PL172462B1 - Sposób wytwarzania wysoko oczyszczonego, zabezpieczonego przed wirusami preparatu czynnika VIII PL PL PL PL PL PL PL - Google Patents

Sposób wytwarzania wysoko oczyszczonego, zabezpieczonego przed wirusami preparatu czynnika VIII PL PL PL PL PL PL PL

Info

Publication number
PL172462B1
PL172462B1 PL93298670A PL29867093A PL172462B1 PL 172462 B1 PL172462 B1 PL 172462B1 PL 93298670 A PL93298670 A PL 93298670A PL 29867093 A PL29867093 A PL 29867093A PL 172462 B1 PL172462 B1 PL 172462B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
factor viii
surfactant
preparation
chromatographic purification
treatment
Prior art date
Application number
PL93298670A
Other languages
English (en)
Other versions
PL298670A1 (en
Inventor
Johann Eibl
Friedrich Elsinger
Herbert Gritsch
Yendra Linnau
Otto Schwarz
Peter Turecek
Guenther Woeber
Original Assignee
Immuno Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=3501200&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL172462(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Immuno Ag filed Critical Immuno Ag
Publication of PL298670A1 publication Critical patent/PL298670A1/xx
Publication of PL172462B1 publication Critical patent/PL172462B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
    • Y10S530/829—Blood
    • Y10S530/83—Plasma; serum
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
    • Y10S530/829—Blood
    • Y10S530/83—Plasma; serum
    • Y10S530/831—Cohn fractions

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

1. Sposób wytwarzania wysoko oczyszczonego, zabezpieczonego przed wirusami preparatu czynnika VIII, znamienny tym, ze obejmuje kombinacje nastepujacych operacji: a) oczyszczanie chromatograficzne frakcji zawierajacej czynnik VIII, b) obróbke tensydem czynnika VIII w roztworze wodnym przy stosunku tensyd/proteina od 1:1 do 1000:1 oraz c) obróbke cieplna preparatu czynnika VIII w stanie stalym. PL PL PL PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania zabezpieczonego przed wirusami, wysoko oczyszczonego czynnika VIIL
Krzepnięcie krwi jest powodowane przez cały szereg następujących po sobie reakcji różnych białek i enzymów. Brak czynników krzepnięcia krwi przeszkadza w wytwarzaniu fibryny z fibrynogenu, a przez to zasklepieniu rany: następstwem tego są krwawienia. Taki przypadek ma miejsce w hemofilii A. Jest ona najbardziej rozpowszechnioną chorobą krwawienia. Czynnik VIII występuje w osoczu razem z czynnikiem von Willebrand'a (vWF) jako nie kowalentnie związany kompleks (FVIII/vWF). Proteiny FVIII i vWf, jak również kompleks FVIII/vWF są stosowane do leczenia zastępczego osób chorych na hemofilię. Odpowiednim preparatom farmaceutycznym są stawiane wysokie wymagania w zakresie skuteczności działania i bezpieczeństwa.
Materiałem wyjściowym do wytwarzania preparatów jest najczęściej osocze ludzkie, które zawiera czynnik VIII, ale tylko w ograniczonych ilościach (około 0,1 -0,2 gg/ml). Otrzymywanie czynnika VIII wymaga więc nie tylko przerabiania dużych ilości osocza, lecz także muszą być z niego usuwane w możliwie największym stopniu proteiny towarzyszące, przy czym wiele spośród tych protein towarzyszących ma podobne właściwości fizykochemiczne.
Dalsza trudność polega na tym, ze preparat musi być jeszcze maktywowany odnośnie czynników zakaźnych, gdyż materiał wyjściowy może zawierać np. wirusy żółtaczki zakaźnej
172 462 lub HIV. Dochodzi jeszcze to, że każda operacja technologiczna i każda maktywacja muszą być tak wykonywane, aby w maksymalnym stopniu utrzymać aktywność biologiczną żądanych czynników krzepnięcia.
WedhiP nwh mpiwl nrnHnk rvirihr h «tnenip sie stnnniowe nreevnitarie fyn Irin precypitację lub strącanie przez dodanie siarczanu amonowego, których celem jest usunięcie zanieczyszczeń, jak kompleksowych czynników protrombinowych, fibrynogenu i fibronektyny. Czystość otrzymywanych koncentratów czynnika VIII wynosi około 1 jednostki/mg proteiny i zwykle nie przekracza granic zakresu 10-20 jednostek/mg proteiny.
Z opisu patentowego EP-A-0 378 208 jest znany sposób wytwarzania czynnika VIII, według którego roztwór krioprecypitatu poddaje się działaniu rozpuszczalnika organicznego (trój-/n-butylo/fosforanu (TNBP)) w obecności roztworu substancji ułatwiającej rozpuszczanie Tween® 80 w ceiu inaktywacji wirusów. Następnie poddaje się czynnik VIII dwustopniowemu wytrącaniu oczyszczającemu, liofilizuje i ogrzewa w suchym stanie.
Obróbka produktów biologicznych i farmaceutycznych za pomocą 0,25-10% wagowych nie denaturującego środka Amphiphilis (detergentu) jest opisana w patencie EP-B-0 050 061.
O-p-Śb sLó/bL·, o «·>χχ4ζ-ν 4 *1 k A -p O 1 n Iz..................
opUdUU UUIUUM ρυΐνηι ivi<peiwLannA.umi ai£,nnivenjun, / W Vllll4tl.lll.iV V* VL/WUVOV1 gentów jest znany z opisu patentowego EP-B-0 131 740. W opisie tym stwierdzono, że obróbka samym detergentem jest mało skuteczna w zakresie inaktywacji wirusów. Rozpuszczalniki organiczne działają jednak tylko przeciwko wirusom okrytym błonami. Miały juz miejsce zakażenia żółtaczką zakaźną, powstałe w wyniku kontaminacji żółtaczką zakaźną A koncentratu czynnika VIII, w którym wirusy zostały inaktywowane tym sposobem. Wirus żółtaczki zakaźnej A nie ma błony zawierającej lipidy; dlatego więc nie ulega inaktywacji (Mannucci PM et ai (1992) The Lancet 339, 819 Outbreak of hepatitis A among italian patients with haemophilia).
Obróbkę frakcji zawierających czynnik VIII rozpuszczalnikami organicznymi wykonuje się najczęściej tak, że po przeprowadzeniu obróbki działający toksycznie rozpuszczalnik musi być oddzielany w kosztowny sposób. W opisie patentowym EP-A-0 343 275 została w tym ceiu zaproponowana ekstrakcja frakcji zawierającej czynnik VIII olejami, takimi jak olej sojowy lub olej rycynowy. Następnie poddaje się czynnik VIII chromatografii z żelem przenikalnym przy użyciu wymieniaczy jonowych.
Według sposobu podanego w opisie patentowym EP-A-0 094 611 ogrzewa się czynnik VIII w stanie suchym w ceiu zredukowania jego zakaźności.
Według opisu patentowego EP-B-0 159 311 mokre produkty z krwi w stanie stałym ogrzewa się w celu inaktywacji potencjalnie zawartych w nich wirusów. Dla takiego ogrzanego parą koncentratu czynnika VII1 nie jest znany żaden przypadek zakażenia (Mannucci pM (1992) Transfusion 32, 134-138 Low risk of viral infections after administration of vapor-heated factor VIII concentrates).
Obróbka cieplna wysoko oczyszczonych koncentratów czynnika VIII jest uznana jako krytyczna. Według opisu patentowego EP-A-0 173 242 przed ogrzewaniem roztworu oczyszczonego chromatograficznie czynnika VIII musi być do niego dodana np. mieszanina stabilizatorów (węglowodany i aminokwasy). Ponadto jest w zwyczaju poddawanie frakcji zawierającej czynnik VIII obróbce mającej na ceiu inaktywację przeciwwirusową jeszcze przed oczyszczaniem chromatograficznym.
Celem wynalazku jest postawienie do dyspozycji sposobu, według którego może być wytwarzany oczyszczony czynnik VIII, który w wyniku przeprowadzenia efektywnej obróbki mającej na celu inaktywację przeciw wirusową jest uznawany za zabezpieczony przed wirusami.
Aktywność właściwa wytwarzanego preparatu powinna wynosić zwłaszcza co najmniej 25 jednostek/mg proteiny.
Osiąga się ten cel za pomocą sposobu polegającego według wynalazku, na tym, ze sposób ten obejmuje kombinację następujących operacji: a) oczyszczania chromatograficzne frakcji zawierającej czynnik VIII, b) obróbkę tensydem czynnika VIII w roztworze wodnym przy stosunku tensyd/proteina od 1:1 do 1000.1 oraz c) obróbkę cieplną preparatu czynnika VIII w stanie stałym.
172 462
Czynnik VIII może być wytwarzany według wynalazku jako kompleks FVIII/vWF, FVIII lub vWF. Podczas wytwarzania może być ewentualnie prowadzona jedna obróbka w celu zdysocjowania kompleksu FVID/vWF. np. za pomocą chlorku wapniowego.
kJWY !VlUiJVllV τι ri /n nl o -τΙ/ί
7rrr\rlm em obróbka tensydem może uyć włączona do skutecznej inaktywacji przeciw wirusowej. Jako tensydy stosuje się np. niejonowe tensydy, jak Tween®80, Triton® X-100, Triton® X-114, dodecylomaltozyd, oktyloglikozyd, tensydy z jonami dwubiegunowymi, jak tlenek dwumetylooktyloaminy lub N-dodecylo-N,Ndwumetylo-3-amonio-1-propanosulfonian, i jonowe tensydy, jak dezoksycholan sodowy lub cholan sodowy. Obróbkę tensydem wykonuje się przede wszystkim w roztworze wodnym nie zawierającym rozpuszczalników organicznych. Jako roztwór wodny proponuje się roztwór krioprecypitatu, który ewentualnie jeszcze oczyszcza się przez zaadsorbowanie czynników kompleksu protrombinowego. W takim roztworze uprzywilejowany stosunek tensyd/proteina wynosi od 1:1 do 10:1.
Obróbkę tensydem wykonuje się przeważnie przed oczyszczaniem chromatograficznym, przeważnie przy stosunku tensyd/proteina od 3,5:1 do 10:1, przy czym tensyd można oddzielić w prosty sposób podczas cmomaiugidu i.
W dalszej postaci wykonania jest jednak możliwa obróbka tensydem podczas chromatografii. Zaletą tego wariantu jest to, że czynnik VIII jest w specyficzny sposób adsorbowany także w obecności protein skłonnych do agregacji, a więc i do niepożądanej koadsorpcji.
Gdy wychodzi się z zawierającego czynnik VIII materiału wyjściowego o małej zawartości protein, wówczas często utrzymuje się pewne stężenie tensydu w roztworze wodnym. Wskutek tego stosunek tensyd/proteina może wynosić do 1000:1.
Pozostałość z hodowli komórek, która zawiera rekombinantowy czynnik VIII, zawiera np. proteinę w ilości co najmniej około 100 mg/l. Stężenie tensydu w tej pozostałości z hodowli wynoszące 10% odpowiada więc stosunkowi tensyd/proteina nie większemu niż około 1000:1.
W celu zwiększenia gwarancji przeciwko zakażeniu wirusami nie okrytymi błonami, jest zaproponowana według wynalazku kombinacja z obróbką cieplną czynnika w stanie stałym. Obróbce takiej może być poddany liofilizowany preparat, przy czym obróbka cieplna jest stosowana dla preparatu w stanie wilgotnym.
Uprzywilejowana postać wykonania wynalazku obejmuje więc cieplną obróbkę gorącą parą, przy czym zawartość wody, metanolu lub etanolu w preparacie czynnika VIII w stanie stałym nastawia się na więcej niż 0,05 (5% masy) i mniej niż 0,70 (70% masy), a zwłaszcza mniej niż 0,40 (40% masy) i operację przeprowadza w zamkniętym zbiorniku, ewentualnie w obecności obojętnego gazu ochronnego, w temperaturze mieszczącej się w zakresie od 50 do 121°C.
W liofilizacie czynnika VIII mogą być także zawarte albuminy lub sole, jak cytrynian sodowy, albo aminokwasy.
Nieoczekiwanie okazało się, że ta obróbka cieplna nie powoduje żadnych istotniejszych strat aktywności i dlatego może być poddawany obróbce także dość nietrwały, wysoko oczyszczony czynnik VIII.
Podczas oczyszczania chromatograficznego czynnik VIII zostaje w dużym stopniu uwolniony od zawartości protein towarzyszących. Uprzywilejowana postać wykonania sposobu produkcji obejmuje kilkustopniowe oczyszczanie chromatograficzne, przy czym w pierwszym stopniu stosuje się materiał adsorpcyjny dla czynnika VIII, a w następnym stopniu materiał do adsorpcji zanieczyszczających protein.
Można np. zastosować najpierw wymieniacz anionowy do adsorpcji czynnika VIII, a następnie materiał o dużym powinowactwie do fibronektyny, jak żelatynę lub heparynę, immobilizowany na nierozpuszczalnym nośniku. Także tu chromatografia może być korzystna w obecności tensydów, aby zminimalizować niespecyficzną adsorpcję czynnika VIII na powinowatym nośniku.
Przy wytwarzaniu wolnego od albuminy preparatu czynnika VIII adsorpcję roztworu zawierającego czynnik VIII można wykonywać na żelu trójazynowym (Cibacron-Blue 3GA , immobilizowanym na nierozpuszczalnym nośniku (firmy Bio-Rad); Fractogel® TSK-AF-Blue (firmy Merck), Blue-Sepharose® - CL6B (firmy Pharmacia)).
172 462
Takie żele nie wiążą przy dużej selektywności albuminy, której ilościowo nie można oddzielić od czynnika VIII innymi metodami i która występuje w preparacie czynnika VIII jako zanieczyszczenie, jeżeli zawartość albuminy nie jest pożądana do stabilizacji.
Tako uTrr^/wlljM/wane a ctucn ίρ cm np nrczc7i'7cmo »» t 1VJV7 '' wO V ŁJ j LJ L.W «1.1 W rOirninficzreim7n#mie «π^^ίαηίοΛΤΑ w in \si t I V» j 11I1V111LIV anionowe na bazie akrylanowej, krzemianowej lub węglowodanowej, takie DEAE-Sephadex' (firmy Pharmacia), QAE Sepharose® (firmy Pharmacia), DEAE-Toyo-Pearl® (firmy Tosohaas), TMAE-Tractogel® (firmy Merck) itp.
Wymieniacze anionowe na bazie akrylanowej są wykonane przeważniejako tentakelmatrix (porównaj Mlilter w (1990) Journal of Chromatography 510,133-140 New ion exchangers for the chromatography of biopolymers). W takiej matrycy grupy wymieniacza znajdują się wzdłuż spolimeryzowanego łańcucha bocznego, który jest połączony z powierzchnią matrycy. Wynika z tego duża pojemność załadunkowa i lepsza selektywność.
Czynnik VIII krzepnięcia krwi, który jest wytwarzany sposobem według wynalazku, jest uznany jako zabezpieczony przed wirusami i ma przeważnie dużą aktywność właściwą, wynoszącą co najmniej 25 jednostek/mg proteiny.
---v y uaia^KU.
kKriAJ itej4 unŁvj wuuiug
Drszln»·,/·» zł r» /4 ł r
LUUdlżl nuuj /UJ awu
Przykład I. 1 kg krioprecypitatu, otrzymanego za 101 litrów osocza, został rozpuszczony w 3,5 litrach buforu 1, będącego roztworem NaCl (85 mmoli/l) zbuforowanym tris-lizyną.
W celu wstępnego oczyszczenia roztworu zawierającego czynnik VIII został domieszany do niego Al(OH)3, oddzielony AL(OH)3, domieszany BaSO4 i oddzielony BaSO4. Następnie została nastawiona wartość pH w pozostałości na 6,5 temperatura obniżona do 4°C, a powstały osad oddzielony przez odwirowanie i odrzucony. Z kolei dodano do pozostałości Triton® Χ-100 w ilości 110 g/litr /stosunek tensyd/proieina wynosił 55:1/ i mieszano w ciągu 30 minut w temperaturze 25°C. Czynnik VIII został następnie zaadsorbowany przy pH 6,8 na 750 ml
DEAE-Toyopearl 9 cm.
650 M firmy Tosohaas, zrównoważonego buforem 1, w kolumnie o średnicy
Frakcja zawierająca czynnik VIII została wyeluowana z żelu za pomocą 2,25 litra buforu 2 (500 mM roztwór NaCl zbuforowany cytrynianem).
Aktywność właściwa wynosiła 76 jednostek międzynarodowych czynnika VIII na mg ni ptpjm/
Po wysuszeniu sublimacyjnym oddzielonej przez ultrafiltrację frakcji zawierającej czynnik VIII, ogrzewano czynnik VIII z H2O, w ilości 7,5% wagowych, w zamkniętym zbiorniku, w ciągu 10 godzin w temperaturze 60°C. Aktywność czynnika VIII po tej operacji wyniosla72% w stosunku do nie ogrzanej próby. Obróbka cieplna w obecności albuminy prowadziła do aktywności czynnika VIII wynoszącej 92% nie ogrzanej próby.
Przykład II. 1kg krioprecypitatu został otrzymany i rozpuszczony w taki sam sposób jak w przykładzie I.
Oczyszczanie wstępne zostało wykonane za pomocą Al(OH)3 i BaSO4. Do pozostałości dodano Tween 80 w ilości 120 g na litr /stosunek tensyd/proteina wynosił 4:1/ i mieszano w ciągu 45 minut w temperaturze 25°C. Po rozcieńczeniu buforem 1 w stosunku 1:3 roztwór został oczyszczony chromatograficznie przez adsorpcję czynnika VIII na 400 ml EMD-TMAE-Fractogelu® (firmy Merck). Żel został uprzednio zrównoważony buforem 1. Nie związane proteiny oddzielono za pomocą buforu 1, a następnie wyeluowano buforem 2 frakcję zawierającą czynnik VIII.
Aktywność właściwa wynosiła 45 jednostek międzynarodowych na mg proteiny.
Eluat został zatężony przez ultrafiltrację i wysuszony sublimacyjnie. Czynnik VIII ogrzewano w obecności 9,5% H2O w ciągu 10 godzin w temperaturze 60°C.
Aktywność czynnika VIII wynosiła 87% nie ogrzanej próby.
Współczynnik całkowitej redukcji wirusów według wytycznych EC III/8115/89-EN Komisji Wspólnot Europejskich został oznaczony na przykładzie HIV-1 i wirusów FSME, przy czym zawiesina wirusów była kilkakrotnie dodawana podczas tej operacji. Współczynnik całkowitej redukcji wirusów wynosił co najmniej 12. Odpowiada to redukcji teoretycznego miana wirusowego, wynoszącego co najmniej 12 12 podczas całej operacji.
172 462
Przykład III. Preparat zawierający 3000 jednostek międzynarodowych czynnika VIII, otrzymany według przykładu II, zawierał 120 jednostek fibronektyny (3960 (tg). W celu usunięcia tego zanieczyszczenia preparat zawierający czynnik VIII został oczyszczony chromatograficznie w kolumnie (o srcdnicy 1,6 cm), zawierający 15 ml heparyny-sepharozy, za pomocą buforu o stężeniu 220 mM NaCl.
Czynnik VIII nic został związany, fibronektyna nie była wykrywalna we frakcji zawierającej czynnik VIII. Aktywność właściwa wynosiła 46 jednostek międzynarodowych czynnika VIII na mg proteiny. Fibronektynę można było otrzymać przez wyeluowanie roztworem NaCl o stężeniu 750 mM.
Przykład IV. 1 kg krioprecypitatu został otrzymany i rozpuszczony w taki sam sposób jak w przykładzie I.
Oczyszczanie wstępne zostało wykonane za pomocą Al(OH)31 PEG 4000. Dodano 0,15% Al(OH)3 i mieszano w ciągu 30 minut w temperaturze 25°C. Al(OH)3 został następnie oddzielony przez odwirowanie i odrzucony. Do pozostałości dodano 3,15% PEG 4000, nastawiono wartość pH na 6,5 i obniżono temperaturę do 9°C. Mieszano w ciągu 30 minut, a powstały osad został oddzielony przez odwirowanie i odrzucony.
Do pozostałości dodano następnie Tween 80 w ilości 80 g na litr /stosunek tensyd/proteina wynosił 50:1/ i całość dobrze wymieszano. Po rozcieńczeniu buforem 1 w stosunku 1:3 roztwór został poddany chromatografowaniu na 1,75 litra Q-Sepharose® Fast Tlow firmy Pharmacia.
Czynnik VIII został zaadsorbowany, a niezwiązane proteiny oddzielone za pomocą 7,9 litrów buforu 1. Przez wyeluowanie użytym w ilości 5,25 litrów roztworem 500 mM NaCl zbuforowanym cytrynianem sodowym została otrzymana frakcja zawierająca czynnik VIII.
Aktywność właściwa wynosiła 89 jednostek międzynarodowych czynnika VIII na mg proteiny.
Zatężony koncentrat został liofilizowany, a następnie ogrzany w obecności 8% wagowych H2O w zamkniętym naczyniu w ciągu 10 godzin w temperaturze 60°C.
Aktywność czynnika VIII wynosiła 81% nie ogrzanej próby.
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 90 egz.
Cena 2,00 zł

Claims (7)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Sposób wytwarzania wysoko oczyszczonego, zabezpieczonego przed wirusami preparatu czynnika VIII, znamienny tym, ze obejmuje kombinację następujących operacji: a) oczyszczanie chromatograficzne frakcji zawierającej czynnik VIII, b) obróbkę tensydem czynnika VIII w roztworze wodnym przy stosunku tensyd/proteina od 1:1 do 1000:1 oraz c) obróbkę cieplną preparatu czynnika VIII w stanie stałym.
  2. 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, ze obróbkę tensydem prowadzi się przed oczyszczaniem chromatograficznym, przy czym stosunek tensyd/proteina wynosi od 3,5:1 do 10:1.
  3. 3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, ze ouióbkę tensydem piowddzi się podczas oczyszczania chromatograficznego.
  4. 4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że obróbkę cieplną prowadzi się gorącą parą, przy czym zawartość wody, metanolu lub etanolu w preparacie czynnika VII! w stanie stałym nastawia się na więcej niż 0,05 (5% masy) i mniej niż 0,70 (70% masy), a zwłaszcza mniej niż 0,40 (40% masy), i operację przeprowadza się w zamkniętym zbiorniku, ewentualnie w obecności obojętnego gazu ochronnego, w temperaturze mieszczącej się w zakresie 50-121°C.
  5. 5. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że oczyszczanie chromatograficzne przeprowadza się kilkustopniowo, przy czym w pierwszym stopniu stosuje się materiał, który adsorbuje czynnik VIII, a w następnym stopniu stosuje się materiał do adsorpcji zanieczyszczających protein.
  6. 6. Sposób według zastrz. 1 albo 5, znamienny tym, że do oczyszczania chromatograficznego stosuje się wymieniacz anionowy na osnowie akrylanu, krzemianu lub węglowodanu.
  7. 7. Sposób według zastrz. 6, znamienny tym, że stosuje się wymieniacz anionowy, którą są połączone spolimeryzowane łańcuchy boczne, zawierające e lx i o r? u i u λ* λ / cip χχ\·λ{τ\ι C'\i *-< 1 ϋνννχ y W J· 5 grupy wymieniacza anionowego.
PL93298670A 1992-04-24 1993-04-22 Sposób wytwarzania wysoko oczyszczonego, zabezpieczonego przed wirusami preparatu czynnika VIII PL PL PL PL PL PL PL PL172462B1 (pl)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AT0084992A AT399818B (de) 1992-04-24 1992-04-24 Verfahren zur herstellung einer hochgereinigten virussicheren faktor viii-präparation

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL298670A1 PL298670A1 (en) 1994-04-05
PL172462B1 true PL172462B1 (pl) 1997-09-30

Family

ID=3501200

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL93298670A PL172462B1 (pl) 1992-04-24 1993-04-22 Sposób wytwarzania wysoko oczyszczonego, zabezpieczonego przed wirusami preparatu czynnika VIII PL PL PL PL PL PL PL

Country Status (18)

Country Link
US (1) US5410022A (pl)
EP (1) EP0567448B2 (pl)
JP (1) JP2511631B2 (pl)
AT (2) AT399818B (pl)
AU (1) AU659301B2 (pl)
BR (1) BR9301641A (pl)
CA (1) CA2094347C (pl)
CZ (1) CZ279979B6 (pl)
DE (1) DE59308628D1 (pl)
DK (1) DK0567448T4 (pl)
ES (1) ES2117703T5 (pl)
FI (1) FI106468B (pl)
HU (1) HU210632B (pl)
MX (1) MX9302279A (pl)
NO (1) NO307465B1 (pl)
PL (1) PL172462B1 (pl)
SK (1) SK279750B6 (pl)
ZA (1) ZA932843B (pl)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1994013329A1 (de) * 1992-12-16 1994-06-23 Immuno Aktiengesellschaft Verfahren zur herstellung eines virussicheren biologischen präparates
DE4320294A1 (de) * 1993-06-18 1994-12-22 Immuno Ag Verwendung von humanem Protein C zur Verhinderung und Behandlung von Thrombozytenablagerungen
DE4325872C1 (de) * 1993-08-02 1994-08-04 Immuno Ag Virusinaktivierte Faktor Xa-Präparation
AT402788B (de) * 1993-08-03 1997-08-25 Immuno Ag Virussichere blutgerinnungsfaktor xiii-präparation
DE4337573C1 (de) * 1993-11-04 1995-05-18 Octapharma Ag Verfahren zur Herstellung einer virusinaktivierten Faktor VIII enthaltenden Fraktion mittels chromatographischer Methoden
DE4407837C1 (de) * 1994-03-09 1995-08-17 Octapharma Ag Verfahren zur Gewinnung von hochreinem, virusinaktiviertem alpha¶1¶-Antitrypsin mittels Anionenaustauscher-Chromatographie
US5659017A (en) * 1995-11-07 1997-08-19 Alpha Therapeutic Corporation Anion exchange process for the purification of Factor VIII
AT403764B (de) 1996-03-15 1998-05-25 Immuno Ag Stabiler faktor viii/vwf-komplex
DE19623293C2 (de) * 1996-06-11 1998-10-22 Biotest Pharma Gmbh Nicht-immunogene Faktor VIII-enthaltende Zusammensetzung und ein Verfahren zu ihrer Herstellung
AT404358B (de) 1997-02-04 1998-11-25 Immuno Ag Verfahren zur chromatographischen reinigung bzw. fraktionierung von von willebrand-faktor aus einem vwf-hältigen ausgangsmaterial
CN100553678C (zh) 1999-02-22 2009-10-28 巴克斯特国际有限公司 新的无白蛋白的因子ⅷ制剂
US20040117862A1 (en) * 2002-03-11 2004-06-17 Cooper Julian D. Production of high levels of transgenic factor VII with engineered stability and its therapeutic uses
US20060110788A1 (en) * 2004-10-01 2006-05-25 Invitrogen Corporation Feeding buffers, systems, and methods for in vitro synthesis of biomolecules
ES2706296T3 (es) 2008-11-07 2019-03-28 Univ Connecticut Formulaciones de Factor VIII
CN101967188B (zh) * 2010-11-08 2012-11-28 江西博雅生物制药股份有限公司 一种人凝血因子ⅷ的制备工艺
US20160120964A1 (en) * 2014-11-05 2016-05-05 George Shlieout Processes for producing compositions with improved safety profile having lipase activity and compositions suitable for pharmaceutical use

Family Cites Families (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3920625A (en) * 1973-06-19 1975-11-18 Kabi Ab Isolation of coagulation factors from biological material using cross linked sulfated, sulfonated carbohydrates
AT350726B (de) * 1976-08-30 1979-06-11 Immuno Ag Verfahren zur herstellung einer blut- gerinnungsfoerdernden praeperation aus menschlichem blutplasma
FR2435832A1 (fr) * 1978-07-21 1980-04-04 Alsthom Cgee Dispositif de connexion electrique
US4250139A (en) * 1979-02-01 1981-02-10 Collagen Corporation Microwave sterilization of dry protein
DE2916711A1 (de) * 1979-04-25 1980-11-06 Behringwerke Ag Blutgerinnungsfaktoren und verfahren zu ihrer herstellung
DE3176491D1 (en) * 1980-03-05 1987-11-26 Miles Lab Pasteurized therapeutically active protein compositions
DE3173208D1 (en) * 1980-10-06 1986-01-23 Edward Shanbrom Method of reducing undesirable activities of biological and pharmaceutical products
US4314997A (en) * 1980-10-06 1982-02-09 Edward Shanbrom Purification of plasma protein products
DE3043857A1 (de) * 1980-11-21 1982-07-08 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Verfahren zur herstellung von blutgerinnungsfaktoren und danach hergestellte praeparation der faktoren ii und vii
DE3045153A1 (de) * 1980-11-29 1982-07-08 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Verfahren zur herstellung von blutgerinnungsfaktoren und danach hergestellte praeparation der faktoren ix und x
US4495278A (en) * 1981-04-27 1985-01-22 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Process for making novel blood clotting enzyme compositions
US4456590B2 (en) * 1981-11-02 1989-05-30 Heat treatment of lyphilized blood clotting factor viii concentrate
US4481189A (en) * 1982-04-14 1984-11-06 New York Blood Center Inc. Process for preparing sterilized plasma and plasma derivatives
US4379085A (en) * 1982-05-14 1983-04-05 American National Red Cross Heat stabilization of plasma proteins
US4511556A (en) * 1982-06-10 1985-04-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inactivation of a lipid virus
JPS59134730A (ja) * 1983-01-20 1984-08-02 Green Cross Corp:The 血液凝固第８因子の加熱処理法
CA1213827A (en) * 1983-04-29 1986-11-12 Ricardo H. Landaburu Process for pasteurizing fibronectin
ATE36457T1 (de) * 1983-05-02 1988-09-15 Immuno Ag Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen krankheitserregern.
US4540573A (en) * 1983-07-14 1985-09-10 New York Blood Center, Inc. Undenatured virus-free biologically active protein derivatives
JPS6054287B2 (ja) * 1983-10-19 1985-11-29 株式会社ミドリ十字 血漿蛋白の加熱処理方法
US4490361A (en) * 1983-12-02 1984-12-25 Alpha Therapeutic Corporation Virus inactivating heat treatment of plasma fractions
AT389815B (de) * 1984-03-09 1990-02-12 Immuno Ag Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern in blutprodukten
US5043428A (en) * 1984-08-31 1991-08-27 Behringwerke Aktiengesellschaft Pasteurized, isoagglutinin-free factor VIII preparation and a process for its production
DE3432083A1 (de) * 1984-08-31 1986-03-06 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Pasteurisierte, isoagglutininfreie faktor viii-praeparation und verfahren zu ihrer herstellung
JPH0669961B2 (ja) * 1984-09-25 1994-09-07 株式会社ミドリ十字 免疫グロブリンの加熱処理方法
JPH0825902B2 (ja) * 1985-02-21 1996-03-13 株式会社ミドリ十字 γ−グロブリンの加熱処理方法
US4673733A (en) * 1985-04-11 1987-06-16 Sudhish Chandra Treatment of biological and pharmaceutical products adsorbed on a solid phase with virus and pyrogen inactivating agents
AT391808B (de) * 1986-11-03 1990-12-10 Immuno Ag Verfahren zur herstellung einer faktor viii (ahf)-haeltigen fraktion
AT388501B (de) * 1987-02-12 1989-07-25 Immuno Ag Verfahren zur herstellung von parenteral verabreichbaren blutprodukten
AU2251288A (en) * 1987-05-15 1988-12-06 Alan I. Rubinstein Sequential improved method for treatment of human blood- clotting factor products
IL86417A (en) * 1987-05-22 1992-09-06 Armour Pharma Process for the inactivation of pathogens in biological or pharmaceutical material by mixing with aqueous solution containing a sugar(alcohol)and neutral salts as stabilizers
AT391809B (de) * 1988-01-12 1990-12-10 Immuno Ag Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern in blutplasmaprodukten
FR2630115B1 (fr) * 1988-04-14 1994-10-28 Merieux Inst Procede de stabilisation des solutions d'albumine humaine et solution obtenue
ATE85220T1 (de) * 1988-05-27 1993-02-15 Centre Regional De Transfusion Verfahren zur herstellung eines hochreinen, virusfreien antihaemophiliefaktors mittels chromatographie.
AT397203B (de) * 1988-05-31 1994-02-25 Immuno Ag Gewebeklebstoff
FR2632309B1 (fr) * 1988-06-07 1990-08-24 Lille Transfusion Sanguine Procede de purification par voie chromatographique de proteines, notamment de facteur viii, et les produits obtenus
AT390801B (de) * 1988-07-28 1990-07-10 Immuno Ag Verfahren zur herstellung von lys-plasminogen
ATE85221T1 (de) * 1988-11-05 1993-02-15 Octapharma Ag Verfahren zur herstellung eines hochreinen, nicht infektioesen antihaemophiliefaktors mittels chromatographie.
US5156973A (en) * 1988-11-23 1992-10-20 Edward Shanbrom Antiviral blood sampling process and apparatus
DE3843126C3 (de) * 1988-12-22 1994-10-06 Octapharma Ag Verfahren zur Herstellung eines hochreinen Thrombinkonzentrates
ES2057191T5 (es) * 1989-01-13 2003-05-01 Mitsubishi Pharma Corp Metodo de produccion para una composicion que contiene proteinas.
EP0431129B1 (en) * 1989-06-15 1996-05-29 Rorer International (Overseas) Inc. Methods for the inactivation of viruses in viral-contaminated pharmaceutical compositions
IE73210B1 (en) * 1990-01-24 1997-05-07 Warner Lambert Co Process for the production of thrombin and high purity thrombin preparation thereby obtained
US5217737A (en) * 1991-05-20 1993-06-08 Abbott Laboratories Plastic containers capable of surviving sterilization
AT402891B (de) * 1991-06-20 1997-09-25 Immuno Ag Verfahren zur herstellung eines inaktivierten blutproduktes
FR2679251B1 (fr) * 1991-07-18 1993-11-12 Nord Assoc Essor Transfusion San Procede de preparation d'un concentre de thrombine humaine destine a un usage therapeutique.
FR2681867B1 (fr) * 1991-09-26 1993-12-31 Pasteur Merieux Serums Vaccins Procede de purification du facteur viii et preparations obtenues.
AT398079B (de) * 1991-11-04 1994-09-26 Immuno Ag Präparation mit thrombinaktivität sowie verfahren zu ihrer herstellung
FR2841484B1 (fr) * 2002-06-26 2004-09-10 Boucq De Beaudignies Ghisla Le Dispositif et procede de filtration de l'air et des gaz avec regeneration des particules captees

Also Published As

Publication number Publication date
DK0567448T3 (da) 1999-03-22
US5410022A (en) 1995-04-25
CZ279979B6 (cs) 1995-09-13
MX9302279A (es) 1994-08-31
ZA932843B (en) 1993-11-23
AT399818B (de) 1995-07-25
FI106468B (fi) 2001-02-15
SK39193A3 (en) 1993-11-10
FI931826A (fi) 1993-10-25
AU659301B2 (en) 1995-05-11
AU3687593A (en) 1993-10-28
DE59308628D1 (de) 1998-07-09
ES2117703T5 (es) 2005-07-16
NO931476D0 (no) 1993-04-22
DK0567448T4 (da) 2005-05-02
FI931826A0 (fi) 1993-04-22
BR9301641A (pt) 1993-10-26
ATE166881T1 (de) 1998-06-15
HU210632B (en) 1995-06-28
EP0567448B1 (de) 1998-06-03
JPH069694A (ja) 1994-01-18
HUT64777A (en) 1994-02-28
SK279750B6 (sk) 1999-03-12
EP0567448B2 (de) 2005-01-05
JP2511631B2 (ja) 1996-07-03
NO931476L (no) 1993-10-25
EP0567448A1 (de) 1993-10-27
CA2094347C (en) 2002-06-25
CZ69293A3 (en) 1993-12-15
NO307465B1 (no) 2000-04-10
ES2117703T3 (es) 1998-08-16
CA2094347A1 (en) 1993-10-25
HU9301038D0 (en) 1993-06-28
PL298670A1 (en) 1994-04-05
ATA84992A (de) 1994-12-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL172462B1 (pl) Sposób wytwarzania wysoko oczyszczonego, zabezpieczonego przed wirusami preparatu czynnika VIII PL PL PL PL PL PL PL
EP0315968B2 (en) Plasma and recombinant protein formulations in low ionic strength media
US4876241A (en) Stabilization of biological and pharmaceutical products during thermal inactivation of viral and bacterial contaminants
EP0314095B1 (en) Plasma and recombinant protein formulation in high ionic strength media
US5605884A (en) Factor VIII formulations in high ionic strength media
US5639730A (en) Method of producing a virus-safe biological preparation
US6358534B1 (en) Immunotolerant prothrombin complex preparation
JPH0580455B2 (pl)
CZ20023454A3 (cs) Přípravek obsahující hemostaticky aktivní vWF a způsob jeho přípravy
JPS6237010B2 (pl)
CA1337688C (en) Stabilization of biological and pharmaceutical products during thermal inactivation of viral and bacterial contaminants
WO1998030230A1 (fr) Compositions proteinees et procede de production
JP2689390B2 (ja) 因子▲ｖｉｉｉ▼のゲル▲ろ▼過法
CA2208928C (en) Selective stabilization of protein during viral inactivation
HU211239A9 (hu) Eljárás nagy tisztaságú, vírusbiztos Vili faktor-készítmény előállítására
AU6711898A (en) A method for inactivating pathogens, in particular viruses, in a biological material
CN116715751A (zh) 一种人血管性血友病因子/人凝血因子ⅷ复合物干热处理稳定剂及其用途
PL187886B1 (pl) Sposób wytwarzania nieimmunogennej kompozycji zawierającej czynnik krzepnięcia VIII
JPH1053534A (ja) α２プラスミンインヒビターの製造方法
JPH02304030A (ja) 抗ｎａｎｂウイルス抗体陽性静注用免疫グロブリン製剤の製造方法