EA003367B1 - Стабильные жидкие составы ботулинического токсина - Google Patents

Стабильные жидкие составы ботулинического токсина Download PDF

Info

Publication number
EA003367B1
EA003367B1 EA200100337A EA200100337A EA003367B1 EA 003367 B1 EA003367 B1 EA 003367B1 EA 200100337 A EA200100337 A EA 200100337A EA 200100337 A EA200100337 A EA 200100337A EA 003367 B1 EA003367 B1 EA 003367B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
botulinum toxin
formulation
group
muscle
composition
Prior art date
Application number
EA200100337A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200100337A1 (ru
Inventor
Элизабет Мойер
Памела Хертзер
Original Assignee
Элан Фармасьютикалс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=22277018&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA003367(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Элан Фармасьютикалс, Инк. filed Critical Элан Фармасьютикалс, Инк.
Publication of EA200100337A1 publication Critical patent/EA200100337A1/ru
Publication of EA003367B1 publication Critical patent/EA003367B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/4886—Metalloendopeptidases (3.4.24), e.g. collagenase
    • A61K38/4893—Botulinum neurotoxin (3.4.24.69)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/06—Anti-spasmodics, e.g. drugs for colics, esophagic dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/06—Anti-spasmodics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/02—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for disorders of the vagina
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/04—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for inducing labour or abortion; Uterotonics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/06—Antiabortive agents; Labour repressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/06—Antimigraine agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/16—Otologicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)

Abstract

Изобретение относится к жидким композициям на основе ботулинического токсина, которые устойчивы при хранении в жидком виде при стандартных температурах холодильника в течение, по меньшей мере, 1-2 лет и при более высоких температурах в течение, по меньшей мере, 6 месяцев. Кроме того, изобретение охватывает способы лечения с использованием таких композиций и некоторые применения этих композиций в приготовлении медикаментов для терапевтических и косметических целей.

Description

Область техники
Изобретение относится к лечебным композициям на основе ботулинического токсина, устойчивым при хранении в жидком виде при температурах 0-10°С в течение, по меньшей мере, 1-2 лет.
Список литературы
Сопзку, Е.8., Ьапд, А.Е. (1994) Ιη: Тйегару \\бй ВоЦббшт Τοχίη. 1апкоу1с, I. апб На11е1 М., ебз. Магсе1 Беккет, 1пс., №\ν Уогк.
Етапке1, Л.8. апб Катег, Е.М. (1998) Сйет1са1 Ьто^йй Агсй. О1о1атупдо1. 8игд. 124(3): 321-323.
ОатИап, М.О. апб НоГГтап, Н.Т. (1992) Сгуз1а1Нпе ртератабоп оГ Ьокбпит 1охт 1уре А (ВоЮ.х): Бедгабабоп т ро1епсу \\йй зЮгаде. О1о1агупдо1оду - Неаб апб Ыеск 8игдегу 102(2): 135-140.
НатЬ1е1оп, Р., Саре1, В., Вабеу, Ν., Негоп, КЬ., Сгоокз, А., МеШпд, I. (1981) Ргобисбоп, рибйсабоп апб кхобпд оГ С1озб1бшт Ьокбпит 1уре А 1охш. Вютебка1 Азрес1з оГ Вокбзт, Асабетк Ргезз, ΝΥ.
Нагбтап, Ι.Ο. апб ЫтЫгб, Ь.Е., Ехес. Ебз. (1996) Оообтап & Обтап'з Тйе Рйагтасо1од1са1 Ваз1з оГ Тйетареибсз, 9'1' Еб. МсСга\\-НПк №\ν Уогк.
НоГГтап, Н.Т. апб Оатбап, М.О. (1993) 81аЬббу оГ Ьокбпит 1охт ш сбшса1 изе. Вокбпит апб Те1апиз №игокхшз (В.К. БазОирк, Еб.), Р1епит Ргезз, ΝΥ.
Гойпзоп, Е.А., Оообпоидй, М.С, Вогобк, О.Е., (1997) и.8. Ракп! 5,696,077.
Ьасбтап, Ь., ЫеЬегтап, Н.А., Катд, кЬ. (1986) Тйе Тйеогу апб Ртасбсе оГ 1пбиз(г1а1 Рйагтасу (3гб Еб.), Ьеа & РеЫдет, РЫ1абе1рЫа
Ме1бпд, I., НатЬ1е1оп, Р. апб 8йопе, С.С. (1988) С1озйтбшт Ьокбпит 1охтз: пакле апб ргерагабоп Гог сбшса1 изе. Еуе 2: 16-23.
Рйузк1ап'з Безк КеГегепсе. 518ί Еб1боп,
1997. (РБК) Мебка1 Есопоткз Сотрапу, 1пс, Моп1уа1е, N1.
8сйап1х, Б.к апб Каибег, Б.А. (1978) 81апбагб|/еб аззау Гог С1озбтбшт Ьокббшт 1охтз, I. Аззос. ОГГ. Апа1. Сйет 61: 1.
81трзоп, Ь.Ь. (1993) Тйе асбопз оГ с1озбтб1а1 Юхб1з оп зЮгаде апб ге1еазе оГ пеигойапзтй1егз. №1Ц.1га1 апб 8уп1йебс №игокхтз, А.Ь. Нагуеу, Еб., Асабетк Ргезз Ыб., 8ап Бкдо, рр. 277317.
Тзш, кК.С. (1986), Гансе! 2: 245-247.
Предпосылки создания изобретения
Ботулинический токсин представляет собой полипептидный продукт жизнедеятельности анаэробной бактерии С1озбтбшш Ьокббшт. Этот токсин вызывает у млекопитающих мышечный паралич в результате блокирования высвобождения ацетилхолинового нейромедиатора пресинаптическими клетками в нервномышечном соединении. Хотя действие этого токсина долгое время ассоциировалось с ботулизмом со смертельным исходом, в последние годы он используется в терапевтических целях для лечения некоторых непроизвольных нарушений мышечных движений, в том числе очаговых дистоний (таких как косоглазие, эссенциальный блефароспазм и спазм мышц половины лица), а также сегментарных дистоний (типа кривошеи, нижнечелюстной дистоний и спастической дисфонии) и мышечной спастичности. Он нашел также применение по ряду косметических показаний, в частности в консервативном сокращении количества морщин угрюмости на лице, а также при лечении гипергидроза (усиленной потливости).
В настоящее время существуют два препарата на основе ботулинического токсина типа А, одобренных для терапевтического использования на людях, - это ВОТОХ® (Осийпит®; А11егдап 1пс., йуте, СА) и БУ8РОРТ® (8рех\хооб Рйагтасеибса1з. Ыб.; и.К.). Обе эти композиции поставляются врачам в лиофилизированном виде (после сублимационной сушки) и подлежат восстановлению непосредственно перед использованием.
Учитывая различия между отдельными пациентами в необходимой дозировке, возможна существенная разница в дозах, назначаемых каждому конкретному пациенту. Кроме того, по ряду показаний врачи могут назначать лишь небольшую часть содержимого приготовленной ампулы в течение довольно длительного времени, который может составлять до нескольких часов. Несмотря на то, что в одном из опубликованных исследований указано, что жидкие композиции на основе ботулинического токсина можно повторно замораживать и оттаивать с сохранением практически неизменного действия (Шанц и Коттер, 1978), в более поздних работах, посвященных оценке активности восстановленного токсина, доказано, что ВОТОХ® теряет, по меньшей мере, 44% эффективности после восстановления и хранения в стандартном холодильнике (порядка 4°С) в течение 12 ч. Более того, в случае хранения восстановленной композиции в низкотемпературной камере при температуре -70°С она по прошествии двух недель теряет порядка 70% эффективности (Гартлан и Хоффман, 1993).
По этой причине рекомендуется не использовать такие композиции позднее, чем через 4 ч после восстановления, так как это может привести к существенной убыли лекарства с соответствующим увеличением затрат для пациента.
Учитывая вышесказанное, возникает потребность в готовой к употреблению жидкой композиции на основе ботулинического токсина, которая была бы пригодной к удобной отгрузке, хранению и применению в соответствии с нуждами практических врачей. Такая композиция и предлагается в соответствии с настоящим изобретением.
Краткое изложение сущности изобретения
Целью изобретения является получение устойчивых жидких композиций на основе ботулинического токсина для использования в составе фармацевтических препаратов. Преимущество предлагаемых композиций состоит в том, что в отличие от некоторых уже имеющихся на рынке, они демонстрируют устойчивость в жидком виде при хранении в течение длительного времени (год и более) при стандартных температурах холодильника (приблизительно 4±2°С, или порядка 2-8°С, или, в более общем случае, в пределах от 0 до 10°С). В соответствии с одним из признаков изобретения, композиции устойчивы в жидком виде в случае хранения при комнатной температуре (порядка 25° или, в более общем случае, в пределах от 10 до 30°) в течение, по меньшей мере, полугода. Такие композиции особенно эффективны в условиях, когда лечебный эффект достигается благодаря снижению или подавлению передачи импульса от холинергических нервных волокон в какуюлибо область, в частности к мышце или группе мышц, железе или органу. Ниже по тексту описания приводятся некоторые примеры таких композиций.
В соответствии с одним из признаков изобретения, предлагается устойчивая жидкая фармацевтическая композиция, включающая изолированный ботулинический токсин и буферное вещество, обеспечивающее получение буферной области значений рН примерно от рН 5 до рН 6. Согласно этому основному варианту осуществления, токсин смешивается с буферной жидкостью с образованием жидкой композиции, имеющей рН от 5 до 6, в частности примерно от
5,4 до 5,8, а предпочтительнее -примерно от 5,5 до 5,6. Получаемая таким образом композиция оказывается устойчивой в течение, по меньшей мере, года, а также в течение, по меньшей мере, двух лет при температурах от 0 до 10°С или, по меньшей мере, 6 месяцев при более высоких температурах. В принципе, согласно изобретению можно вводить в предлагаемые композиции любые из известных серотипов ботулинического токсина (напр., серотипы А, В, С1, С2, Ό, Е, Р или С) либо другие серотипы с аналогичной биологической активностью. В соответствии с предпочтительными вариантами осуществления, используемый в композиции ботулинический токсин представляет собой токсин серотипа А или В, выделенный из ΟοδΙπάίιιιη ЬоШйпит.
В соответствии с предпочтительными вариантами осуществления, ботулинический токсин типа В присутствует в композиции в виде комплекса с молекулярной массой 700 кДа в концентрации порядка 100-20 000 ед./мл, в частности, порядка 1000-5000 ед./мл. При использовании же токсина типа А он применяется, как правило, в концентрации порядка 20-2000 ед./мл, в частности, порядка 100-1000 ед./мл.
Если в композиции применено сочетание разных серотипов, то их полезную дозировку или пределы концентрации можно определить путем соотнесения с дозами и концентрациями, приведенными в качестве примеров в описании, с учетом их соответствующей биологической активности.
Что касается буферных веществ, то для предлагаемых композиций используются физиологические буферы, которые считаются безопасными при инъекции в ткани млекопитающих, в частности человека. В качестве наиболее типичных буферов можно назвать, хотя возможный перечень ими не ограничивается, фосфатные, фосфат-цитратные, сукцинатные, ацетатные, нитратные, аконитатные, малатные и карбонатные системы. Целесообразно включить также в состав композиции какой-нибудь инертный белковый наполнитель типа альбумина из человеческой сыворотки или желатина. Следует иметь в виду, что специалистами в данной области признаны и используются ряд аналогов, приведенных выше в качестве примера буферных веществ и белковых наполнителей. Композиции токсина согласно изобретению можно помещать в любую из традиционных емкостей или ампул, надежно сохраняя при этом их эффективность.
В соответствии с одним из сопутствующих признаков изобретения, заявляется способ лечения пациентов, нуждающихся в подавлении передачи импульса от холинергических волокон, например, к отдельной мышце или группе мышц либо в область какой-либо конкретной железы, напр., к потовым железам, либо к отдельному органу с холинергической иннервацией. Кроме того, изобретение предусматривает использование предлагаемых композиций в получении медикаментов для лечения подобных заболеваний.
Ниже приведены примеры терапевтических и косметических показаний к применению композиции на основе ботулинического токсина. В качестве первых можно назвать, хотя ими возможный перечень не ограничивается, блефароспазм, косоглазие, спазм мышц половины лица, отит среднего уха, спастический колит, анизм, асинергия детрузора-сфинктера мочевого пузыря, стискивание челюстей, искривление позвоночника, мышечная спастичность, в частности обусловленная такими взятыми по отдельности или в сочетании признаками, как удар, повреждение спинного мозга, закрытая черепно-мозговая травма, корковый паралич, рассеянный склероз и болезнь Паркинсона, а также дистония (напр., спастическая кривошея, или шейная дистония, спастическая дисфония, дистония конечностей, дистония гортани и нижнечелюстная дистония, или болезнь Мейджа). Можно также вводить композицию в промежность (промежностные мышцы) пациенток во время родов с целью расслабления этих мышц. Что касается косметических показаний к применению композиции, то они могут включать ее введение в мышцы, отвечающие за образование морщин на лице или борозд на бровях. Кроме того, применение композиции показано при миофасциальных болях, головной боли при мигрени, сосудистых расстройствах, невралгии, невропатии, артритных болях, болях в спине, усиленной потливости, ринорее (истечении слизи из носа), астме, повышенном слюноотделении и избыточном выделении желудочного сока.
В качестве конкретных путей введения композиций согласно изобретению используются внутримышечный, подкожный или с использованием электрофореза. Так, например, в ходе исследований, проведенных в целях подтверждения идеи изобретения, было обнаружено, что ботулинический токсин типа В демонстрирует высокую эффективность в лечении шейной дистонии при внутримышечном введении в разделенных на курс лечения или разовых суточных дозах в пределах от 5000 до 10 000 единиц.
В соответствии с другим аспектом изобретения, предлагается способ лечения пациентов, обладающих повышенным иммунитетом или резистентностью к какому-либо конкретному серотипу ботулинического токсина, с помощью устойчивой жидкой композиции, включающей другой серотип. Так, например, пациента, невосприимчивого к серотипу А ботулинического токсина, можно лечить устойчивой жидкой композицией, содержащей любой из серотипов
B, С1, С2, Ό. Е, Р или 6, а пациента, невосприимчивого к серотипу В - композицией, содержащей любой из серотипов А, С1, С2, Ό, Е, Р и
C, с получением пролонгированной эффективности.
Указанные и другие цели и признаки изобретения с большей очевидностью явствуют из нижеследующего детального описания в сочетании с прилагаемыми иллюстрациями.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение направлено на получение устойчивых жидких фармацевтических композиций на основе ботулинического токсина, а также на некоторые применения таких композиций. Хотя в настоящее время на рынке имеются препараты на основе ботулинического токсина для самого разнообразного применения в терапии и косметике, учитывая неустойчивость активного токсинного ингредиента раствора, приходится восстанавливать композиции из лиофилизированных ингредиентов, к которым предъявляются строгие требования в отношении хранения. Так, например, ВОТОХ® выпускается в виде лиофилизированного порошка, который необходимо отгружать и хранить в морозильной камере при температуре -5°С или ниже с последующим восстановлением путем добавления отмеренного количества солевого раствора непосредственно перед приме нением. Рекомендуется вводить композицию пациенту не позднее, чем через 4 ч после восстановления, а также охлаждать в течение этого времени любой восстановленный продукт (ΡΌΚ, 1997); замораживание и оттаивание такого продукта не рекомендуются (Хоффман, 1993).
Согласно изобретению заявляется устойчивая жидкая композиция, содержащая ботулинический токсин и демонстрирующая устойчивость в жидком виде в течение, по меньшей мере, одного года при стандартных температурах холодильника, а также в течение, по меньшей мере, шести месяцев при комнатной температуре. Преимущество такой композиции состоит в том, что она не требует каких-либо особых мер по хранению или транспортировке и, кроме того, позволяет уменьшить вероятность ошибочного разведения токсина, которая могла бы привести к передозировке.
I. Определения
Используемый в описании термин стабильный или устойчивый подразумевает сохранение биологической активности или эффективности биологически активного вещества, более конкретно ботулинического токсина, в течение заданного или неопределенного времени.
Термин ботулинический токсин относится к биологически активному белку или белковому комплексу, который получают, как правило, из бактерии С1о81пбшш Ьо1и1шиш. Он применим к любому из, по меньшей мере, восьми известных разных в серологическом отношении токсинов (А, В, С1, С2, Ό, Е, Р и 6), а также к любым другим ботулиническим токсинам, обладающим такой же общей способностью к подавлению передачи от холинергических нервных волокон и формирующим активную молекулу. В ряде случаев этот термин можно также отнести к белку-носителю, который выводится тоже из С. Ьо1и1шиш и образует комплекс с активной молекулой, как описано ниже в разделе ΙΙΙΑ. Как показано ниже, разные серотипы ботулинического токсина связаны между собой фармакологически, но различаются в иммунологическом плане. Как правило, активная молекула токсина имеет размеры приблизительно от 145 до 170 кДа. Применительно к настоящему изобретению, будем считать, что белок токсина включает токсины и белкиносители, изолированные от естественных источников, а также соответствующие токсины и белки-носители, которые получают путем рекомбинации с использованием известных технологий. Кроме того, термин ботулинический токсин охватывает белки, содержащие аминокислотные последовательности, которые включают консервативные аминокислотные замены, в том числе делении, по сравнению с известными последовательностями ботулинического токсина, как это будет показано ниже.
Биологическую активность ботулинического токсина следует понимать как его способность блокировать передачу нервного возбуждения в зонах синапсов, имеющих ацетилхолиновые рецепторы, посредством блокирования выхода ацетилхолина из нервных окончаний. В нижеследующем тексте этот термин используется попеременно с терминами подавление холинергической передачи, подавление холинергического импульса, редукция холинергического импульса, а также с их различными видоизменениями. Анализы ίη νίΐτο для оценки биологической активности токсина включают в себя, как показано ниже, пробу на БЭ50 (полулетальную дозу) на мышах. Единица активности определяется в рамках такой пробы как количество белка токсина, необходимое для того, чтобы вызвать гибель 50% мышей, тестированных с такой дозировкой. Функциональное определение этого термина приведено ниже в примере 2.
Наиболее распространенные аминокислоты обозначаются здесь через их одно- или трехбуквенные сокращения: аланин (А, А1а), цистеин (С, Сук), аспаргиновая кислота (Ό, Акр), глутаминовая кислота (Е, С1и), фенилаланин (Е, РЬе), глицин (С, С1у), гистидин (Н, Ηίκ), изолейцин (I, 11е), лизин (К, Ьук), лейцин (Ь, Ьеи), метионин (М, Ме1). аспарагин (Ν, Акп), пролин (Р, Рго), глутамин (О, С1п), аргинин (В, Агд), серин (8, 8ег), треонин (Т, ТЬг), валин (V, Уа1), триптофан (А, Тгр), тирозин (Υ, Туг).
Термин жидкие фармацевтические композиции относится к фармацевтически активным составам лекарства или биопрепарата, которые можно хранить в жидком фармацевтическом наполнителе типа буферированного солевого раствора или физиологического буферного вещества, в течение достаточно длительного времени. Композиция может представлять собой концентрированный состав, который перед употреблением разбавляют в такой же или другой жидкости.
Термин буфер (буферное вещество) относится к соединению (обычно соли), которое при его растворении в водной среде служит для поддержания концентрации свободного иона водорода в растворе в пределах определенного диапазона значений рН, когда ионы водорода добавляются к раствору или выводятся из него. Если соль или раствор выполняет эту функцию, считается, что они обладают буферным действием или буферируют раствор в таком диапазоне. Как правило, буферное вещество обладает надлежащей буферной емкостью в пределах ±1 единицы рН от его рК. Физиологическим буферным веществом считается такое буферное вещество, которое нетоксично для млекопитающих, в частности людей, при его введении в составе фармацевтического препарата. Ниже приведен ряд примеров физиологических буферных веществ, пригодных для целей изобретения.
Фармацевтически приемлемой жидкостью является такая жидкость, которая считается безопасной при употреблении или введении в организм млекопитающих, в частности людей.
Термин белок-наполнитель в том понимании, как он используется в тексте описания, относится к белкам, которые вводятся в фармацевтически активный препарат, не добавляя ему в сколько-нибудь существенной степени биологической активности. В качестве примеров белков-наполнителей можно назвать, хотя ими возможный перечень не ограничивается, сывороточные альбумины, в частности альбумин из человеческой сыворотки, и желатин. Такие белки должны быть предпочтительно не иммуногенными для видов млекопитающих, которым назначается фармацевтическая композиция.
Используемый ниже по тексту и, в частности, в пунктах формулы изобретения термин содержащий следует понимать в смысле включающий, имеющий в своем составе или характеризующийся наличием. Какой-либо состав или способ, содержащий элементы А, В и С, может включать, в дополнение к А, В и С, другие ранее не указанные элементы, например, Х или Υ.
Понятие около в том смысле, в каком оно используется ниже по тексту и, в частности, в пунктах формулы изобретения, означает приблизительно или близко к. Применительно к численным значениям, его можно интерпретировать, не будучи связанными каким-либо точным численным выражением, как некоторое оценочное значение, составляющее ±10% от ранее указанного значения или диапазона.
Что касается всех остальных используемых в описании терминов, то их следует толковать с учетом обычных определений, известных специалистам в данной отрасли знаний или приводимых в общепринятых медицинских или научных словарях.
II. Ботулинический токсин
Как было сказано выше, ботулинический токсин представляет собой полипептидный продукт, получаемый из различных штаммов бактерии С1окйтбшш ЬоФБпит. Эти штаммы продуцируют, по меньшей мере, восемь известных токсинов, различающихся в серологическом отношении (А, В, С1, С2, Ό, Е, Е и С). Каждый из штаммов С. Ьагаб т и С. ЬШупсит продуцируют единственный серотип, подобный, соответственно, серотипам Е и Е (Симпсон, 1993). Как правило, молекула токсина имеет размеры от 145 до 170 кДа. В некоторых случаях активная молекула токсина состоит из двух цепей с дисульфидной связью, образованных из полипептида-предшественника. Так, например, ботулинический токсин типа В продуцируется из одиночного полипептида-предшественника в 150 кДа, который разрывается с образованием двух фрагментов с дисульфидной связью - тя9 желой цепи (Н-цепи) в 100 кДа и легкой цепи (Ь-цепи) в 50 кДа при максимальной активности. Встречающийся в природе токсин демонстрирует нековалентную связь с нетоксичными белками-носителями, также продуцируемыми бактерией С. ЬоШйпшп. Эти белки-носители связываются с цепями токсина с образованием комплексов, имеющих массу до 900 кДа (Тип А) и предпочтительно порядка 700 кДа для типа В. Белки-носители претерпевают совместную очистку с токсином, образуя оптимальную составную часть описываемых здесь композиций.
Разные серотипы ботулинического токсина демонстрируют различную специфичность по связывании в клетках. Так, например, токсины типа А и типа Е связываются, по-видимому, с одним и тем же синаптосомальным центром связывания, тогда как токсин типа В связывается с отличным от него центром и не создает конкуренции в связывании в центре, свойственном для типов А/Е (Меллинг, 1988). Не ограничиваясь лишь какой-то конкретной теорией или механизмом действия, укажем тем не менее, что, по-видимому, Н-цепь токсина обеспечивает нейронное цитосвязывание и пенетрационную активность, в то время как действие Ь-цепи направлено на ингибирование выделения ацетилхолина в зоне синапса. Кроме того, можно полагать, что ботулинические токсины типов А и В используют несколько разные механизмы для подавления выхода ацетилхолина: тип А расщепляет синаптически ассоциированный белок-25 (8ΝΑΡ-25), в то время как тип В расщепляет везикулярно ассоциированный мембранный белок (УАМР, или синаптобревин), причем оба указанных белка являются компонентами выделения синаптических пузырьков из синапсов.
Все серотипы токсина С. ЬоШшит дают применительно к млекопитающим одинаковый физиологический результат, подавляя или блокируя деятельность холинергического синапса, что приводит к частичному или полному параличу мышц, либо к блокаде, либо к подавлению функции органа или железы, в зависимости от места введения. Соответственно, композицию согласно изобретению можно использовать с любым из серотипов ботулинического токсина, получаемых из С1о81ибшт ЬоШ1йшт. которые характеризуются описанным выше биологическим действием. Последовательности аминокислот большинства известных сегодня серотипов также известны или могут быть определены традиционными способами. Следует понимать, что применительно к настоящему изобретению композиция на основе ботулинического токсина должна также включать получаемый рекомбинантной инженерией ботулинический токсин, содержащий консервативные аминокислотные замены по сравнению с известными последовательностями. Как правило, эти замены можно произвести, исходя из стандартных заменяющих классов встречающихся в природе аминокислот.
Так, например, в качестве стандартных заменяющих классов могут выступать шесть классов, основанных на наличии общей боковой цепи и наивысшей частоте замещений в природных гомологичных белках, как это определено, например, известной специалистам стандартной матрицей частоты замещений типа матрицы Дайхоффа. В рамках этой матрицы, например, существуют следующие классы: класс I: Суз; класс II: 8ет, Тйт, Рго, Нур, А1а и С1у, имеющие небольшие алифатические боковые цепи и боковые цепи с ОН-группами; класс III: Азп, Азр, 61и и 61п, имеющие нейтральные или отрицательно заряженные боковые цепи, способные к образованию водородных связей; класс IV: Н1з, Агд и Ьуз, имеющие основные полярные боковые цепи; класс V: Не, ναΐ и Ьеи, имеющие разветвленные алифатические боковые цепи, и Ме1; класс VI: Рйе, Туг и Тгр, имеющие ароматические боковые цепи. Кроме того, каждая группа может включать аналоги аминокислот, такие как орнитин, гомоаргинин, Ν-метиллизин, диметиллизин или триметиллизин в классе IV и галогенированный тирозин в классе VI. Далее, в указанные классы могут входить как Ь-, так и Ό-стереоизомеры, хотя для замен предпочтительны Ь-аминокислоты. В качестве примера консервативной замены можно указать замену Азр на какой-либо другой остаток класса III, например, Азп, 61п или 61и.
Хотя активность ботулинического токсина можно определить с использованием традиционного электрофизиологического анализа, ее измеряют, как правило, путем введения токсина в организм мелких животных типа мышей с последующим определением дозы токсина, необходимой для умерщвления в среднем 50% тестируемых животных. Эта доза называется половинной летальной дозой (ЬЭ50) и задается в качестве единицы биологической активности. Дозы, применяемые в терапевтических целях, условно приводятся к указанным единицам. Как более детально показано ниже в разделе ШВ, разные серотипы могут демонстрировать различную эффективность при лечении людей, выражаемую в единицах ЬЭ50. Лечебные дозы можно титровать на основе этих данных, пользуясь известными специалистам методами.
III. Приготовление ботулинического токсина
В этом разделе описываются способы приготовления ботулинического токсина, подлежащего использованию в составе композиции согласно изобретению.
А. Очистка ботулинического токсина из С. Ьо1и1шит.
Здесь приводятся общие методы приготовления очищенного ботулинического токсина из культивированной бактерии С1оз1пбшш Ьо1и11пит на примере ботулинического токсина типа
В. Кроме перечисленных здесь конкретных методов, специалистам известны и иные технологии приготовления ботулинического токсина типов А и В, а также других известных серотипов.
Как уже было показано выше, активным ингредиентом в композициях согласно изобретению является белковый компонент экстрактов С1ойпбшш ЬоШйпит. известный под названием ботулинический токсин, активный компонент которого имеет молекулярную массу от 145 до 175 кДа и который присутствует обычно в природном белковом комплексе с гораздо большей молекулярной массой. В этом разделе приводятся примеры методов очистки различных ботулинических токсинов, причем особое внимание уделяется серотипам А и В ботулинического токсина. Следует иметь в виду, что в общенаучной литературе даются указания по альтернативным методам очистки токсинов, так что специалисты легко смогут выбрать нужный метод и применить его к данному конкретному токсину, который предполагается использовать в композициях, приготовленных в соответствии с изобретением.
В общем случае ботулинический токсин типа В выделяют в виде комплекса из процесса ферментации с высоким титром культур С1о§бгбшт Ьо1и1шит с использованием хорошо известных технологий. В Соединенных Штатах исходные культуры могут получить организации, владеющие лицензией, выданной Центром по борьбе с заболеваниями (СБС) или другим полномочным органом в соответствии с национальными нормами по распределению микроорганизмов. Подходящими исходными материалами для очистки ботулинического токсина типа В являются С1ойпбшт Ьо1и1шит Окга или Веап В. Замороженные исходные культуры засевают в контрольные пробирки, в которых содержится культуральная среда типа тиогликолята или триптиказ-пептона, а также культуры, выращенные и обработанные с применением технологии, описанной ниже и более подробно изложенной в патенте США 5696077, включенном в список использованной литературы.
Если говорить коротко, культуры выращивают с использованием известных способов до получения достаточного количества бактериального исходного материала с целью добиться нужного выхода токсина. Как правило, для получения 0,5 г токсина требуется около 20 л бактериальной культуры. Температуру культуры доводят до комнатной и производят регулировку ее рН на значение 3,5 с помощью серной или другой подходящей кислоты. Дают отстояться образовавшемуся остатку и супернатант декантируют. Затем к осадку добавляют хлорид кальция при перемешивании и увеличивают объем с помощью деионизированной воды, так чтобы конечная концентрация СаС12 составила порядка 150 мМ. Повышают рН примерно до уровня нейтральности (6,5) и осветляют раствор токсина центрифугированием. Производят повторное осаждение токсина путем доведения рН до 3,7.
Дают образовавшемуся осадку отстояться и собирают центрифугированием токсичный осадок, после чего его повторно растворяют в буферном веществе (рН 5,5) и в течение ночи производят его исчерпывающий диализ против того же буферного вещества. Далее центрифугируют диализированный токсин и супернатант хроматографируют на анионообменной колонке (ΌΕΑΕ). Собирают не связавшуюся фракцию и проверяют ее на содержание белка. Осаждают из этой фракции комплексы токсина путем добавления сульфата аммония до примерно 60%ного насыщения. Осадок растворяют в фосфатном буферном веществе и диализуют против того же буферного вещества (рН 7,9). Полученный очищенный препарат токсина можно использовать для приготовления композиции.
Методика приготовления ботулинического токсина типа А также хорошо известна специалистам в данной области. Так, например, Хемблтон с соавторами (1981) и Меллинг с соавторами (1988) (соответствующие работы приведены в списке литературы) описывают получение и очистку ботулинического токсина типа А из ОоЧпбшш Ьо1и1шит типа Α ЫСТС 2916. Культуры бактерий выращивают из прошедшего проверку исходного раствора и засевают в 30-литровый ферментер, работающий в анаэробных условиях, с использованием традиционных стандартных режимов. Непрерывно контролируют выход токсина (например, посредством определения ΕΌ50), и по достижении максимального выхода (ориентировочно 2х106 ЕЭ50/мл для мышей) подкисляют культуру (создавая значение рН=3,5 с помощью 3 N Н28О4), после чего собирают токсин центрифугированием. Этот осевший неочищенный токсин повторно растворяют и экстрагируют фосфатным буфером с концентрацией 0,2 М (рН 6,0), а затем производят обработку рибонуклеазой (100 мкг/мл при 34°) и осаждение с использованием ΝΗ48Ο4 (60%-ное насыщение при 25°). Далее осадок ресуспендируют и подвергают ионообменной хроматографии ЭЕАЕ-8ер11асе1 при рН
5,5 (после предварительной адсорбции). Производят контроль фракций на активность, а активные фракции подвергают повторному осаждению с использованием NΗ48О4 (60%-ное насыщение при 25°). Осадок можно сохранить и повторно растворить для получения композиции согласно изобретению, как описано ниже.
Предлагаемые композиции предпочтительно содержат связывающий комплекс токсина типа приготавливаемых с использованием методов, описанных выше применительно к ботулиническим токсинам типов А и В, либо в них применяются эквивалентные формы ботулинического токсина типов Сь С2, Ό, Е, Е или С, приготавливаемых в соответствии с известными методами. Титр токсина определяют путем последовательного разведения восстановленного связывающего комплекса токсина в белке-наполнителе, например в альбумине из человеческой сыворотки, с предотвращением образования пузырьков и слишком интенсивного взбалтывания, как при вихревом перемешивании. В соответствии с оговоренной методикой, титр определяется в ходе испытания на летальность мышей, такого как испытания на РО, . описанного в примере 2. Берут рабочий экземпляр культуры, который разбавляют, разбивают на аликвотные части и лиофилизируют для целей хранения. Этот исходный раствор проверяют в ходе анализов на определение концентрации белка, чистоты и фармацевтической пригодности с использованием известных методов, описанных ниже в примере 2.
IV. Устойчивые композиции на основе ботулинического токсина
В ходе работы над настоящим изобретением было неожиданно обнаружено, что ботулинический токсин можно приготавливать и хранить в виде устойчивой жидкой композиции, которая сохраняет свою эффективность в течение длительного времени, например, по меньшей мере, порядка 1-2 лет, при температурах холодильника (т.е. порядка 5±3°С, конкретнее порядка 4±2°С или, в более общем случае, 010°С) либо в течение, по меньшей мере, 6 месяцев при комнатной температуре (т.е. порядка 25°С или, в более общем случае, 10-30°С). Такую композицию можно назначать человеку или другим видам млекопитающих в виде фармацевтического препарата без необходимости дополнительного восстановления силами врачей. Композиция характеризуется значениями рН от 5 до 6, предпочтительнее от 5,5 до 5,6, которые поддерживаются благодаря применению соответствующих буферных растворов. Композиция может также включать один или более белковнаполнителей.
В примере 1 приведено детальное описание процесса приготовления композиции на основе ботулинического токсина (типа В) с концентрацией 5000 ед./мл. Совершенно очевидно, что такие режимы приготовления можно применить и к другим серотипам ботулинического токсина, например к ботулиническому токсину типа А, с концентрациями, требуемыми для этих серотипов, с тем чтобы получить устойчивые композиции в удобных лекарственных формах.
Если говорить коротко, концентрированный препарат ботулинического токсина наподобие очищенных препаратов токсина, описанных выше применительно к типам А и В, примешивают к разбавителю типа сукцинатного буфера с рН от 5 до 6, предпочтительнее порядка 5,6. В случае с токсином типа В желательно иметь концентрацию порядка 5000 ед./мл (по результатам оценки в ходе пробы ЬП50 на мышах), однако, необходимой или желательной может оказаться и любая концентрация примерно в пределах 100-20 000 ед./мл или даже выше, в зависимости от отпускаемой дозы. В случае с токсином типа А выгоднее работать с концентрациями в пределах от 20 до 2000, предпочтительнее порядка 100-1000 ед./мл. Для целей изготовления фармацевтических препаратов берут пробу композиции и тестируют ее на предмет наличия возможных микробных загрязнителей (биологического груза), после чего подвергают стерильной фильтрации в стеклянных или полипропиленовых сосудах для последующего отпуска пациентам. Конечный продукт можно хранить в жидком виде в течение, по меньшей мере, одного года, предпочтительнее более двух лет при температуре 0-10°С без сколько-нибудь существенной потери биологической эффективности, как это видно из пробы ЬП50 на мышах (пример 2), где потери составили <20%.
В качестве упомянутого выше разбавителя можно использовать любую фармацевтически приемлемую жидкость, которая не оказывала бы неблагоприятного действия на устойчивость комплекса и позволяла бы поддерживать устойчивые значения рН в пределах от 5 до 6. В качестве примеров особо устойчивых буферов можно назвать сукцинатные и фосфатные буферы; однако, специалистам должно быть понятно, что применение буферов для композиций согласно изобретению не ограничивается какимто конкретным из них, при условии, что буфер будет обеспечивать приемлемый уровень стабильности рН, или буферной емкости, в указанном диапазоне значений. Как правило, буфер имеет надлежащую емкость в пределах единицы рН от его рК (Лечмен с соавт., 1986). Применительно к настоящему изобретению, сюда относятся буферы со значениями рК в примерном диапазоне от 4,5 до 6,5. Пригодность буфера можно оценить на основе публикуемых таблиц значений рК или определить эмпирически с использованием широко известных методик. Кроме уже упоминавшихся сукцинатных и фосфатных буферов, возможно применение других фармацевтически пригодных буферов, в том числе ацетатных, нитратных, аконитатных, малатных и карбонатных (Лечмен). Значение рН раствора можно отрегулировать на требуемую конечную точку в пределах данного диапазона с использованием фармацевтически приемлемой кислоты, например соляной или серной, либо основания, например едкого натра.
В качестве белка-наполнителя, добавляемого к композиции, можно брать любой из множества фармацевтически приемлемых белков или пептидов. Предпочтительнее выбирать белок-наполнитель по его пригодности к введению в организм млекопитающего без риска иммунной реакции. Так, например, альбумин из человеческой сыворотки прекрасно подходит для фармацевтических композиций, назначаемых людям, и наоборот, при лечении крупного рогатого скота следует предпочесть бычью сыворотку. Для этих целей можно также использо вать другие известные фармацевтические белковые наполнители, такие как желатин. Наполнитель вводят в композицию в концентрации, достаточной для предотвращения адсорбции белкового комплекса токсина на рабочем сосуде или пробирке. Концентрация наполнителя изменяется в соответствии с его видом и концентрацией комплекса токсина в композиции. В качестве примера можно указать, что в ходе исследований, проведенных в целях подтверждения идеи, положенной в основу изобретения, было установлено, что концентрация альбумина из человеческой сыворотки, равная 0,5 мг/мл, достаточна для работы с композициями с содержанием ботулинического токсина типа В 5000 ед./мл и в то же время не вызывает сколько-нибудь заметной иммунной или аллергической реакции у большей части людей; в общем случае, достаточная защита обеспечивается при выборе концентраций в пределах 0,05-1 мг на 100 ед. токсина В.
В литературе описаны также подходящие концентрации наполнителя для стабилизации ботулинического токсина типа А. Так, например, ВОТОХ® стабилизируют добавлением 0,5 мг альбумина на 100 единиц активности токсина (ΡΌΕ).
V. Практическое применение
А. Использование композиций на основе ботулинического токсина в лечебных и косметических целях.
Фармацевтические композиции согласно изобретению можно использовать по целому ряду показаний, когда желательно добиться подавления или блокирования передачи нервного возбуждения от холинергических волокон, и в частности (но не только), такой передачи, которая связана с регулированием работы гладких или скелетных мышц. В этом разделе приводятся примеры расстройств, для лечения которых можно использовать предлагаемые композиции, однако, следует понимать, что возможности применения изобретения не ограничиваются этими примерами. Ниже в части В приведены типовые дозировки и способы введения композиций для некоторых из рассматриваемых показаний.
Ботулинический токсин, и в частности токсин типа А, показал себя эффективным средством лечения спастических мышечных нарушений. Применив схему одноразового лечения (которая может включать многократные внутримышечные инъекции), можно добиться снятия неконтролируемого мышечного спазма на период до нескольких месяцев. Так, например, Управление США по контролю за продуктами и лекарствами допустило ВОТОХ® (ботулинический токсин типа А) к применению при локальных инъекциях в глазную впадину для лечения блефароспазма. Среди других показаний можно назвать другие очаговые дистонии, такие как дистония гортани, синдром Мейджа (дисто ния нижней челюсти; челюстно-лицевая дистония), спастическая кривошея (Хардман с соавт., 1996), дистония конечностей, анизм и асинергия детрузора-сфинктера мочевого пузыря, блефароспазм, косоглазие, спазм мышц половины лица, а также ринорея, отит среднего уха, повышенное слюноотделение, астма, спастический колит, избыточное выделение желудочного сока (см., напр., патент США 5766005), головная боль при мигрени, сосудистые нарушения, невралгия или невропатия (патент США 5714468; νθ 953041), артритные боли (νθ 9517904), расстройства желудочно-кишечного тракта с вовлечением поперечно-полосатой или гладкой мышцы (патент США 5674205), расслабление промежности при родах (патент США 5562899) или ослабление стискивания челюстей (патент США 5298019). Проводились также местные инъекции ботулинического токсина типа А для достижения косметического ослабления мышечного тонуса, вызывающего эффект морщин угрюмости на лице, и для выправления бровей (Френкель, 1998); кроме того, установлено, что он показан при подкожных инъекциях для лечения гипергидроза (усиленной потливости; νθ 9528171; патент США 5766605), а также для лечения юношеского искривления позвоночника (патент США 5053005), коркового паралича в подростковом и взрослом возрасте (патент США 5298019; νθ 9305800), а также спазмов и непроизвольных сокращений, вызываемых корковым параличом, рассеянным склерозом или болезнью Паркинсона (патент США 5183462). Все вышеперечисленные источники целиком приведены здесь в качестве справочных материалов.
В ходе опытов, проведенных для подтверждения идеи, положенной в основу изобретения, было проведено тестирование устойчивых жидких композиций, содержащих ботулинический токсин типа В, которые оказались эффективными при лечении шейной дистонии, известной также под названием кривошея, т.е. такого состояния, при котором больной испытывает непроизвольные спазмы и мышечные сокращения в области головы, шеи и позвоночника, что проявляется в поворотах или качаниях головы. Кроме того, такое состояние часто сопровождается дрожанием и мышечно-скелетными болями. В целом этиология этого расстройства неизвестна, однако, можно предполагать, что оно является следствием нарушения функции центральной нервной системы, приводящего к повышенной активности задействуемой при этом мускулатуры. Современные схемы лечения, включая применение антихолинергических и дофаминергических средств, миорелаксантов, спазмолитиков и противосудорожных средств, не дают сколько-нибудь длительного облегчения. Ботулинический токсин типа В оказывается эффективным при лечении этого состояния благодаря тому, что он вызывает ло кальный паралич или парез, характеризующийся временем начального развития, равным, как правило, примерно 1 неделе после инъекции, и продолжительностью реакции от 1 до 4 месяцев.
Композиции на основе других серотипов ботулинического токсина полезны при первичном лечении любого из состояний, описанных ранее применительно к типу А. Кроме того, как сказано выше, ботулинический токсин типов В6 может быть также применен для лечения пациентов, которые оказались невосприимчивыми к ботулиническому токсину типа А вследствие их иммунной реакции на этот токсин. И наоборот, серотип А можно использовать для пациентов, невосприимчивых к серотипу В или к любому из других серотипов токсина. В соответствии с изобретением, возможно приготовление и использование композиций на основе одного или более серотипов ботулинического токсина.
Вообще говоря, следует иметь в виду, что учитывая их сходное биологическое действие, разные типы ботулинического токсина можно использовать как взаимозаменяемые средства лечения различных нарушений, в частности, связанных с мышечной спастичностью. Тем не менее, как это показано ниже на примере типов А и В, эффективные дозы (выражаемые в БЭ5о или в единицах биологической активности) могут существенно меняться от одного серотипа к другому. Оценки эквивалентных дозировок можно произвести на основе известных доз, описанных применительно к любому из тестированных токсинов.
В. Дозировка и способы введения.
Известно, что ботулинический токсин является мощным и в ряде случаев смертельным токсином для животных. Тем не менее, как сказано выше, его можно безо всякого риска применять для лечения людей при условии соблюдения достаточных мер предосторожности в выборе способа введения и назначении дозы.
Дозы различных форм ботулинического токсина могут меняться в зависимости от используемого серотипа токсина. Так, например, в ходе опытов, проведенных в целях подтверждения идеи, положенной в основу изобретения, было установлено, что при сравнении в терминах единиц БЭ5о для мышей токсин типа А (ВОТОХ®) оказался в 4-6 раз эффективнее токсина типа В при индукции паралича у обезьян, как это следует из электрофизиологических замеров на отобранных скелетных мышцах. Это наблюдение согласуется с экспериментальными результатами, полученными на крысах, которые демонстрируют значительные различия в количествах этих двух токсинов, требуемых для того, чтобы вызвать паралич конечностей у крыс (Селлин; Джексон). Принимая во внимание указанные наблюдения, можно получить оценочные значения эквивалентных доз или определить их эмпирически силами квалифицированных врачей-практиков.
Рекомендуемая доза может также изменяться в соответствии с историей болезни пациента. Так, отмечается, что пациенты, получившие многократные дозы, например, токсина А, оказались резистентными к дальнейшему лечению, требуя более значительных доз для достижения аналогичного эффекта с течением времени. Не ограничиваясь лишь каким-то конкретным механизмом действия, укажем, тем не менее, что это явление связано с развитием у пациента иммунной реакции, специфичной к определенному серотипу. Приводимые значения образования антител у пациентов, подвергнутых многократной терапии с использованием токсина типа А, колеблются примерно от 3 до 57%. Соответственно, рекомендуется, чтобы в случае, когда врач выбирает методику смены серотипов в процессе реализации данной схемы лечения, начальная доза нового серотипа рассчитывалась не на основе имеющегося лекарственного анамнеза, а исходя из условий для пациента, еще не подвергавшегося лечению.
В качестве необходимых способов введения могут быть выбраны любые из них, которые способны обеспечить подачу активного ингредиента токсина к пораженной ткани без возникновения тяжелых побочных эффектов для пациента. В число этих методов входят, без какихлибо ограничений, внутримышечные инъекции, местное введение, подкожное и периневральное введение, электрофорез и пр. Специалистам хорошо известны специальные процедуры введения ботулинических токсинов, в том числе приемы, направленные на ограничение системного распределения активных компонентов. Можно применить электромиографию для идентификации и более точной локализации специфических групп мышц, в частности для лечения с участием мышц, идентификация которых затруднена, например, мышц в глазной впадине, гортани и в крыловидной зоне, а также мышц пациентов, страдающих ожирением.
Лечение дистоний осуществляется обычно посредством ведения токсина поблизости от иннервированных зон пораженной мышцы, чаще всего с помощью иглы для внутримышечных инъекций. Как правило, создаваемый при этом местный паралич может дать пациенту облегчение на период до 3 или 4 месяцев. Можно произвести тестирование пациентов на меньших дозах с их последующим индивидуальным титрованием до оптимальной дозировки, с тем чтобы добиться нервно-мышечной блокады, достаточной для коррекции любой дисфункции без возникновения выраженного паралича. Если пациент оказывается невосприимчивым к действию токсина, может быть показано изменение дозы. Преимущество настоящего изобретения как раз и состоит в том, что оно позволяет устранить традиционную проблему дозировки, связанную с неустойчивостью токсинного материала в растворе, способной привести к допол19 нительной неопределенности в выборе нужной дозы.
Рекомендуемые дозы ботулинического токсина типа А хорошо известны специалистам в данной области; они были определены для целого ряда показаний. Так, например, для лечения косоглазия рекомендуется вводить дозу ботулинического токсина типа А, равную 1,25-
2,5 ед., в вертикальные мышцы при горизонтальном косоглазии менее 20 диоптрий, а при горизонтальном косоглазии более 20 призменных диоптрий следует брать дозу в 2,5-5 ед. (ΡΗνδίοίαη'δ Эс5к КеГегепсе, 5Г’1 Εάίΐίοη).
Ботулинический токсин типа А используют также для лечения блефароспазма с использованием доз в 1,25-2,5 ед., инъецируемых с помощью иглы калибра 27-30 в медиальную и боковую претарзальную области огЫсйап’, оси11 верхнего века и в боковую претарзальную область огЬ1си1ап8 оси11 нижнего века. Ожидается, что последствия такого лечения будут длиться в течение около 3 месяцев; при повторном лечении дозу можно увеличить вплоть до двукратной величины, в зависимости от реакции пациента. Рекомендуется в течение 30-дневного периода вводить суммарную дозу не более 200 ед. токсина типа Α (Ρΐινδίααη'δ Эс^к КеГегепсе, 5 Г’1 ЕбШоп).
В примере 3 приведены типовые результаты исследования пределов дозировки при использовании токсина типа В для лечения шейной дистонии (кривошеи) с помощью композиции согласно изобретению. В ходе этих исследований, содержание которых также изложено ниже, в распоряжение лечащих врачей была предоставлена жидкая композиция на основе ботулинического токсина типа В согласно изобретению с указаниями по ее хранению в больничном холодильнике с регулированием температуры в пределах от 2 до 8°С. Как правило, композицию брали из партий, приготовленных и хранившихся при рекомендуемой температуре в течение 6-12 месяцев. Врачи получали примерно 6-месячный запас композиции.
Если говорить коротко, пациентам вводили различные дозы токсина путем внутримышечной инъекции в 2-4 группы поверхностных мышц шеи и/или плеча, определяемые в соответствии с врачебной оценкой поражения мышцы данным расстройством. В ходе одного из исследований вводили индивидуальные разделенные дозы порядка 100-1200 ед. с получением суммарных доз, равных 270-2280 ед. в течение периода до 398 суток. Все пациенты почувствовали улучшение состояния за время эксперимента, причем в этот период не наблюдалось ослабления эффективности композиции.
Дальнейшие исследования, проведенные в подтверждение идеи, положенной в основу изобретения, показали, что пациентов, которые оказались невосприимчивыми к действию токсина типа А, можно лечить токсином типа В. В этом случае пациенты, участвовавшие в эксперименте, продемонстрировали пониженную реактивность к токсину типа А и считались надежно вылеченными, если по окончании терапии наблюдался, по меньшей мере, 25%-ный спад суммарного показателя (спад = улучшение) по шкале оценок спастической кривошеи Тогойо ХУеЧегп (Т^8ТК8; Конски, 1994) по отношению к показателям, соответствующим исходной позиции. Вводили индивидуальные дозы токсина типа В в пределах от 150 до 1430 ед. с получением суммарных доз, равных 300-12 000 ед. в течение периода до 117 суток, как детально показано в примере 3. В целом пациенты чувствовали улучшение в ходе этого исследования, особенно при введении более значительных доз, причем нет никаких свидетельств развития блокирующих антител к токсину типа В, а также снижения эффективности композиции. В ходе другого исследования периодически вводили индивидуальные дозы токсина типа В, равные 0, 400, 1200 и 2400 ед. в течение времени до 203 суток, при этом достигалось успешное лечение кривошеи, как описано выше.
Ниже приводятся примеры, служащие лишь для иллюстрации изобретения, но никоим образом не ограничивающие возможности его применения.
Примеры
Материалы
Если не оговорено иное, все рассматриваемые здесь реагенты могут быть получены от любого признанного поставщика, осуществляющего продажи реагентов для использования в химической, биохимической, биотехнологической или фармацевтической отрасли, в зависимости от конкретных потребностей.
Пример 1. Приготовление устойчивой композиции на основе ботулинического токсина.
A. Приготовление сукцинатного буфера.
Сукцинатный буфер приготавливали партиями по 3 л с концентрацией динатрийсукцината 2,7 мг/мл и хлорида натрия 5,8 мг/мл с добавлением 0,5 мг/мл альбумина из человеческой сыворотки (Мичиганский институт биопродуктов). Использовали концентрированную соляную кислоту для регулировки значения рН буфера на 5,6. Буфер фильтровали через фильтр 0,2 мкм в герметичный контейнер типа автоклава. Перед употреблением отбирали пробу буфера и проверяли ее на рН, бактериальный эндотоксин и биологические примеси.
B. Приготовление композиции на основе ботулинического токсина.
Нужную аликвотную часть концентрированного токсина типа В разбавляли примерно в
1000 раз с использованием сукцинатного буфера (рН 5,6) до получения концентрации 5000±1000 ед./мл. Разбавленный токсин хранили в 2литровых запаянных стеклянных сосудах в качестве основного раствора. Затем его хранили при температуре 5±3°С до отгрузки материала на разливку.
Перед разливкой отбирали пробу основного раствора и проверяли ее на наличие микробного загрязнения (биологических примесей) в соответствии с известными стандартными методами. Затем раствор перекачивали перистальтическим насосом по трубам медицинского назначения и подвергали стерильной фильтрации (0,2 мкм) в стерильный сборник основного раствора, находящийся внутри разливочного бокса. Получаемый стерильно отфильтрованный основной раствор разливали в стеклянные флаконы емкостью 3,5 см3 аликвотными частями по 0,5 мл (2500 ед.), 1 мл (5000 ед.) или 2 мл (10 000 ед.).
Состав конечного продукта в контейнере приведен в табл. 1.
Таблица 1.Состав композиции на основе ботулинического токсина В
Активный ингредиент Инертные ингредиенты Концентрация
Ботулинический токсин типа В - 5000±1000 ЬЭ50 ед./мл
- Сукцинат, Фармакопея США 10 мМ
- Хлорид натрия, Фармакопея США 100 мМ
- Человеческий альбумин, разрешен Управлением по контролю за качеством пищевых и фармацевтических продуктов 0,5 мг/мл
- Соляная кислота, ΝΤ Для регулировки рН
Пример 2. Испытание композиции на основе ботулинического токсина на устойчивость.
А. Показатели устойчивости.
Ботулинический токсин типа В изготавливали, разбавляли в соответствии с описанной выше методикой до получения концентрации 2500 ед./мл и хранили аликвотными частями по 1 мл в стеклянных флаконах емкостью 5 мл при температуре 5°С в течение времени до 30 месяцев включительно. Через 0, 1, 3, 6, 9, 12, 18, 24 и 30 месяцев после первоначального хранения производили произвольный отбор аликвотных частей и проверяли их на эффективность в ходе определения ЬП50 на мышах. Растворы осматривали также на предмет их внешнего вида и проверяли на рН с использованием стандартных методик.
В табл. 2 приведены результаты тестирования аликвотных частей, отобранных в разные моменты времени. Из этих результатов видно, что композиции, приготовленные в соответствии с изобретением, устойчивы; это подтверждается сохранением эффективности в пределах диапазона, указанного для нулевого момента, в течение, по меньшей мере, 30 месяцев в случае хранения при температуре 5°С.
Таблица 2. Устойчивость композиции при 5°С
Время хранения (в месяцах) Эффективность (средняя в ед./мл) рН Внешний вида
0 1750-3250 5,5 Пригодна
1 1941 Νϋ*’ ΝΏ
3 2541 5,6 ΝΏ
6 2020 5,6 Пригодна
9 2357 5,6 Пригодна
12 2064 5,6 Пригодна
18 2318 5,4 Пригодна
24 1799 5,6 Пригодна
30 2101 5,6 Пригодна
“Пригодна = прозрачный раствор от бесцветного до светло-желтого, практически без видимых частиц. ьИспытание не проводилось.
В табл. 3 приведены результаты тестирования аликвотных частей композиции на основе ботулинического токсина типа В, приготовленной и разбитой на аликвотные части в соответствии с описанным выше, но хранившейся при температуре 25°С. Из этих результатов видно, что композиция устойчива в течение, по меньшей мере, 6 месяцев при температуре 25°С, что подтверждается сохранением средней эффективности на уровне, по меньшей мере, порядка 90%, предпочтительнее, по меньшей мере, 95%, после 6-месячного хранения и на уровне, по меньшей мере, порядка 75% от ее первоначальной эффективности после 9-месячного хранения при температуре 25°С.
Таблица 3. Устойчивость композиции при 25°С
Время хранения (в месяцах) Эффективность (средняя в ед./мл) рН Внешний вида
0 1941 5,5 Пригодна
1 2297 5,6 \чь
2 1935 5,6 ΝΏ
3 2017 5,6 ΝΏ
6 1909 ΝΏ Пригодна
9 1579 5,6 Пригодна
“Пригодна = прозрачный раствор от бесцветного до светло-желтого, практически без видимых частиц. ьИспытание не проводилось.
В. Испытания на устойчивость.
1. Определение рН композиции на основе ботулинического токсина.
Значение рН композиции на основе токсина типа В измеряли рН-метром производства фирмы Р18Йег 8с1сп11Пс Лссише! модели 50 с использованием датчика с автоматической температурной компенсацией. В качестве электрода применяли комбинированный электрод производства фирмы Οτίοη Ио55 с КС1 электродом сравнения. Определение рН осуществляли по методу стандартной двухточечной калибровки (рН 4,0, рН 7,0) согласно указаниям производителя. Проводили по три измерения для каждой пробы. Значения рН регистрировали с точностью до 2-х значащих цифр и вычисляли среднюю величину.
2. Испытание на эффективность, выражаемую в БО50. на мышах.
Для определения ЬП50 брали здоровых мышей, ранее не повергавшихся испытаниям, обоего пола весом от 18 до 22 г. По каждому разливаемому продукту проводили тестирование мышей воздействием 5-ти доз композиции на основе токсина типа В. Каждое испытание повторяли пятикратно.
Из испытываемой пробы приготавливали два исходных раствора. Исходный раствор А получали разбавлением испытываемой пробы до примерной концентрации 750 ед./мл с помощью желатино-фосфатного буфера с рН 6,2. Исходный раствор В получали 10-кратным разбавлением раствора А до 75 ед./мл. Из исходного раствора В приготавливали следующие испытательные разведения: 1:7,5, 1:10, 1:13,5, 1:18 и 1:24,3.
Мышам производили внутрибрюшинные инъекции 0,2 мл композиции с необходимым разведением. Их выдерживали в течение 4суточного постинъекционного периода, осуществляя ежедневное наблюдение. Регистрировали все летальные случаи. По прошествии четырех суток наблюдение прекращали.
Общую смертность (СИ - еишИаНуе бса1115) для разных уровней разведения рассчитывали путем суммирования количества летальных случаев от максимального разведения в сторону увеличения. Общую выживаемость (С8 - еишИаИуе 8ШУ1уог8) рассчитывали путем суммирования количества выживших особей от минимального разведения в сторону уменьшения. Процентную величину СИ определяли как СЭ/(С0+С8)х100% для каждого разведения. Разведение, соответствующее ЬИ50. определяли методом пропорционального расстояния (ΡΌ) по Риду и Мюнчу, используя разведения, дающие такие значения % СИ, которые находятся по разные стороны от 50%-ной общей смертности.
(%СЦ>50%) - 50% Пропорциональное расстояние (Ρϋ) = —----------------------(%СО>50%) - (%СЕК50%)
Полученное значение ΡΌ умножали на разность логарифмов между уровнями разведения, которые находятся по разные стороны от 50%-ной общей смертности. Это значение прибавляли к логарифму разведения со смертностью (СИ), превышающей 50, с тем, чтобы получить разведение, соответствующее ЕО50.
Вычисляли антилогарифм этого разведения для получения количества единиц ЕО50 токсина на инъецируемый объем (0,2 мл). Далее умножали это количество на 5, получая количество единиц ЕО50 на мл токсина исходного раствора В.
Единицы ЕО50 на мл исходного раствора В умножали на коэффициент разбавления (т.е. разбавление, необходимое для достижения примерной эффективности 75 ед./мл) для получения эффективности пробы. Затем рассчитывали среднее арифметическое и стандартное отклонение количества единиц ЬЭ50 на мл для 5-ти достоверных опытов.
3. Внешний вид композиции.
Внешний вид оценивали путем визуального осмотра на черном и белом фоне под ярким светом после создания слабого завихрения. При этом принимали во внимание все необходимые признаки - цвет, прозрачность и наличие видимых частиц.
Пример 3. Лечение шейной дистонии (ШД).
А. Разведение, расчет, путь введения и схема дозировки лекарства.
1. Обработка лекарства.
Заполняли флаконы лекарством для отпуска 2,0 мл (10 000 ед.), 1,0 мл (5000 ед.) и 0,5 мл (2500 ед.) не разбавленного опытного лекарства. На всех этапах приготовления старались избегать интенсивного взбалтывания и выделения пузырьков, поскольку в обоих этих состояниях возможна денатурация ботулинического токсина. Извлекали композицию из флакона, пользуясь 1-миллилитровым туберкулиновым шприцем с соблюдением максимально возможной точности экстрагируемого объема.
2. Расчет лекарства.
Пациентов, страдающих шейной дистонией (ШД), лечили токсином типа В путем введения содержимого соответствующего флакона(ов) с получением доз, указанных в приведенной ниже таблице. Расчет мышиных единиц (ед.) для постепенного увеличения дозы ведется описанным ниже способом, при этом 1 ед. представляет собой количество токсина, присутствующего в дозе, которая соответствует значению ЬО50, определенному для мышей согласно изложенному в примере 2.
По каждому сеансу дозировки вводили токсин типа В согласно стандартным процедурам, подробно описанным ниже. Инъекции композиции производил врач-невропатолог, прошедший предварительное обучение терапевтическому применению ботулинического токсина для лечения больных, страдающих ШД. Пациентам рекомендовали как можно больше расслабиться, с тем чтобы можно было беспрепятственно наблюдать положение головы и шеи в состоянии покоя. Выявляли шейные мышцы, участвующие в развитии ШД, с подтверждением результата пальпацией этих мышц. В случае, если исследователь находил это нужным, производили ЭМГ-анализ с целью дополнительной локализации пораженных мышц. В данном протоколе подлежащими лечению названы следующие мышцы: поднимающая мышца лопатки, средняя и передняя лестничные, полуостистая, ремённая, грудино-ключично-сосцевидная и трапециевидная. Производили инъекции в 1-5 участков каждой из этих мышц. Суммарный инъецируемый объем, приходящийся на один участок, брали меньшим или равным 1,0 мл во избежание местной деформации ткани, но не меньше 0,1 мл для облегчения точного отмеривания объема с помощью стандартного 1 миллилитрового шприца. Вначале пациенты получали суммарную дозу в 5000 ед. с дальнейшим увеличением приблизительно до 15 000 единиц во время их последующих посещений клиники.
В. Клинические исследования шейной дистонии (ШД).
1. Исследование 1.
пациентов (3 мужчины и 5 женщин), имевших средний возраст 43,9 года, с индивидуальными клиническими диагнозами идиопатической ШД приняли участие в исследовании, в ходе которого им вводили композицию на основе токсина типа В в 2-4 группы поверхностных мышц шеи и/или плеча. Допускалось лечение этих пациентов с частотой каждые 4 недели, при условии, что не наблюдаются тяжелые осложнения или устойчивое клиническое улучшение на момент поступления. Пациенты участвовали в 1-5 сеансах дозировки. Индивидуальные дозы находились в пределах от 100 до 1200 ед. при суммарной дозировке 270-2280 ед. композиции на основе токсина типа В, рассматриваемой в данном описании. Оценивали эффективность с использованием шкалы кривошеи Цуя (Цуй Дж. К.К. (1986), Гансе! 2: 245-247). Участие пациентов в исследовании длилось от 127 до 398 суток, при этом среднее время исследования составило 244,8 дня. Исходные показатели кривошеи были сходными, при этом все пациенты продемонстрировали ограниченный спад показателей (спад=улучшение) с некоторой тенденцией к зависимости от дозировки, выявленной при сравнении суммарных доз. В целом, пациенты почувствовали улучшение состояния. В ходе исследования не наблюдалось какихлибо признаков развития блокирующих антител.
2. Исследование 2.
Задействованные в этом исследовании пациенты имели клинический диагноз идиопатической ШД (кривошеи) с выработавшейся резистентностью к токсину типа А. Им вводили внутримышечно композицию на основе токсина типа В согласно изобретению в 2-4 поверхностных мышцы шеи и плеча.
Исследование от начала до конца прошли двенадцать пациентов, имевших средний возраст 52,3 года. Они участвовали в исследовании в течение 37-127 суток, при этом среднее время составило 65 дней. Лечение проводилось 1-3 дозами опытного лекарства. Пределы суммарных доз были равны 940-2100 ед., а индивидуальных доз -от 150 до 1430 ед. токсина типа В. Средний временной интервал между сеансами дозировки составлял 22,3 дня для пациентов, получивших меньшие дозы (всего 100-899 ед.), и 48,4 дня для получивших более значительные дозы (900-1500 ед.).
Благоприятным клиническим воздействием считали, по меньшей мере, 25%-ный спад показателей по шкале оценок спастической кривошеи Τοτοηΐο ХУеЧегп (Τ^δΤΚ.8) - Шкале тя жести заболевания (Конски Э.С., Ланг. А.Э. (1994) Ιη: Терапия с использованием ботулотоксина. 1апкоу1с, 1. апб На11е1 М., ебк. Магсе1 Иеккет, 1пс., Ыете Уогк) по отношению к показателю, соответствующему исходной позиции (спад=улучшение). Средние показатели были в исходной позиции примерно одинаковыми у всех пациентов. 56% пациентов, которые входили в группу с большей дозировкой, продемонстрировали спад показателей Τ^δΤΒδ-тяжести по сравнению с 7% пациентов, входивших в группу, получившую меньшие дозы. Наблюдалось также умеренное улучшение показателей Τ^δΤΒδ-болезненных ощущений, в особенности на ранних стадиях исследования.
У этих пациентов не наблюдалось какихлибо признаков развития блокирующих антител к токсину типа В.
3. Исследование 3.
пациентов, имевших средний возраст 50,9 года, с подтвержденным диагнозом шейной дистонии получали инъекции композиции на основе токсина типа В в 2-4 поверхностных мышцы шеи и плеча с постепенным увеличением дозы с течением времени (до 1,5 раз в каждый последующий сеанс). Оценивали благоприятное клиническое воздействие на основе описанного выше теста Τ^§ΤΒ§-тяжести заболевания, при этом улучшением считалось 25%-ное снижение этих показателей.
Пациенты участвовали в исследовании в течение 28-177 суток, при этом среднее время исследования составило 71,9 дня. Лечение проводилось 1-3 дозами композиции. Пределы суммарных доз были равны 1430-12000 ед., а индивидуальных доз - от 300 до 12000 ед. Для целей клинической оценки были выделены 4 группы по дозировке: 100-800 ед. (группа А), 900-2399 ед. (группа В), 2400-5999 ед. (группа С) и 6000-12 000 ед. (группа Ό). Интервалы времени между сеансами дозировки находились в следующих пределах: для группы А 13-101 суток, в среднем 35,7 дня; для группы В 14-113 суток, в среднем 48,8 дня; для группы С 29-177 суток, в среднем 62,2 дня; для группы Ό 28-177 суток, в среднем 55,1 дня.
Средние показатели, соответствующие исходной позиции, были сходными у всех пациентов во всех указанных группах дозировки, при этом во всех 4-х группах наблюдалось некоторое среднее снижение показателей (улучшение состояния) в ходе исследования. В целом можно сделать вывод, что средняя процентная величина улучшения по отношению к исходным показателям и средний коэффициент реакции по шкале тяжести заболевания были в ходе исследования наибольшими в группах С и Ό. Замеры среднего наибольшего улучшения, средней наибольшей процентной величины улучшения и среднего наибольшего коэффициента реакции дали более высокие значения в двух группах с большей дозировкой по сравнению с двумя дру27 гими группами, получавшими меньшие дозы (8,1 и 6,8 против 2,1 и 3,6 для наибольшего улучшения; 43,9% и 35,5% против 10% и 16,1% для среднего наибольшего улучшения; 0,32 и 0,23 против 0,05 и 0,09 для среднего наибольшего коэффициента реакции). Процент пациентов, у которых имела место реакция на лечение, был более высоким в двух группах с большей дозировкой (С - 80%, Ό - 78%), чем в двух других группах с меньшими дозами (А - 0%, В - 27%). Средняя продолжительность реакции была также большей в первых двух группах (С - 47,6 дня, Ό - 38,1 дня) по сравнению с другими двумя группами (А - 0 дней, В - 31 день). Приведенные данные свидетельствуют о зависимости реакции на действие композиций на основе токсина типа В согласно изобретению от принятой дозировки.
4. Исследование 4.
Было проведено тестирование трех доз композиции на основе токсина типа В по сравнению со случаем введения плацебо (индифферентного имитатора лекарства) в ходе исследования, в котором участвовали 85 пациентов, страдающих ШД, причем выбранный тип исследования характеризовался рандомизацией (использованием элементов случайности), двойным контролем, применением разовых доз, а также наличием 4-х ветвей, параллельных групп и множественных центров. Возраст пациентов находился в пределах от 18 до 80 лет. Дозы токсина типа В, равные 400, 1200 или 2400 ед., вводили в 2-4 группы поверхностных мышц шеи и/или плеча. Состояние пациентов оценивали по шкале показателей ΤνδΤΒδ для исходной позиции и на 2-ю и 4-ю недели после лечения. Пациентов, у которых по прошествии 4 недель не наблюдалось 3-балльного или более существенного улучшения (>20%) по шкале Τν8ΤΚ.8 тяжести заболевания, исключали из исследования как не прореагировавших. Пациентов же, продемонстрировавших реакцию на лекарство, вновь наблюдали для целей оценки состояния каждые 4 недели, до тех пор пока уровни их реагирования не падали более, чем на 50%.
Все полученные показатели по шкале Τν8ΤΚ.8 свидетельствуют об улучшении состояния с увеличением дозы композиции на основе токсина типа В. На 4-й неделе наблюдалось статистически значимое улучшение у пациентов, входивших в группу с дозами 2400 ед., по сравнению с пациентами, получавшими плацебо, по шкале ΤνδΤΒδ оценок как показателей по болевым ощущениям, так и суммарных показателей, а процент пациентов, у которых наблюдалось улучшение, был более высоким в группе с дозами 2400 ед. Средние суммарные оценочные показатели на 2-й, 4-й и 8-й неделях были значительно более высокими в группе с дозами 2400 ед. по сравнению с любой из остальных участвовавших в исследовании групп;
анализы колебаний данных по 4-й неделе показали статистически значимое различие (р=0,0286) между разными группами. Наблюдались также существенные различия между группами, получавшими плацебо и дозу 2400 ед. (р=0,0050), а также по результатам анализа на зависимость от дозировки (р=0,0028). Анализы колебаний данных по 4-й неделе показали статистически значимое различие (р=0,0073) между разными группами, и кроме того, наблюдались существенные различия между группами, получавшими плацебо и дозу 2400 ед. (р=0,0015), а также по результатам анализа на зависимость от дозировки (р=0,0008).
Продолжительность участия пациентов в этом исследовании составила от 25 до 203 суток, при этом среднее количество дней (61) было более значительным для группы, получавшей дозы 2400 ед.
5. Исследование 5.
Это исследование также относилось к категории исследований амбулаторных больных, характеризующейся рандомизацией, двойным контролем, использованием плацебо, применением разовых доз, а также наличием 4-х ветвей, параллельных групп и множественных центров, и было направлено на изучение действия разового применения плацебо (группа А) либо одной из трех доз (2500 ед. для группы В, 5000 ед. для группы С и 10 000 ед. для группы Ό) композиции на основе токсина типа В, инъецируемой в 2-4 группы поверхностных мышц шеи и/или плеча пациентам с подтвержденным диагнозом ШД. Оценку состояния пациентов производили во время посещений через 2 и 4 недели после лечения. Пациентов, у которых наблюдалось более чем 20%-ное улучшение на 4-й неделе по сравнению с исходной позицией (по шкале ΤνδΤΒδ для суммарных показателей), считали прореагировавшими и просили их посещать клинику для повторных оценок состояния с интервалами в 4 недели в течение, самое большее, 4-х месяцев либо до того момента, когда уровень их реагирования упадет более, чем на 50%.
К участию в исследовании были привлечены 122 пациента, имевших возраст от 19 лет до 81 года. По периоду времени, в течение которого пациенты продолжали участвовать в этом исследовании, можно судить о времени, в течение которого они демонстрировали реакцию на действие опытного лекарства. Отдельные группы пациентов характеризовались сходным минимальным и максимальным количеством дней, в течение которых они продолжали участвовать в исследовании. Среднее время участия в исследовании увеличивалось с увеличением дозы от 45 дней для группы А, получавшей плацебо, до 61 дня (В), 67 дней (С) и 75 дней (Ό).
Все полученные показатели по шкале
ΤνδΤΒδ свидетельствуют об улучшении состояния пациентов всех групп за время от исходной позиции до 4-й недели. Все эти показа29 тели демонстрируют тенденцию к улучшению с увеличением дозы композиции. Анализ колебаний показателей по шкале суммарных оценок ТА8Т18, относящихся к 4-й неделе, показал статистически значимое общее различие (р=0,0001) между отдельными группами. Кроме того, значимыми оказались результаты анализа на зависимость от дозы (р=0,0001) и всех 3-х сравнений плацебо с группами активного лечения (р=0,0016 для плацебо против 2500 ед., р=0,0005 для плацебо против 5000 ед., р=0,0001 для плацебо против 10 000 ед.). Процент пациентов, продемонстрировавших реакцию на 4-й неделе, был более высоким в группе Ό (10000 ед.), чем в любой другой группе, по шкале ТА8ТВ8 для суммарных показателей, показателей по нетрудоспособности и по болевым ощущениям. Наблюдались значимые результаты по зависимости от дозы для каждого из четырех показателей шкалы ТА8ТВ8 (суммарные р<0,001; тяжесть заболевания - р=0,035; нетрудоспособность - р=0,002; болевые ощущения р=0,001). Показатели, относящиеся к болевым ощущениям, улучшились на 4-й неделе во всех группах до 67,5, 70,2 и 75,1 соответственно для групп В, С и Ό. Статистически значимыми были общие различия между отдельными группами (р=0,0049), результаты анализа на зависимость от дозы (р=0,0017) и сравнений плацебо со всеми тремя группами активного лечения (р=0,0149, 0,0084 и 0,0007 соответственно для групп В, С и Ό, сравнивавшихся с группой, получавшей плацебо).
Пример 4. Физиологическая реакция человеческого организма на действие композиции на основе ботулинического токсина типа В.
Проводили тестирование восемнадцати здоровых человек на реакцию экстензора άί^ί1а11к Ьге\зк (ΕΌΒ - ех1епког б1дйа11к Ьге\зк) в виде изменения амплитуды М-колебания на действие токсина типа В с использованием известных специалистам стандартных электрофизиологических методов. Испытуемые имели возраст от 18 до 22 лет. Указанные электрофизиологические исследования проводили на 2-й, 4-й, 6-й, 9й, 11-й, 13-й и 14-й день после внутримышечных инъекций доз композиции на основе токсина типа В в пределах от 1,25 до 480 ед. Результаты анализа полученных данных свидетельствуют об уменьшении амплитуды и площади Мколебания в ΕΌΒ с увеличением дозы. Максимальный эффект от дозы в 480 ед. выразился в 75%-ном уменьшении амплитуды М-колебания по сравнению с исходной позицией.
В ходе отдельного исследования были произвольно отобраны 10 лиц для инъекции дозы токсина типа В (В) в один ΕΌΒ и дозы ВОТОХ® (токсина типа А, А) - в другой ΕΌΒ с использованием одной из пяти различных схем дозировки: 1,25 ед. А / 20 ед. В; 2,5 ед. А / 80 ед. В; 5 ед. А / 160 ед. В; 7,5 ед. А / 320 ед. В; 10 ед. А / 480 ед. В (по 2 человека на каж дую схему дозировки). Одному контрольному пациенту вводили в каждую мышцу ΕΌΒ солевой раствор. Скорость уменьшения амплитуды и площади М-колебания оказалась одинаковой в обеих мышцах, причем максимальный эффект достигался примерно на 6-й день после инъекции. Действие обоих серотипов выразилось в уменьшении амплитуды М-колебания в зависимости от дозы. Наибольшее облегчение после снятия нагрузки наблюдалось для обоих типов токсина на 9-й день.
Несмотря на то, что вышеприведенное описание касается конкретных способов применения и вариантов осуществления, совершенно очевидно, что возможны самые разнообразные модификации изобретения при условии сохранения его объема.

Claims (50)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Стабильная жидкая фармацевтическая композиция на основе ботулинического токсина, содержащая фармацевтически приемлемый буфер, обеспечивающий получение буферных значений рН в диапазоне примерно от рН 5 до рН 6, и изолированный ботулинический токсин, и являющаяся устойчивой в жидком виде в течение, по меньшей мере, одного года при температуре примерно от 0 до 10°С.
  2. 2. Композиция по п.1, для которой указанная температура составляет порядка 5±3°С.
  3. 3. Композиция по п.1, для которой указанная температура составляет порядка 4±2°С.
  4. 4. Композиция по любому из пп.1-3, в которой указанный буфер имеет рК в диапазоне значений рН 4,5-6,5.
  5. 5. Композиция по любому из пп.1-4, которая является устойчивой в жидком виде в течение, по меньшей мере, двух лет.
  6. 6. Композиция по любому из пп.1-5, для которой указанный диапазон буферных значений рН составляет приблизительно рН 5,6±0,2.
  7. 7. Композиция по любому из пп.1-6, для которой указанный буфер выбирается из группы, включающей фосфатный буфер, фосфатноцитратный буфер и сукцинатный буфер.
  8. 8. Композиция по любому из пп.1-7, в которой указанный ботулинический токсин представляет собой ботулинический токсин серотипа, выбранного из группы, включающей серотипы А, В, С1, С2, Ό, Е, Е и С.
  9. 9. Композиция по п.8, в которой указанный ботулинический токсин представляет собой ботулинический токсин типа В, присутствующий в диапазоне концентраций примерно 100-20000 ед./мл.
  10. 10. Композиция по п.9, в которой указанный ботулинический токсин типа В присутствует в диапазоне концентраций примерно 10005000 ед./мл.
  11. 11. Композиция по п.9 или 10, в которой указанный ботулинический токсин типа В присутствует в виде комплекса с высокой молекулярной массой, составляющей порядка 700 кДа.
  12. 12. Композиция по п.8, в которой указанный ботулинический токсин представляет собой ботулинический токсин типа А, присутствующий в диапазоне концентраций примерно 202000 ед./мл.
  13. 13. Композиция по п.12, в которой указанный ботулинический токсин типа А присутствует в диапазоне концентраций примерно 1001000 ед./мл.
  14. 14. Композиция по любому из пп.1-13, которая дополнительно содержит белокнаполнитель.
  15. 15. Композиция по п.14, в которой указанный белок-наполнитель выбран из группы, включающей сывороточный альбумин, рекомбинантный альбумин из человеческой сыворотки и желатин.
  16. 16. Стабильная жидкая фармацевтическая композиции на основе ботулинического токсина, содержащая фармацевтически приемлемый буфер, обеспечивающий получение буферных значений рН в пределах от рН 5 до рН 6, и изолированный ботулинический токсин, и являющаяся устойчивой в жидком виде в течение, по меньшей мере, 6 месяцев при температуре от 10 до 30°С.
  17. 17. Композиция по п.16, для которой указанная температура составляет порядка 25°С.
  18. 18. Композиция по любому из пп.16 и 17, в которой указанный буфер имеет рК в диапазоне значений рН 4,5-6,5.
  19. 19. Композиция по любому из пп.16-18, для которой указанный буфер выбирается из группы, включающей фосфатный буфер, фосфатно-цитратный буфер и сукцинатный буфер.
  20. 20. Композиция по любому из пп.16-19, для которой указанный диапазон буферных значений рН составляет приблизительно рН 5,6±0,2.
  21. 21. Композиция по любому из пп.16-20, в которой указанный ботулинический токсин представляет собой ботулинический токсин серотипа, выбранного из группы, включающей серотипы А, В, Сь С2, Ό, Е, Р и С.
  22. 22. Композиция по п.21, в которой указанный ботулинический токсин представляет собой ботулинический токсин типа В, присутствующий в диапазоне концентраций примерно 10020000 ед./мл.
  23. 23. Композиция по п.22, в которой указанный ботулинический токсин типа В присутствует в диапазоне концентраций примерно 10005000 ед./мл.
  24. 24. Композиция по п.22 или 23, в которой указанный ботулинический токсин типа В присутствует в виде комплекса с высокой молекулярной массой, составляющей порядка 700 кДа.
  25. 25. Композиция по п.21, в которой указанный ботулинический токсин представляет собой ботулинический токсин типа А, присутствующий в диапазоне концентраций примерно 202000 ед./мл.
  26. 26. Композиция по п.25, в которой указанный ботулинический токсин представляет собой ботулинический токсин типа А, присутствующий в диапазоне концентраций примерно 1001000 ед./мл.
  27. 27. Композиция по любому из пп.16-26, которая дополнительно включает белокнаполнитель.
  28. 28. Композиция по п.27, в которой указанный белок-наполнитель выбран из группы, включающей сывороточный альбумин, альбумин из человеческой сыворотки и желатин.
  29. 29. Способ лечения пациента, страдающего болезнью, при которой он нуждается в ингибировании передачи холинергического импульса к отдельной мышце, группе мышц, железе или органу, включающий этап введения в отдельную мышцу, группу мышц, железу или орган пациента фармацевтически эффективной дозы жидкой композиции на основе ботулинического токсина по любому из пп.1-28.
  30. 30. Способ по п.29, отличающийся тем, что упомянутая болезнь выбрана из группы, включающей мышечную спастичность, блефароспазм, косоглазие, спазм мышц половины лица, дистонию, отит среднего уха, спастический колит, анизм, асинергию детрузора-сфинктера мочевого пузыря, стискивание челюстей и искривление позвоночника.
  31. 31. Способ по п.30, отличающийся тем, что указанный пациент страдает мышечной спастичностью, которая вызвана одним или большим числом факторов, входящих в группу, включающую удар, повреждение спинного мозга, закрытую черепно-мозговую травму, корковый паралич, рассеянный склероз и болезнь Паркинсона.
  32. 32. Способ по п.30, отличающийся тем, что указанный пациент страдает дистонией, выбранной из группы, которая включает спастическую кривошею (шейную дистонию), спастическую дисфонию, дистонию конечностей, дистонию гортани и нижнечелюстную дистонию (дистонию Мейджа).
  33. 33. Способ по п.29, отличающийся тем, что указанная отдельная мышца или группа мышц создает морщину или борозды на брови.
  34. 34. Способ по п.29, отличающийся тем, что указанной мышцей является промежностная мышца, а указанным пациентом является женщина во время родов.
  35. 35. Способ по п.29, отличающийся тем, что указанный пациент страдает от состояния, входящего в группу, которая включает миофасциальные боли, головную боль при мигрени, сосудистые расстройства, невралгию, невропатию, артритную боль, боль в спине, гипергидроз, ри33 норею, астму, повышенное слюноотделение и избыточное выделение желудочного сока.
  36. 36. Способ по любому из пп.29-35, отличающийся тем, что указанный пациент невосприимчив к серотипу А ботулинического токсина и указанный ботулинический токсин в указанной композиции выбран из группы, включающей серотипы В, Сь С2, Ό, Е, Е и С.
  37. 37. Способ по п.36, отличающийся тем, что указанный ботулинический токсин в указанной композиции представляет собой ботулинический токсин типа В.
  38. 38. Способ по любому из пп.29-35, отличающийся тем, что указанный пациент невосприимчив к серотипу В ботулинического токсина и указанный ботулинический токсин в указанной композиции выбран из группы, включающей серотипы А, Сь С2, Ό, Е, Е и С.
  39. 39. Способ по п.38, отличающийся тем, что указанный ботулинический токсин в указанной композиции представляет собой ботулинический токсин типа А.
  40. 40. Применение устойчивой жидкой композиции на основе ботулинического токсина по любому из пп.1-28 для приготовления медикамента, подлежащего использованию в лечении пациента, нуждающегося в ингибировании передачи холинергического возбуждения к отдельной мышце, группе мышц, железе или органу.
  41. 41. Применение по п.40, отличающееся тем, что указанный пациент страдает расстройством, входящим в группу, которая включает мышечную спастичность, блефароспазм, косоглазие, спазм мышц половины лица, дистонию, отит среднего уха, спастический колит, анизм, асинергию детрузора-сфинктера мочевого пузыря, стискивание челюстей и искривление позвоночника.
  42. 42. Применение по п.41, отличающееся тем, что указанный пациент страдает мышечной спастичностью, которая вызвана одним или большим числом факторов, входящих в группу, включающую удар, повреждение спинного мозга, закрытую черепно-мозговую травму, корко вый паралич, рассеянный склероз и болезнь Паркинсона.
  43. 43. Применение по п.41, отличающееся тем, что указанный пациент страдает дистонией, входящей в группу, которая включает спастическую кривошею (шейную дистонию), спастическую дисфонию, дистонию конечностей, дистонию гортани и нижнечелюстную дистонию (дистонию Мейджа).
  44. 44. Применение по п.40, отличающееся тем, что указанная отдельная мышца или группа мышц создает морщину или борозды на брови.
  45. 45. Применение по п.40, отличающееся тем, что указанной отдельной мышцей является промежностная мышца, а указанным пациентом является женщина во время родов.
  46. 46. Применение по п.40, отличающееся тем, что указанный пациент страдает от состояния, входящего в группу, которая включает миофасциальные боли, головную боль при мигрени, сосудистые расстройства, невралгию, невропатию, артритную боль, боль в спине, гипергидроз, ринорею, астму, повышенное слюноотделение и избыточное выделение желудочного сока.
  47. 47. Применение по любому из пп.40-46, отличающееся тем, что указанный пациент невосприимчив к ботулиническому токсину типа А и указанный ботулинический токсин в указанной композиции выбран из группы, включающей серотипы В, Сь С2, Ό, Е, Е и С.
  48. 48. Применение по п.47, отличающееся тем, что указанный ботулинический токсин в указанной композиции представляет собой ботулинический токсин типа В.
  49. 49. Применение по любому из пп.40-46, отличающееся тем, что указанный пациент невосприимчив к ботулиническому токсину типа В и указанный ботулинический токсин в указанной композиции выбран из группы, включающей серотипы А, Сь С2, Ό, Е, Е и С.
  50. 50. Применение по п.49, отличающееся тем, что указанный ботулинический токсин в указанной композиции представляет собой ботулинический токсин типа А.
EA200100337A 1998-09-11 1999-09-09 Стабильные жидкие составы ботулинического токсина EA003367B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US9987098P 1998-09-11 1998-09-11
PCT/US1999/020912 WO2000015245A2 (en) 1998-09-11 1999-09-09 Stable liquid formulations of botulinum toxin

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200100337A1 EA200100337A1 (ru) 2001-10-22
EA003367B1 true EA003367B1 (ru) 2003-04-24

Family

ID=22277018

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200100337A EA003367B1 (ru) 1998-09-11 1999-09-09 Стабильные жидкие составы ботулинического токсина

Country Status (41)

Country Link
US (2) US7211261B1 (ru)
EP (1) EP1112082B2 (ru)
JP (4) JP4557426B2 (ru)
KR (1) KR100699756B1 (ru)
CN (1) CN100438905C (ru)
AP (1) AP1591A (ru)
AR (1) AR022671A1 (ru)
AT (1) ATE221386T1 (ru)
AU (1) AU755556C (ru)
BG (1) BG65555B1 (ru)
BR (1) BR9913585A (ru)
CA (1) CA2342243C (ru)
CO (1) CO5170497A1 (ru)
CU (1) CU23251A3 (ru)
DE (1) DE69902396T3 (ru)
DK (1) DK1112082T4 (ru)
EA (1) EA003367B1 (ru)
EE (1) EE200100140A (ru)
ES (1) ES2181473T5 (ru)
GE (1) GEP20032946B (ru)
HK (1) HK1040927A1 (ru)
HR (1) HRP20010259B1 (ru)
HU (1) HUP0103638A3 (ru)
ID (1) ID28824A (ru)
IL (2) IL141564A0 (ru)
IS (1) IS2381B (ru)
LT (1) LT4959B (ru)
LV (1) LV12684B (ru)
NO (1) NO328898B1 (ru)
NZ (1) NZ509349A (ru)
PL (1) PL200926B1 (ru)
PT (1) PT1112082E (ru)
RS (1) RS50344B (ru)
SA (1) SA99200566B1 (ru)
SI (2) SI1112082T1 (ru)
SK (1) SK286919B6 (ru)
TR (1) TR200100728T2 (ru)
TW (1) TW574036B (ru)
UA (1) UA72477C2 (ru)
WO (1) WO2000015245A2 (ru)
ZA (1) ZA200101709B (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2741497C2 (ru) * 2016-05-27 2021-01-26 Ипсен Биофарм Лимитед Жидкая композиция нейротоксина, стабилизированная триптофаном или тирозином

Families Citing this family (77)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE69526340T2 (de) * 1994-05-09 2002-11-14 William J Binder Botulinumtoxin ZUR REDUKTION VON Migraine -KOPFSCHMERZEN
TW574036B (en) * 1998-09-11 2004-02-01 Elan Pharm Inc Stable liquid compositions of botulinum toxin
US20120238504A1 (en) * 1998-09-11 2012-09-20 Solstice Neurosciences, Llc Stable Formulations of Botulinum Toxin in Hydrogels
DE19925739A1 (de) * 1999-06-07 2000-12-21 Biotecon Ges Fuer Biotechnologische Entwicklung & Consulting Mbh Therapeutikum mit einem Botulinum-Neurotoxin
US7838008B2 (en) 1999-12-07 2010-11-23 Allergan, Inc. Methods for treating diverse cancers
US7838007B2 (en) 1999-12-07 2010-11-23 Allergan, Inc. Methods for treating mammary gland disorders
US7780967B2 (en) 2000-02-08 2010-08-24 Allergan, Inc. Reduced toxicity Clostridial toxin pharmaceutical compositions
US8632785B2 (en) * 2000-02-08 2014-01-21 Allergan, Inc. Clostridial toxin pharmaceutical composition containing a gelatin fragment
DE60125986T3 (de) * 2000-02-08 2011-07-28 Allergan, Inc., 92612, Calif. Pharmazeutische Zusammensetzungen mit Botulinum Toxin
US20030118598A1 (en) 2000-02-08 2003-06-26 Allergan, Inc. Clostridial toxin pharmaceutical compositions
US20060269575A1 (en) * 2000-02-08 2006-11-30 Allergan, Inc. Botulinum toxin pharmaceutical compositions formulated with recombinant albumin
US6821520B2 (en) 2000-02-15 2004-11-23 Allergan, Inc. Clostridial toxin therapy for Hashimoto's thyroiditis
ITUD20010002A1 (it) 2001-01-05 2002-07-05 Univ Degli Studi Udine Uso della tossina botulinica per la soluzione di patologie articolari, in particolare della coxartrosi, della epicondilite e della patolo
CA2369810C (en) * 2002-01-30 2007-08-07 1474791 Ontario Limited Method of treating pain
US7140371B2 (en) 2002-03-14 2006-11-28 Allergan, Inc. Surface topography method for determining effects of a botulinum toxin upon a muscle and for comparing botulinum toxins
US6688311B2 (en) 2002-03-14 2004-02-10 Allergan, Inc. Method for determining effect of a clostridial toxin upon a muscle
JPWO2003082315A1 (ja) * 2002-03-29 2005-07-28 財団法人化学及血清療法研究所 筋緊張亢進疾患治療剤
US7691394B2 (en) 2002-05-28 2010-04-06 Botulinum Toxin Research Associates, Inc. High-potency botulinum toxin formulations
US20040009180A1 (en) * 2002-07-11 2004-01-15 Allergan, Inc. Transdermal botulinum toxin compositions
WO2004048519A2 (en) 2002-11-21 2004-06-10 Ira Sanders Treatment of mammalian reaction to ige interactions
JP2006519761A (ja) * 2002-12-20 2006-08-31 ボツリヌム・トクシン・リサーチ・アソシエイツ・インコーポレイテッド 改善された薬学的ボツリヌス毒素組成物
US8071550B2 (en) 2003-03-03 2011-12-06 Allergan, Inc. Methods for treating uterine disorders
ES2381091T3 (es) * 2003-03-06 2012-05-23 Botulinum Toxin Research Associates, Inc. Tratamiento del dolor facial crónico y cefalea relacionados con la sinusitis con toxina botulínica
WO2004078200A1 (en) * 2003-03-06 2004-09-16 Botulinum Toxin Research Associates, Inc. Selection of patients with increased responsiveness to botulinum toxin
US6838434B2 (en) * 2003-05-02 2005-01-04 Allergan, Inc. Methods for treating sinus headache
US7220422B2 (en) * 2003-05-20 2007-05-22 Allergan, Inc. Methods and compositions for treating eye disorders
US8609112B2 (en) 2003-10-29 2013-12-17 Allergan, Inc. Botulinum toxin treatments of depression
US8617572B2 (en) 2003-10-29 2013-12-31 Allergan, Inc. Botulinum toxin treatments of depression
US8609113B2 (en) 2003-10-29 2013-12-17 Allergan, Inc. Botulinum toxin treatments of depression
US8734810B2 (en) * 2003-10-29 2014-05-27 Allergan, Inc. Botulinum toxin treatments of neurological and neuropsychiatric disorders
AU2005251676B2 (en) 2004-03-03 2011-09-29 Revance Therapeutics, Inc. Compositions and methods for topical diagnostic and therapeutic transport
ES2691498T3 (es) * 2004-03-03 2018-11-27 Revance Therapeutics, Inc. Aplicación tópica y liberación transdérmica de toxinas botulínicas
US9211248B2 (en) 2004-03-03 2015-12-15 Revance Therapeutics, Inc. Compositions and methods for topical application and transdermal delivery of botulinum toxins
AU2005274822B2 (en) * 2004-07-26 2008-10-30 Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa Therapeutic composition with a botulinum neurotoxin
US7179474B2 (en) 2004-09-03 2007-02-20 Allergan, Inc. Methods for treating a buttock deformity
US7429386B2 (en) 2004-09-03 2008-09-30 Allergan, Inc. Stretch mark treatment
US8192979B2 (en) * 2005-01-03 2012-06-05 Botulinum Toxin Research Associates, Inc. Compositions, methods and devices for preparing less painful Botulinum toxin formulations
RU2007136616A (ru) 2005-03-03 2009-04-10 Риванс Терапьютикс, Инк. (Us) Композиция и способ для местного применения и чрескожного введения ботулинового токсина
US7419675B2 (en) 2005-05-26 2008-09-02 Allergan, Inc. Method for treating peritoneal adhesions
US8323666B2 (en) 2005-08-01 2012-12-04 Allergan, Inc. Botulinum toxin compositions
US8168206B1 (en) 2005-10-06 2012-05-01 Allergan, Inc. Animal protein-free pharmaceutical compositions
US8137677B2 (en) 2005-10-06 2012-03-20 Allergan, Inc. Non-protein stabilized clostridial toxin pharmaceutical compositions
DE102006019447A1 (de) * 2006-04-24 2007-10-25 Dressler, Dirk, Dr. Markierung von Botulinum Toxin
AR061669A1 (es) 2006-06-29 2008-09-10 Merz Pharma Gmbh & Co Kgaa Aplicacion de alta frecuencia de terapia con toxina botulinica
US10792344B2 (en) 2006-06-29 2020-10-06 Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa High frequency application of botulinum toxin therapy
CN101687018A (zh) * 2007-06-01 2010-03-31 德国麦氏大药厂 基于肉毒毒素的神经毒成分供应温度-稳定性固体肌肉松弛剂的方法
EP2048156A1 (en) * 2007-10-12 2009-04-15 Merz Pharma GmbH & Co.KGaA Process for providing a temperature-stable muscle relaxant on the basis of the neurotoxic component of botulinum toxin
US9107815B2 (en) 2008-02-22 2015-08-18 Allergan, Inc. Sustained release poloxamer containing pharmaceutical compositions
US20170361130A9 (en) * 2008-05-23 2017-12-21 Pankaj Modi Stabilized and solubilized drug formulation for topical application and transdermal efficacy for cosmetic improvement and methods of formulation
WO2010016895A1 (en) * 2008-08-05 2010-02-11 Solstice Neurosciences, Inc. Compositions of activated botulinum toxin type b
WO2010016901A1 (en) * 2008-08-05 2010-02-11 Solstice Neurosciences, Inc. Compositions of activated botulinum holotoxin type b (150 kd)
US20100112006A1 (en) * 2008-11-03 2010-05-06 Solstice Neurosciences, Inc. Compositions of activated botulinum holotoxin type B (150 kD)
US20100112005A1 (en) * 2008-11-03 2010-05-06 Solstice Neurosciences, Inc. Compositions of activated botulinum toxin type B
US20100124559A1 (en) * 2008-11-20 2010-05-20 Allergan, Inc. Early Treatment and Prevention of Increased Muscle Tonicity
CA2745657C (en) 2008-12-04 2022-06-21 Botulinum Toxin Research Associates, Inc. Extended length botulinum toxin formulation for human or mammalian use
SG10202100698QA (en) 2008-12-31 2021-02-25 Revance Therapeutics Inc Injectable Botulinum Toxin Formulations
EP2248518B1 (en) * 2009-04-17 2013-01-16 Merz Pharma GmbH & Co. KGaA Formulation for stabilizing proteins, peptides or mixtures thereof.
CN102869373B (zh) 2009-06-25 2017-05-10 雷文斯治疗公司 不含白蛋白的肉毒杆菌毒素制剂
ES2693705T3 (es) 2009-07-02 2018-12-13 Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa Neurotoxinas que muestran actividad biológica reducida
PL2490986T3 (pl) 2009-10-21 2019-03-29 Revance Therapeutics, Inc. Sposoby i systemy oczyszczania nieskompleksowanej neurotoksyny botulinowej
US20120328701A1 (en) * 2011-01-24 2012-12-27 Anterios, Inc. Nanoparticle compositions, formulations thereof, and uses therefor
JP6162135B2 (ja) 2011-11-09 2017-07-12 メルツ ファルマ ゲーエムベーハー ウント コンパニー カーゲーアーアー 短縮された生物活性を示す神経毒
US9393291B2 (en) 2012-04-12 2016-07-19 Botulinum Toxin Research Associates, Inc. Use of botulinum toxin for the treatment of cerebrovascular disease, renovascular and retinovascular circulatory beds
WO2014066916A2 (en) 2012-10-28 2014-05-01 Revance Therapeutics, Inc. Compositions and methods for safe treatment of rhinitis
RU2535115C1 (ru) 2013-05-15 2014-12-10 Бости Трейдинг Лтд Фармацевтический состав, содержащий нейротоксин ботулина
US11484580B2 (en) 2014-07-18 2022-11-01 Revance Therapeutics, Inc. Topical ocular preparation of botulinum toxin for use in ocular surface disease
US9901627B2 (en) 2014-07-18 2018-02-27 Revance Therapeutics, Inc. Topical ocular preparation of botulinum toxin for use in ocular surface disease
SG11201701619TA (en) * 2014-09-02 2017-03-30 American Silver Llc Botulinum toxin and colloidal silver particles
EP3590500A1 (en) * 2014-12-23 2020-01-08 Merz Pharma GmbH & Co. KGaA Botulinum toxin prefilled container
SG11201706247VA (en) * 2015-02-03 2017-08-30 Merz Pharma Gmbh & Co Kgaa Botulinum toxin prefilled container
WO2018038301A1 (en) * 2016-08-26 2018-03-01 Hugel Inc. Stabilized liquid formulation of botulinum toxin and preparation method thereof
CA3035473A1 (en) 2016-09-13 2018-03-22 Allergan, Inc. Non-protein clostridial toxin compositions
JP2019535829A (ja) 2016-11-21 2019-12-12 エイリオン セラピューティクス， インコーポレイテッド 大型薬剤の経皮送達
KR101744900B1 (ko) * 2017-01-20 2017-06-08 주식회사 대웅 보툴리눔 독소를 포함하는 안정한 액상 조성물
JP2020520917A (ja) * 2017-05-18 2020-07-16 ルバンス セラピュティックス インク．Ｒｅｖａｎｃｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 頸部ジストニアの治療方法
KR102063475B1 (ko) 2018-02-22 2020-01-09 주식회사 에이비바이오 보툴리눔 독소, 안정화제, 및 국소마취제를 포함하는 액상 제형 및 이의 제조방법
EP3863589A1 (en) 2018-10-08 2021-08-18 Merz Pharma GmbH & Co. KGaA Neurotoxin prefilled vial

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1994000481A1 (en) * 1992-06-23 1994-01-06 Associated Synapse Biologics Pharmaceutical composition containing botulinum b complex
EP0593176A2 (en) * 1992-09-28 1994-04-20 Wisconsin Alumni Research Foundation Pharmaceutical compositions containing botulinum toxin and method of preparation
WO1996011699A1 (en) * 1994-10-13 1996-04-25 Wisconsin Alumni Research Foundation Pharmaceutical composition of botulinum neurotoxin and method of preparation
WO1997035604A1 (en) * 1996-03-27 1997-10-02 Wisconsin Alumni Research Foundation Pharmaceutical compositions of botulinum toxin or botulinum neurotoxin and methods of preparation

Family Cites Families (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3522247A (en) * 1967-11-07 1970-07-28 Pfizer & Co C 2-amino-6,7-disubstituted-4h-1,3-benzothiazine-4-ones as bronchodilators
US4932936A (en) 1988-01-29 1990-06-12 Regents Of The University Of Minnesota Method and device for pharmacological control of spasticity
US5053005A (en) 1989-04-21 1991-10-01 Gary E. Borodic Chemomodulation of curvature of the juvenile spine
US5919665A (en) * 1989-10-31 1999-07-06 Ophidian Pharmaceuticals, Inc. Vaccine for clostridium botulinum neurotoxin
US5183462A (en) 1990-08-21 1993-02-02 Associated Synapse Biologics Controlled administration of chemodenervating pharmaceuticals
GB9120306D0 (en) 1991-09-24 1991-11-06 Graham Herbert K Method and compositions for the treatment of cerebral palsy
WO1994028923A1 (en) 1993-06-10 1994-12-22 Allergan, Inc. Multiple botulinum toxins for treating neuromuscular disorders and conditions
DE122009000066I2 (de) 1993-06-10 2010-12-30 Allergan Inc Behandlung von neuromuskulären Störungen und Zuständen mit verschiedenen botulinen Serotypen
GB9315306D0 (en) 1993-07-23 1993-09-08 Smithkline Beecham Corp Methods
US5437291A (en) 1993-08-26 1995-08-01 Univ Johns Hopkins Method for treating gastrointestinal muscle disorders and other smooth muscle dysfunction
US6974578B1 (en) 1993-12-28 2005-12-13 Allergan, Inc. Method for treating secretions and glands using botulinum toxin
DE69434008T2 (de) 1993-12-28 2005-09-22 Allergan, Inc., Irvine Botulinumtoxin zur Behandlung von mit Muskelkrankheiten verbundenen Schmerzen
US5766605A (en) 1994-04-15 1998-06-16 Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York Treatment of autonomic nerve dysfunction with botulinum toxin
DE69526340T2 (de) 1994-05-09 2002-11-14 William J Binder Botulinumtoxin ZUR REDUKTION VON Migraine -KOPFSCHMERZEN
AU2907695A (en) * 1994-08-08 1996-03-07 Wisconsin Alumni Research Foundation Purification and pharmaceutical compositions containing type g botulinum neurotoxin
US5562899A (en) 1995-02-28 1996-10-08 Gerber; Allen Medical prevention of lacerations to the vagina and perineum
US6136551A (en) * 1995-04-24 2000-10-24 Allergan, Inc. Assay for detecting the presence of botulinum toxin neutralizing antibodies in a patient serum sample
ATE239491T1 (de) 1995-06-06 2003-05-15 L Bruce Pearce Verbesserte zusammensetzungen und verfahren zur chemodenervation mit neurotoxinen
US5721215A (en) 1996-03-20 1998-02-24 Allergan Injectable therapy for control of muscle spasms and pain related to muscle spasms
US6699966B1 (en) * 1996-07-08 2004-03-02 University Of Massachusetts Proteins within the type E botulinum neurotoxin complex
CN1057430C (zh) * 1996-10-09 2000-10-18 崔生发 一种生物化学杀鼠剂
TW574036B (en) * 1998-09-11 2004-02-01 Elan Pharm Inc Stable liquid compositions of botulinum toxin
US6146902A (en) * 1998-12-29 2000-11-14 Aventis Pasteur, Inc. Purification of polysaccharide-protein conjugate vaccines by ultrafiltration with ammonium sulfate solutions
US6113915A (en) 1999-10-12 2000-09-05 Allergan Sales, Inc. Methods for treating pain
US6139845A (en) 1999-12-07 2000-10-31 Allergan Sales, Inc. Method for treating cancer with a neurotoxin
DE60125986T3 (de) 2000-02-08 2011-07-28 Allergan, Inc., 92612, Calif. Pharmazeutische Zusammensetzungen mit Botulinum Toxin
US20030118598A1 (en) * 2000-02-08 2003-06-26 Allergan, Inc. Clostridial toxin pharmaceutical compositions
US6358513B1 (en) 2000-02-15 2002-03-19 Allergan Sales, Inc. Method for treating Hashimoto's thyroiditis
US6464986B1 (en) 2000-04-14 2002-10-15 Allegan Sales, Inc. Method for treating pain by peripheral administration of a neurotoxin
WO2006096164A1 (en) 2005-03-03 2006-09-14 Allergan, Inc. Media for clostridium bacterium and processes for obtaining a clostridial toxin
US20080096238A1 (en) * 2004-03-30 2008-04-24 Alcon, Inc. High throughput assay for human rho kinase activity with enhanced signal-to-noise ratio
JP2008532549A (ja) 2005-03-15 2008-08-21 アラーガン、インコーポレイテッド 内因性クロストリジウム毒素受容体系に対する増大した標的能力を有する修飾クロストリジウム毒素
US7855268B2 (en) 2006-06-01 2010-12-21 Allergan, Inc. Tolerogizing compositions comprising botulinum toxin type B peptides

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1994000481A1 (en) * 1992-06-23 1994-01-06 Associated Synapse Biologics Pharmaceutical composition containing botulinum b complex
EP0593176A2 (en) * 1992-09-28 1994-04-20 Wisconsin Alumni Research Foundation Pharmaceutical compositions containing botulinum toxin and method of preparation
WO1996011699A1 (en) * 1994-10-13 1996-04-25 Wisconsin Alumni Research Foundation Pharmaceutical composition of botulinum neurotoxin and method of preparation
WO1997035604A1 (en) * 1996-03-27 1997-10-02 Wisconsin Alumni Research Foundation Pharmaceutical compositions of botulinum toxin or botulinum neurotoxin and methods of preparation

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2741497C2 (ru) * 2016-05-27 2021-01-26 Ипсен Биофарм Лимитед Жидкая композиция нейротоксина, стабилизированная триптофаном или тирозином
RU2741497C9 (ru) * 2016-05-27 2021-04-30 Ипсен Биофарм Лимитед Жидкая композиция нейротоксина, стабилизированная триптофаном или тирозином

Also Published As

Publication number Publication date
JP5270594B2 (ja) 2013-08-21
UA72477C2 (ru) 2005-03-15
AP2001002108A0 (en) 2001-03-31
SK3132001A3 (en) 2001-10-08
JP2007169301A (ja) 2007-07-05
JP4557426B2 (ja) 2010-10-06
IS5836A (is) 2001-01-31
TW574036B (en) 2004-02-01
NO328898B1 (no) 2010-06-07
US20070148189A1 (en) 2007-06-28
SI20566A (sl) 2001-12-31
US7211261B1 (en) 2007-05-01
SI20566B (sl) 2008-08-31
IL141564A0 (en) 2002-03-10
NO20011207D0 (no) 2001-03-09
NO20011207L (no) 2001-05-09
SA99200566B1 (ar) 2006-09-20
AU755556C (en) 2005-12-15
ES2181473T3 (es) 2003-02-16
WO2000015245A3 (en) 2000-06-08
EP1112082B1 (en) 2002-07-31
CU23251A3 (es) 2007-12-17
TR200100728T2 (tr) 2001-08-21
JP2002524527A (ja) 2002-08-06
ZA200101709B (en) 2002-11-28
HUP0103638A2 (hu) 2002-01-28
HRP20010259A2 (en) 2005-02-28
CN100438905C (zh) 2008-12-03
PT1112082E (pt) 2002-12-31
KR100699756B1 (ko) 2007-03-27
AU5821499A (en) 2000-04-03
EP1112082A2 (en) 2001-07-04
BR9913585A (pt) 2001-06-05
HK1040927A1 (en) 2002-06-28
HUP0103638A3 (en) 2004-06-28
PL200926B1 (pl) 2009-02-27
CA2342243A1 (en) 2000-03-23
KR20010086388A (ko) 2001-09-10
PL347069A1 (en) 2002-03-11
DK1112082T3 (da) 2002-11-25
WO2000015245A2 (en) 2000-03-23
YU19001A (sh) 2005-06-10
CO5170497A1 (es) 2002-06-27
DK1112082T4 (da) 2010-05-31
ES2181473T5 (es) 2010-07-05
EA200100337A1 (ru) 2001-10-22
JP2010138186A (ja) 2010-06-24
IL141564A (en) 2009-08-03
HRP20010259B1 (en) 2007-11-30
ID28824A (id) 2001-07-05
AR022671A1 (es) 2002-09-04
AU755556B2 (en) 2002-12-12
IS2381B (is) 2008-07-15
LV12684A (en) 2001-07-20
NZ509349A (en) 2003-08-29
GEP20032946B (en) 2003-04-25
BG105435A (en) 2001-12-29
DE69902396T3 (de) 2010-09-30
RS50344B (sr) 2009-11-10
US8173138B2 (en) 2012-05-08
LV12684B (lv) 2001-10-20
ATE221386T1 (de) 2002-08-15
LT2001041A (en) 2002-06-25
AP1591A (en) 2006-03-20
CN1316906A (zh) 2001-10-10
SI1112082T1 (en) 2002-12-31
CA2342243C (en) 2014-01-14
BG65555B1 (bg) 2008-12-30
LT4959B (lt) 2002-10-25
SK286919B6 (sk) 2009-07-06
DE69902396D1 (de) 2002-09-05
JP2013144691A (ja) 2013-07-25
EP1112082B2 (en) 2010-03-17
DE69902396T2 (de) 2003-03-20
EE200100140A (et) 2002-06-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA003367B1 (ru) Стабильные жидкие составы ботулинического токсина
ES2709202T3 (es) Composiciones adecuadas para el tratamiento de enfermedades mediadas por colágeno
JP6797305B2 (ja) ボツリヌス毒素および安定化剤を含む液状剤形およびその製造方法
EP1600163B1 (en) Use of the neurotoxic component of botulinum toxins for the treatment of spastic muscle
US20120238504A1 (en) Stable Formulations of Botulinum Toxin in Hydrogels
KR20190022548A (ko) 트립토판 또는 타이로신으로 안정화된 액체 신경독 제형
Malgorzata et al. The mechanism of the beneficial effect of botulinum toxin type a used in the treatment of temporomandibular joints dysfunction
JPH06503364A (ja) 髄膜炎菌“Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ　ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ”感染症に対するサブユニットワクチンと、精製状態での対応サブユニット
JP2011157331A (ja) 高用量投与が可能なボツリヌス毒素製剤
MXPA01002445A (en) Stable liquid formulations of botulinum toxin
CZ2001564A3 (cs) Stabilní kapalný farmaceutický botulotoxinový přípravek a jeho použití

Legal Events

Date Code Title Description
PC4A Registration of transfer of a eurasian patent by assignment
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU