyskane wyniki wykazują, że preparat jest stabilny w ciągu co najmniej 6 miesięcy w temperaturze 25°C, gdyż jego średnia moc utrzymuje się na poziomie co najmniej 90%, korzystnie co najmniej 95%, po 6 miesiącach przetrzymywania, oraz na poziomie co najmniej około 70% mocy początkowej po przetrzymywaniu w ciągu 9 miesięcy w temperaturze 25°C.
T a b l i c a 3
Stabilność preparatu w temperaturze 25°C
| Czas przechowywania (miesięcy) | Moc (średnia, j/ml) | pH | Wygląd3 |
| 0 | 1941 | 5,5 | Odpowiedni |
| 1 | 2297 | 5,6 | NDb |
| 2 | 1935 | 5,6 | ND |
| 3 | 2017 | 5,6 | ND |
| 6 | 1909 | ND | Odpowiedni |
| 9 | 1579 | 5,6 | Odpowiedni |
a Odpowiedni = bezbarwny do jasnożółtego roztwór, praktycznie nie zawierający widzialnych cząstek b Testu nie przeprowadzano
B. Testy na stabilność
1. Oznaczanie pH preparatu zawierającego toksynę jadu kiełbasianego
Wartość pH preparatu zawierającego toksynę jadu kiełbasianego mierzono stosując Fisher Scientific Accumet pH Meter, Model 50, z automatyczną kompensacją temperatury. Stosowano elektrodę zespoloną Orion Ross Combination Electrode z elektrodą odniesienia KCl. Pomiary pH wykonywano po standardowym dwupunktowym ustawieniu (pH 4,0 i pH 7,0), zgodnie z instrukcją producenta. Dla każdej próbki wykonywano trzy pomiary. Wyniki pomiarów zapisywano z dokładnością do drugiego znaku i obliczano średnią.
2. Badanie mocy w teście LD50 na myszach
Zdrowe, nie wykorzystywane uprzednio myszy CFW lub CD-1 obu płci, o wadze 18 do 22 g, stosowano do oznaczania LD50. Dla każdej próbki myszy testowano 5 dawkami preparatu zawierającego toksynę jadu kiełbasianego typu B. Każde badanie powtarzano pięciokrotnie.
Z próbki testowej sporządzano dwa roztwory podstawowe. Roztwór podstawowy A otrzymywano rozcieńczając próbkę testową do mocy 750 jednostek/ml buforem fosforanowym z żelatyną o pH 6,2. Roztwór podstawowy B otrzymywano rozcieńczając roztwór A 10-krotnie do 75 jednostek/ml. Kolejne rozcieńczenia sporządzano z roztworu podstawowego B: 1:7,5, 1:10, 1:13,5, 1:18 i 1:23,3.
PL 200 926 B1
Myszom wstrzykiwano dootrzewnowo 0,2 ml odpowiedniego rozcieńczenia związku. Myszy przetrzymywano i obserwowano w ciągu czterech dni, zapisując zgony. Obserwacje kończono po czterech dniach.
Skumulowaną śmiertelność (CD) dla różnych poziomów rozcieńczenia obliczano sumując ilość zgonów od maksymalnego do minimalnego rozcieńczenia. Skumulowane przeżycie (CS) obliczano natomiast sumując ilość przeżywających zwierząt od minimalnego do maksymalnego rozcieńczenia. Procent CD obliczano dla każdego rozcieńczenia jako CD/(CD+CS) x 100%. Rozcieńczenie reprezentujące LD50 oznaczano stosując metodę proporcjonalnego dystansu Reeda i Muencha, wykorzystując rozcieńczenia dające wartości procentowe CD odpowiadające 50% skumulowanej śmiertelności.
Proporcjonalny dystans (PD) = (%CD > 50%)- 50% (% CD > 50%) - )% CD < 50%)
Otrzymaną wartość PD mnożono przez logarytm różnicy pomiędzy poziomami rozcieńczeń odpowiadającymi 50% CD. Te wartość dodawano do logarytmu rozcieńczenia odpowiadającego śmiertelności większej niż 50 dla otrzymania rozcieńczenia reprezentującego LD50 Obliczano następnie antylogarytm tego rozcieńczenia w celu otrzymania ilości jednostek LDso toksyny w podawanej iniekcyjnie objętości (0,2 ml). Liczbę tę mnożono przez 5 dla obliczenia ilości jednostek LD50 w mililitrze roztworu podstawowego B.
Ilość jednostek LD50 w mililitrze roztworu podstawowego mnożono przez współczynnik rozcieńczenia (to znaczy rozcieńczenie wymagane dla uzyskania ustalonej mocy 75 jednostek/ml) dla uzyskania wymaganej mocy próbki. Średnia arytmetyczna i standardowe odchylenie dla jednostek LD50/ml obliczano z 5 ważnych testów.
3. Wygląd preparatu
Wygląd oceniano wizualnie wobec czarnego i białego tła przy silnym oświetleniu, podczas łagodnego obracania. Oceniano barwę, klarowność i obecność widzialnych cząstek.
P r z y k ł a d 3: Traktowanie dystonii szyjnej (CD)
A. Rozcieńczanie, obliczanie, podawanie i dawkowanie leku
1. Obchodzenie się z lekiem
Fiolki napełniano dozując 2,0 ml (10.000 jednostek), 1,0 ml (5.000 jednostek) lub 0,5 ml (2.500 jednostek) nie rozcieńczonego leku do badań. Unikano gwałtownego mieszania lub tworzenia się pęcherzyków, gdyż toksyna jadu kiełbasianego w takich warunkach może ulegać denaturacji. Roztwór usuwano z fiolki za pomocą strzykawki tuberkulinowej dbając o pobieranie dokładnej objętości.
2. Obliczanie ilości leku
Toksynę jadu kiełbasianego typu B aplikowano pacjentom cierpiącym na dystonię szyjną (CD) podając im zawartość odpowiedniej fiolki (fiolek) dla uzyskania dawkowania wskazanego poniżej w tablicy. Jednostki dla zwiększania dawki obliczano w sposób podany poniżej, gdzie 1 jednostka jest ilością toksyny obecną w dawce reprezentującej LD50 oznaczone na myszach jak opisano w przykładzie 2.
Dla każdej serii dawkowania toksynę jadu kiełbasianego typu B podawano zgodnie ze standardowymi procedurami opisanymi w dalszej części. Iniekcje związku były wykonywane przez lekarza neurologa przeszkolonego uprzednio w stosowaniu terapeutycznym toksyny jadu kiełbasianego pacjentom z CD. Pacjentom zalecano maksymalnie możliwe rozluźnienie dla ułatwienia obserwacji postawy głowy i karku w stanie spoczynkowym. Oceny mięśni karku zaangażowanych w powstawanie CD dokonywano za pomocą ich obmacywania. Według uznania badającego, wykonywano badania EMG w celu bliższej lokalizacji najbardziej zaatakowanych mięśni. Do mięśni przeznaczonych do traktowania zgodnie z tym protokółem należą dźwigacz łopatki, mięsień pochyły środkowy, mięsień pochyły przedni, mięsień półkolcowy, mięsień płatowy, mięsień mostkowo-obojczykowo-sutkowy i mięsień czworoboczny. Lek wstrzykiwano w każdy z tych mięśni w 1-5 miejscach. Całkowita objętość iniekcji w każdym miejscu była mniejsza lub równa 1,0 ml dla zapobiegania miejscowego zniekształcenia tkanki, ale wynosiła co najmniej 0,1 ml dla ułatwienia dokładnego odmierzania objętości za pomocą standardowej 1,0 ml strzykawki. Początkowo, pacjenci otrzymywali całkowitą dawkę 5.000 jednostek a podczas następnych wizyt do około 15.000 jednostek.
B. Badania kliniczne dystonii szyjnej (CD)
1. Badanie 1
Ośmiu pacjentów (3 mężczyzn, 5 kobiet) o średnim wieku 43,9 lat i indywidualnych klinicznych diagnozach idiopatycznej CD wzięło udział w badaniu, w którym preparat zawierający toksynę jadu
PL 200 926 B1 kiełbasianego typu B wstrzykiwano do 2-4 grup mięśni powierzchniowych karku i/lub barku. Pacjenci podlegali traktowaniu co każde 4 tygodnie, o ile nie wystąpiły poważne szkodliwe działania uboczne lub trwała kliniczna poprawa. Pacjenci uczestniczyli w 1-5 sesjach podawania leku. W czasie indywidualnych sesji podawano od 100 do 1.200 jednostek, a dawki skumulowane wynosiły od 270 do 2.280 jednostek toksyny jadu kiełbasianego typu B w postaci preparatu tutaj opisanego. Skuteczność oceniano stosując punktację kręczu szyi według Tsui (Tsui Torticollis Scalę (J.K.C Tsui (1986), Lancet 2:245-247)). Pacjenci uczestniczyli w badaniach w ciągu 127 do 398 dni, średnia ilość dni wynosiła 244,8. Punktacje kręczu szyi były podobne w punktacji podstawowej i wszyscy pacjenci wykazywali umiarkowaną poprawę z pewnymi wskazaniami na zależność od wielkości dawki, gdy porównywano całkowite dawkowania. Stan wszystkich pacjentów uczestniczących w tych badaniach ulegał poprawie, nie znaleziono oznak pojawiania się przeciwciał blokujących.
2. Badanie 2
Pacjenci zaangażowani w to badanie mieli klinicznie zdiagnozowany idiopatyczny kręcz szyi (CD) i wykazywali oporność na toksynę jadu kiełbasianego typu A. Pacjenci otrzymywali domięśniowo toksynę jadu kiełbasianego typu B w postaci preparatu według wynalazku do 2-4 powierzchniowych mięśni karku i barku.
Dwunastu pacjentów (średni wiek 52,3 lata) rozpoczęło i zakończyło omawiane badania. Pacjenci uczestniczyli w badaniach w ciągu 37 do 127 dni, średnio 65 dni. Podawano im 1-3 dawek badanego leku. Dawki skumulowane wynosiły 940-2.100 jednostek a dawki indywidualne 150-1.430 jednostek toksyny jadu kiełbasianego typu B. Średni odstęp czasowy pomiędzy sesjami dawkowania wynosił 22,3 dni dla pacjentów przyjmujących mniejsze dawki (całkowicie100-899 jednostek) oraz 48,4 dni dla przyjmujących większe dawki (900-1.500 jednostek).
Poprawę kliniczną definiowano jako co najmniej 25% zmniejszenie punktacji w skali ciężkości przypadku Western Spasmodic Torticollis Rating Scale (TWSTRS, E.S. Consky i A. E. Lang (1994) w Therapy with Botulinum Toxin), Wydawcy J. Jankovic i M. Hallet, Marcel Dekker, Inc., New York), w porównaniu z punktacją podstawową (zmniejszenie punktacji oznacza poprawę). Średnia punktacja podstawowa była podobna dla wszystkich pacjentów, 56% pacjentów w grupie otrzymującej większe dawki wykazywało zmniejszenie punktacji TWSTRS wobec 7% w grupie otrzymującej mniejsze dawki. Obserwowano również niewielką poprawę w punktacji bólu TWSTRS u obu grup, w szczególności we wczesnych fazach badania. Nie notowano powstawania u pacjentów blokujących przeciwciał wobec toksyny jadu kiełbasianego typu B.
3. Badanie 3
Dwudziestu ośmiu pacjentów (średni wiek 50,9 lat) z potwierdzoną diagnozą dystonii szyjnej otrzymywało iniekcyjnie preparat zawierający toksynę jadu kiełbasianego typu B do 2-4 powierzchniowych mięśni karku i ramienia. Dawka była zwiększana do 1,5-krotnie w kolejnych sesjach. Skuteczność kliniczną oceniano stosując opisany uprzednio test ciężkości przypadku TWSTR-Sewerity, przyjmując 25% zmniejszenie punktacji za poprawę.
Pacjenci uczestniczyli w badaniu w ciągu 28-177 dni, średnio 71,9 dni. Podawano im 1 do 3 dawek preparatu. Skumulowana dawka wynosiła od 1.430 do 12.000 jednostek, indywidualna od 300 do 12.000 jednostek. Dla celów oceny klinicznej utworzono 4 grupy: 100-800 jednostek (grupa A), 900-2.399 jednostek (grupa B), 2.400-5.999 jednostek (grupa C) oraz 6.000-12.000 jednostek (grupa D). Odstęp czasu pomiędzy kolejnymi sesjami podawania wynosił odpowiednio: grupa A -13-101 dni, średnio 35,7 dni; grupa B - 14-113 dni, średnio 48,8 dni; grupa C - 29-177 dni, średnio 62,2 dni; grupa D - 28-177 dni, średnio 55,1 dni.
Średnie punktacje wyjściowe były podobne u wszystkich pacjentów ze wszystkich traktowanych grup. Obserwowano podczas badań we wszystkich czterech grupach średnie zmniejszenie się punktacji (poprawę). Całkowity średni procent poprawy w stosunku do punktacji wyjściowej i średni stopień reakcji w skali ciężkości był największy w grupach C i D. Wyniki średniej maksymalnej poprawy, średniego maksymalnego procentu poprawy i średni maksymalny stopień reakcji były wyższe dla dwóch grup otrzymujących większe dawki niż dla dwóch grup, które otrzymywały mniejsze dawki (8,1 i 6,8 wobec 2,1 i 3,6 dla maksymalnej poprawy; 43,9% i 35,5% wobec 10% i 16,1% dla średniej maksymalnej poprawy; oraz 0,32 i 0,23 wobec 0,05 i 0,09 dla średniego maksymalnego stopnia reakcji). Procent pacjentów reagujących na lek był większy dla dwóch grup otrzymujących wyższą dawkę (C, 80% i D, 78%) niż dla dwóch grup otrzymujących niższą dawkę (A, 0% i B 27%). Średni czas trwania reakcji był dłuższy dla dwóch grup, które otrzymały wyższą dawkę (C, 47,6 dni i D, 38,1 dni) niż dla dwóch grup
PL 200 926 B1 przyjmujących niższą dawkę (A, 0 dni i B, 31 dni). Powyższe dane wykazują zależną od dawki reakcję preparatów według wynalazku zawierających toksynę jadu kiełbasianego typu B.
4. Badanie 4
Trzy dawki preparatu zawierającego toksynę jadu kiełbasianego typu B testowano w porównaniu do placebo na 85 pacjentach cierpiących na CD, w wieloośrodkowych badaniach na wybieranych losowo pacjentach, prowadzonych z użyciem podwójnej ślepej próby i kontrolowanych przez placebo. W badaniach podawano równolegle pojedynczą dawkę według 4 standardów terapii. Wiek pacjentów wynosił od 18 do 80 lat. Dawki 400, 1200 lub 2400 toksyny jadu kiełbasianego typu B wstrzykiwano do 2-4 powierzchniowych grup mięśni karku i/lub barku. Stosując skalę punktową TWSTRS, pacjentów oceniano, w czasie zerowym oraz następnie po 2 i 4 tygodniach podawania. Pacjentów, u których nie obserwowano poprawy o 3 lub więcej punktów (> 20%) w skali ciężkości przypadku TWSTRS po upływie 4 tygodni wycofywano z badań jako nie reagujących. Reagujących oceniano po kolejnych 4 tygodniach do czasu gdy ich reakcja zmniejszała się o więcej niż 50%.
Wszystkie punktacje TWSTRS wykazywały poprawę wraz ze zwiększaniem dawki toksyny jadu kiełbasianego typu B. Po 4 tygodniach obserwowano znaczącą poprawę w grupie otrzymującej 2.400 jednostek w porównaniu z grupą otrzymującą placebo, zarówno w ocenie bólu TWSTRS jak i w całkowitej punktacji według TWSTRS. Procent pacjentów wykazujących poprawę był wyższy w grupie otrzymującej 2.400 jednostek. Średnia całkowita ocena była znacznie wyższa u pacjentów z grupy otrzymującej 2.400 jednostek, po 2, 4 i 8 tygodniach, w porównaniu ze wszystkimi innymi grupami. W analizie wariancji danych po 4 tygodniach obserwowano znaczącą statystycznie różnicę (p=0,0286) pomiędzy poszczególnymi grupami. Obserwowano również znaczącą różnicę pomiędzy grupą otrzymującą placebo i grupą otrzymującą 2.400 jednostek (p=0,0050), a także w analizie zależności reakcji od dawki (p=0,0028). W analizie wariancji danych po 4 tygodniach stwierdzono statystycznie znaczącą różnicę (p=0,0073) pomiędzy traktowanymi grupami, a także znaczące różnice pomiędzy grupą otrzymującą placebo i grupą otrzymującą 2.400 jednostek (p=0,0015) oraz w analizie zależności reakcji od dawki (p=0,0008).
Pacjenci uczestniczyli w tych badaniach od 25 do 203 dni, najdłużej średnio (61 dni) grupa otrzymująca dawkę 2.400 jednostek.
5. Badanie 5
Te badania były również wieloośrodkowymi badaniami na wybieranych losowo dochodzących pacjentach, prowadzonymi z użyciem podwójnej ślepej próby i kontrolowanymi przez placebo. W badaniach podawano równolegle pojedynczą dawkę według 4 standardów terapii, sprawdzając efekty jednorazowego podania placebo (grupa A) lub jednej z trzech dawek (2.500 jednostek; grupa B; 5.000 jednostek, grupa C; 10.000 jednostek, grupa D) toksyny jadu kiełbasianego typu B, którą podawano iniekcyjnie do 2-4 grup mięśni powierzchniowych karku i/lub barku pacjentom z potwierdzoną dystonią szyjną. Pacjentów badano podczas wizyt po 2 i 4 tygodniach po podaniu i ci, u których stwierdzono większą niż 20% poprawę, według całkowitej punktacji TWSTRS w porównaniu z punktacją wyjściową, oceniani byli jako „reagujący. Pacjenci ci byli badani co cztery tygodnie w ciągu maksimum 4 miesięcy lub do czasu, gdy ich reakcja zmniejszyła się o więcej niż 50%.
W badaniach uczestniczyło 122 pacjentów w wieku od 19 do 81 lat. Czas, w jakim pacjenci brali udział w badaniach odpowiadał czasowi w jakim reagowali oni na badany lek. Traktowane grupy były podobne dla przypadków minimalnej i maksymalnej ilości dni uczestniczenia w badaniach. Średni czas uczestniczenia w badaniu zwiększał się wraz ze zwiększaniem dawki, od 45 dni dla grupy A (placebo), do 61 dni dla grupy B, 67 dni dla grupy C i 75 dni dla grupy D.
We wszystkich punktacjach TWSTRS obserwowano dla wszystkich traktowanych grup poprawę po 4 tygodniach w stosunku do punktacji wyjściowej. Wszystkie punktacje TWSTRS miały tendencję do poprawiania się wraz ze zwiększeniem dawki preparatu. W analizie kowariancji dla całkowitej punktacji TWSTRS po 4 tygodniach, całkowita różnica pomiędzy badanymi grupami była statystycznie znacząca (p=0,0001). Ponadto, analiza zależności reakcji od dawki wykazywała także znaczącą różnicę (p=0,0001) oraz wszystkie 3 porównania dla grupy otrzymującej placebo z grupami otrzymującymi lek wykazały znaczące różnice (p=0,0016 dla placebo wobec 2.500 jednostek; p=0,0005 dla placebo wobec 5.000 jednostek; oraz p=0,0001 dla placebo wobec 10.000 jednostek). Procent pacjentów reagujących na podawanie po 4 tygodniach był wyższy w grupie D (10.000 jednostek) niż w każdej innej grupie, zgodnie z punktacjami TWSTRS (całkowitą, dotycząca utraty czynności i dotyczącą bólu). Stwierdzano znaczącą zależność reakcji od dawki dla każdej z czterech punktacji TWSTRA (całkowita, p<0,001; ciężkość przypadku, p=0,035; utrata czynności, p=0,002; ból, p=0,001). Ocena ulgi
PL 200 926 B1 w bólu dla wszystkich traktowanych grup była po 4 tygodniach następująca: 67,5, 70,2 i 75,1 odpowiednio dla grup B, C i D. Całkowite różnice pomiędzy traktowanymi grupami były statystycznie znaczące (p=0,0049), analiza zależności reakcji od dawki wykazała statystycznie znaczącą zależność (p=0,0017), porównanie grupy otrzymującej placebo ze wszystkimi trzema grupami otrzymującymi lek wykazało statystycznie znaczące różnice (p=0,0149, 0,0084 i 0,0007, odpowiednio dla grup B, C i D).
P r z y k ł a d 4: Reakcja fizjologiczna na preparat zawierający toksynę jadu kiełbasianego typu B u ludzi
Osiemnastu zdrowych pacjentów testowano na zmiany amplitudy fali M dla krótkiego mięśnia prostującego kciuka (EDB) w odpowiedzi na podanie toksyny jadu kiełbasianego typu B, stosując do tego celu standardowe metody elektrofizjologiczne. Wiek badanych pacjentów wynosił od 18 do 22 lat. Badania elektrofizjologiczne prowadzono po 2, 4, 6, 9, 11, 13 i 14 dniach po podaniu domięśniowym dawek od 1,25 do 480 jednostek toksyny jadu kiełbasianego typu B. Wyniki analizy danych wykazały zależne od wielkości dawki zmniejszenie amplitudy fali M dla EDB i obszary ze zwiększoną dawką. Maksymalny efekt przy podaniu 480 jednostek wyrażał się 75% zmniejszeniem amplitudy fali M w stosunku do poziomu wyjściowego.
W oddzielnych badaniach, 10 pacjentom wybranym losowo wstrzykiwano w jeden mięsień EDB dawkę preparatu zawierającego toksynę jadu kiełbasianego typu B („B) oraz w inny mięsień EDB dawkę preparatu „BOTOX (toksyna jadu kiełbasianego typu A, „A), stosując jeden z pięciu różnych schematów dawkowania: 1,25 jednostek A/20 jednostek B; 2,5 jednostek A/80 jednostek B; 5 jednostek A/160 jednostek B; 7,5 jednostek A/320 jednostek B; 10 jednostek A/480 jednostek B (po 2 pacjentów dla każdego schematu dawkowania). Jednemu pacjentowi kontrolnemu podano zastrzyk roztworu soli w każdy mięsień EDB. Stopień zmniejszenia amplitudy fali M i powierzchni był podobny dla obu mięśni. Maksymalne działanie obserwowano po około 6 dniach po iniekcji. Oba serotypy wykazywały zależne od wielkości dawki zmniejszenie amplitudy fali M. Poprawa po ćwiczeniu była największa w 9 dniu dla obu typów toksyn.
Aczkolwiek wynalazek został opisany w odniesieniu do specyficznych metod i odmian, to jest zrozumiałe, że możliwe są rozmaite modyfikacje i zmiany bez odchodzenia od jego zakresu.
Bibliografia
E.S. Consky, A.E. Lang (1994) w Therapy with Botulin Toxin, wyd. J. Jankovic i M. Hallet; Mar cel Dekker, Inc., New York
A.S. Frankel i F.M. Kramer (1998), Chemical browlift. Arch. Otolaryngol. Surg. 124(3): 321-323
M.G. Gartlan i H.T. Hoffman (1992) Crystalline preparation of botulinum toxin type A (Botox): Degradation in potency with storage, Otolaryngology - Head and Neck Surgery 102(2): 135-140
P. Hambleton, B. Capel, N. Bailey, N.I. Heron, A. Crooks, J. Melling (1981), Production, purification and toxoiing of Clostridium botulinum type A toxin, Biomedical Aspects od Botulism, Academic Press, NY
J.G. Hardman i L.E. Limbird, wyd. (1996) Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis ofTherapeutics, 9 wydanie, McGraw-Hill, New York
H.T. Hoffman i M.G. Gartlan (1993) Stability of botulinum toxin i clinical use, Botulinum and Tetanus Neurotoxins, wyd. B.R DasGupta, Plenum Press, NY
E.A Johnson, M.C. Goodnough, G.E. Borodic (1997), Opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 5.696.077
L. Lachman, H.A. Lieberman, J.L Kanig (1986,), The Theory and Practice of Industrial Pharmacy (3 wydanie), Lea & Febiger, Philadelphia
J. Melling, P. Hambleton i C.C. Shone (1988), Clostridium botulinum toxins: nature and preparation for clinical use, Eye 2: 16-23
Physician's Desk Reference, 51 wydanie, 1997; („PDR) Medical Economics Company, Inc. Montvale, NJ
D.J. Schantz i D.A. Kautter (1978), Standardized assay for Clostridium botulinum toxins, J. Assoc. Anal. Chem, 61:1
L.L. Simpson (1993), The actions of clostridial toxins on storage and release of neurotransmitters, Natural and Synthetic Neurotoxins, wyd. A.L. Harvey, Academic Press Ltd., San Diego, str. 277-317
J. K.C Tsui (1986), Lancet 2: 245-247.
Claims (33)
1. Stabilny, gotowy do użycia, ciekły preparat zawierający toksynę jadu kiełbasianego do terapeutycznego użytku dla ludzi, znamienny tym, że zawiera dopuszczalny w farmacji buforowy roztwór soli zdolny do buforowania w zakresie pH pomiędzy 5 i 6, terapeutyczny koncentrat oczyszczonej, izolowanej toksyny jadu kiełbasianego do użytku dla ludzi oraz albuminę z surowicy krwi, który to preparat jest stabilny jako ciecz w ciągu co najmniej jednego roku w temperaturze pomiędzy 0°C i 10°C oraz w ciągu co najmniej 6 miesięcy w temperaturze pomiędzy 10°C i 30°C.
2. Preparat według zastrz. 1, znamienny tym, że buforowany zakres pH wynosi od pH 5,4 do pH 5,8.
3. Preparat według zastrz. 1, znamienny tym, że preparat jest stabilny w postaci ciekłej w ciągu co najmniej dwóch lat w temperaturze pomiędzy 0°C i 10°C.
4. Preparat według zastrz. 1, znamienny tym, że preparat jest stabilny w postaci ciekłej w ciągu co najmniej jednego roku w temperaturze w zakresie od 2°C do 8°C, korzystnie 5°C.
5. Preparat według zastrz. 1, znamienny tym, że preparat jest stabilny w postaci ciekłej w ciągu co najmniej jednego roku w temperaturze w zakresie od 2°C do 6°C, korzystnie 4°C.
6. Preparat według zastrz. 1, znamienny tym, że preparat jest stabilny w postaci ciekłej w ciągu co najmniej 6 miesięcy w temperaturze 25°C.
7. Preparat według zastrz. 1, znamienny tym, że toksyną jadu kiełbasianego jest toksyna serotypu wybranego z grupy składającej się z serotypów A, B, C1, C2, D, E, F i G.
8. Preparat według zastrz. 7, znamienny tym, że toksyną jadu kiełbasianego jest toksyna typu B, obecna w stężeniu 100 - 20.000 jednostek/ml.
9. Preparat według zastrz. 8, znamienny tym, że toksyna jadu kiełbasianego typu B jest obecna w stężeniu 1.000 - 5.000 jednostek/ml.
10. Preparat według zastrz. 7, znamienny tym, że toksyna jadu kiełbasianego typu B jest obecna w postaci kompleksu o wysokiej masie cząsteczkowej wynoszącej około 700.000, to jest około
700.000 x 1,6605387313 x 10-27 kg.
11. Preparat według zastrz. 7, znamienny tym, że toksyną jadu kiełbasianego jest toksyna typu A, obecna w stężeniu 20 - 2.000 jednostek/ml.
12. Preparat według zastrz. 11, znamienny tym, że toksyna jadu kiełbasianego typu A jest obecna w stężeniu 100 - 1.000 jednostek/ml.
13. Preparat według zastrz. 1, znamienny tym, że dopuszczalny w farmacji buforowy roztwór soli zawiera bufor wybrany z grupy, do której należą bufor fosforanowy, bufor fosforanowo-cytrynowy i bufor bursztynianowy.
14. Preparat według zastrz. 1, znamienny tym, że zawiera 100 mM chlorku sodowego, 10 mM buforu bursztynianowego o stężeniu 5,6 pH, albuminę z surowicy ludzkiej o stężeniu 0,5 mg/mL oraz toksynę jadu kiełbasianego typu B o stężeniu 4.000 - 6.000 jednostek/ml, korzystnie około 5.000 jednostek/ml.
15. Preparat według zastrz. 1, znamienny tym, że albuminę z surowicy krwi stanowi rekombinowana ludzka albumina z surowicy.
16. Preparat według zastrz. 1, znamienny tym, że zawiera 0,5 mg/ml albuminę ludzką, toksynę jadu kiełbasianego typu B o stężeniu 4.000 - 6.000 jednostek/ml, korzystnie 5.000 jednostek/ml, oraz dopuszczalny w farmacji buforowy roztwór soli, zawierający 100 mM chlorku sodowego i 10 mM buforu bursztynianowego, zdolny do utrzymywania pH 5,6, który to preparat jest stabilny jako ciecz w ciągu co najmniej 6 miesięcy w temperaturze pomiędzy 10°C i 30°C.
17. Zastosowanie stabilnego, gotowego do użycia, ciekłego preparatu zawierającego toksynę jadu kiełbasianego według zastrz. 1 do wytwarzania preparatu do hamowania bodźca cholinergicznego do wybranego mięśnia, grupy mięśni, gruczołu lub narządu, znamienne tym, że do wybranego mięśnia, grupy mięśni, gruczołu lub narządu pacjenta podaje się skuteczną farmaceutycznie ilość ciekłego preparatu zawierającego toksynę jadu kiełbasianego.
18. Zastosowanie według zastrz. 17, znamienne tym, że powyższy pacjent cierpi na zaburzenie z grupy, do której należy spastyczność, kurcz powiek, zez, kurcz połowy twarzy, zapalenie ucha środkowego, spastyczne zapalenie okrężnicy, skurcz zwieracza odbytu, ataksja moczowego wypychacza-zwieracza, ścisk szczęk, wygięcie kręgosłupa.
PL 200 926 B1
19. Zastosowanie według zastrz. 18, znamienne tym, że powyższy pacjent cierpi na spastyczność związaną z jedną lub kilkoma grupami chorób, takich jak udar, uszkodzenie rdzenia kręgowego, uszkodzenia wewnątrzczaszkowe, porażenie mózgowe, stwardnienie rozsiane i choroba Parkinsona.
20. Zastosowanie według zastrz. 18, znamienne tym, że powyższy pacjent cierpi na dystonię związaną z jedną lub kilkoma grupami chorób, takich jak kręcz szyi kurczowy (dystonia szyjna), dystonia spazmatyczna, dystonia kończyn, dystonia krtaniowa, oraz dystonia ustno-żuchwowa (Meige'a).
21. Zastosowanie według zastrz. 17, znamienne tym, że powyższe mięśnie lub grupy mięśni wywołują zmarszczki lub bruzdy na czole.
22. Zastosowanie według zastrz. 17, znamienne tym, że powyższym mięśniem jest mięsień kroczowy a powyższa pacjentka rodzi dziecko.
23. Zastosowanie według zastrz. 17, znamienne tym, że powyższy pacjent cierpi na zaburzenia wybrane z grupy, do której należą ból mięśni twarzy, ból głowy związany z migreną, zaburzenia naczyniowe, nerwoból, neuropatia, ból artretyczny, ból pleców, nadmierne pocenie się, wyciek z nosa, astma, nadmierne wydzielanie śliny oraz nadmierne wydzielanie soku żołądkowego.
24. Zastosowanie według zastrz. 17, znamienne tym, że toksyną jadu kiełbasianego jest toksyna serotypu wybranego z grupy składającej się z serotypów A, B, C1, C2, D, E, F i G.
25. Zastosowanie według zastrz. 24, znamienne tym, że toksyną jadu kiełbasianego jest toksyna typu B, obecna w stężeniu 100 - 20.000 jednostek/ml.
26. Zastosowanie według zastrz. 25, znamienne tym, że toksyna jadu kiełbasianego typu B jest obecna w stężeniu 1.000 - 5.000 jednostek/ml.
27. Zastosowanie według zastrz. 24, znamienne tym, że toksyna jadu kiełbasianego typu B jest obecna w postaci kompleksu o masie cząsteczkowej około 700.000 to jest około 700.000 x 1,6605387313 x 10-27 kg.
28. Zastosowanie według zastrz. 24, znamienne tym, że toksyną jadu kiełbasianego jest toksyna typu A, obecna w stężeniu 20 - 2.000 jednostek/ml.
29. Zastosowanie według zastrz. 28, znamienne tym, że toksyną jadu kiełbasianego jest toksyna typu A, obecna w stężeniu 100 - 1.000 jednostek/ml.
30. Zastosowanie według zastrz. 24, znamienne tym, że pacjent jest oporny na toksynę jadu kiełbasianego typu A i toksyna jadu kiełbasianego w preparacie jest wybrana z grupy, do której należą serotypy B, C1, C2, D, E, F i G toksyny jadu kiełbasianego.
31. Zastosowanie według zastrz. 30, znamienne tym, że toksyna jadu kiełbasianego w powyższym preparacie jest toksyną typu B.
32. Zastosowanie według zastrz. 24, znamienne tym, że pacjent jest oporny na toksynę jadu kiełbasianego typu B i toksyna jadu kiełbasianego w preparacie jest wybrana z grupy, do której należą serotypy A, C1, C2, D, E, F i G toksyny jadu kiełbasianego.
33. Zastosowanie według zastrz. 32, znamienne tym, że toksyna jadu kiełbasianego w powyższym preparacie jest toksyną typu A.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US9987098P | 1998-09-11 | 1998-09-11 | |
| PCT/US1999/020912 WO2000015245A2 (en) | 1998-09-11 | 1999-09-09 | Stable liquid formulations of botulinum toxin |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL347069A1 PL347069A1 (en) | 2002-03-11 |
| PL200926B1 true PL200926B1 (pl) | 2009-02-27 |
Family
ID=22277018
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL347069A PL200926B1 (pl) | 1998-09-11 | 1999-09-09 | Stabilny ciekły preparat zawierający toksynę jadu kiełbasianego oraz zastosowanie stabilnego ciekłego preparatu zawierającego toksynę jadu kiełbasianego |
Country Status (41)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7211261B1 (pl) |
| EP (1) | EP1112082B2 (pl) |
| JP (4) | JP4557426B2 (pl) |
| KR (1) | KR100699756B1 (pl) |
| CN (1) | CN100438905C (pl) |
| AP (1) | AP1591A (pl) |
| AR (1) | AR022671A1 (pl) |
| AT (1) | ATE221386T1 (pl) |
| AU (1) | AU755556C (pl) |
| BG (1) | BG65555B1 (pl) |
| BR (1) | BR9913585A (pl) |
| CA (1) | CA2342243C (pl) |
| CO (1) | CO5170497A1 (pl) |
| CU (1) | CU23251A3 (pl) |
| DE (1) | DE69902396T3 (pl) |
| DK (1) | DK1112082T4 (pl) |
| EA (1) | EA003367B1 (pl) |
| EE (1) | EE200100140A (pl) |
| ES (1) | ES2181473T5 (pl) |
| GE (1) | GEP20032946B (pl) |
| HK (1) | HK1040927A1 (pl) |
| HR (1) | HRP20010259B1 (pl) |
| HU (1) | HUP0103638A3 (pl) |
| ID (1) | ID28824A (pl) |
| IL (2) | IL141564A0 (pl) |
| IS (1) | IS2381B (pl) |
| LT (1) | LT4959B (pl) |
| LV (1) | LV12684B (pl) |
| NO (1) | NO328898B1 (pl) |
| NZ (1) | NZ509349A (pl) |
| PL (1) | PL200926B1 (pl) |
| PT (1) | PT1112082E (pl) |
| RS (1) | RS50344B (pl) |
| SA (1) | SA99200566B1 (pl) |
| SI (2) | SI1112082T1 (pl) |
| SK (1) | SK286919B6 (pl) |
| TR (1) | TR200100728T2 (pl) |
| TW (1) | TW574036B (pl) |
| UA (1) | UA72477C2 (pl) |
| WO (1) | WO2000015245A2 (pl) |
| ZA (1) | ZA200101709B (pl) |
Families Citing this family (78)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2174945T3 (es) * | 1994-05-09 | 2002-11-16 | William J Binder | Toxina de botulinum para la reduccion de cefaleas de migrañas. |
| US20120238504A1 (en) * | 1998-09-11 | 2012-09-20 | Solstice Neurosciences, Llc | Stable Formulations of Botulinum Toxin in Hydrogels |
| TW574036B (en) * | 1998-09-11 | 2004-02-01 | Elan Pharm Inc | Stable liquid compositions of botulinum toxin |
| DE19925739A1 (de) * | 1999-06-07 | 2000-12-21 | Biotecon Ges Fuer Biotechnologische Entwicklung & Consulting Mbh | Therapeutikum mit einem Botulinum-Neurotoxin |
| US7838007B2 (en) | 1999-12-07 | 2010-11-23 | Allergan, Inc. | Methods for treating mammary gland disorders |
| US7838008B2 (en) | 1999-12-07 | 2010-11-23 | Allergan, Inc. | Methods for treating diverse cancers |
| ES2275992T5 (es) * | 2000-02-08 | 2011-05-18 | Allergan, Inc. | Composiciones farmacéuticas de toxina botulínica. |
| US20030118598A1 (en) * | 2000-02-08 | 2003-06-26 | Allergan, Inc. | Clostridial toxin pharmaceutical compositions |
| US20060269575A1 (en) * | 2000-02-08 | 2006-11-30 | Allergan, Inc. | Botulinum toxin pharmaceutical compositions formulated with recombinant albumin |
| US7780967B2 (en) | 2000-02-08 | 2010-08-24 | Allergan, Inc. | Reduced toxicity Clostridial toxin pharmaceutical compositions |
| US8632785B2 (en) * | 2000-02-08 | 2014-01-21 | Allergan, Inc. | Clostridial toxin pharmaceutical composition containing a gelatin fragment |
| US6821520B2 (en) | 2000-02-15 | 2004-11-23 | Allergan, Inc. | Clostridial toxin therapy for Hashimoto's thyroiditis |
| ITUD20010002A1 (it) * | 2001-01-05 | 2002-07-05 | Univ Degli Studi Udine | Uso della tossina botulinica per la soluzione di patologie articolari, in particolare della coxartrosi, della epicondilite e della patolo |
| CA2369810C (en) * | 2002-01-30 | 2007-08-07 | 1474791 Ontario Limited | Method of treating pain |
| US7140371B2 (en) | 2002-03-14 | 2006-11-28 | Allergan, Inc. | Surface topography method for determining effects of a botulinum toxin upon a muscle and for comparing botulinum toxins |
| US6688311B2 (en) | 2002-03-14 | 2004-02-10 | Allergan, Inc. | Method for determining effect of a clostridial toxin upon a muscle |
| JPWO2003082315A1 (ja) * | 2002-03-29 | 2005-07-28 | 財団法人化学及血清療法研究所 | 筋緊張亢進疾患治療剤 |
| US7691394B2 (en) | 2002-05-28 | 2010-04-06 | Botulinum Toxin Research Associates, Inc. | High-potency botulinum toxin formulations |
| US20040009180A1 (en) * | 2002-07-11 | 2004-01-15 | Allergan, Inc. | Transdermal botulinum toxin compositions |
| SI1565210T1 (sl) | 2002-11-21 | 2012-07-31 | Ira Sanders | Klostridialni nevrotoksin za uporabo pri zdravljenju nazalne kongestije |
| EP1594523B1 (en) * | 2002-12-20 | 2009-03-25 | Botulinum Toxin Research Associates, Inc. | Pharmaceutical compositions comprising botulinum toxin and human serum albumin |
| US8071550B2 (en) | 2003-03-03 | 2011-12-06 | Allergan, Inc. | Methods for treating uterine disorders |
| MXPA05009425A (es) * | 2003-03-06 | 2006-02-10 | Botulinum Toxin Res Ass Inc | Tratamiento del dolor facial cronico y cefalea relacionados con la sinusitis con toxina botulinica. |
| EP1599220B1 (en) * | 2003-03-06 | 2013-07-17 | Botulinum Toxin Research Associates, Inc. | Selection of patients with increased responsiveness to botulinum toxin |
| US6838434B2 (en) * | 2003-05-02 | 2005-01-04 | Allergan, Inc. | Methods for treating sinus headache |
| US7220422B2 (en) * | 2003-05-20 | 2007-05-22 | Allergan, Inc. | Methods and compositions for treating eye disorders |
| US8734810B2 (en) * | 2003-10-29 | 2014-05-27 | Allergan, Inc. | Botulinum toxin treatments of neurological and neuropsychiatric disorders |
| US8617572B2 (en) | 2003-10-29 | 2013-12-31 | Allergan, Inc. | Botulinum toxin treatments of depression |
| US8609112B2 (en) | 2003-10-29 | 2013-12-17 | Allergan, Inc. | Botulinum toxin treatments of depression |
| US8609113B2 (en) | 2003-10-29 | 2013-12-17 | Allergan, Inc. | Botulinum toxin treatments of depression |
| SG10201803560WA (en) * | 2004-03-03 | 2018-06-28 | Revance Therapeutics Inc | Compositions And Methods For Topical Application And Transdermal Delivery Of Botulinum Toxins |
| US9211248B2 (en) | 2004-03-03 | 2015-12-15 | Revance Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for topical application and transdermal delivery of botulinum toxins |
| US8974774B2 (en) | 2004-03-03 | 2015-03-10 | Revance Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for topical diagnostic and therapeutic transport |
| KR100852821B1 (ko) * | 2004-07-26 | 2008-08-18 | 메르츠 파마 게엠베하 운트 코. 카가아 | 보툴리눔 신경독소를 포함하는 치료 조성물 |
| US7179474B2 (en) | 2004-09-03 | 2007-02-20 | Allergan, Inc. | Methods for treating a buttock deformity |
| US7429386B2 (en) | 2004-09-03 | 2008-09-30 | Allergan, Inc. | Stretch mark treatment |
| WO2006073410A1 (en) * | 2005-01-03 | 2006-07-13 | Botulinum Toxin Research Associates, Inc. | Compositions, methods and devices for preparing less painful botulinum toxin formulations |
| KR101453963B1 (ko) | 2005-03-03 | 2014-10-22 | 레반스 테라퓨틱스, 아이엔씨. | 보툴리눔 독소의 국소 적용 및 경피 전달을 위한 조성물 및 방법 |
| US7419675B2 (en) | 2005-05-26 | 2008-09-02 | Allergan, Inc. | Method for treating peritoneal adhesions |
| US8323666B2 (en) | 2005-08-01 | 2012-12-04 | Allergan, Inc. | Botulinum toxin compositions |
| US8137677B2 (en) | 2005-10-06 | 2012-03-20 | Allergan, Inc. | Non-protein stabilized clostridial toxin pharmaceutical compositions |
| US8168206B1 (en) | 2005-10-06 | 2012-05-01 | Allergan, Inc. | Animal protein-free pharmaceutical compositions |
| DE102006019447A1 (de) * | 2006-04-24 | 2007-10-25 | Dressler, Dirk, Dr. | Markierung von Botulinum Toxin |
| US10792344B2 (en) | 2006-06-29 | 2020-10-06 | Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa | High frequency application of botulinum toxin therapy |
| AR061669A1 (es) * | 2006-06-29 | 2008-09-10 | Merz Pharma Gmbh & Co Kgaa | Aplicacion de alta frecuencia de terapia con toxina botulinica |
| EP2048156A1 (en) * | 2007-10-12 | 2009-04-15 | Merz Pharma GmbH & Co.KGaA | Process for providing a temperature-stable muscle relaxant on the basis of the neurotoxic component of botulinum toxin |
| CA2686637A1 (en) * | 2007-06-01 | 2008-12-04 | Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa | Process for providing a temperature - stable muscle relaxant on the basis of the neurotoxic component of botulinum toxin in solid form |
| US9107815B2 (en) | 2008-02-22 | 2015-08-18 | Allergan, Inc. | Sustained release poloxamer containing pharmaceutical compositions |
| US20170361130A9 (en) * | 2008-05-23 | 2017-12-21 | Pankaj Modi | Stabilized and solubilized drug formulation for topical application and transdermal efficacy for cosmetic improvement and methods of formulation |
| WO2010016901A1 (en) * | 2008-08-05 | 2010-02-11 | Solstice Neurosciences, Inc. | Compositions of activated botulinum holotoxin type b (150 kd) |
| EP2315598A1 (en) * | 2008-08-05 | 2011-05-04 | Solstice Neurosciences, Inc. | Compositions of activated botulinum toxin type b |
| US20100112005A1 (en) * | 2008-11-03 | 2010-05-06 | Solstice Neurosciences, Inc. | Compositions of activated botulinum toxin type B |
| WO2010051038A1 (en) * | 2008-11-03 | 2010-05-06 | Solstice Neurosciences, Inc. | Compositions of activated botulinum holotoxin type b (150 kd) |
| US20100124559A1 (en) * | 2008-11-20 | 2010-05-20 | Allergan, Inc. | Early Treatment and Prevention of Increased Muscle Tonicity |
| WO2010096134A1 (en) | 2008-12-04 | 2010-08-26 | Botulinum Toxin Research Associates, Inc. | Extended length botulinum toxin formulation for human or mammalian use |
| CN102300584A (zh) | 2008-12-31 | 2011-12-28 | 雷文斯治疗公司 | 可注射的肉毒杆菌毒素制剂 |
| EP2248518B1 (en) * | 2009-04-17 | 2013-01-16 | Merz Pharma GmbH & Co. KGaA | Formulation for stabilizing proteins, peptides or mixtures thereof. |
| IL268980B (en) | 2009-06-25 | 2022-09-01 | Revance Therapeutics Inc | Botulinum toxin formulations without albumin |
| BRPI1014253A2 (pt) | 2009-07-02 | 2016-04-12 | Merz Pharma Gmbh & Co Kgaa | polinucleotídeo codificado um polipeptídeo de neurotoxina, vetor, célula hospedeira, anticorpo, uso de um polinucleotídeo, método para a fabricação de um polipeptídeo de neurotoxina e método para a fabricação de um medicamento |
| LT2490986T (lt) * | 2009-10-21 | 2018-11-26 | Revance Therapeutics, Inc. | Nekompleksinio botulino neurotoksino gryninimo būdai ir sistemos |
| BR112013018920A2 (pt) * | 2011-01-24 | 2017-11-28 | Anterios Inc | composições de nanopartículas, formulações destas e seus usos |
| MX351012B (es) | 2011-11-09 | 2017-09-28 | Merz Pharma Gmbh & Co Kgaa | Neurotoxinas que exhiben actividad biologica acortada. |
| US9393291B2 (en) | 2012-04-12 | 2016-07-19 | Botulinum Toxin Research Associates, Inc. | Use of botulinum toxin for the treatment of cerebrovascular disease, renovascular and retinovascular circulatory beds |
| CA2889833A1 (en) | 2012-10-28 | 2014-05-01 | Revance Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for safe treatment of rhinitis |
| RU2535115C1 (ru) | 2013-05-15 | 2014-12-10 | Бости Трейдинг Лтд | Фармацевтический состав, содержащий нейротоксин ботулина |
| US11484580B2 (en) | 2014-07-18 | 2022-11-01 | Revance Therapeutics, Inc. | Topical ocular preparation of botulinum toxin for use in ocular surface disease |
| US9901627B2 (en) | 2014-07-18 | 2018-02-27 | Revance Therapeutics, Inc. | Topical ocular preparation of botulinum toxin for use in ocular surface disease |
| CN107205889B (zh) * | 2014-09-02 | 2021-05-11 | 美国白银有限责任公司 | 肉毒毒素和胶体银颗粒 |
| JP6798993B2 (ja) | 2014-12-23 | 2020-12-09 | メルツ ファーマ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング ウント コンパニー コマンディト ゲゼルシャフト アウフ アクティーン | ボツリヌス毒素プレフィルド容器 |
| AU2015381351B2 (en) * | 2015-02-03 | 2020-05-14 | Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa | Botulinum toxin prefilled container |
| DK3679946T3 (da) * | 2016-05-27 | 2022-02-07 | Ipsen Biopharm Ltd | Flydende neurotoksinformulering stabiliseret med tryptophan eller tyrosin |
| WO2018038301A1 (en) * | 2016-08-26 | 2018-03-01 | Hugel Inc. | Stabilized liquid formulation of botulinum toxin and preparation method thereof |
| BR112019004929A2 (pt) | 2016-09-13 | 2019-06-04 | Allergan Inc | composições de toxina clostridial não proteíca |
| BR112019010131A2 (pt) | 2016-11-21 | 2019-10-08 | Eirion Therapeutics Inc | entrega transdérmica de agentes grandes |
| KR101744900B1 (ko) | 2017-01-20 | 2017-06-08 | 주식회사 대웅 | 보툴리눔 독소를 포함하는 안정한 액상 조성물 |
| US20200179498A1 (en) * | 2017-05-18 | 2020-06-11 | Revance Therapeutics, Inc. | Methods of treatment for cervical dystonia |
| KR102063475B1 (ko) | 2018-02-22 | 2020-01-09 | 주식회사 에이비바이오 | 보툴리눔 독소, 안정화제, 및 국소마취제를 포함하는 액상 제형 및 이의 제조방법 |
| JP2022514151A (ja) | 2018-10-08 | 2022-02-10 | メルツ ファルマ ゲーエムベーハー ウント コンパニー カーゲーアーアー | 神経毒プレフィルドバイアル |
Family Cites Families (37)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3522247A (en) * | 1967-11-07 | 1970-07-28 | Pfizer & Co C | 2-amino-6,7-disubstituted-4h-1,3-benzothiazine-4-ones as bronchodilators |
| US4932936A (en) | 1988-01-29 | 1990-06-12 | Regents Of The University Of Minnesota | Method and device for pharmacological control of spasticity |
| US5053005A (en) | 1989-04-21 | 1991-10-01 | Gary E. Borodic | Chemomodulation of curvature of the juvenile spine |
| US5919665A (en) * | 1989-10-31 | 1999-07-06 | Ophidian Pharmaceuticals, Inc. | Vaccine for clostridium botulinum neurotoxin |
| US5183462A (en) | 1990-08-21 | 1993-02-02 | Associated Synapse Biologics | Controlled administration of chemodenervating pharmaceuticals |
| GB9120306D0 (en) | 1991-09-24 | 1991-11-06 | Graham Herbert K | Method and compositions for the treatment of cerebral palsy |
| JP3510886B2 (ja) * | 1992-06-23 | 2004-03-29 | ボツリヌム トキシン リサーチ アソシエイト インコーポレイテッド | ボツリヌスｂ複合体を含有する医薬組成物 |
| EP0593176A3 (en) * | 1992-09-28 | 1995-03-01 | Wisconsin Alumni Res Found | Pharmaceutical compositions containing botulinum toxin and method of manufacture. |
| DE69432299T2 (de) | 1993-06-10 | 2003-12-11 | Allergan, Inc. | Multiple Botulinum Toxine zur Behandlung von neuromuskulären Störungen und Zuständen |
| AU689115B2 (en) | 1993-06-10 | 1998-03-26 | Allergan, Inc. | Treatment of neuromuscular disorders and conditions with different botulinum serotype |
| GB9315306D0 (en) | 1993-07-23 | 1993-09-08 | Smithkline Beecham Corp | Methods |
| US5437291A (en) | 1993-08-26 | 1995-08-01 | Univ Johns Hopkins | Method for treating gastrointestinal muscle disorders and other smooth muscle dysfunction |
| US6974578B1 (en) | 1993-12-28 | 2005-12-13 | Allergan, Inc. | Method for treating secretions and glands using botulinum toxin |
| DE122008000042I1 (de) | 1993-12-28 | 2009-01-02 | Merz Pharma Gmbh & Co Kgaa | Verwendung der neurotoxischen Komponente des Botulinum Toxins zur Behandlung von Muskelspasmen |
| US5766605A (en) | 1994-04-15 | 1998-06-16 | Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York | Treatment of autonomic nerve dysfunction with botulinum toxin |
| ES2174945T3 (es) | 1994-05-09 | 2002-11-16 | William J Binder | Toxina de botulinum para la reduccion de cefaleas de migrañas. |
| AU2907695A (en) * | 1994-08-08 | 1996-03-07 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Purification and pharmaceutical compositions containing type g botulinum neurotoxin |
| US5512547A (en) * | 1994-10-13 | 1996-04-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Pharmaceutical composition of botulinum neurotoxin and method of preparation |
| US5756468A (en) * | 1994-10-13 | 1998-05-26 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Pharmaceutical compositions of botulinum toxin or botulinum neurotoxin and methods of preparation |
| US5562899A (en) | 1995-02-28 | 1996-10-08 | Gerber; Allen | Medical prevention of lacerations to the vagina and perineum |
| US6136551A (en) * | 1995-04-24 | 2000-10-24 | Allergan, Inc. | Assay for detecting the presence of botulinum toxin neutralizing antibodies in a patient serum sample |
| DK0773788T3 (da) | 1995-06-06 | 2003-09-01 | Allergan Inc | Forbedrede præparater og fremgangsmåder til kemodenervering under anvendelse af neurotoxiner |
| US5721215A (en) | 1996-03-20 | 1998-02-24 | Allergan | Injectable therapy for control of muscle spasms and pain related to muscle spasms |
| US6699966B1 (en) * | 1996-07-08 | 2004-03-02 | University Of Massachusetts | Proteins within the type E botulinum neurotoxin complex |
| CN1057430C (zh) * | 1996-10-09 | 2000-10-18 | 崔生发 | 一种生物化学杀鼠剂 |
| TW574036B (en) | 1998-09-11 | 2004-02-01 | Elan Pharm Inc | Stable liquid compositions of botulinum toxin |
| US6146902A (en) * | 1998-12-29 | 2000-11-14 | Aventis Pasteur, Inc. | Purification of polysaccharide-protein conjugate vaccines by ultrafiltration with ammonium sulfate solutions |
| US6113915A (en) | 1999-10-12 | 2000-09-05 | Allergan Sales, Inc. | Methods for treating pain |
| US6139845A (en) | 1999-12-07 | 2000-10-31 | Allergan Sales, Inc. | Method for treating cancer with a neurotoxin |
| ES2275992T5 (es) | 2000-02-08 | 2011-05-18 | Allergan, Inc. | Composiciones farmacéuticas de toxina botulínica. |
| US20030118598A1 (en) * | 2000-02-08 | 2003-06-26 | Allergan, Inc. | Clostridial toxin pharmaceutical compositions |
| US6358513B1 (en) | 2000-02-15 | 2002-03-19 | Allergan Sales, Inc. | Method for treating Hashimoto's thyroiditis |
| US6464986B1 (en) | 2000-04-14 | 2002-10-15 | Allegan Sales, Inc. | Method for treating pain by peripheral administration of a neurotoxin |
| US20080096238A1 (en) * | 2004-03-30 | 2008-04-24 | Alcon, Inc. | High throughput assay for human rho kinase activity with enhanced signal-to-noise ratio |
| ES2509872T3 (es) | 2005-03-03 | 2014-10-20 | Allergan, Inc. | Procedimientos para obtener una toxina clostrídica |
| JP2008535486A (ja) | 2005-03-15 | 2008-09-04 | アラーガン、インコーポレイテッド | クロストリジウム毒素標的細胞に対する改変された標的能力を有する修飾クロストリジウム毒素 |
| US20080118532A1 (en) | 2006-06-01 | 2008-05-22 | Atassi M Zouhair | Determining and reducing immunoresistance to a botulinum toxin therapy using botulinum toxin b peptides |
-
1999
- 1999-08-31 TW TW88114941A patent/TW574036B/zh active
- 1999-09-07 SA SA99200566A patent/SA99200566B1/ar unknown
- 1999-09-09 ID IDW20010592A patent/ID28824A/id unknown
- 1999-09-09 AR ARP990104540A patent/AR022671A1/es unknown
- 1999-09-09 PL PL347069A patent/PL200926B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1999-09-09 SI SI9930126T patent/SI1112082T1/xx unknown
- 1999-09-09 ES ES99945649T patent/ES2181473T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-09 CN CNB998107395A patent/CN100438905C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-09-09 PT PT99945649T patent/PT1112082E/pt unknown
- 1999-09-09 RS YUP-190/01A patent/RS50344B/sr unknown
- 1999-09-09 KR KR1020017003032A patent/KR100699756B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-09-09 WO PCT/US1999/020912 patent/WO2000015245A2/en active IP Right Grant
- 1999-09-09 AP APAP/P/2001/002108A patent/AP1591A/en active
- 1999-09-09 IL IL14156499A patent/IL141564A0/xx unknown
- 1999-09-09 BR BR9913585-0A patent/BR9913585A/pt not_active Application Discontinuation
- 1999-09-09 NZ NZ509349A patent/NZ509349A/en not_active IP Right Cessation
- 1999-09-09 CO CO99057166A patent/CO5170497A1/es not_active Application Discontinuation
- 1999-09-09 CA CA2342243A patent/CA2342243C/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-09 EE EEP200100140A patent/EE200100140A/xx unknown
- 1999-09-09 EA EA200100337A patent/EA003367B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1999-09-09 US US09/393,590 patent/US7211261B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-09 GE GEAP19995844A patent/GEP20032946B/en unknown
- 1999-09-09 AU AU58214/99A patent/AU755556C/en not_active Ceased
- 1999-09-09 DK DK99945649.4T patent/DK1112082T4/da active
- 1999-09-09 DE DE69902396T patent/DE69902396T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-09 HU HU0103638A patent/HUP0103638A3/hu unknown
- 1999-09-09 JP JP2000569829A patent/JP4557426B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-09 SK SK313-2001A patent/SK286919B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1999-09-09 UA UA2001042366A patent/UA72477C2/uk unknown
- 1999-09-09 EP EP99945649A patent/EP1112082B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-09 SI SI9920081A patent/SI20566B/sl not_active IP Right Cessation
- 1999-09-09 TR TR2001/00728T patent/TR200100728T2/xx unknown
- 1999-09-09 AT AT99945649T patent/ATE221386T1/de active
-
2001
- 2001-01-31 IS IS5836A patent/IS2381B/is unknown
- 2001-02-21 IL IL141564A patent/IL141564A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-02-28 ZA ZA200101709A patent/ZA200101709B/en unknown
- 2001-03-09 NO NO20011207A patent/NO328898B1/no not_active IP Right Cessation
- 2001-03-12 CU CU20010063A patent/CU23251A3/es not_active IP Right Cessation
- 2001-04-09 HR HR20010259A patent/HRP20010259B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-04-10 LV LV010056A patent/LV12684B/xx unknown
- 2001-04-10 LT LT2001041A patent/LT4959B/lt not_active IP Right Cessation
- 2001-04-10 BG BG105435A patent/BG65555B1/bg unknown
-
2002
- 2002-04-10 HK HK02102724.7A patent/HK1040927A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-03-08 US US11/683,628 patent/US8173138B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-03-27 JP JP2007083103A patent/JP2007169301A/ja not_active Withdrawn
-
2010
- 2010-02-26 JP JP2010043514A patent/JP5270594B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2013
- 2013-02-28 JP JP2013039884A patent/JP2013144691A/ja not_active Withdrawn
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL200926B1 (pl) | Stabilny ciekły preparat zawierający toksynę jadu kiełbasianego oraz zastosowanie stabilnego ciekłego preparatu zawierającego toksynę jadu kiełbasianego | |
| US20120238504A1 (en) | Stable Formulations of Botulinum Toxin in Hydrogels | |
| EP0773788B1 (en) | Improved compositions and methods for chemodenervation using neurotoxins | |
| BRPI0614474A2 (pt) | composições melhoradas de toxina botulìnica | |
| TWI739368B (zh) | A型肉毒桿菌毒素複合物、其配製劑和使用方法 | |
| CZ2001564A3 (cs) | Stabilní kapalný farmaceutický botulotoxinový přípravek a jeho použití | |
| MXPA01002445A (en) | Stable liquid formulations of botulinum toxin | |
| AU2013202882B2 (en) | Improved botulinum toxin compositions |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20110909 |