FI106468B - Menetelmä virusturvallisen, erittäin puhtaan tekijä VIII:n valmistamiseksi - Google Patents

Menetelmä virusturvallisen, erittäin puhtaan tekijä VIII:n valmistamiseksi Download PDF

Info

Publication number
FI106468B
FI106468B FI931826A FI931826A FI106468B FI 106468 B FI106468 B FI 106468B FI 931826 A FI931826 A FI 931826A FI 931826 A FI931826 A FI 931826A FI 106468 B FI106468 B FI 106468B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
factor viii
preparation
process according
chromatographic purification
treatment
Prior art date
Application number
FI931826A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI931826A0 (fi
FI931826A (fi
Inventor
Johann Eibl
Otto Schwarz
Yendra Linnau
Peter Turecek
Friedrich Elsinger
Herbert Gritsch
Guenther Woeber
Original Assignee
Baxter Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=3501200&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=FI106468(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Baxter Ag filed Critical Baxter Ag
Publication of FI931826A0 publication Critical patent/FI931826A0/fi
Publication of FI931826A publication Critical patent/FI931826A/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI106468B publication Critical patent/FI106468B/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
    • Y10S530/829—Blood
    • Y10S530/83—Plasma; serum
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
    • Y10S530/829—Blood
    • Y10S530/83—Plasma; serum
    • Y10S530/831—Cohn fractions

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Description

106468
Menetelmä virusturvallisen, erittäin puhtaan tekijä VIII:n valmistamiseksi 5 Keksintö koskee menetelmää virusturvallisen, erittäin puhtaan tekijä VIII:n valmistamiseksi.
Veren hyytyminen laukaistaan joukolla erilaisten proteiinien tai vastaavasti entsyymien peräkkäisiä reaktioita. Veren 10 hyytymistekijöiden puutteen johdosta estyy fibriinin muodos tuminen fibrinogeenistä ja siten myös haavan sulkeutuminen; tästä seuraa verenvuotoja. Tällainen tapaus esiintyy esimerkiksi hemofilia A:ssa. Tämä on levinnein verenvuototauti ja sen aiheuttaa tekijä VIII:n puute. Tekijä VIII esiintyy plas-15 massa yhdessä Willebrand-tekijän (vWF) kanssa ei-kovalentti- sesti sitoutuneena kompleksina (FVIII/vWF). Proteiineja FVIII ja vWF sekä kompleksia FVIII/vWF käytetään hemofiliaa sairastavien korvaushoitoon. Vastaaville farmaseuttisille valmisteille asetetaan suuria vaatimuksia tehokkuuden ja turvalli-20 suuden suhteen.
Lähtöaineena valmisteiden valmistamiseksi on useimmiten ihmisen plasma, joka sisältää tekijä VIII:a kuitenkin ainoastaan vähäisinä määrinä (n. 0,1 - 0,2 /Ltg/ml) . Tekijä VIII:n tal-:*\25 teenottamiseksi ei ole tästä syystä käsiteltävä ainoastaan suuria määriä, vaan myös häiritsevät saattoproteiinit on • · erotettava mahdollisimman pitkälti, jolloin useilla näistä saattoproteiineista on samankaltaisia fysikaalis-kemiallisia ··· ominaisuuksia.
« · » • « · * 30
Eräänä toisena vaikeutena on se, että valmiste on vielä inak- M ( ' • · · : ·* tivoitava infektioosisten aineiden suhteen, koska lähtöaine • * · *.* * voi sisältää esim. hepatiittivirusta tai HIV:tä. Lisäksi ··· tulee vielä se seikka, että jokainen yksittäinen menetelmän • · t « .••*35 vaihe ja jokainen inaktivointi on suoritettava siten, että « · · haluttujen hyytymistekijöiden biologinen aktiivisuus säilyy : " mahdollisimman pitkälti.
• · • · · • · * 2 106468
Klassisissa valmistusmenetelmissä käytetään asteittaisia saostuksia (esim. kryosaostusta tai saostuksia lisäämällä ammoniumsulfaattia), joiden tarkoituksena on poistaa epäpuhtauksia, kuten protrombiinikompleksitekijöitä, fibrinogeeniä 5 ja fibronektiiniä. Saatujen tekijä VIII-konsentraattien puh taus on 1 E/mg proteiinia ja tavallisesti se on korkeintaan 10 - 20 E/mg proteiinia.
EP-hakemusjulkaisusta 0 378 208 tunnetaan menetelmä tekijä 10 VIII:n valmistamiseksi, jonka menetelmän mukaisesti kryosak- kaliuos alistetaan käsittelyyn orgaanisella liuottimena [tri-(n-butyyli)fosfaatti (TNBP)] liuokoiseksi tekevän aineen Tween®80 läsnäollessa virusten inaktivoimiseksi. Tekijä VIII alistetaan tämän jälkeen kaksivaiheiseen puhdistussaostuk-15 seen, lyofilisoidaan ja kuumennetaan kuivassa tilassa.
EP-patenttijulkaisussa 0 050 061 on esitetty biologisten ja farmaseuttisten tuotteiden käsittelyä 0,25 - 10 paino-%:lla ei-denaturoivaa amfifiiliä (detergenttiä).
20
Menetelmä proteiinien käsittelemiseksi orgaanisilla liuottimilla, mahdollisesti detergenttien läsnäollessa, on tunnettu « * * i". EP-patenttijulkaisusta 0 131 740. Tässä osoitetaan, että • « « ; / käsittely detergentillä yksinään on suhteellisen tehoton • * * ’•‘•25 virusinaktivoinnin suhteen. Orgaaniset liuottimet vaikuttavat * * kuitenkin ainoastaan kelmuvaipallisia viruksia vastaan. On ·· · • V esiintynyt jo hepatiitti-infektioita, jotka johtuvat hepa- * t« .* tiitti A: 11a saastuneista tekijä VIII-konsentraateista, jotka on virusinaktivoitu tällä tavalla. Hepatiitti A-viruksella ei •*.’30 ole lipidipitoista kelmua; tästä syystä se ei inaktivoidu • · (Mannucci P M et ai (1992) The Lancet 339, 819 "Outbreak of hepatitis A among Italian patients with haemophilia").
• · · » · · · * · · *...* Tekijä Vlll-pitoisten fraktioiden käsittely orgaanisilla :*.35 liuottimilla suoritetaan useimmiten siten, että toksisesti .·. ; vaikuttava liuotin on erotettava käsittelyn päätyttyä panok- • · · sellisella tavalla. EP-hakemusjulkaisussa 0 343 275 ehdote- 106468 taan tätä tarkoitusta varten tekijä VIII-pitoisten fraktioiden uuttamista öljyillä, kuten soijaöljyllä tai risiiniöljyllä. Tämän jälkeen tekijä VIII alistetaan geelipermeaatiokro-matografiaan ioninvaihdinmateriaaleissa.
5 EP-hakemusjulkaisun 0 094 611 menetelmän mukaisesti tekijä VIII:a kuumennetaan kuivassa tilassa infektiivisyyden vähentämiseksi.
10 EP-patenttijulkaisun 0 159 311 mukaisesti verituotteita kuu mennetaan kiinteässä, kosteassa tilassa mahdollisesti esiintyvien virusten inaktivoimiseksi. Tällä tavalla "höyrykuumen-netun" tekijä VIII-konsentraatin kohdalla ei tunneta infek-tiotapausta (Mannucci P M (1992) Transfusion 32, 134 - 138 15 "Low risk of viral infection after administration of vapor- heated factor VIII concentrates").
Erittäin puhtaiden tekijä Vlll-konsentraattien lämpökäsittelyä pidetään kriittisenä. Kromatografisesti puhdistettuun 20 tekijä VIII:aan on EP-hakemusjulkaisun 0 173 242 mukaisesti lisättävä stabilisaattoreiden (hiilihydraattien ja aminohappojen) seos ennen, kuin tätä kuumennetaan liuoksessa. Muutoin ;**, on tavanomaista alistaa tekijä VIII-pitoinen fraktio vielä '* / ennen kromatografista puhdistusta käsittelyyn virusten inak-
* · I
.'.25 tivoimiseksi.
• · · · · • · • · · • ’/· Keksinnön tehtävänä on saada käyttöön menetelmä, jonka mukai- :T: sesti voidaan valmistaa puhdas tekijä VIII, jota pidetään virusturvallisena tehokkaan käsittelyn johdosta virusten :\*30 inaktivoimiseksi.
• · • · • · ·
« » I
• · ·
Valmistetun valmisteen spesifisen aktiivisuuden tulee olla »·» ...: etenkin vähintään 25 E/mg proteiinia.
• * # • · • · • « « :\35 Tehtävä ratkaistaan keksinnön mukaisesti seuraavien toimenpi-
« · I
.·. : teiden yhdistelmällä: • * · 4 106468 a) tekijä VIII-pitoisen fraktion kromatografinen puhdistus, b) tekijä VIII:n tensidikäsittely vesiliuoksessa tensidi/pro-teiinisuhteessa 1:1 - 1000:1 ja c) tekijä VIII-valmisteen lämpökäsittely kiinteässä tilassa.
5
Tekijä VIII voidaan valmistaa keksinnön mukaisesti FVIII/wWF-kompleksina, FVIII:na tai vastaavasti vWF:nä. Valmistuksen aikana voidaan myös suorittaa mahdollinen käsittely esim. kalsiumkloridillä FVIII/vWF-kompleksin erottamiseksi.
10
On todettu, että keksinnön mukaista tensidikäsittelyä voidaan käyttää yllättävästi virusten inaktivoimiseksi menestyksellisesti. Tensideinä käytetään esimerkiksi ei-ionisia tensidejä, kuten Tween®80:tä, Triton®X-100:aa, Triton®X-114:ta, dodekyy-15 limaltosidiä tai oktyyliglukosidia, kahtaisionisia tensidejä, kuten dimetyylioktyyliamiini-N-oksidia tai N-dodekyyli-N,N-dimetyyli-3-ammonio-l-propaanisulfonaattia, ja ionisia tensidejä, kuten natriumdeoksikolaattia tai natriumkolaattia. Tensidikäsittely suoritetaan ennen kaikkea vesiliuoksessa, 20 joka on vapaa orgaanisista liuottimista. Vesiliuoksena käyte tään esim. kryosakkaliuosta, joka on puhdistettu mahdollisesti vielä adsorboimalla protrombiinikompleksitekijät. Tällai-sessa liuoksessa tensidi/proteiini-suhde on edullisesti 1:1 - / 10:1.
• « I
*.'.25 t ""· Tensidikäsittely suoritetaan edullisesti ennen kromatografis- • · · • ta puhdistusta, etenkin tensidi/proteiini-suhteella 3,5:1 - ::: 10:1, jolloin tensidi voidaan erottaa yksinkertaisella taval la kromatografiän aikana.
:\*30 • « • ·
Eräässä toisessa sovellutusmuodossa tensidikäsittely on kui- • · · tenkin myös mahdollista kromatografiän aikana. Tässä muunnel- • · · massa on se etu, että tekijä VIII adsorboituu spesifisellä • · · ·...· tavalla myös aggregoitumiseen ja siten ei-toivottuun koadsor- :\35 hoitumiseen taipuvaisten proteiinien läsnäollessa.
• · · 5 106468
Kun lähdetään tekijä VIII-pitoisesta lähtöaineesta, jonka proteiinipitoisuus on vähäinen, on usein sopivaa säilyttää määrätty tensidikonsentraatio vesiliuoksessa. Siten tensi-di/proteiini-suhde voi olla jopa 1000:1.
5
Soluviljelysupernatantissa, joka sisältää yhdistelmä-tekijä Viiltää, proteiinipitoisuutena on esimerkiksi vähintään n.
100 mg/1. Kymmenprosenttinen tensidikonsentraatio tässä vil-jelysupernatantissa vastaa siten tensidi/proteiini-suhdetta, 10 joka on korkeintaan n. 1000:1.
Turvallisuuden parantamiseksi ei-kelmuvaipallisten virusten aiheuttaman infektion suhteen ehdotetaan keksinnön mukaista yhdistelmää tekijä VIII:n lämpökäsittelyn kanssa kiinteässä 15 tilassa. Tämä voidaan suorittaa lyofilisoidulla valmisteella, jolloin lämpökäsittely tapahtuu edullisesti valmisteen kosteassa tilassa.
Keksinnön eräs edullinen suoritusmuoto käsittää siten lämpö- 20 käsittelyn kuumalla höyryllä, jolloin tekijä VIII-valmiste säädetään kiinteässä tilassa veden, metanolin tai etanolin . pitoisuuteen, joka on yli 0,05 (5 paino-%) ja alle 0,70 (70 » « paino-%), etenkin alle 0,40 (40 paino-%), ja sitä kuumenne- • « « *· taan suljetussa astiassa, mahdollisesti inertin suojakaasun « « *.*.25 läsnäollessa 50...121 °C:n lämpötila-alueella.
* · • · » • Tekijä Vlll-lyofilisaattiin voi sisältyä edelleen albumiinia tai vastaavasti suoloja, kuten natriumsitraattia, tai vastaavasti aminohappoja.
:\*30 • · .···, Yllättävästi on osoittautunut, että tämä lämpökäsittely ei ♦ ♦ ♦ aiheuta olennaisia aktiivisuuden häviöitä, mistä syystä voi-daan käsitellä myös suhteellisen epästabiilia, erittäin puh- • · · dasta tekijä VIII:aa.
35 « 4 * : Kromatografisen puhdistuksen aikana tekijä VIII vapautetaan pitkälti saattoproteiineista. Valmistusmenetelmän eräs edul- 6 106468 linen suoritusmuoto käsittää monivaiheisen kromatografisen puhdistuksen, jolloin yhdessä vaiheessa käytetään adsorptio-ainetta tekijä VIII:aa varten ja toisessa vaiheessa käytetään materiaalia saastuttavien proteiinien adsorboimiseksi.
5
Siten voidaan käyttää esim. ensin anioninvaihdinta tekijä VIII:n adsorboimiseksi ja sitten materiaalia, jolla on suuri affiniteetti fibronektiinin, kuten gelatiinin tai hepariinin suhteen ja joka on immobilisoitu liukenemattomaan kantoainee-10 seen. Myös tässä kromatografointi tensidien läsnäollessa voi olla edullista tekijä Villin epäspesifisen adsorption minimi-moiseksi affiniteettikantoaineeseen.
Albumiinivapaan tekijä VIII-valmisteen valmistamiseksi tekijä 15 VIII-pitoinen liuos voidaan adsorboida triatsiinigeeleihin (Cibacron®-Blue 3GA, immobilisoituna liukenemattomaan kanto-aineeseen (Bio-Rad); Fractogel® TSK-AF-Blue (Merck), Blue-Sepharose®-CL6B (Pharmacia)).
20 Tämäntyyppiset geelit sitovat suurella selektiivisyydellä albumiinia, joka ei ole erotettavissa kvantitiivisesti muilla . menetelmillä tekijä Villistä ja esiintyy epäpuhtautena tekijä VIII-valmisteissa, mikäli albumiinipitoisuus ei ole toivottua
« 4 I
*· stabilointia varten.
• · • * * V.25 *·"· Edullisesti kromatografiseen puhdistukseen käytetään anionin- *« · ♦ vaihtimia, jotka perustuvat akrylaattiin, silikaattiin tai hiilihydraattiin, kuten DEAE-Sephadex® (Pharmacia) , QAE-Sepharose® (Pharmacia), DEAE-Toyo-Pearl® (Tosohaas), TMAE- :·.·30 Fractogel® (Merck) ja vastaavat.
• · • · « • « ·
Akrylaattipohjäiset anioninvaihtimet on muodostettu edulli- « sesti "tuntosarvimatriisiksi" (vrt. Muller W (1990) Journal I i 4 of Chromatography 510, 13 3 - 140 "New ion exchangers for the 35 chromatography of biopolymers"). Tällaisessa matriisissa • ,·, : vaihdinryhmät ovat polymeeristä sivuketjua pitkin, joka on « « · « * 7 106468 yhdistynyt matriisipintaan. Tästä syntyy hyvä varauskapasi-teetti ja parantunut selektiivisyys.
Veren hyytymistekijä VIII, joka on valmistettu keksinnön 5 mukaisen menetelmän mukaisesti, on virusturvallinen ja sillä on edullisesti korkea spesifinen aktiivisuus, joka on vähintään 25 E/mg proteiinia.
Keksintöä selitetään vielä lähemmin seuraavien esimerkkien 10 avulla.
Esimerkki 1 1 kg kryosakkaa, joka oli saatu 101 litrasta plasmaa, liuo-15 tettiin 3,5 litraan puskuria 1, Tris-lysiini-puskuroitua
NaCl-liuosta (85 mmoolia/1).
Tekijä VIII-pitoisen liuoksen esipuhdistamiseksi lisättiin AI (OH) 3: a, AI (OH) 3 poistettiin, lisättiin BaS04:ää ja BaS04 20 erotettiin. Tämän jälkeen supernatantin pH säädettiin arvoon 6,5, lämpötilaa alennettiin 4 °C:seen ja muodostunut sakka ,·. erotettiin sentrifugoimalla ja heitettiin pois.
; Lisättiin 110 g Triton®X-100:aa/1 supernatanttia (tensidi/pr- • · < ’*'25 oteiini-suhde 55:1) ja sekoitettiin 30 minuutin ajan 25 * * °C:ssa. Tekijä VIII adsorboitiin sitten pH-arvossa 6,8 750 ·· · 1 V mitään DEAE-Toyopearl® 650 M:ää (valmistaja Tosohaas), joka • ·« V * oli tasapainotettu puskurilla 1, pylväässä, jonka läpimitta oli 9 cm.
:v3 0 ♦ *
Tekijä VIII-pitoinen fraktio eluoitiin geelistä 2,25 litralla •# puskuria 2 (sitraatti-puskuroitu 500 mM NaCl-liuos).
• · · ·»·· • * » *..·* Spesifinen aktiivisuus oli 76 IE tekijä VIII:aa/mg proteii- •\?5 nia.
* · • ·« « · 8 106468
Ultrasuodatetun tekijä VIII-pitoisen fraktion jäädytyskuiva-tuksen jälkeen tekijä VIII:aa kuumennettiin 10 tunnin ajan 60 °C:ssa suljetussa astiassa käyttämällä läsnä 7,5 % p/p H20:ta. Tekijä VIII-aktiivisuus oli 72 % kuumentamattomasta 5 näytteestä. Lämpökäsittely albumiinin läsnäollessa sai aikaan tekijä VIII-aktiivisuuden, joka oli 92 % kuumentamattomasta näytteestä.
Esimerkki 2 10 1 kg kryosakkaa otettiin talteen ja liuotettiin samalla tavalla kuin esimerkissä 1.
Esipuhdistus suoritettiin Al(OH)3:lla ja BaS04:llä. Superna-15 tanttiin lisättiin 120 g Tween 80:tä litraa kohden (tensidi/proteiini-suhde 4:1) ja sekoitettiin 45 minuutin ajan 25 °C:ssa. Laimennettiin puskurilla 1 suhteessa 1:3 ja sitten liuos puhdistettiin kromatografisesti adsorboimalla tekijä VIII 400 ml:aan EMD-TMAE-Fractogel®:iä (Merck). Geeli 20 tasapainotettiin edellä puskurilla 1. Sitoutumattomat prote iinit erotettiin puskurilla 1 ja tämän jälkeen tekijä VIII- ,·, pitoinen fraktio eluoitiin puskurilla 2.
« « < I I « J < I Spesifinen aktiivisuus oli 45 IE tekijä VIII:aa/mg proteii-
f I I
** '25 nia.
i t * « « 1 • * • · f J Eluaatti konsentroitiin ultrasuodattamalla ja pakastuskuiva- V ‘ tettiin. Tekijä VIII:aa kuumennettiin suljetussa astiassa 10 tunnin ajan 60 °C:ssa käyttämällä läsnä 9,5 % p/p H20:ta.
: · 30 • * 5*:*· Tekijä VIII-aktiivisuus oli 87 % kuumentamattomasta näyttees- \ tä.
• · ♦ IMI + « I « 1 « *···* Euroopan yhteisön komission ohjeen EC III/8115/89-EN mukainen ;’*.35 virusten kokonaisvähennystekijä määritettiin HIV-1- ja FSME- * : virusten esimerkin avulla, jolloin virussuspensiota lisättiin • · useaan kertaan tämän menetelmän aikana. Virusten kokonaisvä- 9 106468 hennystekijä oli vähintään 12. Tämä vastaa teoreettisen vi-rustitterin vähenemistä, joka on vähintään 1012, koko menetelmän suhteen.
5 Esimerkki 3
Valmiste, jossa oli 3000 IE tekijä VIII:aa ja joka oli valmistettu esimerkin 2 mukaisesti, sisälsi 120 E fibronektiiniä (3960 jug) .
10 Tämän epäpuhtauden poistamiseksi tekijä VIII-pitoinen valmiste puhdistettiin kromatografisesti 15 ml:n hepariini-Sepharo-se-pylväällä (läpimitta 1,6 cm) puskurilla, jossa oli 260 mM NaCl:ää.
15
Tekijä VIII ei sitoutunut, fibronektiiniä ei voitu osoittaa tekijä VIII-pitoisessa fraktiossa. Spesifinen aktiivisuus oli 46 IE tekijä VIII:aa/mg proteiinia. Fibronektiini voitiin ottaa talteen eluoimalla 750 mM NaCl-liuoksella.
20
Esimerkki 4 1 kg kryosakkaa otettiin talteen ja liuotettiin samalla ta-; , valla kuin esimerkissä 1.
rt'.
» i *1 — '25 ( '* 1 Esipuhdistus suoritettiin Al(OH)3:lla ja PEG 4000:11a.
«· « • * · * * * * ««« V * Lisättiin 0,15 % Al(OH)3:a ja sekoitettiin 30 minuutin ajan 25 °C:ssa. AI(OH)3 erotettiin sitten sentrifugoimalla ja hei- Γ·*30 tettiin pois.
• · *« » i · t 4 I *
Supernatanttiin lisättiin 3,15 % PEG 4000:ta, pH säädetiin M» **|j arvoon 6,6 ja lämpötilaa alennettiin 9 °C:seen. Sekoitettiin « · *«·* 3 0 minuutin ajan ja muodostunut sakka erotettiin sentrifugoi- •*•«35 maila ja heitettiin pois.
* • » 4 « * « · « · 10 106468
Supernatanttiin lisättiin edelleen 100 g Tween 80:tä litraa kohden (tensidi/proteiini-suhde 50:1) ja sekoitettiin hyvin. Laimennettiin puskurilla 1 suhteessa 1:3 ja sitten liuos kromatografoitiin 1,75 litrassa Q-Sepharose® Fast Flow:ta 5 (Pharmacia).
Tekijä VIII adsorboitiin ja sitoutumattomat proteiinit erotettiin 7,9 litralla puskuria 1. Eluoimalla 5,25 litralla natriumsitraatti-puskuroitua 500 mM NaCl-liuosta saatiin 10 tekijä VIII-pitoinen fraktio.
Spesifinen aktiivisuus oli 89 IE tekijä VIII:aa/mg pro-te-iinia.
15 Konsentroitu eluaatti lyofilisoitiin ja sitten sitä kuumen nettiin suljetussa astiassa 60 °C:ssa 10 tunnin ajan käyttämällä läsnä 8 % p/p H20:ta.
Tekijä VIII-aktiivisuus oli 81 % kuumentamattomasta näyttees-2 0 tä.
< I
• « I
• t « • « • t • · · • · · • · • · ·· · • · « • « • · • « · • · · • · · • · · • · · • · • · • · · • · · • · · « • · • · · • » · · « « * • · • · ♦ · ♦ • · • · • ♦ ·

Claims (7)

1. Menetelmä erittäin puhtaan, virusturvallisen tekijä VIII-valmisteen valmistamiseksi, tunnettu seuraavien toimenpitei- 5 den yhdistelmästä: a) tekijä VIII-pitoisen fraktion kromatografinen puhdistus, b) tekijä VIII:n tensidikäsittely vesiliuoksessa tensidi/pro-teiini-suhteessa 1:1 - 1000:1 ja c) tekijä VIII-valmisteen lämpökäsittely kiinteässä tilassa. 10
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että tensidikäsittely suoritetaan ennen kromatografista puhdistusta, jolloin tensidi/proteiini-suhde on 3,5:1 - 10:1.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että tensidikäsittely suoritetaan kromatografisen puhdistuksen aikana.
4. Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukainen menetelmä, 20 tunnettu siitä, että lämpökäsittely tapahtuu kuumalla höyryl lä, jolloin tekijä VIII-valmiste säädetään kiinteässä tilassa veden, metanolin tai etanolin pitoisuuteen, joka on yli 0,05 (5 paino-%) ja alle 0,70 (70 paino-%) , etenkin alle 0,40 (40 • « « ,·, ; paino-%) , ja käsitellään suljetussa astiassa, mahdollisesti !.25 inertin suojakaasun läsnäollessa 50...121 °C:n lämpötilassa. • · I
• · , 5. Jonkin patenttivaatimuksen 1-4 mukainen menetelmä, • · « • ·* tunnettu siitä, että kromatografinen puhdistus suoritetaan *.* · monivaiheisesti, jolloin yhdessä vaiheessa käytetään materi- 30 aalia, joka adsorboi tekijä VIII:n, ja toisessa vaiheessa käytetään materiaalia saastuttavien proteiinien adsorboimi-seksi. • · « ’I”
6. Jonkin patenttivaatimuksen 1-6 mukainen menetelmä, • · *·;·35 tunnettu siitä, että kromatografiseen puhdistukseen käytetään : anioninvaihdinta, joka perustuu akrylaattiin, silikaattiin :*·.· tai hiilihydraattiin. • « 12 106468
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään anioninvaihdinta, joka muodostuu matriisista, johon on sitoutunut polymeerisiä sivuketjuja, joissa on anio-ninvaihdinryhraiä. 5 « · · • » 1 * · * · · » »· • · • · • « · « · · • · • · • · · • · · • · ·. · • · · « · · « · · « i « ; < « · · • · · 4 ♦ · • · · « · • ♦ 1 • « · • · t · · « Patentkrav: 106468
FI931826A 1992-04-24 1993-04-22 Menetelmä virusturvallisen, erittäin puhtaan tekijä VIII:n valmistamiseksi FI106468B (fi)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AT84992 1992-04-24
AT0084992A AT399818B (de) 1992-04-24 1992-04-24 Verfahren zur herstellung einer hochgereinigten virussicheren faktor viii-präparation

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI931826A0 FI931826A0 (fi) 1993-04-22
FI931826A FI931826A (fi) 1993-10-25
FI106468B true FI106468B (fi) 2001-02-15

Family

ID=3501200

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI931826A FI106468B (fi) 1992-04-24 1993-04-22 Menetelmä virusturvallisen, erittäin puhtaan tekijä VIII:n valmistamiseksi

Country Status (18)

Country Link
US (1) US5410022A (fi)
EP (1) EP0567448B2 (fi)
JP (1) JP2511631B2 (fi)
AT (2) AT399818B (fi)
AU (1) AU659301B2 (fi)
BR (1) BR9301641A (fi)
CA (1) CA2094347C (fi)
CZ (1) CZ279979B6 (fi)
DE (1) DE59308628D1 (fi)
DK (1) DK0567448T4 (fi)
ES (1) ES2117703T5 (fi)
FI (1) FI106468B (fi)
HU (1) HU210632B (fi)
MX (1) MX9302279A (fi)
NO (1) NO307465B1 (fi)
PL (1) PL172462B1 (fi)
SK (1) SK279750B6 (fi)
ZA (1) ZA932843B (fi)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU6653094A (en) * 1992-12-16 1994-07-04 Immuno Aktiengesellschaft Process for preparing a virus-safe biological composition
DE4320294A1 (de) * 1993-06-18 1994-12-22 Immuno Ag Verwendung von humanem Protein C zur Verhinderung und Behandlung von Thrombozytenablagerungen
DE4325872C1 (de) * 1993-08-02 1994-08-04 Immuno Ag Virusinaktivierte Faktor Xa-Präparation
AT402788B (de) * 1993-08-03 1997-08-25 Immuno Ag Virussichere blutgerinnungsfaktor xiii-präparation
DE4337573C1 (de) * 1993-11-04 1995-05-18 Octapharma Ag Verfahren zur Herstellung einer virusinaktivierten Faktor VIII enthaltenden Fraktion mittels chromatographischer Methoden
DE4407837C1 (de) * 1994-03-09 1995-08-17 Octapharma Ag Verfahren zur Gewinnung von hochreinem, virusinaktiviertem alpha¶1¶-Antitrypsin mittels Anionenaustauscher-Chromatographie
US5659017A (en) * 1995-11-07 1997-08-19 Alpha Therapeutic Corporation Anion exchange process for the purification of Factor VIII
AT403764B (de) 1996-03-15 1998-05-25 Immuno Ag Stabiler faktor viii/vwf-komplex
DE19623293C2 (de) * 1996-06-11 1998-10-22 Biotest Pharma Gmbh Nicht-immunogene Faktor VIII-enthaltende Zusammensetzung und ein Verfahren zu ihrer Herstellung
AT404358B (de) 1997-02-04 1998-11-25 Immuno Ag Verfahren zur chromatographischen reinigung bzw. fraktionierung von von willebrand-faktor aus einem vwf-hältigen ausgangsmaterial
JP5149470B2 (ja) 1999-02-22 2013-02-20 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド 新規のアルブミンを含有していない第ｖｉｉｉ因子処方物
US20040117862A1 (en) * 2002-03-11 2004-06-17 Cooper Julian D. Production of high levels of transgenic factor VII with engineered stability and its therapeutic uses
JP2008514240A (ja) * 2004-10-01 2008-05-08 インヴィトロジェン コーポレーション 生体分子のインビトロ合成用の供給バッファー、系、及び方法
NZ593190A (en) 2008-11-07 2013-01-25 Baxter Int Factor viii formulations
CN101967188B (zh) * 2010-11-08 2012-11-28 江西博雅生物制药股份有限公司 一种人凝血因子ⅷ的制备工艺
CN107073084B (zh) * 2014-11-05 2022-03-25 雅培制药股份有限公司 用于生产具有改善的安全特性的具有脂肪酶活性的组合物和适用于药物用途的组合物的方法

Family Cites Families (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3920625A (en) * 1973-06-19 1975-11-18 Kabi Ab Isolation of coagulation factors from biological material using cross linked sulfated, sulfonated carbohydrates
AT350726B (de) * 1976-08-30 1979-06-11 Immuno Ag Verfahren zur herstellung einer blut- gerinnungsfoerdernden praeperation aus menschlichem blutplasma
FR2435832A1 (fr) * 1978-07-21 1980-04-04 Alsthom Cgee Dispositif de connexion electrique
US4250139A (en) * 1979-02-01 1981-02-10 Collagen Corporation Microwave sterilization of dry protein
DE2916711A1 (de) * 1979-04-25 1980-11-06 Behringwerke Ag Blutgerinnungsfaktoren und verfahren zu ihrer herstellung
EP0035204B2 (en) * 1980-03-05 1991-05-22 Miles Inc. Pasteurized therapeutically active protein compositions
US4314997A (en) * 1980-10-06 1982-02-09 Edward Shanbrom Purification of plasma protein products
DE3173208D1 (en) * 1980-10-06 1986-01-23 Edward Shanbrom Method of reducing undesirable activities of biological and pharmaceutical products
DE3043857A1 (de) * 1980-11-21 1982-07-08 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Verfahren zur herstellung von blutgerinnungsfaktoren und danach hergestellte praeparation der faktoren ii und vii
DE3045153A1 (de) * 1980-11-29 1982-07-08 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Verfahren zur herstellung von blutgerinnungsfaktoren und danach hergestellte praeparation der faktoren ix und x
US4495278A (en) * 1981-04-27 1985-01-22 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Process for making novel blood clotting enzyme compositions
US4456590B2 (en) * 1981-11-02 1989-05-30 Heat treatment of lyphilized blood clotting factor viii concentrate
US4481189A (en) * 1982-04-14 1984-11-06 New York Blood Center Inc. Process for preparing sterilized plasma and plasma derivatives
US4379085A (en) * 1982-05-14 1983-04-05 American National Red Cross Heat stabilization of plasma proteins
US4511556A (en) * 1982-06-10 1985-04-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inactivation of a lipid virus
JPS59134730A (ja) * 1983-01-20 1984-08-02 Green Cross Corp:The 血液凝固第８因子の加熱処理法
CA1213827A (en) * 1983-04-29 1986-11-12 Ricardo H. Landaburu Process for pasteurizing fibronectin
DE3473407D1 (en) * 1983-05-02 1988-09-22 Immuno Ag Method of inactivating pathogens
US4540573A (en) * 1983-07-14 1985-09-10 New York Blood Center, Inc. Undenatured virus-free biologically active protein derivatives
JPS6054287B2 (ja) * 1983-10-19 1985-11-29 株式会社ミドリ十字 血漿蛋白の加熱処理方法
US4490361A (en) * 1983-12-02 1984-12-25 Alpha Therapeutic Corporation Virus inactivating heat treatment of plasma fractions
AT389815B (de) * 1984-03-09 1990-02-12 Immuno Ag Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern in blutprodukten
US5043428A (en) * 1984-08-31 1991-08-27 Behringwerke Aktiengesellschaft Pasteurized, isoagglutinin-free factor VIII preparation and a process for its production
DE3432083A1 (de) * 1984-08-31 1986-03-06 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Pasteurisierte, isoagglutininfreie faktor viii-praeparation und verfahren zu ihrer herstellung
JPH0669961B2 (ja) * 1984-09-25 1994-09-07 株式会社ミドリ十字 免疫グロブリンの加熱処理方法
JPH0825902B2 (ja) * 1985-02-21 1996-03-13 株式会社ミドリ十字 γ−グロブリンの加熱処理方法
US4673733A (en) * 1985-04-11 1987-06-16 Sudhish Chandra Treatment of biological and pharmaceutical products adsorbed on a solid phase with virus and pyrogen inactivating agents
AT391808B (de) * 1986-11-03 1990-12-10 Immuno Ag Verfahren zur herstellung einer faktor viii (ahf)-haeltigen fraktion
AT388501B (de) * 1987-02-12 1989-07-25 Immuno Ag Verfahren zur herstellung von parenteral verabreichbaren blutprodukten
AU2251288A (en) * 1987-05-15 1988-12-06 Alan I. Rubinstein Sequential improved method for treatment of human blood- clotting factor products
IL86417A (en) * 1987-05-22 1992-09-06 Armour Pharma Process for the inactivation of pathogens in biological or pharmaceutical material by mixing with aqueous solution containing a sugar(alcohol)and neutral salts as stabilizers
AT391809B (de) * 1988-01-12 1990-12-10 Immuno Ag Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern in blutplasmaprodukten
FR2630115B1 (fr) * 1988-04-14 1994-10-28 Merieux Inst Procede de stabilisation des solutions d'albumine humaine et solution obtenue
DE3878227D1 (de) * 1988-05-27 1993-03-18 Centre Regional De Transfusion Verfahren zur herstellung eines hochreinen, virusfreien antihaemophiliefaktors mittels chromatographie.
AT397203B (de) * 1988-05-31 1994-02-25 Immuno Ag Gewebeklebstoff
FR2632309B1 (fr) * 1988-06-07 1990-08-24 Lille Transfusion Sanguine Procede de purification par voie chromatographique de proteines, notamment de facteur viii, et les produits obtenus
AT390801B (de) * 1988-07-28 1990-07-10 Immuno Ag Verfahren zur herstellung von lys-plasminogen
EP0367840B1 (de) * 1988-11-05 1993-02-03 Octapharma AG Verfahren zur Herstellung eines hochreinen, nicht infektiösen Antihämophiliefaktors mittels Chromatographie
US5156973A (en) * 1988-11-23 1992-10-20 Edward Shanbrom Antiviral blood sampling process and apparatus
DE3843126C3 (de) * 1988-12-22 1994-10-06 Octapharma Ag Verfahren zur Herstellung eines hochreinen Thrombinkonzentrates
DE69011136T3 (de) * 1989-01-13 2003-10-23 Mitsubishi Pharma Corp Verfahren zur Herstellung einer Protein enthaltenden Zusammensetzung.
DE69027187T2 (de) * 1989-06-15 1996-10-31 Rorer Int Overseas Verfahren zur inaktivierung von viren in mit viren verunreinigten pharmazeutischen zusammensetzungen
IE73210B1 (en) * 1990-01-24 1997-05-07 Warner Lambert Co Process for the production of thrombin and high purity thrombin preparation thereby obtained
US5217737A (en) * 1991-05-20 1993-06-08 Abbott Laboratories Plastic containers capable of surviving sterilization
AT402891B (de) * 1991-06-20 1997-09-25 Immuno Ag Verfahren zur herstellung eines inaktivierten blutproduktes
FR2679251B1 (fr) * 1991-07-18 1993-11-12 Nord Assoc Essor Transfusion San Procede de preparation d'un concentre de thrombine humaine destine a un usage therapeutique.
FR2681867B1 (fr) * 1991-09-26 1993-12-31 Pasteur Merieux Serums Vaccins Procede de purification du facteur viii et preparations obtenues.
AT398079B (de) * 1991-11-04 1994-09-26 Immuno Ag Präparation mit thrombinaktivität sowie verfahren zu ihrer herstellung
FR2841484B1 (fr) * 2002-06-26 2004-09-10 Boucq De Beaudignies Ghisla Le Dispositif et procede de filtration de l'air et des gaz avec regeneration des particules captees

Also Published As

Publication number Publication date
HU210632B (en) 1995-06-28
EP0567448B2 (de) 2005-01-05
JPH069694A (ja) 1994-01-18
ZA932843B (en) 1993-11-23
JP2511631B2 (ja) 1996-07-03
DK0567448T3 (da) 1999-03-22
ES2117703T5 (es) 2005-07-16
SK39193A3 (en) 1993-11-10
BR9301641A (pt) 1993-10-26
PL298670A1 (en) 1994-04-05
HUT64777A (en) 1994-02-28
EP0567448A1 (de) 1993-10-27
CZ69293A3 (en) 1993-12-15
NO931476D0 (no) 1993-04-22
SK279750B6 (sk) 1999-03-12
AU3687593A (en) 1993-10-28
ATE166881T1 (de) 1998-06-15
ES2117703T3 (es) 1998-08-16
ATA84992A (de) 1994-12-15
DK0567448T4 (da) 2005-05-02
CA2094347A1 (en) 1993-10-25
FI931826A0 (fi) 1993-04-22
MX9302279A (es) 1994-08-31
AT399818B (de) 1995-07-25
US5410022A (en) 1995-04-25
EP0567448B1 (de) 1998-06-03
PL172462B1 (pl) 1997-09-30
HU9301038D0 (en) 1993-06-28
CZ279979B6 (cs) 1995-09-13
CA2094347C (en) 2002-06-25
NO931476L (no) 1993-10-25
NO307465B1 (no) 2000-04-10
AU659301B2 (en) 1995-05-11
FI931826A (fi) 1993-10-25
DE59308628D1 (de) 1998-07-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI106468B (fi) Menetelmä virusturvallisen, erittäin puhtaan tekijä VIII:n valmistamiseksi
EP0315968B1 (en) Plasma and recombinant protein formulations in low ionic strength media
US4876241A (en) Stabilization of biological and pharmaceutical products during thermal inactivation of viral and bacterial contaminants
AU618157B2 (en) Viral inactivation process
US5639730A (en) Method of producing a virus-safe biological preparation
EP0314095B1 (en) Plasma and recombinant protein formulation in high ionic strength media
JP3628703B2 (ja) 治療グレードトロンビン産物及び製品
JP4250771B2 (ja) カチオン交換クロマトグラフィーによる因子ＶＩＩＩ／ｖＷＦ複合体の精製方法
US6358534B1 (en) Immunotolerant prothrombin complex preparation
JP4324102B2 (ja) フィブリノーゲンの調製方法
CA1337688C (en) Stabilization of biological and pharmaceutical products during thermal inactivation of viral and bacterial contaminants
JPH0376292B2 (fi)
WO1998030230A1 (fr) Compositions proteinees et procede de production
HU211239A9 (hu) Eljárás nagy tisztaságú, vírusbiztos Vili faktor-készítmény előállítására
JP4105249B2 (ja) α２プラスミンインヒビターの製造方法
MXPA99008941A (es) Preparacion del complejo de protrombina inmunotolerante