NO340154B1

NO340154B1 - Krystallformer av astaxantin

Info

Publication number: NO340154B1
Application number: NO20080462A
Authority: NO
Inventors: Peter Van Hoogevest; Steve Leigh; Mathew Louis Steven Leigh
Original assignee: Phares Pharmaceutical Res Nv
Priority date: 2005-08-15
Filing date: 2008-01-24
Publication date: 2017-03-13
Also published as: RU2008110066A; NO20080462L; CN101243032A; ES2420155T3; EP1917227A1; WO2007020057A1; AU2006281638A1; DK1917227T3; US7563935B2; JP2012255037A; AU2006281638B2; EP1917227B1; CA2618447A1; US20080234521A1; CN101243032B; JP5509444B2; JP2009504700A; CA2618447C

Description

Den foreliggende oppfinnelse vedrører krystallformer omfattende astaxantin og relaterte prosesser, sammensetninger og fremgangsmåter.

Avgivelse av fargemidler så som astaxantin med god oral biotilgjengelighet for forbedret plasmaopptak og deponering i kjøtt i laksefisk er av spesiell viktighet for fiskeforprodusenter og fiskeoppdrettere. På grunn av dårlig løselighet i fysiologisk miljø gir administrering av astaxantinkrystaller i fiskeforpellet og andre ernæringsdoseringsformer ikke tilstrekkelig oralt opptak av fargemidler. For å gjøre farge-midlene mer biotilgjengelige har flere metoder blitt utviklet for å fremstille partikulære astaxantinsammensetninger som er dispergerbare i vann for å prosesseres til forpelleter. De dispergerbare sammensetninger fremstilles til å oppløse krystallinsk astaxantin i oppløsningsmidler (US 6,863,914 og US 6,406,735) eller oljer (US 5,364,563) under høyt trykk og temperatur, umiddelbart etterfulgt av dispergering av den organiske løsning i vandig hydrokolloid. Alternativt, karotenoidet smeltes i en vandig eksipientmatriks og emulsifiseres under trykk uten anvendelse av oppløs-ningsmiddel eller olje (US 6,093,348). Alle fremgangsmåtene krever ytterligere prosessering for å fremstille pulverformuleringer fra de vandige dispersjoner. Ingen av beskrivelsene beskriver den type astaxantin krystall som anvendes i termer av deres krystallstruktur som beskrevet med røntgen diffraksjon og Råman spektroskopi. Til tross for vanskelige betingelser som er nødvendig for å fremstille astaxantinsammensetninger har lite blitt gjort for å gjøre fremstillingsmetodene og pro-duksjonsmetodene bedre. En måte å redusere energi og oppløsningsmiddelforbruk vil være å utnytte forskjellige krystallformer av astaxantin som har fordelaktig løse-lighet, smelte- eller stabilitetskarakteristika, for dermed å muliggjøre mer forsiktige prosesseringsbetingelser. Overraskende, beskrivelsene sier spesifikt ingenting om spesifikke krystallformer av astaxantin og deres potensial for å fremstille astaxantinsammensetninger. Forskjellige krystallformer kan påvirke in vivo oppløsningsrate og muliggjøre høyere (supermetninger) konsentrasjoner av karotenoider i oljeformige administreringsvehikler som deretter kan tilveiebringe høyere oralt opptak og biotilgjengelighet.

US 6,827,941 beskriver amorfe aggregater av astaxantin som fremstilles fra fortyn-nete astaxantinløsninger i aceton (50 mg/l) etterfulgt av 20 gangers fortynning med vann/aceton 7/3 (vol/vol). Den sier ingenting med hensyn til dannelse av spesifikke krystallformer. US 5,654,488 beskriver syntese og krystallisering av trans-astaxantin fra reaksjonsblandingen ved anvendelse av Wittig-prosessering, men spesifiserer ikke krystallstrukturen eller strukturene som oppnås.

Den foreliggende oppfinnelse vedrører en blanding av nye, tidligere ikke-beskrevne krystallformer i samsvar med krav 1 omfattende astaxantin som angitt heri som krystallform I og krystallform II. Videre beskriver oppfinnelsen krystallform I, Videre, oppfinnelsen vedrører en fremgangsmåte for å fremstille nevnte blanding og nevnte krystallform I. I tillegg beskriver oppfinnelsen krystallform I og kombinasjoner av krystallform I og krystallform II omfattende definerte mengder av all-trans astaxantin med forskjellige mengder av (andre) karotenoidale forbindelser. Den dekker videre administrasjonsformer omfattende krystallform I eller kombinasjoner av krystallform I og krystallform II og anvendelse av enten krystallform I eller kombinasjoner av krystallform I og krystallform II oppløst eller suspendert i olje eller organisk løse-middel. Løsningene eller dispersjonene kan anvendes for å fremstille faststoffsammensetninger omfattende astaxantin i hydrofile eller lipofile bærere av dispergerende midler eller kan anvendes for å fremstille fysiske former av astaxantin.

I denne oppfinnelse gjelder følgende definisjoner;

"Astaxantin" omfatter all-trans-astaxantin (3,3'-dihydroksy-p,p-karoten-4,4'-dion) sammen med ikke mer enn 25 vekt % av andre karotenoidale forbindelser (inkluderende cis-isomerene av astaxantin).

"Karotenoidale forbindelser" inkluderer astaxantinmetabolitter, syntetiske eller naturlige astaxantinderivater, for eksempel eterifiserte eller esterifiserte, oksidasjon - eller hydrogeneringsprodukter, og cis- isomerer. Termen inkluderer biprodukter oppnådd under syntese og krystallisering av astaxantin, eller under ekstraheringsprosessen av astaxantin fra naturlige kilder. Typiske astaxantinrelaterte karotenoidale forbindelser er for eksempel 9-cis-astaxantin, 13-cis-astaxantin, 15-cis-astaxantin, astacen, semi-astacen og C-25 aldehyd (all-trans-3-hydroksy-4-okso-12'-apo-beta-karoten-12'-al, med CAS Nr. 72523-68-3). Termen ekskluderer spesifikt all-trans-astaxantin. Termen dekker "totale karotenoider andre enn astaxantin" kravene i US-FDA spesifikasjoner for astaxantin som beskrevet i 21 CFR 73.35.

"Mol% " indikerer renhet av en krystallform med hensyn til totalt molart karotenoid-innhold, som er summen av all-trans-astaxantin og karotenoidale forbindelser.

"I hovedsak i samsvar med" en røntgenpulverdiffraksjon eller Ramanspektrum gitt i figurene betyr at ethvert spektrum som oppviser den samme sekvens av topper eller minimum, som viser det samme forhold av intensiteter av nevnte topper og minimum ved de samme bølgenummer (Råman) og Teta og d-intergitter intervallposisjon (røntgen) innen et standardavvik på ± 5 % er i samsvar med det karakteristiske røntgen- og Ramanspektra for astaxantin krystallform I vist i figur 1 og figur 2, respektivt, eller røntgen- og Ramanspektra for krystallform II vist i fig 3 og fig 4, respektivt.

"Ca." refererer til standardavvik på 20 % på hver side av grensene i mol % av karotenoidale forbindelser i løsning for fremstilling av krystallform I eller form II eller blandinger derav, eller i nevnte krystallformer.

"Lipofilt dispergerende middel" er en faststoffformig substans med vannløselighet ved romtemperatur lavere enn eller lik 5 mg/ml som har egenskapen å fastholde en molekylær eller kolloidal dispersjon eller aggregater av astaxantin i en faststoff sammensetning.

"Hydrofilt dispergerende middel" er en faststoffsubstans med vannløselighet ved romtemperatur mer enn 5 mg/ml som har egenskapen og fungerer som et fuktmiddel for å forbedre suspensjonen av astaxantin i en vandig fase. Definisjonen refererer også til o/w emulsifiserere, polymerer og hydrokolloider.

"Faststoffsammensetning" betyr at astaxantinet er fordelt i en faststoffmatriks som fremstilles ved å oppløse karotenoidet og det lipofile eller hydrofile dispergerende middel sammen i et gjensidig oppløsningsmiddel eller kombinasjon av oppløsnings-midler, etterfulgt av fjerning av oppløsningsmiddelet eller solventblandingen

"Vannblandbart oppløsningsmiddel" angir at oppløsningsmiddelet kan blandes i ethvert forhold med vann uten faseseparasjon, for eksempel etanol.

"Vann-ublandbart oppløsningsmiddel" betyr at oppløsningsmiddelet kan blandes kun delvis med vann uten faseseparasjon, for eksempel diklormetan

"Anti-solvent" er en krystalliseringsvæske som er blandbar med oppløsningsmiddelet hvor all-trans-astaxantin og karotenoidale forbindelser er oppløst men har en lavere solvensitet eller praktisk ingen solvente egenskaper (for astaxantin) ved temperaturen som forårsaker krystallisering av den spesifikke krystallform. Definisjonen inkluderer vann. Per definisjon, astaxantin haren løselighet på mindre enn 1 mg/ml i antisolvente ved romtemperatur eller under, for eksempel metanol.

"Life science industri" inkluderer ernæring, for, farmasøytisk, akvakultur, kosmetisk, nutrisøytisk, veterinær industri.

Oppfinnelsen er innen området "krystallformer" og "fargesammensetninger" omfattende naturlig eller syntetisk astaxantin.

Oppfinnelsen beskriver følgende utførelser:

En blanding bestående i hovedsak av krystallformer av astaxantin omfattende

a) 95% til 5% basert på vekt av krystallform Ikarakterisertmed i det minste en av

i) Røntgendiffraksjonsmønster omfattende følgende intergitter planintervall d i 10_<10>m: 8,0 ± 0,1, 6,5 ± 0,05, 6,3 ±0,05, 6,1 ±0,05, 5,96 ± 0,05, 5,58 ± 0,05, 5,43 ± 0,05, 4,87 ± 0,05, 4,32 ± 0,05, 4,24 0,05, 4,21 ± 0,05, 4,07 ± 0,05, 4,03 ± 0,05, 3,58 0,05, 3,50 ± 0,05,

ii) Ramanspektrum inneholdende topper ved; 372 2, 346 ± 2, 333 ± 2,

312 ± 2, 289 ± 2, 234 ± 2, 193 ± 2, 178 ± 2, 133 ± 2, 82 ± 2, cm-<1>; og, valgfritt minst en av

iii) et DSC- scan som viser en faseovergang ved 212-222 °C; og iv) en løselighetsprofil i diklormetan på 35-45 g/l ved 20 °C-25 °C; og

b) 5% til 95% basert på vekt av krystallform IIkarakterisertmed i det minste en av

i) Røntgendiffraksjonsmønster omfattende følgende intergitter planintervall d i 10"<10>m: 7,2 ± 0,1, 6,6 ± 0,05, 6,5 ± 0,05, 5,48 ± 0,05, 5,34 ± 0,05, 5,27 ± 0,05, 4,49 ± 0,05, 4,38 ± 0,05, 4,12 ± 0,05, 3,89 ± 0,05, 3,61 ± 0,05, 3,56 ± 0,05, 3,34 ± 0,05, 3,32 ± 0,05, 3,22 ± 0,05; og

ii) Ramanspektrum inneholdende topper ved 376 ± 2, 337 ± 2, 314 ± 2,

304 ± 2, 289 ± 2, 206 ± 2, 180 ± 2, 137 ± 2, 107 ± 2, 93 ± 2, cm-<1>; og, valgfritt, ved i det minste en av

iii) et DSC-scan som viser en faseovergang ved 225-240 °C; og iv) en løselighetsprofil i diklormetan på 10 - 30 g/l ved 20 °C-25 °C.

En foretrukket utførelse vedrører en blanding bestående i hovedsak av 20 til 80 vekt% av den krystallinske form av astaxantin som er benevnt krystallform I; og 80 til 20 vekt% av den krystallinske form av astaxantin som er benevnt krystallform II.

En foretrukket utførelse vedrører en blanding bestående i hovedsak av 10 til 90 vekt% av den krystallinske form av astaxantin som er benevnt krystallform I; og 90 til 10 vekt% av den krystallinske form av astaxantin som er benevnt krystallform II.

Det beskrives også en sammensetning omfattende en krystallinsk form av astaxantin benevnt krystallform Ikarakterisert vedi det minste en av

i) Røntgendiffraksjonsmønster omfattende følgende intergitter planintervall d i 10"<10>m: 8,0 ± 0,1, 6,5 ± 0,05, 6,3 ± 0,05, 6,1 ± 0,05, 5,96 0,05, 5,58 ± 0,05, 5,43 ± 0,05, 4,87 ± 0,05, 4,32 ± 0,05, 4,24 ± 0,05, 4,21 0,05, 4,07 ± 0,05, 4,03 ± 0,05, 3,58 ± 0,05, 3,50 ± 0,05,

ii) Ramanspektrum inneholder topper ved; 372 ± 2, 346 ± 2, 333 ± 2, 312 ± 2, 289 ± 2, 234 ± 2, 193 ± 2, 178 ± 2, 133 ± 2, 82 ± 2, crrT<1>; og, valgfritt ved minst en av,

iii) et DSC-scan som viser en faseovergang ved 212-222 °C; og iv) en løselighetsprofil i diklormetan på 35-45 g/l ved 20 °C-25 °C.

Beskrivelsen vedrører også en sammensetning omfattende en krystallinsk form av astaxantin benevnt krystallform IIkarakterisertmed i det minste en av

i) Røntgendiffraksjonsmønster omfattende følgende intergitter planintervall d i 10"<10>m: 7,2 ± 0,1, 6,6 ± 0,05, 6,5 ± 0,05, 5,48 ± 0,05, 5,34 0,05, 5,27 ± 0,05, 4,49 ± 0,05, 4,38 ± 0,05, 4,12 ± 0,05, 3,89 ± 0,05, 3,61 0,05, 3,56 ± 0,05, 3,34 ± 0,05, 3,32 ± 0,05, 3,22 ± 0,05; og ii) Ramanspektrum inneholdende topper ved et Råman spektrum inneholdende topper ved 376 ± 2, 337 ± 2, 314 ± 2, 304 ± 2, 289 ± 2, 206 ± 2, 180 ± 2, 137 ± 2, 107 ± 2, 93 2, cm"<1>; og, valgfritt, i det minste en av iii) et DSC-scan som viser en faseovergang ved 225-240 °C; og iv) en løselighetsprofil i diklormetan på 10 - 30 g/l ved 20 °C-25 °C.

Også beskrevet er en fremgangsmåte for å fremstille ovenfor nevnte sammensetninger, som omfatter å tilsette eksipienter til krystallform I, og en fremgangsmåte som omfatter å tilsette eksipienter til krystallform II.

En spesiell foretrukket utførelse vedrører en krystallinsk form av astaxantin angitt som krystallform Ikarakterisertmed i det minste en av

i) Røntgendiffraksjonsmønster omfattende følgende intergitter planintervall d i 10"<10>m: 8,0 ± 0,1, 6,5 ± 0,05, 6,3 ± 0,05, 6,1 0,05, 5,96 0,05, 5,58 ± 0,05, 5,43 ± 0,05, 4,87 ± 0,05, 4,32 ± 0,05, 4,24 ± 0,05, 4,21 0,05, 4,07 ± 0,05, 4,03 ± 0,05, 3,58 ± 0,05, 3,50 ± 0,05,

ii) Ramanspektrum inneholdende topper ved; 372 ± 2, 346 ± 2, 333 ± 2, 312 ± 2, 289 ± 2, 234 ± 2, 193 ± 2, 178 ± 2, 133 ± 2, 82 ± 2, cm-<1>; og, valgfritt, ved minst en av

iii) et DSC-scan som viser en faseovergang ved 212- 222 °C; og

iv) en løselighetsprofil i diklormetan på 35- 45 g/l ved 20 °C- 25 °C.

En spesielt foretrukket utførelse vedrører krystallformen av astaxantin benevnt krystallform I som tilveiebringer et røntgenpulver diffraksjonsmønster i hovedsak i samsvar med røntgenpulver diffraksjonsmønster gitt i figur 1.

En spesielt foretrukket utførelse vedrører en krystallinsk form av astaxantin benevnt krystallform I som tilveiebringer et Råman spektrum i hovedsak i samsvar med Råman spektrumet gitt i figur 2.

En ytterligere foretrukket utførelse vedrører krystallinsk form av astaxantin benevnt krystallform Ikarakterisertmed i det minste en av

ii) Ramanspektrum inneholdende topper ved; 372 ± 2, 346 ± 2, 333 ± 2, 312 ± 2, 289 ± 2, 234 ± 2, 193 ± 2, 178 ± 2, 133 ± 2, 82 ± 2, cm-<1>; og, valgfritt, ved minst en av,

v) et DSC-scan som viser en faseovergang ved 212- 222 °C: og vi) en løselighetsprofil i diklormetan på 35-45 g/l ved 20 °C- 25 °C, og som omfatter all-trans-astaxantin og i det minste ca 13 mol% av i det minste en karotenoidal forbindelse.

En ytterligere foretrukket utførelse vedrører den krystallinske form av astaxantin som er benenevnt krystallform Ikarakterisertmed minst en av

iii) et DSC-scan som viser en faseovergang ved 212-222 °C; og iv) en løselighetsprofil i diklormetan på 35-45 g/l ved 20 °C-25 °C,

og omfatter all-trans-astaxantin og minst ca 13 mol% av i det minste en karotenoidal forbindelse, valgt blant gruppen omfattende 9-cis-astaxantin, 13-cis-astaxantin, 15-cis-astaxantin, astacen, semi-astacen og C-25 aldehyd.

Videre beskrives en krystallinsk form av astaxantin benevnt krystallform IIkarakterisertmed minst en av

i) Røntgendiffraksjonsmønster omfattende følgende intergitter planintervaller d i 10"<10>m: 7,2 ±0,1, 6,6 ± 0,05, 6,5 ± 0,05, 5,48 ± 0,05, 5,34 0,05, 5,27 ± 0,05, 4,49 ± 0,05, 4,38 ± 0,05, 4,12 ± 0,05, 3,89 ± 0,05, 3,61 0,05, 3,56 ± 0,05, 3,34 ± 0,05, 3,32 ± 0,05, 3,22 ± 0,05; og ii) Ramanspektrum inneholdende topper ved 376 ± 2, 337 ± 2, 314 ± 2, 304 ± 2, 289 ± 2, 206 ± 2, 180 ± 2, 137 ± 2, 107 ± 2, 93 ± 2, cm-<1>; og, valgfritt, ved minst en av

iii) en DSC-scan som viser en faseovergang ved 225-240 °C; og iv) en løselighetsprofil i diklormetan på 10 - 30 g/l ved 20 °C-25 °C.

Videre beskrives den krystallinske form av astaxantin som er angitt som krystallform II som tilveiebringer et røntgenpulver diffraksjonsmønster i hovedsak i samsvar med røntgenpulver diffraksjonsmønster gitt i figur 3.

Videre beskrives en krystallinsk form av astaxantin benevnt krystallform II som tilveiebringer Råman spektrum som i hovedsak er i samsvar med et Råman spektrum som vist i figur 4.

Videre beskrives en krystallinsk form av astaxantin benevnt krystallform IIkarakterisertmed minst en av i) Røntgendiffraksjonsmønster omfattende følgende intergitter planintervall d i 10"<10>m: 7,2 ± 0,1, 6,6 ± 0,05, 6,5 ± 0,05, 5,48 ± 0,05, 5,34 0,05, 5,27 ± 0,05, 4,49 ± 0,05, 4,38 ± 0,05, 4,12 ± 0,05, 3,89 ± 0,05, 3,61 ± 0,05, 3,56 ± 0,05, 3,34 ± 0,05, 3,32 ± 0,05, 3,22 ± 0,05; og ii) Ramanspektrumet inneholdende topper ved 376 ± 2, 337 ± 2, 314 ± 2, 304 ± 2, 289 ± 2, 206 ± 2, 180 ± 2, 137 ± 2, 107 ± 2, 93 ± 2, cm-<1>; og, valgfritt, ved minst en av

iii) et DSC-scan som viser en faseovergang ved 225-240 °C; and

iv) en løselighetsprofil i diklormetan på 10 - 30 g/l ved 20 °C-25 °C,

og som omfatter all-trans-astaxantin og maksimalt ca 7 mol% av minst en karotenoidal forbindelse.

i) Røntgendiffraksjonsmønster omfattende følgende intergitter planintervall d i 10"<10>m: 7,2 ± 0,1, 6,6 ± 0,05, 6,5 ± 0,05, 5,48 ± 0,05, 5,34 0,05, 5,27 ± 0,05, 4,49 ± 0,05, 4,38 ± 0,05, 4,12 ± 0,05, 3,89 ± 0,05, 3,61 0,05, 3,56 ± 0,05, 3,34 ± 0,05, 3,32 ± 0,05, 3,22 ± 0,05; og ii) Ramanspektrum inneholdende topper ved 376 ± 2, 337 ± 2, 314 ± 2, 304 ± 2, 289 ± 2, 206 ± 2, 180 ± 2, 137 ± 2, 107 ± 2, 93 ± 2, cm-<1>; og, valgfritt, ved minst en av

iii) et DSC-scan som viser en faseovergang ved 225-240 °C; og

iv) en løselighetsprofil på diklormetan på 10 - 30 g/l ved 20 °C-25 °C

og som omfatter all-trans-astaxantin og maksimalt ca 7 mol% av minst en karotenoidal forbindelse, valgt blant gruppen omfattende minst en 9-cis-astaxantin, 13-cis-asatxantin, 15-cis-astaxantin, astacen, semi-astacen og C-25 aldehyd.

i) Røntgendiffraksjonsmønster omfattende følgende intergitter planintervall d i 10"<10>m: 7,2 ± 0,1, 6,6 ± 0,05, 6,5 ± 0,05, 5,48 ± 0,05, 5,34

0,05, 5,27 ± 0,05, 4,49 ± 0,05, 4,38 ± 0,05, 4,12 ± 0,05, 3,89 ± 0,05, 3,61 ± 0,05, 3,56 ± 0,05, 3,34 ± 0,05, 3,32 ± 0,05, 3,22 ± 0,05; og ii) Ramanspektrum inneholdende topper ved 376 ± 2, 337 ± 2, 314 ± 2, 304 ± 2, 289 ± 2, 206 ± 2, 180 ± 2, 137 ± 2, 107 ± 2, 93 ± 2, cm-<1>; og, valgfritt, med mint en av

iii) et DSC-scan som viser en faseovergang ved 225-240 °C; og iv) En løselighetsprofil i diklormetan på 10 - 30 g/l ved 20 °C-25 °C hvor astaxantin er i samsvar med følgende spesifikasjoner som angitt i 21 CFR 73.35 av US-FDA som vist i tabell 1:

En ytterligere utførelse ifølge oppfinnelsen vedrører en fremgangsmåte for å fremstille en blanding av krystallinske former av astaxantin benevnt krystallform I og krystallform II, omfattende minst 5 vekt/vekt % av form I eller form II som omfatter trinnene: i) anvende en løsning av en blanding av astaxantin som omfatter all-trans-astaxantin og ca. 7 mol% til ca. 17 mol% av minst en karotenoidal forbindelse, valgt blant gruppen omfattende minst en 9-cis-astaxantin, 13-cis-astaxantin, 15-cis-astaxantin, astacen, semi-astacen og C-25 aldehyd, i et oppløsningsmiddel hvor løseligheten av astaxantin er minst 1 mg/ml ved en temperatur opptil kokepunktet av nevnte oppløsningsmiddel, og ytterligere trinnene valgt blant gruppen omfattende; iia) tilsetning av et antisolvent, iib) fjerning av solventen ved evaporering, valgfritt med samtidig utbytting av solventen med et antisolvent,

iic) avkjøling av det organiske solventløsning valgfritt med et nukleerende middel eller sårmiddel omfattende krystallform I eller II, eller blandinger derav, og iii) høste, vaske med et antisolvent og tørke krystallene.

En ytterligere utførelse ifølge oppfinnelsen vedrører en fremgangsmåte for å fremstille en krystallinsk form av astaxantin benevnt krystallform I, som omfatter trinnene: i) anvende en løsning av en blanding av astaxantin som omfatter all-trans-astaxantin og minst ca 13 mol% av minst en karotenoidal forbindelse, valgt blant gruppen omfattende 9-cis-astaxantin, 13-cis-astaxantin, 15-cis-astaxantin, astacen, semi-astacen og C-25 aldehyd oppløst i et oppløsningsmiddel hvor løseligheten av astaxantin er minst 1 mg/ml ved en temperatur opp til kokepunktet av nevnte oppløsningsmiddel og ytterligere trinnene valgt blant gruppen omfattende; iia) tilsetning av et antisolvent, iib) fjerning av solventen ved evaporering valgfritt med samtidig utbytting av solventen med et antisolvent, iic) avkjøling av den organiske solventløsning valgfritt med et nukleerende middel eller såmiddel omfattende krystallform I og iii) høste, vaske med et antisolvent og tørking av krystallene.

En ytterligere utførelse ifølge oppfinnelsen vedrører en fremgangsmåte for å fremstille en krystallinsk form av astaxantin angitt som krystallform I, som omfatter trinnene: i) anvende en løsning av en blanding av astaxantin som omfatter all-trans-astaxantin og minst ca. 13mol% av minst en karotenoidal forbindelse valgt blant gruppen omfattende minst en 9-cis-astaxantin, 13-cis-astaxantin, 15-cis-astaxantin, astacen, semi-astacen og C-25 aldehyd i et oppløsningsmiddel valgt blant gruppen omfattende diklormetan, trikloretan, kloroform, dimetoksymetan, dietoksyetan, dioksasyclopentan, THF, NMP, N-etylpyrrolidon, toluen, pyridin og karbon disulfid, ved en temperatur opp til kokepunktet av nevnte solvent og ytterligere trinn valgt blant gruppen omfattende; iia) tilsetning av et antisolvent valgt blant gruppen omfattende metanol, etanol, N-propanol, isopropanol, N-butanol, tert-butanol og vann, iib) fjerning av solventen ved evaporering valgfritt med samtidig utbytting av solvent med et antisolvent, iic) kjøling av den organiske solventløsning med valgfri tilsetning av et nukleerende middel eller såmiddel omfattende

krystallform I og iii) høste, vaske med et antisolvent og tørking av krystallene.

Det beskrives også en fremgangsmåte for å fremstille en krystallinsk form av astaxantin angitt som krystallform II, som omfatter trinnet: i) Oppløse en blanding av astaxantin som omfatter all-trans-astaxantin og i hovedsak maksimum på ca 7 mol % av minst et karotenoidal forbindelse, valgt blant gruppen omfattende i det minste 9-cis-astaxantin, 13-cis-astaxantin, 15-cis-astaxantin, astacen, semi-astacen og C-25 aldehyd i en solvent hvor løseligheten av astaxantin er minst 1 mg/ml ved en temperatur på opptil kokepunktet av nevnte solvent og hvor ytterligere trinn er valgt blant gruppen omfattende; iia) tilsetning av en antisolvent, iib) fjerning av solventen ved evaporering, valgfritt med samtidig utbytting av solventen ved en antisolvent, iic) avkjøling av den organiske solventløsning med valgfri tilsetning av et nukleerende middel eller såmiddel omfattende krystallform I og iii) høsting, vaske med en antisolvent og tørking av krystallene.

Det beskrives oså en fremgangsmåte for å fremstille en krystallinsk form av astaxantin angitt krystallform II, omfattende trinnene: i) å oppløse astaxantin, omfattende all-trans-astaxantin og i hovedsak et maksimum av ca 7 mol% av minst en karotenoidal forbindelse valgt blant gruppen omfattende minst en 9-cis-astaxantin, 13-cis-astaxantin, 15-cis-astaxantin, astacen, semi-astacen og C-25 aldehyd i en solvent, valgt blant gruppen omfattende diklormetan, trikloretan, kloroform, dimetoksymetan, dietoksyetan, dioksasyclopentan,THF, NMP, N-etylpyrrolidon, toluen, pyridin og karbon disulfid, og ytterligere trinn valgt blant gruppen omfattende: iia) tilsetning av et antisolvent, iib) fjerning av solventen ved evaporering, eller valgfritt ved samtidig utbytting av solventen med en antisolvent, iic) avkjøling av den organiske solventløsning valgfritt med tilsetning av et nukleerende middel eller såmiddel omfattende krystallform II og, iii) høste, vaske med en antisolvent og tørking av krystallene.

Det beskrives også en fremgangsmåte for å fremstille en krystallinsk form av astaxantin angitt som krystallform I eller en blanding av krystallform I og krystallform II som omfatter en krystalliseringsprosess bestående av trinnene: i) oppløse astaxantin, omfattende all-trans-astaxantin og maksimalt ca 7 mol % av minst en karotenoidal forbindelse, valgt blant gruppen omfattende minst en 9-cis-astaxantin, 13-cis-astaxantin, 15-cis-astaxantin, astacen, semi-astacen og C-25 aldehyd i et oppløsningsmiddel, valgt blant gruppen omfattende diklormetan, trikloretan, kloroform, dimetoksymetan, dietoksyetan, dioksasyclopentan, THF, NMP, N-etylpyrrolidon, toluen, pyridin og karbon disulfid, ii) underlegge løsningen til i det minste en behandling valgt blant gruppen omfattende varme, lys, oksiderende midler og ytterligere trinn valgt blant gruppen omfattende iiia) tilsetning av en antisolvent, iiib) fjerning av solventen ved evaporering eller valgfritt med samtidig utbytting av solventen med en antisolvent, iiic) avkjøling av den organiske solventløsning med eller uten tilsetning av et nukleerende middel eller såmiddel, og iv) høste, vaske med en antisolvent og tørking av krystallene.

En foretrukket utførelse av forbindelsen vedrører en fremgangsmåte som omfatter ytterligere å prosessere krystallformene I og II eller blandinger derav definert over til ernæringsdoseringsformer.

Videre beskrives en administreringsform omfattende astaxantin, krystallform I eller II, eller blandinger derav for anvendelse i en life science industri.

Videre beskrevet er en administreringsform omfattende astaxantin krystallform I eller II av astaxantin, eller blandinger derav for anvendelse i fiskeforindustrien hvor innholdet av astaxantin er under 20 % basert på vekt.

Videre beskrevet er en administreringsform omfattende en suspensjon av astaxantin krystallform I eller II, eller blandinger derav i en spisbar olje for fremstill ing av et fiskefor og for anvendelse innen life- science industrien.

En ytterligere utførelse ifølge oppfinnelsen er en fremgangsmåte for å fremstille en administrasjonsform omfattende astaxantin for anvendelse i fiskefor og innen life science industrien hvor astaxantin krystallform I eller blandinger av astaxantin krystallform I og II er oppløst i et organisk solvent eller olje eller blandinger derav etterfulgt av ytterligere prosessering til nevnte administrasjonsform. Videre beskrives en slik fremgangsmåte for krystallform II.

En ytterligere utførelse er en fremgangsmåte for å fremstille en administrasjonsform omfattende astaxantin for anvendelse innen life science industri hvor astaxantin krystallform I, eller blandinger av astaxantin krystallform I og II derav oppløses i en organisk solvent eller olje eller blandinger derav etterfulgt av ytterligere prosessering til nevnte administreringsform som omfatteren lipofil dispergerende middel. Videre beskrives en slik fremgangsmåte for krystallform II.

En ytterligere utførelse er en fremgangsmåte for å fremstille en administreringsform omfattende astaxantin for anvendelse innen life science industri hvor astaxantin krystallform I, eller blandinger av astaxantin krystallform I og II oppløses i en organisk solvent eller olje eller blandinger derav etterfulgt av ytterligere prosessering til nevnte administrasjonsform som omfatter et hydrofilt dispergerende middel. Videre beskrives en slik fremgangsmåte for krystallform II.

En ytterligere utførelse er en fremgangsmåte for å fremstille en oljesammensetning omfattende astaxantin hvor fremgangsmåten omfatter å oppløse krystallform I, eller blandinger av astaxantin krystallform I og II direkte i en spisbar olje og/eller fiskeolje ved temperaturer mellom 100 °C og 200 °C for direkte inkorporering i fiskeforpellet og andre applikasjoner. Videre beskrives en slik fremgangsmåte for krystallform II.

Kort beskrivelse av figurene:

Fig. 1 viser et røntgendiffraktogram av krystallform I av astaxantin.

Fig. 2 viser et Ramanspektrum av krystallform I av astaxantin.

Fig. 3 viser et røntgendiffraktogram av krystallform II av astaxantin..

Fig. 4 viser et Ramanspektrum av krystallform II av astaxantin.

Fig. 5 viser et Ramanspektrum av en blanding omfattende krystallform I og krystallform II av astaxantin sammenlignet med et beregnet spektrum som avledet fra de individuelle spektra av krystallform I og form II av astaxantin.

Detaljert beskrivelse av figurene og eksemplene:

Karotenoider er en klasse hydrokarboner (karotener) og deres oksygenerte derivater (xantofyller) består av åtte isoprenoidenheter. Karotenoidklassen av forbindelser

klassifiseres i to hovedgrupper; karotener og xantofyller. I motsetning til karotenene, som er rene polyen hydrokarboner, så som beta-karoten eller lykopen, så inneholder xantofyller ytterligere funksjonelle enheter så som hydroksy, epoksy og oksogrupper. Typiske representativer for gruppen xantofyller er kantaxantin, zeaxantin og astaxantin.

Astaxantin er 3,3'-dihydroksy-(3,(3-karoten-4,4'-dion. Syntetisk astaxantin har CAS nummer 7542-45-2 og er en 1:2:1 blanding av diastereoisomerene (3S, 3'S), (3R, 3'S) og 3R, 3'R). Astaxantin isolert fra den naturlige kilde har CAS nummer 472-61-7. Astaxantin er et pigment som finnes i mange krepsdyr, så som i hummer ( Homarus gammarus), i laks ( Salamo salar) i fjærene til flamingo (for eksempel Phoencopterus rubber). Astaxantin anvendes primært som en foringrediens for forskjellige dyr, spesielt laks, ørret, reke, røe havkarusser, dekorative fisk og fjærfe. I det siste har naturlig astaxantin også blitt benyttet som en ernæring, nutrisøytikal eller tilsetningsmiddel innen kosmetikk med antioksitive egenskaper.

Astaxantin kan oppnås med fermentering (Biotechnol. Letters 10(1988)609-614), eller fra mikroalger beskrevet WO-A89/1997 og EP329754. WO-A86/6082 beskriver isolering av astaxantin fra naturlige kilder ved ekstrahering av krepsdyrskall. US2004253664 beskriver produksjon av karotenoider, xantofyller og apo- karotenoider ved anvendelse av eukariote mikroorganismer. En alternativ kilde for ekstrahering av naturlig astaxantin er Aquasta™ som er et produkt fremstilt med fermentering av en eid stamme av gjæren Phaffia rodozyma. En ytterligere fremgangsmåte for å oppnå astaxantin er å benytte kjemisk syntese så som i US 5,654,488.

Screening for krystallformer av astaxantin ved anvendelse av små mengder (vanligvis ca 50ul -1000ul av en organisk solventløsning av astaxantin) utføres i rør eller i brønnplatekopper. Astaxantinet i rørene/koppene krystalliseres ved tilsetning av en antisolvent eller ved evaporering, og krystallstrukturen undersøkes ved måling av deres karakteristiske Ramanspektrum, røntgenpulverdiffraksjonsmønsterog andre fysikalske parametere. Kontrollert krystallisering ved anvendelse av små mengder astaxantin inneholdende i hovedsak forskjellige nivåer av forskjellige karotenoidale forbindelser, resulterer uventet, i to distinkte krystallformer av astaxantin som dannes individuelt eller sammen i en blanding. Blandingene av krystallformene undersøkes for innhold av de individuelle former ved å sammenligne det målte Ramanspektrum med de gjennomsnittlige individuelle spektra for de to former ved flere kjente vektforhold for "beste tilpasning". Nærvær av de to individuelle former i blandingen reflekteres i de karakteristiske Ramanspektrum, hvor ingen ytterligere karakteristiske topper observeres, annet enn toppene fra spektraene av de individuelle former I og form II, som bidrar til "beste tilpasning" spektrum. Faktorer relatert til solventfjerning og krystallgjenvinning ved anvendelse av polare, apolare, aprotiske og protiske oppløsningsmidler av industriell relevans med hensyn til toksisitet (for eksempel solvent rens), grad av løselighet og stabilitet av astaxantin undersøkes. De viser at dannelse av astaxantin krystallform I eller II er, overraskende, uavhengig av solventet som benyttes eller krystalliseringsmetoden, men styres i hovedsak av nærvær og konsentrasjon av karotenoidale forbindelser. Uventet, astaxantinet kan eksistere i to forskjellige krystallformer og som en blanding av de to formene, avhengig av tilstandene for fremstilling av krystallene. Dette indikerer klart at to industrielt nyttige krystallinske former og en blanding av de to former kan fremstilles under kontrollerte betingelser fra en løsning av astaxantin.

Den kjente teknikk for å fremstille astaxantin sammensetninger for fiskefor og ernæringsapplikasjoner og andre bransjer innen life science industri beskriver ikke muligheten for å fremstille spesifikke krystallformer og nærmere bestemt, blandinger av de to former med klart karakteriserte røntgenpulverdiffraksjonsmønstre og Ramanspektrum i tillegg til minst en ytterligere fysisk parameter så som smeltepunkt, løselighet i organiske oppløsningsmidler, DSC-scan. Krystallformene har forskjellig løselighet i organosolventer og oljer som muliggjør et bredere valg for håndtering og formulering av astaxantinsammensetninger. Videre, krystallformen kan påvirke in vivo oppøsningshastighet og muliggjøre høyere (supermettete) konsentrasjoner i oljeformige administreringsvehikler som kan tilveiebringe høyere opptak og biotilgjengelighet, etter oral administrering.

Røntgendiffraktogrammene av astaxantin krystallformene er registrert ved anvendelse av en Bruker D8 Advance model. D-verdiene er beregnet fra to teta verdier av bølgelengde av 1.5406 10"<10>m. Cu K alfa 2 bestråling elimineres ved anvendelse av Bruker, EVA Versjon 10.0. Ramanspektra registreres med et Bruker FT-Spektrometer Bruker RFS 100/S med en laser eksitasjonsbølgelengde på 1064 nm. DSC-målingene utføres med en Perkin Eimer Differential Calorimeter Model DSC 7.

Krystallform I håret krystallhabitat med irregulær form og en rød/rødbrun utseende og et lavere smeltepunkt, høyere løselighet og høyere oppløsningsrate i organo-solvent eller oljer sammenlignet med krystallform II. Krystallform I erkarakterisertmed dets røntgenpulverdiffraksjon og Ramanspektrum, som gitt i figurer 1 og 2, respektivt. Tabell 2 tilveiebringer det karakteristiske røntgenpulverdiffraksjon av krystallform I. Topposisjonene er gitt med vinkel 2-Teta° og korresponderende d-verdi. Standardavvik i disse posisjoner kan være ±5 % eller mindre. Intensiteten av deres topper er gitt med deres Cps- verdi og relativ intensitet relatert til høyeste maksimum. Idet den relative intensitet er <5 % designeres toppen som "vw" det vil si. "svært svakt". Videre, 5-15 % som "w" (svak); 15-30 % som "m", (medium); 30 -70 % "s", (sterk) og > 70 % "vs", (svært sterk).

Tabell 3 gir det karakteristiske Ramanspektrum av krystallform I. Toppintensitetene er gitt med bølgenummer i cm"<1>. Standardavviket i disse posisjoner kan være 5 % eller mindre. Intensiteten av toppene er gitt med deres Råman intensitetsverdi og relativ intensitet relatert til høyeste maksimum. Idet den relative intensitet er mindre enn <5 % angis toppen som "vw" det vil si. "svært svak"; og videre 5-15 % som "w" (svak); 15 -30 % som "m", (medium); 30 -70 % "s", (sterk) og > 70 % "vs", (svært sterk).

Krystallform I er stabil i tørrformen. Denne krystall kan oppvise egenskaper som er ønskelige over de fra form II, så som forbedret løselighet i organosolventer og oljer.

Krystallform II har et krystallblad/arklignende habitus og blå/fiolett utseende og et høyere smeltepunkt og lavere løselighet i olje og organiske oppløsningsmidler sammenlignet med krystallform I. Krystallform II erkarakterisertav deres røntgenpulver diffraksjon og Råman spektrum som gitt i figurene 3 og 4, respektivt. I tabell 4 tilveiebringes et typisk røntgenpulver diffraksjon av krystallform II. Topposisjonene er gitt med vinkel 2-Theta° og korresponderende d-verdi. Standardavvik i disse posisjoner kan være ±5 % eller mindre. Intensiteten av toppene er gitt med deres Cps- verdi og relativt intensitet relatert til høyeste maksimum. Idet den relative intensitet er <5 % angis toppen som "vw" (svært svak); og 5 -15 % som "w" (svak); 15 -30 % som "m", (medium); 30 -70 % "s" (sterk) og > 70 % "vs", det vil si. (svært sterk).

I tabell 5 tilveiebringes et typisk Ramanspektrum for krystallform II. Topposisjonene er gitt med bølgenummer i cm "<1>. Standardavviket i disse posisjoner kan være ±5 % eller mindre. Intensiteten av toppene er gitt med deres Råman intensitetsverdi og relative intensitet relatert til det høyeste maksimum. Idet den relative intensitet er <5 % angis toppen som "vw" (svært svak); 5-15 % as "w" (svak); 15 -30 % som "m", (medium); 30 -70 % "s", (sterk) og > 70 % "vs", (svært sterk).

T

Figur 5 avbilder et Råman spektrum av en blanding omfattende krystallform I og form II i et vektforhold av 0,55:0,45.

For å fremstille den ønskete krystallform eller blandinger av de to former kan astaxantin som omfatter minst 93 % basert på vekt av all-trans-astaxantin oppløses i et egnet oppløsningsmiddel og anvendes som utgangsmateriale. Egnete mengder av i det minste en karotenoidal forbindelse kan tilsettes. Alternativt kan de(n) karotenoidale forbindelse(r) dannes in situ ved å regulere betingelsene, for eksempel temperatur og oksidering av løsningen før og/eller under krystalliseringen. For eksempel, karotenoidale forbindelser kan dannes in situ under eller etter oppløsning av astaxantin i solventer med høye kokepunkt så som toluen, spisbar olje og alkanoler. Såmidler omfattende den ønskete krystall kan tilsettes til krystalliserings-medium for å akselerere krystalliseringen og for å øke utbytte av den ønskete krystallform.

Alternativt, den ønskete krystallform eller blanding av form I og form II kan fremstilles ved å kontrollere fremgangsmåten for fremstillingen, ekstrahering eller rensetrinnene for astaxantin hvor den finale krystallinske løsning omfatter en tilstrekkelig mengde av minst karotenoidal forbindelse(r) i hovedsak innen det området som er ønsket for å danne krystallform I, form II eller fysiske blandinger av form I og form II som beskrevet i denne søknad. Krystallform I eller blandinger av form I og form II kan også fremstilles fra en løsning med meget ren astaxantin (det vil si mer enn 95 %) etterfulgt av behandlingen av løsningen med for eksempel varme og/eller lys for å forårsake dannelse av en tilstrekkelig mengde karotenoidal forbindelse for å oppnå i hovedsak krystallform I, eller blandinger av form I og form II etter final krystallisering.

Det skal forstås at ovenfor nevnte krystalliseringsmetoder kan utføres fortrinnvis etter syntese for fremstilling av enten form I eller form II krystaller.

Alternativt, de kan også utføres i rensingen eller ekstraheringstrinnene for astaxantin krystallene (som del av kjemisk syntese eller isolering av astaxantin forbindelsen fra naturlige produkter) hvor minst et krystalliseringstrinn for å fremstille astaxantin krystall, eller en krystalliseringsprosedyre som benytter solventer benyttes.

Utgangsløsningen for å fremstille astaxantin krystall fra en blanding av krystallformene trenger ikke inneholde den eksakte mengde av karotenoidale forbindelser (innen det ønskete område i en bestemt krystallform) så lenge der er en tilstrekkelig konsentrasjon ved starten av krystalliseringen, ledsagende med krystaller av form I eller II eller blandinger derav som beskrevet. Oppløsning av astaxantin i kokende solventer kan resultere i tilstrekkelig dannelse av karotenoidale forbindelser som biprodukt. Videre, ved å selektere det mest egnete solvent, temperatur og betingelser for vasking, kan de ikke-assosierte karotenoidale forbindelser fjernes. Tilsetting av såmidler omfattende krystallform I eller krystallform II til en krystall-iseringsløsning kan ytterligere akselerere dannelse av den ønskete form med høyere utbytter.

Egnete karotenoidale forbindelser som kan tilsettes til all-trans-astaxantin, individuelt eller fortrinnsvis med blanding for å fremstille den ønskete astaxantin krystall form I eller form II, eller en blanding derav er syntetiske astaxantin derivater for eksempel eterifiserte eller esterifiserte, oksidering- eller hydrogeneringsprodukter, cis-isomerer av astaxantin. Termen inkluderer biprodukt oppnådd under syntese og krystallisering av astaxantin eller under ekstraheringsprosessen av astaxantin fra naturlige kilder. Dannelsen av de karotenoidale forbindelser kan være resultatet av å utføre syntese under sub-optimale betingelser eller kan være resultatet av å utføre syntesen, ekstraheringen eller krystalliseringsprosedyrene under betingelser som muliggjør kontroll av karotenoidal forbindelse konsentrasjonen ved det ønskete nivå.

En forbindelse, eller en blanding av foretrukne karotenoidale forbindelser kan velges blant medlemmer av gruppen av karotenoidale forbindelser omfattende 9-cis, 13-cis-astaxantin og andre cis-astaxantin derivativer (foreksempel 15-cis-astaxantin), astacen (det vil si Q>, Q> karoten-3,3', 4,4'-tetron med CAS nr 514-76-1), semi-astacen (3-hydroksy- B,B-karoten-3',4,4'-trion) og C-25 aldehyd (all-trans-3-hydroksy-4-okso- 12'-apo-beta-karoten-12'-al, med CAS Nr. 72523-68-3). De kan anvendes alene eller i kombinasjon.

Der er flere krystalliseringsmetoder basert på tilsvarende prinsipper som kan vurderes for å fremstille krystallform I, form II eller blandinger omfattende form I og form II, med utgangspunkt i løsninger med forskjellige karotenoidal forbindelsesprofil og konsentrasjon. Egnete krystalliseringsmetoder som kan vurderes av en fagkyndig inkluderer men er ikke begrenset til følgende metoder. Generelt, egnete oppløs-ningsmidlerfor å fremstille løsningene er oppløsningsmidler som oppløser minst 1 mg/ml fortrinnsvis opp til 10- 50 mg/ml av astaxantin ved temperaturen hvor krystallisering initieres. Idet anti-solventen anvendes er egnete anti- solventer solventer som oppløser mindre enn 1 mg/ml ved temperaturen for krystallisering og som er blandbare med oppløsningsmiddel hvori astaxantinet oppløses.

Med utgangspunkt i en apolar aprotisk organisk løsning av astaxantin under kontrollerte temperaturbetingelser induseres krystallisering ved fjerning av solvent fra løsningen, valgfritt ved samtidig utbytting med en blandbar polar antisolvent. En foretrukket apolar aprotisk solvent er diklormetan. Alternative klorinerte apolare aprotiske solventer er for eksempel kloroform, triklormetan. Egnete ikke-klorinerte alternativer er dimetoksymetan, dietoksyetan og dioksasyclopentan. Et foretrukket polar antisolvent er metanol eller andre alkanoler så som etanol, N-propanol, isopropanol, N-butanol og tert- butanol.

Krystaller omfattende form I eller form II kan også oppnås ved fjerning av solventen fra en astaxantinløsning i en polar aprotisk eller polar protisk solvent ved evaporering. Solventer som har en høy løselighet for astaxantin og et lavt kokepunkt er foretrukket. Eksempler er THF og pyridin.

En annen fremgangsmåte for å indusere krystallisering er kjøling av en (over) mettet løsning i et apolart aprotisk solvent. Foretrukne apolare aprotiske solventer er diklormetan, toluen eller alternative klorinerte apolare aprotiske solventer. Polare solventer så som tetrahydrofuran (THF), N-metylpyrrolidon (NMP), N-ethylpyrrolidone (NEP) og pyridin som har en høy løselighet for astaxantin kan også vurderes. Krystal-liseringshastigheten og utbyttet av den ønskete krystallform kan økes ved å tilsette såmidler av ren form til krystalliseringsløsningen.

Krystaller omfattende form I eller II kan også oppnås ved fortynning av en løsning av astaxantin inneholdende de ønskete konsentrasjoner av all-trans-astaxantin og karotenoidale forbindelser i en apolar aprotisk, polar aprotisk eller polar protisk solvent ved å tilsette en blandbar polar anti- solvent. Eksempler på apolare aprotiske solventer er diklormetan, toluen eller alternativt klorinerte solventer. Anti-solventer er i dette tilfellet alkanoler så som metanol. Eksempler på egnete polare solventer er THF, NMP og pyridin. Som anti-solvent kan alkanoler, eller fortrinnsvis vann anvendes.

De resulterende krystaller høstes for eksempel med filtrering, spontan sedimentering eller sentrifugeringsmetoder kjent innen fagfeltet, og vaskes valgfritt med en egnet (anti- solvent), fortrinnsvis med en kald alkanol (fortrinnsvis metanol) og tørkes, fortrinnsvis under vakuum. De resulterende krystaller kan males for å oppnå den ønskete partikkelstørrelse for ytterligere prosessering.

Ved anvendelse av fremgangsmåtene beskrevet over kan de klorinerte solventer erstattes av dimetoksymetan, dietoksyetan eller dioksasyclopentan.

Idet konsentrasjonen av karotenoidal forbindelse i krystalliseringsløsningen øker fra 0 % opp til ca. 7 mol% og de resterende karotenoider er all-trans-astaxantin, vil krystallform II i hovedsak dannes, og nærvær av den andre krystallform I kan være under detekterbare nivåer på mindre enn 5 %.

Ved ca. 7mol% karotenoidal forbindelse og de resterende karotenoider er all-trans-astaxantin, kan mindre mengder av krystallform I dannes i nærvær av hovedmengder av krystallform II. Idet mol% av karotenoidal forbindelse foreliggende i løsningen øker fra ca. 7 mol% til ca. 17 mol% og den resterende fraksjon av totale karotenoider er all-trans-astaxantin, oppnås blandinger som omfatter krystallform I og II, hvor forholdet av form I til II følger økningen i karotenoidale forbindelser. Ved ca 17 mol% karotenoidal forbindelse, og den resterende fraksjon av totale karotenoider er all-trans-astaxantin, kan mindre mengder av krystallform II dannes i nærvær av hovedmengder av krystallform I. Over ca. 17 mol% av karotenoidale forbindelser og hvor den resterende fraksjon av de totale karotenoider er all-trans-astaxantin, dominerer krystallform I og nærvær av krystallform II kan være under detekterbare nivåer på mindre enn 5 %. Graden av dannelse av krystallform I og/eller form II avhenger imidlertid av de totale krystalliseringsbetingelser.

Avhengig av karotenoidalt nivå i krystalliseringsløsningen og krystalliserings-betingelsene av krystallfrom I og II inneholde fra 0 % til 100 % av form I og 100 % til 0 % av form II, eller fra 0,1 % til 99,9 % av form I og 99,9 % til 0,1 % av form II, eller fra 5 % til 95 % av form I og 95 % til 5 % av form II, og fra 10 % til 90 % av form I og 90 % til 10 % av form II, eller fra 20 % til 80 % av form I og 80 % til 20 % av form II. 1 foretrukne eksempler idet karotenoidal forbindelsene er hovedsakelig cis-astaxantin, kan krystaller av from I dannes inneholdende minst ca. 17 mol% cis-astaxantin (fortrinnsvis, 9-cis eller 13-cis eller blandinger derav). Det er således mulig å fremstille astaxantin krystallform I omfattende opp til nær 100 % astaxantin som har fordelaktige løselighetskarakteristika i organosolventer og oljer og et lavere smeltepunkt.

Innholdet av karotenoidale forbindelser kan være høyere eller lavere i utgangsløs-ningen sammenlignet med de resulterende krystaller, avhengig av krystalliserings-prosedyren som anvendes. Idet økende temperaturer anvendes, vil konsentrasjonen av karotenoidal forbindelse i løsningen og krystallene vil øke mens all-trans-astaxantin innholdet av krystallene vil bli redusert. Idet mildere temperaturbetingelser og/eller forskjellige krystalliseringsmetoder anvendes kan nivået av karotenoidal forbindelse være lavere i krystallene. Parallelt, all-trans-astaxantin - innholdet i krystallene vil øke. Videre, vasketrinnet som benyttes i det finale trinn for å fremstille de ønskete astaxantin krystallform kan fjerne ikke- assosierte karotenoidale forbindelser fra astaxantin krystallene.

Krystallform I, fremstilt fra løsninger omfattende all-trans-astaxantin og over ca. 17 mol% av karotenoidale forbindelser, kan omfatte all-trans-astaxantin sammen med minst ca 13 mol%, og fortrinnsvis minst et medlem av gruppen karotenoidale forbindelser omfattende cis-astaxantin, semi astacen, astacen eller C-25 aldehyd. Mer foretrukket er 9-cis eller 13-cis-astaxantin eller 15-cis-astaxntin for seg selv, eller i en blanding. Idet alle krystallene er form I og astaxantinet omfatter all-trans-astaxantin og kun 9-cis elleM3-cis-astaxantin, i samsvar med renhetsdefinisjonen adoptert innen akvakultur (bestemmelse av stabilisert astaxantin i preblandinger og fiskefor, - versjon 1.1, Roche Vitamins Ltd og referanser deri, J. Schierle, N. Faccin, V. Riegert), kan astaxantin anses som 100 % rent.

Krystallform II fremstilt fra en løsning omfattende all-trans-astaxantin og en karotenoidal forbindelseskonsentrasjon fra 0 % opp til maksimum av ca. 7 mol% kan omfatte all-trans-astaxantin med mindre enn ca. 7 mol%, og fortrinnsvis, i det minste et medlem av gruppen av karotenoidale forbindelser omfattende 9-cis-astaxantin, 13-cis-astaxantin, 15-cis-astaxantin, semi astacen, astacen eller C-25 aldehyd. Mer foretrukket er 9-cis eller 13-cis-astaxantin for seg selv eller i en blanding. Astaxantinet møter spesifikasjonene beskrevet i US-FDA data base 21 CFR 73.35, omfattende ikke mer enn 4 % av "totale karotenoider andre enn astaxantin", og i form av krystallform II er dekket av denne oppfinnelse. For å unngå tvil, "totale karotenoider andre enn astaxantin" er definert i foreliggende oppfinnelse som "karotenoidal forbindelse".

Foretrukket, er et astaxantin som møter FDA-spesifiseringen, hvor "totale karotenoider andre enn astaxantin" består av karotenoidale forbindelser valgt blant gruppen omfattende i det minste en cis-astaxantin, astacen, semi-astacen og C-25 aldehyd. Mer foretrukket er et astaxantin som møter FDA-spesifikasjonen hvor nevnte "totale karotenoider andre enn astaxantin" består av karotenoidale forbindelser valgt blant gruppen omfattende 9-cis-astaxantin, 13-cis-astaxantin og 15-cis-astaxantin.

Krystallformer kan inneholde andre forbindelser så som solventrester, tungmetaller og degraderingsprodukter som foreligger i mindre, tillatte mengder.

Krystallform I, form II og blanding av de to former er egnet for inkorporering som sådan i faststoff, semifaststoff formuleringer egnet for administrering til en organisme. Eksempler på faststofformer er tabletter, granuler, pellet, kapsler, pulvere, etc. Eksempler på semifaststofformer er kremer, salver, geler, suspensjoner og lotioner. De inkluderer fortrinnsvis partikulat mikroniserte suspensjoner av krystallform I eller form II eller blandinger av form I og II i en oljevehikkel. Fortrinnsvis har krystallene en gjennomsnittlig størrelse i området mellom 1-5 1-5 um.

Foretrukne administrasjonsformer som kan fremstilles ved anvendelse av krystallform I er olje- dispergerbare sammensetninger omfattende astaxantin og fremgangsmåter for fremstilling derav, er beskrevet i WO03/102116. Krystallform I eller II eller blandinger derav som angitt med røntgen- og Råman- spektroskopi beskrevet heri kan anvendes for å fremstille vann-dispergerbare sammensetninger omfattende astaxantin så som beskrevet i US 2,861,891, US 5,364,563 og US 6,296,877.

Den vanlige metode for å fremstille faststoffsammensetninger og formuleringer omfattende astaxantin er å oppløse krystallform I, form II eller blandinger derav i en organisk vannblandbar eller vann-ublandbar oppløsningsmiddel eller blandinger derav i nærvær av egnete eksipienter, etterfulgt av fjerning av solventen ved enten fortynning i vann eller evaporeringsteknikker beskrevet i WO03/102116. Krystallform I eller II kan direkte benyttes som sådan og oppløses i oljeløsninger av astaxantin med å applisere energi.

Solventene som anvendes for å fremstille løsninger og for å produsere astaxantin krystallform I eller II eller blandinger derav til tørre astaxantinsammensetninger kan være vannblandbare eller vann-ublandbare. Eksempler på vannblandbare og ublandbare solventer inkluderer eksemplene av solventer anvendt for krystallisering av krystallformene som er angitt over. Ved applisering av varme/trykk, kan et anti- solvent som benyttes under krystallisering under normalt trykk og omgivelses-temperaturer anvendes som solvent for astaxantin (foreksempel isopropanol/vann).

Foretrukne eksempler på eksipienter er dispergerende midler, polymerer og syntetiske naturlige gummier og cellulose derivater som kan være enten hydrofile eller lipofiler.

Faststoffastaxantinsammensetningen omfatter mellom 2,5 vekt % til 25 vekt %,

fortrinnsvis 5 vekt % til 15 vekt %, mer foretrukket 7,5 vekt % til 12,5 vekt % av totalt astaxantin. Mengden av dispergerende middel som anvendes i sammensetningen er fortrinnsvis mellom 50 vekt % til 97,5 vekt %. Varierende mengder av eksipienter kan anvendes som bulkmidlerfor å fylle opp den nødvendige vekt.

Egnete lipofile dispergerende midler er de som er beskrevet i WO 03/102116 som lipofile polymerer egnet for å fremstille oljeløselige karotenoide sammensetninger og anvendt som ernæringsmidler eller som farmasøytiske tilsetningsmidler som lipofile belegningsmateriale for å modifisere medikamentfrigivelse av orale faststoff doseringsformer. Egnete dispergerende midler kan velges blant spesielle medlemmer av gruppen omfattende etylcelluloser, syntetiske og naturlige resiner, rosiner og gummier.

Egnete hydrofile dispergerende midler er de som er beskrevet i US 5364563 og US 6296877 som vannløselige dispergerende midler, og fremgangsmåter som er egnet for fremstilling av vanndispergerbare karotenoidsammensetninger. De hydrofile dispergerende midler inkluderer men er ikke begrenset til beskyttende koloider av lav- og høy-molekylvekt komponenter av for eksempel gelatin, fiskegelatin, stivelse, dekstrin, planteproteiner, pektin, gummi arabicum, casein, caseinat eller blandinger av disse, proteininneholdende beskyttende koloider, spesielt ikke-gelerende lavmolekylvekt proteinhydrolysater og høyere molekylvekt gelerende gelatiner er foretrukket. Disse og andre poly(vinylalkohol), polyvinylpyrrolidon, metyl cellulose, karboksymetyl cellulose, hydroksypropyl cellulose og alginater kan også anvendes. Midlet molekylvekt av lavmolekylvekt beskyttende kolloid komponent er fortrinnsvis fra 10,000 til 50,000, fortrinnsvis fra 15,000 ti 30,000, mens høymolekylvekt kompo-nenten har en midlet molekylvekt på fortrinnsvis mer enn 60,000. Andelen av lavmolekylvekt beskyttende kolloid komponent er fra 5 til 95 % basert på vekt, fortrinnsvis fra 20 til 80 % basert på vekt, fortrinnsvis fra 30 til 60 % basert på vekt. For å øke den mekaniske stabilitet av sluttproduktet er det nyttig å samblande kolloidet med en mykner, så som sukkere eller sukkeralkoholer. For eksempel kan sukrose, glukose, laktose, invertert sukker, sorbitol, mannitol eller glyserol som beskrevet i US 6,296,877 anvendes. Ytterligere hydrofile dispergerende midler kan velges blant medlemmer av gruppen omfattende PEG (polyetylengylkol) med MW 4000-6000, polyvinylpyrrolidon, polyvinylalkohol, krospovidon, polyvinylpyrrolidon-polyvinylacetat kopolymer, hydroksypropylmetylcellulose (HMPC), hydroksypropylcellulose (HPC), hydroksypropylmetylcellulose ftalat (HPMCP), polyakrylater og polymetakrylater.

Solventen eller solventblandingen fjernes for eksempel med spraytørking, fryse-tørking, frysespraytørking, spraygranulering eller superkritisk fluid ekspansjon.

Krystallformene er egnet for fremstilling av sammensetninger omfattende J eller H aggregater av astaxantin som beskrevet i US 6,827,941 som presipiteres ved tilsetning av organisk solventløsning fremstilt fra astaxantin krystallform I, form II eller blandinger derav til overskudd av vann.

Krystallform I kan anvendes fortrinnsvis for å fremstille de vann- dispergerbare sammensetninger i samsvar med US 6,093,348, hvor karotenoide dispergeres med egnet surfaktant/hydrokolloider og smeltet ved høye temperaturer og trykk for å danne en emulsjon.

Eksempler:

De påfølgende representative eksempler (1-7) illustrerer fremgangsmåter for å fremstille astaxantin krystallform I eller form II eller definerte blandinger derav med utgangspunkt i organiske væskeløsninger med forskjellig polaritet omfattende kjente mengder av all-trans-astaxantin og minst en spesifisert karotenoidal forbindelse. Eksempler (7-9) illustrerer fremgangsmåten hvor krystallform I og/eller krystallform II eller definerte blandinger derav kan inkorporeres som sådan i administreringsformer. Eksempler (10-13) illustrerer fremgangsmåten hvor krystallform I eller krystallform II eller definerte blandinger derav kan oppløses i solventer for å fremstille administrering - og ernæringssammensetninger.

For fremstilling av den ønskete krystallform ble astaxantin innkjøpt fra Sigma (naturlig astaxantin) og Dr. Ehrenstorfer (syntetisk astaxantin, analytisk kvalitet). Renhet av forbindelsen ble bestemt med HPLC-målinger ogkarakterisert vedrøntgendiffraksjon og Ramanspektroskopi. Ultraren astaxantin kan også oppnås fra mindre ren astaxantin ved hjelp av preparativ HPLC.

Eksempel 1

40 mg astaxantin (97,2 mol% all-trans-astaxantin og 1,6 mol% 9-cis-astaxantin og 1,2 mol% 13-cis-astaxantin) oppløses i 2 ml diklormetan (DCM) ved 30 °C og prosesseres til krystaller ved solventfjerning under vakuum. Ramanspektrum viser nærvær av krystallform II som i fig 4. Røntgendiffraksjonsmønster er vist i fig 3. HPLC-analyser av krystallene viser 99,2 mol% all-trans-astaxantin, 0,4 mol% 9-cis-astaxantin, 0,4 mol% 13-cis-astaxantin, korresponderende med et nivå av karotenoidal forbindelse på ca 0,8 mol% .

Eksempel 2

20 mg analytisk kvalitet astaxantin (97,2 mol% all-trans-astaxantin og 1.6 mol% 9-cis-astaxantin og 1,2 mol% 13-cis-astaxantin) oppløses i 1 ml pyridin og oppvarmes ved 70 °C i 30 min. Etter tilsetning av 8,0 ml kaldt vann, vaskes de dannete krystaller med vann, og Ramanspektrum viser nærvær av krystallform I som det fremgår av spektrum i fig 2. Røntgendiffraksjonsmønster er vist i fig 1. HPLC-bestemmelse bekrefter den totale mengde all-trans-astaxantin og cis-astaxantin isomerer til å være 100 %. Astaxantinet omfatter 78 mol% all-trans-astaxantin, 3 mol% 9-cis-astaxantin og 19 mol% 13-cis-astaxantin. Nivåer av karotenoidale produkter er ca 22 mol%. Tilsvarende, idet pyrridinløsningen oppvarmes ved 80 °C i 40 min, dannes 28 mol% 13-cis-astaxantin og det resulterende krystall tilordnes som astaxantin krystallform I med det karakteristiske røntgen diffraksjonsmønster og Råman spektrum.

Eksempel 3

20 mg astaxantin omfattende 97,2 mol% all-trans-astaxantin og 2,8 mol% cis-astaxantin (som ytterligere omfatter 1,6 mol% 9-cis-astaxantin og 1,2 mol% 13-cis-astaxantin) oppløses i 1,0 ml pyridin ved romtemperatur (løsning 1). 20 mg av astaxantin fra eksempel 2 omfattende 72 mol% all-trans-astaxantin og 28 mol% 13-cis-astaxantin oppløses i 1,0 ml pyridin ved romtemperatur (løsning 2). De to løsninger blandes ved flere forhold, og 0,6 ml kaldt vann tilsettes, og de dannete krystaller samles med filtrering, vaskes med 2 ml vann og et Råman spektrum registreres etter tørking. Resultatene er summert i tabell 6.

Eksempel 3 viser klart at ved å anvende en polar protisk solvent, for eksempel pyridin, avhenger dannelse av enten krystallform I eller II eller blandinger derav i hovedsak på nivåer av karotenoidale forbindelser i løsningen. Fig 5 viser et Ramanspektrum av en blanding omfattende krystallform I og form II i et vektforhold av 0,55:0.45.

Alternativt kan konsentrasjonen av karotenoidale forbindelser kontrolleres med for eksempel å tilsette kjente mengder av an karotenoidal forbindelse tilstrekkelig til å assosiere med krystallgitteret av all-trans-astaxantin og/eller dannet in situ ved opp-varming av pyrridinløsningen slik at man forårsaket dannelse av nevnte karotenoidale forbindelse som vist i eksempel 2, før tilsetning av antisolventen vann. Alternativt, den ønskete krystallform eller blanding kan fremstilles ved evaporering av løsningen, avkjøling av løsningen med eller uten anvendelse av såmidler av enten krystallform I eller II.

Eksempel 4

35,66 mg astaxantin omfattende 97,2 mol% all-trans-astaxantin, 1,6 mol% 9-cis-astaxantin og 1,2 mol% 13-cis-astaxantin og 3,61 mg av en karotenoidal forbindelse omfattende astacen oppløses i 24 ml DCM og DCen fjernes ved destillering og samtidig erstatning med metanol. De dannete krystaller høstes og vaskes med kald metanol og tørkes under vakuum. Råman spektrum viste nærvær av krystaller omfattende krystallform I og likeledes krystallform II i et forhold av 6:4. (Råman spektrum av begge rene krystallformer er midlet i flere vektforhold og i samsvar med målte spektrum. HPLC- analyser av krystallene viser 85,4 % vekt/vekt all-trans-astaxantin, 0,4 % w/w 9-cis-astaxantin, 1,0 % w/w 13-cis-astaxantin, 7,6 % w/w astacen, 1,9 % w/w semi-astacen og 3,6 % w/w C-25 aldehyd korresponderende med en karotenoidal forbindelsesnivå på ca 17 mol%.

Eksempel 5

40,3 mg astaxantin omfattende 80 % w/w all-trans-astaxantin, 2,7 % w/w 9-cis-astaxantin, 2,7 % w/w 13-cis-astaxantin, 0,8 % w/w astacen, 5,5 % w/w semi astacen og 8,7 % w/w C-25 aldehyd oppløses i 24 ml DCM og oppvarmes til koking.

.40 ml MeOH tilsettes dråpevis idet DCM fjernes med destillering. De resulterende krystaller filtreres og vaskes deretter med MeOH ved 0 °C og krystallene tørkes in

vakuum natten over ved RAT. Råman spektrum viser nærvær av form I krystaller. HPLC analyse av krystallene viste 87 % vekt/vekt all-trans-astaxantin, 1,3 % vekt/vekt 9-cis-astaxantin, 1,5 % vekt/vekt 13-cis-astaxantin, 0,9 % vekt/vekt astacen, 6,2 % vekt/vekt semi-astacen og 2,8 % C-25 aldehyd, korresponderende til et nivå av karotenoidal forbindelse på ca. 16 mol%.

Eksempel 6

196,7 mg astaxantin omfattende 80 % vekt/vekt all-trans-astaxantin, 2,7 % vekt/vekt 9-cis-astaxantin, 2,7 % vekt/vekt 13-cis-astaxantin, 0,8 % vekt/vekt astacen, 5,5 % vekt/vekt semi astacen og 8,7 % vekt/vekt C-25 aldehyd og 203,3 mg astaxantin 97,2 % vekt/vekt all-trans-astaxantin, 1,6 % vekt/vekt 9-cis-astaxantin og 1,2 % vekt/vekt 13-cis-astaxantin oppløses i 24 ml DCM. DCMen fjernes med destillasjon og samtidig erstattes av 40 ml MeOH som i eksempel 1. Råman spektrum vist nærvær av krystaller omfattende krystallform I og likeledes form II i et forhold av 7:3. HPLC- analyser av krystallene vist 91 % vekt/vekt all-trans-astaxantin og karotenoidal forbindelse omfattende 0,9 % vekt/vekt 9-cis-astaxantin, 0,5 % vekt/vekt 13-cis-astaxantin, 0,4 % vekt/vekt astacen, 3,5 % vekt/vekt semi-astacen og 3,5 % C-25 aldehyd korresponderende til et nivå av karotenoidal forbindelse på ca 12 mol%.

Eksempel 7

Analog til foregående eksempler, men i stedet for pyridin, kan alternative utgangs solventer så som kloroform, trikloretan, ditoksymetan, dietoksyetan og dioksasyclopentan THF, NMP, NEP og toluen anvendes. Krystallene av krystallform I eller krystallform II kan oppnås, avhengig av konsentrasjonen av karotenoidal forbindelse i krystalliseringsløsningen (ved starten av krystalliseringen) omfattende all-trans-astaxantin, fra den valgfritt oppvarmete løsning med enten i) fjerning av solvent ved evaporering, valgfritt med samtidig erstatning med en blandbar antisolvent, ii) tilsetning av en blandbar antisolvent til løsningen, eller iii) avkjøling av en "over-mettet") løsning. Idet konsentrasjonen av den karotenoidale forbindelse i krystal-liseringsløsningen øker fra 0 % opptil ca 7 % og den resterende fraksjon av totale karotenoider er all-trans-astaxantin, dannes i hovedsak krystallform II, og nærvær av den andre krystallform I kan være under detekterbare nivåer på mindre enn 5 %. Ved ca 7 mol% karotenoidal forbindelse, og den resterende fraksjon av totale karotenoider er all-trans-astaxantin, kan mindre menger av krystallform I dannes i nærvær av hovedmengden av krystallform II. Idet mol% av karotenoidal forbindelse er foreliggende øker fra 7 mol% til ca. 17 mol%, og den resterende fraksjon av totale karotenoider er all-trans-astaxantin, oppnås blandinger omfattende krystallform I og II hvor forholdet av formel I til II øker. Ved ca. 17 mol% karotenoidal forbindelse og den resterende fraksjon av totale karotenoider er all-trans-astaxantin, kan mindre mengder av krystallform II dannes i nærvær av en hovedmengde av krystallform I. Over ca 17 mol% av karotenoidale forbindelser og hvor den resterende fraksjon av totale karotenoider er all-trans-astaxantin, dominerer krystallform I og nærvær av den andre krystallform II kan være under detekterbare nivåer på mindre enn 5 %. Graden av dannelse av krystallform I og/eller form II avhenger, imidlertid på de totale krystalliseringsbetingelser.

Eksempel 8

10 g astaxantin krystallform I eller form II blandes med 90 g soyabønneolje. Krystallene males og den resulterende mikroniserte suspensjon er egnet for preparering av pulverformuleringer eller kan direkte oppløses i olje ved anvendelse av flash-varme-prosedyrer etterfulgt av avkjøling med et overskudd av en oljefase eller vannfase omfattende et emulsifiserende middel.

Eksempel 9

10 g astaxantin krystallform I eller form II blandes med 20 g stivelse. Pulveret prosesseres ytterligere til en flytbar granulatløsning egnet for fylling i kapsel og

tablettering.

Eksempel 10

I en oppvarmbar flaske suspenderes 4 g astaxantin krystallform I eller form II og 1,54 g peanøttolje i en løsning av 1,23 g etoksyquin i 28,8 g isopropanol/vann (88/12, vekt/vekt) ved 30 °C. Denne suspensjon blandes ved en blandetemperatur på 170 °C ved 58,7 g isopropanol/vann (88/12, vekt/vekt) med en oppholdstid på 0,2 sekunder. Den resulterende molekylært dispergerte astaxantinløsning føres deretter umiddelbart inn i et ytterligere blandekammer. 11,34 g av en vandig gelatinløsning, justert til pH 9, som i tillegg til 8,4 g gelatin A (100 Bloom, M.W. =94,000), inneholder 4,2 g Gelita Sol P (M.W. =21,000) og 9,2 g sukrose, tilsettes for å presipitere astaxantinet, ved 45 °C, i kolloidal dispergertform.

Eksempel 11

En pulversammensetning prepareres ved å oppløse 1 g astaxantin krystallform I, med 8 g etylcellulose N4 (The Dow Chemical Company) og 1 g alfa-tokoferol i 90 g diklormetan (Fluka), etter fjerning av solventen for å produsere et granulat, ved anvendelse av spraygranulering.

Eksempel 12

En pulversammensetning prepareres ved å oppløse 0,8 g astaxantin krystallform II med 8,4 g etylcellulose N4 (The Dow Chemical Company ) og 0,80 g alfa-tokoferol i 90 g diklormetan (Fluka), etterfulgt av fjerning av solventen for å fjerne et granulat, ved anvendelse av spraygranulering.

Eksempel 13

620 mg astaxantin (krystallform II) blandes med 200 ml THF ved romtemperatur, og det filtreres. 50 ml av THF- løsningen tilsettes dråpevis til 250 ml vann i løpet av 30 min. Det dannes i hovedsak kolloidal presipitater av astaxantin aggregater som kan høstes med filtrering.

Claims

1. En blanding omfattende i hovedsak krystallformer av astaxantin,karakterisert vedat den omfatter: a) 95% til 5% basert på vekt av krystallform Ikarakterisertmed minst én av i) Røntgendiffraksjonsmønster omfattende følgende intergitterplanintervall d i1CT<10>m: 8,0 ±0,1, 6,5 ± 0,05, 6,3 ± 0,05, 6,1 ± 0,05, 5,96 ± 0,05, 5,58 ± 0,05, 5,43 ± 0,05, 4,87 ± 0,05, 4,32 ± 0,05, 4,24 ± 0,05, 4,21 ± 0,05, 4,07 ± 0,05, 4,03 ± 0,05, 3,58 ± 0,05, 3,50 ± 0,05, ii) Ramanspektrum inneholdende topper ved; 372 ± 2, 346 ± 2, 333 ± 2, 312 ± 2, 289 ± 2, 234 ±2, 193 ± 2, 178 ± 2, 133 ± 2, 82 ±2, cm"<1>; og, valgfritt minst én av; iii) et DSC-scan som viser en faseovergang ved at 212-222 °C; og iv) en løselighetsprofil i diklormetan på 35-45 g/l ved 20 °C- 25 °C; og b) 5% til 95% basert på vekt av krystallform IIkarakterisert vedminst én av ii) Røntgendiffraksjonsmønster omfattende følgende intergitterplanintervall d i10"<10>m:7,2±0,1, 6,6 ±0,05, 6,5 ±0,05, 5,48 ± 0,05, 5,34 ± 0,05, 5,27 ± 0,05, 4,49 ± 0,05, 4,38 ± 0,05, 4,12 ± 0,05, 3,89 ± 0,05, 3,61 ± 0,05, 3,56 ± 0,05, 3,34 ± 0,05, 3,32 ± 0,05, 3,22 ± 0,05; og ii) Ramanspektrum inneholdende toppene ved 376 ± 2, 337 ± 2, 314 ± 2, 304 2, 289 ± 2, 206 ± 2, 180 ± 2, 137 ± 2, 107 ± 2, 93 ± 2, cm"<1>; og, valgfritt i det minste én av iii) et DSC-scan som viser en faseovergang ved 225-240 °C; og iv) en løselighetsprofil i diklormetan på 10 - 30 g/l ved 20 °C-25 °C.

2. Blanding i samsvar med krav 1,karakterisert vedat den i hovedsak består av

10 % til 90 % basert på vekt av den krystallinske form av astaxantin benevnt som krystallform I og

90 % til 10 % basert på vekt av den krystallinske form av astaxantin som er benevnt krystallform II.

3. Blanding i samsvar med krav 1,karakterisert vedat den i hovedsak består av

20 % til 80 % basert på vekt av den krystallinske form av astaxantin som benevnt krystallform I og

80 % til 20 % basert på vekt av den krystallinske form av astaxantin som benevnt krystallform II.

4. Krystallinsk form av astaxantin benevnt krystallform I,karakterisert vedminst én av i) Røntgendiffraksjonsmønster omfattende følgende intergitterplanintervall d i10"<10>m: 8,0 ±0,1, 6,5 ± 0,05, 6,3 ± 0,05, 6,1 ± 0,05, 5,96 ± 0,05, 5,58 ± 0,05, 5,43 0,05, 4,87 ± 0,05, 4,32 ± 0,05, 4,24 ± 0,05, 4,21 ± 0,05, 4,07 ± 0,05, 4,03 ± 0,05, 3,58 ±0,05, 3,50 ±0,05, ii) Ramanspektrum inneholdende topper ved; 372 ± 2, 346 ± 2, 333 ± 2, 312 ± 2, 289 ±2, 234 ±2, 193 ± 2, 178 ± 2, 133 ± 2, 82 ±2, cm"<1>; og valgfritt minst én av iii) et DSC-scan som viser en faseovergang ved 212-222°C; og iv) en løselighetsprofil i diklormetan på 35-45 g/l ved 20°C-25 °C, omfattende all-trans-astaxantin og minst ca. 13 mol % av minst en karotenoidal forbindelse.

5. Krystallinsk from av astaxantin benevnt krystallform I i samsvar med krav 4karakterisert vedat at minst en karotenoidal forbindelse er valgt blant gruppen omfattende 9-cis-astaxantin, 13-cis-astaxantin, 15-cis-astaxantin, astacen, semi-astacen og C-25 aldehyd.

6. En sammensetning omfattende en krystallinsk form av astaxantin i samsvar med ethvert av kravene 4-5.

7. Administrasjonsform av astaxantin,karakterisert vedat den omfatter krystallform I i samsvar med krav 4, eller blandinger av krystallformer av astaxantin i samsvar med krav 1, for anvendelse innen life science industri.

8. Administrasjonsform av astaxantin omfattende krystallform I av astaxantin i samsvar med krav 4, eller blandinger av krystallformer av astaxantin i samsvar med krav 1, for anvendelse i fiskefor hvor innholdet av astaxantin er under 20 vekt %.

9. Administrasjonsform av astaxantin omfattende en suspensjon av krystallform I av astaxantin i samsvar med krav 4, eller blandinger av krystallformer av astaxantin i samsvar med krav 1, for anvendelse i fiskefor hvor nevnte administrasjonsform omfatter en spisbar olje.

10. Fremgangsmåte for fremstilling av en blanding av krystallinske former av astaxantin angitt som krystallform I og krystallform II i samsvar med krav 1, omfattende minst 5 % vekt/vekt i form I eller form II,karakterisert vedat fremgangsmåten omfatter trinnene: i) anvende en løsning av en blanding av astaxantin som omfatter all-trans-astaxantin og 7 mol% til 17 mol% av minst en karotenoidal forbindelse, valgt blant gruppen omfattende 9-cis-astaxantin, 13-cis-astaxantin, 15-cis-astaxantin, astacen, semi-astacen og C-25 aldehyd i en solvent hvor løseligheten av astaxantin er minst 1 mg/ml ved en temperatur opp til kokepunktet av nevnte solvent og ytterligere trinn valgt blant gruppen omfattende iia) tilsetning av et antisolvent, iib) fjerning av solventen ved evaporering, valgfritt med samtidig utbytting av solventen med en antisolvent, iic) avkjøling av den organiske solventløsning valgfritt med et nukleerende middel eller såmiddel omfattende krystallform I eller II eller blandinger derav, og iii) høste, vaske med en antisolvent og tørking av krystallene.

11. Fremgangsmåte for fremstilling av en krystallinsk form av astaxantin benevnt krystallform I, i samsvar med krav 4,karakterisert vedat fremgangsmåten omfatter trinnene: i) anvende en løsning av en blanding av astaxantin som omfatter all-trans-astaxantin og minst 13 mol% av minst en karotenoidal forbindelse valgt blant gruppen omfattende 9-cis-astaxantin, 13-cis-astaxantin, 15-cis- astaxantin,astacen, semi-astacen og C-25 aldehyd oppløst i en solvent hvor løseligheten av astaxantin er minst 1 mg/ml ved en temperatur opp til kokepunkt av nevnte solvent, og ytterligere trinn valgt blant gruppen omfattende iia) tilsetting av et antisolvent, iib) fjerning av solventen ved evaporering og valgfritt samtidig utbytting av solventen med en antisolvent, iic) avkjøling av den organiske solventløsning valgfritt med et nukleerende middel eller såmiddel omfattende krystallform I og iii) høste, vaske med en antisolvent og tørking av krystallene.

12. Fremgangsmåte for å fremstille krystallinsk form av astaxantin benevnt krystallform I i samsvar med krav 4,karakterisert vedat fremgangsmåten omfatter trinnene: i) anvende en løsning av en blanding av astaxantin som omfatter all-trans-astaxantin og minst 13 mol% av minst en karotenoidal forbindelse, valgt blant gruppen omfattende minst en 9-cis-astaxantin, 13-cis-astaxantin, 15-cis-astaxantin, astacen, semi-astacen og C-25 aldehyd i en solvent valgt blant gruppen omfattende diklormetan, trikloretan, kloroform, dimetoksymetan, dietoksyetan, dioksasyklopentan, THF, NMP, N-etylpyrrolidon, toluen, pyridin og karbon disulfid, ved en temperatur opp til kokepunktet av nevnte solvent og ytterligere trinn valgt blant gruppen omfattende: iia) tilsetning av en antisolvent, valgt blant gruppen omfattende metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, tert-butanol og vann, iib) fjerning av solventen ved evaporering valgfritt med samtidig utbytting av solventen med en antisolvent, iic) avkjøling av den organiske solventløsning med valgfri tilsetning av et nukleerende middel eller såmiddel omfattende krystallform I og iii) høste, vaske med en antisolvent og tørking av krystallene.

13. Fremgangsmåte for å fremstille en administrasjonsform av astaxantin for anvendelse i fiskefor og innen life science industri hvor astaxantin krystallform I i samsvar med krav 4 eller blandinger av krystallformer av astaxantin i samsvar med krav 1 oppløses i et organisk solvent eller olje eller blandinger derav etterfulgt av ytterligere prosessering til nevnte administrasjonsform.

14. Fremgangsmåte for å fremstille en administrasjonsform av astaxantin for anvendelse innen life science industri hvor astaxantin krystallform I i samsvar med krav 4, eller blandinger av krystallformer av astaxantin i samsvar med krav 1 oppløses i en organisk solvent eller olje eller blandinger derav etterfulgt av ytterligere prosessering til nevnte administrasjonsform hvor nevnte administrasjonsform omfatter et lipofilt dispergerende middel.

15. Fremgangsmåte for å fremstille en administrasjonsform av astaxantin for anvendelse innen life science industri hvor astaxantin krystallform I i samsvar med krav 4eller blandinger av krystallformer av astaxantin i samsvar med krav 1 derav i samsvar med krav 1 oppløses i en organisk solvent eller olje eller blandinger derav etterfulgt av ytterligere prosessering til nevnte administrasjonsform hvor nevnte administrasjonsform omfatter et hydrofilt dispergerende middel.

16. Fremgangsmåte for å fremstille en oljesammensetning omfattende astaxantin hvor fremgangsmåten omfatter å oppløse krystallform I i samsvar med krav 5eller blandinger av krystallformer av astaxantin i samsvar med krav 1 direkte i en spisbar olje og/eller fiskeolje ved temperaturer mellom 100 °C og 230 °C for direkte inkorporering i fiskeforpelleter og andre applikasjoner.

17. Fremgangsmåte for kontrollert krystallisering for fremstilling av en blanding av krystallformer av astaxantin i samsvar med krav 1 med et ønsket forhold av krystallform I og krystallform II,karakterisert vedat krystalliseringsløsningen omfatter astaxantin og en forutbestemt mengde av minst én karotenoidal forbindelse.

18. Fremgangsmåte for kontrollert krystallisering i samsvar med krav 17,karakterisert vedat nevnte minst ene forbindelse er valg blant gruppen som består av 9-cis-astaxantin, 13-cis-astaxantin, 15-cis-astaxantin, astacen, semi-astacen og C-25-aldehydet.