SK15462001A3 - Deriváty etántiolu, spôsoby ich prípravy, farmaceutické prípravky s ich obsahom a ich použitie na liečenie - Google Patents

Deriváty etántiolu, spôsoby ich prípravy, farmaceutické prípravky s ich obsahom a ich použitie na liečenie Download PDF

Info

Publication number
SK15462001A3
SK15462001A3 SK1546-2001A SK15462001A SK15462001A3 SK 15462001 A3 SK15462001 A3 SK 15462001A3 SK 15462001 A SK15462001 A SK 15462001A SK 15462001 A3 SK15462001 A3 SK 15462001A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
tert
mmol
pyridin
amino
added
Prior art date
Application number
SK1546-2001A
Other languages
English (en)
Inventor
Marcel Linschoten
Magnus Polla
Peder Svensson
Original Assignee
Astrazeneca Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Astrazeneca Ab filed Critical Astrazeneca Ab
Publication of SK15462001A3 publication Critical patent/SK15462001A3/sk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/55—Protease inhibitors
    • A61K38/57—Protease inhibitors from animals; from humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/06—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D211/08—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to ring carbon atoms
    • C07D211/18—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D211/34—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms with hydrocarbon radicals, substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrocarbon radicals, substituted by hetero atoms, attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/54—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/55—Acids; Esters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings
    • C07D277/20—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D277/22—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D277/30—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Thiazole And Isothizaole Compounds (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Use Of Switch Circuits For Exchanges And Methods Of Control Of Multiplex Exchanges (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Description

Predložený vynález sa týka derivátov etántiolu a ich farmaceutický prijateľných solí, ktoré inhibujú základné karboxypeptidázy, špecifickejšie karboxypeptidázy U, a teda sa môžu použiť pri prevencii a liečení ochorení, pri ktorých je užitočná inhibícia karboxypeptidázy U. Predložený vynález sa ďalej týka zlúčenín na použitie pri liečení; spôsobov prípravy takýchto zlúčenín; farmaceutických prípravkov, ktoré ako účinnú zložku obsahujú najmenej jednu zlúčeninu podľa vynálezu alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ; a použitia účinných zlúčenín pri výrobe liečiv na ďalej uvedené medicínske použitie..
Doterajší stav techniky
Fibrinolýza je výsledkom sérií enzymatických reakcií, ktoré majú za následok degradáciu fibrínu vplyvom plazmínu. Aktivácia plazminogénu je ústredným procesom pri fibrinolýze. Štiepenie plazminogénu za vzniku plazmínu je sprevádzané plazminogénnymi aktivátormi, tkanivovo-typovým plazminogénnym aktivátorom (t-PA) alebo urokinázovo-typovým plazminogénnym aktivátorom (uPA). Počiatočná plazmínová degradácia fibrínu generuje karboxy-terminálne lyzínové zvyšky, ktoré sú vysoko afinitnými väzbovými miestami pre plazminogén. Pretože plazminogén viazaný ku fibrínu sa oveľa ľahšie aktivuje na plazmín než voľný plazminogén, tento mechanizmus poskytuje pozitívnu reguláciu spätnej väzby fibrinolýzy.
Jedným z endogénnych inhibítorov pre fibrinolýzu je karboxypeptidáza U (CPU). CPU je tiež známe ako karboxypeptidáza B plazmy, aktívny trombínom aktivovateľný inhibítor fibrinolýzy (TAFIa), karboxypeptidázy R a indukovateľnej aktivity karboxypeptidázy. CPU sa tvorí počas koagulácie a fibrinolýzy zo svojho prekurzora proCPU účinkom proteolytických enzýmov, napríklad trombínu, komplexu trombínu-trombomodulínu alebo plazmínu. CPU štiepi základné aminokyseliny na karboxy-terminálnych fragmentoch fibrínu. Strata karboxyterminálnych lyzínov a tým väzbových miest lyzínu pre plazminogén slúži potom na inhibíciu fibrinolýzy.
-2Inhibovaním straty lyzínových väzbových miest pre plazminogén a teda zvýšenie rozsahu tvorby plazmínu, účinných inhibítorov karboxypeptidázy U by sa dalo očakávať uľahčenie fibrinolýzy.
Kyselina 2-merkaptometyl-3-guanidinoetyltiopropánová sa uvádza ako inhibítor karboxypeptidázy N. Pred nedávnom bola táto zlúčeniná opísaná, že inhibuje CPU, Hendriks, D. a kol., Biochimica et Biophysica Acta, 1034 (1990) 86 92.
Kyselina guanidinoetylmerkaptojantárová sa uvádza ako inhibítor karboxypeptidázy N. Pred nedávnom bola táto zlúčenina opísaná, že inhibuje CPU, Eaton, D. L., a kol., The Journal of Biological Chemistry. 266 (1991) 21833 21838.
Podstata vynálezu
Prekvapujúco sa zistilo, že zlúčeniny vzorca I sú predovšetkým účinné ako inhibítory karboxypeptidázy U a tým využiteľné ako liečivá na liečenie alebo profylaxiu stavov, pri ktorých je užitočná inhibícia karboxypeptidázy U.
Predložený vynález sa teda týka zlúčenín všeobecného vzorca I
R i s.
Xx5
Y R R (I) alebo ich farmaceutický prijateľnej soli alebo solvátu alebo solvátu takejto soli, kde R1 predstavuje
CrCe-alkylovú skupinu, substituovanú jednou alebo viacerými zásaditými skupinami, ako je aminoskupina, amidinoskupina a/alebo guanidinoskupina;
-3cykloalkylovú skupinu, substituovanú jednou alebo viacerými zásaditými skupinami, ako je aminoskupina, amidinoskupina a/alebo guanidinoskupina;
heterocyklylovú skupinu, obsahujúcu najmenej jeden atóm dusíka;
heterocyklylovú skupinu, obsahujúcu najmenej jeden heteroatóm zvolený z S alebo O, a substituovanú jednou alebo viacerými zásaditými skupinami, ako je aminoskupina, amidinoskupina a/alebo guanidinoskupina;
alebo arylovú skupinu, substituovanú jednou alebo viacerými zásaditými skupinami, ako je aminoskupina, amidinoskupina a/alebo guanidinoskupina,
R2 predstavuje atóm vodíka, acylovú skupinu, acylaminoskupinu, alkylovú skupinu, alkylkarbamoylovú skupinu, alkyltioskupinu, alkoxyskupinu, aroylovú skupinu, aroylaminoskupinu, aryloxyskupinu, aryltioskupinu, amidinoskupinu, aminoskupinu, arylovú skupinu, karbamoylovú skupinu, karboxylovú skupinu, kyanoskupinu, cykloalkylovú skupinu, formylovú skupinu, guanidinoskupinu, halogén, heterocyklylovú skupinu, hydroxylovú skupinu, oxoskupinu, nitroskupinu, tiolovú skupinu, skupinu Z2N-CO-O-, ZO-CO-NZ- alebo Z2N-CO-NZ-,
R3 predstavuje COOR5, SO(OR5), SO3R5, P=O(OR5)2, B(OR5)2, P=OR5(OR5) alebo tetrazol, alebo akýkoľvek izostér karboxylovej kyseliny,
R4 predstavuje SH, S-CO-Ci-C6-alkylovú skupinu alebo S-CO-arylovú skupinu,
R5 predstavuje atóm vodíka, Ci-C6-alkylovú skupinu alebo arylovú skupinu,
R6 predstavuje atóm vodíka alebo CrCô-alkylovú skupinu,
X predstavuje O, S, SO, SO2, C(Z)2, N(Z), NR6SO2, SO2NR6, NR6CO alebo CONR6,
Y predstavuje C(Z)2,
-4Z predstavuje nezávisle atóm vodíka, Ci-C6-alkylovú skupinu, arylovú skupinu, cykloalkylovú skupinu alebo heterocyklylovú skupinu.
Výhodnými zlúčeninami podľa predloženého vynálezu sú také zlúčeniny vzorca I, alebo ich farmaceutický prijateľná soľ alebo solvát alebo solvát takejto soli, v ktorých
R1 predstavuje cykloalkylovú skupinu, substituovanú jednou alebo viacerými zásaditými skupinami, ako je aminoskupina, amidinoskupina a/alebo guanidinoskupina;
heterocyklylovú skupinu, obsahujúcu najmenej jeden atóm dusíka;
heterocyklylovú skupinu, obsahujúcu najmenej jeden heteroatóm zvolený z S alebo O, a substituovanú jednou alebo viacerými zásaditými skupinami, ako je aminoskupina, amidinoskupina a/alebo guanidinoskupina;
alebo arylovú skupinu, substituovanú jednou alebo viacerými zásaditými skupinami, ako je aminoskupina, amidinoskupina a/alebo guanidinoskupina,
R2 predstavuje atóm vodíka, acylovú skupinu, acylaminoskupinu, alkylovú skupinu, alkylkarbamoylovú skupinu, alkyltioskupinu, alkoxyskupinu, aroylovú skupinu, aroylaminoskupinu, aryloxylovú skupinu, aryltioskupinu, amidinoskupinu, aminoskupinu, arylovú skupinu, karbamoylovú skupinu, karboxylovú skupinu, kyanoskupinu, cykloalkylovú skupinu, formylovú skupinu, guanidinoskupinu, halogén, heterocyklylovú skupinu, hydroxylovú skupinu, oxoskupinu, nitroskupinu, tiolovú skupinu, skupinu Z2N-CO-O-, ZO-CO-NZ- alebo Z2N-CO-NZ-,
R3 predstavuje COOR5,
R4 predstavuje SH, S-CO-CrCg-alkylovú skupinu alebo S-CO-arylovú skupinu,
-5R5 predstavuje atóm vodíka, C-ι-C6-alkylovú skupinu alebo arylovú skupinu,
R6 predstavuje atóm vodíka alebo Ci-C6-alkylovú skupinu,
X predstavuje O, S, SO, SO2, C(Z)2, N (Z), NR6SO2i SO2NR6 alebo CONR6,
Y predstavuje C(Z)2) ;
Z predstavuje nezávisle atóm vodíka, Ci-C6-alkylovú skupinu, arylovú skupinu, cykloalkylovú skupinu alebo heterocyklylovú skupinu.
Výhodnejšími zlúčeninami podľa predloženého vynálezu sú také zlúčeniny vzorca I, alebo ich farmaceutický prijateľná soľ alebo solvát, alebo solvát takejto soli, v ktorých
R1 predstavuje, cykloalkylovú skupinu, substituovanú jednou alebo viacerými zásaditými skupinami, ako je aminoskupina, amidinoskupina a/alebo guanidinoskupina;
heterocyklylovú skupinu, obsahujúcu najmenej jeden atóm dusíka;
heterocyklylovú skupinu, obsahujúcu najmenej jeden heteroatóm zvolený z S alebo O, a substituovanú jednou alebo viacerými zásaditými skupinami, ako je aminoskupina, amidinoskupina a/alebo guanidinoskupina;
R2 predstavuje atóm vodíka, Ci-C3-alkylovú skupinu, aminoskupinu, halogén alebo hydroxylovú skupinu,
R3 predstavuje COOR5,
R4 predstavuje SH, S-CO-CrCô-alkylovú skupinu alebo S-CO-arylovú skupinu, R5 predstavuje atóm vodíka, Ci-C6-alkylovú skupinu alebo arylovú skupinu,
X predstavuje C(Z)2,
Y predstavuje C(Z)2,
-6Z predstavuje nezávisle atóm vodíka alebo Ci-C6-alkylovú skupinu.
Ešte výhodnejšími zlúčeninami podľa predloženého vynálezu sú také zlúčeniny vzorca I, alebo ich farmaceutický prijateľná soľ alebo solvát, alebo a solvát takejto soli, v ktorých
R1 predstavuje, cykloalkylovú skupinu, substituovanú jednou alebo viacerými zásaditými skupinami, ako je aminoskupina, amidinoskupina a/alebo guanidinoskupina;
heterocyklylovú skupinu, obsahujúcu najmenej jeden atóm dusíka;
R2 predstavuje vodík, fluór alebo Ci-alkylovú skupinu,
R3 predstavuje COOR5,
R4 predstavuje SH, S-CO-CrCe-alkylovú skupinu alebo S-CO-arylovú skupinu,
R5 predstavuje atóm vodíka, C;-C6-alkýlovú skupinu alebo arylovú skupinu,
X predstavuje C(Z)2,
Y predstavuje C(Z)2,
Z predstavuje nezávisle atóm vodíka alebo C-i-C6-alkylovú skupinu.
Najvýhodnejšími zlúčeninami podľa predloženého vynálezu sú také zlúčeniny vzorca I alebo ich farmaceutický prijateľná soľ alebo solvát, alebo solvát takejto soli, v ktorých
R1 predstavuje cýklopentyl, pyridyl, pyrimidinyl, piperidinyl alebo tiazolyl;
R2 predstavuje atóm vodíka, fluór alebo C^alkylovú skupinu,
R3 predstavuje COOR5,
R4 predstavuje SH,
-Ί R5 predstavuje atóm vodíka,
X predstavuje CHZ,
Y predstavuje CHZ,
Z predstavuje nezávisle atóm vodíka alebo Ci-C6-alkylovú skupinu.
V celom opise a v priložených patentových nárokoch sa budú používať nasledujúce definície:
Termín zásaditá skupina označuje zásaditú skupinu, kde konjugovaná kyselina uvedenej zásaditej skupiny má hodnotu pKa od približne -5 do asi 25, výhodne od 1 do 15.
Termín izostér karboxylovej kyseliny označuje kyslú skupinu, ktorá má hodnotu pKa od približne -5 do asi 25, výhodne od 1 do 15.
Termín Ci-C6-alkylová skupina označuje lineárnu alebo rozvetvenú, nasýtenú alebo nenasýtenú, substituovanú alebo nesubstítuovanú alkylovú skupinu, ktorá obsahuje 1 až 6 atómov uhlíka v reťazci, pričom alkylová skupina môže byť prípadne prerušená jedným alebo viacerými heteroatómami, ktoré sú zvolené z O, N alebo S. Príklady uvedenej alkylovej skupiny zahrňujú, ale nie sú obmedzené na, metyl, etyl, etenyl, etinyl,. n-propyl, /'zo-propyl, propenyl, /zopropenyl, propinyl, n-butyl, /zo-butyl, sek-butyl, ŕerc-butyl, butenyl, /zo-butenyl, butinyl, a pentyl a hexyl s lineárnym a rozvetveným reťazcom.
Termín CrC3-alkylová skupina označuje lineárnu alebo rozvetvenú, nasýtenú alebo nenasýtenú, substituovanú alebo nesubstítuovanú alkylovú skupinu, ktorá obsahuje 1 až 3 atómy uhlíka v reťazci, pričom alkylová skupina môže byť prípadne prerušená jedným alebo viacerými heteroatómami, ktoré sú zvolené z O, N alebo S. Príklady uvedenej alkylovej skupiny zahrňujú, ale nie sú obmedzené na, metyl, etyl, etenyl, etinyl, n-propyl, /zo-propyl, propenyl, /zopropenyl, propinyl.
-8Termín Ci-alkylová skupina označuje substituovanú alebo nesubstituovanú alkylovú skupinu, ktorá obsahuje 1 atóm uhlíka. Príklad uvedenej alkylovej skupiny zahrňuje, ale nie je obmedzený na, metyl,
Termín Ci-C6-alkoxylová skupina označuje alkyl-O-skupinu, pričom CrC6alkyl je definovaný vyššie.
Termín CrCg-alkoxylová skupina označuje alkyl-O-skupinu, pričom C1-C3alkyl je definovaný vyššie.
Termín heterocyklylová skupina označuje substituovaný alebo nesubstituovaný, 4- až 10-členný monocyklický alebo multicyklický kruhový systém, v ktorom jeden alebo viac z atómov kruhu alebo kruhov predstavuje iný prvok ako uhlík, napríklad dusík, kyslík alebo síra, predovšetkým 4-, 5- alebo 6-členné aromatické alebo alifatické heterocyklické skupiny, a zahrňuje, ale nie je obmedzený na, azetidínovú, furánovú, tiofénovú, pyrolovú, pyrolínovú, pyrolidínovú, dioxolánovú, oxatiolánovú, oxazolánovú, oxazolovú, tiazolovú, imidazolovú, imidazolínovú, imidazolidínovú, pyrazolovú, pyrazolínovú, pyrazolidínovú, izoxazolovú, izotiazolovú, oxadiazolovú, furazanovú, triazolovú, tiadiazolovú, pyránovú, pyridínovú, piperidínovú, dioxánovú, morfolínovú, ditiánovú, oxatiánovú, tiomorfolínovú, pyridazínovú, pyrimidínovú, pyrazínovú, piperazínovú, triazínovú, tiadiazínovú, ditiazínovú, azaindolovú, azaindolínovú, indolovú, indolínovú, naftyridínovú skupinu, a treba rozumieť, že zahrňuje všetky izoméry vyššie uvedených skupín. Termín ''azetidinyľ je napríklad potrebné rozumieť tak, že zahrňuje 2- a 3-izoméry a termíny pyridyl a piperidinyľ je napríklad potrebné rozumieť tak, že zahrňuje 2-, 3- a 4-izoméry.
Termín cykloalkylová skupina označuje nasýtený alebo nenasýtený, substituovaný alebo nesubstituovaný, nearomatický kruh obsahujúci 3, 4, 5, 6 alebo 7 atómov uhlíka, a zahrňuje, ale nie je obmedzený na, cyklopropylovú, cyklobutylovú, cyklopentylovú, cyklohexylovú, cykloheptylovú, cyklobutenylovú, cyklopentenylovú, cyklohexenylovú, cykloheptenylovú, cyklopentadienylovú, cyklohexadienylovú a cykloheptadienylovú skupinu.
Termín halogén zahrňuje skupiny fluóru, chlóru, brómu a jódu.
-9Termín arylová skupina označuje substituovaný alebo nesubstituovaný ΟεC-i4-aromatický uhľovodík a zahrňuje, ale nie je obmedzený na, fenyl, naftyl, indenyl, antracenyl, fenantrenyl a fluorenyl.
Termín aryloxylová skupina označuje aryl-O-skupinu, pričom aryl je definovaný vyššie.
Termín acylová skupina označuje alkyl-CO-skupinu, pričom alkyl je definovaný vyššie.
Termín aroylová skupina označuje aryl-CO-skupinu, pričom aryl je definovaný vyššie.
Termín alkyltioskupina označuje alkyl-S-skupinu, pričom alkyl jé definovaný vyššie.
Termín aryltioskupina označuje aryl-S-skupinu, pričom aryl je definovaný vyššie.
Termín aroylaminoskupina označuje aroyl-N(Z)-skupinu, pričom aroyl a Z sú definované vyššie.
Termín acylaminoskupina označuje acyl-N(Z)-skupinu, pričom acyl a Z sú definované vyššie.
Termín karbamoylová skupina označuje H^N-CO-skupinu.
Termín alkylkarbamoylová skupina označuje Z2N-CO-skupinu, pričom Zje definované vyššie.
Termín substituovaný označuje Ci-alkylovú skupinu, CrC3-alkylovú skupinu, Ci-C6-alkylovú skupinu, cykloalkylovú skupinu“, heterocyklylovú skupinu alebo arylovú skupinu, definované vyššie, ktoré sú substituované jednou alebo viacerými skupinami, ako je acylová skupina, acylaminoskupina, alkylová skupina, alkylkarbamoylová skupina, alkyltioskupina, alkoxyskupina, aroylová skupina, aroylaminoskupina, aryloxyskupina, aryltioskupina, amidinoskupina, aminoskupina, arylová skupina, karbamoylová skupina, karboxylová skupina, kyanoskupina, cykloalkylová skupina, formylová skupina, guanidínová skupina,
-10halogén, heterocyklylová skupina, hydroxylová skupina, oxoskupina, nitroskupina, tiolová skupina, tioskupina, skupina Z2N-CO-O-, ZO-CO-NZ- alebo skupina Z2NCO-NZ-.
Okrem toho, zlúčeniny vzorca I, v ktorom R4 znamená merkaptoskupinu, môžu byť prítomné vo forme diméru, ktorý je viazaný prostredníctvom väzby -S-S-, ktoré sú taktiež zahrnuté do rozsahu tohto vynálezu.
Do rozsahu predloženého vynálezu sú taktiež zahrnuté čisté enantioméry, racemické zmesi a nerovnorodé zmesi dvoch enantiomérov. Je tiež potrebné si uvedomiť, že všetky možné diastereoizomérne formy spadajú do rozsahu predloženého vynálezu. Do rozsahu predloženého vynálezu sú zahrnuté tiež deriváty zlúčenín vzorca I, ktoré majú biologickú funkciu zlúčenín vzorca I, ako sú prekurzory.
V závislosti od podmienok spracovania sa zlúčeniny všeobecného vzorca I sa môžu získať v neutrálnej forme alebo vo forme soli, alebo vo forme solvátu, napríklad hydrátu a všetky spadajú do rozsahu predloženého vynálezu.
Príprava
Predložený vynález sa tiež týka spôsobu A až C na prípravu zlúčenín všeobecného vzorca I.
Spôsob A
Spôsob A na prípravu zlúčenín všeobecného vzorca I, kde R1, R3, R4.a Y sú definované vyššie a R2 znamená vodík a X predstavuje C(Z)2, zahrňuje nasledujúce kroky:
a) Zlúčeniny všeobecného vzorca II,
R1-X-OH (II), kde R1 má význam definovaný vo vzorci I a X predstavuje C(Z)2, ktoré sú buď komerčne dostupné alebo sa môžu získať s použitím známych metód, môžu sa konvertovať na zlúčeniny všeobecného vzorca III,
-11 R1-X-L (III), kde L znamená vhodnú odstupujúcu skupinu, ako chlór, bróm, jód, triflát alebo tozyl, pri štandardných podmienkach s použitím vhodného reakčného činidla, ako je PPh3/CBr4, TosCI/pyridín alebo (CF3SO2)2O/TEA.
b) Zlúčeniny všeobecného vzorca III sa potom môžu nechať reagovať s zlúčeninami všeobecného vzorca IV, ŕ
HOOC^R6 (IV), kde R2 a R3 majú význam definovaný vo vzorci I, ktoré sú buď komerčne dostupné alebo sa môžu získať s použitím známych metód, v prítomnosti vhodnej zásady, ako je K2CO3 alebo NaH, pri štandardných podmienkach, za vzniku zlúčenín všeobecného vzorca V.
R
I 2
V,
HOOC; R (V),
c) Zlúčeniny všeobecného vzorca V, v ktorom R1 a R3 majú významy definované vo vzorci I a X znamená C(Z)2 a R2 predstavuje H, sa potom môžu konvertovať na zlúčeniny všeobecného vzorca VI,
(VI), reakciou s formaldehydom v prítomnosti vhodnej zásady, ako je Et2NH, pri štandardných podmienkach.
d) Zlúčeniny všeobecného vzorca VI sa tiež môžu pripraviť reakciou zlúčenín všeobecného vzorca VII,
- 12(R5O)2OPaR3 (VII), kde R3 a R5 sú definované vo vzorci I, s alkylačným činidlom všeobecného vzorca III v prítomnosti vhodnej zásady, ako je LDA alebo NaH, pri štandardných podmienkach, za vzniku zlúčenín všeobecného vzorca VIII, (R5O)2OP
A,» (VIII),
e) Zlúčeniny všeobecného vzorca VIII sa potom môžu nechať reagovať s vhodným aldehydom alebo ketónom OC(Z)2, v prítomnosti vhodnej zásady, ako je KOtBu, LDA alebo NaH, pri štandardných podmienkach, za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca VI.
(VI),
f) Zlúčeniny všeobecného vzorca VI sa potom ďalej môžu nechať reagovať so zlúčeninami všeobecného vzorca IX,
R5 -SH (IX), kde R5 je vhodná chrániaca skupina, ako je Ac, Bz, PMB alebo Bn, samotné alebo v prítomnosti vhodnej zásady, ako je NaOMe, NaH alebo trietylamín alebo alternatívne v prítomnosti iniciátora voľných radikálov, ako je AIBN, pri štandardných podmienkach, za vzniku zlúčenín všeobecného vzorca I, v ktorom R1, R3, R4 a Y majú významy definované vo vzorci I a R2 znamená H a X predstavuje C(Z)2.
Spôsob B
Spôsob B na prípravu zlúčenín všeobecného vzorca I, v ktorom R1, R2, R3 a R4 majú významy definované vo vzorci I a Y znamená CH2 a X predstavuje O, S, SO, SO2, C(Z)2 alebo N(Z), zahrňuje nasledujúce kroky:
-13a) Reakciu zlúčeniny všeobecného vzorca X,
R1-X-H (X), kde R1 má význam definovaný vo vzorci I a X znamená O, S alebo N(Z), s alkylačným činidlom všeobecného vzorca XI,
L
(XI), kde R2 a R3 majú významy definované vo vzorci I a L znamená vhodnú odstupujúcu skupinu, ako je chlór, bróm, jód, triflátová alebo tozylátová skupina, pri štandardných podmienkach s použitím vhodného reakčného činidla, ako je NaH, Ag2CO3 alebo B^NHSCMNaOH, za vzniku zlúčenín všeobecného vzorca XII, (XII),
b) Zlúčeniny všeobecného vzorca XI, sa potom môžu nechať reagovať s oxidom uhličitým v prítomnosti vhodnej zásady, ako je LDA alebo KHMDS, pri štandardných podmienkach, za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca XIII.
R
I z HOOC^R (XIII), (c) Zlúčeniny všeobecného vzorca XIII sa ďalej môžu nechať reagovať s alkylesterom kyseliny chlórmravčej, ako je CICOOMe, v prítomnosti zásady, ako je trietylamín, a ďalej sa vytvorený zmesný anhydrid podrobí redukcii s vhodným redukčným činidlom, ako je NaBH4, pri štandardných podmienkach, za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca XIV.
OH (XIV),
d) Zlúčeniny všeobecného vzorca XIV sa potom nechajú reagovať so zlúčeninou všeobecného vzorca IX
R5-SH (IX), kde R5 znamená vhodnú chrániacu skupinu, ako je Ac alebo Bz, v prítomnosti vhodného reakčného činidla, ako je PPIb/DIAD, pri štandardných podmienkach, za vzniku zlúčenín všeobecného vzorca I, v ktorom R1, R2, R3 a R4 majú vyššie definované významy a Y znamená CH2 a X predstavuje O, S, C(Z)2 alebo N(Z).
e) Zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom R1, R2, R3, R4 a Y majú vyššie definované významy a X znamená S, sa potom môžu nechať reagovať s vhodným oxidačným činidlom, ako je MCPBA, pri štandardných podmienkach, za vzniku zlúčenín všeobecného vzorca I, v ktorom R1, R2, R3, R4 a Y majú vyššie definované významy a X znamená SO alebo SO2.
Spôsob C
Spôsob C na prípravu zlúčenín všeobecného vzorca I, v ktorom R1, R2, R3, R4 a Y majú vyššie definované významy a X znamená NR6CO, CONR6, SO2NR6 alebo NR6SO2, zahrňuje nasledujúce kroky:
a) Reakciu zlúčeniny všeobecného vzorca XV, e 2
R HNx,R (XV),
SR
-15kde R2, R3, R6 a Y majú významy definované vo vzorci I a R5 znamená vhodnú chrániacu skupinu, ako je Ac, Bz, PMB alebo Bn, so zlúčeninou všeobecného vzorca XVI,
R1-X (XVI), v ktorom R1 má význam definovaný vo vzorci I a X predstavuje COOH alebo SO2CI, v prítomnosti vhodného kopulačného reakčného činidla, ako je PyBOP/DIPEA, DCC/HOBt, EDC/TEA/DMAP alebo pyridínu, pri štandardných podmienkach, za vzniku zlúčenín všeobecného vzorca I, v ktorom R1, R2, R3, R4 a Y majú vyššie definované významy a X predstavuje NR6CO alebo NR6SO2.
b) Reakciu zlúčeniny všeobecného vzorca XVII,
2.
X^R.
yX=3
SR (XVII), v ktorom R2, R3 a Y majú významy definované vo vzorci I a X predstavuje COOH alebo SO2CI a R5 znamená vhodnú chrániacu skupinu, ako je Ac, Bz, PMB alebo Bn, so zlúčeninou všeobecného vzorca XVIII,
R6-NH2 (XVIII), v ktorom R6 má význam definovaný vo vzorci I, v prítomnosti vhodného kopulačného reakčného činidla, ako je PyBOP/DIPEA, DCC/HOBt, EDC/TEA/DMAP alebo pyridín, pri štandardných podmienkach, za vzniku zlúčenín všeobecného vzorca I, v ktorom R1, R2, R3, R4 a Y majú vyššie definované významy a X predstavuje CONR6 alebo SO2NR6.
Odborníci skúsení v odbore si budú vedomí toho, že vo vyššie opísaných spôsoboch sa môže potrebné chrániť funkčné skupiny medziproduktov pomocou vhodných chrániacich skupín.
-16Funkčné skupiny, ktoré je vhodné chrániť zahrňujú hydroxyskupinu, aminoskupinu, merkaptoskupinu a karboxylovú kyselinu. Vhodné chrániace skupiny pre hydroxyskupinu zahrňujú trialkylsilyl alebo diarylalkylsilyl (napríklad tercbutyldimetylsilyl, terc-butyldifenylsilyl alebo trimetylsilyl), tetrahydropyranyl a benzyl. Vhodné chrániace skupiny pre aminoskupinu, amidinoskupinu a guanidinoskupinu zahrňujú ŕerc-butyloxykarbonyl a benzyloxy-karbonyl. Vhodné chrániace skupiny pre merkaptoskupinu zahrňujú CO-C^-alkyl, p-metoxybenzyl ad trityl. Vhodné chrániace skupiny pre karboxylovú kyselinu zahrňujú C-|.6-alkyl a benzylestery.
Chrániace skupiny sa môžu odstrániť v súlade s metódami, ktoré sú pre odborníkov v odbore známe a sú opísané v ďalšom.
Určité chránené deriváty zlúčenín vzorca I, ktoré sa môžu pripraviť pred konečným odstránením chrániacich skupín za vzniku zlúčenín vzorca I, sú nové.
Použitie chrániacich skupín je opísané v „Protective Groups in Organic Synthesis“, 2nd Edítion, T. W. Greene & P. G. M. Wutz, Wiley-lnterscience (1991). Chrániacou skupinou môže byť tiež polymérna živica, ako je Wangova živica alebo 2-chIórtritylchloridová živica.
Odborníci skúsení v odbore si tiež budú vedomí toho, že hoci takéto chránené deriváty zlúčenín vzorca I samotné nemusia vykazovať farmakologickú aktivitu, môžu sa podávať parenterálne alebo orálne a následne sa metabolizovať v tele za vzniku zlúčenín podľa predloženého vynálezu, ktoré sú farmakologicky účinné. Takéto deriváty sa preto môžu opísať ako prekurzory. Všetky prekurzory zlúčenín vzorca I sú zahrnuté do rozsahu tohto vynálezu.
Je tiež potrebné si uvedomiť, že všetky polymorfné formy, amorfné formy, anhydráty, hydráty, solváty zlúčenín podľa predloženého vynálezu spadajú do rozsahu tohto vynálezu.
Farmaceutické prípravky
Predložený vynález sa v ďalšom týka farmaceutických kompozícií obsahujúcich najmenej jednu zlúčeninu podľa predloženého vynálezu, alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ, ako účinnú zložku.
-17Na klinické použitie sa zlúčeniny podľa vynálezu formulujú do farmaceutického prípravku na orálny, intravenózny, subkutánny, tracheálny, bronchiálny, intranazálny, pulmonálny, transdermálny, bukálny, rektálny, parenterálny alebo niektorý ďalší spôsob podávania. Farmaceutický prípravok obsahuje zlúčeninu podľa vynálezu v kombinácii s jednou alebo viacerými farmaceutický prijateľnými zložkami. Nosič môže byť vo forme pevnej látky polopevnej látky alebo kvapalného riedidla alebo ako kapsula. Tieto farmaceutické prípravky predstavujú ďalší predmet vynálezu. Zvyčajné množstvo účinných zlúčenín je v rozsahu 0,1 % až 95 % hmotnostných z prípravku.
Pri príprave farmaceutických prípravkov obsahujúcich zlúčeninu podľa predloženého vynálezu sa zvolená zlúčenina môže zmiešať s pevnými práškovými zložkami, ako je laktóza, sacharóza, sorbitol, manitol, škrob, amylopektín, deriváty celulózy, želatína alebo ďalšia vhodná zložka, ako aj s dezintegračnými činidlami a mastivami, ako je stearát horečnatý, stearát vápenatý, stearylfumarát sodný a polyetylénglykolové vosky. Zmes sa potom môže spracovať na granule alebo sa lisovať na tablety.
Mäkké želatínové kapsule sa môžu pripraviť ako kapsule obsahujúce zmes účinnej zlúčeniny alebo zlúčenín podľa predloženého vynálezu, rastlinný olej, tuk alebo ďalšie vhodné vehikulum pre mäkké želatínové kapsule. Tvrdé želatínové kapsule môžu obsahovať granule účinnej zlúčeniny. Tvrdé želatínové kapsule môžu tiež obsahovať účinnú zlúčeninu v kombinácii s pevnými práškovými zložkami, ako je laktóza, sacharóza, sorbitol, manitol, zemiakový škrob, kukuričný škrob, amylopektín, deriváty celulózy alebo želatína.
Dávkové jednotky na rektálne podávanie sa môžu pripraviť (i) vo forme čípkov, ktoré obsahujú účinnú zložku zmiešanú s neutrálnou tukovou bázou; (ii) vo forme želatínovej rektálnej kapsule, ktorá obsahuje účinnú zložku v zmesi s rastlinným olejom, parafínovým olejom alebo ďalším vhodným vehikulom pre želatínové rektálne kapsule; (iii) vo forme hotových mikro-črevných nálevov alebo (iv) vo forme suchých prípravkov pre mikro-črevné nálevy, ktoré sa rekonštituujú vo vhodnom rozpúšťadle bezprostredne pred podávaním.
-18Kvapalné prípravky sa môžu pripraviť vo forme sirupov alebo suspenzií, napríklad roztokov alebo suspenzií obsahujúcich účinnú zložku a zvyšok pozostávajúci napríklad z cukru alebo cukorných alkoholov a zmesi etanolu, vody, glycerolu, propylénglykolu a polyetylénglykolu. Ak je to potrebné, takéto kvapalné prípravky môžu obsahovať farbiace činidlá, aromatické činidlá, konzervačné látky, sacharín a karboxymetylcelulózu alebo ďalšie zahusťovacie činidlá. Kvapalné prípravky sa môžu tiež pripraviť vo forme suchého prášku, ktorý sa pred použitím rekonštituuje s vhodným rozpúšťadlom.
Roztoky na parenterálne podávanie sa môžu pripraviť ako roztok zlúčeniny podľa vynálezu vo farmaceutický prijateľnom rozpúšťadle. Tieto roztoky môžu tiež obsahovať stabilizačné zložky, konzervačné látky a/alebo pufrovacie zložky. Roztoky na parenterálne podávanie sa môžu tiež pripraviť ako suché prípravky, ktoré sa pred použitím rekonštituujú s vhodným rozpúšťadlom.
Typicky denná dávka účinnej látky varíruje v širokom rozsahu a bude závisieť od rozličných faktorov, ako sú napríklad individuálne požiadavky každého pacienta, spôsob podávania a ochorenie. Vo všeobecnosti, orálne sa parenterálne dávky sa budú pohybovať v rozsahu od 0,1 do 1000 mg účinnej látky na deň.
Medicínske a farmaceutické použitie
Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sú inhibítormi karboxypeptidázy U, buď samotné, alebo v prípade prekurzorov, po podaní. Očakáva sa teda, že zlúčeniny podľa predloženého vynálezu budú využiteľné pri takých stavoch, pri ktorých sa je užitočná inhibícia karboxypeptidázy U, ako je liečenie alebo profylaxia trombózy a nadmerná zrážanlivosť v krvi a tkanivách cicavcov, vrátane človeka.
Je známe, že nadmerná zrážanlivosť môže viesť k trombo-embolickým ochoreniam. Stavy spojené s nadmernou zrážanlivosťou a trombo-embolickými ochoreniami, ktoré možno uviesť, zahrňujú rezistenciu na proteín C a zdedenú alebo získanú nedostatočnosť antitrombínu III, proteínu C, proteínu S a heparínového kofaktora II. Ďalšie stavy, o ktorých je známe, že sú spojené s nadmernou zrážanlivosťou a trombo-embolickým ochorením, zahrňujú cirkulačný a septický šok, cirkuláciu anti-fosfolipidových protilátok, homocysteinémiu, heparínom vyvolanú trombocytopéniu a poruchy fibrinolýzy. Zlúčeniny podľa
-19predloženého vynálezu sú teda určené na terapeutické a/alebo profylaktické liečenie týchto stavov. Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sú ďalej určené na liečenie stavov, pri ktorých jestvuje nežiaduci nadbytok proCPU/CPU.
Konkrétne chorobné stavy, ktoré je možné uviesť zahrňujú terapeutickú a/alebo profylaktické liečenie venóznej trombózy a pulmonálnej embólie, arteriálnej trombózy (napríklad pri infarkte myokardu, nestabilnej angíne, mŕtvici na báze trombózy a periferálnej arteriálnej trombóze) a systémovej embólii zvyčajne z predsiene počas arteriálnej fibrilácie alebo z ľavej komory po transmurálnom infarkte myokardu.
Okrem toho sa očakáva, že zlúčeniny podľa vynálezu budú využiteľné pri profylaxii reoklúzie a restenózy (t.j. trombóze) po trombolýze, perkutánnej transluminálnej angioplastii (PTA) a koronárnych bypassových operáciách; pri prevencii retrombózy po mikrochirurgickom zákroku a všeobecne vaskulárnom chirurgickom zákroku.
Ďalšie indikácie zahrňujú terapeutickú a/alebo profylaktické liečenie roztrúsenej intravaskulárnej koagulácii spôsobenej baktériou, viacnásobnou traumou, intoxikáciou alebo akýmkoľvek iným mechanizmom, fibrinolytické liečenie, ak je krv v kontakte s cudzími povrchmi v tele, ako sú vaskulárne štepy, vaskulárne stenty, vaskulárne katétre, mechanické a biologické protetické chlopne alebo akékoľvek iné lekárske zariadenie a na fibrinolytické liečenie, ak krv je v kontakte s lekárskym zariadením mimo tela, ako počas kardiovaskulárneho chirurgického zákroku s použitím prístroja srdce-pľúca alebo pri hemodialýze.
Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sa môžu tiež kombinovať a/alebo podávať spoločne s akýmkoľvek antitrombotickým činidlom s odlišným mechanizmom účinku, ako sú činidlá proti zrážaniu krvných doštičiek acetylsalicylová kyselina, ticlopidin, clopidogrel, tromboxánový receptor a/alebo inhibítory syntetázy, antagonisty receptora fibrinogénu, prostacyklínové mimetické činidlá a inhibítory fosfodiesterázy a antagonisty ADP-receptora (P2T) a inhibítory trombinu.
Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sa môžu ďalej kombinovať a/alebo podávať spoločne s trombolytickými činidlami, ako je tkanivový plazminogénny
-20aktivátor (prirodzený, rekombinantný alebo modifikovaný), streptokináza, urokínáza, prourokináza, anizoylovaný plazminogén-streptokinázový aktivátorový komplex (APSAC), živočíšne plazminogénne aktivátory slinnej žľazy a podobne, pri liečení trombotických ochorení, predovšetkým infarktu myokardu a mŕtvice.
Experimenty in vitro
Inhibičný účinok zlúčenín podľa predloženého vynálezu sa stanovil s použitím skúšky, ktorá je opísaná v; Dirk Hendriks, Šimon. Scharpé and Mare van Sande, Clinical Chemistry, 31. 1936 - 1939 (1985); a Wei Wang, Dirk F. Hendriks, Šimon S. Scharpé, The Journal of Biological Chemistry, 269, 15937 - 15944 (1994).
Príklady uskutočnenia vynálezu
Všeobecné experimentálne postupy
Hmotnostné spektrá sa zaznamenali na trojnásobnom kvadrupólovom hmotnostnom spektrometre Finnigan MAT TSQ 700, vybavenom s elektrosprayovým rozhraním (FAB-MS) a hmotnostnom spekrometre VG Platform II vybavenom s elektrosprayovým rozhraním (LC-MS). Merania 1H NMR a 13C NMR sa uskutočnili na spektrometroch Varian UNITY plus 400, 500 a 600, pracujúcich pri 1H frekvenciách 400. 500 a 600 MHz. Chemické posuny sú uvedené v ppm s rozpúšťadlom ako vnútorným štandardom. Organické extrakty sa vysušili s použitím MgSO4 alebo Na2SO4 ako sušiacim činidlom. Chromatografické separácie sa uskutočnili s použitím Merck Silica gel 60 (0,063 - 0,200 mm). HPLC separácie sa uskutočnili na kolóne HIGHCROM KR100-10C8.
Príklad 1
2-Merkaptometyl-3-piperidin-4-yl-propiónová kyselina (a) 3-Piperidin-4-yl-propiónová kyselina
Roztok 3-pyridin-4-yl-akrylovej kyseliny (4,20 g, 28,0 mmol) vo vode (50 ml) a amoniaku (vodný, 25 %, 4 ml) sa hydrogenoval pri tlaku 60 bar vo vysokotlakovom oceľovom autokláve v prítomnosti ruténia (5 % na oxide hlinitom,
-21 439 mg). Keď tlak vodíka zostal konštantný (3 dni) katalyzátor sa odstránil z reakčnej zmesi pomocou filtrácie. Katalyzátor sa premyl s etanolom a vodou a etanol sa odstránil z roztoku na rotačnej odparke a vodný roztok sa vysušil vymrazením, pričom sa získala kyselina 3-piperidin-4-ylpropiónová (4,30 g, 100 %).
(b) ŕerc-Butylester kyseliny 4-(2-karboxyetyl)-piperidín-1-karboxylovej
Roztok kyseliny 3-piperidin-4-ylpropíónovej (4,79 30,5 mmol), di-ŕerc-butyldikarbonátu (6,98 g, 32,0 mmol) a NaHCO3 (2.69 a, 32.0 mmol) v zmesi THF/voda (1:1, 50 ml) sa miešal pri laboratórnej teplote počas 22 hodín. Pridal sa ďalší podiel di-ŕerc-butyldikarbonátu (2,00 g, 9,10 mmol) spolu s katalytickým množstvom DMAP, výsledná zmes sa miešala počas ďalších štyroch dní. THF sa odstránil pri zníženom tlaku a vodná fáza sa extrahovala s CH2CI2. Vodná vrstva sa potom okyslila na hodnotu pH 2 s 1 M HCI a kyselina sa extrahovala s CH2CI2. Spojené organické extrakty sa premyli so soľankou, vysušili sa a zahustili vo vákuu, pričom sa získal ŕerc-butylester kyseliny 4-(2-karboxyetyl)piperidín-1-karboxylovej, vo forme bielej pevnej látky (6,36 g, 81 %).
(c) ŕerc-Butylester kyseliny 4-(3-benzylsulfanyl-2-karboxypropyl)-piperidín-1karboxylovej
BuLi (1,6 M, 15,3 ml, 24,4 mmol) sa pridal k roztoku diizopropylamínu (3,43 ml, 24,4 mmol) v THF (3 ml) pri teplote -78 °C pod argónom. Po niekoľkých minútach sa roztok nechal zahriať na laboratórnu teplotu počas obdobia 15 minút. Výsledný roztok LĎA sa pomaly pridal k roztoku ŕerc-butylesteru kyseliny 4-(2karboxyetyl)-piperidín-1-karboxylovej (3,07 g, 11,9 mmol) v THF (7 ml) pri teplote 78 °C. Výsledný roztok sa miešal pri -78 °C počas 10 minút, počas tejto doby sa pridal THF (20 ml), aby sa rozpustil anión, ktorý vytuhol. Dianión sa ochladil na teplotu -78 °C a pridal sa brómmetyltiobenzyléter (2,72 g, 12,5 mmol) vo forme roztoku v THF (3 ml), roztok sa miešal pri teplote -78 °C počas 30 minút, pri teplote 0°C počas 30 minút a potom sa nechal zahriať na laboratórnu teplotu a miešal sa cez noc. Reakčná zmes sa okyslila s 1 M HCI, zriedila sa s EtOAc a organická fáza sa premyla s vodou a vysušila sa. Surový produkt sa prečistil pomocou bleskovej chromatografie (MeOH/CHCb, 1 : 9), čím sa získal ŕerc-butylester kyseliny 4-(3-22benzylsulfanyl-2-karboxypropyl)-piperidín-1-karboxylovej vo forme bledožltého oleja (3,12 g, 66%).
(d) terc-Butylester kyseliny 4-(2-karboxy -3-merkaptopropyl)-piperidín-1karboxylovej
Kovový sodík (513 mg, 22,5 mmol) sa po častiach v priebehu 5 minút pridal k roztoku terc-butylesteru kyseliny 4-(3-benzylsulfanyl-2-karboxypropyl)-piperidín-1karboxylovej (0,9 g 2,29 mmol) v THF (45 ml) a kvapalného amoniaku (50 ml) pri teplote -60 °C pod argónom. Po miešaní počas 15 minút sa po častiach pridal chlorid amónny (1,7 g, 31,5 mmol). Chladiaci kúpeľ sa odstránil a amoniak sa odparil s použitím prúdu argónu. Pridal sa 0,5 M NaOH a zmes sa premyla s heptánom. Vodná fáza sa okyslila s 2 M HCI a extrahovala sa s metylénchloridom. Organická fáza sa premyla so soľankou, vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku, pričom sa získal terc-butylester kyseliny 4-(2-karboxy-3-merkaptopropyl)-piperidín1-karboxylovej (0,7 g, 100 %).
(e) 2-Merkaptometyl-3-piperidin-4-yl-proniónová kyselina
K roztoku terc-butylesteru kyseliny 4-(2-karboxy-3-merkaptopropyl)-piperidín1-karboxylovej (0,7 g, 2,29 mmol) v metylénchloride (8 ml) sa pod argónom pridal trietylsilán (731 μΙ, 4,58 mmol) a následne TFA (4 ml). Reakčná zmes sa miešala počas 60 minút a potom sa zahustila pri zníženom tlaku. Prečistenie pomocou HPLC (10 —> 30% acetonitrilu, 0,1 % TFA vo vode) poskytlo zlúčeninu uvedenú v názve vo forme TFA soli (447 mg, 61 %).
1H NMR (400 MHz, D2O): δ 1,34 - 1,50 (m, 2H}, 1,54 - 1,76 (m, 3H), 1,90 1,99 (m,1H), 2,0 - 2,1 (m, 1H), 2,9 - 3,05 (m, 5H), 3,38 - 3,48 (m, 2H).
MS (+) 204 (M+1 ).
Príklad 2
3-(1 -Acetylpiperidin-4-yl)-2-merkaptometylprooniónová kyselina
Roztok TFA soli 2-merkaptometyl-3-piperidin-4-ylpropiónovej kyseliny (0,1 g, 0,32 mmol) v acetanhydride (2 ml) sa miešal cez noc pod argónom a potom sa
-23zahustil pri zníženom tlaku. Prečistenie pomocou HPLC (10 -» 50 % acetonitrilu,
0,1 % TFA vo vode) poskytlo zlúčeninu uvedenú v názve (63 mg, 80 %).
1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 1,0 - 1,22 (m, 2H), 1,46 - 1,55 (m, 1 H), 1,55 - 1,66 (m, 2H), 1,67 - 1,79 (m, 1 H), 1,81-1,92 (m, 1 H), 2,08 (s, 3H), 2,55 - 2,73 (m, 4H), 3,03-3,12 (m, 1H), 3,85-3,94 (m, 1H), 4,45-4,53 (m, 1H).
MS (+) 246 (M+ 1).
Príklad 3
3-Merkapto-5-metyl-2-piperidin-4-ylmetylhexánová kyselina (a) ŕerc-Butylester kyseliny 4-hydroxyrnetyl-piperidín-1 -karboxylovej
K roztoku 4-(hydroxymetyl)piperidínu (5,00 g, 43,41 mmol THF/H2O (1:1, 120 ml) sa pridal di-ŕerc-butyldikarbonát (9,47 g, 43,41 mmol). Reakčná zmes sa miešala počas 16 hodín pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa potom vliala do H2O (500 ml) a extrahovala sa s etylacetátom (3 x 250 ml). Organické vrstvy sa spojili a premyli vodou. Organická vrstva sa vysušila nad síranom sodným, prefiltrovala sa a potom sa zahustila pri zníženom tlaku, čím sa získal tercbutylester kyseliny 4-hydroxymetyl-piperidín-1 -karboxylovej (9,01 g, 96 %).
(b) ŕerc-Butylester kyseliny 4-brómmetyl-piperidín-1-karboxylovej
K roztoku ŕerc-butylesteru kyseliny 4-hydroxymetyl-piperidín-1 -karboxylovej (8,75 g, 40,64 mmol) v dietylétere (200 ml) sa pri teplote 0 °C pod dusíkom pridal trifenylfosfín (21,32 g, 81,28 mmol) a tetrabromid uhličitý (26,96 g, 81,28 mmol). Zmes sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu a miešala sa pod dusíkom počas 48 hodin. Reakčná zmes sa prefiltrovala cez vrstvu Celitu a organický filtrát sa premyl s 5 % NaS2O3, vodou, soľankou a vysušil sa. Zmes sa prefiltrovala a zahustila sa pri zníženom tlaku. Surový produkt sa prečistil pomocou stĺpcovej chromatografie (etylacetát/hexán, 1 : 9), čím sa získal ŕerc-butylester kyseliny 4brómmetyl-piperidín-1-karboxylovej (8,26 g, 73 %).
(c) ŕerc-Butylester kyseliny 4-[2-ŕerc-butoxykarbonyl-2-(dietoxyfosforyl)-etyl]piperidín-1 -karboxylovej
-24terc-Butylester kyseliny dietylfosfónoctovej (75,0 g, 297,32 mmol) sa po kvapkách pridal k suspenzii hydridu sodného (8,03 g, 334,58 mmol) v DMF (450 ml) pri teplote 0 °C pod dusíkom. Zmes sa miešala pri 0 °C počas 0,5 hodín a pri laboratórnej teplote počas 0,5 hodín. K reakčnej zmes sa pridal terc-butylester kyseliny 4-brómmetyl-piperidín-1 -karboxylovej (20,68 g, 74,34 mmol) v DMF (50 ml) a reakčná zmes sa zahriala na teplotu 60 °C a miešala sa počas 16 hodín. Reakčná zmes sa ochladila na laboratórnu teplotu, vliala sa do H2O a extrahovala sa s etylacetátom. Organické vrstvy sa spojili a premyli sa s vodou. Organická vrstva sa vysušila, prefiltrovala a zahustila pri zníženom tlaku. Surový produkt sa prečistil pomocou stĺpcovej chromatografie (etylacetát/hexán, 3 : 7), pričom sa získal terc-butylester kyseliny 4-[2-terc-butoxykarbonyl-2-(dietoxy-fosforyl)-etyljpiperidin-1-karboxylovej a nezreagovaný terc-butylester kyseliny dietylfosfónoctovej. Produkt mal čistotu 47 %, stanovené pomocou HPLC. Produkt sa ďalej prečistil vákuovou destiláciou, pričom sa dosiahla čistota 77 %. Táto zmes sa použila na ďalšiu reakciu.
(d) ŕerc-Butylester kyseliny 4-(2-terc-butoxykarbonyl-5-metyl-hex-2-enyl)-piperidín1-karboxylovej terc-Butylester kyseliny 4-[2-ŕerc-butoxykarbonyl-2-(dietoxy-fosforyl}-etyl]piperidín-1-karboxylovej (8,1 g) v 20 ml DME sa po kvapkách pridal k suspenzii hydridu sodného (1,04 g, 43,13 mmol) v DME (20 ml) pri teplote 0 ’C pod dusíkom. Zmes sa miešala počas 0,75 hodín a k zmesi sa po kvapkách pridal izovaleraldehyd (7,76 g, 90,1 mmol). Zmes sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu a miešala sa počas 48 hodín. Zmes sa zriedila s éterom a premyla sa s vodou. Organická vrstva sa vysušila, prefiltrovala a zahustila pri zníženom tlaku, čím sa získalo 9,4 g žltého oleja. Surový produkt sa prečistil pomocou stĺpcovej chromatografie (etylacetát/hexán, 1 : 50), pričom sa získal terc-butylester kyseliny
4-(2-terc~butoxykarbonyl-5-metyl-hex-2-enyl)-piperidín-1-karboxylovej (1,53 g, 24 %) pre dve reakcie.
(e) terc-Butylester kyseliny 4-[2-terc-butoxykarbonyl-3-(4-metoxy-benzylsuifanyl)-5metyl-hexyl]-piperidín-1-karboxylovej
-25Roztok ŕerc-butylesteru kyseliny 4-(2-ŕerc-butoxykarbonyl-5-metyl-hex-2enyl)-piperidín-1-karboxylovej (2,0 g, 5,24 mmol) v DMF (5 ml) sa pridal k zmesi uhličitanu draselného (0,54 g, 3,93 mmol) a 4-metoxy-a-toluéntiol (1,17 g, 10,48 mmol) v DMF (50 ml) pod dusíkom. Zmes sa refluxovala počas 5 hodín a nechala sa ochladiť na laboratórnu teplotu. Reakčná zmes sa potom vliala do H2O a extrahovala sa s etylacetátom. Organické vrstvy sa spojili a premyli sa s vodou. Organická vrstva sa vysušila, prefiltrovala a zahustila pri zníženom tlaku, čím sa získalo 3,76 g surového materiálu. Surový produkt sa prečistil pomocou stĺpcovej chromatografie (etylacetát/hexán, 1 : 10), pričom sa získal ŕerc-butylester 4-[2-tercbutoxykarbonyl-3-(4-metoxy-benzylsulfanyl)-5-metyl-hexyl]-piperidín-1-karboxylovej kyseliny (1,77 g, 63%).
(f) 3-Merkapto-5-metyl-2-piperidin-4-ylmetyl-hexánová kyselina
Zmes H2O (2,6 ml) a TFA (26 ml) sa vymrazila a potom sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu pod dusíkom. Pridal sa ŕerc-butylester 4-[2-ŕercbutoxykarbonyl-3-(4-metoxy-benzylsulfanyl)-5-metylhexýl]-piperidín-1-karboxylovej kyseliny (2,62 g, 4,89 mmol) a zmes sa refluxovala počas 16 hodín. Zmes sa nechala ochladiť na laboratórnu teplotu a zahustila sa pri zníženom tlaku. Surový produkt sa prečistil pomocou stĺpcovej chromatografie s reverznou fázou (MeOH/H2O, 3 :2), čím sa získala zlúčenina uvedená v názve vo forme TFA soli (0,40 g, 22 %).
1H NMR (300 MHz) (CD3OD) δ 0,88 (d), 0,94 (d), 1,43 (m), 1,70 (br), 1,94 (m). 2,48 (m), 2,90 (m), 2,99 (br), 3,34 (m).
MS (+) 260,2 (M-TFA).
Príklad 4
3-Merkapto-4-fenyl-2-piperidin-4-ylmetyl-butánová kyselina (a) ŕerc-Butylester kyseliny 4-(2-ŕerc-butoxykarbonyl-4-fenyl-but-2-enyl)-piperidín-1karboxylovej
Roztok ŕerc-butylesteru kyseliny 4-[2-ŕerc-butoxykarbonyl-2-(dietoxy-fosforyl)etyl]-piperidín-1-karboxylovej (3,0 g) v DME (8 ml) sa po kvapkách pridal
-26k suspenzii hydridu sodného (0,26 g, 10,51 mmol) v DME (8 ml) pri teplote 0 °C pod dusíkom. Zmes sa miešala počas 0,75 hodín. K zmesi sa pri teplote 0 °C po kvapkách pridal fenylacetaldehyd (5,26 g, 43,81 mmol). Zmes sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu a miešala sa počas 16 hodín. Zmes sa zriedila s éterom a premyla sa s vodou. Organická vrstva sa vysušila, prefiltrovala a zahustila pri zníženom tlaku, pričom sa získalo 8,6 g žltého oleja. Surový produkt sa prečistil pomocou stĺpcovej chromatografie (etylacetát/hexán, 1 : 50 —► 1 :10), čím sa získal ŕerc-butylester kyseliny 4-(2-ŕerc-butoxykarbonyl-4-fenyl-but-2-enyl)piperidín-1karboxylovej (1,32 g, výťažok 62 %) pre dve reakcie.
(b) ŕerc-Butylester kyseliny 4-[2-ŕerc-butoxykarbonyl-3-(4-metoxy-benzylsulfanyl)-4fenyl-butyl]-piperidín-1-karboxylovej ŕerc-Butylester kyseliny 4-(2-ŕerc-butoxykarbonyl-4-fenyl-but-2-enyl)piperidín-1 -karboxylovej (0,8 g, 1,93 mmol) v DMF (10 ml) sa pridal k suspenzii uhličitanu draselného (0,20 g, 1,44 mmol)) a 4-metoxy-a-toluéntiolu (0,54 ml, 3,85 mmol) v DMF (10 ml) pod dusíkom. Zmes sa zahrievala pri teplote 75 °C počas 24 hodín a nechala sa ochladiť na laboratórnu teplotu. Reakčná zmes sa potom vliala do Η2Ο a extrahovala sa a etylacetátom. Organické vrstvy sa spojili a premyli sa s vodou. Organická vrstva sa vysušila, prefiltrovala a zahustila pri zníženom tlaku, čím sa získalo 1,8 g surového materiálu. Surový produkt sa prečistil pomocou stĺpcovej chromatografie (etylacetát/hexán, 1 :10), čím sa získal ŕerc-butylester kyseliny 4-[2-ŕerc-butoxykarbonyl-3-(4-metoxy-benzylsulfanyl)-4-fenylbutyl]piperidín-1-karboxylovej (0,55 g, 50 %).
(c) 3-Merkapto-4-fenyl-2-piperidin-4-ylmetyl-butánová kyselina
Zmes H2O (0,65 ml) a TFA (6,5 ml) sa vymrazila a potom sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu pod dusíkom. Pridal sa ŕerc-butylester 4-[2-ŕercbutoxykarbonyl-3-(4-metoxy-benzylsulfanyl)-4-fenyl-butyl)-piperidín-1-karboxylovej kyseliny (0,65 g, 1,14 mmol) a zmes sa refluxovala počas 16 hodín. Zmes sa nechala ochladiť na laboratórnu teplotu a zahustila sa pri zníženom tlaku. Surový produkt sa prečistil pomocou stĺpcovej chromatografie s reverznou fázou (MeOH/H2O, 1:1), čím sa získala zlúčenina uvedená v názve vo forme TFA soli (0,27 g, 58 %).
-271H NMR (300 MHz) (DMSO) δ 1,22 (m). 1,49 (m), 1,67 (br), 2,21 (d). 2,98 (m). 7,25 (m, 5H). 8,27 (br). 8,57 (br), 12,59 (br).
MS (+) 294,3 (M-TFA).
Príklad 5 i
2-(2-Amino-pyridin-4-ylmetyl)-3-merkapto-propiónová kyselina (a) N-(4-Metylpyridin-2-yl)-acetamid
2-Amino-4-metylpyridín (99,0 g, 91,5 mmol) v acetanhydride (250 ml) sa zahrieval pri teplote 70 °C počas dvoch hodín. Zmes sa ochladila na laboratórnu teplotu a pridal sa dietyléter (100 ml). Produkt vykryštalizoval vo forme bielych kryštalických ihličiek. Odfiltrovamie a vysušenie vo vákuu poskytlo N (4metylpyridin-2-yl)-acetamid (130 g, 95 %).
(b) 2-Acetylamino-izonikotínová kyselina
Zmes N-(4-metyl-pyridin-2-yl)-acetamidu (40,0 g, 0,26 mol) a vody (400 ml) sa zahrievala pri teplote 90 °C až pokým roztok nebol homogénny. Opatrne sa v malých podieloch za intenzívneho mechanického miešania v priebehu 2 hodín pridal KMnO4 (100 g, 0,62 mol). Reakčná zmes sa udržiavala pri teplote Ô0 až 95 °C počas ďalších 3 hodín a potom sa prefiltrovala ešte za horúca cez Celit. Filtrát sa zahustil na približne 100 ml a pridala sa koncentrovaná HCI na adjustovanie hodnoty pH na približne 4. Reakčná banka sa ochladila na a ľadovom kúpeli a biela pevná látka sa odfiltrovala. Kryštály sa premyli so studenou vodou a chloroformom a vysušili sa vo vákuu, čím sa získala 2-acetylamino-izonikotínová kyselina (12,0 g, 25 %).
(c) Etylester 2-amino-izonikotínovej kyselina
2-Acetylamino-izonikotínová kyselina (10,8 g, 60,0 mmol) sa suspendovala v etanole (150 ml) a pridal sa BF3OEt2 (22 ml, 138 mmol). Zmes sa refluxovala cez noc a po ochladení na laboratórnu teplotu sa pridal 1,0 % NaHCCb (250 ml). Produkt sa extrahoval s chloroformom a spojené organické extrakty sa premyli
-28s vodou a vysušili sa. Prefiltrovanie a zahustenie poskytlo etylester 2-aminoizonikotínovej kyseliny (7,46 g, 79 %) vo forme bledožltých kryštálov.
(d) Etylester 2-[N,N-bis-(terc-butoxykarbonyl)amino]-izonikotínovej kyseliny
K roztoku etylesteru 2-amino-izonikotínovej kyseliny (5,00 g, 30 mmol) v terc-BuOH (45 ml) a acetóne (15 ml) sa pridal DMAP (50 mg, 0,41 mmol) a di-tercbutyl-dikarbonát (16,4 g, 75,0 mmol). Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc a pridal sa hexán (60 ml). Reakčná zmes sa chladila v chladničke počas 3 hodín a prefiltrovala sa, čím sa získal etylester 2-[N;N-bis(tercbutoxykarbonyl)amino]-izonikotínovej kyseliny (8,71 g, 79 %).
(e) terc-Butylester (4-hydroxymetyl-pyridin-2-yi)-karbámovej kyseliny
Roztok etylesteru 2-[.N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)amino]-izonikotínovej kyseliny (35,0 g, 95,5 mmol) v THF (350 ml) sa nechal reagovať s LiAIH4 (7,25 g, 191 mmol) a refluxoval sa počas jednej hodiny pod dusíkom. Reakčná zmes sa opatrne vyliala na rozdrvený ľad a produkt sa extrahoval niekoľkokrát s CHCI3 a CHCI3: MeOH (9:1). Spojené organické extrakty sa vysušili, prefiltrovali a zahustili pri zníženom tlaku, čím sa získal terc-butylester (4-hydroxymetyl-pyrídin-2-yl)karbámovej kyseliny (18,5 g, 86 %) vo forme bledožltej pevnej látky.
(f) terc-Butylester (4-brómmetyl-pyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny terc-Butylester (4-hydroxymetyl-pyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny (8,00 g, 35,6 mmol) sa rozpustil vCH2C2 (150 ml) a nechal sa reagovať s PPh3 (11,2 g, 42,8 mmol) pod dusíkom. Reakčná banka sa ochladila na ľadovom kúpeli a CBr4, (14,2 g, 42,8 mmol) sa pridal v malých podieloch. Ľadový kúpeľ sa odstránil po 30 minútach a reakčná zmes sa miešala cez noc pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa zahustila pri zníženom tlaku a pridal sa acetonitril (50 ml). Reakčná banka sa umiestnila do chladničky na 3 hodiny a zrazenina sa odfiltrovala a premyla sa s chladným acetonitrilom. Biela pevná látka sa vysušila vo vákuu, čím sa získal terc-butylester (4-brómmetyl-pyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny (8,38 g, 82 %).
(g) Dietylester 2-(2-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-4-ylmetyl)-malónovej kyseliny
-29κ roztoku NaH (80 %, 0,17 g, 4,00 mmol) v THF (5 ml) sa pri teplote 0 °C pod argónom pridal dietylester kyseliny malónovej (0,64 g, 4,00 mmol). Po tom, ako zmes miešala počas 15 minút, sa zmes pridala k refluxovanej zmesi tercbutylesteru (4-brómmetyl-pyridin-2-yl )-karbámovej kyseliny (1,.00 g, 3,45 mmol) v THF (10 ml) a zmes sa refluxovala počas 2 hodín. Zmes sa zahustila pri zníženom tlaku a zvyšok sa rozdelil medzi vodu a chloroform. Organická vrstva sa premyla s vodou a soľankou a vysušila sa. Po odfiltrovaní a odparení rozpúšťadla sa surový produkt prečistil pomocou bleskovej chromatografie (MeOH/CH2Cl2, 1 : 100), pričom sa získal dietylester 2-(2-ŕerc-butoxykarbonylaminopyridin-4ylmetyl)-malónovej kyseliny (0,80 g, 55 %).
(h) Monoetylester 2-(2-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-4-ylmetyl)-malónovej kyseliny
Roztok KOH (0,19 g, 3,43 mmol) v etanole (5 ml) a pridal k roztoku dietylesteru 2-(2-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-4-ylmetyl)-malónovej kyseliny (1,20 g, 3,27 mmol) v etanole (5 ml) a metylénchloride (5 ml) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala počas 18 hodín pri laboratórnej teplote. Zmes sa zahustila pri zníženom tlaku a k zvyšku sa pridala voda. Vodná vrstva sa premyla s dietyléterom, okyslila sa na hodnotu pH 4 s použitím 1 M HCI a extrahovala sa s metylénchloridom. Organická vrstva sa premyla s vodou, soľankou a vysušila sa. PO odfiltrovaní a odparení vo vákuu sa surový produkt prečistil pomocou bleskovej chromatografie (CH3OH/CH2CI2, 1 :20), čím sa získal monoetylester 2-(2-tercbutoxykarbonylamino-pyridin-4-ylmetyl)-malónovej kyseliny (0,90 g, 81 %).
(i) Etylester 2-(2-ŕerc--butoxykarbonylamino-pyridin-4-ylmetyl)-akrylovej kyseliny
Roztok dietylamínu (0,26 g, 2,67 mmol) v metylénchloride (4 ml) sa pridal k zmesi monoetylesteru 2-(2-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-4-ylmetyl)malónovej kyseliny (0,90 g, 2,66 mmol) a 37 % vodného roztoku formaldehydu (0,24 g, 3,00 mmol) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala počas 5 hodín pri laboratórnej teplote a zmes sa potom vyliala do zmesi ľad-voda a extrahovala sa s metylénchloridom. Organická vrstva sa premyla s 5 % NaHCO3 a vysušila sa. Surový produkt sa prečistil pomocou bleskovej chromatografie (1 % metanol
-30v CH2CI2), čím sa získal etylester 2-(2-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-4-ylmetyl)akrylovej kyseliny (0,58 g, 71 %).
(j) Etylester kyseliny 2-acetylsulfanylrnetyl-3-(2-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-4yl)-propiónovej
Roztok etylesteru 2-(2-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-4-ylmetyl)-akrylovej kyseliny (0,48 g, 1,57 mmol) a trietylaminu (0,17 g, 1,64 mmol) sa pridal ktiooctovej kyseline (3 ml) pri teplote 0 °C pod dusíkom. Zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 4 hodín. Zmes sa vyliala do zmesi ľad-voda a extrahovala sa s CH2CI2. Organická fáza sa premyla s nasýteným NaHCO3 (vodný) a vysušila sa. Surový produkt sa prečistil pomocou bleskovej chromatografie (2,5 %
MeOH v CH2CI2), čím sa získal etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(2-tercbutoxykarbonylamino-pyridin-4-yl)-propiónovej kyseliny (0,60 g, 100 %).
(k) Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(2-amino-pyridin-4-yl)-propiónovej kyseliny
TFA (0.5 ml) sa pridal k roztoku etylesteru 2-acetylsulfanylmetyl-3-(2-ŕercbutoxykarbonylamino-pyridin-4-yl)-propiónovej kyseliny (50 mg, 0.13 mmol) v metylénchloride pod argónom. Roztok sa miešal počas 60 minút a zahustil sa pri zníženom tlaku, čím sa získal surový etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(2-aminopyridin-4-yl)propiónovej kyseliny (52 mg, 100 %).
1H NMR (500 MHz. CD3OD): δ 1,15 (t, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,73 - 2,83 {m, 2H), 2,86 - 2,93 (m, 1H), 3,01 - 3,07 (dd, 1H), 3,12 - 3,18 (dd, 1H), 4,03 - 4,12 (m, 2H), 6,39 (s, 1H), 6,43 (d, 1H), 7,77 (d, 1H).
(l) 2-(2-.Amino-pyridin-4-ylmetyl)-3-merkapto-propiónová kyselina
Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(2-amino-pyridin-4-yl)-propiónovej kyseliny (52 mg, 0.13 mmol) sa rozpustil v koncentrovanej HCI (2 ml) pod argónom. Roztok sa zahrieval pod refluxom počas jednej hodiny. Zahustením pri zníženom tlaku sa získala zlúčenina uvedená v názve vo forme hydrochloridovej soli (32 mg, 100 %).
1H NMR (500 MHz. CD3OD): δ 2,70 (bs, 2H), 2,85 - 3,0 (m, 3H), 6,76 (bs, 1H), 6,81 (bs, 1H), 7,67 (bs, 1H).
-31 MS (+) 213 (M+1).
Príklad 6
3-(6-Amino-pyridin-3-yl)-2-merkaptometvl-propiónová kyselina (a) Etylester 6-amino-nikotínovej kyseliny
2-Amino-3-pyridínkarboxylová kyselina (25,0 g, 181 mmol) sa suspendovala v etanole (190 ml) a pridal sa SOCI2 (15 ml, 206 mmol). Zmes sa refluxovala počas 10 hodín a pridalo sa viac SOCI2 (16 ml). Po 3 dňoch pod refluxom (a viac SOCI2 (10 ml) pridané každý deň) sa reakčná zmes ochladila na laboratórnu teplotu a pridal sa dietyléter. Po 24 hodinách pri teplote -20 °C sa zmes prefiltrovala. Surová soľ sa rozpustila v metanole (214 ml) a pridal sa roztok NaOH (40,0 g, 23,5 mmol) v metanole (90 ml). Reakčná zmes sa miešala počas jednej hodiny a pridalo sa THF (270 ml). Reakčná zmes sa prefiltrovala cez vložku oxidu kremičitého (THF/MeOH) a zahustila sa pri zníženom tlaku, čím sa získal etylester 6-aminonikotínovej kyseliny (36,2 g, 97 %).
.(b) Etylester 6-terc-butoxykarbonylamino-nikotínovej kyseliny
K roztoku etylesteru 6-amino-nikoténovej kyseliny (36,0 g, 217,0 mmol) v terc-BuOH (308 ml) a acetóne (103 ml) sa pridal DMAP (0,53 g, 4,34 mmol) a diterc-butyl-dikarbonát (72,0 g, 330 mmol). Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 10 hodín a potom sa pridal ďalší di-ŕerc-butyldikarbonát (2,60 g). Po 10 hodinách miešania pri laboratórnej teplote sa pridal hexán (470 ml). Reakčná zmes sa ochladila na -20 °C na dve hodiny a prefiltrovala sa. Filtrát sa premyl so zmesou hexán/dichlórmetán (3 : 1) a vysušil sa vo vákuu, čím sa získal etylester 6terc-butoxykarbonylamino-nikotínovej kyseliny (40,5 g, 70 %).
(c) ŕerc-Butylester (5-hydroxymetyl-pyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny
K miešanému roztoku etylesteru 6-terc-butoxykarbonylamino-nikotínovej kyseliny (3,50 g, 13,1 mmol) v THF (20 ml) pôd dusíkom sa v priebehu dvoch hodín pridal L1AIH4 (0,91 g, 240 mmol) v THF (20 ml). Reakčná zmes sa miešala počas 6 hodín, potom sa (opatrne) pridal ,NH4CI (soľ) až do neutrálneho roztoku. Zmes
-32prefiltrovala a zahustila pri zníženom tlaku, čím sa získal ŕerc-butylester (5hydroxymetyl-pyriďin-2-yl)-karbámovej kyseliny (2,00 g, 68 %).
(d) ŕerc-Butylester (5-brómmetyl-pyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny
Trifenylfosfín (8,70 g, 33,1 mmol) a tetrabromid uhličitý (17,0 g, 51,2 mmol) sa pridali k suspenzii ŕerc-butylesteru (5-hydroxymetyl-pyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny (7,00 g, 31,2 mmol) v CH2CI2 (200 ml) pri laboratórnej teplote. V miešaní sa pokračovalo počas 5 hodín a následne sa rozpúšťadlo odparilo. Pridal sa aoetonitril (200 ml) a zmes sa chladila pri teplote -20 °C počas dvoch hodín. Zmes sa potom prefiltrovala a kryštalický zvyšok sa premyl s chladným acetonitrilom (2 x 10 ml), čím sa získal ŕerc-butylester (5-brómmetyl-pyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny (5,96 g, 67 %).
(e) Dietylester 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridinľ3-ylmetyl)-malónovej kyseliny
K suspenzii NaH (0,49 g, 16,3 mmol, 80 %) v THF (15 ml) sa pri teplote 0 °C pridal dietylester kyseliny malónovej (2,61 g, 16,3 mmol). Zmes sa miešala počas 15 minút a potom sa po kvapkách pridal k refluxovanej zmesi ŕerc-butylester (5brómmetyl-pyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny (3,90 g, 13,6 mmol) v THF (25 ml) a výsledná zmes sa refluxovala počas 15 minút. Po odparení rozpúšťadla sa surový produkt prečistil pomocou bleskovej chromatografie (metanól/CH2CI2, 1:100 -> 2,5:100), čím sa získal dietylester 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3ylmetyl)-malónovej kyseliny (2,18 g , 44 %).
(f) Monoetylester 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny
Roztok KOH (0,37 g, 6,54 mmol) v etanole (5 ml) sa pridal k roztoku dietylesteru 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny (2,18 g, 5,95 mmol) v etanole (25 ml) a metylénchloride (10 ml) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala počas 18 hodím pri laboratórnej teplote. Zmes sa zahustila pri zníženom tlaku a zvyšok sa rozpustil vo vode. Vodná vrstva sa premyla s éterom, okyslila sa na hodnotu pH 4 s použitím 1 M HCI a extrahovala sa s metylénchloridom. Organická vrstva sa premyla s vodou, soľankou a vysušila sa. Po prefiltrovaní a zahustení pri zníženom tlaku sa surový produkt prečistil pomocou
-33bleskovej chromatografie (metanol/CH2CI2, 1 : 20), pričom sa získal monoetylester
2- (6-ŕerc-butoxykarbonyl-aminopyridin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny (1,.00 g, 50 % )· (g) Etylester 2-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yImetyl)-akrylovej kyseliny
Dietylamín (0,29 g, 3,00 mmol), voda (2 ml) a metylénchlorid (2 ml) sa pridali k zmesi monoetylesteru 2-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)malónovej kyseliny (1,00 g, 2,96 mmol) a 37 % vodného roztoku formaldehydu (0,25 g, 3,05 mmol) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala počas 16 hodín pri laboratórnej teplote a potom sa vyliala do zmesi ľad-voda a extrahovala sa s metylénchloridom. Organická vrstva sa premyla s 5 % NaHCO3 a vysušila sa. Prefiltrovaním a zahustením pri zníženom tlaku sa získal etylester 2-(6-ŕercbutoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-akrylovej kyseliny (0,75 g, 83 %).
, ) (h) Etylester kyseliny 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin3- yl)-propiónovej
Etylester 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-akrylovej kyseliny (0,49 g, 1,60 mmol) a trietylamín (0,17 g, 1,64 mmol) sa pridali ku tiooctovej kyseline (3 ml) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 6 hodín. Zmes sa vyliala do zmesi ľad-voda a extrahovala sa s CH2CI2. Organická fáza sa premyla s nasýteným NaHCO3 a vysušila sá. Surový produkt sa prečistil pomocou bleskovej chromatografie (MeOH/CH2Cl2, 2,5:100), čím sa získal etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3yl)propiónovej kyseliny (0,36 g, 61 %).
(i) Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-amino-pyridin-3-yl)-propiónovej kyseliny
TFA (0,5 ml) sa pridalo k roztoku etylesteru kyseliny 2-acetylsulfanylmetyl-3(6-terc-butoxykarbonylaminopyridin-3-yl)-propiónovej (100 mg, 0,26 mmol) v metylén-chloride (2 ml) pod argónom. Roztok sa miešal počas 60 minút a potom sa zahustil pri zníženom tlaku, čím sa získal surový etylester 2-acetylsulfanylmetyl3-(6-aminopyridin-3-yl)-propiónovej kyseliny (104 mg, 100 %).
-341H NMR (500 MHz. CD3OD): δ 1,21 (t, 3H), 2,33 (s, 3H), 2,78 - 2,97 (m, 3H),
3,05 - 3,13 (m, 1H), 3,14 - 3,21 (m, 1 H), 4,08-4,15 {m, 2H), 6,99 (d, 1H), 7,69 (s,
1H), 7,85 (d, 1H).
(j) 3-(6-Amino-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-propiónová kyselina
Etylester kyseliny 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-terc-butoxykarbonylaminopyridin-3-yl)-propiónovej (38 mg, 0,096 mmol) sa rozpustil v koncentrovanej. HCI (2,0 ml) pod argónom. Roztok sa miešal pri laboratórnej teplote počas jednej hodiny a potom sa zahrieval pod refluxom počas jednej hodiny. Zahustenie pri zníženom tlaku poskytlo zlúčeninu uvedenú v názve (25,7 mg, 100 %) vo forme hydrochloridovej soli.
1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 2,74 -2,78 (m, 2H), 2,84 - 2,94 (m, 3H). 7,02 (d. 1H), 7,72 (s, 1 H), 7,89 (d, 1H).
MS (+)213 (M+1 ).
Príklad 7
3-(6-Amino-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-2-metyl-propiónová kyselina (a) ŕerc-Butylester etylester 2-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-2metyl-malónovej kyseliny
Roztok ferc-butylesteru etylesteru kyseliny metylmalónovej (457 mg, 2,26 mmol) v DMF (4 ml) sa po kvapkách pridal k suspenzii NaH (90 mg, 2,26 mmol, 60 % v oleji) v DMF (4 ml). Reakčná zmes sa miešala počas 20 minút. Pridal sa roztok ŕerc-butylesteru (5-brómmetyl-pyridin-2-yl)karbámovej kyseliny (500 mg, 1,74 mmol) v DMF (2,5 ml) a reakčná zmes sa miešala počas 70 minút. Pridal sa EtOAc a zmes sa premyla s vodou a soľankou, vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku. Chromatografia (heptán/EtOAc, 3:1 -> 1:3) poskytla tercbutylester etylester 2-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-2metylmalónovej kyseliny (437 mg, výťažok 61 %).
(b) Mono-ŕerc-butylester 2-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-2-metylmalónovej kyseliny
-351 M NaOH (2 ml) sa pridal k roztoku ŕerc-butylesteru etylesteru 2-(6-ŕercbutoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-2-metylmalónovej kyseliny (0,42 g, 1,03 mmol) v THF/EtOH (4 ml, 1 : 1). Reakčná zmes sa miešala pri teplote 50 °C počas 16 hodín. Pridal sa CH2CI2 a zmes sa premyla s 0,5 M HCI a soľankou a vysušila sa. Zahustením pri zníženom tlaku sa získal mono-ŕerc-butylester 2-(Q-tercbutoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-2-metyl-malónovej kyseliny (348 mg, 89 %).
(c) ŕerc-Butylester 3-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-hydroxymetyl-2metyl-proniónovej kyseliny
Metylester kyseliny chlórmravčej (75 μΙ, 0,92 mmol) sa po kvapkách pridal k roztoku mono-ŕerc-butylesteru 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-2metyl-malónovej kyseliny (348 mg, 0,915 mmol) a Et3N (123 μΙ, 0,92 mmol) v THF (6 ml). Reakčná zmes sa miešala počas 20 minút, prefiltrovala sa a po kvapkách sa pridala k suspenzii NaBH4 (39 mg, 1,04 mmol) v THF (6 ml) pri teplote 0 °C. Reakčná zmes sa miešala počas 16 hodín pri laboratórnej teplote, pridala sa 0,2 M HCI a následne EtOAc. Organická fáza sa premyla so soľankou a vysušila sa. Zahustením pri zníženom tlaku a následnou chromatografiou (toluén/EtOAc. 3:1 -> 1:3) sa získal ŕerc-butylester 3-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2hydroxymetyl-2-metyl-propiónovej kyseliny (190 mg, 57 %).
(d) ŕerc-Butylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3yl)-2-metylpropiónovej kyseliny
Dietylester kyseliny azodikarboxylovej (160 μΙ, 1,01 mmol) sa po kvapkách pridal k roztoku ŕerc-butylesteru 3-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2hydroxy-metyl-2-metyl-propiónovej kyseliny (180 mg, 0,49 mmol) a trifenylfosfínu (266 mg, 1,01 mmol) v THF (6 ml) a reakčná zmes sa miešala počas 5 minút. Pridala sa tioloctová kyselina (96 μΙ, 1,34 mmol) a reakčná zmes sa miešala počas 16 hodín. Zahustenie pri zníženom tlaku a následná chromatografia (toluén/EtOAc, 10:1 -> 1:1) poskytla ŕerc-butyl ester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-ŕercbutoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-metyl-propiónovej kyseliny (137 mg, 65 %).
(e) 3-(6-Amino-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-2-metyl-propiónová
-36ŕerc-Butylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin3-yl)-2-metyl-prónovej kyseliny (4 mg, 9,4 pmol) sa rozpustil v koncentrovanej HCI pod argónom. Roztok sa zahrieval pod refluxom počas jednej hodiny. Zahustenie pri zníženom tlaku poskytlo zlúčeninu uvedenú v názve vo forme hydrochloridovej soli (2,5 mg, 100%).
1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 1,20 (s, 3H), 2,62 (d, 1H), 2,76 - 2,83 (m, 2H), 2,95 (d. 1H), 6,94 (d, 1H), 7,64 (d, 1H), 7,80 (dd, 1H).
MS (+) 227 (M+1).
Príklad 8
2-(6-Amino-pyridin-3-ylmetyl)-2-merkaptometyl-butánová kyselina (a) ŕerc-Butylester [5-(5-etyl-2,2-dimetyl-4,6-dioxo-[1,3]dioxan-5-ylmetyl)-pyridin-2yl]-karbámovej kyseliny ŕerc-Butylester (5-brómmetyl-pyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny (1,0 g, 3,48 mmol) sa pridal k roztoku 2,2-dimetyl-5-etyl-1,3-dioxán-4,6-diónu (600 mg, 3,48 mmol) a trietylamínu (0,51 ml, 3,66 mmol) v dimetylsulfoxide (40 ml) pod dusíkom. Reakčná zmes sa miešala cez noc a pridala sa voda (100 ml). Filtrácia zrazeniny poskytla ŕerc-butylester [5-(5-etýl-2,2-dimetyl-4,6-dioxo-[1,3]dioxan-5ylmetyl)-pyridin-2-yl]-karbámovej kyseliny (1,15 g, 87 %).
(b) Monoetylester 2-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-2-etylmalónovej kyseliny
Roztok kovového sodíka (140 mg, 6,08 mmol) v etanole (20 ml) sa pridal k roztoku ŕerc-butylesteru [5-(5-etyl-2,2-dimetyl-4,6-dioxo-[1,3]dioxan-5-ylmetyl)pyridin-2-yl]-karbámovej kyseliny (1,15 g, 3,04 mmol) v etanole (10 ml). Reakčná zmes sa miešala počas 90 minút a potom sa pridal metylénchlorid. Zmes sa premyla s 0,5 M HCI, vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku, čím sa získal monoetylester 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-2-etyl-malónovej kyseliny (1,.05 g, 95 %).
-37(c) Etylester 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylaminopyridin-3-ylmetyl)-2-hydroxymetylbutánovej kyseliny
Metylester kyseliny chlórmravčej (150 μΙ, 1,95 mmol) sa po kvapkách pridal k roztoku monoetylesteru 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-2-etylmalónovej kyseliny (700 mg, 4,91 mmol) a Et3N (275 μΙ, 1,97 mmol) v THF (15 ml) pri teplote -20 °C pod dusíkom. Reakčná zmes sa miešala počas 50 minút, prefiltrovala sa a po kvapkách sa pridala k suspenzii NaBH4 (80 mg, 2,1 mmol) v THF (15 ml) pri teplote -20 °C. Reakčná zmes sa miešala počas 16 hodín pri laboratórnej teplote. Pridala sa 0,2 M HCI a následne metylénchlorid. Organická fáza sa premyla so soľankou a vysušila sa. Zahustením pri zníženom tlaku a následnou chromatografiou (toluén/EtOAc, 3 :1 —> 1 : 3) sa získal etylester 2-(6ŕerc-butoxykarbonylaminopyridin-3-ylmetyl)-2-hydroxymetyl-butánovej kyseliny (300 mg, 45 %).
(d) Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-piridin-3-ylmetyl)butánovej kyseliny
Diizopropylester kyseliny azodikarboxylovej (296 μΙ, 1,53 mmol) sa po kvapkách pridal k roztoku trifenylfosfínu (402 mg, 1,53 mmol) v THF (4 ml) pri teplote 0 °C pod argónom a reakčná zmes sa miešala počas 30 minút. Po kvapkách sa v priebehu 10 minút pridal roztok tioloctovej kyseliny (109 μΙ, 1,53 mmol) a etylester 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-2-hydroxymetylbutánovej kyseliny (0,27 g, 0,77 mmol) v THF (2 ml). Reakčná zmes sa miešala počas 60 minút pri teplote 0 °C a potom pri laboratórnej teplote počas 16 hodín. Zahustením pri zníženom tlaku a následnou chromatografiou (heptán/EtOAc, 10:1 -» 1 : 1) sa získal etylester 2- acetylsulfanylmetyl-2-(6-terc-butoxykarbonylaminopyridin-3-ylmetyl)-butánovej kyseliny (193 mg, 61 %).
(e) 2-(6-Amino-pyridin-3-ylmetyl)-2-merkaptometyl-butánová kyselina
Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-2-(6-ferc-butoxykarbonylamino-pyridin-3ylmetyl)-butánovej kyseliny (12,3 mg, 30 pmol) sa rozpustil v koncentrovanej HCI (2 ml) po argónom. Roztok sa zahrieval pod refluxom počas 24 hodín. Zahustenie pri
-38zníženom tlaku poskytlo zlúčeninu uvedenú v názve vo forme hydrochloridovej soli (8,3 mg, 100%).
1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 0,91 (t, 3H), 1,71 (m, 2H), 2,68 (m, 2H), 2,92 (m, 2H), 6,96 (d, 1H), 7,65 (bs. 1 H), 7,82 (dd, 1H).
MS (-) 239 (M-1).
Príklad 9
3-(6-Amino-5-metyl-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-2-metyl-propiónová kyselina (a) 2-[N,N-bis(terc-Butoxykarbonyl)amino]-3-metyl-5-(2,2,5-trimetyl-4,6-dioxo-[1,3]dioxan-5-ylmetyl)-py rid í n
2-[N,N-bis(ŕerc-Butoxykarbonyl)amino]-5-brómmetyl-3-metyl-pyridín (1,6 g, 4,0 mmol) sa pridal k roztoku 2l2,5-trimetyl-1,3-dioxán-4,6-diónu (630 mg, 4,0 mmol) a trietylamínu (0,58 ml, 4,2 mmol) v dimetylsulfoxide (40 ml). Reakčná zmes sa miešala cez noc a pridala sa voda (100 ml). Zmes sa extrahovala s EtOAc, spojené organické fázy sa premyli s vodou a soľankou a vysušili sa. Zahustenie pri zníženom tlaku poskytlo surový 2-[N,N-bis(ŕerc-Butoxykarbonyl)amino]-3-metyl-5(2,2,5-trimetyl-4,6-dioxo-[1,3]-dioxan-5-ylmetyl)-pyridín (2,06 g).
(b) Monoetylester 2-(6-[N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)amino]-5-metyl-pyridin-3ylmetyl)-2-metylmalónovej kyseliny
Roztok kovového sodíka (184 mg, 8,0 mmol) v etanole (20 ml) sa pridal k roztoku surového 2-[N,N-bis(ŕerc-Butoxykarbonyl)amino]-3-metyl-5-(2,2,5trimetyl-4,6-dioxo-[1,3]-dioxan-5-ylmetyl)-pyridínu (2,06 g, ~ 4,0 mmol) v etanole (20 ml) pod argónom. Reakčná zmes sa miešala počas 60 minút a potom sa pridal metylénchlorid. Zmes sa premyla s 0,5 M HCl a soľankou a vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku, čím sa získal surový monoetylester 2-(6-[N,N-bis(ŕercbutoxykarbonyl)-amino]-5-metyl-pyridin-3-ylmetyl)-2-metylmalónovej kyseliny (1,9 9)· (c) Etylester 3-(6-[N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)amino]-5-metyl-pyridin-3-yl)-2hydroxy-metyl-2-metylpropiónovej kyseliny
-39Metylester kyseliny chlórmravčej (338 μ|, 4,4 mmol) sa po kvapkách pridal k roztoku surového monoetylesteru 2-(6-[N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)-amino]-5metyl-pyridin-3-ylmetyl)-2-metylmalónovej kyseliny (1,9 g) a Et3N (641 μΙ, 4,6 mmol) v THF (30 ml) pri teplote -20 °C. Reakčná zmes sa miešala počas 50 minút, prefiltrovala sa a po kvapkách sa pridala k suspenzii NaBH4 (182 mg, 4,8 mmol) v THF (30 ml) pri teplote -20 °C. Reakčná zmes sa miešala počas 16 hodín pri laboratórnej teplote. Pridala sa 0,5 M HCI a následne metylénchlorid. Organická fáza sa premyla so soľankou a vysušila sa. Zahustením pri zníženom tlaku a následnou chromatografiou (toluén/EtOAc, 10 :1 -> 1 : 3) sa získal etylester 3-(6[N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)-amino]-5-metyl-pyridin-3-yl)-2-hydroxy-metyl-2metylpropiónovej kyseliny (885 mg, 49 %).
(d) Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-[N,N-bis(ŕerc-butoxykarbonyl)-amino]-5metyl-pyridin-3-yl)-2-metyl-propiónovej kyseliny
Diizopropylester kyseliny azodikarboxylovej (755 μΙ, 3,91 mmol) sa po kvapkách pridal k roztoku trifenylfosfínu (1,026 g, 3,91 mmol) v THF (10 ml) pri teplote 0 °C a reakčná zmes sa miešala počas 30 minút. Po kvapkách sa v priebehu 10 minút pridal roztok tioloctovej kyseliny (279 μΙ, 3,91 mmol) a etylester 3-(6-[N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)amino]-5-metylpyridin-3-yl)-2-hydroxymetyl-2metylpropiónovej kyseliny (885 mg, 1,96 mmol) v THF (5 ml). Reakčná zmes sa miešala počas 60 minút pri teplote 0 °C a potom počas 16 hodín pri laboratórnej teplote. Zahustením pri zníženom tlaku a následnou chromatografiou (heptán/EtOAc, 10 : 1 —> 1 : 3) sa získal nie čistý etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3(6-[N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)-amino]-5-metyl-pyridin-3-yl)-2-metyl-propiónovej kyseliny (1,46 g).
(e) Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-ámino-5-metyl-pyridin-3-yl)-2-metylproniónovej kyseliny
Surový etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-[N,N-bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-5-metyl-pyridin-3-yl)-2-metyl-propiónovej kyseliny (1,46 g) sa rozpustil v TFA (5 ml) a miešal sa počas 60 minút. Zahustenie pri zníženom tlaku a následná chromatografia (toluén/EtOAc, 1 ; 1 —> 1 : .10 —> 0:1) poskytli mierne
-40znečistený etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-amino-5-metyl-pyridin-3-yl)-2-metylproniónovej kyseliny (696 mg, 84 %).
(f) 3-(6-Amino-5-metyl-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-2-metyl-propiónová kyselina
Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-amino-5-metyl-pyridin-3-yl)-2-metylproniónovej kyseliny (Í7 mg, 40 pmol) sa rozpustil v koncentrovanej HCI (2 ml) pod argónom. Roztok sa zahrieval pod refluxom počas 150 minút. Zahustením pri zníženom tlaku sa získala zlúčenina uvedená v názve vo forme hydrochloridovej soli (10,7 mg, 96%).
1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 1,20 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,61 (d, 1H), 2,79 (2d, 2H), 2,94 (d, 1H), 7,55 (m, 1H), 7,69 (m, 1H).
MS (+) 241 (M+1 ).
Príklad 10
3-Merkapto-2-[(piperidín-4-karbonyl)-amino]-propiónová kyselina
CH2CI2 (70 ml) sa pridal k 4-metoxytritylchloridovej živici (7 g, L=0,91 mmol/g, 6,37 mmol) pod argónom a živica sa nechala napučiavať počas 10 minút a pridala sa HCI-soľ etylesteru 2-amino-3-merkapto-propiónovej kyseliny (5,9 g, 32 mmol). Potom sa v malých podieloch v priebehu 10 minút pridal TFA (70 ml). Suspenzia sa pretrepávala pri laboratórnej teplote počas jednej hodiny a zahustila sa pri zníženom tlaku. Keď bola takmer suchá, pridal sa toluén (150 ml) a zmes sa znova zahustila pri zníženom tlaku. Tento postup sa opakoval dvakrát. Teraz žltá živica sa premyla s DMF (3 x 60 ml), CH2CI2 (2 x 60 ml), TEA: CH2CI2 (1 . 11, 2 x 60 ml), CH2CI2 (2 x 60 ml), MeOH (2 x 60 ml) a vysušila sa vo vákuu cez noc.
Aby sa vypočítalo zavedenie etylesteru 2-amino-3-merkapto-propiónovej kyseliny na živicu, 50 mg produktu sa nechalo reagovať s 10 % TFA vCH2CI2 počas jednej minúty a tento postup sa opakoval 4-krát. Zmes sa zahustila pri zníženom tlaku, pričom sa získal etylester 2-amino-3-merkapto-propiónovej kyseliny (9,8 mg), čo indikovalo zavedenie približne 0,6 mmol/g.
-41 Roztok mono-terc-butylesteru piperidín-1.4-dikarboxylovej kyseliny (28 mg, 0,12 mmol) v DMF (1 ml) sa pridal k živici (100 mg, L=0,6 mmol/g, 0,06 mmol) v plastikovej striekačke, a následne sa pridal PyBOP (62 mg, 0,12 mmol) v DMF (0,5 ml) a DIPEA (41 μΙ, 0,24 mmol). Reakčná zmes sa ponechala pri laboratórnej teplote počas 2 hodín za občasného miešania a postup sa opakoval ešte raz. Živica sa potom premyla s DMF (2x2 ml), CH2CI2 (2x2 ml), MeOH (2x2 ml), CH2CI2 (2x2 ml) a THF (2x2 ml). Do striekačky sa pridal THF (800 μΙ) a živica sa nechala napučiavať počas 10 minút. Potom sa pridala voda (250 μΙ) a 10 M NaOH (50 μΙ). Reakčná zmes sa ponechala pri laboratórnej teplote počas 16 hodín za občasného miešania. Živica sa potom premyla so zmesou THF : voda (1 : 1, 2 x 2 ml), THF (2x2 ml), CH2CI2 (2x2 ml), MeOH (2x2 ml) a CH2CI2 (2x2 ml).
Do striekačky sa pridal 10 % TFA v CH2CI2 (1 ml) a po 5 minútach sa roztok zachytil v odváženej skúmavke. Tento postup sa opakoval ešte jedenkrát a spojené organické fázy sa zahustili pri zníženom tlaku, pričom sa získala zlúčenina uvedená v názve vo forme TFA soli (15,3 mg, 74 %).
1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 1,85- 2,10 (m,4H). 2,65 - 2,72 (m, 1 H), 2,85 - 2,92 (m, 1H), 2,95 - 3,08 (m, 3H), 3,40 - 3,47 (m, 2H), 4,55-4,60 (m,1H).
Príklad 11
2-((Azetidín-2-karbonyl)-amino)-3-merkapto-propiónová kyselina
Zlúčenina uvedená v názve sa pripravila z 1-terc-butylesteru azetidín-1,2dikarboxylovej kyseliny s použitím postupu opísaného v príklade 14. Výťažok: 13,8 mg (72%).
1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 2,54 - 2,63 (m, 1H), 2,82 -3,05 (m, 3H), 3,93 -4,15 (m, 2H), 4,66 -4,71 (m, 1H), 5,05-5,10 (m, 1H).
Príklad 12
3-Merkapto-2-[(piperidín-3-karbonyl)-amino]-propiónová kyselina
-42Zlúčenina uvedená v názve sa pripravila z 1-terc-butylesteru piperidin-1,3dikarboxylovej kyseliny s použitím postupu opísaného v príklade 14. Výťažok:
15,1 mg, (73%).
1H NMR (500 MHz. CD3OD): δ 1,.73 - 2,10 (m, 4H), 2,84 - 2,.92 (m,2H), 2,95 - 3,14 (m, 2H), 3,15 - 3,29 (m, 3H). 4,56 - 4,62 (m, 1H).
Príklad 13
2- [(Azetidín-3-karbonyl)amino]-3-merkapto-propiónová kyselina
Zlúčenina uvedená v názve sa pripravila z mono-terc-butylesteru azetidín1,3-dikarboxylovej kyseliny s použitím postupu opísaného v príklad 14. Výťažok: 13,5 mg (71 %).
1H NMR (500 MHz. CD3OD): δ 2,86 - 3,02 (m, 2H), 3,72 - 3,80 (m, 1H), 4,20 -4,24 (d, 4H), 4,62-4,67 (m, 1H).
Príklad 14
3- (6-Amino-5-metyl-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-propiónová kyselina (a) 5-Bróm-2-[N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)amino]-3-metyl-pyridín
2-Amino-5-bróm-3-metylpyridín (15,0 g, 80,2 mmol) v terc-butanole sa nechal reagovať s di-terc-butyldikarbonátom (43,6 g, 200 mmol) a DMAP (0,60 g, 4,91 mmol). Reakčná zmes sa nechala pri teplote prostredia cez noc a potom sa zahustila pri zníženom tlaku. Pridal sa hexán a produkt sa vyzrážal vo forme pevnej látky. Prefiltrovaním sa získal 5-bróm-2-[N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)amino]-3metyl-pyridín (22,0 g, 71 %).
(b) 2-[N,N bis(terc-Butoxykarbonyl)amino]-5-(terc-butyldimetyl-silanyloxymetyl)-3metyl-pyridín
Roztok 5-bróm-2-[N,N-bis(terc-butoxykarbónyl)amino]-3-metylpyridín (26,0 g, 67,1 mmol), terc-butyl-dimetyl-tributylstannanylmetoxy-silán (47,6 g, 109 mmol) a chlorid bis(trifenylfosfín)paládia(ll) (0,90 g, 1,42 mmol) v 1,2-dichlóretáne (80 ml) sa miešal pri teplote 90 °C počas dvoch dní. Zmes sa ochladila na teplotu 0
-43°C a pridal sa dietyléter (200 ml) a následne nasýtený vodný fluorid draselný (40 ml). Zmes sa intenzívne miešala počas 30 minút a prefiltrovala sa. Organická fáza sa premyla s vodou, vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku. Blesková chromatografia (hexán/EtOAc, 100:0 -> 95:5) poskytla 2-[N,N-bis(tercbutoxykarbonyl)amino]-5-(terc-butyldimetyl-silanyloxymetyl)-3-metylpyridín (18,0 g, 59 %).
(c) 2-[N,N-bis-(terc-butoxykarbonyl)amino]-5--hydroxymetyl-3-metylpyridín
Tetrabutylamóniumfluorid (25,1 g, 79,6 mmol) sa pridal k roztoku 2-[N,Nbis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-5-(terc-butyldimetyl-šilanyloxymetyl)-3metylpyridínu (18,0 g, 39,8 mmol) v THF (150 ml). Reakčná zmes sa miešala cez noc pri laboratórnej teplote. Zahustením pri zníženom tlaku a následnou bleskovou chromatografiou (hexáne/EtOAc, 50:50) sa získal 2-[N,N-bis-(ŕercbutoxykarbonyl)-amino]-5~hydroxymetyl-3-metylpyridín (8, g, 59 %).
(d) 5-Brómmetyl-2-[N,N-bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-3-metylpyridín
Trifenylfosfín (7,43 g, 28,3 mmol) a CBr4 (9,49 g, 28,6 mmol) sa pri teplote 0 °C pridal k roztoku 2-[N,N-bis-(ŕerc-butoxykarbonyl)-amino]-5~hydroxymetyl-3metyl-pyridínu (8,00 g, 23,6 mmol) v dichlórmetáne (220 ml). Reakčná zmes sa miešala počas 3 hodín a potom sa zahustila pri zníženom tlaku. Bleskovou chromatografiou (hexán/EtOAc, 80: 20) sa získal 5-brómmetyl-2-[N,N-bis(ŕercbutoxykarbonyl)amino]-3-metylpyridín (8,0 g, 77 %).
(e) Dietylester 2-(6-[N,N-bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-5-metyl-pyridin-3-ylmetyl)malónovej kyseliny
K suspenzii NáH (0,24 g, 6,0 mmol; 60 %) v DMF (5 ml) sa pridal dietylester kyseliny malónovej (0,91 ml, 6,0 mmol) a zmes sa miešala počas 15 minút. Pridal sa roztok 2-[N,N-bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-5-brómmetyl-3-metylpyridínu (2,0 g, 5,0 mmol) v DMF (5 ml) a výsledný roztok sa miešal počas 120 minút pri teplote 60 °C. Pridal sa etylester kyseliny octovej a zmes sa premyla s vodou a soľankou a vysušila sa. Po odparení rozpúšťadla sa surový produkt prečistil pomocou bleskovej chromatografie (CH3OH/CH2CI2, 1:100 -> 1:20), čím sa
-44získal dietylester 2-(6-[N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)amino]-5-metyl-pyridin-3ylmetyl)-malónovej kyseliny (1,2 g, 50 %).
(f) Monoetylester 2-(6-[N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)amino]-5-metyl-pyridin-3ylmetyl)-malónovej kyseliny
Roztok KOH (154 mg, 2,75 mmol) v etanole (2 ml) sa pri teplote 0 °C pridal k roztoku dietylesteru 2-(6-[N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)amino]-5-metylpyridin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny (1,2 g, 2,50 mmol) v etanole (10 ml) a metylénchloride (4 ml). Zmes sa miešala počas 18 hodín pri laboratórnej teplote. Zmes sa zahustila pri zníženom tlaku a zvyšok sa rozpustil vo vode. Pridal sa etylacetát a organická vrstva sa premyla s 0,5 M HCI, vodou, soľankou a vysušila sa. Po prefiltrovaní a zahustení pri zníženom tlaku sa získal surový monoetylester 2-(6-[N,N-bis(tercbutoxykarbonyl)-amino]-5-metyl-pyridin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny (1,0 g, 88 %).
(g) Etylester kyseliny 2-(6-[N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)amino]-5-metylpyridin-3-ylmetyl)-akrylovej
Dietylamín (0,26 g, 2,67 mmol) sa pri teplote 0 °C pridal k zmesi monoetylesteru 2-(6-[N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)amino]-5-metyl-pyridin-3ylmetyl)-malónovej kyseliny (1,0 g, 2,2 mmol) a 37 % vodného roztoku formaldehydu (0,24 g, 3,00 mmol) v metylénchloride (2 ml). Zmes sa miešala počas 16 hodín pri laboratórnej teplote a pridal sa etylacetát. Organická vrstva sa premyla s vodou a s 5 % NaHCO3 a vysušila sa. Zahustením pri zníženom tlaku s následnou bleskovou chromatografiou (toluén/etylacetát, 3 :1 -> 1 : 2) sa získal etylester 2-(6-[N,N-bÍs(terc-butoxykarbonyl)-amino]-5-metylpyridin-3-yl-metyl)akrylovej kyseliny (0,68 g, 73 %).
(h) Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-[N,N-bis(/erc-butoxykarbonyl)amino]-5metyl-pyrídin-3yl)-propiónovej kyseliny
Trietylamín (0,234 ml,, 1,68 mmol) sa pridal k roztoku etylesteru 2-(6-[N,Nbis(terc-butoxykarbonyl)amino]-5-metylpyridin-3-yl-metyl)-akrylovej kyseliny (0,68 g, 1,61 mmol) vtiooctovej kyseline (3 ml) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 16 hodín Pridal sa etylacetát a organická fáza sa
-45premyla s vodou, nasýteným NaHCO3 a soľankou a vysušila sa. Surový produkt sa prečistil pomocou bleskovej chromatografie {toluén/etylacetát, 3 :1 -> 1 : 2), čím sa získal čistý etylester kyseliny 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-[N,N-bis(ŕercbutoxykarbonyl)amino]-5-metyl-pyridin-3-yl)-propiónovej kyseliny (489 mg, 61 %) a mierne znečistený etylester kyseliny 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-[N,N-bis(ŕercbutoxykarbonyl)amino]-5-metyl-pyridin-3-yl)-propiónovej (0,34 g, 43 %).
(i) 3-(6-Amino-5-metyl-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-propiónová kyselina
Etylester kyseliny 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-[N,N-bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-5-metyl-pyridin-3-yl)-propiónovej (17 mg, 0;034 mmol) sa rozpustil v koncentrovanej. HCl (3,0 ml). Roztok sa zahrieval pod refluxom počas jednej hodiny. Zahustením pri zníženom tlaku sa získal zlúčenina uvedená v názve (8,9 mg, 100 %) vo forme hydrochloridovej soli.
1H NMR (500 MHz. CD3OD): δ 2,26 (s. 3H), 2,72 - 2,75 (m, 2H). 2,83 - 2,.91 (m,3H), 7,60 (s, 1H), 7,77 (s, 1H).
MS (+) 227 (M+ 1 ).
Príklad 15
3-(6-Amino-4-metyl-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-propiónová kyselina (a) 2-Amino-5-bróm-4-metylpyridín
2-Amino-4-metylpyridín (110 g, 1,02 mol) v bromovodíkovej kyseline (1 I, 48 %) sa miešal pri teplote 70 °C a po kvapkách sa v priebehu jednej hodiny pridal roztok peroxidu vodíka (300 ml, 15 %), takou rýchlosťou, že teplota reakčnej zmesi sa udržiavala na 70 až 80 °C. Zmes sa miešala počas 90 minút pri teplote 70 °C a vyliala sa na rozdrvený ľad. Hodnota pH sa adjustovala na 4 až 5 s uhličitanom sodným a vyzrážaná pevná látka (obsahujúca prevažne dibrómované produkty) sa odfiltrovala a zlikvidovala. Hodnota pH sa potom zvýšila na 9 a vyzrážaný produkt sa zachytil filtráciou. Rekryštalizácia z toluénu poskytla 2-amino-5-bróm-4metylpyridín (76,3 g, 40 %).
(b) 2-[N,N-bis(ŕerc-Butoxykarbonyl)amino]-5-bróm-4-metylpyridin
-462-Amino-5-bróm-4-metylpyridín (5,70 g, 30,5 mmol) v chloroforme sa nechal reagovať s di-ferc-butyldikarbonátom (20,0 g, 91,60 mmol) a DMAP (0,60 g, 4,91 mmol). Reakčná zmes sa nechala pri teplote prostredia cez noc a potom sa zahustila pri zníženom tlaku. Blesková chromatografia (hexán/EtOAc, 95:5) poskytla 2-[N,N-bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-5-bróm-4-metylpyridín (8,02 g, 68 %). ; (c) 2-[N,N-bis(ŕerc-Butoxykarbonyl)amino]-5-(ferc-butyldimetyl-silanyloxymetyl)-4metylpyridín
Roztok 2-[N,N-bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-5-bróm-4-metylpyridínu (15,0 g, 38,70 mmol), terc-butyl-dimetyl-tributylstananylmetoxy-silánu (25,4 g, 58,3 mmol) a dichloridu bis-(trifenylfosfín)paládia(ll) (0,90 g, 1,42 mmol) v 1,2dichlóretáne (50 ml) sa miešal pri teplote 90 °C počas dvoch dní. Zmes sa ochladila na teplotu 0 °C a pridal sa dietyléter (200 ml) a následne nasýtený vodný fluorid draselný (40 ml). Zmes sa intenzívne miešala počas 30 minút a potom sa prefiltrovala. Organická fáza sa premyla s vodou, vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku. Blesková chromatografia (hexán/EtOAc, 95; 5) poskytla 2-[N,Nbis(terc-Butoxykarbonyl)amino]-5-(terc-butyl-dimetyl-silanyloxymetyl)-4-metylpyridín (10,0 g, 57%).
(d) 2-[N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)amino]-5-hydroxymetyl-4-metylpyridin
Tetrabutylamóniumfluorid (13,9 g, 44,1 mmol) sa pridal k roztoku 2-[N,N-bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-5-(terc-butyldimetylsilanyloxymetyl)-4-metylpyridín (10,0 g, 24,3 mmol) v THF (100 ml). Reakčná zmes sa miešala počas 3 hodín laboratórnej teplote. Zahustením pri zníženom tlaku a následnou bleskovou chromatografiou (hexán/EtOAc, 50 : 50) sa získal 2-[N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)amino]-5-hydroxy-metyl-4-metylpyridin (5.0 g, 67 %).
(e) 5-Brómmetyl-2-[N,N-bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-4-metylpyridín
Trifenylfosfín (4,69 g, 17,9 mmol) a CBr4 (4,89 g, 14,8 mmol) sa pridal k roztoku 2-[N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)-amino]-5-hydroxymetyl-4-metylpyridinu (5,00 g, 22,0 mmol) v dichlórmetáne (130 ml) pri teplote 0 °C. Reakčná zmes sa
-47miešala počas 3 hodín a potom sa zriedila s dichlórmetánom. Organická fáza sa premyla s vodou, vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku. Bleskovou chromatografiou (hexán/EtOAc, 80:20) sa získal 5-brómmetyl-2-[N,N-bis(ŕercbutoxykarbonyl)amino]-4-metylpyridin (5,35 g, 90 %).
(f) Dietylester 2-(6-[N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)amino]-4-metyl-pyridin-3-ylmetyl)malónovej kyseliny
K suspenzii NaH (0,24 g, 6,0 mmol, 60 %) v DMF (5 ml) sa pridal dietylester kyseliny malónovej (0,91 ml, 6,0 mmol) a zmes sa miešala počas 15 minút. Pridal sa roztok 2-[N,N-bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-5-brómmetyl-4-metylpyridinu (2,0 g, 5,0 mmol) v DMF (5 ml) a výsledný roztok sa miešal počas 120 minút pri teplote 60 °C. Pridal sa etylacetát a zmes sa premyla s vodou a soľankou a vysušila sa. Po odparení rozpúšťadla sa surový produkt prečistil pomocou bleskovej chromatografie (CH3OH/CH2CI2, 1 :100 —> 1 :20), čím sa získala čistá frakcia dietylesteru 2-(6-[N,N-bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-4-metyl-pyridin-3ylmetyl)-malónovej kyseliny (1,15 g, 48%) ä znečistená frakcia dietylesteru 2-(6[N,N-bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-4-metyl-pyridin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny (1.1 g).
(g) Monoester 2-(6-[N,N-bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-4-metyl-pyridin-3-ylmetyl)malónovej kyseliny
Roztok KOH (141 mg, 2,52 mmol) v etanole (2 ml) sa pridal k roztoku dietylesteru 2-(6-[N,N-bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-4-metyl-pyridin-3-ylmetyl)malónovej kyseliny (1,1 g, 2,29 mmol) v etanole (10 ml) a metylénchloride (4 ml) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala počas 18 hodín pri laboratórnej teplote. Zmes sa zahustila pri zníženom tlaku a zvyšok sa rozpustil vo vode. Pridal sa etylacetát a organická vrstva sa premyla s 0,5 M HCI, vodou a soľankou a vysušila sa. Po odfiltrovaní a zahustení pri zníženom tlaku sa získal surový monoetylester 2-(6[N,N-bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-4-metyl-pyridin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny (1,0 g, 97%).
(h) Etylester 2-(6-[N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)amino]-4-metylpyridin-3-ylmetyl)akrylovej kyseliny
-48Pridal sa dietylamín (0,26 g, 2,67 mmol) a zmes monoetylesteru 2-(6-[N,Nbis(terc-butoxykarbonyl)amino]-4-metyl-pyridin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny (1,0 g, 2,2 mmol) a 37 % vodný roztok formaldehydu (0,24 g, 3,00 mmol) v metylénchloride (2 ml) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala počas 16 hodín pri laboratórnej teplote a pridal sa etylacetát. Organická vrstva sa premyla s vodou a 5 % NaHCO3 a vysušila sa. Zahustením pri zníženom tlaku s následnou bleskovou chromatografiou (toluén/etylacetát, 3:1 -> 1:1) sa získal etylester 2-(6-[N,Nbis(terc-butoxykarbonyl)-amino]-4-metylpyridin-3-ylmetyl)-akrylovej kyseliny (0,81 g, 88 %).
(i) Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-[N,N-bis(ferc-butoxykarbonyl)amino]-4metyl-pyridin-3-yl)-propiónovej kyseliny
Trietylamín (0,279 ml, 2,0 mmol) sa pridal k roztoku etylesteru 2-(6-[N,Nbis(ferc-butoxykarbonyl)amino]-4-metylpyridin-3-ylmetyl)-akrylovej kyseliny (0,8 g, 1,9 mmol) vtiooctovej kyseline (3 ml) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 16 hodín. Pridal sa etylacetát a organická fáza sa premyla s vodou, nasýteným NaHCO3 a soľankou a vysušila sa. Surový produkt sa prečistil pomocou bleskovej chromatografie (toluén/etylacetát, 3 : 1 —> 1 : 2), čím sa získal čistý etylester kyseliny 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-[N,N-bis(tercbutoxykarbonyl)amino]-5-metylpyridin-3-yl)-propiónovej (200 mg, 21 %) a mierne znečistený etylester kyseliny 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-[N,N-bis(tercbutoxykarbonyl)amino]-4-metylpyridin-3-yl)-propiónovej (0,68 g).
(j) 3-(6-Amino-4-metyl-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-propiónová kyselina
Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-[N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)amino]-4metyl-pyrridin-3-yl)-propiónovej kyseliny (36 mg, 0,072 mmol) sa rozpustil v koncentrovanej HCI (3,0 ml). Roztok sa zahrieval pod refluxom počas jednej hodiny. Zahustením pri zníženom tlaku sa získala zlúčenina uvedená v názve (18,7 mg, 98 %) vo forme hydrochloridovej soli.
1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 2,42 (s, 3H), 2,72 - 2,95 (m, 5H), 6,81 (s, 1H),7,58(s, 1H).
-49MS (+) 227 (M+1).
Príklad 16
2-Merkaptometyl-3-piperidin-4-yl-butánová kyselina (a) ferc-Butylester4-formylpiperidíh-1-karboxylovej kyseliny
Perjodistan (26,9 g, 63,5 mmol) sa pridal k roztoku 1-terc-butoxykarbonylpiperidín-4-metanolu (10,5 g, 48,8 mmol) v metylénchloride (200 ml) a zmes sa miešala počas 90 minút. Pridal sa dietyléter a zrazeniny sa odstránili extrakciou s 10 % Na2S2O3/nasýteným NaHCO3 (1:1, 300 ml). Organická vrstva sa premyla s 0,5 M NaOH a soľankou, vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku. Blesková chromatografia (hexán/EtOAc, 8:2) poskytla ŕerc-butylester 4-formylpiperidín-1karboxylovej kyseliny (8,5 g, 81 %).
(b) Dietylester 2-(1-ferc-butoxykarbonyl-piperidin-4-ylmetylén)-malónovej kyseliny
K roztoku dietylesteru kyseliny malónovej (710 μΙ, 4,7 mmol) a tercbutylesteru 4-formylpiperidín-1-karboxylovej kyseliny (1,0 g, 4,7 mmol) v metylénchloride (5 ml) sa pridal piperidin (46 μΙ, 0,47 mmol) a octová kyselina (27 μΙ, 0,47 mmol). Reakčná zmes sa miešala počas 72 hodín pri laboratórnej teplote a potom počas 16 hodín pri teplote 45 °C. Pridal sa EtOAc a zmes sa premyla s vodou a soľankou, vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku. Surový produkt sa prečistil pomocou bleskovej chromatografie (heptán/EtOAc, 3:1 -> 1 : 3), čím sa získal dietylester 2-(1-terc-butoxykarbonyl-piperidin-4-ylmetylén)-malónovej kyseliny (0,69 g, 40 %).
(c) Dietylester 2-[1-(1-ŕerc-butoxykarbonyl-piperidin-4-yl)-etyl]-malónovej kyseliny
MeLi (5,34 ml, 8,54 mmol, 1,6 M v dietylétere) sa po kvapkách pridal k suspenzii Cul (0,74 g, 3,88 mmol) v THF (5 ml) pri teplote -78°C pod argónom a zmes sa miešala počas 30 minút. Po kvapkách sa pridal roztok dietylesteru 2-(1terc-butoxykarbonyl-piperidin-4-ylmetylén)-malónovej kyseliny (0,69 g, 1,94 mmol) v THF (5 ml) a reakčná zmes sa miešala počas 120 minút pri teplote -78 °C a potom sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu v priebehu 60 minút. Pridal sa koncentrovaný vodný NH4OH a zmes sa potom extrahovala s EtOAc, premyla sa
-50s koncentrovaným vodným NH4OH a soľankou, vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku. Surový produkt sa prečistil pomocou bleskovej chromatografie (heptán/EtOAc, 3 :1 —> 1 : 6), čím sa získal dietylester 2-(1-(1-ŕerc-butoxykarbonylpiperidin-4-yl)-etyl]-malónovej kyseliny (0,39 g, 54 %).
(d) Monoetylester 2-(1-(1 -terc-butoxykarbonyl-piperidín-4-yl)-etyl]malónovej kyseliny
Roztok KOH (84 mg, I. 16 mmol) v EtOH (2 ml) sa po kvapkách pridal k roztoku dietylesteru 2-[1-(1-terc-butoxykarbonyl-piperidin-4-yl)-etyl]-malónovej kyseliny (0,39 g, 1,01 mmol) v metylénchloride (4 ml) a EtOH (10 ml) pri teplote 0 °C. Výsledná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc. Pridal sa EtOAc a zmes sa premyla s 0,5 M HCI a soľankou, vysušila sa zahustila pri zníženom tlaku, pričom sa získalo 416 mg surového monoetylesteru 2-(1-(1-ŕerc-butoxykarbonylpiperidin-4-yl)-etyl]-malónovej kyseliny.
(e) terc-Butylester 4-(2-etoxykarbonyl-1-metyl-alyl)-piperidín-1 -karboxylovej kyseliny
Formaldehyd (132 mg, 1,65 mmol, 37 % vo vode) sa pridal k roztoku surového monoetylesteru 2 [1-(1-ŕerc-butoxykarbonyl-piperidin-4-yl)-etyl]-malónovej kyseliny (416 mg) v metylénchloride (2 ml) pri teplote 0 °C. Po kvapkách sa pridal dietylamín (153 μΙ, 1,47 mmol) a zmes sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc. Pridal sa EtOAc a zmes sa premyla s vodou a nasýtenom NaHCO3, vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku. Surový produkt sa prečistil pomocou bleskovej chromatografie (toluén/EtOAc, 3:1), čím sa získal terc-butylester 4-(2etoxykarbonyl-1-metyl-alyl)-piperidín-1-karboxylovej kyseliny (0,18 g, 49 % v dvoch krokoch).
(f) ŕerc-Butylester 4-(3-acetylsulfanyl-2-etoxykarbonyl-1-metyl-propyl)-piperidín-1karboxylovej kyseliny
TEA (86 μΙ, 0,617 mmol) sa pridal k roztoku terc-butylesteru 4-(2etoxykarbonyl-1-metyl-alyl)piperidín-1-karboxylovej kyseliny (0,18 g, 0,59 mmol) v tiooctovej kyseline (2 ml) pri teplote 0 °C. PO miešaní počas 6 hodín sa pridala ďalšia tiooctová kyselina (2 ml) a zmes sa miešala pri teplote 45 °C cez noc. Pridal sa EtOAc a zmes sa premyla s vodou, nasýteným NaHCO3 a soľankou, vysušila sa
-51 zahustila pri zníženom tlaku. Surový produkt sa prečistil pomocou bleskovej chromatografie (toluén/EtOAc, 5:1 —> 1 :1), pričom sa získal mierne znečistený ŕerc-butylester 4-(3-acetylsulfanyl-2-etoxykarbonyl-1 -metyl-propyl)-piperidín-1 karboxylovej kyseliny (0,17 g, 75 %).
(g) Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-piperidin-4-yl-butánovej kyseliny
TFA (2 ml) sa pridal k roztoku ŕerc-butylesteru 4-(3-acetylsulfanyl-2etoxykarbonyl-1-metylpropyl)-piperidín-1.-karboxylovej kyseliny (0,17 g, 0,439 mmol) v metylénchloride (10 ml). Reakčná zmes sa miešala počas 90 minút a zahustila sa pri zníženom tlaku. Surový produkt sa prečistil s použitím HPLC (10 -> 50 % acetonitrilu vo vode, 0,1 % TFA), čím sa získal etylester 2acetylsulfanylmetyl-3-piperidin-4-yl-butánovej kyseliny (101 mg, 54 %) vo forme TFA soli.
(h) 2-Merkaptometyl-3-piperidin-4-yl-butánová kyselina
Koncentrovaná chlorovodíková kyselina (4 ml) sa pridala k TFA soli etylesteru 2-acetylsulfanylmetyl-3-piperidin-4-ylbutánovej kyseliny (0,101 g, 0,252 mmol) pod argónom. Reakčná zmes sa zahrievala pod refluxom počas 5 hodín a potom sa zahustila pri zníženom tlaku, čím sa získala diastereoizomérna zmes zlúčeniny uvedenej v názve (73,7 mg) vo forme hydrochloridovej soli.
1H NMR (500 MHz, CD3OD) pre hlavný diastereoizomér: δ 1,10 (d, 3H), 1,36 -1,58 (m, 2H), 1,71 - 1,78 (m, 2H). 1,93 - 1,99 (m, 1 H), 2,05 - 2,11 (m, 1 H), 2,60 - 2,66 (m, 2H), 2,80 - 2,86 (m, 1H), 2,94 - 3,02 (m, 2H), 3,38 - 3,45 (m, 2H).
MS (+) 218 (M+1).
Príklad 17
3-(6-Amino-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-butánová kyselina (a) ŕerc-Butylester (5-formyl-pyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny ŕerc-Butylester (5-hydroxymetyl-pyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny (7,00 g, 31,2 mmol) sa rozpustil v suchom DMSO (50 ml) a reakčná banka sa ponorila do vodného kúpeľa pri teplote 15 °C. Pridal sa TEA (13,1 ml, 94,0 mmol) a následne
-52sa po častiach pridal komplex oxidu sírového-pyridínu (15, g, 94,0 mmol). Reakčná zmes sa miešala počas ďalších 45 minút a vyliala sa na rozdrvený ľad. Produkt sa extrahoval s dietyléterom a spojené organické extrakty sa premyli so soľankou, vysušili sa a zahustili pri zníženom tlaku. Rekryštalizáciou zo zmesi hexán/CH2C2 sa získal ŕerc-butylester (5-formyl-pyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny (5,40 g, 78 %) vo forme bielych kryštálov.
(b) Dietylester 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetylén)-malónovej kyseliny
K roztoku dietylesteru malónovej kyseliny (710 μΙ., 4,7 mmol) a ŕercbutylesteru (5-formyl-pyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny (1,04 g, 4,7 mmol) v zmesi metylénchlorid/DMF (11 :1, 5 ml) sa pridal piperidín (46 μΙ, 0,47 mmol) a kyselina octová (27 μΙ, 0,47 mmol). Reakčná zmes sa miešala počas 72 hodín pri laboratórnej teplote a potom počas 16 hodín pri teplote 45 °C. Pomaly sa pridal heptán, pričom sa získal dietylester 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3ylmetylénj-malónovej kyseliny (0,69 g, 40 %) vo forme šedých kryštálov.
(c) Dietylester 2-[1 -(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-etyl]-malónovej kyseliny
MeLi (6,5 ml, 10,4 mmol, 1,6 M v dietylétere) sa po kvapkách pridal k suspenzii Cul (0,9 g, 4,73 mmol) v THF (28 ml) pri teplote -78 °C pod argónom. Reakčná zmes sa miešala počas 30 minút. Po kvapkách sa pridal roztok dietylesteru 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetylén)-malónovej kyseliny (0,84 g, 2,3 mmol) v THF (7 ml) a reakčná zmes sa miešala počas 180 minút pri teplote -78 °C. Po kvapkách sa pridal nasýtený vodný NH4OH a zmes sa extrahovala s EtOAc. Organická fáza sa premyla s nasýteným vodným NH4OH a NaCl, vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku. Blesková chromatografia (toluén/EtOAc, 3 :1 —> 1 : 6) poskytla dietylester 2-[1-(6-ŕerc-butoxykarbonylaminopyridin-3-yl)-etyl]-malónovej kyseliny (0,723 g, 82,.4 %) vo forme bielej pevnej látky.
(d) Monoetylester 2-[1-(6-ŕerc-butoxykarbonylaminopyridin-3-yl)etyl]-malónovej kyseliny
-53Roztok KOH (113,6 mg, 2,04 mmol) v EtOH (2 ml) sa po kvapkách pridal k roztoku dietylester 2-[1-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-etyl]-malónovej kyseliny (0,7 g, 1,84 mmol) v metylénchloride (4 ml) a EtOH (10 ml) pri teplote 0 °C pod argónom a reakčná zmes sa miešala cez noc. Pridal sa 1 M KOH (100 ml) a zmes sa premyla s metylénchloridom. Vodná fáza sa okyslila na hodnotu pH 2 s použitím 2 M HCI a extrahovala sa s EtOAc. Organická fáza sa vysušila a zahustila sa pri zníženom tlaku, pričom sa získal surový monoetylester 2-[1-(6-ŕercbutoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)etyl]-malónovej kyseliny (423 mg, 65 %).
(e) Etylester 2-[1-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-etyl]-akrylovej kyseliny
Dietylamín (0,153 ml, 1,473 mmol) sa pridal k roztoku monoetyesteru 2-[1(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-etyl]-malónovej kyseliny (423 mg, 1,2 mmol) a formaldehydu (132 mg, 1,626 mmol, 36 % vo vode) v metylénchloride (2 ml) pri teplote 0 °C pod argónom. Zmes sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc. Pridal sa EtOAc a roztok sa premyl s vodou, NaHCO3 a soľankou, vysušil sa a zahustil pri zníženom tlaku. Blesková chromatografia (toluén/EtOAc, 3:1) poskytla etylester 2-[1-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-etyl]-akrylovej kyseliny (158 mg, 41 %).
(f) Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)butánovej kyseliny
TEA (0,076 ml, 0,542 mmol) sa pridal k roztoku etylesteru 2-[1-(6-ŕercbutoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-etyl]-akrylovej kyseliny (158 mg, 0,493 mmol) v tiooctovej kyseline (2 ml) pri teplote 0 °C pod argónom. Zmes sa miešala pri teplote 45 °C cez noc. Pridal sa EtOAc a roztok sa premyl s NaHCO3 a soľankou, vysušil sa a zahustil pri zníženom tlaku. Blesková chromatografie (toluén/EtOAc, 5 :1 —> 1 :1) poskytla mierne znečistený etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-fercbutoxykarbonyl-aminopyridin-3-yl)-butánovej kyseliny (178 mg, 91 %).
(g) Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-amino-pyridin-3-yl)-butánovej kyseliny
TFA (2 ml) sa pridal k roztoku etylesteru 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-ŕercbutoxykarbonyl-amino-pyridin-3-yl)-butánovej kyseliny (178 mg, 0,449 mmol) v metylénchloride (2 ml). Zmes sa miešala počas 60 minút a zahustila sa pri
-54zníženom tlaku. Blesková chromatografia (toluén/EtOAc. 1 : 6) poskytla znečistený etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-amino-pyridin-3-yl)-butánovej kyseliny (176 mg, 95%). Ďalšie prečistenie pomocou HPLC (10 -> 70 % acetonitrilu vo vode, 0,1 % TFA) poskytlo etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-amino-pyridin-3yl)-butánovej kyseliny (104 mg, 56 %) vo forme TFA soli.
(h) 3-(6-Amino-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-butánová kyselina
Koncentrovaná chlorovodíková kyselina (4 ml) sa pridala ketylesteru 2acetylsulfanylmetyl-3-(6-amino-pyridin-3yl)-butánovej kyseliny (104 mg, 0,253 mmol) pod argónom. Reakčná zmes sa zahrievala pod refluxom počas 5 hodín a potom sa zahustila pri zníženom tlaku, čím sa získala diastereoizomérna zmes zlúčeniny uvedenej v názve (61 mg, 92 %) vo forme hydrochloridovej soli.
1H NMR (500 MHz, D2O) pre hlavný diastereoizomér: δ 1,26 (d, 3H), 2,49 2,53 (m, 2H), 2,64 - 2,77 (m, 1 H), 2,95 - 3,02 (m, 1H), 7,02 (d, 1 H), 7,69 (d, 1H), 7,88 (m, 1 H).
MS (+) 227 (M+1).
Príklad 18
3-(6-Amino-2-metylpyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-propiónová kyselina (a) ŕerc-Butylester (5-bróm-6-metylpyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny
5-Bróm-6-metylpyridin-2-ylamín (25,0 g, 133,7 mmol) v zmesi THF/ŕercbutanol (1 : 10, 550 ml) sa nechal reagovať s di-ŕerc-butyldikarbonátom (39,3 g, 180,0 mmol) a DMAP (2,40 g, 19,6 mmol). Reakčná zmes sa miešala počas 4 hodín pri teplote 40 °C a zahustila sa pri zníženom tlaku. Bleskovou chromatografiou (metylénchlorid) sa získal ŕerc-butylester (5-bróm-6-metylpyridin-2yl)-karbámovej kyseliny (17,0 g, 44 %).
(b) ŕerc-Butylester [5-(ŕerc-butyldimetyl-silanyloxymetyl)-6-metylpyridin-2-yl]karbámovej kyseliny
Roztok ŕerc-butylesteru (5-bróm-6-metylpyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny (2,75 g, 95,8 mmol). ŕerc-butyldimetyl-tributylstananylmetoxy-silánu (43,5 g,
-55100,2 mmol) a dichloridu bis(trifenylfosfín)paládia(ll) (1,00 g, 1,40 mmol) v 1,2díchlóretáne (350 ml) sa miešal pod refluxom počas 48 hodín. Ďalší dichlorid bis(trifenylfosfín)paládium(ll) (1,00 g, 1,40 mmol) sa pridával každých 12 hodín. Zmes sa ochladila na teplotu 0 °C a pridal sa dietyléter (300 ml) a následne nasýtený vodný fluorid draselný (100 ml). Zmes sa intenzívne miešala počas 60
I minút a prefiltrovala sa. Organická fáza sa premyla s vodou, vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku. Bleskovou chromatografiou (MeOH/CH2CI2, 1 :99) sa získal ŕerc-butylester [5-(ŕerc-butyldimetyl-silanyloxymetyl)-6-metylpyridin-2-yl]karbámovej kyseliny (15 g. 47 %).
(c) ŕerc-Butylester (5-hydroxymetyl-6-metylpyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny
Tetrabutylamóniumfluorid (19,6 g, 62,4 mmol) sa pridal k roztoku ŕerc-butylesteru [5-(ŕerc-butyldimetyl-silanyloxymetyl)-6-metylpyridin-2-yl]-karbámovej kyseliny (10,5 g, 31,23 mmol) v THF (100 ml) a miešal sa pri laboratórnej teplote cez noc. Pridala sa voda a produkt sa extrahoval s chloroformom. Organická fáza sa vysušila a zahustila pri zníženom tlaku. Bleskovou chromatografiou (MeOH/CH2CI2, 2,5 : 77,5) sa získal ŕerc-butylester (5-hydroxymetyl-6-metylpyridin2-yl)-karbámovej kyseliny (6,0 g, 81 %).
(d) 5-Brómmetyl-2-[N,N-bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-pyrimidín
Trifenylfosfín (9,83 g, 37,5 mmol) a CBr4 (17,7 g, 53,5 mmol) sa pridal k roztoku ŕerc-butylesteru (5-hydroxymetyl-6-metylpyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny (8,50 g, 35,7 mmol) v dichlórmetáne (30 ml) pri teplote 0 °C. Reakčná zmes sa miešala počas 3 hodín pri laboratórnej teplote a potom sa zriedila s dichlórmetánom. Organická fáza sa premyla s vodou, vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku. Bleskovou chromatografiou (CH2CI2) sa získal 5-brómmetyl-2[N,N-bis(ŕerc-butoxy-karbonyl)amino]-pyrimidín (4,05 g, 38 %).
(e) Dietylester 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-2-metylpyridin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny
Roztok dietylesteru kyseliny malónovej (1,21 ml, 7,97 mmol) v DMF (2 ml) sa po kvapkách pridal k suspenzii NaH (348 mg, 7,97 mmol, 55 % v minerálnom oleji) v DMF (5 ml) pri teplote 0 °C pod argónom. Reakčná zmes sa miešala počas 45
-56minút a po kvapkách sa pridal roztok ŕerc-butylesteru (5-brómmetyl-6-metylpyridin2-yl)-karbámovej kyseliny (2,0 g, 6,64 mmol) v DMF (5 ml). Zmes sa miešala cez noc (0 °C -> 20 °C). Pridal sa EtOAc a roztok sa premyl s vodou a soľankou, vysušil sa a zahustil pri zníženom tlaku. Blesková chromatografia (heptán/EtOAc, 4:1) poskytla dietylester 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-2-metylpyridin-3-ylmetyl)malónovej kyseliny (1,87 g, 74 %).
f) Monoetylester 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-2-metylpyridin-3-ylmetyl)malónovej kyseliny
Roztok KOH (300 mg, 5,35 mmol) v EtOH (4 ml) sa pridal k roztoku dietylesteru 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-2-metylpyridin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny (1,85 g 4,86 mmol) v zmesi EtOH/metylénchlorid (2 : 1, 21 ml) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala počas 40 hodín pri laboratórnej teplote a pridal sa EtOAc. Zmes sa premyla s 0,5 M HCI a soľankou, vysušila sa pri zníženom tlaku, pričom sa získal surový monoetylester 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-2-metylpyridin-3ylmetyl)-malónovej kyseliny (1,45 g).
(g) Etylester 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-2-metylpyridin-3-ylmetyl)-akrylovej kyseliny
Dietylamín (359 mg, 4,90 mmol) sa po kvapkách pridal k roztoku monoetylester 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-2-metylpyridin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny (1,44 g, 4,09 mmol) a formaldehydu (464 mg, 5,72 mmol, 37 % vo vode) v metylénchloride (35 ml) pri teplote 0 °C pod argónom. Zmes sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc. Pridal sa metylénchlorid a roztok sa premyl s Na2CO3 a soľankou, vysušil sa a zahustil pri zníženom tlaku, pričom sa získal etylester 2-(6ŕerc-butoxykarbonylamino-2-metylpyridin-3-ylmetyl)-akrylovej kyseliny (1,03 g, 79 %).
(h) Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-2-metyl-pyridin-3yl)-propiónovej kyseliny
TEA (0,556 ml, 3,99 mmol) sa pridal k roztoku etylesteru 2-(6-tercbutoxykarbonylamino-2-metylpyridin-3-ylmetyl)-akrylovej kyseliny (1,23 g, 3,84 mmol) v tiooctovej kyseline (10 ml) pri teplote 0 °C pod argónom. Zmes sa miešala
-57pri laboratórnej teplote počas 64 hodín. Pridal sa EtOAc a roztok sa premyl s Na2CO3 a soľankou, vysušil sa a zahustil pri zníženom tlaku. Bleskovou chromatografiou (toluén/EtOAc, 5:1 -> 1:1) sa získal etylester 2acetylsulfanylmetyl-3-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-2-metyl-pyridin-3-yl)-propiónovej kyseliny (1,33 g,87 %).
(i) 3-(6-Amino-2-metyl-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-propiónová kyselina
Koncentrovaná chlorovodíková kyselina (2 ml) sa pridala k etylesteru 2acetylsulfanylmetyl-3-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-2-metyl-pyridin-3-yl)-propiónovej kyseline (77 mg. 0,19 mmol) pod argónom. Reakčná zmes sa zahrievala pod refluxom počas 110 minút a potom sa zahustila pri zníženom tlaku, čím sa získala zlúčenina uvedená v názve (39 mg, 76 %) vo forme hydrochloridovej soli.
1H NMR (500 MHz, D2O): δ 2,49 (s, 3H), 2,73 - 2,92 (m, 5H), 6,81 (d, 1H), 7,77 (d, 1 H).
MS (+) 227 (M+1).
Príklad 19
Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(2-amino-pyrimidin-5-yl)-propiónovej kyseliny (a) 2-[N,N-bis(terc-Butoxykarbonyl)amino]-5-brómpyrimidín
2-Amino-5-brómpyrimidín (9,00 g, 51,7 mmol) v zmesi THF/terc-butanol (1 : 1, 100 ml) sa nechal reagovať s di-terc-butyldikarbonátom (34,0 g, 156,0 mmol) a DMAP (3,00 g, 24,5 mmol). Reakčná zmes sa nechala stáť pri teplote prostredia cez noc a zahustila sa pri zníženom tlaku. Zvyšok sa rozdelil medzi dichlórmetán a vodu a hodnota pH sa adjustovala na 4 s 1 M HCI. Roztok sa extrahoval s dichlórmetánom, vysušil sa a zahustil pri zníženom tlaku. Surový produkt sa suspendoval v hexáne a prefiltroval sa, pričom sa získal 2-[N,N-bis(tercbutoxykarbonyl)amino]-5-brómpyrimidín (15,0 g, 77 %).
(b) 2-[N,N-bis(terc-Butoxykarbonyl)amino]-5-(terc-butyldimetyl-silanyloxymetyl)pyrimidín
-58Roztok 2-[N,N-bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-5-brómpyrimidínu (16,0 g, 45,0 mmol), ŕerc-butyldimetyl-tributylstananylmetoxy-silánu (20,5 g, 47,1 mmol) a dichloridu bis(trifenylfosfín)paládia(ll) (1,00 g, 1,40 mmol) v 1,2-dichlóretáne (50 ml) sa miešal pod refluxom cez noc. Pridal sa ďalší dichlorid bis(trifenylfosfín)paládia(ll) (1,00 g, 1,40 mmol) a roztok sa refluxoval počas 8 hodín. Zmes sa ochladila na teplotu 0’C a pridal sa dietyléter (200 ml) a následne sa pridal nasýtený vodný fluorid draselný (50 ml). Zmes sa intenzívne miešala počas 60 minút a prefiltrovala sa. Organická fáza sa premyla s vodou, vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku. Bleskovou chromatografiou (lvleOH/CH2CI2, 1 :99) sa získal 2-[N,N-bis(ŕercbutoxykarbonyl)amino]-5-(ŕerc-butyldimetyl-silanyloxymetyl)-pyrimidín (10,2 g, 55 %).
(c) 2-[N,N-bis(terc-Butoxykarbonyl)amino]-5-hydroxymetyl-pyrimidín
Tetrabutylamóniumfluorid (15,3 g, 48,6 mmol) sa pridal k roztoku 2-[N,Nbis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-5-(ŕerc-butyldimetylsilanyloxymetyl)-pyrimidínu (10,0 g, 24,3 mmol) v THF (100 ml) a miešal sa pri laboratórnej teplote cez noc. Pridala sa voda a produkt sa extrahoval a chloroformom. Organická fáza sa vysušila a zahustila pri zníženom tlaku. Bleskovou chromatografiou (MeOH/CH2CI2, 2,5:77,5) sa získal 2-[N,N-bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-5-hydroxymetylpyrimídín (4,20 g , 53 %).
(d) 5-Brómmetyl-2-[N,N-bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-pyrimidín
Trifenylfosf í n (2,71 g, 10,73 mmol) a CBr4 (4,89 g, 14,8 mmol) sa pridal k roztoku 2-[N,N-bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-5-hydroxymetyl-pyrimidínu (3,20 g, 9,83 mmol) v dichlórmetáne (30 ml) pri teplote 0 °C. Reakčná zmes sa miešala počas jednej hodiny a potom sa zriedila s dichlórmetánom. Organická fáza sa premyla s vodou, vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku. Bleskovou chromatografiou (CH2CI2) sa získal 5-brómmetyl-2-[N,N-bis(ŕercbutoxykarbonyl)amino]-pyrimidín (2,55 g, 67 %).
(e) Dietylester 2-(2-[N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)amino]-pyimidin-5-ylmetyl)malónovej kyseliny
-59Roztok dietylesteru kyseliny malónovej (0,704 ml, 4,64 mmol) v DMF (2 ml) sa po kvapkách pridal k suspenzii NaH (200 mg, 4,64 mmol, 55 % v minerálnom oleji) v DMF (4 ml) pri teplote 0 °C pod argónom. Reakčná zmes sa miešala počas 30 minút a po kvapkách sa pridal roztok 5-brómmetyl-2-[N,N-bis(ŕercbutoxykarbonyl)-amino]-pyrimidínu (1,5 g, 3,86 mmol) v DMF (4 ml). Zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 3 hodín. Pridal sa EtOAc a roztok sa premyl s vodou a soľankou, vysušil sa a zahustil pri zníženom tlaku. Bleskovou chromatografiou (heptán/EtOAc, 3:2) sa získal dietylester 2-(2-[N,N-bis(ŕercbutoxykarbonyl)amino]-pyrimidin-5-ylmetyl)-malónovej kyseliny (0,87 g 40 %).
(f) Monoetylester 2-(2-[N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)amino]-pyrimidin-5-ylmetyl)malónovej kyseliny
Roztok KOH (106 mg, 1,88 mmol) v EtOH (2 ml) sa pridal k roztoku dietylesteru 2-(2-[N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)amino]-pyrimidin-5-ylmetyl)malónovej kyseliny (0,80 g, 1,71 mmol) v zmesi EtOH/metylénchlorid (2:1, 12 ml) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala počas 16 hodín pri laboratórnej teplote a pridal sa EtOAc. Zmes sa premyla s 0,5 M HCl a soľankou, vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku, pričom sa získal monoetylester 2-(2-[N,N-bis(tercbutoxykarbonyl)amino]-pyrimidin-5-ylmetyl)-malónovej kyseliny (0,67 g, 89 %).
(g) Etylester 2-(2-[N,N-bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-pyrimidin-5-ylmetyl)akrylovej kyseliny
Dietylamín (0,124 mi, 1,69 mmol) sa po kvapkách pridal k roztoku monoetylesteru kyseliny 2-(2-[N,N-bis(terc-butoxykarbonyl)amino]-pyrimidin-5ylmetyl)-malónovej (0,62 g, 1,41 mmol) a formaldehydu (160 mg, 2,0 mmol, 37 % vo vode) v metylénchloride (15 ml) pri teplote 0 °C pod argónom. Zmes sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc. Pridal sa EtOAc a roztok sa premyl s vodou, NaHCO3 a soľankou, vysušil sa a zahustil pri zníženom tlaku, čím sa získal surový etylester 2-(2-[N,N-bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-pyrimidin-5-ylmetyl)-akrylovej kyseliny (0,54 g, 94 %).
(h) Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(2-[N,N bis(terc-butoxykarbonyl)amino]pyrimidin-5-yl)propiónovej kyseliny
-60TEA (0,189 ml, 1,35 mmol) sa pridal k roztoku etylesteru 2-(2-[N,N-bis(ŕercbutoxykarbonyl)amino]-pyrimidin-5-ylmetyl)-akrylovej kyseliny (0,53 g, 1,30 mmol) vtiooctovej kyseline (13 ml) pri teplote 0 °C pod argónom. Zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 40 hodín. Pridal sa EtOAc a roztok sa premyl s Na2CO3 a soľankou, vysušil sa a zahustil pri zníženom tlaku. Bleskovou chromatografiou (heptán/EtOAc, 5: 1 —> 1 : 1) sa získal etylester 2-acetylsulfanylrhetyl-3-(2-[N,N bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-pyrimidin-5-yl)propiónovej kyseliny (0,56 g, 89 %).
(i) Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(2-amino-pyrimidin-5-yl)-propiónovej kyseliny
TFA (1,5 ml) sa pridal k roztoku etylesteru 2-acetylsulfanylmetyl-3-(2-[N,N bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-pyrimidin-5-yl)propiónovej kyseliny (225 mg, 0,46 mmol) v metylénchloride (1,5 ml). Reakčná zmes sa miešala počas 120 minút a zahustila sa pri zníženom tlaku, čím sa získala zlúčenina uvedená v názve (172 mg, 94 %) vo forme TFA soli.
1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 1,22 (t, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,80 - 3,00 (m, 3H), 3,00 - 3,22 (m, 2H), 4,13 (q, 2H). 8,43 (s, 2H).
MS (+) 284 (M+1).
Príklad 20
2-(6-Amino-pyridin-3-ylmetyl)-3-merkapto-butánová kyselina (a) Etylester 3-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino- pyridin-3-yl)-2(dietoxyfosforyl)propiónovej kyseliny
K suspenzii NaH (1,17 g, 60 % v minerálnom oleji, 29,3 mmol) v DMF (70 ml) sa pridal trietylfosfónoacetát (6,01 g, 26,82 mmol) pri teplote 0 °C. Reakčná zmes sa nechala miešať pri teplote 0 °C počas 0,5 hodín. K reakčnej zmesi sa pridal ŕerc-butylester (5-brómmetyl-pyridin-2-yl)karbámovej kyseliny (7,0 g, 24,38 mmol) pri teplote 0 °C a reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 16 hodín. Reakčná zmes sa zriedila pomalým pridávaním nasýteného vodného chloridu amónneho (70 ml). Zmes sa extrahovala s EtOAc, premyla sa so soľankou a vysušila sa. Surový produkt sa prečistil pomocou stĺpcovej chromatografie
-61 (CH2CI2/EtOAc, 1:0 -> 1:1 -» 0:1), pričom sa získal etylester 3-(Q-tercbutoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-(dietoxyfosforyl)-propiónovej kyseliny (5,1 g,
%).
(b) Etylester 2-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-but-2-énovej kyseliny ľ ' .
K suspenzii NaH (278,8 mg, 60 % v minerálnom oleji, 6,97 mmol) v THF (25 ml) sa pri teplote 0 °C pridal roztok etylester 3-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin3-yl)-2-(dietoxyfosforyl)-propiónovej kyseliny (2,5 g, 5,81 mmol) v THF (30 ml).Reakčná zmes sa nechala miešať pri teplote 0 °C počas jednej hodiny. K reakčnej zmesi sa po kvapkách pridal acetaldehyd (512 mg, 11,6 mmol) pri teplote 0 °C. Reakčná zmes sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu a potom sa miešala počas 16 hodín Do reakčnej nádoby sa pridal acetaldehyd (2,0 g) a reakčná zmes sa nechala miešať pri laboratórnej teplote počas ďalších 16 hodín. Reakčná zmes sa zriedila pomalým pridávaním nasýteného vodného chloridu amónneho (30 ml). Zmes sa extrahovala s EtOAc, premyla sa so soľankou a vysušila sa , čím sa získal surový produkt. Surový produkt sa prečistil pomocou stĺpcovej chromatografie (EtOAc/hexán, 1 : 8), pričom poskytol etylester kyseliny 2(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-but-2-énovej vo forme zmesi izomérov (1,1 g, 60 %).
(c) Etylester 3-acetylsulfanyl-2-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)butánovej kyseliny
Ktioloctovej kyseline (15 ml) sa pridal Et3N (1,5 g, 14,8 mmol) a etylester 2(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-but-2-énovej kyseliny (920 mg, 2,9 mmol) pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa miešala pri teplote 40 až 45 °C počas 7 dní (ďalšie tioloctová kyselina (1,5 ml) sa pridávala k reakčnej zmesi každé dva dni). Reakčná zmes sa ochladila na laboratórnu teplotu a potom sa zriedila s EtOAc (50 ml). Organická vrstva sa oddelila, premyla sa s nasýteným NaHCO3, soľankou a vysušila sa. Spojené organické vrstvy sa zahustili pri zníženom tlaku. Surový produkt sa prečistil postupne s použitím troch chromatografických kolón (CH2CI2, EtOAc/hexán, 1:5a acetón/hexán, 1 : 8), pričom sa získal etylester 3acetylsulfanyl-2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyrídin-3-ylmetyl)-butánovej kyseliny vo formé diastereo-izomérnej zmesi (780 mg, 68 %). Diastereoizoméma zmes sa
-62separovala s použitím preparatívnej chirálnej chromatografie, podľa postupu opísanej nižšie, pričom sa získali štyri izoméry etylester/A 3-acetylsulfanyl-2-(6-ŕercbutoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-butánovej kyseliny, etylester/B 3acetylsulfanyl-2-(6-ŕerc-butoxykarbonyl-aminopyridin-3-ylmetyl)-butánovej kyseliny, etylester/C 3-acetylsulfanyl-2-(6-ŕerc-butoxy-karbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)butánovej kyseliny a etylester/D 3-acetylsulfanyl-2-(6-ŕerc-butoxykarbonylaminopyridin-3-ylmetyl)-butánovej kyseliny.
Etylester/D 3-acetylsulfanyl-2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)butánovej kyseliny
Etylester/D 3-acetylsulfanyl-2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3ylmetyl)-butánovej kyseliny sa oddelil od zmesi etylesteru/A 3-acetylsulfanyl-2-(6ŕerc-butoxykarbonylaminopyridin-3-ylmetyl)-butánovej kyseliny, etylesteru/B 3acetyl-sulfanyl-2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-butánovej kyseliny, etylesteru/C 3-acetylsulfanyl-2-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)butánovej kyseliny a etylesteru/D 3-acetylsulfanyl-2-(6-ŕerc-butoxykarbonylaminopyridin-3-ylmetyl)-butánovej kyseliny na chirálnej OJ kolóne eluovaním so zmesou izohexán : acetonitril: izopropylalkohol: dietylamín (99; 0,5; 0,5; 0,1). Enantiomérny zvyšok predstavoval > 99 %, podľa stanovenia pomocou HPLC s požitím kolóny chiralpak OJ, eluovaním so zmesou izohexán : etanol: dietylamín (99; 1; 0,5).
Etylester/A 3-acetylsulfanyl-2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)butánovej kyseliny
Etylester/A 3-acetylsulfanyl-2-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3ylmetyl)-butánovej kyseliny sa oddelil od zmesi etylesteru/A 3-acetylsulfanyl-2-(6ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-butánovej kyseliny, etylesteru/B 3acetylsulfanyl-2-(6-ferc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-butánovej kyseliny a etylester/C 3-acetylsulfanyl-2-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)butánovej kyseliny na kolóne chiralcel OJ c eluovaním so zmesou izohexán : 1propanol: dietylamín (98; 2; 0,1). Enantiomérny zvyšok predstavoval > 99%, podľa stanovenia pomocou HPLC s použitím kolóny chiralpak OJ, eluovaním so zmesou izohexán : etanol: dietylamín (99; 1; 0,5).
-63Etylester/B 3-acetylsulfanyl-2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)butánovej kyseliny
Etylester/B 3-acetylsulfanyl-2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3ylmetyl)-butánovej kyseliny sa oddelil od zmesi etylesteru/B 3-acetylsulfanyl-2-(6terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-butánovej kyseliny a etylesteru/C 3acetylsulfanyl-2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-butánovej kyseliny na kolóne chiralcel AS, eluovaním so zmesou hexán : etanol : dietylamín (99 : 1 : 0,5). Enantiomérny zvyšok predstavoval > 99%, podľa stanovenia pomocou HPLC, s použitím kolóny chiralpak AS, eluovaním so zmesou izohexán : etanol : dietylamín (99; 1; 0,5).
Etylester/C 3-acetylsulfanyl-2-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)butánovej kyseliny
Etylester/C 3-acetylsulfanyl-2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3ylmetyl)-butánovej kyseliny sa oddelil od zmes etylesteru/B 3-acetylsulfanyl-2-(6terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-butánovej kyseliny a etylesteru/C 3acetyl-sulfanyl-2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-butánovej kyseliny na kolóne chiralcel AS, eluovaním so zmesou hexán : etanol: dietylamín (99 : 1 : 0,5). Enantiomérny zvyšok predstavoval 87 %, ako sa stanovilo pomocou HPLC s použitím kolóny chiralpak AS, eluovaním so zmesou izohexán : etanol : dietylamín (99; 1; 0,5).
(d) 2-(6-Amino-pyridin-3-ylmetyl)-3-merkapto-butánová kyselina/A
Roztok etylesteru/A 3-acetylsulfanyl-2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin3-ylmetyl)-butánovej kyseliny (45 mg; 0,11 mmol) v koncentrovanej HCI (2 ml) sa refluxoval pod argónom počas jednej hodiny. Reakčná zmes sa nechala ochladiť na laboratórnu teplotu a zahustila sa pri zníženom tlaku, pričom sa získalo 28,4 mg zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme hydrochloridovej soli.
1H NMR (400 MHz, D2O): δ 7,89 (d, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,03 (d, 1 H), 3,23 3,33 (m, 1H), 3,1 - 3,2 (m, 1H), 2,75 - 2,9 (m, 2H), 1,47 (d, 3H).
MS (+) 227 (M+1).
-64(e) 2-(6-Amino-pyridin-3-ylmetyl)-3-merkapto-butánová kyselina/B
Roztok etylesteru/B 3-acetylsulfanyl-2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin3-ylmetyl)-butánovej kyseliny (55 mg; 0,14 mmol) v koncentrovanej HCI (2 ml) sa refluxoval pod argónom počas jednej hodiny. Reakčná zmes sa nechala ochladiť na laboratórnu teplotu a zahustila sa pri zníženom tlaku, pričom sa získalo 39,4 mg zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme hydrochloridovej soli.
1H NMR (400 MHz, D2O): δ 7,89 (d, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,03 (d, 1H), 3,23 3,33 (m, 1 H), 3,1 - 3,2 (m, 1 H), 2,75 - 2,9 (m, 2H), 1,47 (d, 3H).
MS (+) 227 (M+1 ).
(f) 2-(6-Amino-pyridin-3-ylmetyl)-3-merkapto-butánová kyselina/C
Roztok etylesteru/C 3-acetylsulfanyl-2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin3-ylmetyl)-butánovej kyseliny (9 mg; 0,02 mmol) v koncentrovanej HCI (0,5 ml) sa refluxoval pod argónom počas jednej hodiny. Reakčná zmes sa nechala ochladiť na laboratórnu teplotu a zahustila sa pri zníženom tlaku, pričom sa získalo 6,4 mg zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme hydrochloridovej soli.
1H NMR (400 MHz, D2O): δ 7,82 - 7,9 (m, 1H). 7,67 (br s. 1H). 7,0 (d. 1H),
3,16 - 3,28 (m, 1H), 2,96 - 3,04 (m, 1H), 2,76 - 2,86 (m, 2H), 1,47 (d, 3H).
MS (+) 227 (M+1).
(g) 2-(6-Amino-pyridin-3-ylmetyl)-3-merkapto-butánová kyselina/D
Roztok etylesteru/D 3-acetylsulfanyl-2-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin3-ylmetyl)-butánovej kyseliny (9 mg, 0,02 mmol) v koncentrovanej HCI (0,5 ml) sa refluxoval pod argónom počas jednej hodiny. Reakčná zmes sa nechala ochladiť laboratórnu teplote a zahustila sa pri zníženom tlaku, pričom sa získalo 6,8 mg zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme hydrochloridovej soli.
1H NMR (400 MHz, D2O): δ 7,82 - 7,9 (m, 1H), 7,67 (br s, 1H), 7,0 (d, 1H),
3,16 - 3,28 (m, 1H), 2,96 - 3,04 (m, 1H), 2,76 - 2,86 (m, 2H), 1,47 (d, 3H).
MS (+) 227 (M+1 ).
-65Príklad 21
2-(6-Amino-pyridin-3-ylmetyl)-3-merkapto-pentánová kyselina (a) Etylester 2-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)pent-2-énovej kyseliny :
K roztoku NaH (290,5 mg, 60 % v minerálnom oleji, 7,5 mmol) v THF (25 ml) sa pri teplote 0 °C pridal roztok etylesteru 3-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3yl)-2-(dietoxyfosforyl)-propiónovej kyseliny {2,5 g, 5,81 mmol) v THF (30 ml). Reakčná zmes sa nechala miešať pri teplote 0 °C počas jednej hodiny. K reakčnej zmesi sa pridal propiónaldehyd (725 mg, 12,5 mmol), po kvapkách pri teplote 0 °C. Reakčná zmes sa nechala miešať pri laboratórnej teplote počas 16 hodín. Pridal sa propiónaldehyd (2,5 g) a zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas ďalších 16 hodín. Reakčná zmes sa zriedila pomalým pridávaním nasýteného vodného NH4CI (30 ml). Zmes sa extrahovala s EtOAc, premyla sa so soľankou a vysušila sa. Surový produkt sa prečistil pomocou stĺpcovej chromatografie (EtOAc/hexán, 1 : 8), pričom sa získal etylester 2-(6-ferc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-pent-2énovej kyseliny, vo forme zmesi izomérov (1,2 g, 60 %).
(b) Etylester 3-acetylsulfanyl-2-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)pentánovej kyseliny
Ku tioloctovej kyseline (15 ml) sa pridal Et3N (1,8 g, 17 mmol) a etylester 2(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-pent-2-énovej kyseliny (1,1 g, 3,3 mmol) pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa miešala pri teplote 65 °C počas 8 dní (ďalšia tiooctová kyselina (1,5 ml) sa pridávala k reakčnej zmesi každé dva dni). Reakčná zmes sa ochladila na laboratórnu teplotu a potom sa zriedila s EtOAc. Organická vrstva sa oddelila, premyla sa s nasýteným NaHCO3, soľankou a vysušila sa. Spojené organické vrstvy sa zahustili pri zníženom tlaku. Zvyšok sa prečistil postupne s použitím dvoch chromatografických kolón (CH2CI2 a EtOAc/hexán, 1 : 5), pričom sa získalo 350 mg zmesi požadovaných produktov a nezreagovaného východiskového materiálu. Surový produkt sa ďalej prečistil pomocou HPLC (EtOH/hexán, 1 : 9) a potom pomocou stĺpcovej chromatografie (acetón/hexán, 1 :8), čím sa získala zlúčenina uvedená v názve vo forme diastereoizomérnej zmesi (180 mg, 18%). Diastereoizomérna zmes etylesteru 3-66acetylsulfanyl-2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-pentánovej kyseliny sa oddelila s použitím preparatívnej chirálnej chromatografie podľa postupov, ktoré sú opísané nižšie, pričom sa získali štyri izoméry, etylester/A 3-acetylsulfanyl-2-(6terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-pentánovej kyseliny, etylester/B 3acetylsulfanyl-2-(6-ŕerc-butoxy-karbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-pentánovej kyseliny, etylester/C 3-acetylsulfanyl-2-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3ylmetyl)-pentánovej kyseliny a etylester/D 3-acetylsulfanyl-2-(6-tercbutoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-pentánovej kyseliny. Diastereoizomérna zmes sa separovala na dvoch kolónach chiralcel OJ, ktoré boli navzájom spojené, eluovaním so zmesou izohexán : izopropylalkohol: metanol (97 : 1 : 2). Enantiomérny zvyšok sa stanovil analyticky pomocou HPLC s použitím dvoch kolón chiralcel OJ, ktoré boli navzájom spojené, eluovaním so zmesou izohexán : izopropylalkohol: metanol (97:1: 2). Pre etylester/A až etylester/C 3acetylsulfanyl-2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-pentánovej kyseliny sa zistil enantiomérny zvyšok > 99 %, pričom tento predstavoval 97 % pre etylester/D 3-acetylsulfanyl-2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)pentánovej kyseliny.
(c) 6-Amino-pyridin-3-ylmetyll-3-merkapto-pentánová kyselina/A
Roztok etylesteru/A 3-acetylsulfanyl-2-(6-/erc-butoxykarbonylamino-pyridin3-ylmetyl)-pentánovej kyseliny (50,4 mg, 0,12 mmol) v koncentrovanej HCI (2 ml) sa refluxoval pod argónom počas 1,5 hodín. Reakčná zmes sa nechala ochladiť na laboratórnu teplotu a zahustila sa pri zníženom tlaku, pričom sa získalo 33,9 mg zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme hydrochloridovej soli.
1H NMR (500 MHz, D2O): δ 7,87 (dd, 1H), 7,67 (d, 1H), 7,0 (d, 1H), 3,02 3,16 (m, 2H), 2.79-2,87 (m, 2H), 1,79-1,88 (m, 1 H), 1,53 - 1,64 (m, 1H), 1,07 (t, 3H).
MS (+) 241 (M+1).
(d) 2-(6-Amino-pyridin-3-ylmetyl)-3-merkapto-pentánová kyselina/B
Roztok etylesteru/B 3-acetylsulfanyl-2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin3-ylmetyl)-pentánovej kyseliny (51,6 mg; 0,13 mmol) v koncentrovanej HCI (2 ml)
-67sa refluxoval pod argónom počas 1,5 hodín. Reakčná zmes sa nechala ochladiť na laboratórnu teplotu a zahustila sa pri zníženom tlaku, pričom sa získalo 34,7 mg zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme hydrochlorid ovej soli.
1H NMR (500 MHz, D2O): δ 7,87 (dd, 1 H), 7,67 (d, 1H), 7,0 (d, 1 H), 3,02 3,16 (m, 2), 2,79-2,87 (m, 2H), 1,79- 1,88 (m, 1H), 1,53- 1,64 (m, 1H), 1,07 (t, 3H).
MS (+) 241 (M+1).
(e) 2-(6-Amino-pyridin-3-ylmetyl)-3-merkapto-pentánová kyselinä/C
Roztok etylesteru/C 3-acetylsulfanyl-2-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin3-ylmetyl)-pentánovej kyseliny (4,3 mg; 0,01 mmol) v koncentrovanej HCI (2 ml) sa refluxoval pod argónom počas 1,5 hodín. Reakčná zmes sa nechala ochladiť na laboratórnu teplotu a zahustila sa pri zníženom tlaku, pričom sa získalo 2,9 mg zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme hydrochloridovej soli.
1H NMR (500 MHz, D2O): δ 7,86 (dd, 1H), 7,66 (br s, 1H), 7,0 (d, 1H), 2,94 3,04 (m, 2H), 2,74 -2,.9 (m, 2H), 1,88 -1,97 (m, 1H), 1,55 -1,66 (m, 1H), 1,05 (t, 3H).
MS (+)241 (M+1).
(f) 2-(6-Amino-pyridin-3-ylmetyl)-3-merkapto-pentánová kyselina/D
Roztok etylesteru/D 3-acetylsulfanyl-2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin3-ylmetyl)-pentánovej kyseliny (19,2 mg; 0,05 mmol) v koncentrovanej HCI (2 ml) sa refluxoval pod argónom počas 1,5 hodín. Reakčná zmes sa nechala ochladiť na laboratórnu teplotu a zahustila sa pri zníženom tlaku, pričom sa získalo 12,9 mg zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme hydrochloridovej soli.
1H NMR (500 MHz, D2O); δ 7,86 (dd, 1 H), 7,66 (br s, 1 H), 7,0 (d, 1 H), 2,94 3,04 (m, 2H), 2,74 - 2,9 (m, 2H), 1,88 - 1,97 (m, 1H), 1,55 -1 ,66 (m, 1H), 1,05 (t, 3H).
MS (+) 241 (M+1).
-68Príklad 22
3-(6-Amino-5-chlór-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-propiónová kyselina (a) Etylester 6-amino-5-chlór-nikotínovej kyseliny
N-Chlórsukcínimid (21,7 g, 0,162 mol) sa pridal k suspenzii etylesteru 6amino-nikotínovej kyseliny (18,0 g, 0,108 mol) v acetonitrile (270 ml) a zmes sa refluxovala počas dvoch hodín. Reakčná zmes sa prefiltrovala a zahustila pri zníženom tlaku. Zvyšok sa rozpustil v dichlórmetáne, premyl sa s vodou a vysušil. Bleskovou chromatografiou (2,5 % MeOH v CH2CI2) sa získal čistý etylester 6amino-5-chlór-nikotínovej kyseliny (17,23 g, 79 %).
(b) Etylester 6-bis(terc-butoxykarbonyl)-amino-5-chlór-nikotínovej kyseliny
DMAP (0,11 g, 0,9 mmol) a (Boc)2O (21,54 g, 99 mmol) sa pridal k roztoku etylesteru 6-amino-5-chlór-nikotínovej kyseliny (9,0 g, 45 mmol) v dichlórmetáne (250 ml). Reakčná zmes sa miešala počas 24 hodín. V priebehu reakčnej doby sa pridal DMAP (0,02 ekv.) a (Boc)2O (3 x 0,5 ekv.). Reakčná zmes sa premyla s vodou a vysušila sa. Surový produkt sa premyl s hexánom, pričom sa získal čistý etylester 6-bis(terc-butoxykarbonyl)-amino-5-chlór-nikotínovej kyseliny (11,87 g, 66 %) (c) ŕerc-Butylester (3-chlór-5-hvdroxymetyl-pyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny
L1AIH4 (2,4 g, 63,2 mmol) sa po častiach v priebehu 3,5 hodín pridal k roztoku etylesteru 6-bis(ŕerc-butoxykarbonyl)-amino-5-chlór-nikotínovej kyseliny (11,5 g, 28,6 mmol) v THF (70 ml) pri teplote 0 °C. Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc, potom sa opatrne pridal NH4CI (nasýtený) a následne sa pridala voda. Roztok sa prefiltroval, vysušil a zahustil pri zníženom tlaku, pričom sa získal surový ŕerc-butylester (3-chlór-5-hvdroxymetyl-pyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny (5,86 g, 79 %).
(d) ŕerc-Butylester (5-brómmetyl-3-chlór-pyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny
Trifenylfosfín (2,61 g, 9,7 mmol) a následne tetrabromid uhličitý (4,58 g, 13,8 mmol) sa pridali k suspenzii ŕerc-butylesteru (3-chlór-5-hvdroxymetyl-pyridin-2-69yl)-karbámovej kyseliny (2,38 g, 9,2 mmol) v CH2CI2 (60 ml) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 5 hodín a potom sa zahustila pri zníženom tlaku. Pridal sa acetonitril (40 ml) a zmes sa udržiavala pri teplote -20 °C cez noc. Zmes sa potom prefiltrovala a kryštalický zvyšok sa premyl s chladným acetonitrilom. Filtrát sa zahustil pri zníženom tlaku a získal sa ďalší výťažok bromidu, ako je opísané vyššie. terc-Butylester (5-brómmetyl-3-chlór-pyridin-2-yl)karbámovej kyseliny (1,86 g, 63 %) sa získal vo forme bielych kryštálov.
(e) Dietylester 2-(6-terc-butoxykarbonylamino-5-chlór-pyridin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny
Dietylester kyseliny malónovej (1,87 ml, 12,31 mmol) sa pridal k suspenzii NaH (0,54 g, 12,31 mmol, 55 %) v suchom DMF (15 ml) pri teplote -8 °C. Táto zmes sa miešala počas 15 minút a potom sa po kvapkách pridal roztok tercbutylesteru (5-brómmetyl-3-chlór-pyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny (3,30 g, 10,26 mmol) v suchom DMF (50 ml) pri teplote 0 °C. Výsledný roztok sa miešal počas 40 minút pri teplote 0 eC. potom sa opatrne pridal NH4CI (5 ml, nasýtený). Miešaním pri laboratórnej teplote cez noc a zahustením pri zníženom tlaku sa získal zvyšok, ktorý sa rozpustil v zmesi voda/CH2CI2. Vodná vrstva sa extrahovala s CH2CI2 a spojené organické extrakty sa vysušili, prefiltrovali a zahustili pri zníženom tlaku. Bleskovou chromatografiou (1 % MeOH v CH2CI2) sa získal dietylester 2-(6-ŕercbutoxykarbonyl-amino-5-chlórpyridin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny (2,45 g, 60 %) vo forme lepkavého číreho oleja.
(f) Monoetylester 2-(6-terc-butoxykarbonylamino-5-chlórpyridin-3-ylmetyl)malónovej kyseliny
Roztok KOH (0,44 g, 6,72 mmol, 85 %) v etanole (5 ml) sa pridal k roztoku dietylesteru 2-(6-terc-butoxykarbonyl-amino-5-chlórpyridin-3-ylmetyl)-malónovéj kyseliny (2,45 g, 6,11 mmol) v etanole (25 ml) a metylénchloride (10 ml) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala počas 18 hodín pri laboratórnej teplote. Rozpúšťadlo sa odparilo vo vákuu a zvyšok sa rozpustil vo vode. Vodná vrstva sa premyla s éterom, okyslila sa na hodnotu pH 4 s použitím 1 M HCI a extrahovala sa s metylénchloridom a etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa premyli s vodou a soľankou a vysušili sa. Prefiltrovaním a zahustením pri zníženom tlaku sa získal
-70surový produkt, ktorý sa prečistil pomocou bleskovej chromatografie (10 % MeOH v CH2CI2), pričom sa získal monoetylester 2-(6-terc-butoxykarbonylamino-5chlórpyridin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny (1,41 g, 62 %), vo forme žlto-biele sklovitej peny.
(g) Etylester 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-5-chlórpyridin-3-ylmetyl)-akrylovej kyseliny
Dietylamín (3,67 ml, 3,67 mmol) sa po kvapkách pridal a následne sa pridala voda (2,5 ml) a CH2CI2 (2,5 ml) k zmesi monoetylesteru 2-(6-terc-butoxykarbonylamino-5-chlórpyridin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny (1,40 g, 3,64 mmol) a 37% vodného roztoku formaldehydu (0,29 ml, 3,75 mmol) v CH2CI2 (2 ml) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala počas 20 hodín pri laboratórnej teplote a potom sa vyliala do zmesi ľad-voda a extrahovala sa s metylénchloridom. Organická vrstva sa premyla s 5 % NaHCO3, vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku. Blesková chromatografia (1 až 2,5 % metanolu v CH2CI2) poskytla výťažok 0,81 g etylesteru 2-(6-terc-butoxy-karbonylamino-5-chlór-pyridin-3-ylmetyl)-akrylovej kyseliny (65 %).
(h) Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-terc-butoxykarbonylamino-5-chlórpyridin-3yl-metyl)-propiónovej kyseliny
Tiooctová kyselina (4 ml) sa pridala k suspenzii etylesteru 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-5-chlór-pyridin-3-ylmetyl)-akrylovej kyseliny (0,732 g, 2,16 mmol) a trietylamínu (0,31 ml, 2,23 mmol) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala pri laboratórnej teplote pod argónom cez noc, vyliala sa na zmes ľad-voda a extrahovala sa s CH2CI2 Organická fáza sa premývala s nasýteným NaHCO3, až pokým neustal vývoj plynu a potom sa vysušila. Surový produkt sa prečisti dvakrát s bleskovou chromatografiou (CH2CI2,1 až 2,5 % MeOH v CH2CI2 a hexán/EtOAc, 5 : 2 —> 1 : 1), pričom sa získal čistý etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-ŕercbutoxykarbonylamino-5-chlórpyridin-3-ylmetyl)-propiónovej kyseliny (0,79 g, 87 %).
(i) 3-(6-Amino-5-chlórpyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-propiónová kyselina
Roztok etylesteru 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-5chlórpyridin-3-ylmetyl)-propiónovej kyseliny (55 mg, 0,132 mmol) v koncentrovanej HCI (4 ml) sa refluxoval počas 90 minút. Reakčná zmes sa ochladila a zahustila sa
-71 pri zníženom tlaku, pričom sa získala zlúčenina uvedená v názve, vo forme HCI-soli (36 mg, 96,4 %).
1H NMR (400 MHz, D2O): δ 2,70 - 2,97 (m, 5H), 7,73 (s, 1H), 8,09 (s, 1H).
MS (+)248 (M+1). ,
Príklad 23
3-(6-Amino-5-hydroxymetylpyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-propiónová kyselina (a) Etylester 6-bis((erc-butoxykarbonyl)amino-5-vinyl-nikotínovej kyseliny
Zmes 5-bróm-6-bis(terc-butoxykarbonyl)amino-nikotínovej kyseliny (4,50 g, 10,1 mmol), vinyltributylcínu (3,52 g, 11,1 mmol) a trifenyfosfinu tetrakispaládia (0,50 g, 0,40 mmol) v THF (15 ml) sa miešala pod refluxom počas 24 hodín. Pridal sa trifenyfosfín tetrakispaládia (0,50 g) a po 24 hodinách pod refluxom sa reakčná zmes ochladila a zriedila sa s dichlórmetánom (100 ml). Pridal sa nasýtený vodný KF (25 ml) a roztok sa miešal počas jednej hodiny. Pridala sa voda a produkt sa extrahoval s dichlórmetánom, organická fáza sa vysušila a zahustila pri zníženom tlaku. Bleskovou chromatografiou (1 % MeOH v dichlórmetáne) sa získal etylester
6-bis(terc-butoxykarbonyl)amino-5-vinyl-nikotínovej kyseliny (3,20 g, 81 %).
(b) ŕerc-Butylester (5-hydroxymetyl-3-vinyl-pyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny
DIBAL (25 ml, 1 M v hexáne) sa po kvapkách pridal k roztoku etylesteru 6bis(ŕerc-butoxykarbonyl)amino-5-vinyl-nikotínovej kyseliny (2,00 g, 5,1 mmol) v THF (40 ml) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas jednej hodiny. Opatrne sa pridal NH4CI (nasýtený) a následne sa pridala voda a zmes sa zahustila pri zníženom tlaku. Zvyšok sa suspendoval v 5 % MeOH v dichlórmetáne a prefiltroval sa cez oxid kremičitý. Filtrát sa vysušil a zahustil pri zníženom tlaku, pričom sa získal terc-butylester (5-hydroxymetyl-3-vinylpyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny (1,00 g, 78 %).
(c) terc-Butylester (5-brómmetyl-3-vÍnylpyridin-2-yl)karbámovej kyseliny
K miešanej suspenzii terc-butylesteru (5-hydroxymetyl-3-vinylpyridin-2-yl)karbámovej kyseliny (10,0 g, 40,0 mmol) v CH2CI2 (150 ml) ad THF (60 ml) sa
-72pridal trifenylfosfín (11,5 g, 44,0 mmol) a následne sa pridal tetrabromid uhličitý (19,9 g, 60,0 mmol) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas jednej hodiny a potom sa zahustila pri zníženom tlaku. Pridal sa acetonitril (100 ml) a zmes sa udržiavala pri teplote -20 °C cez noc. Zmes sa potom odfiltrovala a kryštalický zvyšok sa premyl s chladným acetónitrilom. Produkt sa prečistil pomocou bleskovej chromatografie (1 % MeOH v dichlórmetáne), čím sa získal ŕerc-butylester (5-brómmetyl-3-vinylpyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny (4,5 g, 36 %).
(d) Dietylester 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-5-vinylpyridin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny
Dietylester kyseliny malónovej (2, 30 g, 14,3 mmol) sa pridal k suspenzii NaH (0,61 g, 14,3 mmol, 55 %) v suchom DMF (75 ml) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala počas 15 minút a potom sa po kvapkách pridala k roztoku ŕerc-butylesteru (5-brómmetyl-3-vinylpyridin-2-yl)-karbámovej kyseliny (4,50 g, 14,3 mmol) v suchom DMF (100 ml) pri teplote 0 °C. Výsledný roztok sa miešal počas 40 minút pri teplote 0 °C, potom sa opatrne pridal NH4CI (30 ml, nasýtený). Zahustením pri zníženom tlaku sa získal zvyšok, ktorý sa rozpustil v zmesi voda/CH2Cl2. Vodná vrstva sa extrahovala s CH2CI2 a spojené extrakty sa vysušili, prefiltrovali a zahustili pri zníženom tlaku. Bleskovou chromatografiou (1 % MeOH v CH2CI2) sa získal dietylester 2-{6-ŕerc-butoxykarbonylamino-5-vinylpyridin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny (4,30 g, 77 %).
(e) Monoetylester 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-5-vinylpyridin-3-ylmetyl)malónovej kyseliny
Roztok KOH (0,71 g, 12,6 mmol, 85 %) v etanole (10 ml) sa pridal k roztoku dietylesteru 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-5-vinylpyridin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny (4,30 g, 11,0 mmol) v etanole (25 ml) a dichlórmetáne (10 ml) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala počas 6 hodín pri laboratórnej teplote. Rozpúšťadlo sa odparilo vo vákuu a zvyšok sa rozpustil vo vode. Vodná vrstva sa premyla s éterom, okyslila sa na hodnotu pH 4 s použitím 1 M HCI a extrahovala sa s dichlórmetánom. Organická vrstva sa premyla s vodou a soľankou a vysušila sa. Prefiltrovaním a zahustením pri zníženom tlaku a následnou bleskovou
-73chromatografiou (10 % MeOH v CH2CI2) sa získal monoetylester 2-(6-tercbutoxykarbonylamino-5-vinylpyridin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny (3,05 g, 76 %).
(f) Etylester 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-5-vinylpyridin-3-ylmetyl)-akrylovej kyseliny f '
Dietylamín (0,85 ml, 8,80 mmol) sa po kvapkách pridal k zmési monoetylesteru 2-(6-terc-butoxykarbonylamino-5-vinylpyridin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny (3,05 g, 8,37 mmol) a 37 % vodného roztoku formaldehydu (0,71 g, 8,80 mmol) v CH2CI2 (2 ml) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala počas 3 hodín pri laboratórnej teplote a potom sa vyliala na zmes ľad-voda a extrahovala sa s dichlórmetánom.. Organická vrstva sa premyla s 5 % NaHCO3 a vysušila sa. Bleskovou chromatografiou (1 % metanolu v CH2CI2) sa získal etylester 2-(Q-tercbutoxykarbonylamino-5-vinylpyridin-3-ylmetyl)-akrylovej kyseliny (1,7Ú g, 61 %).
(g) Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-5-vinylpyridin-3yl)-propiónovej kyseliny
Tiooctová kyselina (4 ml) sa po kvapkách pridala k suspenzii etylesteru 2(6-terc-butoxykarbonylamino-5-vinylpyridin-3-ylmetyl)-akrylovej kyseliny (0,73 g, 2,16 mmol) v trietylamíne (0,31 ml, 2,23 mmol) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala pri laboratórnej teplote pod argónom cez noc, vyliala sa na zmes ľad-voda a extrahovala sa s CH2CI2. Organická fáza sa premývala s nasýteným NaHCO3, až pokým neustal vývoj plynu a potom sa vysušila. Bleskovou chromatografiou (1 % MeOH v CH2CI2) sa získal etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-tercbutoxykarbonylamino-5-vinylpyridin-3-ylmetyl)-propiónovej kyseliny (0,51 g, 70 %).
(h) Etylester 3-(6-ŕe/'c-butoxykarbonylamino-5-hydroxymetylpyridin-3-yl)-merkaptometylpropiónovej kyseliny
Ozón sa nechal prebublávať cez roztok etylesteru 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6ŕerc-butoxykarbonylamino-5-vinylpyridin-3-yl)-propiónovej kyseliny (0,65 g, 1,60 mmol) v etanole (25 ml) pri teplote -78 °C. Potom sa zmes nechal počas 5 minút prebublávať O2 a následne sa N2 prebublával počas 15 minút. K zmesi sa pri teplote -78 °C opatrne pridávala zmes NaBH4 (0,30 g, 8,00 mmol) vo vode a reakčná zmes sa nechala dosiahnuť teplotu 0 °C. V miešaní sa pokračovalo počas
-743 hodín. Pridal sa acetón (10 ml) a reakčná zmes sa odparila na 1/3 pôvodného objemu. Pridal sa 50 % NaCl (vodný) a zmes sa extrahovala s dichlórmetánom, vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku, pričom sa získal surový etylester 3-(6ŕerc-butoxykarbonylamino-5-hydroxymetylpyridin-3-yl)-merkaptometyl-propiónovej kyseliny (0,38 g, 63 %).
(i) Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-terc-butoxykarbonylamino-5-hydroxymetylpyridin-3-yl)-propiónovej kyseliny
Zmes surového etylesteru 3-(6-terc-butoxykarbonylamino-5-hydroxymetylpyridin-3-yl)-merkaptometylpropiónovej kyseliny (0,38 g, 1,0 mmol) a KHCO3 (0,11 g, 1,1 mmol) v anhydride kyseliny octovej (1 ml) sa miešala pri laboratórnej teplote počas 5 hodín. Potom sa pridal NH4CI (nasýtený) a voda. Zmes sa extrahovala s dichlórmetánom, vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku. S použitím bleskovej chromatografie (CH2CI2, 2,5 % MeOH v CH2CI2) sa získal etylester 2-acetylsulfanyl-metyl-3-(6-terc-butoxykarbonylamino-5hydroxymetylpyridin-3-yl)-propiónovej kyseliny (0,23 g, 60 %).
(j) 3-(6-Amino-5-hydroxymetyl-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-propiónová kyselina
Roztok etylesteru 3-(6-terc-butoxykarbonylamino-5-hydroxymetylpyridin-3yl)-2-merkaptometyl-propiónovej kyseliny (50 mg, 135 mmol) v koncentrovanej HCI (2 ml) sa refluxoval počas 60 minút. Reakčná zmes sa ochladila a zahustila pri zníženom tlaku, pričom sa získal zlúčenina uvedená v názve, vo forme HCI-soli (37 mg, 98,3 %).
1H NMR (400 MHz, D2O): δ 2,70 - 2,95 (m, 5H), 4,65 (s, 2H), 7,68 (s, 1H), 7,88 (s, 1H).
MS (+) 244 (M+1).
Príklad 24
2-Merkaptometyl-3-pyrolidin-3-yl-propiónová kyselina (a) (1-Benzyl-pyrolidin-3-yl)-metanol
-75Red-AI (160 ml 3,5 M roztoku v toluéne, 560 mmol) sa pridal k roztoku 1benzyl-5-oxo-pyrolidín-3-karboxyloevj kyseliny (20 g, 91 mmol) v suchom THF (650 ml) pod argónom. Reakčná zmes sa refluxovala počas 2,5 hodín a potom sa vyliala na zmes rozdrveného ľadu a NaOH (20 %). Fázy sa oddelili, vodná fáza sa extrahovala s toluénom a spojené organické fázy sa vysušili a zahustili pri zníženom tlaku, pričom sa získalo 17,9 g surového produktu vo forme žltého oleja.
(b) ŕerc-Butylester 3-hydroxymetyl-pyrolidín-1 -karboxylovej kyseliny % Pd-C (6,1 g) a mravčan amónny (10 g, 158 mmol) sa pridali k roztoku (1-benzylpyrolidin-3-yl)-metanolu (6,1 g, 32 mmol) v metanole (220 ml) pod argónom. Po refluxovaní počas 15 minút sa reakčná zmes prefiltrovala za horúca cez stípček celitu, celit sa potom premyl s metanolom a spojené organické fázy sa zahustili. Zvyšok sa rozpustil v ŤHF (35 ml) a vode (35 ml), roztok sa ochladil na teplotu 0 °C a pridal sa K2CO3 (22 g; 159 mmol) a di-ŕerc-butyldikarbonát (6,95 g, 32 mmol). Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc. THF sa odstránilo pri zníženom tlaku, pridala sa voda a vodná fáza sa extrahovala s EtOAc. Spojené organické fázy sa vysušili a zahustili pri zníženom tlaku, pričom sa získalo 4,64 g surového produktu. Bleskovou chromatografiou (heptán/EtOAc: 1/0 —> 68/32) surového produktu sa získal ŕerc-butylester 3-hydroxymetylpyrolidín1-karboxylovej kyseliny (3,82 g, 60 %), vo forme bezfarebného oleja.
(c) ŕerc-Butylester 3-trifluórmetansulfonyloxymetylpyrolidin-1-karboxylovej kyseliny
Metansulfonylchlorid (0,4 ml, 5,17 mmol) sa po kvapkách pridal k roztoku ŕerc-butylesteru 3-hydroxymetylpyrolidín-1 -karboxylovej kyseliny (1 g, 4,97 mmol) a trietylamínu (1,04 ml, 7,46 mmol) v CH2CI2 (15 ml) pri teplote 0 °C. Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc. Po prefiltrovaní sa pridal CH2CI2 a organická fáza sa premyla s 1 M HCI, vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku, pričom sa získal ŕerc-butylester 3-trifluórmetansulfonyloxymetylpyrolidín-1karboxylovej kyseliny (1,4 g, 97 %).
(d) ŕerc-Butylester 3-brómmetylpyrolidín-1 -karboxylovej kyseliny
Zmes ŕerc-butylesteru 3-trifluórmetansulfonyloxymetylpyrolidín-1karboxylovej kyseliny (3,85 g, 13,8 mmol) a LiBr (3,61 g, 42 mmol) v suchom
-76acetóne (30 ml) sa refluxoval cez noc. Reakčná zmes sa nechala ochladiť na laboratórnu teplotu, prefiltrovala sa a zahustila. Zvyšok sa rozpustil v CH2CI2 a premyl sa s vodou, vysušila sa a zahustil pri zníženom tlaku, čím sa získalo 6 g surového produktu. Prečistením pomocou bleskovej chromatografie (heptán/EtOAc: 1/0 -> 68/32) sa získal ŕerc-butylester 3-brómometylpyrolidín-1karboxylovej kyseliny (2,84 g, 78 %), vo forme bezfarebného oleja.
(e) Dietylester 2-(1-ŕerc-butorykarbonyl-pyrolidin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny
Dietylester kyseliny malónovej (1,9 ml, 12,7 mmol) sa po kvapkách pridal roztok NaH (60 %, 0,51 g, 12,8 mmol) v suchom THF (15 ml) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas jednej hodiny, po ktorej sa k refluxovanej zmesi pridal ŕerc-butylester 3-brómometylpyrolidín-1-karboxylovej kyseliny (2,8 g, 10,6 mmol) v suchom THF (30 ml). Reakčná zmes sa ďalej refluxovala počas 19 hodín a potom sa zahustila takmer do sucha. Pridala sa voda (1 liter) a produkt sa extrahoval s CH2CI2. Spojené organické fázy sa vysušili a zahustili pri zníženom tlaku, pričom sa získalo 3,3 g surového produktu. Prečistením pomocou bleskovej chromatografie (CH2CI2/EtOAc: 1/0 -> 68/32) sa získal dietylester 2-(1-ŕercbutorykarbonyl-pyrolidin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny (1,64 g, 45 %).
(f) Monoetylester 2-(1-ŕerc-butoxykarbonylpyrolidin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny
Roztok KOH (0,26 g; 4,6 mmol) v etanole (7 ml) sa pridal k roztoku dietylesteru 2-(1-ŕerc-butorykarbonylpyrolidin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny (1,52 g; 4,4 mmol) v etanole (7 ml) pri teplote 0 °C. Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc, zahustila sa pri zníženom tlaku a zvyšok sa rozpustil vo vode (500 ml). Vodná vrstva sa premyla s dietyléterom, okyslila sa na hodnotu pH 3 s použitím 0,5 M HCI a extrahovala sa s dietyléterom. Organická fáza sa vysušila a zahustila pri zníženom tlaku, pričom sa získal monoetylester 2-(1-ŕercbutoxykarbonylpyrolidin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny (1,13 g, 81 %).
(g) ŕerc-Butylester 3-(2-etoxykarbonyl-alyl)-pyrolidín-1 -karboxylovej kyseliny
Dietylamín (0,34 ml; 3,3 mmol) sa pridal k zmesi monoetylesteru 2-(1-ŕercbutoxykarbonylpyrolidin-3-ylmetyl)-malónovej kyseliny (0,69 g, 2,19 mmol) v 36 % vodnom roztoku formaldehydu (0,27 ml, 3,5 mmol), CH2CI2 (1,6 ml) a vody (1,6 ml)
-77pri teplote 0 °C. Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc, vyliala sa na zmes ľad-voda (500 ml) a extrahovala sa s CH2CI2. Spojené organické fázy sa premyli s 5 % NaHCO3, vysušili sa a zahustili pri zníženom tlaku, pričom sa získal ŕerc-butylester 3-(2-etoxykarbonyl-alyl)-pyrolidín-1-karboxylovej kyseliny (0,55 g, 87 %), vo forme bezfarebného oleja.
(h) ŕerc-Butylester 3-(3-acetylsulfanyl-2-etoxykarbonyl-propyl)-pyrolidín-1 karboxylovej kyseliny
Tiooctová kyselina (5 ml), ktorá sa ochladila na teplotu 0 °C, sa pridala k zmesi ŕerc-butylester 3-(2-etoxykarbonyl-alyl)-pyrolidín-1-karboxylovej kyseliny (0,72 g, 2,54 mmol) a trietylamínu (0,37 ml; 2,67 mmol) pri teplote 0 °C. Reakčná zmes sa miešala pri teplote 0 °C počas 30 minút, pri laboratórnej teplote počas 23 hodín a potom sa vyliala do zmesi ľad-voda (400 ml). Vodná vrstva sa extrahovala s CH2CI2. Spojené organické fázy sa premyli s nasýteným NaHCO3, vysušili sa a zahustili pri zníženom tlaku. Surový produkt sa prečistil pomocou bleskovej chromatografie (CH2CI2/EtOAc: 1/0 -» 68/32), čím sa získal ŕerc-butylester 3-(3acetylsulfanyl-2-etoxykarbonyl-propyl)-pyrolidin-1-karboxylovej kyseliny (0,72 g, 79 %), vo forme oleja.
(i) 2-Merkaptometyl-3-pyrolidin-3-yl-propiónová kyselina
Roztok ŕerc-butylesteru 3-(3-acetylsulfanyl-2-etoxykarbonyl-propyl)-pyrolidín1-karboxylovej kyseliny (0,52 g; 1,45 mmol) v koncentrovanej HCI (15 ml) sa refluxoval pod argónom počas jednej hodiny. Reakčná zmes sa nechala ochladiť na laboratórnu teplotu a zahustila sa pri zníženom tlaku, pričom ša získala diastereoizomérna zmes zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme hydrochloridovej soli (0,33 g; 100%).
1H NMR (500 MHz, D2O): δ 1,60 - 1,92 (m, 3H), 2,19 - 2,32 (m,1H), 2,32 2,42 (m, 1H), 2,66 - 2,83 (m, 3H), 2,84 - 2,96 (m, 1H), 3,23 - 3,32 (m, 1H), 3,40 3,58 (m, 2H).
MS (+) 190 (M+1 ).
Príklad 25
-783-(c/s-4--Aminocyklopent-2-enyl)-2-merkaptometyl-propiónová kyselina (a) 4-ŕerc-Butoxykarbonylamino-cyklopent-2-enylmetylester c/'s-metansulfónovej kyseliny
Metansulfonylchlorid (0,76 ml, 9,8 mmol) sa pridal k roztoku ŕerc-butylesteru cis-(4-hydroxymetyl-cyklopent-2-enyl)-karbámovej kyseliny (2 g, 9,4 mmol) a trietylamínu (1,96 ml, 14,1 mmol) v CH2CI2 (30 ml) pri teplote 0 °C. Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc. Po prefiltrovaní sa pridal CH2CI2 a organická fáza sa premyla s 1 M HCI, vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku, pričom sa získal 4-ŕerc-butoxykarbonylamino-cyklopent-2-enylmetylester c/'smetansulfónovej kyseliny (2,64 g, 96 %).
(b) ŕerc-Butylester c/'s-(4-brómmetyl-cyklopent-2-enyl)-karbámovej kyseliny
Zmes 4-ŕerc-butoxykarbonylamino-cyklopent-2-enylmetylester kyseliny c/'smetansulfónovej (2,51 g, 8,6 mmol) a LiBr (2,24 g, 25,8 mmol) v suchom acetóne (20 ml) sa refluxoval cez noc. Reakčná zmes sa nechala ochladiť na laboratórnu teplotu, prefiltrovala sa a zahustila. Zvyšok sa rozpustil v CH2CI2 a premyl sa s vodou, vysušil a zahustil pri zníženom tlaku, pričom sa získal ŕerc-butylester c/s(4-brómmetyl-cyklopent-2-enyl)-karbámovej kyseliny (2,23 g, 94 %).
(c) Dietylester 2-(c/'s-4-ŕerc-butoxykarbonylamino-cyklopent-2-enylmetyl)-malónovej kyseliny
Dietylester kyseliny malónovej (1,29 ml, 8,5 mmol) sa pridal k zmesi NaH (60 %, 0,34 g; 8,5 mmol) v DMF (10 ml). PO miešaní pri laboratórnej teplote počas 15 minút sa pridal roztok ŕerc-butylesteru c/s-(4-brómmetyl-cyklopent-2-enyl)karbámovej kyseliny (1,95 g, 7,1 mmol) v DMF (12 ml) a reakčná zmes sa miešala pri teplote 60 °C počas 19 hodín. Pridal ša EtOAc a organická fáza sa extrahovala s vodou a soľankou, vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku, pričom sa získalo 2,44 g surového produktu. Prečistenie pomocou bleskovej chromatografie (CH2CI2/EtOAc: 1/0 -> 68/32) poskytlo dietylester 2-(c/'s-4-ŕercbutoxykarbonylamino-cyklopent-2-enylmetyl)-malónovej kyseliny (1,47 g, 58 %).
-79(d) Monoetylester 2-(c/'s-4-terc-biitoxykarbonylamino-cyklopent-2-enylmetyl)malónovej kyseliny
Roztok KOH (0,19 g; 3,4 mmol) v etanole (6 ml) sa pridal k roztoku dietylesteru 2-(c/s-4-terc-butoxykarbonylamino-cyklopent-2-enylmetyl)-malónovej kyseliny (1,15 g; 3,2 mmol) v etanole (6 ml) pri teplote 0 °C. Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc, zahustila sa a pridala sa zmes ľad-voda (400 ml). Vodná fáza sa premyla s dietyléterom (emulzia vytvorená v priebehu extrakcie sa spracovala so soľankou, aby sa dosiahlo dobré oddeľovanie fáz), okyslila sa na hodnotu pH 3 s použitím 0,5 M HCI extrahovala sa s dietyléterom. Organická fáza sa vysušila a zahustila pri zníženom tlaku, pričom sa získal monoetylester 2-(c/s-4-ferc-butoxykarbonylamino-cyklopent-2-enylmetyl)-malónovej kyseliny (0,86 g, 81 %), vo forme bielych kryštálov.
(e) Etylester 2-(c/s-4-terc-butoxykarbonylamino-cyklopent-2-enylmetyl)-akrylovej kyseliny
Dietylamín (0,31 ml: 3,0 mmol) sa pridal k zmesi monoetylesteru 2-(c/s-4terc-butoxykarbonylamino-cyklopent2-enylmetyl)-malónovej kyseliny (0,66 g, 2,0 mmol) v 36 % vodnom roztoku formaldehydu (0,25 ml, 3,2 mmol), CH2CI2 (1,6 ml) a vody (1,6 ml) pri teplote 0 °C. Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc, vyliala sa na zmes ľad-voda (400 ml) a extrahovala sa s CH2CI2. V priebehu extrakcie sa oddeľovanie fáz zlepšilo pridaním soľanky. Spojené organické fázy sa premyli s 5 % NaHCCh, vysušili sa a zahustili pri zníženom tlaku, čím sa získal etylester 2-(c/s-4-ŕerc-butoxykarbonylamino-cyklopent-2-enylmetyl)-akrylovej kyseliny (0,56 g, 94 %), vo forme oleja.
(f) Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(c/s-4-terc-butoxykarbonylamino-cyklopent-2enyl)-propiónovej kyseliny
Tiooctová kyselina (4 ml), ktorá sa nechala ochladiť na teplotu 0 °C, sa pridala k zmesi etylesteru 2-(c/s-4-terc-butoxykarbonylamino-cyklopent-2enylmetyl)-akrylovej kyseliny (0,56 g, 1,9 mmol) a trietylamínu (0,28 ml, 2,0 mmol) pri teplote 0 °C. Reakčná zmes sa miešala pri teplote 0 °C počas 30 minút, pri laboratórnej teplote počas 19 hodín a'potom sa vyliala na zmes ľad-voda (400 ml). Vodná vrstva sa extrahovala s CH2CI2. Organická fáza sa premyla s nasýteným
-80NaHCCh, vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku, pričom sa získalo 1,7 g surového produktu. Prečistením pomocou bleskovej chromatografie (CH2CI2/EtOAc: 1/0 -> 68/32) sa získal etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(c/s-4-ŕercbutoxykarbonylamino-cyklopent-2-enyl)-propiónovej kyseliny (0,46 g, 65 %).
(g) 3-(cis-4-Amino-cyklopent-2-enyl)-2-merkaptometyl-proiónová kyselina
Roztok etylesteru 2-acetylsulfanylmetyl-3-(c/s-4-ŕerc-butoxykarbonylaminocyklo-pent-2-enyl)-propiónovej kyseliny (86 mg, 0,23 mmol) v koncentrovanej HCl (5 ml) sa refluxoval pod argónom počas jednej hodiny. Reakčná zmes sa nechala ochladiť na laboratórnu teplotu a zahustila sa pri zníženom tlaku, pričom sa získala diastereoizoméma zmes zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme hydrochloridovej soli (65 mg).
1H NMR (400 MHz, D2O): δ 1,35 - 1,47 (m, 2H), 1,60 - 1,72 (m, 1 H), 1,74 1,92 (m, 2H). 1,92 - 2,04 (m, 1H), 2,67 - 2,92 (m, 10H), 4,34 - 4,43 (m, 2H), 5,79 -5,85 (br s, 2H). 6,12 (d. 1H), 6,18 (d, 1H).
Príklad 26
2-Merkaptometyl-3-piperazin-1 -yl-propiónová kyselina (a) ŕerc-Butylester 4-(2-etoxykarbonyl-alyl)-piperazín-1-karboxylovej kyseliny
K roztoku etylesteru 2-brómmetyl-akrylovej kyseliny (1,93 g, 10 mmol) v N,Ndimetylformamide (25 ml) sa pridal ŕerc-butylester piperazín-1-karboxylovej kyseliny (1,86 g, 10 mmol) a potom po kvapkách, etyl-diizopropylamín (1,71 ml, 10 mmol). Po miešaní počas 16 hodín pri laboratórnej teplote sa rozpúšťadlo odstránilo pri zníženom tlaku a pridala sa voda (50 ml) a dichlórmetán (50 ml). Po miešaní počas 2 minút sa vrstvy separovali, organická vrstva sa premyla s vodou a soľankou a vysušila sa nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstránilo pri zníženom tlaku, pričom sa získal surový ŕerc-butylester 4-(2-etoxykarbonyl-alyl)-piperazín-1karboxylovej kyseliny (2,456 g, 82 %).
(b) ŕerc-Butylester 4-(3-acetylsulfanyl-2-etoxykarbonylpropyl)-piperazín-1 karboxylovej kyseliny
-81 K surovému ŕerc-butylesteru 4-(2-etoxykarbonyl-alyl)-piperazín-1karboxylovej kyseliny (2,4 g, 8,2 mmol) sa pridala tiooctová kyselina (7,5 ml) pod argónom. Zmes sa ochladila na teplotu 0 °C a po kvapkách sa pridal trietylamín (1,14 ml, 8,2 mmol). Zmes sa potom miešala pri laboratórnej teplote počas 2 dní a pridala sa tioloctová kyselina (2,5 ml). V miešaní sa pokračovalo počas jedného dňa, potom sa opatrne pridal vodný nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného, až do neutrálnej reakcie a zmes sa extrahovala trikrát s dichlórmetánom. Spojené organické vrstvy sa premyli dvakrát s vodným nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a jedenkrát so soľankou. PO vysušení nad síranom horečnatým sa rozpúšťadlo odstránilo pri zníženom tlaku a zvyšok sa prečistil pomocou stĺpcovej chromatografie (silikagél, 1,7 % metanolu v dichlórmetáne), čím sa získal ŕerc-butylester 4-(3-acetylsulfányl-2-etoxykarbonyl-propyl)-piperazín-1karboxylovej kyseliny (0,29 g, 9,4 %).
(c) 2-Merkaptometyl-3-piperazin-1-yl-proniónová kyselina
K To ŕerc-butylesteru 4-(3-acetylsulfanyl-2-etoxykarbonylpropyl)-piperazín-1karboxylovej kyseliny (0,095 g, 0,25 mmol) sa pod argónom pridala nasýtená kyselina chlorovodíková (3 ml, 37 %) a zmes sa zahrievala pod argónom na reflux počas 2,5 hodín. Roztok sa zahustil pri zníženom tlaku, pričom sa získala zlúčenina uvedená v názve, vo forme dihydrochloridovej soli (0,071 g, kvantitatívny výťažok).
1H NMR (300 MHz, D2O): δ 3,86 - 3,49 (m, 10H), 3,36 - 3,28 (m, 1 H), 3,01 2,88 (m, 2 H).
MS 205 (M+H).
Príklad 27
3-(6-Aminopyridin-3-ýl)-2-merkaptometyl-pentánová kyselina (a) Dietylester 2-[1-(6-ŕerc-butoxykarbonylaminopyridin-3-yl)-propyl]-malónovej kyseliny
K miešanej suspenzii jodidu meďného (5,71 g, 30 mmol) v dietylétere (120 ml) sa pod argónom pridal etylmagnéziumbromid (3 M roztok v dietylétere, 20 ml, 20 mmol) v rozpätí 10 minút pri teplote 0 °C. PO 5 minútach miešania sa
-82zmes ochladila na teplotu -78 °C a po kvapkách sa v priebehu 0,5 hodiny pridal roztok dietylesteru 2-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetylén)-malónovej kyseliny (5,47 g, 15,0 mmol) v tetrahydrofuráne (60 ml). Počas tohto obdobia sa pridával tetrahydrofurán (40 ml). Zmes sa nechala miešať pri teplote -40 °C počas 2,5 hodiny. Potom sa za intenzívneho a za prístupu vzduchu pridal roztok chloridu amónneho (5 %) vo vodnom roztoku amoniaku (5 %) a zmes sa zahriala na laboratórnu teplotu. Zmes sa extrahovala dvakrát s etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa premyli postupne s vodným roztokom amoniaku (5 %) a soľankou a vysušili sa nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstránilo pri zníženom tlaku a zvyšok sa rekryštalizoval, zo zmesi diizopropyléteru a tetrahydrofuránu (5:1, obj./obj.), pričom sa získal dietylester 2-[1-(6-ŕercbutoxykarbonylaminopyridin-3-yl)-propyl]-malónovej kyseliny (3,23 g, 55 %).
b) Monoetylester 2-[1-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-propyl]-malónovej kyseliny
Dietylester 2-[1-(6-terc-butoxykarbonylaminopyridin-3-yl)-propyl]-malónovej kyseliny (3,23 g, 8,19 mmol) sa rozpustil v zmesi dichlórmetánu (12 ml) a etanolu (24 ml ,99,5 %). K tomuto roztoku sa po kvapkách pridal roztok hydroxidu draselného (0,528 g, 87 %, 8,20 mmol) v etanole (16 ml, 99,6 %) pri teplote 0 °C v priebehu 0,5 hodín. V miešaní sa pokračovalo počas 16 hodín, pričom sa zmes nechala zahriať na laboratórnu teplotu. Po zahustení pri zníženom tlaku na 5 až 10 ml, sa pridala voda (50 ml) a výsledná emulzia sa miešala počas 0,5 hodiny a potom sa prefiltrovala. Filtrát sa premyl dvakrát so zmesou etylacetátu a dietyléteru (2:1, obj/obj). Vodná vrstva sa okyslila pridaním roztoku citrónovej kyseliny vo vode (10 %), na dosiahnutie hodnoty pH 4 až 5, a extrahovala sa trikrát s etylacetátom.. Spojené organické vrstvy sa premyli so soľankou, vysušili sa nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstránilo pri zníženom tlaku, pričom sa získal monoetylester 2-[1 -(6-ŕerc-butoxy-karbonylamino-pyridin-3-yl)-propyl]malónovej kyseliny (2,47 g, 82 %).
(c) Etylester 2-[1-(6-terc-butoxykarbonyl-pyridin-3-yl)-propyl]-akrylovej kyseliny
K roztoku monoetylesteru 2-[1-(6-terc-butoxy-karbonylamino-pyridin-3-yl)propylj-malónovej kyseliny (2,45 g, 6,69 mmol) v dichlórmetáne (11 ml) sa pridal
-83vodný roztok formaldehydu (0,49 ml, 37 %) a dietylamín (0,62 ml, 6,4 mmol) pri teplote 0 °C. Po intenzívnom miešaní zmesi počas 16 hodín sa pridala voda (40 ml) a etylacetát (40 ml). Po ďalšom miešaní počas 2 minút pri laboratórnej teplote sa vrstvy oddelili a vodná vrstva sa extrahovala s etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa premyli s nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a soľankou. Po vysušení nad síranom sodným sa rozpúšťadlo odstránilo pri zníženom tlaku, pričom sa získal etylester 2-[1-(6-terc-butoxykarbonyl-pyridin-3-yl)propylj-akrylovej kyseliny (1,21 g, 54 %).
(d) Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-ŕerc-butoxykarbonylaminopyridin-3-yl)pentánovej kyseliny
Etylester 2-[1-(6-terc-butoxykarbonyl-pyridin-3-yl)-propyl]-akrylovej kyseliny (120 g, 3,59 mmol) sa rozpustil vtióloctovej kyseline (4 ml) pod argónom a pridal sa trietylamín (0,56 ml, 4,0 mmol). Zmes sa zahrievala pri teplote 60 °C. Po 22 hodinách sa pridala tioloctová kyselina (2 ml). PO ďalších 14 hodinách sa zmes ochladila na laboratórnu teplotu a pomaly sa pridal nasýtený roztok hydrogenuhličitanu sodného, s cieľom získať neutrálny roztok. Tento sa extrahoval trikrát s etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa premyli s vodným nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a soľankou a vysušili sa nad síranom horečnatým. Po zahustení pri zníženom tlaku sa zvyšok prečisti pomocou stĺpcovej chromatografie (silikagél, 1,7 % metanolu v dichlórmetáne), pričom sa získal etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-terc-butoxykarbonylaminopyridin-3-yl)pentánovej kyseliny (1,22 g, 83 %).
Zmes diastereoizomérov sa separovala v preparatívnom merítku pomocou chirálnej chromatografie s použitím kolóny Chiralpak AD (250*4,6 mm) ako stacionárnej fázy a zmesi hexánu (zmes izomérov)/etanolu (85 :15), obsahujúcej dietylamín (0,05 %) pri prietokovej rýchlosti 1 ml/min s koncentráciou vzoriek 5 mg/ml.
Enatiomérny zvyšok sa stanovil analyticky pomocou chirálnej HPLC na rovnakej kolóne so zmesou hexán/etanol zmes (85 : 15) ako elučné činidlo.
-84Etylester/A kyseliny 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3yl)-pentánovej
Retenčný čas 10,72 min, ee = 99 %.
Etylester/B kyseliny 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-terc-butoxykarbopylamino-pyridin-3yl)-pentánovej
Retenčný čas 14,41 min, ee = 98 %
Etylester/C kyseliny 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3yl)-pentánovej
Retenčný čas 23,01 min, ee = 98 %.
Etylester/D kyseliny 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3yl)-pentánovej
Retenčný čas 29,83 min, ee = 97 %.
(e) 3-(6-Aminopyridin-3-yl-2-merkaptometyl-pentánová kyselina
Kyselina chlorovodíková (38 %, 4 ml) sa pridala k etylesteru kyseliny 2acetylsulfanylmetyl-3-(6-terc-butoxykarbonylaminopyridin-3-yl)-pentánovej (0,041 g. 0,1 mmol) pod argónom a zmes sa zahrievala pod refluxom počas 4 hodín. Zahustením pri zníženom tlaku a vysušením (45 °C, 0,5 mbar), pričom sa získala zlúčenina uvedená v názve, vo forme hydrochloridovej soli (0,027 mg, 97 %).
3-(6-Amino-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-pentánová kyselina /A
Táto zlúčenina sa získala z etylesteru/A kyseliny 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6terc-butoxykarbonylaminopyridin-3-yl)-pentánovej s použitím vyššie opísaného postupu.
1H NMR (300 MHz, D2O): δ 7,79 (dd, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,05 (d, 1H), 2,81 (m, 2H). 2,51 (m, 2 H), 1,66 (m, 2H), 0,72 (t, 3H).
MS + 241 (M+H).
-853-(6-Amino-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-pentánová kyselina/B
Táto zlúčenina sa získala z etylesteru/B kyseliny 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6ŕerc-butoxykarbonylaminopyridin-3-yl)-pentánovej s použitím vyššie opísaného postupu.
1H NMR (300 MHz, D2O): δ 7,85 (dd, 1 H), 7,64 (d, 1 H), 7,01 (d, 1H), 2,98 2,64 (m, 4H), 1,89 (m, 1H), 1,60 (m, 1H), 0,74 (t, 3H).
MS + 241 (M+H).
3-(6-Amino-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-pentánová kyselina /C
Táto zlúčenina sa získala z etylesteru/C kyseliny 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6terc-butoxýkarbonylaminopyridin-3-yl)-pentánovej s použitím vyššie opísaného postupu.
1H NMR (300 MHz, D2O): δ 7,85 (dd, 1H), 7,64 (d, ÍH), 7,01 (d, 1H), 2,98 2,64 (m, 4 H), 1,89 (m, 1H), 1,60 (m, 1H), 0,74 (t, 3 H).
MS + 241 (M+H).
3-(6-Amino-pyridin-3-yl)-2-merkaptometvi-pentánová kyselina/D
Táto zlúčenina sa získala z etylesteru/D kyseliny 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6ŕerc-butoxykarbonylaminopyridin-3-yl)-pentánovej s použitím vyššie opísaného postupu.
1H NMR (300 MHz, D2O): δ 7,79 (dd, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,05 (d, 1H), 2,81 (m, 2H), 2,51 (m, 2H), 1,66 (m,2 H), 0,72 (t, 3H).
MS + 241 (M+H).
Príklad 28
3-(6-Aminopyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-4-metyl-pentánová kyselina (a) Dietylester 2-[1-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-metypropyl]malónovej kyseliny
-86K miešanému roztoku kyanidu medi (3,58 g, 40 mmol) v tetrahydrofuráne (50 ml) sa pri teplote 15 °C v priebehu 15 minút pod argónom pridal roztok izopropylmagnéziumbromidu (40 ml, 2 M, 80 mmol) v tetrahydrofuráne. Po ďalších 15 minútach miešania sa po kvapkách v priebehu 15 minút pridal roztok dietylesteru 2-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetylén)-malónovej kyseliny (3,78 g, 10,4 mmol) v tetrahydrofuráne (50 ml). Po miešaní počas 16 hodín sa zmes nechala zahriať na laboratórnu teplotu. Potom sa za intenzívneho miešania a za prístupu vzduchu pridal roztok chloridu amónneho (5 %) vo vodnom roztoku amoniaku (5 %). Zmes sa extrahovala dvakrát s etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa premyli postupne s vodným roztokom amoniaku (5 %) a soľankou a vysušili sa nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstránilo pri zníženom tlaku a zvyšok sa prečisti pomocou stĺpcovej chromatografie (silikagél, 1,7% metanolu v dichlórmetáne), čím sa získal surový dietylester 2-[1-(6-ŕercbutoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-metypropyl]-malónovej kyseliny (2,85 g, 25 %).
(b) Monoetylester 2-[(1 -(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-metylpropyl]malónovej kyseliny
K roztoku dietylesteru 2-[1-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-metylpropylj-malónovej kyseliny (1,559 g, 3,84 mmol) v zmesi dichlórmetánu (6 ml) a etanolu (12 ml, 95 %) sa pri teplote 0 °C po kvapkách v priebehu 40 minút pridal roztok hydroxidu draselného (0,272 g, 85 %, 4,2 mmol) v etanole (6 ml, 95 %). Po ďalšom miešaní počas jednej hodiny sa zmes nechala zahriať na laboratórnu teplotu a v miešaní sa pokračovalo počas 18 hodín. Potom sa pridala voda (30 ml) a dichlórmetán (30 ml) a po 3 minútach miešania sa vrstvy oddelili. Organická vrstva sa extrahovala jedenkrát v vodou a spojené vodné vrstvy sa jedenkrát premyli s éterom. Potom sa pridal vodný roztok kyseliny citrónovej (10 %) na adjustovanie hodnoty pH na 4 a roztok sa extrahoval trikrát s etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa premyli so soľankou a vysušili sa nad síranom horečnatým. Po odparení rozpúšťadla sa získal surový monoetylester 2-[1-(6-ŕercbutoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-metylpropyl]-malónovej kyseliny (0,94 g, 64 %) (c) Etylester 2-[1-(6-terc-butoxykarbonyl-pyridin-3-yl)-2-metylpropyl]-akrylovej kyseliny
-87K roztoku monoetylesteru 2-[1-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2metylpropylj-malónovej kyseliny (0,94 g, 2,47 mmol) v dichlórmetáne (4 ml) sa pridal vodný roztok formaldehydu (0,18 ml, 37 %) a dietylamínu (0,23 ml, 2,32 mmol) pri teplote 0 °C. Po intenzívnom miešaní zmesi počas 16 hodín sa pridala voda (30 ml) a etylacetát (30 ml). Po ďalších 2 minútach miešania pri laboratórnej teplote sa vrstvy oddelili a vodná vrstva extrahovala dvakrát s etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa premyli s nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a soľankou. Po vysušení nad síranom sodným sa rozpúšťadlo odstránilo pri zníženom tlaku a zvyšok sa prečistil pomocou stĺpcovej chromatografie (silikagél, 1,7% metanolu v dichlórmetáne), pričom sa získal etylester 2-[1-(6-terc-butoxykarbonyl-pyridin-3-yl)-2-metyl-propyl]-akrylovej kyseliny (0,24 g, 28 %).
(d) Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-4metyl-pentánovej kyseliny
Etylester 2-[1-(6-ŕerc-butoxykarbonyl-pyridin-3-yl)-2-metylpropyl]-akrylovej kyseliny (0,431 g, 1,24 mmol) sa rozpustil vtioloctovej kyseline (4 ml) pod argónom a pridal sa trietylamín (0,21 ml, 1,5 mmol). Zmes sa zahriala na teplotu 60 °C. Po 24 hodinách sa pridala tioloctová kyselina (2 ml). Po ďalších 20 hodinách sa zmes ochladila na laboratórnu teplotu a pomaly sa pridal nasýtený roztok hydrogenuhličitanu sodného, čím sa získal neutrálny roztok. Tento sa extrahoval trikrát s etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa premyli s vodným nasýteným roztokom hydrogen-uhličitanu sodného a soľankou a vysušili sa nad síranom horečnatým. Po zahustení pri zníženom tlaku sa zvyšok prečisti pomocou stĺpcovej chromatografie (silikagél, 1,7% metanolu v dichlórmetáne), pričom sa získal etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-4-metylpentánovej kyseliny (0,284 g, 54 %), vo forme zmesi diastereoizomérov (6 : 1).
(e) 3-(6-Aminopyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-4-metylpentánová kyselina
Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-4metylpentánovej kyseliny (0,085 g, 0,20 mmol) sa rozpustil v argónom nasýtenej kyseline chlorovodíkovej (5 ml, 37 %) a zahrieval sa za refluxu pod argónom počas 5,5 hodín. Zahustením pri zníženom tlaku a vysušením pri teplote 45 °C a tlaku
-880,3 mbar sa získala zlúčenina uvedená v názve, vo forme hydrochloridovej soli (0,058 g, 99 %), ako zmes diastereoizomérov (6:1).
1H NMR (300 MHz, D2O): δ 7,81 (m, 1H), 7,62 (m, 1H), 6,98 (m, 1H), 3,18 3,06 (m, 1 H), 2,93 - 2,40 (m, 3 H), 2,23 - 1,93 (m, 1 H), 0,93 - 0,74 (m, 6 H).
I
MS 255 (M+H)
Príklad 29
3-(6-Amino-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-3-fenylpropiónová kyselina (a) Dietylester 2-[(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-fenylmetyl]-malónovej kyseliny
K intenzívne miešanej suspenzii kyanidu meďného (1,71 g, 19,06 mmol) v suchom THF (18 ml) sa pridal roztok fenylmagnéziumbromidu (12,7 ml 3 M v étere, 38,11 mmol) pri teplote 0 °C pod argónom. Zmes sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu, pričom sa získal tmavohnedý roztok. Po 150 minútach sa pri teplote 0 °C pridal roztok dietylesteru kyseliny 2-(6-terc-butoxykarbonylaminopyridin-3-ylmetylén)-malónovej (1,74 g, 4,76 mmol) v suchom THF (19 ml). Zmes sa nechala miešať počas 3 dní a potom sa pridal vodný chlorid amónny. Vodná vrstva sa oddelila a extrahovala sa s etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa premyli so soľankou a vysušili sa. Odstránením rozpúšťadla vo vákuu sa získal zvyšok, ktorý sa suspendoval v hexáne. Odfiltrovaním kryštálov sa získal dietylester 2-[(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-fenylmetyl]-malónovej kyseliny (1,85 g, 88 %).
(b) Monoetylester 2-[(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-fenylmetyl]malónovej kyseliny
Roztok KOH (0,266 g, 4,11 mmol) v etanole (14 ml) sa pridal k roztoku dietylesteru 2-[(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-fenylmetyl]-malónovej kyseliny (1,82 g, 4,11 mmol) v etanole (12 ml) a metylénchloride (13 ml) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala cez noc pri laboratórnej teplote. Pridal sa ďalší KOH (80 mg rozpusteného v 3 ml etanolu) pri teplote 0 °C. Reakčná zmes sa miešala počas ďalších 18 hodín. Zmes sa zahustila pri zníženom tlaku a ku zvyšku sa pridal
-89etylacetát a 0,5 M HCI. Organická vrstva sa premyla so soľankou a vysušila sa. Po prefiltrovaní a odparení vo vákuu sa zvyšok suspendoval v hexáne. Odfiltrovaním kryštálov sa získal monoetylester 2-[(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)fenylmetyl]-malónovej kyseliny (1,7 g, 98 %).
(c) Etylester 2-[(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-fenylmetyl]-akrylovej kyseliny
Dietylamín (0,52 ml, 5,04 mmol) sa pridal k zmesi monoetylesteru 2-[(6-tercbutoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-fenylmetyl]-malónovej kyseliny (1,7 g, 4,1 mmol) a 37 % vodného roztoku formaldehydu (0,42 ml, 5,6 mmol) v metylénchloride (6,5 ml) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala cez noc pri laboratórnej teplote a potom sa zriedila s etylacetátom. Organická vrstva sa premyla s vodným nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a soľankou a vysušila ša. Po prefiltrovaní a odparení vo vákuu sa surový produkt prečistil pomocou bleskovej chromatografie (CH2CI2), pričom sa získal etylester'2-[(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)fenylmetylj-akrylovej kyseliny (0,36 g, 23 %).
(d) Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-3fenyl-propiónovej kyseliny
Trietylamín (0,105 g, 1,04 mmol) sa pridal k roztoku etylesteru 2-[(Q-tercbutoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-fenylmetyl]-akrylovej kyseliny (0,36 g, 0,94 mmol) v tiooctovej kyseline (4 ml) pri teplote 0 °C pod argónom. Zmes sa zahrievala pri teplote 45 °C počas 24 hodín. Pridal sa etylacetát a organická fáza sa premyla s vodným nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a soľankou a vysušila sa. Po prefiltrovaní a odparení vo vákuu sa surový produkt prečistil pomocou bleskovej chromatografie (toluén/etylacetát, 1:0 -> 5:1), pričom sa získal etylester 2-acetyl-sulfanylmetyl-3-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)3-fenylpropiónovej kyseliny (0,314 g, 73 %).
3-(6-Amino-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-3-fenyl-propiónová kyselina
Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-3fenyl-propiónovej kyseliny (58 mg; 0,125 mmol) sa rozpustil v koncentrovanej HCI (3,0 ml). Roztok sa zahpeval pod refluxom počas 130 minút pod argónom.
-90Zahustením pri zníženom tlaku sa získala zlúčenina uvedená v názve, vo forme hydrochlorídovej soli (41 mg, 100 %).
1H NMR (500 MHz, D2O): δ 8,03 -7,83 (m, 2H), 7,5 - 7,3 (m, 5H), 7,05 6,95 (m, 1H), 4,27 - 4,15 (m, 1H), 3,6 - 3,45 (m, 1H), 2,84 - 2,58 (m, 2H).
MS (+) 289 (M+1).
Príklad 30
3-(6-Amino-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-4-fenyl-butánová kyselina
a) Dietylester 2-[1-(6-ferc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-fenyletyl]-malónovej kyseliny
K intenzívne miešanej suspenzii kyanidu meďného (0,66 g, 7,32 mmol) !
v suchom THF (5 ml) sa pridal s roztok benzylmagnéziumbromidu (5 ml, 2,93 M v étere, 14,64 mmol) pri teplote 0 °C pod argónom. Zmes sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu, pričom sa získal tmavohnedý roztok. Po 60 minútach sa pri teplote 0 °C pridal roztok dietylesteru 2-(6-ŕerc-butoxykarbonylaminopyridin-3ylmetylén)-malónovej kyseliny (0,67 g, 1,83 mmol) v suchom THF (4 ml). Zmes sa miešala cez noc pri laboratórnej teplote, potom sa pridal vodný chlorid amónny. Vodná vrstva sa oddelila a extrahovala sa s etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa premyli so soľankou a vysušili sa. Odstránením rozpúšťadla vo vákuu sa získal zvyšok, ktorý sa prečistil pomocou bleskovej chromatografie (CH2CI2/etylacetát, 1:0 -> 100:15), čím sa získal dietylester kyseliny 2-[1-(6-ŕercbutoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-fenyletyl]-malónovej (0,44 g, 53 %).
(b) Monoetylester kyseliny 2-[1-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-fenyletyl]-malónovej
Roztok KOH (0,067 g, 1,03 mmol) v etanole (3 ml) sa pri teplote 0 °C pridal k roztoku dietylesteru 2-[1-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-fenyletyl]malónovej kyseliny (0,44 g, 0,96 mmol) v etanole (3 ml) a metylénchloride (2 ml). Zmes sa miešala počas 48 hodín pri laboratórnej teplote. Zmes sa zahustila pri zníženom tlaku a ku zvyšku sa pridal etylacetát a 0,5 M HCI. Organická vrstva sa premyla so soľankou a vysušila sa. Prefiltrovaním a odparením vo vákuu sa získal
-91 monoetylester 2-[1-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-fenyl-etyl]malónovej kyseliny (0,37 g, 90 %).
(c) Etylester 2-[ 1 -(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-fenyl-etyl]-akrylovej kyseliny
Dietylamín (0,27 ml, 2,59 mmol) sa pridal k zmesi monoetylesteru 2-[1-(6ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-fenyl-etyl]-malónovej kyseliny (0,37 g, 0,86 mmol) a 37 % vodného roztoku formaldehydu (0,22. ml, 2,9 mmol) v metylénchloride (3,5 ml) pri teplote 0 °C. Zmes sa miešala cez moc pri laboratórnej teplote. Pridal sa ďalší formaldehyd (0,24 ml) a dietylamín (0,24 ml). V miešaní pri laboratórnej teplote sa pokračovalo počas 18 hodín a potom sa pridal etylacetát a voda. Organická vrstva sa premyla s vodným nasýteným hydrogenuhličitanom sodným a soľankou, vysušila sa a zahustila pri zníženom tlaku, pričom sa získal etylester 2-[1-(6-terc-butoxykarbonyl-amino-pyridin-3-yl)-2fenyl-etylj-akryíovej kyseliny (0,34 g, 99 %).
(d) Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-4fenyl-butánovej kyseliny
Trietylamín (0,096 g, 0,95 mmol) sa pridal k roztoku etylesteru 2-[1-(6-ŕercbutoxykarbonyl-amino-pyridin-3-yl)-2-fenyl-etyl]-akrylovej kyseliny (0,34 g, 0,86 mmol) v tiooctovej kyseline (3,5 ml) pri teplote 0 °C pod argónom. Zmes sa zahrievala pri teplote 45 °C počas 24 hodín. Pridal sa etylacetát a organická fáza sa premyla s vodným nasýteným hydrogenuhličitanom sodným a soľankou a vysušila sa. Po prefiltrovaní a odparení vo vákuu sa surový produkt prečistil pomocou bleskovej chromatografie (CHECb/etylacetát, 1 : 0 -> 100 : 5), pričom sa získal etylester kyseliny 2-acety1sulfanylmetyl-3-(6-ŕerc-butoxykarbonylaminopyridin-3-yl)-4-fenyl-butánovej (0,264 g, 65 % ).
(e) 3-(6-Aminopyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-4-fenyl-butánová kyselina
Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-4fenyl-butánovej kyseliny (0,14 g, 0,3 mmol) sa rozpustil v koncentrovanej HCI (5,0 ml). Roztok sa zahrieval na reflux počas 4,5 hodín pod argónom. Zahustením
-92pri zníženom tlaku sa získala zlúčenina uvedená v názve, vo forme hydrochloridovej soli (100 mg, 98 %).
1H NMR (500 MHz, D2O): δ 7,90 - 7,83 (m, 1H), 7,43 (d, 1H), 7,34 - 7,18 (m, 3H); 7,17 - 7,06 (m, 2H), 7,01 - 6,9 (m, 1 H), 3,4 - 2,5 (m, 6H).
MS (+) 303 (M+1).
Príklad 31
2-(6-Aminopyridin-3-ylmetyl)-3-merkapto-5-fenyl-pentánová kyselina' (a) Etylester kyseliny (E,Z)-2-({6-[(ferc-butoxykarbonyl)amino]-3-pyridinyl}metyl)-5fenyl-2-penténovej
K suspenzii NaH (310 mg, 7,12 mmol, 55 % v minerálnom oleji) v THF (25 ml) sa pri teplote 0 °C pod argónom pridal roztok etylesteru 3-{6-[(tercbutoxykarbonyl)-amino]-3-pyridinyl}-2-(dietoxyfosforyl)propánovej (2,55 g, 5,95 mmol) v THF (25 ml). Po jednej hodine sa po kvapkách pridal roztok 3fenylpropanalu (1,59 g, 11,9 mmol). Reakčná zmes sa miešala počas 17 hodín pri laboratórnej teplote, potom sa rýchle zriedila s NH4CI (50 ml, nasýtený vodný roztok). Zmes sa extrahovala s etylacetátom, organická vrstva sa premyla so soľankou, vysušila sa (Na2SO4), prefiltrovala a zahustila pri zníženom tlaku. Stĺpcovou chromatografiou (CH2CI2/EtOAc 20:1 -» 10: 1) sa získal etylester kyseliny (E,Z)-2-({6-[(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-3-pyridinyl}metyl)-5-fenyl-2penténovej (2,49 g, 100 %).
(b) Etylester 3-(acetylsulfanyl)-2-({6-[(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-3-pyridinyl}metyl5-fenylpentánovej kyseliny
Trietylamín (1,22 ml, 0,617 mmol) sa pridal k roztoku etylesteru (E,Z)-2-({6[(terc-butoxykarbonyl)amino]-3-pyridinyl}metyl)-5-fenyl-2-penténovej kyseliny (400 mg, 0,597 mmol) v tiooctovej kyseline (10 ml) pri teplote 40 °C. Po miešaní počas 90 hodín sa zmes zahustila pri zníženom tlaku. Stĺpcovou chromatografiou (CH2CI2/EtOAc 20:1 -> 10: 1),potom (toluén/EtOAc, 10:1 ) a potom (heptán/EtOAc 2:1 ) sa získal etylester kyseliny 3-(acetylsulfanyl)-2-({6-[(ferc-93butoxykarbonyl)amino]-3-pyridinyl}-rnetyl-5-fenylpentánovej (126 mg, 27 %), vo forme diastereoizomérnej zmesi v pomere 1:1.
(c) 2-(6-Aminopyridin-3-ylmetyl)-3-merkapto-5-fenyl-pentánová kyselina
Etylester 3-(acetylsulfanyl)-2-({6-[(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-3pyridinyl}metyl-5-fenylpentánovej kyseliny (9 mg, 18,5 μιτιοΙ) sa rozpustil v koncentrovanej HCI (1 ml) pod argónom. Roztok sa zahrieval na reflux počas 4 hodín. Zahustením pri zníženom tlaku sa zjskal zlúčenina uvedená ,v názve vo forme hydrochloridovej soli (6,4 mg, 98 %), vo forme diastereoizomérnej zmesi v pomere 1:1.
1H NMR (400 MHz, D2O): δ 1,78 - 2,20 (m, 2H), 2,70 - 3,04 (m, 6H), 6,88, 6,92 (2d, 1H), 7,22 — 7,39 (m, 5H), 7,52, 7,54 (2d,1H), 7,69, 7,75 (2d, 1H).
MS (+)317 (M+1 ).
Príklad 32
Etylester 3-[3-(6-amino-pyridin-3-yl)-2-etoxykarbonyl-propyldisulfanyl]-2-(6-aminopyridin-3 ylmetyl)-propiónovej kyseliny (a) Etylester 3-[3-(6-terc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-etoxykarbonylpropyldisulfanyl]-2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-propiónovej kyseliny
Etylester kyseliny 3-acetylsulfanyl-2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3yl-metyl)-propiónovej (150 mg, 0,392 mmol) sa rozpustil v etanole (15 ml) nasýtenom s NH3 (plynným). Po miešaní počas 160 minút sa zmes zahustila pri zníženom tlaku: Zvyšok sa rozpustil v EtOH (10 ml) a následne sa pridal roztok l2 v EtOH (0,5 M, 0,784 ml). Reakčná zmes sa miešala počas 30 minút pri laboratórnej teplote, potom sa zriedila s CH2CI2, premyla sa s nasýteným vodným Na2S2O5 a nasýteným vodným NaHCO3, vysušila sa, prefiltrovala a zahustila pri zníženom tlaku, pričom sa získal etylester 3-[3-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2etoxykarbonyl-propyl-disulfanyl]-2-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)propiónovej kyseliny (130 mg, 98 %).
-94(b) Etylester 3-[3-(6-aminopyridin-3-yl)-2-etoxykarbonyl-propyldisulfanyl]-2-(6amino-pyridin-3-ylmetyl)-propiónovej kyseliny
Etylacetát nasýtený s HCI (plynným) (15 ml) sa pridal k roztoku etylesteru 3[3-(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-yl)-2-etoxykarbonyl-propyl-disulfanyl]-2(6-ŕerc-butoxykarbonylamino-pyridin-3-ylmetyl)-propiónovej kyseliny (130 mg, 0,191 mmol) v etylacetáte (7 ml) pri teplote 0 °C. Reakčná zmes sa nechala dosiahnuť laboratórnu teplotu a miešala sa počas 19 hodín, potom sa odparila pri zníženom tlaku. Zvyšok sa rozpustil vo vode, pridal sa nasýtený vodný Na2CO3 a vodná fáza sa extrahovala s CH2CI2,. Organická vrstva sa vysušila a zahustila pri zníženom tlaku, čím sa získala zlúčenina uvedená v názve (90 mg, 98 %).
1H NMR (400 MHz, CDCI3): δ 1,19 (t, 3H), 1,20 (t, 3H), 2,68 - 2,86 (m, 6H). 2,90 - 3,01 (m, 4H), 4,07 - 4,14 (m, 4H). 6,45 (d, 2H), 7,28 (m, 2H), 7,87 (s, 2H).
MS (+) 479 (M+1).
Príklad 33
3-(6-Amino-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-hexánová kyselina (a) N-(5-Butyryl-pyridin-2-yl)-2,2-dimetylpropiónamid
Roztok N-{5-brómpyridin-2-yl)-2,2-dimetyl-propióamidu (3,582 g, 13,9 mmol) v dietylétere (36 ml) sa ochladil na teplotu -78 °C pod argónom a po kvapkách sa v priebehu 20 minút pridal n-butyllítium (1,6 M, 19 ml, 30,4 mmol). Päť minút po úplnom pridaní sa zmes nechala zahriať na teplotu 0 °C. Pridal sa N-metoxy-Nmetyl-butyramid (3,65 g, 27,8 mmol) v priebehu menej ako 5 minút a v miešaní sa pokračovalo počas 45 minút. Číry roztok sa okyslil s 2 N kyselinou chlorovodíkovou na hodnotu pH 2. PO intenzívnom miešaní počas 15 minút sa zmes neutralizovala s hydrogénuhličitanom sodným a vrstvy sa oddelili. Vodná vrstva sa extrahovala trikrát s dietyléterom. Spojené organické vrstvy sa premyli so soľankou, vysušili sa a zahustili pri zníženom tlaku. Výsledný olej sa vysušil v olejovej vákuovej pumpe, čím sa odstránil nadbytok reakčného činidla. Po bleskovej chromatografii (dichlórmetán/metanol 60:1) sa získal surový N-(5-butyryl-pyridin-2-yl)-2,2-95dimetylpropiónamid (2,47 g, 71 %) vo forme svetlo oranžového oleja, ktorý sa už ďalej nečistil.
(b) N-[5-(1-Hydroxy-butyl)-pyridin-2-yl]-2,2-dimetylpropiónamid
K roztoku N-(5-butyry-pyridin-2-yl)-2,2-dimetylpropiónamidu (2,47 g, 9,95 mmol) v etanole (20 ml) sa pridal hydridoboritan sodný (185 mg, 5,0 mmol). Po miešaní pri laboratórnej teplote počas 40 minút sa zmes okyslila s 1 N kyselinou chlorovodíkovou na hodnotu pH 2 a miešala sa počas 10 minút. Po neutralizovaní s hydrogénuhličitanom sodným sa zmes extrahovala trikrát s dichlórmetánom. Spojené organické extrakty sa premyli s dvakrát s roztokom hydrogénuhličitanu sodného a jedenkrát so soľankou. Po vysušení a zahustení pri zníženom tlaku sa zvyšok prečistil pomocou bleskovej chromatografie (dichlórmetán/metanol 30 : 1), pričom sa získal N-[5-(1-hydroxy-butyl)-pyridin-2-yl]-2,2-dimetylpropiónamid (1,025 g, 41 %).
(c) Monoetylester 2-{1-[(6-(2,2-dimetyl-propionylamino)-pyridin-3-yl]-butyl}malónovej kyseliny
K roztoku N-[5-(1-hydroxy-butyl)-pyridin-2-yl]-2,2-dimetylpropiónamidu (1,025 g, 4,09 mmol) v trichlórmetáne (12 ml) sa pridal tionylchlorid (6 ml) a zmes sa zahrievala pri teplote 55 °C počas jednej hodiny. Potom sa roztok zahustil pri zníženom tlaku, čím sa získal surový N-[5-(1-chlórbutyl)-pyridin-2-yl]-2,2-dimetylpropiónamid hydrochlorid, vo forme bezfarebnej pevnej látky.
K roztoku dietylesteru kyseliny malónovej (1,31 g, 8,2 mmol) v dimetylformamide (20 ml) sa pridal hydrid sodný (60 % disperzia v minerálnom oleji, 350 mg, 8.7 mmol) a zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 15 minút. Po ochladení na teplotu 0 °C sa pridal roztok rmedziproduktu -[5-(1-chlórbutyl)pyridin-2-yl]-2,2-dimetyl-propiónamid hydrochloridu v dimetylformamide (5 ml). Po miešaní počas jednej hodiny sa rozpúšťadlo zahustilo pri zníženom tlaku a pridal sa etylacetát (25 ml) a následne sa na neutralizovanie pridal roztok chloridu amónneho (polo-nasýtený). Vrstvy sa oddelili, vodná vrstva sa extrahovala s etylacetátom a spojené organické vrstvy sa premyli trikrát s vodou a soľankou a
-96vysušili sa. Po zahustení pri zníženom tlaku sa zvyšok prefiltroval cez silikagél so zmesou dichlórmetán/metanol (30 : 1) ako rozpúšťadlom.
Tento surový dietylester 2-{ 1-((6-(2,2-dimetyl-propionylamino)-pyridin-3-yl]butyl}-malónovej kyseliny sa rozpustil v zmesi dichlórmetánu (2,5 ml) a etanolu (5 ml) pri teplote 0 °C a pridal sa roztok hydroxidu draselného (87%, 111 mg, 5,4 mmol) v etanole (4 ml). Zmes sa nechala pomaly zahriať na laboratórnu teplotu a v miešaní sa pokračovalo počas 24 hodín. Potom sa pridal dichlórmetán (20 ml),.voda (20 ml) a soľanka (3 ml). Zmes sa intenzívne miešala počas 2 minút. Vrstvy sa potom oddelili a vodná vrstva sa premyla s dichlórmetánom. Spojené vodné vrstvy sa okyslili (pH 5) s kyselinou citrónovou a extrahovali sa trikrát s dichlórmetánom. Spojené organické vrstvy sa premyli so soľankou a vysušili sa. Zahustením pri zníženom tlaku sa získal surový monoetylester kyseliny 2-{1-[(6(2,2-dimetyl-propionylamino)-pyridin-3-yl]-butyl}-malónovej (258 mg, 41 %).
(d) Etylester 2-{ 1 -[(6-(2,2-dimetyl-propionylamino)-pyridin-3-yl]-butyl}-akrylovej kyseliny
K roztoku monoetylester kyseliny 2-{1-[(6-(2,2-dimetyl-propionylamino)-pyridin-3yl]-butyl}-malónovej (712 mg, 1,95 mmol) v THF (6,5 ml) sa pri teplote 0 °C v priebehu 5 minút pridal formaldehyd (37 % vo vode, 0,3 ml). V miešaní sa pokračovalo počas 10 minút, potom sa po kvapkách v priebehu 10 minút pridal piperidín (0,26 ml, 2,63 mmol). Zmes sa nechala zahriať cez noc na laboratórnu teplotu. Po 14 hodinách sa zmes zahustila pri zníženom tlaku na jednu tretinu svojho objemu, potom sa pridal éter a voda (15 ml každého). Po 2 minútach intenzívneho miešania sa vrstvy oddelili, vodná vrstva sa extrahovala s éterom a spojené organické vrstvy sa premyli s vodou, 4 % kyselinou citrónovou, vodou a soľankou. Vysušením a zahustením pri zníženom tlaku sa získal etylester kyseliny 2-{1-[(6-(2,2-dimetyl-propionylamino)-pyridin-3-yl]-butyl}-akrylovej (550 mg, 85%), vo forme bezfarebnej pevnej látky.
(e) Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-[6-(2,2-dimetyl-propionylamino)-pyridin-3-yl]hexánovej kyseliny
-97Etylester kyseliny 2-{1-[(6-(2,2-dimetyl-propionylamino)-pyridin-3-yl]-butyl}akrylovej (550 mg, 1,65 mmol) sa rozpustil pod argónom vtioloctovej kyseline (4 ml) a po kvapkách sa pridal trietylamín (0,24 ml, 1,7 mmol). Po miešaní počas 16 hodín pri teplote 50 °C sa pridala tioloctová kyselina (2 ml) a vmiešaní sa pokračovalo počas 14 hodín. Roztok sa ochladil na laboratórnu teplotu a neutralizoval sa pridaním roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Zmes sa extrahovala trikrát s etylacetátom, spojené extrakty sa premyli s roztokom hydrogenuhličitanu sodného a soľankou. Po vysušení a zahustení pri zníženom tlaku sa zvyšok prečistil pomocou bleskovej chromatografie (dichlórmetán/metanol, 60 1), čím sa získal etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-[6-(2,2-dimetylpropionylamino)-pyridin-3-yl]-hexánovej kyseliny (619 mg, 92%), vo forme viskózneho oleja.
(f) 3-(6-Amino-pyridin-3-yl)-2-merkaptometyl-hexánová kyselina
Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-[6-(2,2-dimetyl-propionylamino)-pyridin-3yl]-hexánovej kyseliny (40,4 mg, 99 pmbi) sa rozpustil pod argónom vo vodnej kyseline chlorovodíkovej (37 %, 4,2 ml) a zahrieval sa pod refluxom počas dvoch hodín. Zahustením pri zníženom tlaku (0,3 torr, 40 °C) sa získala zlúčenina uvedená v názve, vo forme hydrochloridovej soli (28 mg, 97 %).
1H NMR (300 MHz, D2O): δ 7,86 (d, 1H), 7,65 (d. 1H), 7,02 (t, 1H), 2,98 2,42 (m, 4H). 1,85 - 1,54 (m, 2 H), 1,19 - 1,00 {m, 2 H), 0,87 - 0,77 (m, 3H).
MS (+) 255 (M+1).
Príklad 34
3-(2-Aminotiazol-5-yl)-2-merkaptometyl-propiónová kyselina (a) Dietylester 2-(2-aminotiazol-5-ylmetylén)-malónovej kyseliny
K roztoku 2-aminotiazol-5-karbaldehydu (47 %; 6 g, 23 mmol) v CH2CI2 (30 ml) a DMF (30 ml) sa pridalo 4A molekulové sito, dietylester kyseliny malónovej (3,5 ml; 23 mmol). piperidín (1,1 ml; 11,5 mmol) a kyselina octová (0,7 ml; 11,5 mmol). Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 96 hodín. Pridal sa EtOAc a reakčná zmes sa prefiltrovala cez celit, aby sa odstránila vytvorená
-98zrazenina. K filtrátu sa pridal EtOAc (500 ml) a organická fáza sa premyla s NaHCO3 a so soľankou. Organická fáza sa vysušila a zahustila, pričom sa získalo 4,9 g surového produktu. Pridaním petroléteru k roztoku surového produktu v etanole a následným odfiltrovaním sa získal dietylester 2-(2-aminotiazol-5ylmetylén)-malónovej kyseliny (1,13 g, 18 %).
(b) Dietylester 2-(2-aminotiazol-5-ylmetyl)-malónovej kyseliny
NaCNBH3 (1,88 g; 29,9 mmol) sa za miešania pridal k roztoku dietylesteru 2(2-aminotiazol-5-ylmetylén)-malónovej kyseliny (1,13 g; 4g2 mmol) v etanole pri teplote 0 °C. Hodnota pH roztoku sa monitorovala tým, že sa k roztoku pridávali malé množstvá brómkrezolovej zelenej (Bromocresol Green). Po kvapkách sa pridala koncentrovaná HCl, až pokým roztok nezožltol. Ľadový kúpeľ sa odstránil a reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 5 hodín. Pridala sa voda a produkt sa extrahoval s CH2CI2. Spojené organické fázy sa vysušili a zahustili, pričom sa získal dietylester 2-(2-aminotiazol-5-ylmetyl)-malónovej kyseliny (1 g, 87,8%).
(c) Dietylester 2-(2-ferc-butoxykarbonylamino-tiazol-5-ylmetyl)-malónovej kyseliny
BOC2O (0,6 g; 27,5 mmol) sa pridal k roztoku trietylamínu (0,4 ml, 30,1 mmol), 4-(dimetylamiňo)pyridínu (0,34 g, 27,8 mmol) a dietylester 2-(2-aminotiazol5-ylmetyl)-malónovej kyseliny (0,75 g, 27,5 mmol) v CH2CI2 (5 ml) pri teplote 0 °C. Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc. Pri teplote 0 °C sa pridal ďalší BOC2O (0,15 g; 0,7 mmol) a reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas jednej hodiny. Pridal sa CH2CI2 a organická fáza sa extrahovala s 0,3 M KHSO4 a so soľankou. Organická fáza sa vysušila a zahustila, pričom sa získalo 0,78 g surového produktu. NMR indikovala, že približne 40 % dietylesteru 2-(2aminotiazol-5-ylmetyl)-malónovej kyseliny zostalo. K roztoku surového produktu (0,78 g) sa pri teplote 0 °C pridal BOC2O (0,6 g; 27,5 mmol), trietylamín (0,4 ml, 30,1 mmol), 4-(dimetylamino)-pyridín (034 g, 27,8 mmol) v CH2CI2 (5 ml). Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc a pracovný postup sa opakoval. Surový produkt (1 g) sa prečistil pomocou bleskovej chromatografie (heptán/EtOAc; 1 : 1 ) a HPLC, pričom sa získal dietylester 2-(2-terc-butoxykarbonylaminotiazol-5ylmetyl)-malónovej kyseliny (184 mg, 17,9 %).
-99(d) Monoetylester 2-(2-terc-butoxykarbonylamino-tiazol-5-ylmetyl)-malónovej kyseliny
Dietylester 2-(2-ŕerc-butoxykarbonylamino-tiazol-5-ylmetyl)-malónovej kyseliny (158 mg; 0,43 mmol) sa rozpustil v etanole(1 ml) a THF (0,5 ml) a pri teplote 0 °C sa pridal roztok KOH (24 mg, 0,43 mmol) v etanole (0,114 ml). Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 96 hodín a potom sa vyliala na zmes Fad-voda. Vodná fáza sa extrahovala s dietyléterom, okyslila sa na hodnotu pH 3 pridaním 0,5 M HCI a extrahovala sa s dietyléterom. Spojené organické fázy sa vysušili a zahustili, pričom sa získal monoetylester 2-(2-tercbutoxykarbonylamino-tiazol-5-ylmetyl)-malónovej kyseliny (97 mg, 66,4 %).
(e) Etylester 2-(2-ŕerc-butoxykarbonylamino-tiazol-5-ylmetyl)-akrylovej kyseliny
K zmesi monoetylesteru kyseliny 2-(2-terc-butoxykarbonylamino-tiazol-5-ylmetyl)-malónovej (94 mg; 0,27 mmol), 36 % vodného roztoku formaldehydu (36 μΙ; 1,2 mmol), CH2CI2 (0,2 ml) a vody (0,2 ml) sa pri teplote 0 °C pridal dietylamín (30 μΙ,: 0,40 mmol). Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc, vyliala sa na zmes ľad-voda a extrahovala sa s CH2CI2. Spojené organické fázy sa premyli s 5 % NaHCO3, vysušili sa a zahustili, čím sa získal etylester 2-(2-tercbutoxykarbonylamino-tiazol-5-ylmetyl)-akrylovej kyseliny (69 mg, 80,9 %).
(f) Etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(2-ŕerc-butoxykarbonylaminotiazol-5-yl)propiónovej kyseliny
Trietylamín (32 μΙ,: 0,23 mmol) sa pridal k roztoku etylesteru 2-(2-tercbutoxykarbonylamino-tiazol-5-ylmetyl)-akrylovej kyseliny (67 mg; 0,21 mmol) v kyseline tiooctovej (0,4 ml) pri teplote 0 °C. Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 48 hodín a potom sa vyliala do zmesi ľad-voda. Vodná vrstva sa extrahovala s CH2CI2. Spojené organické fázy sa premyli s nasýteným NaHCO3, vysušili sa zahustili, pričom sa získalo 190 mg surového produktu. Surový produkt sa prečistil pomocou bleskovej chromatografie (heptán/EtOAc: 1:0-» 68:32), čím poskytol etylester 2-acetylsulfanylmetyl-3-(2-tercbutoxykarbonylaminotiazol-5-yl)-propiónovej kyseliny (43 mg, 51,6 %).
-100 (g) 3-(2-Aminotiazol-5-yl)-2-merkaptometyi-propiónová kyselina
Roztok etylesteru 2-acetylsulfanylmetyl-3-(2-terc-butoxykarbonylaminotiazol5-yl)-propiónovej kyseliny (43 mg, 0,11 mmol) v koncentrovanej HCI (1,5 ml) sa refluxoval pod argónom počas 1,5 hodín. Reakčná zmes sa nechala ochladiť na laboratórnu teplotu a zahustila sa pri zníženom tlaku, pričom sa získalo 30 mg surového produktu. Surový produkt sa prečistil pomocou preparatívnej HPLC, čím sa získala zlúčenina uvedená v názve (8 mg, 21 %), vo forme hydrochloridovej soli.
1H NMR (500 MHz, D2O): δ 2,75 - 3,1 (m, 5H), 7<0 (br s, 1 H).
MS (+)219 (M+1).
Skratky
Ac = acetát
AIBN = α,α'-azoizobutyronitril
Bn = benzyl
Bu = butyl
Bz = benzoyl
DCC = dícyklohexylkarbodiimid
DIAD = diizopropylazodikarboxylát
DIPE.~ = diizopropyletylamín
DMAP = N,N-dimetylaminopyridín
DME = 1,2-dimetoxyetán
DMF = dimetylformamid
DMSO = dimetylsulfoxid
EDC = 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid ee = enantiomérny zvyšok
Et = etyl
EtOAc = etylacetát
EtOH = etanol
-101 HOAc = kyselina octová
HOBt= 1-hydroxybenzotriazol
HPLC = vysokoúčinná kvapalinová chromatografia
KHMDS = bis(trimetylsilyl)amid draselný
LDA = diizopropylamid lítny
MCPBA = 3-chlórperbenzoová kyselina
Me = metyl
MeOH = metanol
PMB = 4-metoxybenzyl
Ph = fenyl
Pr = propyl
PyBOP = (benzotriazol-l-yloxy)tripyrolidinofosfónium hexafluórfosfát
TEA = trietylamín
TFA = trifluóroctová kyselina
THF = tetrahydrofurán
Tos = toluén-4-sulfonyl (0,
-102-

Claims (17)

1. Derivát etántiolu všeobecného vzorca I ? i XXR3
Y^R3
Ŕ* alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ alebo solvát alebo solvát takejto soli, kde
R1 predstavuje
Ci-C6-alkylovú skupinu, substituovanú jednou alebo viacerými zásaditými skupinami, ako je aminoskupina, amidinoskupina a/alebo guanidinoskupina;
cykloalkylovú skupinu, substituovanú jednou alebo viacerými zásaditými skupinami, ako je aminoskupina, amidinoskupina a/alebo guanidinoskupina;
heterocyklylovú skupinu, obsahujúcu najmenej jeden atóm dusíka;
heterocyklylovú skupinu, obsahujúcu najmenej jeden heteroatóm zvolený z S alebo O, a substituovanú jednou alebo viacerými zásaditými skupinami, ako je aminoskupina, amidinoskupina a/alebo guanidinoskupina;
alebo arylovú skupinu, substituovanú jednou alebo viacerými zásaditými skupinami, ako je aminoskupina, amidinoskupina a/alebo guanidinoskupina,
R2 predstavuje atóm vodíka, acylovú skupinu, acylaminoskupinu, alkylovú skupinu, alkylkarbamoylovú skupinu, alkyitioskupinu, alkoxyskupinu, aroylovú skupinu, aroylaminoskupinu, aryloxyskupinu, aryltioskupinu, amidinoskupinu, aminoskupinu, arylovú skupinu, karbamoylovú skupinu, karboxylovú skupinu, kyanoskupinu, cykloalkylovú skupinu, formylovú
-103 skupinu, guanidinoskupinu, halogén, heterocyklylovú skupinu, hydroxylovú skupinu, oxoskupinu, nitroskupinu, tiolovú skupinu, skupinu
Z2N-CO-O-, ZO-CO-NZ- alebo Z2N-CO-NZ-,
R3 predstavuje COOR5, SO(OR5), SO3R5, P=O(OR5)2, B(OR5)2,
P=OR5(OR5) alebo tetrazol, alebo akýkoľvek izostér karboxylovej kyseliny,
R4 predstavuje SH, S-CO-CrCe-alkylovú skupinu alebo S-CO-arylovú skupinu,
R5 predstavuje atóm vodíka, CrC6-alkylovú skupinu alebo arylovú skupinu,
R6 predstavuje atóm vodíka alebo Ci-C6-alkylovú skupinu,
X predstavuje O, S, SO, SO2l C(Z)2, N(Z), NR6SO2, SO2NR6, NR6CO alebo CONR6,
Y predstavuje C(Z)2,
Z predstavuje nezávisle atóm vodíka, C-ι-Ce-alkýlovú skupinu, arylovú skupinu, cykloalkylovú skupinu alebo heterocyklylovú skupinu.
2. Zlúčenina podľa nároku 1, alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo solvát alebo solvát takejto soli, kde
R1 predstavuje cykloalkylovú skupinu, substituovanú jednou alebo viacerými zásaditými skupinami, ako je aminoskupina, amidinoskupina a/alebo guanidinoskupina;
heterocyklylovú skupinu, obsahujúcu najmenej jeden atóm dusíka;
heterocyklylovú skupinu, obsahujúcu najmenej jeden heteroatóm zvolený z S alebo O, a substituovanú jednou alebo viacerými zásaditými skupinami, ako je aminoskupina, amidinoskupina a/alebo guanidinoskupina;
-104alebo arylovú skupinu, substituovanú jednou alebo viacerými zásaditými skupinami, ako je aminoskupina, amidinoskupina a/alebo guanidinoskupina,
R2 predstavuje atóm vodíka, acylovú skupinu, acylaminoskupinu, alkylovú skupinu, alkylkarbamoylovú skupinu, alkyltioskupinu, alkoxyskupinu, aroylovú skupinu, aroylaminoskupinu, aryloxylovú skupinu, aryltioskupinu, amidinoskupinu, aminoskupinu, arylovú skupinu, karbamoylovú skupinu, karboxylovú skupinu, kyanoskupinu, cykloalkylovú skupinu, formylovú skupinu, guanidinoskupinu, halogén, heterocyklylovú skupinu, hydroxylovú skupinu, oxoskupinu, nitroskupinu, tiolovú skupinu, skupinu Z2N-CO-O-, ZO-CO-NZ- alebo Z2N-CO-NZ-,
R3 predstavuje COOR5,
R4 predstavuje SH, S-CO-Ci-C6-alkylovú skupinu alebo S-CO-arylovú skupinu,
R5 predstavuje atóm vodíka, Ci-C6-alkylovú skupinu alebo arylovú skupinu, R6 predstavuje atóm vodíka alebo Ci-C6-alkylovú skupinu,
X predstavuje O, S, SO, SO2, C(Z)2, N(Z), NR6SO2, SO2NR6 alebo CONR6, Y predstavuje C(Z)2,
Z predstavuje nezávisle atóm vodíka, CrC6-alkylovú skupinu, arylovú skupinu, cykloalkylovú skupinu alebo heterocyklylovú skupinu.
3. Zlúčenina podľa nároku 1 alebo 2, alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo solvát, alebo solvát takejto soli, kde
R1 predstavuje, cykloalkylovú skupinu, substituovanú jednou alebo viacerými zásaditými skupinami, ako je aminoskupina, amidinoskupina a/alebo guanidinoskupina;
-105heterocyklylovú skupinu, obsahujúcu najmenej jeden atóm dusíka;
heterocyklylovú skupinu, obsahujúcu najmenej jeden heteroatóm zvolený z S alebo O, a substituovanú jednou alebo viacerými zásaditými skupinami, ako je aminoskupina, amidinoskupina a/alebo guanidinoskupina;
R2 predstavuje atóm vodíka, CrCs-alkylovú skupinu, aminoskupinu, halogén alebo hydroxylovú skupinu,
R3 predstavuje COOR5,
R4 predstavuje SH, S-CO-Ci-C6-alkylovú skupinu alebo S-CO-arylovú skupinu,
R5 predstavuje atóm vodíka, C^Ce-alkylovú skupinu alebo arylovú skupinu,
X predstavuje C(Z)2l
Y predstavuje C(Z)2,
Z predstavuje nezávisle atóm vodíka alebo Ci-C6-alkylovú skupinu.
4. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, alebo jej farmáceuticky prijateľná soľ alebo solvát, alebo solvát takejto soli, kde R1 predstavuje, cykloalkylovú skupinu, substituovanú jednou alebo viacerými zásaditými skupinami, ako je aminoskupina, amidinoskupina a/alebo guanidinoskupina;
heterocyklylovú skupinu, obsahujúcu najmenej jeden atóm dusíka;
R2 predstavuje vodík, fluór alebo C^alkylovú skupinu,
R3 predstavuje COOR5,
R4 predstavuje SH, S-CO-Ci-C6-alkylovú skupinu alebo S-CO-arylovú skupinu,
-106R5 predstavuje atóm vodíka, CrCe-alkylovú skupinu alebo arylovú skupinu,
X predstavuje C(Z)2,
Y predstavuje C(Z)2,
Z predstavuje nezávisle atóm vodíka alebo Ci-C6-alkylovú skupinu.
5. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo solvát, alebo solvát takejto soli, kde
R1 predstavuje cyklopentyl, pyridyl, pyrimidinyl, piperidinyl alebo tiazolyl;
R2 predstavuje atóm vodíka, fluór alebo Ci-alkylovú skupinu,
R3 predstavuje COOR5,
R4 predstavuje SH,
R5 predstavuje atóm vodíka,
X predstavuje CHZ,
Y predstavuje CHZ,
Z predstavuje nezávisle atóm vodíka alebo C-i-C6-alkylovú skupinu.
6. Spôsob prípravy zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 5, kde R1, R3, R4 a Y majú významy definované v nároku 1 a X znamená C(Z)2 a R2 predstavuje H, vyznačujúci sa tým, že zahrňuje krok reakcie zlúčeniny vzorca VI, (VI),
-107kde R1, R3 a Y majú významy definované v nároku 1 a X znamená C(Z)2, so zlúčeninou vzorca IX,
R5 -SH (IX), kde R5 je vhodná chrániaca skupina, ako je Ac, Bz, PMB alebo Bn, samotné alebo v prítomnosti vhodnej zásady, ako je NaOMe, NaH alebo trietylamín alebo alternatívne v prítomnosti iniciátora voľných radikálov, ako je AIBN, pri štandardných podmienkach.
7. Spôsob prípravy zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 5, kde R1, R2, R3
I a R4 majú významy definované v nároku 1 a Y znamená CH2 a X predstavuje O, S, C(Z)2 alebo N(Z), vyznačujúci sa tým, že zahrňuje krok reakcie zlúčeniny vzorca XIV, (XIV), kde R1, R2 a R3 majú významy definované v nároku 1 a X predstavuje O, S, N(Z)2 alebo N(Z), so zlúčeninou všeobecného vzorca IX
R5-SH (IX), kde R5 znamená vhodnú chrániacu skupinu, ako je Ac alebo Bz, v prítomnosti vhodného reakčného činidla, ako je PPhVDIAD, pri štandardných podmienkach.
8. Spôsob prípravy zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 5, kde R1, R2, R3, R4 a Y majú významy definované v nároku 1 a X znamená NR6CO alebo NR6SO2, vyznačujúci sa tým,, že zahrňuje krok reakcie zlúčeniny všeobecného vzorca XV,
-108R‘HX* (XV), kde R2, R3, R6 a Y majú významy definované v nároku 1 a R5 znamená vhodnú chrániacu skupinu, ako je Ac, Bz, PMB alebo Bn, so zlúčeninou všeobecného vzorca XVI,
R1-X (XVI), v ktorom R1 má význam definovaný v nároku 1 a X predstavuje COOH alebo SO2CI, v prítomnosti vhodného kopulačného reakčného činidla, ako je PyBOP/DIPEA, DCC/HOBt, EDC/TEA/DMAP alebo pyridínu, pri štandardných podmienkach.
9. Farmaceutický prípravok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje zlúčeninu podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 5, ako účinnú zložku v kombinácii s farmaceutický prijateľnou pomocnou látkou, riedidlom alebo nosičom.
10. Použitie zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 5 na liečenie.
11. Použitie zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 5 na výrobu lieku na inhibíciu karboxypeptidázy U.
12. Spôsob liečenia alebo profylaxie stavov spojených s inhibíciou karboxypeptidázy U, vyznačujúci sa tým, že zahrňuje podávanie cicavcovi, vrátane človeka, ktorý potrebuje takéto liečenie, účinného množstva zlúčeniny definovanej v ktoromkoľvek z nárokov 1 až 5.
13. Farmaceutický prípravok na použitie pri liečení alebo profylaxii stavov spojených s inhibíciou karboxypeptidázy U, vyznačujúci sa tým, že zahrňuje podávanie zlúčeniny definovanej v ktoromkoľvek z nárokov 1 až 5, v kombinácii s farmaceutický prijateľnou pomocnou látkou, riedidlom alebo nosičom.
14. Farmaceutický prípravok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje
-109(i) zlúčeninu vzorca I alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ alebo solvát, alebo solvát takejto soli, a (ii) jedno alebo viac antitrombotických činidiel s odlišným mechanizmom účinku, ako je činidlo proti zrážaniu krvných doštičiek, inhibítor
I tromboxánového receptora, inhibítor syntetázy, antagonista receptora fibrinogénu, prostacyklínové mimetické činidlo, inhibítor fosfodiesterázy alebo antagonista ADP-receptora (P2T), v zmesi s farmaceutický prijateľnou pomocnou látkou, riedidlom alebo nosičom.
15. Kit súčastí, vyznačujúci sa tým, že obsahuje (i) farmaceutický prípravok obsahujúci zlúčeninu vzorca I alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ alebo solvát, alebo solvát takejto soli v zmesi s farmaceutický prijateľnou pomocnou látkou, riedidlom alebo nosičom; a (ii) farmaceutický prípravok obsahujúci jedno alebo viac antitrombotických činidiel s odlišným mechanizmom účinku, ako je činidlo proti zrážaniu krvných doštičiek, inhibítor tromboxánového receptora, inhibítor syntetázy, antagonista receptora fibrinogénu, prostacyklínové mimetické činidlo, inhibítor fosfodiesterázy alebo antagonista ADP-receptora (P2T), v zmesi s farmaceutický prijateľnou pomocnou látkou, riedidlom alebo nosičom;
pričom ako zlúčenina (i) tak aj činidlo (ii) sa poskytujú vo forme, ktorá je vhodná na podávanie spolu s druhou zložkou.
16. Spôsob liečenia pacienta trpiaceho alebo náchylného na stav, pri ktorom je vhodná alebo sa vyžaduje inhibícia karboxypeptidázy U a rozličné antitrombotické mechanizmy, vyznačujúci sa tým, že tento spôsob zahrňuje podávanie pacientovi terapeuticky účinného celkového množstva (i) zlúčeniny vzorca I alebo jej farmaceutický prijateľnej soli alebo solvátu, alebo solvátu takejto soli v zmesi s farmaceutický prijateľnou pomocnou látkou, riedidlom alebo nosičom; spolu s
-110(ii) jedným alebo viacerými antitrombotickými činidlami s odlišným mechanizmom účinku, ako je činidlo proti zrážaniu krvných doštičiek, inhibítor tromboxánového receptora, inhibítor syntetázy, antagonista receptora fibrinogénu, prostacyklínové mimetické činidlo, inhibítor fosfodiesterázy alebo antagonista ADP-receptora (P2T), v zmesi s farmaceutický prijateľnou pomocnou látkou, riedidlom alebo nosičom.
17. Spôsob liečenia pacienta trpiaceho alebo náchylného na stav, pri ktorom je vhodná alebo sa vyžaduje inhibícia karboxypeptidázy U a rozličné antitrombotické mechanizmy, vyznačujúci sa tým, že tento spôsob zahrňuje podávanie pacientovi prípravku definovaného v nároku 14.
SK1546-2001A 1999-05-03 2000-05-03 Deriváty etántiolu, spôsoby ich prípravy, farmaceutické prípravky s ich obsahom a ich použitie na liečenie SK15462001A3 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE9901573A SE9901573D0 (sv) 1999-05-03 1999-05-03 New compounds
PCT/SE2000/000834 WO2000066557A1 (en) 1999-05-03 2000-05-03 New compounds

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK15462001A3 true SK15462001A3 (sk) 2002-11-06

Family

ID=20415426

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1546-2001A SK15462001A3 (sk) 1999-05-03 2000-05-03 Deriváty etántiolu, spôsoby ich prípravy, farmaceutické prípravky s ich obsahom a ich použitie na liečenie

Country Status (27)

Country Link
US (1) US7071175B1 (sk)
EP (1) EP1180098A1 (sk)
JP (1) JP2002543184A (sk)
KR (1) KR100755152B1 (sk)
CN (1) CN1263739C (sk)
AR (1) AR034241A1 (sk)
AU (1) AU771760B2 (sk)
BR (1) BR0010257A (sk)
CA (1) CA2371213C (sk)
CZ (1) CZ20013930A3 (sk)
EE (1) EE04490B1 (sk)
HK (1) HK1042303A1 (sk)
HU (1) HUP0202876A3 (sk)
IL (1) IL145954A0 (sk)
IS (1) IS6139A (sk)
MX (1) MXPA01011055A (sk)
MY (1) MY128014A (sk)
NO (1) NO321377B1 (sk)
NZ (1) NZ515062A (sk)
PL (1) PL200932B1 (sk)
RU (1) RU2244708C2 (sk)
SE (1) SE9901573D0 (sk)
SK (1) SK15462001A3 (sk)
TR (1) TR200103153T2 (sk)
TW (1) TWI232105B (sk)
WO (1) WO2000066557A1 (sk)
ZA (1) ZA200108968B (sk)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6828566B2 (en) * 1997-07-22 2004-12-07 Hitachi Ltd Method and apparatus for specimen fabrication
SE9901572D0 (sv) * 1999-05-03 1999-05-03 Astra Ab New compounds
MXPA02002671A (es) 1999-09-14 2002-07-30 Meiji Seika Kaisha Derivado de acido fosfonico que tiene actividad inhibidora contra la carboxipeptidasa b.
SE0103272D0 (sv) 2001-09-28 2001-09-28 Astrazeneca Ab Chemical compounds
US6713496B2 (en) 2002-01-22 2004-03-30 Pfizer Inc 3-(imidazolyl)-2-alkoxypropanoic acids
BR0307033A (pt) 2002-01-22 2004-12-07 Pfizer ácidos 3-(imidazolil)-2-aminopropanóicos para o uso como inibidores tafi-a para o tratamento de doenças trombóticas
EP1497300A2 (en) * 2002-03-21 2005-01-19 Schering Aktiengesellschaft Plasma carboxypeptidase b inhibitors
CA2486402C (en) 2002-05-22 2013-04-30 Errant Gene Therapeutics, Llc Histone deacetylase inhibitors based on alpha-chalcogenmethylcarbonyl compounds
SE0201837D0 (sv) * 2002-06-14 2002-06-14 Astrazeneca Ab Chemical compounds
US7576206B2 (en) 2003-08-14 2009-08-18 Cephalon, Inc. Proteasome inhibitors and methods of using the same
US7223745B2 (en) 2003-08-14 2007-05-29 Cephalon, Inc. Proteasome inhibitors and methods of using the same
US7468383B2 (en) 2005-02-11 2008-12-23 Cephalon, Inc. Proteasome inhibitors and methods of using the same
AU2009290474A1 (en) 2008-09-11 2010-03-18 Pfizer Inc. Heteroaryls amide derivatives and their use as glucokinase activators
CA2741783A1 (en) 2008-10-29 2010-05-06 Taisho Pharmaceutical Co., Ltd. Compounds having tafia inhibitory activity
CA2748587A1 (en) 2009-01-20 2010-07-29 Pfizer Inc. Substituted pyrazinone amides
CN102388038B (zh) 2009-03-11 2014-04-23 辉瑞大药厂 用作葡糖激酶活化剂的苯并呋喃基衍生物
AU2010341530B2 (en) 2009-12-22 2016-03-10 Cephalon, Inc. Proteasome inhibitors and processes for their preparation, purification and use
CN102249992A (zh) * 2011-07-05 2011-11-23 广东工业大学 一种制备2-氨基异烟酸的方法
US9919939B2 (en) 2011-12-06 2018-03-20 Delta Faucet Company Ozone distribution in a faucet
WO2014198620A1 (en) 2013-06-10 2014-12-18 Sanofi Macrocyclic urea derivatives as inhibitors of tafia, their preparation and their use as pharmaceuticals
AR099134A1 (es) * 2014-01-24 2016-06-29 Hoffmann La Roche Procedimiento para la preparación de n-[(3-aminooxetán-3-il)metil]-2-(1,1-dioxo-3,5-dihidro-1,4-benzotiazepín-4-il)-6-metil-quinazolín-4-amina
CN115093008B (zh) 2015-12-21 2024-05-14 德尔塔阀门公司 包括消毒装置的流体输送系统
USD879309S1 (en) 2018-08-09 2020-03-24 Scott Specialties, Inc. Maternity support

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3091569A (en) 1960-08-26 1963-05-28 Mead Johnson & Co Mucolytic-nu-acylated sulfhydryl compositions and process for treating animal mucus
FR1393338A (fr) 1964-01-08 1965-03-26 Rech S Pharma Et Scient Nouveau dérivé de la cystéine et sa préparation
US3766206A (en) 1971-11-03 1973-10-16 Pfizer 18beta-glycyrrheting acid amides useful as antiulcer agents
FR2266502A1 (en) 1974-04-08 1975-10-31 Synpharm Sa N-(2-thenoyl)-cysteine and esters - with mucolytic activity, prepd. from cysteine (esters) and thenoyl chloride
US4113715A (en) 1977-01-17 1978-09-12 E. R. Squibb & Sons, Inc. Amino acid derivatives
US4177277A (en) 1977-01-17 1979-12-04 E. R. Squibb & Sons, Inc. Method for alleviating hypertension
JPS545949A (en) 1977-06-16 1979-01-17 Hisamitsu Pharmaceut Co Inc Novel cyclohexanecarboxylic acid and its derivatives
FR2430945A2 (fr) 1978-07-12 1980-02-08 Chauvin Blache Lab Nouveaux derives de la cysteine, leur procede de fabrication et leur application en therapeutique
US4537727A (en) 1982-11-12 1985-08-27 Eli Lilly And Company Process for recovering 2-acetylthiomethyl-5-aminopentanoic acid
EP0136883B1 (en) * 1983-10-03 1987-11-25 E.R. Squibb &amp; Sons, Inc. Enkephalinase inhibitors
US4708965A (en) 1985-09-16 1987-11-24 Morgan Lee R Method of treating herpes virus infections with N,N'-diacetylcystine and derivatives
JPS62270555A (ja) * 1986-05-19 1987-11-24 Dainippon Pharmaceut Co Ltd スルホン酸誘導体およびその塩
EP0318859A3 (en) 1987-12-03 1990-08-16 Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd. N-substituted mercaptopropanamide derivatives
JPH01254654A (ja) * 1988-04-01 1989-10-11 Dainippon Pharmaceut Co Ltd スルホン酸の誘導体及びその塩
EP0361365A1 (en) * 1988-09-30 1990-04-04 E.R. SQUIBB &amp; SONS, INC. Aminobenzoic and aminocyclohexane-carboylic acid compounds, compositions, and their method of use
DE3838467C2 (de) 1988-11-12 1998-12-10 Agfa Gevaert Ag Fotografisches Aufzeichnungsmaterial
ZA911813B (en) 1990-08-09 1991-12-24 Sankyo Co (benzhydryloxyethylpiperidyl)aliphatic acid derivatives and their use in the treatment of allergies and asthma
IT1249650B (it) 1991-05-29 1995-03-09 Poli Ind Chimica Spa N-(5-tioxo-l-prolil)-l-cisteina e suoi derivati, loro preparazione ed impiego terapeutico
GB9122016D0 (en) 1991-10-16 1991-11-27 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
IT1266571B1 (it) 1993-07-30 1997-01-09 Zambon Spa Derivati della beta-mercapto-propanammide utili nel trattamento delle malattie cardiovascolari
US5470834A (en) * 1993-10-06 1995-11-28 Florida State University Sulfoximine and suldodiimine matrix metalloproteinase inhibitors
DE4441873A1 (de) * 1994-11-24 1996-05-30 Wella Ag Mittel zur dauerhaften Haarverformung
JP3874455B2 (ja) 1996-06-27 2007-01-31 新日本製鐵株式会社 フィブリノーゲン受容体拮抗物質およびそれを有効成分とする医薬製剤

Also Published As

Publication number Publication date
KR100755152B1 (ko) 2007-09-04
CZ20013930A3 (cs) 2002-10-16
CN1263739C (zh) 2006-07-12
TR200103153T2 (tr) 2002-04-22
AU771760B2 (en) 2004-04-01
PL354360A1 (en) 2004-01-12
HUP0202876A3 (en) 2005-07-28
NO321377B1 (no) 2006-05-02
BR0010257A (pt) 2002-02-13
HUP0202876A2 (hu) 2003-01-28
PL200932B1 (pl) 2009-02-27
RU2244708C2 (ru) 2005-01-20
EE200100574A (et) 2003-02-17
MY128014A (en) 2007-01-31
HK1042303A1 (zh) 2002-08-09
IL145954A0 (en) 2002-11-10
AR034241A1 (es) 2004-02-18
NZ515062A (en) 2004-04-30
JP2002543184A (ja) 2002-12-17
NO20015383L (no) 2001-12-21
SE9901573D0 (sv) 1999-05-03
IS6139A (is) 2001-11-01
EP1180098A1 (en) 2002-02-20
US7071175B1 (en) 2006-07-04
ZA200108968B (en) 2003-09-05
CA2371213C (en) 2009-11-10
MXPA01011055A (es) 2002-06-04
CN1358174A (zh) 2002-07-10
EE04490B1 (et) 2005-06-15
TWI232105B (en) 2005-05-11
KR20020010630A (ko) 2002-02-04
NO20015383D0 (no) 2001-11-02
WO2000066557A1 (en) 2000-11-09
AU4790200A (en) 2000-11-17
CA2371213A1 (en) 2000-11-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SK15462001A3 (sk) Deriváty etántiolu, spôsoby ich prípravy, farmaceutické prípravky s ich obsahom a ich použitie na liečenie
US7423012B2 (en) Phosphinyloxy, oxime and carboxylic acid derivatives which are useful as carboxypeptidase U inhibitors
AU4898897A (en) Selective factor xa inhibitors
IL149042A (en) Non-covalent inhibitors of urokinase and vascular formation
WO2009004383A2 (en) Aza-bicyclohexane compounds useful as anticoagulants
NO317096B1 (no) Nye forbindelser, farmasoytisk formulering inneholdende slike forbindelser, fremgangsmate for deres fremstilling, og anvendelse derav
AU747531B2 (en) Selective factor Xa inhibitors
NZ518195A (en) Non-covalent inhibitors of urokinase and blood vessel formation
CZ20014357A3 (cs) Inhibitory faktoru VIIa, způsob jejich přípravy a jejich pouľití
EP2204373A1 (en) Phosphonic acid as Plasma Carboxypeptidase B Inhibitors
JP2005533064A (ja) ２，５−ジ置換３−メルカプトペンタン酸
WO2001079262A1 (en) Pyrazinone and pyridinone derivatives as thrombin inhibitors
US20010020033A1 (en) Selective factor xa inhibitors
EP1526131A1 (en) Aminoalkyl-pyrazinones and -pyridones as thrombin inhibitors
CZ20002070A3 (cs) Nové sloučeniny

Legal Events

Date Code Title Description
FD9A Suspended procedure due to non-payment of fee