NO333793B1 - Templatfikserte beta-harnalspeptidhermere med CXCR4-antagonistisk aktivitet, farmasoytisk sammensetning omfattende nevnte peptidhermere, samt fremgangsmate for fremstilling derav. - Google Patents

Templatfikserte beta-harnalspeptidhermere med CXCR4-antagonistisk aktivitet, farmasoytisk sammensetning omfattende nevnte peptidhermere, samt fremgangsmate for fremstilling derav. Download PDF

Info

Publication number
NO333793B1
NO333793B1 NO20055585A NO20055585A NO333793B1 NO 333793 B1 NO333793 B1 NO 333793B1 NO 20055585 A NO20055585 A NO 20055585A NO 20055585 A NO20055585 A NO 20055585A NO 333793 B1 NO333793 B1 NO 333793B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
lower alkyl
angry
pro
amino acid
cys
Prior art date
Application number
NO20055585A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20055585L (no
Inventor
Frank Gombert
Juerg Zumbrunn
Steven J Demarco
Reshimi Mukherjee
Kerstin Moehle
John Anthony Robinson
Heiko Henze
Barbara Romagnoli
Jan Vrijblod
Daniel Obrecht
Christian Ludin
Original Assignee
Univ Zuerich
Polyphor Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univ Zuerich, Polyphor Ag filed Critical Univ Zuerich
Publication of NO20055585L publication Critical patent/NO20055585L/no
Publication of NO333793B1 publication Critical patent/NO333793B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/10—Peptides having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
    • C07K1/047—Simultaneous synthesis of different peptide species; Peptide libraries
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Abstract

2005-11-25 SAMMENDRAG Templatfiksert (-hårnålpeptidohermere med generell formel 5 hvori Z er en templatfiksert kjede på 12, 14 eller 18 (- aminosyreresiduer som, avhengig av deres posisjoner i . kjeden (telt ved å starte fra den N-terminale aminosyre), er Gly, NMeGly, Pro eller Pip, eller av visse typer som, i de gjenværende symboler i 10 overnevnte formel, er definert i beskrivelsen og kravene, og saltene derav, har CXCR4 antagoniserende egenskaper og kan anvendes til å forhindre HIV-infeksjoner i friske individer eller til å forsinke eller stoppe virusprogresjon i infiserte pasienter; eller hvor 15 kreft blir mediert eller som resulterer fra CXCR4- reseptoraktivitet; eller hvor immunologiske sykdommer blir mediert eller resulterer fra CXCR4-reseptoraktivitet; eller for å behandle immunoundertrykkelse, eller under afereseoppsamling 20 av stamceller fra perifert blod. Disse (-hårnålpeptidohermerne kan fremstilles ved en fremgangsmåte som er basert på en blandet fast fase og oppløsningsfase syntetisk strategi.

Description

Den foreliggende oppfinnelse tilveiebringer templatfikserte p-hårnålspeptidhermere som inkorporerer templatfikserte kjeder med 14 a-aminosyreresiduer som, avhengig av deres posisjon i kjedene, er Gly, NMeGly, Pro eller Pip eller av visse typer, som definert nedenfor. Disse templatfikserte P-hårnålhermerne har CXCR4 antagoniserende aktivitet. I tillegg tilveiebringer foreliggende oppfinnelse en effektiv synteseprosess med hvilke disse forbindelsene kan, hvis ønsket, bli fremstilt i parallellbibliotekformat. Disse p-hårnålpeptidhermerne viser forbedret effektivitet, biotilgjengelighet, halveringstid og det viktigste, et signifikant forsterket forhold mellom CXCR4 antagonistisk aktivitet på den ene side og hemolyse på røde blodceller og cytotoksisitet på den andre.
Til dags dato har de tilgjengelige terapier for behandling av HIV-infeksjoner ført til en bemerkelsesverdig forbedring i symptomer og bedring av sykdommen hos infiserte folk. Den meget aktive antiretrovirale terapi (HAART-terapi) som involverer en kombinasjon av revers transkriptase/proteinaseinhibitor har forbedret dramatisk den kliniske behandling av individer med AIDS eller HIV-infeksjon er det fremdeles igjen flere alvorlige problemer inkludert multilegemiddelresistens, signifikante uheldige virkninger og høye omkostninger. Særlig ønsket er anti-HIV-midler som blokkerer HIV-infeksjonen på et tidlig stadium i infeksjonen, så som ved virusinntreden.
Det har nylig blitt anerkjent at for effektiv inntreden i målceller krever de humane immunosviktviraene kjemokinreseptorer CCR5 og CXCR4 så vel som den primære reseptor CD4 (N. Levy, Engl. J. Med., 335, 29, 1528-1530). Følgelig bør et middel som kunne blokkere CXCR4-kjemokinreseptoren forhindre infeksjoner i friske individer og forsinke eller stoppe virusutvikling hos infiserte pasienter { Science, 1997, 275, 1261-1264).
Forbindelser med strukturer som viser noe likhet med strukturene til P-hårnålpeptid-hermerne i følge oppfinnelsen er kjent fra Tamamura et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 11, 2001, 359-362, som rapporter om en konformasjonsstudie vedrørende en svært spesifikke CXCR4 inhibitor, T140, og fra Tamamura et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 11, 2001, 1897-1902, som rapporterer om utviklingen av spesifikke CXCR4 inhibitorer med høy selektivitetsindeks, Nobutaka et al, Curreent Opinion in Investigational Drugs, 2001, 2(9), 1198-1202, som rapporterer om peptidleder
(«peptide lead»)- CXCR4 antagonister med høy anti-HIV-aktivitet, Speath et al, i Helvetica Chimica Acta, 1998, vol 81, 1726 som rapporterer om en fremgangsmåe for å stabilisere en beta-hårnålskonformasjon i en syklisk proteinløkkehermer og WO01/16161, som beskriver en fremgangsmåte for fremstillingen av forbindelser som kan etterlikne flate strukturer i proteiner og som derfor kan anvendes for å probe stor-overflateprotein-protein-interaksjoner.
Blant forskjellige typer av CXCR4-inhibitorer (M. Schwarz, T.N.C. Wells, A.E.I. Proudfoot, Receptors and Channels, 2011, 7, 417-428), er én fremmadskridende klasse basert på naturlig forekommende kationiske peptidanaloger avledet fra Polyfemusin II som har en antiparallell P-arkstruktur, og en P-hårnål som blir opprettholdt av to disulfidbroer (H. Nakashima, M. Masuda, T. Murakami, Y. Koyanagi, A. Matsumoto, N. Fujii, N. Yamamoto, Antimicrobial Agents and Chmoth. 1992, 36, 1249-1255; H. Tamamura, M. Kuroda, M. Masuda, A. Otaka, S. Funakoshi, H. Nakashima, N. Yamamoto, M. Waki, A. Matsumotu, J.M. Lancelin, D. Kohda, S. Tate, F. Inagakim N. Fujii, Biochim. Biophys. Acta 1993, 209, 1163; WO 95/10534 Al).
Syntese av strukturelle analoger og strukturelle undersøkelser ved kjernemagnetisk resonans (NMR) spektroskopi har vist at de kationiske peptider tilpasser godt definerte p-hårnålkonformasjoner, på grunn av den restrikterende virkning av én eller to disulfidbroer (H. Tamamura, M. Sugioka, Y. Odagaki, A. Omagari, Y. Kahn, S. Oishi, H. Nakashima, N. Yamamoto, S.C. Peiper, N. Hamanaka, A. Otaka, N. Fujii, Bioorg. Med. Chem. Lett. 2001, 359-362). Disse resultatene viser at P-hårnålstrukturen spiller en viktig rolle i CXCR4 antagonistisk aktivitet.
Ytterligere strukturelle undersøkelser er også angitt at den antagonistiske aktivitet også kan påvirkes av modulerende amfifile struktur og farmakoforen (H. Tamamura, A. Omagari, K. Hiramatsu, K. Gotoh, T. Kanamoto, Y. Xu, E. Kodama, M. Matsuoka, T. Hattori, N. Yamamoto, H. Nakashima, A. Otaka, N. Fujii, Bioorg. Med. Chem. Lett. 2001, 11, 1897-1902; H. Tamamura, A. Omagari, K. Hiramatsu, S. Oishi, H. Habashita, T. Kanamoto, K. Gotoh, N. Yamamoto, H. Nakashima, A. Otaka, N. Fujii, Bioorg. Med. Chem. 2002, 10, 1417-1426; H. Tamamura, K. Hiramatsu, K. Miyamoto, A. Omagari, S. Oishi, H. Nakashima, N. Yamamoto, Y. Kuroda, T. Nakagawa, A. Otaki, N. Fujii, Bioorg. Med. Chem. Letters 2002, 12, 923-928).
Et nøkkeltrekk i konstruksjonen av CXCR4 antagonistiske peptider er selektivitet. Polyfemusin II avledede analoger utviser fremdeles en cytotoksisitet på tross av forbedringer (K. Matsuzaki, M. Fukui, N. Fujii, K. Miyajima, Biochim. Biophys. Acta 1991, 259, 1070; A. Otaka, H. Tamamura, Y. Terakawa, M. Masuda, T. Koide, T. Murakami, H. Nakashima, K. Matsuzaki, K. Miyajima, T. Ibuka, M. Waki, A. Matsumoto, N. Yamamoto, N. Fujii Biol. Pharm. Bull. 1994, 17, 1669 og siterte referanser ovenfor).
Denne cytotoksiske aktivitet forhindrer essensielt dets anvendelse in vivo, og representerer en alvorlig ulempe i kliniske applikasjoner. Før intravenøs anvendelse kan vurderes må den generelle toksisitet, proteinbindingsaktiviteten i blodserum, så vel som proteasestabilitet bli alvorlige trekk som må undersøkes adekvat.
Nylig er det blitt vist at CXCR4-reseptor ikke bare er involvert i inntreden av HIV men også i den kjemotaktiske aktivitet til kreftceller, så som brystkreftmetastase eller i metastase av ovariekreft (A. Muller, B. Homey, H. Soto, N. Ge, D. Catron, M.E. Buchanan, T. Mc Clanahan, E. Murpehy, W. Yuan, S.N. Wagner, J. Luis Barrera, A. Mohar, E. Verastegui, A. Zlotnik, Nature 2001, 50, 410; J.M. Hall, K.S. Korach, Molecular Endocrinology, 2003, 1-47), ikke-Hodgins lymfom (F. Bertolini, C. DellAgnola, P. Manusco, C. Rabascio, A. Burlini, S. Monestiroli, A. Gobbi, G. Pruneri, G. Martinelli, Cancer Research 2002, 62, 3106-3112), eller lungekreft (T.Kijima, G. Maulik, P.C. Ma, E.V. Tibaldi, R:E. Turner, B. Rollins, M. Sattler, B.E. Johnson, R. Salgia, Cancer Research 2002, 62, 6304-6311), melanom, prostatakreft, nyrekreft, nevroblastom, pankreatisk kreft, multippel myelom, kronisk lymfocyttisk leukemi (H. Tamamura et al. Febs Letters 2003, 550 79-83, siterte referanser). Blokkering av den kjemotaktiske aktivitet med en CXCR4-inhibitor burde stoppe migreringen av kreftceller.
CXCR4-reseptoren er også blitt implisert i vekst og proliferasjon av tumorer. Det ble vist at aktivering av CXCR4-reseptoren var kritisk for vekst av både maligne nevronale og gliale tumorer, og småcellet lungetumorer. Videre inhiberer systemisk administrering av CXCR4 antagonist AMD3100 vekst av intrakranialt glioblastom og medulloblastom xenografter ved øket apoptose og reduksjon av prolifereringen av tumorceller (Rubin JB, Kung AL, Klein RS, Chan JA, Sun Y, Schmidt K, Kieran MW, Luster AD, Segal RA. Proe Nati Acadd Sei USA 2003 100(23):13513-13518, Barbero S, Bonavia R, Bajetto A, Porcile C, Pirani P, Ravetti JL, Zona GL, Spaziante R, Florio T, Schettini G., Tromal Cancer Res. 2003, 63(8): 1969-1974; Kijima T, Maulik G, Ma PC, Tibaldi EV, Turner RE, Rollins B, SattlerM, Johnson BE, Salgia R. Cancer Res. 2002; 62(21):6304-6311, Cancer Res. 2002; 62(11):3106-3112.
Den kjemokine stromacelleavledede faktor-1 (CXCL12/SDF-1) og dens reseptor CXCR4 er involvert i trafikken av B-celler og hematopoetiske forløpere. Det er blitt vist at CXCR4-reseptor spiller en viktig rolle ved frigjøring av stamceller fra benmargen til det perifere blod. Reseptoren er f.eks. uttrykt på CD34+-celler og er blitt implisert i prosessen CD34+-cellemigrering og målsøking. Denne aktiviteten til CXCR4-reseptoren kunne være meget viktig for effektiv affereseoppsamling av perifere blodstamceller. Autologe perifere blodceller tilveiebringer en hurtig og opprettholdt hematopoetisk gjenopprettelse etter autotransplantasjon etter administrering av høydose kjemoterapi eller radioterapi i pasienter med haematologiske lidelser og faste tumorer (WC. Liles et al., Blood 2003, 102, 2728-2730).
Det er økende indikasjoner som foreslår at kjemokiner generelt og interaksjonen mellom den kjemotiltrekkende CXCL12/stroma celleavledet faktor-1 alfa og dens reseptor CXCR4 spesielt spiller en kjernerolle ved angiogenese. Kjemokiner induserer angiogenese direkte ved å binde deres kognate reseptorer på endotelceller eller indirekte ved å fremme inflammatoriske celleinfiltrater, som leverer andre angiogene stimuli. Et antall av proinflammatoriske kjemokiner inkludert interleukin 8 (IL-8), vekstregulert onkogen, stroma celle-avledet faktor 1 (SDF-1), monocytt kjemotaktisk protein 1 (MCP-1), eotaksin 1, og 1-309 har blitt vist å virke slik at det styrer de som induserer angiogenese. (Chen X, Beutler JA, McCloud TG, Loehfelm A, Yang L, Dong HF, Chertov OY, Salcedo R, Oppenheim JJ, Howard OM. Clin Cancer Res. 2003 9(8):3115-3123, Salcedo R, Oppenheim JJ. Microcirculation 2003 (3-4): 359-370).
Det er vel etablert at kjemokiner er involvert i et antall av inflammatoriske patologier og noen av dem viser en kjernerolle ved modulering av osteoplastutvikling. Immunofarging for SDF-1 (CXCL12) på synoviale biopsier og benbiopsi fra både reumatoid artritt (RA) og osteoartritt (OA) prøver har vist sterke økninger i ekspresjonsnivåene under inflammatoriske betingelser (Grassi F, Cristino S, Toneguzzi S, Piacentini A, Facchini A, Lisignoli G. J Cell Physiol. 2004; 199(2):244-251. Det synes rimelig at CXCR4-reseptoren spiller en viktig rolle i inflammatoriske sykdommer, f.eks. så som reumatoid artritt, astma eller multippel sklerose (K.R. Shadidi et al., Scandinavian Journal of Immunology, 2003, 57, 192-198, J. A. Gonzalo J. Immunol. 2000, 165, 499-508, S. Hatse et al., FEBS Letters 2002 527, 255-262 og siterte referanser).
Medieringen av rekruttering av immunceller til inflammasjonssetet bør stoppes av en CXCR4-inhibitor. 1 forbindelsen beskrevet nedenfor er en ny strategi introdusert for å stabilisere beta-hårnålkonformasjoner i syklisk ryggradsfridde peptidohermere som utviser høy CXCR4 antagonistisk aktivitet, som er nyttig for effektiv afereseoppsamling av perifere blodstamceller, og som har anticanceraktivitet og antiinfiammatorisk aktivitet.
Dette involverer transplantasjon av den kationiske og hydrofobe hårnålsekvensen inn i et templat, hvis funksjon er å holde tilbake peptidløkkeryggraden i en hårnålgeometri. Rigiditeten til hårnålen kan ytterligere påvirkes ved å innføre en disulfidbro. Teplatundet hårnålhermerpeptider er blitt beskrevet i litteraturen (D, Obrecht, M. Altorfer, J. A. Robinson, Adv. Med. Chem. 1999, 4, 1-68; J. A. Robinson, Syn. Lett. 2000, 4, 429-441), men slike molekyler har ikke tidligere blitt evaluert for utvikling av CXCR4 antagonistiske peptider. Evnen til å danne P-hårnålpeptidohermere ved å bruke kombinatorelle og parallellsyntesemetoder er imidlertid blitt etablert (L. Jiang, K. Moehle, B. Dhanapal, D. Obrecht, J. A. Robinson, Heiv. Chim. Acta. 2000, 83, 3097-3112).
Disse metodene tillater syntese og screening av store hårnålhermerbibliotek, som i sin tur fasiliterer i betydelig grad struktur-aktivitetsundersøkelser, og følgelig oppdagelse av nye molekyler med meget potent CXCR4 antagonistisk aktivitet eller antikreftaktivitet eller antiinfiammatorisk aktivitet og lav hemolytisk aktivitet på humane rode blodceller.
P-håmålpeptidohermere oppnådd ved tilnærmelsen beskrevet heri er nyttig som anti-HIV-midler, antikreftmidler, som inhibitorer av tumorvekst eller som apoptoseinduserende midler, antimetastasemidler, og antiinflammatoriske midler eller som midler som kan anvendes i afereseoppsamling av stamceller fra perifert blod.
P-hårnålpeptidohermer i henhold til foreliggende oppfinnelse er forbindelser med den generelle formel
hvori
er DPro-LPro; og
Z er en kjede av 14 a-aminosyrerester, hvori posisjonen til nevnte aminosyrerester i nevnte kjede telles ved å starte fra den N-terminale aminosyren, hvorved disse aminosyrerestene er, avhengig av posisjonen i kjeden
Pl: Tyr, Gin, Arg, His, Ile, Trp, Thr, Glu, Ser, Val, Met, Phe, Gly, Asp, Leu,
Pip;
P2: Arg, His, Lys, 4-PyrAla;
P3: Cit, Arg, His, Ile, Tyr, Trp, Pro, Glu, Asn, Asp, Lys, Ala, Leu, Val, 4F-Phe,
Met, Ser, Thr, Gin, Tyr;
P4: Cys;
P5: Arg, Dab, Ser, (EA)G;
P6: Pro, Gly, Phe, Val, Cit, Ala;
P7:<D>Pro, Pro, Gly, Val;
P8: Arg, Tyr, Trp, Thr, 4F-Phe, Dab, 4-PyrAla, Isorn, (Im)G, Cit, His, IpegDab,
<D>Pro;
P9: Arg, (Pip)G, (EA)G, Orn, Pro;
P10: 2-Nal, Trp, Tyr;
Pil: Cys;
P12: Tyr, Cit;
P13: Cit, Gin, Arg, His, Tyr, Asn, Asp, Lys, Ala, Ser, Leu, Met, NGly, Thr, Cys;
og
P14: Lys, Glu, Gin, Asn, Asp, Ala, Ser, NMeK;
hvori de to Cys-restene tilstede som P4- og Pl 1-restene er bundet via en disulfidbro dannet ved å erstatte de to -SH-gruppene i de to restene med en -S-S-gruppe; i fri form eller i form av et farmasøytisk akseptabelt salt.
I henhold til foreliggende oppfinnelse kan disse p-hårnålpeptidohermere fremstilles ved en prosess som omfatter: (a) å koble en egnet funksjonalisert fast understøttelse med et egnet N-beskyttet derivat av den aminosyren som i det ønskede endeprodukt er i posisjon 6, 7 eller 8 hvis n er 14, hvor enhver funksjonell gruppe som kan være tilstede i nevnte N-beskyttede aminoderivat er på samme måten egnet beskyttet; (b) å fjerne den N-beskyttende gruppe fra produktet som således er oppnådd; (c) å koble produktet således oppnådd med et egnet N-beskyttet derivat av den aminosyren som i det ønskede endeprodukt er i én posisjon nærmere det N-terminale aminosyreresidu, enhver funksjonell gruppe som kan være tilstede i nevnte N-beskyttede aminosyrederivat er likeledes egnet beskyttet; (d) å fjerne den N-beskyttende gruppe fra det oppnådde produkt; (e) å gjenta trinnene (c) og (d) inntil den N-terminale aminosyreresidu er blitt innført; (f) å koble produktet således oppnådd med en forbindelse med generell formel hvori er som definert ovenfor og X er en N-beskyttende gruppe eller, alternativt, hvis
skal være gruppe (al) eller (a2) ovenfor,
(fa) som kobler produktet oppnådd i trinn (e) med et egnet N-beskyttet derivat av en aminosyre med generell formel
HOOC-B-H III eller HOOC-A-H IV
hvori B og A er som definert ovenfor, enhver funksjonell gruppe som kan være tilstede i nevnte N-beskyttede aminosyrederivat er på samme måten egnet beskyttet;
(fb) å fjerne den N-beskyttede gruppe fra produktet som således er oppnådd; og
(fc) å koble produktet således oppnådd med et egnet N-beskyttet derivat av en aminosyre med ovennevnte generelle formel IV og, henholdsvis III, enhver funksjonell gruppe som kan være tilstede i N-beskyttede aminosyrederivat er på samme måten egnet beskyttet; og henholdsvis hvis
skal være gruppen (a3) ovenfor,
(fa') som kobler produktet oppnådd i trinn (e) med et egnet N-beskyttet derivat av en aminosyre med overnevnte formel III, enhver funksjonell gruppe som kan være tilstede i
nevnte N-beskyttede aminosyrederivat er på samme måte egnet beskyttet;
(fb') å fjerne den N-beskyttede gruppe fra produktet som således er oppnådd; og
(fc') å koble produktet således oppnådd med et egnet N-beskyttet derivat av en aminosyre med ovennevnte generelle formel III, enhver funksjonell gruppe som kan være tilsted ei nevnte N-beskyttede aminosyrederivat er på samme måte egnet beskyttet;
(g) å fjerne den N-beskyttede gruppe fra produktet oppnådd i trinn (f) eller (fc) eller (fc'); (h) å koble produktet således oppnådd med et egnet N-beskyttet derivat av den aminosyren som i det ønskede endeproduktet er i posisjon 14 hvis n er 14, enhver funksjonell gruppe som kan være tilstede i nevnte N-beskyttede aminosyrederivat er på samme måte egnet beskyttet; (i) å fjerne den N-beskyttende gruppe fra produktet således oppnådd; (j) å koble produktet således oppnådd med et egnet N-beskyttet derivat av den aminosyren som i det ønskede endeprodukt er én posisjon videre vekk fra posisjon 14 hvis n er lik 14enhver funksjonell gruppe som skal være tilstede i nevnte N-beskyttede aminosyrederivat er på samme måte egnet beskyttet; (k) å fjerne den N-beskyttende gruppe fra produktet således oppnådd; (1) å gjenta trinnene (j) og (k) inntil alle aminosyreresiduene er blitt innført; (m) hvis ønsket selektiv avbeskyttelse av én eller flere beskyttede funksjonelle gruppe(r) tilstede i molekylet og egnet substituere den reaktive gruppen(e) således frigjort;
(n) hvis ønsket danne én, to eller tre mellomtrådkoblinger mellom sidekjeder til de egnede aminosyreresiduene i motsatte posisjoner i P-trådregionen;
(o) å avspalte produktet således oppnådd fra den faste understøttelse;
(p) å syklysere produktet avspaltet fra den faste understøttelsen;
(q) å fjerne enhver beskyttende gruppe tilstede på funksjonelle grupper av ethvert ledd i kjeden av aminosyreresiduer og, hvis ønsket, enhver beskyttende gruppe som kan i tillegg være tilstede i molekylet; og
(r) hvis ønsket å konvertere produktet således oppnådd til et farmasøytisk akseptabelt salt eller konvertere et farmasøytisk akseptabelt, eller uakseptabelt salt således oppnådd til den tilsvarende frie forbindelse med formel I eller til et forskjellig farmasøytisk akseptabelt salt.
Alternativt kan peptidohermerne i henhold til foreliggende oppfinnelse fremstilles ved: (a') kobling av en egnet funksjonalisert fast understøttelse med en forbindelse med generell formel
hvori er som definert ovenfor og X er en N-beskyttende gruppe eller, alternativt, hvis
skal være gruppen (al) eller (a2) ovenfor,
(a'a) kopling av nevnte egnede funksjonaliserte faste understøttelser med et egnet N-beskyttet derivat av en aminosyre med generell formel
HOOC-B-H III eller HOOC-A-H IV
hvori B og A er som definert ovenfor, enhver funksjonell gruppe som kan være tilstede i nevnte N-beskyttede aminosyrederivat er likeledes egnet beskyttet;
(a'b) å fjerne den N-beskyttende gruppe fra produktet således oppnådd; og
(a'c) å koble produktet således oppnådd med et egnet N-beskyttet derivat av en aminosyre med ovennevnte generelle formel IV og, henholdsvis, III, enhver funksjonell gruppe som kan være tilstede i nevnte N-beskyttede aminosyrederivat er på samme måte egnet beskyttet; og henholdsvis hvis
skal være gruppe (a3), ovenfor,
(aV) å koble produktet oppnådd i trinn (e) med et egnet N-beskyttet derivat av en aminosyre med ovenfor generelle formel III, enhver funksjonell gruppe som kan være tilstede i nevnte N-beskyttede aminosyrederivat er på samme måte egnet beskyttet;
(a'b') å fjerne den N-beskyttende gruppe fra produktet således oppnådd; og
(a'c') å koble produktet således oppnådd med et egnet N-beskyttet derivat av en aminosyre med ovennevnte generelle formel III, enhver funksjonell gruppe som kan være tilstede i nevnte N-beskyttede aminosyrederivat er likeledes egnet beskyttet;
(b') å fjerne den N-beskyttende gruppen fra produktet oppnådd i trinn (a'), (a'c) eller (aV);
(c') å koble produktet således oppnådd med et egnet N-beskyttet derivat av den aminosyren som i det ønskede endeprodukt er i posisjon 14 hvis n er 14, enhver funksjonell gruppe som
kan være tilstede i nevnte N-beskyttede aminosyrederivat er likeledes egnet beskyttet;
(d') å fjerne den N-beskyttende gruppe fra produktet således oppnådd;
(e') å koble produktet således oppnådd med et egnet N-beskyttet derivat av den aminosyren som i det ønskede endeproduktet er én posisjon lenger vekk fra posisjon 14 hvis n er 14, enhver funksjonell gruppe som kan være tilstede i nevnte N-beskyttede aminosyrederivat er likeledes egnet beskyttet; (f) å fjerne den N-beskyttende gruppe fra produktet som således er oppnådd;
(g') å gjenta trinnene (e') og (f) inntil alle aminosyreresiduene er blitt innført;
(h') hvis ønsket selektivt å avbeskytte én eller flere beskyttede funksjonelle gruppe(r) tilstede i molekylet og egnet substituere de reaktive grupper således frigjort;
(i') hvis ønsket danne én, to eller tre mellomtrådkoblinger mellom sidekjedene til egnede aminosyreresiduer på motsatte posisjoner i p-trådregionen;
(j') å avspalte produktet således oppnådd fra den faste understøttelse;
(k') å syklisere produktet avspaltet fra den faste understøttelsen;
(1') å fjerne enhver beskyttende gruppe som er tilstede på funksjonelle grupper i ethvert ledd i kjeden av aminosyreresiduer og, hvis ønsket, enhver beskyttende gruppe som kan i tillegg være tilstede i molekylet; og
(m') hvis ønsket, konvertere produktet som således er oppnådd til et farmasøytisk akseptabelt salt eller konvertere et farmasøytisk akseptabelt, eller uakseptabelt, salt således oppnådd inn i den tilsvarende frie forbindelse med formel I eller inn i et forskjellig, farmasøytisk akseptabelt, salt.
Innføring av en aminosyreresidu med type I kan alternativt bli utført ved kobling med en avspaltningsgruppeholdig acylerende middel, så som brom, klor eller jodeddiksyre etterfulgt av nukleofil forskyvning med en aminosyre med formel H2N-R<86>som, hvis nødvendig, er egnet beskyttet.
Peptidohermerne i henhold til foreliggende oppfinnelse kan også være enantiomerer av forbindelsen med formel I. Disse enantiomerer kan fremstilles ved en modifikasjon av overnevnte fremgangsmåter hvori enantiomerene av alle kirale startmaterialer blir brukt.
Som brukt i beskrivelsen angir betegnelsen "alkyl" tatt alene eller i kombinasjoner mettede, rette eller forgrenede kjeder av hydrokarbonradikaler som har opptil 24, fortrinnsvis opptil 12 karbonatomer. På samme måte angir betegnelsen "alkenyl" rette eller forgrenede kjeder av hydrokarbonradikaler som har opptil 24, fortrinnsvis opptil 12, karbonatomer og som inneholder minst én, eller avhengig av kjede lengden, opptil fire olefine dobbeltbindinger. Betegnelsen "lavere" angir radikaler og forbindelser som har opptil seks karbonatomer. Således angir f.eks. betegnelsen "lavere alkyl" mettet, rett eller forgrenet kjede av hydrokarbonradikaler som har opptil seks karbonatomer, så som metyl, etyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, sek-butyl, isobutyl, tert-butyl og liknende. Betegnelsen "aryl" angir aromatiske karbosykliske hydrokarbonradikaler som inneholder én eller to seksleddede ringer, så som fenyl eller naftyl, som kan være substituert med opptil tre substituenter så som Br, Cl, F, CF3, NO2, lavere alkyl eller lavere alkenyl. Betegnelsen "heteroaryl" angir aromatiske heterosykliske radikaler som inneholder én eller to fem-og/eller seks-leddede ringer, hvor minst én av dem inneholder opptil tre heteroatomer valgt fra gruppen som består av O, S og N, og nevnte ring(er) er eventuelt substituert; representative eksempler på slike eventuelt substituerte heteroarylradikaler er angitt ovenfor i forbindelse med definisjon av R<77>.
Det strukturelle element -A-CO- angir aminosyrebygningsblokker som i kombinasjon med det strukturelle element -B-CO- danner templater (al) og (a2). Det strukturelle element -B-CO- danner i kombinasjon med et annet strukturelt element -B-CO- templat (a3). Fortrinnsvis er templat (a3) tilstede bare i formel I hvori n er 18 i kjede Z. Templater (a) til og med (p) utgjør byggeblokker som har en N-terminus og en C-terminus orientert i rommet på en slik måte at avstanden mellom de to grupper kan ligge mellom 4,0-5,5 A. En peptidkjede Z er koblet til C-terminus og N-terminus i templatene (a) til og med (p) via de tilsvarende N- og C-termini slik at temp latet og kjeden danner en syklisk struktur slik som den vist i formel 1.1 et tilfelle som her hvor avstanden mellom N- og C-termini i templatet ligger mellom 4,0-5,5 A vil templatet indusere det H-bindingsnettverket som er nødvendig for dannelse av en p-hårnålkonformasjon i peptidkjeden Z. Således danner templatet og peptidet en ( 5- hårnålhermer.
P-hårnålkonformasjon er meget relevant for CXCR4 antagoniserende aktivitet til P-hårnålhermere i henhold til foreliggende oppfinnelse, p-hårnålstabiliserende konformasjonelle egenskaper til templatene (a) til og med (p) spiller en nøkkelrolle, ikke bare for den selektive CXCR4 antagoniserende aktivitet men også for synteseprosessen definert ovenfor, idet inkorporering av templatene ved begynnelsen eller nær midten av de lineære beskyttede peptidforløperne forsterker sykliseringsutbyttene signifikant.
Byggeblokker A1-A69 tilhører en klasse av aminosyrer hvori N-terminus er et sekundært amin som danner del av en ring. Blant de genetisk kodede aminosyrer finnes bare prolin i denne klassen. Konfigurasjonen til bygningsblokk Al til og med A69 er (D), og de er kombinert med en byggeblokk -B-CO- i (L)-konfigurasjonen. Foretrukne kombinasjoner for templatene (al) er -D-Al-CO-LB-CO- til<D>A69-CO-LB-CO-. Således utgjør f.eks.<D>Pro-<L>Pro prototypen til templatene (al). Mindre foretrukket, men mulig, er kombinasjonene - LAl-CO-DB-CO- til<L>A69-CO-DB-CO dannende templater (a2). Således utgjør f.eks.<L>Pro-<D>Pro prototypen til templat (a2).
Det skal forstås at bygningsblokk -Al-CO- til -A69-CO- hvori A har (D)-konfigurasjon bærer en gruppe R<1>i a-posisjonen til N-terminus. De foretrukne verdier for R<1>er H og lavere alkyl hvor de mest foretrukne verdier for R<1>er H og metyl. Det vil forstås av de med kunnskap på området at A1-A69 er vist i (D)-konfigurasjon, mens når R<1>er H og metyl tilsvarer dette (R)-konfigurasjonen. Avhengig av prioritet av andre verdier for R<1>i henhold til Cahn, Ingold og Prelog-reglene, kan denne konfigurasjonen også måtte uttrykkes som
(S).
I tillegg til R<1>kan bygningsblokker -Al-CO til -A69-CO- bære en ytterligere substituent angitt som R<2>til R<17>. Denne ytterligere substituenten kan være H, og hvis den er noe annet enn H er den fortrinnsvis en liten til medium størrelse alifatisk eller aromatisk gruppe. Eksempler på foretrukne verdier for R2 til R<17>er: - R<2>: H; lavere alkyl; lavere alkenyl; (CH2)mOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); (CH2)mSR<56>(hvor R<56>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); (CH2)mNR<33>R<34>(hvor R tt : lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R IA : H; eller lavere alkyl; R It og R tA tatt sammen danner: -(CH2)2-6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; R<57>: H; eller lavere alkyl); (CH2)mOCONR33R75(hvor R<33>:H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75;lavere alkyl; ellerR33ogR75danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)mNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; ellerR33og R<82>tatt sammen danner -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)„N(R<20>)COR<64>(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0CONR<58>R<59>(hvor R<58>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; eller lavere alkyl; eller R<58>og R<59>tatt sammen danner: -(CH2)2_6-; -(CH2)20(CH2)2)-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)„PO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). - R<3>:H; lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)mOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)mSR<56>(hvor SR<56>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)mNR33R3<4>(hvor R<33>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R34:H; eller lavere alkyl; eller R<33>og R<34>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)mOCONR<33>R<75>(hvor<R33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R75:lavere alkyl; eller R33ogR75tatt sammen danner -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)mNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R82:H; eller lavere alkyl; eller R<33>og R<82>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2)<;> hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)„N(R<20>)COR64(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0CONR<58>R<59>(hvorR58:lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; lavere alkyl; eller R<58>og R59 tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); (CH2)oPO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). - R<4>: H; lavere alkyl; lavere alkoksy; -(CH2)mOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)mSR<56>(hvor R<56>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)mNR<33>R<34>(hvor R tt : lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R IA : H; eller lavere alkyl; eller R It og R tA tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-<;> hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)mOCONR<33>R<75>(hvor<R33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75:lavere alkyl; ellerR33og R<75>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)mNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; eller R33og R<82>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R57:H; eller lavere alkyl); -(CH2)mN(R<20>)COR64 (hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0CONR<58>R<59>(hvor R<58>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; eller lavere alkyl; eller R<58>og R59 tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)oPO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). - R<5>: lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)0OR<55>(hvor R<55>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)„SR<56>(hvorR56:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)„NR33R3<4>(hvor R H : lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R IA : H; eller lavere alkyl; eller R 11 og R IA tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)0OCONR<33>R<75>(hvor<R33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75:lavere alkyl; ellerR33og R<75>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; R<57>:hvor H, eller lavere alkyl); (CH2)oNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R33:H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; eller R33og R<82>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R57:H; eller lavere alkyl); (CH2)oN(R<20>)COR<64>(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: alkyl; alkenyl; aryl og aryl-lavere alkyl; heteroaryl-lavere alkyl); -(CH2)0COOR<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0CONR<58>R<59>(hvor R<58>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R59:H; eller lavere alkyl; eller R<58>og R59 tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)oPO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). - R<6>: H; lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)0OR<55>(hvor R<55>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0SR<56>(hvorR56:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0NR<33>R<34>(hvor R<33>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<34>: H; eller lavere alkyl; eller R<33>og R<34>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-<;>hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)0OCONR<33>R<75>(hvor<R33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75;lavere alkyl; ellerR33og R<75>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)oNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R33:H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; eller R33og R<82>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-: hvor R57:H; eller lavere alkyl); -(CH2)oN(R<20>)COR<64>(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)„CONR58R59(hvor R<58>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; eller lavere alkyl; eller R<58>og R59 tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)oPO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy).-R<7>:lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)qOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)qSR<56>(hvorR56:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)qNR33R3<4>(hvorR3<3>:lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R34:H; eller lavere alkyl; eller R<33>og R<34>tatt
sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57->; hvorR5<7>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)qOCONR<33>R<75>(hvor<R33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75:lavere alkyl; ellerR33og R<75>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); (CH2)qNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere alkyl; R33:H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; eller R33og R<82>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)qN(R<20>)COR<64>(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)rCOOR<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)qCONR58R59(hvorR58:lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; eller lavere alkyl; eller R<58>og R<59>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)rPO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); (CH2)rS02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller
-(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy).
- R<8>H; F; Cl, CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl, -(CH2)0OR<55>(hvor R<55>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); (CH2)0SR<56>(hvor R<56>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0NR<33>R<34>(hvor R<33>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R34:H; eller lavere alkyl; eller R<3>3 ogR3<4>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)0OCONR33R7<5>(hvor R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75:lavere alkyl; ellerR33og R<75>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR57(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)oNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R82:H; eller lavere alkyl; eller R<33>og R<82>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)„N(R<20>)COR64(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0CONR<58>R<59>(hvorR58:lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; eller lavere alkyl; ellerR58og R<59>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)oPO(OR<60>)2(hvor R<60>:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). - R<9>: lavere alkyl; lavere aleknyl; -(CH2)0OR<55>(hvor R<55>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0SR<56>(hvorR56:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0NR33R3<4>(hvor R 11 : lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R IA : H; eller lavere alkyl; eller R 11 og R IA tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)0OCONR<33>R<75>(hvor<R33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75:lavere alkyl; ellerR33og R<75>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)mNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R33:H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; eller R33og R<82>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R57:H; eller lavere alkyl); -(CH2)„N(R<20>)COR<64>(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)„CONR58R59(hvor R<58>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; eller lavere
alkyl; eller R<58>og R59 tatt sammen danner -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)„PO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). - R<10>:lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)0OR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0SR<56>hvor (R56:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0NR33R3<4>(hvor R 11 : lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R IA : H; eller lavere alkyl; eller R 11 og R IA tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-<;>hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)„OCONR<33>R<75>(hvor<R33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75:lavere alkyl; ellerR33og R<75>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)oNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R33:H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; eller R33og R<82>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R57:H; eller lavere alkyl); -(CH2)„N(R<20>)COR<64>(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0CONR<58>R<59>(hvor R<58>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; lavere alkyl; ellerR58og R<59>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)oPO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl) eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H, F, Cl, CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). - R<11>: H; lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)mOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)mSR<56>(hvor R<56>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)mNR<33>R<34>11 IA 11 IA(hvor R : lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R : H; eller lavere alkyl; eller R og R tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)mOCONR<33>R<75>(hvor<R33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75:lavere alkyl; ellerR33og R<75>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)mNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R33:H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>H; eller lavere alkyl; eller R33og R<82>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R57:H; eller lavere alkyl); -(CH2)mN(R<20>)COR<64>(hvor R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR<57>(hvorR57:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0CONR<58>R<59>(hvor R<58>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; lavere alkyl; ellerR58og R<59>tatt sammen danner -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)oPO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). - R<12>: H; lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)mOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)mSR<56>(hvor R<56>: lavere alkyl: eller lavere alkenyl); -(CH2)mNR<33>R<34>(hvor R<33>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<34>: H; eller lavere alkyl; eller R<33>og R<34>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-<;> hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)mOCONR33R<75>(hvor<R33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75:lavere alkyl; ellerR33og R<75>tatt sammen danner: -(CH2)2-6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)mNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; eller R33og R<82>tatt sammen danner -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R57:H; eller lavere alkyl); -(CH2)mN(R<20>)COR64 (hvor R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)rCOOR57(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); - (CH2)rCONR58R5<9>(hvor R<58>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; eller lavere alkyl; eller R<58>og R<59>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)rPO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvor R<62>; lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl, CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). - R<13>:lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)qOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)qSR<56>(hvorR56:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)qNR33R3<4>(hvor R 11 : lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R IA : H; eller lavere alkyl; eller R 11 og R IA tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)qOCONR<33>R<75>(hvor<R33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75:lavere alkyl; ellerR33og R<75>tatt sammen danner -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)qNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R33:H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; eller R33og R<82>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)qN(R<20>)COR<64>(hvor R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)rC00<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); - (CH2)qCONR58R59(hvor R<58>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; eller lavere alkyl; eller R<59>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)rPO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)rS02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H, F, Cl, CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). - R<14>: H; lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)mOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)mSR<56>(hvor R<56>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)mSR<56>(hvor R<56>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)mNR<33>R<34>(hvor R<33>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R IA : H; eller lavere alkyl; eller R 11 og R IA tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)mOCONR<33>R<75>(hvor R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<75>: lavere alkyl; ellerR33og R<75>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)mNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R82:H; eller lavere alkyl; eller R<33>og R<82>tatt sammen danner -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R57:H; eller lavere alkyl); -(CH2)mN(R<20>)COR64 (hvor: R<20>: H; lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0CONR<58>R<59>(hvor R<58>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; eller lavere alkyl; eller R<58>og R59 tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)oPO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkoksy). - R<15>:lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)0OR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0SR<56>(hvorR56:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0NR<33>R34(hvor R 11 : lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R IA : H; eller lavere alkyl; eller R 11 og R IA tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-<;>hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)„OCONR<33>R<75>(hvor<R33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75:lavere alkyl; ellerR33og R<75>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)oNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R33:H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; eller R33og R<82>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R57:H; eller lavere alkyl); -(CH2)„N (R<20>)COR<64>(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); spesielt foretrukket er NR20COlavere alkyl (R20)=H;eller lavere alkyl); - (CH2)„COOR<57>(hvorR57:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)„CONR58R<59>(hvor R<58>: lavere alkyl, eller lavere alkenyl; og R<59>: H; lavere alkyl; ellerR58og R<59>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)„PO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl, lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). - R<16>lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)0OR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0SR<56>(hvorR56:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0NR33R3<4>(hvor
11 IA 11 IA
R : lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R : H; eller lavere alkyl; eller R og R tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)0OCONR<33>R<75>(hvor<R33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75:lavere alkyl; ellerR33og R<75>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-;
-(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)oNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R33:H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; eller R33og R<82>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R57:H; eller lavere alkyl); -(CH2)oN(R<20>)COR<64>(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR<57>(hvorR57:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); - (CH2)0CONR<58>R<59>(hvor R<58>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; eller lavere alkyl; eller R<58>og R59 tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)oPO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). - R<17>:lavere alkyl; lavere alkenyl, -(CH2)qOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)qSR<56>(hvorR56:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)qNR33R3<4>(hvorR3<3>:lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R34:H; eller lavere alkyl; eller R<33>og R<34>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-<;>hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)qOCONR33R<75>(hvor<R33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75:lavere alkyl; ellerR33og R<75>tatt sammen danner: -(CH2)2-6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)qNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; eller R33og R<82>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R57:H; eller lavere alkyl); -(CH2)qN(R20)COR64(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)rCOOR57(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); - (CH2)qCONR58R59(hvor R<58>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; lavere alkyl; eller R<58>og R<59>tatt sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)rPO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)rS02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy).
Blant byggeblokkene Al til A69 er de følgende foretrukket: A5 med R2 som er H, A8, A22, A25, A38 med R2 som er H, A42, A47, og A50. De mest foretrukne byggeblokkene er av type A8':
hvori R<20>er H eller lavere alkyl; og R<64>er alkyl; alkenyl; aryl; aryl-lavere alkyl; eller heteroaryl-lavere alkyl; særlig de hvori R<64>er n-heksyl (A8'-l); n-heptyl (A8'-2); 4-(fenyl)benzyl (A8'-3); difenylmetyl (A8'-4); 3-amino-propyl (A8'-5); 5-amino-pentyl (A8'-6); metyl (A8'-7); etyl (A8'-8); isopropyl (A8'-9); isobutyl (A8'-10); n-propyl (A8'-11); sykloheksyl (A8'-12); sykloheksylmetyl (A8'-13); n-butyl (A8'-14); fenyl (A8'-15); benzyl (A8'-16); (3-indolyl)metyl (A8'-17); 2-(3-indolyl)etyl (A8'-18); (4-fenyl)fenyl (A8'-19); og n-nonyl (A8'-20).
Byggeblokk A70 tilhører klassen av åpen kjede a-substituert a-aminosyrer, byggeblokker A71 og A72 til den tilsvarende P-aminosyreanalogen og byggeblokker A73-A104 til de sykliske analoger av A70. Slike aminosyrederivater er blitt vist å omfatte små peptider i vel definerte reverserte ring- eller U-formede konformasjoner (C. M. Venkatachalam, Biopolymers, 1968, 6, 1425-1434; W. Kabsch, C Sander, Biopolymers 1983, 22, 2577). Slike byggeblokker eller templater er ideelt tilpasset for stabilisering av P-hårnålkonformasjoner i peptidløkker (D. Obrecht, M. Altorfer, J. A. Robinson, "Novel Peptide Mimetic Building Blocks and Strategies for Efficient Lead Finding", Adv. Med. Chem. 1999, vol. 4, 1-68; P. Balaram, "Non-standard amino acids in peptide design and protein engineering", Curr. Opin. Struct. Biol. 1992, 2, 845-851; M. Crisma, G. Valle, C. Toniolo, S. Prasad, R. B. Rao, P. Balaram, "P-turn conformations in crystal structures of model peptides containing a,a-disubstituted amino acids", Biopolymers 1995, 35, 1-9,; V. J. Hruby, F. Al-Obeidi, W. Kazmierski, Biochem. J. 1990, 268, 249-262).
Det har blitt vist at begge enantiomerer av byggeblokker -A70-CO- til A104-CO- i kombinasjon md en byggeblokk -B-CO- av L-konfigurasjon kan effektivt stabilisere og indusere P-hårnålkonformasjoner (D. Obrecht, M. Altorfer, J. A. Robinson, "Novel Peptide Mimetic Building Blocks and Strategies for Efficient Lead Finding", Adv. Med. Chem. 1999, vol. 4, 1-68; D. Obrecht, C. Spiegler, P. Schonholzer, K. Muller, H. Heimgartner, F. Stierli, Heiv. Chim. Acta 1992, 75, 1666-1696; D. Obrecht, U. Bohdal, J. Daly, C. Lehmann, P. Schonholzer, K. Muller, Tetrahedron 1995, 51, 10883-10900; D. Obrecht, C. Lehmann, C. Ruffieux, P. Schonholzer, K. Muller, Heiv. Chim. Acta 1995, 78, 1567-1587; D. Obrecht, U. Bohdal, C. Broger, D. Bur, C. Lehmann, R. Ruffieux, P. Schonholzer, C. Spiegler, Heiv. Chim. Acta 1995, 78, 563-580; D. Obrecht, H. Karajiannis, C. Lehmann, P. Schonholzer, C. Spiegler, Heiv. Chim. Acta 1995, 78, 703-714).
Således for hensikten til foreliggende oppfinnelse kan templater (al) også bestå av -A70-CO- til A104-CO- hvor byggeblokk A70-A104 er av enten (D)- eller (L)-konfigurasjon, i kombinasjon med en byggeblokk -B-CO- av (L)-konfigurasjon.
Foretrukne verdier for R<20>i A70-A104 er H eller lavere alkyl, hvorved metyl er den mest foretrukne. Foretrukne for verdier for R<18>, R<1>9 ogR21-R<29>i byggeblokk A70-A104 er følgende:
- R<18>:lavere alkyl.
-R1<9>:lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)pOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)PSR<56>(hvorR56:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)PNR33R3<4>(hvor R 11 : lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R IA : H; eller lavere alkyl; eller R 11 og R IA danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvorR5<7>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)pOCONR<33>R<75>(hvor<R33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75:lavere alkyl; ellerR33og R<75>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)PNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R33:H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R82:H; eller lavere alkyl; eller R<33>og R<82>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)PN(R<20>)COR64(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)pCOOR<57>(hvorR57:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)pCONR58R59(hvorR58:lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; eller lavere alkyl; eller R<58>og R<59>danner sammen -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-<;>hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)oPO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)pS02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)0C6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). -R2<1>:H; lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)0OR<55>(hvor R<55>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)„SR<56>(hvorR56:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)„NR<33>R<34>(hvor R 11 : lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R IA : H; eller lavere alkyl; eller R 11 og R IA danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)0OCONR<33>R<75>(hvor<R33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75:lavere alkyl; ellerR33og R<75>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)oNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R33:H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; eller R33og R<82>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)„N(R<20>)COR<64>(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); - (CH2)0CONR<58>R<59>(hvor R<58>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; lavere alkyl; eller R<58>og R<59>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)oPO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); (CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller (CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). -R<22>:lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)0OR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0SR<56>(hvorR56:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0NR33R3<4>(hvor R 11 : lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R IA : H; eller lavere alkyl; eller R 11 og R IA danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvorR5<7>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)0OCONR<33>R<75>(hvor<R33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75:lavere alkyl; ellerR33og R<75>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)oNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R33:H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; eller R<33>og R<82>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)oN(R<20>)COR<64>(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)„COOR<57>(hvorR57:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)„CONR58R59(hvor R<58>:lavere alkyl, eller lavere alkenyl; ogR59:H; lavere alkyl; eller R<58>og R<59>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)oPO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). -R<23>:H; lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)0OR<55>(hvor R<55>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0SR<56>(hvorR56:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0NR<33>R<34>(hvor R 11 : lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R IA : H; eller lavere alkyl; eller R 1A: H; eller lavere alkyl; ellerR33og R<34>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)0OCONR<33>R<75>(hvor R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<75>: lavere alkyl; eller R<33>og R<75>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)„NR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; eller R<33>og R82 danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)„N(R<20>)COR<64>(hvor: R<20>; H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); spesielt foretrukket er NR<20>COlower alkyl (R<20>=H; eller lavere alkyl); -(CH2)0COOR57(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)„CONR<58>R<59>(hvor<R58>: lavere alkyl, eller lavere alkenyl; ogR5<9>:H; lavere alkyl; ellerR58ogR59danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)oPO(OR<60>)2(hvor R<60>:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3, lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy); - R<24>:lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)0OR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)„SR<56>(hvorR56:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)„NR33R3<4>(hvor R 11 : lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R IA : H; eller lavere alkyl; eller R 11 og R IA sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)„OCONR<33>R<75>(hvor<R33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75:lavere alkyl; ellerR33og R<75>danner sammen -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)oNR<20>CONR<33>R82(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R33:H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R82:H; eller lavere alkyl; eller R<33>og R<82>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)„N(R<20>)COR<64>(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); særlig fordelaktig er NR<20>COlavere alkyl (R<20>=H; eller lavere alkyl); - (CH2)„COOR<57>(hvorR57:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)„CONR58R<59>(hvor R<58>: lavere alkyl, eller lavere alkenyl; og R<59>: H; lavere alkyl; ellerR58og R<59>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R57:H; eller lavere alkyl); -(CH2)„PO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); - (CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). - R<25>: H; lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)mOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)mNR<33>R<34>(hvor R<33>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<34>: H; eller lavere alkyl; ellerR33og R<34>sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)mOCONR<33>R<75>(hvor R<33>: H; eller lavere alkyl; eller laver alkenyl; R<75>: lavere alkyl; eller R<33>og R<75>sammen danner: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)mNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; ellerR33og R<82>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)mN(R<20>)COR<64>(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR<57>(hvorR57:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0CONR<58>R<59>(hvor R<58>:lavere alkyl; eller lavere alkenyl; ogR59:H; lavere alkyl; eller R<58>og R<59>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)oPO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); - (CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). - R<26>: H; lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)mOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)mNR<33>R<34>(hvor R<33>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<34>: H; eller lavere alkyl; ellerR33og R<34>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)mOCONR<33>R<75>(hvor R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<75>: lavere alkyl; eller R<33>og R<75>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)mNR<20>CONR33R8<2>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; ellerR33og R<82>danner sammen: -(CH2)2-6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR5<7>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)mN(R<20>)COR<64>(hvor: R<20>:H; eller lavere alkyl;R64:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0CONR<58>R<59>(hvor R<58>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; lavere alkyl; ellerR58og R<59>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)„PO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). - Alternativt, R<25>og R26 tatt sammen kan være -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-;
-(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl).
-R2<7>:H; lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)0OR<55>(hvor R<55>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0SR<56>(hvorR56:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0NR<33>R<34>(hvor R 11 : lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R IA : H; eller lavere alkyl; eller R 11 og R IA danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-<;>hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)0OCONR<33>R<75>(hvor<R33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75:lavere alkyl; ellerR33og R<75>danner sammen: -(CH2)2_6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)oNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R33:H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; eller R<33>og R<82>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R57:H; eller lavere alkyl); -(CH2)oN(R<20>)COR<64>(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); - (CH2)0CONR<58>R<59>(hvor R<58>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; lavere alkyl; eller R<58>og R<59>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)oPO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). - R<28>:lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)0OR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)„SR<56>(hvorR56:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)„NR33R3<4>(hvor R 11 : lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R IA : H; eller lavere alkyl; eller R 11 og R IA danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvorR5<7>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)0OCONR<33>R<75>(hvor<R33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75:lavere alkyl; ellerR33og R<75>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)oNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R33:H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R82:H; eller lavere alkyl; eller R<33>og R<82>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)oN(R<20>)COR64(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR<57>(hvorR57:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0CONR<58>R<59>(hvor R<58>:lavere alkyl; eller lavere alkenyl; ogR59:H; lavere alkyl; eller R<58>og R<59>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvorR5<7>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)„PO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvorR62:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvorR<8>:H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). - R<29>:lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)0OR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0SR<56>(hvorR56lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0NR33R3<4>(hvor R 11 : lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R IA : H; eller lavere alkyl; eller R 11 og R IA danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)0OCONR<33>R<75>(hvor R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75:lavere alkyl; ellerR33og R<75>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)oNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R33:H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R82:H; eller lavere alkyl; eller R33og R<82>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)„N(R<20>)COR<64>(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); spesielt foretrukket er NR20COlavere-alkyl (R20=H;eller lavere alkyl); - (CH2)0COOR<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0CONR<58>R<59>(hvor R<58>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; lavere alkyl; ellerR58og R<59>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R57:H; eller lavere alkyl); -(CH2)0PO(OR<6>°: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R62(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy).
For templater (b) til (p), så som (bl) og (cl) er de foretrukne verdier for de forskjellige symboler følgende: - R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl, lavere alkenyl; -(CH2)0OR<55>(hvor R<55>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)„SR<56>(hvor R<56>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); - (CH2)0NR<33>R<34>(hvor R<33>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R34:H; eller lavere alkyl; ellerR3<3>og R<34>danner sammen -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)0OCONR33R7<5>(hvor R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75:lavere alkyl; ellerR33og R<75>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R57:H; eller lavere alkyl); -(CH2)oNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R82:H; eller lavere alkyl; eller R<33>og R<82>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)„N(R<20>)COR<64>(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0CONR<58>R<59>(hvorR58;lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; eller lavere alkyl; ellerR58og R<59>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)oPO(OR<60>)2(hvor R<60>:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy).
- R<20>: N; eller lavere alkyl.
- R<30>: H, metyl.
-R3<1>:H; lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)pOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)PNR<33>R<34>(hvor R<33>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<34>: H; eller lavere alkyl; ellerR33og R<34>danner sammen: -(CH2)2-6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)pOCONR<33>R<75>(hvor R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<75>: lavere alkyl; eller R<3>3 ogR7<5>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)PNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; eller R<33>og R82 danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)PN(R<20>)COR<64>(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); (-CH2)0CONR<58>R<59>(hvor R<58>: lavere alkyl, eller lavere alkenyl; og R<59>:H; lavere alkyl; eller R<58>og R<59>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)„PO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)rC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy); mest foretrukket er -CH2CONR<5>8R59(R5<8>: H; eller lavere alkyl; R<59>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl).
- R<32>: H, metyl.
- R<33>:lavere alkyl, lavere alkenyl; -(CH2)mOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)mNR<34>R<63>(hvor R<34>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<63>: H; eller lavere alkyl; eller R<34>og R63 danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)mOCONR75R8<2>(hvor R<75>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R82:H; eller lavere alkyl; eller R<75>og R<82>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)mNR<20>CONR<78>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R<78>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R82:H; eller lavere alkyl; ellerR78danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)mN(R20)COR64(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)„CONR<58>R<59>(hvor R<58>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; lavere alkyl; eller R<58>og R59 danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller
-(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl).
- R<34>: H; eller lavere alkyl.
- R<35>: H; lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)mOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)mNR<33>R<34>(hvor R<33>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<34>: H; eller lavere alkyl; ellerR33og R<34>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)mOCONR<33>R<75>(hvor R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<75>: lavere alkyl; eller R<33>og R<75>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)mNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; ellerR33og R<82>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)mN(R<20>)COR<64>(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR<57>(hvorR57:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0CONR<58>R<59>(hvor R<58>:lavere alkyl; eller lavere alkenyl; ogR59:H; lavere alkyl; eller R<58>og R<59>danner
sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl).
- R<36>:lavere alkyl; lavere alkenyl; eller aryl-lavere alkyl.
-R3<7>:H; lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)pOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)PNR<33>R<34>(hvor R<33>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<34>: H; eller lavere alkyl; ellerR33og R<34>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)pOCONR<33>R<75>(hvor R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<75>: lavere alkyl; eller R<33>og R<75>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)PNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere alkyl; R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; eller R<33>og R<82>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)PN(R<20>)COR<64>(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0CONR<58>R<59>(hvor R<58>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>:H; lavere alkyl; eller R<58>og R<59>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)„PO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). -R3<8>:H; lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)pOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)PNR<33>R<34>(hvor R<33>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<34>: H; eller lavere alkyl; ellerR33og R<34>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)pOCONR<33>R<75>(hvor R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<75>: lavere alkyl; eller R<33>og R<78>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)PNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; eller R<33>og R82 danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)PN(R<20>)COR64(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR57 (hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0CONR<58>R<59>(hvor R<58>: lavere alkyl, eller lavere alkenyl; og R<59>:H; lavere alkyl; eller R<58>og R<59>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)oPO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). - R<39>: H; lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)mOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl; -(CH2)mN(R<20>)COR<64>(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere aleknyl); -(CH2)0COOR<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -
(CH2)0CONR<58>R<59>(hvor R<58>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; lavere alkyl; eller R<58>og R<59>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller
-(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl).
- R<40>:lavere alkyl; lavere alkenyl; eller aryl-lavere alkyl.
-R<41>:H; lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)pOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)PNR<33>R<34>(hvor R<33>: lavere alkyl, eller lavere alkenyl; R<34>: H; eller lavere alkyl; ellerR33og R<34>danner sammen: -(CH2)2-6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)pOCONR<33>R<75>(hvor R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<75>: lavere alkyl; eller R<33>og R<75>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)PNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; eller R<33>og R82 danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)PN(R<20>)COR<64>(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0CONR<58>R<59>(hvor R<58>: lavere alkyl, eller lavere alkenyl; og R<59>:H; lavere alkyl; eller R<58>og R<59>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)oPO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). -R4<2>:H; lavere alkyl; lavre alkenyl; -(CH2)pOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)PNR<33>R<34>(hvor R<33>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<34>: H; eller lavere alkyl; ellerR33og R<34>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)pOCONR<33>R<75>(hvor R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<75>: lavere alkyl; eller R<33>og R<75>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)PNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; eller R<33>og R82 danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)PN(R<20>)COR<64>(hvor R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR57 (hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0CONR<58>R<59>(hvor R<58>: lavere alkyl, eller lavere alkenyl; og R<59>:H; lavere alkyl; eller R<58>og R<59>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)oPO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). - R<43>:lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)mOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)mSR<56>(hvor R<56>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)mNR33R3<4>(hvor R 11 : lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R IA : H; eller lavere alkyl; eller R 11 og R IA danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvorR5<7>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)mOCONR33R<75>(hvor<R33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75:lavere alkyl; og R33og R<75>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)mNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; eller R33og R<82>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R57:H; eller lavere alkyl); -(CH2)mN(R<20>)COR64 (hvor R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -
(CH2)0CONR<58>R<59>(hvor R<58>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; lavere alkyl; eller R<58>og R<59>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)oPO(OR<60>)2(hvor R<60>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0S02R<62>(hvor R<62>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); eller -(CH2)qC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). -R4<4>:lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)pOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)PSR<56>(hvor R<56>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)PNR33R3<4>(hvor R 11 lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R IA : H; eller lavere alkyl; eller lavere alkyl; eller R 11 og R<34>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)pOCONR<33>R<75>(hvor R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75:lavere alkyl; ellerR33og R<78>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R57:H; eller lavere alkyl); -(CH2)PNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R82:H; eller lavere alkyl; eller R<33>og R<82>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)PN(R<20>)COR<64>(hvor R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)pCOOR<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); - (CH2)pCONR58R5<9>(hvor R<58>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; lavere alkyl; eller R<58>og R<59>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)„C6H4R<8>(hvor R<8>:H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). -R4<5>:H; lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)0OR<55>(hvor R<55>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)„SR<56>(hvorR56:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)„NR33R34(hvor R 11 : lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R IA : H; eller lavere alkyl; eller R 11 og R IA danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-<;> hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)sOCONR33R<75>(hvor<R33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75:lavere alkyl; ellerR33og R<75>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)oNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; eller R33og R<82>danner dammen -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R57:H; eller lavere alkyl); -(CH2)oN(R<20>)COR<64>(hvor R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); - (CH2)0CONR<58>R<59>(hvor R<58>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; lavere alkyl; eller R<58>og R<59>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)SC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). -R4<6>:H; lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)sOR<55>(hvor R<55>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)SSR<56>(hvorR56:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)SNR<33>R<34>(hvor R<33>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<34>: H; eller lavere alkyl; eller R<33>og R<34>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-<;> hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)sOCONR<33>R<75>(hvor<R33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl;R75:lavere alkyl; ellerR33og R<75>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere
alkyl); -(CH2)SNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R : H; eller lavere alkyl; eller R og R danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R57:H; eller lavere alkyl); -(CH2)SN(R20)COR64 (hvor R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)0COOR<57>(hvor R<57>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); - (CH2)0CONR<58>R<59>(hvor R<58>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; lavere alkyl; eller R<5>8 ogR5<9>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)SC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy).
- R<47>:H; eller OR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl).
- R<48>: H; eller lavere alkyl.
-R4<9>:H; lavere alkyl; -(CH2)0COOR<57>(hvorR57:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)„CONR58R59(hvor R<58>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; og R<59>: H; lavere alkyl; eller R<58>og R<59>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); (CH2)SC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy).
- R<50>: H; metyl.
- R<51>: H; lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)mOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)mNR<33>R<34>(hvor R<33>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<34>: H; eller lavere alkyl; ellerR33og R<34>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); (CH2)mOCONR<33>R<75>(hvor R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<75>: lavere alkyl; eller R<33>og R<75>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)mNR<20>CONR33R8<2>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; ellerR33og R<82>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)mN(R<20>)COR<64>(hvor R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)pCOOR<57>(hvorR57:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)pCONR<58>R<59>(hvor R<58>:lavere alkyl; eller lavere alkenyl; ogR59:H; lavere alkyl; eller R<58>og R<59>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); eller -(CH2)rC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). - R<52>: H; lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)mOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)mNR<33>R<34>(hvor R<33>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<34>: H; eller lavere alkyl; ellerR33og R<34>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)mOCONR<33>R<75>(hvor R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<75>: lavere alkyl; eller R<33>og R<75>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)mNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; ellerR33og R<82>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)mN(R<20>)COR64(hvor R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)pCOOR<57>(hvorR57:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)pCONR<58>R<59>
(hvor R<58>:lavere alkyl; eller lavere alkenyl; ogR59:H; lavere alkyl; eller R<58>og R<59>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvorR5<7>:H; eller lavere alkyl); eller -(CH2)rC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy). - R<53>: H; lavere alkyl; lavere alkenyl; -(CH2)mOR<55>(hvorR55:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)mNR<33>R<34>(hvor R<33>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<34>: H; eller lavere alkyl; ellerR33og R<34>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)mOCONR<33>R<75>(hvor R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<75>: lavere alkyl; eller R<33>og R<75>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>:H; eller lavere alkyl); -(CH2)mNR<20>CONR<33>R<82>(hvor R<20>: H; eller lavere lavere alkyl; R<33>: H; eller lavere alkyl; eller lavere alkenyl; R<82>: H; eller lavere alkyl; ellerR33og R<82>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); -(CH2)mN(R<20>)COR<64>(hvor: R<20>: H; eller lavere alkyl; R<64>: lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)pCOOR<57>(hvorR57:lavere alkyl; eller lavere alkenyl); -(CH2)pCONR<58>R<59>(hvor R<58>:lavere alkyl; eller lavere alkenyl; ogR59:H; lavere alkyl; eller R<58>og R<59>danner sammen: -(CH2)2.6-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; eller -(CH2)2NR<57>(CH2)2-; hvor R<57>: H; eller lavere alkyl); eller -(CH2)rC6H4R<8>(hvor R<8>: H; F; Cl; CF3; lavere alkyl; lavere alkenyl; eller lavere alkoksy).
- R<54>:lavere alkyl; lavere alkenyl; eller aryl-lavere alkyl.
Blant byggeblokkene A70-A104 er følgende foretrukket: A74 med R<22>som er H, A75, A76, A77 med R<22>som er H, A78 og A79.
Byggeblokkene -B-CO- i templatene (al), (a2) og (a3) angir en L-aminosyreresidu. Foretrukkede verdier for B er: -NR<20>CH(R<71>)- og enantiomerer med gruppene A5 med R<2>som er H, A8, A22, A25, A38 med R2 som er H, A42, A47, og A50. Mest foretrukket er
I tillegg inkluderer de mest foretrukne verdier for B også grupper av type A8" av (L)-konfigurasjon:
hvoriR20er H eller lavere alkyl og R<64>er alkyl; alkenyl; -[(CH2)U-X]t-CH3(hvor X er -O-; - NR<20->, eller -S-; u = 1-3, og t = 1-6), aryl; aryl-lavere alkyl; eller heteroaryl-lavere alkyl; spesielt de hvori R<64>er n-heksyl (A8"-21); n-heptyl (A8"-22); 4-(fenyl)benzyl (A8"-23); difenylmetyl (A8"-24); 3-amino-propyl (A8"-25); 5-amino-pentyl (A8"-26); metyl (A8"-27); etyl (A8"-28); isopropyl (A8"-29); isobutyl (A8"-30); n-propyl (A8"-31); sykloheksyl (A8"-32); sykloheksylmetyl (A8"-33); n-butyl (A8"-34); fenyl (A8"-35);
benzyl (A8"-36); (3-indolyl)metyl (A8"-37); 2-(3-indolyl)etyl (A8"-38); (4-fenyl)fenyl (A8"-39); n-nonyl (A8"-40); CH3-OCH2CH2-OCH2- (A8"-41) og CH3-(OCH2CH2)2-OCH2- (A8"-42).
Peptidkjeden Z i p-hårnålhermerne beskrevet heri er generelt definert i betegnelse av aminosyreresiduer som tilhører én av de følgende grupper: - Gruppe C -NR<20>CH(R<72>)CO-; "hydrofobe: små til medium størrelse" - Gruppe D -NR<20>CH(R<73>)CO-; "hydrofobe: store aromatiske eller heteroaromatisk" - Gruppe E -NR<20>CH(R<74>)CO-; "polar-kationisk" og "urea-avledet" - Gruppe F -NR<20>CH(R<84>)CO-; "polar-ikke-ladet eller anionisk" - Gruppe H -NR<20->CH(CO-)-(CH2)4.7-CH(CO-)-NR20-;-NR<20->CH(CO-)-(CH2)pSS(CH2)p-CH(CO-)-NR<20->; -NR20-CH(CO-)-(-(CH2)pNR20CO(CH2)p-CH(CO-)-NR20-; og -NR<20->CH(CO-)-(-(CH2)pNR<20>(CH2)p-CH(CO-)-NR<20->;
"intertrådkobling"
Gruppe I -NR<86>CH2CO-; "polar-kationisk eller hydrofob"
Videre kan aminosyreresiduene i kjede Z også være med formel -A-CO- eller med formel - B-CO- hvori A og B er som definert ovenfor. Avslutningsvis kan Gly også være en aminosyreresidu i kjede Z, og Pro kan være en aminosyreresidu i kjede Z også, med unntak av posisjoner hvor intertrådkoblinger (H) er mulig.
Gruppe C omfatter aminosyreresiduer med små til middels størrelse hydrofobe sidekjedegrupper i henhold til den generelle definisjonen for substituent R<72>. En hydrofob residu refererer seg til en aminosyresidekjede som er uladet ved fysiologisk pH og som blir avstøtt av vandig oppløsning. Videre inneholder disse sidekjedene generelt ikke hydrogenbindingsdonorgrupper, så som (men ikke begrenset til) primære og sekundære amider, primære og sekundære aminer og de korresponderende protonerte salter derav, tioler, alkoholer, fosfonater, fosfater, urea eller tiourea. De kan imidlertid inneholde hydrogenbindingsakseptorgrupper så som etere, tioetere, estere, tertiære amider, alkyl-eller arylfosfaonater og fosfater eller tertiære aminer. Genetisk kodede små til middels størrelse aminosyre inkluderer alanin, isoleukin, leukin, metionin og valin.
Gruppe D omfatter aminosyreresiduer med aromatiske og heteroaromatiske sidekjedegrupper i henhold en den generelle definisjonen for substituent R<73>. En aromatisk aminosyreresidu refererer seg til en hydrofob aminosyre som har en sidekjede som inneholder minst én ring som har et konjugert7t-eletrosystem (aromatisk gruppe). I tillegg kan de inneholde hydrogenbindingsdonorgrupper så som (men ikke begrenset til) primære og sekundære amider, primære og sekundære aminer og de tilsvarende protonerte salter derav, tioler, alkoholer, fosfonater, fosfater, urea eller tiourea, og
hydrogenbindingsakseptorgrupper så som (men ikke begrenset til) etere, tioetere, estere,
tertiære amider, alkyl- eller arylfosfonater og fosfater eller tertiære aminer. Genetisk kodede aromatiske minosyrer inkluderer fenylalanin og tyrosin.
En heteroaromatisk aminosyreresidu refererer seg til en hydrofob aminosyre som har en sidekjede som inneholder minst én ring som har et konjugert 71-system inkorporert minst ett heteroatom så som (men ikke begrenset til) O, S og N i henhold til den generelle definisjonen for substituent R<77>.1 tillegg kan slike residuer inneholde hydrogenbindingsdonorgrupper så som (men ikke begrenset til) primære og sekundære amider, primære og sekundære aminer og de tilsvarende protonerte salter derav, tioler, alkoholer, fosfonater, fosfater, urea eller tiourea, og hydrogenbindingsakseptorgrupper så som (men ikke begrenset til) etere, tioetere, estere, tertiære amider, alkyl- eller arylfosfonater og fosfater eller tertiære aminer. Genetisk kodede heteroaromatiske aminosyrer inkluderer tryptofan og histidin.
Gruppe E omfatter aminosyrer som inneholder sidekjeder med polare kationiske, acylamino- og ureaavledede residuer i henhold til den generelle definisjonen for substituent R<74>. Polar-kationisk refererer seg til en basisk sidekjede som er protonert ved fysiologisk pH. Genetisk kodede polare kationiske aminosyrer inkluderer arginin, lysin og histidin. Citrullin er et eksempel på en ureaavledet aminosyreresidu.
Gruppe F omfatter aminosyrer som inneholder sidekjeder med polare ikke-ladede eller anioniske residuer i henhold til den generelle definisjonen for substituent R<84>. En polar ikke-ladet eller anionisk residu referer seg til en hydrofil sidekjede som er uladet og, henholdsvis anionisk ved fysiologisk pH (karboksylsyrer er inkludert), men som ikke blir avstøtt av vandige oppløsninger. Slike sidekjeder inneholder typisk hydrogenbindingsdonorgrupper så som (men ikke begrenset til) primære og sekundære amider, karboksylsyrer og etere, primære og sekundære aminer, tioler, alkoholer, fosfonater, fosfater, urea eller tiourea. Disse grupper kan danne hydrogenbindingsnettverk med vannmolekyler. I tillegg kan de også inneholde hydrogenbindingsakseptorgrupper så som (men ikke begrenset til) etere, tioetere, estere, tertiære aminer, karboksylsyrer og karboksylater, alkyl- eller arylfosfonater og fosfater eller tertiære aminer. Genetisk kodede polare ikke-ladede aminosyrer inkluderer asparagin, cystein, glutamin, serin og treonin, men også asparaginsyre og glutaminsyre.
Gruppe H omfatter sidekjede med fortrinnsvis (L)-aminosyrer i motsatte posisjoner av P-trådregionen som kan danne en intertrådkobling. Den best kjente kobling er disulfidbroen dannet av cysteiner og homo-cysteiner posisjonert i motsatte posisjoner av P-tråden. Forskjellige metoder er kjent for å danne disulfidkoblinger inkludert de beskrevet av J. P. Tam et al. Synthesis 1979, 955-957; Stewart et al., SolidPhase Peptide Synthesis, 2d Red. Pierce Chemical Company, III., 1984; Ahmed et al., J. Biol. Chem. 1975, 250, 8477-8482; og Pennington et al., Peptides, sider 164-166, Giralt and Andreu, red., ESCOM Leiden, Nederland, 1990. Mest fordelaktig for den foreliggende oppfinnelses område kan disulfidkoblinger fremstilt ved å bruke acetamidometyl (Acm)-beskyttende grupper for cystein. En veletablert intertrårkobling består av å koble henholdsvis ornitiner og lysiner med glutamin og asparaginsyreresiduer lokalisert på motsatte P-trådposisjoner ved hjelp av en amidbindingsdannelse. Foretrukne beskyttende grupper for sidekjedeaminogruppene til ornitin og lysin er allyloksykarbonyl (Alloc) og allylestere for asparagin og glutaminsyre. Avslutningsvis kan intertrådkoblinger også etableres ved å koble aminogruppene til lysin og ornitin lokalisert på motsatte p-trådposisjoner med reagenser så som N,N-karbonylimidazol for å danne sykliske ureaer.
Gruppe I omfatter glysin som har aminogruppen substituert med sidekjeder som inneholder polare kationiske eller hydrofobe residuer i henhold til den generelle definisjonen for substituent R<86>. Polar-kationisk refererer seg til en basisk sidekjede som er protonert ved fysiologisk pH. Et hydrofobt residu refererer seg til en aminosyresidekjede som er uladet ved fysiologisk pH og som blir avstøtt av vandig oppløsning.
Som nevnt tidligere er posisjoner for intertrådkoblinger, hvis n er 12, posisjoner P4 og P9; og/eller P2 og Pil tatt sammen, hvis n er 14, posisjoner P2 og P13 og/eller P4 og Pl 1; og hvis n er 18, posisjoner P4 og P17 og/eller P6 og Pl5 og/eller P8 og Pl3 tatt sammen. Slike intertrådkoblinger er kjent for å stabilisere P-hårnålkonformasjoner og utgjør således et viktig strukturelt element for konstruksjonen av p-hårnålhermere.
Mest foretrukne aminosyreresiduer i kjende Z er de avledet fra naturlige a-aminosyrer. Heretter følger en liste over aminosyrer som, eller residuer av hvilke, er egnet for hensiktene i foreliggende oppfinnelse, hvor forkortelsene tilsvarer generelt akseptert vanlig praksis:
Andre a-aminosyrer som, eller residuer av hvilke, er egnet for hensiktene til foreliggende oppfinnelse inkluderer:
Særlig foretrukne residuer i gruppe C er:
Særlig foretrukkede residuer i gruppe D er:
Særlig foretrukne residuer i gruppe E er:
Særlig foretrukne residuer i gruppe F er:
Særlig foretrukne residuer i gruppe I er:
Generelt omfatter peptidkjeden Z i P-hårnålhermerne i henhold til oppfinnelsen 12, 14 eller 18 aminosyreresiduer. Posisjonene Pl til P12 og, henholdsvis, til P14 eller Pl 8 av hver aminosyreresidu i kjede Z er utvetydig definert som følger: Pl representerer den første aminosyre i kjeden Z som er koblet med dens N-terminus til C-terminus av templatene (b)-(p), eller av gruppe -B-CO- i templat (al) eller av gruppe -A-CO- i templat (a2), eller av gruppe -B-CO- som danner C-terminus i templat (a3); og P12 og, henholdsvis, P14 eller Pl8 representerer den siste aminosyre i kjeden Z som er koblet med dens C-terminus til N-terminusen til templatene (b)-(p), eller av gruppe -A-CO- i templat (al) eller av gruppe -B-CO- i templat (a2), eller av gruppe -B-CO- som danner N-terminus til templat (a3). Hver av posisjonene Pl til P12 og henholdsvis P14 til Pl8 vil fortrinnsvis inneholde en aminosyreresidu som tilhører én av de ovennevnte typer C D, E, F, I, H eller med formel - A-CO- eller med formel -B-CO-, eller som er Gly, NMeGly, Pro eller Pip som følger:
Hvis n er 14, er a-aminosyreresiduene i posisjoner 1-14 i kjede Z fortrinnsvis:
- Pl: av type C, eller av type D, eller av type E, eller av type F, eller residuene er Gly eller NMeGly eller Pro eller Pip; - P2: av type E, eller av type D, eller av type F; - P3: av type E, eller av type F, eller av type D, eller av type C, eller residuen er Pro eller Pip; - P4: av type D, eller av type C, eller av type F; - P5: av type E, eller av type F, eller av type I; - P6: av type C, eller av type D, eller av type F, eller residuen er Gly, NMeGly, Pro eller Pip; - P7: av type C, eller av type D, eller med formel -A-CO-, eller residuen er Gly, NMeGly, Pro eller Pip; - P8: av type E, eller av type F, eller av type D, eller av type I, eller residuen er Pro eller Pip; - P9: av type F, eller av type E, eller av type D, eller av type I, eller residuen er Pro eller Pip; - P10: av type F, eller av type D, eller av type C; - P11: av type D, eller av type C, eller av type F, eller av type E; - P12: av type C, eller av type D, eller av type F; - P13: av type F, eller av type E, eller av type D, eller av type C, eller av type I, eller residuen er Gly eller NMeGly; og
- P14: eller av type F, eller av type E, eller av type C; eller
- P2 og P13 og/eller P4 og Pl 1, danner sammen en gruppe av type H;
på P4, P7, P8 eller Pl 1 er også D-isomerer mulig;
med det forbehold at
- aminosyreresiduet i Pl er Gly eller NMeGly eller Pip; og/eller
- aminosyreresiduet i P2 er av type F; og/eller
- aminosyreresiduet i P3 er av type F, eller Pro eller Pip; og/eller
- aminosyreresiduet i P4 er av type F; og/eller
- aminosyreresiduet i P5 er av type F, eller av type I; og/eller
- aminosyreresiduet i P6 er av type C, eller av type D, eller den er NMeGly eller Pip; og/eller - aminosyreresiduet i P7 er av type C, eller av type D, eller den er NMeGly, Pro eller Pip; og/eller - aminosyreresiduet i P8 er av type D, eller av type I, eller den er Pro eller Pip; og/eller - aminosyreresiduet i P9 er av type F, eller av type I eller den er Pip; og/eller
- aminosyreresiduet i P10 er av type F; og/eller
- aminosyreresiduet i Pl 1 er av type C; og/eller
- aminosyreresiduet i P12 er av type C, eller av type F; og/eller
- aminosyreresiduet i P13 er av type F, eller den er Gly eller NMeGly; og/eller
- P4 og Pl 1 danner sammen en gruppe av type H; og/eller
- aminosyreresiduet i P4 er en D-isomer; og/eller
- aminosyreresiduet i Pl 1 er en D-isomer.
Hvis n er 14, er a-aminosyreresiduene i posisjoner 1-14 mest foretrukket:
- Pl: Tyr, Gin, Arg, His, Ile, Trp, Thr, Glu, Ser, Val, Met, Phe, Gly, Asp,
Leu, Pip;
P2: Arg, His, Lys, 4-PyrAla;
P3: Cit; Arg, His, Ile, Tyr, Trp, Pro, Glu, Asn, Asp, Lys, Ala, Leu, Val,
4F-Phe, Met, Ser, Thr, Gin, Tyr;
P4: Val, Phe, Tyr, t-BuG, Cys, Ser, Dab, Glu;
P5: Arg, Dab, Ser, (EA)G;
P6: Pro, Gly, Phe, Val, Cit, Ala;
P7: °Pro, Pro, Gly, Val;
P8: Arg, Tyr, Trp, Thr, 4F-Phe, Dab, 4-PyrAla, Isora, (Im)G, Cit, His,
IpegDab, °Pro;
P9: Arg, (Pip)G, (EA)G, Orn, Pro;
P10: 2-Nal, Trp, Tyr;
Pil: Phe, Tyr, Val, t-BuG, Cys, Asn, Glu, Dab, Arg;
P12: Tyr, Cit;
P13: Cit, Gin, Arg, His, Tyr, Asn, Asp, Lys, Ala, Ser, Leu, Met, NMeGly, Thr, Cys; og
P14: Lys, Glu, Gin, Asn, Asp, Ala, Ser, NMeK;
med det forbehold at
- aminosyreresiduet i Pl er Pip eller Gly; og/eller
- aminosyreresiduet i P3 er Glu, Asn, Asp, Thr eller Gin; og/eller
- aminosyreresiduet i P4 er Cys, Ser, eller Glu; og/eller
- aminosyreresiduet i P5 er Ser eller (EA)G; og/eller
- aminosyreresiduet i P6 er Phe, Val, eller Ala; og/eller
- aminosyreresiduet i P7 er Val, Pro, eller<D>Pro; og/eller
- aminosyreresiduet i P8 er Tyr, Trp, 4F-Phe, 4-PyrAla, (Im)G, His eller<D>Pro; og/eller
- aminosyreresiduet i P9 er (EA)G; og/eller
- aminosyreresiduet i P10 er Val eller t-BuG; og/eller
- aminosyreresiduet i P12 er Tyr eller Cit; og/eller
- aminosyreresiduet i P13 er Glu, Gin, Asp, Asn, Ser, Thr, Cys, eller NMeGly; og/eller
- Cys på P4 og Pl 1 danner en disulfidbro; og/eller
- Glu på P4 og Dab på Pl 1 danner en laktambro; og/eller
- Dab på P4 og Glu på Pl 1 danner en laktambro.
Særlig foretrukne P-peptidohermere i henhold til oppfinnelsen inkluderer de beskrevet i eksemplene 21, 22, 38, 45, 51, 52, 53, 55, 56, 60, 61, 68, 75, 84, 85, 87, 101, 102, 105, 110, 120, 132, 147, 151, 152 og 160.
Fremgangsmåtene i henhold til oppfinnelsen kan fordelaktig utføres som parallell matrisesynteser for å gi bibliotek av templat-fikserte P-hårnålpeptidohermere med ovennevnte generelle formel I. Slike parallellsynteser tillater en å oppnå matriser av tallrike (normalt 24-192, typisk 96) forbindelser med generell formel I med høyt utbytte og definert renhet mens dannelsen av dimere og polymere biprodukter minimaliseres. Det riktige valg av den funksjonaliserte faste understøttelse (dvs. fast understøttelse pluss linkermolekyl), templater og sete for syklisering spiller derved nøkkelroller.
Den funksjonaliserte faste understøttelse er egnet avledet fra polystyren tverrbundet med fortrinnsvis 1-5 % divinylbenzen; polystyren belagt med polyetylenglykol avstandsmolekyler (Tentagel<R>); og polyakrylamidharpikser (se også Obrecht, D.; Villalgordo, J.-M. "Solid Supported Combinatorial and Parallel Synthesis of Small-Molecular-Weight Compound Libraries", Tetrahedron Organic Chemistry Series, vol. 17, Pergamon, Elsevier Science, 1998).
Den faste understøttelsen blir funksjonalisert ved hjelp av en linker, dvs. et bifunksjonelt avstandsmolekyl som inneholder på den ene enden en forankringsgruppe for tilfesting til den faste understøttelse, og på den annen side en selektivt spaltbar funksjonell gruppe brukt for de påfølgende kjemiske transformasjoner og avspaltningsprosedyrer. Med hensikten i foreliggende oppfinnelse er to typer av linkere brukt: Type 1 linkere er konstruert for å frigjøre amidgruppene under sure betingelser (Rink H, Tetrahedron Lett. 1987, 28, 3783-3790). Linkere av denne typen danner amider av karboksylgruppen av aminosyrer; eksempler på harpikser funksjonalisert ved slike linkerstrukturer inkluderer 4-[(((2,4-dimetoksyfenyl)Fmoc-aminometyl)fenoksyacetamido) aminometyl] PS harpiks, 4-[(((2,4-dimetoksyfenyl)Fmoc-aminometyl)fenoksyacetamido) aminometyl]-4-metylbenzydrylamin PS harpiks (Rink amid MBHA PS Resin), og 4-[(((2,4-dimetoksyfenyl)Fmoc-aminometyl)fenoksyacetamido) aminometyl] benzhydrylamin PS-harpiks (Rink amid BHA PS resin). Fortrinnsvis er understøttelsen avledet fra polystyren tverrbundet med, mest foretrukket 1-5 % divinylbenzen og funksjonalisert ved hjelp av 4-(((2,4-dimetoksyfenyl)Fmoc-aminometyl)fenoksyacetamido) linker.
Type 2 linkere er konstruert til eventuelt å frigjøre karboksylgruppen under sure betingelser. Linkere av denne typen danner syrelabile estere med karboksylgruppen til aminosyrene, vanligvis av syre-labilt benzyl, benzhydryl og tritylestere; eksempler på slike linkerstrukturer inkluderer 2-metoksy-4-hydroksymetylfenoksy (Sasrin<R>linker), 4-(2,4-dimetoksyfenyl-hydroksymetyl)-fenoksy (Rink linker), 4-(4-hydroksymetyl-3-metoksyfenoksy)smørsyre (HMPB linker), trityl og 2-klortrityp. Fortrinnsvis er understøttelsen avledet fra polystyren tverrbundet med mest foretrukket 1-5 %, divinylbenzen og funksjonalisert ved hjelp av 2-klorotrityllinker.
Når de utføres som parallell matrisesynteser kan fremgangsmåtene i henhold til oppfinnelsen fordelaktig utføres som beskrevet heri nedenfor, men det vil øyeblikkelig bli klart for de med kunnskap på området hvordan disse prosedyrene måtte bli modifisert i tilfelle det er ønsket å syntetisere én enkelt forbindelse med ovennevnte formel I.
Et antall reaksjonskar (normalt 24-192, typisk 96) lik det totale antall av forbindelser som skal syntetiseres ved parallellmetoden blir opplastet med 25-1000 mg, fortrinnsvis 100 mg, av den egnede funksjonaliserte faste understøttelsen, fortrinnsvis 1-3 % tverrbundet polystyren eller Tentagel-harpiks.
Oppløsningsmidlet som skal anvendes må være i stand til å svelle harpiksen og inkluderer men er ikke begrenset til diklormetan (DCM), dimetylformamid (DMF), N-metylpyrrolidon (NMP), dioksan, toluen, tetrahydrofuran (THF), etanol (EtOH), trifluoretanol (TFE), isopropylalkohol og liknende. Oppløsningsmiddelblandinger som inneholder minst én komponent et polart oppløsningsmiddel (f.eks. 20 % TFE/DCM, 35 % THF/NMP) er gunstig for å sikre høy reaktivitet og solvatisering av de harpiksbundne peptidkjeder (Fields, G. B., Fields, C. G., J. Am. Chem. Soc. 1991, 113, 4202-4207).
Med utviklingen av forskjellige linkere som frigjør den C-terminale karboksylsyregruppen under milde sure betingelser, som ikke påvirker de syrelabile grupper som beskytter funksjonelle grupper i sidekjedene, har et betydelig fremskritt blitt gjort i syntesen av beskyttede peptidfragmenter. Den 2-metoksy-4-hydroksybenzylalkohol-avledede linker (Sasrin<R->linker, Mergler et al., Tetrahedron Lett. 1988, 29, 4005-4008) er spaltbar med fortynnet trifluoreddiksyre (0,5-1 % TF A i DCM) og er stabil for Fmoc avbeskyttelsesbetingelser under peptidsyntese, Boc/tBu-basert ytterligere beskyttende grupper er kompatible med dette beskyttelsesskjema. Andre linkere som er egnet for fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen inkluderer den supersyrelabile 4-(2,4-dimetoksyfenyl-hydroksymetyl)-fenoksylinker (Rink linker, Rink, H. Tetrahedron Lett. 1987, 28, 3787-3790), hvor fjerning av peptidet krever 10 % eddiksyre i DCM eller 0,2 % trifluoreddiksyre i DCM; hvor 4-(4-hydroksymetyl-3-metoksyfenoksy)smørsyre-avledet linker (HMPB-linker, Florsheimer & Riniker, Peptides 1991, 1990, 131), som også spaltet med 1 % TFA/DCM for å gi et peptidfragment som inneholder alle syrelabile sidekjedebeskyttende grupper; og i tillegg den 2-klortritypkloridlinker (Barlos et al, Tetrahedron Lett. 1989, 30, 3943-3946), som tillater peptidavløsningen ved å bruke en blanding av iseddiksyre/trifluoretanol/DCM (1:2:7) i 30 min.
Egnede beskyttede grupper for aminosyrer og henholdsvis for deres residuer er f.eks.
for aminogruppen (som er tilstede f.eks. også i sidekjeden til lysin)
Cbz benzyloksykarbonyl
Boe tert.-butyloksykarbonyl
Fmoc 9-fluprenylmetoksykarbonyl
Alloc allyloksykarbonyl
Teoc trimetylsilyletoksykarbonyl
Tcc trikloretoksykarbonyl
Nps o-nitrofenylsulfonyl;
Trt trifenylmetyl eller trityl
for karboksylgruppen (som tilstede f.eks. også i sidekjeden til asparagin- og glutaminsyre) ved konversjon til estere med alkoholkomponentene
tBu tert.-butyl
Bn benzyl
Me metyl
Ph fenyl
Pac fenacyl
allyl
Tse trimetylsilyletyl
Tee trikloretyl;
for guanidinogruppen (som tilstede f.eks. i sidekjeden til arginin)
Pmc 2,2,5,7,8 -pentamety lkroman-6 - sulfony 1
Ts tosyl (dvs. p-toluensulfonyl)
Cbz benzyloksykarbonyl
Pbf pentamety ldihydrobenzofuran-5 -sulfonyl
for hydroksygruppen (som er tilstede f.eks. på sidekjeden til treonin og serin)
tBu tert.-butyl
Bn benzyl
Trt trityl
og for merkaptogruppen (som tilstede f.eks. i sidekjeden til cystein)
Acm acetamidometyl
tBu tert.-butyl
Bn benzyl
Trt trityl
Mtr 4-metoksytrityl.
De 9-fluorenylmetoksykarbonyl- (Fmoc)-beskyttede aminosyrederivater er fortrinnsvis brukt som byggeblokker for konstruksjon av de demplatfikserte P-hårnålløkkehermere med formel I. For avbeskyttelse, dvs. avspaltning av Fmoc-gruppen kan 20 % piperidin i DMF eller 2 % DBU/2 % piperidin i DMF anvendes.
N-substituerte glysinderivater (type I) brukt som byggeblokker for konstruksjon av visse forbindelser med formel I er avledet fra 9-fluorenylmetoksykarbonyl- (Fmoc)-beskyttede aminosyrederivater eller alternativt bygget opp i to trinn fra avspaltningsgruppeholdige glysinforløpere, så som brom, klor eller jodeddiksyre, og egnede primære aminbyggeblokker NH2-R<86>. Det første syntesetrinnet består av tilfesting av avspaltningsgruppeholdig acetylerende middel, så som bromeddiksyre, til harpiksbundet mellomprodukt gjennom dannelse av amidbinding. Det andre reaksjonstrinn - den nukleære forskyvningen - blir utført ved å bruke de primære aminbyggeblokkene, mens residuene er hvis nødvendig egnet beskyttet med grupper som beskrevet ovenfor for sidekjeder til aminosyrer.
For inkorporering av N-substituerte glysinderivater som byggeblokker i templatfikserte P-hårnålløkkehermere blir den generelle synteseprosedyren for å sette sammen hårnålhermerne brukt som beskrevet heri.
Mengden av reaktant, dvs. aminosyrederivatet er vanligvis 1-20 ekvivalenter basert på milliekvivalenter pr. gram (mekv/g) opplasting på den funksjonaliserte faste understøttelsen (typisk 0,1-2,85 mekv/g for polystyrenharpikser) opprinnelig veid inn i reagensrøret. Ytterigere ekvivalenter av reaktanter kan anvendes, hvis nødvendig, for å drive reaksjonen til fullstendiggjørelse på en rimelig tid. Reagensrørene blir i kombinasjon med holderblokken og renrøret gjeninnsatt i reservoarblokken og apparatet blir festet sammen. Gassgjennomstrømningen gjennom grenrøret er igangsatt for å tilveiebringe et kontrollert miljø, f.eks. nitrogen, argon, luft og liknende. Gassgjennomstrømningen kan også oppvarmes eller avkjøles før gjennomstrømning gjennom grenrøret. Oppvarming eller avkjøling av reaksjonsbrønnene blir oppnådd ved å varme opp reaksjonsblokken eller avkjøle eksternt med isopropanol/tørris og liknende for å foreta de ønskede syntetiske reaksjoner. Risting blir utført ved risting eller magnetisk omrøring (i reagensrøret). De foretrukne arbeidsstasjoner (uten imidlertid å være begrenset dertil) er Labsourses Combi-chem stasjon og MultiSyn Techs-Syro syntetiseringsanordning.
Amidbindingsdannelse krever aktivering av a-karboksylgruppen for acyleringstrinnet. Når denne aktiveringen blir utført ved hjelp av de vanlig brukte karbodiimider så som disykloheksylkarbodiimid (DCC, Sheehan & Hess, J. Am. Chem. Soc. 1955, 77, 1067-1068) eller diisopropylkarbodiimid (DIC, Sarantakis et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1976, 73, 336-342), er det resulterende disykloheksylurea og diisopropylurea uoppløselige og henholdsvis oppløselige i oppløsningsmidlene generelt brukt. I en variant av karbodiimidmetoden blir 1 -hydroksybenzotriazol (HOBt, Konig & Geiger, Chem. Ber 1970, 103, 788-798) inkludert som en tilsetning til koblingsblandingen. HOBt forhindrer dehydrering, undertrykker racemisering av de aktiverte aminosyrer og virker som en katalysator for å forbedre de langsomme koblingsreaksjoner. Visse fosfoniumreagenser er blitt brukt som direkte koblingsreagenser, så som benzotriazol-l-yl-oksy-tris-(dimetylamino)-fosfoniumheksafluorfosfat (BOP, Castro et al., Tetrahedron Lett. 1975, 14, 1219-1222; Synthesis, 1976, 751-752) eller benzotriazol-1 -yl-oksy-tris-pyrrolidino-fosfoniumheksafluorfosfat (Py-BOP, Coste et al., Tetrahedron Lett. 1990, 31, 205-208), eller 2-(lH-benzotriazol-l-yl)l,l,3,3-tetrametyluroniumterafluorborat (TBTU), eller heksafluorfosfat (HBTU, Knorr et al., Tetrahedron Lett. 1989, 30, 1927-1930); disse fosfoniumreagensene er også egnet for in situ dannelse av HOBt-estere med de beskyttede amino syr eder ivatene. Mer nylig har difenoksyfosforylazid (DPPA) eller 0-(7-aza-benzotriazol-l-yl)-N,N,N',N'-tetrametyluroniumtetrafluorborat (TATU) eller 0-(7-aza-benzotriazol-l-yl)-N,N,N',N'-tetrametyluroniumtetrafluorborat (TATU) eller 0-(7-aza-benzotriazol-l-yl)-N,N,N',N'-tetrametyluroniumheksafluorfosfat (HATU)/7-aza-l-hydroksybenzotriazol (HOAt, Carpino et al., Tetrahedron Lett. 1994, 35, 2279-2281) også blitt brukt som koblingsreagenser.
På grunn av det faktum at nesten kvantitative koblingsreaksjoner er essensielle er det ønskelig å ha eksperimentelt bevis for fullstendiggjørelse av reaksjonene. Ninhydrintesten (Kaiser et al., Anal. Biochemistry 1970, 34, 595), hvor ved positiv kolorimetrisk respons til en porsjon av harpiksbundet peptid angir kvalitativt nærvær av det primære amin, kan lett og hurtig utføres etter hvert koblingstrinn. Fmoc-kjemi tillater den spektrofotometriske deteksjon av Fmoc-kromoforen når den er frigjort med basen (Meienhofer et al., Int. J. Peptide Protein Res. 1979, 13, 35-42).
Det harpiksbundne mellomprodukt i hvert reaksjonsrør blir vasket fritt for overskudd av bibeholdte reagenser, av opp løsningsmidler og av biprodukter ved gjentatte eksponeringer til rene oppløsningsmidler ved én av de to følgende metoder: 1) Reaksjonsbrønnene blir fylt med oppløsningsmiddel (fortrinnsvis 5 ml), reaksjonsrørene, i kombinasjon med holdeblokken og grenrøret blir senket ned og ristet i 5-300 minutter, fortrinnsvis 15 minutter, og avrent ved tyngdekraft etterfulgt av gasstrykk anvendt gjennom grenrørinnløpet (mens utløpet lukkes) for å presse ut oppløsningsmidlet; 2) Grenrøret blir fjernet fra holdeblokken, porsjoner av oppløsningsmiddel (fortrinnsvis 5 ml) blir tilført gjennom toppen av reagensrørene og avrent ved tyngdekraften gjennom et filter inn i et mottakerkar så som et reagensrør eller ampulle.
Begge de ovennevnte vaskeprosedyrer ble gjentatt opptil ca. 50 ganger (fortrinnsvis ca. 10 ganger), under overvåking av effektiviteten til reagenset, oppløsningsmidlet og fjerning av biprodukt ved fremgangsmåte såom TLC, GC eller inspeksjon av vaskingene.
Den ovenfor beskrevne fremgangsmåte til å reagere den harpiksbundne forbindelse med reagenser i reaksjonsbrønnene etterfulgt av fjerning av overskuddsreagenser, biprodukter og oppløsningsmidler blir gjentatt ved hver påfølgende transformasjon inntil det endelige harpiksbundne fullt beskyttede lineære peptidet er oppnådd.
Før dette fullt beskyttede lineære peptidet er avspaltet fra den faste understøttelsen er det mulig hvis ønsket selektivt å avbeskytte én eller flere beskyttede funksjonelle grupper tilstede i molekylet og egnet substituere de reaktive grupper således frigjort. På denne måte må den funksjonelle gruppe(r) det dreier seg om initielt være beskyttet av en beskyttende gruppe som selektivt kan fjernes uten å påvirke de gjenværende beskyttende gruppene tilstede. Alloc (allyloksykarbonyl) er et eksempel på en slik aminobeskyttende gruppe som kan selektivt fjernes, f.eks. ved hjelp av Pd<0>og fenylsilan i CH2C12, uten å påvirke de gjenværende beskyttende gruppene, så som Fmoc, tilstede i molekylet. Den reaktive gruppen som således frigjøres kan deretter behandles med et middel som er egnet til å innføre den ønskede substituent. Således kan f.eks. en aminogruppe acyleres ved hjelp av et acyleringsmiddel tilsvarende acylsubstituenten som skal innføres. For dannelsen av pegylerte aminosyrer så som IPegK, eller SPegK, er fortrinnsvis en oppløsning av 5 ekvivalenter av HATU (N-[(dimetylamino)-lH-l,2,3-triazolo[4,5-b]pyridin-l-ylmetylen]-N-metylmetanaminiumheksafluorfosfat N-oksid) i tørr DMF og en oppløsning på 10 ekvivalenter av DIPEA (diisopropyletaylamin) i tørr DMF og 5 ekvivalenter av 2-[2-(2-metoksyetoksy)etoksy]eddiksyre (lPeg) og, henholdsvis 2-(2-metoksyetoksy)eddiksyre (sPeg), blir applisert til den frigjorte aminogruppen til den egnede aminosyresidekjeden i 3 timer. Prosedyren blir deretter gjentatt i ytterligere 3 timer med en fersk oppløsning av reagenser etter filtrering og vasking av harpiksen.
Før dette fullt beskyttede lineære peptidet blir avspaltet fra den faste understøttelsen er det også mulig hvis ønsket å danne (en) intertrådkobling(er) mellom sidekjeder av egnede aminosyreresiduer på motsatte posisjoner i p-trådregionen.
Intertrådkoblinger og deres dannelse er blitt diskutert ovenfor sammen med forklaringene gjort med hensyn på grupper av typen H som kan f.eks. være disulfidbroer dannet av cystein og homocysteinresiduer i motsatte posisjoner på P-tråden; eller laktambroer dannet ved glutamin og asparaginsyreresiduer som kobler ornitin og henholdsvis lysinresiduer eller ved glutaminsyreresiduer som kobler 2,4-diaminosmørsyreresiduer lokalisert på motsatte P-trådposisjoner ved amidbindingsdannelse. Dannelsen av slike intertrådkoblinger kan utføres ved fremgangsmåter velkjent på området.
For dannelsen av disulfidbroer blir fortrinnsvis en oppløsning av 10 ekvivalenter av jodoppløsning applisert i DMF eller i en blanding av CH2Cl2/MeOH i 1,5 time som blir gjentatt i ytterligere 3 timer med en fersk jodoppløsning etter filtrering av jodoppløsningen, eller i en blanding av DMSO og eddiksyreoppløsning, bufret med 5 % NaHC03til pH 5-6 i 4 timer, eller i vann etter justering til pH 8 med ammoniumhydroksidoppløsning ved omrøring i 24 timer, eller i en oppløsning av NMP og tri-n-butylfosfin (fortrinnsvis 50 ekv.).
For dannelsen av laktambroer blir fortrinnsvis en oppløsning av 2 ekvivalenter av HATU (N- [(dimetylamino)-1H-1,2,3-triazolo[4,5 -b]pyridin-1 -ylmetylen]-N-metylmetanaminiumheksafluorfosfat N-oksid) i tørr DMF og en oppløsning av 4 ekvivalenter av DIPEA (diisopropyletaylamin) i tørr DMF blir applisert i 16 timer.
Avspaltning av det fullt beskyttede lineære peptidet fra den faste understøttelsen blir utført ved nedsenking av reagensrørene i kombinasjon med holderblokken og grenrør i reaksjonsbrønner som inneholder en oppløsning av avspaltningsreagensen (fortrinnsvis 3-5 ml). Gassgjennomstrømning, temperaturkontroll, risting og reaksjonsovervåking blir implementert som beskrevet ovenfor og som ønsket for å påvirke avspaltningsreaksjonen. Reaksjonsreagensrørene er i kombinasjon med holderblokken og grenrøret demontert fra reservoarblokken og hevet over oppløsningsnivået men under den øvre leppen til reaksjonsbrønnene, og gasstrykk blir applisert gjennom grenrørinnløpet (mens utløpet lukkes) for effektivt å utstøte den endelige produktoppløsning i reservoarbrønnene. Harpiksen som blir igjen i reagensrørene blir deretter vasket 2-5 ganger som ovenfor med 3-5 ml av et egnet oppløsningsmiddel for å ekstrahere (utvaske) så mye av det avspaltede produkt som mulig. Produktoppløsningene således oppnådd blir kombinert, mens det passes på å unngå kryssblanding. De individuelle oppløsninger/ekstrakter blir deretter manipulert som nødvendig for å isolere de endelige forbindelser. Typiske manipuleringer inkluderer men er ikke begrenset til inndamping, konsentrasjon, væske/væske-ekstraksjon, surgjøring, basisgjøring, nøytralisering eller ytterligere reaksjoner i oppløsning.
Oppløsningene som inneholder fullt beskyttede lineære peptidderivater som er blitt avspaltet fra den faste understøttelse og nøytralisert med en base blir inndampet. Syklisering ble deretter utført i oppløsning som bruker oppløsningsmidler så som DCM, DMF, dioksan, THF og likende. Forskjellige koblingsreagenser som ble nevnt tidligere kan anvendes for sykliseringen. Varigheten av sykliseringen er ca. 6-48 timer, fortrinnsvis ca. 16 timer. Fremdriften av reaksjonen blir fulgt, f.eks. ved RP-HPLC (revers fase høy ytelsesevne væskekromatografi). Deretter blir oppløsningsmidlet fjernet ved inndamping, det fullt beskyttede sykliske peptidderivatet blir oppløst i et oppløsningsmiddel som ikke er blandbart med vann, så som DCM, og oppløsningen blir ekstrahert med vann eller en blanding av vannblandbare oppløsningsmidler, for å fjerne ethvert overskudd av koblingsreagensen.
Alternativt kan avspaltningen og fullstendig avbeskyttelse av det fullt beskyttede peptid fra den faste understøttelsen utføres manuelt i glasskår.
Endelig blir det fullt beskyttede peptidderivatet behandlet med 95 % TF A, 2,5 % H20, 2,5 % TIS eller enhver annen kombinasjon av renovasjonsmidler (scavengers) for å påvirke avspaltning av beskyttende grupper. Avspaltningsreaksjonstiden er vanligvis 30 min. til 12 timer, fortrinnsvis ca. 2,5 timer. De flyktige midlene blir inndampet til tørrhet og råpeptidet blir oppløst i 20 % AcOH i vann og ekstrahert med isopropyleter eller andre oppløsningsmidler som er egnet derfor. Det vandige lag blir oppsamlet og inndampet til tørrhet og det fullt avbeskyttede sykliske peptidderivatet med formel I blir oppnådd som et endeprodukt. Avhengig av dets renhet kan dette peptidderivatet brukes direkte for biologiske assayer, eller det må ytterligere renses f.eks. ved preparerende HPLC.
Som nevnt tidligere er det deretter mulig hvis ønsket å konvertere et fullt avbeskyttet produkt med formel I således oppnådd til et farmasøytisk akseptabelt salt eller å konvertere et farmasøytisk akseptabelt eller uakseptabelt salt således oppnådd til den tilsvarende frie forbindelse med formel I eller inn i et annet farmasøytisk akseptabelt salt. Enhver av disse operasjoner kan utføres ved fremgangsmåter velkjent på området.
Templatutgangsamterialene med formel II brukt i prosessene i henhold til oppfinnelsen pre-utgangsmaterialer derfor, og fremstillingen av disse utgangs- og pre-utgangsmaterialer er beskrevet i internasjonal patentsøknad nr. PCT/EP02/01711 av samme søker, publisert som WO 02/070547 Al.
Utgangsmaterialene med formel H2NR<86>er kjent eller kan fremstilles ved fremgangsmåter som er velkjent på området.
P-hårnålpeptidohermere i henhold til oppfinnelsen kan anvendes i et vidt område av applikasjoner for å forhindre HIV-infeksjoner i friske individer og forsinke eller stoppe viral utvikling i infiserte pasienter, og hvor kreft blir mediert er et resultat av CXCR4 reseptoraktivitet, eller hvor immunologiske sykdommer blir mediert eller er et resultat fra CXCR4 reseptoraktivitet, eller P-hårnålpeptidohermerne i henhold til oppfinnelsen kan brukes til å behandle immunundertrykkelse, eller de kan brukes under aferesesamling av stamceller fra perifert blod.
P-hårnålpeptidohermere kan administreres i seg selv eller kan appliseres som en egnet formulering sammen med bærere, fortynningsmidler eller eksipienter velkjent på området.
Når det anvendes til å behandle eller forhindre HIV-infeksjon eller kreft så som brystkreft, hjernekreft, prostatakreft, lungekreft, nyrekreft, nevroblastom, ikke-hodgkins lymfom, ovariekreft, multippelt myelom, kronisk lymfocyttisk leukemi, pankreatisk kreft, melanom, angiogenese, og hematopoietisk vev; eller inflammatoriske lidelser så som astma, allergisk rinitt, hypersensitivitetslungesykdommer, hypersensitivitetspneumonitt, eosinofil pneumoni, forsinket type hypersensitivitet, interstitielle lungesykdommer (ILD), idiopatisk pulmonal fibrose, ILD assosiert med reumatoid artritt, systemisk lupus erytematosus, ankyloserende sponylitt, systemisk sklerose, Sjøgrens syndrom, systemisk anafylakse eller hypersensitivitetsresponser, legemiddelallergier, reumatoid artritt, psoriatisk artritt, systemisk lupus erytematosus, myastenia gravis, juvenil igangsettende diabetes, glomerulonefritt, autoimmun proiditt, graftavstøtning, inkludert allograftavstøtning eller graft-versus-vertssykdom, inflammatoriske tarmsykdommer, inflammatoriske dermatoser, eller for å behandle immunoundertrykkelse, inkludert immunoundertrykkelse indusert av kjemoterapi, strålingsterapi eller graft-transplanteringsavstøtning, kan P- hårnålpeptidohermerne administreres enkelt, som blandinger av flere P-hårnålpeptidohermere i kombinasjon med andre anti-HIV-midler, eller antimikrobielle midler eller antikreftmidler eller antiinflammatoriske midler, eller i kombinasjon med andre farmasøytisk aktive midler, p-hårnålpeptidohermere kan administreres i seg selv som farmasøytiske sammensetninger.
Farmasøytiske sammensetninger som omfatter p-hårnålpeptidohermere i henhold til oppfinnelsen kan fremstilles ved hjelp av konvensjonell blanding, oppløsning, granulering, fremstilling av belagte tabletter, pulverisering, emulgering, innkapsling, innfanging eller lyofiliseringsprosesser. Farmasøytiske sammensetninger kan formuleres på konvensjonell måte ved å bruke én eller flere fysiologisk akseptable bærere, fortynningsmidler, eksipienter eller hjelpemidler som fasiliterer prosessering av de aktive P-hårnålpeptidohermerne i preparater som kan anvendes farmasøytisk. Korrekt formulering avhenger av den valgte administrasjonsmetoden.
For topisk administrasjon kan p-hårnålpeptidohermere i henhold til oppfinnelsen formuleres som oppløsninger, geler, salver, kremer, suspensjoner, etc. som er velkjent på området.
Systemiske formuleringer inkluderer de konstruert for administrasjon ved injeksjon, f.eks. subkutan, intravenøs, intramuskulær, intratekal eller intraperitoneal injeksjon, så vel som de konstruert for transdermal, transmukosal, oral eller pulmonal administrering.
For injeksjoner kan P-hårnålpeptidohermere i henhold til oppfinnelsen formuleres i adekvate oppløsninger, fortrinnsvis i fysiologisk kompatible buffere så som Hanks oppløsning, Ringers oppløsning eller fysiologisk saltoppløsning. Oppløsningene kan inneholde formuleringsmidler så som midler for suspensjon, stabilisering og/eller dispergering. Alternativt kan p-hårnålpeptidohermerne i henhold til oppfinnelsen være i pulverform i kombinasjon med en egnet bærer, f.eks. sterilt pyrogenfritt vann før anvendelse.
For transmukosal administrering blir gjennomtrengningsmidler som er egnet for barrieren som skal gjennomtrenges brukt i formuleringen som kjent på området.
For oral administrering kan forbindelsene lett formuleres ved å kombinere de aktive p-hårnålpeptidohermerne i henhold til oppfinnelsen med farmasøytisk akseptable bærere velkjent på området. Slike bærere gjør det mulig for p-hårnålpeptidohermerne i henhold til oppfinnelsen og formuleres som tabletter, piller, drasjeer, kapsler, væsker, geler, sirup, slurry, suspensjoner etc. For oralt inntak av en pasient som skal behandles. For orale formuleringer så som f.eks. pulvere, kapsler og tabletter, inkluderer egnede eksipienter fyllmaterialer så som sukre, så som laktose, sukrose, mannitol og sorbitol; cellulosepreparater så som maisstivelse, hvetestivelse, risstivelse, potetstivelse, gelatin, tragakantgummi, metylcellulose, hydroksypropylmetylcellulose, natriumkarboksymetylcellulose, og/eller polyvinylpyrrolidon (PVP); granulerende midler, og bindemidler. Hvis ønsket kan desintegrerende midler tilføyes så som tverrbundet vinylpyrrolidoner, agar eller alginsyre eller salt derav, så som natriumalginat. Hvis ønsket kan faste doseringsformer være sukkerbelagt eller enterisk belagt ved å bruke standard teknikk.
For orale flytende preparater så som f.eks. suspensjoner, eliksirer og oppløsninger inkluderer egnede bærere eksipienter eller fortynningsmidler vann, glykoler, oljer, alkoholer, etc. I tillegg kan smaksmidler, preserveringsmidler, fargemidler og liknende tilsettes.
For administrering i munnhulen kan sammensetningen ha form av tabletter, sugetabletter, etc. formulert som vanlig.
For administrering ved inhalasjon er p-hårnålpeptidohermerne egnet levert i form av en aerosolspray fra trykkpakker eller en nebulisator, med anvendelse av et egnet drivmiddel, f.eks. diklordifluormetan, diklorfluormetan, karbondioksid eller en annen egnet gass. I tilfelle av trykkaerosol kan doseenheten bestemmes ved å tilveiebringe en ventil for å levere en målt mengde. Kapsler og patroner med f.eks. gelatin for anvendelse i en inhalator eller insuflator kan formuleres slik at det inneholder en pulverblanding av P-hårnålpeptidohermerne i henhold til oppfinnelsen og en egnet pulverbase så som laktose eller stivelse.
Forbindelser kan også formuleres i rektale eller vaginale sammensetninger så som stikkpiller sammen med egnede stikkpillebaser så som kakaosmør eller andre glyserider.
I tillegg til formuleringer beskrevet tidligere kan P-hårnålpeptidohermerne i henhold til oppfinnelsen også formuleres som depotpreparater. Slike lengevirkende formuleringer kan administreres ved implantasjon (f.eks. subkutant eller intramuskulært) eller ved intramuskulær injeksjon. For fremstilling av slike depotpreparater kan p-hårnålpeptidohermerne i henhold til oppfinnelsen formuleres med egnede polymere eller hydrofobe materialer (f.eks. som en emulsjon eller en akseptabel olje) eller ionebytteharpikser, eller som lite oppløselige salter.
I tillegg kan andre farmasøytiske leveringssystemer anvendes så som liposomer og emulsjoner velkjent på området. Visse organiske oppløsningsmidler så som dimetylsulfoksid kan også anvendes. I tillegg kan P-hårnålspeptidohermere i henhold til oppfinnelsen bli levert ved å bruke et forsinket frigjøringssystem, så som semipermeable matriser av faste polymerer som inneholder det terapeutiske middel. Forskjellige materialer for forsinket frigjøring er blitt etablert og er velkjent for de med kunnskap på området. Kapsler med forsinket frigjøring kan, avhengig av deres kjemiske natur, frigjøre forbindelsene over noen uker opptil 100 dager. Avhengig av den kjemiske natur og den biologiske stabilitet til det terapeutiske middel kan ytterligere strategier for proteinstabilisering anvendes.
Idet P-hårnålpeptidohermerne i henhold til oppfinnelsen kan inneholde ladede residuer, kan det inkluderes i enhver av de ovenfor beskrevne formuleringer som sådan eller som farmasøytisk akseptable salter. Farmasøytisk akseptable salter synes å være mer oppløselige i vandige og andre protiske oppløsningsmidler enn de er i de tilsvarende fri former.
P-hårnålpeptidohermere i henhold til oppfinnelsen eller sammensetninger derav vil generelt anvendes i en mengde som er effektiv til å oppnå den ønskede hensikt. Det skal forstås at den anvendte mengden vil avhenge av en spesiell applikasjon.
For topisk administrering til å behandle eller forhindre HIV-infeksjoner kan en terapeutisk effektiv dose bli bestemt ved å benytte f.eks. in vitro assayene tilveiebragt i eksemplene. Behandlingen kan appliseres mens HIV-infeksjonen er synlig, eller til og med når den ikke er synlig. En ordinær fagmann vil være i stand til å bestemme terapeutisk effektive mengder til å behandle topiske HIV-infeksjoner uten unødvendig eksperimentering.
For systemisk administrering kan en terapeutisk effektiv dose estimeres initielt fra in vitro assayer. F.eks. kan en dose formuleres i dyremodeller for å oppnå et sirkulerende P-hårnålspeptidohermerkonsentrasjonsområde som inkluderer IC50som bestemt i cellekultur (dvs. konsentrasjonen av en testforbindelse som er letal for 50 % av cellekulturen), Slik informasjon kan anvendes til mer nøyaktig å bestemme nyttige doser hos mennesker.
Initielle doser kan også bestemmes fra in vivo data, f.eks. dyremodeller som benytter teknikker som er velkjent på området. En som har ordinær kunnskap på området kan lett optimalisere administrering til mennesker basert på dyredata.
Doseringsmengder for applikasjoner så som anti-HIV-midler kan justeres individuelt for å tilveiebringe plasmanivåer av p-hårnålpeptidohermere i henhold til oppfinnelsen som er tilstrekkelig til å opprettholde den terapeutiske virkning. Terapeutisk effektive serumnivåer kan oppnås ved å administrere et flertall av doser hver dag.
I tilfelle av lokal administrering eller selektivt opptak kan den effektive lokale konsentrasjonen av p-hårnålspeptidohermere i henhold til oppfinnelsen ikke relateres til plasmakonsentrasjonen. En med ordinær kunnskap på området vil være i stand til å optimalisere terapeutisk effektive lokale doser uten unødvendig eksperimentering.
Mengden av P-hårnålpeptidohermere administrert vil selvfølgelig være avhengig av personen som blir behandlet, ved personens vekt, alvorligheten av sykdommen, administrasjonsmåten og vurderingen til den behandlende lege.
Anti-HIV-terapi kan gjentas periodisk mens infeksjoner er detekterbare eller til og med når de ikke er detekterbare. terapien kan tilveiebringes alene eller i kombinasjon med andre legemidler, så som f.eks. andre anti-HIV-midler eller anti-kreftmidler, eller andre antimikrobielle midler.
Normalt vil en terapeutisk effektiv dose av P-hårnålpeptidohermere beskrevet heri tilveiebringe terapeutisk virkning uten å forårsake hovedsakelig toksisitet.
Toksisitet av p-hårnålpeptidohermere i henhold til oppfinnelsen kan bestemmes ved standard farmasøytiske fremgangsmåter i cellekulturer eller i eksperimentelle dyr, f.eks. ved å bestemme LD50(dosen som er letal for 50 % av populasjonen) eller LDioo(dosen som er letal for 100 % av populasjonen). Doseforholdet mellom toksisk og terapeutisk virkning er den terapeutiske indeks. Forbindelser som utviser høye terapeutiske indekser er foretrukket. Dataene oppnådd fra disse cellekulturassayene og dyrestudiene kan anvendes til å formulere et doseområde som ikke er toksisk for anvendelse hos mennesker. Dosen til P-hårnålpeptidohermere i henhold til oppfinnelsen ligger fortrinnsvis innenfor et område av sirkulerende konsentrasjoner som inkluderer den effektive dose med liten eller ingen toksisitet. Dosen kan variere med området avhengig av den anvendte doseform og administrasjonsruten benyttet. Den nøyaktige formuleringen, administrasjonsrute og dose kan velges av den individuelle lege i lys av pasientens tilstand (se f.eks. Fingel et al., 1975, i: The Pharmacological Basis ofTherapeutics, kapittel 1, side 1).
De følgende eksempler illustrerer oppfinnelsen i mer detalj, men er ikke ment å begrense dens område på noen måte. De følgende forkortelser er brukt i eksemplene: HBTU: 1-benzotriazol-l-yl-tetrametylurouniumheksafluorfosfat (Knorr et al., Tetrahedron Lett. 1989, 30, 1927-1930);
HOBt: 1-hydroksybenzotriazol;
DIEA: diisopropyletylamin;
HOAT: 7-aza-l -hydroksybenzotriazol;
HATU: 0-(7-aza-benzotriazol-1 -yl)-N,N,N',N'-tetrametyluroniumheksafluorofosfat (Carpino et al. Tetrahedron Lett. 1994, 35, 2279-2281).
Eksempler
1. Peptidsyntese
Kobling av den første beskyttede aminosyreresidu til harpiksen
0,5 g av 2-klortritylkloridharpiks (Barlos et al. Tetrahedron Lett. 1989, 30, 3943-3946)
(0,83 mMol/g, 0,415 mmol) ble fylt i en tørket flaske. Harpiksen ble suspendert i CH2CI2(2,5 ml) og tillatt å svelles ved romtemperatur under konstant omrøring i 30 min. Harpiksen ble behandlet med 0,415 mMol (1 ekv.) av det første egnede beskyttede aminosyreresiduet (se nedenfor) og 284 ul (4 ekv.) av diisopropyletylamin (DIEA) i CH2CI2(2,5 ml), ble blandingen ristet i 25°C i 4 timer. Harpiksfargen forandret seg til purpur og oppløsningen forble gulaktig. Harpikset ble ristet (CH2Cl2/MeOH/DIEA: 17/2/1), 30 ml i 30 min.; deretter vasket i følgende rekefølge med CH2C12(lx), DMF (lx), CH2C12(lx), MeOH (lx), CH2CI2(lx), MeOH (lx), CH2C12(2x), Et20 (2x) og tørket under vakuum i 6 timer. Opplasting var typisk 0,6-0,7 mMol/g.
Følgende forlastede harpikser ble fremstilt: Fmoc-ProO-klortritylharpiks, Fmoc-<D>ProO-klortritylharpiks, og Fmoc-S-(4-S-Alloc-amino)-ProO-klortritylharpiks.
Syntese av det fullt beskyttede peptidfragment
Syntesen ble utført ved å bruke en Syro-peptidsyntetiseringsanordning (Multisyntech) ved å bruke 24-96 reaksjonskar. I hvert kar ble det plassert 60 mg (vekten av harpiksen før opplasting) av de ovennevnte harpiks. De følgende reaksjonssykler ble programmert og utført:
Trinnene 3-6 er gjentatt for hver aminosyre.
Pegylering av sidekjedeaminofunksjoner med 2-[ 2-( 2- metoksyetoksy) etoksy] eddiksyre og 2-( 2- metoksyetoksy) eddiksyre
Harpiksen (0,040 mmol) som inneholder peptidet ble svellet i 5 ml fersk destillert CH2CI2i 30 min. og deretter ble palladiumkatalysatoren Pd(PPh3)4, 14 mg, 0,3 ekv., tilsatt etterfulgt av PhSiH3, 0,8 mmol, 20 ekv. Harpiksen ble ristet i 2 timer og reaksjonsoppløsningen ble avfiltrert. Reaksjonen ble gjentatt igjen ved å anvende den samme mengde av reagenser og etter 2 timer ble harpikset vasket med CH2CI2og DMF og avslutningsvis med Et20.
Harpiksen ble igjen svellet i fersk destillert CH2CI2(2 ml) i 30 min., oppløsningsmidlet ble filtrert av og harpiksen svellet i DMF i 1 time. En oppløsning av DIPEA (10 ekv.) i 1 ml av DMF ble tilsatt etterfulgt av tilsetting av 2-[2-(2-metoksyetoksy)etoksy]eddiksyre eller 2-(2-metoksyetoksy)eddiksyre) (5 ekv.) og avslutningsvis med en oppløsning av HATU (5 ekv.) i 1 ml DMF. Harpiksen ble ristet i 3 timer og reaksjonsoppløsningen ble avfiltrert. Reaksjonen ble gjentatt igjen ved å anvende samme mengde av reagenser og etter 3 timer ble harpiksen vasket med CH2C12og DMF og avslutningsvis med Et20.
Pegyleringsprosedyren ble utført eventuelt, etter syntese av det fullt beskyttede peptidfragment var blitt avsluttet, og deretter etter enten prosedyre A, prosedyre B eller prosedyre C, som beskrevet nedenfor, ble adoptert avhengig av om ingen mellomtrådkoblinger eller disulfid P-trådkoblinger eller laktam P-trådkoblinger skulle dannes.
Prosedyre A: Syklisering og opparbeidelse av ryggradssykliserte peptider
Spalting av det fullt beskyttede peptidfragment
Etter fullstendiggjørelse av syntesen ble harpiksen suspendert i 1 ml (0,39 mmol) av 1 % TFA i CH2CI2(vol/vol) i 3 minutter, filtrert og filtratet ble nøytralisert med 1 ml (1,17 mMol), 3 ekv.) av 20 % DIEA i CH2C12(v/v). Denne fremgangsmåte ble gjentatt to ganger for å sikre at avspaltningen var fullstendig. Filtratet ble inndampet til tørrhet og produktet ble fullt avbeskyttet [avspaltningsblanding som inneholder 95 % trifluoreddiksyre (TFA), 2,5 % vann og 2,5 % triisopropylsilan (TIS)] som skal analyseres ved revers fase-HPLC (kolonne Ci8) og ESI-MS for å overvåke effektiviteten til den lineær peptidsyntese.
Syklisering av det lineære peptid
100 mg av det fullt beskyttede lineære peptid ble oppløst i DMF (9 ml, kons. 10 mg/ml). Deretter ble 41,8 mg (0,110 mMol, 3 ekv.) av HATU, 14,9 mg (0,110 mMol, 3 ekv.) av HOAt og 1 ml (0,584 mMol) av 10 % DIEA i DMF (vol/vol) ble tilsatt, og blandingen ble spunnet ved 20°C i 16 timer og deretter konsentrert under høyt vakuum. Residuen ble oppdelt mellom CH2C12og H20/CH3CN (90/10: vol/vol). CH2Cl2-fasen ble inndampet for å gi det fullt beskyttede sykliske peptid.
Avbeskyttelse og rensing av det sykliske peptid
Det oppnådde sykliske peptid ble oppløst i 1 ml av spaltingsblandingen som inneholder 95 % trifluoreddiksyre (TFA), 2,5 % vann og 2,5 % triisopropylsilan (TIS). Blandingen ble etterlatt til henstand ved 20°C i 2,5 timer og deretter konsentrert under vakuum. Residuet ble oppløst i en oppløsning av H20/eddiksyre (75/25 :vol/vol) og blandingen ble ekstrahert med diisopropyleter.
Vannfasen ble tørket under vakuum og deretter ble produktet renset ved preparerende revers fase HPLC.
Etter lyofilisering ble produktene oppnådd som hvite pulvere og analysert av ESI-MS. De analytiske data som omfatter renhet etter preparerende HPLC og ESI-MS er vist i tabell 1, 2 og 3.
Analytisk metode 1:
Analytisk HPLC retensjonstider (RT, i minutter) ble bestemt ved å bruke en VYDAC 218MS5215 kolonne med følgende oppløsningsmidler A (H20 + 0,02 % TFA) og B (CH3CN) og gradienten: 0 min.: 92 % A, 8 % B; 8 min.: 62 % A 38 % B; 9-12 min.: 0 % A, 100 % B.
Analytisk metode 2:
Analytiske HPLC retensjonstider (RT, i minutter) blir bestemt ved å bruke en EX (s.n. 217808-2 kolonne med følgende oppløsningsmidler A (H20 + 0,02 % TFA) og B (CH3CN) og gradienten: 0 min.: 95 % A, 5 % B; 8 min.: 30 % A, 70 % B; 9 min.: 0 % A, 100 % B; 9-12 min.: 95 % A, 5 % B.
Prosedyre B: Syklisering og opparbeidelse av ryggradsykliserte peptider som har disulfid P-trådkoblinger
Dannelse av disulfid ( 5- trådkobling
Etter ferdigstillelse av syntesen ble harpiksen svellet i 3 ml tørr DMF i 1 time. Deretter ble 10 ekv. av jodoppløsning i DMF (6 ml) tilsatt til reaktoren, etterfulgt av omrøring i 1,5 timer. Harpikset ble filtrert og en fersk oppløsning av jod (10 ekv.) i DMF (6 ml) ble tilsatt, etterfulgt av omrøring i ytterligere 3 timer. Harpiksen ble filtrert og vasket med DMF (3x) og CH2C12(3x).
Ryggradsyklisering, avspalting og rensing av peptidet
Etter dannelse av disulfid P-trådkoblingen ble harpiksen suspendert i 1 ml (0,39 mMol) i 1 % TFA i CH2CI2(vol/vol) i 3 min. og filtrert, og filtratet ble nøytralisert med 1 ml (1,17 mMol, 3 ekv.) av 20 % DIEA i CH2C12(vol/vol). Denne prosedyren ble gjentatt to ganger for å sikre at avspaltingen var fullstendig.
De flyktige bestanddeler ble fjernet og 6 ml tørr DMF ble tilsatt til røret. Deretter ble 2 ekv. av HATU i tørr DMF (1 ml) og 4 ekv. av DIPEA i tørr DMF (1 ml) tilsatt til peptidet etterfulgt av omrøring i 16 timer. De flyktige bestanddelene ble inndampet til tørrhet. Det rå sykliserte peptid ble oppløst i 7 ml CH2C12og ekstrahert med 10 % acetonitril i H20 (4,5 ml) tre ganger. CH2Cl2-laget ble inndampet til tørrhet. For å avbeskytte peptidet totalt ble 3 ml av avspaltningcocktail TFA:TIS:H20 (95:2,5:2,5) tilsatt, og blandingen ble holdt i 2,5 timer. De flyktige bestanddelene ble inndampet til tørrhet og råpeptidet ble oppløst i 20 % AcOH i vann (7 ml) og ekstrahert med isopropyleter (4 ml) tre ganger. Det vandige lag ble innsamlet og inndampet til tørrhet og residuet ble renset ved preparerende revers fase
HPLC.
Etter lyofilisering ble produktene oppnådd som hvite pulvere analysert ved ESI-MS analytisk metode 1 eller 2. De analytiske data som omfatter renhet etter preparerende HPLC og ESI-MS er vist i tabellene 1, 2 og 3.
Prosedyre C: Syklisering og opparbeidelse av ryggradsykliserte peptider som har laktam P-trådkoblinger
Dannelse av laktam fi- trådkobling
0,036 mmol av harpiksen ble tatt i en reaktor og svellet i tørr DMF i 1 time. Til dette ble 41,60 mg (1 ekv.) av Pd(PPh3)4og 0,133 ml (30 ekv.) av PhSiH3tilsatt og omrørt natten over. Harpiksen ble filtrert og vasket grundig med DCM og DMF. Harpiksen ble svellet igjen i tørr DMF i 1 time. Til dette ble 1 ml DIPEA-oppløsning i DMF (24,64 ul av DIPEA i 1 ml DMF, 4 ekv.) tilsatt etterfulgt av 1 ml HATU-oppløsning i DMF (27,37 mg av HATU, 2 ekv.) og det endelige volum av reaksjonsblandingen var 7 ml og omrørt natten over. Harpiksen ble vasket grundig med DMF, CH2C12, DMF, CH2C12.
Ryggradsyklisering, avspaltning og rensing av peptidet
Peptidet ble avspaltet fra harpiksen med 1 % TFA i DCM og inndampet til tørrhet og 8 ml av tørr DMF ble tilsatt røret. 2 ekv. av HATU i tørr DMF (1 ml) og 4 ekv. av DIPEA i tørr DMF (1 ml) ble tilsatt peptidet og omrørt i 16 timer. De flyktige bestanddeler ble inndampet til tørrhet. Det rå sykliserte peptid ble oppløst i 7 ml DCM og ekstrahert med 10 % acetonitril i H20 (4,5 ml) tre ganger. DCM-laget ble inndampet til tørrhet.
Det rå sykliserte peptid ble oppløst i 7 ml CH2C12og ekstrahert med 10 % acetonitril i H20 (4,5 ml) tre ganger. CH2Cl2-laget ble inndampet til tørrhet. For å avbeskytte peptidet totalt ble 3 ml avspaltingscocktail TFA:TIS:H20 (95:2,5:2,5) tilsatt, og blandingen ble holdt i 2,5 timer. De flyktige bestanddeler ble inndampet til tørrhet og råpeptidet ble oppløst i 20 % AcOH i vann (7 ml) og ekstrahert med isopropyleter (4 ml) tre ganger. Det vandige lag ble innsamlet og inndampet til tørrhet, og residuet ble renset ved preparerende revers fase
HPLC.
Etter lyofilisering ble produktene oppnådd som hvite pulvere og analysert med ESI-MS analytisk metode 1 eller 2. De analytiske data som omfatter renhet etter preparerende HPLC og ESI-MS er vist i tabell 1, 2 og 3.
Eksempler 15-50 (n=14) er vist i tabell 2. Peptidene ble syntetisert ved å starte med aminosyren Pro som ble overført til harpiksen. Utgangsharpiks var Fmoc-ProO-klorotritylharpiks, som ble fremstilt som beskrevet ovenfor. De lineære peptider ble syntetisert på fast understøttelse i henhold til fremgangsmåten beskrevet ovenfor i følgende sekvens: harpiks-Pro-DPro-P14-P13-P12-Pl 1-P10-P9-P8-P7-P6-P5-P4-P3-P2-P1. Deretter ble de avspaltet fra harpiksen, syklisert, avbeskyttet og renset som angitt i prosedyre A.
HPLC-retensjonstider (minutter) ble bestemt ved å bruke gradientmetode 1 beskrevet ovenfor: Eks. 15 (5,35); Eks. 16 (5,48); Eks. 17 (5,85); Eks. 18 (5,78); Eks. 19 (4,82); Eks. 20 (5,33); Eks. 21 (5,77); Eks. 22 (5,85); Eks. 23 (6,22); Eks. 24 (6,22); Eks. 25 (4,48); Eks. 26 (5,08); Eks. 27 (6,17); Eks. 28 (6,28); Eks. 29 (6,57); Eks. 30 (6,73); Eks. 31 (5,60); Eks. 32 (5,58); Eks. 33 (5,85); Eks. 34 (6,20); Eks. 35 (6,33); Eks. 36 (5,43); Eks. 37 (5,85); Eks. 38 (5,92); Eks. 39 (5,47); Eks. 40 (6,0, 6,37)<*>; Eks. 41 (5,13); Eks. 42 (5,00); Eks. 43 (5,00); Eks. 44 (5,33, 5,67)<*>; Eks. 45 (5,03); Eks. 46 (4,75); Eks. 47 (5,27); Eks. 48 (5,65; 6,08)<*>; Eks. 49 (5,03); Eks. 50 (5,75).
<*>dobbelte topper som viser korrekt MS.
Eksempler 51-115, 117-141, 143-148 (n=14) er vist i tabell 2. Peptidene ble syntetisert ved p starte med aminosyre Pro som ble overført til harpiksen. Utgangsharpiks var Fmoc-ProO-klortritylharpiks, som ble fremstilt som beskrevet ovenfor. De lineære peptider ble syntetisert på fast understøttelse i henhold til fremgangsmåter beskrevet ovenfor i følgende sekvens: harpiks-Pro-DPro-P14-P13-P12-Pl 1-P10-P9-P8-P7-P6-P5-P4-P3-P2-P1. Deretter ble disulfidbroer dannet og peptidene ble avspaltet fra harpiksen, syklisert, avbeskyttet og renset som angitt i fremgangsmåte B.
HPLC-retensjonstider (minutter) ble bestemt for å bruke gradientmetode 1 for eksempler Eks. 51-53, 138-139, for eksempler 54-115, 117-137, 140-141, 143-148 gradientmetode 2, som beskrevet ovenfor: Eks. 51 (4,68); Eks. 52 (4,67); Eks. 53 (5,05); Eks. 54 (3,16); Eks. 55 (3,41); Eks. 56 (3,07); Eks. 57 (2,95); Eks. 58 (2,99); Eks. 59 (3,18); Eks. 60 (3,16); Eks. 61 (3,27); Eks. 62 (2,91), Eks. 63 (2,88); Eks. 64 (2,88); Eks. 65 (2,98); Eks. 66 (3,17); Eks. 67 (2,93); Eks. 68 (2,91); Eks. 69 (2,90); Eks. 70 (2,88); Eks. 71 (3,08); Eks. 72 (3,00); Eks. 73 (3,14); Eks. 74 (3,02); Eks. 75 (2,99); Eks. 76 (3,56); Eks. 77 (3,14); Eks. 78 (3,18); Eks. 79 (3,02); Eks. 80 (3,18); Eks. 81 (3,13); Eks. 82 (3,38); Eks. 83 (3,27); Eks. 84 (3,32); Eks. 85 (3,37); Eks. 86 (3,57); Eks. 87 (3,35); Eks. 88 (3,08); Eks. 89 (3,10); Eks. 90 (3,14); Eks. 91 (3,18); Eks. 92 (3,17); Eks. 93 (3,25); Eks. 94 (3,10); Eks. 95 (3,18); Eks. 96 (3,15); Eks. 97 (3,31); Eks. 98 (3,26); Eks. 99 (3,32); Eks. 100 (3,28); Eks. 101 (3,83); Eks. 102 (3,00); Eks. 103 (3,29); Eks. 104 (2,98); Eks. 105 (2,77); Eks. 106 (2,74); Eks.
107 (3,00); Eks. 108 (2,81); Eks. 109 (2,69, 2,75); Eks. 110 (2,76, 2,82<*>); Eks. 111 (2,73, 2,78); Eks. 112 (2,71); Eks. 113 (2,51); Eks. 114 (2,97); Eks. 115 (2,95); Eks. 117 (2,70); Eks. 118 (2,78); Eks. 119 (2,83); Eks. 120 (2,80); Eks. 121 (3,09), Eks. 122 (3,45); Eks.
123 (2,82); Eks. 124 (3,29); Eks. 125 (3,27); Eks. 126 (3,19); Eks. 127 (3,05); Eks. 128 (3,86); Eks. 129 (4,76); Eks. 130 (4,43); Eks. 131 (4,57); Eks. 132 (4,45); Eks. 133 (4,39); Eks. 134 (4,27); Eks. 135 (4,33); Eks. 136 (2,75); Eks. 137 (2,72); Eks. 138 (4,75); Eks. 139 (4,25); Eks. 140 (4,77); Eks. 141 (3,27); Eks. 143 (3,01); Eks. 144 (3,24); Eks. 145 (2,84); Eks. 146 (2,80); Eks. 147 (2,91); Eks. 148 (2,76).
<*>dobbelte topper som viser korrekt MS.
Eksempel 116 (n=14) er vist i tabell 2. Peptidet ble syntetisert ved å starte med aminosyre Pro som ble overført til harpiksen. Utgangsharpiks var Fmoc-S-(4-S-Alloc-amino)-ProO-klortritypharpiks, som ble fremstilt som beskrevet ovenfor. Det lineære peptid ble syntetisert på fast understøttelse i henhold til fremgangsmåten beskrevet ovenfor i følgende sekvens: harpiks-S-(4-S-Alloc-amino)Pro-DPro-P 14-P13-P12-P11 -P10-P9-P8-P7-P6-P5-P4-P3-P2-P1. Deretter ble pegyleringsprosedyre anvendt ved å bruke 2-[2-(2-metoksyetoksy)etoksy]eddiksyre som resulterer i<D>ProA8"-42 som templat. Deretter ble disulfidbroen dannet og peptidet ble avspaltet fra harpiksen, syklisert, avbeskyttet og renset som angitt i prosedyre B.
HPLC-retensjonstid (minutter) ble bestemt ved å bruke gradientmetode 2 som beskrevet ovenfor: Eks. 116 (3,00).
Eksempel 142 (n=14) er vist i tabell 2. Peptidet ble syntetisert ved å starte med aminosyre Pro som ble overført til harpiksen. Utgangsharpiks var Fmoc-ProO-klortritylharpiks, som ble fremstilt som beskrevet ovenfor. Det lineære peptid ble syntetisert på fast understøttelse i henhold til fremgangsmåte beskrevet ovenfor i følgende sekvens: harpiks-Pro-DPro-P14-P13-P12-Pl 1-P10-P9-Dab-P7-P6-P5-P4-P3-P2-Pl. Deretter ble pegyleringsprosedyren anvendt ved å bruke 2-[2-(2-metoksyetoksy)etoksy]eddiksyre. Deretter ble disulfidbroen dannet og peptidet ble avspaltet fra harpiksen, syklisert, avbeskyttet og renset som angitt i prosedyre B.
HPLC-retensjonstid (minutter) ble bestemt ved å bruke gradientmetode 2 som beskrevet ovenfor: Eks. 142 (3,18).
Eksempel 149 (n=14) er vist i tabell 2. Peptidet ble syntetisert ved å starte med aminosyre Pro som ble overført til harpiksen. Startharpiks var Fmoc-ProO-klortritylharpiks, som ble fremstilt som beskrevet ovenfor. Det lineære peptid ble syntetisert på fast understøttelse i henhold til fremgangsmåte beskrevet ovenfor i følgende sekvens: harpiks-Pro-<D>Gln-P14-P13-P12-P11-P10-P9-P8-P7-P6-P5-P4-P3-P2-P1. Deretter ble disulfidbroen dannet og peptidet ble avspaltet fra harpiksen, syklisert, avbeskyttet og renset som angitt i prosedyre
B.
HPLC-retensjonstid (minutter) ble bestemt ved å bruke gradientmetode 2 som beskrevet ovenfor: Eks. 149 (2,76).
Eksempel 150 (n=14) er vist i tabell 2. Peptidet ble syntetisert ved å starte med aminosyren<D>Pro som ble overført til harpiksen. Startharpiks var Fmoc-ProO-klortritylharpiks, som ble fremstilt som beskrevet ovenfor. Det lineære peptid ble syntetisert på fast understøttelse i henhold til fremgangsmåte beskrevet ovenfor i følgende sekvens: harpiks-DPro-Gly-P 14-P 13-P 12-P 11 -P10-P9-P8-P7-P6-P5-P4-P3-P2-P1. Deretter ble disulfidbroen dannet og peptidet ble avspaltet fra harpiksen, syklisert, avbeskyttet og renset som i prosedyre B.
HPLC-retensjonstid (minutter) ble bestemt ved å bruke gradientmetode 2 som beskrevet ovenfor: Eks. 150 (2,61).
Eksempel 151 (n=14) er vist i tabell 2. Peptidet ble syntetisert ved å starte med aminosyren Pro som ble overført til harpiksen. Utgangsharpiks var Fmoc-ProO-klortritylharpiks, som ble fremstilt som beskrevet ovenfor. Det lineære peptid ble syntetisert på fast understøttelse i henhold til fremgangsmåte beskrevet ovenfor i følgende sekvens: harpiks-Pro-DPro-P14-P13-P12-Pl 1-P10-P9-P8-P7-P6-P5-P4-P3-P2-P1. Deretter ble peptidet avspaltet fra harpiksen, syklisert, avbeskyttet og renset som angitt i prosedyre
A.
HPLC-retensjonstid (minutter) ble bestemt ved å bruke gradientmetode 2 som beskrevet ovenfor: Eks. 151 (2,86).
Eksempler 152-153 (n=14) er vist i tabell 2. Peptidene ble syntetisert ved å starte med aminosyren Pro som ble overført til harpiksen. Startharpiks var Fmoc-ProO-klortritylharpiks, som ble fremstilt som beskrevet ovenfor. De lineære peptidene ble
syntetisert på fast understøttelse i henhold til fremgangsmåte beskrevet ovenfor i følgende sekvens: harpiks-Pro-DPro-P14-P13-P12-Pl 1-P10-P9-P8-P7-P6-P5-P4-P3-P2-P1. Deretter ble laktambroene dannet og peptidene ble avspaltet fra harpiksen, syklisert, avbeskyttet og renset som angitt i prosedyre C.
HPLC-retensjonstid (minutter) ble bestemt ved å brile gradientmetode 2 som beskrevet ovenfor: Eks. 152 (2,87); Eks. 153 (2,87, 2,88<*>).
<*>dobbelte topper som viser korrekt MS.
Eksempler 156-157 (n=18) er vist i tabell 3. Peptidene ble syntetisert ved å starte med aminosyren<D>Pro som ble overført til harpiksen. Startharpiks var Fmoc-ProO-klortritylharpiks, som ble fremstilt som beskrevet ovenfor. De lineære peptider ble syntetisert på fast understøttelse i henhold til fremgangsmåten beskrevet ovenfor i følgende sekvens: harpiks-DPro-Gly-P18-P17-P16-P15-P14-P13-P12-Pl 1-P10-P9-P8-P7-P6-P5-P4-P3-P2-P1. Deretter ble disulfidbroene dannet og peptidene ble avspaltet fra harpiksen, syklisert, avbeskyttet og renset som angitt i prosedyre B.
HPLC-retensjonstider (minutter) ble bestemt ved å bruke gradientmetode 2 som beskrevet ovenfor: Eks. 156 (3,00), Eks. 157 (2,98).
Renhet: %-renhet av forbindelsene etter prep. HPLC: Eks. 156 (95), Eks. 157 (76). Masse: [M+3H]/3: Eks. 156 (845,5), Eks. 157 (848,8).
Eksempler 158-159 (n=18) er vist i tabell 3. Peptidene ble syntetisert ved å starte med aminosyren Pro som ble overført til harpiksen. Startharpiks var Fmoc-ProO-klortritylharpiks, som ble fremstilt som beskrevet ovenfor. De lineære peptider ble syntetisert på fast understøttelse i henhold til fremgangsmåten beskrevet ovenfor i følgende sekvens: harpiks-Pro-Gly-P 18-P17-P16-P15-P14-P 13-P 12-P 11 -P10-P9-P8-P7-P6-P5-P4-P3-P2-P1. Deretter ble disulfidbroene dannet og peptidene ble avspaltet fra harpiksen, syklisert, avbeskyttet og renset som angitt i prosedyre B.
HPLC-retensjonstider (minutter) ble bestemt ved å bruke gradientmetode 2 som beskrevet ovenfor: Eks. 158 (3,41), Eks. 159 (3,25).
Renhet: %-renhet av forbindelsene etter prep. HPLC: Eks. 158 (95), Eks. 159 (83). Masse: [M+3H]/3: Eks. 158 (848,8), Eks. 159 (822,1).
Eksempel 160 (n=18) er vist i tabell 3. Peptidet ble syntetisert ved å starte med aminosyre<D>Pro som ble overført til harpiksen. Startharpiks var Fmoc-<D>ProO-klortritylharpiks, som ble fremstilt som beskrevet ovenfor. Det lineære peptid ble syntetisert på fast understøttelse i henhold til fremgangsmåten beskrevet ovenfor i følgende sekvens: harpiks-DPro-Gly-P 18-P 17-P 16-P 15-P14-P 13-P 12-P 11 -P10-P9-P8-P7-P6-P5-P4-P3-P2-P1. Deretter ble følgende fremgangsmåte benyttet: Peptidet (36 umol) ble avspaltet fra harpiksen med 1 % TFA i CH2CI2. Etter inndamping til tørrhet ble 8 ml tørr DMF tilsatt røret. Deretter ble 2 ekv. av HATU i tørr DMF (1 ml) og 4 ekv. DIPEA i tørr DMF (1 ml) tilsatt og omrøring ble utført i 16 timer. De flyktige bestanddeler ble inndampet til tørrhet. Det rå sykliserte peptid ble oppløst i 7 ml DCM og ekstrahert med 10 % acetonitril i H20 (4,5 ml) tre ganger. Det organiske lag ble inndampet til tørrhet. For å avbeskytte peptidet totalt, ble 3 ml avspaltningscocktail TFA:TIS:H20 (95:2,5:2,5) tilsatt og holdt i 3 timer. De flyktige bestanddelene ble inndampet til tørrhet og råpeptidet ble oppløst i 20 % eddiksyre i vann (7 ml) og ekstrahert med isopropyleter (4 ml) tre ganger. Det vandige laget ble fortynnet opp til 200 ml med vann. pH ble justert til pH 8 med aluminiumhydroksidoppløsning. Reaksjonsblandingen ble ristet i 24 timer. Oppløsningen ble surgjort med eddiksyre til pH 5, inndampet til tørrhet og renset ved
HPLC.
HPLC-retensjonstid (minutter) ble bestemt ved å bruke gradientmetode 2 som beskrevet ovenfor: Eks. 160 (2,92).
Renhet: %-renhet av forbindelsene etter prep. HPLC: Eks. 160 (93)
Masse: [M+3H]/3: Eks. 160 (785,3).
2. Biologiske metoder
2.1. Fremstilling av peptider.
Lyofiliserte peptider ble veiet på en Microbalance (Mettler MT5) og oppløst i sterilt vann til en endelig konsentrasjon på 1 mM med mindre noe annet er angitt. Stamløsninger ble holdt ved +4°C, beskyttet mot lys.
2.2. Ca<2+->assay: CXCR4-antagoniserende aktivitet av peptidene.
Fremgangsmåte 1: 3-4 Mio CXCR4 transfekterte pre-B-celler [se referanser 1, 2 og 3 nedenfor] pr. måling ble resuspendert i 200 ul MSB (20 mM 4-(2-hydroksyetyl)-piperazin-1- etansulfonsyre (HEPES), 136 mM NaCl, 4,8 mM KC1 og 1 mM CaCl2) som inneholder 5 mM D-glukose og ble lastet opp på 0,75 ul av 1 mM Fura-2-acetoksymetylester (Fura-2-AM) i 17 min. ved 37°C. Cellene ble vasket fri for Fura-2-AM med en platesentrifuge og resuspendert i 800 ul MSB som inneholder 5 mM D-glukose. Peptidene som skulle administreres ble fortynnet til en 100 ganger endekonsentrasjon i MSB/0,2 % PPL, og 8 ul ble injisert. [Ca<2+>];-avhengig fluorescensforandring i respons til enkel eller sekvensiell stimulering med peptider ble registrert med et fluorimeter på en eksitasjonsbølgelengde på 340 nM og en endeemisjonsbølgelengde på 510 nM [se ref. 4 nedenfor]. Målinger ble gjort under kontinuerlig omrøring ved 37°C. Signalstyrken ble kalibrert med 3 mM CaCl2/l mM ionomycin (maksimal fura-2-acetoksymetylestermetting) og 10 uM MnCl2(minimal Fura-2- acetoksymetylestermetning) og [Ca<2+>]i-forandringer er presentert i % fura-2-acetoksymetylestermetning. Graden av [Ca<2+>]i-forandringer ble beregnet på basis av de initielle [Ca<2+>]i-forandringene og plottet inn i avhengighet av kjemokinkonsentrasjonen for å oppnå en sigmoidal kurve og bestemme IC50-verdier.
MSB: 20 mM HEPES, 136 mM NaCl, 4,8 mM KC1, 1 mM CaCl2«2H20, pH 7,4. Osmolaritet: 310 mOsm justert med NaOH eller HC1, justert med H20 eller PBS.
MSB pluss: 5 mM D-glukose i MSB (50 mg/50 ml).
Fura 2-acetoksymetylester: 1 mM stamløsning i dimetylsulfoksid.
Metode 2: økninger i intracellulær kalsium ble overvåket ved å bruke en Flexstation 384 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) for å assaye peptidene for CXCR4-antagonisme i en muse pre-B-cellelinje 300-19 stabilt transfektert med human CXCR4 [se referanser 1, 2 og 3 nedenfor]. Cellene ble partiopplastet med kalsium 3 assaysett (Molecular Devices) i assaybuffer (Hanks balanserte saltoppløsning, HBSS, 20 mM HEPES, pH 7,4, 0,1 % BSA) i 1 time ved romtemperatur og deretter ble 200000 merkede celler utdelt i sorte 96 brønner assayplater (Costar nr. 3603). En 20 ganger konsentrert oppløsning av peptid i assaybuffer ble tilsatt cellene og hele platen ble sentrifugert for å utfelle cellene på bunnen av brønnene. Kalsiummobilisering indusert av 10 nM stromaavledet faktor 1 (SDF-1) ble målt i Flexstation 384 (eksitasjon, 485 nM; emisjon, 525 nM) i 90 sekunder. En maksimal forandring i fluorescensrespons over basislinjen ble brukt for å beregne antagonistaktivitet. Dataene for doseresponskurver (antagonistkonsentrasjon versus % maksimum respons) ble tilpasset til en fire parameter logistikkligning ved å bruke SoftmaxPro 4,6 (Molecular Devices), fra hvilke IC5o-verdier ble kalkulert.
2.3. FIGS-Assay™
Assayet ble utført i henhold til referanse 5 nedenfor. Stamoppløsninger av peptidene (10 mM) ble fremstilt ved oppløsning i 10 mM Tris-HCl ved romtemperatur. Stamløsninger ble holdt ved +4°C, lysbeskyttet. Arbeidsoppløsninger ble fremstilt improvisert ved seriefortynninger i fosfatbufret saltoppløsning (PBS) og tilsatt i et endelig volum på 10 ul direkte til cellekulturene. Etter 48 timer av samdyrking ble kulturene skylt med PBS og deretter eksponert til glutaraldehyd/formaldehyd (0,2 %/2 %) i PBS for 5 min. For fotometrisk kvantifisering ble de fikserte kulturer i det påfølgende inkubert med orto-nitro-fenyl-galaktopyranosid (ONPG) som et P-galaktosidasesubstrat, som ble enzymatisk konvertert til det kromofore orto-nitrofenol (ONP). Utlesningen oppnås direkte ved å måle optisk tetthet av brønnene på 405 nm i en iEMS 96-brønners plateleser.
2.4. Cytotoksisk assay
Peptidenes cytotoksisitet på HELA-celler (Acc57) og COS-7-celler (CRL-1651) ble bestemt ved å bruke MTT reduksjonsassayer [se ref. 6 og 7 nedenfor]. Kortfattet var metoden som følger: HELA-celler og COS-7-celler ble sådd med henholdsvis 7,0-IO<3>og 4,5-10<3>celler/brønn og dyrket i 96-brønners mikrotiterplater over 24 timer ved 37°C med 5 % C02. På dette punkt ble tid null (Tz) bestemt ved MTT-reduksjon (se nedenfor). Supernatanten i de gjenværende celler ble kastet og ferskt medium og peptidene i seriefortynninger på 12,5, 25 og 50 uM ble pipettert inn i brønnene. Hver peptidkonsentrasjon ble assayet i triplikat. Inkubasjonen av cellene ble fortsatt i 48 timer ved 37°C ved 5 % C02. Brønnene ble deretter vasket én gang med PBS og deretter 100 ul MTT-reagens (0,5 mg/ml i medium RPMI1640 og, henholdsvis DMEM) ble tilsatt brønnene. Dette ble inkubert ved 37°C i 2 timer og deretter ble mediet aspirert og 100 ul isopropanol ble tilsatt hver brønn. Absorbansen ved 595 nm av det solubiliserte produkt ble målt (OD595peptid). For hver konsentrasjon ble gjennomsnitt beregnet fra triplikater. Prosentandel av vekst ble beregnet som følger: (ODsQspeptid-ODsQsTz-ODsQsTom brønn)/(OD595Tz-OD595Tom brønn) x 100 % og ble plottet for hver peptidkonsentrasjon.
LC50-verdier (letal konsentrasjon, definert som den konsentrasjonen som dreper 50 % av cellene) ble bestemt for hvert peptid ved å bruke trendlinjefunksjonen til EXCEL (Microsoft Office 2000) for konsentrasjonene (50, 25, 12,5 og 0 nm) hvor den tilsvarende vekstprosentandelen og verdien -50, (=TREND(C50:C0, %50:%0,-50)). GI 50 (vekstinhibisjon) konsentrasjonene ble beregnet for hvert peptid ved å bruke en trendlinjefunksjon for konsentrasjonene (50, 25, 12,5 og 0 u.g/ml) som tilsvarer prosentandelene og verdiene 50, (=TREND (C50:C0,%5o:%o,50).
2.5. Cellekultur
"CCR5" celler ble dyrket i DMEM-medium med 4500 mg/ml glukose, 10 % føtalt bovint serum (FBS), supplementert med 50 ul penicillin og 50 ng/ml streptomycin (Pen/Strept.).
Hut/4-3-celler ble opprettholdt i RPMI-medium, 10 % FBS, supplementert med Pen/Strept. og 10 mM HEPES. HELA-celler og CCRF-CEM-celler ble opprettholdt i RPMI1640 pluss 5 % FBS, Pen/Strept. og 2 mM L-glutamin. Cos-7-celler ble dyrket i DMEM-medium med 4500 mg/ml glukose supplementert med 10 % FCS, Pen/Strept. og 2 mM L-glutamin. Alle cellelinjer ble dyrket ved 37°C ved 5 % C02. Cellemedia, mediasupplement, PBS-buffer, HEPES, Pen/Strept., L-glutamin og sera ble kjøpt fra Gibco/(Pailsey, UK). Alle fine kjemikalier kom fra Merck (Darmstadt, Tyskland).
2.6 Hemolyse
Peptidene ble testet for sin hemolytiske aktivitet mot humane røde blodceller (hRBC). Ferske hRBC ble vasket tre ganger med fosfatbufret saltoppløsning (PBS) ved sentrifugering i 10 min. ved 2000 x g. Peptider i en konsentrasjon på 100 uM ble inkubert med 20 % v/v hRBC i 1 time ved 37°C. Den endelige erytrocyttkonsentrasjonen var ca. 0,9xl0<9>celler/ml. En verdi på 0 % henholdsvis 100 % cellelyse ble bestemt ved inkubasjon av hRBC i nærvær av PBS alene og henholdsvis 0,1 % Triton X-100 i H20. Prøvene ble sentrifugert og supernatantene var 20 ganger fortynnet i PBS-buffer og den optiske tetthet (OD) av prøven ved 540 nM ble målt. 100 % lyseverdi (OD540H2O) ga en OD540på ca. 1,3-1,8. Prosent hemolyse ble kalkulert som følger: (OD54opeptid/OD54oH20) x 100 %.
2.7. Kjemotaktisk assay (cellemigreringsassay)
Den kjemotaktiske respons til CCRF-CEM-celler til en gradient av stromacelleavledet faktor la (SDF-1) ble målt ved å bruke engangsassayplater fra Neuroprobe (5 \ i porestørrelse) (Gaitersburg, MD), i henhold til fabrikantens retningslinjer og referanser deri [særlig referanse 8 nedenfor]. Kortfattet ble én 175 cm<2>flaske vasket én gang med Dulbeccos fosfatbufret saltoppløsning (DPBS), og trypsinisert i 10 min. eller inntil cellene ble løftet. Trypsinet ble nøytralisert ved tilsetting av ferskt medium som inneholder serum og cellene ble pelletert, vasket én gang i DPBS, og resuspendert med 1-0,5 X IO<7>celler/ml i RPMI + 0,5 bovint serumalbumin (BSA). 45 ul cellesuspensjon ble blandet med 5 ul av 10 ganger konsentrert PEM peptid fortynnet i samme assaymedium. 35 ul av denne blandingen ble applisert til toppen av assayfilteret. Cellene ble tillatt å migrere (ved 37°C) i bunnkammeret av assayplaten som inneholder 1 nM SDF-1. Etter 4 timer ble filteret fjernet og MTT ble tilsatt de migrerte cellene til en endelig konsentrasjon på 0,5 mg/ml og inkubert i ytterligere 4 timer. Etter merking med MTT ble alt mediet fjernet og 100 ul av isopropanol +10 mM HC1 ble tilsatt cellene. Den optiske absorbansen ved 595 nm (ABS595) ble lest ved å bruke en Tecan Genios plateleser med Magellan programvare. Antall celler migrert ble bestemt ved å sammenligne ABSsQs-verdier mot en standardkurve dannet med et kjent antall celler i assayplaten og ble plottet mot SDF-1-konsentrasjon for å oppnå en sigmoidal kurve og bestemme IC50-verdiene. Verdiene for IC50ble bestemt ved å bruke en Trendline funksjon i Microsoft Excel ved å tilpasse en logaritmisk kurve til gjennomsnittelige datapunkter.
2.8 Plasmastabilitet
405 ul plasma/albuminoppløsning ble plassert i et polypropylen (PP) rør og tilsatt 45 ul av en forbindelse fra en 100 uM oppløsning B, avledet fra 135 ul av PBS og 15 ul av 1 mM peptid i PBS, pH 7,4. 150 ul porsjoner ble overført i individuelle brønner på 10 kDa filterplaten (Millipore MAPPB 1010 Biomax membran). For "0 minutterkontroller": 270 ul PBS ble plassert i et PP-rør og 30 ul av stamløsning B ble tilsatt og spunnet. 150 ul kontrolloppløsning ble plassert i én brønn på filterplaten og tjener som "filtrert kontroll".
Ytterligere 150 ul kontrollopp løsning ble plassert direkte i en mottakerbrønn (reservert for filtrat) og tjener som "ikke-filtrert kontroll". Hele platen inkludert inndampingslokket ble inkubert i 60 min. ved 37°C. Plasmaprøver (rotteplasma: Harlan Sera lab UK, human plasma: Blutspendezentrum Ztirich) ble sentrifugert i minst 2 timer ved 4300 rpm (3500 g) og 15°C for å gi 100 ul filtrat. For "serumalbumin"-prøver (ferskt tilvirket humant albumin: Sigma A-4327, rottealbumin: Sigma A-6272, alle ved 40 mg/ml konsentrasjon i PBS) er ca. 1 times sentrifugering tilstrekkelig. Filtratene i mottaker PP-platen ble analysert med LC/MS som følger: kolonne: Jupiter C18 (Phenomenex), mobile faser: (A) 0,1 % maursyre i vann og (B) acetonitril, gradient: 5-100 % (B) i 2 min., elektrosparyionisering, MRM-deteksjon (trippel kvadrupol). Toppområdene ble bestemt og triplikatverdiene ble gjennomsnittsberegnet. Bindingen er uttrykt i prosent av (filtrert og ikke-filtrert tidspunkt 0 min.) kontroll 1 og 2 ved: 100-(100<*>T6o/T0). Gjennomsnittet av disse verdiene blir deretter kalkulert (se ref. 9 nedenfor).
2.9. Farmakokinetisk undersøkelse (PK)
Farmakokinetisk undersøkelse etter enkel intravenøs (i.v.) og intraperetoneal (i.p.) administrering ble utført for forbindelsen i eksempel 51 ("eks. 51"). 30 g (+ 20 %) mannlig CD-1 mus oppnådd fra Charles River Laboratories Deutschland GmbH ble brukt i undersøkelsen. Bæreren, fysiologisk saltoppløsning, ble tilsatt for å gi en endelig konsentrasjon på 1 mg/ml av forbindelsene. Volumet var 2 ml/kg i.v. og 10 ml/kg i.p. og peptidet eks. 51 ble injisert for å gi en endelig intraperetoneal dose på 10 mg/kg og en intravenøs dose på 2 mg/kg. Ca. 250-300 ul av blod ble fjernet under lett isoflurananestesi fra det retroorbitale pleksus med forutbestemte tidsintervaller (0, 5, 15, 30 min. og 1, 2 og 3 timer for i.v. undersøkelsen og 0, 15, 30 min. og 1, 2, 4 og 8 timer for i.p. undersøkelsen) og tilsatt hepariniserte rør. Plasma ble fjernet fra pelleterte celler ved sentrifugering og frosset ved -80°C før HPLC-MS-analyse.
Fremstilling av plasmakalibreringsprøver
"Blank" museplasma fra ubehandlede dyr ble brukt. Porsjoner av plasma på 0,2 ml hver ble tilsatt 50 ng propranolol (Internal Standards, IS), (prøvepreparasjon ved fast fase ekstraksjon på OASIS<®>HLB-patroner (Waters)) og med kjente mengder av eks. 51 for å oppnå 9 plasmakalibreringsprøver i området 10-5000 nM. OASIS<®>HLB-patronene ble behandlet med 1 ml metanol og deretter med 1 ml 1 % NH3i vann. Prøvene ble deretter fortynnet med 700 ul NH3i vann og opplastet. Platen ble vasket med 1 ml metanol/1 % NH3i vann 5/95. Eluering ble utført ved å bruke 1 ml 0,1 % TFA i metanol.
Platen som inneholder eluatene ble innført i konsentrasjonssystemet og tatt opp til tørrhet. Residuene ble oppløst i 100 ul maursyre 0,1 %/acetonitril, 95/5 (vol/vol) og analysert i HPLC/MS på en revers fase analytisk kolonne (Jupiter Cl8, 50 x 2,0 mm, 5 \ im, Phenomenex), ved å bruke gradienteluering (mobile faser A: 0,1 % maursyre i vann, B: acetonitril; fra 5 % B til 100% B i 2 min.).
Fremstilling av plasmaprøver
Prøver som kommer fra dyrebehandling ble oppsamlet for å oppnå et egnet ekstraksjonsvolum. Hvis det totale volumet oppnådd var mindre enn 0,2 ml, ble den egnede mengde av "blank" museplasma tilsatt for å holde matriks identisk til forbrenningskurven. Prøver ble deretter tilsatt med IS og prosessert som beskrevet for kalibreringskurven.
Farmakokinetisk evaluering
PK-analyse ble utført på oppsamlede data (generelt n=2 eller 3) ved å bruke programvare PK solutions 2.0™ (Summit Research Service, Montrose, CO 81401 USA). Området under kurven AUC ble beregnet ved den lineære trapesoidale regel. AUC^.») ble estimert som
Ct/b (b: eliminasjonsgradkonstant). AUC(t.0O) er summen av AUC(0-t) og AUC^.»).
Elimineringshalveringstid ble beregnet ved lineær regresjon på minst tre datapunkter under eliminasjonsfasen. De valgte tidsintervaller for halveringstidbestemmelser ble evaluert ved korrelasjonskoeffisienten (r<2>), som bør være minst over 0,85 og mest optimalt over 0,96. I tilfelle av i.v. administrering ble den initielle konsentrasjonen ved tnullbestemt ved ekstrapolering av kurven gjennom de første to tidspunktene. Endelig biotilgjengelighet etter i.p. administrering ble beregnet fra det normaliserte AUQo-») forholdet etter i.p. versus i.v. administrering.
3.0. Resultater
Resultatene av eksperimentene beskrevet under 2.2-2.7 ovenfor er angitt i tabell 4 nedenfor.
n.d.: ikke bestemt
Bestemmelse av IC5o(nM) verdier i Ca<2+->assayet for eks. 1-53 ble utført ved å bruke metode 1, for eks. 54-155 ble metode 2 brukt. For bestemmelse av cytotoksisitetsverdier i eks. 1-53 ble LC50-beregning brukt, for eks. 52-160 ble GI50-beregning brukt.
n.d. ikke bestemt
Bestemmelse av IC50(nM) verdier i Ca<2+->assayet for eks. 1-53 ble utført ved å bruke metode 1, for eks. 54-160 ble metode 2 brukt.
Resultatene av eksperimentene beskrevet i 2.8 ovenfor er angitt i tabell 5 nedenfor.
Resultatene av eksperimentet beskrevet i 2.9 (PK) ovenfor er angitt i tabell 6, 7 og 8 nedenfor.
Etter intravenøs administrering av eks. 51 ved et dosenivå på 2 mg/kg kroppsvekt, fulgte eks. 51 intravenøse kinetiske karakteristika. Etter PK-analyse viste eks. 51 en ekstrapolert Ci„itieii på 28594 ng/ml og en Cmaks. observert på 1461 ng/ml ved 5 min. Plasmanivåer ble hurtig redusert til 328 og 80 ng/ml ved henholdsvis 15 min. og 1 time. Fra 1-3 timer ble plasmanivåene redusert med en elimineringshalveringstid på 2,8 timer til 49 ng/ml ved 3 timer.
AUC(o-t) og AUC(o-oo) ble oppsummert til henholdsvis 1704 og 1905 ng-t/ml. Etter intraperetoneal administrering av eks. 51 i et dosenivå på 10 mg/kg kroppsvekt øket plasmanivåer av eks. 51 nesten lineært i de første to timer og viste et CmakS. på 3160 ng/ml ved 2 timer. Fra 2-8 timer ble plasmanivåene redusert med en elimineringshalveringstid på 2,5 timer til 519 ng/ml ved 8 timer. AUC(0-t) og AUC^.») ble summert til henholdsvis 1112 og 12948 ng-t/ml. Ved sammenligning med normalisert AUC-verdi eller i.v.-administrering (100 % absorbert, 593 ng-t/ml) av eks. 51 absorbert etter i.p.-administrering som summerte seg til 136 % (1295 ng-t/ml) på en 45 ganger lavere normalisert CmakS. etter i.p.-administrering (316 vs. 1497 ng/ml). Verdien over 100 % kan delvis reflektere en dårlig reliabilitet forårsaket av de begrensede antall punkter.
Referanser
1. Oberlin E, Amara A, Bachelerie F, Bessia C, Virelizier J-L, Arenzana-Seisdedos F,
Schwartz O, Heard J-M, Clark-Lewis I, Legler DF, Loetscher M, Baggiolini M, Moser B.
Nature. 1996, 352:833-835 2. Loetscher M, Geiser T, 0'Reilly T, Zwalen R, Baggiolini M, Moser B. J. BioLChem.
1994.269:232-237
3. D'Apuuo M, Rolink A, Loetscher M, Hoxie JA, Clark-Lewis I, Melchors F, Baggiolini
M, Moser B. EurJ. Immunol. 1997. 27:1788-1793
4. von Tscharner V, Prodliom B, Baggiolini M, Reuter H. Nature. 1986. 324:369-72.
5. Hamy F, Felder ER, Heizmann G, Lazdins J, Aboul-ela F, Varani G, Kam J, Klimkait
T. Proc. Natl. Acad. Sci. 1997. 0*3548-3553.
6. MossmanT. JJmmunol. Meth. 1983, 65:55-63
7. Berridge MV, Tan AS. Arch. Biochem. Biophys. 1993, 303:474-482
8. Frevert CW, Wong VA, Goodman RV, Goodwin R, Martin TR, JJmmunol. Meth. 1998. 213: 41-52 9. Singh R., Chang, S.Y., Talor, L.C., Rapid Commun. Mass Spectrom., 1996, 10: 1019-1026

Claims (34)

1. Forbindelser,karakterisert vedden generelle formel
hvori
I er<p>Pfp<D>Pro-<L>Pro: og Z er en kjede av 14 a-aminosyrerester, hvori posisjonen til nevnte aminosyrerester i nevnte kjede telles ved å starte fra den N-terminale aminosyren, hvorved disse aminosyrerestene er, avhengig av posisjonen i kjeden P1: Tyr, Gin, Arg, His, Ile, Trp, Thr, Glu, Ser, Val, Met, Phe, Gly, Asp, Leu, Pip; P2: Arg, His, Lys, 4-PyrAla; P3: Cit, Arg, His, Ile, Tyr, Trp, Pro, Glu, Asn, Asp, Lys, Ala, Leu, Val, 4F-Phe, Met, Ser, Thr, Gin, Tyr; P4: Cys; P5: Arg, Dab, Ser, (EA)G; P6: Pro, Gly, Phe, Val, Cit, Ala; P7:<D>Pro, Pro, Gly, Val; P8: Arg, Tyr, Trp, Thr, 4F-Phe, Dab, 4-PyrAla, Isorn, (Im)G, Cit, His, IpegDab, <D>Pro; P9: Arg, (Pip)G, (EA)G, Orn, Pro; PIO: 2-Nal, Trp, Tyr; Pil: Cys; Pl2: Tyr, Cit; P13: Cit, Gin, Arg, His, Tyr, Asn, Asp, Lys, Ala, Ser, Leu, Met, NG ly, Thr, Cys; og Pl4: Lys, Glu, Gin, Asn, Asp, Ala, Ser, NMeK; hvori de to Cys-restene tilstede som P4- og Pl 1-restene er bundet via en disulfidbro dannet ved å erstatte de to -SH-gruppene i de to restene med en -S-S-gruppe; i fri form eller i form av et farmasøytisk akseptabelt salt.
2. Forbindelse med formel 1 i følge krav 1,karakterisert vedat templatet er<D>Pro-<L>Pro, n er 14 og aminosyrerestene i posisjon 1-14: Pl: Tyr; P2: Arg; P3: Cit; P4: Phe; P5: Arg; P6: Val; P7:<D>Pro; P8: Arg; P9: Arg; P10: 2-Nal; Pil: Val; Pl 2: Tyr; P13: Cit; og P14: Lys.
3. Forbindelse med formel 1 i følge krav 1,karakterisert vedat templatet er<D>Pro-<L>Pro, n er 14 og aminosyrerestene i posisjon 1-14: Pl: Tyr; P2: Arg; P3: Cit; P4: Phe; P5: Arg; P6: Val; P7: Pro; P8: Arg; P9: Arg; P10: 2-Nal; Pil: Val; Pl 2: Tyr P13: Cit; og P14: Lys.
4. Forbindelse med formel I i følge krav 1,karakterisert vedat templatet er<D>Pro-<L>Pro, n er 14 og aminosyrerestene i posisjon 1 - 14: Pl: Tyr; P2: Arg; P3: Cit; P4: Phe; P5: Arg; P6: Gly; P7:<D>Pro; P8: Arg; P9: Arg; P10: 2-Nal; Pil: Phe; Pl 2: Tyr P13: Cit; og P14: Lys.
5. Forbindelse med formel I i følge krav 1,karakterisert vedat templatet er<D>Pro-<L>Pro, ner 14 og aminosyrerestene i posisjon 1-14: Pl: Tyr; P2: Arg; P3: Cit; P4: Val; P5: Arg; P6: Gly; P7:<D>Pro; P8: Arg; P9: Arg; P10: 2-"Nal; Pil: Val; P12: Tyr; P13: Cit; og Pl 4: Lys.
6. Forbindelse med formel I i følge krav 1,karakterisert vedat templatet er<D>Pro-<L>Pro, n er 14 og aminosyrerestene i posisjon 1 - 14: Pl: Tyr; P2: Arg; P3: Cit; P4: Cys; P5: Arg; P6: Gly; P7:<D>Pro; P8: Arg; P9: Arg; PIO: 2-Nal; Pil: Cys; Pl 2: Tyr P13: Cit; og Pl 4: Lys; Cys ved P4 and Pl 1 danner en disulfidbro.
7. Forbindelse med formel I i følge krav 1,karakterisert vedat templatet er<D>Pro-<L>Pro, n er 14 og aminosyrerestene i posisjon 1 - 14: Pl: Tyr; P2: Arg; P3: Cit; P4: Cys; P5: Arg; P6: Gly; P7: Gly; P8: Arg; P9: Arg; P10: 2-Nal; Pil: Cys; Pl 2: Tyr P13: Cit; og Pl 4: Lys; Cys ved P4 and Pl 1 danner en disulfidbro.
8. Forbindelse med formel I i følge krav 1,karakterisert vedat templatet er<D>Pro-<L>Pro, n er 14 og aminosyrerestene i posisjon 1 - 14: Pl: Tyr; P2: Arg; P3: Cit; P4: Cys; P5: Arg; P6: Val; P7: Gly; P8: Arg; P9: Arg; P10: 2-Nal; Pil: Cys; Pl 2: Tyr P13: Cit; og Pl 4: Lys; Cys ved P4 and Pl 1 danner en disulfidbro.
9. Forbindelse med formel 1 i følge krav 1,karakterisert vedat templatet er<D>Pro-<L>Pro, n er 14 og aminosyrerestene i posisjon 1-14: Pl: Tyr; P2: Arg; P3: Cit; P4: Cys; P5: Arg; P6: Gly; P7:<D>Pro; P8: Trp; P9: Arg; P10: 2-Nal; Pli: Cys; Pl 2: Tyr P13: Gin; og Pl 4: Lys; Cys ved P4 and Pl 1 danner en disulfidbro.
10. Forbindelse med formel I i følge krav 1,karakterisert vedat templatet er<D>Pro-<L>Pro, n er 14 og aminosyrerestene i posisjon 1-14: Pl: Tyr; P2: Arg; P3: Cit; P4: Cys; P5: Arg; P6: Gly; P7:<D>Pro; P8: Thr; P9: Arg; P10: 2-Nal; Pil: Cys; Pl 2: Tyr P13: Gin; og Pl 4: Lys; Cys ved P4 and Pl 1 danner en disulfidbro.
11. Forbindelse med formel I i følge krav 1,karakterisert vedat templatet er<D>Pro-<L>Pro, n er 14 og aminosyrerestene i posisjon 1-14: Pl: Tyr; P2: Arg; P3: Cit; P4: Cys; P5: Arg; P6: Gly; P7:<D>Pro; P8: Arg; P9: Arg; P10: 2-Nal; Pli: Cys; Pl 2: Tyr P13: Gin; og P14: Gin; Cys ved P4 and Pl 1 danner en disulfidbro.
12. Forbindelse med formel I i følge krav 1,karakterisert vedat templatet er<D>Pro-<L>Pro, n er 14 og aminosyrerestene i posisjon 1-14: Pl: Tyr; P2: Arg; P3: Cit; P4: Cys; P5: Arg; P6: Gly; P7:<D>Pro; P8: Arg; P9: Arg; P10: 2-Nal; Pil: Cys; Pl 2: Tyr P13: Gin; og P14: Glu; Cys ved P4 and Pl l danner en disulfidbro.
13. Forbindelse med formel I i følge krav 1,karakterisert vedat templatet er<D>Pro-<L>Pro, n er 14 og aminosyrerestene i posisjon 1 - 14: Pl: Glu; P2: Arg; P3: Cit; P4: Cys; P5: Arg; P6: Gly; P7:<D>Pro; P8: Arg; P9: Arg; P10: 2-Nal; Pil: Cys; Pl 2: Tyr P13: Gin; og Pl 4: Lys; Cys ved P4 and Pl 1 danner en disulfidbro.
14. Forbindelse med formel I i følge krav 1,karakterisert vedat templatet er<D>Pro-<L>Pro, n er 14 og aminosyrerestene i posisjon 1-14: Pl: Tyr; P2: Arg; P3: Glu; P4: Cys; P5: Arg; P6: Gly; P7:<D>Pro; P8: Arg; P9: Arg; P10: 2-Nal; Pil: Cys; Pl 2: Tyr P13: Gin; og P14: Lys; Cys ved P4 and Pl 1 danner en disulfidbro.
15. Forbindelse med formel 1 i følge krav 1,karakterisert vedat templatet er<D>Pro-<L>Pro, n er 14 og aminosyrerestene i posisjon 1-14: Pl: Tyr; P2: Arg; P3: Cit; P4: Cys; P5: Arg; P6: Gly; P7:<D>Pro; P8: Arg; P9: Arg; P10: 2-Nal; Pil: Cys; P12: Tyr P13: Gin; og Pl 4: Asn; Cys ved P4 and Pl 1 danner en disulfidbro.
16. Forbindelse med formel I i følge krav 1,karakterisert vedat templatet er<D>Pro-<L>Pro, n er 14 og aminosyrerestene i posisjon 1-14: Pl: Tyr; P2: Arg; P3: Cit; P4: Cys; P5: Arg; P6: Gly; P7:<D>Pro; P8: Arg; P9: Arg; P10: 2-Nal; Pli: Cys; Pl 2: Tyr P13: Gin; og P14: Asp; Cys ved P4 and Pl 1 danner en disulfidbro.
17. Forbindelse med formel I i følge krav 1,karakterisert vedat templatet er<D>Pro-<L>Pro, n er 14 og aminosyrerestene i posisjon 1 - 14: Pl: Tyr; P2: Arg; P3: Cit; P4: Cys; P5: Arg; P6: Gly; P7:<D>Pro; P8: Arg; P9: Arg; P10: 2-Nal; Pil: Cys; Pl 2: Tyr P13: Gin; og Pl 4: Ser; Cys ved P4 and Pl 1 danner en disulfidbro.
18. Forbindelse med formel I i følge krav 1,karakterisert vedat templatet er<D>Pro-<L>Pro, n er 14 og aminosyrerestene i posisjon 1-14: Pl: Tyr; P2: Arg; P3: Cit; P4: Cys; P5: Ser; P6: Gly; P7:<D>Pro; P8: Arg; P9: Arg; P10: 2-Nal; Pil: Cys; Pl 2: Tyr Pl3: Gin; og P14: Lys; Cys ved P4 and Pl 1 danner en disulfidbro.
19. Forbindelse med formel T i følge krav 1,karakterisert vedat templatet er<D>Pro-<L>Pro, n er 14 og aminosyrerestene i posisjon 1-14: Pl: Tyr; P2: Arg; P3: Ser; P4: Cys; P5: Arg; P6: Gly; P7:<D>Pro; P8: Arg; P9: Arg; P10: Trp; Pil: Cys; Pl2: Tyr Pl3: Cit; og Pl 4: Asp; Cys ved P4 and Pl 1 danner en disulfidbro.
20. Forbindelse med formel I i følge krav 1,karakterisert vedat templatet er<D>Pro-<L>Pro, n er 14 og aminosyrerestene i posisjon 1-14: Pl: Tyr; P2: His; P3: Cit; P4: Cys; P5: Arg; P6: Gly; Pl:<D>Pro; P8: Arg; P9: Arg; P10: Trp; Pil: Cys; Pl 2: Tyr P13: Cit; og P14: Lys; Cys ved P4 and Pl 1 danner en disulfidbro.
21. Forbindelse med formel I i følge krav 1,karakterisert vedat templatet er<D>Pro-<L>Pro, n er 14 og aminosyrerestene i posisjon 1-14: Pl: Tyr; P2: Arg; P3: Thr; P4: Cys; P5: Arg; P6: Gly; P7:<D>Pro; P8: Dab; P9: Arg; P10: Trp; Pil: Cys; Pl 2: Tyr P13: Gin; og P14: Lys; Cys ved P4 and Pl 1 danner en disulfidbro.
22. Forbindelse med formel I i følge krav 1,karakterisert vedat templatet er<D>Pro-<L>Pro, n er 14 og aminosyrerestene i posisjon 1 - 14: Pl: Tyr; P2: Arg; P3: Cit; P4: Cys; P5: Arg; P6: Gly; P7:<D>Pro; P8: Arg; P9: Arg; P10: 2-Nal; Pil: Cys; P12: Tyr Pl3: Thr; og Pl 4: Lys; Cys ved P4 and Pl 1 danner en disulfidbro.
23. Forbindelse med formel I i følge krav 1,karakterisert vedat templatet er<D>Pro-<L>Pro, n er 14 og aminosyrerestene i posisjon 1 - 14: Pl: Tyr; P2: Arg; P3: Ile; P4: Cys; P5: Arg; P6: Gly; P7:<D>Pro; P8: Arg; P9: Arg; P10: Tyr; Pli: Cys; Pl 2: Tyr Pl3: Gin; og Pl 4: Lys; Cys ved P4 and Pl 1 danner en disulfidbro.
24. Enantiomerer av forbindelsen med formel I, karakterisert vedat de er angitt i krav l.
25. Forbindelser som angitt i ethvert av kravene 1-24, for anvendelse som terapeutisk aktive forbindelser.
26. Forbindelser som angitt i krav 25, karakterisert vedat de har CXCR4 antagoniserende aktivitet og/eller antikreftaktivitet og/eller antiinfiammatorisk aktivitet.
27. Farmasøytisk sammensetning som inneholder en forbindelse som angitt i ethvert av kravene 1-24, og en farmasøytisk inert bærer.
28. Sammensetning som angitt i krav 27, karakterisert vedat det er i en form som er egnet for oral, topisk, transdeimal, injeksjon, munnhule, transmukosal, pulmonal eller inhalasjonsadministrering.
29. Sammensetning som angitt i krav 27 eller 28, karakterisert vedat de er i form av tabletter, drasjeer, kapsler, oppløsninger, væsker, geler, plastre, kremer, salver, sirup, slurrier, suspensjoner, spray, nebulisatorer eller stikkpiller.
30. Anvendelse av forbindelser som angitt i ethvert av kravene 1-24, til fremstilling av et CXCR4 antagoniserende legemiddel.
31. Anvendelse som angitt i krav 30, hvori nevnte CXCR4 antagoniserende legemiddel er ment å bli anvendt til å forhindre HIV-infeksjoner i friske individer eller for å senke eller stoppe virusprogresjon i infiserte pasienter, eller hvor kreft blir mediert eller som resulterer fra; eller hvor en immunologisk sykdom blir mediert eller resulterer fra CXCR4 reseptoraktivitet; eller for å behandle immunundertrykkelse; eller afereseoppsamling av perifere blodstamceller.
32. Fremgangsmåte til fremstilling av forbindelser som angitt i ethvert av kravene 1-24,karakterisert vedat den omfatter: (a) å koble en egnet funksjonalisert fast understøttelse med et egnet N-beskyttet derivat av den aminosyren som i det ønskede endeprodukt er i posisjon 6, 7 eller 8 hvis n er 14, hvor enhver funksjonell gruppe som kan være tilstede i nevnte N-beskyttede aminoderivat er på samme måten egnet beskyttet; (b) å fjerne den N-beskyttende gruppe fra produktet som således er oppnådd; (c) å koble produktet således oppnådd med et egnet N-beskyttet derivat av den aminosyren som i det ønskede endeprodukt er i én posisjon nærmere det N-terminale aminosyreresidu, enhver funksjonell gruppe som kan være tilstede i nevnte N-beskyttede aminosyrederivat er likeledes egnet beskyttet; (d) å fjerne den N-beskyttende gruppe fra det oppnådde produkt; (e) å gjenta trinnene (c) og (d) inntil den N-terminale aminosyreresidu er blitt innført; (f) å koble produktet således oppnådd med en forbindelse med generell formel
hvori er som definert ovenfor og X er en N-beskyttende gruppe eller, alternativt, hvis skal være gruppe (al) eller (a2) ovenfor, (fa) som kobler produktet oppnådd i trinn (e) med et egnet N-beskyttet derivat av en aminosyre med generell formel
hvori B og A er som definert ovenfor, enhver funksjonell gruppe som kan være tilstede i nevnte N-beskyttede aminosyrederivat er på samme måten egnet beskyttet; (fb) å fjerne den N-beskyttede gruppe fra produktet som således er oppnådd; og (fc) å koble produktet således oppnådd med et egnet N-beskyttet derivat av en aminosyre med ovennevnte generelle formel IV og, henholdsvis III, enhver funksjonell gruppe som kan være tilstede i N-beskyttede aminosyrederivat er på samme måten egnet beskyttet; og henholdsvis hvis
skal være gruppen (a3) ovenfor, (fa') som kobler produktet oppnådd i trinn (e) med et egnet N-beskyttet derivat av en aminosyre med overnevnte formel III, enhver funksjonell gruppe som kan være tilstede i nevnte N-beskyttede aminosyrederivat er på samme måte egnet beskyttet; (fb') å fjerne den N-beskyttede gruppe fra produktet som således er oppnådd; og (fc') å koble produktet således oppnådd med et egnet N-beskyttet derivat av en aminosyre med ovennevnte generelle formel III, enhver funksjonell gruppe som kan være tilsted ei nevnte N-beskyttede aminosyrederivat er på samme måte egnet beskyttet; (g) å fjerne den N-beskyttede gruppe fra produktet oppnådd i trinn (f) eller (fc); (h) å koble produktet således oppnådd med et egnet N-beskyttet derivat av den aminosyren som i det ønskede endeproduktet er i posisjon 14 hvis n er 14, enhver funksjonell gruppe som kan være tilstede i nevnte N-beskyttede aminosyrederivat er på samme måte egnet beskyttet; (i) å fjerne den N-beskyttende gruppe fra produktet således oppnådd; (j) å koble produktet således oppnådd med et egnet N-beskyttet derivat av den aminosyren som i det ønskede endeprodukt er én posisjon videre vekk fra posisjon 14 hvis n er lik 14, enhver funksjonell gruppe som skal være tilstede i nevnte N-beskyttede aminosyrederivat er på samme måte egnet beskyttet; (k) å fjerne den N-beskyttende gruppe fra produktet således oppnådd;
(1) å gjenta trinnene (j) og (k) inntil alle aminosyreresiduene er blitt innført; (m) hvis ønsket selektiv avbeskyttelse av én eller flere beskyttede funksjonelle gruppe(r) tilstede i molekylet og egnet substituere den reaktive gruppen(e) således frigjort; (n) hvis ønsket danne én, to eller tre mellomtrådkoblinger mellom sidekjeder til de egnede aminosyreresiduene i motsatte posisjoner i p-trådregionen; (o) å avspalte produktet således oppnådd fra den faste understøttelse; (p) å syklysere produktet avspaltet fra den faste understøttelsen; (q) å fjerne enhver beskyttende gruppe tilstede på funksjonelle grupper av ethvert ledd i kjeden av aminosyreresiduer og, hvis ønsket, enhver beskyttende gruppe som kan i tillegg være tilstede i molekylet; og (r) hvis ønsket å konvertere produktet således oppnådd til et farmasøytisk akseptabelt salt eller konvertere et farmasøytisk akseptabelt, eller uakseptabelt salt således oppnådd til den tilsvarende frie forbindelse med formel 1 eller til et forskjellig farmasøytisk akseptabelt salt.
33. Fremgangsmåte til fremstilling av en forbindelse som angitt i ethvert av kravene 1-24, karakterisert vedat den omfatter: (a') kobling av en egnet funksjonalisert fast understøttelse med en forbindelse med generell formel
hvori er som definert ovenfor og X er en N-beskyttende gruppe eller, alternativt, hvis
skal være gruppen (al) eller (a2) ovenfor, (a'a) kopling av nevnte egnede funksjonaliserte faste understøttelser med et egnet N-beskyttet derivat av en aminosyre med generell formel
hvori B og A er som definert ovenfor, enhver funksjonell gruppe som kan være tilstede i nevnte N-beskyttede aminosyrederivat er likeledes egnet beskyttet; (a'b) å fjerne den N-beskyttende gruppe fra produktet således oppnådd; og (a'c) å koble produktet således oppnådd med et egnet N-beskyttet derivat av en aminosyre med ovennevnte generelle formel IV og, henholdsvis, III, enhver funksjonell gruppe som kan være tilstede i nevnte N-beskyttede aminosyrederivat er på samme måte egnet beskyttet; (b') å fjerne den N-beskyttende gruppen fra produktet oppnådd i trinn (a') eller (a'c); (c') å koble produktet således oppnådd med et egnet N-beskyttet derivat av den aminosyren som i det ønskede endeprodukt er i posisjon 14 hvis n er 14, enhver funksjonell gruppe som kan være tilstede i nevnte N-beskyttede aminosyrederivat er likeledes egnet beskyttet; (d') å fjerne den N-beskyttende gruppe fra produktet således oppnådd; (e') å koble produktet således oppnådd med et egnet N-beskyttet derivat av den aminosyren som i det ønskede endeproduktet er én posisjon lenger vekk fra posisjon 14 hvis n er 14,, enhver funksjonell gruppe som kan være tilstede i nevnte N-beskyttede aminosyrederivat er likeledes egnet beskyttet; (f) å fjerne den N-beskyttende gruppe fra produktet som således er oppnådd; (g') å gjenta trinnene (e') og (P) inntil alle aminosyreresiduene er blitt innført; (h') hvis ønsket selektivt å avbeskytte én eller flere beskyttede funksjonelle gruppe(r) tilstede i molekylet og egnet substituere de reaktive grupper således frigjort; (i') hvis ønsket danne én, to eller tre mellomtiådkoblinger mellom sidekjedene til egnede aminosyreresiduer på motsatte posisjoner i P-trådregionen; (j') å avspalte produktet således oppnådd fra den faste understøttelse; (k') å syklisere produktet avspaltet fra den faste understøttelsen; (1') å fjerne enhver beskyttende gruppe som er tilstede på funksjonelle grupper i ethvert ledd i kjeden av aminosyreresiduer og, hvis ønsket, enhver beskyttende gruppe som kan i tillegg være tilstede i molekylet; og (m') hvis ønsket, konvertere produktet som således er oppnådd til et farmasøytisk akseptabelt salt eller konvertere et farmasøytisk akseptabelt, eller uakseptabelt, salt således oppnådd inn i den tilsvarende frie forbindelse med formel I eller inn i et forskjellig, farmasøytisk akseptabelt, salt.
34. Modifikasjon av fremgangsmåten som angitt i ethvert av kravene 32 eller 33, til fremstilling av forbindelser som angitt i krav 24, karakterisert vedat enantiomerer av alle kirale utgangsmaterialer blir anvendt.
NO20055585A 2003-05-02 2005-11-25 Templatfikserte beta-harnalspeptidhermere med CXCR4-antagonistisk aktivitet, farmasoytisk sammensetning omfattende nevnte peptidhermere, samt fremgangsmate for fremstilling derav. NO333793B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/EP2003/004640 WO2004096839A1 (en) 2003-05-02 2003-05-02 Template-fixed beta-hairpin peptidomimetics with cxcr4 antagonizing activity
PCT/EP2004/004535 WO2004096840A1 (en) 2003-05-02 2004-04-29 Template- fixed beta-hairpin peptidomimetics with cxcr4 antagonizing activity

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO20055585L NO20055585L (no) 2005-11-25
NO333793B1 true NO333793B1 (no) 2013-09-16

Family

ID=33395700

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20055585A NO333793B1 (no) 2003-05-02 2005-11-25 Templatfikserte beta-harnalspeptidhermere med CXCR4-antagonistisk aktivitet, farmasoytisk sammensetning omfattende nevnte peptidhermere, samt fremgangsmate for fremstilling derav.
NO20131086A NO340835B1 (no) 2003-05-02 2013-08-08 Templatfikserte beta-hårnål peptidhermere med CXCR4 antagonistisk aktivitet

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20131086A NO340835B1 (no) 2003-05-02 2013-08-08 Templatfikserte beta-hårnål peptidhermere med CXCR4 antagonistisk aktivitet

Country Status (17)

Country Link
US (3) US7786078B2 (no)
EP (3) EP1622931B1 (no)
JP (3) JP4846564B2 (no)
KR (5) KR20130059462A (no)
CN (1) CN1802385B (no)
AU (2) AU2003232253A1 (no)
BR (3) BRPI0409928B8 (no)
CA (3) CA2524253C (no)
EA (1) EA010163B1 (no)
ES (3) ES2563094T3 (no)
HK (1) HK1094210A1 (no)
IL (3) IL171530A (no)
MX (1) MXPA05011550A (no)
NO (2) NO333793B1 (no)
NZ (1) NZ543806A (no)
WO (2) WO2004096839A1 (no)
ZA (1) ZA200508863B (no)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BRPI0520016B1 (pt) 2005-02-17 2021-11-16 Polyphor Ltd. Composto, composiqao farmaceutica, uso de composto e processo para a fabricaqao de composto
CN105111280B (zh) * 2005-02-17 2020-01-24 波利弗尔有限公司 具有蛋白酶抑制活性的模板固定的β-发夹肽模拟物
US9073973B2 (en) 2005-05-02 2015-07-07 Polyphor Ltd. Dye conjugates of template-fixed peptidomimetics
PL1942108T3 (pl) 2005-10-28 2014-03-31 Ono Pharmaceutical Co Związek zawierający grupę zasadową i jego zastosowanie
ES2407115T3 (es) 2005-11-18 2013-06-11 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Compuesto que contiene un grupo básico y uso del mismo
WO2007079597A1 (en) * 2006-01-16 2007-07-19 Polyphor Ltd. Template - fixed peptidomimetics with antimicrobial activity
US8633163B2 (en) * 2007-01-29 2014-01-21 Polyphor Ltd. Template-fixed peptidomimetics
KR101479148B1 (ko) * 2007-02-28 2015-01-05 폴리포 리미티드 주형 고정된 펩타이드 모방체
WO2009074807A2 (en) 2007-12-12 2009-06-18 Imperial Innovations Limited Methods
EP2324047B1 (en) * 2008-08-08 2015-02-25 Polyphor AG Template-fixed peptidomimetics
US8883720B2 (en) 2008-11-26 2014-11-11 Polyphor Ag Template-fixed beta-hairpin peptidomimetics with CXCR4 antagonizing activity
US8865656B2 (en) 2009-05-07 2014-10-21 Polyphor Ag Beta-hairpin peptidomimetics having CXCR4 antagonizing activity
CN103703018B (zh) * 2011-06-07 2016-10-26 波利弗尔股份公司 作为CXC4拮抗剂的β-发夹肽模拟物
AR087363A1 (es) * 2011-07-29 2014-03-19 Pf Medicament Uso del anticuerpo i-3859 para la deteccion y diagnostico de los canceres
JP6294227B2 (ja) 2011-10-07 2018-03-14 ポリフォー・アクチェンゲゼルシャフトＰｏｌｙｐｈｏｒ Ａｇ Ｆｐｒ１の阻害剤としてのテンプレート固定ペプチド模倣薬
JP6047231B2 (ja) * 2012-06-06 2016-12-21 ポリフォー・アクチェンゲゼルシャフトＰｏｌｙｐｈｏｒ Ａｇ β−ヘアピンペプチド模倣薬
SG11201500130WA (en) * 2012-08-08 2015-03-30 Polyphor Ag Combinations with a backbone-cyclized peptide
US10544527B2 (en) * 2015-03-24 2020-01-28 Toray Industries, Inc. Fabric and clothing having flame retardancy and high visibility
EP3370518B1 (en) 2015-10-14 2023-08-23 X-Therma, Inc. Compositions and methods for reducing ice crystal formation
EP3630153A2 (en) * 2017-05-22 2020-04-08 National Hellenic Research Foundation Macrocyclic modulators of disease associated protein misfolding and aggregation
WO2023227771A1 (en) 2022-05-27 2023-11-30 Fundación Privada Instituto De Salud Global Barcelona Cyclic peptides with antibacterial activity against multidrug resistant (mdr) pathogens

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH08504837A (ja) 1993-10-14 1996-05-28 生化学工業株式会社 新規ポリペプチドおよびこれから調製される抗ｈｉｖ剤
JP4625603B2 (ja) * 1999-08-30 2011-02-02 ポリファー アーゲー テンプレートを固定したβヘアピンループ類似物の合成
BR0207502A (pt) * 2001-02-23 2004-03-09 Polyphor Ltd Compostos, enanciÈmeros, composição farmacêutica, uso de compostos, e, processo para a fabricação de compostos
CN101157924A (zh) 2001-12-11 2008-04-09 人体基因组科学有限公司 嗜中性白细胞因子α
AU2002342618C1 (en) * 2002-08-20 2008-10-30 Polyphor Ltd. Template-fixed peptidomimetics with antibacterial activity
DE60226351T2 (de) * 2002-10-02 2008-12-11 Polyphor Ltd. Matrizenfixierte peptidomimetika mit antimikrobieller wirkung

Also Published As

Publication number Publication date
EP1622931B1 (en) 2015-07-15
KR101330239B1 (ko) 2013-11-15
AU2004234062A1 (en) 2004-11-11
NO20131086A1 (no) 2005-11-25
CA2524253A1 (en) 2004-11-11
BR122019016211B8 (pt) 2021-07-27
CA2847486A1 (en) 2004-11-11
WO2004096840A1 (en) 2004-11-11
AU2004234062B2 (en) 2010-07-15
EP2540736B1 (en) 2015-11-18
BR122019016211B1 (pt) 2020-05-12
US20150087577A1 (en) 2015-03-26
US9518092B2 (en) 2016-12-13
NO20055585L (no) 2005-11-25
EP2540735A2 (en) 2013-01-02
WO2004096839A1 (en) 2004-11-11
JP5770781B2 (ja) 2015-08-26
BRPI0409928A (pt) 2006-04-25
US7786078B2 (en) 2010-08-31
EP1622931A1 (en) 2006-02-08
KR20110089173A (ko) 2011-08-04
BR122019016210B1 (pt) 2020-09-08
CN1802385A (zh) 2006-07-12
ES2550241T3 (es) 2015-11-05
JP2011140496A (ja) 2011-07-21
KR20130059463A (ko) 2013-06-05
BRPI0409928A8 (pt) 2019-09-10
ES2563094T3 (es) 2016-03-10
EP2540735A3 (en) 2013-02-27
BRPI0409928B1 (pt) 2020-05-12
ES2550856T3 (es) 2015-11-12
IL227933B (en) 2019-01-31
EP2540735B1 (en) 2015-07-22
CN1802385B (zh) 2011-11-09
EA200501550A1 (ru) 2006-06-30
JP2013227317A (ja) 2013-11-07
US8895695B2 (en) 2014-11-25
JP4846564B2 (ja) 2011-12-28
BRPI0409928B8 (pt) 2021-05-25
KR20130059462A (ko) 2013-06-05
JP5307169B2 (ja) 2013-10-02
AU2003232253A8 (en) 2004-11-23
IL171530A (en) 2013-08-29
ZA200508863B (en) 2007-03-28
AU2003232253A1 (en) 2004-11-23
IL227933A0 (en) 2013-09-30
MXPA05011550A (es) 2006-07-06
KR101230453B1 (ko) 2013-02-06
KR20110089174A (ko) 2011-08-04
US20110245155A1 (en) 2011-10-06
CA2847490C (en) 2015-11-17
US20070078079A1 (en) 2007-04-05
CA2524253C (en) 2016-03-29
EP2540736A2 (en) 2013-01-02
JP2007523847A (ja) 2007-08-23
CA2847490A1 (en) 2004-11-11
CA2847486C (en) 2016-03-15
EA010163B1 (ru) 2008-06-30
KR101330238B1 (ko) 2013-11-15
NZ543806A (en) 2008-03-28
BR122019016210B8 (pt) 2021-07-27
IL227932A0 (en) 2013-09-30
IL227932B (en) 2019-01-31
NO340835B1 (no) 2017-06-26
EP2540736A3 (en) 2013-02-27
KR20060034217A (ko) 2006-04-21
HK1094210A1 (en) 2007-03-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO333793B1 (no) Templatfikserte beta-harnalspeptidhermere med CXCR4-antagonistisk aktivitet, farmasoytisk sammensetning omfattende nevnte peptidhermere, samt fremgangsmate for fremstilling derav.
DK1856140T3 (en) Matrix-fixed beta-hairpin shaped peptidomimetics with protease inhibitory activity
EP1622930B9 (en) Template-fixed peptidomimetics as medicaments against hiv and cancer