RU2245335C2 - Макроциклическое соединение и способ идентификации агента на его основе - Google Patents

Макроциклическое соединение и способ идентификации агента на его основе Download PDF

Info

Publication number
RU2245335C2
RU2245335C2 RU2001101559/04A RU2001101559A RU2245335C2 RU 2245335 C2 RU2245335 C2 RU 2245335C2 RU 2001101559/04 A RU2001101559/04 A RU 2001101559/04A RU 2001101559 A RU2001101559 A RU 2001101559A RU 2245335 C2 RU2245335 C2 RU 2245335C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
mmol
alkyl
etoac
mixture
added
Prior art date
Application number
RU2001101559/04A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2001101559A (ru
Inventor
Брюс А. ЛИТТЛФИЛД (US)
Брюс А. ЛИТТЛФИЛД
Моника ПАЛМ (US)
Моника ПАЛМ
Борис М. СЕЛЕЦКИЙ (US)
Борис М. СЕЛЕЦКИЙ
Мюррей Дж. ТАУЛ (US)
Мюррей Дж. ТАУЛ
Мелвин Дж. ЙУ (US)
Мелвин Дж. ЙУ
Вандзун ЗЕНГ (US)
Вандзун ЗЕНГ
Original Assignee
Эйсай Ко., Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=22219026&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RU2245335(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Эйсай Ко., Лтд. filed Critical Эйсай Ко., Лтд.
Publication of RU2001101559A publication Critical patent/RU2001101559A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2245335C2 publication Critical patent/RU2245335C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
    • C07D493/22—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains four or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относится к новым макроциклическим соединениям формулы:
Figure 00000001
где A, D, D1, G, Z, Z1, Е, X, Т, Q, Y, Y1, J, J1, U, U1 и n имеют значения, указанные в описании, обладающим противораковой и антимитотической (блокирующий митоз) активностью, а также к способу идентификации агентов, которые индуцируют продолжительный митотический блок в клетке после временного экспонирования этой клетки этим агентом. Технический результат - получение новых макроциклических соединений, проявляющих сильное противораковое действие. 2 н. и 19 з.п. ф-лы, 2 табл.

Description

Предпосылки изобретения
Данное изобретение относится к фармацевтически активным макролидам. Халихондрин В является сильнодействующим противораковым агентом, выделенным первоначально из морской губки Halichondria okadai и впоследствии обнаруженным в видах Axinella, Phakellia carteri и видах Lissondendryx.
Полный синтез Халихондрина В опубликован в 1992 году (Aicher, T.D. et al., J. Am. Chem. Soc. 114:3162-3164). Халихондрин В продемонстрировал ингибирование полимеризации тубулина, сборки микротрубочек, поперечного сшивания бетаs-тубулина, связывания ГТФ и винбластина с тубулином и тубулин-зависимого гидролиза ГТФ in vitro и обнаружил противораковые свойства in vivo и in vitro.
Сущность изобретения
В данном изобретении предлагаются аналоги халихондрина, имеющие фармацевтическую активность, такую как противораковая или антимитотическая (блокирующая митоз) активность. Эти соединения являются значительно меньшими, чем халихондрин В. Данное изобретение описывает соединение, имеющее формулу (I):
Figure 00000002
В формуле (I) А обозначает C1-6 насыщенный или С2-6 ненасыщенный углеводородный скелет, причем этот скелет является незамещенным или имеет 1-13 заместителей, предпочтительно 1-10 заместителей, например, по меньшей мере один заместитель, выбранный из циано, галогена, азидо, Q1 и оксо. Каждый Q1 независимо выбран из OR1, SR1, SO2R1, OSO2R1, NR2R1, NR2(CO)R1, NR2(CO)(CO)R1, NR4(CO)NR2R1, NR2(CO)OR1, (CO)OR1, O(CO)R1, (CO)NR2R1 и О(СО)NR2R1. Число заместителей может составлять, например, 1-6, 1-8, 2-5 или 1-4. Подразумевается, что во всем описании в числовые диапазоны включаются ограничивающие их значения.
Каждый из R1, R2, R4, R5 и R6 независимо выбирают из Н, C1-6алкила, C1-6галогеналкила, C1-6гидроксиалкила, C1-6аминоалкила, С6-10арила, С6-10галогенарила (например, п-фторфенила или п-хлорфенила), С6-10гидроксиарила, С1-4алкокси-С6-арила (например, п-метоксифенила, 3,4,5-триметоксифенила, п-этоксифенила или 3,5-диэтоксифенила), С6-10арил-С1-6алкила (например, бензила или фенетила), C1-6алкил-С6-10арила, С6-10галогенарил-С1-6алкила, C1-6алкил-С6-10галогенарила, (C1-3алкокси-С6-арил)-C1-3алкила, С2-9 гетероциклического радикала, С2-9гетероциклический радикал-С1-6алкила, С2-9гетероарила и С2-9гетероарил-С1-6алкила. Может быть более одного R1, например, если А замещен двумя различными алкокси (OR1) группами, такими как бутокси и 2-аминоэтокси.
Примеры А включают в себя 2,3-дигидроксипропил, 2-гидроксиэтил, 3-гидрокси-4-перфторбутил, 2,4,5-тригидроксипентил, 3-амино-2-гидроксипропил, 1,2-дигидроксиэтил, 2,3-дигидрокси-4-перфторбутил, 3-циано-2-гидроксипропил, 2-амино-1-гидроксиэтил, 3-азидо-2-гидроксипропил, 3,З-дифтор-2,4-дигидроксибутил, 2,4-дигидроксибутил, 2-гидрокси-2(п-фторфенил)этил, -СН2(СО) (замещенный или незамещенный арил), -СН2(СО) (алкил или замещенный алкил, такой как галогеналкил или гидроксиалкил) и 3,3-дифтор-2-гидроксипент-4-енил.
Примеры Q1 включают в себя -NH(CO)(СО)-(гетероциклический радикал или гетероарил), -OSO2-(арил или замещенный арил), -О(СО)NH-(арил или замещенный арил), аминоалкил, гидроксиалкил, -NH(CO)(CO)-(арил или замещенный арил), -NH(CO)(алкил)(гетероарил или гетроциклический радикал), О (замещенный или незамещенный алкил)(замещенный или незамещенный арил) и -NH(CO)(алкил)(арил или замещенный арил).
Каждый из D или D' независимо выбирают из R3 и ОR3, где R3 обозначает Н, C1-3алкил или C1-3галогеналкил. Примерами D и D' являются метокси, метил, этокси и этил. В некоторых вариантах реализации один из D и D' представляет собой Н.
Значение n представляет собой 1 или предпочтительно, 0, с образованием в результате либо шестичленного, либо пятичленного кольца. Это кольцо может быть замещенным или незамещенным, например, где Е обозначает R5 или. OR5, или может быть гетероциклическим радикалом или циклоалкилом, например, где G обозначает S, СН2, NR6 или предпочтительно О.
Каждый из J и J’ обозначает независимо Н, C1-6алкокси или C1-6алкил; или J и J’, взятые вместе, представляют собой =СН2 или -О- (прямой или разветвленный С1-5алкилен или алкилиден)-O-, такой как экзоциклический метилиден, изопропилиден, метилен или этилен. Q обозначает C1-3алкил и предпочтительно представляет собой метил. Т обозначает этилен или этенилен, необязательно замещенный (CO)OR7, где R7 обозначает Н или C1-6алкил. Каждый из U и U' обозначает независимо Н, C1-6алкокси или C1-6алкил; или U и U', взятые вместе, обозначают =СН2 или -О- (прямой или разветвленный С1-5алкилен или алкилиден)-О-. Х обозначает Н или C1-6алкокси. Каждый из Y и X' обозначает независимо Н или C1-6алкокси; или Y и Y', взятые вместе, обозначают =O, =СН2 или -О-(прямой или разветвленный С1-5алкилен или алкилиден)-О-. Каждый из Z и Z' обозначает независимо Н или C1-6алкокси; или Z и Z', взятые вместе, обозначают =O, =СН2 или -О-(прямой или разветвленный С1-5алкилен или алкилиден)-О-.
Данное изобретение описывает соединения достаточной стабильности, чтобы быть пригодными для фармацевтического применения. Данное изобретение описывает также фармацевтически приемлемые соли описанных соединений, описывает новые синтетические промежуточные продукты, фармацевтические композиции, содержащие одно или несколько описанных соединений, способы получения описанных соединений или промежуточных продуктов и способы применения описанных соединений или композиций. Способы применения включают в себя способы обратимого или необратимого ингибирования митоза в клетке и ингибирования ракового или опухолевого роста in vitro, in vivo или в организме пациента. Данное изобретение описывает также способы идентификации антимитотического или противоракового агента, такого как агент, обладающий обратимым действием или, предпочтительно, необратимым действием.
Подробное описание изобретения
А. Определения
В. Аналоги халихондрина
С. Синтез аналогов халихондрина
D. Фармакологическая активность
Е. Применения
А. Определения
Следующие термины, как они используются в данном описании, частично определены ниже.
Углеводородный скелет содержит атомы углерода и водорода и может быть линейным, разветвленным или циклическим. Ненасыщенные углеводороды включают в себя одну, две, три или более двойных связей С-С (sp2) или тройных связей С-С (sp). Примеры ненасыщенных углеводородных радикалов включают в себя этинил, 2-пропинил, 1-пропенил, 2-бутенил, 1,3-бутадиенил, 2-пентенил, винил(этенил), аллил и изопропенил. Примеры бивалентных ненасыщенных углеводородных радикалов включают в себя алкенилены и алкилидены, такие как метилидин, этилиден, этилидин, винилиден и изопропилиден. Обычно соединения данного изобретения имеют углеводородные скелеты ("А" в формуле (I)), которые являются замещенными, например, гидрокси, амино, циано, азидо, гетроарилом, арилом и другими описанными здесь радикалами. Углеводородные скелеты могут иметь два геминальных атома водорода, замещенные оксо-группой, бивалентным карбонильным атомом кислорода (=O), или образующим кольцо заместителем, таким как -О-(прямой или разветвленный алкилен или алкилиден)-О-, с образованием ацеталя или кеталя.
C1-6алкил включает в себя линейные, разветвленные и циклические углеводороды, такие как метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, изопентил, втор-пентил, неопентил, трет-пентил, циклопентил, гексил, изогексил, втор-гексил, циклогексил, 2-метилпентил, трет-гексил, 2,3-диметилбутил, 3,3-диметилбутил, 1,3-диметилбутил и 2,3-диметилбут-2-ил. Алкокси (-OR), алкилтио (-SR) и другие производные от алкила радикалы (замещенные, ненасыщенные или бивалентные) являются аналогичными алкильным группам (R). Алкильные группы и производные от алкила группы, такие как характерные алкокси, галогеналкильные, гидроксиалкильные, алкенильные, алкилиденовые и алкиленовые группы, могут быть С2-6, С3-6 или С2-4.
Алкилы, замещенные галогеном, гидрокси, амино, циано, азидо и т.д., могут иметь 1, 2, 3, 4, 5 или более заместителей, которые выбраны независимо (могут быть или могут не быть одинаковыми) и могут быть или могут не быть при одном и том же атоме углерода. Например, галогеналкильные группы являются алкильными группами с по меньшей мере одним заместителем, выбранным из фтора, хлора, брома и иода. Галогеналкилы могут иметь два или более галогеновых заместителей, которые могут быть или могут не быть одним и тем же галогеном и могут быть или не быть при одном и том же атоме углерода. Примеры включают в себя хлорметил, периодметил, 3,3-дихлорпропил, 1,3-дифторбутил и 1-бром-2-хлорпропил.
Гетероциклические радикалы и гетероарилы включают в себя фурил, пиранил, изобензофуранил, хроменил, ксантенил, феноксатиенил, 2Н-пирролил, пирролил, имидазолил (например, 1-, 2- или 4-имидазолил), пиразолил, изотиазолил, изоксазолил, пиридил (например, 1 -, 2 - или 3-пиридил), пиразинил, пиримидинил, пиридазинил, индолизинил, изоиндолил, 3Н-индолил, индолил (например, 1-, 2- или 3-индолил), индазолил, пуринил, 4Н-хиноликсинил, изохинолил, хинолил, фталазинил, нафтиридинил, хиноксалинил, хиназолинил, циннолинил, птеридинил, пирролинил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, пиразолинил, пиперидил, пиперазинил, индолинил, изоиндолинил и морфолинил. Гетероциклические радикалы и гетероарилы могут быть связаны с остальной молекулой в любом положении на кольце. Гетероциклические радикалы и гетероарилы могут представлять собой С2-9 или менее, например, как С3-6, С2-5 или С3-7.
Арильные группы включают в себя фенил, бензил, нафтил, толил, мезитил, ксилил и куменил.
Понятно, что "гетероциклический радикал", "арил" и "гетероарил" включают в себя радикалы, имеющие 1, 2, 3, 4 или более заместителей, независимо выбранных из низшего алкила, низшего алкокси, амино, галогена, циано, нитро, азидо и гидроксила. Гетероциклические радикалы, гетероарилы и арилы могут быть также бивалентными заместителями углеводородного скелета "А" в формуле (I).
В. Аналоги халихондрина
Согласно формуле (I) в разделе "Сущность изобретения", варианты изобретения включают в себя соединения, в которых n равно 0; в которых каждый из D и D' независимо выбран из R3, C1-3алкокси и C1-3галогеналкилокси; в которых R5 выбран из Н, С2-6алкила, C1-6галогеналкила, C1-6гидроксиалкила, C1-6аминоалкила, С6-10арила, С6-10галогенарила, С6-10гидроксиарила, C1-3алкокси-С6арила, С6-10арил-С1-6алкила, C1-6алкил-С6-10арила, С6-10галогенарил-С1-6алкила, C1-6алкил-С6-10галогенарила, (C1-3алкокси-С6арил)-C1-3алкила, С2-9гетероциклического радикала, С2-9(гетероциклический радикал)-C1-6алкила, С2-9гетероарила и С2-9гетероарил-С1-6алкила; и их комбинаций.
Другой вариант включает в себя соединения, имеющие одну или несколько из следующих характеристик: соединения (а) где А обозначает C 1-6 насыщенный или С 2-6 ненасыщенный углеводородный скелет, причем этот скелет имеет, по меньшей мере, один заместитель, выбранный из циано, галогена, азидо, Q1 и оксо; (b) каждый Q1 независимо выбран из OR1, SR1, SO2R1, OSО2R1, NR2R1, NH2(CO)R1, NR2(CO)(CO)R1 и О(CO)NR2R1; (c) Z и Z', взятые вместе, обозначают =O или =CH2; (d) где каждый Q1 независимо выбран из OR1, SR1, SO2R1, OSO2R1, NH(CO)R1, NH(CO)(CO)R1 и O(CO)NHR1; (e) каждый R1 выбран независимо из C 1-6 алкила, C 1-6 галогеналкила, С6арила, С6галогенарила, C 1-3 алкокси-С6aрила, С6арил-С 1-3 алкила, C 1-3 алкил-С6арила, С6галогенарил-С 1-3 алкила, C 1-3 алкил-С6галогенарила, (C 1-3 алкокси-С6арил)-C 1-3 алкила, С2-9гетероциклического радикала, С2-9гетероарила и С2-9гетероарил-С 1-6 алкила; (f) один из D и D' обозначает метил или метокси, а другой представляет собой Н; (g) n равно 0; (h) G обозначает О; (i) J и J', взятые вместе, обозначают =СН2; (j) Q обозначает метил; (k) Т обозначает этилен; (l) U и U', взятые вместе, обозначают =СН2; (m) Х обозначает Н; (n) каждый из Y и Y' обозначает Н; и (о) Z и Z', взятые вместе, представляют собой =O. Примерами комбинаций являются комбинация (h)-(m), комбинация (а) и (b), комбинация (f) и (h) и комбинация (h) и варианта, где один из D и D' представляет собой метил, а другой представляет собой Н. Двумя особенно предпочтительными соединениями являются В1793 и В1939.
Другой вариант реализации включает в себя соединения, в которых Q1 независимо выбран из OR1, SR1, SO2R1 и OSO2R1; и каждый R1 независимо выбран из C1-6алкила, C1-6галогеналкила, С6арила, С6галогенарила, C1-3алкокси-С6арила, С6арил-C1-3алкила, C1-3алкил-С6aрила, С6галогенарил-С1-3алкила, C1-3алкил-С6галогенарила, (C1-3алкокси-С6арил)-C1-3алкила. Другие варианты реализации включают в себя соединения, в которых: один из D и D' представляют собой алкил или алкокси, где n равно 1; (f) как указано выше, где n равно 1; Е обозначает алкокси, где n равно 1; n равно 0, где один из D и D' обозначает гидрокси, а другой обозначает Н; и (f) как описано выше, где n равно 1 и Е представляет собой метил.
Данное изобретение относится также к соединениям, в которых: (1) А имеет по меньшей мере один заместитель, выбранный из гидроксила, амино, азидо, галогена и оксо; (2) А представляет собой насыщенный углеводородный скелет, имеющий по меньшей мере один заместитель, выбранный из гидроксила, амино и азидо (например, В1793, В1939, В2042, В1794 и В1922); (3) А имеет по меньшей мере два заместителя, независимо выбранных из гидроксила, амино и азидо (например, В2090 и В2136); (4) А имеет по меньшей мере два заместителя, независимо выбранных из гидроксила и амино (например, В2042 и В2090); (5) А имеет по меньшей мере один гидроксильный заместитель и по меньшей мере один аминозаместитель (например, В1939 и В2136); (6) А имеет по меньшей мере два гидроксильных заместителя (например, В1793 и В1794); (7) А представляет собой С2-4 углеводородный скелет, который является замещенным (например, В2004, В2037, В1920, В2039, В2070, В2090 и В2043); (8) А представляет собой С3 углеводородный скелет, который является замещенным (например, В1793, В1920, В1984, В1988, В1939, В1940, В2014); (9) А имеет (S)-гидроксил в положении альфа относительно атома углерода, связывающего А с кольцом, содержащим G (например, В1793, В1939 или В1920), или (R)-гидроксил (например, В2102, В2013, В2042); и (10) А представляет собой C1-6 насыщенный углеводородный скелет, имеющий по меньшей мере один заместитель, выбранный из гидроксила и циано (например, В2013, В2037, В2102, В2086 и В2091). Под (S)-гидроксилом имеют в виду, что конфигурация атома углерода, имеющего гидроксильную группу, является (S)-конфигурацией. Варианты данного изобретения включают в себя также соединения, которые имеют по меньшей мере два заместителя при атомах углерода (1) альфа и гамма, (2) бета и гамма или, предпочтительно, (3) альфа и бета относительно атома углерода, связывающего А с кольцом, содержащим G. Эти альфа-, бета- и гамма-атомы углерода могут иметь (R)- или (S)-конфигурацию.
В данном изобретении предлагаются далее предпочтительные соединения, имеющие формулу (1)-А, показанную ниже, где заместители идентичны определенным выше.
Figure 00000003
Данное изобретение относится далее к следующему моносахаридному
промежуточному соединению, имеющему формулу (II)
Figure 00000004
где R обозначает метил или метокси и каждый из P1, P2 и P3 независимо выбран из Н и защитных групп первичного спирта. Предпочтительно, диольная боковая цепь находится ниже плоскости страницы, а ОР2 находится выше плоскости страницы. Защитные группы первичного спирта включают в себя сложные эфиры, простые эфиры, силиловые эфиры, алкиловые эфиры и алкоксиалкиловые эфиры.
Примеры сложных эфиров включают в себя формиаты, ацетаты, карбонаты и сульфонаты. Конкретные примеры включают в себя формиат, бензоилформиат, хлорацетат, трифторацетат, метоксиацетат, трифенилметоксиацетат, п-хлорфеноксиацетат, 3-фенилпропионат, 4-оксопентаноат, 4,4-(этилендитио)пентаноат, пивалоат, кротонат, 4-метоксикротонат, бензоат, п-фенилбензоат, 2,4,6-триметилбензоат, карбонаты, такие как метил, 9-флуоренилметил, этил, 2,2,2-трихлорэтил, 2-(триметилсилил)этил, 2-(фенилсульфонил)этил, винил, аллил и п-нитробензил.
Примеры силиловых эфиров включают в себя триметилсилиловый, триэтилсилиловый, трет-бутилдиметилсилиловый, трет-бутилдифенилсилиловый, триизопропилсилиловый и другие триалкилсилиловые эфиры. Алкиловые эфиры включают в себя метиловый, бензиловый, п-метоксибензиловый, 3,4-диметоксибензиловый, тритиловый, трет-бутиловый, аллиловый и аллилоксикарбониловый эфиры или производные. Алкоксиалкиловые эфиры включают в себя ацетали, такие как метоксиметиловый, метилтиометиловый, (2-метоксиэтокси)метиловый, бензилоксиметиловый, бета-(триметилсилил)этоксиметиловый и тетра-гидропираниловый эфиры. Примеры бензиловых эфиров включают в себя п-метоксибензил (МРМ), 3,4-диметоксибензил, O-нитробензил, п-нитробензил, п-галогенбензил, 2,6-дихлорбензил, п-цианобензил, 2- и 4-пиколил. Предпочтительно, каждый из Р1 и Р2 представляет собой TBS и РЗ представляет собой МРМ (см. спирт 19 ниже). В одном аспекте, формула (II) может быть модифицирована таким образом, что боковая цепь гидроксиэтила может также иметь защищенный гидроксил, -СН2СН2O-Р4, где Р4 независимо выбран из значений для Р1. Родственным промежуточным продуктом является спирт 17, где боковая цепь гидроксиэтила заменена боковой цепью гидроксиметила. Подобным же образом может быть получена соответствующая боковая цепь гидроксипропила или боковая цепь аминоалкила.
Р1 и Р2, взятые вместе, могут быть диол-защитной группой, такой как циклические ацетали и кетали (метилен, этилиден, бензилиден, изопропилиден, циклогексилиден и циклопентилиден), производными силилена, такими как производные ди-трет-бутилсилилена и 1,1,3,3-тетраизопропилдисилоксанилидена, циклические карбонаты и циклические боронаты. Способ присоединения и удаления таких гидроксилзащитных групп и дополнительные защитные группы являются хорошо известными в данной области и описаны, например, в Р.Kocienski, Protecting Groups, Thieme, 1994, и в T.W.Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd edition, John Wiley & Sons, 1992.
В следующем разделе предлагаются характерные синтезы промежуточных соединений формулы (II) и аналогов халихондрина формулы (I).
С. Синтез аналогов халихондрина
Ниже дается обзор с последующими синтетическими схемами 1-16 и несколько детализированных протоколов.
Соединения общей формулы 4 могут быть получены путем, описанным на схеме синтеза 1. Ключевой фрагмент F-2, иллюстрируемый в качестве примера соединением винилиодида Х2, может быть получен согласно методике Kischi et al., (Total synthesis of halichondrin В and norhalichondrin B. Aicher, T.D.; Buszek, K.R.; Fang, F.G.; Forsyth, C.J.; Jung, S.H.; Kischi, Y.; Matelich, M.C.; Scola, M.; Spero, D.M.; Yoon, S.K. J. Am. Chem. Soc. 1992, 114, 3162-4).
Figure 00000005
Figure 00000006
Ключевой фрагмент F-3 может быть получен восстановлением с помощью DIBALH соответствующего метилового эфира, XF3, полученного согласно методике Stamos et аl., (схема 2). [Synthetic studies on halichondrins: a practical synthesis of the C.1-C13 segment. Stamos, D.P.; Kischi, Y. Tetrahedron Lett. 1996, 37, 8643-8646]. Синтез ключевого фрагмента F-1, иллюстрируемого в качестве примера соединением 20, может быть выполнен, как описано в схеме 3 или схеме 4.
С использованием В1793 в качестве характерного примера, связывание этих трех ключевых фрагментов происходило, как описано в схеме 5: связывание по Nozaki-Hiyama-Kischi фрагментов 20 и Х2 с последующим внутримолекулярным образованием простого эфира по Вильямсону давало тетрагидропиран В2318. Модификация защитной группы, как описано в схеме 5 или альтернативно в схеме 6, давала первичный иодид В2313. Обменная реакция галоген-металл и связывание с ключевым фрагментом F-3 давали смесь диастереомерных спиртов В2308. Дополнительные операции с защитными группами и окисление с последующей внутримолекулярной реакцией по Nozaki-Hiyama-Kischi давали промежуточный продукт, который при окислении и обработке TBAF подвергался внутримолекулярной реакции Михаэля с замыканием гетероцикла. Опосредованное РРТ образование ацеталя давало В1793.
Арильные группы могут быть введены в боковую цепь С32 (например, В2043), как показано в качестве примера в схеме 7. Промежуточное соединение В2318 освобождали от защитных групп и полученный диол подвергали окислительному расщеплению до соответствующего альдегида. Обработка реагентом Гриньяра (например, р-F-PhMgBr), разделение полученных диастереомеров и силилирование давали 204, который превращали в конечный продукт по способу, подобному описанному в схеме 6.
Аналоги простых эфиров могут быть получены из В1793 обработкой подходящим алкилирующим агентом (например, схема 8). Подобным образом, сульфонаты, сложные эфиры, карбаматы и т.д. могут быть получены из В1793 обработкой активированным карбонильным компонентом. Окислительное расщепление диолов и восстановление или селективное окисление гидроксильных групп могло бы давать такие производные, как В2037 и В1934, соответственно.
Альтернативно, одна или несколько гидроксильных групп могут быть превращены в соответствующие аминогруппы с последующим связыванием с активированным карбонильным компонентом (схема 9). Вытеснение сульфонильного промежуточного продукта (например, В1920) соединениями с нуклеофильным углеродом или гетероатомом также может быть легко выполнено (схема 10).
Метильные аналоги С31 могут быть получены, как описано в схеме 11. Связывание при участии индия, эфира аллилбромида с 2,3-О-(3-изопропилидин)-D-глицеральдегидом давало лактон 103. Гетероприсоединение по Михаэлю, восстановление лактона, связывание по Виттигу и внутримолекулярное присоединение по Михаэлю давали тетрагидрофуран 107. Перегруппировка Пуммерера, коррекция защитных групп и восстановление с помощью DIBALH давали ключевой фрагмент 1 (например, 114), который превращали в конечное соединение по способу, аналогичному описанному в схеме 6.
Атомы фтора могут вводиться, как описано в схемах 12-14. С использованием в качестве исходного продукта соответствующего промежуточного соединения тетрагидрофурана получали фторированный ключевой фрагмент 1 и превращали его в конечное соединение по способу, аналогичному способу, иллюстрированному в схеме 6.
Производные триолов могут быть аналогично получены из промежуточного продукта тетрагидрофурана. Например, как описано в схеме 15, присоединение аллилтрибутилстаннана к альдегиду Х32 давало гомоаллиловый спирт 33, который превращали в конечное соединение по способу, аналогичному описанному в схеме 6. Эти триолы могут быть модифицированы далее, как показано в качестве примера в схеме 6.
Производные 1,3-диолов могут быть получены из промежуточных продуктов, описанных ранее. Например, В2086 может быть подвергнут окислительному расщеплению и восстановлен с получением 1,3-диола В2091 (схема 16).
Figure 00000007
Figure 00000008
Figure 00000009
Figure 00000010
Figure 00000011
Figure 00000012
Figure 00000013
Figure 00000014
Figure 00000015
Figure 00000016
Figure 00000017
Figure 00000018
Figure 00000019
Figure 00000020
Figure 00000021
Figure 00000022
Синтез ключевого фрагмента F-3:
Figure 00000023
Ключевой фрагмент F-3. DIBALH (1 M в толуоле, 3,86 мл) добавляли к раствору XF-3 (1,46 г, 1,93 ммоль) в толуоле (37 мл) при -78° С. После перемешивания в течение 10 минут реакцию гасили осторожным добавлением МеОН (0,46 мл) и H2O (0,21 мл), нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 15 минут. Белую суспензию фильтровали через целит со смесью 1:1 CH2Cl2/Et2О. Фильтрат концентрировали и очищали колоночной хроматографией (10% EtOAc-гексаны) с получением ключевого фрагмента F-3 (1,34 г, 96%) в виде масла.
Синтез В1793:
Figure 00000024
Триол 1. Раствор TBDPSCI (444 мл, 1,7 моль) в ДМФА (0,5 л) добавляли в виде трех порций к суспензии L-арабинозы (250,0 г, 1,66 моль), имидазола (231,4 г, 3,40 моль) и ДМФА (2,5 л). Добавление каждой порции занимало 1,5 часа с 30-минутным и 15-часовым интервалом, отделяющими вторую и третью порции, соответственно. Полученный раствор перемешивали в течение 3 часов, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (5%-33% EtOAc/гексаны) с получением триола 1 (394 г, 61%).
Figure 00000025
Триацетат 2. Уксусный ангидрид (6,06 моль) добавляли на протяжении 1,5 часов к триолу 1 (1,01 моль) в пиридине (1,0 л) при 15° С. Раствор перемешивали в течение 1 часа, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (15%-25% EtOAc-гексаны) с получением триацетата 2 (518 г, 97%).
Figure 00000026
Диацетаты 3. Аллилтриметилсилан (1,11 моль) и затем BF3· OEt2 (1,11 ммоль) добавляли на протяжении 1,5 часов к триацетату 2 (164 г, 0,32 моль) в толуоле (1,5 л) при 0° С. Оранжевый раствор перемешивали в течение 1 часа при 0° С и в течение 2 часов при комнатной температуре. Смесь медленно выливали в насыщенный водный NaHCO3 (1,7 л) при 0° С и перемешивали в течение 30 минут. Отделенный водный слой экстрагировали EtOAc (3× 600 мл) и объединенные органические слои сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (5%-10% EtOAc-гексаны) с получением смеси диацетатов 3 (108 г, 69%).
Figure 00000027
Диол 4a. Твердый К2СО3 (72 ммоль) добавляли к диацетатам 3 (108 г, 218 ммоль) в МеОН (0,5 л) при комнатной температуре. Суспензию перемешивали в течение 2,5 часов и затем концентрировали. Оранжевый осадок суспендировали в насыщенном водном NH4Cl (150 мл), экстрагировали EtOAc (3× 150 мл) и объединенные органические слои сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (15%-50% EtOAc-гексаны) с получением альфа-изомера 4a (33,86 г, 37%) и бета-изомера 4b (58 г, 63%).
Figure 00000028
Спирт 5. Имидазол (16,75 г, 246 ммоль) и TBSCl (16,08 г, 107 ммоль) добавляли к раствору диола 4a (33,86 г, 82 ммоль) в СН2Сl2 (250 мл) при 0° С. Через 18 часов при 0° С и 5 ч при комнатной температуре реакционную смесь разбавляли насыщенным водным раствором NаНСО3 (250 мл), перемешивали в течение 30 минут и слоям давали разделиться. Водный слой экстрагировали EtOAc (3× 250 мл) и объединенные органические слои сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (2%-50% EtOAc-гексаны) с получением спирта 5 (36,0 г, 83%).
Figure 00000029
Метиловый эфир 6. Иодметан (16,5 мл, 265 ммоль) и NaH (60% в минеральном масле, 5,28 г, 132 ммоль) добавляли к раствору спирта 5 (34,93 г, 66 ммоль), ТГФ (320 мл) и ДМФА (80 мл) при 0° С. Через 19 часов при 0° С реакцию гасили насыщенным водным раствором NH4Cl и насыщенным водным раствором Nа2S2O3. Полученную смесь перемешивали в течение 20 минут и слоям давали разделиться. Водную фазу экстрагировали EtOAc (3× 200 мл) и объединенные органические слои сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (3% EtOAc-гексаны) с получением метилового эфира 6 (34,23 г, 96%).
Figure 00000030
Диол 7. HCl (37% водный раствор, 12,75 мл, 153 ммоль) добавляли к раствору метилового эфира 6 (32,93 г, 61 ммоль) в МеОН (110 мл) при комнатной температуре. Спустя 17 часов к реакционной смеси добавляли NаНСО3 (17 г). Смесь перемешивали в течение 30 минут, концентрировали, суспендировали в EtOAc и фильтровали. Фильтрат концентрировали и очищали флэш-хроматографией (50% EtOAc-гексаны - EtOAc) с получением диола 7 (10,0 г, 87%).
Figure 00000031
Спирт 8. Раствор пивалоилхлорида (8,4 мл, 67 ммоль) в пиридине (50 мл) добавляли на протяжении 1,5 ч к раствору диола 7 (12,24 г, 65 ммоль) в пиридине (100 мл) при 0° С. Через 1 час при 0° С и 18 часов при комнатной температуре смесь разбавляли насыщенным водным раствором NH4Cl и экстрагировали EtOAc (3× 800 мл). Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (50% EtOAc-гексаны) с получением спирта 8 (16,9 г, 96%).
Figure 00000032
Олефин 9. Бензилбромид (62 мл, 521 ммоль) и Bu4NHSO4 (10,6 г, 31 ммоль) добавляли к раствору спирта 8 (16,9 г, 62 ммоль) в СН2Сl2 (100 мл) при 0° С. Раствор NaOH (9,95 г, 248 ммоль) в Н2О (10 мл) добавляли к реакционной смеси на протяжении 15 минут. Через 30 минут при 0° С и 18 часов при комнатной температуре реакционную смесь разбавляли насыщенным водным раствором NH4Cl и экстрагировали CH2Cl2 (3× 100 мл). Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (гексаны - 30% EtOAc-гексаны) с получением олефина 9 (22,1 г, 98%).
Figure 00000033
Диол 10. OsO4 (0,1 М раствор в толуоле, 7,3 мл, 0,73 ммоль) и раствор олефина 9 (24,9 г, 69 ммоль) в трет-ВuОН (165 мл) добавляли к раствору К2СО3 (31,2 г, 161 ммоль), К3Fе(СN)6 (74,4 г, 161 ммоль), (DHQ)2PYR (1,33 г, 1,50 ммоль), Н2O (500 мл) и трет-ВuОН (330 мл) при 0° С. Через 3 часа при 0° С добавляли Nа2S2O3· 5 Н2O (37,3 г, 150 ммоль). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры, перемешивали в течение 1 часа и экстрагировали EtOAc (3× 300 мл). Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (5% изопропанол-СН2Сl2) с получением диола 10 (17,98 г, 75%).
Figure 00000034
Силиловый эфир 11. Имидазол (21 г, 308 ммоль) и TBSCl (26,5 г, 176 ммоль) добавляли к раствору диола 10 (17,4 г, 44 ммоль) в ДМФА (90 мл) при комнатной температуре. Через 18 часов реакционную смесь разбавляли насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (250 мл), перемешивали в течение 1 часа и экстрагировали СН2Сl2 (3× 100 мл). Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (5% EtOAc-гексаны) с получением силилового эфира 11 (25,7 г, 94%).
Figure 00000035
Спирт 12. Смесь силилового эфира 11 (21,2 г, 33,8 ммоль), Pd(OH)2 (20%, 4,7 г, 33,8 ммоль) и EtOAc (200 мл) перемешивали при комнатной температуре в атмосфере Н2 в течение 3 часов. Смесь фильтровали через целит, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (10%-20% EtOAc-гексаны) с получением спирта 12 (17,4 г, 96%).
Figure 00000036
Олефин 13. N-оксид 4-метилморфолина (7,66 г, 65 ммоль) и ТРАР (1,15 г, 3,26 ммоль) добавляли в виде четырех порций на протяжении 20 минут к раствору спирта 12 (17,4 г, 32,5 ммоль) в CH2Cl2 (145 мл) при 0° С. Спустя 20 минут реакционную смесь разбавляли Et2O (50 мл) и насыщенным водным раствором Nа2S2O3 (50 мл) и фильтровали через целит. Органический слой отделяли, промывали последовательно насыщенным водным CuSO4-солевым раствором (1:1) и солевым раствором, сушили над Na2SO4, фильтровали через целит и концентрировали с получением целевого неочищенного кетона.
Реагент Теббе готовили перемешиванием бис(циклопентадиенил)титана (11,36 г, 45,6 ммоль) и Ме3Аl (2,0 М в толуоле, 45,6 мл, 91,2 ммоль) в течение 4 дней при комнатной температуре. Этот материал охлаждали до -25° С и добавляли раствор неочищенного кетона в ТГФ (150 мл). Реакционную смесь нагревали до 0° С, перемешивали в течение 30 минут, гасили медленным добавлением 0,1 н. NaOH (3,5 мл) и затем перемешивали еще в течение 20 минут при комнатной температуре. Смесь разбавляли Et2O, фильтровали через целит и концентрировали. Остаток растворяли в CH2Cl2, фильтровали через основной Аl2O3, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (5% EtOAc-гексаны) с получением олефина 13 (12,8 г, 74% для двух стадий).
Figure 00000037
Спирт 14. 9-BBN (0,5 М в ТГФ, 165 мл, 83 ммоль) добавляли к раствору олефина 13 (12,78 г, 24 ммоль) в ТГФ (280 мл) при 0° С. После перемешивания в течение 5 часов при комнатной температуре реакционную смесь повторно охлаждали до 0° С и в этот момент добавляли Н2O (200 мл), ТГФ (100 мл) и NаВО3· 4 Н2О (75 г). Смесь нагревали при комнатной температуре, перемешивали в течение 16 часов и затем концентрировали. Водный остаток экстрагировали EtOAc (4× 300 мл) и объединенные органические слои сушили над Na2SO4. Концентрирование и очистка флэш-хроматографией (20%-35% EtOAc-гексаны) давали спирт 14 (12,05 г, 91%).
Figure 00000038
Спирт 15. ДМСО (9 мл, 127 ммоль) добавляли к раствору оксалилхлорида (5,6 мл, 64 ммоль) в CH2Cl2 (350 мл) при -78° С. После перемешивания в течение 15 минут добавляли раствор спирта 14 (11,7 г, 0,021 ммоль) в CH2Cl2 (50 мл) и перемешивание продолжали в течение 1 часа, после чего добавляли Et3N (26,7 мл, 192 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 0° С, перемешивали в течение 15 минут, разбавляли насыщенным водным раствором NH4Cl и экстрагировали CH2Cl2 (3× 200 мл). Объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и концентрировали с получением целевого неочищенного альдегида.
Этот материал растворяли в CH2Cl2 (200 мл) и обрабатывали Et3N (20 мл) при комнатной температуре. После перемешивания в течение ночи реакционную смесь разбавляли насыщенным водным раствором NH4Cl и экстрагировали CH2Cl2 (3× 200 мл). Объединенные органические слои сушили над Nа2SO4, концентрировали и фильтровали через короткую колонку с SiO2 (20% EtOAc-гексаны) с получением неочищенного эпимеризованного продукта.
Этот альдегид растворяли в смеси Еt3N-ЕtОН (1:1, 100 мл), охлаждали до 0° С и обрабатывали боргидридом натрия (1,21 г, 32 ммоль). Смесь перемешивали в течение 20 минут, осторожно разбавляли насыщенным водным раствором NH4Cl, перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре и экстрагировали СН2Сl2 (3× 150 мл). Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (20% EtOAc-гексаны) с получением спирта 15 (9,95 г, 85% для трех стадий).
Figure 00000039
МРМ-эфир 16. BF3· OEt2 (0,1 М в CH2Cl2, 1,8 мл, 0,18 ммоль) добавляли к раствору спирта 15 (9,87 г, 18 ммоль), МРМ-трихлоримидата (4,9 мл, 27 ммоль) и CH2Cl2 (175 мл) при 0° С. Спустя 40 минут к реакционной смеси добавляли вторую порцию BF3· OEt2 (0,1 М в СН2Сl2, 0,9 мл, 0,09 ммоль). Спустя 20 минут реакцию гасили насыщенным водным раствором NH4Cl, перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре и разбавляли Et2O (600 мл). Органический слой отделяли и водный слой экстрагировали Et2O (150 мл). Объединенные органические слои промывали последовательно 0,1 н. водным NaOH, насыщенным водным раствором NаНСО3, солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (20% EtOAc-гексаны) с получением МРМ-эфира 16 (10,20 г, 85%).
Figure 00000040
Спирт 17. LAH (1 М в ТГФ, 22,5 мл, 22,5 ммоль) добавляли к раствору МРМ-эфира 16 (10,05 г, 15 ммоль) в Et2O (1,0 л) при 0° С. Спустя 30 минут реакцию осторожно гасили Н2О (1,3 мл) и 1 н. водным NaOH (1,3 мл). После перемешивания в течение 1 часа при комнатной температуре суспензию фильтровали через целит, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (20% EtOAc-гексаны) с получением спирта 17 (8,18 г, 93%).
Figure 00000041
Олефин 18. ДМСО (5,8 г, 82,4 ммоль) добавляли к раствору оксалилхлорида (3,6 мл, 41,2 ммоль) в CH2Cl2 (100 мл) при -78° С. Спустя 15 минут к реакционной смеси добавляли раствор спирта 17 (7,94 г, 13,5 ммоль) в СН2Сl2 (35 мл). После перемешивания в течение 1 часа добавляли Еt3N (17 мл, 122 ммоль), смесь нагревали до 0° С, перемешивали в течение 20 минут, разбавляли насыщенным водным раствором NH4Cl и затем экстрагировали СН2Сl2 (3× 100 мл). Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, концентрировали и фильтровали через короткую колонку SiO2 (20% EtOAc-гексаны) с получением целевого неочищенного альдегида.
н-BuLi (1,6 М, 20 мл, 30 ммоль) добавляли по каплям к раствору СН3РРh3Вr (10,1 г, 30 ммоль) в ТГФ (350 мл) и ДМСО (100 мл) при 0° С. Через 1 час добавляли раствор неочищенного альдегида в ТГФ (50 мл). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 часов. Добавляли насыщенный водный NH4Cl и смесь экстрагировали EtOAc (3× 500 мл). Объединенные экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (7% EtOAc-гексаны) с получением олефина 18 (5,57 г, 71% выход для 2 стадий).
Figure 00000042
Спирт 19. 9-BBN (0,5 М в ТГФ, 65 мл, 33 ммоль) добавляли к раствору олефина 18 (5,56 г, 9,6 ммоль) в ТГФ (85 мл) при 0° С. Смесь перемешивали в течение 5 часов при комнатной температуре и затем повторно охлаждали до 0° С. Добавляли последовательно Н2O (200 мл), ТГФ (100 мл) и NаВО3· 4 Н2О (30 г), После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре органические летучие компоненты удаляли при пониженном давлении. Водный остаток экстрагировали EtOAc (3× 200 мл) и объединенные органические слои сушили над Na2SO4. Концентрирование и очистка флэш-хроматографией (30% EtOAc-гексаны) давали спирт 19 (12,05 г, 92%).
Figure 00000043
Альдегид 20. ДМСО (1,36 мл, 19,2 ммоль) добавляли по каплям на протяжении 4 минут к раствору оксалилхлорида (1,26 мл, 14,4 ммоль) в СН2Сl2 (120 мл) при -78° С. После перемешивания в течение 10 минут через канюлю добавляли раствор спирта 19 (5,76 г, 9,61 ммоль) в CH2Cl2 (20 мл). Перенос завершали споласкиванием дополнительным количеством CH2Cl2 (2× 5 мл). После перемешивания в течение 20 минут смесь обрабатывали Еt3Н (5,36 мл, 38,4 ммоль) и перемешивали в течение 10 минут при -78° С, 30 минут при 0° С и 10 минут при комнатной температуре. Реакционную смесь выливали в насыщенный водный раствор NаНСО3 (200 мл) и отделенный водный слой экстрагировали CH2Cl2 (3х) и затем EtOAc (100 мл). Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (10%-20% EtOAc-гексаны) с получением альдегидного соединения 20 (5,28 г, 92%) в виде масла.
Figure 00000044
В2318. 0,1% NiCl2/CrCl2 (в/в, 3,21 г) и 1% NiCl2/CrCl2 (в/в, 4,31 г) добавляли к раствору альдегида 20 (3,73 г, 6,25 ммоль), ключевого фрагмента F-2, представленного винилиодидом Х2 (5,10 г, 9,16 ммоль), ТГФ (85 мл) и ДМФА (21 мл) при комнатной температуре в боксе с перчатками. Реакционную смесь перемешивали в течение 24 часов, удаляли из бокса с перчатками, охлаждали до 0° С, разбавляли EtOAc (100 мл), гасили насыщенным водным раствором NH4Cl (200 мл) и перемешивали в течение 30 минут. Отделенную водную фазу экстрагировали EtOAc (6х) и объединенные органические слои сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (20%-30% EtOAc-гексаны) с получением В2318 (~3 г), загрязненного близко идущими примесями и нециклизованным промежуточным продуктом (4,61 г). Последний (4,61 г, 4,48 ммоль) растворяли в ТГФ (150 мл), охлаждали до 0° С и обрабатывали KHMDS (0,5 М в толуоле, 14 мл, 7,0 ммоль) на протяжении 2-минутного периода. После перемешивания при 0° С в течение 15 минут реакцию гасили насыщенным водным раствором NH4Cl (150 мл) и нагревали до комнатной температуры. Отделенный водный слой экстрагировали EtOAc (3х) и объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, концентрировали и объединяли с частично очищенным продуктом, полученным, как описано выше. Колоночная хроматография (10% EtOAc-гексаны) давала В2318 (3,17 г, 55%) в виде неразделяемой смеси ~3:1 диастереомеров С27.
Figure 00000045
В2317. DDQ (1,45 г, 6,42 ммоль) добавляли порциями на протяжении 30 минут к перемешиваемому раствору В2318 (3,12 г, 3,35 ммоль) в СН2Сl2 (50 мл) и фосфатном буфере с рН 7 (5 мл) при комнатной температуре. Реакцию гасили насыщенным водным раствором NaHCO3 (50 мл), перемешивали в течение 5 минут, разбавляли дополнительным количеством насыщенного водного раствора NаНСО3 (100 мл), Н2O (200 мл) и экстрагировали Et2O (5x). Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (15%-30% EtOAc-гексаны) с получением извлеченного В2318 (1,40 г) и смеси изомерных продуктов С27. Извлеченный В2318 повторно подвергали реакционным условиям, описанным выше, для получения дополнительного продукта. Извлеченный исходный материал опять возвращали в цикл, подвергая его действию условий удаления защитных групп. Весь целевой материал объединяли и разделяли жидкостной хроматографией среднего давления с получением В2317 (1,65 г, 61%).
Figure 00000046
В2316. TsCI (0,63 г, 3,30 ммоль) добавляли к раствору В2317 (1,60 г, 1,97 ммоль) в СН2Сl2 (8 мл) и пиридине (2 мл) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 29 часов реакцию гасили насыщенным водным раствором NаНСО3 (30 мл) и H2O (10 мл). Отделенный водный слой экстрагировали Et2O и объединенные органические слои сушили над Nа2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (15%-30% EtOAc-гексаны) с получением В2316 (2,01 г, 92%) в виде масла вместе с извлеченным В2317 (92 мг, 5,8%).
Figure 00000047
B2315. LAH (1 М в ТГФ, 2,61 мл, 2,61 ммоль) добавляли на протяжении 1 минуты к раствору B2316 (1,68 г, 1,74 ммоль) в Et2O (80 мл) при 0° С. После перемешивания в течение 7 минут реакцию гасили осторожным добавлением МеОН (0,42 г, 10,4 ммоль) и Н2O (0,19 мл, 10 ммоль), нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 20 минут. Фильтрование через целит со смесью 1:1 CH2Cl2-Et2O, концентрирование и очистка колоночной хроматографией (30%-40% EtOAc-гексаны) давали B2315 (1,38 г, 90%) в виде масла.
Figure 00000048
В2314. MMTrCl (0,70 г, 2,26 ммоль) добавляли к раствору B2315 (1,33 г, 1,51 ммоль) в СН2Сl2 (25 мл) и изо-Pr2NEt (0,79 мл, 4,53 ммоль) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали в течение 1 часа и затем выливали в смесь насыщенного водного раствора NаНСО3 (20 мл), Н2О (10 мл) и Et2O (50 мл). Отделенный водный слой экстрагировали Et2O (3х). Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (CH2Cl2, затем 15%-30% EtOAc-гексаны) с получением В2314 (1,65 г,95%) в виде твердой пены.
Figure 00000049
В2313. Смесь В2314 (1,60 г, 1,39 ммоль) и Nal (3,10 г, 20,8 ммоль) в ацетоне (50 мл) нагревали с обратным холодильником (при дефлегмации) в течение 13 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли EtOAc и концентрировали. Добавляли Н2О (5 мл), солевой раствор (20 мл) и Na2S2O3 (200 мг) и полученную смесь экстрагировали Et2O (4х). Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (10% EtOAc-гексаны) с получением В2313 (1,50 г, 97%) в виде масла.
Figure 00000050
B2308. Трет-BuLi (1,7 М в пентане, 1,00 мл, 1,7 ммоль) добавляли на протяжении 1 минуты к раствору В2313 (0,90 г, 0,81 ммоль) в Et2O (14 мл) при -78° С. После перемешивания в течение 9 минут смесь переносили через канюлю на протяжении 4 минут в раствор ключевого фрагмента F-3 (0,83 г, 1,14 ммоль) в Et2O (4 мл) при -78° С. Перенос завершали ополаскиванием дополнительным количеством Et2O (2 мл). Полученную смесь перемешивали при -78° С в течение 5 минут и затем при 0° С в течение 10 минут, гасили насыщенным водным раствором NаНСО3 (30 мл) и нагревали до комнатной температуры. Отделенный водный слой экстрагировали Et2O (3х) и объединенные органические фазы сушили над Na2SO4 и концентрировали. Остаток объединяли с остатками двух других партий (соответствующими 0,11 г и 0,44 г В2313) и очищали колоночной хроматографией (10%-20% EtOAc-гексаны) с получением смеси B2307 и B2308 (1,86 г, 83%) в виде твердой пены. Хотя эти изомеры могли бы быть разделены препаративной ТСХ (20% EtOAc-гексаны), их использовали далее в виде смеси.
Figure 00000051
B2305 и B2306. Смесь В2307/В2308 (1,80 г, 1,05 ммоль) растворяли в EtOH (20 мл), обрабатывали PPTS (10,0 мг, 0,04 ммоль), перемешивали при комнатной температуре в течение 11 часов и затем гасили NаНСО3 (20,0 мг, 0,24 ммоль). После перемешивания в течение 15 минут смесь концентрировали, азеотропно перегоняли с толуолом (15 мл) и очищали колоночной хроматографией (20%-30% EtOAc-гексаны) с получением смеси B2305 и B2306 (1,22 г, 81%) в виде твердой пены. Хотя эти изомеры могли бы быть разделены препаративной ТСХ (30% EtOAc-гексаны), их использовали далее в виде смеси.
Figure 00000052
B2304. Смесь В2305/В2306 (1,16 г, 0,68 ммоль) и периодинан Десс-Мартина (0,61 г, 1,44 ммоль) в CH2Cl2 (35 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Дополнительное количество периодинана Десс-Мартина (0,54 г, 1,27 ммоль) добавляли к этой смеси и перемешивание продолжали в течение дополнительного 1 часа. Смесь разбавляли Et2O (100 мл), перемешивали в течение 20 минут и фильтровали через целит с Et2O. Бесцветный фильтрат промывали насыщенным водным раствором NаНСО3 (100 мл) и отделенный водный слой экстрагировали Et2O (3х). Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (10%-15% EtOAc-гексаны) с получением B2304 (0,98 г, 84%) в виде твердой пены.
Альтернативно, B2304 может быть получен следующим образом, и фактически описанный ниже синтез имеет преимущества перед синтезом, описанным выше.
Figure 00000053
К раствору спирта, 2,4 г, в метиленхлориде, 29 мл, добавляли трифторметансульфоновый ангидрид, 770 мг. Смесь перемешивали в течение 15 минут, экстрагировали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, сушили и хроматографировали с получением 2,737 г, 100%.
Figure 00000054
К раствору мезилата, 405 мг, в ДМФА, 0,06 мл, добавляли диизопропилэтиламин, 0,130 мл, с последующим добавлением бензолтиола, 0,061 мл. Спустя 4 часа и спустя 22 часа добавляли дополнительное количество амина, 0,03 мл, и бензолтиола, 0,015 мл. Спустя 24 часа эту смесь разбавляли смесью 5% этилацетат/гексан, 1 мл, и хроматографировали с получением 409 мг.
Figure 00000055
К раствору сульфида, 1,97 г, в ацетонитриле, 16 мл, добавляли N-метилморфолиноксид (NMO), 38 мг, а затем раствор 1,02 г тетрапропиламмония перрутената (VII) (ТРАР), в ацетонитриле, 1 мл. После 3,5 часов при комнатной температуре смесь нагревали до 40° С в течение 1 часа. Смесь охлаждали и добавляли водный насыщенный раствор тиосульфата натрия и смесь распределяли между водой и этилацетатом. Обычная обработка давала 1,567 г коричневого масла.
Figure 00000056
К раствору пивалоатного эфира, 1,567 г, в метиленхлориде, 11,2 мл, при -78° С добавляли DIBAL, 2,5 мл 1 М раствора в толуоле. Спустя 15 минут добавляли дополнительное количество DIBAL, 0,8 мл. После дополнительных 5 минут медленно добавляли метанол, 0,46 мл, с последующим добавлением воды, 0,2 мл. Смесь фильтровали через целит и хроматографировали с получением 1,386 г масла.
Figure 00000057
К раствору сульфона, 36 мг, в ДМЭ, 1 мл, при -40° С добавляли н-бутиллитий, 2,8 экв. Спустя 35 минут добавляли раствор альдегида, 42 мг, в ДМЭ, 0,5 мл. Спустя 40 минут добавляли насыщенный водный хлорид аммония и смесь экстрагировали этилацетатом. Обычная обработка с последующей хроматографией давала 52 мг масла.
Figure 00000058
К раствору спирта, 42 мг, в метиленхлориде, 2 мл, добавляли реагент Десса-Мартина, 36,4 мг. Смесь перемешивали в течение 30 минут и добавляли эфир. Смесь фильтровали через целит, промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, насыщенным тиосульфатом натрия, обрабатывали обычным образом и хроматографировали с получением 38 мг масла.
Figure 00000059
Получение раствора SmI2
Раствор 1,2-дииодэтана в 10 мл ТГФ добавляли к суспензии Sm, 0,16 г, в ТГФ, 1 мл. Смесь перемешивали в течение 1 часа. Аликвоту этого раствора, 0,03 мл, добавляли к раствору сульфона в ТГФ при -78° С. Спустя 5 минут добавляли дополнительное количество реагента SmI, 0,05 мл. После нескольких дополнительных минут добавляли еще раз этот реагент, 0,25 мл. Охлаждающую баню удаляли и добавляли насыщенный водный бикарбонат натрия, 3 мл. Смесь распределяли между эфиром и водой и обычная обработка давала 9,1 мг, 81%, масла.
Figure 00000060
B2302 и В2303. В боксе с перчатками NiCl2/CrCl2 (1% в/в, 1,09 г, 8,86 ммоль) добавляли к раствору B2304 (1,01 г, 0,70 ммоль) в ТГФ (600 мл) и ДМФА (150 мл) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 2 дней реакционную смесь вынимали из бокса с перчатками, охлаждали до 0° С, гасили насыщенным водным раствором NH4Cl (300 мл) и перемешивали при 0° С в течение 20 минут. После добавления H2O (100 мл) два слоя разделяли и водный слой экстрагировали EtOAc (5х). Объединенные органические фазы промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (15% EtOAc-гексаны) с получением смеси B2302 и В2303 (0,84 г, 92%) в виде твердой пены. Хотя эти изомеры могли бы быть разделены препаративной ТСХ (20% EtOAc-гексаны), их использовали далее в виде смеси.
Figure 00000061
B2301. Смесь В2302/В2303 (0,79 г, 0,60 ммоль) и периодинан Десса-Мартина (0,26 г, 0,60 ммоль) в СН2Сl2 (30 мл) при комнатной температуре перемешивали в течение 30 минут. К смеси добавляли дополнительное количество периодинана Десса-Мартина (0,26 г, 0,60 ммоль) и перемешивание продолжали еще в течение 1,5 часа. Затем смесь разбавляли Et2O (100 мл), перемешивали в течение 5 минут и фильтровали через целит. Фильтрат промывали насыщенным водным раствором NаНСО3 (100 мл) и отделенный водный слой экстрагировали Et2O (3х). Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (10%-15% EtOAc-гексаны) с получением B2301 (0,67 г, 85%) в виде масла.
Figure 00000062
В1793. TBAF (1 М в ТГФ, содержащем 0,5 М имидазол-HCl, 4,60 мл, 4,60 ммоль) добавляли на протяжении 2 минут к раствору В2301 (0,62 г, 0,48 ммоль) в ТГФ (29 мл) при комнатной температуре и полученную смесь перемешивали в течение 18 часов. После разбавления гексанами (10 мл) реакционную смесь сразу же наносили на SiO2-колонку, загруженную смесью 50% EtOAc-гексаны, и элюировали смесью 50% EtOAc-гексаны (1 л) и затем смесью 10% MeOH/EtOAc, собирая смесь промежуточных продуктов. После удаления растворителя остаток растворяли в CH2Cl2 (15 мл) и обрабатывали PPTS (645 мг). После перемешивания в течение 1 часа при комнатной температуре добавляли дополнительное количество PPTS (414 мг) и полученную белую суспензию перемешивали в течение 4,5 часов. Затем реакционную смесь наносили непосредственно на SiO2-колонку, загруженную смесью 70% EtOAc-гексаны, и элюировали смесью 70% EtOAc-гексаны (0,5 л), EtOAc (1 л). Элюирование градиентом 5%-10% MeOH/EtOAc давало чистый В1793 (181 мг), а элюирование смесью 15% MeOH-EtOAc давало дополнительный полуочищенный продукт, который после очистки препаративной ТСХ (10% MeOH-EtOAc) давал дополнительный чистый В1793 (42 мг). В1793 (всего 223 мг, 64%) получали в виде белого твердого вещества. Масс-спектрометрия высокого разрешения (HRMS): рассчит. для C40H58O12+Na 753,3826. Найдено: 753,3808.
Синтез В1794:
Figure 00000063
В1794. За исключением стереохимических различий и различий в защитных группах (схемы 3 и 5), арабинозу превращали в В1794 по способу, подобному описанному для В1793 (см. схемы 4 и 5). HRMS: рассчит. для C40H58O12+Na 753,3826. Найдено: 753,3856.
Синтез характерных аналогов В1793:
Figure 00000064
B1920 и В1921. TsCl (9,9 мг, 0,052 ммоль) добавляли к раствору диола В1793 (7,6 мг, 0,010 ммоль) в СН2Сl2 (1 мл) и пиридине (0,1 мл) при комнатной температуре. Спустя 48 часов реакцию гасили смесью 1:4 насыщенного водного NаНСО3-солевого раствора и экстрагировали CH2Cl2 (4x). Объединенные экстракты сушили над Nа2SO4 и концентрировали. Очистка препаративной ТСХ (80% EtOAc-гексаны) давала монотозилат А1920 (6,0 мг, 67%) и дитозилат В1921 (1,8 г, 18%).
Figure 00000065
В2294. MsCl (0,3 М в CH2Cl2, 98 мкл, 0,030 ммоль) добавляли по каплям на протяжении 40 минут к смеси коллидина (7 мкл, 0,054 ммоль), В1793 (20,8 мг, 0,028 ммоль) и CH2Cl2 (1 мл) при 0° С. Через 76 часов при 4° С реакцию гасили смесью 1:4 насыщенного водного NаНСО3-солевого раствора и экстрагировали CH2Cl2 (4x). Объединенные экстракты сушили над Na2SO4 и концентрировали. Неочищенный продукт растворяли в толуоле (3 мл), концентрировали и очищали препаративной ТСХ (1,5% MeOH-EtOAc с получением мезилата В2294 (21,4 мг, 95%).
Figure 00000066
В2014 и В2015. 0,016 М раствор 4-фторбензилбромида в Et2O (800 мкл, 13 мкмоль) и Аg2O (10 мг, 43 мкмоль) добавляли, каждый, в виде трех порций с интервалами 1 час при комнатной температуре к раствору В1793 (1,7 мг, 2,3 мкмоль) в Et2O (1,2 мл). Смесь защищали от света, перемешивали в течение 7 часов и затем фильтровали через целит. Концентрирование и очистка препаративной ТСХ (EtOAc) давали первичный эфир В2014 (1,1 мг, 56%) и вторичный эфир В2015 (0,6 мг, 31%). HRMS (FAB): рассчит. для C47H63FO12+Na 861,4201. Найдено: для В2014 861,4178, для В2015 861,4160.
Figure 00000067
Общая часть: Смесь В1793 (1 мг, 1,37 мкмоль), Et3N (10 мкл, 72 мкмоль) и ArNCO (2-4 экв.) в CH2Cl2 (0,2 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов - в течение ночи до тех пор, пока реакция не завершалась (согласно данным ТСХ). Реакционную смесь разбавляли насыщенным NаНСО3 (3 мл), экстрагировали СН2Сl (3х) и EtOAc (2x), сушили над Na2SO4 и очищали препаративной ТСХ (5% MeOH-CH2Cl2) с получением продуктов:
В1984. (1,0 мг, 86%) HRMS (FAB): рассчит. для C47H63NO13+Na 872,4197. Найдено: 872,4214.
В1990. (1,1 мг, 92%) HRMS (FAB): рассчит. для C47H62ClNO13+Na 906,3807. Найдено: 906,3826.
В1992. (1,0 мг, 83%) HRMS (FAB): рассчит. для C48H65NO14+Na 902,4303. Найдено: 902,4269.
Figure 00000068
В2042. DEAD (0,4 М в эфире, 50 мкл, 19 мкмоль) добавляли к раствору В1793 (2,0 мг, 2,7 мкмоль), трифенилфосфина (5 мг, 19 мкмоль), 4-нитробензойной кислоты (3,2 мг, 19 мкмоль) и Et2O (500 мкл) при комнатной температуре. Спустя 22 часа реакционную смесь наносили непосредственно на пластинку для препаративной ТСХ и элюировали смесью 60% EtOAc-гексаны с получением промежуточного диэфира (3,0 мг). Этот материал помещали в МеОН (300 мкл) и обрабатывали К2СО3 (приблизительно 1 мг). После перемешивания при комнатной температуре в течение 30 минут реакционную смесь разбавляли солевым раствором и экстрагировали CH2Cl2 (5x). Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали препаративной ТСХ (5% MeOH-EtOAc с получением В2042 (1,2 мг, 60% для двух стадий). HRMS (FAB): рассчит. для C40H58O12+Na 753,3826. Найдено: 753,3810.
Figure 00000069
B1896 и B1897. NaBH4 (3 мг, 0,08 ммоль) добавляли к раствору B1793 (2,30 мг, 3,15 мкмоль) в смеси 1:1 СН2Сl2-МеОН (0,2 мл) при комнатной температуре. Концентрирование реакционной смеси и очистка препаративной ТСХ (8% MeOH-EtOAc) давали B1896 (0,80 мг, 35%) и B1897 (смесь 2:1, 0,15 мг, 6,5%). HRMS (FAB) для B1896: рассчит. для C40H60O12+Na 755,3983. Найдено: 753,3969.
Figure 00000070
В1918. Смесь B1793 (2,0 мг, 2,74 мкмоль), NaIO4 (35 мг, 0,16 ммоль), МеОН (0,8 мл) и Н2О (0,2 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 40 минут. Реакционную смесь разбавляли H2O (1 мл), экстрагировали CH2Cl2 (6x), сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (5% MeOH-CH2Cl2) с получением В1918 (1,9 мг, 100%).
Figure 00000071
B2037. 0,034 М раствор NaBH4 (0,1 мл, 3,4 мкмоль) в EtOH добавляли порциями к раствору B1918 (1,9 мг, 2,72 мкмоль) в МеОН (0,8 мл) и СН2Сl2 (0,2 мл) при температуре от -78° С до комнатной, пока реакция не завершалась согласно данным ТСХ. Реакцию гасили насыщенным водным раствором NH4Cl (2 мл) при -78° С, нагревали до комнатной температуры, экстрагировали СН2Сl2 (6x), сушили над Na2SO4 и очищали препаративной ТСХ (5% MeOH-CH2Cl2) с получением B2037 (1,7 мг, 89%). HRMS (FAB): рассчит. для С39Н56О11+Na 723,3720. Найдено: 723,3749.
Figure 00000072
NaIO4 (35 мг, 0,16 ммоль) добавляли к раствору В1793 (1,7 мг, 0,0023 ммоль), МеОН (800 мкл) и H2O (200 мкл) и спустя 15 минут эту смесь разбавляли Н2O и экстрагировали CH2Cl2 (5х). Органические экстракты сушили над Na2SO4, концентрировали и промежуточный альдегид немедленно растворяли в ДМФА (300 мкл). Добавляли 3-бром-3,3-дифторпропен (3 мкл, 0,023 ммоль) и порошок индия (3 мг, 0,23 ммоль) и через 24 часа добавляли дополнительное количество 3-бром-3,3-дифторпропена (1 мкл, 0,008 ммоль). Спустя 18 часов добавляли Н2O и смесь экстрагировали EtOAc (3х). Объединенные органические экстракты промывали последовательно H2O и солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали препаративной ТСХ (80% EtOAc-гексаны) с получением В2035 (0,74 мг, 41% для 2 стадий) в виде смеси изомеров. HRMS (FAB): рассчит. для C42H58F2O11+Na 799,3845. Найдено: 799,3883.
Figure 00000073
NaBH4 (2 мг, 0,05 ммоль) добавляли к раствору В1793 (2,2 мг, 0,003 ммоль) в смеси 1:1 CH2Cl2-MeOH (200 мкл) при комнатной температуре. Спустя 15 минут добавляли насыщенный водный NH4Cl и Н2О и смесь экстрагировали CH2Cl2 (6x) и EtOAc (2х). Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (10% МеOH-EtOAc) с получением промежуточного триола, который растворяли в МеОН (800 мкл) и Н2O (200 мкл). Добавляли NaIO4 (35 мг, 0,16 ммоль) и спустя 20 минут смесь разбавляли Н2О и экстрагировали CH2Cl2 (6x). Органические экстракты сушили над Nа2SO4, концентрировали и промежуточный альдегид немедленно растворяли в ТГФ (500 мкл). Добавляли 4-фторфенилмагнийбромид (2 М в Et2O, 12 мкл, 0,024 ммоль) и через 20 минут реакцию гасили насыщенным водным раствором NH4Cl. Смесь экстрагировали CH2Cl2 (6x) и объединенные органические экстракты сушили над Na2SO4 и концентрировали. Очистка препаративной ТСХ (EtOAc) давала целевой продукт в виде смеси 4 изомеров (1,32 мг, 55% для 3 стадий).
Периодинан Десса-Мартина (~3 мг, 0,007 ммоль) добавляли к раствору полученного выше продукта (0,95 мг, 0,0012 ммоль) в СН2Сl2 (300 мкл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Добавляли дополнительное количество периодинана Десса-Мартина (~3 мг, 0,007 ммоль) и CH2Cl2 (300 мкл) и после дополнительных 40 минут добавляли Et2O, насыщенный водный NаНСО3 (4 мл) и насыщенный водный Nа2S2O3 (1 мл). Смесь экстрагировали Et2O (3х) и объединенные экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (20% EtOAc-гексаны) с получением В2008 (0,58 мг, 61%). HRMS (FAB): рассчит. для C41H57FO11+Na 815,3783. Найдено: 815,3758.
В2011. Аналогичным образом В1793 (1,9 мг, 0,003 ммоль) превращали в В2011 (0,87 мг, 42% для 4 стадий). HRMS (FAB): рассчит. для С45Н58O11+Na 797,3877. Найдено: 797,3877.
Figure 00000074
В2013
Раствор В1920 (1,4 мг, 0,0016 ммоль), KCN (1 мг, 0,016 ммоль) и ДМСО (500 мкл) нагревали при 60° С в течение 8 часов. После охлаждения до комнатной температуры добавляли Н2O и смесь экстрагировали EtOAc (3х). Объединенные органические экстракты промывали последовательно Н2O и солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали препаративной ТСХ (80% EtOAc-гексаны) с получением В2013 (0,78 мг, 67%). HRMS (FAB): рассчит. для C41H57NO11+Na 762,3829. Найдено: 762,3848.
Figure 00000075
X1920
Смесь В1920 (1,3 мг, 1,47 мкмоль), Nal (30 мг, избыток) и ацетона (1 мл) перемешивали при 60° С в течение 3,5 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли насыщенным водным раствором NаНСО3 (3 мл), экстрагировали СН2Сl2 (5х) и EtOAc, сушили над Na2SO4 и очищали колоночной хроматографией (50% EtOAc-CH2Cl2 - 80% EtOAc-гексаны) с получением иодида X1920 (1,3 мг, 100%).
Figure 00000076
Общая часть. Смесь иодида X1920 (1,0 экв.), изо-Pr2EtN (11-22 экв.), ArSH (9-46 экв.) и ДМФА (0,3 мл) перемешивали при комнатной температуре, пока реакция не завершалась согласно данным ТСХ (обычно 24-48 часов). Реакционную смесь разбавляли насыщенным водным раствором NаНСО3 (2 мл), экстрагировали СН2Сl2 и EtOAc, сушили над Na2SO4 и очищали препаративной ТСХ (80% EtOAc-гексаны или 5% МеОН-СН2Сl2) с получением сульфидных продуктов:
B1998. (1,3 мг давали 1,1 мг, 85%) HRMS (FAB): рассчит. для С46Н61СlO11S+Na 897,3521. Найдено: 897,3533.
B2010. (1,1 мг давали 0,7 мг, 59%) HRMS (FAB): рассчит. для C47H64O12S+Na 875,4016. Найдено: 875,4057.
B2019. (1,1 мг давали 0,7 мг, 61%) MS (FAB): M+Na
Figure 00000077
Общая часть. 0,01 М раствор mCPBA (1,2 экв.) в CH2Cl2 добавляли к раствору сульфида (1,0 экв.) в СН2Сl2 (0,5 мл) при 0° С в течение 30 минут. Реакционную смесь разбавляли насыщенным водным раствором NаНСО3 (2 мл), экстрагировали СН2Сl2 и EtOAc, сушили над Na2SO4 и очищали препаративной ТСХ (80% EtOAc-гексаны или EtOAc) с получением продуктов:
B2016. (0,9 мг давали 0,7 мг, 74%)
В2030. (1,0 мг давали 0,6 мг, 61%) HRMS (FAB): рассчит. для С47Н64O14S+Na 907,3914. Найдено: 907,3950.
Figure 00000078
В1934. TBDPSCl (3,0 мкл, 12 мкмоль) добавляли к раствору B1793 (1,3 мг, 1,78 мкмоль), имидазола (10 мг, 166 мкмоль) и ДМФА (0,10 мл) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 1 часа реакционную смесь разбавляли насыщенным водным раствором NаНСО3 (2 мл), экстрагировали CH2Cl2 (3х) и EtOAc (2x), сушили над Na2SO4 и очищали препаративной ТСХ (5% МеОН-СН2Сl2 с получением промежуточного силилового эфира (1,3 мг, 77%).
Этот материал растворяли в CH2Cl2 (0,5 мл) и обрабатывали периодинаном Десса-Мартина (10 мг, 24 мкмоль) в течение 1,5 часов при комнатной температуре, разбавляли Et2O и фильтровали через целит. Фильтрат концентрировали и очищали препаративной ТСХ (50% EtOAc-гексаны) с получением дикетона в качестве промежуточного продукта (1,0 мг, 77%), который растворяли в ТГФ (0,5 мл) и обрабатывали 0,02 М TBAF, содержащим 0,01 М гидрохлорид имидазола (ТГФ-раствор, 75 мкл, 1,5 мкмоль) при комнатной температуре в течение 15 минут. Реакционную смесь элюировали через колонку SiO2 (50% EtOAc-гексаны - 5% MeOH-CH2Cl2) и целевой продукт дополнительно очищали препаративной ТСХ (5% MeOH-CH2Cl2 с получением В1934 (0,75 мг, 100%). HRMS (FAB): рассчит. для C40H56O12+Na 751,3669. Найдено: 751,3690. Синтез В1939:
Figure 00000079
В1922. Тетра-н-бутиламмонийазид (0,2 М в ДМФА, 0,5 мл, 0,10 ммоль) добавляли к раствору мезилата В2294 (21,4 мг, 0,026 ммоль) в ДМФА (2 мл) при комнатной температуре. После перемешивания при 83° С в течение 3,5 часов реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли толуолом, концентрировали и очищали препаративной ТСХ (80% этилацетат-гексаны) с получением В1922 (18 мг, 92%).
Figure 00000080
В1939. Ме3Р (1 М в ТГФ) и Н2О (0,8 мл) последовательно добавляли к раствору азида В1922 (24,6 мг, 0,032 ммоль) в ТГФ (3,2 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 22 часов, разбавляли толуолом, концентрировали и очищали флэш-хроматографией [ступенчатый градиент, 10% МеОН-EtOAc, затем MeOH-EtOAc-30% водный NH4OH (9:86:5)] с получением целевого первичного амина (23,3 мг), который согласно 1Н-ЯМР содержал ~1% оксида триметилфосфина. Лиофилизация из бензола и выдерживание под высоким вакуумом в течение 2 дней давали В1939 (20,3 мг, 87%).
Синтез характерных аналогов В1939:
В1930, В1940, В1973, В1987, В1988, В1991, В2003, В2004
Figure 00000081
B1930. Ме3Р (1 М в ТГФ, 13 мкл, 0,013 ммоль) добавляли к раствору В1922 (1,6 мг, 2,1 мкмоль), ТГФ (400 мкл) и Н2О (100 мкл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 22 часов, разбавляли толуолом, концентрировали и азеотропно отгоняли с толуолом (2х) с получением неочищенного амина, который использовали сразу же в следующей стадии.
EDC (0,06 М в CH2Cl2, 100 мкл, 11 мкмоль) добавляли к раствору неочищенного амина, бензоилмуравьиной кислоты (0,8 мг, 5,3 мкмоль) и СН2Сl2 (200 мкл) при комнатной температуре. Через 30 минут реакцию гасили смесью 1:4 насыщенный водный NаНСО3-солевой раствор и экстрагировали CH2Cl2 (5x). Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали препаративной ТСХ (EtOAc) с получением B1930 (1,5 мг, 83% для двух стадий). HRMS (FAB): рассчит. для С48Н63NO13+Na 884,4197. Найдено: 884,4166.
В1940. С использованием методики, описанной выше для В1930, В1922 восстанавливали, связывали с гидрохлоридом 3-пиридилуксусной кислоты и очищали препаративной ТСХ [(МеОН-EtOAc-30% водный NH4OH (9:86:5)] с получением В1940 (0,8 мг, 67% для двух стадий). HRMS (FAB): рассчит. для C47H64N2O12+Na 871,4357. Найдено: 871,4362.
В1973. С использованием методики, описанной выше, В1922 (0,9 мг, 1,2 мкмоль) восстанавливали, связывали с фенилуксусной кислотой и очищали препаративной ТСХ (5% MeOH-EtOAc) с получением В1973 (0,44 мг, 44% для двух стадий). HRMS (FAB): рассчит. для C48H65NO12+Na 870,4404. Найдено: 870,4447.
В1987. С использованием методики, описанной выше, В1922 (0,9 мг, 1,2 мкмоль) восстанавливали, связывали с 3-индолглиоксиловой кислотой и очищали препаративной ТСХ (3% MeOH-EtOAc) с получением В1987 (0,8 мг, 75% для двух стадий). HRMS (FAB): рассчит. для C50H64N2O12+Na 923,4306. Найдено: 923,4338.
В1991. С использованием методики, описанной выше, В1922 (1,0 мг, 1,3 мкмоль) восстанавливали, связывали с 4-хлорбензойной кислотой и очищали препаративной ТСХ (3% MeOH-EtOAc) с получением В1991 (0,8 мг, 70% для двух стадий). HRMS (FAB): рассчит. для C47H62NO12+Na 890,3858. Найдено: 890,3843.
В2003. С использованием методики, описанной выше, В1922 (1,0 мг, 1,3 мкмоль) восстанавливали, связывали с 3,4,5-триметоксибензоилмуравьиной кислотой и очищали препаративной ТСХ (EtOAc) с получением В2003 (0,7 мг, 56% для двух стадий). HRMS (FAB): рассчит. для C51H69NO16+Na 974,4514. Найдено: 974,4525.
В2004. С использованием методики, описанной выше, В1922 (1,0 мг, 1,3 мкмоль) восстанавливали, связывали с 3,4,5-триметоксибензойной кислотой и очищали препаративной ТСХ (5% MeOH-EtOAc) с получением В2004 (0,7 мг, 58% для двух стадий). HRMS (FAB): рассчит. для C49H65NO13+Na 946,4565. Найдено: 946,4599.
Figure 00000082
В1988. Периодинан Десса-Мартина (1 мг, 2,3 мкмоль) добавляли к раствору В1930 (0,80 мг, 0,93 мкмоль) в СН2Сl2 (500 мкл) при комнатной температуре. Спустя 1 час реакцию разбавляли Et2O и фильтровали через целит. Фильтрат промывали последовательно смесью 1:9 насыщенный водный NаНСО3-Nа2S2O3 и солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали препаративной ТСХ (80% EtOAc-гексаны) с получением В1988 (0,45 мг, 56%). HRMS (FAB): рассчит. для C48H61NO13+Na 882,4041. Найдено: 884,4012.
Синтез В2090:
Figure 00000083
Соединение 103. Порошок индия (1,35 г, 11,8 ммоль) добавляли к раствору 102 (3,38 г, 17,6 ммоль) в ДМФА (20 мл) при комнатной температуре. Затем добавляли неразбавленный альдегид 101 (3,72 г, 28,6 ммоль) и смесь перемешивали в течение ночи, давая температуре подняться до комнатной температуры. Реакционную смесь повторно охлаждали до 0° С и затем осторожно гасили насыщенным водным раствором NH4Cl (100 мл). После перемешивания в течение 30 минут полученную смесь экстрагировали Et2O (3х), сушили над Nа2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (10%-20% EtOAc-гексаны) с получением чистого кристаллического 103 (2,20 г, 59%).
Figure 00000084
Соединение 104. Et3N (72 мкл, 0,51 мкмоль) добавляли к раствору 103 (1,09 г, 5,13 ммоль) и тиофенола (0,63 мл, 7,16 мысль) в CH2Cl2 и полученную смесь перемешивали при 0° С в течение 1 часа. Фильтрование через SiO2 давало смесь 104 и 105, которая после жидкостной хроматографии среднего давления (15%-20% EtOAc-гексаны) давала 104 (0,53 г, 32%) и 105 (0,92 г, 56%).
Figure 00000085
Соединение 106. DIBALH (1 М в толуоле, 3,28 мл, 3,28 ммоль) добавляли к раствору 104 (0,53 г, 1,64 ммоль) в толуоле (10 мл) при -78° С и смесь перемешивали при -78° С в течение 10 минут. Реакцию гасили осторожным добавлением МеОН (0,40 мл, 9,84 ммоль) и Н2О (0,17 мл, 9,84 ммоль), нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 20 минут. Белую суспензию фильтровали через смесь целита и SiO2 со смесью 1:1 CH2Cl2-Et2O и концентрировали с получением 106 (0,53 г, 100%) в виде масла.
Figure 00000086
Соединение 107. Смесь 106 (0,53 г, 1,64 ммоль) и этил(трифенилфосфоранилиден)ацетата (1,15 г, 3,29 ммоль) в толуоле (10 мл) нагревали до 80° С в течение 15 часов. Смесь охлаждали до комнатной температуры и вводили DBU (25 мкл, 0,16 ммоль). Смесь нагревали до 80° С в течение 1,5 часов, охлаждали до комнатной температуры, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (10%-20% EtOAc-гексаны) с получением 107 (0,54 г, 83%) в виде масла (соотношение изомеров α :β 3:1).
Figure 00000087
Соединение 108. Раствор mCPBA (~55%, 450 мг в 4,5 мл CH2Cl2, 1,44 ммоль) добавляли к раствору 107 (0,54 г, 1,36 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл) при -78° С. Реакционную смесь разбавляли насыщенным водным раствором NаНСО3 (50 мл), Н2O (10 мл) и Et2O (60 мл) и затем нагревали до комнатной температуры. Отделенный водный слой экстрагировали EtOAc (4x) и объединенные органические фазы сушили над Nа2SО4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (50% EtOAc-гексаны) с получением 108 (0,51 г, 92%) в виде масла.
Figure 00000088
Соединение 109. Смесь 108 (0,51 г, 1,24 ммоль) и NaOAc (1,00 г, 12,4 ммоль) в АС2O (10 мл) перемешивали при 140° С в течение 12 часов, охлаждали до комнатной температуры и затем концентрировали. Остаток распределяли между насыщенным водным раствором NаНСО3 (20 мл) и Et2O (30 мл) и интенсивно перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. Отделенный водный слой экстрагировали Et2O (2x) и объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (5%-15% EtOAc-гексаны) с получением 109 (0,41 г, 73%) в виде масла.
Figure 00000089
Соединение 110. Смесь 109 (0,41 г, 0,91 ммоль) и К2СО3 (44,3 мг, 0,32 ммоль) в EtOH (5 мл) нагревали до 60-70° С в течение 1 дня. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь концентрировали и элюировали через колонку SiO2 (10%-20% EtOAc-гексаны) с получением частично очищенного альдегидного промежуточного продукта. Этот материал растворяли в EtOH (2,5 мл), обрабатывали NaBH4 (50 мг, 1,32 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. Смесь концентрировали и очищали колоночной хроматографией (40% EtOAc-гексаны) с получением 110 (181 мг, 66%).
Figure 00000090
Соединение 111. BF3· OЕt2 (0,05 M в CH2Cl2, 175 мкл, 8,75 мкмоль) добавляли к раствору 110 (181 мг, 0,60 ммоль) и п-метоксибензил-2,2,2-трихлорацетимидата (0,50 мл, 1,80 ммоль) в СН2Сl2 (5 мл) при 0° С. Полученную смесь перемешивали в течение 1,5 часов при 0° С и в течение 2 часов при комнатной температуре до завершения реакции. Смесь гасили насыщенным водным раствором NаНСО3 (25 мл) и экстрагировали Et2O (5x). Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (CH2Cl2 и затем 20% EtOAc-гексаны) с получением полуочищенного 111 (0,37 г, >100%) в виде масла.
Figure 00000091
Соединение 112. Смесь 111 (0,37 г, макс.=0,60 ммоль) и TsOH· H2O (36 мг) в EtOH (5 мл) перемешивали сначала при комнатной температуре в течение ночи и затем при 60° С в течение 1 часа. Добавляли дополнительное количество TsOH· H2O (31 мг) при комнатной температуре и реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Затем смесь концентрировали, гасили насыщенным водным раствором NаНСО3 и экстрагировали EtOAc (5х). Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (20%-50% EtOAc-гексаны и затем 5% МеOH-CH2Cl2) с получением 112 (121 мг, 53%) в виде масла, наряду с извлеченным 111 (49 мг, 21%).
Figure 00000092
Соединение 113, TBSOTf (250 мкл, 1,09 ммоль) добавляли к раствору 112 (121 мг, 0,32 ммоль) и Et3N (176 мкл, 1,26 ммоль) в СН2Сl2 при 0° С и полученную смесь перемешивали в течение 25 минут. Реакцию гасили насыщенным водным раствором NаНСО3 (15 мл) и отделенный водный слой экстрагировали эфиром (3х). Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (5%-10% EtOAc-гексаны) с получением 113 (165 мг, 85%) в виде масла.
Figure 00000093
Соединение 114. DIBALH (1 M в толуоле, 0,54 мл, 0,54 ммоль) добавляли к раствору 113 (165 мг, 0,27 ммоль) в толуоле (5 мл) при -78° С и полученную смесь перемешивали при -78° С в течение 10 минут. Реакцию гасили осторожным добавлением МеОН (65 мкл, 0,81 ммоль) и Н2O (29 мкл, 0,81 ммоль), нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 25 минут. Белую суспензию фильтровали через целит со смесью 1:1 CH2Cl2-Et2O. Концентрирование и очистка колоночной хроматографией (10%-20% EtOAc-гексаны) давали 114 (153 мг, 100%) в виде масла.
Figure 00000094
В2090. Подобно описанному в схеме 6 способу для синтеза В1794, промежуточное соединение 114 превращали в В2090. HRMS (FAB): рассчит. для С39Н56О11+Na 723,3720. Найдено: 723,3731.
Figure 00000095
В2136. Аналогично способу описанному для В1939, В2090 превращали в В2136. HRMS (FAB): рассчит. для С39Н57NO10+Na 722,3880. Найдено: 722,3907.
Синтез В2039/В2043:
Figure 00000096
Диол 201. TBAF (1 М в ТГФ, 383 мкл, 0,383 ммоль) добавляли к раствору Х2318 (350-LS-218) (80,8 мг, 0,0765 ммоль) в ТГФ (7 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. После частичного концентрирования остаток наносили непосредственно на колонку SiO2, загруженную с использованием смеси 30% EtOAc-гексаны. Градиентное элюирование (30% EtOAc-гексаны - EtOAc) давало диол 201 (49,7 мг, 92%).
Figure 00000097
Альдегид 202. Смесь диола 201 (497 мг, 0,0707 ммоль), NaIO4 (100 мг, 0,47 ммоль), МеОН (10 мл) и Н2O (2,5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. Добавляли Н2О и смесь экстрагировали CH2Cl2 (4x). Объединенные органические экстракты сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (30% EtOAc-гексаны) с получением альдегида 202 (41,7 мг, 88%).
Figure 00000098
Спирт 203. 4-фторфенилмагнийбромид (2 М в Et2O, 155 мкл, 0,31 ммоль) добавляли к раствору альдегида 202 (41,7 мг, 0,062 ммоль) в ТГФ (6 мл). Через 15 минут при комнатной температуре реакцию гасили насыщенным водным раствором NаНСО3 и экстрагировали CH2Cl2 (4x). Объединенные органические экстракты сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали препаративной ТСХ (40% EtOAc-гексаны) с получением спирта 203 (32,4 мг, 68%) в виде смеси 1:1 изомеров С34. Минорный нежелательный изомер С27 отделялся на этой стадии и его также выделяли в виде смеси 1:1 изомеров С34 (8,4 мг, 18%).
Figure 00000099
Эфир 204. Et3N (18 мкл, 0,13 ммоль) и TBSOTf (15 мкл, 0,063 ммоль) добавляли к раствору спирта 203 (32,4 мг, 0,042 ммоль) в СН3Сl2 (5 мл) при 0° С. Спустя 20 минут реакцию гасили добавлением насыщенного водного раствора NH4Cl и экстрагировали СН2Сl2 (3х). Объединенные органические экстракты сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (20% EtOAc-гексаны) с получением эфира 204 (33,1 мг, 89%).
Figure 00000100
Спирт 205. LAH (1 М в ТГФ, 113 мкл, 0,113 ммоль) добавляли по каплям к раствору эфира 204 (33,1 мг, 0,0375 ммоль) в Et2O (10 мл) при 0° С. Спустя 20 минут добавляли Н2O и 1 М NaOH и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Фильтрование через целит, концентрирование и очистка колоночной хроматографией (40% EtOAc-гексаны) давали спирт 205 (28,4 мг, 95%).
Figure 00000101
Эфир 206. Диизопропилэтиламин (31 мкл, 0,18 ммоль) и MMTrCl (22 мг, 0,071 ммоль) добавляли к раствору спирта 205 (28,4 мг, 0,0356 ммоль) в CH2Cl2 (4 мл) при 0° С. После 15 часов при комнатной температуре добавляли Н2O и смесь экстрагировали СН2Сl2 (3х). Объединенные экстракты промывали солевым раствором, сушили над Nа2SO4, концентрировали и очищали препаративной ТСХ (40% EtOAc-гексаны) с получением эфира 206 в виде смеси ~1,5:1 эпимеров С34 (45 мг, выход количественный), которая содержала небольшое количество близко идущих примесей.
Figure 00000102
Спирт 207. DDQ (40 мг, 0,18 ммоль) добавляли к раствору эфира 206 (37 мг, 0,034 ммоль) в СН2Сl2 (4 мл) и смеси 1:10 трет-BuOH и фосфатного буфера с рН 7 (2 мл) при 0° С. Смесь интенсивно перемешивали в темноте в течение 15 минут. Добавляли три дополнительные порции DDQ (40 мг, 0,18 ммоль) с интервалами 10 минут, затем реакцию разбавляли насыщенным водным раствором NаНСО3 и экстрагировали CH2Cl2 (3х). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4 концентрировали и очищали препаративной ТСХ (30% EtOAc-гексаны) с получением спирта 207 (19,2 мг, 59%), а также извлеченного эфира 206 (9,7 мг, 26%).
Figure 00000103
Мезилаты 208А и 208В. Et3N (19 мкл, 0,13 ммоль) и Ms2O (10 мг, 0,056 ммоль) последовательно добавляли к раствору спирта 207 (21,3 мг, 0,022 ммоль) в CH2Cl2 (6 мл) при 0° С. Спустя 30 минут добавляли насыщенный водный раствор NаНСО3 и смесь экстрагировали CH2Cl2 (3х). Объединенные экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали препаративной ТСХ (30% EtOAc-гексаны) с получением мезилатов 208А (11,7 мг 51%) и 208В (6,5 мг, 28%) в виде отдельных изомеров С34.
Figure 00000104
В2039 и В2043. Подобно описанному в схеме 6 для синтеза В1794, оба диастереомера 208А и 208В независимо превращали в В2039 и В2043. HRMS (FAB): рассчит. для С45Н59FО11+Na 817,3939. Найдено: для В2039 817,3896, для В2043 817, 3910.
Синтез В2086, В2088, В2091
Figure 00000105
Спирт Х-20. NaIO4 (1,16 г, 5,4 ммоль) добавляли к раствору диолов 10 а, b (1,19 г, 3,0 ммоль) в смеси МеОН-Н2О (4:1, 75 мл) при 0° С. Реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры. После перемешивания в течение 40 минут смесь разбавляли EtOAc, фильтровали через целит, концентрировали и распределяли между солевым раствором и CH2Cl2. Отделенный водный слой экстрагировали CH2Cl2 (2x). Объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и концентрировали с получением неочищенного альдегидного промежуточного продукта.
NaBH4 (228 мг, 6,0 ммоль) добавляли к раствору альдегида в смеси MeOH-Et2O (1:1, 40 мл) при 0° С. Смесь перемешивали в течение 30 минут, осторожно гасили насыщенным водным раствором NH4Cl, перемешивали в течение 20 минут при комнатной температуре и экстрагировали CH2Cl2 (3х). Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (40%-50% EtOAc-гексаны) с получением спирта Х-20 (1,02 г, 93% для двух стадий).
Figure 00000106
Силиловый эфир. Имидазол (0,94 г, 13,9 ммоль) и TBSCl (0,59 г, 3,89 ммоль) последовательно добавляли к раствору спирта Х-20 (1,02 г, 2,78 ммоль) в ДМФА (10 мл) при комнатной температуре. Спустя 14 часов реакционную смесь разбавляли насыщенным водным раствором NH4Cl и экстрагировали EtOAc (3х). Объединенные органические экстракты промывали Н2О, солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (5%-15% EtOAc-гексаны) с получением силилового эфира 21 (1,3 г, 98%).
Figure 00000107
Спирт 22. Смесь Рd(ОН)2 (20%, 0,8 г), силилового эфира 21 (1,3 г, 2,70 ммоль) и EtOAc (30 мл) перемешивали в течение 1 часа в атмосфере Н2 (1 атм) при комнатной температуре, фильтровали через целит, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (20%-40% EtOAc-гексаны) с получением спирта 22 (0,96 г, 91%).
Figure 00000108
Спирт 25. N-оксид 4-метилморфолина (980 мг, 8,4 ммоль) и ТРАР (131 мг, 3,26 ммоль) последовательно добавляли к раствору спирта 22 (1,78 г, 4,6 ммоль) в СН2Сl2 (45 мл) при комнатной температуре. Холодная баня была необходима для регулирования этой экзотермической реакции. Спустя 20 минут реакционную смесь разбавляли гексанами, фильтровали через короткую колонку SiO2 (15% EtOAc-гексаны) и концентрировали с получением неочищенного кетона.
Реагент Теббе (14,9 мл, 9,0 ммоль) добавляли на протяжении 10 минут к раствору неочищенного кетона в ТГФ (60 мл) при 0° С. Спустя 20 минут реакционную смесь выливали в Et2O (100 мл), который предварительно охлаждали до -78° С, гасили медленным добавлением Н2О (30 мл), нагревали до комнатной температуры, перемешивали в течение 30 минут и экстрагировали Et2O (4х). Объединенные экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (10% EtOAc-гексаны) с получением целевого олефина, загрязненного гем-диметиловым продуктом (1,07 г). Эту смесь использовали непосредственно в следующей стадии.
9-BBN (0,5 М в ТГФ, 11,5 мл, 5,8 ммоль) добавляли к раствору олефина в ТГФ (15 мл) при 0° С. Реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры, перемешивали в течение 5 часов и затем повторно охлаждали до 0° С. Добавляли Н2О (60 мл), ТГФ (60 мл) и NаВО3· 4Н2O (5,7 г). После перемешивания в течение 5 часов при комнатной температуре ТГФ удаляли при пониженном давлении и водный остаток экстрагировали EtOAc (4x). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (20%-40% EtOAc-гексаны) с получением спирта 25 (605 мг, 18% для трех стадий).
Figure 00000109
Спирт 26. С использованием описанной ранее методики, спирт 25 (604 мг, 1,49 ммоль) последовательно окисляли, изомеризовали и восстанавливали. Очистка флэш-хроматографией (20%-40% EtOAc-гексаны) давала спирт 26 (550 мг, 91% для трех стадий).
Figure 00000110
МРМ-эфир 27. BF3· OEt2 (0,05 М в CH2Clz, 270 мкл, 0,013 ммоль) добавляли к раствору спирта 26 (545 мг, 1,35 ммоль) и МРМ-трихлоримидата (1,14 г, 4,0 ммоль) в CH2Cl2 (40 мл) при 0° С. Спустя 1 час реакцию гасили насыщенным водным раствором NаНСО3, экстрагировали CH2Cl2, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (10%-15% EtOAc-гексаны) с получением МРМ-эфира 27 (580 мг, 82%).
Figure 00000111
Спирт 28. LAH (1 М в ТГФ, 1,9 мл, 1,9 ммоль) добавляли к раствору МРМ-эфира 27 (580 мг, 1,11 ммоль) в Et2O (100 мл) при 0° С. Спустя 30 минут реакцию осторожно гасили Н2О (0,5 мл) и 1 н. водным NaOH (0,5 мл), перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре, фильтровали через целит, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (30%-50% EtOAc-гексаны) с получением спирта 28 (460 мг, 95%).
Figure 00000112
Олефин 29. ДМСО (441 мкл, 6,23 ммоль) добавляли к раствору оксалилхлорида (272 мкл, 3,12 ммоль) в СН2Сl2 (30 мл) при -78° С. Спустя 15 минут добавляли к этой реакционной смеси раствор спирта 28 (458 мг, 1,04 ммоль) в CH2Cl2 (15 мл). После перемешивания в течение 1 часа при -78° С добавляли Et3N (1,3 мл, 9,35 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 0° С, перемешивали в течение 10 минут, разбавляли насыщенным водным раствором NH4Cl и экстрагировали CH2Cl2 (3х). Объединенные органические экстракты сушили над Na2SO4, концентрировали и фильтровали через короткую колонку SiO2 (20%-30% EtOAc-гексаны) с получением неочищенного альдегида.
н-ВuОН (1,63 М, 1,4 мл, 2,28 ммоль) добавляли по каплям к раствору СН3РРh3Вr (815 мг, 2,28 ммоль), ТГФ (20 мл) и ДМСО (7,5 мл) при 0° С. Спустя 1 час добавляли раствор альдегида в ТГФ (10 мл). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 часов. Добавляли насыщенный водный раствор NH4Cl и смесь экстрагировали EtOAc (4х). Объединенные органические экстракты промывали Н2О, солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (10%-15% EtOAc-гексаны) с получением олефина 29 (380 мг, 95% выход для двух стадий).
Figure 00000113
Соединение 31. 9-BBN (0,5 М в ТГФ, 6 мл, 3 ммоль) добавляли к раствору олефина 29 (370 мг, 0,85 ммоль) в ТГФ (7 мл) при 0° С. Смеси давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 часа. После повторного охлаждения до 0° С добавляли Н2O (30 мл), ТГФ (20 мл) и NаВО3· 4 Н2O (2,8 г). После перемешивания в течение 3 часов при комнатной температуре ТГФ удаляли при пониженном давлении. Водный остаток экстрагировали EtOAc (4x), сушили над Nа2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (25%-50% EtOAc-гексаны) с получением спирта 30, который использовали непосредственно в следующей стадии.
Пивалоилхлорид (157 мкл, 1,27 ммоль) добавляли к раствору спирта 30 в смеси СН2Сl2-пиридин (1:1, 10 мл) при комнатной температуре. Спустя 18 часов добавляли дополнительное количество пивалоилхлорида (100 мкл, 0,81 ммоль). Спустя 1 час реакционную смесь охлаждали до 0° С, гасили МеОН (0,5 мл), концентрировали, разбавляли солевым раствором и экстрагировали СН2Сl2 (4х). Объединенные органические экстракты сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (10%-15% EtOAc-гексаны) с получением соединения 31 (410 мг, 90% для двух стадий).
Figure 00000114
Спирт 32. TBAF (1 M в ТГФ, 1,14 мл, 1,14 ммоль) добавляли к раствору 31 (410 мг, 0,761 ммоль) в ТГФ (5 мл) при комнатной температуре. Спустя 1,5 часа реакционную смесь концентрировали и очищали флэш-хроматографией (40% EtOAc-гексаны - 100% EtOAc) с получением спирта 32 (320 мг, 100%).
Figure 00000115
Спирт 33а и 33b. Периодинан Десса-Мартина (925 мг, 2,18 ммоль) добавляли к раствору спирта 32 (309 мг, 0,727 ммоль) в СН2Сl2 (19 мл) при комнатной температуре. Спустя 1 час реакцию разбавляли Et2O и фильтровали через целит. Фильтрат промывали последовательно смесью насыщенный водный раствор NaHCO3-Na2S2O3 1:9 и солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (20%-30% EtOAc-гексаны) с получением целевого альдегида, который немедленно использовали в следующей стадии.
BF3· OEt2 (135 мкл, 1,1 ммоль) добавляли к раствору неочищенного альдегида, три-н-бутилаллилолова (337 мкл, 1,08 ммоль) и СН2Сl2 (16 мл) при -78° С. Спустя 1 час реакцию гасили насыщенным водным раствором NаНСО3 и экстрагировали СН2Сl2 (3х). Объединенные органические экстракты сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали жидкостной хроматографией среднего давления (25%-30% EtOAc-гексаны) с получением основного, более полярного спирта 33а (165 мг, 49% для двух стадий) и минорного, менее полярного продукта 33b (90 мг, 27% для двух стадий).
Figure 00000116
Соединение 34. TBSOTf (163 мкл, 0,710 ммоль) добавляли к раствору спирта 33а (165 мг, 0,355 ммоль), Et3N (247 мкл, 1,78 ммоль) и СН2Сl2 (5 мл) при 0° С. Спустя 25 минут реакцию гасили насыщенным водным раствором NаНСО3, экстрагировали СН2Сl2 (3х), сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (15%-20% EtOAc-гексаны) с получением соединения 34 (200 мг, 98%).
Figure 00000117
Диолы 35a и 35b. OsO4 (0,1 M раствор в толуоле, 32 мкл, 3,2 мкмоль) добавляли к раствору К2СО3 (168 мг, 1,22 ммоль), К3Fе(СN)6 (400 мг, 1,22 ммоль), (DHQ)2PYR (11 мг, 12 мкмоль), Н2О (3,2 мл), и трет-ВuОН (2,2 мл) при 0° С. Затем к реакционной смеси добавляли раствор олефина 34 (200 мг, 0,345 ммоль) в трет-ВuОН (1 мл). Через 5 часов при 0° С добавляли Na2S2O3· 5 H2O (200 мг). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры, перемешивали в течение 30 минут и экстрагировали CH2Cl2 (5x). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали препаративной ТСХ (70% EtOAc-гексаны) с получением основного, менее полярного диола 35а (118 мг, 56%) и минорного, более полярного диастереомерного продукта 35b (74 мг, 35%). Индивидуальные диастереоизомеры использовали далее отдельно.
Figure 00000118
Соединение 36. TBSOTf (177 мкл, 0,77 ммоль) добавляли к раствору диола 35а (118 мг, 0,192 ммоль), Et3N (267 мкл, 1,92 ммоль) и CH2Cl2 (5 мл) при 0° С. Спустя 25 минут реакцию гасили насыщенным водным раствором NаНСО3, экстрагировали CH2Cl2 (3х), сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (10%-15% EtOAc-гексаны) с получением соединения 36 (161 мг, 100%).
Figure 00000119
Спирт 37. С использованием процедуры, описанной ранее для получения спирта 28, из соединения 36 (161 мг, 0,192 ммоль) получали спирт 37 (135 мг, 93%) после очистки флэш-хроматографией (20%-40% EtOAc-гексаны).
Figure 00000120
Альдегид 38. Периодинан Десса-Мартина (227 мг, 0,535 ммоль) добавляли к раствору спирта 37 (135 мг, 0,178 ммоль) в СН2Сl2 (5 мл) при комнатной температуре. Спустя 1 час реакционную смесь разбавляли Et2O и фильтровали через целит. Фильтрат последовательно промывали смесью насыщенный водный раствор NаНСО3-Nа2S2O3 1:9 и солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (10%-20% EtOAc-гексаны) с получением альдегида 38 (127 мг, 95%).
Figure 00000121
B2086, B2102. Каждый из полученных выше диастереомеров отдельно доводили до конечного продукта аналогично методике, описанной в схеме 6 для В1794. Диастереомер 35а давал B2086. Диастереомер 35b давал B2102.
Figure 00000122
В2088. NaIO4 добавляли к раствору В2086 (1 мг, 1,29 мкмоль) в МеОН-Н2О (4:1, 1 мл) при комнатной температуре. Спустя 30 минут реакционную смесь разбавляли Н2O, экстрагировали СН2Сl2 (6х), сушили над Na2SO4 и концентрировали с получением В2088 (1,2 мг).
Figure 00000123
В2091. NaBH4 (0,013 М в EtOH, 20 мкл, 0,27 мкмоль) добавляли к раствору В2088 (1 мг, 1,29 мкмоль) в MeOH-CH2Cl2 (4:1, 0,5 мл) при -78° С. Периодически добавляли дополнительное количество NaBH4 с тщательным мониторингом реакции при помощи ТСХ (требовалось в целом 220 мкл раствора NaBH4). Реакционную смесь гасили при 0° С насыщенным водным раствором NH4Cl, перемешивали в течение 20 минут при комнатной температуре и экстрагировали CH2Cl2 (6x). Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали препаративной ТСХ (7% MeOH-EtOAc) с получением В2091 (0,40 мг, 50%).
Синтез В1933:
Figure 00000124
Спирт 303. 9-BBN (0,5 М в ТГФ, 23 мл, 0,012 моль) добавляли по каплям на протяжении 30 минут к раствору алкена 302 (1,51 г, 0,00386 моль) в ТГФ (40 мл) при 0° С. После перемешивания при комнатной температуре в течение 80 минут смесь охлаждали до 0° С и осторожно добавляли Н2О (80 мл) с последующим добавлением NаВО3· 4 Н2O (4,2 г, 0,027 моль). Смесь интенсивно перемешивали при комнатной температуре в течение 2,3 часов, затем экстрагировали EtOAc (3х). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над NB2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (50% EtOAc-гексаны) с получением спирта 303 (1,37 г, 87%).
Figure 00000125
Альдегид 304. Оксалилхлорид (88 мкл, 1,00 ммоль) добавляли по каплям к раствору ДМСО (142 мкл, 2,00 ммоль) в СН2Сl2 (20 мл) при -78° С. Спустя 30 минут добавляли раствор спирта 303 (137 мг, 0,335 ммоль) в СН2Сl2 (5 мл) и перемешивали при -78° С в течение 1 часа. Добавляли Et3N (420 мкл, 3,01 ммоль) и спустя 10 минут реакцию перемешивали в течение 10 минут при 0° С и в этот момент добавляли насыщенный водный раствор NH4Cl и полученную смесь экстрагировали CH2Cl2 (3х). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (50% EtOAc-гексаны) с получением промежуточного альдегида 304 (0,114 г, 84%), который немедленно использовали в следующей стадии.
Figure 00000126
Спирт 305. TBAF (1 М в ТГФ, 5 мкл, 0,005 ммоль) добавляли к раствору альдегида 304 (0,114 г, 0,27 ммоль) в СF3ТМS (0,5 М в ТГФ, 1,1 мл, 0,54 ммоль) при 0° С. Спустя 20 минут добавляли вторую порцию TBAF (1 М в ТГФ, 100 мкл, 0,1 ммоль) и смесь перемешивали в течение 10 минут и в этот момент добавляли по каплям избыток TBAF (1 М в ТГФ, 270 мкл, 0,27 ммоль) для расщепления промежуточного силилового эфира. Спустя 30 минут смесь разбавляли Н2О и экстрагировали EtOAc (3х). Органические экстракты промывали H2O, солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (50% EtOAc-гексаны) с получением спирта 305 (123 мг, 95%) в виде неразделяемой смеси 1:1 изомеров.
Figure 00000127
Силиловый эфир 306. TBSOTf (265 мкл, 1,16 ммоль) добавляли к раствору спирта 305 (123 мг, 0,257 ммоль) и Et3N (430 мкл, 3,08 ммоль) в CH2Cl2 (8 мл) при 0° С. После перемешивания при комнатной температуре в течение 20 часов добавляли насыщенный водный NаНСО3 и смесь экстрагировали CH2Cl2 (3х). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (20% EtOAc-гексаны) с получением силилового эфира 306 (148 мг, 97%).
Figure 00000128
Спирт 307. LAH (1 M в ТГФ, 220 мкл, 0,22 ммоль) добавляли по каплям к раствору силилового эфира 306 (131 мг, 0,22 ммоль) в Et2O (5 мл) при 0° С. Спустя 20 минут осторожно добавляли Н2O и 1 М NaOH. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут, фильтровали через стекловату, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (50% EtOAc-гексаны) с получением спирта 307 (112 мг, выход количественный).
Figure 00000129
Алкен 309. Оксалилхлорид (58 мкл, 0,66 ммоль) добавляли по каплям к раствору ДМСО (94 мкл, 1,3 ммоль) в СН2Сl2 (10 мл) при -78° С. Спустя 30 минут добавляли раствор спирта 307 (112 мг, 0,22 ммоль) в СН2Сl2 (3 мл). Спустя 1 час добавляли Et3N (276 мкл, 1,98 ммоль) и через 10 минут при -78° С реакцию перемешивали при 0° С в течение 10 минут. Добавляли насыщенный водный NH4Cl и смесь экстрагировали СН2Сl2 (3х). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (50% EtOAc-гексаны) с получением альдегида 308 (101 мг, 91%), который сразу же использовали в следующей стадии.
нBuLi (1,63 М в ТГФ, 200 мкл, 0,33 ммоль) добавляли по каплям к раствору СН3РРh3Вr (118 мг, 0,33 ммоль) в ТГФ (3 мл) и ДМСО (1,2 мл) при 0° С. Спустя 70 минут добавляли раствор альдегида 308 (101 мг, 0,20 ммоль) в ТГФ (3 мл) и через 10 минут при 0° С реакцию перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (20% EtOAc-гексаны) с получением алкена 309 (90,9 мг, 90%).
Figure 00000130
Спирт 310. 9-BBN (0,5 М в ТГФ, 17 мл, 8,45 ммоль) добавляли по каплям к раствору алкена 309 (1,06 г, 2,11 ммоль) в ТГФ (30 мл) при 0° С. После перемешивания в течение 2,5 часов при комнатной температуре реакцию охлаждали до 0° С и осторожно добавляли H2O (60 мл) с последующим добавлением NaBO3· 4 H2O (3,25 г, 21,1 ммоль). Смесь интенсивно перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов, затем разбавляли Н2O и экстрагировали EtOAc (3х). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (20%-30% EtOAc-гексаны) с получением спирта 310 (0,920 г, 84%).
Figure 00000131
Пивалоат 311. Смесь спирта 310 (65,8 мг, 0,0126 ммоль), пиридина (61 мкл, 0,76 ммоль) и PvCl (23 мкл, 0,189 ммоль) в CH2Cl2 (3 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов. Вторую реакцию с использованием спирта 310 (0,92 г, 1,76 ммоль) проводили при таких же условиях и обе реакции объединяли во время обработки: добавляли насыщенный водный раствор NH4Cl и смесь экстрагировали СН2Сl2 (3х). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Nа2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (20% EtOAc-гексаны) с получением пивалоата 311 (1,08 г, выход количественный).
Figure 00000132
Спирт 312. Смесь эфира 311 (0,811 г, 1,33 ммоль), DDQ (6,1 г, 27 ммоль) и смеси 10:1 трет-ВuОН-фосфатный буфер с рН 7 (42 мл) в CH2Cl2 (84 мл) интенсивно перемешивали в темноте при комнатной температуре в течение 1,5 часов и в этот момент добавляли дополнительное количество DDQ (1,0 г, 4,4 ммоль). Спустя 1 час добавляли насыщенный водный NаНСО3 и смесь экстрагировали СН2Сl2 (4х). Объединенные органические экстракты последовательно промывали насыщенным водным раствором NаНСО3 и солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (20% EtOAc-гексаны) с получением спирта 312 (0,56 г, 87%), а также с выделением исходного материала 311 (97 мг, 12%).
Figure 00000133
Кетон 313. Оксалилхлорид (21 мкл, 0,12 ммоль) добавляли по каплям к раствору ДМСО (34 мкл, 0,48 ммоль) в СН2Сl2 (3 мл) при -78° С. Спустя 1 час добавляли раствор спирта 312 (39,4 мг, 0,081 ммоль) в CH2Cl2 (1,5 мл) и смесь перемешивали в течение 1,5 часов. Добавляли Et3N (100 мкл, 0,73 ммоль) и через 10 минут смесь нагревали до 0° С. Добавляли насыщенный водный раствор NH4Cl и смесь экстрагировали CH2Cl2 (3х). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Nа2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (30% EtOAc-гексаны) с получением кетона 313 (36,6 мг, 93%), который использовали непосредственно в следующей стадии.
Figure 00000134
Алкен 314. Реагент Теббе (~0,65 М в толуоле, 720 мкл, 0,47 ммоль) добавляли по каплям к раствору кетона 313 (151 мг, 0,31 ммоль) в ТГФ (5 мл) при 0° С. Спустя 5 минут осторожно добавляли H2O и смесь экстрагировали EtOAc (3х). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (10% EtOAc-гексаны) с получением алкена 314 (139 мг, 93%).
Figure 00000135
Спирт 315. 9-BBN (0,5 М в ТГФ, 6,0 мл, 2,9 ммоль) добавляли по каплям к раствору алкена 314 (468 мг, 0,97 ммоль) в ТГФ (10 мл) при 0° С. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов и в этот момент добавляли дополнительное количество 9-BBN (0,5 М в ТГФ, 500 мкл, 0,25 ммоль). Спустя 2,5 часа смесь охлаждали до 0° С и осторожно добавляли Н2O (10 мл) с последующим добавлением NaBO3· 4 Н2O (1,5 г, 9,7 ммоль). Смесь интенсивно перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов, разбавляли Н2О и экстрагировали EtOAc (3х). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (градиент 20%-30% EtOAc-гексаны) с получением спирта 315 (0,47 г, 97%).
Figure 00000136
Спирт 316. Оксалилхлорид (246 мкл, 2,82 ммоль) добавляли по каплям к раствору ДМСО (400 мкл, 5,64 ммоль) в CH2Cl2 (40 мл) при -78° С. Спустя 1 час добавляли раствор спирта 315 (0,47 г, 0,94 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл) и смесь перемешивали в течение 1 часа. Добавляли Еt3Н (1,2 мл, 8,5 ммоль) и спустя 10 минут смесь нагревали до 0° С и перемешивали в течение 10 минут. Добавляли насыщенный водный раствор NH4Cl и смесь экстрагировали CH2Cl2 (3х). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4 и концентрировали. Неочищенный альдегид перемешивали в СН2Сl2 (20 мл) и Et3N (2 мл) при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли насыщенный водный NH4Cl и смесь экстрагировали CH2Cl2 (3х). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (30% EtOAc-гексаны) с получением эпимеризованного альдегида, который сразу же растворяли в смеси 1:1 Et2O:EtOH (10 мл) и охлаждали до 0° С. Добавляли NaBH4 (35 мг, 0,94 ммоль) и спустя 10 минут реакцию гасили насыщенным водным раствором NH4Cl. Смесь экстрагировали EtOAc (3х) и объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (30% EtOAc-гексаны) с получением спирта 316 (0,410 г, 87% выход для 3 стадий).
Figure 00000137
Эфир 317. Спирт 316 (60,7 мг, 0,12 ммоль) и MPMOTCl (0,10 г, 0,36 ммоль) объединяли, азеотропно перегоняли из толуола (3х) и сушили под высоким вакуумом в течение ночи. Добавляли СН2Сl2 (3 мл) и смесь охлаждали до 0° С. Добавляли BF3· OEt2 (приблизительно 1 мкл, 0,01 ммоль) и после перемешивания в течение 10 минут реакцию гасили насыщенным водным раствором NH4Cl. Смесь экстрагировали СН2Сl2 (3х) и объединенные экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали препаративной ТСХ (30% EtOAc-гексаны) с получением эфира 317 (55,4 мг, 74%).
Figure 00000138
Спирт 318. LAH (1 M в ТГФ, 104 мкл, 0,104 ммоль) добавляли по каплям к раствору эфира 317 (54 мг, 0,087 ммоль) в Et2O (5 мл) при 0° С. Спустя 30 минут осторожно добавляли Н2O и 1 М NaOH. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут, фильтровали через стекловату, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (30%-50% EtOAc-гексаны) с получением спирта 318 (45,5 мг, 98%).
Figure 00000139
Альдегид 319. Оксалилхлорид (11 мкл, 0,13 ммоль) добавляли по каплям к раствору ДМСО (18 мкл, 0,25 ммоль) в CH2Cl2 (2 мл) при -78° С. Спустя 1,8 ч добавляли раствор спирта 318 (22,6 мг, 0,042 ммоль) в СН2Сl2 (1 мл) и смесь перемешивали в течение 1 часа. Добавляли Et3N (53 мкл, 0,38 ммоль) и спустя 10 минут реакцию нагревали до 0° С и перемешивали в течение 10 минут. Добавляли насыщенный водный NH4Cl и смесь экстрагировали СН2Сl2 (3х). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (20% EtOAc-гексаны) с получением альдегида 319 (21,7 мг, 97%).
Figure 00000140
B1933. Подобно тому, как описано в схеме 6 для синтеза В1794, промежуточное соединение 319 превращали в B1933. HRMS (FAB): рассчит. для С41Н57F3О11+Na 783,3931. Найдено: 783,3940.
Figure 00000141
B1942. Смесь B1897 (2 мг, 2,73 мкмоль), NaIO4 (35 мг, 0,16 ммоль), МеОН (0,8 мл) и H2O (0,2 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем реакционную смесь разбавляли H2O (3 мл) и экстрагировали СН2Сl2 (6х) и EtOAc (2x). Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4 и очищали колоночной хроматографией (5% МеОН-СН2Сl2) с получением целевого альдегида.
Этот материал растворяли в ТГФ (0,1 мл), охлаждали до 0° С и обрабатывали 0,5 С СF3ТМS в ТГФ (30 мкл, 15 ммоль) с последующим добавлением 0,05 М TBAF в ТГФ (5 мл, 0,025 ммоль). После перемешивания в течение 30 минут реакционную смесь разбавляли насыщенным водным раствором NаНСО3 (2 мл) и Н2О (1 мл), экстрагировали EtOAc (6х), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали с получением неочищенного бис-TMS-эфира.
Этот материал растворяли в ТГФ (0,5 мл) и обрабатывали 1 М TBAF в ТГФ, содержащем 0,5 М гидрохлорид имидазола (8 мкл, 8 мкмоль), при комнатной температуре в течение 30 минут.
Реакционную смесь элюировали через колонку SiO2 (50% EtOAc-гексаны - EtOAc) с получением диола в качестве промежуточного продукта.
Смесь этого продукта и периодинана Десса-Мартина (10 мг, 24 ммоль) в CH2Cl2 (0,5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа, разбавляли Et2O (5 мл) и фильтровали через целит. Фильтрат концентрировали и очищали препаративной ТСХ (50% EtOAc-гексаны) с получением В1942 (1,5 мг, 72% для 5 стадий). HRMS (FAB): рассчит. для С40Н55F3О11+Na 767,3516. Найдено: 767,3542.
Синтез В2070/В2073:
Figure 00000142
Спирт 401. Смесь NaIO4 (375 мг, 1,74 ммоль), X400 (674 мг, 1,58 ммоль), МеОН (16 мл) и Н2О (4 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После разбавления Н2О смесь экстрагировали CH2Cl2 (4х) и объединенные органические экстракты сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (30% EtOAc-гексаны) с получением альдегида в качестве промежуточного продукта (570 мг), который сразу же растворяли в ДМФ (15 мл). Добавляли индий (275 мг, 2,4 ммоль) и 3-бром-3,3-дифторпропен (240 мкл, 2,4 ммоль) и после перемешивания при комнатной температуре в течение 17 часов добавляли Н2О и 0,1 М НСl. Смесь экстрагировали EtOAc (3х) и объединенные органические экстракты промывали последовательно Н2О и солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (20%-30% EtOAc-гексаны) с получением спирта 401 в виде смеси 1:1 изомеров С34 (605 мг, 81% для двух стадий).
Figure 00000143
Диол 402. Смесь OsO4 (1 кристалл), спирта 401 (605 мг, 1,28 ммоль), N-оксида 4-метилморфолина (0,45 г, 3,84 ммоль), ацетона (30 мл) и Н2О (6 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 29 часов. Добавляли дополнительное количество OsO4 (3 кристалла) и N-оксида 4-метилморфолина (0,1 г, 0,8 ммоль) и спустя 2 дня добавляли насыщенный водный раствор Nа2S2О3. Смесь экстрагировали СН2Сl2 (6х) и объединенные органические экстракты сушили над Nа2SO4 и концентрировали. Неочищенный промежуточный продукт триол сразу же растворяли в смеси 4:1::МеОН:Н2O (25 мл) и добавляли NaIO4 (0,41 г, 1,9 ммоль). После энергичного перемешивания при комнатной температуре в течение 2 часов смесь разбавляли Н2O, экстрагировали СН2Сl2 (3х) и объединенные органические экстракты сушили над Na2SO4 и концентрировали с получением альдегида в качестве промежуточного продукта, который сразу же растворяли в смеси 1:1 EtOH-Et2O (30 мл) и охлаждали до 0° С. Добавляли NaBH4 (48 мг, 1,3 ммоль) и спустя 20 минут реакцию гасили Н2O и экстрагировали СН2Сl2 (4х). Объединенные органические экстракты сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (50% EtOAc-гексаны) с получением диола 402 (485 мг, 80% для 3 стадий).
Figure 00000144
Силиловый эфир 403. TBSOTf (2,3 мл, 10 ммоль) добавляли по каплям к смеси диола 402 (485 мг, 1,0 ммоль), Et3N (2,8 мл, 20 ммоль) и СН2Сl2 (30 мл) при 0° С. После перемешивания в течение 1 часа при комнатной температуре добавляли насыщенный водный NH4Cl и смесь экстрагировали CH2Cl2 (3х). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (20% EtOAc-гексаны) с получением силилового эфира 403 (668 мг, 95%).
Figure 00000145
Спирт 404. LAH (1 М в ТГФ, 2,8 мкл, 2,8 ммоль) добавляли по каплям к раствору силилового эфира 403 (668 мг, 0,948 ммоль) в Et2O (60 мл) при 0° С. Спустя 15 минут осторожно добавляли H2O и 1 М NaOH. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут, фильтровали через стекловату, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (30% EtOAc-гексаны) с получением спирта 404 (500 мг, 85%).
Figure 00000146
Альдегид 405. Оксалилхлорид (210 мкл, 2,42 ммоль) добавляли по каплям к раствору ДМСО (345 мкл, 4,84 ммоль) в CH2Cl2 (30 мл) при -78° С. Спустя 1 час добавляли раствор спирта 404 (500 мг, 0,806 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл). Спустя 40 минут добавляли Et3N (1,0 мл, 7,2 ммоль). После перемешивания при -78° С в течение 10 минут реакционную смесь нагревали до 0° С и перемешивали еще в течение 10 минут. Добавляли насыщенный водный NH4Cl и смесь экстрагировали СН2Сl2 (3х). Объединенные органические экстракты промывали последовательно Н2О, солевым раствором, сушили над Na2SO4 и концентрировали. Очистка флэш-хроматографией (30% EtOAc-гексаны) давала альдегид 405 (486 мг, 98%), который сразу же использовали в следующей стадии.
Figure 00000147
Алкен 406. HBuLi (1,63 М, 860 мкл, 1,4 ммоль) добавляли по каплям к раствору СН3РРh3Вr (500 мг, 1,4 ммоль) в ТГФ (15 мл) и ДМСО (6 мл) при 0° С. Спустя 1 час добавляли раствор альдегида 405 (486 мг) в ТГФ (15 мл). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 30 минут. Добавляли насыщенный водный NH4Cl, смесь экстрагировали EtOAc (3х) и объединенные органические экстракты промывали последовательно Н2O и солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (20% EtOAc-гексаны) с получением алкена 406 (450 мг, 93%).
Figure 00000148
Сложный эфир 407. 9-BBN (0,5 М в ТГФ, 9,0 мл, 4,5 ммоль) добавляли по каплям к раствору алкена 406 (0,460 г, 0,746 ммоль) в ТГФ (10 мл) при 0° С. После нагревания до комнатной температуры смесь перемешивали в течение 3 часов и добавляли дополнительные порции 9-BBN (0,5 М в ТГФ, 3,0 мл, 1,5 ммоль) с интервалами 30 минут. Реакционную смесь вновь охлаждали до 0° С, после чего осторожно добавляли ТГФ (10 мл), Н2O (10 мл) и NаВО3· 4 Н2O (1,72 г, 11,2 ммоль). Смесь интенсивно перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 часов и добавляли дополнительно NaBO3· 4 H2O (1,0 г, 6,5 ммоль). Спустя 2 часа смесь разбавляли H2O и экстрагировали EtOAc (3х). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (20%-30% EtOAc-гексаны) с получением спирта в качестве промежуточного продукта (509 мг), который немедленно растворяли в СН2Сl2 (10 мл) и обрабатывали пиридином (600 мкл, 7,5 ммоль) и PvCl (275 мкл, 2,2 ммоль). Спустя 6 часов добавляли насыщенный водный раствор NH4Cl и смесь экстрагировали СН3Сl2 (3х). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (20%-30% EtOAc-гексаны) с получением эфира 407 (423 мг, 79% для 2 стадий).
Figure 00000149
Спирт 408. Смесь сложного эфира 407 (11 мг, 0,015 ммоль) и Pd(OH)2/C (10 мг) в EtOAc (500 мкл) интенсивно перемешивали в атмосфере H2 при комнатной температуре в течение 6 часов. Смесь фильтровали через целит, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (30% EtOAc-гексаны) с получением спирта 408 (9,4 мг, выход количественный).
Figure 00000150
Алкен 409. Оксалилхлорид (7 мкл, 0,075 ммоль) добавляли по каплям к раствору ДМСО (11 мкл, 0,15 ммоль) в СН2Сl2 (2 мл) при -78° С в атмосфере азота. Спустя 40 минут добавляли раствор спирта 408 (15,2 мг, 0,025 ммоль) в CH2Cl2 (1 мл) и реакцию перемешивали при -78° С в течение 1 часа. Добавляли Et3N (31 мкл, 0,22 ммоль) и после перемешивания в течение 10 минут смесь нагревали до 0° С. Спустя 10 минут реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором NH4Cl и экстрагировали CH2Cl2 (3х). Объединенные экстракты промывали последовательно Н2О и солевым раствором, сушили над Na2SO4 и концентрировали. После флэш-хроматографии (30% EtOAc-гексаны) промежуточный кетон (13 мг) сразу же растворяли в ТГФ (500 мкл) и обрабатывали реагентом Теббе (~0,65 М в толуоле, 62 мкл, 0,040 ммоль) при 0° С. Спустя 1,5 часа добавляли дополнительное количество реагента Теббе (~0,65 М в толуоле, 62 мкл, 0,040 ммоль) и спустя 10 минут осторожно добавляли Н2O и затем солевой раствор. Смесь экстрагировали EtOAc (3х) и объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (10% EtOAc-гексаны) с получением алкена 409 (11,9 мг, 80% для 2 стадий).
Figure 00000151
Спирт 410. 9-BBN (0,5 М в ТГФ, 1,5 мл, 0,72 ммоль) добавляли по каплям к раствору алкена 409 (0,144 г, 0,242 ммоль) в ТГФ (2 мл) при 0° С. После нагревания до комнатной температуры смесь перемешивали в течение 3 часов. Реакционную смесь повторно охлаждали до 0° С, после чего осторожно добавляли ТГФ (2 мл), Н2O (2 мл) и NаВО3· 4 Н2О (0,38 г, 2,4 ммоль). Смесь интенсивно перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов, разбавляли Н2О и экстрагировали EtOAc (3х). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Nа2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (20% EtOAc-гексаны) с получением спирта 410 (0,140 г, 94%).
Figure 00000152
Спирт 411. Оксалилхлорид (26 мкл, 0,30 мл) добавляли по каплям к раствору ДМСО (43 мкл, 0,60 ммоль) в CH2Cl2 (4 мл) при -78° С. Спустя 1 час добавляли раствор спирта 410 (57 мг, 0,093 ммоль) в СН2Сl2 (2 мл). Спустя 45 минут добавляли Et3N (125 мкл, 0,90 ммоль). После перемешивания при -78° С в течение 10 минут реакционную смесь нагревали до 0° С и перемешивали в течение еще 10 минут. Добавляли насыщенный водный NH4Cl и смесь экстрагировали CH2Cl2 (3х). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4 и концентрировали. Неочищенный продукт растворяли в СН2Сl2 (4 мл), обрабатывали Et3N (400 мкл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. Добавляли насыщенный водный раствор NH4Cl и смесь экстрагировали СН2Сl2 (3х).
Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (30% EtOAc-гексаны) с получением альдегида в качестве промежуточного продукта (48 мг), который сразу же растворяли в смеси 1:1 Et2O/EtOH (4 мл), охлаждали до 0° С и обрабатывали твердым NaBH4 (~4 мг, 0,09 ммоль). После перемешивания в течение 15 минут осторожно добавляли насыщенный водный раствор NH4Cl и смесь экстрагировали EtOAc (3х). Объединенные экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (20%-30% EtOAc-гексаны) с получением спирта 411 (45,6 мг, 80% для 3 стадий).
Figure 00000153
412А и 412В. Спирт 411 (120 мг, 0,196 ммоль) и МРМОТСl (0,17 г, 0,59 ммоль) объединяли, азеотропно перегоняли из толуола (3х) и сушили под высоким вакуумом в течение 1 часа. Добавляли CH2Cl2 (9 мл) и смесь охлаждали до 0° С. Добавляли по каплям BF3· OEt2 (0,016 М в СН2Сl2, 125 мкл, 0,002 ммоль) и после перемешивания в течение 20 минут реакцию гасили насыщенным водным раствором NH4Cl. Смесь экстрагировали СН2Сl2 (3х) и объединенные экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали препаративной ТСХ (20% EtOAc-гексаны) с получением МРМ-эфира в качестве промежуточного продукта, который содержал некоторое количество близко идущих примесей. Этот материал сразу же растворяли в Et2O (10 мл) и обрабатывали LAH (1 М в ТГФ, 300 мкл, 0,300 ммоль) при 0° С. Спустя 10 минут добавляли Н2О и 1 М NaOH и после перемешивания в течение 10 минут при комнатной температуре смесь фильтровали через целит, концентрировали и очищали препаративной ТСХ (35% EtOAc-гексаны) с получением 412А (49 мг, 39% для 2 стадий) в виде единственного изомера С34 и 412В (46 мг, 36% для 2 стадий) в виде смеси ~9:1 изомеров С34.
Figure 00000154
В2070 и В2073. Подобно тому, как описано в схемах 4 и 6 для синтеза В1794, промежуточные продукты 412А и 412В превращали в В2070 и В2073, соответственно. Для В2070: HRMS (FAB): рассчит. для C41H58F2O12+Na 803,3794. Найдено: 803,3801. Для В2073: HRMS (FAB): рассчит. для С41Н58F2О12+Na 803,3793. Найдено: 803,3781.
Синтез В1963:
Figure 00000155
Диол 501 (64). Насыщенный водный NаНСО3 (21 мл) и КВr (89 мг, 0,75 ммоль) добавляли к раствору диола 10 (1,35 г, 3,4 ммоль) в СН2Сl2 (34 мл). Смесь охлаждали до 0° С и добавляли последовательно 4-метокси-2,2,6,6-тетраметил-1-пиперидинилокси (0,05 М в СН2Сl2, 7,45 мл, 0,37 ммоль) и NaOCl (0,07 М в Н2O, 5,6 мл, 0,39 ммоль). Спустя 1 час реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором Na2S2O3, разбавляли насыщенным водным раствором NаНСО3 и экстрагировали СН2Сl2 (3х). Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, концентрировали и растворяли в ТГФ (21 мл).
После охлаждения до 0° С последовательно добавляли СF3ТМS (1,5 г, 10,5 ммоль) и TBAF (0,1 М в ТГФ, 680 мкл, 0,068 ммоль). После перемешивания в течение 40 минут добавляли дополнительное количество TBAF (1 М в ТГФ, 8,3 мл, 8,3 ммоль). Спустя 30 минут реакцию гасили Н2O и экстрагировали EtOAc (3х). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (30%, 40%, 50% EtOAc-гексаны, затем EtOAc) с получением смеси 2:1 диолов (553 мг, 35%). Разделение при помощи жидкостной хроматографии среднего давления (1,5% MeOH-CH2Cl2) давало основной, более полярный изомер 501 (64) (340 мг, 22%) и дополнительный, менее полярный изомер (152 мг, 10%).
Figure 00000156
В1963. Подобно тому, как описано в схемах 4 и 6 для синтеза В1794, промежуточное соединение 501 превращали в В1963.
Синтез В2320 и родственных аналогов
Figure 00000157
Эти соединения получают обработкой В2294 подходящим амином в растворителе, таком как метанол, в течение периода нескольких часов - нескольких дней. Ход реакции может наблюдаться при помощи тонкослойной хроматографии. Стандартная процедура обработки, хорошо известная специалистам в данной области, дает целевые соединения. Ниже описана процедура для получения ER803868; однако эта процедура является общей и может быть использована для получения любого целевого аналога.
Синтез ER803868
К раствору В2294, 1,2 мг, в метаноле, 0,5 мл, добавляли морфолин, 0,012 мл. Смесь перемешивали в течение 10 дней с добавлением дополнительных количеств морфолина, 0,012 мл, в дни 1, 2, 3, 4 и 8. Затем смесь хроматографировали с получением 1,4 мг целевого соединения.
Figure 00000158
B2320 R=N,N-диметиламино
B2330 R=N-изопропиламино
B2336 R=N-метиламино
B2339 R=N-трет-бутиламино
B2417 R=N-2-гидроксиэтиламино
B2418 R=N-пиперазинил
B2489 R=N,N-бис-(2-гидроксиэтил)амино
B2490 R=N-1,3-дигидрокси-2-пропиламино
B2491 R=N-бензиламино
ER803834 R=N-пиперидинил
ER803835 R=N-пирролидинил
ER803836 R=N-3-(R)-гидроксипирролидинил
ER803843 R=N-гомопиперидинил
ER803845 R=N-пара-метоксибензиламино
ER803846 R=N-фенетиламино
ER803851 R=N-2-(S-гидроксиметил)пирролидинил
ER803852 R=N-2-(R-гидроксиметил)пирролидинил
ER803868 R=N-морфолинил
ER803869 R=N-этиламино
ER803870 R=N-имидазоил
ER803883 R=N,N-диэтиламино
ER803884 R=N-пара-хлорбензиламино
D. Фармакологическая активность
Многие из отдельно описанных лекарственных средств испытывали на активность in vitro и in vivo (см. таблицу 1). Способы скрининга включали в себя стандартный тест ингибирования роста клеток in vitro с использованием клеток рака ободочной кишки человека DLD-1 (номер доступа АТСС CCL 221) в формате 96-луночного титрационного микропланшета (Finlay, G.J. et al., Analytical Biochemistry 139:272-277, 1984), тест обратимости митотического блокирования с использованием U937 (номер доступа АТСС CRL 1593) (описанный ниже), и в некоторых случаях, тест ингибирования роста in vivo с использованием ксенотрансплантата опухоли меланомы человека LOX (см. таблицу 1). Испытывали также химическую стабильность к разложению эстеразой.
Тест обратимости митотического блокирования U937
Гистиоцитные лимфомные клетки человека U937 добавляли в колбы с 75 см2 культуры ткани в количестве 2,5× 106 клеток в 22,5 мл среды RPMI 1640, содержащей 10% фетальную телячью сыворотку. Клеткам давали адаптироваться к культуре в течение 36 часов инкубирования при 37° C в увлажненной атмосфере, содержащей 5% CO2. Затем в колбу добавляли каждое испытуемое лекарственное средство в количестве 2,5 мл 10x-конечной концентрации. Полученные конечные концентрации составляли 0,1-1000 нМ, при полулогарифмических приращениях для 10 ступеней концентраций в целом, включая не содержащую лекарственного средства контрольную колбу, в которую добавляли 2,5 мл среды. Клетки инкубировали с лекарственным средством в течение 12 часов периода предобработки при 37° С в увлажненной атмосфере, содержащей 5% СO2.
Содержимое удаляли из каждой колбы и центрифугировали при 300× g в течение 10 минут при комнатной температуре, после чего содержащую лекарственное средство среду удаляли из осадка клеток. Клетки ресуспендировали в 25 мл теплой не содержащей лекарственного средства среды и центрифугировали при 300× g в течение 10 минут при комнатной температуре. После удаления среды из осадка клеток клетки ресуспендировали в 35 мл теплой не содержащей лекарственного средства среды, переносили в свежие колбы и пробу клеток в 10 мл брали сразу же из каждой колбы, немедленно обрабатывали, как описано ниже, и хранили для последующего анализа клеточного цикла (0 часов после вымывания лекарственного средства).
Инкубирование оставшихся 25 мл клеток продолжали в не содержащей лекарственного средства среде в течение следующих 10 часов. Пробу 10 мл клеток брали из каждой колбы, немедленно обрабатывали и хранили для последующего анализа клеточного цикла (10 часов после вымывания лекарственного средства), и добавляли свежую замещающую среду в каждую инкубационную колбу. Инкубирование клеток в не содержащей лекарственного средства среде продолжали в течение 5 дней. В день 2 из каждой колбы брали 20 мл среды и клеток и заменяли на 20 мл свежей среды. Жизнеспособность клеток определяли количественно через 5 дней согласно способу вытеснения трипанового синего с использованием счета клеток при помощи гемоцитометра.
Клетки обрабатывали для анализа клеточного цикла с использованием модификаций способа, опубликованного в Becton Dickinson Immunocytometry Systems source book section 1.11 (Preparation of Alcohol-Fixed Whole Cells From Suspensions For DNA Analysis). Вкратце, каждую пробу 10 мл клеток, взятых из колб в моменты времени 0 и 10 часов после вымывания лекарственного средства, отдельно центрифугировали при 300× g в течение 10 минут. После удаления среды из осадка клеток клетки ресуспендировали в 3 мл холодного солевого раствора. Семь миллилитров холодного 100% этанола медленно добавляли при энергичном перемешивании вортексом. Обработанные этанолом пробы клеток из 0-часового и 10-часового периодов после вымывания соединения выдерживали в течение ночи при 4° С. Обработанные этанолом клетки центрифугировали при 300× g в течение 10 минут, этанол удаляли и затем клетки промывали в 10 мл забуференного фосфатом солевого раствора (ЗФР). Клетки ресуспендировали в 0,5 мл 0,2 мг/мл рибонуклеазы A (Sigma № R-5503) в ЗФР и инкубировали в водяной бане 37° С в течение 30 минут.
Клетки переносили в подходящие пробирки для проточной цитометрии и в каждую пробирку добавляли 0,5 мл 10 мг/мл пропидийиодида (PI) (Sigma № P-4170) в ЗФР. Клетки инкубировали с PI при комнатной температуре в темноте в течение по меньшей мере 15 минут перед анализом с использованием проточного цитометра (Becton Dickinson FACScan flow cytometer (клеточного сортера с возбуждением флуоресценции или равноценного прибора)). Клетки должны анализироваться в пределах часа и храниться в темноте при 4° С до использования. Анализ клеточного цикла выполняли на клетках 0 часов и 10 часов с использованием проточно-цитометрического измерения интенсивности клеточной флуоресценции. Интенсивность флуоресценции пропидийиодида для каждой клетки измеряли в шкале линейного усиления, причем дублетные события игнорировались посредством дискриминации дублетов. Результаты, полученные из анализа 15000 клеток, представлены в виде гистограммы с увеличивающейся интенсивностью флуоресценции на оси х и числом клеток при конкретном уровне интенсивности на оси у.
Интенсивность PI-окрашивания зависит от количества ДНК в клетке, так что можно идентифицировать клетки в различных фазах клеточного цикла, как, например, клетки, которые еще не синтезировали ДНК с момента последнего митоза (G1-фаза), клетки, которые находятся в промежуточных стадиях синтеза ДНК (S-фаза), и клетки, которые удвоили их комплемент ДНК и готовы к делению (G2-фаза). Клетки, которые блокированы в фазе митоза клеточного цикла, также имеют удвоенное количество ДНК в сравнении с клетками G1-фазы. Если все клетки блокированы в митозе, то нет клеток G1-фазы, но если блок удаляется при удалении соединения, клетки завершают митоз и повторно появляются в G1-фазе. Таким образом, число клеток, повторно появляющихся таким путем в G1- или S-фазе, является мерой числа клеток, которые недавно завершили митоз. Для каждой пробы при 0 и 10 часах после удаления соединения процент клеток, завершивших митоз, определяли количественно (как число клеток, повторно появляющихся в G1-фазе) и строили график как функцию начальной концентрации соединения, применяемой во время 12-часового периода предобработки. Процент клеток, все еще жизнеспособных через 5 дней после вымывания лекарственного средства, накладывали на тот же график. Можно было определить отношение между концентрацией соединения, требующейся для полного блокирования всех клеток в митозе в момент 0 часов, и концентрацией, требующейся для сохранения этого блокирования через 10 часов после удаления соединения. Это отношение было взято за меру обратимости соединения, причем отношения, близкие к единице или равные единице, указывают на соединения, вероятно являющиеся сильно действующими in vivo противоопухолевыми средствами (см. таблицу 1, столбцы 4-6).
Figure 00000159
Figure 00000160
Figure 00000161
В данном изобретении описан также способ идентификации агента, который индуцирует продолжительное митотическое блокирование в клетке после временного экспонирования клетки с этим агентом. В данном изобретении описано определение относительной обратимости испытуемых соединений путем соотнесения измерения стадии (d) и измерения стадии (f), как описано ниже. Это определение может быть, например, отношением или арифметической разностью. В одном аспекте этот способ предусматривает:
(а) инкубирование первой пробы клеток с заданной концентрацией испытуемого соединения в течение интервала времени между интервалом, достаточным для истощения G1-популяции, и интервалом, который эквивалентен одному клеточному циклу (например, в типичном случае, 8-16 часов или около 12 часов);
(b) практически полное отделение испытуемого соединения от указанной первой пробы клеток (например, промыванием или заменой среды);
(c) инкубирование указанной первой пробы клеток в среде, не содержащей испытуемого соединения, в течение интервала времени, достаточного, чтобы дать возможность по меньшей мере 80% (например, 85%, 90% и предпочтительно 95%, 98% или 99%) клеток, освобожденных от индуцированного высокообратимым митотическим ингибитором митотического блокирования, завершить митоз и вернуться к G1-фазе (например, в типичном случае, 6-14 часов или около 10 часов после стадии отделения (b); и
(d) измерение процента временно экспонированных клеток со стадии (с), которые завершили митоз и вернулись в G1-фазу (например, измерением маркера клеточного цикла, такого как ДНК-зависимая PI-флуоресценция).
В одном аспекте этот способ скрининга включает в себя дополнительные стадии:
(e) инкубирование второй пробы клеток с концентрацией испытуемого соединения, меньшей, чем концентрация, используемая на стадии (а), или равной этой концентрации, в течение интервала времени между интервалом, достаточным для истощения G1-популяции, и интервалом, который эквивалентен одному клеточному циклу;
(f) измерение процента клеток со стадии (е), которые завершили митоз и вернулись к G1-фазе; и
(g) определение коэффициента обратимости испытуемого соединения.
В одном варианте этого способа первая и вторая пробы клеток являются клетками суспензионной культуры, выбранными, например, из клеток лейкоза человека, лимфомы человека, мышиного лейкоза и мышиной лимфомы. Первая и вторая пробы клеток могут инкубироваться одновременно (стадии (а) и (е)) или в отдельных порциях. Другие варианты дополнительно включают в себя перед стадией (а) стадию (i) определения желательного интервала времени для инкубирования указанной первой пробы клеток с обратимым агентом митотического блокирования (или, альтернативно, указанным испытуемым соединением) для обеспечения удовлетворительного большинства клеток, собранных при митотическом блокировании; причем инкубирование согласно стадии (а) проводят в течение интервала времени, определенного на стадии (i). Другой вариант этого способа дополнительно включает в себя перед стадией (с) стадию (ii) определения желательного интервала времени для инкубирования без испытуемого соединения согласно стадии (с), где указанная стадия (ii) предусматривает определение интервала времени, после которого по меньшей мере 80% клеток, предобработанных высокообратимым антимитотическим агентом, завершают митоз и вновь вступают в G1-фазу; причем инкубирование согласно стадии (с) проводят в течение интервала времени, определенного на стадии (ii). В другом варианте этого способа используют клетки несуспензионной культуры, например, из прикрепленных к субстрату клеток рака человека или мышей, собранных любыми подходящими средствами для отделения их из колб для культуры структивные пути, препятствуют продолжительному экспонированию. Эффективность относительно обратимых антимитотических агентов может зависеть от периода поддерживаемого экспонирования.
Ввиду высокой стоимости разработки фармацевтических веществ, экономические выгоды определения коэффициентов обратимости, описанного выше, являются значительными. Вышеописанные способы могут быть использованы, например для предсказания, будет ли испытуемое соединение с хорошей активностью in vitro эффективным in vivo, например, в клиническом испытании. Это показано, например, сопоставлением данных для двух известных соединений, относительно необратимого антимитотического агента винкристина и высокообратимого антимитотического агента винбластина(см. табл.2)
Figure 00000162
Анализы антимитотических лекарственных средств винбластина и винкристина в тесте обратимости митотического блокирования с U937 показывают, что, несмотря на идентичную эффективность в индуцировании начального митотического блокирования (значения для 0 часов), способность этих двух лекарственных средств индуцировать митотическое блокирование, которое поддерживается 10 часов после вымывания лекарственных средств (значения для 10 часов), весьма различаются: винкристин индуцирует необратимое митотическое блокирование, тогда как блокирование, индуцированное винбластином, является высокообратимым.
Анализы in vivo противораковой активности антимитотических лекарственных средств винбластина и винкристина против трансплантатов рака ободочной кишки человека COLO 205, выращиваемых подкожно в (голых) мышах с ослабленным иммунитетом, показывают, что при эквивалентных дозах 1 мг/кг винкристин обнаруживает значительную ингибирующую рост раковой опухоли активность, тогда как винбластин является неактивным. В более низкой дозе 0,3 мг/кг винкристин все еще дает умеренное ингибирование роста, тогда как винбластин опять является неактивным. Более высокая активность in vivo винкристина коррелирует с его необратимостью в сравнении с высокой обратимостью винбластина.
Е. Применение
Описанные соединения обладают фармакологической активностью, в том числе противораковой и антимитотической активностью, как показано в разделе D выше. Примеры опухолей включают в себя меланому, фибросаркому, моноцитарный лейкоз, рак ободочной кишки, рак яичников, рак молочной железы, остеосаркому, рак предстательной железы, рак легких и ras-трансформированные фибробласты.
Данное изобретение описывает фармацевтические композиции, которые включают в себя соединение формулы (I) и фармацевтически приемлемый носитель. Композиции могут также содержать комбинацию описанных соединений или комбинацию одного или нескольких описанных соединений и другие фармацевтически активные агенты, такие как противоопухолевый агент, иммуностимулирующий агент, интерферон, цитокин, анти-MDR-агент или ингибирующий ангиогенез агент. Композиции могут быть приготовлены для перорального, местного, парентерального, внутривенного или внутримышечного введения или введения посредством инъекции или ингаляции. Композиции могут быть также приготовлены для регулируемого высвобождения, в том числе в виде трансдермальных пластырей.
Способ ингибирования роста опухолей у пациента включает в себя стадию введения пациенту эффективного противоопухолевого количества описанных соединения или композиции. Данное изобретение рассматривает также комбинированные терапии, в том числе способы совместного введения соединения формулы (I) до, во время или после введения другого фармацевтически активного агента. Способы введения могут быть одинаковыми или различными. Ингибирование опухолевого роста включает в себя рост клетки или ткани, экспонированной испытуемым соединением, который является, по меньшей мере, на 20% и предпочтительно на 30%, 50% или 75% меньшим, чем рост контроля (в отсутствие известного ингибитора или испытуемого соединения).
Другие варианты
Основные признаки данного изобретения могут быть легко поняты из приведенного выше описания и прилагаемой ниже формулы изобретения. На основании всего описания, могут быть разработаны и приспособлены к конкретным условиям варианты описанных соединений и способов без отхода от сути и объема формулы изобретения и описания. Ссылки и публикации, описанные здесь, включены тем самым во всей их полноте.
Figure 00000163

Claims (21)

1. Макроциклическое соединение, имеющее формулу
Figure 00000164
где А обозначает C1-6 насыщенный или С2-6 ненасыщенный углеводородный скелет, причем указанный скелет является незамещенным или имеет от 1 до 10 заместителей включительно, независимо выбранных из циано, галогена, азидо, оксо и Q1;
каждый Q1 независимо выбран из OR1, SR1, SO2R1, OSO2R1, NR2R1, NR2(CO)R1, NR2(CO)(CO)R1, NR4(CO)NR2R1, NR2(CO)OR1, (CO)OR1, O(CO)R1, (CO)NR2R1 и O(CO)NR2R1;
каждый из R1, R2, R4, R5 и R6 независимо выбран из Н, C1-6алкила, C1-6галогеналкила, C1-6гидроксиалкила, C1-6аминоалкила, С6-10арила, С6-10галогенарила, С6-10гидроксиарила, C1-3алкокси-С6-арила, С6-10арил-С1-6алкила, C1-6алкил-С6-10арила, C6-10галогенарил-C1-6алкила, C1-6алкил-С6-10галогенарила, (C1-3алкокси-С6-арил)-C1-3алкила, С2-9 гетероциклического радикала, (С2-9 гетероциклический радикал)-C1-6алкила, С2-9гетероарила и С2-9гетероарил-C1-6алкила;
каждый из D и D' независимо выбран из R3 и ОR3, где R3 обозначает Н, C1-3алкил или C1-3галогеналкил;
n равно 0 или 1;
Е обозначает R5 или OR5;
G обозначает О или S;
каждый из J и J' обозначает независимо Н, С1-6алкокси или С1-6алкил; или J и J', взятые вместе, представляют собой =СН2 или -О- (прямой или разветвленный С1-5алкилен) -О-;
Q обозначает C1-3алкил;
Т обозначает этилен или этенилен, необязательно замещенный (СО)OR-, где R7 обозначает Н или C1-6алкил;
каждый из U и U’ обозначает независимо Н, С1-6алкокси или C1-6алкил; или U и U’, взятые вместе, обозначают =СН2 или -О- (прямой или разветвленный С1-5алкилен) -О-;
Х обозначает Н или C1-6алкокси;
каждый из Y и Y’ обозначает независимо Н или C1-6алкокси; или Y и Y’, взятые вместе, обозначают =O, =СН2 или -О- (прямой или разветвленный C1-5алкилен) -О-;
каждый из Z и Z' обозначает независимо Н или C1-6алкокси; или Z и Z', взятые вместе, обозначают =O, =СН2 или -О- (прямой или разветвленный С1-5алкилен) -О-;
или его фармацевтически приемлемая соль.
2. Соединение по п.1, где n равно 0.
3. Соединение по п.1, где каждый из D и D' независимо выбран из R3, С1-3алкокси и C1-3галогеналкилокси.
4. Соединение по п.1, где R5 выбран из Н, C1-6алкила, C1-6галогеналкила, C1-6гидроксиалкила, C1-6аминоалкила, С6-10арила, С6-10галогенарила, С6-10гидроксиарила, C1-3алкокси-С6-арила, С6-10арил-С1-6алкила, C1-6алкил-С6-10-арила, С6-10галогенарил-C1-6алкила, C1-6алкил-С6-10галогенарила, (C1-3алкокси-С6арил)-C1-3алкила, С2-9гетероциклического радикала, (С2-9гетероциклический радикал) -С1-6алкила, С2-9гетероарила и С2-9гетероарил-С1-6алкила.
5. Соединение по п.1, где А содержит C1-6 насыщенный или С2-6 ненасыщенный углеводородный скелет, причем указанный скелет имеет, по меньшей мере, один заместитель, выбранный из циано, галогена, азидо, оксо и Q1;
каждый Q1 независимо выбран из OR1, SR1, SO2R1, OSО2R1, NR2R1, NR2(CO)R1 и О (CO) NR2R1;
n равно 0;
G равно O;
J и J', взятые вместе, представляют собой =СН2;
Q представляет собой метил;
Т представляет собой этилен;
U и U', взятые вместе, представляют собой =CH2;
Х представляет собой Н;
каждый из Y и Y' представляет собой Н и
Z и Z', взятые вместе, представляют собой =О или =СН2.
6. Соединение по п.1, где каждый Q1 независимо выбран из OR1, SR1, SO2R1, OSО2R1, NH (CO) R1, NH (CO) (CO) R1 и О (CO) NHR1;
каждый R1 независимо выбран из C1-6алкила, C1-6галогеналкила, С6арила, С6галогенарила, C1-3алкокси-С6арила, С6арил-С1-3алкила, C1-3алкил-С6арила, С6галогенарил-С1-3алкила, C1-3алкил-С6галогенарила, (C1-3алкокси-С6арил)-C1-3алкила, С2-9гетероциклического радикала, С2-9гетероарила и С2-9гетероарил-C1-6алкила;
один из D и D' представляет собой метил или метокси, а другой представляет собой Н;
n равно 0;
G представляет собой О;
J и J', взятые вместе, представляют собой =СН2;
Q представляет собой метил;
Т представляет собой этилен;
U и U', взятые вместе, представляют собой =СН2;
Х представляет собой Н;
каждый из Y и Y’ представляет собой Н и
Z и Z', взятые вместе, представляют собой =O.
7. Соединение по п.6, где А имеет, по меньшей мере, один заместитель, выбранный из гидроксила, амино, азидо, галогена и оксо.
8. Соединение по п.7, где А содержит насыщенный углеводородный скелет, имеющий, по меньшей мере, один заместитель, выбранный из гидроксила, амино и азидо.
9. Соединение по п.8, где А имеет, по меньшей мере, два заместителя, независимо выбранных из гидроксила, амино и азидо.
10. Соединение по п.8, где А имеет, по меньшей мере, два заместителя, независимо выбранных из гидроксила и амино.
11. Соединение по п.8, где А имеет, по меньшей мере, один гидроксильный заместитель и по меньшей мере один аминозаместитель.
12. Соединение по п.8, где А имеет, по меньшей мере, два гидроксильных заместителя.
13. Соединение по п.8, где А содержит C2-4 углеводородный скелет.
14. Соединение по п.8, где А содержит С3 углеводородный скелет.
15. Соединение по п.13, где А имеет (S) -гидроксил на альфа-атоме углерода относительно атома углерода, связывающего А с кольцом, содержащим G.
16. Соединение по п.6, где А содержит С1-6-насыщенный углеводородный скелет, имеющий, по меньшей мере, один заместитель, выбранный из гидроксила и циано.
17. Соединение по п.6, где Q1 независимо выбран из OR1, SR1, SO2R1 и OSO2R1, где каждый R1 независимо выбран из C1-6алкила, C1-6галогеналкила, С6арила, С6галогенарила, C1-3алкокси-С6арила, С6арил-С1-3алкила, C1-3алкил-С6арила, С6галогенарил-C1-3алкила, С1-3алкил-С6галогенарила и (C1-3алкокси-С6арил)-C1-3алкила.
18. Соединение по п.1 следующей структуры:
Figure 00000165
19. Соединение по п.1 следующей структуры:
Figure 00000166
и его фармацевтически приемлемые соли.
20. Способ идентификации агента, который индуцирует продолжительный митотический блок в клетке после временного воздействия на указанную клетку указанным агентом, предусматривающий стадии:
(a) инкубирования первой пробы клеток с заданной концентрацией соединения по п.1 в течение интервала времени между интервалом, достаточным для истощения G1-популяции, и интервалом, который эквивалентен одному клеточному циклу;
(b) практически полного выделения указанного соединения из указанной первой пробы клеток;
(c) инкубирования указанной первой пробы клеток в среде, не содержащей указанного соединения, в течение интервала времени, достаточного, чтобы позволить по меньшей мере 80% клеток, освобожденных от митотического блока, индуцированного высокообратимым митотическим ингибитором, завершить митоз и вернуться в G1-фазу; и
(d) измерения процента временно экспонированных клеток со стадии (с), которые завершили митоз и вернулись в G1-фазу.
21. Способ по п.20, дополнительно предусматривающий стадии:
(e) инкубирования второй пробы клеток с концентрацией указанного соединения, меньшей, чем концентрация, используемая на стадии (а), или равной этой концентрации, в течение интервала времени между интервалом, достаточным для истощения G1-популяции, и интервалом, который эквивалентен одному клеточному циклу;
(f) измерения процента клеток со стадии (е), которые завершили митоз и вернулись в G1-фазу; и
g) определения относительной обратимости указанного соединения путем соотнесения измерения стадии (d) и измерения стадии (f).
RU2001101559/04A 1998-06-17 1999-06-16 Макроциклическое соединение и способ идентификации агента на его основе RU2245335C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US8968298P 1998-06-17 1998-06-17
US60/089,682 1998-06-17

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2001101559A RU2001101559A (ru) 2003-02-10
RU2245335C2 true RU2245335C2 (ru) 2005-01-27

Family

ID=22219026

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2001101559/04A RU2245335C2 (ru) 1998-06-17 1999-06-16 Макроциклическое соединение и способ идентификации агента на его основе

Country Status (24)

Country Link
US (4) US6214865B1 (ru)
EP (4) EP2272840B1 (ru)
JP (1) JP4454151B2 (ru)
KR (1) KR100798600B1 (ru)
CN (1) CN1216051C (ru)
AT (1) ATE502932T1 (ru)
AU (1) AU762998B2 (ru)
BE (1) BE2011C028I2 (ru)
BR (1) BRPI9911326B8 (ru)
CA (3) CA2335300C (ru)
CY (2) CY1111516T1 (ru)
DE (2) DE69943296D1 (ru)
DK (1) DK1087960T3 (ru)
FR (1) FR11C0038I2 (ru)
HK (1) HK1035534A1 (ru)
HU (1) HU227912B1 (ru)
IL (1) IL139960A0 (ru)
LU (1) LU91854I2 (ru)
NO (5) NO328280B1 (ru)
NZ (1) NZ508597A (ru)
PT (1) PT1087960E (ru)
RU (1) RU2245335C2 (ru)
WO (1) WO1999065894A1 (ru)
ZA (1) ZA200007159B (ru)

Families Citing this family (86)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT1087960E (pt) * 1998-06-17 2011-06-17 Eisai R&D Man Co Ltd Análogos macrocíclicos e métodos de sua utilização e preparação
US8097648B2 (en) * 1998-06-17 2012-01-17 Eisai R&D Management Co., Ltd. Methods and compositions for use in treating cancer
US6653341B1 (en) * 1998-06-17 2003-11-25 Eisai Co., Ltd. Methods and compositions for use in treating cancer
DE10037310A1 (de) * 2000-07-28 2002-02-07 Asta Medica Ag Neue Indolderivate und deren Verwendung als Arzneimittel
EP1531846A4 (en) * 2002-02-27 2006-04-19 Us Gov Health & Human Serv CONJUGATES OF LIGAND, LINK AND CYTOTOXIC AGENS, AND RELATED COMPOSITIONS AND USE PROCESSES
MXPA04009209A (es) 2002-03-22 2004-11-26 Eisai Co Ltd Derivados de hemiasterlina y usos de los mismos.
US20050075395A1 (en) * 2003-05-28 2005-04-07 Gary Gordon Continuous dosing regimen
MXPA05012814A (es) * 2003-05-29 2007-01-25 Abbott Lab Regimen de dosificacion continua con n-(2(2 -((4-hidroxifenil) amino)pirid -3-il)-4- metoxibencen -sulfonamida (abt-751).
US20070196418A1 (en) * 2003-07-29 2007-08-23 Michael Lewis Drug delivery methods and devices
CN104876896A (zh) * 2004-06-03 2015-09-02 卫材R&D管理有限公司 用于制备软海绵素b的类似物的中间体
CN109180615A (zh) * 2004-06-03 2019-01-11 卫材R&D管理有限公司 用于制备软海绵素b的类似物的中间体
US20060045846A1 (en) * 2004-08-30 2006-03-02 Horstmann Thomas E Reagents and methods for labeling terminal olefins
US20060154312A1 (en) * 2004-12-09 2006-07-13 Sergei Agoulnik Tubulin isotype screening in cancer therapy using halichondrin B analogs
JP5735277B2 (ja) 2007-10-03 2015-06-17 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 ハリコンドリンｂ類似体の合成のための中間体および方法
CA2720632C (en) * 2008-04-04 2016-12-20 Eisai R&D Management Co., Ltd. Halichondrin b analogs
WO2010113983A1 (ja) 2009-03-30 2010-10-07 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 リポソーム組成物の製造方法
RU2476216C1 (ru) * 2009-03-30 2013-02-27 Эйсай Ар Энд Ди Менеджмент Ко., Лтд. Липосомальная композиция
DK2415470T3 (en) 2009-03-30 2016-09-19 Eisai R&D Man Co Ltd liposome
EP2420504B1 (en) * 2009-04-14 2014-01-15 Nissan Chemical Industries, Ltd. Method for producing tetrahydropyran compound and intermediate thereof
MX2012008510A (es) 2010-01-26 2012-11-21 Eisai R&D Man Co Ltd Derivados de furo [3, 2-b] pirano utiles en la sintesis de analogos de halicondrina b.
WO2012129100A1 (en) 2011-03-18 2012-09-27 Eisai R&D Management Co., Ltd. Methods and compositions for predicting response to eribulin
WO2012147900A1 (en) 2011-04-28 2012-11-01 Eisai R&D Management Co., Ltd. Microreactor process for halichondrin b analog synthesis
ES2705950T3 (es) 2011-06-03 2019-03-27 Eisai R&D Man Co Ltd Biomarcadores para predecir y valorar la capacidad de respuesta de sujetos con cáncer de tiroides y de riñón a compuestos de lenvatinib
EP2785687B1 (en) 2011-11-30 2019-02-20 Sandoz AG Process for preparation of (3r)-2,4-di-leaving group-3-methylbut-1-ene
CN104024237B (zh) 2011-12-16 2016-02-24 阿方拉研究股份有限公司 用于制备3-((2s,5s)-4-亚甲基-5-(3-氧代丙基)四氢呋喃-2-基)丙醇衍生物的方法及其有用的中间体
US9062020B2 (en) 2011-12-29 2015-06-23 Alphora Research Inc. 2-((2S,3S,4R,5R)-5-((S)-3-amino-2-hydroxyprop-1-yl)-4-methoxy-3-(phenylsulfonylmethyl)tetrahydrofuran-2-yl)acetaldehyde derivatives and process for their preparation
IN2014MN02106A (ru) 2012-03-30 2015-09-11 Alphora Res Inc
KR20150090921A (ko) 2012-12-04 2015-08-06 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 유방암 치료에서 에리불린의 용도
EP2997017B1 (en) 2013-05-15 2017-08-09 Alphora Research Inc. 3-((2s,5s)-4-methylene-5-(3-oxopropyl)tetrahydrofuran-2-yl)propanol derivatives, their preparation and intermediates useful thereof
BR112015029386B1 (pt) 2013-06-26 2023-11-14 Eisai R&D Management Co., Ltd. Uso de eribulina e lenvatinibe como terapia de combinação e kit
AU2014286880B2 (en) * 2013-07-03 2017-12-14 Sandoz Ag Synthetic process for preparation of macrocyclic C1-keto analogs of Halichondrin B and intermediates useful therein including intermediates containing -SO2-(p-TOLYL) groups
CN103483352A (zh) * 2013-10-18 2014-01-01 李友香 抗肿瘤的药用原料药
US9783549B2 (en) 2013-11-04 2017-10-10 Eisai R&D Management Co., Ltd. Macrocyclization reactions and intermediates useful in the synthesis of analogs of halichondrin B
RU2676486C1 (ru) 2013-12-06 2018-12-29 Эйсай Ар Энд Ди Менеджмент Ко., Лтд. Способы, предназначенные для синтеза аналогов галихондрина b
CN104860978A (zh) * 2014-02-20 2015-08-26 正大天晴药业集团股份有限公司 软海绵素b类似物的合成中间体
TW201617326A (zh) * 2014-03-06 2016-05-16 Ａｌｐｈｏｒａ研發股份有限公司 （ｓ）－１－（（２ｒ，３ｒ，４ｓ，５ｓ）－５－烯丙－３－甲氧－４－（對甲苯磺醯甲基）四氫呋喃－２－基）－３－氨基丙－２－醇之結晶衍生物
WO2015183961A1 (en) 2014-05-28 2015-12-03 Eisai R&D Management Co., Ltd Use of eribulin in the treatment of cancer
EP3160970A4 (en) 2014-06-30 2017-12-27 President and Fellows of Harvard College Synthesis of halichondrin analogs and uses thereof
TWI721954B (zh) 2014-08-28 2021-03-21 日商衛材R&D企管股份有限公司 高純度喹啉衍生物及其生產方法
WO2016038624A1 (en) 2014-09-09 2016-03-17 Cipla Limited "process for the preparation of macrocyclic ketone analogs of halichondrin b or pharmaceutically acceptable salts and intermediates thereof"
CN105713031B (zh) * 2014-12-05 2021-05-07 正大天晴药业集团股份有限公司 一种用于制备艾日布林的中间体及其制备方法
RU2017128583A (ru) 2015-02-25 2019-03-25 Эйсай Ар Энд Ди Менеджмент Ко., Лтд. Способ ослабления горечи хинолинового производного
CA2978226A1 (en) 2015-03-04 2016-09-09 Merck Sharpe & Dohme Corp. Combination of a pd-1 antagonist and a vegfr/fgfr/ret tyrosine kinase inhibitor for treating cancer
CN107810013B (zh) 2015-03-04 2021-04-02 默沙东公司 用于治疗癌症的pd-1拮抗剂和艾立布林的组合
WO2016176560A1 (en) 2015-04-30 2016-11-03 President And Fellows Of Harvard College Chromium-mediated coupling and application to the synthesis of halichondrins
WO2016179607A1 (en) 2015-05-07 2016-11-10 Eisai R&D Management Co., Ltd. Macrocyclization reactions and intermediates and other fragments useful in the synthesis of halichondrin macrolides
WO2016182850A1 (en) 2015-05-08 2016-11-17 Albany Molecular Research, Inc. Methods and intermediates for the preparation of omacetaxine and cephalotaxine derivatives thereof
AU2016279474B2 (en) 2015-06-16 2021-09-09 Eisai R&D Management Co., Ltd. Anticancer agent
WO2017139664A1 (en) 2016-02-12 2017-08-17 Eisai & R&D Management Co., Ltd. Intermediates in the synthesis of eribulin and related methods of synthesis
EP3449921B1 (en) 2016-04-28 2023-05-31 Eisai R&D Management Co., Ltd. Eribulin for inhibiting tumor growth
CN109415383A (zh) * 2016-05-26 2019-03-01 雷迪博士实验室有限公司 制备艾日布林的方法及其中间体
US11136335B2 (en) 2016-06-30 2021-10-05 Eisai R&D Management Co., Ltd. Prins reaction and intermediates useful in the synthesis of halichondrin macrolides and analogs thereof
CN110072552A (zh) 2016-10-14 2019-07-30 默沙东公司 用于治疗尿路上皮癌的pd-1拮抗剂和艾立布林的组合
JP6978758B2 (ja) 2016-11-11 2021-12-08 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ パラジウム媒介ケトール化
KR20190084065A (ko) 2016-11-23 2019-07-15 닥터 레디스 레보러터리즈 리미티드 에리불린 및 그 중간체의 제조방법
US10865212B2 (en) 2017-01-02 2020-12-15 Yonsung Fine Chemical Co.. Ltd. Intermediate for preparing eribulin mesylate and process for preparing the same
KR101880939B1 (ko) 2017-01-02 2018-08-17 연성정밀화학(주) 에리불린 메실산염의 제조 중간체 및 그의 제조방법
KR101991710B1 (ko) 2017-12-14 2019-06-21 연성정밀화학(주) 에리불린 메실산염의 제조 중간체 및 그의 제조방법
CN108341738B (zh) * 2017-01-24 2022-10-21 江苏恒瑞医药股份有限公司 用于制备艾日布林的方法及其中间体
CN108341828B (zh) * 2017-01-24 2021-04-06 江苏恒瑞医药股份有限公司 用于制备艾日布林的方法及其中间体
US9938288B1 (en) 2017-04-05 2018-04-10 President And Fellows Of Harvard College Macrocyclic compound and uses thereof
EP4119563A3 (en) 2017-04-05 2023-04-05 President And Fellows Of Harvard College Macrocyclic compound and uses thereof
US11498892B2 (en) 2017-07-06 2022-11-15 President And Fellows Of Harvard College Fe/Cu-mediated ketone synthesis
JP7370313B2 (ja) 2017-07-06 2023-10-27 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ ハリコンドリンの合成
US20190046513A1 (en) 2017-08-10 2019-02-14 Huya Bioscience International, Llc Combination therapies of hdac inhibitors and tubulin inhibitors
CN109694379B (zh) * 2017-10-24 2020-09-11 江苏恒瑞医药股份有限公司 用于制备艾日布林的中间体及其制备方法
CN111328328B (zh) * 2017-11-09 2023-05-23 研成精密化学株式会社 用于制备甲磺酸艾日布林的中间体及其制备方法
JP7353281B2 (ja) 2017-11-15 2023-09-29 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ 大環状化合物およびそれらの使用
US11419856B2 (en) 2017-11-20 2022-08-23 Basilea Pharmaceutica International AG Pharmaceutical combinations for use in the treatment of neoplastic diseases
US11008296B2 (en) 2017-11-21 2021-05-18 Natco Pharma Limited Intermediates for the preparation of eribulin thereof
IL275729B2 (en) 2018-01-03 2023-09-01 Eisai R&D Man Co Ltd Prins reaction and compounds useful in the synthesis of helicondrin macrolides and their analogs
WO2019211877A1 (en) 2018-05-03 2019-11-07 Cipla Limited Process for the preparation of macrocyclic ketone analogs of halichondrin b
WO2020008382A1 (en) * 2018-07-04 2020-01-09 Dr. Reddy’S Laboratories Limited Process for preparation of eribulin and intermediates thereof
JP2021532102A (ja) * 2018-07-20 2021-11-25 ドクター レディズ ラボラトリーズ リミテッド エリブリンおよびその中間体の調製のための精製プロセス
CN113166096A (zh) * 2018-10-09 2021-07-23 雷迪博士实验室有限公司 制备艾立布林的方法及其中间体
US11447499B2 (en) 2019-06-14 2022-09-20 Rk Pharma Inc. Process for the preparation of eribulin mesylate intermediate
JP2022537785A (ja) 2019-06-21 2022-08-29 カウンスィル オブ サイエンティフィック アンド インダストリアル リサーチ ホモプロパルギルアルコールを調製するための化学酵素的プロセス
US11083705B2 (en) 2019-07-26 2021-08-10 Eisai R&D Management Co., Ltd. Pharmaceutical composition for treating tumor
BR112022008756A2 (pt) 2019-11-07 2022-07-26 Eisai R&D Man Co Ltd Conjugados anticorpo-fármaco anti-mesotelina eribulina e métodos de uso
CN113135876B (zh) * 2020-01-16 2024-05-17 南通诺泰生物医药技术有限公司 艾日布林及其中间体的制备方法
US20230144203A1 (en) * 2020-01-22 2023-05-11 Shanghai Senhui Medicine Co., Ltd. Drug conjugate of eribulin derivative, preparation method therefor and application thereof in medicine
KR102377262B1 (ko) 2020-05-11 2022-03-22 연성정밀화학(주) 결정성 에리불린 염
IL279168B (en) * 2020-12-02 2022-04-01 Finetech Pharmaceutical Ltd A process for the preparation of eribulin
CN113354659B (zh) 2021-06-08 2022-04-08 江苏慧聚药业股份有限公司 甲磺酸艾日布林的合成
AU2022316425A1 (en) * 2021-07-22 2024-02-01 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co., Ltd. Drug conjugate of eribulin derivative
WO2023212746A2 (en) * 2022-04-30 2023-11-02 William Marsh Rice University A unified strategy for the total syntheses of eribulin and a macrolactam analogue of halichondrin b

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5436238A (en) 1992-03-12 1995-07-25 President And Fellows Of Harvard College Halichondrins and related compounds
US5338865A (en) 1992-03-12 1994-08-16 President And Fellows Of Harvard College Synthesis of halichondrin B and norhalichondrin B
GB9206244D0 (en) * 1992-03-23 1992-05-06 Pharma Mar Sa Cytotoxic compound from a marine sponge
US5426194A (en) * 1993-01-19 1995-06-20 Arizona Board Of Regents, A Body Corporate Acting On Behalf Of Arizona State University Isolation and structure of Halistatin 1
PT1087960E (pt) * 1998-06-17 2011-06-17 Eisai R&D Man Co Ltd Análogos macrocíclicos e métodos de sua utilização e preparação
US6653341B1 (en) * 1998-06-17 2003-11-25 Eisai Co., Ltd. Methods and compositions for use in treating cancer
CN104876896A (zh) 2004-06-03 2015-09-02 卫材R&D管理有限公司 用于制备软海绵素b的类似物的中间体
JP5735277B2 (ja) 2007-10-03 2015-06-17 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 ハリコンドリンｂ類似体の合成のための中間体および方法
WO2009064029A1 (en) 2007-11-16 2009-05-22 Eisai R & D Management Co., Ltd. Novel intermediate for halichondrin b analog synthesis and novel desulfonylation reaction used for the intermediate
CA2720632C (en) 2008-04-04 2016-12-20 Eisai R&D Management Co., Ltd. Halichondrin b analogs
MX2012008510A (es) 2010-01-26 2012-11-21 Eisai R&D Man Co Ltd Derivados de furo [3, 2-b] pirano utiles en la sintesis de analogos de halicondrina b.

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Horita et al, Tetrahedron Letters, 1995,v.38, n.52, p.8965. *

Also Published As

Publication number Publication date
NO2011026I2 (no) 2012-06-11
EP2272840B1 (en) 2012-08-22
JP2002518384A (ja) 2002-06-25
NO331183B1 (no) 2011-10-24
CA2632433A1 (en) 1999-12-23
EP2272840A1 (en) 2011-01-12
EP2272839B1 (en) 2012-08-22
HK1035534A1 (en) 2001-11-30
AU762998C (en) 2000-01-05
HUP0103357A3 (en) 2002-10-28
CN1312804A (zh) 2001-09-12
KR100798600B1 (ko) 2008-01-28
DK1087960T3 (da) 2011-06-14
NO20093217L (no) 2001-02-15
FR11C0038I1 (fr) 2011-10-14
NO328280B1 (no) 2010-01-25
BR9911326A (pt) 2001-04-03
DE69943296D1 (de) 2011-05-05
US20110172446A1 (en) 2011-07-14
NO2022019I1 (no) 2022-06-03
EP2277873B1 (en) 2012-05-30
CY1111516T1 (el) 2014-04-09
EP1087960B1 (en) 2011-03-23
NZ508597A (en) 2004-01-30
BE2011C028I2 (en) 2018-08-24
HU227912B1 (en) 2012-05-29
AU762998B2 (en) 2003-07-10
CA2755266C (en) 2014-08-12
LU91854I2 (fr) 2011-10-17
EP2272839A1 (en) 2011-01-12
KR20010083050A (ko) 2001-08-31
BRPI9911326B8 (pt) 2021-05-25
EP1087960A1 (en) 2001-04-04
JP4454151B2 (ja) 2010-04-21
CA2335300A1 (en) 1999-12-23
CA2632433C (en) 2012-02-07
NO20006316D0 (no) 2000-12-12
WO1999065894A1 (en) 1999-12-23
CN1216051C (zh) 2005-08-24
AU4573999A (en) 2000-01-05
CA2755266A1 (en) 1999-12-23
NO20006316L (no) 2001-02-15
ZA200007159B (en) 2001-12-04
PT1087960E (pt) 2011-06-17
FR11C0038I2 (fr) 2013-01-11
CA2335300C (en) 2008-10-07
US6365759B1 (en) 2002-04-02
NO2011018I1 (no) 2011-09-26
US6469182B1 (en) 2002-10-22
EP2277873A1 (en) 2011-01-26
NO2011026I1 (no) 2012-01-09
US8148554B2 (en) 2012-04-03
IL139960A0 (en) 2002-02-10
HUP0103357A2 (hu) 2002-01-28
CY2011010I1 (el) 2014-04-09
ATE502932T1 (de) 2011-04-15
CY2011010I2 (el) 2014-04-09
US6214865B1 (en) 2001-04-10
BR9911326B1 (pt) 2015-01-06
DE122011100031I1 (de) 2011-12-15
EP1087960A4 (en) 2004-12-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2245335C2 (ru) Макроциклическое соединение и способ идентификации агента на его основе
RU2112773C1 (ru) Производные галихондрина b, производные конденсированных пиранов (варианты), производные гидрированного фурана, производные гидрированного пирана, производные енона галихондрина b, производные енона норгалихондрина
Nicolaou et al. Total synthesis of sarcodictyins A and B
EP2522663B1 (en) Intermediates for the preparation of halichondrin B
EP2334686B1 (en) Cortistatin analogues and syntheses therof
PL171982B1 (pl) Nowe pochodne bakatyny I I I PL PL PL PL PL PL
M Heravi et al. Applications of Barton-McCombie reaction in total syntheses
NO315116B1 (no) Semi-syntetiske taksaner med anti-tumoral aktivitet
Liu et al. Synthetic Studies on the HIJK-Ring Fragment of Ciguatoxin
ES2364696T3 (es) Análogos macrocíclicos y procedimientos para su uso y preparación.
JP2003261447A (ja) 抗腫瘍剤
MXPA00012534A (en) Macrocyclic analogs and methods of their use and preparation
Modolo Studies toward completion of the C1-C28 segment of spongistatin 1. Synthesis and photochemistry of 4bH-pyrido [2, 1-a] isoindol-6-one
Lopez et al. Diastereocontrolled Synthesis of Highly Functionalized Spiroketals: Application to the Synthesis of a Precursor of the C-12-C-25 Fragment of Bafilomycin A1
Ruiz-Gómez et al. Dearomatizing anionic cyclization of N-methyl-N-benzyldi (1-naphthyl) phosphinamide: a route for access to a new class of functionalized tricyclic azaphospholes with antitumor properties
Henryon et al. Formal convergent synthesis of ivermectin aglycone-A synthetic approach to the C10-C25 subunit of avermectins 2b
Lee et al. Antimalarial Cyclic Peroxide Lactones.
Truong Samarium iodide directed reductions of β-amino ketones and the total synthesis of bryostatin analogs
Jeong Studies directed toward the synthesis of 2-beta-hydroxyjatrophone
Rice CYTOTOXIC LACTONES FROM SELECTED PLANTS AND ADENINE DERIVATIVES (ELEPHANTOPUS NUDATUS, RADERMACHIA SINICA)
Glass Toward the total synthesis of taxol and its analogs
Stewart Studies Toward the Completion of the C29-C51 Segment of Spongistatin 1
JP2003171278A (ja) 新規なアポトーシス誘導剤

Legal Events

Date Code Title Description
PC4A Invention patent assignment

Effective date: 20071221

RH4A Copy of patent granted that was duplicated for the russian federation

Effective date: 20080620

ND4A Extension of patent duration

Free format text: CLAIMS: 1,2,3,5,7-11,13-16,19

Extension date: 20240616