NO321377B1

NO321377B1 - Nye forbindelser

Info

Publication number: NO321377B1
Application number: NO20015383A
Authority: NO
Inventors: Marcel Linschoten; Magnus Polla; Peder Svensson
Original assignee: Astrazeneca Ab
Priority date: 1999-05-03
Filing date: 2001-11-02
Publication date: 2006-05-02
Also published as: KR20020010630A; SE9901573D0; CZ20013930A3; AR034241A1; CA2371213A1; PL354360A1; TR200103153T2; BR0010257A; NZ515062A; IL145954A0; IS6139A; JP2002543184A; KR100755152B1; EE200100574A; US7071175B1; AU771760B2; CA2371213C; SK15462001A3; HUP0202876A3; WO2000066557A1

Description

Foreliggende oppfinnelse angår nye forbindelser og farmasøytiske akseptable salter derav, som inhiberer basiske karboksypeptidaser, mer spesifikt karboksypeptidase U, og som således kan anvendes ved hindring og behandling av sykdommer hvori inhtbering av karboksypeptidaser U er fordelaktig. I ytterligere aspekter angår foreliggende oppfinnelse forbindelser ifølge oppfinnelsen for anvendelse ved behandling; fremgangsmåte for fremstilling av slike nye forbindelser; farmasøytiske sammensetninger som inneholder minst en forbindelse ifølge oppfinnelsen, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, som aktiv ingrediens; og anvendelse av de aktive forbindelsene ved fremstilling av medikamenter for medisinsk anvendelse som indikert ovenfor. I tillegg angår oppfinnelsen et kit for anvendelse med den farmasøytiske formuleringen.

Fibrinolyse er resultatet av en serie enzymatiske reaksjoner som resulterer i nedbryting av fibrin ved plasmin. Aktivering av plasminogen er den sentrale prosessen i fibrinolyse. Spalting av plasminogen for å gi plasmin utføres av plasminogen-aktivatorer, vevstype plasminogen aktivator (t-PA) eller urokinase-type plasminogen aktivator (u-PA). Begynnende plasmin nedbryting av fibrin generer karboksyterminale lysinrester som tjener som høyaffinitets bindingsseter for plasminogen. Siden plasminogen bundet til fibrin blir langt lettere aktivert til plasmin enn fritt plasminogen gir denne mekanis-men en positiv feedback regulering av fibrinolyse.

En av de endogene inhibitorene til fibrinolyse er karboksypeptidase U (CPU). CPU er også kjent som plasma karboksypeptidase B, aktiv trombinaktivert fibrolyse inhibitor (TAFIa), karbokyspeptidase R og induserbar karboksypeptidase aktivitet CPU dannes i løpet av koagulering og fibrinolyse fra dens forløper proCPU ved hjelp av protolytiske enzymer, for eksempel trombin, trombin-trombomodulin kompleks eller plasmin. CPU spalter basiske aminosyrer ved karboksyterminalen til fibrinfragmentene. Tapet av karboksyterminale lysiner og derved lysinbindingsseter for plasminogen tjener deretter til å inhibere fibrinolyse.

Ved å inhibere tapet av lysinbindingsseter for plasminogen og således øke plasminogen-dannelseshastigheten vil effektive inhibitorer av karboksypeptidase U forventes å lette fibrinolyse.

2-merkapto-3-guanidinoetyltiopropansyre er rapportert som en karboksypeptidase N inhibitor. Mer nylig har denne forbindelsen vist seg å inhibere CPU, Hendriks, D, et al., Biochemica et Biophysica Acta, 1034 (1990), 86-92.

Guanidinoetylmerkaptoravsyre er rapportert som en karboksypeptidase N inhbitor. Nylig har denne forbindelsen vist seg å inhibere CPU, Eaton, D.L. et al., The Journal of Biological Chemistry, 266 (1991) 21833-21838.

Det har overraskende blitt funnet at forbindelser med formel I er særlig effektive som inhibitorer av karboksypeptidase U og derved anvendelige som medikamenter for behandling eller profylakse av tilstander hvor inhibering av karboksypeptidase U er fordelaktig.

I et aspekt angår oppfinnelsen således forbindelse med den generelle formelen I.

hvori

Ri representerer

C3-C7 sykloalkenyl, substituert med amino;

heterosyklyl valgt blant azetidin, pyrrolidin, tiazol, pyridin, pyrimidin eller piperazin; hvilke heterosyklyl er eventuelt substituert med en eller flere av amino, Ct-Ce alkyl, halogen eller hydroksy-Ci-Cé alkyl;

R2 representerer H, C1-C3 alkyl, amino, halogen, hydroksy;

R3 representerer COOR5,

R4 representerer SH eller S-CO-C|-C6 alkyl;

R5 representerer H eller Ci-Ce alkyl;

X representerer C(Z)2,

Y representerer C(Z)2,

Z representerer uavhengig H eller Ci-Cé alkyl, fenyl eller fenyl-Ci-C4 alkyl,

eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav, eller et solvat av et slikt salt.

Foretrukne forbindelser ifølge oppfinnelsen er gitt ved de uselvstendige kravene 2-4.

Foretrukket angår oppfinnelsen forbindelsene

2- merkaptometyl-3-piperidin-4-yl-propionsyre;

3- (l-acetyl-piperidin-4-yl)-2-merkaptometyl-propionsyre;

3-merkapto-5-metyl-2-piperidin-4-ylmetyl-heksanonsyre;

3-merkapto-4-metyl-2-pipeirdin-4-ylmetyl-smørsyre;

2- (2-amino-p<y>irdin-4-<y>lmet<y>l)0-merkapto-5-propionsyre;

3- (6-amino-p<y>irdin-3-<y>l)-2-merka<p>tometyl-propionsyre;

3-(6-amino-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-2-metyl-propionsyre; 2- (6-amino-pyridin-3-ylmetyl)-2-merkaptometyl-smørsyre;

3- (6-amino-5-meryl-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-2-metyl-propion^ 3-(6-amino-5-metyl-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-propionsyre; 3-(6-ammo-4-metyl-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-propionsyre; 2- merkaptometyl-3-piperidin-4-yl-smørsyre;

3- (6-amino-pyridinO-yl)-2-merkaptometyl-smørsyre;

3-(6-ammo-2-metyl-pyirdin-3-yl)-2-merkap^^ 2-acetylsulfanylmetyl-3-(2-amm^ 2-(6-amino-pyridin-3-ylmetyl)-3 -merkapto-smørsyre;

2- (6-amino-pyirdin-3-yIrnetyl)-3-merkapto-pentansyre;

3- (6-amino-5-klor-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-propionsyre; 3-(6-amino-5-hydroksymetyl-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-propioM 2-merkaptomety]-3-pyrrolidin-3-yl-propionsyre;

2- merkaptometyl-3-piperazin-1 -yl-propionsyre;

3- (6-amino-pyirdin-3-yl)-2-merkaptometyl-pentansyre;

3-(6-amino-pyridin-3-yl)-2-merkaptomety^ 3 -(6-amino-pyridin-3 -yl)-2-merkaptometyl-4-fenyl-pentansyre;

3-(6-amino-pyirdin-3-yl)-2-merkaptometyl-4-fenyl-sn^OTsyre;

2- (6-amino-pyridin-3-ylmetyl)-3-merkapto-5-fenyl-pentansyre;

3- [3-(6-amino-pyridm-3-yl)-2-etoksykarbonyl-propyldisulfanyl-2-(6-aminopy^ ylmetyl)-propionsyreetylester;

3-(6-amino-pyirdin-3-yl)-2-merkaptometyl-heksansyre; eller

3-(2-amino-tiazol-5-yl)-2-merkaptometyl-propionsyre.

Følgende definisjoner skal gjelde gjennom beskrivelsen og kravene:

Begrepet "basisk gruppe" betegner en basisk gruppe, hvori den konjugerende syren av nevnte basiske gruppe har en pKa fra ca. -5 til ca. 25, foretrukket fra 1 til 15.

Begrepet "karboksylsyre isoster" betegner en sur gruppe som har en pKa på fra ca. -5 til ca. 25, foretrukket fra 1 til 15.

Begrepet "Ci-Cg alkyl" betegner en rett eller forgrenet, mettet eller umettet, substituert eller usubstituert alkylgruppe som har 1 til 6 karbonatomer i kjeden hvorav alkylgruppen eventuelt kan avbrytes av ett eller flere heteroatomer utvalgt fira O, N eller S. Eksempler på nevnte alkyl inkluderer, men er ikke begrenset til metyl, etyl, etenyl, etynyl, n-propyl, iso-propyl, propenyl, iso-propenyl, propynyl, n-butyl, iso-butyl, sek-butyl, t-butyl, butenyl, iso-butenyl, butynyl og rett og forgrenet fenyl og heksyl.

Begrepet "C1-C3 alkyl" betegner en rett eller forgrenet, mettet eller umettet, substituert eller usubstituert alkylgruppe som har 1 til 3 karbonatomer i kjeden hvor alkylgruppen kan eventuelt være avbrutt av ett eller flere heteroatomer utvalgt fra O, N eller S. Eksempler på nevnte alkyl inkluderer, men er ikke begrenset til metyl, etyl, etenyl, etynyl, n-propyl, iso-propyl, propenyl, iso-propenyl, propynyl.

Begrepet "Ci alkyl" betegner en substituert eller usubstituert alkylgruppe som har ett karbonatom. Et eksempel på nevnte alkyl inkluderer, men er ikke begrenset til, metyl.

Begrepet "C]-C6 alkyl" betegner en alkyl o-gruppe, hvori C\- Ce alkyl er som definert ovenfor.

Begrepet "C1-C3 alkoksy" betegner en alkyl-O-gruppe, hvori Ci-Ca alkyl er som definert ovenfor.

Begrepet "heterosyklyl" betegner et substituert eller usubstituert 4- til 10-leddet monosyklisk eller multisyklisk ringsystem hvori ett eller flere av atomene i ringen eller ringene er et element forskjellig fra karbon, for eksempel nitrogen, oksygen eller svovel, særlig 4-, 5- eller 6-leddet aromatiske eller alifatisk heterosykslike grupper, og inkluderer, men er ikke begrenset til, azetidin, furan, tiofen, pyrrol, pyrrolin, pyrrolidin, dioksolan, oksatiolan, oksasolan, oksasol, tiasol, imidasol, imidasolidin, pyrasol, pyrasolin, pyrasolidin, isoksasol, isotiasol, oksadiasol, furasan, triasol, tiadiasol, pyran, pyridin, piperidin, dioksan, morfolin, ditian, oksatian, tiomorfolin, pyridasin, pyrimidin, pyrasin, piperasin, triasin, tiadiasin, ditiasin, azaindol, azaindolin, indol, indolin, naftyridin grupper, og skal forstås å inkludere alle isomerer av gruppene identifisert ovenfor.

Begrepet "azetidinyl" skal for eksempel forstås til å inkludere 2- og 3-isomerer og begrepene "pyridyl" og "piperidinyl" skal for eksempel forstås å inkudere 2-, 3- og 4-isomerer.

Begrepet "sykloalkyl" betegner en mettet eller umettet substituert eller usubstituert ikke-aromatisk ring bestående av 3,4,5,6 eller 7 karbonatomer og inkluderer, men ikke begrenset til, syklopropyl, syklobutyl, syklopentyl, sykloheksyl, sykloheptyl, syklobutenyl, syklopentenyl, sykloheksenyl, sykloheptenyl, syklopentadienyl, syklo-heksadienyl og sykloheptadienyl grupper.

Begrepet "halogen" inkluderer fluor, klor, brom og jodgrupper.

Begrepet "aryl" betegner et substituert eller usubstituert CVCu aromatisk hydrokarbon og inkluderer, men er ikke begrenset til fenyl, naftyl, indenyl, antrasenyl, fenantrenyl og fluorenyl.

Begrepet "aryloksy" betegner en aryl-O-gruppe, hvor aryl er som definert ovenfor. Begrepet "asyl" betegner en alkyl-CO-gruppe, hvori alkyl er som definert ovenfor.

Begrepet "aroyl" betegner en aryl-CO-gruppe, hvori aryl er som definert ovenfor.

Begrepet "alkyltio" betegner en alkyl-S-gruppe, hvori alkyl er som definert ovenfor.

Begrepet "aryltio" betegner en aryl-S-gruppe, hvori aryl er som definert ovenfor.

Begrepet "arylamino" betegner en aroyl-N(2)-gruppe, hvori aroyl og Z er som definert ovenfor.

Begrepet "asylamino" betegner en asyl-N(Z)-gruppe, hvori asyl og Z er som definert ovenfor.

Begrepet "karbamoyl" betegner en HfeN-CO-gruppe.

Begrepet "alkylkarbamoyl" betegner en Z2-N-CO-gruppe hvori Z er som definert ovenfor.

Begrepet "substituert" betegner en "C] alkyl", "Ci-C3 alkyl", "C]-C6 alkyl", "sykloalkyl", "heterosyklyl" eller en "aryl" gruppe som definert ovenfor som er substituert med en eller flere asyl, asylamino, alkyl, alkylkarbamoyl, alkyltio, alkoksy, aroyl, aroylamino, aryoloksy, aryltio, amidino, amino, aryl, karbamoyl, karboksy, syano, sykloalkyl, formyl, guanidino, halogen, heterosyklyl, hydroksy, okso, nitro, tiol, tio, Z2N-CO-0-, ZO-CO-NZ-, eller Z2N-CO-NZ-grupper.

Videre kan forbindelser med formel I hvori R4 er merkapto være i form av en dimer som bundet via -S-S-binding, som også er inkludert ifølge oppfinnelsen.

Både rene enantiomerer, rasemiske blandinger og ulike blandinger av to enantiomerer er innenfor omfanget av oppfinnelsen. Det er å forstå at alle diastereomere former som er mulige er innenfor omfanget av oppfinnelsen. Også inkludert i oppfinnelsen er derivater av forbindelser med formel I som har den biologiske funksjonen til forbindelser med formel I, slik som prodrugs.

Avhengig av fremstillingsbetingelsene oppnås forbindelsene med formel I enten i nøytral eller saltform eller som et solvat, for eksempel et hydrat, og er alle innenfor omfanget av oppfinnelsen.

Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer også fremgangsmåtene A-C for fremstilling av forbindelser med den generelle formel I.

Fremgangsmåte A

Fremgangsmåte A for fremstilling av forbindelser med den generelle formel I, hvor Ri, R3, R4 og Y er som definert ovenfor og R2 er H, og X er C(Z)2, innbefatter følgende trinn:

a) Forbindelser med den generelle formel II,

hvori Rj er som definert for formel I og X er C(Z)2, som enten er kommersielt tilgjengelige eller tilgjengelige ved anvendelse av kjente teknikker, kan omdannes til en forbindelse med den generelle formel III, hvori L er en egnet utgående gruppe, slik som klor, brom, jod, triflat eller tosyl, under standard betingelser ved anvendelse av egnet reagens, slik som PPh3/CBr4, TosCl/pyridin eller (CF3S02)20/TEA. b) Forbindelser med generell formel III kan deretter reageres med forbindelser med generell formel IV, hvori R2 og R3 er som definert for formel I, som enten er kommersielt tilgjengelig eller tilgjengelig ved anvendelse av kjente teknikker, i nærvær av en egnet base, slik som K2CO3 eller NaH, under standard betingelser som gir forbindelser med den generelle formelen V.

c) Forbindelser med den generelle formel V hvori Rj og R3 er som definert for formel I og X er C(Z)2 og R2 er H kan deretter omdannes til forbindelser med den generelle

formel VI,

ved behandling med formaldehyd i nærvær av en egnet base, slik som Et2NH, under standard betingelser. d) Forbindelser med generell formel VI kan også fremstilles ved å behandle forbindelser med generell formel VII, hvor R3 og R5 er som definert for formel I, med et alkyleringsmiddel med generell formel III i nærvær av en egnet base, slik som LD A eller NaH, under standard betingelser og gir forbindelser med den generelle formel vm,

e) Forbindelser med den generelle formel VIII kan deretter reageres med et passende aldehyd eller keton OC(Z)2 i nærvær av en egnet base slik som KotBu, LDA eller

NaH, under standard betingelser for å gi en forbindelse med den generelle formel

VI.

f) Forbindelser med den generelle formel VI kan ytterligere reageres med forbindelser med den generelle formel IX,

hvor Rs er en egnet beskyttende gruppe, slik som Ac, Bz, PMB eller Bn, alene eller i nærvær av en egnet base, slik som NaOMe, NaH eller trietylamin eller alternativt i nærvær av en fii-radikal initiator, slik som AIBN under standard betingelser for å gi forbindelser med den generelle formel I, hvor R], R3, R4 og Y er som definert for formel I og R2 er H og X er C(Z)2.

Fremgangsmåte B

Fremgangsmåte B for fremstilling av forbindelser med generell formel I, hvori R|, R2, R3 og R* er som definert i formel I og Y er CH2, og X er O, S, SO, S02, C(Z)2, eller N(Z), innbefatter følgende trinn:

a) Reagere en forbindelse med generell formel X,

hvori R] er som definert for formel I og X er O, S, eller N(Z), med et alkyleringsmiddel med generell formel XI, hvori R2 og R3 er som definert for formel I og L er en egnet utgående gruppe, slik som en klorm brom, jod, trifiat eller tosylatgruppe, under standard betingelser ved anvendelse av egnede reagenser, slike som NaH, A& CO3, eller BiuNHSCVNaOH, for å gi forbindelser med den generelle formel XII,.

b) Forbindelser med den generelle formel XII kan deretter reageres med karbondioksid i nærvær av en egnet base, slik som LDA eller KHMDS under standard betingelser

og gi en forbindelse med generell formel XIII,

c) Forbindelser med den generelle formel XIII kan deretter reageres med et alkyl klorformat, slik som CICOOMe i nærvær av en base, slik som trietylamin, og deretter redusere det dannede blandede anhydridet med et egnet reduksjonsmiddel, slik som NaBHt, under standard betingelser, og gi en forbindelse med generell formel XIV d) Forbindelser med generell formel XIV kan deretter reageres med en forbindelse med generell formel IX

hvor Rj er en egnet beskyttende gruppe, slik som Ac eller Bz, i nærvær av et egnet reagens, slik som PPhj/DIAD, under standard betingelser og gi forbindelser med den generelle formel I, hvori R2, R2, R3 og R4 er som definert ovenfor og Y er CH2 og X er O.S,C(Z)2 eller N(Z).

e) Forbindelser med generell formel I, hvori Ri, R2, R3, R4 og Y er som definert ovenfor og X er S kan deretter reageres med et egnet oksidasjonsmiddel, slik som

MCPBA under standard betingelser og gi forbindelser med generell formel I, hvori Ri, R2, R3, R* og Y er som definert ovenfor og X er SO eller SO2.

Fremgangsmåte C

Fremgangsmåte C for fremstilling av forbindelser med generell formel I, hvori Ri, R2, R3, Rt og Y er som definert ovenfor og X er NRéCO, CONR& S02NRfl eller NRfiS02 omfatter følgende trinn:

a) Reagere en forbindelse med generell formel XV,

hvori R2, R3, Re og Y er som definert for formel I og Rj er en egnet beskyttende

gruppe, slike som Ac, Bz, PMB eller Bn, med en forbindelse med generell formel

XVI,

hvori Ri er som definert for formel I og X er COOH eller S02C1 i nærvær av et egnet koblingsreagens, slik som PyBOP/DIPEA, DCC/HOBt, EDC/TEA/DMAP eller pyridin under standard betingelser for å gi forbindelser med generell formel I, hvori Ri, R2, R3» R4 og Y er som definert ovenfor og X er NR^CO eller NReS02-b) Reagere en forbindelse méd generell formel XVII, hvori R2, R3 og Y er som definert for formel I og X er COOH eller SO2CI og Rs er en egnet beskyttende gruppe, slik som Ac, Bz, PMB eller Bn, med en forbindelse med den generelle formel XVIII, hvori Ré er som definert for formel I i nærvær av egnede koblingsreagenser, slike som PyBOP/DIPEA, CDD/HOBt, EDC/TEA/DMAP eller pyridin under standard betingelser og gi forbindelser med den generelle formel I, hvori Rt, R2, R3) R* og Y er som definert ovenfor og X er CONR$ eller S02NR6. Således angår oppfinnelsen en fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge oppfinnelsen, hvori Ri, R3, R4 og Y er som definert ifølge oppfinnelsen og X er C(Z)2 og R2 er H, kjennetegnet ved at den innbefatter trinnet med å omsette en forbindelse med formel VL hvori Ri, R3 og Y er som definert ifølge oppfinnelsen og X er C(Z)2, med en forbindelse med formel IX,

hvori R5 er en egnet beskyttende gruppe, slik som Ac, Bz, PMB eller Bn, alene eller under nærvær av en passende base, slik som NaOMe, NaH eller trietylamin eller alternativt under nærvær av en fri-radikal initiator, slik som AIBN, under standard betingelser.

Oppfinnelsen angår også en fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge oppfinnelsen, hvori Ri, R2, R3 og R4 er som definert ifølge oppfinnelsen og Y er CH2 og X er C(Z)2, kjennetegnet ved at den innbefatter trinnet med å omsette en forbindelse med formel XIV: hvor Ri, R2 og R3 er som definert ifølge oppfinnelsen og X er C(Z)2 med en forbindelse med generell formel IX.

hvori Rs er egnet beskyttende gruppe, slik som Ac eller Bz, under nærvær av et passende reagens, slik som PPhj/DIAD, under standard betingelser.

Det vil være foretrukket av fagmannen at i de fremgangsmåtene beskrevet ovenfor kan funksjonelle gruppene til intermediatforbindelsene trenge å være beskyttet ved egnede beskyttende grupper.

Funksjonelle grupper, som det er ønskelig å beskytte, inkluderer hydroksy, amino, merkapto, og karboksylsyre. Egnede beskyttende grupper for hydroksy inkluderer trialkylsilyl elter diarylalkylsilyl (for eksempel t-butyldimetylsily, t-butyldifenylsilyl eller trimetylsilyl), tetrahydropyranyl og bensyl. Egnede beskyttende grupper for amino, amidino og guanidino inkluderer t-butyloksykarbonyl og bensyloksykarbonyl. Egnede beskyttende grupper for merkapto inkluderer CO-Ci^ alkyl, p-metoksybensyl og trityl. Egnede beskyttende grupper for karboksylsyre inkluderer C1-6 alkyl og bensylester.

Beskyttende grupper kan fjernes i henhold til teknikker som er godt kjente for fagmannen.

Visse beskyttede derivater og forbindelser av formel I, som kan fremstilles før det endelige avbeskyttelsestrinnet for å danne forbindelser med formel I, er nye.

Anvendelsen av beskyttende grupper er beskrevet i "Protective Groups in Organic Synthesis", 2. utgave, T.W. Greene & P.G.M. Wutz, Wiley-Interscience (1991). Den beskyttede gruppen kan også være en polymer slik som en Wang harpiks eller en 2-klortrityl klorid harpiks.

Det vil også være foretrukket av fagmannen, selv om slike beskyttede derivater av forbindelser med formel I ikke fremviser farmakologisk aktivitet som sådan, kan de administreres parenteralt eller oralt og deretter metaboliseres i kroppen for å danne forbindelser ifølge forbindelsen som er farmakologisk aktive. Slike derivater kan derfor beskrives som "prodrugs". Alle prodrugs av forbindelser med I er inkludert innenfor omfanget av oppfinnelsen.

Det skal også forstås at alle polymorfer, amorfe former, anhydrater, hydrater, solvater av forbindelser ifølge oppfinnelsen er innefor omfanget av oppfinnelsen.

I et ytterligere aspekt angår foreliggende oppfinnelse farmasøytiske sammensetninger som innbefatter minst en forbindelse ifølge oppfinnelsen, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, som aktiv ingrediens.

For klinisk anvendelse blir forbindelsen ifølge oppfinnelsen formulert til farmasøytiske formuleringer for oral, intravenøs, subkutan, trakeal, bronkial, intranasal, pulmonær, transdermal, bukkal, rektal, parenteral, eller annen administrasjonsmåle. Den farmasøytiske formuleringen inneholder en forbindelse ifølge oppfinnelsen i kombinasjon med en eller flere farmasøytiske akseptable ingredienser. Bæreren kan være i form av et fast stoff, delvis fast stoff eller et flytende fortynningsmiddel, eller en kapsel. Disse farmasøytiske preparatene er ytterligere et formål for oppfinnelsen. Vanlig mengde av aktiv forbindelse er mellom 0,1 og 95 vektprosent av preparatet.

Ved fremstilling av de farmasøytiske formuleringene som inneholder en forbindelse ifølge oppfinnelsen kan forbindelsen som velges ut blandes med faste pulveriserte ingredienser, slike som laktose, sakkarose, sorbitol, mannitol, stivelse, amylopektin, cellulosederivaterj gelatin eller annen egnet ingrediens, så vel som med disintegrerings-midler og smøremidler slik som magnesium stearat, kalsium stearat, natrium stearyl fumarat og polyetylen glykol vokser. Blandingen kan også bearbeides til granuler eller presses til tabletter.

Myke gelatin kapsler kan fremstilles med kapsler som inneholder en blanding av den aktive forbindelsen eller forbindelser ifølge oppfinnelsen, vegetabilsk olje, fett, eller andre annen egnet vehikel for myke gelatin kapsler. Harde gelatin kapsler kan inneholde granuler av den aktive forbindelsen. Harde gelatin kapsler kan også inneholde den aktive forbindelsen i kombinasjon med faste pulverformige ingredienser slik som laktose, sakkarose, sorbitol, mannitol, potetstivelse, maisstivelse, amylopektin, cellulose derivater eller gelatin.

Doseringsenheter for rektal administrasjon kan fremstilles

(i) i form av stikkpiller som inneholder den aktive substansen blandet med en nøytral fettbase; (ii) i form av en gelatin rektal kapsel som inneholder den aktive substansen i blanding med en vegetabilsk olje, parafinolje eller annen egnet vehikel for

rektale gelatin kapsler;

(iii) i form av en ferdig mikro klyster; eller

(iv) i form av en tørr klysterformulering som kan rekonstitusjoneres i et egnet

løsemiddel like før administrasjon.

Væskepreparater kan fremstilles i form av siruper eller suspensjoner, for eksempel løsninger eller suspensjoner som inneholder den aktive ingrediensen og hvor resten består for eksempel av sukker eller sukkeralkoholer og en blanding av etanol, vann, glyserol, propylen glykol og polyetylen glykol. Hvis ønskelig kan slike væske preparater inneholde fargestoffer, smaksstoffer, konserveringsmidler, sakkarin og karboksymetyl cellulose eller andre fortykningsmidler. Flytende preparater kan også fremstilles i form av et tørt pulver som kan rekonstitusjoneres med et egnet løsemiddel før anvendelse.

Løsninger for parenteral administrasjon kan fremstilles som en løsning av en forbindelse ifølge oppfinnelsen i et farmasøytisk akseptabelt løsemiddel. Disse løsninger kan også inneholde stabiliseringsingredienser, konserveringsmidler og/eller buffer ingredienser. Løsninger for parenteral administrasjon kan også fremstilles som et tørt preparat som kan rekonstitusjoneres med et egnet løsemiddel før anvendelse.

Typisk daglig dose aktiv substans varierer innenfor brede grenser og vil avhenge av forskjellige faktorer slik som for eksempel det individuelle kravet til hver pasient, administrasjonsrute og sykdom. Generelt vil orale og parenterale doseringer være i området 0,1 til 1000 mg pr. dag aktiv substans.

Forbindelser ifølge oppfinnelsen er inhibitorer av karboksypeptidase U enten som sådan, eller i tilfellet prodrug etter administrasjon. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen forventes således å være anvendelige ovenfor de tilstander hvor inhibering av karboksypeptidase U er fordelaktig, slik som i behandling eller profylakse av trombose og nyper-koaguleringsevne i blod og vev hos pattedyr, som inkluderer mennesket.

Det er kjent at hyperkoaguleringsevne kan føre til trombo-emboliske sykdommer. Tilstander assosiert med hyperkoaguleringsevne og tromboemboliske sykdommer som kan nevnes inkluderer protein C resistens og iboende eller tillærte svakheter i anti-trombin III, protein C, protein S og heparin kofaktor II. Andre tilstander kjente å være assosiert med hyperkoaguleringsevne og tromboembolisk sykdom inkluderer sirkulasjons- og septisk sjokk, sirkulerende antifosfor lipid antistoffer, homosysteinami, heparinindusert trombosytopeni og defekter ved fibrinolyse. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen er således indikert både ved terapeutisk og/eller profylaktisk behandling av disse tilstandene. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen er videre indikert ved behandling av tilstander hvor det er uønsket overskudd av proCPU/CPU.

Særlige sykdomstilstander som kan nevnes inkluderer terapeutisk og/eller profylaktisk behandling av venøs trombose og pulmonær embolisme, arterisk trombose (for eksempel ved mykokardisk infarkt, ustabil angina, trombosebasert slag og periferal arterie trombose) og systemisk embolisme vanligvis fra atrium i løpet av arterisk fibrillering eller fra venstre ventrikkel etter transmural myokardisk infarkt.

Videre forventes forbindelsen ifølge oppfinnelsen å ha anvendelse ved profylakse av reoklusjon og restenose (for eksempel trombose) etter trombolyse, perkutant trans-luminal angioplasti (PTA) og koronare bypass operasjoner; og hindring av re-trombose etter mikrokirurgi og vaskulær kirurgi generelt.

Ytterligere indikasjoner inkluderer terapeutisk og/eller profylaktisk behandling av disseminert intravaskulær koagulering forårsaket av bakterie, multippel trauma, intoksikasjon eller en hvilken som helst annen mekanisme, fibrinolytisk behandling når blodet er i kontakt med fremmede overflater i kroppen, slik som vaskulære podinger, vaskulære stenter, vaskulære kateter, mekaniske og biologiske proteseventiler og et hvilket som helst annet medisinsk utstyr, og fibrinolytisk behandling når blod er i kontakt med medisinsk utstyr utenfor kroppen, slik som i løpet av kardiovaskulær kirurgi ved anvendelse av en hjerte-lunge maskin eller ved hemodialyse.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan også kombineres og/eller koadministreres med et hvilket som helst annet antitrombotisk middel med en forskjellig virkningsmekanisme, slike som anti-blodplate midlene acetylsalisylsyre tiklopidin, klopidogrel, tromboksan reseptor og/eller syntase inhibitorer, fibrinogen reseptor antagonister, prostasyklin etterlignere og forsfodiesterase inhibitorer og ADP-reseptor (P2T) antagonister og trombin inhibitorer.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan ytterligere kombineres og/eller koadministreres med trombolytiske midler slike som vevs plasminogen aktivator (naturlig, rekombinant eller modifisert), streptokinase, urokinase, prourokinase, anisoylert plasminogen-streptokinase aktivator kompleks (APSAC), dyrespytt kjertel plasminogen aktivatorer, og lignende, ved behandling av trombotiske sykdommer, særlig myokardisk infarkt og slag.

Utførelsesformer av foreliggende oppfinnelse er videre angitt i de selvstendige kravene 8,11 og 12 som angir en farmasøytisk formulering, krav 10 som angår en anvendelse og krav 13 som angår et kit.

Inhiberingseffekten til forbindelsene ifølge oppfinnelsen ble estimert ved anvendelse av undersøkelsen beskrevet i: Dirk Hendriks, Simon Scharpe og Marc van Sande, Clinical Chemistry, 31,1936-1939 (1985); og Wei Wang, Dirk F. Hendriks, Simon S. Scharpe, The Journal of Biological Chemistry, 269,15937-15944 (1994).

EKSEMPLER

Massespekter ble utført på en Finnigan MAT TSQ 700 trippel kvadropol massespektrometer utstyrt med et elektrospray grensesnitt (FAB-MS) og VG plattform II massespektrometer ustyrt med et elektrospray grensesnitt (LC-MS). <*>H NMR og ,<3>C NMR målinger ble utført på Varian UNITY pluss 400,500 og 600 spektrometre som opererte på 'H frekvensene 400,500 og 600 MHz respektivt. Kjemiske skift er gitt i ppm med løsemidlet som indre standard. De organiske ekstraktene ble tørket ved anvendelse av MgSC^ eller Na2SC<4 som tørkemiddel. Kromatografiske separasjoner ble utført ved anvendelse av mørk silika gel 60 (0,063-6,200 mm). HPLC separasjoner ble utført på en HIGHCROM KR100-10C8 kolonne.

Eksempel 1

2- merkaptometvl- 3- piperidin- 4- vl- propionsvre

a) 3- piperidin- 4- vl- propionsvre

En løsning av 3-pyridin-4-yl-akrylsyre (4,20 g, 28,0 mmol) i vann (50 ml) og ammoniakk (aq, 25%, 4 ml) ble hydrogenert ved 60 bar i en høytrykks stålautoklave i nærvær av rutenium (5% på alumina, 439 mg). Når hydrogentrykket også er konstant (3 dager) ble katalysatoren fjernet fra reaksjonsblandingen ved filtrering. Katalysatoren ble vasket med etanol og vann og etanolet ble fjernet fra løsningen på en rotavapor og den vandige løsningen ble frysetørket og ga 3-piperidin-4-yl-propionsyre (4,30 g, 100%).

b) 4- f2- karboksv- etvlVpiperidin- 1 - karboksvisvre tert- butvlester

En løsning 3-piperdin-4-yl-propionsyre (4,79 g, 30,5 mmol), di-tert-butyl-dikarbonat

(6,98 g, 32,0 mmol) og NaHC03 (2,69 g, 32,0 mmol) i THF/vann (1:1,50 ml) ble omrørt ved romtemperatur i 22 timer. En annen porsjon di-tert-butyl-dikarbonat (2,00 g, 9,10 mmol) ble tilsatt sammen med en katalytisk mengde DMAP og den resulterende blandingen ble rørt i ytterligere 4 dager. THF ble fjernet under redusert trykk og den vandige fasen ble ekstrahert med CH2CI2. De vandige stoffene ble deretter surgjort i pH 2 med IM HC1 og syren ekstrahert med CH2C12. De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltvann, tørket og konsentrert i vakuum som ga 4-(2-karboksy-etyl)-piperidin-1-karboksylsyre tert-butyl ester som et hvitt fast stoff (6,36 g, 81%).

c) 4- f3- bensvlsulfanvl- 2- karboksv- propvn- piperidin- l- karboksvlsvre tert- butyl ester

BuLi (1,6 M, 15,3 ml, 24,4 mmol) ble tilsatt til en løsning av diisopropylamin (3,43 ml,

24,4 mmol) i THF (3 ml) ved -78°C under argon. Etter noen minutter ble løsningen varmet opp til romtemperatur i løpet av 15 minutter. Den resulterende LD A løsningen ble sakte tilsatt til en løsning av 4-(2-karboksy-etyl)-piperidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (3,07 g, 11,9 mmol) i THF (7 ml) ved -78*C. Den resulterende løsningen ble omrørt ved -78°C i 10 minutter og deretter ble THF (20 ml) tilsatt i løpet av den tiden for å løse opp anionet som hadde størknet. Dianonene ble avkjølt til -78°C og brommetyl tiobensyleter (2,72 g, 12,5 mmol) ble tilsatt som en løsning i THF (3 ml), løsningen ble rørt ved -78°C i 30 minutter, ved 0°C i 30 minutter og deretter varmet til romtemperatur og rørt over natten. Reaksjonsblandingen ble surgjort med IM HC1, fortynnet med EtOAc og den organiske fasen ble vasket med vann og tørket. Det urene produktet ble renset med flash kromatografi (MeOH/CHCb, 1:9) som ga 4-(3-bensyl-sulfanyl-2-karboksy-propyl)-piperidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester som en matt gul olje (3,12 g, 66%).

d) 4- f2- karboksv- 3- merkapto- propvD- piperidin- 1 - karboksylsyre tert- butvl ester

Natrium metall (513 mg, 22,5 mmol) ble tilsatt i porsjoner i løpet av 5 minutter til en

løsning av 4-(3-bensylsulfanyl-2-karboksy-propyl)-piperidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (0,9 g, 2,29 mmol) i THF (45 ml) og flytende ammoniakk (50 ml) ved -60°C under argon. Etter raring i 15 minutter ble ammonium klorid (1,7 g, 31,5 mmol) tilsatt i porsjoner. Kjølebadet ble fjernet og ammoniakken ble fordampet ved anvendelse av en strøm av argon. 0,5 M NaOH ble tilsatt og blandingen ble vasket med heptan. Den vandige fasen ble surgjort med 2M HC1 og ekstrahert med metylklorid. Den organiske fasen ble vasket med saltvann, tørket og konsentrert under redusert trykk som ga 4-(2-karboksy-3-merkapto-propyl)-piperidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (0,7 g, 100%).

e) 2- merkaptometvl- 3- piperidin- 4- vl- propionsvre

Til en løsning av 4-(2-karboksy-3-merkapto-propyl)-piperidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (0,7 g, 2,29 mmol) i metylen klorid (8 ml) under argon ble det tilsatt trietyl silan (731 ul, 4,58 mmol) fulgt av TFA (4 ml). Reaksjonsblandingen ble rørt i 60 minutter og deretter konsentrert under redusert trykk. Rensing med HPLC (10 ->• 30% asetonitril, 0,1% TFA i vann) ga tittelforbindelsen som TFA saltet (447 mg, 61%).

'H NMR (400 MHz, D20): 6 1,34-1,50 (m, 2H), 1,54-1,76 (m, 3H), 1,90-1,99 (m, 1H), 2,0-2,1 (m, 1H), 2,9-3,05 (m, 5H), 3,38-3,48 (m, 2H).

MS(+)204(M+1).

Eksempel 2

3-( 1 - asetvl- piperidin- 4- vlV2- merkaptometvl- propions vre

En løsning av 2-merkaptometyl-3-piperidin-4-yl-propionsyre TFA salt (0,1 g, 0,32 mmol) i eddiksyre anhydrid (2 ml) ble rørt over natten under argon og deretter konsentrert under redusert trykk. Rensing med HPLC (10 - > 50% asetonitril, 0,1% TFA i vann) ga tittelforbindelsen (63 mg, 80%).

<]>H NMR (500 MHz, CD3OD): 5 1,0-1,22 (m, 2H), 1,46-1,55 (m, 1H), 1,55-1,66 (m, 2H), 1,67-1,79 (m, 1H), 1,81-1,92 (m, 1H), 2,08 (s, 3H), 2,55-2,73 (m, 4H), 3,03-3,12 (m, 1H), 3,83-3,94 (m, 1H), 4,45-4,53 (m, 1H).

MS(+)246(M+1).

Eksempel 3

3- merkapto- 5- metvl- 2- pipeirdin- 4- vlmetvl- heksansvre

a) 4- hvdroksvmetvl- pipeirdin- 1 - karboksvisvre tert- butvlester

Til en løsning av 4-(hydroksymetyl)piperidin (5,00 g, 43,41 mmol THF/H20 (1:1,120

ml) ble tilsatt di-t-butyl dikarbonat (9,47 g, 43,41 mmol). Reaksjonsblandingen ble rørt i 16 timer ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble deretter helt over i H20 (500 ml) og ekstrahert med etyl acetat (3 x 250 ml). De organiske sjiktene ble kombinert og vasket med vann. Det organiske sjiktet ble tørket over natrium sulfat, filtrert og deretter konsentrert under redusert trykk som ga 4-hydroksymetyl-piperidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (9,01 g, 96%).

b) 4- brommetvl- piperidin- l- karboksvisvre tert- butvl ester

Til en løsning av 4-hydroksymetyl-piperidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (8,75 g,

40,64 mmol) i dietyl eter (200 ml) ble det ved 0°C under nitrogen tilsatt trifenyl fosfin (21,32 g, 81,28 mmol) og karbon tetrabromid (26,96 g, 81,28 mmol). Blandingen ble varmet til romtemperatur og rørt under nitrogen i 48 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom et lag av celite og det organiske filtratet ble vasket med 5% NaS2C*3, vann, saltvann og tørket. Blandingen ble filtrert og konsentrert under redusert trykk. Det urene produktet ble renset med kolonne kromatografi (etyl acetat/heksan, 1:9) som ga 4-brommetyl-piperidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (8,26 g, 73%).

c) 4- f2- tert- butoksykarbonvl- 2-( dietoksv- fosforvn- etvn- piperidin- 1 - karboksvisvre tert-butvl ester

tert-butyl dietylfosfonacetat (75,0 g, 297,32 mmol) ble tilsatt dråpevis til en suspensjon av natrium hydrid (8,03 g, 334,58 mmol) i DMF (450 ml) ved 0°C under nitrogen. Blandingen ble rørt ved 0°C i 0,5 timer og ved romtemperatur i 0,5 timer. 4-brommetyl-piperidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (20,68 g, 74,34 mmol) i DMF (50 ml) ble tilsatt dråpevis til reaksjonsblandingen og reaksjonen ble varmet til 60°C og rørt i 16 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur, helt over i H20 og ekstrahert med etyl acetat. De organiske sjiktene ble kombinert og vasket med vann. Det organiske sjiktet ble tørket, filtrert og konsentrert under redusert trykk. Det urene produktet ble renset med kolonne kromatografi (etyl acetat/heksan, 3:7) som ga 4-[2-tert-butoksykarbonyl-2-(dietoksy-fosforyl)-etyl]-piperidin-l-karboksylsyre tert-butyl

ester og ureagert t-butyl dietylfosfonoacetat. Produktet var 47% rent med HPLC. Produktet ble ytterligere renset med vakuum destillasjon og ga 77% renhet. Denne blandingen ble tatt med til neste reaksjon.

d) 4- f2- tetr- butoksvkarbonvl- 5- metvl- heks- 2- envlVpiperidin- 1 - karboksvisvre tert- butvl ester

4-[2-tert-butoksykarbonyl-2-(dietoksy-fosforyl)-etyl]-piperidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (8,1 g) i 20 ml DME ble tilsatt dråpevis til en suspensjon av natrium hydrid (1,04 g, 43,13 mmol) i DME (20 ml) ved 0°C under nitrogen. Blandingen ble rørt i 0,75 timer og isovaleraldehyd (7,76 g, 90,1 mmol) ble tilsatt dråpevis til blandingen. Blandingen ble varmet til romtemperatur og rørt i 48 timer. Blandingen ble fortynnet med eter og vasket med vann. Det organiske sjiktet ble tørket, filtrert og konsentrert under redusert trykk som ga 9,4 g av en gul olje. Det urene produktet ble renset med kolonne kromatografi (etyl acetat/heksan, 1:50) som ga 4-(2-tert butoksykarbonyl-5-metyl-heks-2-enyl)-piperidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (1,53 g, 24%) for to reaksjoner.

e) 4- r2- tert- butoksvkarbonvl- 3- f4- metoksv- bensvlsulfanvn- 5- metvl- heksvn- DiDeridin-1- karboksvisvre tert- butvl ester

En løsning av 4-(2-tert-butoksykarbonyl-5-metyl-heks-2-enyl)-piperidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (2,0 g, 5,24 mmol) i DMF (5 ml) ble tilsatt til en blanding av kalium karbonat (0,54 g, 3,93 mmol) og 4-metoksy-cc-toluentiol (1,17 g, 10,48 mmol) i DMF (50 ml) under nitrogen. Blandingen ble refluksert i 5 timer og avkjølt til romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble deretter helt over i H20 og ekstrahert med etyl acetat. Det organiske sjiktene ble kombinert og vasket med vann. Det organiske sjiktet ble tørket, filtrert og redusert under trykk som ga 3,76 g av urent materiale. Det urene produktet ble renset med kolonne kromatografi (etyl acetat/heksan, 1:10) som ga 4-[2-tert-butoksykarbonyl-3-(4-metoksy-bensylsulfanyl)-5-metyl-heksyl]-piperidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (1,77 g, 63%).

f) 3- merkapto- 5- metvl- 2- pipeirdin- 4- vlmetvl- heksansvre

En blanding av H20 (2,6 ml) og TFA (26 ml) ble frosset og deretter varmet til

romtemperatur under nitrogen. 4-[2-tert-butoksykarbonyl-3-(4-metoksy-bensyl-sulfanyl)-5-metyl-heksyl]-piperidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (2,62 g, 4,89 mmol)

ble tilsatt og blandingen ble refluksert i 16 timer. Blandingen ble avkjølt til romtemperatur og konsentrert under redusert trykk. Det urene produktet ble renset med omvendt-fase kolonne kromatografi (MeOH/H20,3:2) som ga tittelforbindelsen som TFA saltet (0,40 g, 22%).

<l>H NMR (300 MHz)(CD3OD) 8 0,88 (d), 0,94 (d,) 1,43 (m), 1,70 (br), 1,94 (m), 2,48 (m), 2,90 (m), 2,99 (br), 3,34 (m)

MS (+) 260,2 (M-TFA).

Eksempel 4

3- merkapto- 4- fenvl- 2- piperidin- 4- vlmetvl- smørsvre

a) 4-( 2- teit- butoksvkarbonvl- 4- fenyl- but- 2- envlVpipeirdin- l- karboksvlsvre tert- butvl ester

En løsning av 4-[2-tert-butoksykarbonyl-2-(dietoksy-fosforyl)-etyl]-piperidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (3,0 g) i DME (8 ml) ble tilsatt dråpevis til en suspensjon av natrium hydrid (0,26 g, 10,51 mmol) i DME (8 ml) ved 0°C under nitrogen. Blandingen ble rørt i 0,75 timer. Fenyl acetaldehyd (5,26 g, 43,81 mmol) ble dråpevis tilsatt til blandingen ved 0°C. Blandingen ble varmet til romtemperatur og rørt i 16 timer. Blandingen ble fortynnet med eter og vasket med vann. Det organiske sjiktet ble tørket, filtrert og konsentrert under redusert trykk som ga 8,6 g av en gul olje. Det urene produktet ble renset med kolonne kromatografi (etyl acetat/heksan, 1:50 —>■ 1:10) som ga 4-(2-tetr-butoksykarbonyl-4-fenyl-but-2-enyl)-piperidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (1,32 g, 62% utbytte) for to reaksjoner.

b) 4- [ 2- tert- butoksvkarbonvl- 3- f4- metoksv- bensvlsulfanvn- 4- fenvl- butvi] - piperidin- 1 - karboksvisvre tert- butvl ester

4- (2-tetr-butoksykarbonyl-4-fenyl-but-2-enyl)-piperidin-1 -karboksylsyre tert-butyl ester (0,8 g, 1,93 mmol) i DMF (10 ml) ble tilsatt til en suspensjon av kalium karbonat (0,20 g, 1,44 mmol) og 4-metoksy-a-tohientiol (0,54 ml, 3,85 mmol) i DMF (10 ml) under nitrogen. Blandingen ble oppvarmet til 75°C i 24 timer og avkjølt til romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble deretter helt over i H20 og ekstrahert med etyl acetat. De organiske sjiktene ble kombinert og vasket med vann. Det organiske sjiktet ble tørket, filtrert og konsentrert under redusert trykk som ga 1,8 g urent materiale. Det urene produktet ble renset med kolonne kromatografi (etyl acetat/heksan, 1:10) som ga 4-[2-

tert-butoksykarbonyl-3-(4-meto^ karboksylsyre tert-butyl ester (0,55 g, 50%).

c) 3- merkapto- 4- fenyl- 2- pipeirdin- 4- vlmetvl- srngrsvre

En blanding av H2O (0,65 ml) og TFA (6,5 ml) ble frosset og deretter varmet opp til

romtemperatur under nitrogen. 4-[2-tert-butoksykarbonyl-3-(4-metoksy-bensylsulfanyl)-4-fenyl-butyl]-piperidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (0,65 g, 1,14 mmol) ble tilsatt og blandingen ble refluksert i 16 timer. Blandingen ble avkjølt til romtemperatur og konsentrert under redusert trykk. Det urene produktet ble renset med omvendt-fase kolonne kromatografi (MeOH/H20,1:1) som ga tittelforbindelsen som TFA saltet (0,27 g, 58%).

'H NMR (300 MHz) (DMSO) 6 1,22 (m), 1,49 (m), 1,67 (br), 2,21 (d), 2,98 (m), 7,25 (m, 5H), 8,27 (br), 8,57 (br), 12,59 (br).

MS (+) 294,3 (M-TFA).

Eksempel 5

2- f2- amino- pvridin- 4- vlmetvlV3- merkapto- propionsvre

a) N-( 4- metyl- pvridin- 2- yD- acetarmd

2-amino-4-metylpyridin (99,0 g, 91,5 mmol) i eddiksyreanhydrid (250 ml) ble varmet

til 70°C 1 to timer. Blandingen ble avkjølt til romtemperatur og dietyleter (100 ml) ble tilsatt. Produktet krystalliserte som hvite nålkrystaller. Filtrering og tørking i vakuum ga N-(4-metyl-pyridin-2-yl)-acetamid (130 g, 95%).

b) 2- acetvlamino- isonikotinsvre

En blanding av N-(4-metyl-pyridin-2-yl)-acetamid (40,0 g, 0,26 mol) og vann (400 ml)

ble varmet ved 90°C til løsningen ble homogen. Kmn04 (100 g, 0,62 mol) ble tilsatt forsiktig 1 små porsjoner med kraftig mekanisk røring i løpet av to timer. Reaksjonsblandingen ble holdt ved 90-95°C i ytterligere 3 timer før filtrering gjennom Celite mens blandingen fremdeles var varm. Filtratet ble konsentrert til ca. 100 ml og konsentrert HC1 ble tilsatt for å justere pH til ca. 4. Reaksjonskolben ble avkjølt på isbad og det hvite faste stoffet filtrert fra. Krystallene ble vasket med kaldt vann og kloroform og tørket i vakuum som ga 2-asetylamino-isonikotinsyre (12,0 g, 25%).

c) 2- amino- isonikotinsyre etyl ester

2-acetylamino-isonikotinsyre (10,8 g, 60,0 mmol) ble suspendert i etanol (150 ml) og

BF30et2 (22 ml, 138 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble refluksert over natten og etter avkjøling til romtemperatur ble 10% NaHC03 (250 ml) tilsatt. Produktet ble ekstrahert med kloroform og de kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med vann og tørket. Filtrering og konsentrering ga 2-amino-isonikotinsyre etyl ester (7,46 g, 79%) som matte gule krystaller.

d) 2- fN. N- bisftert- butoksvkarbonynaminoVisonikotinsyre etyl ester

Til en løsning av 2-amino-isonikotinsyre etyl ester (5,00 g, 30 mmol) i t-BuOH (45 ml)

og aceton (15 ml) ble det tilsatt DM AP (50 mg, 0,41 mmol) og di-t-butyl dikarbonat (16,4 g, 75,0 mmol). Reaksjonen ble rørt ved romtemperatur over natten og heksan (60 ml) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble avkjølt i et kjøleskap i 3 timer og filtrert som ga 2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-isonikotinsyre etyl ester (8,71 g, 79%).

e) f4- hvdroksvmetvl- pvridin- 2- vlVkarbaminsvre tert- butvl ester

En løsning av 2-[N,N-bis(tetr-butoksykarbonyl)amino]-isonikotinsyre etyl ester (35,0 g,

95,5 mmol) i THF (350 ml) ble behandlet med LiAlH4 (7,25 g, 191 mmol) og refluksert i 1 time under nitrogen. Reaksjonsblandingen ble helt forsiktig over knust is og produktet ble ekstrahert flere ganger med CHC13 og CHCl3:MeOH (9:1). De kombinerte organiske ekstraktene ble tørket, filtrert og konsentrert under redusert trykk som ga (4-hydroksymetyl-pyridin-2-yl)-karbaminsyre tert-butyl ester (18,5 g, 86%) som et matt gult fast stoff.

f) f4- brommetvl- pvridin- 2- vn- karbaminsvre tert- butvl ester

(4-hydroksymetyl-pyridin-2-yl)-karbaminsyre tert-butyl ester (8,00 g, 35,6 mmol) ble

oppløst i CH2CI2 (150 ml) og behandlet med PPh3 (11,2 g, 42,8 mmol) under nitrogen. Reaksjonskolben ble avkjølt på isbad og CBr4 (14,2 g, 42,8 mmol) ble tilsatt i små porsjoner. Isbadet ble fjernet etter 30 minutter og reaksjonsblandingen ble rørt over natten ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble konsentrert under redusert trykk og acetonitril (50 ml) ble tilsatt. Reaksjonskolben ble plassert i et kjøleskap i 3 timer og presipitatet filtrert og vasket med kald acetonitril. Det hvite faste stoffet ble tørket i

vakuum som ga (4-brommetyl-pyridin-2-yl)-karbaminsyre tert-butyl ester (8,38 g, 82%).

g) 2- f2- tert- butoksvkarbonvlamino- p\ Tidin- 4- vlmetvn- malonsvre dietvl ester

Til en løsning av NaH (80%, 0,17 g, 4,00 mmol) i THF (5 ml) ved 0°C under argon ble

det tilsatt dietyl malonat (0,64 g, 4,00 mmol). Etter at blandingen var rørt i 15 minutter ble blandingen tilsatt til en refluksert blanding av 4-brommetyl-pyridin-2-yl)-karbaminsyre tert-butyl ester (1,00 g, 3,48 mmol) i THF (10 ml), og blandingen ble refluksert i 2 timer. Blandingen ble konsentrert under redusert trykk og residuet ble fordelt mellom vann og kloroform. Det organiske sjiktet ble vasket med vann og saltvann og tørket. Etter filtrering og fordamping av løsemidlet ble det urene produktet renset med flash kromatografi (MeOH/CHiCU, 1:100) som ga 2-(2-tert-butoksy-karbonylarnino-pyridin-4-ylmetyl)-malonsyre dietyl ester (0,80 g, 55%).

h) 2- f2- tert- butoksvkarbonvlamino- pvirdin- 4- vlmetvlVmalonsvremonoetvl ester

En løsning av KOH (0,19 g, 3,43 mmol) etanol (5 ml) ble tilsatt til en løsning av 2-(2-tert butoksykarbonylamino-pyridin-4-yhnetyl)-malonsyre dietyl ester (1,20 g, 3,27 mmol) i etanol (5 ml) og metylenklorid (5 ml) ved 0°C. Blandingen ble rørt i 18 timer ved romtemperatur. Blandingen ble konsentrert under redusert trykk og vann ble tilsatt til residuet. Det vandige sjiktet ble vasket med dietyleter, surgjort til pH 4 med IM HC1, og ekstrahert med metylenklorid. Det organiske sjiktet ble vasket med vann, saltvann og tørket. Etter filtrering og fordamping i vakuum ble det urene produktet renset med flash kromatografi (CH3OH/CH2CI2,1:20) som ga 2-(2-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-4-ylmetyl)-malonsyre monoetyl ester (0,90 g, 81%).

i) 2- r2- tert- butoksvkarbonvlamino- pvridin- 4- vlmetvlVakrvlsvre etvl ester

En løsning av dietylamin (0,26 g, 2,67 mmol) i metylen klorid (4 ml) ble tilsatt til en blanding av 2-(2-tert-butoksykarbonylamino-pyirdin-4-ylmetyl)-malonsyre monoetyl ester (0,90 g, 2,66 mmol) og 37% vandig løsning av formaldehyd (0,24 g, 3,00 mmol) ved 0°C. Blandingen ble rørt i 5 timer ved romtemperatur og blandingen ble helt over i isvann og ekstrahert med metylklorid. Det organiske sjiktet ble vasket med 5% NaHCC>3 og tørket. Det urene produktet ble renset med flash kromatografi (1% metanol i CH2CI2) som ga 2-(2-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-4-ylmetyl)-akrylsyre etyl ester (0,58 g, 71%).

j) 2- acetvlsulfanylmetyl- 3-( 2- tetr- butoksvkarbonvlamino- pvrid^

etyl ester

En løsning av 2-(2-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-4-ylmetyl)-akrylsyre etyl ester (0,48 g, 1,57 mmol) og trietylamin (0,17 g, 1,64 mmol) ble tilsatt til tioeddiksyre (3 ml) ved 0°C under nitrogen. Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 4 timer. Blandingen ble helt over i isvann og ekstrahert med CH2CI2. Den organiske fasen ble vasket med mettet NaHC03 (aq.) og tørket. Det urene produktet ble renset med flash kromatografi (2,5% MeOH i CH2CI2) som ga 2-acetylsulfanylmetyl-3-(2-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-4-yl)propionsyre etyl ester (0,60 g, 100%).

k) 2- acetvlsulfanvlmetvl- 3- f2- amino- pvridin- 4- vn- propionsvre etvl ester

TFA (0,5 ml) ble tilsatt til en løsning av 2-acetylsulfanylmetyl-3-(2-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-4-yl)-propionsyre etyl ester (50 mg, 0,13 mmol) i metylenklorid under argon. Løsningen ble rørt i 60 minutter og konsentrert under redusert trykk som ga urent 2-acetylsulfanylmetyl-3-(2-amino-pyridin-4-yl)-propionsyre etyl ester (52 mg, 100%).

'H NMR (500 MHz, CD3OD3): 8 1,15 (t, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,73-2,83 (m, 2H), 2,86-2,93 (m, 1H), 3,01-3,07 (dd, 1H), 3,12-3,18 (dd, 1H), 4,03-4,12 (m, 2H), 6,39 (s, 1H), 6,43 (d, 1H), 7,77 (d, 1H).

1) 2- f2- amino- pvridin- 4- vlmetvlV3- merkapto- propionsvre

2-acetylsulfanylmetyl-3-(2-amino-pyridin-4-yl)-propionsyre etyl ester (52 mg, 0,13 mmol) ble oppløst i konsentrert HC1 (2 ml) under argon. Løsningen ble varmet til refluks i 1 time. Konsentrasjonen under redusert trykk ga tittelforbindelsen som hydrokloridsaltet (32 mg, 100%).

<*>H NMR (500 MHz, CD3OD): 8 2,70 (bs, 2H), 2,85-3,0 (m, 3H), 6,76 (s, 1H), 6,81 (bs, 1H), 7,67(bs,lH).

MS(+)213(M+1).

Eksempel 6

3-( 6- amino- pvridin- 3- vn- 2- merkaptometyl- propionsvre

a) 6- amino- nikotinsvre etvl ester

2-amino-S-pyridinkarboksylsvre (25,0 g, 181 mmol) ble suspendert i etanol (190 ml) og

SOCh (15 ml, 206 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble refluksert i 10 timer og mer SOCl2 (16 ml) ble tilsatt. Etter 3 dager med re fluks (og mer S0C12 (10 ml) tilsatt hver dag) ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur og dietyleter ble tilsatt. Etter 24 timer

ved -20°C ble blandingen filtrert. Det urene saltet ble løst i metanol (214 ml) og løsningen av NaOH (40,0 g, 23,5 mmol) i etanol (90 ml) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble rørt i 1 time og THF (270 ml) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom en plugg av silika (THF/MeOH) og konsentrert under redusert trykk som ga 6-amino-nikotinsyre etyl ester (36,2 g, 97%).

b) 6- tert- butoksvkarbonvlamino- nikotinsvre etvl ester

Til en løsning av 6-amino-nikotinsyre etyl ester (36,0 g, 217,0 mmol) i t-BuOH (308

ml) og aceton (103 ml) ble tilsatt DMAP (0,53 g, 4,34 mmol) og di-t-butyl dikarbonat (72,0 g, 330 mmol). Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 10 timer fulgt av tilsetting av mer di-t-butyl dikarbonat (2,60 g). Etter 10 timers røring ved romtemperatur ble heksan (470 ml) tilsatt. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til -20°C i 2 timer og filtrert. Filtratet ble vasket med heksan/diklormetan (3:1) og tørket i vakuum som ga 6-tert-butoksyl<^bonylamino-nikotinsyre etyl ester (40,5 g, 70%).

c) ( 5- hvdroksvmetvl- pvridin- 2- vlVkarbaminsvre tert- butvl ester

Til en rørt løsning av 6-tert-butoksykarbonylamino-nikotinsyre etyl ester (3,50 g, 13,1

mmol) i THF (20 ml) under nitrogen ble det tilsatt LiAlH4 (0,91 g, 24,0 mmol) i THF (20 ml) i løpet av 2 timer. Reaksjonsblandingen ble rørt i 6 timer og deretter ble NH4CI (mettet) tilsatt (forsiktig) til nøytral løsning. Blandingen ble filtrert og konsentrert under redusert trykk som ga (5-hydroksymetyl-pyridin-2-yl)-karbaminsyre tert-butyl ester (2,00 g, 68%).

5- brorrmietyl- pyridin- 2- vn- karbarninsvre tert- butvl ester

Trifenylfosfin (8,70 g, 33,1 mmol) og karbontetrabromid (17,0 g, 51,2 mmol) ble tilsatt til en suspensjon av (5-hydroksymetyl-pyridin-2-yl)-karbaminsyre tert-butyl ester (7,00 g, 31,2 mmol) i CH2CI2 (200 ml) ved romtemperatur. Røringen fortsatte i 5 timer fulgt av fordampning av løsemidlet. Acetonitril (200 ml) ble tilsatt og blandingen ble avkjølt til -20°C i 2 timer. Blandingen ble deretter filtrert og det krystallinske residuet ble vasket med kald acetonitril (2x10 ml) som ga (5 -brommetyl-pyridin-2-yl)-karbaminsyre tert-butyl ester (5,96 g, 67%).

d) 2- f6- tert- butoksykarbonvlamino- pvridin- 3- vlmetvlVmalonsyre dietyl ester

Til en suspensjon av NaH (0,49 g, 16,3 mmol, 80%) i THF (15 ml) ble det ved 0°C

tilsatt dimetylmalonat (2,61 g, 16,3 mmol). Blandingen ble rørt i 15 minutter og ble deretter tilsatt dråpevis til en refluksert blanding av (5-brommetyl-pyridin-2-yl)-karbamin syre tert-butyl ester (3,90 g, 13,6 mmol) i THF (25 ml), og den resulterende løsningen ble refluksert i 15 minutter. Etter fordampning av løsemidlet ble det urene produktet renset med flash kromatografi (metanol/C^Ch, 1:100 —> 2,5:100) som ga 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-malonsyre dietyl ester (2,18 g, 44%).

e) 2- f6- tetr- butoksvkarbonvlamino- pyirdin- 3- ylmetvlVmalonsvre monoetyl ester

En løsning av KOH (0,37 g, 6,54 mmol) i etanol (5 ml) ble tilsatt til en løsning av 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-malonsyre dietyl ester (2,18 g, 5,95 mmol) i etanol (25 ml) og metylen klorid (10 ml) ved 0°C. Blandingen ble rørt i 18 timer ved romtemperatur. Blandingen ble konsentrert under redusert trykk og residuet løst i vann. Det vandige sjiktet ble vasket med eter, surgjort til pH 4 med IM HCI og ekstrahert med metylenklorid. Det organiske sjiktet ble vasket med vann, saltvann og tørket. Etter filtrering og konsentrering under redusert trykk ble det urene produktet renset med flash kromatografi (metanol/CH2Cl2,1:20) som ga 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-malonsyre monoetyl ester (1,00 g, 50%).

f) 2-( 6- tert- butoksvkarbonvlamino- pvridin- 3- vlmetvn- akrvlsvre etyl ester

Dietylamin (0,29 g, 3,00 mmol), vann (2 ml) og metylenklorid (2 ml) ble tilsatt til en

blanding av 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-malonsyre mono-etyl ester (1,00 g, 2,96 mmol) og 37% vandig løsning av formaldehyd (0,25 g, 3,05 mmol)

ved 0°C. Blandingen ble rørt i 16 timer ved romtemperatur og deretter helt over i isvann og ekstrahert med metylenklorid. Det organiske sjiktet ble vasket med 5% NaHC03 og tørket. Filtrering og konsentrering under redusert trykk ga 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-akrylsyre etyl ester (0,75 g, 83%).

g) 2- acetvlsulfanvlmetvl- 3- f6- tert- butoksvkarbonvlamino- p\ ddin- 3- vn- propionsvre etvl ester

2-(64ert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-akrylsyre etyl ester (0,49 g, 1,60 mmol) og trietylamin (0,17 g, 1,64 mmol) ble tilsatt til tioeddiksyre (3 ml) ved 0°C. Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 6 timer. Blandingen ble helt over i isvann og ekstrahert med CH2CI2. Den organiske fasen ble vasket med mettet NaHCOs og tørket. Det urene produktet ble renset med flash kromatografi (MeOH/Cr^Ch, 2,4:100) som ga 2-acetylsulfanylmetyl-3-(64ert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-propionsyreetyl ester (0,36 g, 61%).

h) 2- acetvlsulfanvlmetvl- 3-( 3- amino- pvridin- 3- yn- propionsvre etvl ester

TFA (0,5 ml) ble tilsatt til en løsning av 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-tetr-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-propionsyre etyl ester (100 mg, 0,26 mmol) i metylenklorid (2 ml) under argon. Løsningen ble rørt i 60 minutter og konsentrert under redusert trykk som ga urent 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-amino-pyridin-3-yl)-propion syre etyl ester (104 mg, 100%).

<!>H NMR (500 MHz, CD3OD): 5 1,21 (t, 3H), 2,33 (s, 3H), 2,78-2,97 (m, 3H), 3,05-3,13 (m, 1H), 3,14-3,21 (m, 1H), 4,08-4,15 (m, 2H), 6,99 (d, 1H), 7,69 fs, 1H), 7,85 (d, 1H).

i) 3- f6- amino- pvridin- 3- vlV2- merkaptometvl- propionsvre

2-aætylsulfanylmetyl-3-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-propionsyreetyl ester (38 mg, 0,096 mmol) ble løst i konsentrert HC1 (2,0 ml) under argon. Løsningen ble rørt ved romtemperatur i 1 time og varmet til refluks i 1 time. Konsentrering under redusert trykk ga tittelforbindelsen (25,7 mg, 100%) som hydrokloridsaltet.

<*>H NMR (500 MHz, CD3OD): 5 2,74-2,78 (m, 2H), 2,84-2,94 (m, 3H), 7,02 (d, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,89 (d, 1H).

MS (+) 213 (M+l).

Eksempel 7

3- f6- amino- pvirdin- 3- vn- 2- merkaptometyl- 2- metvl- propionsvre

a) 2-( 6- tert- butoksykarbonvlamm^ ester etvl ester

En løsning av tert-butyl etyl metylmalonat (457 mg, 2,26 mmol) i DMF (4 ml) ble dråpevis tilsatt til en suspensjon av NaH (90 mg, 2,26 mmol, 60% i olje) i DMF (4 ml). Reaksjonsblandingen ble rørt i 20 minutter. En løsning av (5-brommetyl-pyridin-2-yl)-karbaminsyre tert-butyl ester (500 mg, 1,74 mmol) i DMF (2,5 ml) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble rørt i 70 minutter. EtOAc ble tilsatt og blandingen ble vasket med vann og saltvann og tørket og konsentrert under redusert trykk. Kromatografi (heptan/EtOAc, 3:1 -> 1:3) ga 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-2-metyl-malonsyre tert-butyl ester etyl ester (437 mg, 61% utbytte).

b) 2- f6- tert- butoksvkarbonvlamino- pvridin- 3- vlmetvlV2- metvl- malonsvre mono- tert-butvl ester

IM NaOH (2 ml) ble tilsatt til en løsning av 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-2-metyl-malonsyre tert-butyl ester etyl ester (0,42 g, 1,03 mmol) i THF/EtOH (4 ml, 1:1). Reaksjonsblandingen ble rørt ved 50°C i 16 timer. CH2CI2 ble tilsatt og blandingen ble vasket med 0,5 M HC1 og saltvann og tørket. Konsentrering under redusert trykk ga 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-2-metyl-malonsyre mono-tert butyl ester (348 mg, 89%).

c) 3- r6- tetr- butoksvkarbonylamino- pvridin- 3- vn- 2- hydroksymetyl- 2- metvl-propionsvre tert- butvl ester

Metyl kloroformat (75 p.1,0,92 mmol) ble tilsatt dråpevis til en løsning av 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-2-metyl-malonsyremono-tert-butyl ester (348 mg, 0,915 mmol) og Et3N (123 ul, 0,92 mmol) i THF (6 ml). Reaksjonsblandingen ble rørt i 20 minutter, filtrert og tilsatt dråpevis til en suspensjon av NaBHt (39 mg, 1,04 mmol) i THF (6 ml) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble rørt 16 timer ved romtemperatur. 0,2 M HC1 ble tilsatt fulgt av EtOAc. Den organiske fasen ble vasket med saltvann og tørket. Konsentrering under redusert trykk fulgt av kromatografi

(toluen/EtOAc, 3:1 -» l:3)ga3-(6-tetr-butoksykarbonylammo-pyirdin-3-yl)-2-hydroksymetyl-2-metyl-propionsyre tert-butyl ester (190 mg, 57%).

d) 2- acetvlsulfanvlmetvl- 3- f6- tert- butoksvkarbonvlamino- pvridin- 3- vlV2- meWl-propionsvre tert- butvl ester

Dietyl azodikarboksylat (160 ul, 1,01 mmol) ble tilsatt dråpevis til en løsning av 3-(6-tert-butokosykarbonylamino-pyirdm-3-yl)-2-hydroksymetyl-2-metyl-propionsyre tert-butyl ester (180 mg, 0,49 mmol) og trifenylfosfm (266 mg, 1,01 mmol) i THF (6 ml) og reaksjonen ble rørt i 5 minutter. Tioleddiksyre (96 pl, 1,34 mmol) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble rørt i 16 timer. Konsentrering under redusert trykk fulgt av kromatografi (toluen/EtOAc, 10:1 —> l:l)ga2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-metyl-propionsyre tert-butyl ester (137 mg, 65%).

e) 3- f6- amino- pvridin- 3- vn- 2- merkaptometvl- 2- metvl- propionsvre

2-acetylsulfanybnetyl-3-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyirdin-3-yl)-2-metyl-propionsyre tert-butyl ester (4 mg, 9,4 umol) ble oppløst i konsentrert HC1 under argon. Løsningen ble varmet til refluks i 1 time. Konsentrering under redusert trykk ga tittelforbindelsen som hydrokloridsalt (2,5 mg, 100%).

'H NMR (500 MHz, CD3OD): 6 1,20 (s, 3H), 2,62 (d, 1H), 2,76-2,83 (m, 2H), 2,95 (d, 1H), 6,94 (d, 1H), 7,64 (d, 1H), 7,80 (dd, 1H).

MS(+)227(M+1).

Eksempel 8

2-( 6- amino- pvirdin- 3- vlmetvn- 2- merkaptometvl- smørsvre

a) fS- fS- etvl^^- dimetvl^. e- diokso- ri. Sldioksan- S- vlmetvn- pvridin^- vll-karbaminsvre tert- butvl ester

(5-brommetyl-pyridin-2-yl)-karbaminsyre tert-butyl ester (1,0 g, 3,48 mmol) ble tilsatt til en løsning av 2,2-dimetyl-5-etyl-l,3-dioksan-4,6-dione (600 mg, 3,48 mmol) og trietylamin (0,5 ml, 3,66 mmol) i dimetyl sulfoksid (40 ml) under nitrogen. Reaksjonsblandingen ble rørt over natten og vann (100 ml) ble tilsatt. Filtrering av presipitatet ga [5-(5-etyl-2,2-dimetyl-4,6-diokos-[ 1,3 ]dioksan-5 -ylmetyl)-pyridin-2-yl]-karbaminsyre tert-butyl ester (1,15 g, 87%).

b) 2-( 6- tert- butoksvkarbonyl^ ester

En løsning av natriummetall (140 mg, 6,08 mmol) i etanol (20 ml) ble tilsatt til en løsning av [5-(5-etyl-2,2-dimetyl-4,6-diokso-[ 1,3] dioksan-5-ylmetyl)-pyridin-2-yl] - karbaminsyre tert-butyl ester (1,15 g, 3,04 mmol) i etanol (10 ml). Reaksjonen ble rørt i 90 minutter og metylenklorid ble deretter tilsatt. Blandingen ble vasket med 0,5M HC1, tørket og konsentrert under redusert trykk som ga 2-(6-tert-butoksy-karbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-2-etyl-malonsyre monoetyl ester (1,05 g, 95%).

c) 2- f6- tert- butoksvkarbonvlamino- pvridin- 3- vlmetvlV2- hvdroksymetvl- smørsvre etvl ester

Metyl kloroformat (150 fil, 1,95 mmol) ble dråpevis tilsatt til en løsning av 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-2-etyl-malonsyre monoetyl ester (700 mg, 1,91 mmol) og Et3N (275 ul, 1,97 mmol) i THF (15 ml) ved -20°C under nitrogen. Reaksjonsblandingen ble rørt i 50 minutter, filtrert og dråpevis tilsatt til en suspensjon av NaBH* (80 mg, 2,1 mmol) i THF (15 ml) ved -20°C. Reaksjonen ble rørt i 16 timer ved romtemperatur. 0,2 M HC1 ble tilsatt fulgt av metylenklorid. Den organiske fasen ble vasket med saltvann og tørket. Konsentrering under redusert trykk fulgt av kromatografi (toluen/EtOAc, 3:1 1:3) ga 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-2-hydroksymetyl-smørsyre etyl ester (300 mg, 45%).

d) 2- acetvlsulfanvlmetvl- 2- f6- tetr- butota^ etvl ester

Diisopropyl azodikarboksylat (296 ul, 1,53 mmol) ble dråpevis tilsatt til en løsning av trifenylfosfin (402 mg, 1,53 mmol) i THF (4 ml) ved 0oC under argon og reaksjonsblandingen ble rørt i 30 minutter. En løsning av tioleddiksyre (109 ml, 1,53 mmol) og 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-2-hydroksymetyl-smørsyreetyl ester (0,27 g, 0,77 mmol) i THF (2 ml) ble dråpevis tilsatt i løpet av 10 minutter. Reaksjonen ble rørt i 60 minutter ved 0°C og deretter i 16 timer ved romtemperatur. Konsentrering under redusert trykk fulgt av kromatografi (heptan/EtOAc, 10:1 —> 1:1) ga2-acetylsulfanylmetyl-2-(6-tert-butotø^ etyl ester (193 mg, 61%).

e) 2-( 6- amino- pvirdin- 3 - vlmetvlV2- merkaptometvl- smørsyre

2- acetylsulfanylmetyl-2-(6-tert-butoksykarbo

etyl ester (12,3 mg, 30 umol) ble løst i konsentrert HC1 (2 ml) under argon. Løsningen ble varmet til refluks i 24 timer. Konsentrering under redusert trykk ga tittelforbindelsen som hydrokloirdsaltet (8,3 mg, 100%).

'H NMR (500 MHz, CD3OD): 6 0,91 (t, 3H), 1,71 (m, 2H), 2,68 (m, 2H), 2,92 (m, 2H), 6,96 (d, 1H), 7,65 (bs, 1H), 7,82 (dd, 1H).

MS (-) 239 (M-l).

Eksempel 9

3- f6- amino- 5- metvl- pvridin- 3- vn- 2- merkaptometvl- 2- metyl- propionsvre

a) 2- fN. N- bisftert- butoksvkarbonvl' lamino1- 3- metvl- 5-( 2. 2. 5- trimetvl- 4. 6- diokso-f 1. 31dioksan- 5- vlmetvlVpvridin

2- [N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-brommetyl-3-metyl-pyridin (1,6 g, 4,0 mmol) ble tilsatt til en løsning av 2,2,5-tirmetyl-l,3-dioksan-4,6-dion (630 mg, 4,0 mmol) og trietylamin (0,58 ml, 4,2 mmol) i dimetyl sulfoksid (40 ml). Reaksjonsblandingen ble rørt over natten og vann (100 ml) ble tilsatt. Blandingen ble ekstrahert med EtOAc, de kombinerte organiske fasene ble vasket med vann og saltvann og tørket. Konsentrering under redusert trykk ga urente 2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-3- metyl-5-(2,2,5-trimetyl-4,6-diokso-[ 1,3]dioksan-5-ylmetyl)-pyridin (2,06 g).

b) 2-( r6- fN. N- bisftert- butoksvkarobnvl) amino1- 5- metvl- pvridin- 3- vlmetvlV2- metvl-malonsvre monoet<y>l ester

En løsning av natriummetall (184 mg, 8,0 mmol) i etanol (20 ml) ble tilsatt til en løsning av urent 2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-3-metyl-5-(2,2,5-trimetyl-4,6-diokso-[l,3]dioksan-5-ylmetyl)-pyridin (2,06 g, ~4,0 mmol) i etanol (20 ml) under argon. Reaksjonen ble rørt i 60 minutter og metylenklorid ble deretter tilsatt. Blandingen ble vasket med 0,5 M HC1 og saltvann, tørket og konsentrert under redusert trykk som ga urent 2-(6-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-metyl-pyridin-3-ylmetyl)-2-metyl-malonsyre monoetyl ester (1,9 g).

c) 3-( 6- rN. N- bis( tert- butoksvk^ 2- metvl- propionsvre etvl ester

Metyl kloroformat (338 ul, 4,4 mmol) ble dråpevis tilsatt til en løsning av urent 2-(6-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-metyl-pyridin-3-ylmetyl)-2-metyl-malonsyre monoetyl ester (1,9 g) og Et3N (641 ul, 4,6 mmol) i THF (30 ml) ved -20°C. Reaksjonsblandingen ble rørt i 50 minutter, filtrert og dråpevis tilsatt til en suspensjon av NaBH4 (182 mg, 4,8 mmol) i THF (30 ml) ved -20°C. Reaksjonsblandingen ble rørt i 16 timer ved romtemperatur. 0,5 M HC1 ble tilsatt fulgt av metylenklorid. Den organiske fasen ble vasket med saltvann og tørket. Konsentrering under redusert trykk fulgt av kromatografi (toluen/EtOAc, 10:1 -» 1:3) ga 3-(6-[N,N-bis(tert-butoksy-kaibonyl)-amino]-5-metyl-pyridin-3-yl)-2-hydroksymetyl-2-metyl-propionsyreetyl ester (885 mg, 49%).

d) 2- acetvlsulfanvlmetyl- 3- f6- fN. N- bisftetr- butoksvkarbonvnamino1- 5- metvl- pvridin-3- ylV2- metyl- propionsvre etvl ester

Diisopropyl azodikarboksylat (775 fil, 3,91 mmol) ble tilsatt dråpevis til en løsning av trifenylfosfin (1,026 g, 3,91 mmol) i THF (10 ml) ved 0°C og reaksjonsblandingen ble rørt i 30 minutter. En løsning av tioleddiksyre (279 ul, 3,91 mmol) og 3-(6-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-metyl-pyridin-3-yl)-2-hydroksymetyl-2-metyl-propionsyre etyl ester (885 mg, 1,96 mmol) i THF (5 ml) ble tilsatt dråpevis i løpet 10 minutter. Reaksjonsblandingen ble rørt i 60 minutter ved 0°C og deretter i 16 timer ved romtemperatur. Konsentrasjon under redusert trykk fulgt av kromatografi (heptan/EtOAc, 10:1 - > 1:3) ga urent 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-[N,N-bis(tert-butoksy karbonyl)amino]-5-metyl-pyridin-3-yl)-2-metyl-propionsyre etyl ester (1,46 g).

e) 2- acetvlsulfanvlmetvl- 3- f6- amino- 5- metvl- pvridin- 3- ylV2- metvl- Dropionsvreetvl ester

Urent 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-metylpyridin-3-yl)-2-metyl-propionsyre etyl ester (1,46 g) ble løst i TFA (5 ml) og rørt i 60 minutter. Konsentrasjon under redusert trykk fulgt av kromatografi (toluen/EtOAc, 1:1 -> 1:10 -» 0:1) ga noe urent 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-amino-5-metyl-pyridin-3-yl)-2-metyl-propionsyre etyl ester (696 mg, 84%).

f) 3-( 6- amino- 5- metvl- pvridinO

2- acetylsulfanylmetyl-3-(6-ammo-5-metyl-py^ etyl ester

(17 mg, 40 umol) ble løst i konsentrert HC1 (2 ml) under argon. Løsningen ble varmet til refluks i 150 minutter. Konsentrering under redusert trykk ga tittelforbindelsen som hydrokloridsaltet (10,7 mg, 96%).

fH NMR (500 MHz, CD3OD): 8 1,20 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,61 (d, 1H), 2,79 (2d, 2H), 2,94 (d, 1H), 7,55 (m, 1H), 7,69 (m, 1H).

MS(+)241 (M+l).

Eksempel 10

3- merkapto- 2- ffpiperidin- 4- karbonvlVamino1- propionsvre

CH2CI2 (70 ml) ble tilsatt til 4-metoksytrityl klorid harpiks (7 g, L=0,91 mmol/g, 6,37 mmol) under argon og harpiksen svellet i 10 minutter og 2-amino-3-merkapto-propionsyre etyl ester HCl-salt (5,9 g, 32 mmol) ble tilsatt. TFA (70 ml) ble deretter tilsatt i små porsjoner i løpet av 10 minutter. Slurrien ble ristet ved romtemperatur i 1 time og konsentrert under redusert trykk. Deretter ble nesten tørr toluen (150 ml) tilsatt og blandingen ble igjen konsentrert under redusert trykk. Denne fremgangsmåten ble gjentatt to ganger. Den nå gule harpiksen ble vasket med DMF (3 x 60 ml), CH2C12 (2 x 60 ml), TFA:CH2C12 (1:1,2 x 60 ml), CH2C12 (2 x 60 ml), MeOH (2 x 60 ml) og tørket under vakuum over natten.

For å beregne tilsettingen av 2-amino-3-merkapto-propionsyre etyl ester til harpiksen ble 50 mg av produktet behandlet med 10% TFA i CH2CI2 i 1 minutt og denne fremgangsmåten ble gjentatt fire ganger. Blandingen ble konsentrert under redusert trykk som ga 2-amino-3-merkapto-propionsyre etyl ester (9,8 mg), som indikerer en tilsetting på ca. 0,6 mmol/g.

En løsning av piperidin-l,4-dikarboksylsyre mono-tert-butyl ester (28 mg, 0,12 mmol) i DMD (1 ml) ble tilsatt til harpiksen (100 mg, L = 0,6 mmol/g, 0,06 mmol) i en plastikk sprøyte, fulgt av PyBOP (62 mg, 0,12 mmol) i DMF (0,5 ml) og DIPEA (41 ul, 0,24 mmol). Reaksjonen ble værende ved romtemperatur i 2 timer med tilfeldig røring og fremgangsmåten ble gjentatt en gang til. Harpiksen ble deretter vasket med DMF (2x2 ml), CH2CI2 (2x2 ml), MeOH (2x2 ml), CH2C12 (2x2 ml) og THF (2x2 ml).

THF (800 ul) ble tilsatt til sprøyten og harpiksen ble svellet i 10 minutter. Deretter ble vann (250 ml) og 10 M NaOH (50 ul) tilsatt. Reaksjonsblandingen ble stående ved romtemperatur i 16 timer med tilfeldig raring. Harpiksen ble deretter vasket med THF:vann (1:1,2x2 ml), THF (2x2 ml), CH2C12 (2x2 ml), MeOH (2x2 ml), og CH2C12 (2x2 ml).

10% TFA i CH2C12 (1 ml) ble tilsatt til sprøyten og etter 5 minutter ble løsningen samlet opp i et tarert glass. Denne fremgangsmåten ble gjentatt en gang til og de kombinerte organiske fasene ble konsentrert under redusert trykk og ga tittelforbindelsen som TFA salt (15,3 g, 74%).

<3>H NMR (500 MHz, CD3OD): 6 1,85-2,10 (m, 4H), 2,65-2,72 (m, 1H), 2,85-2,92 (m, 1H), 2,95-3,08 (m, 3H), 3,40-3,47 (m, 2H), 4,55-4,60 (m, 1H).

Eksempel 11

2 - \( azetidm- 2- karbonvlV amino] - 3 - merkapto- propionsvre

Tittelforbindelsen ble fremstilt fra azetidin-l,2-dikarboksylsyre 1-tert-butyl ester ved fremgangsmåten beskrevet i eksempel 14. Utbytte: 13,8 mg (72%).

<]>H NMR (500 MHz, CD3OD): 8 2,54-2,63 (m, 1H), 2,82-3,05 (m, 3H), 3,93-4,15 (m, 2H), 4,66-4,71 (m, 1H), 5,05-5,10 (m, 1H).

Eksempel 12

3- merkapto- 2-[ fpiperidin- 3- karbonvlVamino]- propionsvre

Tittelforbindelsen ble fremstilt frapiperidin-l,3-dikarboksylsyre 1-tert-butyl ester ved fremgangsmåten beskrevet i eksempel 14. Utbytte: 15,1 mg (73%).

'H NMR (500 MHz, CD3OD): 8 1,73-2,10 (m, 4H), 2,84-2,92 (m, 2H), 2,95-3,14 (m, 2H), 3,15-3,29 (m, 3H), 4,56-4,62 (m, 1H).

Eksempel 13

2- rfazetidin- 3- karbonvl' >- amino1- 3- merkapto- propionsvre

Tittelforbindelsen ble fremstilt fra azetidin-l,3-dikarboksylsyre mono-tert-butyl ester ved fremgangsmåten beskrevet i eksempel 14. Utbytte: 13,5 mg (71%).

'H NMR (500 MHz, CD3OD): 8 2,86-3,02 (m, 2H), 3,72-3,80 (m, 1H), 4,20-4,24 (d, 4H), 4,62-4,67 (m, 1H).

Eksempel 14

3- f6- amino- 5- metvl- pvridin- 3- vlV2- merkaptometvl- propionsvre

a) 5- brom- 2- fN, N- bis( tert- butoksvkarbonvnamino1- 3- metvl- pvridin

2-amino-5-brom3-metylpyridin (15,0 g, 80,2 mmol) i tert-butanol ble behandlet med di-tert-butyl dikarbonat (43,6 g, 200 mmol) og DMAP (0,60 g, 4,91 mmol). Reaksjonsblandingen ble værende ved omgivelsestemperatur over natten og ble deretter konsentrert under redusert trykk. Heksan ble tilsatt og produktet ble presipitert som et fast stoff. Filtrering ga 5-brom-2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-3-metylpyridin(22,0g,71%).

b) 2- fN. N- bis( tert- butoksvkarbonvl) amino1- 5- ftert- butvl- dimetvl- silanvlmetyl)- 3-metvlpvridin

En løsning av 5-brom-2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-3-metyl-pyridin (26,0 g, 67,1 mmol), tert-butyl-dimetyl-tributylstannanylmetoksy-silan (47,6 g, 109 mmol) og bis(trifenylfosifn)palladium(II) diklorid (0,90 g, 1,42 mmol) i 1,2-dikloretan (80 ml) og rørt ved 90°C i to dager. Blandingen ble avkjølt til 0°C og dietyl eter (200 ml) ble tilsatt fulgt av mettet vandig kalium fluorid (40 ml). Blandingen ble rørt kraftig i 30 minutter og filtrert. Den organiske fasen ble vasket med vann, tørket og konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi (heksan/EtOAc, 100:0 - > 95:5) ga 2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-(teit-butyl-dimetyl-silanyloksymetyl)-3-metylpyridin(18,0 g, 59%).

c) 2- fNtN- bis( tert- butoksvkarbonvl) amino1- 5- hvdroksvmetvl- 3- metvlpvridin

Tetrabutylammonium fluorid (25,1 g, 79,6 mmol) ble tilsatt til en løsning 2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-(tert-butyl-dimetyl-silanyloksymetyl)-3-metylpyridin (18,0 g, 39,8 mmol) i THF (150 ml). Reaksjonsblandingen ble rørt over natten ved romtemperatur. Konsentrasjon under redusert trykk fulgt av flash kromatografi (Heksan/EtOAc, 50:50) ga 2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-hydroksymetyl-3-metylpyridin (8,0 g, 59%).

d) 5- brommetvl- 2-[ N. N- bisftert- butoksvkarbonvl) aminoV3- metvlpvridin

Trifenylfosfin (7,43 g, 28,3 mmol) og CBr4 (9,49 g, 28,6 mmol) ble tilsatt til en løsning

av 2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-hydroksymetyl-3-metylpyridin (8,00 g, 23,6 mmol) i diklormetan (220 ml) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble rørt i 3 timer og deretter konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi (heksan/EtOAc, 80:20) ga 5-brornmetyl-2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-3-metylpyridin (8,0 g, 77%).

e) 2-( 6- fN. N- bisrtert- butoksvkarto dietvlester

Til en suspensjon av NaH (0,24 g, 6,0 mmol, 60%) i DMF (5 ml) ble det tilsatt dietyl malonat (0,91 ml, 6,0 mmol) og blandingen ble rørt i 15 minutter. En løsning av 2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-brommetyl-3-metyl-pyridin (2,0 g, 5,0 mmol) i DMF (5 ml) ble tilsatt og den resulterende løsningen rørt i 120 minutter ved 60°C. Etyl acetat ble tilsatt og blandingen ble vasket med vann og saltvann og tørket. Etter fordampning av løsemidlet med det urene produktet renset med flash kromatografi (CH3OH/CH2CI2,1:100-> 1:20) som ga2-(6-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-metyl-pyridin-3-ylmetyl)-malonsyre dietyl ester (1,2 g, 50%).

f) 2-( 6- fN. N- bis( tert- butoksvkarbonvnamino1- 5- metvl- p\ Tidin- 3- ylmetylVmalonsvre monoetvl ester

En løsning av KOH (154 g, 2,75 mmol) i etanol (2 ml) ble tilsatt til en løsning 2-(6-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-metyI-pyridin-3-ylmetyl)-malonsyre dietyl ester (1,2 g, 2,50 mmol) i etanol (10 ml) og metylen klorid (4 ml) ved 0°C. Blandingen ble rørt i 18 timer ved romtemperatur. Blandingen ble konsentrert under redusert trykk og residuet løst i vann. Etyl acetat ble tilsatt og det organiske sjikt ble vasket med 0,5 M HC1, vann, saltvann og tørket. Etter filtrering og konsentrering under redusert trykk ga urent 2-(6-[N,N-bis(tetr-butoksy-karbonyl)amino]-5-metyl-pyridin-3-ylmetyl)-malonsyre monoetyl ester (1,0 g, 88%).

g) 2-( 6- fN. N- bis( tetr- butoksvkarbonvfl etvl ester

Dietylamin (0,26 g, 2,67 mmol) ble tilsatt til en blanding av 2-(6-[N,N-bis(tert-butoksy-karbonyl)amino]-5-metyl-pyirdin-3-ylmetyl)-malonsyre monoetyl ester (1,0 g, 2,2 mmol) og 37% vandig løsning av formaldehyd (0,24 g, 3,00 mmol) i metylen klorid (2 ml) ved 0°C. Blandingen ble rørt i 16 timer ved romtemperatur og etyl acetat ble tilsatt. Det organiske sjikt ble vasket med vann og 5% NaHCCh og tørket. Konsentrering under redusert trykk fulgt av flash kromatografi (toluen/etyl acetat, 3:1 —► 1:1) ga 2-(6-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino] -5-metyl-pyridin-3-ylmetyl)akrylsyre etyl ester (0,68 g, 73%).

h) 2- actvlsulfanvlametvl- 3-( 6- P^. N- bisftetr- butoksvkarbonvnamino1- 5- metvl- pvridin-3- vDpropionsvre etvl ester

Trietylamin (0,234 ml, 1,68 mmol) ble tilsatt til en løsning av 2-(6-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-metyl-pyridin-3-ylmetyl)-akrylsyre etyl ester (0,68 g, 1,61 mmol) i tioaddiksyre (3 ml) ved 0°C. Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 16 timer. Etyl acetat ble tilsatt og den organiske fasen ble vasket med vann og mettet NaHC03 og saltvann og tørket. Det urene produktet ble renset med flash kromatografi (toluen/etyl acetat, 3:1 -> 1:2) som ga ren2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-metyl-pyridin-3-yl)-propionsyre etyl ester (489 mg, 61%) og noe uren 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-metylpyridin-3-yl)propionsyre etyl ester (0,34 g, 43%).

i) 3- f6- amino- 5- metvl- pvridin- 3- vlV2- merkaptometvl- propionsvre

2- acetylsulfanylmetyl-3-(6-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-metyl-pyridin-3-yl)-propionsyre etyl ester (17 mg, 0,034 mmol) ble løst i konsentrert HC1 (3,0 ml). Løsningen ble varmet til refluks i 1 time. Konsentrering under redusert trykk ga tittelforbindelsen (8,9 mg, 100%) som et hydroklorid salt.

'H NMR (500 MHz, CD3OD): 5 2,26 (s, 3H), 2,72-2,75 (m, 2H), 2,83-2,91 (m, 3H), 7,60 (s, 1H), 7,77 (s, 1H).

MS(+)227(M+1).

Eksempel 15

3- f6- amino- 4- metvl- pvridin- 3- vn- 2- merkaptometvl- propionsvre

a) 2- amino- 5- brom- 4- metvlpvridin

2-amino-4-metylpyridin (110 g, 1,02 mol) i hydrobromsyre (IL, 48%) ble rørt ved 70°C og en løsning av hydrogen peroksid (300 ml, 15%) ble tilsatt dråpevis i løpet en time ved en slik hastighet at temperaturen til reaksjonsblandingen holdt seg mellom 70 - 80°C. Blandingen ble rørt i 90 minutter ved 70°C og helt over i knust is. pH ble justert til 4-5 med natrium karbonat og det presipiterte faste stoffet (som inneholdt for det meste dibromerte produkter) ble filtrert fra og kastet. pH ble deretter hevet til 9 og det presipiterte produktet samlet opp ved filtrering. Rekrystallisering fra toluen ga 2-amino-5-brom-4-metylpyridin (76,3 g, 40%).

b) 2-[ N. N- bisftert- butoksvkarbonyl') amino1- 5- brom- 4- metvlpyridin

2-amino-5-brom-4-metylpyridin (5,70 g, 30,5 mmol) i kloroform ble behandlet med di-tert-butyl dikarbonat (20,0 g, 91,60 mmol) og DMAP (0,60 g, 4,91 mmol). Reaksjonsblandingen ble værende ved omgivelsestemperatur over natten og ble deretter konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi (heksan/EtOAc, 95:5) ga 2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-brom-4-metylpyridin (8,02 g, 68%).

c) 2- rN. N- bisftert- butoksvkarbonvnamino1- 5- ftert- butyl- dimetvl- silanvloksvmetvn- 4-metvlpvridin

En løsning av 2-]N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-brom-4-metylpyridin (15,0 g, 38,70 mmol), tert-butyl-dimetyl-tributylstannalylmetoksy-silan (25,4 g, 58,3 mmol), og bis(trifenylfosfin)palladium(II) diklorid (0,90 g, 1,42 mmol) i 1,2-dikloretan (50 ml) ble rørt ved 90°C i to dager. Blandingen ble avkjølt til 0°C og dietyl eter (200 Ml) ble tilsatt fulgt av mettet vandig kalium fluorid (40 ml). Blandingen ble rørt kraftig i 30 minutter og filtrert. Den organiske fasen ble vasket med vann, tørket og konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi (heksan/EtOAc, 95:5) ga 2-[N,N-bis(tert-butoksy karbonyl)amino]-5-(tert-butyl-dimetyl-silanyloksymetyl)-4-metylpyridin (10,0 g, 57%).

d) 2- rN. N- bis( tert- butoksvkarbonvnaminol- 5- hvdroksvmetvl- 4- metvlpyridin

Tetrabutylammonium fluorid (13,9 g, 44,1 mmol) ble tilsatt til en løsning av 2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-(tert-butyl-dimetyl-silanyloksymetyl)-4-metylpyridin (10,0 g, 24,3 mmol) i THF (100 ml). Reaksjonsblandingen ble rørt i 3 timer ved romtemperatur. Konsentrasjon under redusert trykk fulgt av flash kromatografi (heksan/EtOAc, 50:50) ga 2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-hydroksymetyl-4-metylpyridin (5,0 g, 67%).

e) 5- brommetvl- 2- fN. N- bistø

Trifenylfosfin (4,69 g, 17,9 mmol) og CBr4 (4,89 g, 14,8 mmol) ble tilsatt til en løsning

av 2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-hydroksymetyl-4-metylpyri (5,00 g, 22,0 mmol) i diklormetan (130 ml) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble rørt i 3 timer og deretter fortynnet med diklormetan. Den organiske fasen ble vasket med vann, tørket og konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi (heksan/EtOAc, 80:20) ga 5-brornmetyl-2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-4-metylpyridin (5,35 g, 90%).

f) 2- f6- fN. N- bisftetr- butoksvkarbonvl) dietvlester

Til en suspensjon av NaH (0,24 g, 6,0 mmol, 60%) i DMF (5 ml) ble det tilsatt dietyl malonat (0,91 ml, 6,0 mmol) og blandingen ble rørt i 15 minutter. En løsning av 2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-brornmetyl-4-metyl-pyridin (2,0 g, 5,0 mmol) DMF (5 ml) ble tilsatt og den resulterende løsningen rørt i 120 minutter ved 60°C. Etyl acetat ble tilsatt og blandingen ble vasket med vann og saltvann og tørket. Etter fordampning av løsemidlet ble det urene produktet renset med flash kromatografi (CH3OH/CH2Cl2,1:100 -> 1:20) som ga en ren fraksjon 2-(6-[N,N-bis(tert-butoksy-karbonyl)amino]-4-metyl-pyridin-3-yImetyl)-maIonsyre dietyl ester (1,15 g, 48%) og en uren fraksjon 2-(6- [N,N-bis(tetr-butoksykarbonyl)amino]-4-metyl-pyridin-3-ylmetyl)-malonsyre dietyl ester (1,1 g).

g) 2- f6- fN. N- bisftert- butoksvkarbonvnaminol- 4- metvl- pvridin- 3- vlmetvl)- malonsvre monoetyl ester

En løsning av KOH (141 mg, 2,52 mmol) i etanol (2 ml) ble tilsatt til en løsning av 2-(6-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-4-metyl-pyridin-3-yl-metyl)-malonsyre dietyl ester (1,1 g, 2,29 mmol) i etanol (10 ml) og metylenklorid (4 ml) ved 0°C. Blandingen ble rørt i 18 timer ved romtemperatur. Blandingen ble konsentrert under redusert trykk og residuet løst i vann. Etyl acetat ble tilsatt og det organiske sjikt ble vasket med 0,5 M HC1, vann og saltvann og tørket. Etter filtrering og konsentrering under redusert trykk ga urent 2-(6-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)-amino]-4-metyl-pyridin-3-ylmetyl)-malonsyre monoetyl ester (1,0 g, 97%).

h) 2- f6-[ N. N- bis( tert- butoksvkarbonvOamm^^ etvl ester

Dietylamin (0,26 g, 2,67 mmol) ble tilsatt til en blanding av 2-(6-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-4-metyl-pyridin-3-ylmetyl)-malonsyre monoetyl ester (1,0 g, 2,2 mmol) og 37% vandig løsning av formaldehyd (0,24 g, 3,00 mmol) i metylen klorid (2 ml) ved 0°C. Blandingen ble rørt i 16 timer ved romtemperatur og etyl acetat ble tilsatt. Det organiske sjikt ble vasket med vann og 5% NaHCOs og tørket. Konsentrering under redusert trykk fulgt av flash kromatografi (toluen/etyl acetat, 3:1 -> 1:1) ga 2-(6-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-4-metyl-pyridin-3-ylmetyl)-akrylsyre etyl ester (0,81 g, 88%).

i) 2- acetvlsulfanvlmetvl- 3-( 6-| TO^

3- vfl- propionsvre etvl ester

Trietylamin (0,279 ml, 2,0 mmol) ble tilsatt til en løsning av 2-(6-[N,N-bis(tert-butoksy-karbonyl)amino]-4-metyl-pyridin-3-ylmetyl)-akrylsyre etyl ester (0,8 g, 1,9 mmol) i tioeddiksyre (3 ml) ved 0°C. Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 16 timer. Etyl acetat ble tilsatt og den organiske fasen ble vasket med vann, mettet NaHCOa og saltvann og tørket Det urene produktet ble renset ved flash kromatografi (toluen/etyl acetat, 3:1 -> 1:2) som ga ren 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-metyl-pyridin-3-yl)-propionsyre etyl ester (200 mg, 21%) og noe uren 2-acetylsulfanylmelyl-3-(6-[N,N-bis(tert-butoksykarobnyl)amino]-4-metylpyridin-3-yl)-propionsyre etyl ester (0,68 g).

j) 3- f6- amino- 4- metvl- pvridin- 3- vn- 2- merkaptometvl- propionsvre

2-acetylsulfanylmetylO-(6-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-4-metyl-pyridin-3-yl)-propionsyre etyl ester (36 mg, 0,072 mmol) ble løst i konsentrert HC1 (3,0 ml). Løsningen ble varmet til refluks i 1 time. Konsentrering under redusert trykk ga tittel forbindelsen (18,7 mg, 98%) som hydroklorid salt.

'H NMR (500 MHz, CD3OD): 8 2,42 (s, 3H), 2,72-2,95 (m, 5H), 6,81 (s, 1H), 7,58 (s, 1H).

MS (+) 227 (M+l).

Eksempel 16

2- merkaptometvl- 3- piperidin- 4- vl- smørsvre

a) 4- formyl- piperidin- l- karboksvisvre tert- butvl ester

Periodinan (26,9 g, 63,5 mmol) ble tilsatt til en løsning av 1-tert-butoksykarbonyl-piperidin-4-metanol (10,5 g, 48,8 mmol) i metylen klorid (200 ml) og blandingen ble rørt i 90 minutter. Dietyl eter ble tilsatt og presipitatet ble fjernet ved ekstraksjon med 10% NaaSjCVmettet NaHC03 (1:1,300 ml). Det organiske sjiktet ble vasket med 0,5 M NaOH og saltvann, tørket og konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi (heksan/EtOAc, 8:2) ga 4-formyl-piperidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (8,5 g, 81%).

b) 2- C1 - tert- butoksvkarbonvl- piperidin- 4- vlmetvlenVmalonsvre dietvl ester

Til en løsning av dietyl malonat (710 fil, 4,7 mmol) og 4-formyl-piperidin-l -

karboksylsyre tert-butyl ester (1,0 g, 4,7 mmol) i metylenklorid (5 ml) ble det tilsatt piperidin (46 fil, 0,47 mmol) og eddiksyre (27 fil, 0,47 mmol). Reaksjonsblandingen ble rørt i 72 timer ved romtemperatur og deretter i 16 timer ved 45°C. EtOAc ble tilsatt og blandingen ble vasket med vann og saltvann, tørket og konsentrert under redusert trykk. Det urene produktet ble renset ved flash kromatografi (heptan/EtOAc, 3:1 -» 1:3) som ga 2-(l-tert-butoksykarbonyl-piperidin-4-yl-metylen)-malonsyre dietyl ester (0,69 g, 40%).

c) 2- f 1 - fl - tert- butoksvkarbonvl- piperidin- 4- vlVetvn- malonsvre dietvl ester

MeLi (5,34 ml, 8,54 mmol, 1,6 M i dietyl eter) ble tilsatt dråpevis til en slurry av Cul

(0,74 g, 3,88 mmol) i THF (5 ml) ved -78"C under argon og blandingen ble rørt i 30 minutter. En løsning av 2-(l-tert-butoksykarbonyl-piperidin-4-ylmetylen)-malonsyre dietyl ester (0,69 g, 1,94 mmol) i THF (5 ml) ble tilsatt dråpevis og reaksjonsblandingen ble rørt i 120 minutter ved -78*C og deretter varmet til romtemperatur i løpet av 60 minutter. Konsentrert vandig NH4OH ble tilsatt og blandingen ble deretter ekstrahert med EtOAc, vasket med konsentrert vandig NH4OH og saltvann, tørket og konsentrert under redusert trykk. Det urene produktet ble renset med flash kromatografi (heptan/EtOAc, 3:1 - > 1:6) som ga2-[l-tert-butoksykarbonyl-piperidin-4-yl)-etyl]-malon syre dietyl ester (0,39 g, 54%).

d) 2 -\ 1 -( 1 - tert- butoksvkarbonvl- piperidin- 4- vn- malonsvre monoetvl ester

En løsning av KOH (84 mg, 1,16 mmol) i EtOH (2 ml) ble tilsatt dråpevis til en løsning

av 2-[l-(l-tert-butoksykarbonyl-piperidin-4-yl)-malonsyre dietyl ester (0,39 g, 1,01 mmol) i metylenklorid (4 ml) og EtOH (10 ml) ved 0°C. Den resulterende blandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. EtOAc ble tilsatt og blandingen ble vasket med 0,5 M HC1 og saltvann, tørket og konsentrert under redusert trykk som ga 416 mg av uren 2-[l-(l-tert-butoksykarbonyl-piperidin-4-yl)-etyl]-malonsyre monoetyl ester.

e) 4- f2- etoksvkarbonvl- l- metvl- allylVpiperidin- 1- karboksvisvre tert- butvl ester

Formaldehyd (132 mg, 1,65 mmol, 37% i vann) ble tilsatt til en løsning av uren 2-[l-(l-tert-butoksykarbonyl-pipeirdin-4-yl)-etyl]-malonsyre monoetyl ester (416 mg) i metylen klorid (2 ml) ved 0°C. Dietylamin (153 pl, 1,47 mmol) ble tilsatt dråpevis og blandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. EtOAc ble tilsatt og blandingen ble vasket med vann og mettet NaHC03, tørket og konsentrert under redusert trykk. Det urene produktet ble renset med flash kromatografi (toluen/EtOAc, 3:1) og ga 4-(2-etoksykarbonyl-l-metyl-allyl)-piperidin-l-karboksylsyre tert butyl ester (0,18 g, 49% i løpet av to trinn.

f) 4- f3- acetvlsulfanvl- 2- etoksvkarbonvl- l- metvl- propvn- pipeirdin- l- karboksvlsvre tert- butvl ester

TEA (86 ul, 0,617 mmol) ble tilsatt til en løsning av 4-(2-etoksykarbonyl-l-metyl-allyl)-piperidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (0,18 g, 0,59 mmol) i tioeddiksyre (2 ml) ved 0°C. Etter røring i 6 timer ble mer tioeddiksyre (2 ml) tilsatt og blandingen ble rørt ved 45°C over natten. EtOAc ble tilsatt og blandingen ble vasket med vann og mettet NaHC03 og saltvann, tørket og konsentrert under redusert trykk. Det urene produktet ble renset med flash kromatografi (toluen/EtOAc, 5:1 -> 1:1) til et noe urent 4-(3-acetylsulfanyl-2-etoksykarbonyl-1 -metyl-propyl)-pipeirdin-1 -karboksylsyre tert-butyl ester (0,17 g, 75%).

g) 2- acetvlsulfanylmetvl- 3- piperidin- 4- vl- smørsvre etvl ester

TFA (2 ml) ble tilsatt til en løsning av 4-(3-acetylsulfanyl-2-etoksykarbonyl-l-metyl-propyl)-piperidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (0,17 g, 0,439 mmol) i metylenklorid (10 ml). Reaksjonsblandingen ble rørt i 90 minutter og konsentrert under redusert trykk. Det urene produktet ble renset ved anvendelse av HPLC (10 50% acetonitril i vann, 0,1% TFA) som ga 2-acetylsulfanylmetyl-3-piperidin-4-yl-smørsyre etyl ester (101 mg, 54%) som TFA saltet.

h) 2- merkaptometvl- 3- piperidin- 4- vl- smørsvre

Konsentrert saltsyre (4 ml) ble tilsatt til 2-acetylsulfanylmetyl-3-pipeirdin-4-yl-smørsyre etyl ester TFA salt (0,101 mg, 0,253 mmol) under argon. Reaksjonsblandingen ble varmet til refluks i 5 timer og deretter konsentrert under redusert trykk som ga en diastereomer blanding av tittelforbindelsen (73,7 mg) som hydrokloridsaltet.

'H NMR (500 MHz, CD3OD) for hoveddiastereomeren: 8 1,10 (d, 3H), 1,36-1,58 (m, 2H), 1,71-1,78 (m, 2H), 1,93-1,99 (m, 1H), 2,05-2,11 (m, 1H), 2,60-2,66 (m, 2H), 2,80-2,86 (m, 1H), 2,94-3,02 (m, 2H), 3,38-3,45 (m, 2H).

MS (+) 218 (M+l).

Eksempel 17

3 - f 6- amino- p vridin- 3-vD-2-merkaptometvl-smørsvre

a) ( 5- formvl- pvridin- 2- vlVkarbaminsvre tert- butvl ester

(5-hydroksymetyl-pyridin-2-yl)-karbaminsyre tert-butyl ester (7,00 g, 31,2 mmol) ble

oppløst i tørr DMSO (50 ml) og reaksjonskolben ble nedsenket i et vannbad ved 15°C. TEA (13,1 ml, 94,0 mmol) ble tilsatt, fulgt av svovel trioksid pyridin kompleks (15,0 g, 94,0 mmol) i porsjoner. Reaksjonsblandingen ble rørt i ytterligere 45 minutter og helt over i knust is. Produktet ble ekstrahert med dietyl eter og de kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltvann og tørket og konsentrert under redusert trykk. Rekrystallisering fra héksan/QfeCh ga (5-formyl-pyridin-2-yl)-karbaminsyre tert-butyl ester (5,40 g, 78%) som hvite krystaller.

b) 2- f6- tetr- butoksvkarbonvlamino- pvridin- 3 - vlmetvlenVmalonsvre dietvl ester

Til en løsning av dietyl malonat (710 ul, 4,7 mmol) og (5-formyl-pyirdin-2-yl)-karbamin syre tert-butyl ester (1,04 g, 4,7 mmol) i metylen klorid/DMF (1:1,5 ml) ble det tilsatt piperidin (46 pl, 0,47 mmol) og eddiksyre (27 ul, 0,47 mmol). Reaksjonsblandingen ble rørt i 72 timer ved romtemperatur og deretter i 16 timer ved 45°C. Heptan ble tilsatt sakte som ga 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetylen)-malonsyre dietyl ester (0,69 g, 40%) som grå krystaller.

c) 2- f 1 - f64ert- butoksvkarbonylamino- pvridin- 3- yl)- etvl1- malonsvre dietvl

MeLi (6,5 ml, 10,4 mmol, 1,6 M i dietyl eter) ble tilsatt dråpevis til en slurry av Cul

(0,9 g, 4,73 mmol) i THF (28 ml) ved -78°C under argon. Reaksjonsblandingen ble rørt i 30 minutter. En løsning av 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetylen)-malon syre dietyl eter (0,84 g, 2,3 mmol) i THF (7 ml) ble tilsatt dråpevis og reaksjonsblandingen ble rørt i 180 minutter ved -78°C. Mettet vandig NH4OH ble tilsatt dråpevis og blandingen ble ekstrahert med EtOAc. Den organiske fasen ble vasket med mettet vandig NH4OH og NaCl, tørket og konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi (toluen/EtOAc, 3:1 -> 1:6) ga2-[l-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-etyl]-malonsyre dietyl ester (0,723 g, 82,4%) som et hvitt fast stoff.

d) 2- f 1 - f6- tert- butoksvkarbonvlamino- pvridin- 3- vn- etyl1- malonsvre monoetyl ester

En løsning av KOH (113,6 mg, 2,04 mmol) i EtOH (2 ml) ble tilsatt dråpevis til en

løsning av 2-[l-(6-tert-butoksykarbonylamirio-pyridin-3-yl)-etyl]-malonsyre dietyl ester (0,7 g, 1,84 mmol) i metylen klorid (4 ml) og EtOH (10 ml) ved 0°C under argon og reaksjonsblandingen ble rørt over natten. 1M KOH (100 ml) ble tilsatt og blandingen ble vasket med metylen klorid. Den vandige fasen ble surgjort til pH 2 ved anvendelse av 2M HC1 og ekstrahert med EtOAc. Den organiske fasen ble tørket og konsentrert under redusert trykk som ga urent 2-[l-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-etyl]-malonsyre monoetyl ester (423 mg, 6%).

e) 2- f 1 - f6- tert- butoksvkarbonvlamino- pvridin- 3- vlVakrvlsvre etvl ester

Dietylamin (0,153 ml, 1,473 mmol) ble tilsatt til en løsning av 2-[l-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-malonsyre monoetyl ester (423 mg, 1,2 mmol) og formaldehyd (132 mg, 1,626 mmol, 36% i vann) i metylen klorid (2 ml) ved 0<*>C under argon. Blandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. EtOAc ble tilsatt og løsningen ble vasket med vann, NaHCOj og saltvann, tørket og konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi (toluen/EtOAc, 3:1) ga 2-[l-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-akrylsyre etyl ester (158 mg, 41%).

f) 2- actvlsulfanvlmetvlO-( 6- tert- butoksvkarbonvlamino- pvridin^ ester

TEA (0,076 ml, 0,542 mmol) ble tilsatt til en løsning av 2-[l-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-etyl]-akrylsyre etyl ester (158 mg, 0,493 mmol) i tioeddiksyre (2 ml) ved 0°C under argon. Blandingen ble rørt ved 45°C over natten. EtOAc ble tilsatt og løsningen ble vasket med NaHC03 og saltvann, tørket og konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi (toluen/EtOAc, 5:1 1:1) ga noe uren 2-actylsulfanylmetyl-3-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-smørsyre etyl ester (178 mg, 91%).

g) 2- acetvlsulfanvlmetyl- 3-( 6- amino- pvridin- 3- vlVsmørsvre etvl ester

TFA (2 ml) ble tilsatt til en løsning av 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-tert-butoksykarbonyl-arnino-pyridin-3-yl)-smørsyre etyl ester (178 mg, 0,449 mmol) metylen klorid (2 ml). Blandingen ble rørt i 60 minutter og konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi (toluen/EtOAc, 1:6) ga uren 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-amino-pyridin-3-yl)-smørsyre etyl ester (176 mg, 95%). Ytterligere rensing med HPLC (10 ->■ 70% acetonitril i vann, 0,1% TFA) ga 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-amino-pyirdin-3-yI)-smørsyre etyl ester (104 mg, 56%) som TFA saltet.

h) 3 - f 6- amino- pvridin- 3 - vi)-2 -m erkap tornet vi- smørsyre

Konsentrert saltsyre (4 ml) ble tilsatt til 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-amino-pyridin-3-yl)-smørsyre etyl ester (104 mg, 0,253 mmol) under argon. Reaksjonsblandingen ble varmet til refluks i 5 timer og konsentrert under redusert trykk som ga en diastereomer blanding av tittelforbindelsen (61 mg, 92%) som hydrokloirdsaltet.

'H NMR (500 MHz, D20) for hoveddiastereomeren: 8 1.26 (d, 3H), 2,49-2,53 (m, 2H), 2,64-2,77 (m, 1H), 2,95-3,02 (m, 1H), 7,02 (d, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,88 (m, 1H).

MS (+) 227 (M+l).

Eksempel 18

3-( 6- amino- 2- metvl- pvridin- 3- vlV2- merkaptometvl- propionsvre

a) f5- brom- 6- metyl- pvridin- 2- vlVkarbaminsyre tert- butvl ester 5-brom-6-metyl-pyridin-2-yl (25,0 g, 133,7 mmol) i THF/tert-butanol (1:10,550 ml) ble behandlet med di-tert-butyl dikarbonat (39,3 g, 180,0 mmol) og DMAP (2,40 g, 19,6 mmol). Reaksjonsblandingen ble rørt i 4 timer ved 40°C og konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi (metylen klorid) ga (5-brom-6-metyl-pyridin-2-yl)-karbaminsyre tert-butyl ester (17,0 g, 44%).

b) f5-( tert- butvl- dimetvl- silanvloksvmetvlV6- metvl- pvridin- 2- yl1- karbaminsvre tert-butvl ester

En løsning av (5-brom-6-metyl-pyridin-2-yl)-karbaminsyre tert-butyl ester (27,5 g, 95,8 mmol), tert-butyl-dimetyl-tribuylstannanylmetoksy-silan (43,5 g, 100,2 mmol) og bis(trifenylfosfin)palladium(II)diklorid (1,00 g, 1,40 mmol) i 1,2-dikloretan (350 ml) ble rørt ved refluks i 48 timer. Ytterligere bis(trifenylfosifn)palladium(II) diklorid (1,00 g, 1,40 mmol) ble tilsatt hver 12. time. Blandingen ble avkjølt til 0°C og dietyl eter (300 ml) ble tilsatt fulgt av mettet vandig kalium fluorid (100 ml). Blandingen ble rørt kraftig i 60 minutter og filtrert. Den organiske fasen ble vasket med vann, tørket og konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi (MeOH/CH2Cl2,1:99) ga [5-(tert-butyl-dimetyl-silanyloksymetyl)-6-metyl-pyridin-2-yl]-karbamin syre tert-butyl ester (15g,47%).

b) f5- hvdroksymetvl- 6- metvl- pvridin- 2- vn- karbaminsvre tert- butvl ester

Tetrabutylammonium fluorid (19,6 g, 62,4 mmol) ble tilsatt til en løsning av [5-(tert-butyl-dimetyl-silanyloksymetyl)-6-metyl-pyridin-2-yl]-karbaminsyre tert-butyl ester (10,5 g, 31,23 mmol) i THF (100 ml) og rørt ved romtemperatur natten over. Vann ble tilsatt og produktet ekstrahert med kloroform. Den organiske fasen ble tørket og konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi (MeOH/C^Ck, 2,5:77,5) ga (5-hydroksymetyl-6-metyl-pyridin-2-yl)-karbaminsyre tert-butyl ester (6,0 g, 81%).

c) 5- brommetvl- 2-[ N. N- bisftert- butoksykarbonvnamino1- pvrimidin

Trifenylfosfin (9,83 g, 37,5 mmol) og CBr4 (17,7 g, 53,5 mmol) ble tilsatt til en løsning

av (5-hydroksy-6-metyl-pyirdin-2-yl)-karbaminsyre tert-butyl ester (8,50 g, 35,7 mmol) i diklormetan (30 ml) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble rørt i 3 timer ved romtemperatur og ble deretter fortynnet med diklormetan. Den organiske fasen ble vasket med vann, tørket og konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi

(CH2CI2) ga 5-brommetyl-2-[N,N-bis(tert-butoksyk^^ (4,05 g, 38%).

d) 2-( 6- tert- butoksvkarbonylamino- 2- metvl- pvridin- 3- vlmetvlVmalon^ dietvl ester

En løsning av dietyl malonat (1,21 ml, 7,97 mmol) i DMF (2 ml) ble tilsatt dråpevis til

en suspensjon av NaH (348 mg, 7,97 mmol, 55% i mineralolje) i DMF (5 ml) ved 0°C under argon. Reaksjonsblandingen ble rørt i 45 minutter og en løsning av (5-brommetyl-6-metyl-pyridin-2-yl)-karbaminsyre tert-butyl ester (2,0 g, 6,64 mmol) i DMF (5 ml) ble tilsatt dråpevis. Blandingen ble rørt over natten (0°C-> 20°C). EtOAc ble tilsatt og løsningen ble vasket med vann og saltvann, tørket og konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi (heptan/EtOAc, 4:1) ga 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-2-metyl-pyridin-3-ylmetyl)-malonsyre dietyl ester (1,87 g, 74%).

f) 2- f6- tert- butoksvkarbonvlamino- 2- metvl- pvridin- 3- vlmetvlVmalonsvremonoetvl ester

En løsning av KOH (300 mg, 5,35 mmol) i EtOH (4 ml) ble tilsatt til en løsninig av 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-2-metyl-pyridin-3-ylmetyl)-malonsyre dietyl ester (1,85 g, 4,86 mmol) i EtOH/metylen klorid (2:1,21 ml) ved 0°C. Blandingen ble rørt i 40 minutter ved romtemperatur og EtOAc ble tilsatt. Blandingen ble vasket med 0,5 M HC1 og saltvann, tørket og konsentrert under redusert trykk som ga uren 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-2-metyl-pyridin-3-ylmetyl)-malonsyre monoetyl ester (1,45 g).

f) 2- f6- tetr- butoksvkarbonylamino- 2- metvl- pyridin- 3- ylmetyl)- akrvlsvre etvl ester

Dietylamin (359 mg, 4,90 mmol) ble tilsatt dråpevis til en løsning av 2-(6-tert-butoksykarbonylamino;2-metyl-pyirdin-3-ylmetyl)-malonsyre monoetyl ester (1,44 g, 4,09 mmol) og formaldehyd (464 mg, 5,72 mmol, 37% i vann) i metylen klorid (35 ml) ved 0°C under argon. Blandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. Metylen klorid ble tilsatt og løsningen ble vasket med NajCOj og saltvann, tørket og konsentrert under redusert trykk som ga 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-2-metyl-pyridin-3-ylmetyl)-akrylsyre etyl ester (1,03 g, 79%).

h) 2- acetvlsulfanvlmetvl- 3-( 6- tetr- butota^ propionsvre etvl ester

TEA (0,556 ml, 3,99 mmol) ble tilsatt til en løsning av 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-2-metyl-pyridin-3-ylmetyl)-akrylsyre etyl ester (1,23 g, 3,84 mmol) i tioeddiksyre (10 ml) ved 0°C under argon. Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 64 timer. EtOAc ble tilsatt og løsningen ble vasket med Na2C03 og saltvann, tørket og konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi (toluen/EtOAc, 5:1 -> 1:1) ga 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-tert-butoksykarbonylamino-2-metyl-pyridinO-yl)-propionsyre etyl ester (1,33 g, 87%).

i) 3-( 6- amino- 2- metyl- pvridin- 3- vn- 2- merkaptometvl- propionsyre

Konsentrert saltsyre (2 ml) ble tilsatt til 2-acetylsulfonylmetyl-3-(6-tert-butoksykarbonylamino-2-metyl-pyridin-3-yl)-propionsyre etyl ester (77 mg, 0,19 mmol) under argon. Reaksjonsblandingen ble varmet til refluks i 110 minutter og ble deretter konsentrert under redusert trykk som ga tittelforbindelsen (39 mg, 76%) som hydrokloridsaltet.

'H NMR (500 MHz, D20): 8 2,49 (s, 3H), 2,73-2,92 (m, 5H), 6,81 (d, 1H), 7,77 (d, 1H).

MS (+) 227 (M+l).

Eksemne! 19

2- acetvlsulfanylmetyl- 3 - f 2- amino- pvridimidin- 5- viVpropionsvre etvl ester

a) 2- fN. N- bisftetr- butoksvkarbonvnamino1- 5- brompvrimidin

2-amino-5-brompyrimidin (9,00 g, 51,7 mmol) i THF/tert-butanol (1:1,100 ml) ble

behandlet med di-tert-butyl dikarbonat (34,0 g, 156,0 mmol) og DMAP (3,00 g, 24,5 mmol). Reaksjonsblandingen ble stående ved romtemperatur over natten og konsentrert under redusert trykk. Residuet ble fordelt mellom diklormetan og vann og pH ble jusert til 4 med IM HC1. Løsningen ble ekstrahert med diklormetan, tørket og konsentrert under redusert trykk. Det urene produktet ble suspendert i heksan og filtrert som ga 2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-brompyrimidin (15,0 g, 77%).

b) 2- fN. N- bis( tetr- butoksvkarbo^ pvrimidin

En løsning av 2-[N,N-bis(tetr-butoksykarbonyl)amino]-5-brompyrimidin (16,0 g, 45,0 mmol), tert-butyl-dimetyl-tributylstannanylmetoksy-silan (20,5 g, 47,1 mmol) og bis(trifenylfosifn)palladium(II) diklorid (1,00 g, 1,40 mmol) i 1,2-dikloretan (50 ml) ble rørt ved refluks natten over. Ytterligere bis(trifenylfosfin)palladium(H) diklorid (1,00 g, 1,40 mmol) ble tilsatt og løsningen ble refluksert i 8 timer. Blandingen ble avkjølt til 0°C og dietyl eter (200 ml) ble tilsatt fulgt av mettet vandig kalium fluorid (50 ml). Blandingen ble rørt kraftig i 60 minutter og filtrert. Den organiske fasen ble vasket med vann, tørket og konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi (MeOH/CH2Cl2, 1:99) ga 2-tN,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-(tert-butyl-dimetyl-silanyloksymetyl)-pyrimidin (10,2 g, 55%).

2- fN. N- bisftert- butoksvkarbonvl) amino1- 5- hvdroksvmetvl- pvrimidin

Tetrabutylammonium fluorid (15,3 g, 48,6 mmol) ble tilsatt til en løsning av 2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-(tert-butyl-dimetyl-silanyloksymetyl)-pyrimidin (10,0 g, 24,3 mmol) i THF (100 ml) og rørt ved romtemperatur over natten. Vann ble tilsatt og produktet ekstrahert med kloroform. Den organiske fasen ble tørket og konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi (MeOH/ClfeCb, 2,5:77,5) ga 2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)ammo]-5-hydroksymetyl-pyrimidin (4,20 g, 53%).

c) 5- brommetvl- 2- rN. N- bis( tert- butoksvkarbonvl') aminoVpvrimidin

Trifenylfosfin (2,71 g, 10,73 mmol) og CBr4 (4,89 g, 14,8 mmol) ble tilsatt til en

løsning av 2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-5-hydroksymetyl-pyrimidin (3,20 g, 9,83 mmol) i diklormetan (30 ml) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble rørt i 1 time og deretter fortynnet med diklormetan. Den organiske fasen ble vasket med vann og tørket og konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi (CH2O2) ga 5-brommetyl-2-[N,N-bis(tetr-butoksykarbonyl)amino]-pyrimidin (2,55 g, 67%).

d) 2- f2- rN. N- bisftert- butoksvkarbonvnammol- pvrimidin- 5- vlmetvn- malonsvre dietvl ester

En løsning av dietyl malonat (0,704 ml, 4,64 mmol) i DMF (2 ml) ble tilsatt dråpevis til en suspensjon av NaH (200 mg, 4,64 mmol, 55% i mineralolje) i DMF (4 ml) ved 0°C under argon. Reaksjonsblandingen ble rørt i 30 minutter og en løsning av 5-brommetyl-2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-pyrimidin (1,5 g, 3,86 mmol) i DMF (4 ml) ble tilsatt dråpevis. Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 3 timer. EtOAc ble tilsatt og blandingen ble vasket med vann og saltvann, tørket og konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi (heptan/EtOAc, 3:1) ga2-(2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-pyrimidin-5-ylmetyl)-malonsyre dietyl ester (0,87 g, 40%).

e) 2- f2- fN. N- bisftert- butoksvkarbonvnamino] pvrimidin- 5- vlmetvn- malonsvre monoet<y>l ester

En løsning av KOH (106 mg, 1,88 mmol) i EtOH (2 ml) ble tilsatt til en løsning av 2-(2-tN,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-pyrimidin-5-ylmetyl)-malonsyre dietyl ester (0,80 g, 1,71 mmol) i EtOH/metylen klorid (2:1,12 ml) ved 0°C. Blandingen ble rørt i 16 timer ved romtemperatur og EtOAc tilsatt. Blandingen ble vasket med 0,5 M HC1 og saltvann, tørket og konsentrert under redusert trykk som ga 2-(2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]pyrimidin-5-ylmetyl)-malonsyre monoetyl ester (0,67 g, 89%).

f) 2-( 2- fN. N- bisftert- butoksykarbonvnamino1- pvrimidin- 5- vlmetvn- akrvlsvre etvl ester

Dietylamin (0,124 ml, 1,69 mmol) ble tilsatt til en løsning av 2-(2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-pyrimidin-5-ylmetyl)-malonsyre monoetyl ester (0,62 g, 1,41 mmol) og formaldehyd (160 mg, 2,0 mmol, 37% i vann) i metylen klorid (15 ml) ved 0°C under argon. Blandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. EtOAc til tilsatt og løsningen ble vasket med vann, NaHC03 og saltvann, tørket og konsentrert under redusert trykk som gauren 2-(2-[N,N-bis(tert-butoksykarbonyl) amino]-pyrimidin-5-ylmetyl)-akrylsyre etyl ester (0,54 g, 94%).

g) 2- acetvlsulfanvlmetvl- 3-( 2-[ N^ propionsvre etvl ester

TEA (0,189 ml, 1,35 mmol) ble tilsatt til en løsning av 2-(2-[N,N-bis(tert-butoksy-karbonyl)amino]pyrimidin-5-ylmetyl)-akrylsyre etyl ester (0,53 g, 1,30 mmol) i tioeddiksyre (13 ml) ved 0°C under argon. Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 40 timer. EtOAc ble tilsatt og løsningen ble vasket med Na2Co3 og saltvann, tørket og konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi (heptan/EtOAc, 5:1 -> 1:1) ga 2-acetylsulfanylmetyl-3-(2-[N,N-bis(tert^ propionsyre etyl ester (0,56 g, 89%).

h) 2- acetvlsulfanvlmetvl- 3- f2- amino- pvrimidin- 5- vn- propionsvreetvl ester

TFA (1,5 ml) ble tilsatt til en løsning 2-acetylsulfanylmetyl-3-(2-tN,N-bis(tert-butoksykarbonyl)amino]-pyirmidin-5-yl)-propionsyre etyl ester (225 mg, 0,46 mmol) i metylenklorid (1,5 ml). Reaksjonsblandingen ble rørt i 120 minutter og konsentrert under redusert trykk som ga tittelforbindelsen (172 mg, 94%) som TFA saltet.

'H NMR (500 MHz, CD3OD): 5 1,22 (t, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,80-3,00 (m, 3H), 3,00-3,22 (m, 2H), 4,13 (q, 2H), 8,43 (s, 2H).

MS(+)284(M+1).

Eksempel 20

2-f 6-amino-p vri din-3 -ylmetvlV3 -merkapto-smørsyre

a) 3 - f6- tertbutoksvkarbonvlamino- pyridin- 3 - vlV2-( dietoksy- fosforvlVpropionsvre etvl ester

Til en suspensjon av NaH (1,17 g, 60% i mineralolje, 39,3 mmol) i DMF (70 ml) ble tilsatt trietyl fosfonoacetat (6,01 g, 26,82 mmol) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble rørt ved 0°C i 0,5 timer. Reaksjonsblandingen ble tilsatt (5-brommetyl-pyridin-2-yl)-karbaminsyre tert-butyl ester (7,0 g, 24,38 mmol) ved 0°C og reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 16 timer. Reaksjonen ble stoppet med sakte tilsetting av mettet vandig ammonium klorid (70 ml). Blandingen ble ekstrahert med EtOAc, vasket med saltvann og tørket. Det urene produktet ble renset med kolonne kromatografi (CH2Cl2/EtOAc, 1:0 0:1) som ga 3-(6-tertbutoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-(dietoksy-fosforyl)-propionsyre etyl ester (5,1 g, 50%).

b) 2- f6- tert- butoksvkarbonvlamino- pvridin- 3- ylmetvlVbut- 2- enoic syre etvl ester

Til en suspensjon av NaH (278,8 mg, 60% i mineralolje, 6,97 mmol) i THF (25 ml) ved

0°C ble det tilsatt en løsning av 3-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-(dietoksy-fosforyl)-propionsyre etyl ester (2,5 g, 5,81 mmol) i THF (30 ml). Reaksjonsblandingen ble rørt ved 0°C i 1 time. Til reaksjonsblandingen ble det tilsatt acetaldehyd (512 mg, 11,6 mmol) dråpevis ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble varmet opp til

romtemperatur og deretter rørt i 16 timer. Acetaldehyd (2,0 g) ble tilsatt til reaksjonskolben og reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i ytterligere 16 timer. Reaksjonsblandingen ble stoppet med sakte tilsetting av mettet vandig ammoniumklorid (30 ml). Blandingen ble ekstrahert med EtOAc, vasket med saltvann og tørket som ga det urene produktet. Det urene produktet ble renset med kolonne kromatografi (EtOAc/heksan, 1:8) som ga etyl 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-but-2-enoic syre etyl ester som en blanding av isomerer (1,1 g, 60%).

c) 3- acetylsu1fanyl- 2-( 6- tert- butoksvkarbonvla etvl ester

Til tioleddiksyre (15 ml) ble tilsatt Et3N (1,5 g, 14,8 mmol) og etyl 2-(6-tetr-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-but-2-enoic syre etyl ester (920 mg, 2,9 mmol) ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble rørt ved 40-45°C i 7 dager (ytterligere tioleddiksyre (1,5 ml) ble tilsatt til reaksjonsblandingen hver annen dag). Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og deretter fortynnet med EtOAc (50 ml). Det organiske sjiktet ble separert, vasket med mettet NaHC03, saltvann og tørket. De kombinerte organiske sjiktene ble konsentrert under redusert trykk. Den urene blandingen ble renset etterfølgende med tre kromatografiske kolonner (CH2CI2, EtOAc/heksan, 1:5 og aceton/heksan, 1:8), som ga3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-smørsyre etyl ester som en diastereomer blanding (780 mg, 68%). Den diastereomere blandingen ble separert ved anvendelse av preparativ kiral kromatografi ifølge fremgangsmåten beskrevet nedenfor som ga 4 isomerer 3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonyl-amino-pyirdin-3-ylmetyl)-smørsyre etyl ester/A, 3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-smørsyre etyl ester/B, 3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-smørsyre etyl ester/C og 3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-smørsyre etyl ester/D.

3- acetvlsulfanvl- 2- f6- tert- butoksvkarbonvlamino- pvridin- 3- vlmetvlVsmørsvreetvl ester/ D

3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-smørsyreetyl ester/D ble separert fra en blanding av 3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-smørsyre etyl ester/A, 3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-smørsyre etyl ester/B, 3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-smørsyre etyl ester/C og 3-

acetylsulfanyl-2-(6-tert-buto^

ester/D på en kiral OJ kolonne eluert med isoheksan: acetonitril :isopropyl alkohohdietyl amin (99,0,5; 0,5; 0,1). Det enantiomere overskudd var > 99% som ble målt ved HPLC ved anvendelse av en kiralpak OJ kolonne eluert med isoheksan:etanol:dietyl amin (99; 1;0,5).

3- acetvlsulfanvl- 2- f6- tert- butoksvkarbonvlamino- pvridin- 3- vlmetvlVsmørsvreetvl ester/ A

3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-srnørayre ester/A ble separert fra en blanding av 3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-smørsyre etyl ester/A, 3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-smørsyre etyl ester/B og 3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyi)-smørsyre etyl ester/C og på en kiral OJ kolonne eluert med isoheksan:acetonitril:I-propanol: dietyl amin (98; 2; 0,1). Det enantiomere overskudd var > 99% som ble målt med HPLC ved anvendelse av en kiralpak OJ kolonne eluert med isoheksan: etanol: di etyl amin (99; 1; 0,5).

3- acetvlsulfanvl- 2- f6- tert- butoksvkarbonvlamino- pvridin- 3- vlmetvn- smørsvreetvl ester/ B

3-acetylsulfanyl-2-(64ert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-smørsyre etyl ester/B ble separert fra en blanding av 3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3 -ylmetyl)-smørsyre etyl ester/B og 3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonyIamino-pyridin-3-ylmetyl)-smørsyre etyl ester/C på en kiral OJ kolonne eluert med heksan:etanol: dietyl amin (99; 1; 0,5). Det enantiomere overskudd var > 99% som ble målt med HPLC ved anvendelse av en kiralpak OJ kolonne eluert med isoheksan:etanol:dietyl amin (99; 1; 0,5).

3- acetylsulfanvl- 2- f6- tert- butoksvkarbonvlamino- pvridin- 3- ylmetvn- smørsweetvl ester/ C

3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonylaminorpyridin-3-ylmetyl)-smørsyreetyl ester/C ble separert fra en blanding av 3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-smørsyre etyl ester/B og 3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-smørsyre etyl ester/C på en kiral OJ kolonne eluert med heksan:etanol: dietyl amin (99; 1; 0,5). Det enantiomere overskudd var >

87% som ble målt med HPLC ved anvendelse av en kiralpak OJ kolonne eluert med isoheksan:etanol:dietyl amin (99; 1; 0,5).

d) 2- f6- amino- pvridin- 3- vlmetvlV3- merkapto- smørsvre/ A

En løsning av 3-acetylsulfanyl-2-(6-tetr-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-smørsyre etyl ester/A (45 mg, 0,11 mmol) i konsentrert HC1 (2 ml) ble refluksert under argon i 1 time. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og konsentrert under redusert trykk som ga 28,4 mg av tittelforbindelsen som hydroklorid saltet.

'H NMR (400 MHz, D20): 8 7,89 (d, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,03 (d, 1H), 3,23-3,33 (m, 1H), 3,1-3,2 (m, 1H), 2,75-2,9 (m, 2H), 1,47 (d, 3H).

MS (+) 227 (M+l).

e) 2- f6- amino- pvridin- 3- vlmetvlV3- merkapto- smørsvre/ B

En løsning av 3-acetylsulfanyl-2-(6-tetr-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-smørsyre etyl ester/B (55 mg, 0,14 mmol) i konsentrert HC1 (2 ml) ble refluksert under argon i 1 time. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og konsentrert under redusert trykk som ga 39,4 mg av tittelforbindelsen som hydroklorid saltet.

MS(+)227 (M+l).

f) 2- f6- amino- pvridin- 3- vlmetvn- 3- merkapto- smørsvre/ C

En løsning av 3-acetylsulfanyl-2-(6-tetr-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-smørsyre etyl ester/C (9 mg, 0,02 mmol) i konsentrert HC1 (0,5 ml) ble refluksert under argon i 1 time. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og konsentrert under redusert trykk som ga 6,4 mg av tittelforbindelsen som hydroklorid saltet.

'H NMR (400 MHz, D20): 8 7,82-7,9 (m, 1H), 7,67 (br s, 1H), 7,0 (d, 1H), 3,16-3,28 (m, 1H), 2,96-3,04 (m, 1H), 2,76-2,86 (m, 2H), 1,47 (d, 3H).

MS(+)227(M+1).

g) 2- f6- amino- pvridin- 3- vlmetvlV3- merkapto- smørsvreÆ)

En løsning av 3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-buto^

smørsyre etyl ester/C (9 mg, 0,02 mmol) i konsentrert HC1 (0,5 ml) ble refluksert under argon i 1 time. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og konsentrert under redusert trykk som ga 36,8 mg av tittelforbindelsen som hydroklorid saltet.

<l>H NMR (400 MHz, D20): 8 7,82-7,9 (m, 1H), 7,67 (br s, 1H), 7,0 (d, 1H), 3,16-3,28 (m, 1H), 2,96-3,04 (m, 1H), 2,76-2,86 (m, 2H), 1,47 (d, 3H).

MS (+) 227 (M+l).

Eksempel 21

6- amino- pvridin- 3- vlmetvlV3- merkapto- pentansvre

a) 2- f6- tert- butoksvkarbonvlamino- pvridin- 3- vlmetylVpent- 2- enoic syre etvl ester

Til en løsning av NaH (290,5 mg, 60% i mineralolje, 7,5 mmol) i THF (25 ml) ved 0°C

ble det tilsatt en løsning av 3-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-(dietoksy-fosforyl)-propionsyre etyl ester (2,5 g, 5,81 mmol) i THF (30 ml). Reaksjonsblandingen ble rørt ved 0°C i 1 time. Reaksjonsblandingen ble tilsatt propionaldehyd (725 mg, 12,5 mmol) dråpevis ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 16 timer. Propionaldehyd (2,5 g) ble tilsatt og blandingen ble rørt ved romtemperatur i ytterligere 16 timer. Reaksjonen ble stoppet med sakte tilsetting av mettet vandig NH4CI (30 ml). Blandingen ble ekstrahert med EtOAc, vasket med saltvann og tørket. Det urene produktet ble renset med kolonne kromatografi (EtOAc/heksan, 1:8) som ga 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-pent-2-enoic syre etyl ester som en blanding av isomerer (1,2 g, 60%).

b) 3- acetvlsulfanvl- 2- f6- tert- butoksvkarbonvlamino- pvirdin- 3- vlmetvlVpentansvreetvl ester

Til tioleddiksyre (15 ml) ble det tilsatt Et3N (1,8 g, 17 mmol) og 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-pent-2-enoic syre etyl ester (1,1 g, 3,3 mmol) ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble rørt ved 65°C i 8 dager (ytterligere tioleddiksyre (1,5 ml) ble tilsatt til reaksjonsblandingen hver annen dag). Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og deretter fortynnet med EtOAc. Det organiske sjiktet ble separert, vasket med mettet NaHC03, saltvann og tørket. De kombinerte organiske sjiktene ble konsentrert under redusert trykk. Residuet ble renset etterfølgende med to kromatografiske kolonner (CH2G2 og EtOAC/heksan, 1:5) som ga 350 mg av en blanding av de ønskede produkter og ureagert utgangsmateriale. De urene produkter ble ytterligere renset med HPLC (EtOH/Heksan, 1:9) og deretter kolonne kromatografi (aceton/heksan, 1:8) som ga tittelforbindelsen som en diastereomer blanding (180 mg, 18%). Den diastereomere blandingen av 3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-pentansyr^ etyl ester ble separert ved anvendelse av preparativ kiral kromatografi ifølge fremgangsmåten beskrevet nedenfor som ga fire isomerer 3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-pentansyre etyl ester/A, 3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-pentansyre etyl ester/B, 3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonylam^ ester/C og 3-acetylsulfanyl-2-(64ert-butoksykarbonylamino-pyridm-3-ylmetyl)-pentansyre etyl ester/D. Den diastereomere blandingen ble separert på to kiralsel OJ kolonner, som ble forbundet til hverandre og eluert med isoheksan:isopropyl alkohol:metanol (97:1:2). Det enantiomere overskuddet ble målt ved anvendelse av analytisk HPLC ved anvendelse av to kiralsel OJ kolonner som ble bundet til hverandre og eluert med isoheksan: isopropyl alkohol:metanol (97:1:2). For 3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-pentansyre etyl ester/A til og med C ble det enantiomere overskuddet funnet å være > enn 99%, mens det ble funnet å være 97% for 3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbony etyl ester/D.

c) 6- amino- pvridin- 3 - vlmetyD- 3 - merkapto- pentansyre/ A

En løsning av 3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-pentansyre etyl ester/A (50,4 mg, 0,12 mmol) i konsentrert HC1 (2 ml) ble refluksert under argon i 1,5 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og konsentrert under redusert trykk som ga 33,9 mg av tittelforbindelsen som hydrokloridsalt.

'H NMR (500 MHz, D20): 8 7,87 (dd, 1H), 7,67 (d, 1H), 3,02-3,16 (m, 2H), 2,79-2,87 (m, 2H), 1,79-1,88 (m, 1H), 1,53-1,64 (m, 1H), 1,07 (t, 3H).

MS(+)241 (M+l).

d) 6- amino- p vridin- 3 - vlmetyl)- 3 - merkapto- pentansvre/ B

En løsning av 3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonylam pentansyre etyl ester/B (51,6 mg; 0,13 mmol) i konsentrert HC1 (2 ml) ble refluksert under argon i 1,5 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og konsentrert under redusert trykk som ga 34,7 mg av tittelforbindelsen som hydrokloridsaltet.

'H NMR (500 MHz, D20): 8 7,87 (dd, 1H), 7,67 (d, 1H), 7,0 (d, 1H), 3,02-3,16 (m, 2H), 2,79-2,87 (m, 2H), 1,79-1,88 (m, 1H), 1,53-1,64 (m, 1H), 1,07 (t, 3H). MS(+)241 (M+l)

e ) 6- amino- pvridin- 3- vlmetvlV3- merkapto- pentansvre/ C

En løsning av 3-acetylsulfanyl-2-(6-tetr-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-pentansyre etyl ester/C (4,3 mg, 0,01 mmol) i konsentrert HC1 (2 ml) ble refluksert under argon i 1,5 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og konsentrert under redusert trykk som ga 2,9 mg av tittelforbindelsen som hydrokloirdsaltet.

'H NMR (500 MHz, D20): 8 7,86 (dd, 1H), 7,66 (br s, 1H), 7,0 (d, 1H), 2',94-3,04 (m, 2H), 2,74-2,9 (m, 2H), 1,88-1,97 (m, 1H), 1,55-1,66 (m, 1H), 1,05 (t, 3H).

MS (+) 241 (M+l).

f) 6- amino- pvridin- 3- vlmetvlV3- merkapto- pentansvre/ D

En løsning av 3-acetylsulfanyl-2-(6-tetr-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-pentansyre etyl ester/D (19,2 mg, 0,05 mmol) i konsentrert HC1 (2 ml) ble refluksert under argon i 1,5 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og konsentrert under redusert trykk som ga 12,9 mg av tittelforbindelsen som hydrokloridsaltet.

<*>H NMR (500 MHz, D20): 6 7,86 (dd, 1H), 7,66 (br s, 1H), 7,0 (d, 1H), 2,94-3,04 (m, 2H), 2,74-2,9 (m, 2H), 1,88-1,97 (m, 1H), 1,55-1,66 (m, 1H), 1,05 (t, 3H).

MS (+) 241 (M+l).

Eksempel 22

3- f6- amino- 5- klor- pvridin- 3- vlV2- merkaptometvl- propionsvre

a) 6- amino- 5- klor- nikotinsvre etvl ester

N-klorsuksinimid (21,7 g, 0,162) ble tilsatt til en suspensjon av 6-amino-nikotin syre etyl ester (18,0 g, 0,108 mol) i acetonitril (270 ml) og blandingen ble refluksert i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert og konsentrert under redusert trykk. Residuet ble løst i diklormetan, vasket med vann og tørket. Flash kromatografi (2,5% MeOH i CH2CI2) ga rent 6-amino-5-klor-mkotinsyre etyl ester (17,23 g, 79%).

b) 6- bisftert- butoksvkarbonvn- amino- 5- klor- nikotinsvre etyl ester

DMAP (0,11 g, 0,9 mmol) og (Boc)20 (21,54 g, 99 mmol) ble tilsatt til en løsning av 6-amino-5-klor-nikotinsyre etyl ester (9,0 g, 45 mmol) i diklormetan (250 ml). Reaksjonsblandingen ble rørt i 24 timer. DMAP (0,02 ekv.) og (Boc)20 (3 x 0,5 ekv.) ble tilsatt i løpet av reaksjonstiden. Reaksjonsblandingen ble vasket med vann og tørket. Det urene produktet ble vasket med heksan som ga rent 6-bis(tert-butoksykarbonyl)-amino-5-klor-nikotinsyre etyl ester (11,87 g, 66%).

c) fS- klor- S- hvdroksvmetvl- pvridin^- ylVkarbaminsvre tert- butvl ester

L1AIH4 (2,4 g, 63,2 mmol) ble tilsatt i porsjoner i løpet av 3,5 timer til en løsning av 6-bis(tert-butoksykarbonyl)-amino-5-klor-nikotinsyre etyl ester (11,5 g, 28,6 mmol) i THF (70 ml) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble rørt i romtemperatur over natten, deretter ble NH4CI (mettet) tilsatt forsiktig fulgt av vann. Løsningen ble filtrert og tørket og konsentrert under redusert trykk som ga urent (3-klor-5-hydroksymetyl-pyridin-2-yl)-karbaminsyre tert-butyl ester (5,86,79%).

d) ( 5- brornmetyl- 3- klor- pvridin- 2- vn- karbaminsyre tert- butvl ester

Trifenylfosfin (2,61 g, 9,7 mmol) fulgt av karbontetrabromid (4,58 g, 13,8 mmol) ble

tilsatt til en suspensjon av (3-klor-5-hydroksymetyl-pyridin-2-yl)-karbaminsyre tert-butyl ester (2,38 g, 9,2 mmol) i CH2C12 (60 ml) ved 0°C. Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 5 timer og konsentrert under redusert trykk. Acetonitril (401) ble tilsatt og blandingen ble holdt ved -20°C over natten. Blandingen ble deretter filtrert og det krystallinske residuet vasket med kald acetonitril. Filtratet ble konsentrert under redusert trykk og en annen mengde bromid ble oppnådd som beskrevet ovenfor. (5-brommetyl-3-klor-pyridin-2-yl)-karbaminsyre tert-butyl ester (1,86 g, 63%) ble oppnådd som hvite krystaller.

e) 2-( 6- tert- butoksvkarbonvlamino- S- klor- pvridin- 3- vlmetvlVmalon^ ester

Dietyl malonat (1,87 ml, 12,31 mmol) ble tilsatt til en suspensjon av NaH (0,54 g, 12,31

mmol, 55%) i tørr DMF (15 ml) ved -8°C. Denne blandingen ble rørt i 15 minutter før den ble tilsatt dråpevis til en løsning av (5-brommetyl-3-klor-pyridin-2-yl)-karbaminsyre tert-butyl ester (3,30 g, 10,26 mmol) i tørr DMF (50 ml) ved 0°C. Den resulterende løsningen ble rørt i 40 minutter ved 0°C og deretter ble NHtCl (5 ml, mettet) tilsatt forsiktig. Røring ved romtemperatur over natten og konsentrering under redusert trykk ga et residue som ble løst i vann/CH2Cl2. Det vandige sjiktet ble ekstrahert med CH2CI2 og de kombinerte organiske ekstraktene ble tørket, filtrert og konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi (1% MeOH i CH2CI2) ga 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-5-klor-pyridin-3-ylmetyl)-malonsyre dietyl ester (2,45,60%) som en seig klar olje.

f) 2-( 6- tert- butoksvkarbonvlamino- 5- klor- pvridin- 3- vlmetvlVmalonsvre monoetyl ester

En løsning av KOH (0,44 g, 6,72 mmol, 85%) i etanol (5 ml) ble tilsatt til en løsning av 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-5-klor-pyridin-3-ylmetyl)-malonsyre dietyl ester (2,45 g, 6,11 mmol) i etanol (25 ml) og metylen klorid (10 ml) ved 0°C. Blandingen ble rørt i 18 timer ved romtemperatur. Løsemidlet ble fordampet i vakuum og residuet løst i vann. Det vandige sjiktet ble vasket med eter, surgjort til pH 4 med IM HC1 og ekstrahert med metylen klorid og etyl acetat. De kombinerte organiske sjiktene ble vasket med vann og saltvann og tørket. Filtrering og konsentrering under redusert trykk ga det urene produktet som ble renset med flash kromatografi (10% MeOH i CH2C12) som ga 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-5-klor-pyridin-3-ylmetyl)-malonsyre monoetyl ester (1,41 g, 62%) som et gulhvitt glassaktig skum.

g) 2-( 6- tetr- butoksvkarbonvlamino- 5- klor- pvridin- 3- vlmetylVakrvlsvreetvl ester

Dietylamin (3,67 ml, 3,67 mmol) ble tilsatt dråpevis fulgt av vann (2,5 ml) og CH2CI2

(2,5 ml) til en blanding av 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-5-klor-pyridin-3-ylmetyl)-malonsyre monoetyl ester (,140 g, 3,64 mmol) og 37% vandig løsning av formaldehyd (0,29 ml, 3,75 mmol) i CH2C12 (2 ml) ved 0°C. Blandingen ble rørt i 20 timer ved romtemperatur og deretter helt over i isvann og ekstrhert med metylenklorid. Det organiske sjiktet ble vasket med 5% NaHCOj, tørket og konsentrert under redusert

trykk. Flash kromatografi (1-2,5% metanol i CH2CI2) ga 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-5-klor-pyridin-3-ylmetyl)-akrylsyre etyl ester 0,81 g (6%).

2- acetylsulfanvlmetvl- 3- f6- tert- butoksvkarbonvlamino- 5- klor- pvridm- 3- v propionsvre etvl ester

Tioeddiksyre (4 ml) ble tilsatt til en suspensjon av 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-5-klor-pyridin-3-ylmetyl)-akrylsyre etyl ester (0,732 g, 2,16 mmol) og trietylamin (0,31 ml, 2,23 mmol) ved 0°C. Blandingen ble rart ved romtemperatur under argon over natten, helt over i isvann og ekstrahert med CH2O2. Den organiske fasen ble vasket med mettet NaHCO? til gassutvikling stoppet og deretter tørket. Det urene produktet ble renset to ganger over flash kromatografi (CH2G2, 1-2,5% MeOH i CH2C12 og heksan/EtOAc, 5:2 —> 1:1) som ga rent 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-tert-butoksykarbonylamino-5-klor-pyridin-3-ylmetyl)-propionsyre etyl ester (0,79 g, 87%).

h) 3- <' 6- amino- 5- klor- pvridin- 3- vn- 2- merkaptometvl- propionsvre

En løsning av 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-tert-butoksykarbonylamino-5-klor-pyridin-3-ylmetyl)-propionsyre etyl ester (55 mg, 0,132 mmol) i konsentrert HC1 (4 ml) ble refluksert i 90 minutter. Reaksjonen ble avkjølt og konsentrert under redusert trykk som ga tittelforbindelsen som HC1 saltet (36 mg, 96,4 %).

'H NMR (400 MHz, D20): 6 2,70-2,97 (m, 5H), 7,73 (s, 1H), 8,09 (s, 1H).

MS (+) 248 (M+l).

Eksempel 23

3- ( 6- amino- 5- hvdroksvmetvl- pvridin- 3- vl)- 2- merkaptometvl- propionsvre

a) 6- bisftert- butoksvkarbonvnamino- 5- vinvl- nikotinsvre etvl ester

En blanding av 5-brom-6-bis(tert-butoksykarbonyl)amino-nikotinsyre etyl ester (4,50 g,

10,1 mmol), vinyltributyltin (3,52 g, 11,1 mmol) og tetrakispalladium trifenylfosfln (0,50 g, 0,40 mmol) i THF (15 ml) ble rørt i 24 timer ved refluks. Tetrakispalladium trifenylfosfln (0,50 g) ble tilsatt og etter 24 timer med refluks ble reaksjonsblandingen

avkjølt og fortynnet med diklormetan (100 ml). Mettet vandig KF (25 ml) ble tilsatt og løsningen rørt i 1 time. Vann ble tilsatt og produktet ekstrahert med diklormetan og den organiske fasen ble tørket og konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi (1%

MeOH i diklormetan) ga 6-bis(tert-butoksykarbonyl)amino-5-vinyl-nikotinsyre etyl ester 3,20 g (81%).

b) f5- hvdroksvmetvl- 3- vinvl- pvridin- 2- vnkarbaminsvre tert- butyl ester

DIB AL (25 ml, IM i heksan) ble tilsatt dråpevis til en løsning av 6-bis(tetr-butoksykarbonyl)amino-5-vinyl-nikotinsyre etyl ester (2,00 g, 5,1 mmol) i THF (40 ml) ved 0°C. Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 1 time. NH4CI (mettet) ble tilsatt forsiktig fulgt av vann og blandingen ble konsentrert under redusert trykk. Residuet ble suspendert i 5% MeOH i diklormetan og filtrert gjennom silika gel. Filtratet ble tørket og konsentrert under redusert trykk som ga (5-hydroksymetyl-3-klor-pyridin-2-yl)karbaminsyre tert-butyl ester (1,00 g, 78%).

c) f5- brornmetvl- 3- vinvl- pvridin- 2- vnkarbaminsvre tert- butvl ester

Til en rørt suspensjon av (5-hydroksymetyl-3-vinyl-pyridin-2-yl)karbaminsyre tert-butyl ester (10,0 g, 40,0 mmol) i CH2C12 (150 ml) og THF (60 ml) ble det tilsatt trifenylfosfln (11,5 g, 44,0 mmol) fulgt av karbontetrabromid (19,9 g, 60,0 mmol) ved 0°C. Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 1 time og deretter konsentrert under redusert trykk. Acetonitril (100 ml) ble tilsatt og blandingen ble holdt ved -20°C over natten. Blandingen ble deretter filtrert og det krystallinske residuet vasket med kald acetonitril. Produktet ble renset med flash kromatografi (1% MeOH i diklormetan) som ga (5-brommetyl-3-klor-pyirdin-2-yl)karbaminsyre tert-butyl ester (4,5 g, 36%).

d) 2- f6- tert- butoksvkarbonvlamino- 5- vinvl- pvridin- 3- vlmetyn- malonsvre dietvl ester

Dietyl malonat (2,30 g, 14,3 mmol) ble tilsatt til en suspensjon av NaH (0,61 g, 14,3

mmol, 55%) i tørr DMF (75 ml) ved 0<*>C. Blandingen ble rørt i 15 minutter og deretter tilsatt dråpevis til en løsning av (5-brommetyl-3-klor-pyridin-2-yl)karbaminsyre tert-butyl ester (4,50 g, 14,3 mmol) i tørr DMF (100 ml) ved 0°C. Den resulterende løsningen ble rørt i 40 minutter ved 0°C og deretter ble NH4CI (30 ml, mettet) tilsatt forsiktig. Konsentrering under redusert trykk ga et residue som ble løst i vann/CH2Cl2. Det vandige sjiktet ble ekstrahert med CH2C12 og de kombinerte ekstraktene ble tørket, filtrert og konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi (1% MeOH i CH2C12) ga 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-5-vinyl-pyridin-3-ylmetyl)-malonsyre dietyl ester (4,30 g, 77%).

e) 2- f 6- tert- butoksvkarbonvl- S- vinvl- p vridin- 3 - ylmetyl Vmalonsvre monoetvl ester

En løsning av KOH (0,71 g, 12,6 mmol, 85%) i etanol (10 ml) ble tilsatt til en løsning

av 2-(6-tert-butoksykarbonylarmno-5-vinyl-pyirdin-3-ylmetyl)-malonsyre dietyl ester (4,30 g, 11,0 mmol) i etanol (25 ml) og diklormetan (10 ml) ved 0°C. Blandingen ble rørt i 6 timer ved romtemperatur. Løsemidlet ble fordampet i vakuum og residuet løst i vann. Det vandige sjiktet ble vasket med eter, surgjort til pH 4 med IM HC1 og ekstrahert med diklormetan. Det organiske sjiktet ble vasket med vann og saltvann og tørket. Filtrering og konsentrering under redusert trykk fulgt av flash kromatografi (10% MeOH i CH2C12) ga 2-(6-tert-butoksykarbonyl-5-vinyl-pyridin-3-ylmetyl)-malonsyre monoetyl ester (3,05 g, 76%).

f) 2- f6- tert- butoksvkarbonvl- 5- vinvl- pvridin- 3- vlmetvn- akrvlsvre etvl ester

Dietylamin (0,85 ml, 8,80 mmol) ble tilsatt dråpevis til en blanding av 2-(6-tert-butoksykafbonyl-5-vinyl-pyirdin-3-ylmetyl)-malonsyre monoetyl ester (3,05 g, 8,37 mmol) og 37% vandig løsning av formaldehyd (0,71 g, 8,80 mmol) i CH2Cl2 (2 ml) ved 0°C. Blandingen ble rørt i 3 timer ved romtemperatur og deretter helt over i isvann og ekstrahert med diklormetan. Det organiske sjiktet ble vasket med 5% NaHCOj og tørket. Flash kromatografi (1% metanol i CH2CI2) ga 2-(6-tert-butoksykarbonyl-5-vinyl-pyridin-3-ylmetyl)-akrylsyre etyl ester (1,70 g, 61%).

g) 2- acetvlsulfanvlmetvl- 3- f6- tert- butoksvkarbonvlamino- 5- vinvl- pvirdin- 3- vlV propionsvre etvl ester

Tioeddiksyre (4 ml) ble tilsatt til en suspensjon av 2-(6-tert-butoksykarbonyl-5-vinyl-pyridin-3-ylmetyl)-akrylsyre etyl ester (0,73 g, 2,16 mmol) i trietylamin (0,31 ml, 2,23 mmol) ved 0°C. Blandingen ble rørt ved romtemperatur under argon over natten, helt over i isvann og ekstrahert med CH2CI2. Den organiske fasen ble vasket med mettet NaHC03 til gassutviklingen stoppet og deretter tørket. Flash kromatografi (1% MeOH i CH2Cl2)ga2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-tert-butoksy-karbonylamino-5-vinyl-pyridin-3-ylj-propionsyre etyl ester (0,51 g, 70%).

3- f6- tert- butoksvkarbonvlam^ propionsvre etvl ester

Ozon ble boblet gjennom en løsning av 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-tert-butoksykarbonylamino-5-vinyl-pyridin-3-yl)-propionsyre etyl ester (0,65 g, 1,60 mmol) i etanol (25 ml) ved -78°C. O2 ble deretter boblet gjennom blandingen i 5 minutter fulgt av N2-bobling i 15 minutter. En blanding av NaBrLt (0,30 g, 8,00 mmol) i vann ble forsiktig tilsatt til blandingen ved -78°C, og reaksjonsblandingen nådde 0°C. Røring fortsatte i 3 timer. Aceton (10 ml) ble tilsatt og reaksjonsblandingen fordampet til en tredjedel av det opprinnelige volumet. 50% NaCl (vandig) ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert med diklormetan, tørket og konsentrert under redusert trykk som ga urent 3-(6-tert-butoksykarbonylamino-5-hydroksymetyl-pyirdin-3-yl)-merkaptometyl-propionsyreetyl ester (0,38 g, 63%).

h) 2- acetylsulfanvlmetylO- f64etr- butoksykarbonylamino- 5- hvdroksvmetvl- pyridin- 3-vlVpropionsvre etvl ester

En blanding av uren 3-(6-tert-butoksykarbonylamino-5-hydroksymetyl-pyridin-3-yl)-merkaptometyl-propionsyre etyl ester (0,38 g, 1,0 mmol) og KHCO3 (0,11 g, 1,1 mmol) i eddiksyre anhydrid (1 ml) ble rørt ved romtemperatur i 5 timer. NH4CI (mettet) og vann ble deretter tilsatt. Blandingen ble ekstrahert med diklormetan, tørket og konsentrert under redusert trykk. Flash kromatografi (CH2CI2,2,5% MeOH i CH2CI2) ga2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-tert-buto yl)-propionsyre etyl ester (0,23 g, 60%).

i) 3- f6- amino- 5- hvdroksvmetvl- pvridin- 3- vn- 2- merkaptometvl- propionsvre

En løsning av 3-(6-tert-butoksykarbonylamino-5-hydroksymetyl-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-propionsyre etyl ester (50 mg, 135 mmol) i konsentrert HC1 (2 ml) ble refluksert i 60 minutter. Reaksjonen ble avkjølt og konsentrert under redusert trykk som ga tittelforbindelsen som HCl-saltet (37 mg, 98,3%).

'H NMR (400 MHz, D20): 5 2,70-2,95 (m, 5H), 4,65 (s, 2H), 7,68 (s, 1H), 7,88 (s, 1H).

MS(+)244(M+1)

Eksempel 24

2- merkapto- 3- pvrrolidin- 3- vl- propionsvre

a) ( 1 - bensvl- pmolidin- 3- vD- metanol

Red-A (160 ml av en 3,5 M løsning i toluen, 560 mmol) ble tilsatt til en løsning av 1-bensyl-5-okso-pyrrolidin-3-karboksylsyre (20 g, 91 mmol) i tørr THF (650 ml) under argon. Reaksjonsblandingen ble refluksert i 2,5 timer og deretter helt over i en blanding av knust is og NaOH (20%). Fasene ble separert og den vandige fasen ekstrahert med toluen og de kombinerte fasene ble tørket og konsentrert under redusert trykk som ga 17,9 g av det urene produktet som en gul olje.

b) 3- hvdroksvmetyl- pviTolidin- l- karboksvisvre tert- butvl ester

10% Pd-C (6,1 g) og ammoniumformat (10 g, 158 mmol) ble tilsatt til en løsning av

(l-bensyl-pyrrolidin-3-yl)-metanol (6,1 g, 32 mmol) i metanol (220 ml) under argon. Etter refluks i 15 minutter ble reaksjonsblandingen filtrert varm gjennom et lag celite, celiten ble ytterligere vasket med metanol og de kombinerte organiske fasene ble konsentrert. Residuet ble løst i THF (35 ml) og vann (35 ml), løsningen ble avkjølt til 0°C og K2C03 (22 g, 159 mmol) og di-tert-butyl dikarbonat (6,95 g, 32 mmol) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. THF ble fjernet under redusert trykk, vann tilsatt og den vandig fasen ble ekstrahert med EtOAc. De kombinerte organiske fasene ble tørket og konsentrert under redusert trykk som ga 4.64 g urent produkt. Flash kromatografi (heptan/EtOAc: 1/0 - > 68/32) av det urene produktet ga 3-hydroksymetyl-pyrrolidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (3,82 g, 60%) som en fargeløs olje.

c) 3- trifluormetansulfonvloksvmetvl- pvrrolidin- l- karboksvisvre tert- butvl ester

Metansulfonyl klorid (0,4 ml, 5,17 mmol) ble tilsatt dråpevis til en løsning av 3-hydroksymetyl-pyrrolidin-1-karboksylsyre tert-butyl ester (1 g, 4,97 mmol) og trietyl amin (1,04 ml, 7,46 mmol) i CH2CI2 (15 ml) ved 0"C. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. Etter filtrering ble CH2CI2 tilsatt og den organiske fasen ble vasket med IM HC1, tørket og konsentrert under redusert trykk som ga 3-trifluormetansulfonyloksyrnetyl-pyrrolidin-1-karboksylsyre tert-butyl ester (1,4 g, 97%).

d) 3- brommetvl- pvrrolidin- l- karboksvlsvre tert- butvl ester

En blanding av 3-trifluormetansulfonyloksynietyl-pyrrolidin-l -karboksylsyre tert-butyl

ester (3,85 g, 13,8 mmol) og LiBr (3,61 g, 42 mmol) i tørr aceton (30 ml) ble refluksert over natten. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur, filtrert og konsentrert. Residuet ble løst i CH2CI2 og vasket med vann, tørket og konsentrert under redusert trykk som ga 6 g av det urene produktet. Rensing ved flash kromatografi (heptan/EtOAc: 1/10 - > 68/32) ga 3-brommetyl-pyrrolidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (2,84 g, 78%) som en fargeløs olje.

e) 2- f l- tert- butoksvkarbonvl- pvrrolidin- 3- vlmetvlVmalonsvre dietvl ester

Dietyl malonat (1,93 ml, 12,7 mol) ble tilsatt dråpevis til en løsning av NaH (60%: 0,51

g, 12,8 mmol) i tørr THF (15 ml) ved 0°C. Blandingen ble rørt ved romtemperatur hvoretter den ble tilsatt til en reflukserende blanding av 3-brommetyl-pyrrolidin-l - karboksylsyre tert-butyl ester (2,8 g, 10,6 mmol) i tørr THF (30 ml). Reaksjonsblandingen ble ytterligere refluksert i 19 timer og deretter konsentrert nesten til tørrhet. Vann (11) ble tilsatt og produktet ekstrahert med CH2CI2. De kombinerte organiske fasene ble tørket og konsentrert under redusert trykk som ga 3,3 g av det urene produktet. Rensing ved flash kromatografi (CH2Cl2/EtOAc: 1/0 -> 68/32) ga 2-(l-tert-butoksykarbonyl-pyrrolidin-3-ylmetyl)-malonsyre dietyl ester (1,64 g, 45%).

f) 2- f 1 - tert- butoksvkarbonvl- pvrrolidin- 3- vlmetvlVmalonsvre monoetyl ester

En løsning av KOH (0,26 g, 4,6 mmol) i etanol (7 ml) ble tilsatt til en løsning av

2-(l-tert-butoksykarbonyl-pyrrolidin-3-ylmetyl)-malonsyre dietyl ester (1,52 gm 4,4 mmol) i etanol (7 ml) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur over natten, konsentrert under redusert trykk og residuet ble løst i vann (500 ml). Det vandige sjiktet ble vasket med dietyl eter, surgjort til pH 3 med 0,5 M HC1 og ekstrahert med dietyl eter. Den organiske fasen ble tørket og konsentrert under redusert trykk som ga 2-(l-tert-butoksykarbonyl-pyrrolidin-3-ylmetyl)-malonsyre monoetyl ester (1,13 g, 81%).

g) 3- f2- etoksvkarbonyl- allvn- pvrrolidin- l- karboksvisvre tert- butvl ester

Dietylamin (0,34 ml, 3,3 mmol) ble tilsatt til en blanding av 2-(l-tert-butoksykarbonyl-pyrrolidin-3-ylmetyl)-malonsyre monoetyl ester (0,69 g, 2,19 mmol) i 36% vandig løsning av formaldehyd (0,27 ml, 3,5 mmol), CH2C12 (1,6 ml) og vann (1,6 ml) ved 0"C. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur over natten, helt over i isvann (500 ml) og ekstrahert med CH2C12. De kombinerte organiske fasene ble vasket med 5% NaHC03, tørket og konsentrert under redusert trykk som ga 3-(2-etoksykarbonyl-allyl)-pyrrolidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (0,55 g, 87%) som en fargeløs olje.

h) 3-( 3- acetvlsulfanyl- 2- etoksykarbon tert-butvl ester

Tioeddiksyre (5 ml) som var blitt avkjølt til 0°C, ble tilsatt til en blanding av 3-(2-etoksykarbonyl-allyl)-pyrrolidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (0,72 g, 2,54 mmol) og trietyl amin (0,37 ml, 2,67 mmol) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble rørt ved 0°C i 30 minutter, ved romtemperatur i 23 minutter og deretter helt over i isvann (400 ml). Det vandig sjiktet ble ekstrahert med CH2C12. De kombinerte organiske fasene ble vasket med mettet NaHCO}, tørket og konsentrert under redusert trykk. Det urene produktet ble renset med flash kromatografi (CH2Cl2/EtOAc: 1/0 -» 68/32) som ga 3-(3-acetylsulfanyl-2-etoksykarbonyl-propyl)-pyrrolidin-1 -karboksylsyre tert-butyl ester (0,72 g, 79%) som en olje.

i) 2- merkapto- 3- pvrrolidin- 3- vl- propionsyre

En løsning av 3-(3-acetylsulfanyl-2-etoksykarbonyl-propyl)-pyrrolidin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (0,52 g, 1,45 mmol) i konsentrert HC1 (15 ml) ble refluksert under argon i 1 time. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og konsentrert under redusert trykk som ga en diastereomer blanding av tittelforbindelse som hydrokloridsaltet (0,33 g, 100%).

'H NMR (500 MHz, D20): 8 1,60-1,92 (m, 3H), 2,19-2,32 (m, 1H), 2,32-2,42 (m, 1H), 2,66-2,83 (m, 3H), 2,84-2,96 (m, 1H), 3,23-3,32 (m, 1H), 3,40-3,58 (m, 2H), MS(+)190(M+1).

Eksempel 25

3- fCis- 4- amino- svklopent- 2- envlV2- merkapto- propionsvre

Cis- metansulfonsvre4- tert- butoksvkarbonylamino- svklopent- 2- envlmetvl ester

Metansulfonyl klorid (0,76 ml, 9,8 mmol) ble tilsatt til en løsning av cis-(4-hydroksymetyl-syklopent-2-enyl)-karbaminsyre tert-butyl ester (2 g, 9,4 mmol) og trietyl amin (1,96 ml, 14,1 mmol) i CH2C12 (30 ml) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. Etter filtrering ble CH2C12 tilsatt og den organiske fasen ble vasket med IM HC1, tørket og konsentrert under redusert trykk som ga cis-metansulfonsyre-4-tert-butoksykarbonylamino-syklopent-2-enyhnetyl ester (2,64 g, 96%).

a) Cis- f4- brommetvl- svklopent- 2- envlVkarbaminsvre tert- butvl ester

En blanding av cis-metansulfonsyre-4-tert-butoksykarbonylamino-syklopent-2-enylmetyl ester (2,51 g, 8,6 mmol) og LiBr (2,24 g, 25,8 mmol) i tørr aceton (20 ml) ble refluksert over natten. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur, filtrert og konsentrert. Residuet ble løst i CH2C12 og vasket med vann, tørket og konsentrert under redusert trykk som ga Cis-(4-brornmetyl-syklopent-2-enyl)-karbaminsyre tert-butyl ester (2,23 g, 94%).

b) 2-( cis- 4- tert- butoksvkarbonvlamino- svklopent- 2 - envlmetvlVmalonsvre dietvl ester

Dietyl malonat (1,29 ml, 8,5 mmol) ble tilsatt til en blanding av NaH (60%, 0,34 g, 8,5

mmol) i DMF (10 ml). Etter røring ved romtemperatur i 15 minutter ble en løsning av cis-(4-brt>mmetyl-syklopent-2-enyl)-karbaminsyre tert-butyl ester (1,95 g, 7,1 mmol) i DMF (12 ml) tilsatt, og reaksjonsblandingen ble rørt ved 60°C i 19 timer. EtOAc ble tilsatt og den organiske fasen ble ekstrahert med vann og saltvann, tørket og konsentrert under redusert trykk som ga 2,44 g av det urene produktet. Rensing med flash kromatografi (CH2Cl2/EtOAc:l/0 68/32) ga 2-(cis-4-tert-butoksykarbonylamino-syklopent-2-enylmetyl)-malonsyre dietyl ester (1,47 g, 58%).

c) 2- fcis- 4- tert- butoksvkarbonvlamino- syklopent- 2- enylmetvl)- malonsvre monoetyl ester

En løsning av KOH (0,19 g, 3,4 mmol) i etanol (6 ml) ble tilsatt til en løsning av 2-(cis-4-tert-butoksykarbonylamin-syklopent-2-enylmetyl)-malonsyre dietyl ester (1,15 g, 3,2 mmol) i etanol (6 ml) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur over natten, konsentrert og isvann (400 ml) ble tilsatt. Den vandige fasen ble vasket med dietyl eter (emulsjonen dannet i løpet av ekstraksjonen ble behandlet med saltvann for å få fasene til å separere), surgjort til pH 3 med 0,5 M HC1, og ekstrahert med dietyl eter. Den organiske fasen ble tørket og konsentrert under redusert trykk som ga 2-(cis-4-tert-butoksykarbonylamino-syklopent-2-enyuiietyl)-malonsyre monoetyl ester (0,86 g, 81%) som hvite krystaller.

d) 2- fcis- 44ert- butoksvkarbonvlamino- svklopent- 2- envlmetvlVakrvlsvreetvl ester

Dietyl amin (0,31 ml, 3,0 mmol) ble tilsatt til en blanding av 2-(cis-4-tert-butoksykarbonylamino-syklopent-2-enylmetyl)-malonsyre monoetyl ester (0,66 g, 2,0 mmol) i 36% vandig løsning av formaldehyd (0,25 ml, 3,2 mmol), CH2CI2 (1,6 ml) og vann (1,6 ml) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur over natten, helt over i isvann (400 ml) og ekstrahert med CH2CI2. I løpet av ekstraksjonen ble fase-separasjonen forbedret ved tilsetting av saltvann. De kombinerte organiske fasene ble vasket med 5% NaHCO?, tørket og konsentrert under redusert trykk som ga 2-(cis-4-tert-butoksykarbonylamino-syklopent-2-enylmetyl)-akrylsyre etyl ester (0,56 g, 94%) som en olje.

e) 2- acetvlsulfanvlmetvl- 3- fcis- 4- tert- butoksvkarbonvlamino- svklopent- 2- enyl)-propionsvre etvl ester

Tioeddiksyre (4 ml) som var blitt avkjølt til 0°C, ble tilsatt til en blanding av 2-(cis-4-tert-butoksykarbonylamino-syklopent-2-enylmetyl)-akrylsyre etyl ester (0,56 g, 1,9 mmol) og trietylamin (0,28 ml, 2,0 mmol) ved 0<*>C. Reaksjonsblandingen ble rørt ved 0°C i 30 minutter, romtemperatur i 19 timer og deretter helt over i isvann (400 ml). Det vandige sjiktet ble ekstrahert med CH2CI2. Den organiske fasen ble vasket med mettet NaHCCh, tørket og konsentrert under redusert trykk som ga 1,7 g av det urene produktet. Rensing ved flash kromatografi (CHfeCb/EtOAc: 1/0 -)- 68/32) ga 2-acetylsulfanylmetyl-3-(cis-4-tetr-butoksykarbonylamino-syklopent-2-enyl)-propionsyre etyl ester (0,46 g, 65%).

f) 3- fcis- 4- amino- svklopent- 2- envl1- 2- merkaptometvl- propionsvre

En løsning av 2-acetylsulfanylmetyl-3-(cis-4-tetr-butoksykarbonylamino-syklopent-2-enyl)-propionsyre etyl ester (86 mg, 0,23 mmol) i konsentrert HC1 (5 ml) ble refluksert under argon i 1 time. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og konsentrert under redusert trykk som ga en diastereomer blanding av tittelforbindelsen som hydroklorid saltet (65 mg).

<*>H NMR (400 MHz, D20): 5 1,35-1,47 (m, 2H), 1,60-1,72 (m, 1H), 1,74-1,92 (m, 2H), 1,92-2,04 (m, 1H), 2,67-2,92 (m, 10H), 4,34-4,43 (m, 2H), 5,79-5,85 (br s, 2H), 6,12 (d, lH),6,18(d, 1H).

Eksempel 26

2- merkaptometyl- 3- piperasin- 1 - vl- propions yre

a) 4-( 2- etoksvkarbonyl- allyl>piperasin- l - karboksylsyre tert- butyl ester

Til en løsning av 2-brommetyl-akrylsyre etyl ester (1,93 g, 10 mmol) i N,N-dimetylformamid (25 ml) ble det tilsatt piperasin-1-karboksylsyre tert-butyl ester (1,86 g, 10 mmol) og deretter dråpevis etyl-diisopropyl-amin (1,71 ml, 10 mmol). Etter røring i 16 timer ved romtemperatur ble løsemidlet fjernet under redusert trykk og vann (50 ml) og diklormetan (50 ml) ble tilsatt. Etter røring i 2 minutter ble sjiktene separert, den organiske fasen ble vasket med vann og saltvann, tørket over magnesiumsulfat. Løsemidlet ble fjernet under redusert trykk som ga urent 4-(2-etoksykarbonyl-allyl)-piperasin-1-karboksylsyre tert-butyl ester (2,456 g, 82%).

b) 4- f3- acetvlsulfanvl- 2- etoksvkarbonvl- propvn- piperasin- 1 - karboksvlsvrré tert- butyl ester

Til urent 4-(2-etoksykarbonyl-allyl)-piperasin-l-karboksylsyre tert-butyl ester (2,45 g, 8,2 mmol) ble det tilsatt tioleddiksyre (7,5 ml) under argon. Blandingen ble avkjølt til 0°C og trietylamin (1,14 ml, 8,2 mmol) ble tilsatt dråpevis. Blandingen ble deretter rørt ved romtemperatur i 2 dager og tioleddiksyre (2,5 ml) ble tilsatt. Røring fortsatte i 1 dag og deretter ble vandig mettet natrium hydrogenkarbonat løsning tilsatt forsiktig til en klar reaksjon og blandingen ble ekstrahert 3 ganger med diklormetan. De kombinerte organiske sjiktene ble vasket to ganger med vandig mettet natrium hydrogenkarbonat løsning og en gang med saltvann. Etter tørking over magnesium sulfat ble løsemidlet fjernet under redusert trykk og residuet ble renset med kolonne kromatografi (silika gel, 1,7% metnol i diklormetan) som ga 4-(3-acetylsulfanyl-2-etoksykarbonyl-propyl)-piperasin-l-karboksylsyrre tert-butyl ester (0,29 g, 9,4%).

2- merkaptomet vl- 3 -piperasin- 1 - vl- propions vre

Til4-(3-acetylsulfanyl-2-etoksykarbonyl-propyl)-piperasin-l-k^ ester (0,095 g, 0,25 mmol) under argon ble mettet saltsyre (3 ml, 37%) tilsatt og blandingen ble varmet under argon til refluks i 2,5 timer. Løsningen ble konsentrert under redusert trykk som ga tittelforbindelsen som hydrokloridsaltet (0,071 g, kvantitativt).

'H NMR (300 MHz, D20): 5 3,86-3,49 (m, 10H), 3,36-3,28 (m, 1H), 3,01-2,88 (m, 2H).

MS 205 (M+H)

Eksempel 27

3- f6- amino- pvridin- 3- vlV2- merkaptometvl- pentansvre

a) 2- f l-( 6- tert- butoksykarbonylamino- pvridin- 3- vn- propvn- malonsvre dietvl ester

Til en rørt suspensjon av kobber jodid (5,71 g, 30 mmol) i dietyl eter (120 ml) under

argon ble det tilsatt etylmagnesium bromid (3M løsning i dietyl eter, 20 ml, 20 mmol) innen 10 minutter ved 0°C. Etter 5 minutters røring ble reaksjonsblandingen avkjølt til - 78°C og en løsning av 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetylen)-malonsyre dietyl ester (5,47 g, 15,0 mmol) i tetrahydrofuran (60 ml) ble tilsatt dråpevis i løpet av 0,5 timer. I løpet av denne perioden ble tetrahydrofuran (40 ml) tilsatt. Blandingen ble rørt ved -40°C i 2,5 timer. Deretter ble en løsning av ammoniumklorid (5%) i vandig ammoniakk løsning (5%) tilsatt ved kraftig røring, fulgt av overskudd luft, og blandingen ble varmet til romtemperatur. Blandingen ble ekstrahert to ganger med etyl acetat. De -kombinerte organiske sjiktene ble vasket suksessivt med vandig ammoniakk løsning (5%) og saltvann, tørket over magnesium sulfat. Løsemidlet ble fjernet under redusert trykk og residuet ble rekrystallisert fra en blanding av diisopropyl eter og tetrahydrofuran (5:1, vol./vol.) som ga 2-[l-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-propylj-malonsyre dietyl ester (3,23 g, 55%).

b) 2- f l- fe- tert- butoksvkarbonvlamino- pyridin- S- vlVpropvn- malonsvre monoetyl ester

2-[l-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-propyl]-malonsyre dietyl ester (3,23 g,

8,19 mmol) ble løst i en blanding av diklormetan (12 ml) og etanol (24 ml, 99,5%). Til denne løsningen ble det dråpevis tilsatt en løsning av kalium hydroksid (0,528 g, 87%,

8,20 mmol) i etanol (16 ml, 99,5%) ved 0<*>C i løpet av 0,5 timer. Røring fortsatte i 16 timer mens blandingen ble varmet til romtemperatur. Etter konsentrering under redusert trykk til 5-10 ml, ble vann (50 ml) tilsatt og den resulterende emulsjon ble rørt i 0,5 timer og deretter filtrert. Filtratet ble vasket to ganger med en blanding av etyl acetat og dietyl eter (2:1, vol/vol). Det vandig sjiktet ble surgjort ved tilsetting av en løsning av sitronsyre i vann (10%) for å nå en pH på 4 til 5, og ekstrahert tre ganger med etyl acetat. De kombinerte organiske sjiktene ble vasket med saltvann, tørket over magnesium sulfat og løsemidlet ble fjernet under redusert trykk som ga 2-[l-(6-tert-butoksykafbonylamino-pyridin-3-yl)-propyl]-malonsyre monoetyl ester (2,47 g, 82%).

c) 2- f l- f6- tert- butoksvkarbonvl- pyridin- 3- vn- porpvl1- akrylsvre etvl ester

Til en løsning av 2-[l-(6-tert-butoksykarbonylamin6-pyridin-3-yl)-propyl]-malonsyre

monoetyl ester (2,45 g, 6,69 mmol) i diklormetan (11 ml) ble det tilsatt en vandig løsning av formaldehyd (0,49 ml, 37%) og dietylamin (0,62 ml, 6,4 mmol) ved 0°C. Etter kraftig røring av blandingen i 16 timer ble vann (40 ml) og etyl acetat (40 ml) tilsatt. Etter ytterligere 2 minutters røring ved romtemperatur ble sjiktene separert og det vandige sjiktet ekstrahert to ganger med etyl acetat. De kombinerte organiske sjiktene ble vasket med en mettet vandig løsning av natrium hydrogenkarbonat og saltvann. Etter tørking over natrium sulfat ble løsemidlet fjernet under redusert trykk som ga 2-[l-(6-tert-butoksykarbonyl-pyridin-3-yl)-propyl]-akrylsyre etyl ester (1,21 g, 54%).

d) 2- acetvlsulfanvlmety1- 3-( 6- tert- b^ ester

2-[l-(6-tert-butoksykarbonyl-pyridin-3-yl)-propyl]-akrylsyre etyl ester (1,20 g, 3,59 mmol) ble løst i tioleddiksyre (4 ml) under argon og trietylamin (0,56 ml, 4,0 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble varmet til 60°C. Etter 22 timer ble tioleddiksyre (2 ml) tilsatt. Etter ytterligere 14 timer ble blandingen avkjølt til romtemperatur og en mettet løsning av natrium hydrogenkarbonat ble tilsatt sakte for å oppnå en nøytral løsning. Denne ble ekstrahert tre ganger med etyl acetat. De kombinerte organiske sjiktene ble vasket med vandig mettet natrium hydrogenkarbonatløsning og saltvann, og tørket over magnesium sulfat. Etter konsentrering under redusert trykk ble residuet renset ved kolonne kromatografi (silika gel, 1,7% metanol i diklormetan) som ga 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-pentansyre etyl ester (1,22 g, 83%).

Blandingen av diastereomerer ble separert i preparativ skala ved kiral kromatografi ved anvendelse av Chiralpak AD kolonne (250<*> 4,6 mm) som stasjonær fase og heksan (blanding av isomerer/etanol blanding (85:15), som inneholder dietylamin (0,05%) ved en strømningshastighet på 1 ml/min. med en prøvekonsentrasjon på 5 mg/ml.

Det enantiomere overskuddet ble bestemt analytisk ved kiral HPLC på samme kolonne med heksan/etanol blanding (85:15) som eluent.

2- acetvlsulfanvlmetvl- 3- f6- tert- butoksvkarbonvlamino- pvirdin- 3- vlVpentanswe ester/ A: Retensjonstid 10,72 min, ee = 99%.

2- acetvlsulfanvlmetvl- 3-( 6- tetr- butoksvkarbonvlamino- pvridin- 3- vn- pentansvreetvl ester/ B

Retensjonstid 14,41 min, ee = 98%.

2- acetvlsulfanvlmetvl- 3- f6- tert- butoksvkarbonvlamino- pvridin- 3- vlVpentansyreetyl ester/ C

Retensjonstid 23,0 min, ee = 98%.

2- acetylsulfanvlmetvl- 3-( 6- tert- butoksykarbonvlamino- pvirdm- 3- vlVpentanswe ester/ D

Retensjonstid 29,83 min, ee = 97%.

et 3- f6- amino- pvridin- 3- vl)- 2- merkaptometvl- pentansvre

Saltsyre (38%, 4 ml) ble tilsatt til

2-acetylsulfanylmetyl-3-(64ert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-pentansyreetyl ester (0,041 g, 0,1 mmol) under argon og blandinge ble vannet til refluks i 4 timer. Konsentrering under redusert trykk og tørking (45°C, 0,3 mbar) ga tittelforbindelsen som hydrokloridsaltet (0,027 mg, 97%).

S^- amino- pvirdin- S- vn^- merkaptometvl- pentansvre/ A

Denne forbindelsen ble oppnådd fra 3-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyirdin-3-yl)-pentansyre etyl ester/A ved fremgangsmåten beskrevet ovenfor.

'H NMR (300 MHz, D20): 5 7,79 (dd, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,05 (d, 1H), 2,81 (m, 2H), 2,51 (m, 2H), 1,66 (m, 2H), 0,72 (t, 3H),

MS+ 241 (M+H).

3- f6- amino- pvirdin- 3- vn- 2- merkaptometvl- pentansvre/ B

Denne forbindelsen ble oppnådd fra 2-asetylsulfanylmetyl-3-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-pentansyre etyl ester/B ved fremgangsmåten beskrevet ovenfor.

'H NMR (300 MHz, D20): 6 7,85 (dd, 1H), 7,64 (d, 1H), 7,01 (d, 1H), 2,98-2,64 (m, 4H), 1,89 (m, 1H), 1,60 (m, 1H), 0,74 (t, 3H).

MS+ 241 (M+H).

3- f6- amino- pvridin- 3- vl')- 2- merkaptometvl- pentansyre/ C

Denne forbindelsen ble oppnådd fra 2-asetylsulfanylmetyl-3-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-pentansyre etyl ester/C ved fremgangsmåten beskrevet ovenfor.

'H NMR (300 MHz, D20): 5 7,85 (dd, 1H), 7,64 (d, 1H), 7,01 (d, 1H), 2,98-2,64 (m, 4H), 1,89 (m, 1H), 1,60 (m, 1H), 0,74 (t, 3H).

MS+ 241 (M+H).

3- f6- amino- pvridin- 3- vlV2- merkaptometvl- pentansvre/ D

Denne forbindelsen ble oppnådd fra 2-asetylsulfanylmetyl-3-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-pentansyre etyl ester/D ved fremgangsmåten beskrevet ovenfor.

'H NMR (300 MHz, D20): o 7,79 (dd, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,05 (d, 1H), 2,81 (m, 2H), 2,51 (m, 2H), 1,66 (m, 2H), 0,72 (t, 3H).

MS+ 241 (M+H).

Eksempel 28

3- f 6- amino- p virdin- 3 - vlV2- merkaptometvl- 4- metvl- pentansvre 2- f 1 - i 6- tert- butoksvkarbonvl- pvridin- 3- vll- 2- metvl- propvl1- malonsvre dietvl ester

Til en rart løsning av kobber syanid (3,58 g, 40 mmol) i tetrahydrofuran (50 ml) ved - 15°C ble en løsning av isopropylmagnesium bromid (40 ml, 2 M, 80 mmol) i tetrahydrofuran tilsatt under argon i løpet av 15 minutter. Etter ytterligere 15 minutters røring ble en løsning av 2-(6-tert-butoksykarbonyl-pyirdin-3-ylmetylen)-malonsyre dietyl ester (3,78 g, 10,4 mmol) i tetrahydrofuran (50 ml) tilsatt dråpevis i løpet av 15 minutter. Etter røring i 16 timer ble blandingen varmet til romtemperatur. Deretter ble en løsning av ammonium klorid (5%) i vandig ammoniakk løsning (5%) tilsatt under kraftig røring med tilgang på overskudd av luft. Blandingen ble ekstrahert to ganger med etyl acetat. De kombinerte organiske sjiktene ble vasket suksessivt med vandig ammoniakk løsning (5%) og saltvann, og tørket over magnesium sulfat. Løsemidlet ble fjernet under redusert trykk og residuet ble renset med kolonne kromatografi (silika gel, 1,7% metanol i diklormetan) som ga urent 2-[l-(6-tetr-butoksykarbonyl-pyridin-3-yl)-2-metyl-propyl]-malonsyre dietyl ester (2,85 g, 25%).

a) 2- f 1 - f6- tert- butoksykarbonvlamino- pvirdin- 3 - vO- 2- metvl- propvil - malonsvre monoet<y>l ester

Til en løsning av 2-[l-(6-tert-butoksykarbonyl-pyridin-3-yl)-2-metyl-propyl]-malonsyre dietyl ester (1,569 g, 3,84 mmol) i en blanding av diklormetan (6 ml) og etanol (12 ml, 95%) ble ved 0°C en løsning av kalium hydroksid (0,272 g, 85%, 4,2 mmol) i etanol (6 ml. 95%) dråpevis tilsatt i løpet av 40 minutter. Etter ytterligere en times røring ble blandingen varmet til romtemperatur og rørt i ytterligere 18 timer. Deretter ble vann (30 ml) og diklormetan (30 ml) tilsatt og etter 3 minutters raring ble sjiktene separert. Den organiske fasen ble ekstrahert en gang med vann og de kombinerte vandige fasene ble vasket en gang med eter. Deretter ble en vandig løsning av sitronsyre (10%) tilsatt for å justere pH til 4 og løsningen ekstrahert tre ganger med etyl acetat. De kombinerte organiske sjiktene ble vasket med saltvann og tørket over magnesium sulfat. Etter fordampning av løsemidlet ble urent 2-[l-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyirdin-3-yl)-2-metyl-propyl]-malonsyre monoetyl ester (0,94 g, 64%) oppnådd.

b) 2- ri-( 6- tert- butoksvkarbonvl^ etvl ester

Til en løsning av 2-[l-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridk-3-yl)-2-metyl-propyl]-malonsyre monoetyl ester (0,94 g, 2,47 mmol) i diklormetan (4 ml) ble det tilsatt en vandig løsning av formaldehyd (0,18 ml, 37%) og dietylamin (0,23 ml, 2,32 mmol) ved 0°C. Etter kraftig røring av blandingen i 16 timer ble vann (30 ml) og etyl acetat (30 ml) tilsatt. Etter ytterligere to timers røring ved romtemperatur ble sjiktene separert og det vandige sjiktet ble ekstrahert to ganger med etyl acetat. De kombinerte organiske sjiktene ble vasket med mettet vandig løsning og natrium hydrogenkarbonat og saltvann. Etter tørking over natrium sulfat ble løsemidlet fjernet under redusert trykk og residuet ble renset med kolonne kromatografi (silika gel, 1,7% metanol i diklormetan) som ga 2-[l-(6-tert-butoksykarbonyl-pyridin-3-yl)-2-metyl-propyl]-akrylsyre etyl ester (0,24 g, 28%).

c) 2- acetvlsulfanvlmetvl- 3-( 6- tert- butoksvkarbonvlamino- pvirdin- 3- vlV4- metvl-pentansvre etvl ester

2-[l-(6-tert-butoksykarbonyl-pyridin-3-yl)-2-metyl-propyl]-akrylsyre etyl ester (0,431 g, 1,24 mmol) ble løst i tioleddiksyre (4 ml) under argon og trietylamin (0,21 ml, 1,5 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble varmet til 60°C. Etter 24 timer ble tioleddiksyre (2 ml) tilsatt. Etter ytterligere 20 timer ble blandingen avkjølt til romtemperatur og en mettet løsning av natrium hydrogenkarbonat ble sakte tilsatt for å oppnå en nøytral løsning. Denne ble ekstrahert tre ganger med etyl acetat. De kombinerte organiske sjiktene ble vasket med vandig mettet natrium hydrogenkarbonatløsning og saltvann og tørket over magnesium sulfat. Etter konsentrering under redusert trykk ble residuet renset med kolonne kromatografi (silika gel, 1,7% metanol i diklormetan) som ga 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-4-metyl-pentans etyl ester (0,284 g, 54%) som en blanding av diastereomerer (6:1).

d) 3- f6- amino- pvirdin- 3- vn- 2- merkaptometvl- 4- metvl- pentansvre

2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyirdin-3-yl)-4-metyl-pentansyre etyl ester (0,085 g, 0,20 mmol) ble løst i argon og tilsatt mettet saltsyre (5 ml, 37%) og varmet til refluks under argon i 5,5 timer. Konsentrasjon under redusert trykk og tørking ved 45°C/0,3 mbar ga tittelforbindelsen som hydrokloirdsaltet (0,058 g, 99%) som en blanding diastereomerer (6:1).

'H NMR (300 MHz, D20): 6 7,81 (m, 1H), 7,62 (m, 1H), 6,98 (m, 1H), 3,18-3,06 (m, 1H), 2,93-2,40 (m, 3H), 2,23-1,93 (m, 1H), 0,93-0,74 (m, 6H).

MS 255 (M+H).

Eksempel 29

3- f6- amino- pvirdin- 3- vlV2- merkaptometvl- 3- fenvl- propionsvre

a) 2- f( 6- ten- butoksvkarbonylam^ ester

Til en kraftig rørt suspensjon av kobber(I)syanid (1,71 g, 19,06 mmol) i tørr THF (18

ml) ble det tilsatt en løsning av fenylmagnesiumbromid (12,7 ml 3M i eter, 38,11 mmol) ved 0°C under argon. Blandingen ble varmet til romtemperatur som ga en mørkebrun løsning. Etter 150 minutter ble en løsning av 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetylen)-malonsyre dietyl ester (1,74 g, 4,76 mmol) i tørr THF (19 ml) tilsatt ved 0°C. Blandingen ble rørt i 3 dager og deretter ble en vandig ammoniumklorid løsning tilsatt. Det vandige sjiktet ble separert og ekstrahert med etyl acetat. De kombinerte organiske sjiktene ble vasket med saltvann og tørket. Fjerning av løsemidlet i vakuum ga et residue som ble suspendert i heksan. Filtrering av krystallene ga 2-[(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-fenyl-metyl]-malonsyre dietyl ester (1,85 g, 88%).

b) 2- ff6- tert- butoksvkarbonvlamino- pvridin- 3- vn- fenvl- metvl1- malonsvre monetvl ester

En løsning av KOH (0,266 g, 4,11 mmol) i etanol (14 ml) ble tilsatt til en løsning av 2-[(6-tert-butoksykarbonylamino-pyirdin-3-yl)-fenyl-metyl]-malonsyre dietyl ester (1,82 g, 4,11 mmol) i etanol (12 ml) og metylen klorid (13 ml) ved 0°C. Blandingen ble rørt over natten ved romtemperatur. Mer KOH (80 mg oppløst i 3 ml etanol) ble tilsatt ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble rørt i ytterligere 18 timer. Blandingen ble konsentrert under redusert trykk og etyl acetat og 0,5 M HC1 ble tilsatt til residuet. Det organiske sjiktet ble vasket med saltvann og tørket. Etter filtrering og fordampning i vakuum ble residuet suspendert i heksan. Filtrering av krystallene ga 2-[(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-fenyl-metyl]-malonsyre monetyl ester (1,7 g, 98%).

b) 2- f f 6- tetr- butoksykarbonvlamino- pvridin- 3- vll- fenvl- metvll - akrvls vre etvl ester

Dietylamin (0,52 ml, 5,04 mmol) ble tilsatt til en blanding av 2-[(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-fenyl-metyl]-malonsyre monetyl ester (1,7 g, 4,1 mmol) og 37% vandig løsning av formaldehyd (0,42 ml, 5,6 mmol) i metylenklorid (6,5 ml) ved 0°C. Blandingen ble rørt over natten ved romtemperatur og deretter fortynnet med etyl acetat. Det organiske sjiktet ble vasket med vandig mettet natrium bikarbonat og saltvann og tørket Etter filtrering og fordampning i vakuum ble det urene produktet renset med flash kromatografi (CH2CI2) som ga 2-[(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-fenyl-metyl]-akrylsyre etyl ester (0,36 g, 23%).

c) 2- acetvlsulfanvlmetyl- 3-( 6- tert- butoksykarbonylamino- pvirdin- 3- vlV3- fenvl-propionsvre etvl ester

Trietylamin (0,105 g, 1,04 mmol) ble tilsatt til en løsning av 2-[(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-fenyl-metyl]-akrylsyre etyl ester (0,36 g, 0,94 mmol) i tioeddiksyre (4 ml) ved 0°C under argon. Blandingen ble oppvarmet ved 45°C i 24 timer. Etyl acetat ble tilsatt og den organiske fasen ble vasket med mettet vandig natrium bikarbonat og saltvann og tørket. Etter filtrering og fordampning i vakuum ble det urene produktet renset med flash kromatografi (toluen/etyl acetat, 1:0 5:1) som ga2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyirdin-3-yl)-3-fenyl-propionsyre etyl ester (0,314 g, 73%).

3- f6- amino- pvirdin- 3- vlV2- merkaptometvl- 3- fenvl- propionsvre

2- acetylsulfanylmetyl-3-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyirdin-3-yl)-3-fenyl-propionsyre etyl ester (58 mg, 0,125 mmol) ble løst i konsentrert HC1 (3,0 ml). Løsningen ble varmet til refluks i 130 minutter under argon. Konsentrering under redusert trykk ga tittelforbindelsen som hydrokloirdsaltet (41 mg, 100%).

'H NMR (500 MHz, D20): 8 8,03-7,83 (m, 2H), 7,5-7,3 (m, 5H), 7,05-6,95 (m, 1H), 4,27-4,15 (m, 1H), 3,6-3,45 (m, 1H), 2,84-2,58 (m, 2H).

MS (+), 3,6-3,45 (m, 1H), 2,84-2,58 (m, 2H).

Eksempel 30

3- f6- arnino- pvirdin- 3- vlV2- merkaptometvl- 4- fenvl- smørsvre

a) 2- f 1 - f6- tetr- butoksvkarbonvlamino- pyirdin- 3- viV2- fenvl- etvl1- malonsvre dietvl ester

Til en kraftig rørt suspensjon av kobber(I)syanid (0,66 g, 7,32 mmol) i tørr THF (5 ml) ble det tilsatt en løsning av bensylmagneshim bromid (S ml, 2,93 M i eter, 14,64 mmol) ved 0°C under argon. Blandingen ble varmet til romtemperatur som ga en mørkebrun løsning. Etter 60 minutter ble en løsning av 2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetylen)-malonsyre dietyl ester (0,67 g, 1,83 mmol) i tørr THF (4 ml) tilsatt ved 0<*>C. Blandingen ble rørt over natten ved romtemperatur og deretter ble vandig ammoniumklorid tilsatt. Det vandige sjiktet ble separert og ekstrahert med etyl acetat. De kombinerte organiske sjiktene vasket med saltvann og tørket. Fjerning av løsemidlet i vakuum ga et residue som ble renset med flash kromatografi (CH2Cl2/etyl acetat, 1:0-» 100:15) som ga 2-[l-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-fenyl-etyl]-malonsyre dietyl ester (0,44 g, 53%).

b) 2- f 1 - f6- tert- butoksykarbonvlamino- pvridin- 3- yn- 2- fenvl- etvl1 - malonsvre monoetyl ester

En løsning av KOH (0,067 g, 1,03 mmol) i etanol (3 ml) ble tilsatt til en løsning av 2-[ 1 -(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-fenyl-etyl]-malonsyre dietyl ester (0,44 g, 0,96 mmol) i etanol (3 ml) og metylen klorid (2 ml) ved 0°C. Blandingen ble rørt i 48 timer ved romtemperatur. Blandingen ble konsentrert under redusert trykk og etyl acetat og 0,5 M HC1 ble tilsatt til residuet. Det organiske sjiktet ble vasket med saltvann og tørket. Filtrering og fordampning i vakuum ga 2-[l-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-fenyl-etyl]-malonsyre monoetyl ester (0,37 g, 90%).

c) 2- f 1 - f 6- tert- butoksvkarbonvlamino- p vridin- 3 - vi V2- fenvl- etvl1- akrvlsvre etvl ester

Dietylamin (0,27 ml, 2,59 mmol) ble tilsatt til en blanding av 2-[l-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-fenyl-etyl]-malonsyre monoetyl ester (0,37 g, 0,86 mmol) og 37% vandig løsning av formaldehyd (0,22 ml, 2,9 mmol) metylen klorid (3,5 ml) ved 0<*>C. Blandingen ble rørt over natten ved romtemperatur. Mer formaldehyd (0,24 ml) og dietylamin (0,24 ml) ble tilsatt. Røring ved romtemperatur fortsatte i 18 timer og etyl acetat og vann ble deretter tilsatt. Det organiske sjiktet ble vasket med vandig mettet natrium bikarbonatløsning og saltvann, tørket og konsentrert under redusert trykk som ga 2-[l-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-fenyl-etyl]-akrylsyre etyl ester (0,34 g, 99%).

2- acetvlsulfanvlmetvl- 3-( 6- tert- butoksvkarbonyIamino- pvridin^ etvl ester

Trietylamin (0,096 g, 0,95 mmol) ble tilsatt til en løsning av 2-[l-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-fenyl-etyl]-akrylsyre etyl ester (0,34 g, 0,86 mol) i tioeddiksyre (3,5 ml) ved 0°C under argon. Blandingen ble varmet til 45°C i 24 timer. Etyl acetat ble tilsatt og den organiske fasen ble vasket med vandig mettet natrium bikarbonat løsning og saltvann og tørket. Etter filtrering og fordampning i vakuum ble det urene produktet renset med flash kromatografi (GhfeCVetyl acetat, 1:0 -» 100:5) som ga 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-4-fenyl-smørsyre etyl ester (0,264 g, 65%).

d) 3- f6- amino- p\ Tidin- 3- vn- 2- merkaptometvl- 4- fenyl- smørsvre

2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-tert-butoksykarb^

etyl ester (0,14 g, 0,3 mmol) ble løst i konsentrert HC1 (5,0 ml). Løsningen ble varmet til refluks i 4,5 timer under argon. Konsentrering under redusert trykk ga tittelforbindelsen som hydrokloridsaltet (100 mg, 98%).

'H NMR (500 MHz. D20): 5 7,90-7,83 (m, 1H), 7,43 (d, 1H), 7,34-7,18 (m, 3H), 7,17-7,06 (m, 2H), 7,01-6,9 (m, 1H), 3,4-2,5 (m, 6H).

MS (+) 303 (M+l)

Eksempel 31

2- f6- amino- pvridin- 3- vlmetvlV3- merkapto- 5- fenvl- pentansvre

a) etvl ( E. Z1- 2-( { 6-[( tert- butoksykarbonv0amino1 - 3- pvridinvl 1 metvlV5- fenvl- 2-pentenoat

Til en suspensjon av NaH (310 mg, 7,12 mmol, 55% i mineralolje) i THF (25 ml) ved 0<*>C under argon ble det tilsatt en løsning av etyl 3-({6-[(tert-butoksykarbonyl)amino3-3-pyridinyl}-2-(dietoksyfosforyl)propanoat (2,55,5,95 mmo) i THF (25 ml). Etter 1 time ble en løsning av 3-fenylpropanal (1,59 g, 11,9 mmol) tilsatt dråpevis. Reaksjonen ble rørt i 17 timer ved romtemperatur og deretter stoppet med NH4CI (50 ml, mettet, vandig). Blandingen ble ekstrahert med etyl acetat, det organiske sjikt ble vasket med saltvann, tørket (Na2SO*), filtrert og konsentrert under redusert trykk. Kolonne kromatografi (CH2Cl2/EtOAc 20:1 -+ 10.1) ga etyl (E,Z)-2-({6-[(tert-butoksykarbonyl)amino]-3-pyridinyl}metyl)-5-fenyl-2-peritenoat (2,49 g, 100%).

b) etvl 3-( acetvlsulfanvD- 2-( i6 -[( tert- butoksvkarbonvDaminol - 3 - pvridinvU metvlVS-fenvlpentenoat

Trietylamin (1,22 ml, 0,617 mmol) ble tilsatt til en løsning av etyl (E,Z)-2-({6-[(tert-butoksykarbonyl)amino]-3-pyridinyl}metyl)-5-fenyl-2-pentenoat (400 mg, 0,597 mmol) i tioeddiksyre (10 ml) ved 40°C. Etter røring i 90 minutter ble blandingen konsentrert under redusert trykk. Kolonne kromatografi (CH2Cl2/EtOAc 20:1 -> 10,1), deretter (toluen/EtOAc, 10:1) og deretter (heptan/EtOAc 2:1) ga etyl 3-(acetylsulfanyl)-2-({6-[(tert-butoksykarbonyl)amino]-3-pyridinyl}metyl)-5-fenylpentenoat (126 mg, 27%) som en diastereomerisk blanding 1:1.

c) 2-( 6- amino- pvirdin- 3 - vlmetvD- 3 -merkapto-5-fenvl-pentansvre

Etyl 3-(acetylsulfanyl)-2-({6-[(tert-butoksykarbonyl)amino]-3-pyridinyl}metyl)-5-fenylpentenoat (9 mg, 18,5 umol) ble løst i konsentrert HC1 (1 ml) under argon. Løsningen ble varmet til refluks i 4,5 timer. Konsentrering under redusert trykk ga tittelforbindelsen som hydrokloirdsaltet (6,4 mg, 98%) som en diastereomer blanding 1:1.

<!>H NMR (400 MHz. D20): 8 1,78-2,20 (m, 2H), 2,70-3,04 (m, 6H), 6,88,6,92 (2d, 1H), 7,22-7,39 (m, 5H), 7,52,7,54 (2d, 1H), 7,69,7,76 (2d, 1H).

MS(+)317(M+1).

Eksempel 32

3r3-( 6- amino- pvridin- 3- vlV2- etoksvkarto vlmetvn- propionsvre etvl ester

a) 3- f3- f6- tert- buotksvkarbonvlamino- pvridin- 3- ylV2- etoksvkarbonvl-propvldisulfanvl1- 2- r6- tert- butoksvkarbonvlamino- pyridin- 3- vlmetvlVpropionsvre

etvl ester

3-acetylsulfanyl-2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyirdin-3-ylmetyl)-propionsyreetyl ester (150 mg, 0,392 mmol) ble løst i etanol (15 ml) mettet med NH3 (g). Etter røring i 160 minutter ble blandingen konsentrert under redusert trykk. Residuet ble løst i EtOH

(10 ml) hvoretter en løsning av I2 i EtOH (0,5 M, 0,784 ml) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble rørt i 30 minutter ved romtemperatur, deretter fortynnet med CH2CI2, vasket med mettet vandig Na2S20s og mettet vandig NaHC03, tørket, filtrert og konsentrert under redusert trykk som ga 3-[3-(6-tert-butoksykarbonyl-amino-pyridin-3-yl)-2-etoksykarbonyl-propyldisulfanyl]-2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyO-propionsyre etyl ester (130 mg, 98%).

b) 3- f3-( 6- amino- pvridin- 3- vlV2- etoksvkarbonvl- propvldisulfanvl1- 2- f6- amino-pvridin- 3- vlmetvO- propionsvre etvl ester

Etylacetat med HC1 (g) (15 ml) ble tilsatt til en løsning av 3-[3-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-etoksykarbonyl-propyldisulfanyl]-2-(6-tert-butoksykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-propionsyre etyl ester (130 mg, 0,191 mmol( i etyl acetat (7ml) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble holdt ved romtemperatur og rørt i 19 timer, og deretter fordampet under redusert trykk. Residuet ble løst i vann, mettet vandig Na2C03 ble tilsatt og den vandige fasen ble ekstrahert med CH2CI2. Det organiske sjiktet ble tørket og konsentrert under redusert trykk som ga tittelforbindelsen (90 mg, 98%).

'H NMR (400 MHz. D20): 8 1,19 (t, 3H), 1,20 (t, 3H), 2,68-2,86 (m, 6H), 2,90-3,01 (m, 4H), 4,07-4,14 (m, 4H), 6,45 (d, 2H), 7,28 (m, 2H), 7,87 (s, 2H). MS(+)479(M+1).

Eksemne! 33

3- f6- amino- pvridin- 3- vn- 2- merkaptometvl- heksansvre

a) N- fS- butvrvl- pvridin^- vn^^- dimetvl- propionamid

En løsning av N-(5-brompyridin-2-yl)-2,2-dimetyl-propionamid (3,582 g, 13,9 mmol) i

dietyl eter (36 ml) ble avkjølt til -38'C under argon og n-butyllitium (1,6 M, 19 ml, 30,4 mmol) ble tilsatt dråpevis i løpet av 20 minutter. 5 minutter etter fullstendig tilsetting ble blandingen varmet til 0°C. N-metoksy-N-metyl butyramid (3,65 g, 27,8 mmol) ble tilsatt i løpet av mindre enn 5 minutter og røringen fortsatt i 45 minutter. Den klare løsningen ble surgjort med 2N saltsyre til pH 2. Etter kraftig røring i 15 minutter ble blandingen nøytralisert med natrium hydrogen karbonat og sjiktene ble separert. Det vandige sjiktet ble ekstrahert tre ganger med dietyl eter. De kombinerte organiske sjiktene ble vasket med saltvann, tørket og konsentrert under redusert trykk. Den

resulterende oljen ble tørket i oljepumpevakuum for å fjerne overskuddet reagens. Etter flash kromatografi (diklormetan/metanol 60:1) ble urent N-(5-butyryl-pyirdin-2-yl)-2,2-dimetyl-propionamid (2,47 g, 71%) oppnådd som en lys oransje olje som ikke ble ytterligere renset.

b) N- r5- fl- hydroksv- butvlVpyridin- 2- vl1- 2. 2- dimetvl- propionamid

Til en løsning av N-(5-butyryl-pyridin-2-yl)-2,2-dimetyl-propionamid (2,47 g, 9,95

mmol) i etanol (20 ml) ble natrium borhydrid (185 mg, 5,0 mmol) tilsatt. Etter 40 minutters røring ved romtemperatur ble blandingen surgjort med IN saltsyre til pH2 og rørt i 10 minutter. Etter nøytralisering med natrium hydrogenkarbonat ble blandingen ekstrahert tre ganger med diklormetan. De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket to ganger med natrium hydrogen karbonat løsning og en gang med saltvann. Etter tørking og konsentrering under redusert trykk ble residuet renset med flash kromatografi (diklormetan/metanol 30:1) som ga N-[5-(l-hydroksy-butyl)-pyridin-2-yl]-2,2-dimetyl-propionamid (1,025 g, 41%).

c) 2-( 1 - f6- f2. 2- dimetvl- propionvlaminoVpvridin- 3- vnbutvll- malonsvre monoetvl ester

Til en løsning av N-[5-(l-hydroksy-butyl)-pyridin-2-yl]-2,2-dimetyl-propionamid (1,025 g, 4,09 mmol) i triklormetan (12 ml), ble tionylklorid (6 ml) tilsatt og blandingen ble vannet til 55°C i 1 time. Deretter ble løsningen konsentrert under redusert trykk som ga urent N-[5-(l-klor-butyl)-pyridin-2-yl]-2,2-dimetyl-propionamid hydroklorid som et fargeløst fast stoff.

Til en løsning av dietyl malonat (1,31 g, 8,2 mmol) i dimetylformamid (20 ml) ble natrium hydrid (60% dispersjon i mineral olje, 350 mg, 8,7 mmol) tilsatt og blandingen ble rørt ved romtemperatur i 15 minutter. Etter avkjøling til 0°C ble løsningen av intermediatet N-[5-(l-klor-butyl)-pyridin-2-yl]-2,2-dimetyl-propionamid hydroklorid i dimetylformamid (5 ml) tilsatt. Etter 1 times røring ble løsemidlet konsentrert under redusert trykk og etyl acetat (25 ml) ble tilsatt fulgt av ammonium klorid løsning (halvmettet) for nøytralisering. Sjiktene ble separert, den vandige fasen ble ekstrahert med etyl acetat og de kombinerte organiske sjiktene ble vasket tre ganger med vann og saltvann, og tørket. Etter konsentrering under redusert trykk ble residuet filtrert gjennom silika gel med diklormetan/metanol blanding (30:1) som løsemiddel.

Denne urene 2-{1 -[6-(2,2-dimetyl-propionylamino)-pyridin-3-yl)butyl}-malonsyre dietyl ester ble løst i en blanding av diklormetan (2,5 ml) og etanol (5 ml) ved 0°C og en løsning av kalium hydroksid (87%, 111 mg, 5,4 mmol) i etanol (4 ml) ble tilsatt. Blandingen ble varmet opp forsiktig til romtemperatur og raringen fortsatte i 24 timer. Deretter ble diklormetan (20 ml), vann (20 ml) og saltvann (3 ml) tilsatt. Blandingen ble rørt kraftig i 2 minutter. Deretter ble sjiktene separert og det vandig sjiktet vasket med diklormetan. De kombinerte vandige sjiktene ble surgjort (pH 5) med sitronsyre, og ekstrahert tre ganger med diklormetan. De kombinerte organiske sjiktene ble vasket med saltvann og tørket. Konsentrering under redusert trykk ga 2-{l-[6-(2,2-dimetyl-propionylamino)-pyridin-3-yl)butyl}-malonsyre monoetyl ester (258 g, 41%),

d) 2 f 1 - f6- f2. 2- dimetvl- propionvlaminoVpvirdin- 3- vl1- butvl)- akrvlsvre etvl ester

Til en løsning av 2-{l-[6-(2,2-dimetyl-propionylamino)-pyridin-3-yl)butyl}-malonsyre

monoetyl ester (712 mg, 1,95 mmol) i THF (6,5 ml) ved 0"C ble formaldehyd (37% i vann, 0,3 ml) tilsatt i løpet av 5 minutter. Røring fortsatte i 10 minutter og deretter ble piperidin (0,26 ml, 2,63 mmol) tilsatt dråpevis i løpet av 10 minutter. Blandingen ble varmet opp til romtemperatur over natten. Etter 14 timer ble blandingen konsentrert under redusert trykk som ga en tredjedel av volumet og deretter ble eter og vann tilsatt (15 ml hver). Etter 2 minutters kraftig røring ble sjiktene separert, det vandige sjiktet ekstrahert med eter og de kombinerte organiske sjiktene ble vasket med vann, 4% sitron syre, vann og saltvann. Tørking og konsentrering under redusert trykk ga 2{l-[6-(2,2-dimetyl-propionylamino)-pyirdin-3-yl]-butyl}-akrylsyre etyl ester (550 mg, 85%) som et fargeløst fast stoff.

e) 2- acetvlsulfanvlmetvl- 3-[ 6- f2. 2- dimetvl- piropionvlaminoVpvirdin- 3- vlVheksansvre etvl ester

2{l-[6-(2,2-d^metyl-propionylamino)-pyridin-3-yl]-butyl}-akrylsyre etyl ester (550 mg, 1,65 mmol) ble løst under argon i tioleddiksyre (4 ml), og trietylamin (0,24 ml, 1,7 mmol) ble dråpevis tilsatt. Etter røring i 16 timer ved 50°C ble tioleddiksyre (2 ml) tilsatt og røring fortsatte i 14 timer. Løsningen ble avkjølt til romtemperatur og nøytralisert ved tilsetting av natrium hydrogen karbonat løsning. Blandingen ble ekstrahert tre ganger med etyl acetat, de kombinerte ekstraktene ble vasket med natrium hydrogen karbonat løsning og saltvann. Etter tørking og konsentrering under redusert trykk ble residuet renset med flash kromatografi (diklormetan/metanol, 60:1) som ga 2-

acetylsulfanylmetyl-3-[6-(2,2-dimetyl-propion^ ester (619 mg, 92%) som en viskøs olje.

f) 3-( 6- amino- pvridin- 3- vlV2- merkaptometvl- heksansvre

2- acetylsulfanylmetyl-3-[6-(2,2-dimetyl-porpionylamino)-pyridin-3-yl]-heksansyreetyl

ester (40,4 mg, 99 umol) ble løst under argon i vandig saltsyre (37%, 4,2 ml) og varmet til refluks i 2 timer. Konsentrering under redusert trykk (0,3 torr, 40°C) ga tittelforbindelsen som hydrokloirdsaltet (28 mg, 97%).

<]>H NMR (300 MHz, D20): 6 7,86 (d, 1H), 7,65 (d, 1H), 7,02 (t, 1H), 2,98-2,42 (m, 4H), 1,85-1,54 (m, 2H), 1,19-1,00 (m, 2H), 0,87-0,77 (m, 3H).

MS(+)255 (M+1).

Eksempel 34

3- f2- amino- tiasol- 5- vn- 2- merkaptometvl- propionsvre

a) 2-( 2- amino- tiasol- 5- vlmetvlenVmalonsvre dietvlester

Til en løsning av 2-amino-tiasol-5-karbaldehyd (47%, 6 g, 23 mmol) i CH2C12 (30 ml)

og DMF (30 ml) ble det tilsatt 4A molekyl sikt, dietyl malonat (3,5 ml, 23 mmol), piperidin (1,1 ml, 11,5 mmol) og eddiksyre (0,7 ml, 11,5 mmol). Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 96 timer. Deretter ble EtOAc tilsatt og reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom celite for å fjerne det dannede presipitatet. EtOAc (500 ml) ble tilsatt til filtratet og den organiske fasen ble vasket med NaHC03 og saltvann. Den organiske fasen ble tørket og konsentrert som ga 4,9 g av det urene produktet. Tilsetting av petroleum eter til løsningen av det urene produktet i etanol fulgt av filtrering ga 2-(2-amino-tiasol-5-ylmetylen)-malonsyre dietylester (1,13 g, 18%).

b) 2-( 2- amino- tiasol- 5- vlmetvlenVmalonsvre dietvlester

NaCNBH3 (1,88 g, 29,9 mmol) ble tilsatt til en rørt løsning av 2-(2-amino-tiasol-5-ylmetylen)-malonsyre dietylester (1,13 g, 4,2 mmol) i etanol ved 0°C. pH til løsningen ble overvåket ved tilsetting av små mengder Bromocresol Green til løsningen. Konsentrert HC1 ble tilsatt dråpevis til løsningen ble gul. Isbadet ble fjernet og reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 5 timer. Vann ble tilsatt og produktet ble ekstrahert med CH2CI2. De kombinerte organiske fasene ble tørket og konsentrert som ga 2-(2-amino-tiasol-5-ylmetylen)-malonsyre dietylester (1 g, 87,8%).

c) 2- f2- tert- butoksvkarbonvlamino- tiasol- 5- vlmetvlVmalonsvre dietvl ester

BOC2O (0,6 g, 27,5 mmol) ble tilsatt til en løsning av trietyl amin (0,4 ml, 30,1 mmol),

4-(dimetylamino)pyridin (0,34 g, 27,8 mmol) og 2-(2-amino-tiasol-5-ylmetylen)-malonsyre dietylester (0,75 g, 27,5 mmol) i CH2C12 (5 ml) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. Ytterligere BOC2O (0,15 g, 0,7 mmol) ble tilsatt ved 0°C og reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 1 time. CH2CI2 ble tilsatt og den organiske fasen ble ekstrahert med 0,3 M KHSO4 og saltvann. Den organiske fasen ble tørket og konsentrert som ga 0,78 g av det urene produktet. NMR indikerte at ca. 40% av 2-(2-amino-tiasol-5-ylmetylen)-malonsyre dietylester var igjen. BOC2O (0,6 g, 27,5 mmol) ble tilsatt til en løsning av det urene produktet (0,78

g), trietylamin (0,4 ml, 30,1 mmol), 4-(dimetylamino)-pyridin (0,34 g, 27,8 mmol) i CH2Cl2 (5 ml) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur over natten

og opparbeidingsprosedyren ble gjentatt. Det urene produktet (1 g) ble renset med flash kromatografi (heptan/EtOAc, 1:1) og HPLC som ga 2-(2-tert-butoksykarbonylamino-tiasol-5-ylmetyl)-malonsyre dietyl ester (184 mg, 17,9%).

d) 2- f2- tert- butoksvkarbonvlamino- tiasol- 5- vlmetvlVmalonsvre monoetyl ester

2-(2-tert-butoksykarbonylamino-tiasol-5-ylmetyl)-malonsyre dietyl ester (158 mg, 0,43

mmol) ble løst i etanol (1 ml) og THF (0,5 ml) og en løsning av KOH (24 mg, 0,43 mmol) i etanol (0,14 ml) ble tilsatt ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 96 timer og deretter helt over i isvann. Den vandige fasen ble ekstrahert med dietyl eter, surgjort til pH ved tilsetting av 0,5 M HC1, og ekstrahert med dietyl eter. De kombinerte organiske fasene ble tørket og konsentrert som ga 2-(2-tert-butoksykarbonylamino-tiasol-5-ylmetyl)-malonsyre monoetyl ester (97 mg, 66,4%).

e) 2-( 2- tert- butoksvkarbonvlamino- tiasol- 5- vlmetvlVakrvlsvre etvl ester

2-(2-tert-butoksykarbonylamino-tiasol-5-ylmetyl)-malonsyre monoetyl ester (94 mg,

0,27 mmol) en 36% vandig løsning av formaldehyd (36 pl, 1,2 mmol), CH2CI2 (0,2 ml) og vann (0,2 ml) ble tilsatt ved 0°C dietyl amin (30 pl, 0,49 mmol). Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur over natten, helt over i isvann og ekstrahert med CH2CI2. De kombinerte organiske fasene ble vasket med 5% NaHC03,

tørket og konsentrert som ga 2-(2-tert-butoksykarbonylamino-tiasol-5-ylmetyl)-akrylsyre etyl ester (69 mg, 80,9%),.

f) 2- acetvlsulfanvlmetvl- 3- f2- tetr- butoksvkarbonvlamino- tiasol- 5- vn- propionsvreetvl ester

Trietyl amin (32 pl, 0,23 mmol) ble tilsatt til en løsning av 2-(2-tert-butoksykarbonylamino-tiasol-5-ylmetyl)-akrylsyre etyl ester (67 mg: 0,21 mmol) i tioeddiksyre (0,4 ml) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 48 timer og deretter helt over i isvann. Det vandige sjiktet ble ekstrahert med CH2CI2. De kombinerte organiske fasene ble vasket med mettet NaHCCh, tørket og konsentrert som ga 190 mg av det urene produktet. Det urene produktet ble renset med flash kromatografi (heptan/EtOAc: 1:0 -> 68:32) som ga 2-acetylsulfanylmetyl-3-(2-tert-butoksykarbonylamino-tiasol-5-yl)-propionsyre etyl ester (43 mg, 51,6%).

g) 3- f2- amino- tiasol- 5- vlV2- merkaptometvl- propionsvre

En løsning av 2-acetylsulfanylmetyl-3-(2-tert-butoksykarbonylamino-tiasol-5-yl)-propionsyre etyl ester (43 mg, 0,11 mmol) i konsentrert HC1 (1,5 ml) ble refluksert under argon 1,5 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og konsentrert under redusert trykk som ga 30 mg av det urene produktet. Det urene produktet ble renset med preparativ HPLC som ga tittelforbindelsen (8 mg, 21%) som hydrokloridsaltet.

'H NMR (500 MHz, D20): 8 2,75-3,1 (m, 5H), 7,0 (br s, 1H).

MS(+)219(M+1).

Forkortelser

Ac = acetat

aq = vandig AIBN = a,a'-asoisobutyronitril

Bn - bensyl

Bu = butyl

Bz = benzoyl

DCC = disykloheksylkarbodiimid DIAD = diisopropyl asodikarboksylat DEPEA = diisopropyletylamin DMAP , = N,N-dimetyl amino pyridin DME = 1,2-dimetoksyetan

DMF = dimetylformamid

DMSO =dimetylsulfoksid

EDC = l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid ee = enantiomerisk overskudd Et = etyl

EtOAc = etyl acetat

EtOH = etanol

h = time

HOAc = eddiksyre

HOBt = 1-hydroksybensotriasoi HPLC = høy ytelsesvæske kromatografi KHMDS = kalium bis(trimetylsilyl)amid LDA = litium diisopropylamid MCPBA = 3-klorperbensosyre

Me = metyl

MeOH = metanol

min = minutter PMB = 4-metoksybensyl

Ph = fenyl

Pr = propyl

PyBOP = (bensotriasol-l-yloksy)tripyrrolidinofosfonium heksafiuorfosfat TEA = trietylamin TFA = trifluoreddiksyre THF = tetrahydrofuran Tos = toluen-4-sulfonyl

Claims

1. Forbindelse, karakterisert ved form (I) hvori Ri representerer C3-C7 sykloalkenyl, substituert med amino; heterosyklyl valgt blant azetidin, pyrrolidin, tiazol, pyridin, pyrimidin eller piperazin; hvilke heterosyklyl er eventuelt substituert med en eller flere av amino, Ct-C6 alkyl, halogen etler hydroksy-CVCe alkyl; R2 representerer H, C1-C3 alkyl, amino, halogen, hydroksy; R3 representerer COOR5, Ri representerer SH eller S-CO-C1-C6 alkyl; R5 representerer H eller Ci-Cé alkyl; X representerer C(Z)2) Y representerer C(Z)2, Z representerer uavhengig H eller Q-Ce alkyl, fenyl eller fenyl-Ci-C4 alkyl, eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav, eller et solvat av et slikt salt.

2. Forbindelse ifølge krav l,karakterisert ved at R2 representerer H, F eller Ci alkyl, R3 representerer COOR5, R4 representerer SH eller S-CO-Ci-C6 alkyl, Rj representerer H eller Ci-Ce alkyl, X representerer C(Z)2, Y representerer C(Z>2, Z representerer uavhengig H eller Ci-Q alkyl; eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav, eller et solvat av et slikt salt.

3. Forbindelse ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at Ri representerer syklopentyl, pyridyl, pyrimidinyl, piperidinyl eller tiazolyl, R2 representerer H, F eller Ci alkyl, R3 representerer COOR5, R4 representerer SH, Rs representerer H, X representerer CHZ, Y representerer CHZ, og Z representerer uavhengig H eller Ci-C6 alkyl, eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav, eller et solvat av et slikt salt.

4. Forbindelse ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at Ri representerer en aminopyridylgruppe, R2 representerer H, F eller Ci alkyl, R3 representerer COOR5, R4 representerer SH, R5 representerer H, X representerer CHZ, Y representerer CHZ, og Z representerer uavhengig H eller Ci-Cg alkyl, eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav, eller et solvat av et slikt salt.

5. Forbindelse, karakterisert ved at den er:

2- merkaptometyl-3-piperidin-4-yl-propionsyre;

3- (l-acetyl-piperidin-4-yl)-2-merkaptometyl-propionsyre; 3-merkapto-5-metyl-2-piperidin-4-ylmetyl-heksanonsyre; 3-merkapto-4-metyl-2-pipeirdin-4-ylmetyl-smørsyre;

2- (2-amino-pyirdin-4-ylmetyI)-3-merkapto-5-propionsyre;

3- (6-amino-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-propionsyre; 3-(6-amino-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-2-metyl-propionsyre;

2- (6-amino-pyridin-3-ylmetyl)-2-merkaptometyl-smørsyre;

3- (6-ammo-5-metyl-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-2-metyl-propionsyre; 3-(6-amino-5-metyl-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-propionsyre; 3-(6-amino-4-metyl-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-propionsyre;

2- merkaptometyl-3-piperidin-4-yl-smørsyre;

3- (6-amino-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-smørsyre; 3-(6-amino-2-metyl-pyridm-3-yl)-2-merk^ 2-acetylsulfanylmetyl-3-(2-amino-pyrimidin-5-yl)-propu^^ 2-(6-amino-pyridm-3-ylmetyl)-3-rnerkapto-smørsyre;

2- (6-airdno-pyridin-3-ylmetyl)-3-merkapto-pentansyre;

3- (6-amino-5-klor-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-propionsyre; 3-(6-amino-5-hydroksvmetyl-pyridin-3-yl)-2-mer^ 2-merkaptometyl-3-pyirolidin-3-yl-propionsyre;

2- merkaptometyl-3-piperazin-l-yl-propionsyre;

3- (6-ammo-pyirdin-3-yl)-2-merkaptometyl-pentansyre; 3-(6-amino-pyridin-3-yl)-2-merkaptornetyl-4-metyl-pentansyre; 3-(6-amino-pyirdin-3-yl)-2-meitoptometyl-4-fenyl-pentan^ 3-(6-ainino-pyridm-3-yl)-2-merkaptom

2- (6-amino-pyriajn-3-ylmetyl)-3-merkapto-5-fenyl-pentansyre;

3- [3-(6-armno-pvirdin-3-yl)-2-etok ylmetyl)-propionsyreetylester; 3-(6-amino-pyirdin-3-yl)-2-merkaptometyl-heksansyre; eller 3-(2-amino-tiazol-5-yl)-2-merkaptometyl-propionsyre.

6. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1-5, hvori Ri, R3, R» og Y er som definert i krav 1 og X er C(Z)2 og R2 er H, karakterisert ved at den innbefatter trinnet med å omsette en forbindelse med formel VI, hvori Ri, R3 dg Y er som definert i krav 1 og X<*>er C(Z>2, med en forbindelse med formel IX, hvori R5 er en egnet beskyttende gruppe, slik som Ac, Bz, PMB eller Bn, alene eller under nærvær av en passende base, slik som NaOMe, NaH eller trietylamin eller alternativt under nærvær av en fri-radikal initiator, slik som ATJBN, under standard betingelser.

7. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1-5, hvori Ri, R2, R3 og R4 er som definert i krav 1 og Y er CH2 og X er C(Z)2, karakterisert ved at den innbefatter trinnet med å omsette en forbindelse med formel XIV: hvor Ri, R2 og R3 er som definert i krav 1 og X er C(Z)2 med en forbindelse med generell formel IX. hvori Rs er egnet beskyttende gruppe, slik som Ac eller Bz, under nærvær av et passende reagens, slik som PPh3/DIAD, under standard betingelser.

8. Farmasøytisk formulering, karakterisert ved at den inneholder en forbindelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1 til 5 som aktiv ingrediens i kombinasjon med en farmasøytisk akseptabel adjuvans, fortynningsmiddel eller bærer.

9. Forbindelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1 til 5, karakterisert ved at den anvendes ved behandling.

10. Anvendelse av en forbindelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1 til 5 for fremstilling av et medikament for inhibering av karboksypeptidase U.

11. Farmasøytisk formulering for anvendelse ved behandling eller profylakse av tilstander hvori inhibering av karboksypeptidase U er påkrevd eller ønsket, karakterisert ved at den innbefatter en forbindelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1-5 i kombinasjon med en farmasøytisk akseptabel adjuvans, fortynningsmiddel eller bærer.

12. Farmasøytisk formulering, karakterisert ved at den innbefatter: (i) en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav, eller et solvat av et slikt salt, og (ii) ett eller flere antitrombotiske midler med en forskjellig virkningsmekanisme, slik som et antiblodplatemiddel, tromboksanreseptorinhibitor, syntetaseinhibitor, fibrinogenreseptorantagonist, prostasyklinetterligner, fosfodiesteraseinhibitor eller ADP-reseptor (P2T) antagonist, sammenblandet med en farmasøytisk akseptabel adjuvans, fortynningsmiddel eller bærer.

13. Kit av deler, karakterisert ved at det innbefatter: (i) en farmasøytisk formulering som inneholder en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav, eller et solvat av et slikt salt, sammenblandet med en farmasøytisk akseptabel adjuvans, fortynningsmiddel eller bærer; og (ii) en farmasøytisk formulering som inneholder ett eller flere antitrombotiske midler med en forskjellig virkningsmekanisme, slik som et antiblodplatemiddel, tromboksanreseptorinhibitor, syntetaseinhibitor, fibrinogenreseptorantagonist, prostasyklinetterligner, fosfodiesteraseinhibitor eller ADP-reseptor (P2T) antagonist, sammenblandet med en farmasøytisk akseptabel adjuvans, fortynningsmiddel eller bærer; hvor forbindelse (i) og middel (ii) er hver tilveiebragt i en form som er egnet for administrasjon i forbindelse med hverandre.