CZ279979B6 - Způsob výroby před virem zabezpečeného, vysocečištěného faktoru VIII - Google Patents

Způsob výroby před virem zabezpečeného, vysocečištěného faktoru VIII Download PDF

Info

Publication number
CZ279979B6
CZ279979B6 CZ93692A CZ69293A CZ279979B6 CZ 279979 B6 CZ279979 B6 CZ 279979B6 CZ 93692 A CZ93692 A CZ 93692A CZ 69293 A CZ69293 A CZ 69293A CZ 279979 B6 CZ279979 B6 CZ 279979B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
factor viii
sodium
surfactant
polyoxyethylene
chromatographic purification
Prior art date
Application number
CZ93692A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ69293A3 (en
Inventor
Johann Eibl
Friedrich Elsinger
Herbert Ing. Gritsch
Yendra Linnau
Otto Schwarz
Peter Turecek
Günther Wöber
Original Assignee
Immuno Aktiengesellschaft
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=3501200&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ279979(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Immuno Aktiengesellschaft filed Critical Immuno Aktiengesellschaft
Publication of CZ69293A3 publication Critical patent/CZ69293A3/cs
Publication of CZ279979B6 publication Critical patent/CZ279979B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
    • Y10S530/829—Blood
    • Y10S530/83—Plasma; serum
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
    • Y10S530/829—Blood
    • Y10S530/83—Plasma; serum
    • Y10S530/831—Cohn fractions

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

Způsob výroby vysoce čistěného, před virem zabezpečeného přípravku faktoru VIII, vyznačující se kombinací opatření a) chromatografického čištění frakce, obsahující faktor VIII, b) tenzidového zpracování faktoru VIII ve vodném roztoku při poměru tenzid/ protein od 1:1 do 66:1 a , c) tepelného zpracování přípravku faktoru VIII v pevném stavu.ŕ

Description

Způsob výroby před virem zabezpečeného, vysocečištěného faktoru VIII a přípravek tohoto faktoru
Oblast techniky
Vynález se týká způsobu výroby před virem zabezpečeného, vysocečištěného faktoru VIII.
Dosavadní stav techniky
Srážení krve probíhá řadou po sobě jdoucích reakcí různých proteinů, popřípadě enzymů. Nedostatkem faktorů srážení krve je tvorba fibrinu z fibrinogenu, a tím zabránění zavírání jizev, následkem čehož jsou krvácení. Jedním takovým případem je hemofilie A. Tato je nejrozšířenější krevní chorobou a je vyvolána nedostatkem faktoru VIII. Faktor VIII se vyskytuje v plazmě spolu s s/vonWillebrandovým faktorem (vWF) jako nekovalentně vázaný komplex (FVIII/vWF). Proteiny FVIII a vWF, jakož i komplex FVIII/vWF se používají k substitučnímu ošetřování hemofiliků. Na odpovídající farmaceutické preparáty jsou kladeny vysoké požadavky pokud se týká účinnosti a bezpečnosti.
Výchozím materiálem pro výrobu preparátů je většinou lidská plazma, která však obsahuje faktor VIII jen v malých množstvích (asi 0,1 až 0,2 μg/ml). Pro získání faktoru VIII se musí zpracovat nejen velká množství plasmy, ale musí se také oddělit rušivé doprovodné proteiny tak, jak jen je to možné, přičemž mnoho těchto proteinů vykazuje podobné fyzikálně-chemické vlastnosti.
Další potíž spočívá v tom, že praparát je nutno ještě inaktivovat vzhledem k infekčním agens, protože výchozí materiál může obsahovat například virus žloutenky. K tomu ještě přistupuje skutečnost, ž každý krok způsobu a každá inaktivace se musí provádět tak, že biologická aktivita požadovaných faktorů srážení zůstane pokud možno zachována.
Při klasických metodách výroby se provádějí postupná srážení (například kryosrážení nebo koagulace přídavkem síranu amonného), jejichž účelem je odstranění nečistot, jako jsou faktory prothrombinového komplexu, fibrinogen a fibronektin. Čistota získaného koncentrátu faktoru VIII leží přibližné při 1 j/mg proteinu a obvykle nepřesahuje hranice 10-20 j/mg proteinu.
Z pat. spisu EP-A-0378208 je znám způsob výroby faktoru VIII, podle kterého se roztok kryoprecipitátu zpracuje s organickým rozpouštědlem (tri(n-butyl)fosfát (TNBP)) za přítomnosti činidla, zprostředkujícího rozpouštění - TweenR80 pro inaktivaci viru. Faktor VIII se potom podrobí dvojstupňovému čištění vylučováním, lyofilizuje a zahřívá v suchém stavu.
Zpracování biologických a farmaceutických produktů 0,25 až 10 % hmot, nedenaturujících amfifilů (detergentů) je popsán v pat. spisu EP-B-0050061.
Způsob zpracování proteinů organickými rozpouštědly, popřípadě za přítomnosti detergentů, je znám z pat. spisu EP-B-0131740.
-1CZ 279979 B6
Zde je ukázáno, že zpracování s detergentem samotným je vzhledem k inaktivaci viru relativně neúčinné. Organická rozpouštědla působí však jen proti membránou obaleným virům. Existují již zmíněné infekce žloutenky, které zpětně vedou ke koncentrátu hepatidou A kontaminovaného faktoru VIII, které se tímto způsobem virově inaktivují. Virus hepatidy A neobsahuje žádnou membránu, obsahující lipid, proto není takto inaktivován (Mannucci P M a spol. (1992 The Lancet 339, 819 Outbreak of hepatitis A among Italian patients with haemophilia).
Zpracování frakcí, obsahujících faktor VIII organickými rozpouštědly se většinou provádí tak, že se toxicky působící rozpouštědlo po provedeném ošetření musí nákladným způsobem oddělit. V pat. spisu EP-A-034275 je pro tento účel navržena extrakce frakcí, obsahujících faktor VIII oleji, jako je sojový olej nebo ricinový olej. Potom se faktor VIII podrobí gelové permeační chromatografii na iontovýměnných materiálech.
Způsobem podle pat. spisu EP-A-0094611 se faktor VIII pro snížení infekčnosti zahřívá v suchém stavu.
Podle pat. spisu EP-B-0159311 se zahřívají krevní produkty v pevném, vlhkém stavu pro inaktivaci potenciálně přítomných virů. V takovém parou zahřátém koncentrátu faktoru VIII není znám žádný případ infekce (Mannuci P M (1992) Transfusion 32, 134 až 138 Low risk of viral infection after administration of vapor-heated factor VIII concentrates).
Tepelné zpracování vysocečištěného koncentrátu faktoru VIII platí jako kritické. Ke chromatografíčky přečištěnému faktoru VIII musí být podle pat. spisu EP-A-0173242 například přidávána směs stabilizátorů (uhlohydrátů a aminokyselin), před tím, než se tento zahřívá v roztoku. Jinak je běžné podrobit frakce, obsahující faktor VIII ještě před chromatografickým čištěním inaktivaci viru.
Cílem vynálezu je nalézt způsob, podle kterého je možno vyrobit přečištěný faktor VIII, který na základě účinného ošetření pro inaktivaci viru je proti viru zabezpečen.
Výhodně by měla specifická aktivita vyrobeného preparátu činit nejméně 25 j/mg proteinu.
Podstata vynálezu
Vynález tuto úlohu řeší kombinací následujících opatření:
a) chromatografickým čištěním frakce, obsahující faktor VIII, za použití materiálů na bázi akrylátů, silikátů nebo uhlohydrátů
b) zpracováním faktoru VIII tenzidem, vybraným ze skupiny zahrnující z anionických tenzidů sulfatovaný oxyethylovaný alkylfenol, sulfatovaný lauryletheralkohol, dodecylbenzensulfonát sodný, 2-sulfoethyloleát sodný, N-methyl-N-oleylethanolsulfonát sodný, dodecylsulfát sodný, cholát sodný, deoxycholát sodný, dodecylsulfonát sodný a dodecyl-N-sarconisát sodný; z kationických tenzidů dodecyldimethylbenzylamoniumchlorid, oxyethylované aminy, cetyltriethylamoniumchlorid, tetradecylamoniumbromid, dodecylpyrimidiniumchlorid a hexadecyltrimethy-2- lamoniumchlorid; z amfolytických tenzidů dodecyl-p-alanin, kyselinu N-dodecylaminoethansulfonovou, palmitoyllysolecitin a dodecyl-N~betain a z neionických tenzidů kondenzáty ethylenoxidu a propylenoxidu, oxyethylovaný alkylfenol, parciální estery mastných kyselin C12_22 a hexitol anhydridů, polyoxyethylované deriváty parciálních esterů, získaných adicí polyoxyethylenových řetězců na neesterifikované hydroxyly, polyoxyethylenové parciální estery mastných kyselin a polyoxyethylenové ethery mastných alkoholů ve vodném roztoku při poměru tenzid/protein 1:1 až 1 000:1 a
c) tepelným zpracováním přípravku faktoru VIII v pevném stavu při teplotě v rozmezí 50 až 121 ’C.
Faktor VIII může být podle vynálezu vyroben jako komplex FVIII/vWF. Během výrobního postupu může být provedeno přibližně jedno zpracování pro disociaci komplexu FVIII/vWF, například chloridem vápenatým.
Bylo zjištěno, že zpracování tensidem podle vynálezu překvapivě může vést k úspěšné inaktivaci viru. Jako tensidy mohou být například použity neiontové tenzidy jako TweenR80, TritonRX-100, p
Triton X-114, dodecylmaltosid nebo oktylglukosid, tenzidy s obojetnými ionty jako dimethyloktylamin-N-oxid nebo N-dodecyl-N,N-dimethyl-3-amonio-l-propansulfonát a iontové tenzidy, jako je desoxycholát sodný nebo cholát sodný. Zpracování tenzidem se provádí především ve vodném roztoku, který je prostý organických rozpouštědel. Jako vodný roztok se nabízí roztok pro kryosrážení, který se popřípadě ještě přečistí adsorpcí faktorů prothrombinového komplexu. V takovém roztoku bude poměr tenzid/protein přednostně 1:1 až 10:1.
Zpracování tenzidem se výhodně provádí před chromatografickým čištěním, výhodně při poměru tenzid/protein od 3,5:1 do 10:1, přičemž se tenzid může během chromatografie jednoduchým způsobem oddělovat.
V další formě provedení je ale také možné zpracování tenzidem během chromatografie. Tato varianta má tu výhodu, že faktor VIII se bude také specificky adsorbovat za přítomnosti proteinů, majících sklon k agregaci, a tím k nežádoucí koadsorpci.
Jestliže se vychází z výchozího materiálu obsahujícího faktor VIII s nízkým obsahem proteinu, je často namístě udržovat ve vodném roztoku určitou koncentraci tenzidu. Poměr tenzid/protein může tak činit až 1 000:1.
Buněčný supernatant, který obsahuje faktor VIII, vykazuje například obsah proteinu nejméně kolem 100 mg/1. Desetiprocentní koncentrace tenzidu v tomto kultivačním supernatantu tak odpovídá poměru tenzid/protein, který není větší než asi 1 000:1.
Pro zvýšené zabezpečení vůči viry, je podle vynálezu navržena faktoru VIII v pevném stavu. Tato infekci membránou neobalenými kombinace tepelného zpracování může být provedena na lyofili-3CZ 279979 B6 zovaném preparátu, přičemž zpracování teplem se provádí výhodně ve vlhkém stavu preparátu.
Výhodná forma provedení vynálezu zahrnuje tepelné zpracování horkou parou, přičemž je přípravek faktoru VIII v pevném stavu nastaven na obsah vody, methanolu nebo ethanolu vyšší než 0,05 (5 % hmot.) a méně než 0,70 (70 % hmot.), výhodně méně než 0,40 (40 % hmot.) a zahřívá se v uzavřené nádobě, popřípadě za přítomnosti inertního ochranného plynu, na teplotu v rozsahu 50 až 121 ’C.
V lyofilizátu faktoru VIII mohou být obsaženy dále albumin, popřípadě soli jako citrát sodný, popřípadě aminokyseliny.
Bylo s překvapením zjištěno, že toto tepelné zpracování nenese s sebou žádné podstatné ztráty aktivity, takže může také být takto zpracován relativně nestabilní, vysoce přečištěný faktor VIII.
Během chromatografického čištění se faktor VIII dále zbavuje doprovodných proteinů. Výhodná forma způsobu výroby podle vynálezu zahrnuje vícestupňové chromatografické čištění, přičemž se v jednom stupni použije adsorpční materiál pro faktor VIII a v dalších stupních materiál pro adsorpci znečišťujících proteinů.
Může tak být použit nejprve aniontovýměnný materiál pro adsorpci faktoru VIII a potom materiál s vysokou afinitou k fibronektinu, jako želatina nebo heparin, imobilizovaný na nerozpustném nosiči. Tak zde může být výhodná chromtografie za přítomnosti tenzidů, pro minimalizaci nespecifické adsorpce faktoru VIII na afinitním nosiči.
Pro výrobu albuminuprostého faktoru VIII (přípravku) se může adsorpce roztoku obsahujícího faktor VIII provádět na triazingelu (CibacronR-Blue 3GA, imobilizovaný na nerozpustném nosiči (fa Bio-Rad); FractogelR TSK-AF-Blue (fa Měrek), Blue-SepharoseR-CL6B (fa Pharmacia).
Tyto typy gelu vážou s vysokou selektivitou albumin, který se kvantitativně neoddělí jinými metodami od faktoru VIII a je jako nečistota přítomen v přípravcích faktoru VIII, pokud není požadován obsah albuminu pro stabilizaci.
Výhodně se používají pro chromatografické čištění aniontoměniče jako jsou ty, které jsou na bázi akrylátů, silikátů nebo uhlohydrátů, jako DEAE-SephadexR (fa Pharmacia), QAE-SepharoseR (fa Pharmacia), DEAE-Toyo-PearlR (fa Tosohaas), TMAE-FractogelR (fa Měrek) a podobně.
Aniontoměniče na akrylátové bázi jsou výhodně vytvořeny jako tentakelmatrice (srov. Můller W (1990) Journal of Chromátography 510, 133 až 140 New ion exchangers for the chromatography of biopolymers). V takové matrici se nacházejí výměnné skupiny podél polymerního postranního řetězce, který je spojen s povrchem
-4CZ 279979 B6 matrice. Z toho vyplývá vysoká kapacita impregnace a zlepšená selektivita.
Faktor VIII krevního srážení, který se vyrobí způsobem podle vynálezu, je považován za zabezpečený proti viru a má výhodně vysokou specifickou aktivitu nejméně 25 j/mg proteinu.
Vynález bude blíže vysvětlen v následujících příkladech, které jej však nikterak neomezují.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1 kg kryosraženiny, získané ze 101 litrů plasmy se rozpustí ve 3,5 litrech pufru 1, NaCl-roztoku pufrovanému tris-lysinem (85 mmol/1).
Pro předčištění roztoku, obsahujícího faktor VIII, se přimíchá AI(OH)2, oddělí se A1(OH)3, přimíchá se BaSO4 a BaSO4 se oddělí. Potom se nastaví hodnota pH supernatantu na 6,5, teplota se sníží na 4 °C a vzniklá sraženina se oddělí odstředěním a odloží.
Přidá se 110 g TritonuRX-100 na litr supernatantu (poměr tenzid/protein 55:1) a 30 min se míchá při 25 °C. Faktor VIII se ϋ
potom adsorbuje na 750 ml DEAE-Toyopearl 650 M fy Tosohaas, ekvilibrováného pufrem 1, v koloně o průměru 9 cm.
Frakce, obsahující faktor VIII se eluuje z gelu 2,25 litry pufru 2 (citrátem pufrovaný 500 mM NaCl-roztok).
Specifická aktivita činí 76 mj. faktoru VIII na mg proteinu.
Po vymražení ultrafiltrované frakce, obsahující faktor VIII se faktor VIII zahřívá se 7,5 % hmot./hmot, vody v uzavřené nádobě 10 hodin na 60 °C. Aktivita faktoru VIII činí 72 % nezahřívaného vzorku. Tepelné zpracování za přítomnosti albuminu vede k aktivitě faktoru VIII odpovídající 92 % nezahřívaného vzorku.
Příklad 2 kg kryosraženiny se zpracuje stejným způsobem jako v příkladu 1 - tj. získá a rozpustí.
Předčištění se provede A1(OH)3 a BaSO4. K supernatantu se přidá 120 g Tweenu 80 na litr (poměr tenzid/protein 4:1) a 45 min se míchá při 25 ’C. Po zředění pufrem v poměru 1:3 se roztok chromatograficky přečistí adsorpci faktoru VIII na 400 ml EMD-TMAE-FractigeluR (fa Měrek). Gel se předtím ekvilibruje pufrem 1. Nenavázané proteiny se oddělí pufrem 1, potom se eluuje frakce, obsahující faktor VIII pufrem 2.
Specifická aktivita činí 45 mj faktoru VIII na mg proteinu.
-5CZ 279979 B6
Eluát se po ultrafiltraci zkoncentruje a suší vymražením. V uzavřené nádobě se zahřívá faktor VIII za přítomnosti 9,5 % hmot./hmot, vody 10 hodin na 60 °C.
Aktivita faktoru VIII činí 87 % vztaženo na nezahřívaný vzorek.
Celkový faktor redukce viru podle předpisu EC III/8115/89-EN Komise evropského společenství se stanoví na příkladu HIV-1 a FSME-viru, přičemž se suspenze viru přidává vícekrát během tohoto způsobu. Celkový faktor redukce viru činí nejméně 12. To odpovídá redukci teoretického titru viru nejméně 1012 v celém způsobu.
Příklad 3
Přípravek s 3 000 mj. faktoru VIII podle příkladu 2, obsahuje 120 j fibronektinu (3 960 μ9).
Pro odstranění této nečistoty se frakce, obsahující faktor VIII chromatografíčky přečistí s 15 ml sloupcem heparin-Sepharosy (1,6 cm průměr) s pufrem 260 mM NaCl.
Faktor VIII není navázán, fibronektin byl ve frakci, obsahující faktor VIII neprokazatelný. Specifická aktivita činila 46 mj faktoru VIII na mg proteinu. Fibronektin může být získán elucí 750 mM roztokem NaCl.
Příklad 4 kg kryosraženiny se získá a rozpustí stejným způsobem jako v příkladu 1.
Předčištění se provede A1(OH)3 a PEG 4 000.
Přidá se 0,15 % A1(OH)3 a 30 min se míchá při 25 °C. A1(OH)3 se potom oddělí odstředěním a odloží.
K supernatantu se přidá 3,15 % PEG 4 000, hodnota pH se nastaví na 6,6 a teplota se sníží na 9 °C. Míchá se 30 minut a vzniklá sraženina se oddělí odstředěním a odloží.
K supernatantu se přidá dalších 100 g Tweenu 80 na litr (poměr tenzid/protein 50:1) a dobře se promíchá. Po zředění pufrem 1 v poměru 1 ku 3 se roztok chromátografuje na 1,75 litru Q-SepharosyR Fast Flow fy Pharmacia.
Faktor VIII se adsorbuje a nenavázané proteiny se oddělí pomocí 7,9 litru pufru 1. Elucí 5,25 litru citrátem sodným pufrovaného 500 mM NaCl-roztoku se získá frakce, obsahující faktor VIII.
Specifická aktivita činí 89 mj. faktoru VIII na mg proteinu.
-6CZ 279979 B6
Zkoncentrovaný eluát se lyofilizuje a potom se zahřívá za přítomnosti 8 % hmot./hmot, vody v uzavřené nádobě 10 hodin na 60 ’C.
Aktivita .faktoru VIII činí 81 % nezahřívaného vzorku.
PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (9)

1. Způsob výroby před virem zabezpečeného vysoce čištěného faktoru VIII, vyznačující se tím, že zahrnuje kombinaci opatření
a) chromatografického čištění frakce, obsahující faktor VIII, za použití materiálů na bázi akrylátů, silikátů nebo uhlohydrátů
b) zpracování faktoru VIII tenzidem, vybraným ze skupiny zahrnující z anionických tenzidů sulfatovaný oxyethylovaný alkylfenol, sulfatovaný lauryletheralkohol, dodecylbenzensulf onát sodný, 2-sulfoethyloleát sodný, N-methyl-N-oleylethanosulfonát sodný, dodecylsulfát sodný, cholát sodný, deoxycholát sodný, dodecylsulfonát sodný a dodecyl-N-sarconisát sodný; z kationických tenzidů dodecyldimethylbenzylamoniumchlorid, oxyethylované aminy, cetyltriethylamoniumbromid, tetradecylamoniumbromid, dodecylpyrimidiniumchlorid a hexadecyltrimethylamoniumchlorid; z amfolytických tenzidů dodecyl-p-alanin, kyselinu N-dodecylaminoethansulfonovou, palmitoyllysolecitin a dodecyl-N-betain a z neionických tenzidů kondenzáty ethylenoxidu a propylenoxidu, oxyethylovaný alkylfenol, parciální estery mastných kyselin C12_22 a hexitol anhydridů, polyoxyethylované deriváty parciálních esterů, získaných adicí polyoxyethylenových řetězců na neesterifikované hydroxyly, polyoxyethylenové parciální estery mastných kyselin a polyoxyethylenové ethery mastných alkoholů ve vodném roztoku při poměru tenzid/protein 1:1 až 1 000:1 a
c) tepelné zpracování přípravku faktoru VIII v pevném stavu při teplotě v rozmezí 50 až 121 °C.
2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že zahrnuje kombinaci opatření
a) chromatografického čištění frakce, obsahující faktor VIII, za použití materiálů na bázi akrylátů, silikátů nebo uhlohydrátů
b) zpracování faktoru VIII tenzidem, vybraným ze skupiny zahrnující z anionických tenzidů sulfatovaný oxyethylovaný alkylfenol, sulfatovaný lauryletheralkohol, dodecylbenzensulf onát sodný, 2-sulfoethyloleát sodný, N-methyl-N-oleylethanolsulfonát sodný, dodecylsulfát sodný, cholát sodný, deoxycholát sodný, dodecylsulfonát sodný a dodecyl-N-sarconisát sodný; z kationických tenzidů dodecyldimethylbenzyl-7-
I amoniumchlorid, oxyethylované aminy, cetyltriethylamoniumbromid, tetradecylamoniumbromid, dodecylpyrimidiniumchlorid a hexadecyltrimethylamoniumchlorid; z amfolytických tenzidů dodecyl-p-alanin, kyselinu N-dodecylaminoethansulfonovou, palmitoyllysolecitin a dodecyl-N-betain a z neionických tenzidů kondenzáty ethylenoxidu a propylenoxidu, oxyethylovaný alkylfenol, parciální estery mastných kyselin ^12-22 a hexitol anhydridů, polyoxyethylované deriváty parciálních esterů, získaných adicí polyoxyethylenových řetězců na neesterifikované hydroxyly, polyoxyethylenové parciální estery mastných kyselin a polyoxyethylenové ethery mastných alkoholů ve vodném roztoku při poměru tenzid/protein 1:1 až 66:1 a
c) tepelné zpracování přípravku faktoru VIII v pevném stavu při teplotě v rozmezí 50 až 121 C.
3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že se zpracování tenzidem provádí před chromatografickým čištěním, přičemž poměr tenzid/protein činí 3,5:1 až 10:1.
4. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že se zpracování tenzidem provádí během chromatografického čištění.
5. Způsob podle jednoho z nároků 2 až 4, vyznačující se tím, že se tepelné zpracování provádí horkou parou, přičemž přípravek faktoru VIII v pevném stavu je upraven na obsah vody, methanolu nebo ethanolu na více než 5 % hmot, a méně než 70 % hmot., výhodně méně než 40 % hmot, a zpracovává se v uzavřené nádobě, popřípadě za přítomnosti inertního ochranného plynu při teplotě v rozsahu od 50 do 121 °C.
6. Způsob podle jednoho z nároků 2 až 5, vyznačující se tím, že chromatografické čištění se provádí ve více stupních, přičemž v jednom stupni se použije materiál, který adsorbuje faktor VIII a v jednom z dalších stupňů materiál pro adsorpci proteinů, přítomných jako nečistoty.
7. Způsob podle nároků 2 až 6, vyznačující se tím, že se pro chromatografické čištění použije aniontoměnič na akrylátové, silikátové nebo uhlohydrátové bázi.
8. Způsob podle nároku 7, vyznačující se tím, že se použije aniontoměnič, který je tvořen matricí, na kterou jsou navázány polymerní postranní řetězce, které obsahují aniontovýměnné skupiny.
9. Přípravek faktoru VIII srážení krve, vyrobený podle jednoho z nároků 2 až 8, se specifickou aktivitou nejméně 25 j/mg proteinu.
CZ93692A 1992-04-24 1993-04-21 Způsob výroby před virem zabezpečeného, vysocečištěného faktoru VIII CZ279979B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AT0084992A AT399818B (de) 1992-04-24 1992-04-24 Verfahren zur herstellung einer hochgereinigten virussicheren faktor viii-präparation

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ69293A3 CZ69293A3 (en) 1993-12-15
CZ279979B6 true CZ279979B6 (cs) 1995-09-13

Family

ID=3501200

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ93692A CZ279979B6 (cs) 1992-04-24 1993-04-21 Způsob výroby před virem zabezpečeného, vysocečištěného faktoru VIII

Country Status (18)

Country Link
US (1) US5410022A (cs)
EP (1) EP0567448B2 (cs)
JP (1) JP2511631B2 (cs)
AT (2) AT399818B (cs)
AU (1) AU659301B2 (cs)
BR (1) BR9301641A (cs)
CA (1) CA2094347C (cs)
CZ (1) CZ279979B6 (cs)
DE (1) DE59308628D1 (cs)
DK (1) DK0567448T4 (cs)
ES (1) ES2117703T5 (cs)
FI (1) FI106468B (cs)
HU (1) HU210632B (cs)
MX (1) MX9302279A (cs)
NO (1) NO307465B1 (cs)
PL (1) PL172462B1 (cs)
SK (1) SK279750B6 (cs)
ZA (1) ZA932843B (cs)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU6653094A (en) * 1992-12-16 1994-07-04 Immuno Aktiengesellschaft Process for preparing a virus-safe biological composition
DE4320294A1 (de) * 1993-06-18 1994-12-22 Immuno Ag Verwendung von humanem Protein C zur Verhinderung und Behandlung von Thrombozytenablagerungen
DE4325872C1 (de) * 1993-08-02 1994-08-04 Immuno Ag Virusinaktivierte Faktor Xa-Präparation
AT402788B (de) * 1993-08-03 1997-08-25 Immuno Ag Virussichere blutgerinnungsfaktor xiii-präparation
DE4337573C1 (de) * 1993-11-04 1995-05-18 Octapharma Ag Verfahren zur Herstellung einer virusinaktivierten Faktor VIII enthaltenden Fraktion mittels chromatographischer Methoden
DE4407837C1 (de) * 1994-03-09 1995-08-17 Octapharma Ag Verfahren zur Gewinnung von hochreinem, virusinaktiviertem alpha¶1¶-Antitrypsin mittels Anionenaustauscher-Chromatographie
US5659017A (en) * 1995-11-07 1997-08-19 Alpha Therapeutic Corporation Anion exchange process for the purification of Factor VIII
AT403764B (de) 1996-03-15 1998-05-25 Immuno Ag Stabiler faktor viii/vwf-komplex
DE19623293C2 (de) * 1996-06-11 1998-10-22 Biotest Pharma Gmbh Nicht-immunogene Faktor VIII-enthaltende Zusammensetzung und ein Verfahren zu ihrer Herstellung
AT404358B (de) 1997-02-04 1998-11-25 Immuno Ag Verfahren zur chromatographischen reinigung bzw. fraktionierung von von willebrand-faktor aus einem vwf-hältigen ausgangsmaterial
EP1154796B1 (en) * 1999-02-22 2007-06-20 University of Connecticut Novel albumin-free factor viii formulations
US20040117862A1 (en) * 2002-03-11 2004-06-17 Cooper Julian D. Production of high levels of transgenic factor VII with engineered stability and its therapeutic uses
EP1848812A4 (en) * 2004-10-01 2011-11-09 Life Technologies Corp SUPPLY BUFFERS, SYSTEMS AND METHODS FOR THE IN VITRO SYNTHESIS OF BIOMOLECULES
BRPI0921429B1 (pt) 2008-11-07 2022-07-12 Takeda Pharmaceutical Company Limited Formulação farmacêutica liofilizada estável, e, método para preparar um fator liofilizado estável
CN101967188B (zh) * 2010-11-08 2012-11-28 江西博雅生物制药股份有限公司 一种人凝血因子ⅷ的制备工艺
CN107073084B (zh) * 2014-11-05 2022-03-25 雅培制药股份有限公司 用于生产具有改善的安全特性的具有脂肪酶活性的组合物和适用于药物用途的组合物的方法

Family Cites Families (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3920625A (en) * 1973-06-19 1975-11-18 Kabi Ab Isolation of coagulation factors from biological material using cross linked sulfated, sulfonated carbohydrates
AT350726B (de) * 1976-08-30 1979-06-11 Immuno Ag Verfahren zur herstellung einer blut- gerinnungsfoerdernden praeperation aus menschlichem blutplasma
FR2435832A1 (fr) * 1978-07-21 1980-04-04 Alsthom Cgee Dispositif de connexion electrique
US4250139A (en) * 1979-02-01 1981-02-10 Collagen Corporation Microwave sterilization of dry protein
DE2916711A1 (de) * 1979-04-25 1980-11-06 Behringwerke Ag Blutgerinnungsfaktoren und verfahren zu ihrer herstellung
DE3176491D1 (en) * 1980-03-05 1987-11-26 Miles Lab Pasteurized therapeutically active protein compositions
DE3173208D1 (en) * 1980-10-06 1986-01-23 Edward Shanbrom Method of reducing undesirable activities of biological and pharmaceutical products
US4314997A (en) * 1980-10-06 1982-02-09 Edward Shanbrom Purification of plasma protein products
DE3043857A1 (de) * 1980-11-21 1982-07-08 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Verfahren zur herstellung von blutgerinnungsfaktoren und danach hergestellte praeparation der faktoren ii und vii
DE3045153A1 (de) * 1980-11-29 1982-07-08 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Verfahren zur herstellung von blutgerinnungsfaktoren und danach hergestellte praeparation der faktoren ix und x
US4495278A (en) * 1981-04-27 1985-01-22 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Process for making novel blood clotting enzyme compositions
US4456590B2 (en) * 1981-11-02 1989-05-30 Heat treatment of lyphilized blood clotting factor viii concentrate
US4481189A (en) * 1982-04-14 1984-11-06 New York Blood Center Inc. Process for preparing sterilized plasma and plasma derivatives
US4379085A (en) * 1982-05-14 1983-04-05 American National Red Cross Heat stabilization of plasma proteins
US4511556A (en) * 1982-06-10 1985-04-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inactivation of a lipid virus
JPS59134730A (ja) * 1983-01-20 1984-08-02 Green Cross Corp:The 血液凝固第８因子の加熱処理法
CA1213827A (en) * 1983-04-29 1986-11-12 Ricardo H. Landaburu Process for pasteurizing fibronectin
ATE36457T1 (de) * 1983-05-02 1988-09-15 Immuno Ag Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen krankheitserregern.
US4540573A (en) * 1983-07-14 1985-09-10 New York Blood Center, Inc. Undenatured virus-free biologically active protein derivatives
JPS6054287B2 (ja) * 1983-10-19 1985-11-29 株式会社ミドリ十字 血漿蛋白の加熱処理方法
US4490361A (en) * 1983-12-02 1984-12-25 Alpha Therapeutic Corporation Virus inactivating heat treatment of plasma fractions
AT389815B (de) * 1984-03-09 1990-02-12 Immuno Ag Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern in blutprodukten
US5043428A (en) * 1984-08-31 1991-08-27 Behringwerke Aktiengesellschaft Pasteurized, isoagglutinin-free factor VIII preparation and a process for its production
DE3432083A1 (de) * 1984-08-31 1986-03-06 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Pasteurisierte, isoagglutininfreie faktor viii-praeparation und verfahren zu ihrer herstellung
JPH0669961B2 (ja) * 1984-09-25 1994-09-07 株式会社ミドリ十字 免疫グロブリンの加熱処理方法
JPH0825902B2 (ja) * 1985-02-21 1996-03-13 株式会社ミドリ十字 γ−グロブリンの加熱処理方法
US4673733A (en) * 1985-04-11 1987-06-16 Sudhish Chandra Treatment of biological and pharmaceutical products adsorbed on a solid phase with virus and pyrogen inactivating agents
AT391808B (de) * 1986-11-03 1990-12-10 Immuno Ag Verfahren zur herstellung einer faktor viii (ahf)-haeltigen fraktion
AT388501B (de) * 1987-02-12 1989-07-25 Immuno Ag Verfahren zur herstellung von parenteral verabreichbaren blutprodukten
EP0413687A1 (en) * 1987-05-15 1991-02-27 Alan I. Rubinstein Sequential improved method for treatment of human blood-clotting factor products
IL86417A (en) * 1987-05-22 1992-09-06 Armour Pharma Process for the inactivation of pathogens in biological or pharmaceutical material by mixing with aqueous solution containing a sugar(alcohol)and neutral salts as stabilizers
AT391809B (de) * 1988-01-12 1990-12-10 Immuno Ag Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern in blutplasmaprodukten
FR2630115B1 (fr) * 1988-04-14 1994-10-28 Merieux Inst Procede de stabilisation des solutions d'albumine humaine et solution obtenue
DE3878227D1 (de) * 1988-05-27 1993-03-18 Centre Regional De Transfusion Verfahren zur herstellung eines hochreinen, virusfreien antihaemophiliefaktors mittels chromatographie.
AT397203B (de) * 1988-05-31 1994-02-25 Immuno Ag Gewebeklebstoff
FR2632309B1 (fr) * 1988-06-07 1990-08-24 Lille Transfusion Sanguine Procede de purification par voie chromatographique de proteines, notamment de facteur viii, et les produits obtenus
AT390801B (de) * 1988-07-28 1990-07-10 Immuno Ag Verfahren zur herstellung von lys-plasminogen
DE3878245D1 (de) * 1988-11-05 1993-03-18 Octapharma Ag Verfahren zur herstellung eines hochreinen, nicht infektioesen antihaemophiliefaktors mittels chromatographie.
US5156973A (en) * 1988-11-23 1992-10-20 Edward Shanbrom Antiviral blood sampling process and apparatus
DE3843126C3 (de) * 1988-12-22 1994-10-06 Octapharma Ag Verfahren zur Herstellung eines hochreinen Thrombinkonzentrates
DE69011136T3 (de) * 1989-01-13 2003-10-23 Mitsubishi Pharma Corp Verfahren zur Herstellung einer Protein enthaltenden Zusammensetzung.
DK0431129T3 (da) * 1989-06-15 1996-06-17 Rorer Int Overseas Fremgangsmåder til inaktivering af virus i viruskontaminerede farmaceutiske præparater
IE73210B1 (en) * 1990-01-24 1997-05-07 Warner Lambert Co Process for the production of thrombin and high purity thrombin preparation thereby obtained
US5217737A (en) * 1991-05-20 1993-06-08 Abbott Laboratories Plastic containers capable of surviving sterilization
AT402891B (de) * 1991-06-20 1997-09-25 Immuno Ag Verfahren zur herstellung eines inaktivierten blutproduktes
FR2679251B1 (fr) * 1991-07-18 1993-11-12 Nord Assoc Essor Transfusion San Procede de preparation d'un concentre de thrombine humaine destine a un usage therapeutique.
FR2681867B1 (fr) * 1991-09-26 1993-12-31 Pasteur Merieux Serums Vaccins Procede de purification du facteur viii et preparations obtenues.
AT398079B (de) * 1991-11-04 1994-09-26 Immuno Ag Präparation mit thrombinaktivität sowie verfahren zu ihrer herstellung
FR2841484B1 (fr) * 2002-06-26 2004-09-10 Boucq De Beaudignies Ghisla Le Dispositif et procede de filtration de l'air et des gaz avec regeneration des particules captees

Also Published As

Publication number Publication date
SK279750B6 (sk) 1999-03-12
ES2117703T5 (es) 2005-07-16
JPH069694A (ja) 1994-01-18
SK39193A3 (en) 1993-11-10
CA2094347A1 (en) 1993-10-25
HU210632B (en) 1995-06-28
DE59308628D1 (de) 1998-07-09
EP0567448A1 (de) 1993-10-27
NO307465B1 (no) 2000-04-10
PL172462B1 (pl) 1997-09-30
ES2117703T3 (es) 1998-08-16
BR9301641A (pt) 1993-10-26
HUT64777A (en) 1994-02-28
FI106468B (fi) 2001-02-15
DK0567448T4 (da) 2005-05-02
JP2511631B2 (ja) 1996-07-03
DK0567448T3 (da) 1999-03-22
NO931476L (no) 1993-10-25
AU3687593A (en) 1993-10-28
ATA84992A (de) 1994-12-15
FI931826A (fi) 1993-10-25
MX9302279A (es) 1994-08-31
ZA932843B (en) 1993-11-23
ATE166881T1 (de) 1998-06-15
CZ69293A3 (en) 1993-12-15
EP0567448B1 (de) 1998-06-03
NO931476D0 (no) 1993-04-22
HU9301038D0 (en) 1993-06-28
FI931826A0 (fi) 1993-04-22
US5410022A (en) 1995-04-25
EP0567448B2 (de) 2005-01-05
AU659301B2 (en) 1995-05-11
PL298670A1 (en) 1994-04-05
AT399818B (de) 1995-07-25
CA2094347C (en) 2002-06-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0315968B2 (en) Plasma and recombinant protein formulations in low ionic strength media
US4876241A (en) Stabilization of biological and pharmaceutical products during thermal inactivation of viral and bacterial contaminants
US5605884A (en) Factor VIII formulations in high ionic strength media
CZ279979B6 (cs) Způsob výroby před virem zabezpečeného, vysocečištěného faktoru VIII
EP0314095B1 (en) Plasma and recombinant protein formulation in high ionic strength media
JP3133338B2 (ja) ウイルス的に安全な生物学的組成物の調製方法
JP3628703B2 (ja) 治療グレードトロンビン産物及び製品
US6358534B1 (en) Immunotolerant prothrombin complex preparation
US4749783A (en) Viral inactivation and purification of active proteins
JPS63183539A (ja) 静注用免疫グロブリン製剤の製造方法
CA1337688C (en) Stabilization of biological and pharmaceutical products during thermal inactivation of viral and bacterial contaminants
AT405608B (de) Verfahren zur inaktivierung von pathogenen, insbesondere von viren, in einem biologischen material
HU211239A9 (hu) Eljárás nagy tisztaságú, vírusbiztos Vili faktor-készítmény előállítására
US6605222B1 (en) Method for producing a factor VIII/von Willebrand factor complex
JPH1053534A (ja) α２プラスミンインヒビターの製造方法

Legal Events

Date Code Title Description
IF00 In force as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20020421