NO328280B1

NO328280B1 - Makrocykliske analoger

Info

Publication number: NO328280B1
Application number: NO20006316A
Authority: NO
Inventors: Melvin Joseph Yu; Bruce A Littlefield; Monica Palme; Boris M Seletsky; Murray J Towle; Wanjun Zheng
Original assignee: Eisai R&D Man Co Ltd
Priority date: 1998-06-17
Filing date: 2000-12-12
Publication date: 2010-01-25
Also published as: ZA200007159B; CN1216051C; BE2011C028I2; JP4454151B2; BR9911326B1; AU762998C; NO20006316D0; CY1111516T1; CY2011010I2; FR11C0038I2; JP2002518384A; IL139960A0; US8148554B2; FR11C0038I1; PT1087960E; CA2335300A1; NO2011026I1; NO2011018I1; US6214865B1; EP1087960A1

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører farmasøytiske aktive makrolider. Halikondrin B er et virkesterkt anti-kreftmiddel som opprinnelig blir isolert fra den marine svampen Halichondria okadaiog senere funnet i Axinella sp., Phakellia carteriog Lissodendoryx sp..

En total syntese av halikondrin B ble publisert i 1992 (Aicher, T.D. et al., J. Am. Chem. Soc. 114:3162-3164). Halikondrin B har demonstrert in vitro inhibering av tubulin polymerisering, mikrotubul sammensetning, beta<s->tubulin tverrbinding, GTP og vinblastin binding til tubulin, og tubulin-avhengig GTP hydrolyse og har vist in vitro og in vivo anti-kreftegenskaper.

Oppfinnelsen tilveiebringer halikondrinanaloger som har farmasøytisk aktivitet så som anti-kreft eller anti-mitotisk (mitoseblokkerende) aktivitet. Disse forbindelsene er vesentlig mindre enn halikondrin B. Oppfinnelsen vedrører en forbindelse som har formelen:

hvor A er et Ci-6 alkyl eller C2-6 alkenyl hydrokarbonskjelett, idet nevnte skjelett er usubstituert eller inneholder fra 1 til 10 substituenter, uavhengig valgt fra cyano, halogen, azido, okso, p-fluorfenyl, N-piperazinyl, N-piperidinyl, N-pyrrolidinyl, N-3-(R)-hydroksypyrrolidinyl, N-homopiperidinyl, N-2-(S-hydroksymetyl)pyrrolidinyl, N-2-(R-hydroksymetyl)pyrrolidinyl, N-morfolinyl, N-imidazoyl, og Qi;

hver Qi er uavhengig valgt fra ORi, SRi, S02Ri, OS02Ri, NR2Ri, NR2(CO)Ri, NR2(CO)(CO)Ri, NR4(CO)NR2Ri, NR2(CO)ORi, (CO)ORi, 0(CO)Ri, (COJNRzR^ imidazo-2-yl-tio, pyridin-3-yl-metyl-(CO)NH, indol-3-yl-(CO)NH, og 0(CO)NR2Ri;

hver av Ri, R2 og R4 er uavhengig valgt fra H, Ci.6alkyl, Ci-6halogenalkyl, Ci. 6hydroksyalkyl, Ci.6aminoalkyl, C6-ioaryl, C6-iohalogenaryl, C6-iohydroksyaryl, Ci. 3alkoksy-fenyl, C6-ioaryl-Ci-6alkyl, Ci-6alkyl-C6-ioaryl,

C6-iohalogenaryl-Ci-6alkyl, Ci^alkyl-C6-iohalogenaryl og (Ci-3alkoksy-fenyl)-Ci-3alkyl.

Foreliggende oppfinnelse vedrører videre at A omfatter et C1-6 alkyl eller C2-6 alkenyl hydrokarbonskjelett, idet nevnte skjelett har minst én substituent valgt fra cyano, halogen, azido, okso, p-fluorfenyl, N-piperazinyl, N-piperidinyl, N-pyrrolidinyl, N-3-(R)-hydroksypyrrolidinyl, N-homopiperidinyl, N-2-(S-hydroksymetyl)pyrrolidinyl, N-2-(R-hydroksymetyl)pyrrolidinyl, N-morfolinyl, N-imidazoyl, og Qi;

hver Qi er uavhengig valgt fra OR1, SRl S02Ri, OSO2R1, NR2Ri, NR2(CO)Ri, imidazo-2-yl-tio, pyridin-3-yl-metyl-(CO)NH, indol-3-yl-(CO)NH og 0(CO)NR2Ri.

Ifølge foreliggende oppfinnelse er hver Q uavhengig valgt fra OR1, SRi, S02Ri, OS02Ri, NH(CO)R1, NH(CO)(CO)Ri, imidazo-2-yl-tio, pyridin-3-yl-metyl-(CO)NH, indol-3-yl-(CO)NH, og 0(CO)NHRi;

hver Ri er uavhengig valgt fra Ci.6alkyl, Ci^halogenalkyl, C6fenyl, Cehalogenaryl, Ci-3alkoksy-fenyl, C6fenyl-Ci-3alkyl, Ci-3alkyl-C6fenyl, Cehalogenaryl-Ci-3alkyl, Ci-3alkyl-C6halogenaryl og (Ci-3alkoksy-C6fenyl)-Ci-3alkyl.

Videre har A minst én substituent valgt fra hydroksyl, amino, azido, halogen og okso.

Ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter A et mettet hydrokarbonskjelett som har minst én substituent valgt fra hydroksyl, amino og azido.

Videre har A minst to substituenter uavhengig valgt fra hydroksyl, amino og azido.

Ifølge foreliggende oppfinnelse har A minst to substituenter uavhengig valgt fra hydroksyl og amino.

A har videre minst én hydroksylsubstituent og minst én aminosubstituent. Ifølge foreliggende oppfinnelse har A minst to hydroksylsubstituenter.

Oppfinnelsen vedrører forbindelser av tilstrekkelig stabilitet til å være egnede for farmasøytisk utvikling og farmasøytisk akseptable salter av de omtalte forbindelsene.

Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen

A. Definisjoner

B. Halikondrinanaloger

C. Syntese av halikondrinanaloger

D. Farmakologisk aktivitet

E. Anvendelser

A. Definisjoner

De følgende betegnelsene er definert delvis nedenfor og ved deres anvendelse heri.

Hydrokarbonskjelett inneholder karbon og hydrogen atomer og kan være lineære, forgrenede eller cykliske. Umettede hydrokarboner omfatter en, to, tre eller flere C-C dobbeltbindinger (sp<2>) eller C-C trippelbindinger (sp). Eksempler på umettede hydrokarbonrester omfatter etynyl, 2-propynyl, 1-propenyl, 2-butenyl, 1,3-butadienyl, 2-pentenyl, vinyl (etenyl), allyl og isopropenyl. Eksempler på toverdige umettede hydrokarbonrester innbefatter alkenylener og alkylidener så som metylidyn, etyliden, etyldinyl, vinyliden og isopropyliden. Generelt har forbindelser ifølge oppfinnelsen hydrokarbonskjelett ("A" i formel (I) som er substituerte, f.eks med hydroksy, amino, cyano, azido, heteroaryl, aryl og andre enheter som her er beskrevet. Hydrokarbonskjeletter kan ha to geminale hydrogenatomer erstattet med okso, et toverdig karbonyloksygenatom (=0), eller en ringdannende substituent, så som -O- (rettkjedet eller forgrenet alkylen eller alkyliden) -O- for å danne en acetal eller ketal.

Ci-6alkyl omfatter lineære, forgrenede og cykliske hydrokarboner, så som metyl, etyl, propyl, isopropyl, bu ty I, isobutyl, sek-butyl, tert-butyl, pentyl, isopentyl, sek-pentyl, neo-pentyl, tert-pentyl, cyklopentyl, heksyl, isoheksyl, sek-heksyl, cyklo-heksyl, 2-metylpentyl, tert-heksyl, 2,3-dimetylbutyl, 3,3-dimetylbutyl, 1,3-dimetylbutyl og 2,3-dimetylbut-2-yl. Alkoksy (-0R), alkyltio (-SR) og andre alkyl-avledede enheter (substituerte, umettede eller toverdige) er analoge med alkylgrupper (R). Alkylgrupper og alkyl-avledede grupper så som de representative alkoksy, halogenalkyl, hydroksyalkyl, alkenyl, alkyliden og alkylen gruppene kan være C2-6, C3-6, C1-3 eller C2-4-

Alkylgrupper substituert med halogen, hydroksy, amino, cyano, azido og så videre kan ha 1, 2, 3,4, 5 eller flere substituenter, som er valgt uavhengig (som kan være, men ikke nødvendigvis er like) og som kan, men ikke nødvendigvis er på det samme karbonatomet. F.eks er halogenalkyler alkylgrupper med minst én substituent valgt fra fluor, klor, brom og jod. Halogenalkylgrupper kan ha to eller flere halogensubstituenter som kan være, men ikke nødvendigvis er, det samme halogenet, og som kan være, men ikke nødvendigvis er, på det samme karbonatomet. Eksempler omfatter klormetyl, periodometyl, 3,3-diklorpropyl, 1,3-difluorbutyl og 1-brom-2-klorpropyl.

Heterocykliske rester og heteroaryler omfatter furyl, pyranyl, isobenzofuranyl, kromenyl, xantenyl, fenoksatienyl, 2H-pyrrolyl, pyrrolyl, imidazolyl (f.eks 1-, 2- eller 4-imidazolyl), pyrazolyl, isotiazolyl, isoksazolyl, pyridyl (f.eks 1-, 2- eller 3-pyridyl), pyrazinyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, indolizinyl, isoindolyl, 3H-indolyl, indolyl (f.eks 1-, 2-eller 3-indolyl), indazolyl, purinyl, 4H-kinolizinyl, isokinolyl, kinolyl, ftalazinyl, naftyridinyl, kinoksalinyl, kinazolinyl, cinnolinyl, pteridinyl, pyrrolinyl, pyrrolidinyl, imidazolidinyl, pyrazolidinyl, pyrazolinyl, piperidyl, piperazinyl, indolinyl, isoindolinyl og morfolinyl. Heterocykliske rester og heteroarylgrupper kan være forbundet til resten av molekylet ved en hvilken som helst posisjon langs ringen. Heterocykliske rester og heteroaryler kan være C2-g eller mindre, så som C3-6, C2-5 eller C3.7.

Andre utførelsesformer ifølge oppfinnelsen omfatter forbindelser hvor A er et C2-4hydrokarbonskjelett.

En annen utførelsesform omfatter forbindelser hvori A omfatter et C3 hydrokarbonskjelett.

Oppfinnelsen vedrører også forbindelser hvori A har en (S)-hydroksyl på karbonatomet alfa til karbonatomet som forbinder A til ringen inneholdende G. Utførelsesformer av oppfinnelsen omfatter også forbindelser hvor A omfatter et Ci-6 mettet hydrokarbonskjelett som har minst én substituent valgt fra hydroksyl og cyano.

Oppfinnelsen tilveiebringer videre forbindelser hvor Q er uavhengig valgt fra ORi, SRi, S02Ri og OS02Ri, hvor hver Ri er uavhengig valgt fra Ci-6alkyl, Ci-ehalogenalkyl, C6fenyl, C6halogenaryl, Ci-3alkoksy-fenyl, C6fenyl-Ci-3alkyl, Ci-3alkyl-C6fenyl, C6halogenaryl-Ci-3alkyl, Ci-3alkyl-C6halogenaryl og (Ci-3alkoksy-C6fenyl)-Ci-3alkyl.

Oppfinnelsen vedrører forbindelse med følgende struktur:

Foreliggende oppfinnelse vedrører også forbindelse med følgende struktur:

og farmasøytisk akseptable salter derav.

Den følgende delen tilveiebringer representative synteser av mellomproduktene.

C. Syntese av halikondrin analoger

En oversikt er tilveiebragt nedenfor, etterfulgt av synteseskjemaer 1-16 og flere detaljerte fremgangsmåter.

Forbindelser av generell formel 4 kan fremstilles ved fremgangsmåten angitt i skjema 1. Nøkkelfragment F-2 eksemplifisert ved vinyljodid forbindelse X2 kan fremstilles i henhold til fremgangsmåten ifølge Kishi et al (Total synthesis of halichondrin B and norhalichondrin B. Aicher, T.D.: Buszek, K.R.; Fang, F.G.: Forsyth, C.J.; Jung, S.H.; Kishi, Y.; Matelich, M.C.; Scola, P. M.; Spero, D.M.; Yoon, S.K. J. Am. Chem. Soc. 1992, 114, 3162-4).

Nøkkelfragment F-3 kan oppnås ved DIBALH reduksjon av den tilsvarende metylesteren, XF3, fremstilt i henhold til fremgangsmåten ifølge Stamos et al (skjema 2). [Synthetic studies on halichondrins: a practical synthesis of the C.1-C.13 segment. Stamos, D.P.; Kishi, Y. Tetrahedron Lett. 1996, 37, 8643-8646]. Syntese av nøkkelfragment F-1 eksemplifisert ved forbindelse 20 kan syntetiseres som beskrevet i skjema 3 eller skjema 4.

Ved å anvende B1793 som et representativt eksempel ga kopling av de tre nøkkelfragmentene etter fremgangsmåter som angitt i skjema 5: Nozaki-Hiyama-Kishi kopling av fragmenter 20 og X2 fulgt av intramolekylær Williamson eterdann-else, tetrahydropyran B2318. Beskyttelsesgruppe modifikasjon som beskrevet i skjema 5 eller alternativt i skjema 6 ga primært jodid B2313. Halogen-metall utbyttingsreaksjon og kopling med nøkkelfragment F-3 ga en blanding av diastereomere alkoholer B2308. Ytterligere beskyttelsesgruppe manipulering og oksidasjon etterfulgt av en intramolekylær Nozaki-Hiyama-Kishi reaksjon ga et mellomprodukt som, når det ble oksidert og behandlet med TBAF undergikk intramolekylær hetero-Michael ringslutning. PPTer formidlet acetaldannelse ga B1793.

Arylgrupper kan inkorporeres i C32 sidekjeden (f.eks B2043) som eksemplifisert i skjema 7. Mellomprodukt B2318 ble avbeskyttet og den resulterende diolen ble oksidativt spaltet til et tilsvarende aldehyd. Behandling med en Grignard-reagens (f.eks pF-PhMgBr), separasjon av de resulterende diastereomerene og silylering ga 204, som ble omdannet til sluttprodukt ved en fremgangsmåte tilsvarende den beskrevet i skjema 6.

Eteranaloger kan fremstilles fra B1793 ved behandling med et egnet alkyler-ingsmiddel (f.eks skjema 8). Tilsvarende kan sulfonater, estere, karbamater osv fremstilles fra B1793 ved behandling med en aktivert karbonylkomponent. Oksidativ diolspaltning og reduksjon eller selektiv hydroksylgruppe oksidasjon kunne gi derivater så som henholdsvis B2037 og B1934.

Alternativt kan én eller flere hydroksylgrupper omdannes til de tilsvarende aminogruppene med etterfølgende kopling med en aktivert karbonylkomponent (skjema 9). Fortrengning av sulfonyl mellomproduktet (f.eks B1920) ved hjelp av karbon eller heteroatom nukleofiler kunne også lett oppnås (skjema 10).

C31 metylanaloger kan fremstilles som angitt i skjema 11. Indiumformidlet kopling av en allylbromidester med 2,3-0-(3-isopropylidin)-D-glyseraldehyd ga lakton 103. Hetero Michael addisjon, laktonreduksjon, Wittig kopling og intramolekylær Michael addisjon ga tetrahydrofuran 107. Pummerer omordning, beskyttelsesgruppe justering og DIBALH reduksjon ga nøkkelfragment F1 (f.eks 114), som ble omdannet til sluttforbindelse ved en fremgangsmåte analog den beskrevet i skjema 6.

Fluoratomer kunne innføres som beskrevet i skjema 12-14. Ved å begynne med det egnede tetrahydrofuran mellomproduktet ble fluorert nøkkelfragment F1 oppnådd og ført til sluttforbindelse ved en fremgangsmåte analog den illustrert i skjema 6.

Triolderivater kunne fremstilles tilsvarende fra tetrahydrofuran mellomproduktet. F.eks, som vist i skjema 15 ga allyltributylstannan addisjon til aldehyd X32 homoallylisk alkohol 33a som ble ført til sluttforbindelse ved en fremgangsmåte tilsvarende den beskrevet i skjema 6. Disse triolene kunne videre modifiseres som eksemplifisert i skjema 6.

1,3 diolderivatene kunne fremstilles fra mellomprodukter som tidligere er beskrevet. F.eks kunne B2086 spaltes oksidativt og reduseres for å gi 1,3-diol B2091 (skjema 16).

Skjema 1

Nøkkelfragment F-3. DIBALH (1 M i toluen, 3,86 ml) ble tilsatt til en opp-løsning av XF-3 (1,46 g, 1,93 mmol) i toluen (37 ml) ved -78°C. Etter omrøring i 10 minutter ble reaksjonen stoppet ved forsiktig tilsetning av MeOH (0,46 ml) og H20 (0,21 ml) oppvarmet til rt og om rørt i 15 minutter. Den hvite suspensjonen ble filtrert gjennom celitt med 1:1 CH2Cl2/Et20. Filtratet ble konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (10% EtOAc-heksaner) for å gi nøkkelfragment F-3 (1,34 g, 96%) som en olje.

Triol 1. En oppløsning av TBDPSCI (444 ml, 1,7 mol) i DMF (0,5 I) ble tilsatt i tre porsjoner til en suspensjon av L-arabinose (250,0 g, 1,66 mol), imidazol (231,4 g, 3,40 mol) og DMF (2,5 I). Tilsetningen av hver porsjon tok 1,5 timer med et intervall på 30 minutter og 15 timer som separerte henholdsvis andre og tredje porsjoner. Den resulterende oppløsningen ble omrørt i 3 timer, konsentrert og renset ved flash kromatografi (5% til 33% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe triol 1 (394 g, 61%).

Triacetat 2. Eddiksyreanhydrid (6,06 mol) ble tilsatt i løpet av 1,5 timer til triol 1 (1,01 mol) i pyridin (1,0 I) ved 15°C. Oppløsningen ble omrørt i 1 time, konsentrert og renset ved flash kromatografi (15% til 25% EtOAc-heksaner) for i gi triacetat 2 (518 g, 97%).

Diacetater3. Allyltrimetylsilan (1,11 mol) etterfulgt av BF3OEt2 (1,11 mmol) ble tilsatt i løpet av 1,5 timer til triacetat 2 (164 g, 0,32 mol) i toluen (1,5 I) ved 0°C. Den oransje oppløsningen ble omrørt i 1 time ved 0°C og i 2 timer ved rt. Blandingen ble langsomt helt inn i en mettet vandig NaHC03 (1,7 I) ved 0°C og omrørt i 30 minutter. Det separerte vandige laget ble ekstrahert med EtOAc (3 x 600 ml) og de kombinerte organiske lagene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (5% til 10% EtOAc-heksaner) for å gi en blanding av diacetater 3 (108 g, 69%).

Diol 4a. Fast K2C03 (72 mmol) ble tilsatt til diacetater 3 (108 g, 218 mmol) i MeOH (0,5 I) ved rt. Suspensjonen ble omrørt i 2,5 timer og deretter konsentrert. Den oransje resten ble suspendert i mettet vandig NH4CI (150 ml), ekstrahert med EtOAc (3 x 150 ml) og de kombinerte organiske lagene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (15% til 50% EtOAc-heksaner) for å gi alfa-isomer 4a (33,86 g, 37%) og beta-isomer 4b (58 g, 63%).

Alkohol 5. Imidazol (16,75 g, 246 mmol) og TBSCI (16,08 g, 107 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av diol 4a (33,86 g, 82 mmol) i CH2CI2 (250 ml) ved 0°C. Etter 18 timer ved 0°C og 5 timer ved rt ble reaksjonblandingen fortynnet med mettet vandig NaHC03 (250 ml), omrørt i 30 minutter og lagene ble tillatt å separere. Det vandige laget ble ekstrahert med EtOAc (3 x 250 ml) og de kombinerte organiske lagene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (2% til 50% EtOAc-heksaner) for å gi alkohol 5 (36,0 g, 83%).

Metyleter 6. Jodmetan (16,5 ml, 265 mmol) og NaH (60% i mineralolje, 5,28 g, 132 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av alkohol 5 (34,93 g, 66 mmol), THF (320 ml) og DMF (80 ml) ved 0°C. Etter 19 timer ved 0°C ble reaksjonen stoppet med mettet vandig NH4CI og mettet vandig Na2S203. Den resulterende blandingen ble omrørt i 20 minutter og lagene ble tillatt å separere. Den vandige fasen ble ekstrahert med EtOAc (3 x 200 ml) og de kombinerte organiske lagene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (3% EtOAc-heksaner) for å gi metyleter 6 (34,23 g, 96%).

Diol 7. HCI (37% vandig løsning, 12,75 ml, 153 mmol) ble tilsatt til en opp-løsning av metyleter 6 (32,93 g, 61 mmol) i MeOH (110 ml) ved rt. Etter 17 timer ble

NaHC03 (17 g) tilsatt til reaksjonsblandingen. Blandingen ble omrørt i 30 minutter, konsentrert, suspendert i EtOAc og filtrert. Filtratet ble konsentrert og renset ved flash kromatografi (50% EtOAc-heksaner til EtOAc) for å diol 7 (10,0 g, 87%).

Alkohol 8. En løsning av pivaloylklorid (8,4 ml, 67 mmol) i pyridin (50 ml) ble i løpet av 1,5 timer tilsatt til en oppløsning av diol 7 (12,24 g, 65 mmol) i pyridin (100 ml) ved 0°C. Etter 1 time ved 0°C og 18 timer ved rt, ble blandingen fortynnet med mettet vandig NH4CI og ekstrahert med EtOAc (3 x 800 ml). De kombinerte organiske lagene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (50% EtOAc-heksaner) for å gi alkohol 8 (16,9 g, 96%).

Olefin9. Benzylbromid (62 ml, 521 mmol) og Bu4NHS04 (10,6 g, 31 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av alkohol 8 (16,9 g, 62 mmol) i CH2CI2 (100 ml) ved 0°C. En oppløsning av NaOH (9,95 g, 248 mmol) i H20 (10 ml) ble tilsatt til reaksjonsblandingen i løpet av 15 minutter. Etter 30 minutter ved 0°C og 18 timer ved rt ble reaksjonsblandingen fortynnet med mettet vandig NH4CI og ekstrahert med CH2CI2 (3 x 100 ml). De kombinerte organiske lagene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (heksaner til 30% EtOAc-heksaner) for å gi olefin 9 (22,1 g, 98%).

Diol 10a. Os04 (0,1 M oppløsning i toluen, 7,3 ml, 0,73 mmol) og en opp-løsning av olefin 9 (24,9 g, 69 mmol) i t-BuOH (165 ml) ble tilsatt til en oppløsning av K2C03 (31,2 g, 161 mmol) K3Fe(CN)6 (74,4 g, 161 mmol), (DHQ)2PYR (1,33 g, 1,50 mmol), H20 (500 ml) og t-BuOH (330 ml) ved 0°C. Etter 3 timer ved 0°C ble Na2S205 5H20 (37,3 g, 150 mmol) tilsatt. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til rt, omrørt i 1 time og ekstrahert med EtOAc (3 x 300 ml). De kombinerte organiske lagene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (5% isopropanol-CH2CI2) for å tilveiebringe diol 10a (17,98 75%).

Silyleter 11. Imidazol (21 g, 308 mmol) og TBSCI (26,5 g, 176 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av diol 10a (17,4 g, 44 mmol) i DMF (90 ml) ved rt. Etter 18 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet med mettet vandig NaHC03 (250 ml) omrørt i 1 time og ekstrahert med CH2CI2 (3 x 100 ml). De kombinerte organiske lagene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (5% EtOAc-heksaner) for å gi silyleter 11 (25,7 g, 94%).

Alkohol 12. En blanding av silyleter 11 (21,2 g, 33,8 mmol), Pd(OH)2 (20%, 4,7 g, 33,8 mmol) og EtOAc (200 ml) ble omrørt ved rt under 1 atmosfære H2 i 3 timer. Blandingen ble filtrert gjennom celitt, konsentrert og renset ved flash kromatografi (10% til 20% EtOAc-heksaner) for å gi alkohol 12 (17,4 g, 96%).

Olefin 13. 4-metylmorfolin N-oksid (7,66, 65 mmol) og TPAP (1,15 g, 3,26 mmol) ble tilsatt i fire porsjoner i løpet av 20 minutter til en oppløsning av alkohol 12 (17,4 g, 32,5 mmol) i CH2CI2 (145 ml) ved 0°C. Etter 20 minutter ble reaksjonsblandingen fortynnet med Et20 (50 ml) og mettet vandig Na2S205 (50 ml) og filtrert gjennom celitt. Det organiske laget ble separert, vasket trinnsvis med mettet vandig CuSCvsaltvannsoppløsning (1:1) og saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, filtrert gjennom celitt og konsentrert for å gi det ønskede rå ketonet.

Tebbe-reagens ble fremstilt ved å omrøre bis(cyklopentadienyl)titan (11,36 g, 45,6 mmol) og MesAI (2,0 M i toluen, 45,6 ml, 92,1 mmol) i 4 dager ved rt. Dette materialet ble avkjølt til -25°C og en oppløsning av rått keton i THF (150 ml) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 0°C, omrørt i 30 minutter, stoppet ved langsom tilsetning av 0,1 N NaOH (3,5 ml) og deretter omrørt i ytterligere 20 minutter ved rt. Blandingen ble fortynnet med Et20, filtrert gjennom celitt og konsentrert. Resten ble oppløst i CH2CI2, filtrert gjennom basisk Al203, konsentrert og renset ved flash kromatografi (5% EtOAc-heksaner) for å gi olefin 13 (12,8 g, 74% for to trinn).

Alkohol 14.9-BBN (0,5 M i THF, 165 ml, 83 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av olefin 13 (12,78 g, 24 mmol) i THF (280 ml) ved 0°C. Etter omrøring i 5 timer ved rt ble reaksjonsblandingen igjen avkjølt til 0°C, ved hvilket tidspunkt H20 (200 ml), THF (100 ml) og NaB03 4 H20 (75 g) ble tilsatt. Blandingen ble oppvarmet til rt, omrørt i 16 timer og deretter konsentrert. Den vandige resten ble ekstrahert med EtOAc (4 x 300 ml) og de kombinerte organiske lagene ble tørket over Na2S04. Konsentrasjon og rensning ved flash kromatografi (20% til 35% EtOAc-heksaner) ga alkohol 14(12,05 g, 91%).

Alkohol 15. DMSO (9 ml, 127 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av oksalylklorid (5,6 ml, 64 mmol) i CH2CI2 (350 ml) ved -78°C. Etter omrøring i 15 minutter ble en oppløsning av alkohol 14 (11,7 g, 0,021 mmol) i CH2CI2 (50 ml) tilsatt og omrøring ble fortsatt i 1 time, hvoretter Et3N (26,7 ml, 192 mmol) ble tilsatt. Reaksjonblandingen ble oppvarmet til 0°C, omrørt i 15 minutter, fortynnet med mettet vandig NH4CI og ekstrahert med CH2CI2 (3 x 200 ml). De kombinerte organiske lagene ble tørket over Na2S04 og konsentrert for å gi det ønskede rå aldehydet.

Dette materialet ble oppløst i CH2CI2 (200 ml) og behandlet med Et3N (20 ml) ved rt. Etter omrøring over natten ble reaksjonsblandingen fortynnet med mettet vandig NH4CI og ekstrahert med CH2CI2 (3 x 200 ml). De kombinerte organiske lagene ble tørket over Na2S04, konsentrert og filtrert gjennom en kort Si02 kolonne (20% EtOAc-heksaner) for å gi det rå, epimeriserte produktet.

Aldehydet ble oppløst i Et20-EtOH (1:1,100 ml), avkjølt til 0°C og behandlet med natriumborhydrid (1,21 g, 32 mmol). Blandingen ble omrørt i 20 minutter, forsiktig fortynnet med mettet vandig NH4CI, omrørt i 30 minutter ved rt og ekstrahert med CH2CI2 (3 x 150 ml). De kombinerte organiske lagene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (20% EtOAc-heksaner) for å gi alkohol 15 (9,95 g, 85% for tre trinn).

MPM-eter 16. BF3 OEt2 (0,1 M i CH2CI2, 0,18 mmol) ble tilsatt til en opp-løsning av alkohol 15 (9,87 g, 18 mmol), MPM-triklorimidat (4,9 ml, 27 mmol) og CH2CI2 (175 ml) ved 0°C. Etter 40 minutter ble en andre porsjon av BF3 OEt2 (0,1 M

i CH2CI2, 0,9 ml, 0,09 mmol) tilsatt til reaksjonsblandingen. Etter 20 minutter ble reaksjonen stoppet med mettet vandig NH4CI, omrørt i 1 time ved rt og fortynnet med Et20 (600 ml). Det organiske laget ble separert og det vandige laget ble ekstrahert

med Et20 (150 ml). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket trinnsvis med 0,1 N vandig NaOH, mettet vandig NaHC03, saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (20% EtOAc-heksaner) for å gi MPM-eter 16 (10,20 g, 85%).

Alkohol 17. LAH (1 M iTHF, 22,5 ml, 22,5 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av MPM-eter 16 (10,05 g, 15 mol) i Et20 (1,0 I) ved 0°C. Etter 30 minutter ble reaksjonen forsiktig stoppet med H20 (1,3 ml) og 1 N vandig NaOH (1,3 ml). Etter omrøring i 1 time ved rt ble suspensjonen filtrert gjennom celitt, konsentrert og renset ved flash kromatografi (20% EtOAc-heksaner) for å gi alkohol 17 (8,18 g, 93%).

Olefin 18. DMSO (5,8 ml, 82,4 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av oksalylklorid (3,6 ml, 41,2 mmol) i CH2CI2 (100 ml) ved -78°C. Etter 15 minutter ble en opp-løsning av alkohol 17 (7,94 g, 13,5 mmol) i CH2CI2 (35 ml) tilsatt til reaksjonsblandingen. Etter omrøring i 1 time ble Et3N (17 ml, 122 mmol) tilsatt, blandingen ble oppvarmet til 0°C, omrørt i 20 minutter, fortynnet med mettet vandig NH4CI og deretter ekstrahert med CH2CI2 (3 x 100 ml). De kombinerte organiske ekstraktene ble tørket over Na2S04, konsentrert og filtrert gjennom en kort Si02 kolonne (20% EtOAc-heksaner) for å gi det ønskede rå aldehydet.

n-BuLi (1,6 M, 20 ml, 30 mmol) ble tilsatt dråpevis til en oppløsning av CH3PPh3Br (10,1 g, 30 mmol) i THF (350 ml) og DMSO (100 ml) ved 0°C. Etter 1 time ble en oppløsning av det rå aldehydet i THF (50 ml) tilsatt. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til rt og omrørt i 3 timer. Mettet vandig NH4CI ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert med EtOAc (3 x 500 ml). De kombinerte ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved

flash kromatografi (7% EtOAc-heksaner) for å gi olefin 18 (5,57 g, 71% utbytte for 2 trinn).

Alkohol 19.9-BBN (0,5 M i THF, 65 ml, 33 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av olefin 18 (5,56 g, 9,6 mmol) i THF (85 ml) ved 0°C. Blandingen ble omrørt i 5 timer ved rt og deretter igjen avkjølt til 0°C. H20 (200 ml), THF (100 ml) og NaB034 H20 (30 g) ble trinnsvis tilsatt. Etter omrøring over natten ved rt ble de organiske flyktige bestanddelene fjernet under redusert trykk. Den vandige resten ble ekstrahert med EtOAc (3 x 200 ml) og de kombinerte organiske lagene ble tørket over Na2S04. Konsentrasjon og rensning ved flash kromatografi (30% EtOAc-heksaner) ga alkohol 19 (12,05 g, 92%).

Aldehyd 20. DMSO (1,36 ml, 19,2 mmol) ble tilsatt dråpevis i løpet av 4 minutter til en oppløsning av oksalylklorid (1,26 ml, 14,4 mmol) i CH2CI2 (120 ml) ved -78°C. Etter omrøring i 10 minutter ble en oppløsning av alkohol 19 (5,76 g, 9,61 mmol) i CH2CI2 (20 ml) tilsatt ved hjelp av en kanyle. Overføringen var fullført ved rensning med ytterligere CH2CI2 (2x5 ml). Etter omrøring i 20 minutter ble blandingen behandlet med Et3N (5,36 ml, 38,4 mmol) og omrørt i 10 minutter ved -78°C, 30 minutter ved 0°C og 10 minutter ved rt. Reaksjonsblandingen ble helt i mettet, vandig NaHC03 (200 ml) og det separerte vandige laget ble ekstrahert med CH2CI2 (3 x) etterfulgt av EtOAc (100 ml). Den kombinerte organiske fasen ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (10% til 20% EtOAc-heksaner) for å gi aldehydforbindelse 20 (5,28 g, 92%) som en olje. B2318. 0,1% NiCI2/CrCI2 (vekt/vekt, 3,21 g) og 1% NiCI2/CrCI2 (vekt/vekt, 4,31 g) ble tilsatt til en oppløsning av aldehyd 20 (3,73 g, 6,25 mmol), nøkkelfragment F-2 eksemplifisert ved vinyljodid X2. (5,10 g, 9,16 mmol), THF (85 ml) og DMF (21 ml) ved rt i en hanskeboks. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 24 timer, fjernet fra hanskeboksen, avkjølt til 0°C, fortynnet med EtOAc (100 ml), stoppet med mettet NH4CI (200 ml) og omrørt i 30 minutter. Den separerte vandige fasen ble ekstrahert med EtOAc (6 x) og de kombinerte organiske lagene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (20% til 30%) for å gi B2318 (~ 3 g) kontaminert med nærtløpende forurensninger og det ikke-ringsluttede mellomproduktet (4,61 g). Sistnevnte (4,61 g, 4,48 mmol) ble oppløst i THF (150 ml), avkjølt til 0°C og behandlet med KHMDS (0,5 M i toluen, 14 ml, 7,0 mmol) over et tidsrom på 2 minutter. Etter omrøring ved 0°C i 15 minutter ble reaksjonen stoppet med mettet vandig NH4CI (150 ml) og oppvarmet til rt. Det separerte vandige laget ble ekstrahert med EtOAc (3 x) og de kombinerte organiske fasene ble tørket over Na2S04, konsentrert og kombinert med det delvis rensede produktet oppnådd ovenfor. Kolonnekromatografi (10% EtOAc-heksaner) ga B2318 (3,17 g, 55%) som en useparabel -3:1 blanding av C27 diastereomerer.

B2317. DDQ (1,45 g, 6,42 mmol) ble tilsatt porsjonsvis i løpet av 30 minutter til en omrørt oppløsning av B2318 (3,12 g, 3,35 mmol) i CH2CI2 (50 ml) og pH 7 fosfatbuffer (5 ml) ved rt. Reaksjonen ble stoppet med mettet vandig NaHC03 (50 ml), omrørt i 5 minutter, fortynnet med ytterligere vandig NaHC03 (100 ml), H20 (200 ml) og ekstrahert med Et20 (5 x). De kombinerte organiske fasene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (15% til 30% EtOAc-heksaner) for å gi utvunnet B2318 (1,40 g) og en blanding av de C27 isomere produktene. Det utvunnede B2318 ble igjen underkastet reaksjonsbetingelsene beskrevet ovenfor for å gi ytterligere produkt. Utvunnet utgangsmateriale ble igjen sirkulert gjennom avbeskyttelsesbetingelsene. Alt det ønskede materialet ble kombinert og separert ved MPLC for å gi B2317 (1,65 g, 61%).

B2316. TsCI (0,63 g, 3,30 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av B2317 (1,60 g, 1,97 mmol) i CH2CI2 (8 ml) og pyridin (2 ml) ved rt. Etter omrøring i 29 timer ble reaksjonen stoppet med mettet vandig NaHC03 (30 ml) og H20 (10 ml). Det separerte vandige laget ble ekstrahert med Et20 og de kombinerte organiske lagene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (15% til 30% EtOAc-heksaner) for å gi B2316 (2,01 g, 9,2%) som en olje sammen med utvunnet B2317(92 mg, 5,8%).

B2315. LAH (1 M i THF, 2,61 ml, 2,61 mmol) ble tilsatt i løpet av 1 minutt til en oppløsning av B2316 (1,68 g, 1,74 mmol) i Et20 (80 ml) ved 0°C. Etter omrøring i 7 minutter ble reaksjonen stoppet ved forsiktig tilsetning av MeOH (0,42 ml, 10,4 mmol) og H20 (0,19 ml, 10 mmol), oppvarmet til rt og omrørt i 20 minutter. Filtrering gjennom celitt med 1:1 CH2CI2-Et20, konsentrasjon og rensning ved kolonnekromatografi (30% til 40% EtOAc-heksaner) ga B2315 (1,38 g, 90%) som en olje.

B2314. MMTrCI (0,70 g, 2,26 mml) ble tilsatt til en oppløsning av B2315 (1,33 g, 1,51 mmol) i CH2CI2 (25 ml) og iPr2NEt (0,79 ml, 4,53 mmol) ved rt. Den resulterende blandingen ble omrørt i 1 time og deretter helt i en blanding av mettet, vandig NaHC03 (20 ml), H20 (10 ml) og Et20 (50 ml). Det separerte vandige laget ble ekstrahert med Et20 (3 x). De kombinerte organiske fasene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (CH2CI2 etterfulgt av 15% til 30% EtOAc-heksaner) for å gi B2314 (1,65 g, 95%) som et fast skum.

B2313. En blanding av B2314 (1,60 g, 1,39 mmol) og Nal (3,10 g, 20,8 mmol) i aceton (50 ml) ble oppvarmet under tilbakeløp i 13 timer. Etter avkjøling til rt ble reaksjonsblandingen fortynnet med EtOAc og konsentrert. H20 (5 ml), saltvanns-oppløsning (20 ml) og Na2S203 (200 mg) ble tilsatt og den resulterende blandingen ble ekstrahert med Et20 (4 x). De kombinerte ekstraktene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (10% EtOAc-heksaner) for å gi B2313 (1,50 g, 97%) som en olje.

B2307 og B2308. Tert-BuLi (1,7 M i pentan, 1,00 ml, 1,7 mmol) ble tilsatt i løpet av 1 minutt til en oppløsning av B2313 (0,90 g, 0,81 mmol) i Et20 (14 ml) ved - 78°C. Etter omrøring i 9 minutter ble blandingen overført ved hjelp av kanyle i løpet av 4 minutter til en oppløsning av nøkkelfragment F-3 (0,83 g, 1,14 mmol) i Et20 (4 ml) ved -78°C. Overføringen ble fullført ved å rense med ytterligere Et20 (2 ml). Den resulterende blandingen ble omrørt ved -78°C i 5 minutter og deretter ved 0°C i 10 minutter, stoppet med mettet vandig NaHC03 (30 ml) og oppvarmet til rt. Det separerte vandige laget ble ekstrahert med Et20 (3 x) og de kombinerte organiske fasene ble tørket over Na2S04 og konsentrert. Resten ble kombinert med de fra to andre porsjoner (tilsvarende 0,11 g og 0,44 g av B2313) og renset ved kolonnekromatografi (10% til 20% EtOAc-heksaner) for å gi en blanding av B2307 og B2308 (1,86 g, 83%) som et fast skum. Selv om isomerene kunne separeres ved preparativ TLC (20% EtOAc-heksaner) ble de ført fremover som en blanding.

B2305 og B2306. Blandingen av B2307/B2308 (1,80 g, 1,05 mmol) ble oppløst i EtOH (20 ml), behandlet med PPTS (10,0 mg, 0,04 mmol), omrørt ved rt i 11 timer og deretter stoppet med NaHC03 (20,0 mg, 0,24 mmol). Etter omrøring i 15 minutter ble blandingen konsentrert, azeotropbehandlet med toluen (15 ml), og renset ved kolonnekromatografi (20% til 30% EtOAc-heksaner) for å gi en blanding av B2305 og B2306 (1,22 g, 81%) som et fast skum. Selv om isomerene kunne separeres ved preparativ TLC (30% EtOAc-heksaner), ble de ført fremover som en blanding.

B2304. En blanding av B2305/B2306 (1,16 g, 0,68 mmol) og Dess-Martin periodinan (0,61 g, 1,44 mmol) i CH2CI2 (35 ml) ble omrørt ved romtemperatur i 1 time. Ytterligere Dess-Martin periodinan (0,54 g, 1,27 mmol) ble tilsatt til blandingen og omrøring ble fortsatt i ytterligere 1 time. Blandingen ble fortynnet med Et20 (100 ml), omrørt i 20 minutter og filtrert gjennom celitt med Et20. Det fargeløse filtratet ble vasket med mettet vandig NaHC03 (100 ml) og det separerte vandige laget ble ekstrahert med Et20 (3X). De kombinerte organiske fasene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (10% til 15% EtOAc-heksaner) for å gi B2304 (0,98 g, 84%) som et fast skum.

Alternativt kan B2304 fremstilles som følger, og i realiteten er syntesen beskrevet nedenfor overlegen sammenlignet med den angitt ovenfor.

Til en oppløsning av alkoholen, 2,4 g i metylenklorid, 29 ml, ble det tilsatt metansulfonylanhydrid, 770 mg. Blandingen ble omrørt i 15 minutter, ekstrahert med mettet natriumbikarbonat, tørket og kromatografert for å gi 2,737 g, 100%.

Til en oppløsning av mesylatet, 405 mg, i DMF, 0,06 ml, ble det tilsatt diisopropyletylamin, 0,130 ml, etterfulgt av benzentiol, 0,061 ml. Etter 4 timer og etter 22 timer ble ytterligere amin, 0,03 ml og benzentiol, 0,015 ml, tilsatt. Etter 24 timer ble blandingen fortynnet med 5% etylacetat/heksan, 1 ml og kromatografert for å gi 409 mg.

Til en oppløsning av sulfidet, 1,97 g, i acetonitril, 16 ml, ble det tilsatt N-metyl-morfolinoksid (NMO) og deretter en oppløsning av 1,02 g tetrapropylammonium-perrutenat (VII), (TPAP), 38 mg, i acetonitril, 1 ml. Etter 3,5 timer ved romtemperatur ble blandingen oppvarmet til 40°C i 1 time. Blandingen ble avkjølt og vandig mettet natriumtiosulfat ble tilsatt og blandingen fordelt mellom vann og etylacetat. Den vanlige opparbeidelsen ga 1,567 g av en brun olje.

Til en oppløsning av pivaloatesteren, 1,567 g, i metylenklorid, 11,2 ml, ved -78°C ble det tilsatt DIBAL, 2,5 ml av en 1 M oppløsning i toluen. Etter 15 minutter ble ytterligere DIBAL, 0,8 ml, tilsatt. Etter ytterligere 5 minutter ble metanol, 0,46 ml, langsomt tilsatt etterfulgt av vann, 0,2 ml. Blandingen ble filtrert gjennom celitt og kromatografert for å gi 1,386 g av en olje.

Til en oppløsning av sulfonet, 36 mg, i DME, 1 ml, ved -40°C ble det tilsatt n-butyllitium, 2,8 ekvivalenter. Etter 35 minutter ble det tilsatt en oppløsning av aldehydet, 42 mg, i DME (0,5 ml). Etter 40 minutter ble det tilsatt mettet, vandig ammoniumklorid og blandingen ble ekstrahert med etylacetat. Den vanlige opparbeidelsen, etterfulgt av kromatografi ga 52 mg av en olje.

Til en oppløsning av alkoholen, 42 mg, i metylenklorid, 2 ml, ble det tilsatt Dess-Martin reagens, 36,4 mg. Blandingen ble omrørt i 30 minutter og eter ble tilsatt. Blandingen ble filtrert gjennom celitt, vasket med mettet natriumbikarbonat, med mettet natriumtiosulfat, opparbeidet på vanlig måte og kromatografert for å gi 38 mg av en olje.

Fremstilling av SMI2 oppløsning

En oppløsning av 1,2-di-jodetan i 10 ml THF ble tilsatt til en suspensjon av Sm, 0,16 g, i THF, 1 ml. Blandingen ble omrørt i 1 time.

En porsjon av denne oppløsningen, 0,03 ml, ble tilsatt til en oppløsning av sulfonet i THF ved -78°C. Etter 5 minutter ble det tilsatt ytterligere Sml2 reagens, 0,05 ml. Etter få ytterligere minutter ble det tilsatt mer reagens, 0,25 ml. Avkjølings-badet ble fjernet og mettet vandig natriumbikarbonat, 3 ml, ble tilsatt. Blandingen ble fordelt mellom eter og vann og den vanlige opparbeidelsen ga 9,1 mg, 81%, av en olje.

B2302 og B2303. I en hanskeboks ble NiCI2/CrCI2 (1% vekt/vekt, 1,09 g, 8,86 mmol) tilsatt til en oppløsning av B2304 (1,01 g, 0,70 mmol) i THF (600 ml) og DMF (150 ml) ved rt. Etter omrøring i 2 dager ble reaksjonsblandingen tatt ut av hanskeboksen, avkjølt til 0°C, stoppet med mettet, vandig NH4CI (300 ml) og omrørt ved 0°C i 20 minutter. Etter tilsetning av H20 (100 ml) ble de to lagene separert og det vandig laget ble ekstrahert med EtOAc (5x). De kombinerte organiske fasene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (15% EtOAc-heksaner) for å gi en blanding av B2302 og B2303 (0,84 g, 92%) som et fast skum. Selv om isomerene kunne separeres ved preparativ TLC (20% EtOAc-heksaner) ble de ført fremover som en blanding.

B2301. En blanding av B2302/B2303 (0,79 g, 0,60 mmol) og Dess-Martin periodinan (0,26 g, 0,60 mmol) i CH2CI2 (30 ml) ved rt ble omrørt i 30 minutter. Ytterligere Dess-Martin periodinan (0,26 g, 0,60 mmol) ble tilsatt til blandingen og omrøring ble fortsatt i ytterligere 1,5 timer. Blandingen ble deretter fortynnet med Et20 (100 ml), omrørt i 15 minutter og filtrert gjennom celitt. Filtratet ble vasket med mettet vandig NaHC03 (100 ml) og det separerte vandige laget ble ekstrahert med Et20 (3x). De kombinerte organiske fasene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (10% til 15% EtOAc-heksaner) for å gi B2301 (0,67 g, 85%) som en olje.

B1793. TBAF (1 M i THF inneholdende 0,5 M imidazol HCI, 4,60 ml, 4,60 mmol) ble i løpet av 2 minutter tilsatt til en oppløsning av B2301 (0,62 g, 0,48 mmol) i THF (29 ml) ved rt og den resulterende blandingen ble omrørt i 18 timer. Etter fortynning med heksaner (10 ml) ble reaksjonsblandingen direkte belagt på en Si02 kolonne pakket med 50% EtOAc-heksaner og eluert med 50% EtOAc-heksaner (1 I) fulgt av 10% MeOH/EtOAc for å samle en blanding av mellomprodukter. Etter opp-løsningsmiddelfjernelse ble resten oppløst i CH2CI2 (15 ml) og behandlet med PPTS (645 mg). Etter omrøring i 1 time ved rt ble ytterligere PPTS (414 mg) tilsatt og den resulterende hvite suspensjonen ble omrørt i 4,5 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter direkte belagt på en Si02 kolonne pakket med 70% EtOAc-heksaner og eluert med 70% EtOAc/heksaner (0,5 I), EtOAc (1 I). Eluering med 5% til 10% MeOH/EtOAc ga rent B1793 (181 mg) og eluering med 15% MeOH-EtOAc ga ytterligere halv-rent produkt, som etter rensning ved preparativ TLC (10% MeOH-EtOAc) ga ytterligere rent B1793 (42 mg). B1793 (totalt 223 mg, 64%) ble oppnådd som et hvitt, fast stoff. HRMS: beregnet for C4oH580i2+Na 753,3826. Funnet: 753,3808.

B1794. Bortsett fra forskjeller i stereokjemi og beskyttende gruppe (skjemaer 4 og 6) ble arabinose omdannet til B1794 ved en fremgangsmåte svarende til den beskrevet for B1793 (se skjemaer 3 og 5). HRMS: beregnet for C4oH580i2+Na 753,3826. Funnet: 753,3856.

Syntese av representative B1793 analoger:

B1920 og B1921. TsCI (9,9 mg, 0,052 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av diol B1793 (7,6 mg, 0,010 mmol) i CH2CI2 (1 ml) og pyridin (0,1 ml) ved rt. Etter 48 timer ble reaksjonen stoppet med en 1:4 blanding av mettet vandig NaHC03-saltvannsoppløsning og ekstrahert med CH2CI2 (4x). De kombinerte ekstraktene ble tørket over Na2S04 og konsentrert. Rensning ved preparativ TLC (80% EtOAc-heksaner) ga monotosylat B1920 (6,0 mg, 67%) og ditosylat B1921 (1,8 mg, 18%).

B2294. MsCI (0,3 M i CH2CI2, 98 (il, 0,030 mmol) ble tilsatt dråpevis i løpet av 40 minutter til en blanding av kollidin (7^1, 0,054 mmol), B1793 (20,8 mg, 0,028 mmol) og CH2CI2 (1 ml) ved 0°C. Etter 76 timer ved 4°C ble reaksjonen stoppet med en 1:4 blanding av mettet vandig NaHC03-saltvannsoppløsning og ekstrahert med CH2CI2 (4x). De kombinerte ekstraktene ble tørket over Na2S04 og konsentrert. Råproduktet ble oppløst i toluen (3 ml) konsentrert og renset ved preparativ TLC (1,5% MeOH-EtOAc) for å gi mesylat B2294 (21,4 mg, 95%).

B2014 og B2015. En 0,016 M oppløsning av 4-fluorbenzylbromid i Et20 (800 u.l, 13 umol) og Ag20 (10 mg, 43 jumol) ble hver tilsatt i tre porsjoner ved 1 times intervaller til en oppløsning ved rt av B1793 (1,7 mg, 2,3 umol) i Et20 (1,2 ml). Blandingen ble beskyttet mot lys, omrørt i 7 timer og deretter filtrert gjennom celitt. Konsentrasjon og rensning ved preparativ TLC (EtOAc) ga primær eter B2014 (1,1 mg, 56%) og sekundær eter B2015 (0,6 mg, 31%). HRMS (FAB): beregnet for C47H63F012+Na 861,4201. Funnet: for B2014 861,4178, for B2015 861,4160.

Generelt. En blanding av B1793 (1 mg, 1,37 mikromol), Et3N (10 mikroliter, 72 mikromol) og ArNCO (2 til 4 ekvivalenter) i CH2CI2 (0,2 ml) ble omrørt ved rt i 4 timer til over natten inntil reaksjonen ble bedømt som fullført ved TLC. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med mettet NaHC03 (3 ml), ekstrahert med CH2CI2 (3x) og EtOAc (2x), tørket over Na2S04 og renset ved preparativ TLC (5% MeOH-CH2CI2) for å gi produktene: B1984. (1,0 mg, 86%) HRMS (FAB): beregnet for C47H63NOi3+Na 872,4197. Funnet: 872,4214.

B1990. (1,1 mg, 92%) HRMS (FAB): beregnet for C47H62CINOi3+Na 906,3807. Funnet: 906,3826.

B1992. (1,0 mg, 83%) HRMS (FAB): beregnet for C^HesNOu+Na 902,4303. Funnet: 902,4269.

B2042. DEAD (0,4 M i eter, 50 (il, 19 umol) ble tilsatt til en oppløsning av B1793 (2,0 mg, 2,7 u.mol), trifenylfosfin (5 mg, 19 umol), 4-nitrobenzosyre (3,2 mg, 19 umol) og Et20 (500 uJ) ved rt. Etter 22 timer ble reaksjonsblandingen belagt direkte på en preparativ TLC plate og eluert med 60% EtOAc-heksaner for å gi mellomprodukt diesteren (3,0 mg). Dette materialet ble opptatt i MeOH (300 uJ) og behandlet med K2CO3 (ca 1 mg). Etter omrøring ved rt i 30 minutter ble reaksjonsblandingen fortynnet med saltvannsoppløsning og ekstrahert med CH2CI2 (5x). De kombinerte ekstraktene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved preparativ TLC (5% MeOH-EtOAc) for å gi B2042 (1,2 mg, 60% for to trinn). HRMS (FAB): beregnet for C4oH580i2+Na 753,3826. Funnet: 753,3810.

B1896 og B1897. NaBH4 (3 mg, 0,08 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av B1793 (2,30 mg, 3,15 umol) i 1:1 CH2CI2-MeOH (0,2 ml) ved rt. Konsentrasjon av reaksjonsblandingen og rensning ved preparativ TLC (8% MeOH-EtOAc) ga B1896 (0,80 mg, 35%) og B1897 (2:1 blanding, 0,15 mg, 6,5%). HRMS (FAB) for B1896: beregnet for C4oH6oOi2+Na 755, 3983. Funnet: 753,3969.

B1918. En blanding av B1793 (2,0 mg, 2,74 u.mol), Nal04 (35 mg, 0,16 mmol), MeOH (0,8 ml) og H20 (0,2 ml) ble omrørt ved rt i 40 minutter. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med H20 (1 ml), ekstrahert med CH2CI2 (6x), tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (5% MeOH-CH2CI2) for å gi B1918 (1,9 mg, 100%).

B2037. En 0,034 M oppløsning av NaBH4 (0,1 ml, 3,4 umol) i EtOH ble tilsatt porsjonsvis til en oppløsning av B1918 (1,9 mg, 2,72 |imol) i MeOH (0,8 ml) og CH2CI2 (0,2 ml) ved -78°C til rt inntil reaksjonen ble bedømt som fullført ved hjelp av TLC. Reaksjonen ble stoppet med mettet vandig NH4CI (2 ml) ved -78°C, oppvarmet til rt, ekstrahert med CH2CI2 (6x), tørket over Na2S04 og renset ved preparativ TLC (5% MeOH-CH2CI2) for å gi B2037 (1,7 mg, 89%). HRMS (FAB): beregnet for CggHseOn+Na 723,3720. Funnet: 723,3749.

B2035. NalC-4 (35 mg, 0,16 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av B1793 (1,7 mg, 0,0023 mmol), MeOH (800 uJ) og H20 (200 uJ) og etter 15 minutter ble blandingen fortynnet med H20 og ekstrahert med CH2CI2 (5x). De organiske ekstraktene ble tørket over Na2S04, konsentrert og mellomprodukt aldehydet ble umiddelbart oppløst i DMF (300 ^l). 3-brom-3,3-difluorpropen (3 jxl, 0,023 mmol) og indiumpulver (3 mg, 0,23 mmol) ble tilsatt og etter 24 timer ble ytterligere 3-brom-3,3-difluorpropen (1 uJ, 0,008 mmol) tilsatt. Etter 18 timer ble H20 tilsatt og blandingen ble ekstrahert med EtOAc (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket trinnsvis med H20 og saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved preparativ TLC (80% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe B2035 (0,74 mg, 41% for 2 trinn) som en blanding av isomerer. HRMS (FAB): beregnet for C42H58F20n+Na 799,3845. Funnet: 799,3883.

B2008, B2011. NaBH4 (2 mg, 0,05 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av B1793 (2,2 mg, 0,003 mmol) i 1:1 CH2CI2-MeOH (200 |il) ved rt. Etter 15 minutter ble mettet vandig NH4CI og H20 tilsatt, og blandingen ble ekstrahert med CH2CI2 (6x) og EtOAc (2x). De kombinerte organiske ekstraktene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (10% MeOH-EtOAc) for å tilveiebringe en mellomprodukt-triol, som ble oppløst i MeOH (800 uJ) og H20 (200 (il). Nal04 (35 mg, 0,16 mmol) ble tilsatt og etter 20 minutter ble blandingen fortynnet med H20 og ekstrahert med CH2CI2 (6x). De organiske ekstraktene ble tørket over Na2S04, konsentrert og mellomprodukt aldehydet ble umiddelbart oppløst i THF (500 uJ). 4-fluorfenylmagnesiumbromid (2 M i Et20,12 uJ, 0,024 mmol) ble tilsatt og etter 20 minutter ble reaksjonen stoppet med mettet vandig NH4CI. Blandingen ble ekstrahert med CH2CI2 (6x) og de kombinerte organiske ekstraktene ble tørket over Na2S04 og konsentrert. Rensning ved preparativ TLC (EtOAc) ga det ønskede produktet som en blanding av 4 isomerer (1,32 mg, 55% for 3 trinn).

Dess-Martin periodinan (~3 mg, 0,007 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av det ovenstående produktet (0,95 mg, 0,0012 mmol) i CH2CI2 (300 uJ) og blandingen ble omrørt ved rt i 20 minutter. Ytterligere Dess-Martin periodinan (~3 mg, 0,007 mmol) og CH2CI2 (300 uJ) ble tilsatt og etter ytterligere 40 minutter ble Et20, mettet, vandig NaHCC-3 (4 ml) og mettet, vandig Na2S203 (1 ml) tilsatt. Blandingen ble ekstrahert med Et20 (3x) og de kombinerte ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (20% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe B2008 (0,58 mg, 61%). HRMS (FAB): beregnet for C45H57FOii+Na 815,3783. Funnet: 815,3758.

B2011. På analog måte ble B1793 (1,9 mg, 0,003 mmol) omdannet til B2011 (0,87 mg, 42% for 4 trinn). HRMS (FAB): beregnet for C^HssOn+Na 797,3877. Funnet: 797,3877.

B2013. En oppløsning av B1920 (1,4 mg, 0,0016 mmol), KCN (1 mg, 0,016 mmol) og DMSO (500 |il) ble oppvarmet ved 60°C i 8 timer. Etter avkjøling til rt ble H20 tilsatt og blandingen ble ekstrahert med EtOAc (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket trinnvis med H20 og saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved preparativ TLC (80% EtOAc-heksaner) for å gi B2013 (0,78 mg, 67%). HRMS (FAB): beregnet for C4iH57NOn+Na 762,3829. Funnet: 762,3848.

X1920.

En blanding av B1920 (1,3 mg, 1,47 u.mol), Nal (30 mg, overskudd) og aceton (1 ml) ble omrørt ved 60°C i 3,5 timer. Etter avkjøling til rt ble reaksjonsblandingen fortynnet med mettet vandig NaHC03 (3 ml), ekstrahert med CH2CI2 (5x) og EtOAc, tørket over Na2S04 og renset ved kolonnekromatografi (50% EtOAc-CH2CI2 til 80% EtOAc-heksaner) for å gi jodidet X1920 (1,3 mg, 100%).

Generelt. En blanding av jodid X1920 (1,0 ekvivalent), iPr2EtN (11 til 22 ekvivalenter), ArSH (9 til 46 ekvivalenter) og DMF (0,3 ml) ble omrørt ved rt inntil reaksjonen ble bedømt som fullført ved TLC (typisk 24 til 48 timer). Reaksjonsblandingen ble fortynnet med mettet vandig NaHC03 (2 ml), ekstrahert med CH2CI2 og EtOAc, tørket over Na2S04 og renset ved preparativ TLC (80% EtOAc-heksaner eller 5% MeOH-CH2CI2) for å gi sulfidproduktene: B1998. (1,3 mg ga 1,1 mg, 85%) HRMS (FAB): beregnet for C46H6iCIOnS + Na 897,3521. Funnet: 897,3533.

B2010. (1,1 mg ga 0,7 mg, 59%) HRMS (FAB): beregnet for C47H640i2S + Na 875,4016. Funnet: 875,4057.

B2019. (1,1 mg ga 0,7 mg, 61%) MS (FAB): M + Na

Generelt. En 0,01 M oppløsning av mCPBA (1,2 ekvivalent) i CH2CI2 ble tilsatt til en oppløsning av et sulfid (1,0 ekvivalent) i CH2CI2 (0,5 ml) ved 0°C i 30 minutter. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med mettet NaHC03 (2 ml), ekstrahert med CH2CI2 og EtOAc, tørket over Na2S04 og renset ved preparativ TLC (80% EtOAc-heksaner eller EtOAc) for å produktene: B2016. (0,9 mg ga 0,7 mg, 74%)

B2030. (1,0 mg ga 0,6 mg, 61%) HRMS (FAB): beregnet for C47H64O14S + Na 907,3914. Funnet: 907,3950.

B1934. TBDPSCI (3,0 fxl, 12 u.mol) ble tilsatt til en oppløsning av B1793 (1,3 mg, 1,78 u.mol), imidazol (10 mg, 166 |imol) og DMF (0,10 ml) ved rt. Etter omrøring i 1 time ble reaksjonsblandingen fortynnet med mettet vandig NaHC03 (2 ml), ekstrahert med CH2CI2 (3x) og EtOAc (2x), tørket over Na2S04 og renset ved preparativ TLC (5% MeOH-CH2CI2) for å gi mellomprodukt silyleteren (1,3 mg, 77%).

Dette materialet ble oppløst i CH2CI2 (0,5 ml) og behandlet med Dess-Martin periodinan (10 mg, 24 |imol) i 1,5 timer ved rt, fortynnet med Et20 og filtrert gjennom celitt. Filtratet ble konsentrert og renset ved preparativ TLC (50% EtOAc-heksaner) for å gi diketon mellomproduktet (1,0 mg, 77%) som ble oppløst i THF (0,5 ml) og behandlet med 0,02 M TBAF inneholdende 0,01 M imidazolhydroklorid (THF opp-løsning, 75 1,5 |Limol) ved rt i 15 minutter. Reaksjonsblandingen ble eluert gjennom en Si02 kolonne (50% EtOAc-heksaner til 5% MeOH-CH2CI2) og det ønskede produktet ble ytterligere renset ved preparativ TLC (5% MeOH-CH2CI2) for å gi B1934 (0,75 mg, 100%). HRMS (FAB): beregnet for C40H56O12 + Na 751,3669. Funnet: 751,3690.

B1922. Tetra-n-butylammoniumazid (0,2 M i DMF, 0,5 ml, 0,10 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av mesylat B2294 (21,4 mg, 0,026 mmol) i DMF (2 ml) ved rt. Etter omrøring ved 83°C i 3,5 timer ble reaksjonsblandingen avkjølt til rt, fortynnet med toluen, konsentrert og renset ved preparativ TLC (80% etylacetat-heksaner) for ågiB1922(18mg, 92%).

B1939. Me3P (1 M iTHF) og H20 (0,8 ml) ble trinnsvis tilsatt til en oppløsning av azid B1922 (24,6 mg, 0,032 mmol) i THF (3,2 ml) ved rt. Blandingen ble omrørt i 22 timer, fortynnet med toluen, konsentrert og renset ved flash kromatografi [trinn-gradient, 10% MeOH-EtOAc etterfulgt av MeOH-EtOAc-30% vandig NH4OH (9:86:5)] for å tilveiebringe det ønskede primære aminet (23,3 mg), som ifølge <1>H-NMR inneholdt -1% trimetylfosfinoksid. Lyofilisering fra benzen og henstand under høy vakuum i 2 dager ga B1939 (20,3 mg, 87%).

Syntese av representative B1939 analoger:

B1930, B1940, B1973, B1987, B1988, B1991, B2003, B2004

B1930. Me3P (1 M i THF, 13 uJ, 0,013 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av B1922 (1,6 mg, 2,1 u.mol), THF (400 uJ) og H20 (100 uJ) ved rt. Blandingen ble omrørt i 22 timer, fortynnet med toluen, konsentrert og azeotropisk tørket med toluen (2x) for å gi det rå aminet som ble anvendt i det neste trinnet.

EDC (0,06 M i CH2CI2,100 uJ, 11 (imol) ble tilsatt til en oppløsning av det rå aminet, benzoylmaursyre (0,8 mg, 5,3 |j.mol) og CH2CI2 (200 ul) ved rt. Etter 30 minutter ble reaksjonen stoppet med en 1:4 blanding av mettet vandig NaHC03-saltvannsoppløsning og ekstrahert med CH2CI2 (5x). De kombinerte ekstraktene ble tørket over Na2S04 og konsentrert og renset ved preparativ TLC (EtOAc) for å gi B1930 (1,5 mg, 83% for to trinn). HRMS (FAB): beregnet for C48H63NO13 + Na 884,4197. Funnet: 884,4166.

B1940. Ved å anvende fremgangsmåten beskrevet ovenfor for B1930 ble B1922 redusert, koplet med 3-pyridyleddiksyrehydroklorid og renset ved preparativ TLC [(MeOH-EtOAc-30% vandig NH4OH (9:86:5)] for å gi B1940 (0,8 mg, 67% for to trinn). HRMS (FAB): beregnet for C47H64N2Oi2 + Na 871,4357. Funnet: 871,4362.

B1973. Ved å anvende fremgangsmåten beskrevet ovenfor ble B1922 (0,9 mg, 1,2 ixmol) redusert, koplet med fenyleddiksyre og renset ved preparativ TLC (5% MeOH-EtOAc) for å gi B1973 (0,44 mg, 44% for to trinn). HRMS (FAB): beregnet for C48H65NOi2 + Na 870,4404. Funnet: 870,4447.

B1987. Ved å anvende fremgangsmåten beskrevet ovenfor ble B1922 (0,9 mg, 1,2 |imol) redusert, koplet med 3-indolglykolsyre og renset ved preparativ TLC (3% MeOH-EtOAC) for å gi B1987 (0,8 mg, 75% for to trinn). HRMS (FAB): beregnet for C5oH64N2Oi3 + Na 923,4306. Funnet: 923,4338.

B1991. Ved å anvende fremgangsmåten beskrevet ovenfor ble B1922 (1,0 mg, 1,3 umol) redusert, koplet med 4-klorbenzosyre og renset ved preparativ TLC (3% MeOH-EtOAc) for å gi B1991 (0,8 mg, 70% for to trinn). HRMS (FAB): beregnet for C47H62CINOi2 + Na 890,3858. Funnet: 890,3843.

B2003. Ved å anvende fremgangsmåten beskrevet ovenfor ble B1922 (1,0 mg, 1,3 umol) redusert, koplet med 3,4,5-trimetoksybenzoylmaursyre og renset ved preparativ TLC (EtOAc) for å gi B2003 (0,7 mg, 56% for to trinn). HRMS (FAB): beregnet for C5iH6gNOi6 + Na 974,4514. Funnet: 974,4525.

B2004. Ved å anvende fremgangsmåten beskrevet ovenfor ble B1922 (1,0 mg, 1,3 umol) redusert, koplet med 3,4,5-trimetoksybenzosyre og renset ved preparativ TLC (5% MeOH-EtOAc) for å gi B2004 (0,7 mg, 58% for to trinn). HRMS (FAB): beregnet for C50H69NO15 +Na 946,4565. Funnet: 946,4599.

B1988. Dess-Martin periodinan (1 mg, 2,3 (imol) ble tilsatt til en oppløsning av B1930 (0,80 mg, 0,93 |imol) i CH2CI2 (500 uJ) ved rt. Etter 1 time ble reaksjonen fortynnet med Et20 og filtrert gjennom celitt. Filtratet ble vasket trinnvis med en 1:9 blanding av mettet vandig NaHC03-Na2S203 og saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved preparativ TLC (80% EtOAc-heksaner) for å gi B1988 (0,45 mg, 56%). HRMS (FAB): beregnet for C48H6iN013 + Na 882,4041. Funnet: 884,4012.

Forbindelse 103. Indium pul ve r (1,35 g, 11,8 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av 102 (3,38 g, 17,6 mmol) i DMF (20 ml) ved rt. Etter omrøring i 30 minutter ble reaksjonsblandingen avkjølt til 0°C. Rent aldehyd 101 (3,72 g, 28,6 mmol) ble deretter tilsatt og blandingen ble omrørt over natten mens temperaturen ble tillatt å oppvarmes til rt. Reaksjonsblandingen ble gjenavkjølt til 0°C og deretter forsiktig stoppet med mettet vandig NH4CI (100 ml). Etter omrøring i 30 minutter ble den resulterende blandingen ekstrahert med Et20 (3x), tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (10% til 20% EtOAc-heksaner) for å gi rent krystallinsk 103 (2,20 g, 59%).

Forbindelse 104. Et3N (72 uJ, 0,51 (imol) ble tilsatt til en oppløsning av 103 (1,09 g, 5,13 mmol) og tiofenol (0,63 ml, 7,16 mmol) i CH2CI2 og den resulterende blandingen ble omrørt ved 0°C i 1 time. Filtrering gjennom Si02 ga en blanding av 104 og 105, hvoretter MPLC (15% til 20% EtOAc-heksaner) ga 104 (0,53 g, 32%) og 105 (0,92 g, 56%).

Forbindelse 106. DIBALH (1 M i toluen, 3,28 ml, 3,28 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av 104 (0,53 g, 1,64 mmol) i toluen (10 ml) ved -78°C og blandingen ble omrørt ved -78°C i 10 minutter. Reaksjonen ble stoppet ved forsiktig tilsetning av MeOH (0,40 ml, 9,84 mmol) og H20 (0,17 ml, 9,84 mmol) oppvarmet til rt og omrørt i

20 minutter. Den hvite suspensjonen ble filtrert gjennom en blanding av celitt og Si02 med 1:1 CH2CI2-Et20 og konsentert for å gi 106 (0,53 g, 100%) som en olje.

106 107

Forbindelse 107. En blanding av 106 (0,53 g, 1,64 mmol) og etyl (trifenylfos-foranyliden)acetat (1,15 g, 3,29 mmol) i toluen (10 ml) ble oppvarmet til 80°C i 15 timer. Blandingen ble avkjølt til rt og DBU (25 uJ, 0,16 mmol) ble innført. Blandingen ble oppvarmet til 80°C i 1,5 timer, avkjølt til rt, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (10% til 20% EtOAc-heksaner) for å gi 107 (0,54 g, 83%) som en olje (3:1 forhold av a:|3 isomerer).

Forbindelse 108. En oppløsning av mCPBA (-55%, 450 mg i 4,5 ml CH2CI2, 1,44 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av 107 (0,54 g, 1,36 mmol) i CH2CI2 (10 ml) ved -78°C. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med mettet vandig NaHC03 (50 ml), H20 (10 ml) og Et20 (60 ml) og deretter oppvarmet til rt. Det separerte vandige laget ble ekstrahert med EtOAc (4x) og de kombinerte organiske fasene ble tørket over Na2S04, konsentert og renset ved kolonnekromatografi (50% EtOAc-heksaner) for å gi 108 (0,51 g, 92%) som en olje.

Forbindelse 109. En blanding av 108 (0,51 g, 1,24 mmol) og NaOAc (1,00 g, 12,4 mmol) i Ac20 (10 ml) ble omrørt ved 140°C i 12 timer, avkjølt til rt og deretter konsentrert. Resten ble fordelt mellom mettet vandig NaHC03 (20 ml) og Et20 (30 ml) og omrørt kraftig ved rt i 30 minutter. Det separerte vandige laget ble ekstrahert med Et20 (2x), og de kombinerte organiske fasene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (5% til 15% EtOAc-heksaner) for å gi 109 (0,41 g, 73%) som en olje.

Forbindelse 110. En blanding av 109 (0,41 g, 0,91 mmol) og K2C03 (44,3 mg, 0,32 mmol) i EtOH (5 ml) ble oppvarmet til 60-70°C i 1 dag. Etter avkjøling til rt ble reaksjonsblandingen konsentrert og eluert gjennom en Si02 kolonne (10% til 20% EtOAc-heksaner) for å gi delvis rensede aldehyd mellomproduktet. Dette materialet ble oppløst i EtOH (2,5 ml), behandlet med NaBH4 (50 mg, 1,32 mmol) og omrørt ved rt i 30 minutter. Blandingen ble konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (40% EtOAc-heksaner) for å gi 110 (181 mg, 66%).

Forbindelse 111. BF3OEt2 (0,05 M i HC2CI2, 175 uJ, 8,75 umol) ble tilsatt til en oppløsning av 110 (181 mg, 0,60 mmol) og p-metoksybenzyl 2,2,2-triklor-acetimidat (0,50 ml, 1,80 mmol) i CH2CI2 (5 ml) ved 0°. Den resulterende blandingen ble omrørt i 1,5 timer ved 0°C og i 2 timer ved rt inntil reaksjonen var fullført. Blandingen ble stoppet med mettet vandig NaHC03 (25 ml) og ekstrahert med Et20 (5x). De kombinerte organiske fasene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (CH2CI2 og deretter 20% EtOAc-heksaner) for å gi halvrent 111 (0,37 g, >100%) som en olje.

Forbindelse 112. En blanding av 111 (0,37 g, max.=0,60 mmol) og TsOH H20 (36 mg) i EtOH (5 ml) ble innledningsvis omrørt ved rt over natten og deretter ved 60°C i 1 time. Ytterligere TsOH H20 (31 mg) ble tilsatt ved rt og reaksjonsblandingen ble omrørt i 1 time ved rt. Blandingen ble deretter konsentrert, stoppet med mettet vandig NaHC03 og ekstrahert med EtOAc (5x). De kombinerte organiske fasene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (20% til 50% EtOAc-heksaner og deretter 5% MeOH-CH2CI2) for å gi 112 (121 mg, 53%) som en olje sammen med utvunnet 111 (49 mg, 21%).

Forbindelse 113. TBSOTf (250 (il, 1,09 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av 112 (121 mg, 0,32 mmol) og EtøM (176 uJ, 1,26 mmol) i CH2CI2 ved 0°C og den resulterende blandingen ble omrørt i 25 minutter. Reaksjonen ble stoppet med mettet vandig NaHC03 (15 ml) og det separerte vandige laget ble ekstrahert med eter (3x). De kombinerte organiske fasene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (5% til 10% EtOAc-heksaner) for å gi 113 (165 mg, 85%) som en olje.

Forbindelse 114. DIBALH (1 M i toluen, 0,54 ml, 0,54 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av 113 (165 mg, 0,27 mmol) i toluen (5 ml) ved -78°C og den resulterende blandingen ble omrørt ved -78°C i 10 minutter. Reaksjonen ble stoppet ved forsiktig tilsetning av MeOH (65 uJ, 0,81 mmol) og H20 (29 jil, 0,81 mmol), varmet til rt og omrørt i 25 minutter. Den hvite suspensjonen ble filtrert gjennom celitt med 1:1 CH2CI2-Et20. Konsentrasjon og rensning ved kolonnekromatografi (10% til 20% EtOAc-heksaner) ga 114 (153 mg, 100%) som en olje.

B2090. Ved en fremgangsmåte tilsvarende den beskrevet i skjema 6 for syntesen av B1794, ble mellomprodukt 114 omdannet til B2090. HRMS (FAB): beregnet for CagHseOn+Na 723,3720. Funnet: 723,3731.

B2136. Ved en fremgangsmåte analog den for B1939 ble B2090 omdannet til B2136. HRMS (FAB): beregnet for C3gH57NOi0+Na 722,3880. Funnet: 722,3907.

Diol 201. TBAF (1 M i THF, 383 uJ, 0,383 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av X2318 (350-LS-218) (80,8 mg, 0,0765 mmol) i THF (7 ml) og omrørt ved rt i 16 timer. Etter delvis konsentrasjon ble resten belagt direkte på en Si02 kolonne pakket ved anvendelse av 30% EtOAc-heksaner. Gradient eluering (30% EtOAc-heksaner til EtOAc) ga diol 201 (49,7 mg, 92%).

Aldehyd 202. En blanding av diol 201 (49,7 mg, 0,0707 mmol), Nal04 (100 mg, 0,47 mmol), MeOH (10 ml) og H20 (2,5 ml) ble omrørt ved rt i 30 minutter. H20 ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert med CH2CI2 (4x). De kombinerte organiske ekstraktene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (30% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe aldehyd 202 (41,7 mg, 88%).

Alkohol 203. 4-fluorfenylmagnesiumbromid (2 M i Et20,155 uJ, 0,31 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av aldehyd 202 (41,7 mg, 0,062 mmol) i THF (6 ml). Etter 15 minutter ved rt ble reaksjonen stoppet med mettet vandig NH4CI og ekstrahert med CH2CI2 (4x). De kombinerte organiske ekstraktene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved preparativ TLC (40% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe alkohol 203 (32,4 mg, 68%) som en 1:1 blanding av C34 isomerer. Den mindre betydningsfulle, uønskede C27 isomeren ble separert ved dette trinnet og ble også isolert som en 1:1 blanding av C34 isomerer (8,4 mg, 18%).

Eter 204. Et3N (18 uJ, 0,13 mmol) og TBSOTf (15 ul, 0,063 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av alkohol 203 (32,4 mg, 0,042 mmol) i CH2CI2 (5 ml) ved 0°C. Etter 20 minutter ble reaksjonen stoppet ved tilsetning av mettet vandig NH4CI og ekstrahert med CH2CI2 (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (20% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe eter 204 (33,1 mg, 89%).

Alkohol 205. LAH (1 M i THF, 113 uJ, 0,113 mmol) ble tilsatt dråpevis til en oppløsning av eter 204 (33,1 mg, 0,0375 mmol) i Et20 (10 ml) ved 0°C. Etter 20 minutter ble H20 og 1 M NaOH tilsatt og blandingen ble omrørt ved rt i 10 minutter. Filtrering gjennom celitt, konsentrasjon og rensning ved kolonnekromatografi (40% EtOAc-heksaner) ga alkohol 205 (28,4 mg, 95%).

Eter 206. Diisopropyletylamin (31 uJ, 0,18 mmol) og MMTrCI (22 mg, 0,071 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av alkohol 205 (28,4 mg, 00356 mmol) i CH2CI2 (4 ml) ved 0°C. Etter 15 timer ved rt ble H20 tilsatt og blandingen ble ekstrahert med CH2CI2 (3x). De kombinerte ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved preparativ TLC (40% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe eter 206 som en ~1,5:1 blanding av C34 epimerer (45 mg, kvant) som inneholdt en liten mengde av nært-løpende forurensninger.

Alkohol 207. DDQ (40 mg, 0,18 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av eter 206 (37 mg, 0,034 mmol) i CH2CI2 (4 ml) og en 1:10 blanding av tBUOH:pH 7 fosfatbuffer (2 ml) ved 0°C. Blandingen ble omrørt kraftig i mørket i 15 minutter. Tre ytterligere porsjoner av DDQ (40 mg, 0,18 mmol) ble tilsatt ved 10 minutters intervaller, deretter ble reaksjonen fortynnet med mettet vandig NaHC03 og ekstrahert med CH2CI2 (3 x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved preparativ TLC (30% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe alkohol 207 (19,2 mg, 59%) så vel som utvunnet eter 206 (9,7 mg, 26%).

Mesylater 208A og 208B. Et3N (19 uJ, 0,13 mmol) og Ms20 (10 mg, 0,056 mmol) ble trinnvis tilsatt til en oppløsning av alkohol 207 (21,3 mg, 0,022 mmol) i CH2CI2 (6 ml) ved 0°C. Etter 30 minutter ble mettet, vandig NaHC03 tilsatt, og blandingen ble ekstrahert med CH2CI2 (3x). De kombinerte ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved preparativ TLC (30% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe mesylater 208A (11,7 mg, 51%) og 208B (6,5 mg, 28%) som enkle C34 isomerer.

B2039 og B2043. Ved en fremgangsmåte svarende til den beskrevet i skjema 6 for syntesen av B1794 ble begge diastereomerer 208A og 208B uavhengig omdannet til B2039 og B2043. HRMS (FAB): beregnet for C45H59FO11 + Na 817,3939. Funnet: for B2039 817,3896, B2043 817,3910.

Alkohol X-2.0 Nal04 (1,16 g, 5,4 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av dioler 10 a, b (1,19 g, 3,0 mmol) i MeOH-H20 (4:1, 75 ml) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble tillatt å oppvarmes til rt. Etter omrøring i 40 minutter ble blandingen fortynnet med EtOAc, filtrert gjennom celitt, konsentrert og fordelt mellom saltvannsoppløsning og CH2CI2. Det separerte vandige laget ble ekstrahert med CH2CI2 (2x). De kombinerte organiske lagene ble tørket over Na2S04 og konsentrert for å gi det rå aldehyd mellomproduktet.

NaBH4 (228 mg, 6,0 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av aldehydet i MeOH-Et20 (1:1, 40 ml) ved 0°C. Blandingen ble omrørt i 30 minutter, forsiktig stoppet med mettet vandig NH4CI, omrørt i 20 minutter ved rt og ekstrahert med CH2CI2 (3x). De kombinerte ekstraktene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (40% til 50% EtOAc-heksaner) for å gi alkohol X-20 (1,02 g, 93% for to trinn).

Silyleter 21. Imidazol (0,94 g, 13,9 mmol) og TBSCI (0,59 g, 3,89 mmol) ble tilsatt trinnvis til en oppløsning av alkohol X-20 (1,02 g, 2,78 mmol) i DMF (10 ml) ved rt. Etter 14 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet med mettet vandig NH4CI og ekstrahert med EtOAc (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med H20, saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (5% til 15% EtOAc-heksaner) for å gi silyleter 21 (1,3 g, 98%).

Alkohol 22. En blanding av Pd(OH)2 (20%, 0,8 g), silyleter 21 (1,3 g, 2,70 mmol) og EtOAc (30 ml) ble omrørt i 1 time under 1 atmosfære H2 ved rt, filtrert gjennom celitt, konsentrert og renset ved flash kromatografi (20% til 40% EtOAc-heksaner) for å gi alkohol 22 (0,96 g, 91%).

Alkohol 25. 4-metylmorfolin N-oksid (980 mg, 8,4 mmol) og TPAP (131 mg, 3,26 mmol) ble tilsatt trinnsvis til en oppløsning av alkohol 22 (1,78 g, 4,6 mmol) i CH2CI2 (45 ml) ved rt. Et kaldt bad var nødvendig for å kontrollere den eksoterme reaksjonen. Etter 20 minutter ble reaksjonsblandingen fortynnet med heksaner, filtrert gjennom en kort Si02 kolonne (15% EtOAc-heksaner) og konsentrert for å gi det rå ketonet.

Tebbe-reagens (14,9 ml, 9,0 mmol) ble tilsatt i løpet av 10 minutter til en oppløsning av det rå ketonet i THF (60 ml) ved 0°C. Etter 20 minutter ble reaksjonsblandingen helt i Et20 (100 ml) som var forkjølt til -78°C, stoppet ved langsom tilsetning av H20 (30 ml), oppvarmet til rt, omrørt i 30 minutter og ekstrahert med Et20 (4x). De kombinerte ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (10% EtOAc-heksaner) for å gi det ønskede olefinet kontaminert med gem-dimetylproduktet (1,07 g). Denne blandingen ble anvendt direkte i det neste trinnet.

9-BBN (0,5 M i THF, 11,6 ml, 5,8 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av olefinet i THF (15 ml) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble tillatt å oppvarmes til rt, omrørt i 5 timer og deretter igjen avkjølt til 0°C. H20 (60 ml), THF (60 ml) og NaB03 4 H20 (5,7

g) ble tilsatt. Etter omrøring i 5 timer ved rt ble THF fjernet under redusert trykk og den vandige resten ble ekstrahert med EtOAc (4x). De kombinerte organiske

ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (20% til 40% EtOAc-heksaner) for å gi alkohol 25 (605 mg, 18% fortre trinn).

Alkohol 26. Ved å anvende fremgangsmåten beskrevet tidligere ble alkohol 25 (604 mg, 1,49 mmol) trinnvis oksidert, isomerisert og redusert. Rensning ved flash kromatografi (20% til 40% EtOAc-heksaner) ga alkohol 26 (550 mg, 91% for tre trinn).

MPM-eter 27. BF3OEt2 (0,05 M i CH2CI2, 270 uJ, 0,013 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av alkohol 26 (545 mg, 1,35 mmol) og MPM-triklorimidat (1,14 g, 4,0 mmol) i CH2CI2 (40 ml) ved 0°C. Etter 1 time ble reaksjonen stoppet med mettet vandig NaHC03, ekstrahert med CH2CI2, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (10% til 15% EtOAc-heksaner) for å gi MPM-eter 27 (580 mg, 82%).

Alkohol 28. LAH (1 M i THF, 1,9 ml, 1,9 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av MPM-eter 27 (580 mg, 1,11 mmol) i Et20 (100 ml) ved 0°C. Etter 30 minutter ble reaksjonen forsiktig stoppet med H20 (0,5 ml) og 1 N vandig NaOH (0,5 ml), omrørt i 1 time ved rt, filtrert gjennom celitt, konsentrert og renset ved flash kromatografi (30% til 50% EtOAc-heksaner) for å gi alkohol 28 (460 mg, 95%).

Olefin 29. DMSO (441 uJ, 6,23 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av oksalylklorid (272 3,12 mmol) i CH2CI2 (30 ml) ved -78°C. Etter 15 minutter ble en opp-løsning av alkohol 28 (458 mg, 1,04 mmol) i CH2CI2 (15 ml) tilsatt til reaksjonsblandingen. Etter omrøring i 1 time ved -78°C ble Et3N (1,3 ml, 9,35 mmol) tilsatt. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 0°C, omrørt i 10 minutter, fortynnet med mettet vandig NH4CI og ekstrahert med CH2CI2 (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble tørket over Na2S04, konsentrert og filtrert gjennom en kort Si02 kolonne (20% til 30% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe det rå aldehydet.

n-Bul_i (1,63 M, 1,4 ml, 2,28 mmol) ble tilsatt dråpevis til en oppløsning av CH3PPh3Br (815 mg, 2,28 mmol), THF (20 ml) og DMSO (7,5 ml) ved 0°C. Etter 1 time ble en oppløsning av aldehydet i THF (10 ml) tilsatt. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til rt og omrørt i 3 timer. Mettet vandig NH4CI ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert med EtOAc (4x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med H20, saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (10% til 15% EtOAc-heksaner) for å gi olefin 29 (380 mg, 95% utbytte for to trinn).

Forbindelse 31. 9-BBN (0,5 M i THF, 6 ml, 3 mmol) ble tilsatt til en opp-løsning av olefin 29 (370 mg, 0,85 mmol) i THF (7 ml) ved 0°C. Blandingen ble tillatt å oppvarmes til rt og omrørt i 1 time. Etter fornyet avkjøling til 0°C ble H20 (30 ml), THF (20 ml) og NaB03 4 H20 (2,8 g) tilsatt. Etter omrøring i 3 timer ved rt ble THF fjernet under redusert trykk. Den vandige resten ble ekstrahert med EtOAc (4x), tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (25% til 50% EtOAc-heksaner) for å gi alkohol 30 som ble anvendt direkte i det neste trinnet.

Pivaloylklorid (157 u.l, 1,27 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av alkohol 30 i CH2Cl2-pyridin (1:1 blanding, 10 ml) ved rt. Etter 18 timer ble ytterligere pivaloylklorid (100 (il, 0,81 mmol) tilsatt. Etter 1 time ble reaksjonsblandingen avkjølt til 0°C, stoppet med MeOH (0,5 ml), konsentrert, fortynnet med saltvannsoppløsning og ekstrahert med CH2CI2 (4x). De kombinerte organiske ekstraktene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (10% til 15% EtOAc-heksaner) for å gi forbindelse 31 (410 mg, 90% for to trinn).

Alkohol 32. TBAF (1 M i THF, 1,14 ml, 1,14 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av 31 (410 mg, 0,761 mmol) i THF (5 ml) ved rt. Etter 1,5 timer ble reaksjonsblandingen konsentrert og renset ved flash kromatografi (40% EtOAc-heksaner til 100% EtOAc) for å gi alkohol 32 (320 mg, 100%).

Alkoholer 33a og 33b. Dess-Martin periodinan (925 mg, 2,18 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av alkohol 32 (309 mg, 0,727 mmol) i CH2CI2 (19 ml) ved rt. Etter 1 time ble reaksjonen fortynnet med Et20 og filtrert gjennom celitt. Filtratet ble vasket trinnvis med en 1:9 blanding av mettet vandig NaHC03-Na2S203 og salt-vannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi

(20% til 30% EtOAc-heksaner) for å gi det ønskede aldehydet, som umiddelbart ble ført til det neste trinnet.

BF3OEt2 (135 uJ, 1,1 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av det rå aldehydet, tri-n-butylallyltinn (337 uJ, 1,08 mmol) og CH2CI2 (16 ml) ved -78°C. Etter 1 time ble reaksjonen stoppet med mettet vandig NaHC03 og ekstrahert med CH2CI2 (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved MPLC (25% til 30% EtOAc-heksaner) for å gi den dominerende, mer polare alkoholen 33a (165 mg, 49% for to trinn) og det mindre dominerende, mindre polare produktet 33b (90 mg, 27% for to trinn).

Forbindelse 34. TBSOTf (163 jllI, 0,710 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av alkohol 33a (165 mg, 0,355 mmol). Et3N (247 [il, 1,78 mmol) og CH2CI2 (5 ml) ved 0°C. Etter 25 minutter ble reaksjonen stoppet med mettet vandig NaHC03, ekstrahert med CH2CI2 (3x), tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (15% til 20% EtOAc-heksaner) for å gi forbindelse 34 (200 mg, 98%).

Dioler 35a og 35b. Os04 (0,1 M oppløsning i toluen, 32 (il, 3,2 (imol) ble tilsatt til en oppløsning av K2C03 (168 mg, 1,22 mmol), K3Fe(CN)6 (400 mg, 1,22 mmol), (DHQ)2PYR (11 mg, 12 umol), H20 (3,2 ml) og t-BuOH (2,2 ml) ved 0°C. Deretter ble en oppløsning av olefin 34 (200 mg, 0,345 mmol) i t-BuOH (1 ml) tilsatt til reaksjonsblandingen. Etter 5 timer ved 0°C ble Na2S205 H20 (200 mg) tilsatt. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til rt, omrørt i 30 minutter og ekstrahert med CH2CI2 (5x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltvannsopp-løsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved preparativ TLC (70% EtOAc-heksaner) for å gi den dominerende, mindre polare diolen 35a (118 mg, 56%), og det mindre dominerende, mer polare diastereomere produktet 35b (74 mg, 35%). De individuelle diastereomerene ble hver ført videre separat.

Forbindelse 36. TBSOTf (177 [il, 0,77 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av diol 35a (118 mg, 0,912 mmol), Et3N (267 [il, 1,92 mmol) og CH2CI2 (5 ml) ved 0°C. Etter 25 minutter ble reaksjonen stoppet med mettet vandig NaHC03, ekstrahert med CH2CI2 (3x), tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (10% til 15% EtOAc-heksaner) for å gi forbindelse 36 (161 mg, 100%). Alkohol 37. Ved å anvende fremgangsmåten beskrevet tidligere for frem-stillingen av alkohol 28 ga forbindelse 36 (161 mg, 0,192 mmol) alkohol 37 (135 mg, 93%) etter rensning ved flash kromatografi (20% til 40% EtOAc-heksaner)

Aldehyd 38. Dess-Martin periodinan (227 mg, 0,535 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av alkohol 37 (135 mg, 0,178 mmol) i CH2CI2 (5 ml) ved rt. Etter 1 time ble reaksjonsblandingen fortynnet med Et20 og filtrert gjennom celitt. Filtratet ble vasket trinnsvis med en 1:9 blanding av mettet vandig NaHC03-Na2S203 og salt-vannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (10% til 20% EtOAc-heksaner) for å gi aldehyd 38 (127 mg, 95%).

B2086, B2102. Hver av diastereomerene oppnådd ovenfor ble separat ført til sluttprodukt ved en fremgangsmåte svarende til den beskrevet i skjema 6 for B1794. Diastereomer 35a ga B2086. Diastereomer 35b ga 2102.

B2088. Nal04 ble tilsatt til en oppløsning av B2086 (1 mg, 1,29 (imol) i MeOH-H20 (4:1,1 ml) ved rt. Etter 30 minutter ble reaksjonsblandingen fortynnet med H20, ekstrahert med CH2CI2 (6x), tørket over Na2S04 og konsentrert for å gi B2088(1,2 mg).

B2091. NaBH4 (0,013 M i EtOH, 20 (il, 0,27 umol) ble tilsatt til en oppløsning av B2088 (1 mg, 1,29 umol) i MeOH-CH2CI2 (4:1, 0,5 ml) ved -78°C. Ytterligere NaBH4 ble tilsatt periodisk under nøye overvåkning av reaksjonen ved hjelp av TLC (totalt 220 (il av NaBH4 oppløsningen var påkrevet). Reaksjonsblandingen ble stoppet ved 0°C med mettet vandig NH4CI, omrørt i 20 minutter ved rt og ekstrahert med CH2CI2 (6x). De kombinerte ekstraktene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved preparativ TLC (7% MeOH-EtOAc) for å gi B2091 (0,40 mg, 50%).

Alkohol 303. 9-BBN (0,5 M i THF, 23 ml, 0,012 mol) ble tilsatt dråpevis i løpet av 30 minutter til en oppløsning av alken 302 (1,51 g, 0,00386 mol) i THF (40 ml) ved 0°C. Etter omrøring ved rt i 80 minutter ble blandingen avkjølt til 0°C og H20 (80 ml) ble forsiktig tilsatt etterfulgt av NaB03 4 H20 (4,2 g, 0,027 mol). Blandingen ble kraftig omrørt ved rt i 2,5 timer, deretter ekstrahert med EtOAc (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (50% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe alkohol 303 (1,37 g, 87%).

Aldehyd 304. Oksalylklorid (88 uJ, 1,00 mmol) ble tilsatt dråpevis til en opp-løsning av DMSO (142 uJ, 2,00 mmol) i CH2CI2 (20 ml) ved -78°C. Etter 30 minutter ble en oppløsning av alkohol 303 (137 mg, 0,335 mmol) i CH2CI2 (5 ml) tilsatt og omrørt ved -78°C i 1 time. Et3N (420 uJ, 3,01 mmol) ble tilsatt og etter 10 minutter ble reaksjonen omrørt i 10 minutter ved 0°C, ved hvilket punkt mettet vandig NH4CI ble tilsatt og den resulterende blandingen ble ekstrahert med CH2CI2 (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (50% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe mellomprodukt aldehydet 304 (0,114 g, 84%) som ble anvendt umiddelbart i det neste trinnet.

Alkohol 305. TBAF (1 M i THF, 5 ul, 0,005 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av aldehyd 304 (0,114 g, 0,27 mmol) i CF3TMS (0,5 M i THF, 1,1 ml, 0,54 mmol) ved 0°C. Etter 20 minutter ble en andre porsjon av TBAF (1M i THF, 100 |il, 0,1 mmol) tilsatt og blandingen ble omrørt i 10 minutter, ved hvilket punkt overskudd TBAF (1 M i THF, 270 u-l, 0,27 mmol) ble tilsatt dråpevis for å spalte mellomprodukt silyleteren. Etter 30 minutter ble blandingen fortynnet med H20 og ekstrahert med EtOAc (3x). De organiske ekstraktene ble vasket med H20, saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (50% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe alkohol 305 (123 mg, 95%) som en useparerbar 1:1 blanding av isomerer.

Silyleter 306. TBSOTf (265 ul, 1,16 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av alkohol 305 (123 mg, 0,257 mmol) og Et3N (430 uJ, 3,08 mmol) i CH2CI2 (8 ml) ved 0°C. Etter omrøring ved rt i 20 timer ble mettet vandig NaHC03 tilsatt, og blandingen ble ekstrahert med CH2CI2 (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (20% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe silyleter 306 (148 mg, 97%).

Alkohol 307. LAH (1 M i THF, 220 ul, 0,22 mmol) ble tilsatt dråpevis til en oppløsning av silyleter 306 (131 mg, 0,22 mmol) i Et20 (5 ml) ved 0°C. Etter 20 minutter ble H20 og 1 m NaOH forsiktig tilsatt. Blandingen ble omrørt ved rt i 30 minutter, filtrert gjennom glassull, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (50% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe alkohol 307 (112 mg, kvant.).

Alken 309. Oksalylklorid (58 uJ, 0,66 mmol) ble tilsatt dråpevis til en opp-løsning av DMSO (94 uJ, 1,3 mmol) i CH2CI2 (10 ml) ved -78°C. Etter 30 minutter ble oppløsning av alkohol 307 (112 mg, 0,22 mmol) i CH2CI2 (3 ml) tilsatt. Etter 1 time ble Et3N (276 |il, 1,98 mmol) tilsatt, og etter 10 minutter ved -78°C ble reaksjonen omrørt ved 0°C i 10 minutter. Mettet vandig NH4CI ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert med CH2CI2 (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (50% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe aldehyd 308 (101 mg, 91%) som umiddelbart ble anvendt i det neste trinnet.

nBuLi (1,63 M i THF, 200 [il, 0,33 mmol) ble tilsatt dråpevis til en oppløsning av CH3PPh3Br (118 mg, 0,33 mmol) i THF (3 ml) og DMSO (1,2 ml) ved 0°C. Etter 70 minutter ble en oppløsning av aldehyd 308 (101 mg, 0,20 mmol) i THF (3 ml) tilsatt og etter 10 minutter ved 0°C ble reaksjonen omrørt ved rt i 1 time. Mettet vandig NH4CI ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert med EtOAc (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (20% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe alken 309 (90,9 mg, 90%).

Alkohol 310. 9-BBN (0,5 M i THF, 17 ml, 8,45 mmol) ble tilsatt dråpevis til en oppløsning av alken 309 (1,06 g, 2,11 mmol) i THF (30 ml) ved 0°C. Etter omrøring i 2,5 timer ved rt ble reaksjonen avkjølt til 0°C og H20 (60 ml) etterfulgt av NaB034 H20 (3,25 g, 21,1 mmol) ble forsiktig tilsatt. Blandingen ble omrørt kraftig ved rt i 2 timer, deretter fortynnet med H20 og ekstrahert med EtOAc (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (20% til 30% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe alkohol 310 (0,920 g, 84%).

Pivaloat 311. En blanding av alkohol 310 (65,8 mg, 0,0126 mmol), pyridin (61 uJ, 0,76 mmol) og PvCI (23 uJ, 0,189 mmol) i CH2CI2 (3 ml) ble omrørt ved rt i 5 timer. En andre reaksjon ved anvendelse av alkohol 310 (0,92 g, 1,76 mmol) ble utført under tilsvarende betingelser og begge reaksjoner ble kombinert under opparbeidelsen: mettet vandig NH4CI ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert med CH2CI2 (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltvanns-oppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (20% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe pivaloat 311 (1,08 g, kvant.).

Alkohol 312. En blanding av eter 311 (0,811 g, 1,33 mmol), DDQ (6,1 g, 27 mmol) og 10:1 tBuOH: pH 7 fosfatbuffer (42 ml) i CH2CI2 (84 ml) ble omrørt kraftig i mørket ved rt i 1,5 timer, ved hvilket punkt ytterligere DDQ (1,0 g, 4,4 mmol) ble tilsatt. Etter 1 time ble mettet vandig NaHC03 tilsatt og blandingen ble ekstrahert med CH2CI2 (4x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket trinnvis med mettet vandig NaHC03 og saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (20% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe alkohol 312 (0,56 g, 87%) så vel som utvunnet utgangsmateriale 311 (97 mg, 12%).

Keton 313. Oksalylklorid (21 ul, 0,12 mmol) ble tilsatt dråpevis til en opp-løsning av DMSO (34 uJ, 0,48 mmol) i CH2CI2 (3 ml) ved -78°C. Etter 1 time ble en oppløsning av alkohol 312 (39,4 mg, 0,081 mol) i CH2CI2 (1,5 ml) tilsatt og blandingen ble omrørt i 1,5 timer. Et3N (100 ul, 0,73 mmol) ble tilsatt, og etter 10 minutter ble blandingen oppvarmet til 0°C. Mettet vandig NH4CI ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert med CH2CI2 (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (30% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe keton 313 (36,6 mg, 93%) som ble anvendt umiddelbart i det neste trinnet.

Alken 314. Tebbe-reagens (-0,65 M i toluen, 720 uJ, 0,47 mmol) ble tilsatt dråpevis til en oppløsning av keton 313 (151 mg, 0,31 mmol) i THF (5 ml) ved 0°C. Etter 15 minutter ble H20 forsiktig tilsatt og blandingen ble ekstrahert med EtOAc (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (10% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe alken 314 (139 mg, 93%).

Alkohol 315. 9-BBN (0,5 M i THF, 6,0 ml, 2,9 mmol) ble tilsatt dråpevis til en oppløsning av alken 314 (468 mg, 0,97 mmol) i THF (10 ml) ved 0°C. Blandingen ble omrørt ved rt i 2 timer, ved hvilket punkt ytterligere 9-BBN (0,5 M i THF, 500 uJ, 0,25 mmol) ble tilsatt. Etter 2,5 timer ble blandingen avkjølt til 0°C og H20 (10 ml) etterfulgt av NaB03 4 H20 (1,5 g, 9,7 mmol) ble forsiktig tilsatt. Blandingen ble kraftig omrørt ved rt i 5 timer, fortynnet med H20 og ekstrahert med EtOAc (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (gradient 20% til 30% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe alkohol 315 (0,47 g, 97%).

Alkohol 316. Oksalylklorid (246 ul, 2,82 mmol) ble tilsatt dråpevis til en opp-løsning av DMSO (400 uJ, 5,64 mmol) i CH2CI2 (40 ml) ved -78°C. Etter 1 time ble oppløsning av alkohol 315 (0,47 g, 0,94 mmol) i CH2CI2 (10 ml) tilsatt og blandingen ble omrørt i 1 time. Et3N (1,2 ml, 8,5 mmol) ble tilsatt, og etter 10 minutter ble blandingen oppvarmet til 0°C og omrørt i 10 minutter. Mettet vandig NH4CI ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert med CH2CI2 (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04 og konsentrert. Det rå aldehydet ble omrørt i CH2CI2 (20 ml) og Et3N (2 ml) ved rt over natten. Mettet, vandig NH4CI ble tilsatt, og blandingen ble ekstrahert med CH2CI2 (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (30% EtOAc-heksaner), dette ga det epimeriserte aldehydet som umiddelbart ble oppløst i 1:1 Et20:EtOH (10 ml) og avkjølt til 0°C. NaBH4 (35 mg, 0,94 mmol) ble tilsatt og etter 10 minutter ble reaksjonen stoppet med mettet vandig NH4CI. Blandingen ble ekstrahert med EtOAc (3x) og de kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (30% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe alkohol 316 (0,410 g, 87% utbytte for 3 trinn).

Eter 317. Alkohol 316 (60,7 mg, 0,12 mmol) og MPMOTCI (0,10 g, 0,36 mmol) ble kombinert, azeotropbehandlet fra toluen (3x) og tørket under høyvakuum over natten. CH2CI2 (3 ml) ble tilsatt og blandingen ble avkjølt til 0°C. BF3 OEt2 (ca 1 |il, 0,01 mmol) ble tilsatt og etter omrøring i 10 minutter ble reaksjonen stoppet med mettet, vandig NH4CI. Blandingen ble ekstrahert med CH2CI2 (3x) og de kombinerte ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved preparativ TLC (30% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe eter 317 (55,4 mg, 74%).

Alkohol 318. LAH (1 M i THF, 104 uJ, 0,104 mmol) ble tilsatt dråpevis til en oppløsning av eter 317 (54 mg, 0,087 mmol) i Et20 (5 ml) ved 0°C. Etter 30 minutter ble H20 og 1 M NaOH forsiktig tilsatt. Blandingen ble omrørt ved rt i 10 minutter, filtrert gjennom glassull, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (30%-50% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe alkohol 318 (45,5 mg, 98%).

Aldehyd 319. Oksalylklorid (11 ul, 0,13 mmol) ble tilsatt dråpevis til en opp-løsning av DMSO (18 uJ, 0,25 mmol) i CH2CI2 (2 ml) ved -78°C. Etter 1,8 timer ble en oppløsning av alkohol 318 (22,6 mg, 0,042 mmol) i CH2CI2 (1 ml) tilsatt, og blandingen ble omrørt i 1 time. EfeN (53 [il, 0,38 mmol) ble tilsatt, og etter 10 minutter ble reaksjonen oppvarmet til 0°C og omrørt i 10 minutter. Mettet, vandig NH4CI ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert med CH2CI2 (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (20% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe aldehyd 319 (21,7 mg, 97%).

B1933. På tilsvarende måte som beskrevet i skjema 6 for syntesen av B1794 ble mellomprodukt 319 omdannet til B1933. HRMS (FAB): beregnet for C41H57F3O11 + H 783,3931. Funnet: 783,3940.

B1942. En blanding av B1896/B1897 (2 mg, 2,73 umol), Nal04 (35 mg, 0,16 mmol), MeOH (0,8 ml) og H20 (0,2 ml) ble omrørt ved rt i 30 minutter. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med H20 (3 ml) og ekstrahert med CH2CI2 (6x) og EtOAc (2x). De kombinerte organiske fasene ble tørket over Na2S04 og renset ved kolonnekromatografi (5% MeOH-CH2Cl2) for å gi det ønskede aldehydet.

Dette materialet ble oppløst i THF (0,1 ml), avkjølt til 0°C og behandlet med 0,5 M CF3TMS i THF (30 uJ, 15 mmol) etterfulgt av 0,05 M TBAF i THF (5 ml, 0,025 mmol). Etter omrøring i 30 minutter ble reaksjonsblandingen fortynnet med mettet vandig NaHC03 (2 ml) og H20 (1 ml), ekstrahert med EtOAc (6x), tørket over Na2S04, filtrert og konsentrert for å gi den rå bis-TMS eteren.

Dette materialet ble oppløst i THF (0,5 ml) og behandlet med 1 M TBAF i THF inneholdende 0,5 M imidazolhydroklorid (8 [il, 8 u.mol) ved rt i 30 minutter. Reaksjonsblandingen ble eluert gjennom en Si02 kolonne (50% EtOAc-heksaner til EtOAc) for å gi diol mellomproduktet.

En blanding av dette produktet og Dess-Martin periodinan (10 mg, 24 mmol) i CH2CI2 (0,5 ml) ble omrørt ved rt i 1 time, fortynnet med Et20 (5 ml) og filtrert gjennom celitt. Filtratet ble konsentrert og renset ved preparativ TLC (50% EtOAc-heksaner) for å gi B1942 (1,5 mg, 72% for 5 trinn). HRMS (FAB): beregnet for C40H53F3On + H 767,3516. Funnet: 767,3542.

Alkohol 401. En blanding av Nal04 (375 mg, 1,74 mmol), X400 (674 mg, 1,58 mmol), MeOH (16 ml) og H20 (4 ml) ble omrørt ved rt i 1 time. Etter fortynning med H20 ble blandingen ekstrahert med CH2CI2 (4x) og de kombinerte organiske ekstraktene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (30% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe mellomprodukt aldehydet (570 mg), som umiddelbart ble oppløst i DMF (15 ml). Indium (275 mg, 2,4 mmol) og 3-brom-3,3-difluorpropen (240 uJ, 2,4 mmol) ble tilsatt og etter omrøring ved rt i 17 timer ble H20 og 0,1 m HCI tilsatt. Blandingen ble ekstrahert med EtOAc (3x) og de kombinerte organiske ekstraktene ble vasket trinnvis med H20 og saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (20% til 30% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe alkohol 401 som en 1:1 blanding av C34 isomerer (605 mg, 81% for 2 trinn).

Diol 402. En blanding av Os04 (1 xstal), alkohol 401 (605 mg, 1,28 mmol), 4-metylmorfolin N-oksid (0,45 g, 3,84 mmol), aceton (30 ml) og H20 (6 ml) ble omrørt ved rt i 29 timer. Ytterligere Os04 (3 xtaler) og 4-metylmorfolin N-oksid (0,1 g, 0,8 mmol) ble tilsatt og etter 2 dager ble mettet vandig Na2S203 tilsatt. Blandingen ble ekstrahert med CH2CI2 (6x) og de kombinerte organiske ekstraktene ble tørket over Na2S04 og konsentrert. Den rå mellomprodukt triolen ble umiddelbart oppløst i 4:1 :MeOH:H20 (25 ml) og Nal04 (0,41 g, 1,9 mmol) ble tilsatt. Etter kraftig omrøring ved rt i 2 timer ble blandingen fortynnet med H20, ekstrahert med CH2CI2 (3x) og de kombinerte organiske ekstraktene ble tørket over Na2S04 og konsentrert for å tilveiebringe mellomprodukt aldehydet som umiddelbart ble oppløst i 1:1 EtOH-Et20 (30 ml) og avkjølt til 0°C. NaBH4 (48 mg, 1,3 mmol) ble tilsatt og etter 20 minutter ble reaksjonen stoppet med H20 og ekstrahert med CH2CI2 (4x). De kombinerte organiske ekstraktene ble tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (50% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe diol 402 (485 mg, 80% for 3 trinn).

Silyleter 403. TBSOTf (2,3 ml, 10 mmol) ble tilsatt dråpevis til en blanding av diol 402 (485 mg, 1,0 mmol) Et3N (2,8 ml, 20 mmol) og CH2CI2 (30 ml) ved 0°C. Etter omrøring i 1 time ved rt ble mettet, vandig NH4CI tilsatt, og blandingen ble ekstrahert med CH2CI2 (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (20% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe silyleter 403 (668 mg, 95%).

Alkohol 404. LAH (1 M i THF, 2,8 ml, 2,8 mmol) ble tilsatt dråpevis til en opp-løsning av silyleter 403 (668 mg, 0,948 mmol) i Et20 (60 ml) ved 0°C. Etter 15 minutter ble H20 og 1M NaOH forsiktig tilsatt. Blandingen ble omrørt ved rt i 20 minutter, filtrert gjennom glassull, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (30% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe alkohol 404 (500 mg, 85%).

Aldehyd 405. Oksalylklorid (210 ul, 2,42 mmol) ble tilsatt dråpevis til en opp-løsning av DMSO (345 fil, 4,84 mmol) i CH2CI2 (30 ml) ved -78°C. Etter 1 time ble en oppløsning av alkohol 404 (500 mg, 0,806 mmol) i CH2CI2 (10 ml) tilsatt. Etter 40 minutter ble Et3N (1,0 ml, 7,2 mmol) tilsatt. Etter omrøring ved -78°C i 10 minutter ble reaksjonsblandingen oppvarmet til 0°C og omrørt i ytterligere 10 minutter. Mettet, vandig NH4CI ble tilsatt, og blandingen ble ekstrahert med CH2CI2 (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket trinnvis med H20, saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04 og konsentrert. Rensning ved flash kromatografi (30% EtOAc-heksaner) ga aldehyd 405 (486 mg, 98%) som umiddelbart ble anvendt i det neste trinnet.

Alken 406. nBuLi (1,63 M, 860 ul, 1,4 mmol) ble tilsatt dråpevis til en opp-løsning av CH3PPh3Br (500 mg, 1,4 mmol) i THF (15 ml) og DMSO (6 ml) ved 0°C. Etter 1 time ble en oppløsning av aldehydet 405 (486 mg) i THF (15 ml) tilsatt. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til rt og omrørt i 30 minutter. Mettet, vandig NH4CI ble tilsatt, blandingen ble ekstrahert med EtOAc (3 x) og de kombinerte ekstraktene ble vasket trinnvis med H20 og saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (20% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe alken 406 (450 mg, 93%).

Ester 407. 9-BBN (0,5 M i THF, 9,0 ml, 4,5 mmol) ble tilsatt dråpevis til en oppløsning av alken 406 (0,460 g, 0,746 mmol) i THF (10 ml) ved 0°C. Etter opp-varming til rt ble blandingen omrørt i 3 timer og to ytterligere porsjoner av 9-BBN (0,5 M i THF, 3,0 ml, 1,5 mmol) ble tilsatt ved 30 minutters intervaller. Reaksjonsblandingen ble igjen avkjølt til 0°C, hvorpåTHF (10 ml), H20 (10 ml) og NaB034 H20 (1,72 g, 11,2 mmol) ble forsiktig tilsatt. Blandingen ble omrørt kraftig ved rt i 1,5 timer, og ytterligere NaB03 4 H20 (1,0 g, 6,5 mmol) ble tilsatt. Etter 2 timer ble blandingen fortynnet med H20 og ekstrahert med EtOAc (3x). De kombinerte ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (20% til 30% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe mellomproduktalkoholen (509 mg) som umiddelbart ble oppløst i CH2CI2 (10 ml) og behandlet med pyridin (600 uJ, 7,5 mmol) og PvCI (275 [il, 2,2 mmol). Etter 6 timer ble mettet, vandig NH4CI tilsatt, og blandingen ble ekstrahert med CH2CI2 (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (20% til 30% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe ester 407 (423 mg, 79% for 2 trinn).

Alkohol 408. En blanding av ester 407 (11 mg, 0,015 mmol) og Pd(OH)2/C (10 mg) i EtOAc (500 |il) ble omrørt kraftig under en H2 atmosfære ved rt i 6 timer. Blandingen ble filtrert gjennom celitt, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (30% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe alkohol 408 (9,4 mg, kvant.).

Alken 409. Oksalylklorid (7|il, 0,075 mmol) ble tilsatt dråpevis til en opp-løsning av DMSO (11 0,15 mmol) i CH2CI2 (2 ml) ved -78°C under N2. Etter 40 minutter ble en oppløsning av alkohol 408 (15,2 mg, 0,025 mmol) i CH2CI2 (1 ml) tilsatt, og reaksjonen ble omrørt ved -78°C i 1 time. Et3N (31 uJ, 0,22 mmol) ble tilsatt, og etter omrøring i 10 minutter ble blandingen oppvarmet til 0°C. Etter 10 minutter ble reaksjonsblandingen stoppet med mettet, vandig NH4CI og ekstrahert med CH2CI2 (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket trinnvis med H20 og saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04 og konsentrert. Etter flash kromatografi (30% EtOAc-heksaner) ble mellomprodukt ketonet (13 mg) umiddelbart oppløst i THF (500 ul) og behandlet med Tebbe-reagens (-0,65 M i toluen, 62 uJ, 0,040 mmol) ved 0°C. Etter 1,5 timer ble ytterligere Tebbe-reagens (-0,65 M i toluen, 62 uJ, 0,040 mmol) tilsatt, og etter 10 minutter ble H20 og deretter saltvannsoppløsning forsiktig tilsatt. Blandingen ble ekstrahert med EtOAc (3x), og de kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (10% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe alken 409 (11,9 mg, 80% for 2 trinn).

Alkohol 410. 9-BBN (0,5 m i THF, 1,5 ml, 0,72 mmol) ble tilsatt dråpevis til en oppløsning av alken 409 (0,144 g, 0,242 mmol) i THF (2 ml) ved 0°C. Etter opp-varming til rt ble blandingen omrørt i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble igjen avkjølt til 0°C, hvorpå THF (2 ml), H20 (2 ml) og NaB03 4 H20 (0,38 g, 2,4 mmol) ble forsiktig tilsatt. Blandingen ble omrørt kraftig ved rt i 4 timer, fortynnet med H20 og ekstrahert med EtOAc (3x). De kombinerte ekstraktene ble vasket med saltvanns-oppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (20% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe alkohol 410 (0,140 g, 94%).

Alkohol 411. Oksalylklorid (26 uJ, 0,30 ml) ble tilsatt dråpevis til en oppløsning av DMSO (43 jllI, 0,60 mmol) i CH2CI2 (4 ml) ved -78°C. Etter 1 time ble oppløsning av alkohol 410 (57 mg, 0,093 mmol) i CH2CI2 (2 ml) tilsatt. Etter 45 minutter ble Et2N (125 |il, 0,90 mmol) tilsatt. Etter omrøring ved -78°C i 10 minutter ble reaksjonsblandingen oppvarmet til 0°C og omrørt i ytterligere 10 minutter. Mettet, vandig NH4CI ble tilsatt, og blandingen ble ekstrahert med CH2CI2 (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04 og konsentrert. Råproduktet ble oppløst i CH2CI2 (4 ml), behandlet med Et3N (400 [il) og omrørt ved rt i 15 timer. Mettet, vandig NH4CI ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert med CH2CI2 (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (30% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe mellomprodukt aldehydet (48 mg), som umiddelbart ble oppløst i 1:1 Et20-EtOH (4 ml), avkjølt til 0°C og behandlet med fast NaBH4 (~4 mg, 0,09 mmol). Etter omrøring i 15 minutter ble mettet, vandig NH4CI forsiktig tilsatt, og blandingen ble ekstrahert med EtOAc (3x). De kombinerte ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (20% til 30% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe alkohol 411 (45,6 mg, 80% for 3 trinn). 412Aog 412B. Alkohol 411 (120 mg, 0,196 mmol) og MPMOTCI (0,17 g, 0,59 mmol) ble kombinert, azeotropbehandlet fra toluen (3x) og tørket under høy-vakuum i 1 time. CH2CI2 (9 ml) ble tilsatt og blandingen ble avkjølt til 0°C. BF3 OEt2 (0,016 M i CH2CI2,125 ul, 0,002 mmol) ble tilsatt dråpevis, og etter omrøring i 20 minutter ble reaksjonen stoppet med mettet, vandig NH4CI. Blandingen ble ekstrahert med CH2CI2 (3x) og de kombinerte ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved preparativ TLC (20% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe mellomprodukt MPM eteren som inneholdt noen nærtløpende forurensninger. Dette materialet ble umiddelbart oppløst i Et20 (10 ml) og behandlet med LAH (1 M i THF, 300 uJ, 0,300 mmol) ved 0°C. Etter 10 minutter ble H20 og 1 M NaOH tilsatt, og etter omrøring i 10 minutter ved rt ble blandingen filtrert gjennom celitt, konsentrert og renset ved preparativ TLC (35% EtOAc-heksaner) for å tilveiebringe 412A (49 mg, 39% for 2 trinn) som en enkel C34 isomer og 412B:412A (46 mg, 36% for 2 trinn) som en -9:1 blanding av C34 isomerer.

B2070 og B2073. Ved en fremgangsmåte svarende til den beskrevet i skjemaer 4 og 6 og syntesen av B1794 ble mellomprodukter 412A og 412B omdannet til henholdsvis B2070 og B2073. For B2070: HRMS (FAB): beregnet for C4iH58F2012 +Na 803,3794. Funnet: 803,3801. ForB2073: HRMS (FAB): beregnet for C4iH5sF20i2 + Na 803,3793. Funnet: 803,3781.

Diol 501 (64). Mettet, vandig NaHC03 (21 ml) og KB r (89 mg, 0,75 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av diol 10a eller 10b (1,35 g, 3,4 mmol) i CH2CI2 (34 ml). Blandingen ble avkjølt til 0°C og 4-metoksy-2,2,6,6-tetrametyl-1-piperidinyloksy (0,05 M i CH2CI2, 7,45 ml, 0,37 mmol) og NaOCI (0,07 M i H20, 5,6 ml, 0,39 mmol) ble trinnsvis tilsatt. Etter 1 time ble reaksjonsblandingen stoppet med mettet, vandig Na2S203, fortynnet med mettet, vandig NaHC03 og ekstrahert med CH2CI2 (3x). De kombinerte ekstraktene ble tørket over Na2S04, konsentrert og oppløst i THF (21 ml).

Etter avkjøling til 0°C ble CF3TMS (1,5 g, 10,5 mmol) og TBAF (0,1 M i THF, 680 0,068 mmol) trinnsvis tilsatt. Etter omrøring i 40 minutter ble ytterligere TBAF (1 M i THF, 8,3 ml, 8,3 mmol) tilsatt. Etter 30 minutter ble reaksjonen stoppet med H20 og ekstrahert med EtOAc (3x). De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltvannsoppløsning, tørket over Na2S04, konsentrert og renset ved flash kromatografi (30%, 40%, 50% EtOAc-heksaner, etterfulgt av EtOAc) for å gi en 2:1 blanding av dioler (553 mg, 35%). Separasjon ved MPLC (1,5% MeOH-CH2CI2) ga den dominerende, mer polare isomeren 501 (64) (340 mg, 22%) og den mindre dominerende, mindre polare isomeren (152 mg, 10%).

B1963. På tilsvarende måte som beskrevet i skjemaer 4 og 6 for syntesen av B1794, ble mellomprodukt 501 omdannet til B1963.

Disse forbindelsene fremstilles ved å behandle B2294 med et egnet amin i et oppløsningsmiddel, så som metanol, i et tidsrom på fra få timer til flere dager. Reaksjonsforløpet kan overvåkes ved tynnsjikt kromatografi. En standard opparbeid-elsesprosedyre, som er velkjent for fagmannen, gir de ønskede forbindelsene. Fremgangsmåten nedenfor er for å fremstille ER803868; imidlertid er denne fremgangsmåten generell og kan anvendes for å fremstille en hvilken som helst ønsket analog.

Syntese av ER803868

Til en oppløsning av B2294,1,2 mg i metanol, 0,5 ml, ble det tilsatt morfolin, 0,012 ml. Blandingen ble omrørt i 10 dager med ytterligere morfolin, 0,012 ml, tilsatt på dager 1, 2, 3, 4 og 8. Blandingen ble deretter kromatografert for å gi 1,4 mg av den ønskede forbindelsen.

D. Farmakologisk aktivitet

Mange av de individuelt omtalte legemidlene ble testet for in vitro og in vivo aktivitet (se tabell 1, nedenfor). Undersøkelsesmetoder omfattet en standard in vitro cellevekst-inhiberingsanalyse ved anvendelse av DLD-1 humane tarmkreftceller (ATCC aksesjonsnr. CCL 221) i en 96-brønns mikrotiterplate utgave (Finlay, G.J. et al. Analytical Biochemistry 139:272-277, 1984), en U937 (ATCC aksesjonsnr. CRL 1593) mitotisk blokk reversibilitetsanalyse (beskrevet nedenfor), og i noen tilfeller en LOX human melanom tumor xenograft in vivo vekst inhiberingsanalyse (se tabell 1). Kjemisk stabilitet overfor esterase nedbrytning ble også undersøkt.

U937 mitotisk blokk reversibilitetsanal<y>se

U937 humane histocytiske lymfomceller ble tilsatt til 75 cm<2> vevskulturkolber ved 2,5 x 10<6> celler i 22,5 ml RPMI medium 1640 inneholdende 10% føtalt bovint serum. Celler ble tillatt å tilpasses dyrkingen i løpet av 36 timers inkubasjon ved 37°C i en fuktet atmosfære inneholdende 5% C02. Hvert forsøkslegemiddel ble deretter tilsatt til en kolbe som 2,5 ml av 10x sluttkonsentrasjon. Sluttkonsentrasjon-er oppnådd var 0,1-1000 nM, i halv log-inkrementer, i totalt 10 konsentrasjonstrinn omfattende en legemiddelfri kontrollkolbe som mottok 2,5 ml medium. Celler ble inkubert med legemiddel i 12 timers forbehandlingsperiode ved 37°C i en fuktet atmosfære inneholdende 5% C02.

Innholdet ble fjernet fra hver kolbe og sentrifugert ved 300 x g i 10 minutter ved romtemperatur, hvoretter legemiddelholdig medium ble fjernet fra cellepelleten. Celler ble resuspendert i 25 ml varmt legemiddelfritt medium og sentrifugert ved 300 x g i 10 minutter ved romtemperatur. Etter fjerning av medium fra cellepelleten, ble celler resuspendert i 35 ml varmt legemiddelfritt medium, overført til nye kolber, og en 10 ml prøve av celler ble umiddelbart fjernet fra hver kolbe, straks bearbeidet som beskrevet nedenfor og lagret for senere cellecyklusanalyse (0 timer for legemiddelutvasking).

Inkubering av de gjenværende 25 ml celler ble fortsatt i legemiddelfritt medium i ytterligere 10 timer. En 10 ml prøve av celler ble fjernet fra hver kolbe, straks bearbeidet og lagret for senere cellecyklusanalyse (10 timer for legemiddelutvasking) og 10 ml friskt erstatningsmedium ble tilsatt til hver inkuberingskolbe. Inkubering av celler i legemiddelfritt medium fortsatte i 5 dager. Ved dag 2 ble 20 ml medium av celler fjernet fra hver kolbe og erstattet med 20 ml friskt medium. Levedyktighet av celler ble kvantifisert etter 5 dager ved tryptofan blå utelukkelses-teknikker ved anvendelse av hemacytometertelling.

Celler ble bearbeidet for cellecyklusanalyse ved å anvende modifikasjoner av fremgangsmåten publisert i Becton Dickinson Immunocytometry Systems kildebok, del 1.11 (preparering av alkoholfikserte hele celler fra suspensjoner for DNA-analyse). Kort sammenfattet ble hver 10 ml prøve av celler fjernet fra kolbene ved 0 og 10 timer av legemiddelutvasking separat sentrifugert ved 300 x g i 10 minutter. Etter fjernelse av mediet fra cellepelleten ble celler resuspendert i 3 ml kaldt saltvann. 7 ml kald 100% etanol ble langsomt tilsatt under kraftig virvling. Etanol behandlede celleprøver fra 0 timer og 10 timers perioder av forbindelses-utvasking ble lagret over natten ved 4°C. Etanolbehandlede celler ble sentrifugert 300 x g i 10 minutter, etanol ble fjernet og celler ble deretter vasket i 10 ml fosfatbufferet saltvann (PBS). Celler ble resuspendert i 0,5 ml av 0,2 mg/ml ribonuklease A (Sigma nr. R-5503) i PBS og inkubert i vannbad av 37°C i 30 minutter.

Celler ble overført til egnede strømningscytometrirør og 0,5 ml 10 mg/ml propidiumjodid (Pl) (Sigma nr. P4170) i PBS ble tilsatt til hvert rør. Celler ble inkubert med Pl ved romtemperatur i mørk tilstand i minst 15 minutter før analyse med et strømningscytometer (Becton Dickinson FACScan strømningscytometer eller ekvivalent). Celler bør analyseres i løpet av en time og holdes i mørk tilstand ved 4°C inntil de er klare. Cellecyklusanalyse ble utført ved 0 timer og 10 timer ved anvendelse av strømningscytometrisk måling av intensiteten av cellulær fluorescens. Intensiteten av propidiumjodid fluorescens for hver celle ble målt på en lineær forsterkningsskala hvor dublett hendelser ble ignorert ved anvendelse av dublett diskriminering. Resultatene oppnådd fra analysering av 15.000 celler ble presentert som et histogram med økende fluorescens intensitet på x-aksen og antallet celler ved et spesielt intensitetsnivå på y-aksen.

Intensiteten av Pl farging er avhengig av mengden DNA i cellen, slik at det er mulig å identifisere celler i forskjellige faser av cellecyklusen, så som celler som fremdeles ikke har syntetisert DNA siden den siste mitosen (d fase), celler som er i mellomtrinn av DNA syntese (S fase), og celler som har fordoblet komplementet av DNA og er klar til å deles (G2 fase). Celler som blokkeres i mitosefasen av cellecyklusen har også den dobbelte mengden DNA sammenlignet med Gi faseceller. Dersom alle celler er blokkert i mitose finnes det ingen Gi faseceller, fullføres mitose og kommer til syne i Gi fasen. Antallet celler som vender tilbake i Gi eller S-fasen er følgelig et mål for antallet celler som nylig har fullført mitose. For hver prøve ved 0 og 10 timer forbindelsesfjernelse ble prosentdelen av celler som fullfører mitose kvantifisert (som antallet celler som igjen kommer til syne i Gi fasen) og avsatt som en funksjon av den innledende konsentrasjonen av forbindelse anvendt under 12 timers forbehandlingsperioden. Prosentdelen av fremdeles levedyktige celler 5 dager etter legemiddelutvasking ble superponert på den samme grafen. Et forhold kan bestemmes mellom forbindelseskonsentrasjonen påkrevet for fullstendig å blokkere alle celler i mitose ved 0 timer, og konsentrasjonen påkrevet for å opp-rettholde blokkeringen 10 timer etter forbindelsesfjernelse. Dette ble tatt som et mål på en forbindelsesreversibilitet, hvor forholdene nær eller lik én indikerer sannsynlig potente in vivo anti-tumor forbindelser (se tabell 1, kolonner 4-6).

-r

Det er mulig å identifisere et middel som induserer en vedvarende mitotisk

blokkering i en celle etter transient eksponering av cellen mot middelet. Det er mulig å bestemme den relative reversibiliteten av testforbindelsen ved å relatere målingen av trinn (d) og målingen av trinn (f), som beskrevet nedenfor. Denne bestemmelsen kan f.eks være et forhold, eller en aritmisk forskjell.

Denne metoden kan omfatte:

(a) inkubering av en første celleprøve med en på forhånd bestemt konsentrasjon av en forsøksforbindelse i et tidsintervall mellom det som er tilstrekkelig til å tømme Gi populasjonen og det som er ekvivalent med en cellecyklus (f.eks typisk 8-16 timer, eller ca 12 timer); (b) i det vesentlige separering av forsøksforbindelsen fra nevnte første celleprøve (f.eks ved vasking eller endring av mediet); (c) inkubering av nevnte første prøve i medium fritt for forsøksforbindelsen i et tidsintervall tilstrekkelig til å tillate minst 80% (f.eks 85%, 90% og fortrinnsvis 95%, 98% eller 99%) av cellene frigjort ved den mitotiske blokkeringen indusert ved hjelp av en sterkt reversibel mitotisk inhibitor å fullføre mitose og returnere til Gi fasen (f.eks typisk 1-14 timer, eller ca 10 timer, etter separasjonstrinn (b)); og (d) måling av prosentdelen av transient-eksponerte celler fra trinn (c) som har fullført mitose og returnert til Gi fasen (f.eks måling av en cellecyklusmarkør, så som DNA-avhengig Pl fluorescens).

Et trekk ved denne undersøkelsesmetoden omfatter de videre trinnene med: (e) inkubering av en andre prøve av celler med en konsentrasjon av forsøksforbind-elsen som er mindre enn eller lik den anvendt i trinn (a) i et tidsintervall mellom det som er tilstrekkelig for å tømme Gi populasjonen og det som er ekvivalent med én cellecyklus; (f) måling av prosentdelen av celler fra trinn (e) som har fullført mitose og har

returnert til Gi fasen; og

(g) bestemmelse av et reversibilitetsforhold for forsøksforbindelsen.

De første og andre celleprøvene kan være suspensjons kulturceller valgt fra, f.eks, humane leukemi, humane lymfom, murine leukemi og murine lymfomceller.

Første og andre celleprøve kan inkuberes simultant (trinn (a) og (e)) eller i separate porsjoner. Metoden kan videre omfatte at før trinn (a), trinnet (i) med estimering av et ønskelig tidsintervall for inkubering av nevnte første celleprøve med et reversibelt mitotisk blokkerende middel, eller alternativt, forsøksforbindelsen) for å tilveiebringe en tilfredsstillende hoveddel av celler samlet ved mitotisk blokkering; og hvori inkuberingen ifølge trinn (a) er for tidsintervallet anslått til trinn (i). Metoden kan videre omfatte at før trinn (c), trinnet (ii) med estimering av et ønskelig tidsintervall for forsøksforbindelses-fri inkubering i trinn (c), idet nevnte trinn (ii) omfatter bestemmelse av tidsintervallet etter hvilket minst 80% av cellene forbehandlet med et meget reversibelt anti-mitotisk middel fullfører mitose og igjen inntrer i Gi fase; og hvori inkuberingen i trinn (c) er for tidsintervallet bestemt i trinn (ii). En annen form av metoden kan anvende ikke-suspensjons kulturceller fra, f.eks adherente humane eller murine kreftceller, høstet ved en hvilken som helst egnet fremgangsmåte for å frigjøre den fra vevskulturkolber.

Det kan foregå en repetisjon av trinn (a) - (f) ved anvendelse av et område av relative konsentrasjoner av forsøksforbindelse for å bestemme hvilke to i det vesentlige minimale konsentrasjoner av forsøksforbindelsen som tilveiebringer i det vesentlige fullstendig mitotisk blokkering i henholdsvis trinn (d) og i trinn (f). Forholdet mellom disse minimalt tilstrekkelige konsentrasjonene er en indeks for reversibilitet (se detaljert U937 fremgangsmåte for fremstilling av en eksempelvis dose-responskurve). Disse konsentrasjonene kan bestemmes ved å ekstrapolere kurver for prosentdelen av celler (fra trinn (d) og (f)) som en funksjon av konsentrasjon (f.eks ved å teste bare få konsentrasjoner, så som 3 eller færre), eller ved empirisk å teste et fullt område av konsentrasjoner.

De ovenfor angitte metodene er nyttige for å identifisere et middel (forsøksforbindelse) som inhiberer mitose, for å identifisere et mitotisk blokkerende middel som i det vesentlige bevarer sin mitotiske blokkerende effektivitet etter fjernelsen, og for f.eks å forutsi IC50 eller IC95 av et et mitotisk blokkerende middel. Sammenlignet med relativt reversible antimitotiske midler er i det vesentlige irreversible antimitotiske midler, med andre ord, midler som fortsetter å blokkere mitose i en celle som bare er transient eksponert mot middelet, sannsynligvis med effektive in vivo hvor naturlige prosesser, innbefattende multi-legemiddelresistens

(MDR) pumper og metaboliske eller andre degraderende veier, forhindrer forlenget eksponering. Effektiviteten av relativt reversible antimitotiske midler kan avhenge av en periode med vedvarende eksponering.

På bakgrunn av kostnadene for utvikling av farmasøytiske midler, er de økonomiske fordelene ved å bestemme reversibilitetsforhold, som beskrevet ovenfor, betydelige. De ovenfor nevnte metodene kan f.eks anvendes for å forutsi om en forsøksforbindelse med god in vitro aktivitet vil være effektiv in vivo, så som i en klinisk test. Relativt reversible midler vil ikke ventes å virke like godt som irreversible midler. Dette vises f.eks ved å sammenligne data for to kjente forbindelser, det relativt irreversible anti-mitotiske middelet vinkristin og det meget reversible anti-mitotiske middelet vinblastin.

Analyser av de antimitotiske legemidlene vinblastin og vinkristin i U937 mitotisk blokk reversibilitetsanalyse indikerer at på tross av identiske virkestyrker for å indusere innledende mitotiske blokkeringer (0 timers verdier), er evnen av de to legemidlene til å indusere mitotiske blokkeringer som varer 10 timer etter legemiddel utvasking (10 timers verdier) meget forskjellige: vinkristin induserer irreversible mitotiske blokkeringer, mens de indusert av vinblastin er meget reversible.

Analyse av in vivo anti-kreftaktiviteter av de anti-mitotiske legemidlene vinblastin og vinkristin mot COLO 205 human tarmkreft xenografter dyrket subkutant i immunokompromiterte (nakne) mus indikerer at ved ekvivalente doser på 1 mg/kg viser vinkristin vesentlig kreftvekst inhibitorisk aktivitet, men vinblastin er inaktivt. Ved den lavere dosen på 0,3 mg/kg frembringer vinkristin fremdeles moderat vekstinhibering, mens vinblastin igjen er inaktiv. Den større in vivo aktiviteten av vinkristin korrelerer med dets irreversibilitet relativt til vinblastins høye reversibilitet.

E. Anvendelser

De beskrevne forbindelsene har farmakologisk aktivitet, innbefattende anti-tumor og anti-mitotisk aktivitet som definert i avsnitt D ovenfor. Eksempler på tumorer omfatter melanomer, fibrosarkomer, monocytisk leukemi, tarmkarsinomer, ovariekarsinomer, brystkarsinomer, osteosarkomer, prostatakarsinomer, lunge-karsinomer og ras-transformerte fibroblaster.

En fremgangsmåte for å inhibere tumorvekst i en pasient kan omfatte trinnet med administrering til pasienten av en effektiv, anti-tumormengde av en omtalt forbindelse eller sammensetning. Fremgangsmåtene for administrering kan være like eller forskjellige. Inhibering av tumorvekst omfatter en vekst av cellen eller vevet eksponert mot forsøksforbindelsen, dvs minst 20% eller mindre og fortrinnsvis 30%, 50% eller 75% mindre enn veksten av kontrollen (fravær av kjent inhibitor eller forsøksforbindelse).

Claims

hvor A er et Ci-6 alkyl eller C2-6 alkenyl hydrokarbonskjelett, idet nevnte skjelett er usubstituert eller inneholder fra 1 til 10 substituenter, uavhengig valgt fra cyano, halogen, azido, okso, p-fluorfenyl, N-piperazinyl, N-piperidinyl, N-pyrrolidinyl, N-3-(R)-hydroksypyrrolidinyl, N-homopiperidinyl, N-2-(S-hydroksymetyl)pyrrolidinyl, N-2-(R-hydroksymetyl)pyrrolidinyl, N-morfolinyl, N-imidazoyl, og Qi;

hver Qt er uavhengig valgt fra OR1, SR1, SO2R1, OSO2R1, NR2R1( NR^COJRl NRjKCOXCOJRl NR4(CO)NR2Ri, NR2(CO)ORi, (CO)ORi, 0(CO)Ri, (CO)NR2Ri, imidazo-2-yl-tio, pyridin-3-yl-metyl-(CO)NH, indol-3-yl-(CO)NH, og 0(CO)NR2Ri;

hver av R1f R2 og R4 er uavhengig valgt fra H, C-i-ealkyl, Ci-6halogenalkyl, Ci-6hydroksyalkyl, Ci-6aminoalkyl, C6-ioaryl, C6-iohalogenaryl, C6-iohydroksyaryl, Ci.3alkoksy-fenyl, C6-ioaryl-Ci-6alkyl, Ci-6alkyl-C6-ioaryl, C6-iohalogenaryl-Ci.6alkyl, Ci.6alkyl-C6.iohalogenaryl og (Ci.3alkoksy-fenyl)-Ci-3alkyl.
2. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at A er et d-e alkyl eller C2.6 alkenyl hydrokarbonskjelett, idet nevnte skjelett har minst én substituent valgt fra cyano, halogen, azido, okso, p-fluorfenyl, N-piperazinyl, N-piperidinyl, N-pyrrolidinyl, N-3-(R)-hydroksypyrrolidinyl, N-homopiperidinyl, N-2-(S-hydroksymetyl)pyrrolidinyl, N-2-(R-hydroksymetyl)pyrrolidinyl, N-morfolinyl, N-imidazoyl, og Qi;

hverQi er uavhengig valgt fra ORi, SRi, S02Ri, OSO2R1, NR2R1f NR2(CO)Ri, imidazo-2-yl-tio, pyridin-3-yl-metyl-(CO)NH, indol-3-yl-(CO)NH og 0(CO)NR2Ri.
3. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at hver er uavhengig valgt fra ORi, SRi, S02Ri, OS02Ri, NH(CO)Ri, NH(CO)(CO)Ri, imidazo-2-yl-tio, pyridin-3-yl-metyl-(CO)NH, indol-3-yl-(CO)NH, og 0(CO)NHR1;

hver R1 er uavhengig valgt fra Ci-ealkyl, Ci-6halogenalkyl, fenyl, C6halogenaryl, Ci.3alkoksy-fenyl, fenyl-Ci-3alkyl, Ci-3alkyl-fenyl, C6halogenaryl-Ci.3alkyl, Ci-3alkyl-C6halogenaryl og (Ci-3alkoksy-fenyl)-Ci-3alkyl.
4. Forbindelse ifølge kravene 1 eller 2, karakterisert ved at A har minst én substituent valgt fra hydroksyl, amino, azido, halogen og okso.
5. Forbindelse ifølge krav 4, karakterisert ved at A er et mettet hydrokarbonskjelett som har minst én substituent valgt fra hydroksyl, amino og azido.
6. Forbindelse ifølge krav 5, karakterisert ved at A har minst to substituenter uavhengig valgt fra hydroksyl, amino og azido.
7. Forbindelse ifølge krav 5, karakterisert ved at A har minst to substituenter uavhengig valgt fra hydroksyl og amino.
8. Forbindelse ifølge krav 5, karakterisert ved at A har minst én hydroksylsubstituent og minst én aminosubstituent.
9. Forbindelse ifølge krav 5, karakterisert ved at A har minst to hydroksylsubstituenter.
10. Forbindelse ifølge krav 5, karakterisert ved at A er et C2-4 hydrokarbonskjelett.
11. Forbindelse ifølge krav 5, karakterisert ved at A er et C3 hydrokarbonskjelett.
12. Forbindelse ifølge krav 10, karakterisert ved at A har en (S)-hydroksyl på karbonatomet alfa til karbonatomet som forbinder A til ringen inneholdende G.
13. Forbindelse ifølge kravene 1 eller 2, karakterisert ved at A er et Ci-6 mettet hydrokarbonskjelett som har minst én substituent valgt fra hydroksyl og cyano.
14. Forbindelse ifølge krav 3, karakterisert ved at Qi er uavhengig valgt fra ORi, SRi, S02Ri og OS02Ri, hvor hver R, er uavhengig valgt fra Ci-6alkyl, Ci-6halogenalkyl, fenyl, C6halogenaryl, Ci-3alkoksy-fenyl, fenyl-Ci-3alkyl, Ci-3alkyl-fenyl, C6halogenaryl-Ci-3alkyl, Ci-3alkyl-C6halogenaryl og (Ci-3alkoksy-fenyl)-Ci-3alkyl.
15. Forbindelse ifølge krav 1, med følgende struktur
16. Forbindelse ifølge krav 1, med følgende struktur eller farmasøytisk akseptable salter derav.