MXPA01011055A - Nuevos compuestos que inhiben las carboxipeptidasas basicas.. - Google Patents

Nuevos compuestos que inhiben las carboxipeptidasas basicas..

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Abstract

La presente invencion se refiere a compuestos de la formula (I), y sales o solvatos farmaceuticamente aceptables de los mismos, o solvatos de estas sales, compuestos que inhiben la carboxipeptidasa U y de esta manera se pueden usar en la prevencion y tratamiento de enfermedades asociadas con la carboxipeptidasa U. En aspectos adicionales, la invencion se refiere a compuestos de la invencion para el uso en terapia; a procesos para la preparacion de estos nuevos compuestos; las composiciones farmaceuticas que contienen al menos un compuesto de la invencion, o una sal o solvatos farmaceuticamente aceptables de los mismos, como el ingrediente activo; y el uso de compuestos activos en la elaboracion de medicamentos para el uso medico indicado anteriormente.

Description

NUEVOS COMPUESTOS QUE INHIBEN LAS CARBOXIPEPTIDASAS BÁSICAS CAMPO DE LA INVENCIÓN La p-resente invención se refiere a nuevos compuestos, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, que inhiben las carboxipeptidasas básicas, de manera más especifica, la carboxipeptidasa U, y de esta manera se pueden usar en la prevención y tratamiento de enfermedades en donde es benéfica la inhibición de la carboxipeptidasa U. En aspectos adicionales, la invención se refiere a compuestos de la invención para el uso en terapia; a procesos para la preparación de estos nuevos compuestos; a composiciones farmacéuticas que contienen al menos un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como ingrediente activo, y al uso de los compuestos activos en la elaboración de medicamentos para el uso médico indicado anteriormente .
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La fibrinólisis es el resultado de una serie de reacciones enzimáticas que dan por resultado la degradación de la fibrina por plasmina. La activación del plasminógeno es el proceso central en la fibrinólisis . La escisión del plasminógeno para producir plasmina se logra por los REF: 133686 A activadores de plasminógeno, el activador de plasminógeno tipo tejido (t-PA) o el activador de plasminógeno tipo urocinasa (u-PA) . La degradación inicial de plasmina de la fibrina genera residuos de lisina con terminal carboxi que sirven como sitios de unión de alta afinidad para el plasminógeno. Puesto que el plasminógeno unido a fibrina se activa de una manera mucho más fácil a plasmina que el plasminógeno libre, este mecanismo proporciona una regulación de retroalimentación positiva de la fibrinólisis. Uno de los iniciadores endógenos a fibrinólisis es la carboxipeptidasa U (CPU) . La CPU también se conoce como carboxipeptidasa B plasmática, inhibidor de fibrinólisis activable con trombina activa (TAFla) , carboxipeptidasa R y actividad de carboxipeptidasa inducible. La CPU se forma durante la coagulación y fibrinólisis desde su precursor proCPU por la acción de enzimas proteolíticas, por ejemplo, trombina, complejo trombina-trombomodulina o plasmina. La CPU escinde los aminoácidos básicos en la terminal carboxi de los fragmentos de fibrina. La pérdida de Usinas de terminal carboxi, y por lo tanto, de sitios de unión de lisina por plasminógeno, entonces sirve para inhibir la fibrinólisis . Al inhibir la pérdida de los sitios de unión de lisina por plasminógeno, y de esta manera, incrementar la proporción de formación de plasmina, se esperará que los inhibidores efectivos de la carboxipeptidasa U faciliten la fibrinólisis . Se informa que el ácido 2-mercaptometil-3- guanidinoetiltiopropanóico es un inhibidor de carboxipeptidasa N. De manera más reciente, este compuesto se ha mostrado que inhibe la CPU, Hendriks, D. Et al., Biochimica et Biophysica Acta, 1034 (1990) 86-92. Se informa que el ácido guanidinoetilmercaptosuccínico es un inhibidor de carboxipeptidasa N. De manera más reciente, este compuesto se ha mostrado que inhibe la CPU, Eaton, D. L., et al., The Journal of Biological Chemistry, 266 (1991) 21833-21838.
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN De manera sorprendente, se ha encontrado que los compuestos de la Fórmula I son particularmente efectivos como inhibidores de la carboxipeptidasa U y por lo tanto útiles como medicamentos para el tratamiento profilaxis de condiciones en donde es benéfica la inhibición de la carboxipeptidasa U. En un aspecto, la invención se refiere de esta manera a compuestos de la Fórmula General I . 1 YXR3 <» R4 o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos o un solvato de esta sal, en donde Ri representa, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, substituido con uno o más grupos básicos tal como amino, amidino y/o guanidino; cicloalquilo; substituido con uno o más grupos básicos tal como amino, amidino y/o guanidino; heterociclilo, que contiene al menos un átomo de nitrógeno; heterociclilo, que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de S u 0, y substituido con uno o más grupos básicos tal como amino, amidino y/o guanidino, o arilo, substituido con uno o más grupos básicos tal como amino, amidino y/o guanidino, R2 representa H, acilo, acilamino, alquilo, alquilcarbamoilo, alquiltio, alcoxi, aroilo, aroilamino, ariloxi, ariltio, amidino, amino, arilo, carbamoilo, carboxi, ciano, cicloalquilo, formilo, guanidino, halógeno, heterociclilo, hidroxi, oxo, nitro, tiol, el grupo Z2N-C0-0-, ZO-CO-NZ- o Z2N-C0-NZ, R3 representa C0OR5, S0(0R5), S03R5, P=0(OR5)2, B(OR5)2, P=0R5(0R5), o tetrazol, o cualquier isostero de ácido carboxílico, R4 representa SH, S-C0-C!-C6 alquilo o S-CO arilo, R5 representa H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono o arilo, R6 representa H o alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, X representa 0, S, SO, S02, C(Z)2, N(Z), NR6S02, S02NR6, NR6C0 o C0NR6, Y representa C(Z)2, Z representa independientemente H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, arilo, cicloalquilo o heterociclilo. Los compuestos preferidos de acuerdo a la presente invención son aquellos de la Fórmula I, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos, o un solvato de esta sal, en donde Ri representa, cicloalquilo, substituido con uno o más grupos básicos tal como amino, amidino y/o guanidino; heterociclilo, que contiene al menos un átomo de nitrógeno; heterociclilo, que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de S u 0, y substituido con uno o más grupos básicos tal como amino, amidino y/o guanidino; o arilo, substituido con uno o más grupos básicos tal como amino, amidino y/o guanidino; R2 representa H, acilo, acilamino, alquilo, alquilcarbamoilo, alquiltio, alcoxi, aroilo, aroilamino, ariloxi, ariltio, amidino, amino, arilo, carbamoilo, carboxi, ciano, cicloalquilo, formilo, guanidino, halógeno, heterociclilo, hidroxi, oxo, nitro, tiol, grupo Z2N-C0-0- , ZO-CO-NZ- o Z2N-CO-NZ, R3 representa COOR5, ; R representa SH, S-CO-C?-C6 alquilo o S-CO arilo, R5 representa H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono o arilo, R6 representa H o alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, X representa 0, S, SO, S02, C(Z)2, N(Z), NR5S02, S02NR6 o C0NR6, Y representa C(Z)2/ Z representa independientemente H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, arilo, cicloalquilo o heterociclilo. Los compuestos más preferidos de acuerdo a la presente invención son aquellos de la Fórmula I, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos, o un solvato de esta sal, en donde, Ri representa, cicloalquilo, substituido con uno o más grupos básicos tal como amino, amidino y/o guanidino; heterociclilo que contiene al menos un átomo de nitrógeno; heterociclilo, que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de S u O, y substituido con uno o más grupos básicos tal como amino, amidino y/o guanidino; R2 representa H, alquilo de 1 a 3 átomos de carbono, amino, halógeno, o hidroxi, -4 ? i R3 representa COOR5, R representa SH, S-CO-C?-C6 alquilo o S-CO arilo, R5 representa H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono o arilo, X representa C(Z)2/ Y representa C(Z)2, Z representa independientemente H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono. Los compuestos aun más preferidos de acuerdo a la presente invención son aquellos de la Fórmula I, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos, o un solvato de esta sal, en donde Ri representa, cicloalquilo, substituido con uno o más grupos básicos tal como amino, amidino y/o guanidino; heterociclilo, que contiene al menos un átomo de nitrógeno; R2 representa H, F o alquilo Ci, R3 representa CO0R5, ; R4 representa SH, S-C0-C?-C6 alquilo o S-CO arilo, R5 representa H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono o arilo, X representa C(Z)2, Y representa C(Z)2, Z representa independientemente H, o alquilo de 1 a 6 átomos de carbono . Los compuestos más preferidos de acuerdo con la üiS&^^- É- presente invención son aquellos de la Fórmula I, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos, o un solvato de esta sal, en donde: Ri representa, ciclopentilo, piridilo, pirimidinilo, piperidinilo o tiazolilo, R2 representa H, F, o alquilo Ci, R3 representa COOR5, R4 representa SH, R5 representa H, X representa CHZ, Y representa CHZ, Z representa independientemente H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono . Las siguientes definiciones deben aplicar a todo lo largo de esta especificación y las reivindicaciones anexas : El término "grupo básico" denota un grupo básico, en donde el ácido conjugado del grupo ácido tiene una pKa desde aproximadamente -5 a aproximadamente 25, de manera preferente de 1 a 15. El término "isostero de ácido carboxílico" denota un grupo ácido que tiene una pKa desde aproximadamente -5 a aproximadamente 25, de manera preferente de 1 a 15. El término "alquilo de 1 a 6 átomos de carbono" denota un grupo alquilo substituido o insubstítuido, l .-t. , saturado o insaturado, recto o ramificado, que tiene de 1 a 6 átomos de carbono en la cadena, en donde el grupo alquilo se puede interrumpir opcionalmente por uno o más heteroátomos seleccionados de 0, N o S. Los ejemplos de alquilo incluyen de manea enunciativa y sin limitación, metilo, etilo, etenilo, etinilo, n-propilo, iso-propilo, propenilo, iso-propenilo, propinilo, n-butilo, iso-butilo, sec-butilo, t-butilo, butenilo, iso-butenilo, butinilo y pentilo y hexilo de cadena recta y ramificada. El término "alquilo de 1 a 3 átomos de carbono" denota un grupo substituido o insubstituido, saturado o insaturado, recto o ramificado que tiene de 1 a 3 átomos de carbono en la cadena, en donde el grupo alquilo se puede interrumpir opcionalmente por uno o más heteroátomos seleccionados de 0, N o S. Los ejemplos de alquilo incluyen de manera enunciativa y sin limitación, metilo, etilo, etenilo, etinilo, n-propilo, iso-propilo, propenilo, iso-propenilo, propinilo. El término "alquilo Ci" denota un grupo alquilo substituido o insubstituido que tiene un átomo de carbono. Un ejemplo de este alquilo incluye, de manera enunciativa y sin limitación, metilo, El término "alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono" denota un grupo alquil-0, en donde el grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono es como se define anteriormente. !*->._ El término "alcoxi de 1 a 3 átomos de carbono" denota un grupo alquil-0, en donde el alquilo de 1 a 3 átomos de carbono es como se define anteriormente. El término "heterociclilo" denota un sistema de anillo monocíclico o multicíclico de 4 a 10 miembros, substituido o insubstituido en el cual uno o más de los átomos en el anillo o anillos es un elemento diferente de carbono, por ejemplo nitrógeno, oxígeno o azufre, especialmente grupos heterocíclicos aromáticos o alifáticos de 4 , 5 ó 6 miembros, e incluye, de manera enunciativa y sin limitación, azetidina, furano, tiofeno, pirrol, pírrolina, pirrolidina, dioxolano, oxatiolano, oxazolano, oxazol, tiazol, imidazol, imidazolina, imidazolidina, pirazol, pirazolina, pirazolidina, isoxazol, isotiazol, oxadiazol, furazano, tríazol, tiadiazol, piraña, piridina, piperidina, dioxano, morfolina, ditiano, oxatiano, tiomorfolina, piridazina, pirimidma, pirazina, piperazina, triazina, tiadiazina, ditiazina, azaindol, azaindolina, indol, indolina, grupos naftiridina, y se debe entender que incluye todos los isómeros de los grupos identificados anteriormente. El término "azetidinilo" por ejemplo se debe entender que incluye los isómeros 2 y 3 y los términos "piridilo" y "piperidinilo" se debe entender por ejemplo que incluye los isómeros 2, 3 y 4. El término "cicloalquilo" denota un anillo no ..JL . ?u. l A ? Í aromático, substituido o insubstituido, saturado o insaturado compuesto de 3 , 4, 5, 6 ó 7 átomos de carbono, e incluye de manera enunciativa y sin limitación los grupos ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciciohexilo, cicloheptilo, ciclobutenilo, ciclopentenilo, ciclohexenilo, cicloheptenilo, ciclopentadienilo, ciclohexadienilo y ciclopheptadienilo . El término "halógeno" incluye los grupos fluoro, cloro, bromo e yodo. El término "arilo" denota un hidrocarburo aromático de 6 a 14 átomos de carbono, substituido o insubstituido e incluye, de manera enunciativa y sin limitación, fenilo, naftilo, indenilo, antracenilo, fenantrenilo y fluorenilo. El término "ariloxi" denota un grupo aril-O-, en donde arilo es como se define anteriormente. El término "acilo" denota un grupo alquil-CO, en donde el alquilo es como se define anteriormente. El término "aroilo" denota un grupo aril-CO, en donde arilo es como se define anteriormente. El término "alquiltio" denota un grupo alquil-S, en donde alquilo es como se define anteriormente. El término "ariltio" denota un grupo aril-S, en donde aril es como se define anteriormente. El término "aroilamino" denota un grupo aroil- k.-Á^£ .-k- i.-L r . -z N(Z), en donde aroil y Z es como se define anteriormente. El término "acilamino" denota un grupo acil-N(Z), en donde acil- y Z es como se define anteriormente. El término "carbamoilo" denota un grupo H2N-CO. El término "alquilcarbamoilo" denota un grupo Z2N-CO en donde Z es como se define anteriormente. El término "substituido" denota un grupo "alquilo Ci", "alquilo de 1 a 3 átomos de carbono", "alquilo de 1 a 6 átomos de carbono", "cicloalquilo", "heterociclilo" o "arilo" como se define anteriormente que está substituido por uno o más grupos acilo, acilamino, alquilo, alquilcarbamoilo, alquiltio, alcoxi, aroilo, aroilamino, ariloxi, ariltio, amidino, amino, arilo, carbamoilo, carboxi, ciano, cicloalquilo, formilo, guanidino, halógeno, heterociclilo, hidroxi, oxo, nitro, tiol, tio, Z2N-C0-0, ZO-CO-NZ, o Z2N-CO-NZ-. Además, los compuestos de la Fórmula I, en donde R4 es mercapto pueden estar presentes en la forma de un dímero que se une vía el enlace -S-S-, que también se incluye en esta invención. Tanto los enantiómeros puros, las mezclas racémicas y las mezclas desiguales de dos enantiómeros están dentro del alcance de la presente invención.
También, se debe entender que todas las formas diastereoméricas posibles están dentro del alcance de la U invención. También se incluyen en la invención los derivados de los compuestos de la Fórmula I que tiene la función biológica de los compuestos de la Fórmula I, tal como los pro-fármacos . Dependiendo de las condiciones de proceso, los compuestos de la Fórmula I se pueden obtener ya sea en la forma neutral o de sal o como un solvato, por ejemplo, un hidrato, y están todos dentro del alcance de la presente invención.
Preparad ón La presente invención también proporciona el proceso A-C para la elaboración de los compuestos de la Fórmula General I.
Proceso A El proceso A para la elaboración de los compuestos con la Fórmula General I, en donde R1# R3 , R4 e Y son como se definen anteriormente y R2 es H, y X es C(Z)2/ comprende los siguientes pasos: a) Compuestos de la Fórmula General II, Rl-X-OH (II) en donde Ri, es como se define para la Fórmula I y X es C(Z)2, que ya sea está comercialmente disponible o está disponible usando técnicas conocidas, se puede convertir en un compuesto de la Fórmula General III, Rl-X-L (III) En donde L es un grupo saliente adecuado, tal como cloro, bromo, yodo, triflato o tosilo, bajo condiciones normales usando un reactivo adecuado, tal como PPh3/CBr4, TosCl/piridina o (CF3S02) 20/TEA. b) Los compuestos de la Fórmula General III se pueden hacer reaccionar posteriormente con los compuestos de la Fórmula General IV, R2 HOOC^A3 (IV) en donde R2 y R3 son como se definen para la Fórmula I, que están ya sea comercialmente disponibles, o están disponibles usando técnicas conocidas, en la presencia de una base adecuada, tal como K2C03 , o NaH, bajo condiciones normales para dar los compuestos de la Fórmula General V. $ ¿ ?. _a k *-*. ., i i c) Compuestos de la Fórmula General V, en donde Ri y R3 son como se definen para la Fórmula I y X es C(Z)2 y R2 es H se pueden convertir posteriormente a compuestos de la Fórmula General VI, ?-R1 Y^ 3 (VI; por tratamiento con formaldehído en la presencia de una base adecuada, tal como Et2NH, bajo condiciones normales. 10 d) Los compuestos de la Fórmula General VI también se pueden preparar al tratar los compuestos de la Fórmula General VII (R50),OP^ R3 (Vil) 15 en donde R3 y R5 son como se definen para la Fórmula I, con un agente de alquilación de la Fórmula General III en la presencia de una base adecuada, tal como LDA o NaH, bajo condiciones normales, para dar los compuestos de la Fórmula 20 General VIII, 25 e) Los compuestos de la Fórmula General VIII se pueden hacer reaccionar posteriormente con un aldehido o cetona OC(Z)2, apropiada, en la presencia de una base adecuada, tal como KOtBu, LDA o NaH, bajo condiciones normales para dar un compuesto de la Fórmula General VI . f) Los compuestos de la Fórmula General VI se pueden hacer reaccionar adicionalmente con los compuestos de la Fórmula General IX R5-SH (IX) en donde R5 es un grupo protector adecuado, tal como Ac, Bz , PMB o Bn, sólo o en la presencia de una base adecuada, tal como NaOMe, NaH, o trietilamina o alternativamente en la presencia de un iniciador de radicales libres, tal como AIBN bajo condiciones normales para dar los compuestos de la Fórmula General I, en donde Ri, R3 , R4 e Y son como se define para la Fórmula I y R2 H y X es C(Z)2. . »..»-. <J . «W&...
Proceso B El proceso B para la elaboración de los compuestos con la Fórmula General I, en donde Ri , R2, R3 y R4 son como se definen en la fórmula I e Y es CH2 y X es 0, S, SO, SO2, C(ZA o N(Z), comprende los siguientes pasos: (a) Hacer reaccionar un compuesto de la Fórmula General X, Rl-X-H (X) en donde Ri es como se define para la Fórmula I y X es 0, S o N(Z), con un agente de alquilación de la Fórmula General XI.
L R2 R3 (XI) en donde R2 y R3 son como se definen para la Fórmula I y L es un grupo saliente adecuado, tal como un grupo cloro, bromo, yodo, triflato o tosilato, bajo condiciones normales, usando reactivos adecuados, tal como NaH, Ag2C03 , o Bu4NHS?4/NaOH, para dar los compuestos de la Fórmula General XII, x'R1 (XII) R2 R3 (b) Los compuestos de la Fórmula General XII posteriormente se pueden hacer reaccionar con un dióxido de carbono en la presencia de una base adecuada, tal como LDA o KHMDS bajo condiciones normales para dar un compuesto de la Fórmula General XIII.
R1 I XXR2 (XIII) HOOC R3 (c) Los compuestos de la Fórmula General XIII posteriormente se pueden hacer reaccionar con un cloroformiato de alquilo, tal como CICOOMe en la presencia de una base, tal como trietilamina y posteriormente reducir el anhídrido mezclado, formado, con un agente reductor adecuado, tal como NaBH4, bajo condiciones normales, para dar un compuesto de la Fórmula General XIV.
R1 X^,R2 (XIV) r^RS OH (d) Los compuestos de la Fórmula General XIV posteriormente se pueden hacer reaccionar con un compuesto de la Fórmula General IX.
R5-SH (IX) en donde R5 es un grupo protector adecuado, tal como Ac o Bz , en la presencia de un reactivo adecuado, tal como PPh3/DIAD, bajo condiciones normales para dar los compuestos de la Fórmula General I, en donde Ri, R2, R3 y R4 son como se define anteriormente, e Y es CH2 y X es O, S, C(Z)2, o N(Z) . e) Los compuestos de la Fórmula General I, en donde Rlr R2, R3 , R e Y son como se define anteriormente, y X es S, se pueden hacer reaccionar, posteriormente, con un reactivo de oxidación, adecuado, tal como MCPBA bajo condiciones normales para dar los compuestos de la Fórmula General I, en donde Rx, R2, R3 , R4 e Y son como se definen anteriormente y X es SO o S02.
Proceso C El proceso C para la elaboración de los compuestos de la Fórmula General I, en donde Ri, R2, R3, R4 e Y, son como se definen anteriormente y X es NR6CO, CONR6, S02NR6 ó NR6S02 comprende los siguientes pasos: Lt., a) Hacer reaccionar un compuesto de la Fórmula General XV. 6HN^R Y^RS I (XV) SR5 en donde R2, R3 , R6 e Y son como se definen para la Fórmula I y R5 es un grupo protector adecuado, tal como Ac, Bz, PMB o Bn con un compuesto de la Fórmula General XVI .
Rl-X (XVI) en donde Ri es como se define para la Fórmula I y X es COOH o S02C1 en la presencia de reactivos de acoplamientos adecuados, tal como PyBOP/DIPEA, DCC/HOBt, EDC/TEA/DMAP o piridina bajo condiciones normales para dar los compuestos de la Fórmula General I, en donde Ri, R2, R3, R4 e Y son como se definen anteriormente y X es NR6CO o NR6S02. b) Hacer reaccionar un compuesto de la Fórmula General XVII.
X^.R2 (XVII) SR5 Á-y-Mly en donde R2, R3 e Y son como se definen para la Fórmula I y x es COOH o S02C1 y R5 es un grupo protector adecuado, tal como Ac, Bz , PMB o Bn, con un compuesto de la Fórmula General XVIII.
R6-NH2 (XVIII) en donde Re es como se define para la Fórmula I en la presencia de reactivos de acoplamiento adecuados, tal como PyBOP/DIPEA, DCC/HOBt, EDC/TEA/DMAP o piridina bajo condiciones normales para dar los compuestos de la Fórmula General I, en donde Rl r R2, R3, R4 e Y son como se definen anteriormente y X es CONR6 o S02NR6. Se apreciará, por aquellos expertos en la técnica que en los procesos descritos con anterioridad, los grupos funcionales de los compuestos intermedios no necesitan estar protegidos por grupos protectores adecuados. Los grupos funcionales, que se desean proteger, incluyen hidroxi, amino, mercapto y ácido carboxílico. Los grupos protectores adecuados para hidroxi incluyen trialquilsililo o diarilalquilsililo (por ejemplo, t-butildimetilsililo, t-butildifenilsililo o trimetilsililo) , tetrahidropiranilo y bencilo. Los grupos protectores adecuados para amino, amidino y guanidino incluyen t-butiloxicarbonilo y benciloxi-carbonilo . Los grupos u. protectores adecuados para mercapto incluyen CO-C?-6- alquilo, p-metoxibencilo y tritilo. Los grupos protectores adecuados para ácido carboxílico incluyen alquilo de 1 a 6 átomos de carbono y esteres bencílicosa. Los grupos protectores se pueden remover de acuerdo con técnicas, que son bien conocidas por aquellos expertos en la técnica y como se describe posteriormente en la presente. Ciertos derivados protegidos de los compuestos de la Fórmula I, que se pueden elaborar antes de una etapa final de desprotección para formar los compuestos de la Fórmula I, son nuevos. El uso de grupos protectores se describe en "Protective Groups in Organic Synthesis', EA. edition, T.W. Greene & P.G.M. utz, Wiley-Interscience (1991). El grupo protector también puede ser una resina de polímero tal como una resina Wang o una resina de cloruro de 2-clorotritilo . También se apreciara, por aquellos expertos en la técnica, aunque estos derivados protegidos de los compuestos de la Fórmula I no pueden poseer actividad farmacológica como tales, se pueden administrar de manera parenteral u oral y se metabolizan posteriormente en el cuerpo para formar los compuestos de la invención que son farmacológicamente activos. Estos derivados por lo tanto se pueden describir como "profármacos". Todos los tzj - -. -- -a . m-? -* - , .J-J profármacos de los compuestos de la Fórmula I se incluyen dentro del alcance de la invención. También se debe entender que todas las poliformas, formas amorfas, anhidratos, hidratos, solvatos 5 de los compuestos de la presente invención están dentro del alcance de la invención.
Formulaciones farmacéuticas En un aspecto adicional, la invención se refiere 10 a composiciones farmacéuticas que contienen al menos un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como un ingrediente activo . Para el uso clínico, los compuestos de la 15 invención se formulan en formulaciones farmacéuticas para el modo de administración oral, intravenoso, subcutáneo, traqueal, bronqueal, intranasal, pulmonar, transdérmico, bucal, rectal, parenteral u otro. La formulación farmacéutica contiene un compuesto de la invención en 20 combinación con uno o más ingredientes farmacéuticamente aceptables . El portador puede estar en la forma de un diluyente sólido, semi-sólido o líquido, o una cápsula. Estas preparaciones farmacéuticas son un objeto adicional de la invención. Usualmente, la cantidad de compuestos 25 activos está entre 0.1-95 % en peso de la preparación.
En la preparación de formulaciones farmacéuticas que contienen un compuesto de la presente invención, el compuesto seleccionado se puede mezclar con ingredientes sólidos en polvo tal como lactosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almidón, aminopeptina, derivados de celulosa, gelatina u otros ingredientes adecuados, así como con agentes de desintegración y agentes lubricantes tal como estearato de magnesio, estearato de calcio, estearilfumarato sódico y ceras de polietilenglicol. La mezcla luego se puede procesar en granulos o prensar en tabletas. Cápsulas de gelatina suaves se pueden preparar con cápsulas que contienen una mezcla del compuesto activo o compuestos de la invención, aceite vegetal, grasa u otro vehículo adecuado para las cápsulas de gelatina, suaves. Las cápsulas de gelatina, duras pueden contener granulos del compuesto activo. Las cápsulas de gelatina, duras también pueden contener el compuesto activo en combinación con ingredientes sólidos en polvo tal como lactosa, sacarosa, sorbitol, manítol, almidón de patata, almidón de maíz, aminopeptina, derivados de celulosa o gelatina. Las unidades de dosis para la administración rectal se pueden preparar (i) en la forma de supositorios que contienen la substancia activa mezclada con una base de grasa neutral; (ii) en la forma de una cápsula rectal de gelatina que contiene la substancia activa en una mezcla Ü z . con un aceite vegetal, aceite de parafina u otro vehículo adecuado para cápsulas rectales de gelatina; (iii) en la forma de un micro-enema prefabricado; o (iv) en la forma de una formulación de micro-enema, seca que se va a reconstituir en un solvente adecuado justo antes de la administración . Se pueden preparar preparaciones líquidas en la forma de jarabes o suspensiones, por ejemplo, soluciones o suspensiones que contienen el ingrediente activo y el resto que consiste, por ejemplo, de azúcar o alcoholes de azúcares de una mezcla de etanol, agua, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol. Si se desea, las preparaciones líquidas pueden contener agentes colorantes, agentes saborizantes, conservadores, sacarina y carboximetilcelulosa u otros agentes espesantes. Las preparaciones líquidas también se pueden preparar en la forma de un polvo seco o se reconstituyen con un solvente adecuado antes del uso. Las soluciones para la administración parenteral se pueden preparar como una solución de un compuesto de la invención en un solvente farmacéuticamente aceptable. Estas soluciones también pueden contener ingredientes de estabilización, conservadores y/o ingredientes de amortiguamiento. Las soluciones para la administración parenteral también se pueden preparar como una preparación seca para ser reconstituida con un solvente adecuado antes del uso. La dosis diaria típica de la substancia activa varía dentro de un amplio intervalo y dependerá de varios factores tal como por ejemplo el requerimiento individual de cada paciente, la ruta de administración y la enfermedad. En general, las dosis orales y parenterales estarán en el intervalo de 0.1 a 1000 mg por día de substancia activa.
Uso médico y farmacéutico Los compuestos de la invención son inhibidores de la carboxipeptidasa U ya sea como tales o en el caso de profármacos, después de la administración. Los compuestos de la invención de esta manera se espera que sean útiles en aquellas condiciones, donde es benéfica la inhibición de la carboxipeptidasa U, tal como en el tratamiento o profilaxis de la trombosis y la hipercapacidad de coagulación en sangre y tejidos de mamíferos, incluyendo el hombre. Se sabe que la hipercapacidad de coagulación puede conducir a enfermedades tromboembólicas . Las condiciones asociadas con la hipercapacidad de coagulación y las enfermedades tromboembólicas que se pueden mencionar incluyen resistencia a proteína C y deficiencias heredadas o adquiridas en anti trombina III, proteína C, proteína S y .. - A í J t -. . tei- cofactor II de heparina. Otras condiciones conocidas como que están asociadas con la hipercapacidad de coagulación y la enfermedad tromboembólica incluyen choques circulatorio y séptico, anticuerpos anti-fosfolípidos en circulación, homosisteinami , trombositopenia inducida por heparina y defectos en la fibrinólisis. Los compuestos de la invención de esta manera se indican tanto en el tratamiento terapéutico como profiláctico de estas condiciones. Los compuestos de la invención se indican adicionalmente en el tratamiento de condiciones donde existen un exceso indeseable de ProCPU/CPU. Los estados particulares de enfermedad que se pueden mencionar incluyen el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de trombosis venosa y embolia pulmonar, trombosis arterial (por ejemplo en infarto al miocardio, angina inestable, choque en base a trombosis y trombosis arterial periférica) y embolia sistémica usualmente del atrio durante la fibrilación arterial o del ventrículo izquierdo después del infarto al miocardio, transmural. Además, los compuestos de la invención se espera que tengan utilidad en la profilaxis de la re-oclusión y restenosis (es decir, trombosis) después de la trombólisis, angioplastia trans-luminal percutánea (PTA) y operaciones de derivación (bypass) coronaria; la prevención de la re-trombosis después de la micro-cirugía y la cirugía vascular en general . Las indicaciones adicionales incluyen el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de la coagulación intramuscular inseminada provocada por bacterias, trauma múltiple, intoxicación o cualquier otro mecanismo, tratamiento fibrinolítico cuando la sangre está en contacto con substancias extrañas en el cuerpo, tal como injertos vasculares, punzadas vasculares, catéteres vasculares, válvulas prostéticas mecánicas y biológicas o cualquier otro dispositivo médico, y el tratamiento fibrinolítico cuando la sangre está en contacto con dispositivos médicos fuera del cuerpo, tal como durante la cirugía cardiovascular usando una máquina de corazón-pulmón o en la hemodiálisis . Los compuestos de la invención también se pueden combinar y/o co-administrar con cualquier agente antitrombótico con un mecanismo diferente de acción, tal como los agentes anti-plaquetas, ticlopidina de ácido acetilsalicílico, clopidogrel, receptor de tromboxano y/o inhibidores de sintetasa, antagonistas del receptor de fibrinógeno, compuestos imitadores de la prostaciclina e inhibidores de fosfodiesterasa y antagonistas del receptor de ADP (P2T) e inhibidores de la trombina. Los compuestos de la invención se pueden combinar adicionalmente y/o co-administrar con compuestos trombolíticos tal como el activador de plasminógeno de tejido (natural, recombinante modificado), estreptocmasa, urocinasa, prourocinasa, complejo del activador de plasminógeno-estreptocinasa, anisoilado, (APSAC) , activadores de plasminógeno de glándulas salival de animales, y similares, en el tratamiento de enfermedades trombóticas, en particular infarto al miocardio y ataque.
Experimentos in vi tro El efecto inhibidor de los compuestos de la presente invención se estimó usando el ensayo descrito en Dirk Hendriks, Simón Shcarpé and Marc van Sande, Clinical Chemistry, 31, 1936-1939 (1985); y Wei Wang, Dirk F. Hendriks, Simón S. Scharpé, The Journal of Biological Chemistry, 269, 15937-15944 (1994).
EJEMPLOS Procedimientos Experimentales Generales Se registraron los espectros de masa en un espectrómetro de masas, triple cuadropolo Finnigan MAT TSQ 700 equipado con una interfaz de electro-rociado (FAB-MS) y un espectrómetro de masas VG Platform II equipado con una interfaz de electro-rociado (LC-MS) . Las mediciones de RMN A y RMN 13C se realizaron en espectrómetros Varían UNITY plus 400, 500 y 600, que operan a frecuencias A de 400, -¿<^¡*^ 500 y 600 MHz, respectivamente. Los desplazamientos químicos se dan en ppm con el solvente como norma interna. Los extractos orgánicos se secaron usando MgS04 ó Na2S?4 como el agente de secado. Las separaciones cromatográficas se realizaron usando gel de Sílice Merck 60 (0.063-0.200 mm) . Las separaciones de HPLC se realizaron en una columna HIGHCROM KR100-10C8.
Ejemplo 1 Ácido 2-mercaptometil-3-piperidin-4-il-propiónico (a) Ácido 3-piperidin-4-il-propiónico Una solución de ácido 3-piridin-4-il-acrílico (4.20 g, 28.0 mmol) en agua (50 L) y amoniaco (acuoso, 25%, 4 mL) se hidrógeno a 60 bar en un autoclave de acero de alta presión en la presencia de rutenio (5% en alúmina, 439 mg) . Cuando la presión de hidrógeno permaneció constante (3 días) , se removió el catalizador de la mezcla de reacción por filtración. El catalizador se lavó con etanol y agua, y el etanol se removió de la solución en un roto-vapor y la solución acuosa se secó por congelación para dar el ácido 3-piperidin-4-il-propiónico (4.30 g, 100%) . (b) Éster ter-butílico del ácido 4- (2-carboxi-etil ) -piperidin-1-carboxílico Una solución del ácido 3-piperidm-4-il-propiónico (4.79 g, 30.5 mmol), dicarbonato de di-ter-butilo (6.98 g, 32.0 mmol) y NaHC03 (2.69 g, 32.0 mmol) en THF/agua (1:1, 50 mL) se agitaron a temperatura ambiente durante 22 horas. Otra porción del dicarbonato de di-ter-butilo (2.00 g, 9.10 mmol) se adicionó junto con una cantidad catalítica de DMAP, la mezcla resultante se agitó durante otros cuatro días. El THF se removió bajo presión reducida y la fase acuosa se extrajo con CH2C12. La fase acuosa luego se acidificó a pH 2 con HCl 1M y el ácido se extrajo con CH2C1 . Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron y se concentraron in vacuo para dar el éster ter-butílico del ácido 4- (2-carboxi-etil ) -piperidina-1-carboxílico como un sólido blanco (6.36 g, 81%) . (c) Éster ter-butílico del ácido 4- (3-bencilsulfan?l-2-carboxi -propi1 ) -piperidin-1-carboxílico Se adicionó BuLi (1.6 M, 15.3 mL, 24.4 mmol) a una solución de diisopropilamina (3.43 mL, 24.4 mmol) en THF (3 L) a -78°C bajo argón. Después de unos pocos minutos, la solución se dejó calentar a temperatura ambiente durante un periodo de 15 minutos. La solución de y LDA resultante se adicionó lentamente a una solución de éster ter-butílico del ácido 4- (2-carboxi-etil ) -piperidina- 1-carboxílico (3.07 g, 11.9 mmol) en THF (7 mL) a -78°C. La solución resultante se agitó a -78°C durante 10 minutos, se adicionó THF (20 mL) durante ese tiempo a fin de disolver el anión que ha solidificado. El dianión se enfrió a -78°C y se adicionó éter tiobencílico de bromometilo (2.72 g, 12.5 mmol) como una solución en THF (3 mL) , la solución se agitó a -78°C durante 30 minutos, a 0°C durante 30 minutos y luego se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. La mezcla de reacción se acidificó con HCl 1M, se diluyó con EtOAc y la fase orgánica se lavó con agua y se secó. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (MeOH/CHCl3, 1:9) para producir el éster ter-butílico del ácido 4- (3-Bencilsulfani1-2 -carboxi-propil) -piperidina-1-carboxílico como un aceite amarillo pálido (3.12 g, 66%). (d) Ester ter-butílico del ácido 4- (2-carboxi-3-mercapto-propil ) -piperidina-1-carboxílico Se adicionó metal de sodio (513 mg, 22.5 mmol) en porciones durante 5 minutos a una solución del éster terbutílico del ácido 4- (3-Benc?lsulfanil-2-carboxi-propil ) -piperidina-1-carboxílico (0.9 g, 2.29 mmol) en THF (45 mL) y amoniaco líquido (50 mL) a -60°C bajo argón. Después de -tU la agitación durante 15 minutos, se adicionó cloruro de amonio (1.7 g, 31.5 mmol) en porciones. El baño de enfriamiento se removió y el amoniaco se evaporó usando una corriente de argón. Se adicionó NaOH 0.5 M y la mezcla se lavó con heptano. La fase acuosa se acidificó con HCl 2 M y se extrajo con cloruro de metileno. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó y se concentró bajo presión reducida para dar el éster ter-butílico del ácido 4- (2-Carboxi-3-mercapto-propil) -piperidina-1-carboxílico (0.7 g, 100%) . (e) Ácido 2-mercaptometil-3-piperidin-4-il-propiónico A una solución del éster ter-butílico del ácido 4- (2-Carboxi-3-mercapto-propil) -piperidina-1-carboxílico (0.7 g, 2.29 mmol) en cloruro de metileno (8 mL) bajo argón se adicionó trietilsilano (731 µL , 4.58 mmol) seguido por TFA (4 L) . La mezcla de reacción se agitó durante 60 minutos y luego se concentró bajo presión reducida. La purificación por HPLC (acetonitrilo 10?30%, TFA al 0.1% en agua) dio el compuesto del título como una sal de TFA (447 mg, 61%) RMN A (400 MHz, D20) : d 1.34-1.50 (m, 2H) , 1.54-1.76 (m, 3H) , 1.90-1.99 (m, ÍH) , 2.0-2.1 (m, ÍH) , 2.9-3.05 (m, 5H) , 3.38-3.48 (m, 2H) . MS(+) 204 (M+l) .
Ejemplo 2 Ácido 3- (l-acetil-piperidin-4-il) -2-mercaptometil-propion co Una solución de la sal de TFA del ácido 2-Mercaptometil-3-piperidin-4-il-propiónico (0.1 g, 0.32 mmol) en anhídrido acético (2 mL) se agitó durante la noche bajo argón y luego se concentró bajo presión reducida. La purificación por HPLC (acetonitrilo al 10?50%, TFA al 0.1% en agua) dio el compuesto del título (63 mg, 80%).
RMN A (500 MHz, CD3OD) : d 1.0-1.22 (m, 2H) , 1.46-1.55 ( , ÍH) , 1.55-1.66 (m, 2H) , 1.67-1.79 (m, ÍH) , 1.81-1.92 (m, ÍH) , 2.08 (s, 3H) , 2.55-2.73 (m, 4H) , 3.03-3.12 (m, ÍH) , 3.85-3.94 (m, 1H) , 4.45-4.53 (m, ÍH) . MS (+) 246 (M+l) .
Ejemplo 3 Ácido 3-mercapto-5-meti1-2-piperidin-4-ilmetil-hexanoico (a) Ester ter-butílico del ácido 4-hidroximetil-piperidina- 1-carboxílico A una solución de 4- (hidroximetil) piperidina (5.00 g, 43.41 mmol THF/H20 (1:1, 120 mL) se adicionó dicarbonato de di-t-butilo (9.47 g, 43.41 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción luego se vertió en H20 (500 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 250 mL) . Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con agua. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y luego se concentró bajo presión reducida para dar el éster ter-butílico del ácido 4-hidroximetil-piperidina-l-carboxílico (9.01 g, 96%). (b) Ester ter-butílico del ácido 4-bromometil-piperidina-l-carboxílico A una solución del éster ter-butílico del ácido 4-hidroximetil-piperidina-l-carboxílico (8.75 g, 40.64 mmol) en éter dietílico (200 mL) a 0°C bajo nitrógeno, se adicionaron trifenilfosfina (21.32 g, 81.28 mmol) y tetrabromuro de carbono (26.96 g, 81.28 mmol) . La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó bajo nitrógeno durante 48 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de una almohadilla de Celita y el filtrado orgánico se lavó con NaS203 al 5%, agua, salmuera y se secó. La mezcla se filtró y se concentró bajo presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (acetato de etilo/hexano, 1:9) para dar el éster ter-butílico del ácido 4-bromometil-piperidina-l-carboxílico (8.26 g, 73%). (c) Éster ter-butílico del ácido 4- [2-ter-butoxicarbonil-2- (dietoxi-fosforil ) -etil] -piperidina-1-carboxílico Se adicionó gota a gota dietilfosfonoacetato de ter-butilo (75.0 g, 297.32 mmol) a una suspensión de hidruro de sodio (8.03 g, 334.58 mmol) en DMF (450 mL) a 0°C bajo nitrógeno. La mezcla se agitó a 0°C durante 0.5 horas y a una temperatura ambiente durante 0.5 horas. Se adicionó gota a gota éster ter-butílico del ácido 4- bromometil-piperidina-1-carboxílico (20.68 g, 74.34 mmol) en DMF (50 mL) a la mezcla de reacción y la reacción se calentó a 60°C y se agitó durante 16 horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente, se vertió en H20 y se extrajo con acetato de etilo. Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con agua. La capa orgánica se secó, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (acetato de etilo/hexano, 3:7) para dar el éster ter-butílico del ácido 4- [2-ter-Butoxicarbonil-2- (dietoxi-fosforil) -etil] - piperidina-1-carboxílico y dietilfosfonoacetato de terbutilo sin reaccionar. El producto fue 47% puro por HPLC. El producto se purificó adicionalmente por destilación al vacío para dar 77% de pureza. Esta mezcla se toma en la próxima reacción. (d) Éster ter-butílico del ácido 4- (2-ter-butoxicarbonil-5- metil-hex-2-enil) -piperidina- 1-carboxílico Se adicionó gota a gota éster ter-butílico del ácido 4- [2-ter-butoxicarbonil-2- (dietoxi-fosforil ) -etil] - 5 piperidina-1-carboxílico (8.1 g) en 20 mL de DME, a una suspensión de hidruro de sodio (1.04 g, 43.13 mmol) en DME (20 mL) a 0°C bajo nitrógeno. La mezcla se agitó durante 0.75 horas y se adicionó gota a gota isovaleraldehído (7.76 g, 90.1 mmol) a la mezcla. La mezcla se dejó calentar a 10 temperatura ambiente y se agitó durante 48 horas. La mezcla se diluyó con éter y se lavó con agua. La capa orgánica se secó, se filtró y se concentró bajo presión reducida para dar 9.4 de un aceite amarillo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (acetato de 15 etilo/hexano, 1:50) para dar el éster ter-butílico del ácido 4- (2-ter-butoxicarbonil-5-metil-hex-2-enil) - piperidina-1-carboxílico (1.53 g, 24%) para dos reacciones. (e) Éster ter-butílico del ácido 4- [2-ter-butoxicarbonil-3- 20 (4-metoxi-bencilsulfanil) -5-metil-hexil] -piperidina-1- carboxílico Se adicionó una solución del éster ter-butílico del ácido 4- (2-ter-butoxicarbonil-5-metil-hex-2-enil) - piperidin-1-carboxílico (2.0 g, 5.24 mmol) en DMF (5 mL) se 25 adicionó a una mezcla de carbonato de potasio (0.54 g, 3.93 -f^ajffT* ^*AJ- ^^ -Lu.. mmol) y 4-metoxi-a-toluentiol (1.17 g, 10.48 mmol) en DMF (50 mL) bajo nitrógeno. La mezcla se sometió a reflujo durante 5 horas y se dejó enfriar a temperatura ambiente. La mezcla de reacción luego se vertió en H20 y se extrajo con acetato de etilo. La capas orgánicas se combinaron y se lavaron con agua. La capa orgánica se secó, se filtró y se concentró bajo presión reducida para dar 3.76 g del material crudo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (acetato de etilo/hexano, 1:10) para dar el éster ter-butílico del ácido 4-[2-ter-butoxicarbonil-3- (4-metoxi-bencilsulfanil) -5-metil-hexil] -piperidina-1-carboxílico (1.77 g, 63%). ( f ) Ácido 3-mercapto-5-metil-2-piperidina-4-ilmetil-hexanoico Una mezcla de H20 (2.6 mL) y TFA (26 mL) se congeló y luego se dejó calentar a temperatura ambiente bajo nitrógeno. Se adicionó éster ter-butílico del ácido 4- [2-ter-butoxicarbonil-3- (4-metoxi-bencilsulfanil) -5-metil-hexil] -piperidina-1-carboxílico (2.62 g, 4.89 mmol) y la mezcla se sometió a reflujo durante 16 horas. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna de fase invertida (MeOH/H20, 3:2) para dar el compuesto del título como una sal de TFA (0.40 g, 22%) .
RMN A (300 MHz), (CD3OD) d 0.88 (d, ) , 0.94 (d, ) , 1.43 (m) , 1.70 (br) , 1.94 (m) , 2.48 (m) , 2.90 (m) , 2.99 (br) , 3.34 (m) . MS (+) 260.2 (M-TFA) .
Ejemplo 4 Ácido 3-mercapto-4-feni1-2-piperidin-4-ilmetil-butírico (a) Éster ter-butílico del ácido 4- (2-ter-butoxicarbonil-4-feni1-but-2-enil) -piperidina-1-carboxílico Una solución del éster ter-butílico del ácido 4- [2-ter-butoxicarbonil-2- (dietoxi-fosforil) -etil] -piperidina-1-carboxílico (3.0 g) en DME (8 mL) se adicionó gota a gota a una suspensión de hidruro de sodio (0.26 g, 10.51 mmol) en DME (8 mL) a 0°C bajo nitrógeno. La mezcla se agitó durante 0.75 horas. Se adicionó fenil-acetaldehído (5.26 g, 43.81 mmol) gota a gota a la mezcla a 0°C. La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas. La mezcla se diluyó con éter y se lavó con agua. La capa orgánica se secó, se filtró y se concentró bajo presión reducida para dar 8.6 g de un aceite amarillo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (acetato de etilo/hexano, 1:50—1:10) para dar el éster ter-butílico del ácido 4- (2-ter-butoAcarbonil-4-fenil-but-2-enil) -piperidina-1-carboxílico (1.32 g, 62% para dos reacciones. (b) Éster ter-butílico del ácido 4- [2-ter-butoxicarbonil-3- (4-metoxi-bencilsulfanil) -4-fenil-butil] -piperidina-1- carboxílico Se adicionó el éster ter-butílico del ácido 4- (2- ter-butoxicarboni1-4-fenil-but-2-enil) -piperidina-1- carboxílico (0.8 g, 1.93 mmol) en DMF (10 mL) se adicionó una suspensión de carbonato de potasio (0.20 g, 1.44 mmol) y 4-metoxi-a-toluentiol (0.54 mL, 3.85 mmol) en DMF (10 mL) bajo nitrógeno. La mezcla se calentó a 75°C durante 24 horas y se dejó enfriar a temperatura ambiente. La mezcla de reacción luego se vertió en H20 y se extrajo con acetato de etilo. Las capas orgánicas se combinaron y lavaron con agua. La capa orgánica se secó, se filtró y se concentró bajo presión reducida para dar 1.8 g de material crudo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (acetato de etilo/hexano, 1:10) para dar el éster terbutílico del ácido 4- [2-ter-butoxicarbonil-3- (4-metoxi-bencilsulfanil) -4-fenil-butil ] piperidina-1-carboxílico (0.55 g, 50%) . (c) Ácido 3-mercapto-4-feni1-2-piperidina-ilmeti1-butírico Una mezcla de H20 (0.65 mL) y TFA (6.5 mL) se congeló y luego se dejó calentar a temperatura ambiente bajo nitrógeno. Se adicionó éster ter-butílico del ácido 4- i [2-ter-butoxicarbonil-3- (4-metoxi-bencilsulfanil-4-fenil-butil] -piperidina-1-carboxílico (0.65 g, 1.14 mmol) y la mezcla se sometió a reflujo durante 16 horas. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna de fase invertida (MeOH/H20, 1:1) para dar el compuesto del título como una sal de TFA (0.27 g, 58%) RMN A (300 MHz) (DMSO) d 1.22 (m) , 1.49 (m) , 1.64 (br) , 2.21 (d, ) , 2.98 (m) , 7.25 (m, 5H) , 8.27 (br) , 8.57 (br) , 12.59 (br) . MS (+) 294.3 (M-TFA) .
Ejemplo 5 Ácido 2- (2-amino-piridin-4-ilmetil) -3-mercapto-propiónico (a) N- (4-metil-piridin-2-il) -acetamida Se calentó la 2-amino-4-metilpiridina (99.0 g, 91.5 mmol) en anhídrido acético (250 mL) a 70°C durante dos horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se adicionó éter dietílico (100 mL) . El producto cristalizó como cristales de aguja, blancos. El filtrado y el secado in vacuo dieron N- (4-metil-piridin-2-il ) -acetamida (130 g, 95%) . ^^^^^^^^^^,-í [ ' ^ ' (b) Ácido 2-acetilamino-isónicotínico A una mezcla de N- (4-metil-piridin-2-il ) -acetamida (40.0 g, 0.26 mol) y agua (400 mL) se calentó a 90°C hasta que la solución se hizo homogénea. Se adicionó KMn0 (100 g, 0.62 mol) cuidadosamente en pequeñas porciones con agitación mecánica vigorosa durante 2 horas. La mezcla de reacción se mantuvo a 90-95°C durante 3 horas adicionales antes del filtrado a través de Celita en tanto que aún está caliente. El filtrado se concentró a aproximadamente 100 mL y se adicionó HCl concentrado para ajustar el pH a aproximadamente 4. El matraz de reacción se enfrió en un baño de hielo y el sólido blanco se filtró completamente. Los cristales se lavaron con agua fría y cloroformo y se secaron in vacuo dando ácido 2-acetílamino-isonicotíníco (12.0 g, 25%). (c) Éster etílico del ácido 2-amino-isonicotínico Se dispersó el ácido 2-acetilamino-isonicotínico (10.8 g, 60.0 mmol) en etanol (150 mL) y BF3OEt2 (22 mL, 138 mmol) se adicionó. La mezcla se sometió a reflujo durante la noche, y después del enfriamiento a temperatura ambiente, se adicionó NaHC03 al 10%, (250 L) . El producto se extrajo con cloroformo y los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y se secaron. El filtrado y ^s¿*»*^^ la concentración dieron el éster etílico del ácido 2-amino- isonicotínico (7.46 g, 79%) como cristales amarillo pálido. (d) Éster etílico del ácido 2- [N, N-bis (ter- 5 butoxicarbonil ) amino] -isonicotínico A una solución del éster etílico del ácido 2- amino-isonicotínico (5.00 g, 30 mmol) en BuOH (45 mL) y acetona (15 mL) se adicionó DMAP (50 mg, 0.41 mmol) y dicarbonato de di-t-butilo (16.4 g, 75.0 mmol). La reacción 10 se agitó a temperatura ambiente durante la noche y se adicionó a hexano (60 mL) . La mezcla de reacción se enfrió en un refrigerador durante 3 horas y se filtró para dar el éster etílico del ácido 2- [N, N-bis (ter- butoxicarbonil) amino] -isonicotínico (8.71 g, 79}%). 15 (e) Éster ter-butílico del ácido (4-hidroximetil-piridin-2- il) -carbámico Una solución del éster etílico del ácido 2-[N,N- bis (ter-butoxicarbonil) amino] -isonicotínico (35.0 g, 95.5 20 mmol) en THF (350 mL) se trató con LiAlH4 (7.25 g, 191 mmol) y se sometió a reflujo durante 1 hora bajo nitrógeno. La mezcla de reacción se vertió cuidadosamente en hielo triturado y el producto se extrajo varias veces con CHC13 y CHCl3:MeOH (9:1). Los extractos orgánicos combinados se 25 secaron, se filtraron y se concentraron bajo presión y&Á?ttm?táSiaiSñtim n' i- . » " -* <** * ***--- Lt¿* reducida para dar el éster ter-butílico del ácido (4- hidroximetil-piridin-2-il) -carbámico (18.5 g, 86%) como un sólido amarillo pálido. 5 (f ) Éster ter-butílico del ácido (4-bromometil-piridin-2- il) -carbámico Se disolvió el éster ter-butílico del ácido (4- hidroximetil-piridin-2-il) -carbámico (8.00 g, 35.6 mmol) en CH2C12 (150 mL) y se trató con PPh3 (11.2 g, 42.8 mmol) bajo 10 nitrógeno. El matraz de reacción se enfrió en un baño de hielo y se adicionó CBr4 (14.2 G, 42.8 mmol) en pequeñas porciones. El baño de hielo se removió después de 30 minutos y la mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró 15 bajo presión reducida y se adicionó acetonitrilo (50 mL) . El matraz de reacción se colocó en un refrigerador durante 3 horas y el precipitado se filtró y lavó con acetonitrilo frío. El sólido blanco se secó in vacuo dando el éster terbutílico del ácido (4-bromometil-piridin-2-il) -carbámico 20 (8.38 g, 82%) . (g) Éster dietílico del ácido 2- (2-ter-butoxicarbonilamino- piridin-4-ilmetil) -malónico A una solución de NaH (80%, 0.17 g, 4.00 mmol) en 25 THF (5 mL) a 0°C bajo argón se adicionó malonato de dietilo (0.64 g, 4.00 mmol). Después de que la mezcla se agitó durante 15 minutos, la mezcla se adicionó a una mezcla sometida a reflujo de éster ter-butílico del ácido (4- bromometil-piridin-2-il) -carbámico (1.00 g, 3.48 mml) en 5 THF (10 mL) , y la mezcla se sometió a reflujo durante 2 horas. La mezcla se concentró bajo presión reducida y el residuo se dividió entre agua y cloroformo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera y se secó. Después de la filtración y evaporación del solvente, el producto crudo 10 se purificó por cromatografía instantánea (MeOH/CH2Cl2, 1:100) para dar el éster dietílico del ácido 2- (2-ter- butoxicarbonilamino-piridin-4-ilmetil) -malónico (0.80 g, 55%) . 15 (h) Ester monoetílico del ácido 2- (2-ter- butoxicarbonilamino-piridin-4-ilmetil) -malónico Una solución de KOH (0.19 g, 3.43 mmol) en etanol (5 mL) se adicionó a una solución del éster dietílico del ácido 2- (2-ter-butoxicarbonilamino-piridin-4-ilmetil) - 20 malónico (1.20 g, 3.27 mmol) en etanol (5 L) y cloruro de metileno (5 mL) a 0°C. La mezcla se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente. La mezcla se concentró bajo presión reducida y se adicionó agua al residuo. La capa acuosa se lavó con éter dietílico, se acidificó a pH 4 por HCl 1M, y 25 se extrajo con cloruro de metileno. La capa orgánica se lavó con agua, salmuera y se secó. Después de la filtración y evaporación in vacuo, el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (CH3OH/CH2CI2, 1:20) para producir el éster monoetílico del ácido 2-(2-ter-butoxicarbonilamino-piridin-4-ilmetil) -malónico (0.90 g, 81%) . (i ) Éster etílico del ácido 2- (2-ter-butoxicarbonilamino-piridin-4-ilmetil) -acrílico Una solución de dietilamina (0.26 g, 2.67 mmol) en cloruro de metileno (4 mL) se adicionó a una mezcla del éster monoetílico del ácido 2- (2-ter-butoxicarbonilamino-piridin-4-ilmetil) -malónico (0.90 g, 2.66 mmol) y una solución acuosa al 37% de formaldehído (0.24 g, 3.00 mmol) a 0°C. La mezcla se agitó durante 5 horas a temperatura ambiente y la mezcla se vertió sobre agua con hielo y se extrajo con cloruro de metileno. La capa orgánica se lavó con NaHC03 al 5% y se secó. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (metanol al 1% en CH2C12) para producir el éster etílico del ácido 2- (2-ter-butoxicarbonilamino-piridin-4-ilmetil) -acrílico (0.58 g, 71%) . ( j ) Éster etílico del ácido 2- (acetilsulfanilmetil-3- (2- ter-butoxicarbonilamino-piridin-4-il) -propiónico Una solución del éster etílico del ácido 2- (2- ter-butoxicarbonilamino-piridin-4-ilmetil) -acrílico (0.48 g, 1.57 mmol) y trietilamina (0.17 g, 1.64 mmol) se adicionó a ácido tioacético (13 mL) a 0°C bajo nitrógeno. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla se vertió en agua con hielo y se extrajo con CH2CI2. La fase orgánica se lavó con NaHC03 saturado (acuoso) y se secó. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (MeOH al 2.5% en CH2C12) para dar el éster etílico del ácido 2- (acetilsulfanilmetil-3- (2-ter-butoxicarbonilamino-piridin-4-il) -propiónico (0.60 g, 100%) . [k) Ester etílico del ácido 2- (acetilsulfanilmetil-3- (2-amino-piridin-4-il) -propiónico Se adicionó TFA (0.5 mL) a una solución del éster etílico del ácido 2- (acetilsulfanilmetil-3- (2-ter-butoxicarbonilamino-piridin-4-il) -propiónico (50 mg, 0.13 mmol) en cloruro de metileno bajo argón. La solución se agitó durante 60 minutos y se concentró bajo presión reducida para dar el éster etílico del ácido 2-(acetilsulfanilmetil-3- (2-amino-piridin-4-il) -propiónico, crudo (52 mg, 100%) .
RMN A (500 MHz, CD3OD3): d 1.15 (t, 3H) , 2.32 (s, 3H) , 2.73-2.83 (m, 2H) , 2.86-2.93 ( , ÍH) , 3.01-3.07 (dd, ÍH) , 3.12-3.18 (dd, ÍH) , 4.03-4.12 (m, 2H) , 6.39 (s, ÍH) , 6.43 (d, 1H) , 7.77 (d, ÍH) . (1) Ácido 2- (2-amino-piridin-4-ilmetil) -3-mercapto-propiónico Se disolvió el éster etílico del ácido 2- (acetilsulfanilmetil-3- (2-amino-piridin-4-il) -propiónico (52 mg, 0.13 mmol) en HCl concentrado (2 mL) bajo argón. La solución se calentó a reflujo durante 1 hora. La concentración bajo presión reducida dio el compuesto del título como una sal de clorhidrato (32 mg, 100%). RMN A (500 MHz, CD30D) : d 2.70 (bs, 2H) , 2.85-3.0 (m, 3H) , 6.76 (bs, ÍH) , 6.81 (bs, ÍH) , 7.67 (bs, ÍH) . MS (+) 213 (M+l) .
Ejemplo 6 Ácido 3- ( 6-amino-piridin-3-il) -2-mercaptometil-propiónico (a) Éster etílico del ácido 6-amino-nicotínico El ácido 2-amino-5-piridinacarboxílico (25.0 g, 181 mmol) se dispersó en etanol (190 en L) y se adicionó S0C12 (15 mL, 206 mol) . La mezcla se sometió a reflujo durante 10 horas y se adicionó más S0C12 (16 mL) . Después , de 3 días con reflujo (y más S0C12 (10 L) adicionado cada día) , la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se adicionó éter díetílico. Después de 24 horas a -20°C, la mezcla se filtró. La sal cruda se disolvió en metanol (214 mL) y se adicionó una solución de NaOH (40.0 g, 23.5 mmol) en metanol (90 L) . La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora y se adicionó THF (270 mL) . La mezcla de reacción se filtró a través de un tapón de sílice (THF/MeOH) y se concentró bajo presión reducida para dar el éster etílico del ácido 6-amino-nicotínico (36.2 g, 97%). (b) Ester etílico del ácido 6-ter-butoxicarbonilamino-nicotínico A una solución del éster etílico del ácido 6-amino-nicotínico (36.0 g, 217.0 mmol) en t-BuOH (308 mL) y acetona (103 mL) se adicionó DMAP (0.53 g, 4.34 mmol) y dicarbonato de di-t-butilo (72.0 g, 330 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 horas seguido por la adición de más dicarbonato de di-t-butilo (2.60 g) . Después de 10 horas de agitación a temperatura ambiente se adicionó hexano (470 mL) . La mezcla de reacción se enfrió a -20°C durante 2 horas y se filtró. El filtrado se lavó con hexano/diclorometano (3:1) y se secó in vacuo para dar el éster etílico del ácido 6-ter-butoxicarbonilamino-nicotínico (40.5 g, 70%). - « ..,, , . - zz. A, ..f—M-M.,.-^ , . +. Í*» (c) (Éster ter-butílico del ácido (5-hidroximetil-piridin- 2-il) -carbámico A una solución agitada del éster etílico del ácido 6-ter-butoxicarbonilamino-nicotínico (3.50 g, 13.1 mmol) en THF (20 mL) bajo nitrógeno se adicionó LiAlH4 (0.91 g, 24.0 mmol) en THF (20 mL) durante un periodo de 2 horas. La mezcla de reacción se agitó durante 6 horas, luego se adicionó NH4C1 (saturado) cuidadosamente) hasta una que se hizo una solución neutral. La mezcla se filtró y se concentró bajo presión reducida para dar el éster terbutílico del ácido (5-hidroximetil-piridin-2-il ) -carbámico (2.00 g, 68%) . (d) (Ester ter-butílico del ácido (5-bromometil-piridin-2-il) -carbámico Se adicionaron trifenilfosfina (8.70 g, 33.1 mmol) y tetrabromuro de carbono (17.0 g, 51.2 mmol) a una suspensión del éster ter-butílico del ácido (5-hidroximetil-piridin-2-il) -carbámico (7.00 g, 31.2 mmol) en CH2C12 (200 mL) a temperatura ambiente. Se continuó la agitación durante 5 horas seguido por la evaporación del solvente. Se adicionó acetonitrilo (200 mL) y la mezcla se enfrió a -20°C durante 2 horas. La mezcla luego se filtró y el residuo cristalino se lavó con acetonitrilo frío (2 x 10 mL) , para dar el éster ter-butílico del ácido (5-bromometil-piridin-2-il) -carbámico (5.96 g, 67%). (e) Éster dietílico del ácido 2- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -malónico A una suspensión de NaH (0.49 g, 16.3 mmol, 80%) en THF (15 L) a 0°C se adicionó malonato de dietilo (2.61 g, 16.3 mmol) . La mezcla se agitó durante 15 minutos y luego se adicionó gota a gota a una mezcla sometida a reflujo de éster ter-butílico del ácido (5-bromometil-piridin-2-il) -carbámico (3.90 g, 13.6 mmol) en THF (25 mL) , y la solución resultante se sometió a reflujo durante 15 minutos. Después de la evaporación del solvente, el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (metanol/CH2Cl2, 1:100—2.5:100) para dar el éster dietílico del ácido 2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil ) -malónico (2.18 g, 44%). (f ) Éster monometílico el ácido 2- (6-ter-butoxicabonilamino-piridin-3 -ilmetil) -malónico Se adicionó una solución de KOH (0.37 g, 6.54 mmol) en etanol (5 mL) a una solución del éster dietílico del ácido 2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -malónico (2.18 g, 5.95 mmol) en etanol (25 mL) y cloruro de metileno (10 L) a 0°C. La mezcla se agitó durante 18 horas A a temperatura ambiente. La mezcla se concentró bajo presión reducida y el residuo se disolvió en agua. La capa acuosa se lavó con éter, se acidificó a pH 4 por HCl 1M y se extrajo con cloruro de metileno. La capa orgánica se lavó con agua, salmuera y se secó. Después de la filtración y concentración bajo presión reducida, el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (metanol/CH2Cl2, 1:20) para producir el éster monoetílico el ácido 2-(6-ter-butoxicabonilamino-piridin-3-ilmetil) -malónico (1.00 g, 50%) . (g) Éster etílico el ácido 2- ( 6-ter-butoxicabonilamino-piridin-3-ilmetil) -acrílico Se adicionó dietilamina (0.29 g, 3.00 mmol), agua (2 mL) y cloruro de metileno (2 mL) a una mezcla del éster monometílico el ácido 2- (6-ter-butoxicabonilamino-piridin-3-ilmetil) -malónico (1.00 g, 2.96 mmol) y una solución acuosa al 37% de formaldehído (0.25 g, 3.05 mmol) a 0°C. La mezcla se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente y luego se vertió en agua con hielo y se extrajo con cloruro de metileno. La capa orgánica se lavó con NaHC03 al 5% y se secó. La filtración y concentración bajo presión reducida dieron el éster etílico el ácido 2-(6-ter-butoxicabonilamino-piridm-3-ilmetil) -acrílico (0.75 g, 83%) . (h) Ester etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il ) -propiónico El éster etílico del ácido 2-(6-ter-butoxicabonilamino-piridin-3-ilmetil) -acrílico (0.49 g, 1.60 mmol) y trietilamina (0.17 g, 1.64 mmol) se adicionaron a ácido tioacético (3 mL) a 0°C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas. La mezcla se vertió en agua con hielo y se extrajo con CH2C12. La fase orgánica se lavó con NaHC0 saturado y se secó. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (MeOH/CH2Cl2, 2.5:100) para dar el éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (ß-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -propiónico (0.36 g, 61%). (i) Éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- ( 6-amino-piridin-3-il ) -propiónico Se adicionó TFA (0.5 mL) a una solución del éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -propiónico (100 mg, 0.26 mmol) en cloruro de metileno (2 mL) bajo argón. La solución se agitó durante 60 minutos y se agitó bajo presión reducida para dar el éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- ( 6-amino-piridin-3-il) -propiónico, crudo (104 mg, 100%) .
RMN A (500 MHz, CD3OD) : d 1.21 (t, 3H) , 2.33 (s, 3H) , 2.78-2.97 (m, 3H) , 3.05-3.13 (m, ÍH) , 3.14-3.21 (m, ÍH) , 4.08-4.15 (m, 2H) , 6.99 (d, ÍH) , 7.69 (s, ÍH) , 7.85 (d, ÍH) . ( j ) Ácido 3- (6-amino-piridin-3-il) -2-mercaptometil-propiónico Se disolvió el éster etílico del ácido 2 -acetilsulfanilmetil-3- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -propiónico (38 mg, 0.096 mmol) en HCl concentrado (2.0 mL) bajo argón. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y luego se calentó a reflujo durante 1 hora.
La concentración bajo presión reducida dio el compuesto del título (25.7 mg, 100%) como la sal de clorhidrato. RMN A (500 MHz, CD3OD) : d 2.74-2.78 (m, 2H) , 2.84-2.94 (m, 3H) , 7.02 (d, ÍH) , 7.72 (s, ÍH) , 7.89 (d, ÍH) . MS (+) 213 (M+l) .
Ejemplo 7 Ácido 3- ( 6-amino-piridin-3-il ) -2-mercaptometil-2-metil-propiónico (a) Éster etílico del éster ter-butílico del ácido 2- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil ) -2-metil-malónico Una solución de etil-metilmalonato de ter-butilo (457 mg, 2.26 mmol) en DMF (4 mL) se adicionó gota a gota a una suspensión de NaH (90 mg, 2.26 mmol, 60% en aceite), en DMF (4 mL) . La mezcla de reacción se agitó durante 20 minutos. Se adicionó una solución del éster ter-butílico del ácido (5-bromometil-piridin-2-il ) -carbámico (500 mg, 1.74 mmol) en DMF (2.5 mL) y la reacción se agitó durante 70 minutos. Se adicionó EtOAc y la mezcla se lavó con agua y salmuera, se secó y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía (Heptano/EtOAc, 3:1—1:3) dio el éster etílico del éster ter-butílico del ácido 2-(6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil ) -2-metil-malónico (437 mg, 61% de rendimiento) . (b) Éster mono-ter-butílico del ácido 2-(6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -2-meti1-malónico Se adicionó NaOH 1M (2 mL) a un solución del éster etílico del éster ter-butílico del ácido 2-(6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -2-meti1-malónico (0.42 g, 1.03 mmol) en THF/EtOH (4 mL, 1:1). La mezcla de reacción se agitó a 50°C durante 16 horas. Se adicionó CH2C12 y la mezcla se lavó con HCl 0.5 M y salmuera. La concentración bajo presión reducida dio el éster mono-ter-butílico del ácido 2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -2-metil-malónico (348 mg, 89%). (c) Ester ter-butílico del ácido 3- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-hidroximetil-2-metil-propiónico Se adicionó gota a gota cloroformiato de metilo (75 µL, 0.92 mmol) a una solución del éster mono-ter-butílico del ácido 2- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -2-metil-malónico (348 mg, 0.915 mmol) y Et3N (123 µL, 0.92 mmol) en THF (6 mL) . La mezcla de reacción se agitó durante 20 minutos, se filtró y se adicionó gota a gota a una suspensión de NaBH (39 mg, 1.04 mmol) en THF (6 mL) a 0°C. La reacción se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente. Se adicionó HCl 0.2 M seguido por EtOAc. La fase orgánica se lavó con salmuera y se secó. La concentración bajo presión reducida seguida por cromatografía ( tolueno/EtOAc, 3:1—1:3) dio el éster terbutílico del ácido 3- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-hidroximetil-2-metil-propiónico (190 mg, 57%). (d) Éster ter-butílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-metil-propiónico Se adicionó gota a gota azodicarboxilato de dietilo (160 µL, 1.01 mmol) a una solución del éster terbutílico del ácido 3- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-hidroximetil-2-metil-propiónico (180 mg, 0.49 mmol) y trifenilfosfina (266 mg, 1.01 mmol) en THF (6 mL) y la Ll . reacción se agitó durante 5 minutos. Se adicionó ácido tiolacético (96 µL, 1.34 mmol) y la reacción se agitó durante 16 horas. La concentración bajo presión reducida seguida por cromatografía ( tolueno/EtOAc, 10:1—1:1) dio el éster ter-butílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il ) -2-metil-propiónico (137 mg, 65%) . (e) Ácido 3- (6-amino-piridin-3-il) -2-mercaptometil-2-metil-propiónico Se disolvió el éster ter-butílico del ácido 2-acetilsulfanilmeti1-3- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-metil-propiónico (4 mg, 9.4 µmol) en HCl concentrado bajo argón. La solución se calentó a reflujo durante 1 hora. La concentración bajo presión reducida produjo el compuesto del título como la sal de clorhidrato (2.5 mg, 100%) .
RMN A (500 MHz, CD30D) : d 1.20 (s, 3H) , 2.62 (d, ÍH) , 2.76-2.83 (m, 2H) , 2.95 (d, ÍH) , 6.94 (d, ÍH) , 7.64 (d, 1H) , 7.80 (dd, ÍH) . MS (+) 227 (M+l) .
Ejemplo 8 Ácido 2- ( 6-amino-pirid?n-3-ilmetil) -2-mercaptometil-butírico (a) Éster ter-butílico del ácido [5- ( 5-etil-2 , 2-dimetil-4 , 6-dioxo- [1.3] dioxan-5-ilmetil) -piridin-2-il] -carbámico Se adicionó éster ter-butílico del ácido (5-bromometil-piridin-2-il) -carbámico (1.0 g, 3.48 mmol) a una solución de 2 , 2-dimetil-5-etil-l, 3-dioxano-4 , 6-diona (600 mg, 3.48 mmol) y trietilamina (0.51 mL, 3.66 mmol) en sulfóxido de dimetilo (40 mL) bajo nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó durante la noche y se adicionó agua (100 mL) . La filtración del precipitado dio el éster terbutílico del ácido [5- (5-etil-2 , 2-dimetil-4 , 6-dioxo- [1 , 3 ] dioxan-5-ilmetil) -piridin-2-il] -carbámico (1.15 g, 87%) . (b) Éster monoetílico del ácido 2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil-2-etil-malónico Una solución de metal de sodio (140 mg, 6.08 mmol) en etanol (20 mL) se adicionó a una solución del éster ter-butílico del ácido [5- (5-etil-2 , 2-dimetil-4, 6-dioxo- [1,3] dioxan-5-ilmetil) -piridin-2-il] -carbámico (1.15 g, 3.04 mmol) en etanol (10 mL) . La reacción se agitó durante 90 minutos y luego se adicionó a cloruro de metileno. La mezcla se lavó con HCl 0.5 M, se secó y se concentró bajo presión reducida para dar el éster monoetílico del ácido 2- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -2-etil-malónico (1.05 g, 95%). (c) Éster etílico del ácido 2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil ) -2-hidroximetil-butírico Se adicionó gota a gota cloroformiato de metilo (150 µL, 1.95 mmol) a una solución del éster monoetílico del ácido 2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil ) -2-etil-malónico (700 mg, 1.91 mmol) y Et3N (275 µL, 1.97 mmol) en THF (15 mL) a -20°C bajo nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó durante 50 minutos, se filtró y se adicionó gota a gota una suspensión de NaBH4 (80 mg, 2.1 mmol) en THF (15 mL) a -20°C. La reacción se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente. Se adicionó HCl de 0.2 M seguido por cloruro de metileno. La fase orgánica se lavó con salmuera y se secó. La concentración bajo presión reducida seguida por cromatografía ( tolueno/EtOAc , 3:1—1:3) dio el éster etílico del ácido 2-(6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3 -ilmetil) -2-hidroximetil-butírico (300 mg, 45%) . ^ j 4. *.*-£ (d) Éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-2- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil ) -butírico Se adicionó gota a gota azodicarboxilato de diisopropilo (296 µL, 1.53 mmol) a una solución de trifenilfosfina (402 mg, 1.53 mmol) en THF (4 mL) a 0°C bajo argón y la reacción se agitó durante 30 minutos. Se adicionó gota a gota una solución de ácido tiolacético (109 µL, 1.53 mmol) y éster etílico del ácido -2-(6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil ) -2-hidroximetil-butírico (0.27 g, 0.77 mmol) en THF (2 mL) durante 10 minutos. La reacción se agitó durante 60 minutos a 0°C y luego durante 16 horas a temperatura ambiente. La concentración bajo presión reducida seguida por cromatografía (heptano/EtOAc, 10:1—1:1) dio el éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -butírico (193 mg, 61%) . (e) Ácido 2- ( 6-amino-piridin-3-ilmetil) -2-mercaptometil-butírico Se disolvió el éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmeti1-2- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -butírico (12.3 mg, 30 µmol) en HCl concentrado (2 mL) bajo argón. La solución se calentó a reflujo durante 24 horas. La concentración bajo presión reducida dio el compuesto del título como la sal de clorhidrato (8.3 mg, 100%) .
RMN A (500 MHz, CD3OD) : d 0.91 (t, 3H) , 1.71 (m, 2H) , 2.68 (m, 2H) , 2.92 (m, 2H) , 6.96 (d, ÍH) , 7.65 (bs, 1H) , 7.82 (dd, ÍH) . MS(-) 239 (M-l) Ejemplo 9 Ácido 3- (6-amino-5-metil-piridin-3-il) -2-mercaptometil-2-meti1-propiónico (a) 2- [N, N-bis (ter-Butoxicarbonil) amino] -3-Meti1-5- (2,2,5-trimetil-4 , 6-dioxo- [1,3] dioxan-5-ilmetil ) -piridina Se adicionó 2- [N, N-bis (ter-Butoxicarbonil) amino] - 5-bromometil-3-metil-piridina (1.6 g, 4.0 mmol) a una solución de 2 , 2 , 5-trimetil-l, 3-dioxano-4 , 6-diona (630 mg, 4.0 mmol) y trietilamina (0.58 mL, 4.2 mmol) en sulfóxido de dimetilo (40 mL) . La mezcla de reacción se agitó durante la noche y se adicionó agua (100 mL) . La mezcla se extrajo con EtOAc, las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera y se secaron. La concentración bajo presión reducida dio la 2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil ) amino] -3-metil-5- (2,2, 5-trimetil-4 , 6-dioxo- [1,3] ioxan-5-ilmetil) -piridina cruda (2.06 g) . ^^^-^ ^^^^^^z^^^^g¿2¿ (b) Ester monoetílico del ácido 2- ( 6- [N,N-b?s (ter-butoxicarbonil) amino] -5-metil-piridin-3-?lmet?l ) -2 -meti1-malónico Una solución de metal de sodio (184 mg, 8.0 mmol) en etanol (20 mL) se adicionó a una solución de 2-[N,N-bis ( ter-butoxicarboníl) amino] -3 -meti1-5- (2,2, 5-trimetil-4, 6-dioxo- [1, 3] dioxan-5-ilmetil) -piridina cruda (2.06 g, aproximadamente 4.0 mmol) en etanol (20 mL) bajo argón. La reacción se agitó durante 60 minutos y luego se adicionó cloruro de metileno. La mezcla se lavó con HCl 0.5 M y salmuera, se secó y se concentró bajo presión reducida para dar el éster monoetílico del ácido 2- ( 6- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -5 -meti1-piridin-3 -ilmetil) -2 -meti1-malónico crudo (1.9 g) . (c) Éster etílico del ácido 3- (6- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil ) amino] -5-metil-piridin-3-il) -2-hidroximetil-2 -metil-propiónico Se adicionó gota a gota cloroformiato de metilo (338 µL, 4.4 mmol) a una solución del éster monoetílico del ácido 2- ( 6- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -5-meti1-pirídín-3-ilmetil) -2-metil-malónico crudo (1.9 g) y Et3N (641 µL, 4.6 mmol) en THF (30 mL) a -20°C. La mezcla de reacción se agitó durante 50 minutos, se filtró y se adicionó gota a gota a una suspensión de NaBH4 (182 mg, 4.8 mmol) en THF (30 mL) a -20°C. La reacción se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente, se adicionó HCl 0.5 M seguido por cloruro de metileno. La fase orgánica se lavó con salmuera y se secó. La concentración bajo presión reducida seguida por cromatografía ( tolueno/EtOAc, 10:1—1:3) dio el éster etílico del ácido 3- ( 6- [N, N-bis (ter- butoxicarbonil) amino] -5-metil-piridin-3-il) -2-hidroximetil- 2-metil-propiónico (885 mg, 49%). 10 (d) Éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- ( 6- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -5-metil-piridin-3-il) -2- metil-propiónico Se adicionó gota a gota azodicarboxilato de 15 diisopropilo (755 µL, 3.91 mmol) a una solución de trifenilfosfina (1.026 g, 3.91 mmol) en THF (10 mL) a 0°C y la reacción se agitó durante 30 minutos. Se adicionó gota a gota una solución de ácido tiolacético (279 µL, 3.91 mmol) y éster etílico del ácido 3- ( 6- [N, N-bis ( ter- 20 butoxicarbonil) amino] -5-metil-piridin-3-il ) -2 -hidroximetil- 2-metil-propiónico (885 mg, 1.96 mmol) en THF (5 mL) durante 10 minutos. La reacción se agitó durante 60 minutos a 0°C y luego durante 16 horas a temperatura ambiente. La concentración bajo presión reducida seguida por 25 cromatografía (heptano/EtOAc, 10:1—1:3) dio el éster ....aaiM3acn-^a?MBáÜLatl-á.. - *- ? - .tt S ?*. . , Au.. etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- ( 6- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -5-metil-piridin-3-il) -2-metil-propiónico crudo (1.46 g) . (e) Éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- ( 6-amino] -5-metil-piridin-3-il) -2-metil-propiónico Se disolvió el éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -5-metil-piridin-3-il) -2-metil-propiónico crudo (1.46 g) en TFA (5 mL) y se agitó durante 60 minutos. La concentración bajo presión reducida seguido por cromatografía ( tolueno/EtOAc, 1:1—1:10—0:1) dio el éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- ( 6-amino] -5-metil-piridin-3-il) -2-metil-propiónico ligeramente impuro (969 mg, 84%) . (f) Ácido 3- ( 6-amino-5-metil-piridin-3-il) -2-mercaptometil-2-metil-propiónico Se disolvió el éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6-amino-5-metil-piridin-3-il ) -2-metil-propiónico (17 mg, 40 µmol) en HCl concentrado (2 mL) bajo argón. La solución se calentó a reflujo durante 150 minutos. La concentración bajo presión reducida dio el compuesto del título como la sal de clorhidrato (10.7 mg, 96%) .
RMN A (500 MHz, CD3OD) : d 1.20 (s, 3H) , 2.23 (s, 3H) , 2.61 (d, ÍH) , 2.79 (2d, 2H) , 2.94 (d, ÍH) , 7.55 (m, ÍH) , 7.69 (m, ÍH) . MS(+) 241 (M+l) .
Ejemplo 10 Ácido 3-mercapto-2- [ (?iperidina-4-carbonil) -amino] -propiónico Se adiciono CH2CI2 (70 mL) a resina de cloruro de 4-metoxitritilo (7 g, L=0.91 mmol/g, 6.37 mmol) bajo argón y la resina se dejó hinchar durante 10 minutos y se adicionó la sal de HCl del éster etílico del ácido 2-amino-3-mercapto-propióníco (5.9 g, 32 mmol). Luego se adicionó TFA (70 mL) en pequeñas porciones durante 10 minutos. La suspensión espesa se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y se concentró bajo presión reducida. Cuando estuvo casi seco, se adicionó tolueno (150 mL) y la mezcla se concentró nuevamente bajo presión reducida. Este procedimiento se repite dos veces. La nueva resina amarilla se lavó con DMF (3x60 mL) , CH2C12 (2x60 mL) , TEA:CH2C12 (1:1, 2x60 mL) , CH2C12 (2x60 mL) , MeOH (2x60 mL) y se secó bajo vacío durante la noche. Para calcular la carga del éster etílico del ácido 2-amino-3-mercapto-propiónico en la resina, se trataron 50 mg del producto con TFA al 10% en CH2C12 durante 1 minuto y este procedimiento se repitió 4 veces. La mezcla se concentró bajo presión reducida para dar el éster etílico del ácido 2-amino-3-mercapto-propiónico (9.8 mg) , indicando una carga de aproximadamente 0.6 mmol/g. Una solución de éster mono-ter-butílico del ácido piperidina-1, 4-dicarboxílico (28 mg, 0.12 mmol) en DMF (1 mL) se adicionó a la resina (100 mg, L=0.6 mmol/g, 0.06 mmol) en una jeringa de plástico, seguido por PyBOP (62 mg, 0.12 mmol) en DMF (0.5 mL) y DIPEA (41 µL, 0.24 mmol). La reacción se dejó a temperatura ambiente durante 2 horas con agitación ocasional y el procedimiento se repitió una vez más. La resina luego se lavó con DMF (2x2 mL) , CH2C12 (2x2 mL) , MeOH (2x2 mL) , CH2C12 (2x2 mL) y THF (2x2 mL) . Se adicionó THF (800 µL) a la jeringa y la resina se dejó hinchar durante 10 minutos. Luego se adicionaron agua (250 µL) y NaOH 10 M (50 µL) . La reacción se dejó a temperatura ambiente durante 16 horas con agitación ocasional. La resina luego se lavó con THF : agua (1:1, 2x2 mL) , THF (2x2 mL) , CH2C12 (2x2 mL) , MeOH (2x2 mL) y CH2C12 (2x2 mL) . El TFA al 10% en CH2C12 (1 mL) se adicionó a la jeringa y después de 5 minutos, la solución se recolectó en un frasco tarado. Este procedimiento se repitió una vez más y las fases orgánicas combinadas se concentraron bajo presión reducida para producir el compuesto del título como una sal de TFA (15.3 mg, 74%).
.. A¡? . i - r **-**«-" RMN A (500 MHz, CD3OD) : d 1.85-2.10 (m, 4H) , 2.65-2.72 (m, ÍH) , 2.85-2.92 (m, ÍH) , 2.95-3.08 (m, 3H) , 3.40-3.47 (m, 2H) , 4.55-4.60 (m, 1H) .
Ejemplo 11 Ácido 2- [ (azetidina-2-carbonil ) -amino] -3-mercapto-propiónico El compuesto del título se preparó a partir del éster 1-ter-butílico del ácido azetidina-1 , 2-dicarboxílico por el método descrito en el Ejemplo 14. Rendimiento: 13.8 mg (72%) .
RMN A (500 MHz, CD3OD) : d 2.54-2.63 (m, ÍH) , 2.82-3.05 (m, 3H) , 3.93-4.15 (m, 2H) , 4.66-4.71 ( , ÍH) , 5.05-5.10 (m, ÍH) .
Ejemplo 12 Ácido 3-mercapto-2- [ (piperidina-3-carbonil) -amino] -propiónico El compuesto del título se preparó a partir del éster 1-ter-butílico del ácido piperidina 1 , 3-dicarboxílico por el método descrito en el Ejemplo 14. Rendimiento: 15.1 mg (73 %) .
RMN A (500 MHz, CD3OD) : d 1.73-2.10 (m, 4H) , 2.84-2.92 ( , 2H) , 2.95-3.14 (m, 2H) , 3.15-3.29 (m, 3H) , 4.56-4.62 (m, ÍH) .
Ejemplo 13 Ácido 2- [ (Azetidina-3-carbonil) -amino-3-mercapto-propiónico El compuesto del título se preparó a partir del éster mono-ter-butílico del ácido azetidina-1 , 3-dicarboxílico por el método descrito en el Ejemplo 14. Rendimiento 13.5 mg, (71%).
RMN A (500 MHz, CD30D) : d 2.86-3.02 (m, 2H) , 3.72-3.80 (m, ÍH) , 4.20-4.24 (d, 4H) , 4.62-4.67 (m, ÍH) .
Ejemplo 14 Ácido 3- ( 6-amino-5-metil-piridin-3-il) -2-mercaptometil-propiónico (a) 5-Bromo-2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil ) amino] -3-metil-pipdina La 2-Amino-5-bromo-3-metilpiridina (15.0 g, 80.2 mmol) en ter-butanol se trató con dicarbonato de di-ter-butilo (43.6 g, 200 mmol) y DMAP (0.60 g, 4.91 mmol). La mezcla de reacción se dejó a temperatura ambiente durante la noche y luego se concentró bajo presión reducida. Se adicionó hexano y el producto se precipitó como un sólido. La filtración dio la 5-bromo-2- [N, N-bis (ter- butoxicarbonil ) amíno] -3-metil-piridina (22.0 g, 71%). (b) 2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -5- ( ter-butil- dimetil-silaniloximetil) -3-metilpiridina Una solución de 5-bromo-2- [N, N-bis (ter- butoxicarbonil) amino] -3-metil-piridina (26.0 g, 67.1 mmol), ter-butil-dimetil-tributilestannilmetoxi-silano (47.6 g, 109 mmol) y dicloruro de bis (trifenilfosfina) paladio (II) (0.90 g, 1.42 mmol) en 1, 2-dicloroetano (80 mL) se agitó a 90°C durante dos días. La mezcla se enfrió a 0°C y se adicionó éter dietílico (200 mL) seguido por cloruro de potasio acuoso saturado (40 mL) . La mezcla se agitó vigorosamente durante 30 minutos y se filtró. La fase orgánica se lavó con agua, se secó y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía instantánea (hexano/EtOAc, 100:0-95:5) dio la 2- [N, N-bis (ter- butoxicarbonil) amino] -5- (ter-buti1-dimeti1-silaniloximetil- 3-metilpiridina (18.0 g, 59%). (c) 2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -5-hidroximetil-3- metilpiridina Se adicionó cloruro de tetrabutilamonio (25.1 g, 79.6 mmol) a una solución de 2- [N, -bis ( ter- --jh-a- . I J butoxicarbonil ) amino] -5- (ter-butil-dimetil- silaniloximetil) -3-metilpiridina (18.0 g, 39.8 mmol) en THF (150 mL) . La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La concentración bajo presión reducida seguida por cromatografía instantánea (hexano/EtOAc, 50:50) dio la 2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -5-hidroximetil-3-metilpiridina (8.0 g, 59%) . (d) 5-bromometil-2- [N, -bis (ter-butoxicarbonil) amino] -3-metilpiridina Se adicionaron trifenilfosfina (7.43 g, 28.3 mmol) y CBr4 a una solución de 2- [N, N-bis ( ter-butoxicarbonil ) amino] -5-hídroximetil-3-metilpiridina (8.00 g, 23.6 mmol) en diclorometano (220 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó durante 3 horas y luego se concentró bajo presión reducida. La cromatografía instantánea (hexano/EtOAc, 80:20) dio la 5-bromometil-2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -3-metilpiridina (8.0 g, 77%). [e) Éster dietílico del ácido 2- (6- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -5-metil-piridin-3-ilmetil) -malónico A una suspensión de NaH (0.24 g, 6.0 mmol, 60%) en DMF (5 L) se adicionó malonato de dietilo (0.91 mL, 6.0 mmol) y la mezcla se agita durante 15 minutos. Se adicionó Jti .AA, una solución de 2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil ) amino] -5- bromometil-3-metil-piridina (2.0 g, 5.0 mmol) en DMF (5 mL) y la solución resultante se agitó durante 120 minutos a 60°C. Se adicionó acetato de etilo y la mezcla se lavó con 5 agua y salmuera y se secó. Después de la evaporación del solvente, el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (CH3OH/CH2Cl2, 1:100-1:20) para dar el éster dietílico del ácido 2- (6- [N, N-bis ( ter- butoxicarbonil ) amino] -5-metil-piridin-3-ilmetil ) -malónico 10 (1.2 g, 50%) . (f ) Éster monoetílico del ácido 2- ( 6- [N, N-bis (ter- butoxicarbonil ) amino] -5-metil-piridin-3-ilmetil ) -malónico Se adicionó una solución de KOH (154 mg, 2.75 15 mmol) en etanol (2 mL) a una solución del éster dietílico del ácido 2- (6- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -5-metil- piridin-3-ilmetil) -malónico (1.2 g, 2.50 mmol) en etanol (10 mL) y cloruro de metileno (4 mL) a 0°C. La mezcla se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente. La mezcla 20 se concentró bajo presión reducida y el residuo se disolvió en agua. Se adicionó acetato de etilo y la capa orgánica se lavó con HCl 0.5 M, agua, salmuera y se secó. Después de la filtración y concentración bajo presión reducida se obtuvo el éster monoetílico del ácido 2- (6- [N,N-bis (ter-butoxi- 25 carbonil)amino] -5-metil-piridin-3-ilmetil) -malónico (1.0 g, 88%). (g) Ester etílico del ácido 2- ( 6- [N, N-bis ( ter-butoxicarbonil) amino] -5-metil-piridin-3-ilmetil ) -acrílico Se adicionó dietilamina (0.26 g, 2.67 mmol) a una mezcla del éster monoetílico del ácido 2- ( 6- [N, N-bis (terbutoxicarbonil) amino] -5-meti1-piridin-3 -ilmetil) -malónico (1.0 g, 2.2 mmol) y solución acuosa al 37% de formaldehído (0.24 g, 3.00 mmol) en cloruro de metileno (2 mL) a 0°C. La mezcla se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente y se adicionó acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y NaHC03 al 5% y se secó. La concentración bajo presión reducida seguida por cromatografía instantánea (tolueno/acetato de etilo, 3:1—1:2) dio el éster etílico del ácido 2- ( 6- [N, N-bis ( ter-butoxicarboní1) amino] -5-metil-piridin-3-ilmetil) -acrílico (0.68 g, 73%). (h) Éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6- [N, -bis ( ter-butoxicarbonil) amino] -5-metil-piridin-3-il) -propiónico Se adicionó trietilamina (0.234 mL, 1.68 mmol) a una solución del éster etílico del ácido 2- (6- [N, N-bis (ter-butoxi-carbonil) amino] -5-meti1-piridin-3 -ilmetil) -acrílico (0.68 g, 1.61 mmol) en ácido tioacético (3 mL) a 0°C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. Se adicionó acetato de etilo y la fase orgánica se lavó con aiai»». agua, NaHC03 saturado y salmuera y se secó. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (tolueno/acetato de etilo, 3:1—1:2) para dar el éster etílico del ácido 2-acet?lsulfanilmetil-3- (6- [N, N-bis ( er-butoxicarbonil ) amino] -5-metil-piridin-3-il ) -propiónico puro (489 mg, 61%) y éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) -amino] -5-metil-piridin-3-il) -propiónico impuro (0.34 g, 43%) . (i) Ácido 3- (6-amino-5-metil-piridin-3-il) -2-mercaptometil-propiónico Se disolvió el éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -5-metil-piridin-3-il) -propiónico (17 mg, 0.034 mmol) en HCl concentrado (3.0 mL) . La solución se calentó a reflujo durante 1 hora. La concentración bajo presión reducida dio el compuesto del título (8.9 mg, 100%) como la sal de clorhidrato. RMN A (500 MHz, CD3OD) : d 2.26 (s, 3H) , 2.72-2.75 (m, 2H) , 2.83-2.91 (m, 3H) , 7.60 (s, ÍH) , 7.77 (s, ÍH) . MS(+)227 (M+l) .
Ejemplo 15 Ácido 3- (6-amino-4-metil-piridin-3-il) -2-mercaptometil- propiónico 5 (a) 2-Amino-5-bromo-4-metilpiridina Se agitó la 2-amino-4-metilpiridina (110 g, 1.02 mol) en ácido bromhídrico (1 L, 48%) a 70°C y se adicionó gota a gota una solución de peróxido de hidrógeno (300 mL, 15%) durante una hora a una proporción tal que la 10 temperatura de la mezcla de reacción se mantuvo a 70-80°C. La mezcla se agitó durante 90 minutos a 70°C y se vertió en hielo triturado. El pH se ajustó a 4-5 con carbonato de sodio y el sólido precipitado (que contiene principalmente productos di-bromados) se filtró completamente y se 15 descartó. El pH se aumento subsecuentemente a 9 y el producto precipitado se recolectó por filtración. La recristalización de tolueno dio 2-Amino-5-bromo-4- metilpiridina (76.3 g, 40%). 20 (b) 2- [N, N-bis ( ter-butoxicarbonil) amino] -5-bromo-4- metilpiridina Se trató la 2-amino-5-bromo-4-metilpiridina (5.70 g, 30.5 mmol) en cloroformo con dicarbonato de di-ter- butilo (20.0 g, 91.60 mmol) y DMAP (0.60 g, 4.91 mmol). La 25 mezcla de reacción se dejó a temperatura ambiente durante ^•^jfagjj¡^a¡=;j-&te-i -* - - la noche y luego se concentró bajo presión reducida. La cromatografía instantánea (hexano/EtOAc, 95:5) dio la 2- [N, N-bis ( ter-butoxicarbonil ) amino] -5-bromo-4-metilpiridina (8.02 g, 68%) . (c) 2- [N, N-bis (ter-Butoxicarbonil) amino] -5- ( ter-butil-dimetil-silaniloximetil) -4-metilpiridina Una solución de 2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -5-bromo-4-metilpiridina (15.0 g, 38.70 mmol), ter-butil-dimetil-tributilestannilmetoxi-silano (25.4 g, 58.3 mmol), y dicloruro de bis (trifenilfosfina)paladio (II) (0.90 g, 1.42 mmol) en 1 , 2-dicloro-etano (50 mL) se agitó a 90°C durante dos días. La mezcla se enfrió a 0°C y se adicionó éter dietílico (200 mL) seguido por cloruro de potasio acuoso saturado (40 L) . La mezcla se agitó vigorosamente durante 30 minutos y se filtró. La fase orgánica se lavó con agua, se secó y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía instantánea (hexano/EtOAc, 95:5) dio la 2- [N, N-bis ( ter-butoxicarbonil ) amino] -5- (ter-butil-dimetil-silaniloximetil) -4- metilpiridina (10.0 g, 57%). (d) 2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -5-hidroximetil-4-metilpiridina Se adicionó cloruro de tetrabutilamonio (13.9 g, A LI . 44.1 mmol) a una solución de 2- [N, -bis (ter- butoxicarbonil) amino] -5- ( ter-butil-dimetil silaniloximetil) -4-metilpiridina (10.0 g, 24.3 mmol) en THF (100 mL) . La mezcla de reacción se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente. La concentración bajo presión reducida seguida por cromatografía instantánea (hexano/EtOAc, 50:50) dio la 2- [N, N-bis (ter- butoxicarbonil) amino] -5-hídroximetil-4-metilpiridina (5.0 g, 67%). 10 (e) 5 -Bromometil-2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -4- metilpiridina Se adicionaron trifenilfosfina (4.69 g, 17.9 mmol) a una solución de 2- [N, N-bis ( ter- 15 butoxicarbonil ) amino] -5-hidroximetil-4-metilpiridina (5.00 g, 22.0 mmol) en diclorometano (130 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó durante 3 horas y luego se diluyó con diclorometano. La fase orgánica se lavó con agua, se secó y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía 20 instantánea (hexano/EtOAc, 80:20) dio la 5-bromometil-2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -4-metilpirídina (5.35 g, 90%) . 25 f' .ft^fA^^? (f ) Éster etílico del ácido 2- ( 6- [N, N-bis (ter- butoxicarbonil) amino] -4-metil-piridina-3 -ilmetil ) -malónico A una suspensión de NaH (0.24 g, 6.0 mmol 60 %,) en DMF (5 mL) se adicionó malonato de dietilo (0.91 mL, 6.0 mmol) y la mezcla se agitó durante 15 minutos. Una solución de 2- [N, -bis ( ter-butoxicarbonil ) amino] -5-bromometil-4-metil-piridina (2.0 g, 5.0 mmol) en DMF (5 mL) se adicionó la solución resultante y se agitó durante 120 minutos a 60°C Se adicionó acetato de etilo y la mezcla se lavó con agua y salmuera y se secó. Después de la evaporación del solvente, el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (CH30H/CH2C12, 1:100-1:20) para dar una fracción pura, del éster dietílico del ácido 2- (6- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -4-metil-piridina-3-ilmetil) -malónico (1.15 g, 48%) y una fracción impura del éster dietílico del ácido 2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -4-metil-piridina-3-ilmetil) -malónico (1.15 g, 48%) y una fracción impura del éster dietílico del ácido 2- (6 [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -4-metil-piridin-3-ilmetil ) -malónico (1:1 g) . (g) Ester monoetílico del ácido 2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -4-metil-piridina-3-ilmetil) -malónico Se adicionó una solución de KOH (141 mg, 2.52 mmol) en etanol (2 mL) a una solución del éster dietílico [ J.,--. del ácido 2- [N, -bis (ter-butoxicarbonil) amino] -4-metil-piridina-3-ilmetil) -malónico (1.1 g, 2.29 mml) en etanol (10 mL) y cloruro de metileno (4 mL) a 0°C. La mezcla se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente. La mezcla se concentró bajo presión reducida y el residuo se disolvió en agua. Se adicionó acetato de etilo y la capa orgánica se lavo con HCl 0.5 M, agua, salmuera y se secó. Después de la filtración y concentración bajo presión reducida se obtuvo el éster monoetílico del ácido 2- ( 6- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -4-metil-piridina-3-ilmetil) -malónico (1.0 g, 97%) . (h) Ester etílico del ácido 2-(6--[N, ,N--bis (ter-but< Dxicarboni .1) amino] -4--metil--piridin-3--ilmeti .D--acrílico Se adicionó dietilamina (0.26 g, 2.67 mmol) a una mezcla del éster monoetílico del ácido 2- (6- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -4-meti1-piridin-3-ilmetil) -malónico (0.24 g, 3.00 mmol) y una solución acuosa al 37% de formaldehído (0.24 g, 3.00 mmol) en cloruro de metileno (2 mL) a 0°C. La mezcla se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente y se adicionó acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y NaHC03 al 5% y se secó. La concentración bajo presión reducida seguido por cromatografía instantánea (tolueno/acetato de etilo 3:1-1:1) dio el éster etílico del ácido 2- (6- [N, N-bis ( ter- .L. butoxicarbonil) amino] -4-metil-piridina-3 -ilmetil) -acrílico (0.81 g, 88%) . (i) Ester etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -4-metil-piridina-3-il ) -propiónico Se adicionó trietilamina (0.279 mL, 2.0 mol) a una solución del éster etílico del ácido 2- (6- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -4-metil-piridina-3-ilmetil) -acrílico (0.8 g, 1.9 mmol) en ácido tioacético (3 mL) A 0°C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. Se adicionó acetato de etilo y la fase orgánica se lavó con agua, NaHC03 saturado y salmuera y se secó. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (tolueno/acetato de etilo, 3:1—1:2) para dar el éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- ( 6- [N, N-bis ( ter-butoxicarbonil ) amino] -5-metil-piridina-3-il ) -propiónico (200 mg, 21%) y éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -4-metil-piridina-3-il) -propiónico, ligeramente impuro (0.68 g) . ( j ) Ácido 3- (6-amino-4-metil-piridin-3-il) -2-mercaptometil-propiónico Se disolvió el éster etílico del ácido 2- L i. acetilsulfanilmeti1-3- (6- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) -amino] -4-metil-piridina-3-il) -propiónico (36 mg, 0.072 mmol) en HCl concentrado (3.0 mL) . La solución se calentó a reflujo durante 1 hora. La concentración bajo presión reducida dio el compuesto del título (18.7 mg, 98%) como la sal de clorhidrato.
RMN A (500 MHz, CD30D) : d 2.42 (s, 3H) , 2.72-2.95 (m, 5H) , 6.81 (s, ÍH) , 7.58 (s, ÍH) , MS(+) 227 (M+l).
Ejemplo 16 Ácido 2-mercaptometil-3-piperidin-4-il-butírico (a) Ester ter-butílico del ácido 4-formil-piperidina-1-carboxílico Se adicionó periodinano (26.9 g, 63.5 mmol) a una solución de l-ter-butoxicarbonil-piperidina-4-metanol (10.5 g, 48.8 mmol) en cloruro de metileno (200 L) y la mezcla se agitó durante 90 minutos. Se adicionó éter dietílico y se removieron los precipitados por extracción con Na2S2?3 al 10%/NaHCO3 saturado (1:1, 300 mL) . La capa orgánica se lavó con NaOH 0.5 M y salmuera, se secó y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía instantánea (hexano/EtOAc, 8:2) dio el éster ter-butílico del ácido 4-formil-piperidina-1-carboxílico (8.5 g, 81%). (b) Éster dietílico del ácido 2- (1-ter-butoxicarbonil-piperidin-4-ilmetileno) -malónico A una solución del malonato de dietilo (710 µL, 4.7 mmol) y el éster ter-butílico del ácido 4-formil-piperidina-1-carboxílico (1.0 g, 4.7 mol) en cloruro de metileno (5 L) se adicionó piperidina (46 µL, 0.47 mmol) y ácido acético (27 µL, 0.47 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 72 horas a temperatura ambiente y luego durante 16 horas a 45°C. Se adicionó EtOAc y la mezcla se lavó con agua y salmuera, se secó y se concentró bajo presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (heptano/EtOAc, 3:1—1:3) para dar el éster dietílico del ácido 2- (1-ter-butoxicarbonil-piperidin-4-ilmetileno) -malónico (0.69 g, 40%). (c) Éster dietílico del ácido 2- [1- (1-ter-butoxicarbonil-piperidin-4-il) -etil] -malónico Se adicionó gota a gota MeLi (5.34 mL, 8.54 mmol, 1.6 M en éter dietílico) a una suspensión espesa de Cul (0.74 g, 3.88 mmol) en THF (5 mL) a -78°C bajo argón y la mezcla se filtró durante 30 minutos. Se adicionó gota a gota una solución del éster dietílico del ácido 2-(l-ter-butoxicarbonil-piperidin-4-ilmetileno) -malónico (0.69 g, 1.94 mmol) en THF (5 mL) y la mezcla de reacción se agitó Liz durante 120 minutos a -78°C y luego se dejó calentar a temperatura ambiente durante 60 minutos. Se adicionó NHOH acuoso, concentrado y la mezcla luego se extrajo con EtOAc, se lavó con NHOH acuoso, concentrado y salmuera, se secó y se concentró bajo presión reducida. El producto se purificó por cromatografía instantánea (EtOAc, 3:1-1:6 para dar el éster dietílico del ácido 2- [1- (1-ter-butoxicarbonil-piperidin-4-il) -etil] -malónico (0.39 g, 54%). (d) Éster monoetílico del ácido 2- [1- (1-ter-butoxicarbonil-piperidin-4-il) -etil] -malónico Se adicionó gota a gota una solución de KOH (84 mg, 1.16 mmol) en EtOH (2 mL) a una solución del éster dietílico del ácido 2- [1- (l-ter-butoxicarbonil-piperidin-4-il) -etil] -malónico (0.39 g, 1.01 mmol) en cloruro de metileno (4 mL) y EtOH (10 mL) a 0°C. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se adicionó EtOAc y la mezcla se lavó con HCl 0.5 M y salmuera, se secó y se concentró bajo presión reducida para dar 416 mg del éster monoetílico del ácido 2-[l-(l-ter-butoxicarbonil-piperidin-4-il) -etil] -malónico crudo. (e) Éster ter-butílico del ácido 4- (2-etoxicarbonil-l-metil-alil) -piperidina-1-carboxílico Se adicionó formaldehído (132 mg, 1.65 mmol, 37% en agua) a una solución del éster monoetílico del ácido 2- [1- (l-ter-butoxicarbonil-piperidin-4-il) -etil] -malónico crudo (416 mg) en cloruro de metileno (2 mL) a 0°C. Se adicionó gota a gota dietilamina (153 µL, 1.47 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche.
Se adicionó EtOAc y la mezcla se lavó con agua y NaHC03 saturado, se secó y se concentró bajo presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (tolueno/EtOAc, 3:1) para dar el éster ter-butílico del ácido 4- (2-etoxicarbonil-l-metil-alil) -piperidina-1-carboxílico (0.18 g, 49% sobre dos pasos). (f ) Éster ter-butílico del ácido 4- (3-acetilsulfanil-2-etoxicarbonil-1-metil-propil ) -piperidina-1-carboxílico Se adicionó TEA (86 µL, 0.617 mmol) a una solución del éster ter-butílico del ácido 4- (2-etoxicarbonil-1-metil-alil) -piperidina-1-carboxílico (0.18 g, 0.59 mmol) en ácido tioacético (2 mL) a 0°C. Después de la agitación durante 6 horas, se adicionó más ácido tioacético (2 mL) y la mezcla se agitó a 45°C durante la noche. Se adicionó EtOAc y la mezcla se lavó con agua, NaHC?3 saturado y salmuera, se secó y se concentró bajo presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea ( tolueno/EtOAc, 5:1—1:1) a un éster ter-butílico del ácido 4- (3-acetilsulfanil-2- etoxicarboni1-1-metil-propil) -piperidina-1-carboxílico ligeramente impuro (0.17 g, 75%). (g) Éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3-piperidin-4-i1-butírico Se adicionó TFA (2 mL) a una solución del éster ter-butílico del ácido 4- (3-acetilsulfanil-2-etoxicarbonil-1-metil-alil) -pi?eridina-1-carboxílico (0.17 g, 0.439 mmol) en cloruro de metileno (10 mL) . La reacción se agitó durante 90 minutos y se concentró bajo presión reducida. El producto crudo se purificó usando HPLC (acetonitrilo al 10-50% en agua, TFA al 0.1% para dar el éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3-piperidin-4-il-butírico (101 mg, 54%) como la sal de TFA. (h) Ácido 2-mercaptometil-3-piperidin-4-il-butírico Se adicionó ácido clorhídrico concentrado (4 mL) a la sal de TFA del éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3-piperidin-4-il-butírico (0.101 g, 0.252 mmol) bajo argón. La reacción se calentó a reflujo durante 5 horas y luego se concentró bajo presión reducida para dar una mezcla diastereomérica del compuesto del título (73.7 mg) como la sal de clorhidrato. RMN A (500 MHz, CD3OD) para el diastereómero principal d 1.10 (d, 3H) , 1.36-1.58 (m, 2H) , 1.71-1.78 (m, 2H) , 1.93-1.99 (m, ÍH) , 2.05-2.11 ( , ÍH) , 2.60-2.66 (m, 2H) , 2.80-2.86 (m, ÍH) , 2.9-3.02 (m, 2H) , 3.38-3.45 (M, 2H) . MS (+) 218 (M+l) .
Ejemplo 17 Ácido 3- ( 6-amino-piridin-3-il) -2-mercaptometil-butírico (a) Ester ter-butílico del ácido (5-formil-piridin-2-il ) -carbámico Se disolvió el éster ter-butílico del ácido (5-hidroximetil-piridin-2-il) -carbámico (7.00 g, 31.2 mmol) en DMSO (50 mL) y el matraz de reacción se sumergió en un baño de agua a 15 °C. Se adicionó TEA (13.1 ml , 94.0 mmol), seguido por un complejo de trióxido de azufre-piridina (15.0 g, 94.0 mmol) en porciones. La mezcla de reacción se agitó durante 45 minutos adicionales y se vertió en hielo triturado. El producto se extrajo con éter dietílico y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron y se concentraron bajo presión reducida. La cristalización de hexano/CH2Cl dio el éster ter-butílico del ácido (5-formil-pirídin-2-il) -carbámico (5.40 g, 78%) como cristales blancos. . u ,., (b) Ester dietílico del ácido 2- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetileno) -malónico A una solución de malonato de dietilo (710 µL) , 4.7 mmol) y éster ter-butílico del ácido ( 5-formil-piridin-2-il) -carbámico (1.04 g, 4.7 mmol) en cloruro de metileno/DMF (1:1, 5 mL) se adicionó piridina (46 µL, 0.47 mmol) y ácido acético (27 µL, 0.47 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 72 horas a temperatura ambiente y luego durante 16 horas a 45°C. Se adicionó heptano lentamente para dar el éster dietílico del ácido 2-(6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetileno) -malónico (0.69 g, 40%) como cristales grises. (c) Éster dietílico del ácido 2- [1- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -etil] -malónico Se adicionó gota a gota MeLi (6.5 mL, 10.4 mmol, 1.6 M en éter dietílico) a una suspensión espesa de Cul (0.9 g, 4.73 mmol) en THF (28 mL) a -78°C bajo argón. La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos. Una solución del éster dietílico del ácido 2-(6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetileno) -malónico (0.84 g, 2.3 mmol) en THF (7 mL) se adicionó gota a gota y la reacción se agitó durante 180 minutos a -78°C. Se adicionó gota a gota NHOH acuoso, saturado y la mezcla se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se lavó con NHOH acuoso saturado y NaCl, se secó y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía instantánea ( tolueno/EtOAc, 3:1—1:6) dio el éster dietílico del ácido 2-[l-(6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -etil] -malónico (0.723 g, 82.4%) como un sólido blanco. (d) Éster monometílico del ácido 2- [1- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il ) -etil] -malónico Se adicionó gota a gota una solución de KOH (113.6 mg, 2.04 mmol) en EtOH (2 mL) a una solución del éster dietílico del ácido 2- [1- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -etil] -malónico (0.7 g, 1.84 mmol) en cloruro de metileno (4 mL) y EtOH (10 mL) a 0°C bajo argón y la mezcla de reacción se agitó durante la noche. Se adicionó KOH 1M (100 mL) y la mezcla se lavó con cloruro de metileno. La fase orgánica se acidificó a pH 2 usando HCl 2 M y se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se secó y se concentró bajo presión reducida para dar el éster monoetílico del ácido 2- [1- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -etil] -malónico crudo (423 mg, 65%). (e) Éster etílico del ácido 2- [1- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -etil] -acrílico Se adicionó dietilamina (0.153 mL, 1.473 mmol) a una solución del éster monoetílico del ácido 2-[l-(6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -etil] -malónico (423 mg, 1.2 mmol) y formaldehído (132 mg, 1.626 mmol, 36% en agua) en cloruro de metileno (2 mL) a 0°C bajo argón. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se adicionó EtOAc y la solución se lavó con agua, NaHCÜ3 y salmuera se secó y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía instantánea ( tolueno/EtOAc, 3:1) dio el éster etílico del ácido 2- [1- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -etil] -acrílico (158 mg, 41%). (f) Éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il ) -butírico Se adicionó TEA (0.076 mL, 0.542 mmol) a una solución del éster etílico del ácido 2-[l-(6-ter-butoxicarbonil-amino-piridin-3-il) -etil] -acrílico (158 mg, 0.493 mmol) en ácido tioacético (2 mL) a 0°C bajo argón, la mezcla se agitó a 45°C durante la noche. Se adicionó EtOAc y la solución se lavó con NaHC03 y salmuera, se secó y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía instantánea ( tolueno/EtOAc, 5:1—1:1) dio el éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -butírico ligeramente impuro (178 mg, 91%) .
„.J* . (g) Éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6-amino-piridin-3-il) -butírico Se adicionó TFA (2 mL) a una solución del éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -butírico (178 mg, 0.449 mmol) en cloruro de metileno (2 mL) . La mezcla se agitó durante 60 minutos y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía instantánea (tolueno/EtOAc, 1:6) dio el éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6-amino-piridin-3-il) -butírico (176 mg, 95%). La purificación adicional por HPLC (acetonitrilo al 10—70% en agua, TFA al 0.1%) dio el éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6-amino-piridin-3-il) -butírico (104 mg, 56%) como la sal de TFA. (h) Ácido 3- (6-amino-piridin-3-il) -2-mercaptometil-butírico Se adicionó ácido clorhídrico concentrado (4 mL) al éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmeti1-3- (6-amino-piridin-3-il) -butírico (104 mg, 0.253 mmol) bajo argón. La reacción se calentó a reflujo durante 5 horas y luego se concentró bajo presión reducida para dar una mezcla diastereomérica del compuesto del título (61 mg, 92%) como la sal de clorhidrato. RMN A (500 MHz, D20) para el diastereómero principal d 1.26 (d, 3H) , 2.49-2.53 (m, 2H) , 6.64-2.77 (m, ÍH) , 2.95- J . - 3.02 (m, ÍH) , 7.02 (d, ÍH) , 7.69 (d, ÍH) , 7.88 (m, ÍH) , MS (+) 227 (M+l) .
Ejemplo 18 Ácido 3- (6-amino-2-metil-piridin-3-il ) -2-mercaptometil-propiónico (a) Éster ter-butílico del ácido (5-bromo-6-metil-piridin-2-il) -carbámico Se trató la 5-bromo-6-metil-piridin-2-ilamina (25.0 g, 133.7 mmol) en THF/ter-butanol (1:10, 550 mL) con dicarbonato de di-ter-butilo (39.3 g, 180.0 mmol) y DMAP (2.40 g, 19.6 mmol) . La mezcla se reacción se agitó durante 4 horas a 40°C y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía instantánea (cloruro de metileno) dio el éster ter-butílico del ácido (5-bromo-6-metil-piridin-2-il) -carbámico (17.0 g, 44%). (b) Éster ter-butílico del ácido [5- ( ter-butil-dimetil-silaniloximetil ) -6-metil-piridin-2-il ) -carbámico Una solución del éster ter-butílico del ácido (5-bromo-6-metil-piridin-2-il) -carbámico (27.5 g, 95.8 mmol), ter-butil-dimetil-tributilestannilmetoxi-silano (43.5 g, 100.2 mmol) y dicloruro de bis (trifenilfosfina)paladio (II) (1.00 g, 1.40 mmol) en 1 , 2-dicloroetano (350 mL) se agitó a reflujo durante 48 horas. Se adicionó dicloruro de bis (trifenilfosfina) paladio (II) adicional (1.00 g, 1.40 mmol) cada 12 horas. La mezcla se enfrió a 0°C y se adicionó éter dietílico (300 mL) seguido por cloruro de potasio acuoso saturado (100 mL) . La mezcla se agitó vigorosamente durante 60 minutos y se filtró. La fase orgánica se lavó con agua, se secó y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía instantánea (Me0H/CH2Cl2, 1:99) dio el éster ter-butílico del ácido [5- ( ter-butil-dimetil-silaniloximetil) -6-metil-piridin-2-il] -carbámico (15 g, 47%). (c) Éster ter-butílico del ácido [5-hidroximetil-6-metil-piridin-2-il] -carbámico Se adicionó fluoruro de tetrabutilamonio (19.6 g, 62.4 mmol) a una solución del éster ter-butílico del ácido [5- ( ter-butil-dimetil-silaniloximetil) -6-metil-piridin-2-il] -carbámico (10.5 g, 31.23 mmol) en THF (100 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se adicionó agua y el producto se extrajo con cloroformo. La fase orgánica se secó y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía instantánea (MeOH/CH2Cl2 2.5:77.5) dio el éster ter-butílíco del ácido (5-hidroximetil-6-metil-piridin-2-il] -carbámico (6.0 g, 81%).
. - - LA (d) 5- (Bromometil-2- [N, N-bis-ter-butoxicarbonil ) amino] piridina Se adicionó trifenilfosfina (9.83 g, 37.5 mmol) y CBr4 (17.7 g, 53.5 mmol) a una solución del éster ter-butílico del ácido [5-hidroximetil-6-metil-piridin-2-il] -carbámico (8.50 g, 35.7 mmol) en diclorometano (30 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente y luego se diluyó con diclorometano.
La fase orgánica se lavó con agua, se secó y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía instantánea (CH2C12) dio la 5-bromometil-2- [N, N-bis-ter-butoxicarbonil) amino] -piridina (4.05 g, 38%). (e) Éster dietílico del ácido 2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-2-metil-piridin-3 -ilmetil) -malónico Se adicionó gota a gota una solución de malonato de dietilo (1.21 mL, 7.7 mmol) en DMF (2 L) a una suspensión de NaH (348 mg, 7.97 mmol, 55% en aceite mineral) en DMF (5 mL) a 0°C bajo argón. La mezcla de reacción se agitó durante 45 minutos y se adicionó gota a gota una solución del éster ter-butílico del ácido 5- (bromo-metil-6-metil-piridin-2-il) -carbámico (2.0 g, 6.64 mmol) en DMF (5 mL) . La mezcla se agitó durante la noche (0°C—20°C) . Se adicionó EtOAc y la solución se lavó con agua y salmuera, se secó y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía instantánea (heptano/EtOAc, 4:1) dio el éster dietílico del ácido 2- (6-ter-butoxi-carbonilamino-2-metil-piridin-3-ilmetil) -malónico (1.87 g, 74%) . (f ) Éster monoetílico del ácido 2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-2-metil-piridin-3 -ilmetil) -malónico Se adicionó una solución de KOH (300 mg, 5.35 mmol) en EtOH (4 mL) a una solución del éster dietílico del ácido 2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-2-metil-piridin-3-ilmetil) -malónico (1.85 g, 4.86 mmol) en EtOH/cloruro de metileno (2:1, 21 mL) a 0°C. La mezcla se agitó durante 40 horas a temperatura ambiente y se adicionó EtOAc. La mezcla se lavó con HCl 0.5 M y salmuera, se secó y se concentró bajo presión reducida para dar el éster monoetílico del ácido 2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-2-metil-piridin-3-ilmetil) -malónico (1.45 g) . (g) Ester etílico del ácido 2- (6-ter-butoxicarbonilamino-2-metil-piridin-3-ilmetil) -acrílico Se adicionó gota a gota dietilamina (359 mg, 4.90 mmol) a una solución del éster monoetílico del ácido 2- (6-ter-butoxicarbonilamino-2-metil-piridin-3-ilmetil ) -malónico (1.44 g, 4.09 mmol) y formaldehído (464 mg, 5.72 mmol, 37% en agua) en cloruro de metileno (35 L) a 0°C bajo argón. ^^g ^^^ ---.a La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se adicionó cloruro de metileno y la solución se lavó con a2C?3 y salmuera, se secó y se concentró bajo presión reducida para dar el éster etílico del ácido 2-(6-ter-butoxicarbonilamino-2-metil-piridin-3-ilmetil) -acrílico (1.03 g, 79%) . (h) Éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-2-metil-piridin-3-il ) -propiónico Se adicionó TEA (0.556 mL, 3.99 mmol) a una solución del éster etílico del ácido 2-(6-ter-butoxicarbonilamino-2-meti1-piridin-3-ilmetil) -acrílico (1.23 g, 3.84 mmol) en ácido tioacético (10 mL) a 0°C bajo argón. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 64 horas. Se adicionó EtOAc y la solución se lavó con Na2C03 y salmuera, se secó y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía instantánea ( tolueno/EtOAc, 5:1—1:1) dio el éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6-ter-butoxicarbonilamino-2-metil-piridin-3-il ) -propiónico (1.33 g, 87%). (i) 3- (6-Amino-2-metil-piridin-3-il) -2-mercaptometil-propiónico Se adicionó ácido clorhídrico concentrado (2 mL) a éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-2-metil-piridin-3-il) -propiónico (77 mg, 0.19 mmol) bajo argón. La mezcla se calentó a reflujo durante 110 minutos y luego se concentró bajo presión reducida para dar el compuesto del título (39 mg, 76%) como la sal de clorhidrato.
RMN A (500 MHz, D20): d 2.49 (s, 3H) , 2.73-2.92 (m, 5H) , 6.81 (d, ÍH) , 7.77 (d, ÍH) , MS(+) 227 (M+l) .
Ejemplo 19 Éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (2-amino-piridimidin-5-il) -propiónico (a) 2- [N, -bis ( ter-butoxicarbonil ) amino] -5-bromopirimidina Se trató la 2-amino-5-bromopirimidina (9.00 g, 51.7 mmol) en THF/ter-butanol (1:1, 100 mL) con dicarbonato de di-ter-butilo (34.0 g, 156.0 mml) y DMAP (3.00 g, 24.5 mmol). La mezcla de reacción se dejó a temperatura ambiente durante la noche y se concentró bajo presión reducida. El residuo se dividió entre diclorometano y agua y el pH se ajustó a 4 con HCl 1 M. La solución se extrajo con diclorometano, se secó y se concentró bajo presión reducida. El producto crudo fue suspendido en hexano y se filtró para producir la 2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -5-bromopirimidina (15.0 g, 77%). (b) 2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -5- (ter-butil-dimetil-silaniloximetil) -pirimidina Una solución de 2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -5-bromopirimidina (16.0 g, 45.0 mmol) , ter-butil-dimetil-tributilestannilmetoxi-silano (20.5 g, 47.1 mmol) y dicloruro de bis (trifenilfosfina) paladio (II) (1.00 g, 1.40 mml) en 1 , 2-dicloroetano (50 mL) se agitó a reflujo durante la noche. Se adicionó dicloruro de bis (trifenilfosfina) paladio (II) adicional (1.00 g, 1.40 mmol) y la solución se sometió a reflujo durante 8 horas. La mezcla se enfrió a 0°C y se adicionó éter dietílico (200 mL) seguido por cloruro de potasio acuoso saturado (50 mL) . La mezcla se agitó vigorosamente durante 60 minutos y se filtró. La fase orgánica se lavó con agua, se secó y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía instantánea (MeOH/CH2Cl2, 1:9) dio la 2-[N,N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -5- ( ter-butil-dimetil-silaniloximetil) -pirímidina (10.2 g, 55%). (c) 2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -5-hidroximetil-pirimidina Se adicionó cloruro de tetrabutilamonio (15.3 g, 48.6 mmol) a una solución de 2- [N,N-bís ( ter- X?, A~ -butoxicarbonil) amino] -5- ( ter-butil-dimetil-silaniloxi-metil) -pirimidina (10.0 g, 24.3 mmol) en THF (100 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se adicionó agua y el producto se extrajo con cloroformo. La fase orgánica se secó y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía instantánea (MeOH/CH2Cl2, 2.5:77.5) dio la 2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -5-hidroximetil-pirimidina 4.20 g, 53%). (d) 5-Bromometil-2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) -amino] -pirimidina Se adicionó trifenilfosfina (2.71 g, 10.73 mmol) y CBr (4.89 g, 14.8 mmol) a una solución de 2-N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] -5-hidroximetil-pirimidina (3.20 g, 9.83 mmol) en diclorometano (30 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora y luego se diluyó con diclorometano. La fase orgánica se lavó con agua, se secó y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía instantánea (CH2C12) dio la 5-bromometil-2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] pirimidina (2.55 g, 67%). (e) Éster etílico del ácido 2- (2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino]pirimidin-5-ilmetil) -malónico} Una solución de malonato de dietilo (0.704 mL, 4.64 mmol) en DMF (2 mL) se adicionó gota a gota a una suspensión de NaH (200 mg, 4.64 mmol, 55% en aceite mineral) en DMF (4 mL) a 0 o C bajo argón. La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos y se adicionó gota a gota una solución de 5-bromometil-2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] pirimidina (1.5 g, 3.86 mml) en DMF (4 mL) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se adicionó EtOAc y la solución se lavó con agua y salmuera, se secó y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía instantánea (heptano/EtOAc, 3:2) y el éster dietílico del ácido (2- [N, N-bis ( ter-butoxicarbonil) amino] -pirimidin-5-ilmetil) -malónico (0.87 g, 40%). (f) Éster monoetílico del ácido 2- (2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil ) amino] pirimidin-5-ilmetil) -malónico Una solución de KOH (106 mg, 1.88 mmol) en EtOH (2 mL) se adicionó a una solución del éster dietílico del ácido 2-(2-[N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino]pirimidin-5-ilmetil) -malónico (0.80 g, 1.71 mmol) en EtOH/cloruro de metileno (2:1, 12 mL) a 0°C. La mezcla se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente y se adicionó EtOAc. La mezcla se lavó con HCl 0.5 M y salmuera, se secó y se concentró bajo presión reducida para dar el éster monoetílico del ácido 2-(2-[N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] irimidin-5-ilmetil) -malónico (0.67 g, 89%).
J (g) Éster dietílico del ácido 2- (2- [N, N-bis ( ter-butoxicarbonil ) amino] pirimidin-5-ilmetil ) -acrílico Se adicionó gota a gota dietilamma (0.124 mL, 1.69 mmol) a una solución del éster monoetílico del ácido 2- (2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] pirimidin-5-ilmetil) -malónico (0.62 g, 1.41 mmol) y formaldehído (160 mg, 2.0 mmol, 37% en agua) en cloruro de metileno (15 mL) a 0°C bajo argón. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se adicionó EtOAc y la solución se lavó con agua, NaHC03 y salmuera, se secó y se concentró bajo presión reducida para dar el éster etílico del ácido 2- (2- [N, N-bis ( ter-butoxicarbonil ) amino] pirimidin-5-ilmetil ) -acrílico (0.54 g, 94%) . (h) Éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] pirimidin-5-il ) -propiónico Se adicionó TEA (0.189 mL, 1.35 mmol) a una solución del éster etílico del ácido 2- (2- [N, N-bis ( ter-butoxicarbonil ) amino]pirimidin-5-ilmetil) -acrílico (0.53 g, 1.30 mmol) en ácido tioacético (13 mL) a 0°C bajo argón. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 40 horas. Se adicionó EtOAc y la solución se lavó con Na2CÜ3 y salmuera, se secó y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía instantánea (heptano/EtOAc , 5:1—1:1) dio el éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (2- [N, N-bis ( ter-butoxicarbonil ) amino] pirimidin-5-il ) -propiónico (0.56 g, 89%) . (i) Éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (2-amino-pirimidin-5-il ) -propiónico Se adicionó TFA (1.5 mL) a una solución del éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (2- [N, N-bis (ter-butoxicarbonil) amino] pirimidin-5-il) -propiónico (225 mg, 0.46 mmol) en cloruro de metileno (1.5 mL) . La reacción se filtró durante 120 minutos y se concentró bajo presión reducida para dar el compuesto del título (172 mg, 94%) como la sal de TFA.
RMN A (500 MHz, CD3OD) : d 1.22 (t, 3H) , 2.35 (s, 3H) , 2.80-3.00 (m, 3H) , 3.00-3.22 (m, 2H) , 4.13 (q, 2H) , 8.43 (s, 2H) . MS(+) 284 (M+l) .
Ejemplo 20 Ácido 2- ( 6-amino-piridin-3-ilmetil) -3-mercapto-butírico (a) Éster etílico del ácido 3- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2- (dietoxi-fosforil) -propiónico A una suspensión de NaH (1.17 g, 60% en aceite - & ... zA - . mineral, 29.3 mmol) en DMF (70 mL) se adicionó fosfonoacetato de trietilo (6.01 g, 26.82 mmol) a 0°C. La mezcla de reacción se dejó agitar a 0°C durante 0.5 horas. A la reacción se adicionó éster ter-butílico del ácido (5-bromometil-piridin-2-il) -carbámico (7.0 g, 24.38 mmol) a 0°C y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción se enfrió rápidamente con la adición lenta de cloruro de amonio acuoso saturado (70 mL) . La mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera y se secó. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (CH2C12/EtOAc, 1:0-1:1-0:1) para dar el éster etílico del ácido 3- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2- (dietoxi-fosforil) -propiónico (5.1 g, 50%). (b) Éster etílico del ácido 2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -but-2-enoico A una suspensión de NaH (278.8 mg, 60% en aceite mineral, 6.97 mmol) en THF (25 mL) a 0°C se adicionó a una solución del éster etílico del ácido 3-(6-ter-butoxicarbsnilamino-piridin-3-il) -2- (dietoxi-fosforil) -propiónico (2.5 g, 5.81 mmol) en THF (30 L) . La mezcla de reacción se dejó agitar a 0°C durante 1 hora. A la reacción se adicionó acetaldehído (512 mg, 11.6 mmol) gota a gota a 0°C. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y luego se agitó durante 16 horas. Se adicionó ?>¡ -Ü;.. acetaldehído (2.0 g) al recipiente de reacción y la mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 16 horas adicionales. La reacción se enfrió rápidamente con la adición lenta de cloruro de amonio acuoso saturado (30 mL) . La mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera y se secó para dar el producto crudo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (EtOAc/hexano, 1:8) para dar el éster etílico del ácido 2-(6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -but-2-enoico (1.1 g, 60%). (c) Éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil ) -butírico Al ácido tiolacético (15 mL) se adicionó Et3N (1.5 g, 14.8 mmol) y éster etílico del ácido 2-(6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3 -ilmetil) -but-2-enoico (920 mg, 2.9 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a 40-45°C durante 7 días (se adicionó ácido tiolacético adicional (1.5 mL) a la mezcla de reacción cada dos días) . La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y luego se diluyó con EtOAc (50 mL) . La capa orgánica se separó, se lavó con NaHC03 saturado, salmuera y se secó. Las capas orgánicas combinadas se concentraron bajo presión reducida. El producto crudo se purificó subsecuentemente por tres columnas de cromatografía tri ..
(CHC12, EtOAc/hexano, 1:5 y acetona/hexano, 1:8) para dar el éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -butírico como una mezcla diastereomérica (780 mg, 68%) . La mezcla diastereomérica se separó usando cromatografía quiral preparativa de acuerdo al procedimiento descrito posteriormente para dar 4 isómeros, el éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -butírico/A, el éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -butírico/B, el éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -butírico/C y el éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -butírico/D. Éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil ) -butírico/D El éster etílico del ácido 3-acetilsulfan?l-2- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -butírico/D se separó de una mezcla del éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil ) -butírico/A, éster etílico del ácido 3-acetílsulfanil-2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -butírico/B, el éster etílico del ácido 3- acetilsulfanil-2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3- ilmetil) -butíríco/C y el éster etílico del ácido 3- acetilsulfanil-2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3- ilmetil) -butírico/D en una columna chiralcel OJ eluyendo con isohexano : acetonitrilo : alcohol isopropílico : dietil-amina (99; 0.5; 0.5; 0.1). El exceso enantiomérico fue >99% como se mide por HPLC usando una columna OJ chiralpak eluyendo con isohexano: etanol : dietilamina (99; 1:05). 10 Éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- (6-ter- butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -butírico/A Se separó el éster etílico del ácido 3- acetilsulfanil-2- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3- 15 ilmetil) -butírico/A a partir de una mezcla del éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- (6-ter- butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -butírico/B, y éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- ( 6-ter- butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -butírico/B y éster 20 etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- (6-ter- butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -butírico/C en una columna chiralcel OJ eluyendo con isohexano :1- propanol : dietilamina (98; 2; 0.1). El exceso enantiomérico fue >99% como se mide por HPLC usando una columna chiralpak 25 OJ eluyendo con isohexano : etanol .-dietilamina (99; 1; 0.5). Éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- (6-ter- butoxicarbonilamino-piridin-3 -ilmetil) -butírico/B Se separó el éster etílico del ácido 3- 5 acetilsulfanil-2- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3- ilmetil) -butírico/B a partir de una mezcla del éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- ( 6-ter- butoxicarbonilamino-piridin-3 -ilmetil) -butírico/B y el éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- ( 6-ter- 10 butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -butírico/C en una columna AS chiralcel eluyendo con hexano : etanol : dietilamina (99:1:0.5). El exceso enantiomérico fue >99% como se mide por HPLC usando una columna chiralpak AS eluyendo con isohexano : etanol : dietilamina (99; 1; 0.5). 15 Ester etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- (6-ter- butoxicarbonilamino-piridin-3 -ilmetil) -butírico/C Se separó el éster etílico del ácido 3- acetilsulfanil-2- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3- 20 ilmetíl) -butírico/C a partir de una mezcla del éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- ( 6-ter- butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -butírico/B y el éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- (6-ter- butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -butírico/C en una 25 columna chiralcel AS eluyendo con hexano : etanol : dietilamina (99:1:0.5). El exceso enantiomérico fue de 87% como se mide por HPLC usando una columna chiralpak AS y eluyendo con isohexano : etanol : dietilamina (99; 1; 0.5). (d) Ácido 2- (6-amino-piridin-3-ilmetil) -3-mercapto-butírico/A Una solución del éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3- ilmetil) -butírico/A (45 mg; 0.11 mmol) en HCl concentrado (2 mL) se sometió a reflujo bajo argón durante 1 hora. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida para dar 28.4 mg del compuesto del título como la sal de clorhidrato. RMN A (400 MHz, D20): d 7.89 (d, ÍH) , 7.71 (s, ÍH) , 7.03 (d, ÍH) , 3.23-3.33 (m, ÍH) , 3.1-3.2 (m, ÍH) , 2.75-2.9 (m, 2H) , 1.47 (d, 3H) . MS(+) 227 (M+l) . (e) Ácido 2- ( 6-amino-piridin-3-ilmetil) -3-mercapto-butírico/B Una solución del éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -butírico/B (55 mg; 0.14 mmol) en HCl concentrado (2 mL) se sometió a reflujo bajo argón durante 1 hora. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida para dar 39.4 mg del compuesto del título como la sal de clorhidrato.
RMN A (400 MHz, D20) : d 7.89 (d, ÍH) , 7.71 (s, ÍH) , 7.03 (d, ÍH) , 3.23-3.33 (m, ÍH) , 3.1-3.2 (m, ÍH) , 2.75-2.9 (m, 2H) , 1.47 (d, 3H) . MS(+) 227 (M+l) . (f ) Ácido 2- (6-amino-piridin-3-ilmetil) -3-mercapto-butírico/C Una solución del éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -butírico/C (9 mg; 0.02 mmol) en HCl concentrado (0.5 mL) se sometió a reflujo bajo argón durante 1 hora. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida para dar 6.4 mg del compuesto del título como la sal de clorhidrato. RMN A (400 MHz, D20): d 7.82-7.9 (m, ÍH) , 7.67 (br s, ÍH) , 7.0 (d, ÍH) , 3.16-3.28 (m, ÍH) , 2.96-3.04 (m, ÍH) , 2.76-2.86 ( , 2H) , 1.47 (d, 3H) . MS(+) 227 (M+l) . (g) Ácido 2- (6-amino-piridin-3-ilmetil ) -3-mercapto-butírico/D Una solución del éster etílico del ácido 3- Ab-*. - >- *.,*. - * .*. .-. -. -*M » ..A*AA>yA»A-AJ¡y acetilsulfanil-2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -butírico/C (9 mg; 0.02 mmol) en HCl concentrado (0.5 L) se sometió a reflujo bajo argón durante 1 hora. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida para dar 6.8 mg del compuesto del título como la sal de clorhidrato.
RMN A (400 MHz, D20): d 7.82-7.9 (m, ÍH) , 7.67 (br s, ÍH) , 7.0 (d, ÍH) , 3.16-3.28 (m, ÍH) , 2.96-3.04 (m, ÍH) , 2.76-2.86 (m, 2H) , 1.47 (d, 3H) . MS(+) 227 (M+l) .
Ejemplo 21 Ácido 6-amino-piridin-3-ilmetil) -3-mercapto-pentanoico Éster etílico del ácido 2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3 -ilmetil) -pent-2-enoico A una solución de NaH (290.5 mg, 60% en aceite mineral, 7.5 mmol) en THF (25 mL) a 0°C se adicionó una solución del éster etílico del ácido 3-(6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2- (dietoxi-fosforil) -propiónico (2.5 g, 5.81 mmol) en THF (30 mL) . La mezcla de reacción se dejó agitar a 0°C durante 1 hora. A la reacción se adicionó propionaldehído (725 mg, 12.5 mmol) gota a gota a 0°C. La mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 16 horas. Se adicionó propionaldehído (2.5 g) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas adicionales. La reacción se enfrió rápidamente con la adición lenta de NH4C1 acuoso saturado (30 mL) . La mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera y se secó. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (EtOAc/hexano, 1:8 para dar éster etílico del ácido 2- (6- ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -pent-2-enoico como una mezcla de isómeros (1-2 g. 60%) . (b) Éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil ) -pentanoico Al ácido tiolacético (15 mL) se adicionaron Et3N (1.8 g, 17 mmol) y éster etílico del ácido 2-(6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -pent-2-enoico (1.1 g, 3.3 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a 65°C durante 8 días (se adicionó ácido tioacético adicional (1.5 mL) a la mezcla de reacción cada 2 días. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y luego se diluyó con EtOAc. La capa orgánica se separó, se lavó con NaHC03 saturado, salmuera y se secó. Las capas orgánicas combinadas se concentraron bajo presión reducida. El residuo se purificó subsecuentemente por dos columnas de cromatografía (CH2C12 y EtOAc/hexano, 1:5) para dar 350 mg de una mezcla de productos deseados y material . L?.».. de inicio sin reaccionar. El producto crudo se purificó adicionalmente por HPLC (EtOH/hexano, 1:9) y luego la cromatografía en columna (acetona/hexano, 1:8) para dar el compuesto del título como una mezcla diastereomérica (180 mg, 18%) . La mezcla diastereomérica del éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -pentanoico se separó usando cromatografía quiral preparativa de acuerdo al procedimiento descrito posteriormente, para dar los cuatro isómeros, el éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil ) -pentanoico/A, éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -pentanoico/B, éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -pentanoico/C y el éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -pentanoico/D. La mezcla diastereomérica se separó en dos columnas chiralcel OJ, que se conectaron entre sí, eluyendo con hexano : alcohol isopropílico : metanol (97:1:2). El exceso enantiomérico se midió por HPLC, analítica usando dos columnas chiralcel OJ, que se conectaron entre sí, eluyendo con isohexano : alcohol isopropílico :metanol (97:1:2). Para el éster A hasta C etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3 -ilmetil) -pentanoico, el » , - exceso enantiomérico se encontró que es >99%, en tanto que se encontró que es de 97% para el éster D etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -pentanoico. (c) Ácido 6-amino-piridin-3-ilmetil) -3-mercapto-pentanoico/A Una solución del éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -pentanoico/A (50.4 mg, 0.12 mmol) en HCl concentrado (2 mL) se sometió a reflujo bajo argón durante 1.5 horas. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida para dar 33.9 mg del compuesto del título como una sal de clorhidrato.
RMN A (500 MHz, D20) : d 7.87 (dd, ÍH) , 7.67 (d, ÍH) , 7.0 (d, ÍH) , 3.02-3.16 (m, 2H) , 2.79-2.87 (m, 2H) , 1.79-1.88 (m, ÍH) , 1.53-1.64 ( , ÍH) , 1.07 (t, 3H) . MS(+) 241 (M+l) . (d) Ácido 2- (6-amino-piridin-3-ilmetil) -3-mercapto-pentanoico/B Una solución del éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3- ilmetil) -pentanoico/B (51.6 mg; 0.13 mmol) en HCl concentrado (2 mL) se sometió a reflujo bajo argón durante 1.5 horas. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida para dar 34.7 mg del compuesto del título como la sal de clorhidrato.
RMN A (500 MHz, D20) : d 7.87 (dd, ÍH) , 7.67 (d, ÍH) , 7.0 (d, ÍH) , 3.02-3.16 (m, 2H) , 2.79-2.87 (m, 2H) , 1.79-1.88 (m, 1H) , 1.53-1.64 (m, ÍH) , 1.07 (t, 3H) . MS(+) 241 (M+l) . (e) Ácido 2- (6-amino-piridin-3-ilmetil ) -3-mercapto-pentanoico/C Una solución del éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -pentanoico/C (4.3 mg, 0.01 mmol) en HCl concentrado (2 mL) se sometió a reflujo bajo argón durante 1.5 horas. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida para dar 2.9 mg del compuesto del título como la sal de clorhidrato .
RMN A (500 MHz, D20) : d 7.86 (dd, ÍH) , 7.66 (br s, ÍH) , 7.0 (d, 1H) , 2.94-3.04 (m, 2H) , 2.74-2.9 (m, 2H) , 1.88-1.97 A (m, ÍH) , 1.55-1.66 (m, ÍH) , 1.05 (t, 3H) . MS(+) 241 (M+l) . (f) Ácido 2- ( 6-amino-piridin-3 -ilmetil) -3-mercapto-pentanoico/D Una solución del éster etílico del ácido 3-acetilsulfanil-2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -pentanoico/D (19.2 mg, 0.05 mmol) en HCl concentrado (2 mL) se sometió a reflujo bajo argón durante 1.5 horas. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida para dar 12.9 mg del compuesto del título como la sal de clorhidrato .
RMN A (500 MHz, D20) : d 7.86 (dd, ÍH) , 7.66 (d, 1H) , 7.0 (d, 1H) , 2.94-3.04 (m, 2H) , 2.74-2.9 (m, 2H) , 1.88-1.97 (m, ÍH) , 1.55-1.66 (m, ÍH) , 1.05 (t, 3H) . MS(+) 241 (M+l) .
Ejemplo 22 Ácido 3- (6-amino-5-cloro-piridin-3-il) -2-mercaptometil-propiónico (a) Éster etílico del ácido 6-amino-5-cloro-nicotínico Se adicionó N-clorosuccinimida (21.7 g, 0.162 ~Li~s. mol) a una suspensión del éster etílico del ácido 6-amino- 5-cloro-nicotínico (18.0 g, 0.108 mol) en acetonitrilo (270 mL) y la mezcla se sometió a reflujo durante 2 horas. La mezcla de reacción se filtró y se concentró bajo presión 5 reducida. El residuo se disolvió en diclorometano, se lavó con agua y se secó. La cromatografía instantánea (MeOH al 2.5% en CH2C12) dio el éster etílico del ácido 6-amino-5- cloro-nicotínico puro (17.23 g, 79%). 10 (b) Éster etílico del ácido 6-bis- (ter- butoxicarbonil) amino-5-cloro-nicotínico Se adicionó DMAP (0.11 g, 0.9 mmol) y (Boc)20 (21.54 g, 99 mmol) a una solución del éster etílico del ácido 6-amino-5-cloro-nicotínico (9.0 g, 45 mmol) en 15 diclorometano (250 mL) . La mezcla de reacción se agitó durante 24 horas. Se adicionó DMAP (0.02 equivalente) y (Boc)20 (3 x 0.5 equivalente) durante el tiempo de reacción. La mezcla de reacción se lavó con agua y se secó. El producto crudo se lavó con hexano para dar el éster 20 etílico del ácido 6-bis- (ter-butoxicarbonil) -amino-5-cloro- nicotínico puro (11.87 g, 66%). (c) Éster etílico del ácido (3-cloro-5-hidroximetil- piridin-2-il) -carbámico 25 Se adicionó LiAIH4 (2.4 g, 63.2 mmol) en porciones durante un periodo de 3.5 horas a una solución del éster etílico del ácido 6-bis- (ter-butoxicarbonil) -amino-5-cloro-nicotínico (11.5 g, 28.6 mmol) en THF (70 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche, luego se adicionó cuidadosamente NHC1 (saturado) seguido por agua. La solución se filtró, se secó y se concentró bajo presión reducida para producir el éster ter-butílico del ácido (3-cloro-5-hidroximetil-piridin-2-il) -carbámico crudo (5.86 g, 79%). (d) Éster etílico del ácido (5-bromometil-3-cloro-piridin-2-il) -carbámico Se adicionó trifenilfosfina (2.61 g, 9.7 mmol) seguido por tetrabromuro de carbono (4.58 g, 13.8 mmol) a una suspensión del éster ter-butílico del ácido (3-cloro-5-hidroximetil-piridin-2-il) -carbámico (2.38 g, 9.2 mmol) en CHC12 (60 mL) a 0°C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas y se concentró bajo presión reducida. Se adicionó acetonitrilo (40 L) y la mezcla se mantuvo a -20°C durante la noche. La mezcla luego se filtró y el residuo cristalino se lavó con acetonitrilo frío. El producto filtrado se concentró bajo presión reducida y se obtuvo otra cosecha de bromuro como se describe anteriormente. Se obtuvo como cristales blancos el éster ter-butílico del ácido (5-bromometil-3-cloro-piridin-2-il) - .....* carbámico (1.86 g, 63%). (e) Éster etílico del ácido 2- (6-ter-butoxicarbonilamino-5-cloro-piridin-3-ilmetil ) -malónico Se adicionó malonato de dietilo (1.87 ml , 12.31 mmol) a una suspensión de NaH (0.54 g, 12.31 mmol, 55%) en DMF seca (15 ml) a -8°C. Esta mezcla se agitó durante 15 minutos, antes de que se adicionara gota a gota una solución del éster ter-butílico del ácido (5-bromometil-3-cloro-piridin-2-il) -carbámico (3.30 g, 1.26 mmol) en DMF seca (50 ml) a 0°C. La solución resultante se agitó durante 40 minutos a 0°C, luego se adicionó cuidadosamente NH4C1 (5 ml , saturada) . La agitación a temperatura ambiente durante la noche y la concentración bajo presión reducida dio un residuo, que se disolvió en agua/CH2Cl2. La capa acuosa se extrajo con CH2C12 y los extractos orgánicos combinados se secaron, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. La cromatografía instantánea (MeOH al 1% en CH2CI2) dio el éster dietílico del ácido 2-(6-ter-butoxicarbonilamino-5-cloro-piridin-3-ilmetil) -malónico (2.45, 60%) como un aceite claro pegajoso. (f) Éster etílico del ácido 2- (6-ter-butoxicarbonilamino-5-cloro-piridin-3-ilmetil) -malónico Una solución de KOH (0.44 g, 6.72 mmol, 85%) en etanol (5 ml) se adicionó a una solución del éster dietílico del ácido 2- (6-ter-butoxicarbonilamino-5-cloro-piridin-3-ilmetil) -malónico (2.45 g, 6.11 mmol) en etanol (25 ml) y cloruro de metileno (10 ml) a 0°C. La mezcla se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente. El solvente se evaporó in vacuo y el residuo se disolvió en agua. La capa acuosa se lavó con éter, se acidificó a pH 4 por HCl 1 M y se extrajo con cloruro de metileno y acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera y se secaron. La filtración y concentración bajo presión reducida dio el producto crudo que se purificó por cromatografía instantánea (MeOH al 10% en CH2C12) para dar el éster monoetílico del ácido 2-(6-ter-butoxicarbonilamino-5-cloro-piridin-3-ilmetil ) -malónico (1.41 g, 62%) como una espuma vidriosa amarilla-blanca. (g) Éster etílico del ácido 2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-5-cloro-piridin-3-ilmetil) -acrílico Se adicionó gota a gota dietilamina (3.67 ml , 3.67 mmol) seguida por agua (2.5 ml) y CH2C12 (2.5 ml) a una mezcla del éster monoetílico del ácido 2-(6-ter-butoxicarbonilamino-5-cloro-piridin-3-ilmetil ) -malónico (1.40 g, 3.64 mmol) y solución acuosa al 37% de formaldehído (0.29 ml, 3.75 mmol) en CH2C12 (2 ml) a 0°C. La mezcla se agitó durante 20 horas a temperatura ambiente A y luego se vertió en agua con hielo y se extrajo con cloruro de metileno. La capa orgánica se lavó con NaHC03 al 5%, se secó y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía instantánea (metanol al 1-2.5% en CH2C12) produjo el éster etílico del ácido 2-(6-ter-butoxicarbonilamino-5-cloro-piridin-3-ilmetil) -acrílico, 0.81 g (65%) . (h) Éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6-ter-butoxicarbonilamino-5-cloro-piridin-3-ilmetil) -propiónico Se adicionó ácido tioacético (4 ml) a una suspensión del éster etílico del ácido 2-(6-ter-butoxicarbonilamino-5-cloro-piridin-3-ilmetil ) -acrílico (0.732 g, 2.16 mmol) y trietilamina (0.31 ml , 2.23 mmol) a 0°C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente bajo argón durante la noche, se vertió en agua con hielo y se extrajo con CHC12. La fase orgánica se lavó con NaHC03 saturado hasta que se cesó la emisión de gas y luego se secó. El producto crudo se purificó dos veces con cromatografía instantánea (CH2C12, MeOH al 1-2.5% en CH2C12 y hexano/EtOAc, 5:1—1:1) para dar el éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmeti1-3- (6-ter-butoxicarbonilamino-5-cloro-piridin-3-ilmetil) -propiónico (0.79 g, 87%). (i) Ácido 3- (6-amino-cloro-piridin-3-il) -2-mercaptometil-propiónico Una solución del éster etílico del ácido 2-acetilsulf nilmetil-3- (6-ter-butoxicarbonilamino-5-cloro-piridin-3-ilmetil) -propiónico (55 mg, 0.132 mmol) en HCl concentrado (4 mL) se sometió a reflujo durante 90 minutos. La reacción se enfrió y se concentró bajo presión reducida para dar el compuesto del título como la sal de HCl (36 mg, 96.4 %) .
RMN A (400 MHz, D20) : d 2.70-2.97 (m, 5H) , 7.73 (s, ÍH) , 8.09 (s, ÍH) . MS(+) 248 (M+l) Ejemplo 23 Ácido 3- (6-amino-5-hidroximetil-piridin-3-il) -2-mercaptometil-propiónico (a) Éster etílico del ácido 6-bis ( ter-butoxicarbonil) amino-5-vinil-nicotínico Una mezcla del éster etílico del ácido 5-bromo-6-bis (ter-butoxicarbonil ) amino-nicotínico (4.50 g, 10.1 mmol) viniltributilestaño (3.52 g, 11.1 mmol) y trifenilfosfina de tetrakis-paladio (0.50 g, 0.40 mmol) en THF (15 ml) se agitó a reflujo durante 24 horas. Se adicionó trifenilfosfina de tetrakis-paladio (0.50 g) y después de 24 horas a reflujo, la mezcla de reacción se enfrió y se diluyó con diclorometano (100 ml). Se adicionó KF acuoso, saturado (25 ml) y la solución se agitó durante 1 hora. Se adicionó agua y el producto se extrajo con diclorometano, la fase orgánica se secó y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía instantánea (MeOH al 1% en diclorometano) dio el éster etílico del ácido 6-bis (ter- butoxicarbonil) -amino-5-vinil-nicotínico, 3.20 g, (81%). 10 (b) Éster ter-butílico del ácido (5-hidroximetil-3-vinil- p?ridin-2-il) carbámico Se adicionó gota a gota DIBAL (25 ml , 1 M en hexano) a una solución del éster etílico del ácido 6-bis (ter- 15 butoxicarbonil) -amino-5-vinil-nicotínico (2.00 g, 5.1 mmol) en THF (40 ml) a 0°C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se adicionó NH4C1 (saturado) cuidadosamente seguido por agua y la mezcla se concentró bajo presión reducida. El residuo se suspendió en MeOH al 20 5% en diclorometano y se filtró a través de gel de sílice. El filtrado se secó y se concentró bajo presión reducida para dar el éster ter-butílico del ácido (5-hidroximetil-3- vinil-piridin-2-il) carbámico (1.00 g, 78%). 25 ^^te-t^ife'¿aiA^8fat^<-^A*^>^, -< •* ' -**- ^> (c) Éster ter-butílico del ácido (5-hidroximetil-3-vinil-piridin-2-il) carbámico A una suspensión agitada del éster ter-butílico del ácido (5-hidroximetil-3-vinil-piridin-2-il) carbámico (10.0 g, 40.0 mmol) en CH2C12 (150 ml) y THF (60 ml) se adicionó trifenilfosfina (11.5 g, 44.0 mmol) seguido por tetrabromuro de carbono (19.9 g, 60.0 mmol) a 0°C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y luego se concentró bajo presión reducida. Se adicionó acetonitrilo (100 ml) y la mezcla se mantuvo a -20°C durante la noche. La mezcla luego se filtró y el residuo cristalino se lavó con acetonitrilo frío. El producto se purificó por cromatografía instantánea (MeOH al 1% en diclorometano) para dar el éster ter-butílíco del ácido (5-bromometil-3-cloro-piridin-2-il) carbámico (4.5 g, 36%). (d) Éster dietílico del ácido 2- (6-ter-butoxicarbonilamino-5-vinil-piridin-3-ilmetil) -malónico Se adicionó malonato de dietilo (2.30 g, 14.3 mmol) a una suspensión de NaH (0.61 g, 14.3 mmol, 55%) en DMF seca (75 ml) a 0°C. La mezcla se agitó durante 15 minutos y luego se adicionó gota a gota a una solución del éster ter-butílico del ácido (5-bromometil-3-cloro-piridin-2-il) carbámico (4.50 g, 14.3 mmol) en DMF seca (100 ml) a 0°C . La solución resultante se agitó durante 40 minutos a 0°C, luego se adicionó cuidadosamente NH4C1 (30 ml , saturado) . La concentración bajo presión reducida dio un residuo, que se disolvió en agua/CH2Cl2. La capa orgánica se extrajo con CH2C12 y los extractos combinados se secaron, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. La cromatografía instantánea MeOH al 1% en CH2C12) dio el éster dietílico del ácido 2-(6-ter-butoxicarbonilam?no-5-vinil-piridin-3-ilmetil) -malónico (4.30 g, 77%) . (e) Éster monoetílico del ácido 2-(6-ter-butoxicarbonilamino-5-vinil-piridin-3-ilmetil ) -malónico Una solución de KOH (0.71 g, 12.6 mmol, 85%) en etanol (10 ml) se adicionó a una solución del éster dietílico del ácido 2- (6-ter-butoxicarbonilamino-5~vinil-piridin-3-ilmetil) -malónico (4.30 g, 11.0 mmol) en etanol (25 ml) y diclorometano (10 ml) a 0°C. La mezcla se agitó durante 6 horas a temperatura ambiente. El solvente se evaporó in vacuo y el residuo se disolvió en agua. La capa acuosa se lavó con éter, se acidificó a pH 4 por HCl 1 M y se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera y se secó. La filtración y concentración bajo presión reducida seguido por cromatografía instantánea (MeOH al 10% y CH2C12) dio el éster monoetílico del ácido 2- (6-ter-butoxicarbonilamino-5-vinil-piridin-3-ilmetil ) - LÍA - É--AA.»- * - - .- -»L¿ malónico (3.05 g, 76%). (f) Éster etílico del ácido 2- (6-ter-butoxicarbonilamino-5-vinil-piridin-3 -ilmetil) -acrílico Se adicionó gota a gota dietilamina (0.85 ml , 8.80 mmol) a una mezcla del éster monoetílico del ácido 2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-5-vinil-piridin-3 -ilmetil) -malónico (3.05 g, 8.37 mmol) y solución acuosa al 37% de formaldehído (0.71 g, 8.80 mmol) en CH2C1 (2 ml) a 0°C. La mezcla se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente y luego se vertió en agua con hielo y se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se lavó con NaHC03 al 5% y se secó. La cromatografía instantánea (metanol al 1% en CH2C12) produjo el éster etílico del ácido 2-(6-ter-butoxicarbonilamino-5-vinil-piridin-3-ilmetil) -acrílico (1.70 g, 61%) . (g) Éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6-ter-butoxicarbonilamino-5-vinil-piridin-3-il ) -propiónico Se adicionó ácido tioacético (4 ml) a una suspensión del éster etílico del ácido 2-(6-ter-butoxicarbonilamino-5-vinil-piridin-3-ilmetil) -acrílico (0.73 g, 2.16 mmol) en trietilamina (0.31 ml , 2.23 mmol) a 0°C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente bajo argón durante la noche, se vertió en agua con hielo y se extrajo con CH2C12. La fase orgánica se lavó con NaHC03 saturado hasta que cesó la emisión de gas y luego se secó. La cromatografía instantánea MeOH al 1% en CH2C12) dio el éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6-ter-butoxicarbonilamino-5-cloro-piridin-3-il) -propiónico (0.51 g, 70%) . (h) Éster etílico del ácido 3- (6-ter-butoxicarbonilamino-5-hidroximetil-piridin-3-il) -mercaptometil-propiónico Se burbujeó ozono a través de una solución del éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6-ter-butoxicarbonilamino-5-vinil-piridin-3-il) -propiónico (0.65 g, 1.60 mmol) en etanol (25 ml) a -78°C. Luego se burbujeo 02 a través de la mezcla durante 5 minutos seguido por burbujeo de N2 durante 15 minutos. Una mezcla de NaBH4 (0.30 g, 8.00 mmol) en agua se adicionó cuidadosamente a la mezcla a -78°C, y la mezcla de reacción se dejó alcanzar los 0°C. Se continuó la agitación durante 3 horas. Se adicionó acetona (10 ml) y la mezcla de reacción se evaporó a 1/3 del volumen inicial. Se adicionó NaCl al 50% (acuoso) y la mezcla se extrajo con diclorometano, se secó y se concentró bajo presión reducida para dar el éster etílico del ácido 3- (6-ter-butoxicarbonilamino-5-hidroximetil-piridin-3-il) -mercaptometil-propiónico (0.38 g, 63%). rt^. -í -,*... -...-i .-^j-j-. (i) Ester metílico del ácido -3- (6-ter-butoxicarbonilamino- 5-hidroximetil-piridin-3-il) -propiónico Una mezcla del éster etílico del ácido 3-(6-ter- butoxicarbonilamino-5-hidroximetil-piridin-3-il) - mercaptometil-propiónico (0.38 g, 1.0 mmol) y KHCO3 (0.11 g, 1.1 mmol) en anhídrido de ácido acético (1 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas . Luego se adicionó NH4CI (saturado) y agua. La mezcla se extrajo con diclorometano, se secó y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía instantánea (CH2C12, MeOH al 2.5% en CH2C12) dio el éster etílico del ácido 2- acetilsulfanilmeti1-3- (6-ter-butoxicarbonilamino-5- hidroximetil-piridin-3-il) -propiónico (0.23 g, 60%). (j) Ácido 3- (6-amino-5-hidroximetil-piridin-3-il) -2- mercaptometil-propiónico Una solución del éster etílico del ácido 3- (6- amino-5-hidroximetil-piridin-3-il) -2-mercaptometil- propiónico (50 mg, 135 mmol) en HCl concentrado (2 mL) se sometió a reflujo durante 60 minutos. La reacción se enfrió y se concentró bajo presión reducida para dar el compuesto del título como la sal de HCl (37 mg, 98.3%). RMN A (400 MHz, D20) : d 2.70-2.95 (m, 5H) , 4.65 (s, 2H) , 7.68 (s, ÍH) , 7.88 (s, ÍH) . MS(+) 244 (M+l) . l. i y Ejemplo 24 Ácido 2-mercaptometi1-3-pirrolidin-3-il-propiónico (a) ( l-Bencil-pirrolidin-3-il ) -metanol Se adicionó Red-Al (160 mL de una solución 3.5 M en tolueno, 560 mmol) a una solución de ácido l-bencil-5-oxo-pirrolidina-3-carboxílico (20 g, 91 mmol) en THF seco (650 mL) bajo argón) . La mezcla de reacción se sometió a reflujo durante 2.5 horas y luego se vertió en una mezcla de hielo triturado y NaOH (20%) . Las fases se separaron, la fase acuosa se extrajo con tolueno y las fases orgánicas combinadas se secaron y concentraron bajo presión reducida para dar 17.9 g del producto crudo como un aceite amarillo. (b) Ester ter-butílico del ácido 3-hidroximetil-pirrolidina-1-carboxílico Se adicionaron Pd al 10%-C/(6.1 g) y formiato de amonio (10 g, 158 mmol) a una solución de (1-Bencil-pirrolidin-3-il) -metanol (6.1 g, 32 mmol) en metanol (220 mL) bajo argón. Después del reflujo durante 15 minutos, la mezcla de reacción se filtró en tanto que estaba caliente a través de una almohadilla de celita, la celita se lavó adicionalmente con metanol, y las fases orgánicas combinadas se concentraron. El residuo se disolvió en THF A»- (35 mL) y agua (35 ml) , la solución se enfrió a 0°C y se adicionaron K2C03 (22 g, 159 mmol) y dicarbonato de di-ter-butilo (6.95 g, 32 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El THF se removió bajo presión reducida, se adicionó agua y la fase acuosa se extrajo con EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se secaron y se concentraron bajo presión reducida para dar 4.64 g del producto crudo. La cromatografía instantánea (heptano/EtOAc: 1/1—68/32) del producto crudo produjo el éster etílico del ácido 3-hidroximetil-pirrolidina-l-carboxílico (3.82 g, 60%) como un aceite incoloro. (c; Ester ter-butílico del ácido 3-trifluorometansulfanioximeti1-pirrolidina-1-carboxílico Se adicionó gota a gota cloruro de metansulfanio (0.4 mL, 5.17 mmol) a una solución del éster ter-butílico del ácido 3-hidroximetil-pirrolidina-l-carboxílico (1 g, 4.97 mmol) y trietilamina (1.04 mL, 7.46 mmol) en CH2C12 (15 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después de la filtración se adicionó CH2C12, y la fase orgánica se lavó con HCl 1 M, se secó y se concentró bajo presión reducida para producir el éster ter-butílico del ácido 3-trifluorometansulfanioximeti1-pirrolidina-1-carboxílico (1.4 g, 97%) . ¿¿ (d) Éster ter-butílico del ácido 3-bromop.etil-pirrolidina- 1-carboxílico Se sometió a reflujo durante la noche una mezcla del éster ter-butílico del ácido 3- trifluorometansulfanioximeti1-pirrolidina-1-carboxílico (3.85 g, 13.8 mmol) y LiBr (3.61 g, 42 mmol) en acetona seca (30 mL) . La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente, se filtró y se concentró. El residuo se disolvió en CH2C12 y se lavó con agua, se secó y se concentró bajo presión reducida para dar 6 g del producto crudo. La purificación por cromatografía instantánea (heptano/EtOAc: 1/0-68/32) dio el éster ter-butílico del ácido 3-bromometil-pirrolidina-l-carboxílico (2.84 g, 78%) como un aceite incoloro. (e) Éster dietílico del ácido 2- (1-ter-butoxicarbonil-pirrolidin-3-ilmetil) -malónico Se adicionó gota a gota malonato de dietilo (1.93 mL, 12.7 mmol) a una solución de NaH (60%, 0.51 g, 12.8 mmol) en THF seco (15 mL) a 0°C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora después de lo cual, se adicionó a una mezcla sometida a reflujo de éster terbutílico del ácido 3-bromometil-pirrolidina-l-carboxílico (2.8 g, 10.6 mmol) en THF seco (30 L) . La mezcla de A.. reacción se sometió a reflujo adicionalmente durante 19 horas, y luego se concentró a casi sequedad. Se adicionó agua (1 L) y el producto se extrajo con CH2C12. Las fases orgánicas combinadas se secaron y concentraron bajo presión reducida para producir 3.3 g del producto crudo. La purificación por cromatografía instantánea (CH2Cl /EtOAc: 1/0-68/32) dio el éster dietílico del ácido 2- (l-ter-butoxicarbonil-pirrolidin-3-ilmetil) -malónico (1.64 g, 45%) . (f) Éster monoetílico del ácido 2- (1-ter-butoxicarbonil-pirrolidin-3-ilmetil) -malónico Una solución de KOH (0.26 g) , 4.6 mmol) en etanol (7 mL) se adicionó a una solución del éster dietílico del ácido 2- (l-ter-butoxicarbonil-pirrolidin-3-ilmetil) -malónico (1.52 g; 4.4 mmol) en etanol (7 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche, se concentró bajo presión reducida y el residuo se disolvió en agua (500 mL) . La capa acuosa se lavó con éster dietílico, se acidificó a pH 3 por HCl 0.5 M y se extrajo con éter dietílico. La fase orgánica se secó y se concentró bajo presión reducida para producir el éster monoetílico del ácido 2- (l-ter-butoxicarbonil-pirrolidin-3-ilmetil) -malónico (1.13 g, 81%).
¿ A (g) Éster ter-butílico del ácido 3- (2-etoxicarbonil-alil) -pirrolidina-1-carboxílico Se adicionó dietilamina (0.34 mL; 3.3 mmol) a una mezcla del éster monoetílico del ácido 2-(l-ter-butoxicarbonil-pirrolidin-3-ilmetil) -malónico (0.69 g, 2.19 mmol) en solución acuosa al 36% de formaldehído (0.27 mL, 3.5 mmol), CH2C12 (1.6 mL) y agua (1.6 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche, se vertió en agua con hielo (500 mL) y se extrajo con CHC1 . Las fases orgánicas combinadas se lavaron con NaHC03 al 5%, se secaron y concentraron bajo presión reducida para producir el éster ter-butílico del ácido 3- (2-etoxicarbonil-alil) -pirrolidina-1-carboxílico (0.55 g, 87%) como un aceite incoloro. (h) Éster ter-butílico del ácido 3- (3-acetilsulfanil-2-etoxicarbonil-propil) -pirrolidina-1-carboxílico El ácido tioacético (5 mL) , que se ha enfriado a 0°C, se adicionó a una mezcla de éster ter-butílico del ácido 3- (2-etoxicarbonil-alil) -pirrolidina-1-carboxílico (0.72 g, 2.54 mmol) y trietilamina (0.37 mL; 2.67 mmol) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 30 minutos, a temperatura ambiente durante 23 horas y luego se vertió en agua con hielo (400 mL) . La capa acuosa se extrajo con CHC12. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con aHC03 saturado, se secaron y concentraron bajo presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (CH2C12/EtOAc : 1/0-68/32) para producir el éster ter-butílico del ácido 3- (3-acetilsulfanil-2-etoxicarbonil-propil) -pirrolidina-1-carboxílico (0.72 g, 79%) como un aceite. (i) Ácido 2-mercaptometil-3-pirrolidin-3-il-propiónico Una solución del éster ter-butílico del ácido 3- (3-acetilsulfanil-2-etoxicarbonil-propil) -pirrolidina-1-carboxílico (0.52 g, 1.45 mmol) en HCl concentrado (15 mL) se sometió a reflujo bajo argón durante 1 hora. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida para producir una mezcla diastereomérica del compuesto del título como la sal de clorhidrato (0.33 g; 100%).
RMN A (500 MHz, D20) : d 1.60-1.92 (m, 3H) , 2.19-2.32 (m, ÍH) , 2.32-2.42 (m, ÍH) , 2.66-2.83 (m, 3H) , 2.84-2.96 (m, ÍH) , 3.23-3.32 (m, ÍH) , 3.40-3.58 (m, 2H) MS(+) 190 (M+l) .
^ A- Ejemplo 25 Ácido 3- (Cis-4-amino-ciclopent-2-enil ) -2-mercaptometil- propiónico (a) Éster 4-ter-butoxicarbonilamino-ciclopent-2- enilmetílico del ácido cis-metansulfónico Se adicionó cloruro de metansulfonilo (0.76 mL, 9.8 mmol) a una solución del éster ter-butílico del ácido cis- (4-hidroximetil-ciclopent-2-enil) -carbámico (2 g, 9.4 mmol) y trietilamina (1.96 mL, 14.1 mmol) en CH2C12 (30 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después de la filtración se adicionó CH2C12 y la fase orgánica se lavó con HCl 1 M, se secó y se concentró bajo presión reducida para producir el éster 4-ter-butoxicarbonilamino-ciclopent-2-enilmetílico del ácido cis-metansulfónico (2.64 g, 96%). (b) Éster ter-butílico del ácido cis- (4-bromometil- ciclopent-2-enil) -carbámico Una mezcla del éster 4-ter-butoxicarbonilamino- ciclopent-2-enilmetílico del ácido cis-metansulfónico (2.51 g 8.6 mol) y LiBr (2.24 g, 25.8 mmol) en acetona seca (20 mL) se sometió a reflujo durante la noche. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente, se filtró y se concentró. El residuo se disolvió en CH2C1 y se lavó aag ^ - *- - - -A.A--fe t -e ¡Á .zzA con agua, se secó y se concentró bajo presión reducida para dar el éster ter-butílico del ácido cis- ( 4-bromometil-ciclopent-2-enil) -carbámico (2.23 g, 94%). (c) Éster dietílico del ácido 2- (cis-4-ter-butoxicarbonilamino-ciclopent-2-enilmetil ) -malónico Se adicionó malonato de dietilo (1.29 mL, 8.5 mmol) a una mezcla de NaH (60%, 0.34 g, 8.5 mmol) en DMF (10 mL) . Después de la agitación a temperatura ambiente durante 15 minutos, se adicionó una solución del éster terbutílico del ácido cis- (4-bromometil-ciclopent-2-enil) -carbámico (1.95 g, 7.1 mmol) en DMF (12 mL) , y la mezcla de reacción se filtró a 60°C durante 19 horas. Se adicionó EtOAc y la fase orgánica se extrajo con agua y salmuera, se secó y se concentró bajo presión reducida para dar 2.44 g del producto crudo. La purificación por cromatografía instantánea (CH2Cl2/EtOAc : 1/0-68/32) dio el éster dietílico del ácido 2- (cis-4-ter-butoxicarbonilamino-ciclopent-2-enilmetil) -malónico (1.47 g, 58%).
Ester monoetílico del ácido 2- (cis-4-ter-butoxicarbonilamino-ciclopent-2-enilmetil ) -malónico Se adicionó una solución de KOH (0.19 g, 3.4 mmol) en etanol (6 mL) a una solución del éster dietílico del ácido 2- (cis-4-ter-butoxicarbonilamino-ciclopent-2- • .Li*.. enilmetil) -malónico (1.15 g; 3.2 mmol) en etanol (6 mL) a 0°C . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche, se concentró y se adicionó agua con hielo (400 mL) . La fase acuosa se lavó con éter dietílico (la emulsión formada durante la extracción se trató con salmuera a fin de obtener una buena separación de fases) , se acidificó a pH 3 con HCl 0.5 M, y se extrajo con éter dietílico. La fase orgánica se secó y se concentró bajo presión reducida para dar el éster monoetílico del ácido 2- (cis-4-ter-butoxicarbonilamino-ciclopent-2-enilmetil) -malónico (0.86 g, 81%) como cristales blancos. (e) Éster etílico del ácido 2- (cis-4-ter-butoxicarbonilamino-ciclopent-2-enilmetil ) -acrílico Se adicionó dietilamina (0.31 mL; 3.0 mmol) a una mezcla del éster monoetílico del ácido 2- (cis-4-ter-butoxicarbonilamino-ciclopent-2-enilmetil ) -malónico (0.66 g, 2.0 mmol) en solución acuosa al 36% en formaldehído (0.25 mL, 3.2 mmol), CH2C12 (1.6 mL) y agua (1.6 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche, se vertió en agua con hielo (400 mL) y se extrajo con CH2C12. Durante la extracción, se mejoró la separación de fases por la adición de salmueras, las fases orgánicas combinadas se lavaron con NaHC03 al 5%, se secaron y concentraron bajo presión reducida para producir Í .-ítnt K el éster etílico del ácido 2- (cis-4-ter-butoxicarbonilamino-ciclopent-2-enilmetil) -acrílico (0.56 g, 94%) como un aceite. (f) Éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (cis-4-ter-butoxicarbonilamino-ciclopent-2-enil ) -propiónico Se adicionó ácido tioacético (4 mL) , que se ha enfriado a 0°C , a una mezcla del éster etílico del ácido 2- ( cis-4-ter-butoxicarbonilamino-ciclopent-2-enilmetil) -acrílico (0.56 g, 1.9 mmol) y trietilamina (0.28 mL, 2.0 mmol) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 30 minutos, a temperatura ambiente durante 19 horas y luego se vertió en agua con hielo (400 mL) . La capa acuosa se extrajo con CHC12. La fase orgánica se lavó con NaHC03 saturado, se secó y se concentró bajo presión reducida para dar 1.7 g del producto crudo. La purificación por cromatografía instantánea (CH2Cl2/EtOAc : 1/0-68/32) dio el éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (cis-4-ter-butoxicarbonilamino-ciclopent-2-enil ) -propiónico (0.46 g, 65%) . (g) Ácido 3- (cis-4-amino-ciclopent-2-enil) -2-mercaptometil-propiónico Una solución del éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (cis-4-ter-butoxicarbonilamino- -*-* & ciclopent-2-enil) -propiónico (86 mg, 0.23 mmol) en HCl concentrado (5 mL) se sometió a reflujo bajo argón durante 1 hora. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida para dar una mezcla diastereomérica del compuesto del título como la sal de clorhidrato (65 mg) .
RMN A (400 MHz, D20) : d 1.35-1.47 (m, 2H) , 1.60-1.72 (m, ÍH) , 1.74-1.92 (m, 2H) , 1.92-2.04 (m, ÍH) , 2.67-2.92 (m, 10H) , 4.34-4.43 (m, 2H) , 5.79-5.85 (br s, 2H) , 6.12 (d, ÍH) , 6.18 (d, ÍH) .
Ejemplo 26 Ácido 2 -mercaptometil-3-piperazin-1-il-propiónico (a) Ester ter-butílico del ácido 4- (2-etoxicarbonil-alili piperazina-1-carboxílico A una solución del éster etílico del ácido 2-bromometil-acrílico (1.93 g, 10 mmol) en N,N-dimetilformamida (25 mL) se adicionó éster ter-butílico del ácido piperazina-1-carboxílico (1.86 g, 10 mmol) y luego, gota a gota, etil-diisopropil-amina (1.71 L, 10 mmol). Después de la agitación durante 16 horas a temperatura ambiente, el solvente se removió bajo presión reducida y se adicionaron agua (50 mL) y diclorometano (50 mL) . Después t-l-A». de la agitación durante 2 minutos, las capas se separaron, la capa orgánica se lavó con agua y salmuera, y se secó sobre sulfato de magnesio. El solvente se removió bajo presión reducida para dar el éster ter-butílico del ácido 4- (2-etoxicarbonil-alil) -piperazina-1-carboxílico (2.456 g, 82%) . (b) Éster ter-butílico del ácido 4- (3-acetilsulfanil-2-etoxicarbonil-propil) -piperazina-1-carboxílico Al éster ter-butílico del ácido 4- (2-etoxicarbonil-alil) -piperazina-1-carboxílico crudo (2.45 g, 8.2 mmol) se adicionó ácido tiolacético (7.5 mL) bajo argón. La mezcla se enfrió a 0°C y se adicionó gota a gota trietilamina (1.14 mL, 8.2 mmol). La mezcla luego se agitó a temperatura ambiente durante 2 días y se adicionó ácido tiolacético (2.5 mL) . Se continuó la agitación durante 1 día, luego se adicionó solución de carbonato ácido de sodio, saturada, acuosa cuidadosamente hasta la reacción neutral y la mezcla se extrajo tres veces con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se lavaron dos veces con solución de carbonato ácido de sodio, saturada, acuosa y una vez con salmuera. Después de secado sobre sulfato de magnesio, el solvente se removió bajo presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, metanol al 1.7% en diclorometano) para dar el éster ter-butílico del ácido 4- (3-acetilsuifani1-2-etoxicarbonil-propil) -piperazina-1- carboxílico (0.29 g, 9.4%). 5 (c) Ácido 2-mercaptometil-3-piperazin-l-il-propiónico Al éster ter-butílico del ácido 4- (3- acetilsulfani1-2-etoxicarbonil-propil) -piperazina-1- carboxílico (0.095 g, 0.25 mmol) se adicionó ácido clorhídrico saturado con argón (3 mL, 37%) y la mezcla se 10 calentó bajo argón al reflujo durante 2.5 horas. La solución se concentró bajo presión reducida para dar el compuesto del título como la sal de diclorhidrato (0.071 g, cuantitativo) . RMN A (300 MHz, D20) : d 3.86-3.49 (m, 10H) , 3.36-3.28 (m, 15 ÍH) , 3.01-2.88 (m, 2H) . MS 205 (M+H) .
Ejemplo 27 Ácido 3- ( 6-amino-piridin-3-il) -2-mercaptometil-pentanoico 20 (a) Ester dietílico del ácido 2- [1- (6-ter-butoxicarbonil- piridin-3-il) -propil] -malónico A una suspensión agitada de yoduro de cobre (5.71 g, 30 mmol) en éter dietílico (120 mL) bajo argón se 25 adicionó bromuro de etilmagnesio (solución 3M en éter ¡afei ^^g A dietílico, 20 L, 20 mmol) en el espacio de 10 minutos a 0°C. Después de 5 minutos de agitación, la mezcla se enfrió a -78°C y se adicionó gota a gota una solución del éster dietílico del ácido 2- ( 6-ter-butoxicarbonil-piridin-3-ilmetilen) -malónico (5.47 g, 15.0 mmol) en tetrahidrofurano (60 mL) se adicionó gota a gota en 0.5 horas. Durante este periodo, se adicionó tetrahidrofurano (40 mL) . La mezcla se dejó agitar a -40°C durante 2.5 horas. Luego, se adicionó una solución de cloruro de amonio (5%) en solución de amoniaco acuoso (5%) con agitación vigorosa, permitiendo exceso de aire y la mezcla se calentó hasta temperatura ambiente. La mezcla se extrajo dos veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron sucesivamente con solución de amoniaco, acuosa (5%) y salmuera, y se secaron sobre sulfato de magnesio. El solvente se removió bajo presión reducida y el residuo se recristalizó a partir de una mezcla de éter diisopropílico y tetrahidrofurano (5:1, vol/vol) para dar el éster dietílico del ácido 2- [1- (6-ter-butoxicarbonil-piridin-3-il) -propil] -malónico (3.23 g, 55%). (b) Éster monoetílico del ácido 2- [1- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il ) -propil] -malónico Se disolvió el éster dietílico del ácido 2-[l-(6-ter-butoxicarbonil-piridin-3-il) -propil] -malónico (3.23 g, 8.19 mmol) en una mezcla de diclorometano (12 mL) y etanol (24 mL, 99.5%) . A esa solución se adicionó gota a gota una solución de hidróxido de potasio (0.528 g, 87%, 8.20 mmol) en etanol (16 mL, 99.5%) a 0°C durante 0.5 horas. La agitación se continuó durante 16 horas en tanto que la mezcla se dejó calentar hasta temperatura ambiente. Deepués de la concentración bajo presión reducida a 5-10 mL, se adicionó agua (50 mL) y la emulsión resultante se agitó durante 0.5 horas, y luego se filtró. El filtrado se lavó dos veces con una mezcla de acetato de etilo y éter dietílico (2:1, vol/vol). La capa acuosa se acidificó por la adición de una solución de ácido cítrico en agua (6%) para alcanzar un pH de 4 a 5 , se extrajo tres veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio y el solvente se removió bajo presión reducida para producir el éster monoetílico del ácido 2-[l-(6-ter- butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -propil] -malónico (2.47 g, 82%) . c ) Éster etílico del ácido 2- [1- ( 6-ter-butoxicarbonil- piridin-3-il) -propil] -acrílico A una solución del éster monoetílico del ácido 2 - [1- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridín-3-il ) -propil] - malónico (2.45 g, 6.69 mmol) en diclorometano (11 mL) se adicionaron a una solución acuosa de formaldehído (0.49 mL, 37%) y dietilamina (0.62 mL, 6.4 mmol) a 0°C. Después de la agitación vigorosa de la mezcla durante 16 horas, se adicionaron agua (40 L) y acetato de etilo (40 mL) . Después de 2 minutos adicionales de agitación a temperatura ambiente, las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo dos veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio y salmuera. Después del secado sobre sulfato de sodio, el solvente se removió bajo presión reducida para producir el éster etílico del ácido 2-[l-(6-ter-butoxicarbonil-piridin-3-il) -propil] -acrílico (1.21 g, 54%) . (d) Éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il ) pentanoico Se disolvió el éster etílico del ácido 2-[l-(6-ter-butoxicarbonil-piridin-3-il) -propil] -acrílico (1.20 g, 3.59 mmol) en ácido tiolacético (4 mL) bajo argón y trietilamina (0.56 mL, 4.0 mmol) se adicionó. La mezcla se calentó a 60°C. Después de 22 horas, se adicionó ácido tiolacético (2 mL) . Después de 14 horas adicionales, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se adicionó lentamente una solución saturada de carbonato ácido de sodio para obtener una solución neutral. Esto se extrajo A At* tres veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio y salmuera, y se secaron sobre sulfato de magnesio. Después de la concentración bajo presión reducida, el residuo se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice), metanol al 1.7% en diclorometano) para producir el éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il)pentanoico (1.22 g, 83%). La mezcla de diastereómeros se separó en una escala preparativa por cromatografía quiral usando un columna Chiralpak AD (250*4.6 mm) como fase estacionaria y mezcla de hexano (mezcla de isómeros/etanol (85:15), que contiene dietilamina (0.05%) a una velocidad de flujo de 1 mL/min con una concentración de muestra de 5 mg/mL. El exceso enantiomérico se determinó analíticamente por HPLC quiral en la misma columna con mezcla de hexano/etanol (85:15) como eluyente Ester etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il ) -pentanoico/A: Tiempo de retención 10.72 minutos, ee = 99% -*«£.-, i jf » Éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6-ter- butoxicarbonilamino-piridin-3-il ) -pentanoico/B Tiempo de retención 14.41 minutos, ee = 98% 5 Ester etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6-ter- butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -pentanoico/C Tiempo de retención 23.01 minutos, ee = 98% Éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6-ter- 10 butoxicarbonilamino-piridix?-3-il ) -pentanoico/D Tiempo de retención 29.83 minutos, ee = 97% (e) Acido 3- (6-amino-piridin-3-il ) -2-mercaptometil- pentanoico 15 Se adicionó ácido clorhídrico (38%, 4 mL) al éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6-ter- butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -pentanoico (0.041 g, 0.1 mmol) bajo argón y la mezcla se calentó a reflujo durante 4 horas. La concentración bajo presión reducida y el secado 20 (45°C, 0.3 mbar) dio el compuesto del título como la sal de clorhidrato (0.027 mg, 97%). Ácido 3- ( 6-amino-piridin-3-il) -2-mercaptometil-pentanoico/A Este compuesto se obtuvo a partir del éster 25 etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- ( 6-ter- butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -pentanoico/A por el método descrito anteriormente.
RMN A (300 MHz, D20) : d 7.79 (dd, ÍH) , 7.69 (d, ÍH) , 7.05 (d, ÍH) , 2.81 (m, 2H) , 2.51 (m, 2H) , 1.66 (m, 2H) , 0.72 (t, 3H) . MS+241 (M+H) . Ácido 3- ( 6-amino-piridin-3-il) -2-mercaptometil-pentanoico/B Este compuesto se obtuvo a partir del éster etílico del ácido 2-acetilsulfanílmetil-3- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -pentanoico/B por el método descrito anteriormente.
RMN A (300 MHz, D20) : d 7.85 (dd, ÍH) , 7.64 (d, ÍH) , 7.01 (d, ÍH) , 2.98-2.64 (m, 4H) , 1.89 (m, ÍH) , 1.60 (m, ÍH) , 0.74 (t, 3H) . MS+ 241 (M+H)- Ácido 3- ( 6-amino-piridin-3-il) -2-mercaptometil-pentanoico/C Este compuesto se obtuvo a partir del éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -pentanoico/C por el método descrito anteriormente.
-» J- ííS. .-t á . i , AÍ& - Í-- RMN A (300 MHz, D20) : d 7.85 (dd, ÍH) , 7.64 (d, ÍH) , 7.01 (D, ÍH) , 2.98-2.64 (m, 4H) , 1.89 (m, ÍH) , 1.60 (m, ÍH) , 0.74 (t, 3H) . MS + 241 (M+H) . 5 Ácido 3- (6-amino-piridin-3-il) -2-mercaptometil-pentanoico/D Este compuesto se obtuvo a partir del éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6-ter- butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -pentanoico/D por el 10 método descrito anteriormente.
RMN A (300 MHz, D20) : d 7.79 (dd, ÍH) , 7.69 (d, ÍH) , 7.05 (d, ÍH) , 2.81 (m, 2H) , 2.51 (m, 2H) , 1.66 (m, 2H) , 0.72 (t, 3H) . 15 MS + 241 (M+H) Ejemplo 28 Ácido 3- ( 6-amino-piridin-3-il) -2-mercaptometil-4-metil- pentanoico 20 (a) Ester dietílico del ácido 2-[l-(6-ter- butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-metil-propil] malónico A una solución agitada de cianuro de cobre (3.58 g, 40 mmol) en tetrahidrofurano (50 mL) a -15°C, se 25 adicionó una solución de bromuro de isopropilmagnesio (40 mL, 2 M, 80 mmol) en tetrahidrofurano, bajo argón durante 15 minutos. Después de 15 minutos adicionales de agitación, se adicionó gota a gota durante 15 minutos una solución del éster dietílico del ácido 2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino- 5 piridin-3-ilmetil)malónico (3.78 g, 10.4 mmol) en tetrahidrofurano (50 mL) . Después de la agitación durante 16 horas, la mezcla se dejó calentar hasta temperatura ambiente. Luego, se adicionó una solución de cloruro de amonio (5%) en solución de amoniaco acuoso (5%) con 0 agitación vigorosa, permitiendo el exceso de aire. La mezcla se extrajo dos veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron sucesivamente con solución acuosa de amoniaco (5%) y salmuera, y se secaron sobre sulfato de magnesio. El solvente se removió bajo presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, 1.7% de metanol en diclorometano) para dar el éster dietílico del ácido 2-[l-(6-ter- butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-metil-propil] -malónico crudo (2.85 g, 25%) . (b) Éster monoetílico del ácido 2-[l-(6-ter- butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-metil-propil] -malónico A una solución del éster dietílico del ácido 2- [1- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-metil- propil] -malónico (1.569 g, 3.84 mmol) en una mezcla de ¡«¿¿«teri-af -» .t . .... í-z,.-... ..-.¿I».-» .. diclorometano (6 mL) y etanol (12 mL, 95%) a 0°C, se adicionó gota a gota durante 40 minutos, una solución de hidróxido de potasio (0.272 g, 85%, 4.2 mmol) en etanol (6 mL, 95%) después de la agitación adicional de 1 hora, la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y la agitación se continuó durante 18 horas. Luego, se adicionaron agua (30 mL) y diclorometano (30 mL) , y después de 3 minutos de agitación, se separaron las capas. La capa orgánica se extrajo una vez con agua y las capas orgánicas combinadas se lavaron una vez con éter. Luego, se adicionó una solución acuosa de ácido cítrico (10%) para ajustar el pH a 4, y la solución se extrajo tres veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron sobre sulfato de magnesio. Después de la evaporación del solvente, se obtuvo el éster monoetílico del ácido 2- [1- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-metil-propil]malónico (0.94 g, 64%). (c) Éster etílico del ácido 2- [1- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-metil-propil] -acrílico A una solución éster monoetílico del ácido 2-[l-(6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-metilpropil] malónico (0.94 g, 2.47 mmol) en diclorometano (4 mL) se adicionaron una solución acuosa de formaldehído (0.18 L, 37%) y dietilamina (0.23 mL, 2.32 mmol) a 0°C. Después i^t ly^yy- de la agitación de la mezcla vigorosamente durante 16 horas, se adicionaron agua (30 mL) y acetato de etilo (30 mL) . Después de la agitación adicional de 2 minutos a temperatura ambiente, las capas se separaron y la capa 5 acuosa se extrajo dos veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución acuosa, saturada de carbonato ácido de sodio y salmuera. Después del secado sobre sulfato de sodio, el solvente se removió bajo presión reducida y el residuo se purificó por 10 cromatografía en columna (gel de sílice, metanol al 1.7% en diclorometano) para dar el éster etílico del ácido 2-[l-(6- ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-metil-propil] - acrílico (0.24 g, 28%) . 15 (d) Ester etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6-ter- butoxicarbonilamino-piridin-3-il ) -4-metil-pentanoico Se disolvió el éster etílico del ácido 2- [ 1— ( 6- ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-metil-propil] - acrílico (0.431 g, 1.24 mmol) en ácido tiolacético (4 mL) 20 bajo argón y se adicionó trietilamina (0.21 mL, 1.5 mmol). La mezcla se calentó a 60°C. Después de 24 horas, se adicionó ácido tiolacético (2 mL) . Después de 20 horas adicionales, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se adicionó lentamente una solución saturada de carbonato 25 ácido de sodio para obtener una solución neutral. Esto se .-S-^Í^IÍMHHwKHMBt^il'-^^^ ^a -.k^» -M.- -, ta a» 3fc.i. ^ ^*» ¿ extrajo tres veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio y salmuera, y se secó sobre sulfato de magnesio. Después de la concentración bajo presión reducida, el residuo se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, metanol al 1.7% en diclorometano) para producir el éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmeti1-3- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -4-metil-pentanoico (0.284 g, 54%) como una mezcla de diastereómeros (6:1). (e) Ácido 3- (6-amino-piridin-3-il) -2-mercaptometil-4-metil-pentanoico Se disolvió el éster etílico del ácido acetilsulfanilmetil-3- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -4-metil-pentanoico (0.085 g, 0.20 mmol) en ácido clorhídrico saturado con argón (5 mL, 37%) y se calentó a reflujo bajo argón durante 5.5 horas. La concentración bajo presión reducida y el secado a 45°C/0.3 mbar dio el compuesto del título como la sal de clorhidrato (0.058 g, 99%) como una mezcla de diastereómeros (6:1). RMN A (300 MHz, D20) : d 7.81 (m, ÍH) , 7.62 (m, ÍH) , 6.98 (m, ÍH) , 3.18-3.06 (m, ÍH) , 2.93-2.40 (m, 3H) , 2.23-1.93 (m, ÍH) , 0.93-0.74 (m, 6H) . S 255 (M+H) -t-AA Ejemplo 29 Ácido 3- (6-amino-piridin-3-il) -2-mercaptometil-3-fenilpropiónico (a) Ester dietílico del ácido 2- [ (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -fenil-metil] -malónico A una suspensión vigorosamente agitada de cianuro de cobre (I) (1.71 g, 19.06 mmol) en THF seco (18 mL) se adicionó una solución de bromuro de fenilmagnesio (12.7 mL, 3M en éter, 38.11 mmol) a 0°C bajo argón. La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente, dando una solución café oscuro. Después de 150 minutos, se adicionó a 0°C una solución de éster dietílico del ácido 2-(6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetileno) -malónico (1.74 g, 4.76 mmol) en THF seco (19 mL) . La mezcla se dejó agitar durante 3 días, luego se adicionó cloruro de amonio acuoso. La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron. La remoción del solvente in vacuo dio un residuo, que se dispersó en hexano. La filtración de los cristales dio el éster dietílico del ácido 2-[(6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -fenil-metil] -malónico (1.85 g, 88%) . i í, (b) Éster etílico del ácido 2- [ ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -fenil-metil] -malónico Se adicionó una solución de KOH (0.266 g, 4.11 mmol) en etanol (14 mL) a una solución del éster dietílico del ácido 2- [ (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -fenil-metil] -malónico (1.82 g, 4.11 mmol) en etanol (12 mL) y cloruro de metileno (13 mL) a 0°C. La mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se adicionó más KOH (80 mg, disuelto en 3 mL de etanol) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó durante 18 horas adicionales. La mezcla se concentró bajo presión reducida y acetato de etilo, y se adicionaron al residuo HCl 0.5 M. La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó. Después de la filtración y evaporación in vacuo, el residuo se dispersó en hexano. La filtración de los cristales dio el éster monoetílico del ácido 2- [ (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -fenilmetil] -malónico (1.7 g, 98%). (c) Éster etílico del ácido 2- [ ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il ) -fenil-metil] -acrílico Se adicionó dietilamina (0.52 mL, 5.04 mmol) a una mezcla del éster monoetílico del ácido 2-[(6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -fenil-metil] -malónico (1.7 g, 4.1 mmol) y solución acuosa al 37% de formaldehído (0.42 mL, 5.6 mmol) en cloruro de metileno (6.5 mL) a 0°C. i ?f .-^.
La mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente y luego se diluyó con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con bicarbonato de sodio acuoso, saturado y salmuera, y se secó. Después de la filtración y evaporación in vacuo el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (CH2C12) para producir el éster etílico del ácido 2-[(6- ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -fenil-metil] -acrílico (0.36 g, 23%) . (d) Ester etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6-ter- butoxicarbonilamino-piridin-3-il ) -3-fenil-propiónico Se adicionó trietilamina (0.105 g, 1.04 mmol) a una solución del éster etílico del ácido 2-[(6-ter- butoxicarbonil-amino-piridin-3-il) -fenil-metil] -acrílico (0.36 g, 0.94 mmol) en ácido tioacético (4 mL) a 0°C bajo argón. La mezcla se calentó a 45°C durante 24 horas. Se adicionó acetato de etilo y la fase orgánica se lavó con bicarbonato de sodio saturado, acuoso y salmuera, y se secó. Después de la filtración y evaporación in vacuo, el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (tolueno/acetato de etilo, 1:0—5:1), para dar el éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6-ter- butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -3-fenil-propiónico (0.314 g, 73 %) . ÉMÉÉ-fa». . - . ? ? . í i. .-. .i....uta-i-. . Ácido 3- (6-amino-piridin-3-il) -2-mercaptometil-3-fenil-propiónico Se disolvió el éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3- il) -3-fenil-propiónico (58 mg, 0.125 mmol) en HCl concentrado (3.0 mL) . La solución se calentó a reflujo durante 130 minutos bajo argón. La concentración bajo presión reducida, dio el compuesto del título como la sal de clorhidrato (41 mg) , 100% RMN A (500 MHz, D20) : d 8.03-7.83 (m, 2H) , 7.5-7.3 (m, 5H) , 7.05-6.95 (m, ÍH) , 4.27-4.15 (m, ÍH) , 3.6-3.45 (m, ÍH) , 2.84-2.58 (m, 2H) . MS(+) 289 (M+l) .
Ejemplo 30 Ácido 3- (6-amino-?iridin-3-il) -2-mercaptometil-4-fenil-butírico (a) Ester dietílico del ácido 2- [1- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-fenil-etil] -malónico A una suspensión vigorosamente agitada de cianuro de cobre (I) (0.66 g, 7.32 mmol) en THF seco (5 mL) se adicionó una solución de bromuro de bencilmagnesio (5 mL, 2.93 M en éter, 14.64 mmol) a 0°C bajo argón. La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente, dando una solución asi, , ,x café oscuro. Después de 60 minutos, se adicionó a 0°C una solución de éster dietílico del ácido 2-(6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetilen) -malónico (0.67 g, 1.83 mml) en THF seco (4 mL) . La mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente, luego se adicionó cloruro de amonio acuoso. La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron. La remoción del solvente in vacuo dio un residuo que se purificó por cromatografía instantánea (CH2Cl /acetato de etilo, 1:1—100:15) para dar el éster dietílico del ácido 2-[l-(6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-fenil-etil] -malónico (0.44 g, 53%) . (b) Éster monoetílico del ácido 2- [1- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-fenil-etil] -malónico Una solución de KOH (0.067 g, 1.03 mmol) en etanol (3 mL) se adicionó a una solución del éster dietílico del ácido 2- [1- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-fenil-etil] -malónico (0.44, 0.96 mmol) en etanol (3 mL) y cloruro dimetileno (2 mL) a 0°C. La mezcla se agitó durante 48 horas a temperatura ambiente. La mezcla se concentró bajo presión reducida y acetato de etilo y HCl 0.5 M, se adicionaron al residuo. La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó. La filtración y evaporación in vacuo dio el éster monoetílico del ácido 2-[l-(6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-fenil-etil] -malónico (0.37, 90%) . (c) Éster etílico del ácido 2- [1- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-fenil-etil] -acrílico Se adicionó dietilamina (0.27 mL, 2.59 mmol) a una mezcla de éster monoetílico del ácido 2-[l-(6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-fenil-etil] -malónico (0.37 g, 0.86 mmol) y solución acuosa al 37% de formaldehído (0.22 mL, 2.9 mmol) en cloruro de metileno (3.5 mL) a 0°C. La mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se adicionó más formaldehído (0.24 mL) y dietilamina (0.24 mL) . La agitación a temperatura ambiente se conservó durante 18 horas y luego se adicionó acetato de etilo y agua. La capa orgánica se lavó con bicarbonato de sodio acuoso, saturado y salmuera, se secó y se concentró bajo presión reducida para dar el éster etílico del ácido 2- [1- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-fenil-etil] -acrílico (0.34 g, 99%). (d) Éster etílico del ácido 2-acetilsulfanil-3- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il ) -4-fenil-butírico Se adicionó trietilamina (0.096 g, 0.95 mmol) a una solución del éster etílico del ácido 2-[l-(6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-fenil-etil] -acrílico (0.34 g, 0.86 mmol) en ácido tioacético (3.5 L) a 0°C bajo argón. La mezcla se calentó a 45 °C durante 24 horas. Se adicionó acetato de etilo y la fase orgánica se lavó con bicarbonato de sodio acuoso saturado y salmuera y se secó.
Después de la filtración y evaporación in vacuo, el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (CH2Cl2/acetato de etilo, 1:0—100:5) para dar el éster etílico del ácido 2-acetilsulfanil-3- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -4-fenil-butírico (0.264 g, 65%) . (e) Ácido 3- ( 6-amino-piridin-3-il) -2-mercaptometil-4-fenil-butírico El éster etílico del ácido 2-acetilsulfanil-3- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il ) -4-fenil-butírico (0.14 g, 0.3 mmol) se disolvió en HCl concentrado (5.0 mL) .
La solución se calentó a reflujo durante 4.5 horas bajo argón. La concentración bajo presión reducida dio el compuesto del título como la sal de clorhidrato (100 mg, 98%) . RMN A (500 MHz, D20) : d 7.90-7.83 (m, ÍH) , 7.43 (d, ÍH) , 7.34-7.18 (m, 3H) , 7.17-7.06 (m, 2H) , 7.01-6.9 (m, ÍH) , 3.4-2.5 (m, 6H) . S (+) 303 (M+l) . . . -i^^s-JAá Ejemplo 31 Ácido 2- ( 6-amino-?iridin-3-ilmetil) -3-mercapto-5-fenil-pentanoico (a) (E,Z)-2-({6-[ (ter-butoxicarbonil) amino] -3-piridinil}metil) -5-fenil-2-pentenoato de etilo A una suspensión de NaH (310 mg, 7.12 mmol, 55% en aceite mineral) en THF (25 mL) a 0°C bajo argón se adicionó una solución de 3- { 6- [( ter-butoxicarbonil) amino] -3-piridinil} -2- (dietoxifosforil)propanoato de etilo (2.55 g, 5.95 mmol) en THF (25 mL) . Después de 1 hora, se adicionó gota a gota una solución de 3-fenilpropanal (1.59 g, 11.9 mmol) . La reacción se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente, luego se enfrió rápidamente con NH4C1 (50 mL, acuoso, saturado). La mezcla se extrajo con acetato de etilo, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró bajo presión reducida. La cromatografía en columna (CHCl2/EtOAc 20:1—10.1) dio el (E.Z)-2-({6-[ (ter-butoxicarbonil ) amino] -3 -piridinil }metil) -5-fenil-2-pentenoato de etilo (2.49 g, 100%). (b) 3- (acetilsulfanil) -2- ( {6- [ (ter-butoxicarbonil) amino] -3-piridinil}metil ) -5-fenilpentanoato de etilo Se adicionó trietilamino (1.22 mL, 0.617 mmol) a una solución de (E . Z) -2- ( {6- [ (ter-butoxicarbonil) amino] -3- piridinil}metil) -5-fenil-2-pentanoato de etilo (400 MG, 0.597 mmol) en ácido tioacético (10 mL) a 40°C. Después de la agitación durante 90 horas, la mezcla se concentró bajo presión reducida. La cromatografía en columna (CH2Cl2/EtOAc 20:1-10:1), luego (tolueno/EtOAc, 10:1) y luego (heptano/EtOAc 2:1) dio el 3- (acetilsulfanil ) -2- ({ 6- [ (ter- butoxicarbonil) amino] -3-piridinil}metil) -5-fenilpentanoato (126 mg, 27%) como una mezcla diastereomérica, 1:1. (c) ácido 2 - (6-amino-piridin-3-ilmetil ) -3-mercapto-5-fenil-pentanoico Se disolvió el 3- (acetilsulfanil) -2- ( {6- [ (ter-butoxicarbonil ) amino] -3-piridinil] metil) -5-fenilpentanoato de etilo (9 mg, 18.5 µmol) en HCl concentrado (1 mL) bajo argón. La solución se calentó a reflujo durante 4.5 horas. La concentración bajo presión reducida produjo el compuesto del título como la sal de clorhidrato 86.4 mg, 98 %) como una mezcla diastereomérica 1:1. RMNA (400 MHz, D20) : d 1.78-2.20 (m, 2H) , 2.70-3.04 (m, 6H) , 6.88, 6.92 (2d, ÍH) , 7.22-7.39 (m, 5H) , 7.52, 7.54 (2d, ÍH) , 7.69, 7.75 (2d, ÍH) . MS (+) 317 (M+l) . ^j^^¡^^&^^ &^^^^ *^^ * Ejemplo 32 Ester etílico del ácido 3- [3- (6-amino-piridin-3-il) -2-etoxicarbonil-propildisulfanil] -2- ( 6-amino-piridin-3-ilmetil) -propiónico (a) Ester etílico del ácido 3- [3- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-etoxicarbonil-propildisulfanil] -2- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -propiónico Se disolvió el éster etílico del ácido 3-acetilsulfani1-2- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -propiónico (150 mg, 0.392 mmol) en etanol (15 mL) saturado con NH3 (g) . Después de la agitación durante 160 minutos, la mezcla se concentró bajo presión reducida. El residuo se disolvió el EtOH (10 mL) , posteriormente se adicionó una solución de I2 en EtOH (0.5 M. 0.784 mL) . La reacción se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente, luego se diluyó con CH2C12, se lavó con Na2S205 acuoso, saturado y NaHC03 acuoso, saturado, se secó, se filtró y se concentró bajo presión reducida para dar el éster etílico del ácido 3- [3- ( 6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-etoxicarbonil-propildisulfanil] -2 - (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3 -ilmetil ) -propiónico (130 mg, 98 %) . (b) ester etílico del ácido 3- [3- (6-amino-piridin-3-il) -2-etoxicarbonil-propildisulfanil] -2- (6-amino-piridin-3-ilmetil) -propionico Se adicionó acetato de etilo saturado con HCl (g) (15 mL) a una solución del éster estílico del ácido 3-[3- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-il) -2-etoxicarbonil-propiIdisulfanil] -2- (6-ter-butoxicarbonilamino-piridin-3-ilmetil) -propionico (130 mg, 0.191 mmol) en acetato de etilo (7 mL) a 0°C. La reacción se dejó llegar a temperatura ambiente y se agitó durante 19 horas, luego se evaporó bajo presión reducida. El residuo se disolvió en agua, se adicionó Na2C03 acuoso, saturado y la fase acuosa se extrajo con CH2C12. La capa orgánica se secó y se concentró bajo presión reducida para dar el compuesto del título (90 mg, 98 %) . RMNA (400 MHz, CDC13); d 1.19 (t, 3H) , 1.20 (t, 3H) , 2.68-2.86 (m, 6H) , 2.90-3.01 (m, 4H) , 4.07-4.14 (m, 4H) , 6.45 (d, 2H) , 7.28 (m, 2H) , 7.87 (s, 2H) . MS (+) 479 (M+l) .
Ejemplo 33 Ácido 3- ( 6-amino-piridin-3-il) -2-mercaptometil-hexanoico ¡a) N- ( 5-Butiril-piridin-2-il) -2.2 -dimetil-propionamida Una solución de N- (5-bromopiridin-2-il) -2 , 2- ,. '. .»» t .M« . z Mkttlí . dimetil-propionamida (3.582 g, 13.9 mmol) en éter dietílico (36 mL) se enfrió a -78°C bajo argón y se adicionó gota a gota n-butillitio (1.6 M, 19 L, 30.4 mmol) en el espacio de 20 minutos. 5 minutos después de la adición completa, la mezcla se dejó calentar a 0°C. Se adicionó N-metoxi-N-metil-butiramida (3.65 g, 27.8 mmol) en el espacio de menos de 5 minutos y se continuo la agitación durante 45 minutos. La solución clara se acidificó con ácido clorhídrico 2 N Ph 2. Después de la agitación vigorosa durante 15 minutos, la mezcla se neutralizó con carbonato ácido de sodio y se separaron las capas. La capa acuosa se extrajo tres veces con éter y etílico. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron y se concentraron bajo presión reducida. El aceite resultante se secó en un vació con bomba de aceite para remover el reactivo en exceso. Después de la cromatografía instantánea (diclorometano/metanol 60:1) se obtuvo la N- ( 5-butiril-piridin-2-il) -2 , 2-dimetil-propionamida cruda (2.47 g, 71 %) como un aceite naranja claro que se purificó adicionalmente. (b) N- [5- (1-Hidroxi-butil) -piridin-2-il] -2 , 2-dimetil-propionamida A una solución de N- (5-butiril-piridin-2-il) -2 , 2-dimetil-propionamida (2.47 g, 9.95 mmol) en etanol (20 mL) ... t. -tt X l . A : - . . AAA^á utíáte se adicionó borohidruro de sodio (185 mg. 5.0 mmol). Después de 40 minutos de agitación a temperatura ambiente, la mezcla se acidificó con ácido clorhídrico 1 N a pH 2 y se agitó durante 10 minutos. Después de la neutralización 5 con carbonato ácido de sodio, la mezcla se extrajo tres veces con diclorometano. Los extractos orgánicos combinados se lavaron dos veces con solución de carbonato ácido de sodio y una vez con salmuera. Después del secado y concentración bajo presión reducida el residuo se purificó 10 por cromatografía instantánea (diclometano/metanol 30:1) para dar la N- [5- (1-hidroxi-butil) -piridin-2-il] -2 , 2- dimetil-propionamida (1.025 g. 41 %). (c) Ester monoetílico del ácido 2- {1- [6- (2 , 2-dimetil- 15 propionilamino) -piridin-3-il] -butil} -malónico A una solución de N- [5 (1-hidroxi-butil) -piridin- 2-il] -2 , 2-dimetil-propionamida (1.025 g, 4.09 mmol) en triclorometano (12 mL) , se adicionó cloruro de tionilo (6 mL) y la mezcla se calentó a 55°C durante 1 hora. Luego, la 20 solución se concentró bajo presión reducida para dejar el clorhidrato de N- [5- (1-cloro-butil) -piridin-2-il] -2 , 2- dimetil-propionamida crudo como un sólido incoloro. A una solución de malonato de dietilo (1.31 g, 8.2 mmol) en dimetilformamida (20 mL) se adicionó hidruro 25 de sodio (dispersión al 60 % en aceite mineral, 350 mg, 8.7 ys¡& ... ».,..,.. S-MS-H mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. Después del enfriamiento a 0°C, la solución de clorhidrato de N- [5- (1-cloro-butil) -piridin-2-il] -2 , 2- dimetil-propionamida intermedia en dimetilformamida (5 mL) 5 se adicionó. Después de 1 hora de agitación, el solvente se concentró bajo presión reducida y se adicionó acetato de etilo (25 mL) seguido por solución de cloruro de amonio (media saturada para la neutralización. Las capas se separaron, la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo y 10 las capas orgánicas combinadas se lavaron tres veces con agua y salmuera, y se secaron. Después de que se concentró bajo presión reducida, el residuo se filtró a través de gel de sílice con mezcla de diclorometano/metanol (30:1) como solvente . 15 Este éster dietílico del ácido 2- {1- [6- (2 , 2- dimetil-propionilamino) -piridin-3-il] -butil] -malónico crudo se disolvió en una mezcla de diclorometano (2.5 mL) y etanol (5 mL a 0°C y se adicionó una solución de hidróxido de potasio (87 %, 111 mg, 5.4 mmol) en etanol (4 mL) . La 20 mezcla se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente y se continuó la agitación durante 24 horas. Luego, se adicionaron diclorometano (20 mL) agua (20 ml ) y salmuera (3 mL) . La mezcla se agitó vigorosamente durante 2 minutos. Luego, se separaron las capas, la capa acuosa se lavó con 25 diclorometano. Las capas acuosas combinadas se acidificaron • • '? Tffffifff™"aMgffla"M3-A < ¿-.M -. « * MM Ázk..í - - y.* (pH 5) con ácido cítrico, y se extrajeron tres veces con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron. La concentración bajo presión reducida dio el éster monoetílico del ácido 2- {1- [6- (2 , 2- dimetil-propionilamino) -piridin-3-il] -butil} -malónico crudo (258 mg, 41 %) . d) Ester etílico del ácido 2-{l- [6- (2 , 2-dimetil- propionilamino) -piridin-3-il] -butil} -acrílico A una solución del éster monoetílico del ácido 2- {1- [6- (2 , 2-dimetil-propionilamino) -piridin-3-il] -butil} - malónico (712 mg, 1.95 mmol) en THF (6.5 mL) a 0°C, se adicionó formaldehído (37 % en agua, 0.3 mL) en el espacio de 5 minutos. Se continuó la agitación durante 10 minutos, luego se adicionó gota a gota piperidina (0.26 mL, 2.63 mmol) en el espacio de 10 minutos. La mezcla se dejó calentar durante la noche a temperatura ambiente. Después de 14 horas la mezcla se concentró bajo presión reducida a un tercio de su volumen, luego se adicionaron éter y agua (15 mL cada uno) . Después de 2 minutos de agitación vigorosa, las capas se separaron, la capa acuosa se extrajo con éter y las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, ácido cítrico al 4 %, agua y salmuera. El secado y la concentración bajo presión reducida dio al éster etílico del ácido 2- {1- [6- (2 , 2-dimetil-propionilamino) -piridin-3- &.,. ¡ -z .1 ? . . -*. . : il] -butil}acrílico (550 mg, 85 %) como un sólido incoloro. (e) Ester etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- [6- (2 , 2-dimetil-propionilamino) -piridin-3-il] -hexanoico Se disolvió éster etílico del ácido 2- {1- [6- (2 , 2-dimetil-propionilamino) -piridin-3-il] -butil] acrílico (550 mg, 1.65 mmol) bajo argón en ácido tiolacético (4 mL) , y se adicionó gota a gota trietilamina (0.24 mL, 1.7 mmol). Después de la agitación durante 16 horas a 50°C, se adicionó ácido tiolacético (2 mL) y la agitación se continuó durante 14 horas. La solución se enfrió a temperatura ambiente y se neutralizó por adición de solución de carbonato ácido de sodio. La mezcla se extrajo tres veces con acetato de etilo, los extractos combinados se lavaron con solución de carbonato ácido de sodio y salmuera. Después del secado y concentración bajo presión reducida, el residuo se purificó por cromatografía instantánea (diclorometano/metanol, 60:1) para dar el éster etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- [6- (2 , 2-dimetil-propionilamino) -piridin-3-il] -hexanoico (619 mg, 92 %) como un aceite viscoso. (f ) Ácido 3- (6-amino-piridin-3-il) -2-mercaptometil-hexanoico Se disolvió el éster etílico del ácido 2- . La acetilsulfanilmetil-3- [6- (2 , 2-dimetil-propionilamino) -piridin-3-il] -hexanoico (40.4 mg. 99 µmol) bajo argón en ácido clorhídrico acuoso (37 %. 4.2 mL) y se calentó bajo reflujo durante 2 horas. La concentración bajo presión reducida (0.3 torr, 40°C) dio el compuesto del título como la sal de clorhidrato (28 mg, 97 %) . RMNA (300 MHz, D20) : d 7.86 (d, ÍH) , 7.65 (d, ÍH) , 7.02 (t, ÍH) , 2.98-2.42 (m, 4 H) , 1.85-1.54 (m, 2H) , 1.19-1.00 (m, 2H) , 1.19-1.00 (m, 2H) , 0.87-0.77 ( , 3H) . MS (+) 255 (M+l) .
Ejemplo 34 Ácido 3- (2-Amino-tiazol-5-il) -2-mercaptometil-propiónico (a) Ester dietílico del ácido 2- (2-amino-tiazol-5-ilmetilen) -malónico A una solución de 2-amino-tiazol-5-carbaldehído (47 %; 6 g; 23 mmol) en CH2C12 (30 mL) y DMF (30 mL) , se adicionaron tamices moleculares 4A, malonato de dietilo (3.5 mL; 23 mmol) piperidina (1.1 mL; 11.5 mmol) y ácido acético (0.7 mL; 11.5 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 96 horas. Luego, se adicionó EtOAc, y la mezcla de reacción se filtró a través de celita a fin de remover el precipitado formado. Se adicionó EtOAc (500 mL) al filtrado, y la fase orgánica se lavó con NaHC03 *&n& -jt i . sSJJf y salmuera. La fase orgánica se secó y se concentró para producir 4.9 g del producto crudo. La adición de éter de petróleo a una solución de producto crudo en metanol seguido por filtración dio el éster etílico del ácido 2- (2-amino-tiazol-5-ilmetilen) -malonico (1.13 g, 18 %) . (b) Ester dietílico del ácido 2- (2-annino-tiazol-5-ilmetil) -malónico Se adicionó NaCNBH3 (1.88 g; 29.9 mmol) a una solución agitada del éster dietílico del ácido 2-(2-amino-tiazol-5-ilmetil) -malónico (1.13 g; 4.2 mmol) en etanol a 0°C. El pH de la solución se monitoreo por adición de una pequeña cantidad de Verde de Bromocresol a la solución. El HCl concentrado se adicionó gota a gota hasta que la solución se volvió amarilla. Se removió el baño de hielo, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas. Se adicionó agua y el producto se extrajo con CHC12. Las fases orgánicas combinadas se sacaron y concentraron para producir el éster dietílico del ácido 2- (2-amino-tiazol-5-ilmetil) -malónico (1 g, 87.8 %). (c) Ester dietílico del ácido 2- (2-ter-butoxicarbonilammo-tiazol-5-ilmetil) -malónico Se adicionó B0C0 (0.6 g; 27.5 mmol) a una solución de trietilamina (0.4 mL; 30.1 mmol), 4- ""-" - (dimetilamino) piridina (0.34 g; 27.8 mmol) y éster dietílico del ácido 2- (2-amino-tiazol-5-ilmetil) -malónico (9.75 g; 27.5 mmol) en CH2C12 (5 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se adicionó BOC20 adicional (0.15 g; 0.7 mmol) a 0°C y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se adicionó a CH2C1 , y la fase orgánica se extrajo con KHS02 0.3 M y salmuera). La fase orgánica se secó y se concentró para producir 0.78 g del producto crudo. La RMN indicó que aproximadamente 40 % del éster dietílico del ácido 2- (2-amino-tiazol-5-ilmetil) -malónico permaneció. Se adicionó BOC20 (0.6 g; 27.5 mmol) a una solución del producto crudo (0.78 g) , trietilamina (0.4 mL; 30.1 mmol), 4- (dimetilamino) piridina (0.34 g; 27.8 mmol) en CH2C12 (5 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche y se repitió el procedimiento de tratamiento. El producto crudo (1 g) se purificó por cromatografía instantánea (Heptanos/EtOAc ; 1:1) y HPLC para dar el éster dietílico del ácido 2-(2-ter-butoxicarbonilamino-tiazol-5-ilmetil) -malónico (184 mg, 17.9 %) . (d) Ester monoetílico del ácido 2- (2-ter-butoxicarbonilamino-tiazol-5-ilmetil) -malónico Se disolvió el éster dietílico del ácido 2-(2- ter-butoxicarbonilamino-tiazol-5-ilmetil) -malónico (158 mg; 0.43 mmol) en etanol (1 mL) y THF (0.5 mL) , y se adicionó una solución de KOH (24 mg; 0.43 mmol) en etanol (0.14 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 96 horas, y luego se invirtió en agua con hielo. La fase acuosa se extrajo con éter dietílico, se acidificó a PH 3 por adición de HCL 0.5 M y se extrajo con éter dietílico. Las fases orgánicas combinadas se secaron y concentraron para producir el éster monoetílico del ácido 2- (2-ter-butoxicarbonilamino-tiazol-5-ilmetil) -malónico (97 mg, 66.4 %) . (e) Ester etílico del ácido 2- (2-ter-butoxicarbonilamino-tiazol-5-ilmetil) -acrílico A una mezcla del éster monoetílico del ácido 2- (2-ter-butoxicarbonilamino-tiazol-5-ilmetil) -malónico (94 g; 0.27 mmol), se adicionó una solución acuosa al 36 % de formaldehído (36 µl ; 1.2 mmol), CH2C12 (0.2 mL) y agua (0.2 mL) a 0°C, dietilamina (30 µl ; 0.40 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche, se vertió en agua con hielo y se extrajo en CH2C12. Las fases orgánicas se lavaron con NaHC03 al 5 %, se secaron y concentraron para producir el éster etílico del ácido 2- (2-ter-butoxicarbonilamino-tiazol-5-ilmetil) -acrílico (69 mg, 80.9 %) .
AA.A'. (f) Ester etílico del ácido 2-acetilsulfanilmetil-3- (2-ter- butoxicarbonilamino-tiazol-5-il ) -propiónico Se adicionó trietilamina (32 µl ; 0.23 mmol) a una solución del éster etílico del ácido 2-(2-ter- butoxicarbonil-amino-tiazo-5-ilmetil) -acrílico (67 mg; 0.21 mmol) en ácido tioacético (0.4 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 48 horas y luego se vertió en agua con hielo. La capa acuosa se extrajo con CH2C12 • Las fases orgánicas combinadas se lavaron con NaHC03 saturado, se secaron y concentraron para producir 190 mg del producto crudo. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (Heptano/EtOAc : 1:0 ? 68:32) para producir el éster etílico del ácido 2- acetilsulfanilmetil-3- (2-ter-butoxicarbonil-amino-tiazol-5- il) -propionico (43 mg, 51.6 %) . (g) Acido 3- (2-amino-tiazol-5-il) -2-mercaptometil- propiónico Una solución del éster etílico del ácido 2- acetilsulfanilmeti1-3- (2-ter-butoxicarbonilamino-tiazol-5- il) -propiónico (43 mg; 0.11 mmol) en HCl concentrado (1.5 mL) se sometió a reflujo bajo argón durante 1.5 horas. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida para producir 30 mg del S ? >-» *•«. - -i *.í- . producto crudo. El producto crudo se purificó por HPLC preparativa para dar el compuesto del título (8 mg; 21 %) como la sal de clorhidrato. RMNA (500 MHz, D20) : d 2.75-3.1 (m, 5H) , 7.0 (br s, ÍH) . MS (+) 219 (M+l) .
Abreviaciones Ac = acetato Acu= acuoso AIBN = cc, a' -azoisobutironitrilo Bn = bencilo Bu = butilo Bz = benzoilo DCC = diciciohexilcarbodiimida DIAD = azodicarboxilato diísopropilo DIPEA = diisopropiletilamina DMAP = N,N-dimetil-amino-piridina DME = 1 , 2 -dimetoxietano DMF = dimetilformamida DMSO = dimetiisulfóxido EDC = 1- (3-dimetilaminopropil) -3-etilcarbodiimida ee = exceso enantiomérico Et = etilo EtOAc = acetato de etilo EtOH = etanol h = hora HOAC = ácido acético HOBt = 1-hidroxibenzotriazol HPLC = cromatografía líquida de alto desempeño KHMDS = bis ( trimetilsilil) amida potásica LDA = diisopropilamida de litio MCPBA = ácido 3-cloroperbenzoico Me = metilo MeOH = metanol min = minutos PMB = 4-metoxibencilo Ph = fenilo Pr = propilo PyBOP = hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi) tripirrolidinofosfonio TEA = trietilamina TFA = ácido trifluoroacético THF = tetrahidrofurano Tos = tolueno-4-sulfanio Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención. i.^.i^..

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones: 1 . Un compuesto de la formula general I Rl X R2 Y^RS (I) R4 o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, o un solvato de esta sal, caracterizado porque: Ri representa, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, sustituido con 1 o más grupos básicos tal como amino, amidino y/o guanidino; cicloalquilo, sustituido con uno o más grupos básicos tal como amino, amidino y/o gunanidino; heterociclilo, que contiene al menos un átomo de nitrógeno; heterociclilo, que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de S u O, y sustituido con uno o más grupos básicos tal como amino, amidino y/o guanidino; o arilo, sustituido con uno o más grupos básicos tal como amino, amidino y lo guanidino, R2 representa H, acilo, acilamino, alquilo, alquilcarbamoilo, alquiltio, alcoxi, aroilo, aroilamino, ariloxi, ariltio, amidino, amino, arilo, carbamoilo, carboxi, ciano, cicloalquilo, formilo, guanidino, halógeno, heterociclilo, hidroxi, oxo, nitro, tilo, Z2N-CO-0- , ZO-CO-NZ- o Z2N-CO-NZ-, R3 representa COOR5, SO(OR5), SO3R5, P=0(OR5)2, B(OR5)2/ P=OR5(OR5), o tetrazol, o cualquier isostero de ácido carboxílico, R4 representa SH, S-CO-C?-C6 alquilo o S-CO-arilo, 5 R5 representa H, alquilo 1 a 6 átomos de carbono arilo, R6 representa H alquilo 1 a 6 átomos de carbono, X representa 0, S, SO, S02, C(Z)2, N(Z), NR6S02, S02NR6 NR6C0 or C0NR6 , 10 Y representa C(Z)2, Z representa independientemente H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, arilo, cicloalquilo o heterociclilo. 2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una sal o solvato farmacéuticamente 15 aceptable del mismo, o un solvato de esta sal, caracterizado porque: Ri representa, cicloalquilo, sustituido con uno o más grupos básicos tal como amino, amidino y/o guanidino; heterociclilo, que contiene al menos un átomo de nitrógeno; 20 heterociclilo, que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de S u O, y sustituido con uno o más grupos básicos tal como amino, amidino y/o guanidino; o arilo, sustituido con uno o más grupos básicos tal como amino, amidino y/o guanidino; 25 R2 representa H, un grupo acilo, acilamino, ^^^ jj ?¿gME a? alquilo, alquilcarbamoilo, alquiltio, alcoxi, aroilo, aroilamino, ariloxi, ariltio, amidino, amino, arilo, carbamoilo, carboxi, ciano, cicloalquilo, formilo, guanidino, halógeno, heterociclilo, hidroxi, oxo, nitro, tiol, Z2N-CO-0, ZO-CO-NZ- o Z2N-CO-NZ-, R3 representa COOR5, R4 representa SH, S-CO-Ci-Cd alquilo o S-CO-arilo, R5 representa H, alquilo 1 a 6 átomos de carbono, arilo, R6 representa H o alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, X representa O, S, SO, S02 C(Z)2, N(Z), NR6S02, S02NR6, o CONR6, Y representa C(Z) , Z representa independientemente H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, arilo, cicloalquilo o heterociclilo. 3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, o un solvato de esta sal, caracterizado porque. Ri representa, cicloalquilo, sustituido con uno o más grupos básicos tal como amino, amidino y/o guanidino; heterociclilo, que contiene al menos un átomo de nitrógeno; heterociclilo, que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de S u O, y sustituido con uno o más grupos básicos tal como amino, amidino y/o guanidino; R2 representa H, alquilo de 1 a 3 átomos de carbono, amino, halógeno, hidroxi, R3 representa COOR5, R4 representa SH, S-CO-C?-C6 alquilo o S-CO-arilo, R5 representa H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono o arilo, X representa C(Z)2, Y representa C(Z)2, Z representa independientemente H o alquilo de 1 a 6 átomos de carbono . 4. El compuesto de conformidad con cualquier reivindicación anterior, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, o un solvato de esta sal, caracterizado porque, Ri representa, cicloalquilo sustituido con uno o más grupos básicos tal como amino, amidino y/o guanidino; heterociclilo, que contiene al menos un átomo de nitrógeno; R2 representa H, F, o alquilo Ci, R3 representa COOR5, R4 representa SH, S-CO-C?-C6 alquilo o S-CO-arilo, R5 representa H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono o arilo, X representa C(Z)2, Y representa C(Z)2, Z representa independientemente H o alquilo de 1 a 6 átomos de carbono . 5. El compuesto de conformidad con cualquier reivindicación previa, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, o un solvato de esta sal, caracterizado porque: Ri representa ciclopentilo, piridilo, pirimidinilo, piperidinilo o tiazolilo, R2 representa H, F o alquilo Ci R3 representa COOR5 R representa SH, R5 representa H, X representa CHZ, Y representa CHZ, Z representa independientemente H o alquilo de 1 a 6 átomos de carbono. 6. Un proceso para la preparación de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde Ri, R3 , R4 y Y son como se definen en la reivindicación 1 y X es C(Z)2 y R2 es H, caracterizado porque comprende los pasos de: hacer reaccionar un compuesto de la Fórmula VI, —t-rB"a*- R1 (VI) Y^R3 en donde Rl t R Y son como se definen en la reivindicación 1 y X es C(Z)2, con un compuesto de la fórmula IX, 10 R5-SH (IX) en donde R5 es un grupo protector adecuado, tal como Ac, Bz, PMB o Bn, solo o en la presencia de una base adecuada, tal como NaOMe, NaH o trietilamina o alternativamene en la 15 presencia de un iniciador de radicales libres, tal como AIBN bajo condiciones normales. 7. Un proceso para la preparación de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde Rl t R2, R3 y R4 son como se definen en la 20 reivindicación 1 e Y es CH2 y X es O, S, C(Z)2, o N(Z), caracterizado porque comprende el paso de: hacer reaccionar un compuesto de la Formula XIV, en donde Ri, R2 y R3 son como se definen en la reivindicación 1 y X es 0, S, C(Z)2, o N(Z), con un compuesto de la Formula general IX, R5-SH (IX) en donde R5 es un grupo protector adecuado, tal como Ac o Bz, en la presencia de un reactivo adecuado tal como PPh/DIAD, bajo condiciones normales. 8. Un proceso para la preparación de un compuesto de acuerdo con una de las reivindicaciones 1-5, en donde Ri, R2, r3 , R4 e Y son como se definen en la reivindicación 1 y X es NR6C0, o NR6S02 caracterizado porque comprende el paso de: hacer reaccionar un compuesto de la Formula general XV R6HH><R2 ? Y R3 I SR5 en donde R2, R3, R6 y Y son como se definen en la reivindicación 1 y R5 es un grupo protector adecuado, tal como Ac, Bz, PMB o Bn, con un compuesto de la fórmula general XVI, ^^^^i -¡i-¿Jk-- &- M»a i ^ - ^ Rl - X (XVI) en donde Ri es como se define en la reivindicación 1 y X es COOH o S02C1 en la presencia de reactivos de acoplamiento adecuados, tal como PyBOP/DIPEA, DCC/HOBt, EDC/TEA/DMAP o piridina, bajo condiciones normales. 9. Una formulación farmacéutica caracterizada porque contiene un compuesto de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, como un ingrediente activo en combinación con un adyuvante, diluyente portador farmacéuticamente aceptable. 10. El uso de un compuesto de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 en terapia. 11. El uso de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para la elaboración de un medicamento para la inhibición de carboxipeptidasa U. 12. Un método para el tratamiento o profilaxis de condiciones asociadas con la inhibición de carboxipeptidasa U, caracterizado porque comprende administrar a un mamífero, incluyendo el hombre, en necesidad de este tratamiento, y una cantidad efectiva de un compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-5. is- -..4. tzA.sezi.ji- 13. Una formulación farmacéutica para el uso de tratamiento o profilaxis de condiciones asociadas con la inhibición de carboxipeptidasa U, caracterizada porque comprende un compuesto como se define en cualquiera de las 5 reivindicaciones 1-5 en combinación con un adyuvante, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable. 14. Una formulación farmacéutica, caracterizada porque comprende : (i) un compuesto de la Formula I o una sal o 10 solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, o un solvato de esta sal y (ii) uno o más agentes anti-trombóticos con un mecanismo diferente de acción, tal como un agente antiplaquetas, inhibidor del receptor de tromboxano, inhibidor 15 de sintetasa antagonista del receptor de fibrinógeno, producto imitador de prostaciclina, inhibidor de fosfodiasterasa o antagonista del receptor de ADP (P2T) , en mezcla con un adyuvante, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable. 20 15. Un equipo de partes, caracterizado porque comprende : (i) una formulación farmacéutica que contiene un compuesto de la Formula I, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, o un solvato de 25 esta sal, en mezcla con un adyuvante, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable; y (ii) una formulación farmacéutica que contiene uno o más agentes anti-trombóticos con un mecanismo diferente de acción, tal como un agente anti-plaquetas, inhibidor del receptor de tromboxano, inhibidor de sintetasa, antagonista del receptor de fibrinógeno, producto de imitación de prostaciclina, inhibidor de fosfodiesterasa o antagonista del receptor de ADP (P2T) , en mezcla con un adyuvante, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable; compuesto (i) y agente (ii) que se proporcionan cada uno en la forma que es adecuada para la administración en unión entre sí. 16. Un método para el tratamiento de un paciente que sufre de, o esta susceptible a, una condición en la cual se requiere o desea la inhibición de la carboxipeptidasa O y un mecanismo anti-trombótico diferente, método que esta caracterizado porque comprende administrar al paciente una cantidad total terapéuticamente efectiva de: (i) un compuesto de la Formula I, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, o un solvato de esta sal, en mezcla con un adyuvante, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable, en unión con (ii) uno o más agentes anti-trombóticos con un mecanismo diferente de acción, tal como un agente antiplaquetas, inhibidor de receptor en tromboxano, inhibidor de sintetasa, antagonista de receptor de fibrinógeno, producto imitador de prostaciclina, inhibidor de fosfodiesterasa o antagonista de receptor de ADP (P2T) , en mezcla con un adyuvante, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable. 17. Un método para el tratamiento de un paciente que sufre de, o esta susceptible a, una condición en la cual se requiere o desea la inhibición de carboxipeptidasa U y un mecanismo anti-trombótico diferente, método que esta caracterizado porque comprende administrar al paciente una formulación como se define en la reivindicación 14.
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