NO317135B1

NO317135B1 - Nye aminosyrederivater, farmasoytisk formulering inneholdende slike derivater, fremgangsmate for og deres fremstilling, og deres anvendelse som trombininhibitorer

Info

Publication number: NO317135B1
Application number: NO19985700A
Authority: NO
Inventors: Jan-Erik Nystrom; David Gustafsson
Original assignee: Astrazeneca Ab
Priority date: 1996-06-07
Filing date: 1998-12-04
Publication date: 2004-08-23
Also published as: SK165398A3; ZA974542B; DE69718791T2; PL330482A1; EP0910573A1; AR008046A1; CA2255625A1; IL127325A0; IS4906A; CZ398698A3; AU723420B2; NO985700D0; ID17016A; IL127325A; NO985700L; ATE231883T1; WO1997046577A1; CN1226895A; ES2191840T3; AU3114097A

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører nye farmasøytisk nyttige aminosyreforbindelser, spesielt konkurrerende inhibitorer av trypsinlignende serinproteaser, spesielt trombin, deres anvendelse som legemidler, farmasøytiske preparater inneholdende dem og syntetiske veier til deres fremstilling.

Blodkoagulering er nøkkeprosessen som er involvert i både hemostase (det vil si hindring av blodtap fra et skadet kar) og trombose (det vil si dannelse av en blodpropp i et blodkar, hvilket enkelte ganger leder til karobstmksjon).

Koagulering er resultatet av en kompleks serie av enzymatiske reaksjoner. Et av de siste trinnene i denne serien av reaksjoner er omdannelsen av proenzymet protrombin til det aktive enzymet trombin.

Trombin er kjent for å spille en sentral rolle i koagulering. Det aktiverer blodplater hvilket leder til blodplateaggregering, omdanner fibrinogen til fibrinmonomerer, som polymeriserer spontant til fibrinpolymerer, og aktiverer faktor Vin, som videre tverrbinder polymerene til dannelse av uoppløselig fibrin. Videre aktiverer trombin faktor V og faktor VEI hvilket leder til en "postiv feedback"-generering av trombin fra protrombin.

Ved inhibering av aggregeringen av blodplater og dannelsen og tverrbindingen av fibrin ville effektive inhibitorer av trombin derfor forventes å utvise antitrombotisk aktivitet. I tillegg ville antitrombotisk aktivitet være forventet å bli forøket ved effektiv inhibering av den positive feedback-mekanismen.

Tidligere teknikk

Den tidlige utvikling av lavmolekylvektige inhibitorer av trombin har blitt beskrevet av Claesson i Blood Coagul. Fibrinol. (1994) 5,441.

Blomback et al (i J. Clin. Lab. Invest. 24, suppl. 107, 59 (1969)) rapporterte trombininhibitorer basert på aminosyresekvensen beliggende omkring spaltningssetet for fibrinogen Aa-kjeden. Av de omtalte aminosyresekvensene antydet disse forfatterene at tripeptidsekvensen Phe-Val-Arg (P9-P2-P1, i det følgende referert til som P3-P2-P1-sekvensen) ville være den mest effektive inhibitoren.

Trombininhibitorer basert på dipeptidylderivater med en a,o-aminoalkylguamdin i .Pl-stillingen er kjent fra US patent 4.346.078 og internasjonal patentsøknad WO 93/11152. Lignende strukturelt beslektede dipeptidylderivater er også rapportert. For eksempel beskriver internasjonal patentsøknad WO 94/29336 forbindelser med for eksempel aminometylbenzamidiner, cykliske aminoalkylamidiner og cykliske amino-alkylguanidier i Pl-stillingen; EP-patentsøknad 0.648.780 beskriver forbindelser med for eksempel cykliske aminoalkylguanidiner i Pl-stillingen.

Trombininhibitorer basert på peptidylderivater, som også har cykliske aminoalkylguanidiner (for eksempel enten 3- eller 4-aminomeryl-l-amidinopiperidin) i Pl-stillingen, er kjent fra EP-patentsøknader 0. 468.231, 0.559.046 og 0.641.779.

Trombininhibitorer basert på tripeptidylderivater med argininaldehyd i Pl-stillingen ble først beskrevet i EP-patentsøknad 0.185.390.

Senere er argininaldehydbaserte peptidylderivater, modifisert i P3-stillingen, rapportert. For eksempel beskriver internasjonal patentsøknad WO 93/18060 hydroksysyrer, EP-patentsøknad 0.526.877 des-aminosyrer og EP-patentsøknad 0.542.525 O-metylmandelsyrer i P3-stillingen.

Inhibitorer av serinproteaser (for eksempel trombin) basert på elektrofile ketoner i Pl-stillingen er også kjent. For eksempel beskriver EP-patentsøknad 0.195.212 peptidyl a-ketoestere og -amider, EP-patentsøknad 0.362.002 fluoralkylamidketoner, EP-patentsøknad 0.364.344 a,fi,5-triketoforbindelser og EP-patentsøknad 0.530.167 a-alkoksyketonderivater av arginin i Pl-stillingen.

Andre strukturelt forskjellige inhibitorer av trypsinlignende serinproteaser basert på C-terminale borsyrederivater av arginin og isotiouroniumanaloger derav er kjent fra EP-patentsøknad 0.293.881.

Mer nylig er trombininhibitorer basert på peptidylderivater beskrevet i EP-patentsøknad 0.669.317 og internasjonale patentsøknader WO 95/35309, WO 95/23609 og WO 94/29336.

Det er imidlertid stadig et behov for effektive inhibitorer av trypsinlignende serinproteaser slik som trombin. Det er et spesielt behov for forbindelser som både er oralt biotilgjengelige og selektive med hensyn til inhibering av trombin i forhold til andre serinproteaser. Forbindelser som utviser konkurrerende inhiberende aktivitet mot trombin ville være forventet å være spesielt nyttige som antikoaguleirngsmidler og derfor i den terapeutiske behandlingen av trombose og beslektede forstyrrelser.

Ifølge foreliggende oppfinnelse er det tilveiebragt en forbindelse som er kjennetegnet ved at den har formel L

hvor

R<1>representerer H eller Cj^ alkyl;

R<2>og R<3>representerer uavhengig H eller Cm alkyl;

Rx representerer et strukturelt fragment av formel (Ha),

hvor

k, 1 og m uavhengig representerer 0,1 eller 2;

R<4>og R<5>representerer uavhengig H, 1- eller 2-nafryl, Cm alkyl, fenyl eller metylendioksyfenyl (hvilke sistnevnte to grupper eventuelt er substituert med én eller flere av Cm alkyl (hvilken sistnevnte gruppe eventuelt er substituert med én eller flere halogensubstituenter), Cm alkoksy, halogen, hydroksy eller N(H)R<43>);

R<43>representerer uavhengig H;

Y representerer CH2eller (CH2)2;

n representerer 0,1,2,3 eller 4; og

B representerer et strukturelt fragment av formel (IVa) eller (IVb),

hvor

X! og X<2>uavhengig representerer en enkeltbinding eller CH2;

eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

Foretrukne og fordelaktige utførelser av disse forbindelsene fremgår fra de definisjoner som er angitt i medfølgende krav 2-10.

Forbindelsene av formel I kan utvise tautomerisme. Alle tautomere former og blandinger derav omfattes av foreliggende oppfinnelse.

Forbindelsene av formel I kan også inneholde ett eller flere assymetriske karbonatomer og kan derfor utvise optisk og/eller diastereoisomerisme. Alle diastereoisomerene kan separeres ved bruk av konvensjonelle teknikker, for eksempel kromatografi eller fraksjonert krystallisering. De forskjellige stereoisomerene kan isoleres ved separering av en racemisk eller annen blanding av forbindelsene ved bruk av konvensjonelle teknikker, for eksempel fraksjonert krystallisering eller HPLC. De ønskde optiske isomerene kan alternativt fremstilles ved omsetning av de passende optisk aktive utgangsmaterialene under betingelser som ikke vil forårsake racemisering eller epimerisering, eller ved derivatisering, for eksempel med en homochiral syre fulgt av separering av de diastereomere derivatene ved konvensjonelle metoder (for eksempel HPLC, kromatografi over silisiumdioksyd). Alle stereoisomerer omfattes av foreliggende oppfinnelse.

Halogengrupper som R4 og R<5>kan være substituert med, og som substituentene på R<4>og R<5>kan være substituert med, inkluderer fluor, klor og brom.

Prikken tilstøtende karbonatomene i fragmentet av formel Ha betegner festepunktet for fragmentet til forbindelsen av formel I.

Bølgelinjene på karbonatomet i fragmentene av formler IVa og IVb betegner fragmentets bindingsstilling.

Forkortelser er angitt til slutt i denne beskrivelsen.

Ifølge en ytterligere utførelse av oppfinnelsen tilveiebringes en forbindelse av formel (I), som definert ovenfor, forutsatt at R4 og/eller R<5>(slik det passer) i det strukturelle fragmentet (Ila) ikke representerer (i) fenyl substituert med halogensubstituert Cm alkyl;

(i i) metylendioksyfenyl.

Ifølge en annen utførelse av oppfinnelse tilveiebringes en forbindelse av formel (I), som definert ovenfor, hvor R4 og/eller R<5>(slik det passer) i det strukturelle fragmentet (Ha) representerer: (i) fenyl substituert med halogensubstituert Cm alkyl;

(ii) metylendioksyfenyl.

Foretrukne forbindelser av formel I inkluderer de hvor:

n representerer 1; og

B representerer et strukturelt fragment av formel IVa.

Forbindelser av formel I hvor fragmentet

er i S-konfigurasjonen, er foretrukket. Bølgelinjene på nitrogenet og karbonatomet i fragmentet ovenfor betegner fragmentets bindingsstilling.

Foretrukne forbindelser av formel I inkluderer forbindelsene i eksempler 1 til 7,11,12, 16 til 39,41,42,43 og (R,S)-Ph-C(Me)(CH2OMe)-C(0)-Aze-Pab.

Fremstilling

Ifølge oppfinnelsen er det også tilveiebragt en fremgangsmåte for fremstilling av forbindelser av formel I, og denne fremgangsmåten er kjennetegnet ved at den innbefatter:

(a) kobling av en forbindelse av formel V

hvor R<1>, R<2>, R<3>og Rx er som definert ovenfor, med en forbindelse av formel VI hvor Y, n og B er som definert ovenfor; eller (b) kobling av en forbindelse av formel VII hvorR<1>,R<2>,R<3>, Rx og Y er som definert ovenfor, med en forbindelse av formel VU!

hvor n og B er som definert ovenfor,

for eksempel i nærvær av et koblingssystem (for eksempel oksalylklorid i DMF, EDC, DCC, HBTU eller TBTU), en passende base (for eksempel pyridin, DMAP, TEA eller DIPEA) og et egnet organisk oppløsningsmiddel (for eksempel diklormetan, acetonitril eller DMF).

Forbindelser av formel V er kommersielt tilgjengelige, er velkjente i litteraturen, eller er tilgjengelige ved anvendelse av kjente teknikker. For eksempel kan forbindelser av formel V fremstilles ved hydrolyse av en forbindelse av formel DC,

hvor R er Cns alkyl eller Cu alkylfenyl og R<1>,R<2>,R3 og Rx er som definert ovenfor, for eksempel ved romtemperatur i nærvær av en egnet base (for eksempel litiumhydroksyd) og et passende oppløsningsmiddel (for eksempel THF og/eller vann). Forbindelser av formel VI kan fremstilles ved omsetning av en forbindelse av formel X

hvor Y er som definert ovenfor, med eri forbindelse av formel Vm som definert ovenfor, for eksempel under betingelser slik som de som er beskrevet ovenfor for syntese av forbindelser av formel I.

Forbindelser av formel VE er lett tilgjengelige ved bruk av kjente teknikker. For eksempel kan forbindelser av formel VII fremstilles ved omsetning av en forbindelse av formel V som definert ovenfor, med en forbindelse av formel X som definert ovenfor, for eksempel under betingelser slik som de som er beskrevet ovenfor for syntese av forbindelser av formel I.

Forbindelser av formel IX hvor R<1>og R3 begge representerer H kan fremstilles ved reduksjon av en forbindelse av formel XI,

hvor R, Rx og R<2>er som definert ovenfor, for eksempel ved under romtemperatur (for eksempel mellom -70°C og -5°C) i nærvær av et egnet reduksjonsmiddel (for eksempel natriumborhydrid) og et passende organisk oppløsningsmiddel (for eksempel MeOH eller EtOH).

Forbindelser av formel IX hvor R<1>representerer H og R<3>representerer Cm alkyl kan fremstilles ved omsetning av en forbindelse av formel XI som definert ovenfor, med en organometallisk reagens av formel XQ

hvor R<3*>representerer Cm alkyl, M representerer Li eller MgHal og Hal er Cl, Br eller I, under betingelser som er velkjente for fagfolk innen teknikken, i nærvær av et passende organisk oppløsningsmiddel (for eksempel THF). Forbindelser av formel DC hvor R<1>representerer H kan også fremstilles ved omsetning av en forbindelse av formel XE! hvor R og Rx er som definert ovenfor, med en forbindelse av formel XIV,

hvor R<2>og R<3>er som definert ovenfor, under betingelser som er velkjente for fagfolk innen teknikken.

Forbindelser av formel DC hvor R<1>, R<2>og R<3>alle representerer H, og verken k eller 1 i fragment (Ha) representerer 0, kan fremstilles ved reduksjon av en forbindelse av formel

XV,

hvor R<xa>representerer et sunikturelt fragment av formel Ha, som definert ovenfor, hvor hverken k eller 1 representerer 0, og R er som definert ovenfor, i nærvær av et egnet reduksjonsmiddel (for eksempel boran) i nærvær av et passende organisk oppløsnings-middel (for eksempel THF).

Forbindelser av formel XI er enten kjent fra, eller kan fremstilles analogt med, metodene som beskrevet i J. Org. Chem. 54,3831 (1989).

Forbindelser av formel XV er velkjente i litteraturen eller kan fremstilles ved bruk av kjente teknikker, for eksempel ved omsetning av et egnet malonsyrederivat med et alkyleringsmiddel av formel XVI,

hvor L er en avspaltningsgruppe (for eksempel halogen (Cl, Br, I) eller tosyl) og R<xa>er som definert ovenfor, for eksempel i nærvær av en egnet base (for eksempel natrium-hydrid eller natriumetoksyd) og et passende organisk oppløsningsmiddel.

Forbindelser av formel VIE, X, XII, XIII, XIV og XVI er kommersielt tilgjengelige, er velkjente i litteraturen, eller er tilgjengelige ved bruk av kjente teknikker.

Substituenter i blant annet fenylgrupper som inneholdes i forbindelser av formler I, V, VII, IX, XI, XIII, XV og XVI kan inter-omdannes ved bruk av standard teknikker.

Forbindelser av formel I kan isoleres fra deres reaksjonsblandinger ved bruk av konvensjonelle teknikker.

Det vil forstås av fagfolk innen teknikken at i den ovenfor beskrevne fremgangsmåte så kan det være nødvendig å beskytte de funksjonelle gruppene i mellomproduktfor-bindelser med beskyttelsesgrupper.

Funksjonelle grupper som der er ønskelig å beskytte inkluderer hydroksy, amino og karboksylsyre. Egnede beskyttelsesgrupper for hydroksy inkluderer trialkylsilyl- eller diarylalkylsilylgrupper (for eksempel t-butyldimetylsilyl, t-butyldifenylsilyl eller trimetylsilyl) og tetrahydropyranyl. Egnede beskyttelsesgrupper for karboksylsyre inkluderer C|-6alkyl eller benzylestere. Egnede beskyttelsesgrupper for amino, amidino og guanidino inkluderer t-butyloksykarbonyl eller benzyloksykarbonyl. Amidino- og guanidinonitrogener kan være enten mono- eller dibeskyttet.

Beskyttelsen av og fjerning av beskyttelsen fra funksjonelle grupper kan finne sted før eller etter kobling.

Spesielt kan forbindelsene av formel I fremstilles ved fremgangsmåter omfattende kobling av en N-acylert aminosyre eller en N-beskyttet aminosyre. Når en N-beskyttet aminosyre anvendes kan acylgruppen adderes etter kobling og fjerning av beskyttelse fra nitrogenatomet kan deretter bevirkes ved anvendelse av standard metoder.

Beskyttelsesgrupper kan fjernes i overensstemmelse med teknikker som er velkjente for fagfolk innen teknikken og som beskrevet i det følgende.

Visse beskyttede derivater av forbindelser av formel I, som kan fremstilles før et sluttelig beskyttelsesfjerningstrinn for dannelse av forbindelser av formel L er nye.

Ifølge et annet aspekt ved oppfinnelsen tilveiebringes en forbindelse av formel Ia

hvor B<1>representerer et strukturelt fragment av formel IVd eller IVe

hvor D<1>og D2 uavhengig representerer H, OH, OR", OC(0)R, OC(0)OR<c>, C(0)OR<d>, C(0)R<e>og R<8>,R,Rc, Rd og Re representerer uavhengig fenyl, benzyl, (CH2)20C(0)CH3, eller Ci^alkyl hvilken sistnevnte gruppe eventuelt er avbrutt av oksygen; og R<1>, R<2>, R<3>, Rx, Y, n, X<1>og X<2>er som definert ovenfor, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, forutsatt at D<1>og D2 ikke begge representerer H.

Alkylgrupper som Ra, R, R<c>, Rd og Re kan representere kan være lineære eller forgrenede, og kan være mettede eller innettede.

Bølgelinjene på karbonatomet i fragmentene av formler IVd eller IVe betegner fragmentets bindingsstilling.

Foretrukne forbindelser av formel Ia inkluderer de hvor D<1>representerer H og D<2>representerer OH, OCH3, OC(0)Rb eller C(0)OR<d>, hvor Rog Rd er som definert ovenfor.

Foretrukne forbindelser av formel Ia inkluderer forbindelsene i eksempler 8,9,10,13, 14,15,40 og (R,S)-Ph-C(Me)(CH2OMe)-C(0)-Pro-Pab(Z).

Forbindelser av formel Ia kan også fremstilles direkte fra forbindelser av formel I i overensstemmelse med teknikker som er velkjent for fagfolk innen teknikken. For eksempel kan forbindelser av formel Ia hvor D<1>eller D2 representerer OH fremstilles ved omsetning av en tilsvarende forbindelse av formel Ia hvor D 1 eller D 7 (slik det passer) representere COORd og Rd er som definert ovenfor, med hydroksylamin (eller et hydrohalogenidsalt derav), for eksempel ved 40°C i nærvær av en egnet base (for eksempel TEA) og et passende organisk oppløsningsmiddel (for eksempel THF).

Forbindelser av formel Ia kan alternativt fremstilles via andre beskyttede derivater av formel Ia ifølge teknikker som er velkjente for fagfolk innen teknikken. For eksempel kan forbindelser av formel Ia hvor Dl eller D2 representerer OC(0)OR<c>og R<c>er som definert ovenfor, fremstilles ved omsetning av en tilsvarende forbindelse av formel Ia hvor D<1>eller D<2>(slik det passer) representerer OH, med en forbindelse av formel XVII,

hvor R<c>er som definert ovenfor, for eksempel ved romtemperatur i nærvær av en egnet base (for eksempel TEA, pyridin eller DMAP) og et passende organisk oppløsnings-middel.

Forbindelser av formel Ia hvor B<1>representerer et strukturelt fragment av formel IVd, D<1>representerer H og D2 representerer OH eller OR" hvor R<*>er som definert ovenfor, kan alternativt fremstilles ved omsetning av en forbindelse av formel XVIH,

hvor B* representerer fenyl-l,4-en eller cykloheksyl-l,4-en og R<1>, R<2>,R<3>, Rx, Y og n er som definert ovenfor, med en forbindelse av formel XDC

hvor Ral representerer H eller Ra og Ra er som definert ovenfor, for eksempel ved mellom 40 og 60°C, i nærvær av en egnet base (for eksempel TEA) og et passende organisk oppløsningsmiddel (for eksempel THF, CH3CN, DMF eller DMSO).

Forbindelser av formel XVIII kan fremstilles ifølge peptidkoblingsteknikker.for eksempel på analog måte med metodene som beskrevet ovenfor for forbindelser av formel I. Forbindelser av formler XVII og XDC er kommersielt tilgjengelige, er velkjente i litteraturen, eller er tilgjengelige ved bruk av kjente teknikker.

Bruken av beskyttelsesgrupper er fullstendig beskrevet i "Protective Groups in Organic Chernistry" utgitt av J.W.F. McOmie, Plenum Press (1973) og "Protective Groups in Organic Synthesis", 2. utgave, T.W. Greene & P.G.M. Wutz, Wiley-Interscience (1991).

Det vil også forstås av fagfolk innen teknikken at selv om det kan hende at slike beskyttede derivater av forbindelser av formel I (for eksempel forbindelser av formel Ia) ikke er i besittelse av farmakologisk aktivitet som sådan, så kan de administreres parenteralt eller oralt og deretter metaboliseres i kroppen til dannelse av forbindelser ifølge oppfinnelsen som er farmakologisk aktive. Slike derivater kan derfor beskrives som prodrugs. Alle prodrugs av forbindelser av formel I omfattes av foreliggende oppfinnelse.

Beskyttede derivater av forbindelser av formel I som er særlig nyttige som prodrugs inkluderer forbindelser av formel Ia.

Forbindelser av formel I, farmasøytisk akseptable salter, tautomerer og stereoisomerer derav, samt proldrugs derav (inkludert forbindelser av formel Ia som er prodrugs av forbindelser av formel I), er i det følgende referert til samlet som "forbindelsene ifølge oppfinnelsen".

Medisinsk og farmasøytisk anvendelse

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen er nyttige på grunn av at de er i besittelse av farmakologisk aktivitet. De er derfor indikert som farmasøytika.

Ifølge et ytterligere aspekt ved oppfinnelsen tilveiebringes således forbindelsene ifølge oppfinnelsen for anvendelse som farmasøytika.

Spesielt er forbindelsene ifølge oppfinnelsen potente inhibitorer av trombin enten som sådanne eller, i tilfelle for prolegemidler, etter administrasjon, for eksempel som demonstrert i de tester som er beskrevet i det nedenstående.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen forventes således å være nyttige i de tilstander der inhibering av trombin er nødvendig.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen er således indikert i behandling eller profylakse av trombose og hyperkoagulerbarhet i blod og vev hos dyr inkludert mennesket.

Det er kjent at hyperkoagulerbarhet kan lede til tromboemboliske sykdommer. Tilstander som er forbundet med hyperkoagulerbarhet og tromboemboliske sykdommer som kan nevnes inkluderer aktivert protein C-resistens, slik som faktor V-mutasjon (faktor V Leiden) og arvede eller ervervede mangler i ant i trombin HI, protein C, protein S, heparin kofaktor II. Andre tilstander som er kjent for å være forbundet hyperkoagulerbarhet og tromboembolisk sykdom inkluderer sirkulerende antifosfolipid-antistoffer (Lupus-antikoagulant), homocysteinemi, heparinindusert trombocytopenia og defekter i fibrinolyse. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen er således indikert både i den terapeutiske og/eller profylaktiske behandling av disse tilstandene.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen er videre indikert i behandlingen av tilstander hvor det er et uønsket overskudd av trombin uten tegn på hyperkoagulerbarhet, for eksempel i neurodegenerative sykdommer slik som Alzheimers sykdom.

Spesielle sykdomstilstander som kan nevnes inkluderer terapeutisk og/eller profylaktisk behandling av venøs trombose og pulmonal embolisme, arteriell trombose (for eksempel i myokardinfarkt, ustabil angina, trombosebasert slag og perifer arteriell trombose) og systemisk embolisme vanligvis fra atrium under arteriell fibrillering eller fra venstre ventrikkel etter transmuralt myokardinfarkt.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen forventes dessuten å ha nyttevirkning i profylakse av reokklusjon (det vil si trombose) etter trombolyse, perkutan transluminal angioplasti (PTA) og koronare bypass operasjoner; forebyggelse av retrombose etter mikrokirurgi og vaskulær kirurgi generelt.

Ytterligere indikasjoner inkluderer terapeutisk og/eller profylaktisk behandling av disseminert intravaskulær koagulasjon forårsaket av bakterier, multiple traumer, intoksikasjon eller enhver annen mekanisme; antikoagulantbehandling når blod er i kontakt med fremmede overflater i kroppen slik som vaskulære transplantater, vaskulære stenter, vaskulære katetere, mekaniske og biologiske proteseventiler eller enhver annen medisinsk innretning; og antikoagulantbehandling når blod er i kontakt med medisinske innretninger utenfor kroppen slik som under kardiovaskulær kirurgi ved bruk av en hjerte-lunge maskin eller i hemodialyse.

I tillegg til det effekter på koagulasjonsprosessen er trombin kjent for å aktivere et stort antall celler (slik som neutrofiler, fibroblaster, endotelceller og glatte muskelceller). Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan derfor også være nyttige for terapeutisk og/eller profylaktisk behandling av idiopatisk og adult respiratory distress syndrom, pulmonal fibrose etter behandling med stråling eller kjemoterapi, septisk sjokk, septikemi, inflammatoriske responser, som innbefatter, men ikke er begrenset til, ødem, akutt eller kronisk aterosklerose slik som koronar arteriell sykdom, cerebral arteriell sykdom, perifer arteriell sykdom, reperfusjonsskade, og restenose etter perkutan transluminal angioplasti (PTA).

Forbindelser ifølge oppfinnelsen som inhiberer trypsin og/eller trombin kan også være nyttig i behandlingen av pankreatitt.

Ifølge et ytterligere aspekt ved foreliggende oppfinnelse er det tilveiebragt anvendelse

av en forbindelse (I) ifølge hvilket som helst av medfølgende krav 1-12, eller et farma-søytisk akseptabelt salt derav, som aktiv bestanddel i fremstillingen av et legemiddel for behandling av en tilstand der inhibering av trombin er nødvendig. Tilstander som fordel-aktig kan behandles er trombose og hyperkoagulerbarhet i blod og vev.

Det tilveiebringes også anvendelse av en forbindelse som definert i hvilket som helst av medfølgende krav 1-12, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, som aktiv bestanddel i fremstillingen av et antikoaguleringsmiddel.

Dessuten tilveiebringes anvendelse av en forbindelse som definert i hvilket som helst av medfølgende krav 11 eller 12 som en prodrug.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen vil normalt bli administrert oralt, intravenøst, subkutant, bukalt, rektalt, dermalt, nasalt, trakealt, bronkalt, en hvilken som helst annen parenteral vei eller via inhalering, i form av farmasøytiske preparater omfattende aktiv forbindelse enten som en fri base, eller et farmasøytisk akseptabelt ikke-toksisk organisk eller uorganisk syreaddisjonssalt, i en farmasøytisk akseptabel doseringsform. Avhengig av forstyrrelsen og pasienten som skal behandles og administrasjonsveien, kan preparatene administreres ved varierende doser.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan også kombineres og/eller koadministreres med et hvilket som helst antitrombotisk middel med en forskjellig virkningsmekanisme, slik som antiblodplatemidlene acetylsalicylsyre, ticlopidin, clopidogrel, tromboksanreseptor-og/eller syntetaseinhibitorer, fibrinreseptorantagonister, prostacyklinmimetiske midler og fosfodiesteraseinhibitorer og ADP-reseptor (P2T)-antagonister.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan videre kombineres og/eller koadministreres med trombolytika slik som vedplasminogenaktivator (naturlig, rekombinant eller modifisert), streptokinase, urokinase, prourokinase, anisoylert plasminogen-streptokinase-aktivatorkompleks (APSAC), animalske spyttkjertelplasminogenaktivatorer, og lignende, i behandlingen av trombotiske sykdommer, spesielt myokardinfarkt.

Ifølge et ytterligere aspekt ved oppfinnelsen er det således tilveiebragt en farmasøytisk formulering som er kjennetegnet ved at den innbefatter en forbindelse ifølge oppfinnelsen i blanding med en farmasøytisk akseptabel adjuvans, fortynningsmiddel eller bærer.

Egnede daglige doser av forbindelsene ifølge oppfinnelsen i terapeutisk behandling av mennesker er ca 0,001-100 mg/kg kroppsvekt ved peroral administrasjon og 0,001-50 mg/kg kroppsvekt ved parenteral administrasjon.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen har den fordel at de kan være mer effektive, være mindre toksiske, være lengervirkende, ha et bredere aktivitetsområde, være mer potente, gi færre bivirkninger, bli lettere absorbert enn, eller at de kan ha andre nyttige farma-kologiske egenskaper i forhold til forbindelser som er.kjent i den tidligere teknikk.

Biologiske tester

Test A

Bestemmelse av trombinlevringstid ( TH

Human trombin (T 6769, Sigma Chem Co) i bufferoppløsning, pH 7,4,100 ul og inhibitoroppløsning, 100 ul, ble inkubert i 1 min. Blandet normalt citratbehandlet humanplasma, 100 fil, ble deretter tilsatt og levringstiden målt i en automatisk anordning (KC 10, Amelung).

Levringstiden i sekunder ble plottet mot inhibitorkonsentrasjonen, og ICjoTT ble bestemt ved interpolasjon.

IC50TT er den konsentrasjon av inhibitor i testen som fordobler trombinleveringstiden for human plasma.

TestB

Bestemmelse av trombininhibering med en kromopen robotanalyse

Trombininhibitorvirkningsgraden ble målt ved hjelp av en kromogen substratmetode, i en Plato 3300 robot-mikroplateprosessor (Rosys AG, CH-8634 Hombrechtikon, Sveits), ved bruk av 96-brønners halvvolummikrotiterplater (Costar, Cambridge, MA, USA; Cat No 3690). Forrådsoppløsninger av testsubstans i DMSO (72 ul) i 1 mmol/1, ble serie-fortynnet 1:3 (24 + 48 ul) med DMSO for oppnåelse av ti forskjellige konsentrasjoner, som ble analysert som prøver i analysen. 2 ul av testprøve ble fortynnet med 124 ul analysebuffer, 12 ul av kromogen substratoppløsning (S-2366 Chromogenix, Molndal, Sverige) i analysebuffer og sluttelig 12 ul av a-trombinoppløsning, (human a-trombin, Sigma Chemical Co) begge i analysebuffer, ble tilsatt, og prøvene blandet. De sluttelige prøvekonsentrasjonene var: testsubstans 0,00068-13,3 umol/1 S-2366 0,30 mmol/1, a-trombin 0,020 NlHU/ml. Det lineære absorptansinkrementet i løpet av 40 minutters inkubasjon ved 37°C ble benyttet for beregning av prosentvis inhibering for testprøvene, sammenlignet med blindprøver uten inhibitor. ICso-robotverdien, tilsvarende inhibitorkonsentrasjonen som forårsaket 50 % inhibering av trombinaktiviteten, ble beregnet fra en logdose vs. % inhiberingskurve.

TestC

Bestemmelse av inhiberingskonstanten K; for human trombin

Kj-bestemmelser ble foretatt ved bruk av en kromogensubstratmetode, utført ved 37°C på en Cobas Bio-sentrifugalanalysator (Roche, Basel, Sveits). Resterende enzym-aktivitet etter inkubasjon av human-a-trombin med forskjellige konsentrasjoner av testforbindelse ble bestemt ved tre forskjellige substratkonsentrasjoner, og ble målt som endringen i optisk absorptans ved 405 nm.

Testforbindelseoppløsninger (100 ul; normalt i buffer eller saltoppløsningsholdig BSA 10 g/l) ble blandet med 200 ul human a-trombin (Sigma Chemical Co) i analysebuffer (0,05 mol/l Tris-HCl pH 7,4, ioniestyrke 0,15 justert med NaCl) inneholdende BSA (10 g/l) og analysert som prøver i nevnte Cobas Bio. En 60 ul prøve sammen med 20 ul vann ble tilsatt til 320 ul av substratet S-2238 (Chromogenix AB, Molndal, Sverige) i analysebuffer, og absorptansendringen (AA/min) ble overvåket. Sluttkonsentrasjonene av S-2238 var 16,24 og 50 umol/1 og av trombin 0,125 NTH U/ml.

Den stabile reaksjonshastigheten ble benyttet for frembringelse av Dixon-plottinger, det vil si diagrammer av inhibitorkonsentrasjon vs. l/(AA/min). For reversible, konkurrerende inhibitorer danner datapunktene for de forskjellige substrat-konsentrasjonene rette linjer som krysser hverandre ved x = -Kj.

TestD

Bestemmelse av aktivert partiell trombolastintid ( APTT)

APTT ble bestemt i blandet normal human citratbehandlet plasma med reagensen PTT Automated 5 produsert av Stago. Inhibitorene ble tilsatt til plasmaet (10 ul inhibitor-oppløsning til 90 ul plasma) fulgt av reagensen og kalsiumkloirdoppløsning og APTT ble bestemt i blandingen ved bruk av koagulasjonsanalysatoren KC10 (Amelung) ifølge reagensprodusentens instruksjoner. Levringstiden i sekunder ble plottet mot inhibitorkonsentrasjonen i plasma og IC50APTT ble bestemt ved interpolasjon.

IC50APTT er definert som den konsentrasjon av inhibitor i human plasma som doblet aktivert partiell tromboplastintid.

TestE

Bestemmelse av trombintid ex vivo

Inhiberingen av trombin etter oral eller parenteral administrasjon av forbindelsene av formel I og Ia, oppløst i etanol:Solutol™:vann (5:5:90), ble undersøkt i bevisste rotter som, en eller to dager før forsøket, var utstyrt med et kateter for blodprøvetaking fra karotidarterien. På forsøksdagen ble blodprøver trukket ved fastsatte tider etter administrasjonen av forbindelsen inn i plastrør inneholdende en del natriumcitrat-oppløsning (0,13 mol pr 1) og 9 deler blod. Rørene ble sentrifugert for oppnåelse av blodplatefattig plasma. Plasmaet ble benyttet for bestemmelse av trombintid som beskrevet i det nedenstående.

Det citratbehandlede rotteplasma, 100 ul, ble fortynnet med en saltoppløsning, 0,9 %, 100 ul og plasmakoagulasjon ble startet ved tilsetning av human trombin (T 6769, Sigma Chem CO, USA) i en bufferoppløsning, pH 7,4,100 ul. Levringstiden ble målt i en automatisk anordning (KC 10, Amelung, Tyskland).

Da en forbindelse av formel Ia ble administrert ble konsentrasjoner av den passende aktive trombininhibitoren av formel I i rotteplasmaet beregnet ved bruk av standardkurver som relaterte trombintiden i det blandede citratbehandlede rotteplasma til kjente konsentrasjoner av den tilsvarende "aktive" trombininhibitoren oppløst i saltoppløsning. Basert på de beregnede plasmakonsentrasjonene av den aktive trombininhibitoren av formel I (som går ut fra at trombintidforlengelse forårsakes av ovennevnte forbindelse) i rotten, ble arealet under kurven etter oral og/eller parenteral administrasjon av det tilsvarende prolegemidlet av formel I beregnet (AUCpd) ved bruk av trapezoidregelen og ekstrapolasjon av data til uendelig.

Biotilgjengeligheten for den aktive trombininhibitoren av formel I etter oral eller parenteral administrasjon av prolegemidlet av formel Ia ble beregnet som angitt nedenfor:

hvor AUCaktiv,parenteral representerer AUC-verdien oppnådd etter parenteral administrasjon av den tilsvarende aktive trombininhibitoren av formel I til bevisste rotter som beskrevet ovenfor.

Test F

Bestemmelse av trombintid i urin ex vivo

Mengden av den aktive trombininhibitoren av formel I som ble utskilt i urin etter oral eller parenteral administrasjon av forbindelsene ifølge oppfinnelsen, oppløst i etanol: Solutol™:vann (5:5:90), ble beregnet ved bestemmelse av trombintiden i urin ex vivo (ved å gå ut fra at trombintidforlengelse forårsakes av ovennevnte forbindelse).

Bevisste rotter ble plassert i metabolismebur, som ga anledning til separat oppsamling av urin og feces, i 24 timer etter oral administrasjon av forbindelser ifølge oppfinnelsen. Trombintiden ble bestemt på den oppsamlede urinen som beskrevet i det nedenstående.

Blandet normalt citratbehandlet human plasma (100 ul) ble inkubert med den konsentrerte rotteurinen, eller saltoppløsninger derav, i ett minutt. Plasmakoagulasjon ble deretter initiert ved administrasjon av human trombin (T 6769 Sigma Chem Company) i bufferoppløsning (pH 7,4; 100 ul). Levringstiden ble målt i en automatisk anordning (KC 10; Amelung).

Konsentrasjonene av den aktive trombininhibitoren av formel I rotteurinen ble beregnet ved bruk av standardkurver som relaterte trombintiden i det blandede normale citrat behandlede human plasma til kjente konsentrasjoner av ovennevnte aktive trombin-inhibitor oppløst i konsentrert rotteurin (eller saltoppløsninger derav). Ved å multiplisere den totale rotteurinproduksjonen i løpet av 24 timers perioden med den beregnede gjennomsnittlige konsentrasjon av den ovennevnte aktive inhibitoren i urinen, kunne mengden av den aktive inhibitoren som var utskilt i urinen (AMOUNTpd) beregnes. Biotilgjengeligheten av den aktive trombininhibitoren av formel I etter oral eller parenteral administrasjon av prolegemidlet ble beregnet som følger:

hvor AMOUNTaktiv,parenteral representerer mengden utskilt i urinen etter parenteral administrasjon av den tilsvarende aktive trombininhibitoren av formel I til bevisste rotter som beskrevet ovenfor.

Oppfinnelsen illustreres ved hjelp av følgende eksempler.

EKSEMPLER

Generelle eksperimentelle prosedyrer

Massespektra ble registrert på et Finnigan MAT TSQ 700 trippel-kvadrupol masse-spektrometer utstyrt med et elektrospraygrensesnitt (FAB-MS) og VG Platform II-massespektrometer utstyrt med et elektrospraygrensesnitt (LC-MS).<!>H NMR- og<13>C NMR-målinger ble utført på BRUKER ACP 300 og Varian UNITY pluss 400,500 og 600 spektrometere, ved operasjon ved<]>H frekvenser av henholdsvis 300,13, 399,96, 499,82 og 599,94 MHz og ved<13>C frekvenser av henholdsvis 75,46,100,58,125,69 og 150,88 MHz. Preparativ HPLC ble utført på reversfasekolonner (250 nn, 20 eller 50 mm; 5 til 7 um fase Chromasil C8) med strømningshastigheter på 10 til 50 ml/min ved bruk av en UV-detektor (270 til 290 nm).

Fremstilling av utgangsmaterialer

Eksempel A

H-Aze-Pab(Z)

(i) Boc-Aze-OH

Di-tert-butyldikarbonat (13,75 g; 63 mmol) ble tilsatt under omrøring ved romtemperatur til en blanding av L-azetidin-2-karboksylsyre (H-Aze-OH; 5,777 g; 57 mmol) og Na2C03(6,04 g; 57 mmol) i vann (50 ml) og THF (100 ml). Etter 60 timer ble nevnte THF fjernet i vakuum og blandingen ble fortynnet med vann og deretter surgjort med 2 M KHS04. Ekstraksjon med CH2CI2etter tørking (MgSCU) og inndampning av oppløsningsmidlet ga en rest som ble krystallisert fra CC^Chiheksan hvilket ga 10,87 g (95 %) av fargeløse krystaller.

'H NMR (300 MHz; CDC13); 6 4,85-4,7 (br s, 1H), 4,0-3,75 (m, 2H), 2,65-2,35 (m, 2H), 1,4 (s, 9H).

(ii) Boc-Aze-Pab(Z)

Ved romtemperatur ble EDC (13,5 g; 70 mmol) tilsatt til en blanding av Boc-Aze-OH (10,87 g; 54 mmol; fra trinn (i) ovenfor), H-Pab(Z) x HC1 (18,21 g; 57 mmol; fremstilt ifølge metoden beskrevet i internasjonal patentsøknad WO 94/29336) og DMAP (9,9 g; 81 mmol) i acetonitril (270 ml). Etter 16 timer ble oppløsningsmidlet fjernet i vakuum og erstattet med etylacetat. Blandingen ble vasket med vann og en vandig oppløsning av sitronsyre. Det organiske laget ble tørket (MgSOij) og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum hvilket ga en rest som ga 17,83 g av Boc-Aze-Pab(Z) ved krystallisering fra en blanding av CH2CI2, toluen, diisopropyleter og petroleumeter.

'H NMR (300 MHz; CDCI3); 6 7,85-7,75 (d, 1H), 7,45-7,2 (m, 7H), 5,2 (s, 2H), 4,7 (t, 1), 4,6-4,4 (m, 2H), 3,95-3,8 ("q", 1H), 3,8-3,7 (q, 1H), 2,5-2,3 (m, 2H), 1,4 (s, 9H).

(iii) H-Aze-Pab(Z)

Boc-Aze-Pab(Z) (2,44 g; 5,2 mmol) ble oppløst i en blanding av trifluoreddiksyre (10 ml) og CH2CI2(10 ml). Etter 30 minutter ble oppløsningsmidlet og trifluoreddiksyren fjernet i vakuum og resten ble oppløst i CH2CI2. Den organiske fasen ble vasket med NaC03/vandig (10 %) og tørket (K2CO3). Fjerning av oppløsningsmidlet i vakuum ga en rest som ga 1,095 g (57 %) av H-Aze-Pab(Z) som fargeløse krystaller ved krystallisering fra CH2CI2.

'H NMR (300 MHz; CD3OD): 8 7,85-7,75 (d, 2H), 7,45-7,25 (m, 7H), 5,2 (s, 2H), 4,5 (s, 2H), 4,3 (d, 1H), 3,65 (q, 1H), 3,4-3,3 (m, 1H), 2,7-2,5 (m, 1H), 2,4-2,2 (m, 1H).

Eksempel B

H-Pic-Pab(Z) x 2 HC1

(i) Boc-Pic-OH

Fremstilt ifølge M. Bodanszky og A. Bodanszky ('The Practice of Peptide Synthesis", Springer-Verlag (1984)) ved bruk av THF i steden for dioksan som oppløsningsmiddel.

<!>H NMR (300 MHz; CDCI3); 8 5,0-4,8 (br d, 1H), 4,0 (br s, 1H), 3,0 (br s, 1H), 2,20 (d, 1H), 1,65 (m, 2H), 1,5-1,3 (s + m, 13 H)

(ii) Boc-Pic-Pab(Z)

Boc-Pic-OH (2,02 g; 8,8 mmol; fra trinn (i) ovenfor), H-Pab(Z) x 1 HC1 (2,36 g; 7,4 mmol; fremstilt ifølge metoden beskrevet i internasjonal patentsøknad wo 94/29336) og 3,9 g (32 mmol) DMAP, ble oppløst i CH2C12(40 ml). Blandingen ble avkjølt til 0°C og 1,99 g (10,4 mmol) av EDC ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 3 dager. Blandingen ble helt i en 0,2 M KHSO4oppløsning og ekstrahert to ganger med CH2CI2. Det organiske laget ble tørket (Na2S04) og inndampet. Råproduktet ble flashkromatografert på silisiumdioksydgel ved bruk av EtOAc:toluen 7:3 som elueringsmiddel og dette ga 1,59 g (44 %) av produktet.

FAB-MS m/z 495 (M + 1)<+>

'H NMR (400 MHz; CDC13); 8 7,83 (d, 2H), 7,43 (d, 2H), 7,36-7,11 (m, 5H), 6,52 (bs, NH), 5,20 (s, 2H), 4,81-4,72 (m, 1H), 4,61-4,34 (m, 2H), 4,10-3,90 (m, 1H), 2,79-2,64 (m, 1H), 2,36-2,25 (m, 1H), 1,7-1,3 (m, 14H).

(iii) H-Pic-Pab(Z) x 2 HCI

Boc-Pic-Pab(Z) (1,59 g; 3,25 mmol; fra trinn (ii) ovenfor) ble oppløst i 100 ml av EtOAc mettet med HCI. Reaksjonsblandingen ble inndampet etter en halv time og dette ga tittelproduktet i kvantitativt utbytte.

FAB-MS m/z 395 (M + 1)+

'H NMR (300 MHz; D20); 5 7,82 (d, 2H), 7,63-7,41 (m, 7H), 5,47 (s, 2H), 4,69-4,49 (AB-system sentrert ved 5 4,59, 2H), 4,03 (dd, 1H9,3,52 (bd, 1H), 3,10 (dt, 1H), 2,29 (dd, 1H), 2,08-1,61 (m, 5H).

Eksempel C

H-Aze-Pig(Z) x 2 HCI

(i) Boc-Aze-Pig(Z)

Ved romtemperatur ble Boc-Aze-OH (1,03 g; 5,12 mmol; fra eksempel A(i) ovenfor) oppløst i acetonitril (50 ml) og DMAP (1,57 g, 12,8 mmol) ble tilsatt til den resulterende oppløsning. H-Pig(Z) x 2 HCI (1,86 g, 5,12 mmol; fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i internasjonal patentsøknad WO 94/29336) i DMF (20 ml) og EDC (1,47 g; 7,68 mmol) ble deretter tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 20 timer. Reaksjonsblandingen ble så konsentrert, fortynnet med CH2C12(100 ml) og ble vasket med H20 (2 x 30 ml). Det organiske laget ble tørket (MgSOij) og inndampet. Råproduktet (3,77 g) ble renset ved flashkromatografi på en silisiumdioksydgelkolonne eluert med CHzC^MeOH (95:5) og dette ga 1,24 g (51 %) av tittelforbindelsen.

'H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 7,27-7,43 (m, 5H), 5,12 (s, 2H), 4,60-4,67 (t, 1H), 4,16-4,26 (d, 2H), 3,86-3,95 (m, 1H), 3,74-3,82 (m, 1H), 3,11-3,30 (m, 2H), 2,78-2,89 (m, 2H), 2,33-2,52 (bs, 2H), 1,71-1,83 (m, 3H), 1,44 (s, 9H), 1,15-1,29 (m, 2H).

(ii) H-Aze-Pig(Z) x 2 HCI

Boc-Aze-Pig(Z) (1,2 g; 2,53 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i etylacetat mettet med HCI (75 ml) ble omrørt ved romtemperatur i 1 time. Reaksjonsblandingen ble inndampet, fortynnet med vann og ekstrahert med toluen. Vannlaget ble frysetørket og dette ga 1,085 g (96 %) av tittelforbindelsen.

<!>H NMR (500 MHz; CD3OD); 5 7,32-7,46 (m, 5H), 5,28 (s, 2H), 4,99-5,05 (t, 1H), 4,08-4,16 (m, 1H), 3,91-3,99 (m, 3H), 3,13-3,25 (m, 4H), 2,79-2,88 (m, 1H), 2,47-2,57 (m, 1H), 1,82-1,96 (m, 3H), 1,26-1,40 (m, 2H).

Eksempel D

(R,S)-Ph-CH(CH2OTBDMS)-C(0)-Pro-OH

(i) (R,S)-Ph-CH(CH2OTBDMS)-C(0)OTBDMS

(R,S)-tropinsyre (6,6 g; 0,040 mol) ble oppløst i DMF (20 ml). Imidazol (13,0 g; 0,192 mol) og TBDMS-C1 (14,4 g; 0,096 mol) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 4 dager. H20 (0,5 1) ble tilsatt og blandingen ekstrahert tre ganger med eter. Det kombinerte organiske laget ble vasket med sitronsyre/vandig (10 %), H20, NaHC03/vandig og H20, tørket (Na2SC«4) og inndampet. Råproduktet (16 g) ble benyttet i den neste reaksjonen uten ytterligere rensing.

<!>H NMR (500 MHz; CDC13); 8 7,17-7,40 (m, 5H), 4,16-4,23 (m, 1H), 3,77-3,87 (m, 2H), 0,88-0,92 (m, 18H), 0,02-0,29 (m, 12H).

(ii) (R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(0)OH

En blanding av (R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(0)OTBDMS (16,0 g; 0,040 mol; fra trinn (i) ovenfor), K2C03(14,0 g; 0,10 mol), MeOH (400 ml) og H20 (150 ml) ble omrørt ved romtemperatur natten over. Etter konsentrasjon ble vannlaget ekstrahert med eter. pH-verdien ble justert med sitronsyre og vannlaget ble på nytt ekstrahert med eter, tre ganger. Det kombinerte organiske laget ble vasket med H20, tørket og inndampet og dette ga 9,7 g (87 %) av tittelforbindelsen.

'H NMR (300 MHz; CDC13); 8 7,20-7,40 (m, 5H), 4,05-4,20 (m, 1H), 3,75-3,90 (m, 2H), 0,85 (s, 9H), 0,00-0,10 (m, 6H).

(iii) (R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(0)-Pro-OBn

EDC (fri base; 1,45 ml, 8,4 mmol) ble tilsatt ved romtemperatur til en blanding av (R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(0)OH (2,01 g, 7,2 mmol; fra trinn (ii) ovenfor), prolin-benzylesterhydroklorid (1,85 g; 7,6 mmol) og DMAP (1,41 g, 11,5 mmol) i acetonitril (20 ml). Etter 18 timer ble oppløsningsmidlet fjernet i vakuum og råproduktet ble flashkromatografert på silisiumdioksydgel ved bruk av etylacetat:toluen (2:1) som elueringsmiddel og dette ga 2,7 g (80 %) av produktet.

(iv) (R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(0)-Pro-OH

(R,S)-Ph(CH(CH2OTDMS)-C(0)-Pro-OBn (2,6 g; 5,56 mmol; fra trinn (iii) ovenfor) ble oppløst i etanol (100 ml) og Pd/C (10 %; 0,29 g) ble tilsatt. Blandingen ble hydrogenert ved atomsfæretrykk i 3 timer. Etter filtrering ble oppløsningen inndampet. Utbytte av tittelforbindelsen var 1,7 g (81 %).

'H NMR (300 MHz; CDCU); 5 7,15-7,40 (m, 5H), 4,45-4,65 (m, 1H), 4,15-4,30 (m, 1H), 3,85-3,95 (m, 1H), 3,55-3,80 (m, 2H), 3,25-3,40 (m, 1H), 2,30-2,40 (m, 1H), 1,75-2,10 (m, 3H), 0,75-0,90 (m, 9H), -0,20-0,05 (m, 6H).

,<3>C NMR (75,5 MHz; CDCI3) amidin- og karbonylkarboner: 174,00, 172,63.

Eksempel E

(R,S}-3-hydroksy-2-(3-metoksyfenyl)-propionsyre

(i) (R,S)-3-hydroksy-2-(3-metoksyfenyl)-propionsyreetylester

Til en oppløsning av 3-okso-2-(3-metoksyfenyl)-propionsyretylester (0,067 g; 0,3 mmol; fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Org. Chem. 54, 3831 (1989)) i

etanol ble NaBH4(2 ekvivalenter) tilsatt ved -70°C. Etter omrøring i 2 timer ved -70°C og 4 timer ved -5°C ble vann tilsatt og reaksjonsblandingen ble konsentret og ekstrahert med etylacetat. Den organiske fasen ble vasket med saltoppløsning, tørket (MgSO,») og konsentrert hvilket ga tittelforbindelsen.

(ii) (R,S)-3-hydroksy-2-(3-metoksyfenyI)-propionsyre

(R,S)-3-hydroksy-2-(3-metoksyfenyl)-propionsyreetylester fra trinn (i) ovenfor ble oppløst i THF:vann (1:1). LiOH x H2O (2 ekvivalenter) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt i 1 time ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble konsentrert og ekstrahert med CH2CI2. Den organiske fasen ble tørket (MgSC^) og konsentrert hvilket ga 3-hydroksy-2-(3-metoksyfenyl)-propionsyre som ble benyttet i det etter-følgende trinn uten ytterligere rensing.

LC-MS m/z 195 (M -1)'

'H NMR (400 MHz; CD3OD); 5 6,73-6,79 (m, 1H), 6,34-6,46 (m, 3H), 3,57-3,66 (m, 1H), 3,30 (s, 3H), 3,22-3,29 (m, 2H).

Eksempel F

(R,S)-3-hydroksy-2-(3,4-dimetoksyfenyi)-propionsyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel E ovenfor ved å starte med 3-okso-2-(3,4-dimetoksyfenyl)-propionsyreetylester.

LC-MS m/z 225 (M -1)-

'H NMR (400 MHz; CD3OD); 5 6,84-6,95 (m, 3H), 4,01-4,10 (m, 1H), 3,81 (s, 3-H), 3,79 (s, 3H), 3,65-3,73 (m, 2H).

Eksempel G

(R,S)-3-hydroksy-2-(2-naftyl)-propionsyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel E ovenfor ved å starte med 3-okso-2-(2-naftyl)-propionsyreetylester.

LC-MS m/z 215 (M -1)"

'H NMR (400 MHz; CD3OD); 5 7,77-7,85 (m, 4H), 7,41-7,50 (m, 3H), 4,14-4,22 (m, 1H), 3,89-3,95 (m, 1H), 3,80-3,87 (m, 1H).

Eksempel H

(R,S)-3-hydroksy-2-(3,5-dimetyIfenyl)-propionsyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel E ovenfor ved å starte med 3-okso-2-(3,5-dimetylfenyl)-propionsyreetylester.

'H NMR (400 MHz; CDC13); 5 6,94 (s, 1H), 6,89 (s, 2H); 4,13 (dd, 1H); 3,80 (m, 2H), 2,4(s,6H).

Eksempel I

(R,S)-3-hydroksy-2-(3-trifluormetylfenyl)-propionsyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel E ovenfor ved å starte med 3-okso-2-(3-trifluormetylfenyl)-propionsyreetylester.

LC-MS m/z 233 (M-l)-

Eksempel J

(R,S)-3-hydroksy-2-(3-hydroksyfenyl)-propionsyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel E ovenfor ved å starte med 3-okso-2-(3-hydroksyfenyl)-propionsyreetylester.

LC-MS m/z 181 (M-1)"

Eksempel K

(R,S)-3-hydroksy-2-(3-fluorfenyl)-propionsyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel E ovenfor ved å starte med 3-okso-2-(3-fluorfenyl)-propionsyreetylester.

LC-MS m/z 183 (M -1)'; FAB-MS m/z 185 (M + 1)<+>

Eksempel L

(R,S)-3-hydroksy-2-(3-kIorfenyl)-propionsyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel E ovenfor ved å starte med 3-okso-2-(3-klorfenyl)-propionsyreetylester.

<l>H NMR (300 MHz; CDC13); 5 7,34-7,30 (m, 3H); 7,21 (dt, 1H); 5,67 (b, 2H); 4,15 (dd, 1H); 3,87 (m, 2H).

Eksempel M

(R,S)-3-hydroksy-2-(3,5-bis(trifluormetyl)fenyl)-propionsyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel E ovenfor ved å starte med 3-okso-2-(3,5-bis(trifluormetyl)fenyl)-propionsyreetylester.

LC-MS m/z 301 (M-l)"

Eksempel N

3-hydroksy-2-(3-metoksy-5-metylfenyl)-propionsyre

(i) 3-brommetyl-5-metylanisol

En blanding av 3,5-metylanisol (13,6 g; 0,1 mol), NBS (17,8 g, 0,1 mol) og AIBN (1,1 g; 6,7 mmol) i CCU ble tilbakeløpskokt i 2 timer. Den resulterende blanding ble avkjølt, filtrert og inndampet. Råproduktet inneholdende ca 20 % utgangsmateriale, ble benyttet i det neste trinnet.

'H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 6,82 (s, 1H); 6,77 (s, 1H); 6,68 (s, 1H); 4,47 (s, 2H), 3,82 (s, 3H); 2,37 (s, 3H).

(ii) 3-metoksy-5-metyIfenylacetonitril

Til en oppløsning av 3-brommetyl-5-metylanisol (17 g; 0,008 mol; fra trinn (i) ovenfor) i DMSO (25 ml) ble det tilsatt NaCN (8,2 g; 0,16 mol). Blandingen, som ble meget varm ved tilsetningen av cyanidet, ble hensatt til avkjøling til romtemperatur i løpet av 1 time. CH3CN (25 ml) ble deretter tilsatt og blandingen tilbakeløpskokt i 1 time. Reaksjonsblandingen ble konsentrert, vann (200 ml) ble tilsatt og den resulterende oppløsning ble ekstrahert tre ganger med eter. Den kombinerte organiske fasen ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og konsentrert hvilket ga 9 g (70 %) av undertittelproduktet som en gul olje, som ble benyttet uten ytterligere rensing i det neste trinnet.

<]>H NMR (300 MHz; CDC13); 8 6,74 (s, 1H); 6,67 (2s, 2H); 3,79 (s, 3H); 3,68 (s, 2H); 2,33 (s, 3H)

(iii) 3-metoksy-5-metylfenyleddiksyre

En oppløsning av 3-metoksy-5-metylfenylacetonitril (9 g; 0,06 mol; fra trinn (ii) ovenfor) og KOH (17 g; 0,3 mol) i 150 ml vann:i-PrOH (2:1) ble oppvarmet under omrøring i en autoklav ved 120°C natten over og deretter ved romtemperatur i 2 dager. Reaksjonsblandingen ble konsentrert og ekstrahert med eter. Den vandige fasen ble surgjort og ekstrahert to ganger med eter. De kombinerte organiske lagene ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet til en rest som ble oppløst i EtOH, behandlet med aktivert karbon, filtrert og inndampet hvilket ga undertittelforbindelsen (8,1 g; 80 %) som gule krystaller.

'H NMR (300 MHz; CDCI3); 8 6,68 (s, 1H); 6,63 (s, 2H); 3,78 (s, 3H); 3,58 (s, 2H); 2,31 (s, 3H)

(iv) Ety]-3-metoksy-5-metylfenlacetat

Til en oppløsning av 3-metoksy-5-metylfenyleddiksyre (8,1 g; 0,045 mol; fra trinn (iii) ovenfor) i EtOH (100 ml) ble det tilsatt H2S04(kons) og oppløsningen ble hensatt i 40 timer. Reaksjonsblandingen ble konsentrert og råproduktet ble skilt mellom vann og eter. Det organiske laget ble vasket med NaHC03/vandig og vann, tørket (Na2S04) og inndampet og dette ga 8,0 g (85 %) av undertittelforbindelsen som en brun olje.

'H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 6,71 (s, 1H); 6,65 (s, 1H); 6,64 (s, 1H); 4,16 (q, 2H); 3,79 (s, 3H); 3,55 (s, 2H); 2,23 (s, 3H); 1,27 (t, 3H).

(v) Etyl-3-okso-2-(3-metoksy-5-metylfenyl)propionat

En oppløsning av 3-metoksy-5-metylfenylacetat (3,0 g; 14 mmol; fra trinn (iv) ovenfor) og etylformiat (1,9 g; 26 mmol) i eter (75 ml) ble Na (0,39 g; 17 mmol) tilsatt i små klumper. Oppløsningen ble avkjølt til 0°C og EtOH (abs; 0,24 ml) ble deretter tilsatt. Til den resulterende oppslemming ble det tilsatt eter (100 ml), EtOH (5 ml) og vann inntil oppslemmingen var oppløst. Den vandige fasen ble oppsamlet, surgjort til pH 2 (HCl/vandig) og ekstrahert med eter. Den organiske fasen ble vasket med NaHC03/ vandig, tørket (Na2S04) og inndampet og dette ga 2 g (59 %) av undertittelforbindelsen.

'H NMR (400 MHz; CDC13); 8 12,12 (d, 0,5H); 7,31 (d, 0,5 H); 6,62 (bs, 2H); 4,26 (q, 2H); 3,80 (s, 3H); 2,35 (s, 3H); 1,33 (t, 3H)

(vi) Etyl-3-hydroksy-2-(3-metoksy-5-metylfenyl)-propionat

En omrørt oppløsning av etyl-3-okso-2-(3-metoksy-5-metylfenyl)propionat (1,9 g; 8,1 mmol; fra trinn (v) ovenfor) i MeOH (50 ml) ble avkjølt til -15°C. NaBH4(0,61 g; 16 mmol) ble deretter tilsatt i porsjoner. Blandingen ble omrørt i 3 timer ved -15 til -5°C. Vann ble deretter tilsatt og den resulterende blanding konsentrert. Den vandige fasen ble ekstrahert med EtOAc, den organiske fasen ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet hvilket ga 2,0 g (59 %) av undertittelforbindelsen.

<l>H NMR (300 MHz; CDC13); 8 6,65 (s, 1H); 6,63 (s, 1H); 6,58 (s, 1H); 4,3-4,05 (m, 3H); 3,8 (m, 5H); 2,30 (s, 3H); 1,32 (t, 3H)

(vii) 3-hydroksy-2-(3-metoksy-5-metylfenyl)-propionsyre

En oppløsning av etyl 3-hydroksy-2-(3-metoksy-5-metylfenyl)-propionat (1,7 g; 7,1 mmol; fra trinn (vi) ovenfor) og NaOH (7,0 g, 180 mmol) i 200 ml MeOH:H20 (1:1) ble omrørt ved romtemperatur i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter konsentrert, vasket med eter og surgjort. Den resulterende blanding ble ekstrahert to ganger med eter, og de kombinerte organiske lagene ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet og dette ga 1,47 g (98 %).

'H NMR (300 MHz; CDC13); 8 7,60 (s, 1H); 6,66 (s, 1H); 6,65 (s, 1H); 4,12 (dd, 1H); 3,85-3,75 (m, 2H); 3,75 (s, 3H); 2,32 (s, 3H)

Eksempel O

(R,S)-3-hydroksy-2-(2,5-dimetoksyfenyl)propionsyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel E ovenfor ved å starte med 3-okso-2-(2,5-dimetoksyfenyl)propionsyreetylester.

'H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 6,89 (d, 1H); 6,85 (d, 1H); 6,78 (dd, 1H); 4,86 (bred, 2H); 4,14 (dd, 1H); 3,89 (dd, 1H); 3,78 (s, 3H); 3,72 (s, 3H); 3,67 (dd, 1H)

Eksempel P

(R,S)-3-hydroksy-2-(2,3-dimetoksyfenyI)propionsyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel E ovenfor ved å starte med 3-okso-2-(3,5-dimetoksyfenyl)propionsyreetylester.

'H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 6,44 (s, 2H); 6,40 (s, 1H); 4,13 (dd, 1H); 3,85-3,75 (m, 2H); 3,75 (s, 6H).

Eksempel Q

(R,S)-3-hydroksy-2-(3,4-metylendioksyfenyl)propionsyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel E ovenfor ved å starte med 3-okso-2-(3,4-metylendioksyfenyl)propionsyreetylester.

<]>H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 6,78 (s, 1H); 6,73 (s, 2H); 5,95 (s, 2H); 4,08 (dd, 1H); 3,78 (m, 2H).

Eksempel R

(R,S)-3-hydroksy-2-(l-naftyl)propionsyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel E ovenfor ved å starte med 3-okso-2-( 1 -naftyl)propionsyreetylester.

LC-MS m/z 215 (M-1)"

Eksempel S

(R,S)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OTBDMS)COOH

(i) (R,S)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OTBDMS)COOTBDMS

Imidazol (6,7 g; 97,8 mmol) og TBDMS-C1 (7,4 g; 48,9 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av (R,S)-3-hydroksy-2-(3-metoksyfenyl)-propionsyre (4 g; 20,4 mmol; fra eksempel E(ii) ovenfor) i DMF (20 ml). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 3 dager. Vann (0,5 1) ble deretter tilsatt og blandingen ble ekstrahert tre ganger med eter. De kombinerte organiske fasene ble vasket med sitronsyre (10 %), vann, NaHCCVvandig og vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Råproduktet (8,53 g;

98 % av en gul olje) ble benyttet i det neste trinnet uten ytterligere rensing.

'H NMR (400 MHz; CDC13); 5 7,22 (t, 1H); 6,90 (d, 1H); 6,88 (m, 1H); 6,81 (m, 1H); 4,16 (t, 1H); 3,80 (s, 3H); 3,82-3,72 (m, 2H); 0,88 (s, 6H); 0,87 (s, 6H); 0,22 (d, 6H); 0,02 (d, 6H)

(ii) (R,S)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OTBDMS)COOH

En blanding av (R,S)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OTBDMS)COOTBDMS (8,0 g; 18,8 mmol); K2C03(6,25 g; 45,2 mmol), MeOH (120 ml) og H20 (40 ml) ble omrørt ved romtemperatur natten over. Etter konsentrering ble det vandige laget vasket med eter, surgjort med sitronsyre og ekstrahert tre ganger med eter. De kombinerte organiske fasene ble vasket med H20, tørket (Na2SC»4) og inndampet og dette ga 5,0 g (87 %) av undertittelforbindelsen som en gul olje.

Eksempel O

(R,S)-3-hydroksy-2-(2,5-dimetoksyfenyl)propionsyre

'H NMR (400 MHz; CDC13); 5 7,21 (t, 1H); 6,89 (s+d, 2H); 6,82 (m, 1H); 4,86 (b, 2H); 4,13 (dd, 1H); 3,76 (s, 3H); 3,8-3,7 (m, 2H); 0,86 (s, 9H); 0,02 (d, 6H)

Eksempel T

(R,S)-3-hydroksy-2-(3-Boc-aminofenyl)propionsyre

(i) 3-aminofenyleddiksyreetyIester

En oppløsning av m-aminobenzosyre (3,0 g; 19,8 mmol) og H2SO4(kons; 2 ml) i EtOH (abs; 20 ml) ble oppvarmet i 3 dager ved 75°C. Oppløsningen ble konsentrert, vandig Na2C03ble tilsatt, og blandingen ble ekstrahert med eter (80 ml). Det organiske laget ble vasket med saltoppløsning, tørket (Na2S04) og konsentrert hvilket ga 2,9 g (82 %) av undertittelforbindelsen.

Eksempel O

(R,S)-3-hydroksy-2-(2,5-dimetoksyfenyl)propionsyre

'H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 7,10 (t, 1H); 6,77 (d, 1H); 6,62 (t, 1H); 6,58 (m, 1H); 4,15 (q, 2H); 3,65 (b, 2H); 3,52 (s, 2H); 1,25 (t, 3H).

(ii) 3-(Boc-amino)fenyleddiksyreetylester

En oppløsning av 3-aminofenyleddiksyreetylester (1,9 g; 11 mmol; fra trinn (i) ovenfor) og Boc20 (2,3 g; 11 mmol) i THF (50 ml) ble omrørt ved romtemperatur natten over. Den resulterende blanding ble konsentrert, og HCl/vandig ble tilsatt. Den vandige blandingen ble ekstrahert med etyleter, det organiske laget vasket med vann, tørket (Na2S04) og konsentrert og dette ga 2,5 g (84 %) av undertittelproduktet.

'H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 7,33 (s, 1H); 7,24 (dd, 2H); 6,96 (m, 1H); 6,50 (b, 1H); 4,15 (q, 2H); 3,58 (s, 2H); 1,53 (s, 9H); 1,26 (t, 3H).

(iii) 2-((3-Boc-amino)fenyl)-3-oksopropionsyreetylester

Til en oppløsning av 3-(Boc-amino)fenyleddiksyreetylester (2,4 g; 8,6 mmol; fra trinn (ii) ovenfor) og etylformiat (1,1 g; 15 mmol) i tørr etyleter (60 ml) ble Na (0,34 g; 15 mmol) tilsatt i små biter. Blandingen ble avkjølt på et isbad, hvoretter 0,5 ml av abs. EtOH ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 3 dager. EtyetenEtOH (50:5 ml) ble tilsatt til den således dannede gråfargede oppslemmingen, oppløsningen ble omrørt i en stund og vann ble tilsatt inntil klar, gul oppløsning var dannet. Fasene ble separert og den organiske fasen ble ekstrahert en gang med H2O. Den vandige fasen ble surgjort med 3 % vandig HCI til pH 2, hvorved det ble dannet et hvitt bunnfall. En liten porsjon saltoppløsning ble tilsatt og den vandige blandingen ble ekstrahert med etyleter. Den organiske fasen ble vasket med NaHC03/vandig (10 %), tørket (Na2S04) og inndampet. Undertittelproduktet (1,7 g; 64 %) ble isolert som en klar brunaktig olje, som var ren nok til å kunne benyttes uten ytterligere rensing.

'H NMR (300 MHz; CDCI3); 5 7,4 (m, 3H); 7,0 (m, 1H); 6,6 (b, 1H); 4,3 (m, 2H); 1,5 (s, 9H);l,3(m, 3H)

(iv) (R,S)-3-hydroksy-2-(3-Boc-aminofenyl)propionsyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel E ovenfor ved å starte med 2-((3-Boc-amino)fenyl)-3-oksopropionsyreetylester (fra trinn (iii) ovenfor).

'H NMR (300 MHz; CDCI3); 8 7,25 (m, 3H); 6,95 (d, 1H); 6,55 (b, 1H); 4,15 (m, 2H); 1,50 (s, 9H); 1,20 (t, 3H).

Eksempel U

(R,S)-3-hydroksy-2-(3-(Boc-merylamino)fenyl)propionsyre

(i) 3-(formylamino)fenyleddiksyreetylester

En oppløsning av 3-aminofenyleddiksyreetylester (3,0 g; 0,017 mol; fra eksempel T(i) ovenfor) og maursyre (1,5 g; 0,034 mol) i diisopropyleter (150 ml) ble tilbakeløpskokt med en Dean-Stark-felle natten over. Oppløsningen ble konsentrert til tørrhet, oppløst i eter og vasket med fortynnet HCI for å fjerne gjenværende utgangsmateriale. Tørking (Na2S04) og konsentrasjon ga undertittelforbindelsen (3,1 g; 89 %).

'H NMR (300 MHz; CDCI3); 5 8,65 (d, 1H); 8,40 (b, 1H); 7,45 (m, 1H); 7,25 (m, 1H); 7.05 (m, 2H); 4,15 (m, 2H); 3,55 (s, 2H); 1,20 (m, 3H)

(ii) 3-(metyIamino)fenyleddiksyreetylester

En oppløsning av boran-dimetylsulfidkompleks (2 M i THF; 20 ml) ble tilsatt til en iskald oppløsning av 3-(formylamino)fenyleddiksyreetylester (4,1 g; 0,02 mol; fra trinn (i) ovenfor) i THF (tørr; 100 ml) og reaksjonsblandingen ble omrørt i 1 time. Den resulterende oppløsning ble helt på fortynnet HCI og blandingen hensatt i 15 minutter, hvoretter den ble vasket med eter for å fjerne ureagert materiale. Den vandige opp-løsningen ble gjort alkalisk (NaHCOs) og ekstrahert med eter (3 ganger). De kombinerte organiske fasene ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet og dette ga 3,0 g (78 %) av undertittelforbindelsen.

'H NMR (300 MHz; CDC13); 5 7,10 (t, 1H); 6,60 (d, 1H); 6,50 (m, 2H), 4,10 (q, 2H); 3,50 (s, 2H); 2,80 (s, 3H); 1,20 (t, 3H)

(iii) 3-(N-Boc-metylamino)fenyleddiksyreetylester

En oppløsning av 3-(metylamino)fenyleddiksyreetylester (3,0 g; 0,016 mol; fra trinn (ii) ovenfor) og B0C2O (3,4 g; 0,016 mol) i THF (100 ml) ble omrørt ved romtemperatur i 12 dager. Den resulterende oppløsning ble konsentrert og dette ga undertittelforbindelsen (4,9 g; kvantitativt).

<l>H NMR (300 MHz; CDC13); 5 7,25 (d, 1H); 7,10 (m, 3H); 4,15 (q, 2H); 3,60 (s, 2H), 3,25 (s, 3H); 1,45 (s, 9H); 1,25 (t, 3H)

(iv) 2-((N-Boc-metylamino)fenyl)-3-oksopropionsyreetylester

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel T(iii) ovenfor fra 2-(N-Boc-metylamino)fenyleddiksyreetylester (2,0 g; 6,8 mmol; fra trinn (iii) ovenfor) og dette ga 1.6 g (73 %) undertittelprodukt.

'H NMR (300 MHz; CDCI3); 8 12,15 (d, 0,5H; 7,74 (s, 0,5H); 7,25 (m, 4H); 4,2 (m, 2H); 3,26 (s, 3H); 1,46 (s, 9H); 1,29 (m, 3H)

(v) (R,S)-3-hydroksy-2-(3-Boc-aminofenyl)propionsyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel E ovenfor ved å starte med 2-((N-Boc-metylamino)fenyl)-3-oksopropionsyreetylster (fra trinn (iv) ovenfor.

'H NMR (300 MHz; CDC13); 8 7,25 (ra, 1H); 7,15 (m, 3H); 7,05 (d, 1H); 4,05 (m, 1H); 3,80 (m, 2H); 1,40 (s, 9H)

Eksempel V

(R,S)-3-hydroksy-2-(3-klor-5-metylfenyl)propionsyre

(i) 3-klor-5-metylbenzylbromid

En oppløsning av 5-klor-m-xylen (14,06 g; 0,1 mol), NBS (17,8 g; 0,1 mol) og IABN (1,1 g; 6,7 mmol) i CCU ble tilbakeløpskokt i 2 timer. Den resulterende blanding ble avkjølt og det dannede faste materialet ble fjernet ved filtrering. Konsentrering ga undertittelforbindelsen (17,9 g; 80 %).

'H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 7,20 (s, 1H); 7,11 (s, 1H); 7,09 (s, 1H); 4,41 (s, 2H); 2.34 (s, 3H)

(ii) 3-klor-5-metylfenylacetonitril

En oppløsning av 3-klor-5-metylbenzyIbromid (17,6 g; 0,8 mol; fra trinn (i) ovenfor) og NaCN (8,2 g; 0,16 mol) i DMOS (25 ml) ble fremstilt. Den resulterende, temmelig varme blandingen ble avkjølt noe og deretter omrørt ved romtemperatur i 1 time. CH3CN (25 ml) ble deretter tilsatt og blandingen tilbakeløpskokt i 1 time. Etter avkjøling ble vann (200 ml) tilsatt, og den resulterende oppløsning ble ekstrahert tre ganger med eter. Den kombinerte organiske fasen ble vasket tre ganger med vann, tørket (Na2SC<4) og inndampet og dette ga 16,6 g (80 %) av undertittel råproduktet, som ble benyttet uten ytterligere rensing i det neste trinnet.

<[>H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 7,14 (s, 1H); 7,12 (s, 1H); 7,04 (s, 1H); 3,69 (s, 2H); 2.35 (s, 3H)

(iii) 3-klor-5-metylfenyleddiksyre

En blanding av 3-klor-5-metylfenylacetonitril (13,3 g; fra trinn (ii) ovenfor) og KOH (17 g; 0,3 mol) i 150 ml vann:i-PrOH (2:1) ble oppvarmet under omrøring i en autoklav ved 120°C natten over og deretter ved romtemperatur i 2 dager. Nevnte i-PrOH ble inndampet og resten ble surgjort (6 M HCI) til pH 2 og ekstrahert tre ganger med eter. De kombinerte organiske lagene ble vasket to ganger med vann, tørket (Na2S04), og inndampet og dette ga undertittelforbindelsen (10,4 g; 70 %).

'H NMR (400 MHz; CDC13); 5 7,09 (s, 2H); 6,97 (s, 1H); 3,57 (s, 2H); 2,18 (s, 3H) FAB-MS m/z 366 (M -1)'

(iv) Etyl 3-klor-5-metylfenylacetat

En oppløsning av 3-klor-5-metylfenyleddiksyre (5,0 g; 27,09 mmol; fra trinn (iii) ovenfor) og H2SO4(kons; 0,1 ml) i EtOH (25 ml) ble tilbakeløpskokt natten over. Oppløsningen ble konsentrert og den resulterende blanding behandlet i Na2C03oppløsning (75 ml). Etter ekstraksjon med eter (2 x 75 ml) ble de kombinerte organiske fasene vasket med saltoppløsning, tørket (Na2S04) og inndampet og dette ga 4,92 g (85 %) av undertittelforbindelsen.

<l>H NMR (400 MHz; CDCI3); 6 7,07 (s, 1H); 7,08 (s, 1H); 6,97 (s, 1H); 4,15 (q, 2H); 3,54 (s, 2H); 2,31 (s, 3H); 1,25 (t, 3H)

(v) Etyl 3-okso-2-(3-klor-5-metylfenyl)propionat

Denne forbindelsen ble fremstilt analogt med fremgangsmåten beskrevet i eksempel N(v) ovenfor fra etyl 3-klor-5-metylfenylacetat (4,89 g; 23 mmol; fra trinn (iv) ovenfor), etylformiat (3,3 g; 41,4 mmol) og Na (0,63 g; 27,6 mmol; tilsatt i små biter) i tørr etyleter (50 ml) hvilket ga 3,4 g (61 %) av undertittelforbindelsen som en klar olje som krystalliserte langsomt ved henstand.

<l>H NMR (500 MHz; CDCI3); 5 12,2 (b, 1H); 7,28 (s, 1H); 7,09 (s, 1H); 7,07 (s, 1H); 6,94 (s, IH); 4,30 (q, 2H); 2,33 (s, 3H); 1,30 (t, 3H)

FAB-MS m/z 238, 240 (M-l)"

(vi) (R,S)-3-hydroksy-2-(3-klor-5-metylfenyl)propionsyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel E ovenfor ved å starte med etyl 3-okso-2-(3-klor-5-metylfenyl)propionat (fra trinn (v) ovenfor).

'H NMR (400 MHz; CDC13); 5 7,12 (s, 1H); 7,10 (s, 1H); 6,98 (s, 1H); 4,12 (m, 1H); 3,82 (m, 2H); 2,30 (s, 3H)

Eksempel W

(R,S)-3-hydroksy-2-(3^-dimetoksyfenyl)propionsyre

(i) Etyl 3,5-dimetoksyfenylacetat

En oppløsning av 3,5-dimetoksyfenyleddiksyre (2,0 g; 10 mmol) og H2SO4(kons; 0,2 ml) i EtOH (50 ml) ble tilbakeløpskokt natten over. Oppløsningen ble konsentrert og det resulterende materialet ble oppløst i vandig NaOH (1 M). Etter ekstraksjon med eter (2 x 75 ml), vasking av den kombinerte fasen med saltoppløsning, tørking (Na2S04) og inndampning ble 2,0 g (88 %) av undertittelforbindelsen oppnådd.

'H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 6,46 (d, 2H); 6,38 (t, 1H); 4,17 (q, 2H); 3,71 (s, 6H); 3,55 (s, 2H); 1,27 (t, 3H)

(ii) 2-(3,5-dimetoksyfenyl)-3-oksopropionsyreetylester

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Org. Chem. 54, 3831 (1989) fra etyl 3,5-dimetoksyfenylacetat (2,0 g; 8,9 mmol; fra trinn (i) ovenfor) hvilket ga 3,4 g (61 %) av undertittelproduktet som en klar olje, som krystalliserte langsomt ved henstand. Produktet var rent nok til å kunne benyttes uten ytterligere rensing i det neste trinnet.

'H NMR (500 MHz; CDCI3); 8 7,25 (m, 1H); 6,40 (m, 3H); 4,27 (q, 2H); 3,75 (s, 6H); 1,30 (t, 3H)

(iii) (R,S)-3-hydroksy-2-(3,5-dimetoksyfenyl)propionsyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i ovenfor i eksempel E ved å starte med 3-okso-2-(3,5-dimetoksyfenyl)propionsyreetylester (fra trinn (ii) ovenfor)<]>H NMR (300 MHz; CDCI3); 8 6,44 (s, 2H); 6,39 (s, 1H); 4,12 (m, 1H); 3,76 (m, 8H)

Eksempel X

(R,S)-3-hydroksy-2-(2-klor-5-(Boc-amino)fenyl)propionsyre (i) 2-klor-5-(Boc-amino)benzylalkohol

Til en iskald oppløsning av 5-amino-2-klorbenzosyre (9,0 g; 33 mmol) i THF:DMF (200 ml, 1:1) ble TEA (4,0 g; 40 mmol) tilsatt, fulgt av isobutylklorformiat (5,4 g; 40 mmol; tilsatt dråpevis). Blandingen ble deretter omrørt i ytterligere 30 minutter, det dannede hvite bunnfallet ble fjernet ved filtrering, filtratet ble avkjølt til -15°C, og NaBH4(3,8 g; 100 mmol) og vann (20 ml) ble tilsatt. Etter 15 minutter ble vann (200 ml) tilsatt og oppløsningen omrørt ved romtemperatur i 1 time. Etter inndampning ble resten oppløst i MeOH. Filtrering og konsentrering ga råproduktet som ble renset ved flashkromatografi (Si-gel, CH2Cl2:MeOH (9:1)) hvilket resulterte i 7,4 g (87 %) av undertittelforbindelsen.

'H NMR (500 MHz; CDCI3); 5 7,48 (s, 1H); 7,27 (m, 2H); 6,58 (s, 1H); 4,74 (d, 2H); 1,52 (s, 9H)

(ii) 2-klor-5-(Boc-amio)benzylmesylat

Til en iskavkjølt oppløsning av 2-klor-5-(Boc-amino)benzylaIkohol (7,4 g; 29 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i CH2C12(100 ml) ble TEA (2,9 g; 29 mmol) tilsatt, fulgt av MsCl (3,3 g, 29 mmol; tilsatt dråpevis). Etter omrøring i 2 timer ble den resulterende blandingen helt på vann. Det organiske laget ble separert, vasket med vann, tørket (Na2SC<4) og konsentrert og dette ga 10 g (100 %) av undertittelforbindelsen.

'H NMR (300 MHz; CDCI3); 8 7,50 (m, 1H); 7,40 (m, 1H); 7,32 (s, 1H); 6,55 (b, 1H); 5,27 (s, 2H); 3,05 (s, 3H); 1,50 (s, 9H).

(iii) (2-klor-5-(Boc-amino)fenyl)acetonitril

Til en omrørt oppløsning av 2-klor-5-(Boc-amino)benzylmesylat (fra trinn (ii) ovenfor) i DMSO ble NaCN (2,9 g; 60 mmol) og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur natten over. Blandingen ble helt i vann (300 ml) og vannsuspensjonen ble ekstrahert med eter (4 x 50 ml). De kombinerte organiske lagene ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og konsentert. Etter flashkromatografi (Si-gel; heptan:EtOAc (8:2)), ble 5,2 g (65 %) av undertittelforbindelsen oppnådd.

<]>H NMR (300 MHz; CDC13); 8 7,52 (d, 1H); 7,35 (m, 2H); 6,50 (b, 1H); 3,80 (s, 2H); 1,50 (s, 9H)

(iv) (2-klor-5-(Boc-amino)fenyl)eddiksyre

Til en oppløsning av (2-klor-5-(Boc-amino)fenyl)acetonitril (5,2 g; 20 mmol; fra trinn (iii) ovenfor) i vann:i-PrOH (37 ml; 2:1) ble KOH (5 g; 89 mmol) og oppløsningen ble tilbakeløpskokt natten over. Blandingen ble deretter konsentrert, vann:THF (50 ml; 1:1) og Boc20 ble tilsatt, og blandingen ble omrørt natten over. Nevnte THF ble inndampet, vannfasen ble vasket med eter (1 x 50 ml), surgjort med HCI (fortynnet) og ekstrahert med EtOAc (3 x 30 ml). De kombinerte organiske lagene ble vasket med vann, tørket (Na2SC<4) og konsentrert og dette ga 2,8 g (50 %) av undertittelforbindelsen.

'H NMR (300 MHz; CDCI3); 8 7,40 (b, 1H); 7,26 (s, 1H); 7,21 (d, 1H); 6,55 (b, 1H); 3,77 )s, 2H); 1,50 (s, 9H)

(v) Etyl (2-kIor-5-(Boc-amino)fenyl)acetat

Til en oppløsning av (2-klor-5-(Boc-amino)fenyl)eddiksyre (2,8 g; 9,8 mmol; fra trinn (iv) ovenfor) i aceton (100 ml) ble K2C03(2,1 g, 15 mmol) tilsatt. Etl (70,6 g; 150 mmol) ble deretter tilsatt mens reaksjonsblandingen ble omrørt og tilbakeløpskokt. Oppløsningen ble konsentrert og den resulterende blanding ble skilt mellom eter og vann (1:1; 60 ml). Det organiske laget ble separert og vannlaget ble ekstrahert en gang med eter (30 ml). Den kombinerte organiske fasen ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og konsentrert og dette ga 3,0 g (98 %) av undertittelforbindelsen.

'H NMR (300 MHz; CDC13); 8 7,35 (b, 1H); 7,25 (s, 1H); 7,20 (d, 1H); 6,52 (b, 1H); 4,15 (q, 2H); 3,70 (s, 2H); 1,50 (s, 9H); 1,25 (t, 3H)

(vi) 2-(2-klor-5-(Boc-amino)fenyl)-3-oksopropionsyreetylester

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Org. Chem. 54,3831 (1989) fra etyl (2-klor-5-(Boc-amino)fenyl)acetat (3,0 g; 9,6 mmol; fra trinn (v) ovenfor) hvilket ga 1,6 g (49 %) av undertittelproduktet som en klar brunaktig olje, som var ren nok til å kunne benyttes videre uten rensing.

<]>H NMR (300 MHz; MeOD); 6 8,98 (b, 0,5H); 7,89 (s, 0,5H); 7,25 (m, 3H); 4,88 (s, 2H); 4,15 (q, 2H); 1,45 (s, 9H); 1,20 (t, 3H)

(vii) (R,S)-3-hydroksy-2-(2-klor-5-(Boc-amino)fenyl)propionsyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet ovenfor i eksempel E fra 2-(2-klor-5-(Boc-amino)fenyl)-3-oksopropionsyreetylester (fra trinn (vi) ovenfor)

<J>H NMR (300 MHz; CDC13); 8 7,25 (m, 4H); 6,70 (b, 1H); 4,37 (m, 1H); 4,15 (b, 1H);

4,05 (t, 1H); 3,90 (d, 1H); 1,50 (s, 9H)

Eksempel Y

(R,S)-3-hydroksy-2-(3-metylfenyl)propionsyre

(i) 2-(3-mety]fenyl)-3-oksopropionsyreetylester

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Org. Chem. 54, 3831 (1989) ved å starte fra etyl 3-metylfenylacetat (3,0 g; 17 mmol), og dette ga 2,5 g (72 %) av undertittelforbindelsen som var ren nok til å kunne brukes uten ytterligere rensing i det neste trinnet.

<J>H NMR (300 MHz; CDCU); 8 7,25 (m, 2H); 7,05 (m, 3H); 4,30 (q, 2H); 2,40 (q, 2H);

1,30 (t, 3H)

(ii) (R,S)-3-hydroksy-2-(3-metylfenyl)propionsyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel E ovenfor fra 3-okso-2-(3-metyI-fenyl)propionsyreetylester (fra trinn (i) ovenfor) og dette ga 1,6 g (80 %) av tittelforbindelsen.

'H NMR (300 MHz; CDC13); S 7,20 (rn, 1H); 7,05 (m, 3H); 4,12 (t, 1H); 3,80 (m, 2H); 2.32 (s, 3H)

Eksempel Z

(R,S)-3-hydroksy-2-(2,5-dimetyIfenyl)propionsyre

(i) Etyl (2,S-dimetylfenyl)acetat

En oppløsning av (2,5-dimetylfenyl)eddiksyre (3,0 g; 18,3 mmol) og H2SO4(kons; 0,1 ml) i EtOH (40 ml) ble tilbakeløpskokt i 6 dager. Oppløsningen ble konsentrert, eter (40 ml) ble tilsatt og den resulterende blanding ble vasket med Na2C03oppløsning (2 x 25 ml) og vann (1 x 25 ml). Den organiske fasen ble tørket (MgS04) og inndampet hvilket ga 2,94 g (84 %) av undertittelforbindelsen som en klar fargeløs væske. Renhet 97 %.

'H NMR (400 MHz; CDC13); 8 7,08 (d, 1H); 7,02 (d, 1H); 7,00 (s, 1H); 4,17 (q, 2H); 3,61 (s, 2H); 2,33 (s, 3H); 2,29 (s, 3H); 1,28 (t, 3H)

(ii) 2-(2,5-dimetylfenyl)-3-oksopropionsyreetylester

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Org. Chem. 54, 3831 (1989) ved å starte fra etyl (2,5-dimetylfenyl)acetat (2,92 g; 15 mmol; fra trinn (i) ovenfor) og dette ga 2,89 g (86 %) av undertittelproduktet som en brungul olje.

'H NMR (400 MHz; CDC13); 5 12,00 (d, 1H); 7,10 (m, 2H); 6,92 (s, 1H); 4,25 (b, 2H); 2.33 (s, 3H); 2,18 (s, 3H); 1,25 (t, 3H)

(iii) (R,S)-3-hydroksy-2-(2,5-dimety!fenyl)propionsyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet ovenfor i eksempel E fra 3-okso-2-(2,5-dimetylfenyl)propionsyreetylester (2,87 g; 13 mmol; fra trinn (ii) ovenfor) og dette ga 1,37 g (55 %) av tittelproduktet som et hvitt pulver.

'H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 7,10 (d, 1H); 7,01 (d, 1H); 7,00 (s, 1H); 4,14 (m, 2H); 3,73 (q, 1H); 2,37 (s, 3H); 2,29 (s, 3H)

Eksempel AA

2-(4-benzyloksy-3-metylfenyl)-3-hydroksypropionsyre

(i) Benzyl 4-benzyloksy-3-metoksyfenylacetat

CS2CO3(17,88 g; 54,9 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av homovanillinsyre (2,0 g; 11 mmol) i CH3CN, hvoretter BnBr (4,3 g; 24,15 mmol) ble tilsatt dråpevis i løpet av 10 minutter. Blandingen ble tilbakeløpskokt natten over, filtrert gjennom Hyflo og konsentrert. Den resulterende blanding ble oppløst i EtOAc (100 ml), vann (30 ml) ble tilsatt, og det vandige laget ble separert. Den organiske fasen ble vasket med sitronsyre-oppløsning (5 %, 1 x 20 ml) og saltoppløsning, tørket (Na2S04) og inndampet og dette ga 4,25 g (kvantitativt) av undertittelforbindelsen.

'H NMR (300 MHz; CDC13); 8 7,43 (d, 2H); 7,34 (m, 8H); 6,82 (d, 2H); 6,74 (dd, 1H); 5,33 (s, 4H); 3,84 (s, 3H); 3,59 (s, 2H)

(ii) Etyl 2-(4-benzyloksy-3-metoksyfenyl)-3-oksopropionat

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Org. Chem. 54,3831 (1989) fra benzyl 4-benzyloksy-3-metoksyfenylacetat (4,12 g; 11,4 mmol; fra trinn (i) ovenfor) hvilket ga 1,4 g (31,5 %) av undertittelproduktet.

LC-MS m/z 327 (M - IV

'H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 12,03 (d, 1H); 7,44 (d, 2H); 7,30 (m, 5H); 6,85 (d, 2H); 6,72 (dd, 1H); 5,15 (s, 2H); 4,27 (q, 2H); 3,88 (s, 3H); 1,30 (t, 3H)

(iii) Etyl 2-(4-benzyloksy-3-metoksyfenyl)-3-hydroksypropionat

En oppløsning av etyl 2-(4-benzyloksy-3-metoksyfenyl)-3-oksopropionat (1,356 g; 3,47 mmol; fra trinn (ii) ovenfor) i MeOH:CH2Cl2(3:1,20 ml) ble avkjølt til -15 til -5°C, og NaBHt(0,264 g; 6,95 mmol) ble tilsatt i porsjoner. Den avkjølte reaksjonsblandingen ble omrørt, hvoretter den fikk nå romtemperatur. Vann ble tilsatt og blandingen ble delvis konsentrert. Etter ekstraksjon med EtOAc (2 x 25 ml), vasking av den organiske fasen med saltoppløsning, tørking (Na2S04) og inndamping ble 1,32 g (97,1 %) av undertittelforbindelsen oppnådd.

'H NMR (400 MHz; CDCI3); 5 7,42 (d, 2H); 7,32 (m, 4H); 6,82 (m, 2H); 6,74 (dd, 1H); 5,13 (s, 2H); 4,15 (m, 3H); 3,88 (s, 3H); 3,78 (m, 2H); 1,23 (t, 3H)

(iv) 2-(4-benzyloksy-3-metoksyfenyl)-3-hydroksypropionsyre

Til en oppløsning av etyl 2-(4-benzyloksy-3-metoksyfenyl)-3-hydroksypropionat (1,29 g; 3,29 mmol; fra trin (iii) ovenfor) i THF (12,5 ml) ble det tilsatt en oppløsning av LiOH (0,273 g; 6,75 mmol) i H20 (5 ml), og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 2.5 timer. Den resulterende blanding ble delvis konsentrert, vann (25 ml) ble tilsatt, og blandingen ble vasket med to porsjoner CH2CI2, surgjort med HCl/vandig (2 M), og ekstrahert med tre porsjoner CH2CI2. De kombinerte organiske lagene ble vasket med saltoppløsning, tørket (Na2SC>4) og inndampet og dette ga 10,55 g (kvantitativt) av et gult pulver. Renhet 83,2 %.

'H NMR (400 MHz; CDC13); 8 7,41 (d, 2H); 7,32 (m, 4H); 6,94 (d, 2H); 6,82 (dd, 1H); 5.06 (s, 2H); 4,04 (m, 1H); 3,83 (s, 3H); 3,70 (m, 2H)

Eksempel AB

(R,S)-3-hydroksy-2-(3,5-dikIorfenyl)propionsyre

(i) 3,5-diklorbenzylalkohol

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel X(i) ovenfor fra 3,5-diklor-benzosyre (15,3 g; 80 mmol), TEA (8,9 g; 88 mmol), i-Bu klorformiat (12 g, 88 mmol) og NaBH»(9,0 g; 240 mmol), og dette ga 10,5 g (74 %) av undertittelforbindelsen.

'H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 7,27 (t, 1H); 7,28 (d, 2H); 4,68 (s, 2H)

(ii) 3,5-diklorfenylacetonitril

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel X(ii) og X(iii) ovenfor fra 3,5-diklorbenzylalkohol (10,3 g; 58 mmol; fra trinn (i) ovenfor), TEA (6,5 g; 64 mmol) og MsCl (7,0 g, 61 mmol) og dette ga 9,6 g (89 %) av undertittelforbindelsen.

'H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 7,27 (m, 3H); 3,74 (s, 2H)

(iii) 3,5-diklorfenyleddiksyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel X(iv) ovenfor fra 3,5-diklorfenylacetonitril (9,6 g; 52 mmol; fra trinn (ii) ovenfor) og KOH (12,3 g; 220 mmol) hvilket ga 7,6 g (72 %) av undertittelforbindelsen.

'H NMR (400 MHz; CDC13); 5 7,31 (t, 1H); 7,20 (d, 2H); 3,63 (s, 2H)

(iv) Etyl 3,5-diklorfenylacetat

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel T(ii) ovenfor fra 3,5-diklorfenyleddiksyre (7,5 g; 37 mmol; fra trinn (iii) ovenfor) og H2SO4(kons; 0,1 ml) og dette ga 3,0 g (35 %) av undertittelforbindelsen.

<*>H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 7,28 (t, 1H); 7,18 (d, 2H); 4,17 (q, 2H); 3,56 (s, 2H); 1,27 (t, 3H).

(v) 2-(3,5-(diklorfenyl)-3-oksopropionsyreetylester

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Org. Chem. 54, 3831 (1989) ovenfor fra etyl 3,5-diklorfenylacetat (3,0 g; 12,9 mmol; fra trinn (iv) ovenfor) hvilket ga undertittelproduktet (3,0 g; 89 %) som en klar olje, som var ren nok til å kunne brukes videre uten rensing i det neste trinnet.

'H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 12,20 (d, 1H); 7,29 (t, 1H); 7,23 (d, 2H); 4,32 (q, 2H); 1,33 (t, 3H)

(vi) (R,S)-3-hydroksy-2-(3,5-diklorfenyl)propionsyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel E ovenfor fra 2-(3,5-diklorfenyl)-3-oksopropionsyreetylester (fra trinn (v) ovenfor).

'H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 7,34 (t, 1H); 7,24 (d, 2H); 4,12 (dd, 1H); 3,91 (dd, 1H); 3,84 (dd, 1H)

Eksempel AC

(R,S)-3-hydroksy-2-(2,3-dimetoksyfenyl)propionsyre

(i) Etyl 2,3-dimetoksyfenylacetat

Til en oppløsning 2,3-dimetoksyfenyleddiksyre (2,52 g; 12,8 mmol) i EtOH (abs; 20 ml) ble H2SO4(30 ul) tilsatt og oppløsningen ble tilbakeløpskokt i 20 timer. Den resulterende oppløsning ble konsentrert, oppløst i eter og eteroppløsningen ble vasket med NaHCOs/ vandig (2 x 30 ml) og saltoppløsning, tørket (MgS04) og konsentrert og dette ga undertittelforbindelsen.

'H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 6,99 (m, 1H); 6,83 (m, 2H); 4,16 (q, 2H); 3,85 (s, 3H); 3,82 (s, 3H); 3,65 (s, 2H); 1,25 (t, 3H)

(ii) 2-(2,3-dimetoksyfenyl)-3-oksopropionsyreetylester

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Org. Chem. 54,3831 (1989) fra etyl 2,3-dimetyloksyfenylacetat (2,14 g; 9,5 mmol; fra trinn (i) ovenfor) og dette ga undertittelproduktet (1,53 g; 64 %) som en klar grønngul olje, som var ren nok for videre bruk uten rensing i det neste trinnet.

'H NMR (400 MHz; CDC13); 8 12,00 (d, 1H); 7,19 (d, 1H); 7,05 (m, 2H); 6,91 (m, 2H); 6,74 (dd, 1H); 4,24 (q, 2H); 3,87 (s, 3H); 3,74 (s, 3H); 1,24 (t, 3H)

(iii) (R,S)-3-hydroksy-2-(2,3-dimetoksyfenyl)propionsyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel E ovenfor fra 2-(2,3-dimetoksy-fenyl)-3-oksopropionsyreetylester (fra trinn (ii) ovenfor).

LC-MS m/z 225 (M- IV

<]>H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 7,05 (t, 1H); 6,87 (dd, 1H); 6,82 (dd, 1H); 4,15 (m, 3H); 3,85 (s, 6H); 3,75 (m, 1H)

Eksempel AD

(R,S)-3-hydroksy-2-(3-metoksy-5-klorfenyl)propionsyre

(i) 3-metoksy-5-klorbenzaldehyd

3,5-dikloranisol (1,1 g; 6,8 mmol) ble tilsatt i porsjoner til magnesiumspon (0,20 g; 8,2 mmol) i THF (tørr, 20 ml). Etter den første tilsetningen ble EtBr (0,1 ml) tilsatt for å starte reaksjonen. Etter fullstendig tilsetning ble reaksjonsblandingen omrørt ved 60°C natten over hvoretter blandingen ble avkjølt til 0°C, og DMF ble tilsatt. Etter omrøring i 1 time ble blandingen helt på HCl/vandig, konsentrert, og ekstrahert med eter (3 x 50 ml). Den kombinerte organiske fasen ble vasket med vann, tørket (Na2S04), og konsentrert, og dette ga 2,35 g av undertittelforbindelsen.

'H NMR (300 MHz; CDCI3); 5 9,91 (s, 1H); 7,43 (t, 1H), 7,28 (t, 1H); 7,15 (t, 1H); 3,87

(s,3H)

(ii) 3-metoksy-5-klorfenylacetaldehyd

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet av P. Weierstahl et al i Liebigs Ann. 1389

(1995) ved å starte fira 3-metoksy-5-klorbenzaldehyd (2,35 g; 13,8 mmol; fra trinn (i) ovenfor) hvilket ga 2,0 g (ca 54 %) av undertittelforbindelsen.

<l>H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 9,71 (t, 1H); 6,84 (t, 1H); 6,81 (t, 1H); 6,64 (t, 1H); 3,79 (s, 3H); 3,62 (s, 2H)

(iii) (3-metoksy-4-klorfenyl)eddiksyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet av S.E. de Laszlo og P.G. Willard i J. Am. Chem. Soc. 107, 199 (1985) fra 3-metoksy-5-klorfenylacetaldehyd (102 mg; 0,55 mmol; fra trinn (ii) ovenfor) hvilket ga 37 mg (33,6 %) av undertittelforbindelsen.

LC-MS m/z 199 (M -1)"

'H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 6,82 (t, 1H); 6,75 (t, 1H); 6,62 (t, 1H); 3,72 (s, 3H); 3,50

(s,2H)

(iv) Etyl (3-metoksy-5-klorfenyl)acetat

En oppløsning av 3-metoksy-5-klorfenyl)eddiksyre (0,983 g; 4,9 mmol; fra trinn (iii) ovenfor) og H2SO4(kons 0,1 ml) i EtOH (25 ml) ble tilbakeløpskokt natten over. Den resulterende blanding ble konsentrert og Na2C03/vandig (75 ml) ble tilsatt. Blandingen ble ekstrahert med eter (2 x 75 ml), de kombinerte organiske lagene ble vasket med saltoppløsning, tørket (Na2S04) og konsentrert hvilket ga 0,989 g (88,3 %) av undertittelforbindelsen som en brun olje.

<]>H NMR (500 MHz; CDCI3); 8 6,88 (t, 1H); 6,81 (t, 1H); 6,72 (t, 1H); 4,16 (q, 2H); 3,79 (s, 3H); 3,54 (s, 2H); 1,26 (t, 4H)

(v) 2-(3-metoksy-5-klorfenyl)-3-oksopropionsyreetylester

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Org. Chem. 43, 3831 (1989) ved å starte fra etyl (3-metoksy-5-klorfenyl)acetat (0,989 g; 4,33 mmol; fra trinn (iv) ovenfor) hvilket ga 0,347 g (31,3 %) av undertittelproduktet som var rent nok for videre bruk uten rensing.

<]>H NMR (500 MHz; CDCI3); 8 12,15 (b, 1H); 7,31 (s, 1H); 6,86 (t, 1H); 6,82 (t, 1H); 6,70 (t, 1H); 4,30 (q, 2H); 3,80 (s, 3H); 1,31 (t, 3H)

(vi) (R,S)-3-hydroksy-2-(3-metoksy-5-klorfenyl)propionsyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel E ovenfor ved å starte med 2-(3-metoksy-5-klorfenyl)-3-oksopropionsyreetylester (fra trinn (v) ovenfor).

'H NMR (500 MHz; CDC13); 8 6,89 (t, 1H); 6,84 (t, 1H); 6,74 (t, 1H); 4,12 (dd, 1H); 3,83 (m, 2H); 3,79 (s, 3H)

Eksempel AE

(R,S)-3-hydroksy 2-(2-metyl-5-metoksyfenyl)propionsyre

(i) 2-(2-brom-5-metoksyfenyl)-l,3-dioksolan

Til en oppløsning av 2-brom-5-metoksybenzaldehyd (5,0 g, 23,2 mmol) i toluen (300 ml) ble det tilsatt etandiol (2,16 g; 34,2 mmol) og p-TsOH (20 mg), hvoretter

blandingen ble tilbakeløpskokt i 12 timer. Den resulterende blanding ble avkjølt til romtemperatur, vasket med NaHCCtyvandig, tørket (Na2S04) og konsentrert og dette ga 5,918 g (98 %) av undertittelforbindelsen.

<!>H NMR (500 MHz; CDC13); 8 7,44 (d, 1H); 7,16 (d, 1H); 6,78 (dd, 1H); 6,04 (s, 1H);

4,12 (m, 4H); 3,80 (s, 3H)

(ii) 2-(2-metyl-5-metoksyfenyl)-l ,3-dioksolan

En oppløsning av 2-(2-brom-5-metoksyfenyl)-l,3-dioksolan (5,44 g; 21 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i THF (tørr, 60 ml) ble avkjølt til -78°C under en nitrogenatmosfære, og n-BuLi (1,4 M; 19,5 ml) ble tilsatt dråpevis via en sprøyte. Etter tilsetning ble oppløsningen omrørt ved -78°C i 35 minutter, hvoretter Mel (13,41 g; 94,5 mmol) ble tilsatt. Den resulterende blanding ble langsomt omrørt for oppnåelse av romtemperatur, og deretter tilsatt NtLiCl/vandig og ekstrahert med eter. Den organiske fasen ble tørket (Na2SC>4) og konsentrert hvilket ga 4,25 g (kvantitativt) av undertittelforbindelsen som en brun olje.

'H NMR (500 MHz; CDCI3); 8 7,12 (d, 1H); 7,08 (d, 1H); 6,81 (dd, 1H); 5,93 (s, 1H);

4,10 (m, 4H); 3,80 (s, 3H); 2,35 (s, 3H)

(iii) 2-metyl-5-metoksybenzaldehyd

En oppløsning av 2-(2-metyl-5-metoksyfenyl)-l,3-dioksolan (4,2 g; 21,6 mmol; fra trinn (ii) ovenfor) i en blanding av THF (60 ml) og HCl/vandig (5 %; 30 ml) ble omrørt natten over ved romtemperatur. Oppløsningen ble konsentrert og blandingen ekstrahert med eter. Den organiske fasen ble tørket (Na2S04) og konsentrert og dette ga 2,956 g (91 %) av en mørkebrun væske.

<]>H NMR (400 MHz; CDCI3); 5 10,28 (s, 1H); 7,33 (d, 1H); 7,16 (d, 1H); 7,04 (dd, 1H); 3,84 (s, 3H); 2,60 (s, 3H)

(iv) Etyl (2-metyl-5-metoksy)acetat

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel AD(ii) til AD(iv) ovenfor fra 2-metyl-5-metoksybenzaldehyd (fra trinn (iii) ovenfor) hvilket ga 1,18 g (30 % over 3 trinn) undertittelprodukt.

'H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 7,08 (d, 1H); 6,77 (d, 1H); 6,73 (dd, 1H); 4,16 (q, 2H); 3,78 (s, 3H); 3,59 (s, 2H); 2,24 (s, 2H); 1,26 (t, 3H)

(v) 2-(2-metyl-5-metoksyfenyl)-3-oksopropionsyreetylester

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Org. Chem. 54, 3831 (1989) ved å starte fra etyl-2-metyl-5-metoksyacetat (1,16 g; 5,57 mmol; fra trinn (iv) ovenfor), hvilket ga 0,745 g (57 %) av undertittelproduktet, som var rent nok for videre bruk uten rensing.

<!>H NMR (500 MHz; CDCI3); 6 11,97 (d, 1H); 7,14 (d, 1H); 7,10 (d, 1H); 6,67 (dd, 1H); 4,24 (q, 2H); 3,78 (s, 3H); 2,14 (s, 2H); 1,23 (t, 3H)

(vi) (R,S)-3-hydroksy 2-(2-metyl-5-metoksyfenyl)propionsyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet ovenfor i eksempel E fra 2-(2-metyl-5-metoksyfenyl)-3-oksopropionsyreetylester (fra trinn (v) ovenfor).

<!>H NMR (400 MHz; MeOD); 8 7,09 (d, 1H); 6,84 (d, 1H); 6,72 (dd, 1H); 4,03 (m, 2H); 3,73 (s, 3H); 3,64 (dd, 1H); 2,32 (s, 2H)

Eksempel AF

(i) Tropinsyremerylester

Til en oppløsning av tropinsyre (5,0 g, 30 mmol) i toluen:CH2Cl2(150 ml) ble DBU (4,6 g; 30 mmol) tilsatt, fulgt av Mel (4,3 g; 30 mmol). Blandingen ble omrørt natten over, vann ble tilsatt og fasene ble gitt anledning til å skille seg. Vannfasen ble ekstrahert med eter og den kombinerte organiske fasen ble vasket med NaHC03/vandig, HCl/vandig og vann, tørket (Na2S04) og konsentrert og dette ga 0,95 g (18 %) av undertittelforbindelsen.

<l>R NMR (300 MHz; CDC13); 8 7,25 (m, 5H), 4,25 (m, 1H); 3,88 (m, 2H); 3,73 (s, 3H)

(ii) 2-meryl-2-fenyl-3-metoksypropionsyremetylester

Til en kald oppløsning av tropinsyremetylester (0,9 g; 5,0 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i DMF (10 ml) ble NaH (0,87 g; 20 mmol) tilsatt, og den resulterende blanding ble omrørt i 15 minutter, hvoretter Mel (2,8 g; 20 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble omrørt ved romtemperatur natten over. Blandingen ble helt på vann (200 ml) og den resulterende suspensjon ble ekstrahert med eter (4 x 25 ml). Den kombinerte organiske fasen ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og konsentrert og dette ga 0,70 g (ca 65 %) av råmaterialet som ble benyttet uten videre rensing i det neste trinnet.

'H NMR (300 MHz; CDCI3); 8 7,25 (m, 5H); 4,00 (d, 1H); 3,67 (s, 3H); 3,60 (d, 1H); 3,35 (s, 3H); 1,67 (s, 3H).

(iii) (R,S)-2-metyl-2-fenyl-3-metoksypropionsyre

Til en oppløsning av 2-metyl-2-fenyl-3-metoksypropionsyremetylester (0,7 g; 3,4 mmol; fra trinn (ii) ovenfor) i MeOH (50 ml) ble NaOH/vandig (2 M; 50 ml) tilsatt, og blandingen ble omrørt i 2 timer. Blandingen ble surgjort med HCl/vandig og ekstrahert med eter (3 x 50 ml). Den kombinerte organiske fasen ble vasket med vann, tørket (Na2S04), og konsentrert og dette ga 0,40 g (ca 61 %) av undertittelforbindelsen.

'H NMR (300 MHz; CDCI3); 8 7,35 (m, 5H); 4,00 (d, 1H); 3,60 (d, 1H); 3,40 (s, 3H); 1,66 (s, 3H)

Eksempel AG

(R,S)-3-hydroksy-2-(2-klor-3-metylfenyl)propionsyre

(i) 2-klor-3-metylbenzosyre

Natriurnnitritt (14,0 g; 0,2 mol) ble tilsatt til en oppløsning av 2-amino-3-metylbenzo-syre (30,2 g; 0,2 mol) i en blanding av vann (200 ml) og NaOH/vandig (30 %; 24 ml). Oppløsningen ble avkjølt til 0°C og ble tilsatt dråpevis under omrøring til en blanding av HCI (kons; 87,6 ml) og is (100 g). etter omrøring i noen minutter ble den resulterende oppløsningen tilsatt til en iskald blanding av HCl/vandig (23 %; 100 g); CuCl (209 g; 0,2 mol) og vann (40 ml). Oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur i 30 minutter og ved 100°C i 30 minutter, avkjølt og det resulterende bunnfall ble isolert ved filtrering, ble vasket med vann, og ble tørket natten over hvilket ga 27,4 g (80,3 %) av et hvitt krystallinsk materiale.

LC-MS m/z 169,171 (M- I<V>

'H NMR (500 MHz; CDC13); 8 7,79 (d, 1H); 7,43 (d, 1H); 7,25 (t, 1H); 2,46 (s, 3H)

(ii) 2-klor-3-metylbenzylalkohol

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel X(i) ovenfor fra 2-klor-3-metyl-benzosyre (13,65 g; 0,08 mol; fra trinn (i) ovenfor), og dette ga 11,38 g (90,8 %) av undertittelforbindelsen som hvite krystaller.

'H NMR (500 MHz; CDC13); 8 7,32 (d, 1H); 7,31 (d, 1H); 7,18 (dd, 1H); 4,78 (d, 2H); 2.40 (s, 3H)

(iii) 2-klor-3-metylfenylacetonitril

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel X(ii) og X(iii) ovenfor fra 2-kIor-3-metylalkohol (11,3 g; 72,15 mmol; fra trinn (ii) ovenfor), hvilket ga 11,4 g (93 %) av undertittelforbindelsen som et rødbrunt fast stoff.

<]>H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 7,35 (d, 1H); 7,24 (t, 1H); 7,21 (d, 1H); 3,84 (s, 2H); 2.41 (s, 3H)

(iv) Etyl 2-klor-3-metylfenylacetat

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel T(ii) 2-klor-3-metylfenylaceto-nitril (5,28 g; 32 mmol; fra trinn (iii) ovenfor), hvilket ga 6,3 g (88,2 %) av undertittelforbindelsen.

<X>U NMR (400 MHz; CDCI3); S 7,12 (d, 2H); 7,16 (dd, 1H); 4,17 (q, 2H); 3,77 (s, 2H); 2,39 (s, 3H); 1,26 (t, 3H)

(v) 2-(2-klor-3-metylfenyl)-3-oksopropionsyreetyIester

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Org. Chem. 54, 3831 (1989) fra etyl 2-klor-3-metylfenylacetat (6,28 g; 29,53 mmol; fra trinn (iv) ovenfor) og dette ga 5,418 g (76,2 %) av undertittelproduktet. Produktet var rent nok til å kunne benyttes uten videre rensing i det neste trinnet.

LC-MS m/z 239, 241 (M-l)"

<l>H NMR (500 MHz; CDC13); 6 11,96 (b, 1H); 7,21 (d, 1H); 7,14 (m, 1H); 7,03 (d, 1H); 4,25 (m, 2H); 2,41 (s, 3H); 1,23 (t, 3H)

(vi) (R,S)-3-hydroksy-2-(2-klor-3-metylfenyl)propionsyre

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet ovenfor i eksempel E fra 2-(2-klor-3-metylfenyl)-3-oksopropionsyreetylester (5,39 g; 22,39 mmol; fra trinn (v) ovenfor), hvilket ga 4,03 g (79,8 %) av undertittelforbindlsen.

<l>H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 7,25 (d, 1H); 7,21 (m, 1H); 7,16 (d, 1H); 4,36 (dd, 1H); 4,02 (dd, 1H); 3,74 (dd, 1H); 2,38 (s, 3H)

Forbindelser ifølge oppfinnelsen

Eksempel 1

(R)- og (S)-PhCH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab x HCI

(i) (R)- og (S)-PhCH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab(Z)

En blanding av (R,S)-tropinsyre (0,25 g, 1,5 mmol), H-Aze-Pab(Z) x 2 HCI (0,73 g; 1,7 mmol; fra eksempel A ovenfor) og TBTU (0,53 g; 1,7 mmol) i 10 ml DMF ble avkjølt på et isbad. DIPEA (0,78 g; 6,0 mmol) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 48 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter konsentrert, fortynnet med 400 ml vann (pH justert til 8 med NaHCOa) og ekstrahert med etylacetat (3 x 75 ml). Det kombinerte organiske laget ble vasket med NaHC03/vandig (3 x 50 ml) og vann (1 x 50 ml), tørket (Na2S04) og inndampet. Råproduktet (0,59 g) ble renset ved flashkromatografi på en silisiumdioksydgelkolonne (120 g) og eluert med CH2C12(300 ml), CH2C12:THF (500 ml; 3:1) og THF (1750 ml). Fraksjoner av 20 ml ble oppsamlet. Fraksjoner 41-54 ble konsentrert hvilket ga 150 mg av forbindelse IA med et diastereomert forhold på >99:1. Fraksjoner 70-90 ble konsentrert hvilket ga forbindelse IB med et diastereomert forhold på 89:11

Forbindelse IA:

'H NMR (400 MHz; CDC13); 8 8,27 (m, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,38 (d, 2H); 7,3-7,1 (m, 10H), 5,49 (d, 1H); 5,15 (s, 2H); 7,43 (m, 1H); 4,4-4,2 (m, 2H); 4,10 (m, 1H); 4,02 (m, 1H); 3,71 (m, 1H); 3,63 (m, 2H); 2,34 (m, 1H); 2,23 (m, 1H).

<13>C NMR (100 MHz; CDC13) amidin- og karbonylkarboner: 173,7,171,0, 168,5,164,4.

Forbindelse IB

'H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 8,27 (m, 1H, minor diastereomer/rotamer), 8,14 (m, 1H, major diastereomer/rotamer), 7,9-7,7 (m, 2H), 7,5-7,1 (m, 12H); 5,56 (d, 1H), 5,22 (s, 2H, major diastereomer/rotamer) 5,20 (s, 2H, minor diastereomer/rotamer), 4,89 (m, 1H, major diastereomer/rotamer), 482 (m, 1H, minor diastereomer/rotamer), 4,6-4,3 (m, 2H); 4,2-4,0 (m, 2H), 3,8-3,6 (m, 3H), 2,48 (m, 1H), 2,38 (m, 1H)

<I3>C NMR (100 MHz; CDC13), amidin- og karbonylkarboner: 174,8,170,8,168,0,164,7.

(ii) (R)- eller (S)-PhCH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab x HCI

Forbindelse IA (100 mg; 0,19 mmol; fra trinn (i) ovenfor9 ble oppløst i 10 ml etanol og 5 % Pd/C (52 mg) ble tilsatt. Blandingen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i 5 timer. Etter filtrering og inndamping ble produktet oppløst i 5 ml vann og 190 ul HCI (IM) ble tilsatt. Etter frysetørking ble tittelproduktet oppnådd som et hvitt pulver. Utbyttet var 60 mg (74 %), diastereomert forhold 99:1.

'H NMR (400 MHz; D20); 8 8,75 (m, 1H, major rotamer), 8,59 (m, 1H, minor rotamer), 7,69 (d, 2H, major rotamer), 7,63 (d, 2H, minor rotamer), 7,5-7,0 (m, 7H), 5,10 (m, 1H; andre signaler fra det samme protonet overlappende med HDO-signalet), 4,47 (bs, 1H); 4,27 (m, 1H, major rotamer), 4,17 (1H, minor rotamer), 4,1-3,6 (m, 5H); 2,67 (m, 1H, minor rotamer); 2,40 (m, 1H, major rotamer); 2,3-2,1 (m, 1H).

<13>C NMR (75 MHz; D20) amidin- og karbonylkarboner (rotamerer): 177,4, 176,4, 175,3, 174,8, 160,0, 157,6.

(iii) (S)- eller (R)-PhCHCH2OH-C(0)-Aze-Pab x HCI

Tittelforbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten i eksempel l(ii) fra 50 mg (0,097 mmol) av forbindelse IB (fra trinn (i) ovenfor). Utbyttet var 32 mg (79 %), diastereomert forhold 83:17.

'H NMR (400 MHz; D20); 5 7,8-7,0 (m, 9H); 5,10 (m, 1H, minor diastereomer/ rotamer), 4,83 (m, 1H, major diasteromer/rotamer); 4,6-4,2 (m, 3H), 4,1-3,4 (m, 4H); 2,54 (m, 1H, major diastereomer/rotamer), 2,39 (m, 1H, minor diastereomer/rotamer), 2,2-2,1 (m, 1H)

<13>C NMR (75 MHz; D20) amidin- og karbonylkarboner: 176,6,174,9,168,9

Eksempel 2

(R)- og (S)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0>Aze-Pab x HOAc (i) ( R)- og (S)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab(Z)

Til en oppløsning av (R,S)-3-hydroksy-2-(3-metoksyfenyl)-propionsyre (0,157 g; 0,8 mmol; fra eksempel E ovenfor) i DMF (10 ml) ble H-Aze-Pab(Z) x 2 HCI (0,387 g; 0,88 mmol; fra eksempel A ovenfor) tilsatt og blandingen ble avkjølt på et isbad. TBTU (0,283 g; 0,88 mmol) og DIPEA (0,414 g; 3,20 mmol) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 48 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter inndampet og resten oppløst i H20 (100 ml) fulgt av ekstraksjon med etylacetat (3 x 25 ml). Det kombinerte organiske laget ble vasket med vandig NaHC03(3 x 25 ml) og H20 (25 ml), tørket (Na2S04) og inndampet. Råproduktet ble renset ved flashkromatografi på en silisumdioksydgelkolonne eluert med CH2Cl2:MeOH (98:2), etylacetat, etylacetat:EtOH (95:5), etylacetat:EtOH (9:1) og etylacetat:EtOH (85:15). Noen fraksjoner ble konsentrert hvilket ga 177 mg av forbindelse 2A med et diastereomert forhold på 88:12. Andre fraksjoner ble konsentrert til oppnåelse av 164 mg av forbindelse 2B med et diastereomert forhold på 88:12.

Forbindelse 2A:

<]>H NMR (500 MHz; CDC13); 5 8,20-8,27 (m, NH), 7,79-7,85 (m, 2H), 7,18-7,48 (m, 8H); 6,70-6,88 (m, 3H); 5,20-5,24 (m, 2H); 4,84-4,99 (m, 1H); 4,34-4,64 (m, 2H); 3,98-4,16 (m, 2H); 3,56-3,82 (m, 6H); 2,26-2,70 (m, 2H).

Forbindelse 2B:

<]>H NMR (500 MHz; CDCI3); 5 8,14-8,21 (m, NH), 7,8-7,88 (m, 2H), 7,18-7,48 (m, 8H); 6,70-6,87 (m, 3H); 5,20-5,24 (m, 2H), 4,86-5,00 (m, 1H); 4,34-4,64 (m, 2H), 4,00-4,16 (m, 2H); 3,58-3,82 (m, 6H); 2,39-2,69 (m, 2H).

(ii) (R)- eller (S)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Til en oppløsning av forbindelse 2A (0,164 g; 0,30 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i etanol (7 ml) ble det tilsatt eddiksyre (0,018 g; 0,30 mmol) og Pd/C (5 %; 0,08 g). Reaksjonsblandingen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i 4 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom celitt og filtratet konsentrert. Råproduktet ble oppløst i H20 og fryse-tørket hvilket ga 128 mg (91 %) av tittelforbindelsen, diastereomert forhold 88:12.

LC-MS m/z 411 (M+ 1)+

'H NMR (500 MHz; D20); 5 7,67-7,85 (m, 2H); 7,25-7,62 (m, 3H); 6,89-7,04 (m, 2H); 6,74-6,83 (m, 1H); 5,16-5,22 (m, IH); 4,24-4,66 (m, 2H), 3,97-4,19 (m, 3H); 3,64-3,94 (m, 5H); 2,18-2,82 (m, 2H)

(iii) (S)- eller (R)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Til en oppløsning av forbindelse 2B (0,142 g; 0,26 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i etanol (7 ml) ble eddiksyre (0,016 g; 0,26 mmol) og Pd/C (5 %; 0,07 g) tilsatt. Reaksjonsblandingen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i 4 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom celitt og filtratet konsentrert. Råproduktet ble oppløst i H20 og fryse-tørket hvilket ga 113 mg (92 %) av tittelforbindelsen, diastereomert forhold 88:12.

LC-MS 411 (M+l)+

<]>H NMR (500 MHz; D20); 8 7,26-7,86 (m, 5H); 6,88-7,04 (m, 2H); 6,75-6,83 (m, 1H); 4,91-4,96 (m, 1H); 4,26-4,68 (m, 3H); 3,96-4,18 (m, 2H); 3,64-3,94 (m, 5H); 2,18-2,70

(m,2H)

Eksempel 3

(R,S)-3,4-dimetoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab x HOAc (i) (R,S)-3,4-dimet0ksyfenyl-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

En blanding av (R,S)-3-hydroksy-2-(3,4-dimetoksyfenyl)propionsyre (0,23 g; 1,0 mmol; fra eksempel F ovenfor), H-Aze-Pab(Z) x 2 HCI (0,48 g; 1,1 mmol; fra eksempel A ovenfor) og TBTU (0,35 g; 1,1 mmol) i DMF (10 ml) ble avkjølt på et isbad. DIPEA (0,52 g; 4,0 mmol) ble tilsatt og reaksjonsblandingen omrørt ved romtemperatur i 4 dager. Reaksjonsblandingen ble deretter konsentrert. Resten ble fortynnet med etylacetat: H20 (1:2; 300 ml) og pH-verdien justert til 9 med vandig NaHC03fulgt av en ekstraksjon med etylacetat (3 x 100 ml). Det kombinerte organiske laget ble vasket med vandig NaHC03(3 x 100 ml) og H20 (3 x 125 ml), tørket (Na2S04) og inndampet. Råproduktet (0,43 g) ble renset ved flashkromatografi på en silisiumdioksydgelkolonne (50 g), eluering med etylacetat (200 ml), etylacetat:EtOH (95;5; 200 ml), etylacetat: EtOH (9:1; 200 ml) og etylacetat:EtOH (85:15; 200 ml). Utbyttet var 244 mg (42 %) av tittelforbindelsen, diastereomert forhold 52:48.

FAB-MS m/z 575 (M+ 1)<+>

<*>H NMR (400 MHz; CDC13); 5 8,18,-8,26 (m, 1H); 8,00-8,08 (m, 1H); 7,76-7,84 (d, 1H); 7,63-7,68 (d, 1H); 7,25-7,47 (m, 6H); 7,02-7,07 (d, 1H); 6,64-6,84 (m, 3H); 5,20 (s, 2H); 4,82-5,00 (m, 1H); 4,40-4,79 (m, 2H); 3,98-4,24 (m, 2H); 3,84-3,87 (m, 6H); 3,53-3,82 (m, 3H); 2,26-2,69 (m, 2H).

(ii) (R,S)-3,4-dimetoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab x HOAc

(R,S)-3,4-dimetoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab(Z) (0,095 g; 0,17 mmol; fra trinn (i) ovenfor), eddiksyre (0,010 g, 0,17 mmol) og Pd/C (5 %, 0,087 g) ble tilsatt til etanol (10 ml) og den resulterende blanding ble hydrogenert med atmosfæretrykk i 5 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert og filtratet inndampet. Resten ble oppløst i H20 og frysetørket og dette ga 70 mg (85 %) av tittelforbindelsen som et hvitt pulver. Diastereomert forhold 52:48.

LC-MS m/z 441 (M+l)<+>

'H NMR (400 MHz; D20) 5: 7,29-7,85 (m, 4H); 6,85-7,09 (m, 2H); 6,71-6,81 (m, 1H); 4,90-5,19 (m, 1H); 4,31-4,65 (m, 2H); 3,95-4,28 (m, 3H); 2,63-3,90 (m, 8H); 2,15-2,84

(m,2H)

Eksempel 4

(R)- og (S)-2-naftyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab x HOAc

(i) (R)- og (S)-2-natfyI-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab(Z)

En oppløsning av H-Aze-Pab(Z) x 2 HCI (0,483 g; 1,1 mmol; fra eksempel A ovenfor) i DMF (10 ml) ble avkjølt på et isbad. (R,S)-3-hydroksy-2-(2-naftyl)-propionsyre (0,216 g; 1,0 mmol; fra eksempel G ovenfor), TBTU (0,353 g; 1,1 mmol) og DIPEA (0,517 g; 4,0 mmol) ble tilsatt og blandingen omrørt ved romtemperatur i 3 dager. Reaksjonsblandingen ble deretter inndampet og resten oppløst i en blanding av etylacetafcH^O fulgt av en ekstraksjon med etylacetat (2 x 75 ml). Det kombinerte organiske laget ble vasket med vannfri NaHC03(3 x 30 ml) og H20 (25 ml) tørket (Na2S04) og inndampet. Råproduktet ble renset ved flashkromatografi på en silisiumdioksydgelkolonne eluert med etylacetat, etylacetat:EtOH (95:5) og etylacetat:EtOH (9:1). Noen fraksjoner ble konsentrert og dette ga 204 mg (36 %) av forbindelse 4A med et diastereomert forhold på 95:5. Andre fraksjoner ble konsentrert til oppnåelse av 219 mg (36 %) av forbindelse 4B med et diastereomert forhold på 90:10.

Forbindelse 4A:

LC-MS m/z 565 (M + 1)<+>

<!>H NMR (500 MHz; CDC13); 6 8,23-8,31 (t, NH),; 7,20-7,88 (m, 16H); 5,22 (s, 2H); 4,85-4,92 (m, IH); 4,44-4,64 (m, 2H); 4,07-4,24 (m, 2H); 3,64-3,92 (m, 3H); 2,21-2,70

(m, 2H)

Forbindelse 4B:

LC-MS m/z 565 (M + 1)<+>, 587 (M + Na)<+>

lU NMR (500 MHz; CDCI3); 8 8,13-8,21 (t, NH); 7,20-7,90 (m, 16H); 5,24 (s, 2H); 4,95-5,02 (m, 1H); 4,31-4,65 (m, 2H); 4,09-4,24 (m, 2H); 3,62-3,92 (m, 3H), 2,38-2,76 (m, 2H).

(ii) (R)- eller (S)-2-natfyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Til en oppløsning av forbindelse 4A (0,175 g; 0,31 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i etanol (7 ml) ble eddiksyre (0,019 g; 0,31 mmol) og Pd/C (5 %; 0,09 g) tilsatt. Reaksjonsblandingen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i 4 timer og ble deretter filtrert gjennom celitt og filtratet konsentrert. Råproduktet ble oppløst i H20 og frysetørket og dette ga 136 mg (89 %) av tittelforbindelsen, diastereomert forhold 95:5.

LC-MS m/z 431 (M+l)+

<]>H NMR (500 MHz; D20); 8 7,05-8,00 (m, 11H); 5,14-5,22 (m, 1H); 3,60-4,58 (m, 8H); 2,12-2,81 (m, 2H).

(iii) ( S)- eller (R)-2-naftyl-CH(CH20H)-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Til en oppløsning av forbindelse 4B (0,194 g; 0,34 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i etanol (7 ml) ble eddiksyre (0,021 g; 0,34 mmol) og Pd/C (5 %, 0,09 g) tilsatt. Reaksjonsblandingen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i 4 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom celitt og filtratet konsentrert. Råproduktet ble oppløst i H20 og fryse-tørket og dette ga 151 mg (90 %) av tittelforbindelsen, diastereomert forhold 90:10.

LC-MS m/z 431 (M+l)+

'H NMR (500 MHz; D20); 8 7,00-8,00 (m, 11H); 4,92-4,99 (m, 1H); 3,60-4,62 (m, 8H), 2,12-2,83 (m, 2H).

Eksempel 5

(R)- og (S)-PhCH(CH20H)-C(0)-Aze-Pig x HOAc

(i) (R)- eller (S)-PhCH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pig(Z)

En blanding av (R,S)-tropinsyre (0,132 g; 0,8 mmol), H-Aze-Pig(Z) x 2 HCI (0,393 g; 0,88 mmol; fra eksempel C ovenfor) og TBTU (0,283 g; 0,88 mmol) i DMF (10 ml) ble avkjølt på et isbad. DIPEA (0,414 g; 3,20 mmol) ble tilsatt og reaksjonsblandingen omrørt ved romtemperatur i 48 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter konsentrert, fortynnet med H20 (175 ml, pH justert til 8 med NaHCOj) og ekstrahert med etylacetat (3 x 50 ml). Det kombinerte organiske laget ble vasket med vandig NaHC03(3 x 25 ml) og H20 (25 ml), tørket (Na2S04) og inndampet. Råproduktet (0,895 g) ble renset ved flashkromatografi på en silisiumdioksydgelkolonne eluert med CH2CI2, CH2C12:THF (4;1, 1:1,1:4) og CH2Cl2:MeOH (95:5,9;1). Noen fraksjoner ble konsentrert til oppnåelse av 117 mg av en forbindelse med et diastereomert forhold på <99:1.

'H NMR (400 MHz; CDC13); 8 7,88-7,95 (bt, NH), 7,21-7,41 (m, 10H); 7,09 (bs, NH); 5,11 (s, 2H); 4,78-4,80 (m, 1H); 4,00-4,38 (m, 4H); 3,58-3,76 (m, 3H); 3,12-3,34 (m, 2H); 2,76-2,97 (m, 3H); 2,46-2,66 (m, 1H); 2,22-2,35 (m, 1H); 1,66-1,78 (m, 2H); 1,22-1,38 (m, 2H).

(Senere fraksjoner ble konsentrert til oppnåelse av 156 mg av epimeren av forbindelsen ovenfor med et diastereomert forhold på 87:13).

(ii) ( S)- eller (R)-PhCH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pig x HOAc

(R)- eller (S)-PhCH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pig(Z) (0,117 g; 0,22 mmol; den karakteriserte forbindelsen fra trinn (i) ovenfor), eddiksyre (0,013; 0,22 mmol) og Pd/C (5 %; 0,06 g) ble tilsatt til etanol (5 ml) og blandingen hydrogenert ved atmosfæretrykk i 2,5 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom celitt og filtratet ble inndampet. Resten ble oppløst i H2O og frysetørket og dette ga 92 mg (93 %) av tittelforbindelsen, diastereomert forhold <99:1.

'H NMR (400 MHz; D20; komplisert på grunn av tilstedeværelse av diastereomerer/ rotamerer); 8 7,14-7,41 (m, 5H); 4,60-5,06 (m, 1H); 3,64-4,09 (m, 7H); 2,78-3,19 (m, 4H); 2,58-2,71 (m, 1H); 2,34-2,45 (m, 1H); 2,03-2,20 (m, 1H); 0,98-1,77 (m, 4H)

,<3>C NMR (100,5 MHz; D20) amidin- og karboylsignaler 175,95,172,69, 155,85.

Eksempel 6

(R,S)-PhCH(CH2OH)-C(0)-Pro-(R,S)-Hig x HOAc

(i) (R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(0)-Pro-(R,S)-Hig(Z)

EDC x HCI (0,24 g; 1,25 mmol) ble tilsatt til en blanding av (R,S)-PhCH (CH2OTBDMS)-C(0)-Pro-OH (0,38 g; 1,0 mmol; fra eksempel D ovenfor), (R,S)-H-Hig-Z x 2 HCI (0,36 g; 1,0 mmol; fremstilt ved omsetning av Boc-(R,S)-Hig(Z) (se internasjonal patentsøknad WO 94/29336) med gassformig HCI (g) i EtOAc fulgt av inndampning til tørrhet) og DM AP (0,49 g; 4,0 mmol) i acetonitril (10 ml) og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 4 dager. Reaksjonsblandingen ble inndampet og resten ble oppløst i H2O (300 ml; pH justert til 9). Den vandige fasen ble ekstrahert med etylacetat (3x150 ml). Det kombinerte organiske laget ble vasket med vandig NaHC03(2 x 150 ml) og H20 (3 x 150 ml), tørket (Na2S04) og inndampet og dette ga 0,48 g av undertittelforbindelsen som ble benyttet uten ytterligere rensing i det neste trinnet.

(ii) (R,S)-PhCH(CH2OH)-C(0)-Pro-(R,S)-Hig(Z)

(R5S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(0)-Pro-(R,S)-Hig(Z) (0,265 g; 0,41 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i TFA (6,5 ml; 10 % i CH2C12) ble omrørt ved 0°C i 30 minutter. Blandingens pH-verdi ble justert til 9 med vandig K2C03fulgt av en eks tr aksjon med CH2CI2(3 x 75 ml). Det kombinerte organiske laget ble vasket med H20, tørket (Na2S04) og inndampet. Råproduktet (0,24 g) ble renset ved flashkromatografi på en silisiumdioksydgelkolonne (50 g) eluert med CH2C12(200 ml), CH2Cl2:EtOH (95:5; 200 ml) og CH2CI2:EtOH (9:1,400 ml). Utbyttet var 109 mg (50 %) av tittelforbindelsen.

LC-MS m/z 536 (M + 1)<+>

<]>H NMR (400 MHz; CDC13); 6 7,17-7,45 (m, 10H); 5,06-5,15 (m, 2H); 4,46-4,62 (m, 1H); 3,97-4,21 (m, 2H); 3,08-3,91 (m, 8H); 2,80-2,98 (m, 1H); 1,35-2,30 (m, 9H).

<13>C NMR (100,5 MHz; CDC13) amidin- og karbonylsignaler: 172,72, 171,74, 163,77, 159,14.

(iii) (R,S)-PhCH(CH2OH)-C(0)-Pro-(R,S)-Hig x HOAc

En blanding av (R,S)-PhCH(CH2OH)-C(0)-Pro-Hig(Z) (0,11 g; 0,21 mmol; fra trinn (ii) ovenfor), Pd/C (5 %; 0,06 g) og eddiksyre (0,012 g, 0,21 mmol) i EtOH (10 ml) ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i 4 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert og filtratet inndampet. Råproduktet ble oppløst i H20 og frysetørket og dette ga 78 mg (82 %) av tittelforbindelsen.

LC-MS m/z 402 (M + l)<+>

'H NMR (400 MHz; D20); 5 7,15-7,45 (m, 5H); 4,20-4,38 (m, 1H); 3,89-4,14 (m, 2H), 3,67-3,81 (m, 2H); 2,70-3,64 (m, 7H); 1,40-2,37 (m, 9H).

,<3>C NMR (75,5 MHz; D20) amidin og karbonylsignaler: 174,90,173,48,154,84.

Eksempel 7

(R)- og (S)-2,5-dimetoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab x HOAc (i) (R)- og (S)-2^-dimetoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab(Z)

H-Aze-Pab(Z) x 2 HCI (0,387 g; 0,88 mmol) i DMF (10 ml) ble avkjølt på et isbad. 3-hydroksy-2-(2,5-dimetoksyfenyl)-propionsyre (0,181 g; 0,8 mmol), TBTU (0,283 g; 0,88 mmol) og DIPEA (0,414 g; 3,20 mmol) ble tilsatt og reaksjonsblandingen omrørt ved romtemperatur i 4 dager. Reaksjonsblandingen ble deretter inndampet og resten oppløst i en blanding av H20:etylacetat (2:1; 150 ml) fulgt av en ekstraksjon med etylacetat (3 x 25 ml). Det kombinerte organiske laget ble vasket med NaHCOs/vandig (3 x 25 ml) og H20 (25 ml), tørket (Na2S04) og inndampet. Råproduktet (0,43 g) ble renset ved flashkromatografi på en silisiumdioksydgelkolonne eluert med etylacetat, etylacetat:EtOH (99:1), etylacetat:EtOH (97:3) og etylacetat:EtOH (95:5). Noen fraksjoner ble konsentrert til oppnåelse av 165 mg av forbindelse 7A med et diastereomert forhold på <99:1. Andre fraksjoner ble konsentrert til oppnåelse av 185 mg av forbindelse 7B med et diastereomert forhold på 93.7.

Forbindelse 7A:

LC-MS m/z (M + 1)<*>, 597 (M + Na)<+>

<!>H NMR (500 MHz; CDC13); 8 8,26-8,36 (m, NH); 7,80-7,87 (d, 2H); 7,24-7,48 (m, 7H); 6,76-6,85 (m, 3H); 5,22 (s, 2H); 4,83-4,90 (m, 1H); 4,43-4,59 (m, 2H); 3,92-4,18 (m, 3H); 3,80 (s, 3H); 3,75 (s, 3H); 3,58-3,72 (m, 2H); 2,25-2,73 (m, 2H)

Forbindelse 7B:

LC-MS m/z 575 (M + 1)<+>, 597 (M + Na)<+>

'H NMR (500 MHz; CDC13); 8 8,11-8,19 (m, NH), 7,79-7,88 (m, 2H), 7,24-7,48 (m, 7H); 6,68-6,84 (m, 3H); 5,22 (s, 2H); 4,91-4,98 (m, 1H); 4,36-4,67 (m, 2H); 3,99-4,22 (m, 3H); 3,48-3,82 (m, 8H); 2,38-2,95 (m, 2H).

(ii) (R)- eller (S)-2,5-dimetoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Forbindelse 7A (0,141 g; 0,25 mmol; fra trinn (i) ovenfor) ble oppløst i EtOH (7 ml). Eddiksyre (0,015 g; 0,25 mmol) og Pd/C (5 %; 0,07 g) ble tilsatt og blandingen hydrogenert ved atmosfæretrykk i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom celitt og filtratet inndampet. Resten ble oppløst i H20 og frysetørket hvilket ga 113 mg (90 %) av tittelforbindelsen, diastereomert forhold >99:1.

LC-MS m/z 441 (M+l)+

<*>H NMR (400 MHz; D20); S 7,34-7,84 (m, 4H); 6,82-7,14 (m, 3H); 5,06-5,13 (m, 1H); 3,72-4,37 (m, 13H); 2,11-2,86 (m, 2H).

(iii) (R)- eller (S)-2,5-dimetoksyfenyI-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Forbindelse 5B (0,164 g; 0,286 mmol; fra trinn (i) ovenfor) ble oppløst i EtOH (7 ml). Eddiksyre (0,017 g; 0,286 mmol) og Pd/C (5 %; 0,08 g) ble tilsatt og blandingen hydrogenert ved atmosfæretrykk i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom celitt og filtratet inndampet. Resten ble oppløst i H20 og frysetørket og dette ga 130 mg (91 %) av tittelforbindelsen, diastereomert forhold 93:7.

LC-MS m/z 441 (M + 1)<+>

<*>H NMR (400 MHz; D20); 8 7,34-7,86 (m, 4H), 6,78-7,10 (m, 3H); 4,89-4,96 (m, 1H); 3,70-4,68 (m, 13H); 2,16-2,73 (m, 2H).

Eksempel 8

(R,S)-Ph-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab-OH

(i) (R,S)-Ph-CH(CH2OTBDMS)-C(0)-Pro-Pab(Z)

En blanding av (R,S)-Ph-CH(CH2OTBDMS)-C(0)-Pro-OH (0,753 g; 2,0 mmol; se eksempel D ovenfor), H-Pab(Z) x HCI (0,681 g; 2,1 mmol), DMAP (0,366 g; 3,0 mmol) og EDC (500 ul; 2,7 mmol) i acetonitril (7 ml) ble omrørt ved romtemperatur i 3 dager. Reaksjonsblandingen ble inndampet og resten ble renset ved flashkromatografi på en silisiumdioksydgelkolonne eluert med etylacetat:toluen (2:1) og THF:toluen (3:7). Utbyttet av undertittelforbindelsen var 345 mg (27 %).

FAB-MS m/z 643 (M + 1)<+>

'H NMR (300 MHz; CDC13); 8 6,85-7,85 (m, 14H); 5,15 (s, 2H); 3,15-4,80 (m, 8H); 1,60-2,30 (m, 4H); 0,65-0,90 (m, 9H), -0,80-0,05 (m, 6H).

(ii) (R,S)-Ph-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z)

Til en blanding av trifluoreddiksyre (2 ml) i CH2C12(8 ml), (R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(0)-Pro-Pab(Z) (0,345 g; 0,54 mmol; fra trinn (i) ovenfor) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 4 timer. Blandingen ble fortynnet med CH2C12og pH-verdien ble justert til 7 med Na2C03/vandig. Det organiske laget ble tørket (MgSOiOog inndampet. Resten ble underkastet preparativ RPLC hvilket ga 111 mg (39 %) av undertittelforbindelsen.

FAB-MS m/z 529 (M + 1)<+>; LC-MS m/z 527 (M -1)_; 529 (M + 1)<+>, 551 (M + Na)<+>

<*>H NMR (400 MHz; CDC13); 6 7,10-7,86 (m, 14H); 5,18-5,25 (m, 2H), 3,05-4,69 (m, 8H), 1,66-2,28 (m, 4H).

(iii) (R,S)-Ph-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab-OH

(R,S)-Ph-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z) (0,111 g; 0,21 mmol; fra trinn (ii) ovenfor) ble tilsatt til en blanding av hydroksylaminhydroklorid (10,206 g; 3,0 mmol) og trietylamin (1,3 ml; 9,3 mmol) i EtOH (4 ml). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 4 dager. Råproduktet ble underkastet preparativ RPLC og dette ga 40 mg (23 %) av tittelforbindelsen.

LC-MS m/z 411 (M + 1)<+>, 433 (M + Naf

Eksempel 9

(R)- eller (S)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab-OH

En oppløsning av hydroksylaminhydroklorid (0,083 g; 1,2 mmol) og TEA (0,405 g; 4,0 mmol) i 11 ml THF ble sonikert i 35 minutter. (R)- eller (S)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab(Z) (forbindelse 2A fra eksempel 2(i) ovenfor; 0,109 g; 0,2 mmol) ble tilsatt og blandingen ble omrørt ved 40°C natten over. Oppløsningsmidlet ble inndampet og råmaterialet ble renset ved flashkromatografl på en silisumdioksydgelkolonne eluert med en gradient av CH2Cl2:IPA:HOAc (100:0:0 90:10:0 - > 80:20:2) fulgt av HPLC (CH3NH4OAC(0,1 M) (32,5:67,5)). Etter frysetørking ble 38 mg (44 %) av et hvitt pulver oppnådd.

LC-MS m/z 427 (M + 1)<+>

Eksempel 10

(S)- eller (R)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OH)CO-Pro-Pab(Z)

H-Pro-Pab(Z) (0,5 g; 1,1 mmol; fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i internasjonal patentsøknad WO 97/02284), fulgt av TBTU (0,353 g; 0,1 mmol), fulgt av DIPEA (0,517 g; 4,0 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av (R,S)-3-hydroksy-2-(3-metoksyfenyl)-propionsyre (0,196 g; 1 mmol; fra eksempel E(ii) ovenfor) i DMF (10 ml) ved °C. Etter omrøring i 4 dager ved romtemperatur ble reaksjonsblandingen konsentrert og renset ved RPLC (CH3CN:H4NOAc (1 M) (40:60)). Fraksjonene ble konsentrert og ekstrahert 4 ganger med EtOAc. De kombinerte organiske fasene ble deretter tørket (Na2S04) og inndampet og dette ga en råblanding av diastereomerer. Blandingen (0,84 g) ble kromatografert ved RPLC (CH3CN:H4NOAc (1 M) (34:66)), hvilket ga separering av to diastereomerer: forbindelse 10A (0,352 g; 83 %; den hurtigere bevegete diastereomeren; renhet 90,5 % ved HPLC) og forbindelse 10B (0,311 g; 74 %; langsommere beveget diastereomer; renhet 96,9 % ved HPLC).

Forbindelse 10B:

'H NMR (400 MHz; CDC13); 5 7,83 (d, 2H); 7,46 (dd, 2H); 7,4-7,3 (m, 8H); 6,84 (dd+s, 3H); 5,23 (s, 2H); 4,62 (dd, lh); 4,49 (ddd, 2H); 4,03 (dd, 1H); 3,88 (dd, 1H); 3,80 (s, 2H); 3,73 (dd, 2H); 3,63 (m, 1H); 3,2 (m, 1H); 2,3 (m, 1H); 2,1-2,0 (m, 2H); 1,82 (m, 3H); 1,74 (b, 3H).

Eksempel 11

(S)- eller (R)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc

Pd/C (5 %; 10 mg) ble tilsatt til en surgjort (HOAc; 2,7 mg; 0,045 mmol) oppløsning av (S)- eller (R)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z) (forbindelse 10B fra eksempel 10 ovenfor; 10 mg; 0,018 mmol) i 10 ml EtOH. Reaksjonsblandingen ble hydrogenert (1 atm) ved romtemperatur i 3,5 timer. Oppløsningen ble filtrert, inndampet og oppløst i 20 ml CH3CN:H20 (50:50). Denne oppløsningen ble frysetørket og dette ga 10 mg (100 %) av tittelforbindelsen som et hvitt pulver.

LC-MS m/z (425 (M + 1)<+>

Eksempel 12

(R,S)-3-aminofenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc

(i) (R,S)-(3-Boc-aminofenyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z)

En oppløsning av (R,S)-3-hydorksy-2-(3-Boc-aminofenyl)propionsyre (0,146 g; 0,8 mmol; fra eksempel T ovenfor) i DMF (10 ml) ble avkjølt til 0°C. H-Pro-Pab(Z) (0,339; 0,88 mmol), TBTU (0,283 g; 0,88 mmol) og DIPEA (0,414 g; 3,20 mmol) ble tilsatt i den ovenfor angitte rekkefølge og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 4 dager. DMF-materialet ble deretter inndampet og resten ble renset ved preparativ HPLC (CH3CN:NH4OAc (10 %); 42;58). Nevnte CH3CN ble inndampet og vannoppløsningen frysetørket og dette ga undertittelforbindelsen (187 mg; 43 %).

<!>H NMR (500 MHz; CDC13); 5 9,48 (b, 1H); 7,73 (d, 1H); 7,43 (t, 1H); 7,34 (m, 5H); 7,20 (d, 1H); 6,85 (d, 1H); 6,80 (d, 1H); 5,21 (d, 2H); 4,62 (m, 1H); 4,40 (m, 2H); 4,02 (m, 1H); 3,87 (m, 1H); 3,75 (m, 1H); 3,70 (dd, 1H); 3,65 (m, 1H); 3,50 (m, 1H); 3,23 (m, 1H); 2,25 (m, 1H); 1,87 (m, 4H); 1,79 (m, 1H); 1,47 (d, 9H)

(ii) (R,S)-(3-Boc-aminofenyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc

Pd/C (10 %; 10 mg) ble tilsatt til en oppløsning av (R,S)-(3-Boc-aminofenyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z) (270 mg; 0,42 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i 10 ml EtOH og HOAc (10 dråper). Reaksjonsblandingen ble hydrogenert (1 atm) ved romtemperatur i 2 timer. Den resulterende blanding ble filtret gjennom Hyflo. Oppløsningen ble inndampet, vann ble tilsatt og oppløsningen ble frysetørket og dette ga 214 mg (100 %) av undertittelforbindelsen som et hvitt skumaktig materiale.

'H NMR (400 MHz; D20); 8 7,75 (d, 1H); 7,70 (d, 1H); 7,50 (d, 1H); 7,35 (d, 2H); 7,25 (m, 2H); 7,05 (m, 1H); 4,50 (m, 2H); 4,10 (m, 2H); 3,90 (m, 2H); 1,45 (d, 9H).

(iii) (R,S)-3-aminofenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc

En oppløsning av (R,S)-(3-Boc-aminofenyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab (172 mg; 0,42 mmol) i HCI (6 M; 10 ml) ble omrørt ved romtemperatur i 2 timer og produktet fryse- tørket og dette ga 153 mg (76 %; 92,4 % renhet) av tittelforbindelsen som et hvitt materiale.

'H NMR (500 MHz; D20); 8 7,33 (m, 2H); 7,16 (t, 1H); 7,02 (m, 5H); 4,07 (m, 3H); 3,84 (q, 1H); 3,68 (m, 1H); 3,44 (m, 1H); 3,24 (m, 1H); 2,96 (m, 1H); 1,83 (m, 1H); 1,50 (m, 3H)

<13>C NMR (100 MHz; D20) 174,6, 174,3 (rotamerer og/eller diastereomerer); 172,1, 171,9 (rotamerer og/eller diastereomerer); 166,1

Eksempel 13

(S)- eller (R)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab-OH

En oppløsning av hydroksylaminhydroklorid (149 mg; 2,15 mmol) og TEA (725 mg; 7,16 mmol) i 11 ml THF ble sonikert i 35 minutter. (S)- eller (R)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z) (forbindelse 10B fra eksempel 10 ovenfor; 200 mg, 0,36 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet ved 40°C over natten. Oppløsnings-midlet ble inndampet og råmaterialet ble renset, først ved flashkromatografi på en silisiumdioksydgelkolonne eluert en gradient av CH2Cl2:IPA:HOAc (100:0:0 - > 90:10:0 -> 80:20:2) og deretter via RPLC (CH3NH:NH40Ac (0,1 M) (32,5:67,5)). Frysetørking ga 119 mg (75 %) av tittelforbindelsen som et hvitt pulver.

LC-MS m/z 441 (M+l)<+>

<l>H NMR (500 MHz; CD3OD); 8 7,64 (d, 2H); 7,38 (d, 2H); 7,27 (t, 1H); 6,93 (m, 2H); 6,87 (m, 1H); 4,47 (s, 3H); 4,14 (dd, 1H); 4,03 (dd, 1H); 3,80 (s, 1H); 3,72 (dd, 1H); 3,38 (dt, 1H); 2,12 (m, 1H); 2,00 (m, 3H); 1,48 (m, 1H)

<13>C NMR (CD3OD) amidin- og karbonylkarboner: 174,7; 173,4; 161,5.

Eksempel 14

( Sy eller (R)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab-OC(0)Et (i) ( Ry og (S)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OTBTMS)-C(0)-Pro-Pab(Z)

En oppløsning av (R,S)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OTBFMS)COOH (3 g; 9,66 mmol; fra eksempel S ovenfor) i DMF (100 ml) ble avkjølt i isvann, og H-Pro-Pab(Z) (4,8 g; 10,63 mml; fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i internasjonal patentsøknad nr WO 97/02284), TBTU (3,4 g; 10,63 mg) og etterfulgt av DIPEA (5,0 g; 38,65 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 5 dager, oppløsningen ble konsentrert og resten oppløst i en blanding av 400 ml H20 og 200 ml EtOAc. Det organiske laget ble separert og den vandige fasen ekstrahert med EtOAc (3 x 50 ml). De kombinerte organiske fasene ble vasket to ganger med NaHC03/vandig (10 %), en gang med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Råproduktet (6,25 g av et brunt fast stoff) ble renset ved flashkromatografi på silisiumdioksydgel (EtOAcrEtOH (95:5)), hvilket ga 4,27 g av en tykk brun olje. Dette materialet ble videre renset ved RPLC (CH3CN:NH40Ac (10 %) (70:30)) hvilket ga to diastereomerer, forbindelse 14A (1,49 g; den hurtigere bevegete isomeren) og forbindelse 14B (1,0 g; den langsommere bevegete isomeren)

LC-MS m/z 672,6 (M + 1)<+>(racemat)

(ii) (S)- eller (R)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OTBTMS)-C(0)-Pro-Pab-OH

En oppløsning av hydroksylamin x HCI (0,43 g; 6,2 mmol) og TEA (2,1 g; 20,8 mmol) i THF (50 ml) ble sonikert i 2 timer, hvoretter forbindelse 14B (0,70 g; 1,04 mmol; fra trinn (ii) ovenfor) ble tilsatt. Oppløsningen ble omrørt natten over ved 56°C. Etter inndampning ble produktet renset ved RPLC (CH3CN:NH40Ac (10 %) (65:35)) og dette ga 0,396 g (69 %) av undertittelforbindelsen som et hvitt pulver.

<!>H NMR (400 MHz; CDC13); 8 7,89 (bt, 1H); 7,49 (d, 2H); 7,25 (d, 2H); 6,90 (s+d, 2H); 6,83 (m, 1H); 4,93 (b, 2H); 4,66 (m, 2H); 4,24 (t, 1H); 4,20 (d, 1H); 3,88 (dd, 1H); 3,81 (s, 3H); 3,74 (m, 2H); 3,34 (m, 1H); 2,38 (m, 1H); 2,10 (m, 1H); 1,82 (m, 2H); 0,83 (s, 9H), -0,05 (d, 6H)

(iii) (S)- eller (R)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OTBTMS)-C(0)-Pro-Pab-OC(0)Et

En blanding av (S)- eller (R)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OTBTMS)-C(0)-Pro-Pab-OH (130 mg; 0,23 mmol; fra trinn (ii) ovenfor), propionsyreanhydrid (1 g; 7,7 mmol) og DMAP (9 mg, 0,07 mmol) ble omrørt ved romtemperatur i 35 minutter. Den resulterende blandingen ble deretter inndampet og dette ga en gul olje som ble renset ved RPLC (CHsCNiNrLjOAc (10 %) (70:30)) hvilket ga 75 mg (52 %) av undertittelproduktet (renhet 99,6 %).

<!>H NMR (400 MHz; CDC13); S 7,66 (d, 2H); 7,62 (t, 1H); 7,33 (d, 2H); 6,90 (d+s, 3H); 6,82 (m, 1H); 5,04 (b, 2H); 4,63 (t, 1H); 4,59 (d, 1H); 4,30 (dd, 1H); 4,23 (t, 1H); 3,88 )dd, 1H); 3,80 (s, 3H); 3,7 (m, 2H); 3,32 (m, 1H); 2,55 (q, 2H); 2,43 (m, 1H); 2,02 (m, 1H); 1,85 (m, 1H); 1,75 (m, 1H); 1,26 (t, 3H); 0,82 (s, 9H); -0,05 (d, 6H)

(iv) (S)- eller (R)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab-OC(0)Et

TFA (0,2 ml) ble tilsatt til en isavkjølt oppløsning av (S)- eller (R)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OTBTMS)-C(0)-Pro-Pab-OC(0)Et (75 mg; 0,12 mmol; fra trinn (iii) ovenfor i CH2C12. Oppløsningen ble omrørt ved 0°C i 35 minutter hvoretter oppløsningen ble gjort alkalisk med fast Na2C03og ekstrahert med CH2C12. Den organiske fasen ble oppsamlet, vasket (vann), tørket (Na2S04) og inndampet og dette ga 60 mg råprodukt. Etter rensing ved RPLC (CH3CN:NH4OAc (10 %) (42:58)) og frysetørking ble 41 mg (67 %) av tittelproduktet oppnådd som et hvitt pulver.

LC-MS m/z 497 (M + 1)<+>

'H NMR (500 MHz; CDC13); 8 7,66 (d, 1H); 7,34 (d, 2H); 6,83 (dd, 3H); 5,11 (b, 2H); 4.63 (dd, 1H); 4,48 (ddd, 2H); 4,03 (dd, 1H; 3,88 (dd, 1H); 3,80 (s, 3H); 3,73 (dd, 1H); 3.64 (m, 1H); 3,19 (m, 1H); 2,54 (q, 2H); 2,35 (m, 1H); 2,06 (m, 1H); 1,82 (m, 2H); 1,27 (t, 3H)

Eksempel 15

(S)- eller (R)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab-OC(0)CH3

(i) (S)- eUer (R)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OTBTMS)-C(0)-Pro-Pab-OC(0)CH3

En blanding av (S)- eller (R)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OTBTMS)-C(0)-Pro-Pab-OH (130 mg; 0,23 mmol; fra eksempel 14(ii) ovenfor), eddiksyreanhydrid (1 ml; 10 mmol) og DMAP (9 mg; 0,07 mmol) ble omrørt ved romtemperatur i 90 minutter. Etter inndampning ble råproduktet renset ved RPLC (CH3CN:NH4OAc (10 %) (60:40)) og dette ga 78 mg (57 %) av undertittelproduktet.

LC-MS m/z 589 (M + 1)<+>

(ii) ( Sy eller (R)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OH>-C(0)-Pro-Pab-OC(0)CH3

2 ml TFA ble tilsatt til en oppløsning av (S)- eller (R)-3-metoksyfenyl-CH(CH2OTBTMS)-C(0)-Pro-Pab-(OC(0)CH3) (125 mg; 0,21 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i CH2C12(2,5 ml) og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 40 minutter, hvoretter oppløsningen ble gjort alkalisk med Na2C03/vandig og ekstrahert med CH2C12. Det organiske laget ble vasket en gang med vann, tørket (Na2SC<4) og inndampet hvilket ga 60 mg råprodukt. Etter rensing ved RPLC (CH3CN:NH40Ac (10 %) (60:40)) og frysetørking ble 36 mg (36 %) av tittelproduktet oppnådd som et hvitt pulver.

LC-MS m/z 484 (M+l)<+>

Eksempel 16

(R)- eller (S)-3-(metylamino)fenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x 2 HCI

(i) (R,S)-((3-Boc-metylamino)fenyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z)

En oppløsning av (R,S)-3-hydVoksy-2-(3-Boc-aminofenyl)propionsyre (0,28 g; 0,95

mmol; fra eksempel U ovenfor) i DMF (10 ml) ble avkjølt til 0°C. H-Pro-Pab(Z) x HCI (0,46; 0,88 mmol), TBTU (0,32 g; 1,0 mmol) og DIPEA (0,44 g; 3,4 mmol) ble tilsatt i den ovenfor angitte rekkefølge og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 4 dager. DMF-materialet ble deretter inndampet og resten renset ved preparativ HPLC (CH3CN:NH4OAc (10 %); 42:58). Nevnte CH3CN ble inndampet og vannoppløsningen frysetørket og dette ga undertittelforbindelsen (220 mg; 43 %).

'H NMR (400 MHz; CDC13); 6 7,28 (d, 1H); 7,75 (d, 1H); 7,42 (m, 2H); 7,33 (m, 3H); 7,28 (m, 3H); 7,23 (m, 1H); 7,12 (d, 2H); 5,20 (d, 2H); 4,60 (m, 1H); 4,40 (m, 2H); 4,03 (m, 1H); 3,90 (m, 1H); 3,72 (m, 1H); 3,50 (m, 1H); 3,14 (s, 3H); 2,25 (m, 1H); 1,85 (m, 4H); 1,43 (s, 9H)

(ii) (R)- og (S)-((3-Boc-metylamino)fenyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab

Pd/C (10 %; 10 mg) ble tilsatt til en oppløsning av (R,S)-((3-Boc-metylamino)fenyl)-CH(CH2OH-C(0)-Pro-Pab(Z) (270 mg; 0,42 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i 10 ml EtOH og HOAc (10 dråper). Reaksjonsblandingen ble hydrogenert (1 atm) ved romtemperatur i 2 timer og den resulterende blandingen ble filtrert gjennom Hyflo. Oppløsningen ble inndampet, vann ble tilsatt og oppløsningen ble frysetørket og dette ga 214 mg (100 %) av den urene undertittelforbindelsen som et hvitt skumaktig materiale. Råproduktet ble renset ved RPLC (CH3CN:NH40Ac (0,1 M); 32:68) hvilket separerte diastereomerene. CH3CN-materialet ble inndampet og vannoppløsningen frysetørket og dette ga en forbindelse 16A (den hurtigere bevegede diastereomeren) og en forbindelse 16B (den langsommere bevegede diastereomeren).

Forbindelse 16A

'H NMR (300 MHz; D20); 8 7,8 (d, 2H); 7,4 (d, 2H); 7,2 (m, 4H); 4,6 (m, 2H); 4,3 (d, 1H); 4,15 (m, 2H); 3,85 (m, 2H); 3,55 (m, 1H); 2,95 (s, 2H); 2,3 (m, 1H); 2,0 (d, 5H); l,4(d,9H)

Forbindelse 16B

'H NMR (300 MHz; D20); 8 7,8 (d, 2H); 7,5 (d, 2H); 7,3 (m, 4H); 4,5 (m, 2H); 4,4 (d, 1H); 4,1 (m, 2H); 3,8 (m, 2H); 3,4 (m, 1H); 3,2 (s, 2H); 2,2 (m, 1H); 2,0 (d, 5H); 1,4 (d, 9H).

(iii) (R)- eller (S)-3-<metylamino)fenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HCI

En oppløsning av (R)- elller (S)-((3-Boc-metylamino)fenyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab (forbindelsen 16B fra trinn (ii) ovenfor; 172 mg; 0,42 mmol) i HCI (6 M; 10 ml) ble omrørt ved romtemperatur i 2 timer og produktet ble frysetørket og dette ga 153 mg

(76 %; 94,2 % renhet) av tittelforbindelsen som et hvitt materiale.

FAB-MS m/z 424 (M + 1)+

'H NMR (400 MHz; D20); 6 8,77 (t, 1H); 7,80 (d, 2H); 7,72 (d, 1H); 7,63 (t, 1H); 7,54 (d, 2H); 7,50 (m, 2H); 4,55 (m, 2H); 4,46 (m, 2H); 4,46 (dd, 1H); 4,27 (t, 1H); 4,12 (m, 2H); 3,88 (m, 2H); 3,66 (dd, 1H); 3,42 (m, 1H); 3,13 (s, 3H); 2,22 (m, 1H); 2,00 (m, 2H); 1,90 (m, 1H)

<13>C NMR (100 MHz; D20) 174,6,171,9,166,6

Eksempel 17

(S)-PhCH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HCI

(i) (S)-tropinsyre

Racemisk tropinsyre (10 g; 47 mmol) ble oppløst ved bruk av (lR:2R)-(-)-l-p-nitrofenyl-2-aminopropan-l,3-diol (7,85 g; 47 mmol) ifølge prosedyren beskrevet av G. Fodor et al i Acta Chem. Hung. 28,407 (1961), og dette ga 0,25 g (5 %) av tittelforbindelsen.

[a]<D>20= -77°; c = 0,5 (H2) (Lit: - 72°)

(ii) (S)-PhCH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z)

En oppløsning av (S)-tropinsyre (234 mg; 1,4 mmol; fra trinn (i) ovenfor), H-Pro-Pab(Z) (884 mg; 1,95 mmol; fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i interansjonal patentsøknad WO 97/02284) og TEA (1 ml; 7 mmol) i CH2C12(30 ml) ble fremstilt og avkjølt til 0°C. HBTU (570 mg; 1,5 mmol) ble deretter tilsatt og oppløsningen ble omrørt natten over. Etter dette ble oppløsningsmidlet inndampet og råproduktet renset ved RPLC og dette ga 0,50 g (68 %) av undertittelproduktet.

LC-MS m/z (M - 1)"

(iii) (S)-Ph(CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HCI

En oppløsning av (S)-PhCH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z) (220 mg; 0,42 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i EtOH (25 ml) med Pd/C (10 %; 161 mg) ble hydrogenert under atmosfæretrykk ved romtemperatur i 18 timer. Den resulterende oppløsning ble filtrert gjennom Hyflo og inndampet. Det dannede faste stoffet ble oppløst i H20,1 ml 2 M HCl/vandig ble tilsatt og oppløsningen ble frysetørket. Tittelproduktet (132 mg, 80 %) ble oppnådd som et hvitt fast stoff.

LC-MS m/z 394,5 (M + 1)<+>

Eksempel 18

(R,S)-3,5-dimetylfeiiyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab x HOAc (i) (R,S)-3,5-dimetylfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab(Z)

En oppløsning av (R,S)-3-hydroksy-2-(3,5-dimetylfenyl)propionsyre (0,155 g; 0,8 mmol; fra eksempel H ovenfor) i DMF (10 ml) ble avkjølt til 0°C. H-Aze-Pab(Z) x 2HC1 (0,387 g; 0,88 mmol; fra eksempel A ovenfor), fulgt av TBTU (0,283 g, 0,88 mmol) fulgt av DIPEA (0,414 g; 3,2 mmol) ble tilsatt og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur i 4 dager. Oppløsningen ble konsentrert og den resulterende blanding ble renset ved RPLC (CHaCNiNFUAOc (10 %) (40:60)). CH3CN ble inndampet og den vandige fasen ble ekstrahert med EtOAc. Den organiske fasen ble tørket og (Na2S04) og inndampet til tørrhet. Undertittelproduktet (270 mg; 62 %) ble isolert som et hvitt fast stoff.

<l>H NMR (500 MHz; CDC13); 8 8,27 (bt, 0.5H); 8,15 (bt, 0,5H); 7,80 (d, 2H); 7,44 (m, 2H); 7,34 (d, 2H); 7,30 (d, 2H); 6,91 (d, 1H); 6,85 (s, 1H); 6,65 (s, 1H); 5,20 (d, 2H); 4,90 (m, 1H); 4,6-4,4 (m, 2H); 4,1-4,0 (m, 2H); 3,8-3,5 (m, 3H); 2,58 (m, 1H); 2,29 (s, 3H); 2,21 (s, 3H)

(ii) (R,S)-3,5-dimerylfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Til en oppløsning av (R,S)-3,5-dimetylfenyl-CH(CH2OH-C(0)-Aze-Pab(Z) (0,299 g; 0,42 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i EtOH (10 ml) ble det tilsatt eddiksyre (24 ul) og Pd/C (5 %, 0,115 g). Oppløsningen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk og romtemperatur i 2,5 timer. Blandingen ble filtrert gjennom Hyflo og den resulterende oppløsning ble konsentrert, oppløst i en minimum mengde vann og frysetørket og dette ga 0,174 g (88 %; renhet 93,6 %) av tittelforbindelsen som et hvitt fast stoff.

LC-MS m/z 409 (M + 1)<+>

Eksempel 19

(S)- eller (R)-3-(trifluormetyl)fenyl-CH(CH2OH)-C(0)-PTo-Pab x HCI

(i) (R)- og (S)-3-(trifluormetyl)fenyl-CH(CHzOH)-C(0)-Pro-Pab(Z)

En oppløsning av (R,S)-3-hydroksy-2-(3-trifluormetylfenyl)propionsyre (0,25 g; 1,07 mmol; fra eksempel I ovenfor), H-Pro-Pab(Z) (0,532 g; 1,17 mmol; fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i internasjonal patentsøknad WO 97/002284) og TBTU (0,377 g; 1,7 mmol) i DMF (10 ml) ble avkjølt ved 0°C, og DIPEA (0,72 g; 4,27 mmol) ble tilsatt. Den resulterende blanding ble omrørt til romtemperatur i 40°C. Reaksjonsblandingen ble konsentrert, vann (400 ml) ble tilsatt og pH-verdien justert til 9 (NaHC03/vandig). Den resulterende blanding ble ekstrahert med EtOAc (3 x 100 ml). De kombinerte organiske fasene ble vasket med saltoppløsning, tørket (Na2S04). Preparativ HPLC (CH3CN:NH40Ac (0,1 M) (45:55)) ga diastereomerer, forbindelse 19A (87 mg; 0,15 mml; renhet 94,4 % ved HPLC; den hurtigere bevegede diastereomeren) og forbindelse 19B (120 mg; 0,20 mmol; renhet 91 % ved HPLC; den langsommere bevegede diastereomeren).

LC-MS m/z 587 (M + 1)<+>(begge diastereomerer)

(ii) ( S)- eller (R)-3-(trifluormetyl)fenyl-CH(CH2OH)CO-Pro-Pab x HCI

Pd/C (10 %) ble tilsatt til en oppløsning av (R)- eller (S)-3-(trifluormetyl)fenyl-CH(CH2OH-C(0)-Pro-Pab(Z) (118 mg; 0,20 mmol; forbindelse 19B fra trinn (i) ovenfor) i EtOH (10 ml) og HCl/vandig (1 M; 0,4 ml). Blandingen ble hydrogenert i 3 timer ved romtemperatur og atmosfæretrykk. Den resulterende blanding ble filtrert gjennom Hyflo og oppløsningen ble inndampet. Vann ble tilsatt og oppløsningen ble frysetørket hvilket ga 66 mg (66,9 %) av tittelforbindelsen som et hvitt fast stoff (renhet 94,5 % (HPLC)).

LC-MS m/z 463 (M+l)<+>

Eksempel 20

(R,S)-3-hydroksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc (i) (R,S)-3-hydroksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z)

En oppløsning av (RJS)-3-hydroksy-2-(3-hydroksyfenyl)propionsyre (0,146 g; 0,8 mmol; fra eksempel J ovenfor) i DMF (10 ml) ble avkjølt ved 0°C. H-Aze-Pab(Z) x HCI (0,399 g; 0,88 mmol; fra eksempel A ovenfor), TBTU (0,283 g; 0,88 mmol) og DEPIA (0,414 g; 3,2 mmol) ble tilsatt, og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur i løpet av 4 dager. Reaksjonsblandingen ble konsentrert og den resulterende blanding ble renset ved RPLC (CH3CN:NH40Ac (10 %) (42:58)). CH3CN ble inndampet og den vandige oppløsningen ble frysetørket. Undertittelproduktet (187 mg; 43 %) ble isolert som et hvitt fast stoff.

'H NMR (500 MHz; CD3OD); 8 7,82 (d, 2H); 7,41 (m, 3H);;7,34 (m, 2H); 7,25 (d, 1H); 7,13 (t, 1H); 6,78 (s+d, 2H); 6,66 (d, 1H); 5,18 (b, 2H); 4,5 (m, 2H); 4,07 (m, 1H); 3,93 (m, 1H); 3,79 (m, 1H); 3,65 (m, 1H); 3,5-3,3 (m, 2H); 3,30 (s, 1H); 2,2-2,0 (m, 2H); 1,95 (m, 3H); 1,81 (m, 1H)

(ii) (R,S)-3-hydroksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc

Eddiksyre (18 ul) og Pd/C (5 %) ble tilsatt til en oppløsning av (R,S)-3-hydroksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z) (0,173 g; 0,32 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i EtOH (10 ml). Oppløsningen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk og romtemperatur i 3 timer. Blandingen ble filtrert gjennom Hyflo og den resulterende oppløsning ble konsentrert, oppløst i en minimummengde vann, og frysetørket og dette ga 0,133 g (89 %, renhet 94,2 %) av dunete hvite krystaller.

LC-MS m/z 411 (M+ 1)+

Eksempel 21

(R)- eller (S)-((3-klor-5-metylfenyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HCI

(i) (R)- og (S)-((3-klor-5-metylfenyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HCI

En oppløsning av (R,S)-3-hydroksy-2-(3-klor-5-metylfenyl)propionsyre (0,30 g; 1,4

mmol; fra eksempel V ovenfor) i DMF (10 ml) ble avkjølt til 0°C. H-Pro-Pab(Z) x HCI (0,70 g; 1,54 mmol), TBTU (0,99 g; 1,5 mmol) og DEPEA (0,94 g; 5,5 mmol) ble tilsatt i den ovenfor angitte rekkefølge og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 4 dager. DMF ble deretter inndampet og den resulterende blanding helt på vann (400 ml) og pH-verdien justert til 9 med NaHC03/vandig (10 %). Den vandige blandingen ble ekstrahert med EtOAc (3 x 100 ml), de kombinerte organiske fasene ble vasket med NaHC03/vandig (10 %), vann, saltoppløsning, tørket (Na2S04) og konsentrert. Råproduktet (0,674 g) ble renset RPLC (CH3CN:NH4OAc (10 %); 45:55), hvorved diastereomerer ble separert. CH3CN ble inndampet og vannoppløsningene ble ekstrahert med EtOAc. De organiske lagene ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og konsentrert og dette ga en forbindelse 21A (125 mg; 31 %; den hurtigere bevegede diastereomeren) og en forbindelse 21B (102 mg; 25 %; den langsommerene bevegede diastereomeren).

Forbindelse 21B

FAB-MS (m/z) 577, 579 (M + 1)<+>

<!>H NMR (400 MHz; CDC13); 8 7,76 (d, 2H); 7,43 (m, 2H); 7,30 (m, 5H); 7,07 (d, 2H); 6,95 (s, 1H); 5,20 (s, 2H); 4,58 (dd, 1H); 4,42 (m, 2H); 3,97 (t, 1H); 3,85 (dd, 1H); 3,68 (m, 2H); 3,23 (m, 1H); 2,30 (s, 3H); 2,25 (m, 1H); 2,03 (m, 1H); 1,85 (m, 4H).

(ii) (R)- eller (S)-(3-klor-5-metylfenyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HCI

Tioanisol (1,04 g; 8,83 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av (R)- eller (S)-((3-klor-5-metylfenyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z) (forbindelse 21B fra trinn (i) ovenfor; 0,102 g; 0,18 mmol) i 3,7 ml TF A. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 3 timer. Den resulterende blanding ble oppløst i vann, vannoppløsningen ble vasket to ganger med eter, og den resulterende oppløsningen ble frysetørket. Råproduktet ble renset ved preparativ HPCL (CH3CN: NH4OAC(0,1 M); 35:65). CH3CN ble inndampet og vannoppløsningen ble frysetørket og dette ga 50 mg (59 %) av tittelforbindelsen som et hvitt pulver.

<]>H NMR (400 MHz; CDC13); 8 9,23 (b, 2H); 8,74 (b, 2H); 7,78 (d, 2H); 7,57 (d,k 2H); 7,18 (s, 1H); 7,12 (m, 2H); 4,52 (s, 2H); 4,52 (s, 2H); 4,46 (dd, 1H); 4,06 (m, 2H); 3,89 (m, 1H); 3,72 (m, 1H); 3,39 (m, 1H); 2,32 (s, 3H); 2,15 (m, 1H); 1,98 (m, 2H); 1,87 (m, 1H).

<I3>C NMR (100 MHz; CD3OD) 174,9,173,1, 168,3

Eksempel 22

(S)- eller (R)-3-nuorfenyl-CH(CH2OH)CO-Pro-Pab x HCI

(i) (R)- og (S)-3-fluorfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z)

En oppløsning av (R,S)-3-hydroksy-2-(3-fluorfenyl)propionsyre (0,2 g; 1,09 mmol; fra eksempel K ovenfor), H-Pro-Pab(Z) (0,542 g; 1,19 mmol); fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i internasjonal patentsøknad WO 97/02284) og TBTU (0,383 g; 1,19 mmol) i DMF (10 ml) ble avkjølt ved 0°C og DIPEA (0,73 g; 4,34 mmol) ble tilsatt. Den resulterende blanding ble omrørt til romtemperatur i 22 timer. Reaksjonsblandingen ble konsentrert, vann (400 ml) ble tilsatt og pH-verdien ble justert til 9 (NaHC03/vandig). De kombinerte organiske fasene ble vasket med NaHC03/vandig, vann og deretter saltoppløsning, tørket (Na2S04) og inndampet. Den resulterende blanding ble deretter ekstrahert med EtOAc (3 x 100 ml). RPLC (CH3CN:NH4OAc (0,1 M) (45:55)) separerte to diastereomerer; forbindelse 22A (85 mg; 0,16 mmol; renhet 90 % ved HPLC; den hurtigere bevegede diastereomeren) og forbindelse 22B (95 mg; 0,17 mmol; renhet 91 % ved HPLC; den langsommere bevegede diastereoisomeren).

LC-MS m/z (547 (M + 1)<+>(begge diastereomerer)

(ii) (S)- eller (R)-3-fluorfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HCI

Pd/C (10 %) ble tilsatt til en oppløsning av forbindelse 22B (85 mg; 0,16 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i EtOH (10 ml) og HCl/vandig (1 M, 0,4 ml) og deretter ble blandingen hydrogenert i 3 timer ved romtemperatur og atmosfæretrykk. Den resulterende blanding ble filtrert gjennom Hyflo og oppløsningen ble inndampet. Vann ble tilsatt og oppløsningen ble frysetørket hvilket ga 92,9 mg (90,1 %) av et hvitt fast stoff (renhet 93,3 % (HPLC)).

LC-MS m/z 413 (M + l)<+>

Eksempel 23

(S)- og (R)-3-klorfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc (i) (R,S)-3-klorfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z)

En oppløsning av (R,S)-3-hydroksy-2-(3-klorfenyl)propionsyre (0,30 g, 1,5 mmol; fra eksempel L ovenfor), H-Pro-Pab(Z) (0,77 g; 1,7 mmol; fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i internasjonal patentsøknad WO 97/02284), TBTU (0,55 g; 1,7 mmol) og DIPEA (0,41 g; 3,2 mmol) i DMF (20 ml) ble omrørt i 2 dager. Den resulterende blanding ble ekstrahert med toluen:EtOAc (1:1; 300 ml), det organiske laget ble oppsamlet, vasket med NaHCOa/vandig og vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Flashkromatografi (Si gel, CH2C12:THF (7:3)) ga 0,50 g (59 %) av undertittelforbindelsen.

FAB-MS m/z 562,4, 564,5 (M + 1)<+>(ii) (R)- og (S)-(3-klorfenyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc

Trifluormetansulfonsyre (0,2 g; 1,3 mmol) ble tilsatt til en oppløsning av (R,S)-3-klorfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z) (0,15 g; 0,27 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i CH2C12og anisol (43 mg; 0,40 mmol). Den resulterende blanding ble omrørt i 1 time og deretter konsentrert. Vann ble så tilsatt og vannoppløsningens pH-verdi justert til ca 9 med vandig NaHC03. Den vandige fasen ble vasket med eter og frysetørket og dette ga et råprodukt. RPLC separerte to diastereomerer: forbindelse 23A (11 mg; 19 %; renhet 81,7 % ved HPLC; hurtigere beveget diastereomer) og forbindelse 23B (11 mg; 19 %, renhet 90,0 % ved HPLC; langsommere beveget diastereomer).

Forbindelse 23A:

LC-MS m/z 428,4 (M+l)<+>

Forbindelse 23B

FAB-MS m/z 431 (M+l)<+>

Eksempel 24

(R,S)-3,5-dimetylfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc (i) (R,S)-(3,5-dimetylfenyl)-CH(CH20H)-C(0)-Pro-Pab(Z)

En oppløsning av (R,S)-3-hydorksy-2-(3,5-dimetylfenyl)propionsyre (0,155 g; 0,8 mmol; fra eksempel H ovenfor) i DMF (10 ml) ble avkjølt til 0°C. H-Pro-Pab(Z) x 2HC1 (0,399 g; 0,88 mmol; fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i internasjonal patentsøknad WO 97/02248), TBTU (0,283 g; 0,88 mmol) og DIPEA (0,414 g; 3,2 mmol) ble tilsatt (i denne rekkefølgen) og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur i 5 dager. Reaksjonsblandingen ble konsentrert og resten renset ved RPLC (CH3CN: NH4OAC(10 %) (40:60)). CH3CN ble inndampet og den vandige fasen ble ekstrahert med EtOAc. Den organiske fasen ble tørket (Na2S04) og inndampet til tørrhet. Undertittelproduktet (300 mg; 67 %) ble isolert som et lysegult fast stoff.

<J>H NMR (500 MHz; CDC13); 8 7,83 (d, 2H); 7,45 (m, 2H); 7,32 (m, 6H); 6,88 (s, 1H); 6,84 (s, 1H); 6,78 (s, 1H); 5,21 (d, 2H); 4,75-4,30 (m, 3H); 4,04 (m, 1H); 3,83 (m, 1H); 3,74 (dt, 1H); 3,63 (m, 1H); 3,47 (m, 1H); 3,19 (m, 1H); 2,28 (s, 3H); 2,16 (s, 3H); 1,95-1,75 (m,3H).

(ii) (R,SH3,5-dimetylfenyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc

Eddiksyre (29 ul) og Pd/C (5 %; 0,140 g) ble tilsatt til en oppløsning av (R,S)-(3,5-dimetylfenyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z) (0,280 g; 0,50 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i EtOH (10 ml). Oppløsningen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk og romtemperatur i 2,5 timer. Blandingen ble deretter filtrert gjennom Hyflo og den resulterende oppløsning ble konsentrert, oppløst i en minimum mengde vann og frysetørket, og dette ga 0,174 g (88 %; renhet 92,1 %) av hvite krystaller.

LC-MS m/z 423 (M + 1)<+>

<l3>C NMR (100 MHz; D20) karbon- og amidinkarboner, diastereomerer og/eller rotamerer) 174,93,173,17, 173,02, 166,55, 166,40.

Eksempel 25

(S)- eller (R)-3^-bis(tirfluormetyl)fenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HCI

(i) (R)- og (S)-2-(3^-bis(trinuormeryl)fenyl)-CH(CH20H)-C(0)-Pro-Pab x HCI

En oppløsning av 3-hydroksy-2-(3,5-bis(trifluormetyl)fenyl)-propionsyre (284 mg; 0,94 mmol; fra eksempel M ovenfor), H-Pro-Pab(Z) x 2HC1 (468 mg; 1,03 mmol; fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i internasjonal patentsøknad WO 97/02284) og TBTU (332 mg; 1,03 mmol) i DMF (10 ml) ble avkjølt til 0°C, og DIPEA (485 mg; 3,76 mmol) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 60 timer. Oppløsningen ble helt på 400 ml vann, pH-verdien ble justert til 9 (NaHC03/vandig), og oppløsningen ble ekstrahert med 3 x 100 ml EtOAc. De kombinerte organiske fasene ble vasket med NaHCO^vandig, vann og saltoppløsning, tørket (Na2S04) og inndampet. Preparativ HPLC (CH3CN:NH40Ac (0,1 M) (55:45)) separerte to diastereomerer: Forbindelse 25A (161 mg; 0,24 mmol; renhet 86,9 % med HPLC; hurtigere beveget diastereomer) og forbindelse 25B (241 mg; 0,36 mmol; renhet 90,9 % ved HPLC; langsommere beveget diastereomer).

Forbindelse 25B:

'H NMR (500 MHz; CDC13); 6 7,80 (s, 3H); 7,67 (d, 2H); 7,56 (t, 1H); 7,41 (dd, 2H); 7,39-7,28 (m, 3H); 7,21 (d, 1H); 5,19 (s, 2H); 4,57 (dd, 1H); 4,33 (m, 2H); 4,12 (m, 1H); 3,96 (t, 1H); 3,84 (m, 1H); 3,77 (dd, 1H); 3,36 (dd, 1H); 2,17 (m, 1H); 2,10-1,87 (m, 4H).

(ii) ( S)- eller (R)-3,5-bis(trinuormetyl)fenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab

Pd/C (10 %) ble tilsatt til en oppløsning av forbindelse 25B (235 mg; 0,35 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i EtOH (10 ml) og HCl/vandig (1 M, 0,7 ml). Blandingen ble hydrogenert i 3 timer ved omgivelsestemperatur og atmosfæretrykk. Reaksjonsblandingen ble filtrert og konsentrert, vann ble tilsatt, og den resulterende oppløsning ble frysetørket hvilket ga 174 mg (83,3 %) av tittelforbindelsen som et hvitt skumaktig materiale (renhet 92,7 % ved HPLC).

LC-MS m/z 531 (M+ 1)+

Eksempel 26

(R,S)-3-metoksy-5-merylfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HCI

(i) (R,S)-{3-metoksy-5-metylfenyl)-CH(CH20H)-C(0)-Pro-Pab(Z)

En blanding av 3-hydroksy-2-(3-metoksy-5-metylfenyl)-propionsyre (0,19 g; 0,9 mmol; fra eksempel N), H-Aze-Pab(Z) x 2 HCI (0,35 g; 0,99 mmol; fra eksempel A ovenfor) og TBTU (0,32 g; 0,99 mmol) i CH2C12ble avkjølt på et isbad, og DIPEA (0,47 g, 3,7 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble omrørt til romtemperatur natten over hvoretter CH2C12ble inndampet og den urene blandingen flashkromatografert (CH2Cl2:THF:MeOH (11:2:1); Si-gel). De oppsamlede fraksjonene ble oppløst i H20, og den svakt uklare vandige oppløsningen ble ekstrahert med EtOAc. Det organiske laget ble tørket (Na2S04) og inndampet og dette ga 0,18 g (35 %) av undertittelforbindelsen.

<l>H NMR (500 MHz; CDC13); 5 9,5 (b, 1H); 7,77 (dd, 1H); 7,43 (m, 2H); 7,37-7,21 (m, 6H); 6,63 (d, 1H); 6,59 (m, 1H); 5,20 (d, 2H); 4,67 (d, 0,5H); 4,58 (dd, 0,5H); 4,40 (m, 2H); 4,07 (dd, 0,5H); 4,00 (dd, 0,5H); 2,83 (m, 1H); 3,75 (s, 3H); 3,69 (m, 2H); 3,48 (m, 1H); 3,21 (m, 1H); 2,28 (s, 3H); 2,05-1,94 (m, 1H); 1,95-1,75 (m, 3H).

(ii) (R,S)-(3-metoksy-5-metylfenyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HCI

En blanding av (R,S)-(3-metoksy-5-metylfenyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z) (100 mg; 0,17 mmol; fra trinn (i) ovenfor), kons. HCl/vandig (10 dråper) og Pd/C (10 %) i 10 ml EtOH ble hydrogenert ved romtemperatur og atmosfæretrykk i 2 timer. Den resulterende blanding ble filtrert gjennom Hyflo, konsentrert og oppløst i et minimum mengde vann. Frysetørking ga 75 mg (90 %) av tittelforbindelsen (renhet 92 % ved

HPLC).

LC-LM m/z 440 (M + i)+

Eksempel 27

(R,S)-(2,5-dimetoksyfenyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc (i) (R,SH2,5-dimetoksyfenyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z)

En oppløsning av (R,S)-3-hydroksy-2-(2,5-dimetoksyfenyl)-propionsyre (0,23 g; 1,0 mmol; fra eksempel O ovenfor) i DMF (10 ml) ble avkjølt ved 0°C. H-Pro-Pab(Z) x 2HC1 (0,500 g; 1,1 mmol; fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i internasjonal patentsøknad WO 97/02284), TBTU (0,353 g; 1,1 mmol) og DIPEA (0,517 g; 4,0 mmol) ble tilsatt (i denne rekkefølge) og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur i 3 dager. DMF ble inndampet og den resulterende blanding ble renset ved RPLC (CH3CN:NH40Ac (10 %) (40:60)). CH3CN ble inndampet og den vandige fasen ekstrahert med EtOAc. Den organiske fasen ble tørket (Na2S04) og inndampet til tørrhet. Undertittelproduktet (400 mg; 68 %) ble isolert som et lys rosa farget fast stoff.

'H NMR (500 MHz; CDC13); 8 7,19 (d, 3H); 7,43 (dd, 1H); 7,43 (dt, 1H); 7,30 (d, 1H); 6,82-6,72 (m, 4H); 6,68 (d, 1H); 5,20 (d, 3H); 4,70-4,57 (m, 1H); 4,52-4,30 (m, 5H); 3,96 (m, 1H); 3,72 (s, 3H); 3,70 (m, 1H); 3,60 (s, 3H); 3,65-3,45 (m, 2H); 3,18-3,02 (m, 1H); 2,29 (m, 1H); 2,04-1,96 (m, 1H); 1,95-1,74 (m, 4H)

(ii) (R,S)-(2,5-dimetoksyfenyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc

Eddiksyre (36 ul) og Pd/C (5 %; 0,190 g) ble tilsatt til en oppløsning av (R,S)-(2,5-dimetoksyfenyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z) (0,375 g; 0,64 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i EtOH (10 ml). Oppløsningen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk og romtemperatur i 3,5 timer. Blandingen ble filtrert gjennom Hyflo og den resulterende oppløsning ble konsentrert, oppløst i en minimum mengde vann og frysetørket hvilket ga 0,174 g (88 %; renhet 92,1 %) av hvite krystaller.

LC-MS m/z 455 (M+l)+

Eksempel 28

(R,S)-(3,5-dimetoksyfenyl)-CH(CH20H)-C(0)-Pro-Pab(Z)

(i) (R,S)-(3^dimetoksyfenyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HCI

En blanding av (R,S)-3-hydroksy-2-(3,5-dimetoksyfenyl)-propionsyre (0,18 g; 0,8 mmol; fra eksempel P ovenfor), H-Pro-Pab(Z) x 2 HCI (0,40 g; 0,88 mmol; fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i internasjonal patentsøknad nr WO 97/02284) og TBTU (0,28 g; 0,88 mmol) i 10 ml DMF ble avkjølt på et isbad, og DIPEA (0,39 g; 3,0 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur natten over, hvoretter den resulterende blanding ble konsentrert. Råproduktet ble flashkromatografert (CH2CI2: THFrMeOH (10:3:1); Si-gel). Vann ble tilsatt til de oppsamlede fraksjonene og den resulterende blanding ble ekstrahert med EtOAc. Det organiske laget ble tørket (Na2S04) og inndampet hvilket ga 0,32 g (68 %) av undertittelforbindelsen.

'H NMR (500 MHz; CDC13); 8 7,76 (t, 1H); 7,43 (dd, 1H); 7,37-7,20 (m, 6H); 6,40 (d, 2H); 5,20 (d, 2H); 4,65-4,56 (m, 2H); 4,48-4,32 (m, 2H); 4,09-3,98 (m, 4H); 3,82 (m, 2H); 3,75 (s, 3H); 3,66 (s, 3H); 2,53-3,45 (m, 1H); 3,28-3,21 (m, 1H); 2,30-2,18 (m, 1H); 2,04-1,76 (m, 5H).

(ii) (R,S)-3,5-dimetoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HCI

10 dråper av kons. HCI og Pd/C (10 %) ble tilsatt til en oppløsning av (R,S)-(3,5-dimetoksyfenyl)-CH(CH2OH-C(0)-Pro-Pab(Z) (0,16 g; 0,27 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i EtOH (10 ml). Blandingen ble hydrogenert ved romtemperatur og atmosfæretrykk i 2 timer. Den resulterende blanding ble filtrert gjennom Hyflo og inndampet til tørrhet og dette ga 0,14 g (100 %) av tittelforbindelsen (renhet 94,2 % ved

HPLC)

FAB-MS m/z 455 (M+ 1)+

Eksempel 29

(R,S)-3,4-(metyIendioksyfenyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HCI

(i) (R,SM3,4-metylendioksyfenyl)-CH(CH2OH)-C(0>Pro-Pab(Z)

En oppløsning av (R^J-S-hydroksy^-CS^-metylendioksyfenyl^ropionsyre (0,21 g, 1,0 mmol; fra eksempel Q ovenfor), H-Pro-Pab(Z) x 2HC1 (0,50 g; 1,1 mmol; fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i internasjonal patentsøknad WO 97/02284), TBTU (0,35 g, 1,1 mmol) og DIPEA (0,47 g, 3,7 mmol) i CH2C12(10 ml) ble omrørt i 7 dager. Den resulterende blanding ble inndampet og råproduktet ble renset ved flashkromatografi (CH2C12:THF (7:3)). De kombinerte fraksjonene av interesse ble konsentrert og råproduktet ble oppløst i EtOAc. Oppløsningen ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og konsentrert og dette ga 0,28 g (49 %) av undertittelforbindelsen.

'H NMR (300 MHz; CDC13); 8 7,79 (d, 1H); 7,72 (d, 1H); 7,42 (m, 2H); 7,36-7,25 (m, 4H); 7,22 (dd, 2H); 6,76-7,57 (m, 3H); 5,91 (s, 2H); 5,87 (dd, 1H); 5,19 (d, 2H); 4,62-4,52 (m, 1H); 4,45-4,30 (m, 1H); 4,00-3,90 (m, 1H); 3,84-3,74 (m, 1H); 3,64 (m, 1H); 3,22 (m, 1H); 2,28-2,23 (m, 1H); 2,23-2,15 (m, 1H); 2,03-1,75 (m, 4H).

(ii) (R,S)-3,4-metylendioksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HCI

6 dråper av kons. HCI og Pd/C (10 %) ble tilsatt til en oppløsning av (R,S)-(3,4-metylendioksyfenyl)-CH(CH2OH-C(0)-Pro-Pab(Z) (90 mg; 0,16 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i EtOH (10 ml). Blandingen ble hydrogenert ved romtemperatur og atmosfæretrykk i 2 timer. Den resulterende blanding ble filtrert gjennom Hyflo og inndampet til tørrhet hvilket ga 69 mg (92 %) av tittelforbindelsen.

FAB-MS 439 (M+ 1)+

<l3>C NMR (100 MHz; CDCI3) (karbonyl- og amidinkarboner; kompleks på grunn av rotamerer og/eller diastereomerer) 174, 96,174,79,173,04,166,58,172,99,166,45.

Eksempel 30

(S)- eller (R)-3-(l-naftyl)-CH(CH20H)-C(0)-Pro-Pab

(i) (R)- og (S)-3-(l-naftyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z)

En oppløsning av (RS)-3-hydroksy-2-(l-naftyl)-propionsyre (0,3 g; 1,39 mmol; fra eksempel R ovenfor), H-Pro-Pab(Z) (0,692 g; 1,53 mmol; fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i internasjonal patentsøknad nr WO 97/02284) og TB TU (0,490 g; 1,53 mmol) i DMF (10 ml) ble avkjølt ved 0°C og DffEA (0,93 g; 5,55 mmol) ble tilsatt. Den resulterende blanding ble omrørt ved romtemperatur i 60 timer. DMF ble delvis inndampet og resten helt på 400 ml vann. pH-verdien ble justert til 9 (NaHC03/vandig) og oppløsningen ekstrahert med 3 x 100 ml EtOAc. De kombinerte organiske fasene ble vasket med NaHC03/vandig, vann og saltoppløsning, tørket (Na2S04) og inndampet. Preparativ HPLC (CH3CN:NH40Ac (0,1 M) (45:55)) separerte to diastereomerer: forbindelse 30A (262 mg; 0,45 mmol; renhet 92,4 % ved HPLC; hurtigere beveget diastereomer) og forbindelse forbindelse 30B (199 mg; 0,34 mmol; renhet 99,9 % ved HPLC; langsommere beveget diastereomer).

LC-MS m/z 580 (M + 1)<+>(begge diasteromerer)

(ii) (S)- eller (R)-3-(l-naftyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HCI

Pd/C (10 %) ble tilsatt til en oppløsning av forbindelse 30B (190 mg; 0,16 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i EtOH (10 ml) og HCl/vandig (1 M; 0,66 ml), og blandingen ble hydrogenert i 3 timer ved romtemperatur og atmosfæretrykk. Den resulterende blanding ble filtrert gjennom Hyflo og oppløsningen ble inndampet. Vann ble tilsatt og oppløsningen ble frysetørket og dette ga 157 mg (99,4 %) av et hvitt, skumaktig materiale (renhet 99,8 % ved HPLC).

LC-MS m/z 445 (M+l)<+>

Eksempel 31

(R,S)-3^-dimetoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab x HOAc (i) (R,S)-3,5-dimetoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Az*-Pab(Z)

En oppløsning av (R,S)-3-hydroksy-2-(3,5-dimetoksyfenyl)propionsyre (0,27 g; 1,2 mmol; fra eksempel W ovenfor) i DMF (10 ml) ble avkjølt til 0°C. H-Aze-Pab(Z) x 2HC1 (0,57 g; 1,3 mmol; fra eksempel A ovenfor), TBTU (0,42 g; 1,3 mmol) og DIPEA (0,54 g, 4,2 mmol) ble tilsatt i den angitte rekkefølge, og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur i 2 dager. DMF ble inndampet og råproduktet ble renset ved flashkromatografi på en silisiumdioksydgelkolonne ved eluering med CH2Cl2:THF:MeOH (80:30:5) og dette ga 230 mg (34 %) av undertittelproduktet.

<J>H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 8,20 (d, 1H); 7,75 (t, 2H); 7,40 (t, 2H); 7,30 (m, 5H); 6,40 (s, 1H); 6,73 (m, 1H); 6,30 (s, 1H); 5,20 (d, 2H); 4,85 (m, 1H); 4,40 (m, 2H); 4,05 (m, 2H); 3,75 (s, 6H); 3,65 (s, 3H); 2,55 (m, 1H); 2,35 (m, 1H)

(ii) (R,S)-3f5-dimetoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Pd/C (10 %) ble tilsatt til en oppløsning av (R,S)-3,5-dimetoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab(Z) (270 mg; 0,42 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i EtOH (10 ml) og HOAc (10 dråper), og blandingen ble hydrogenert i 2 timer ved romtemperatur og atmosfæretrykk. Den resulterende blandingen ble filtrert gjennom Hyflo. Oppløsningen ble inndampet, vann ble tilsatt og oppløsningen ble frysetørket, og dette ga 170 mg (89 %) av tittelforbindelsen.

FAB-MS m/z 441 (M + 1)<+>

'H NMR (400 MHz; D2OH; 8 7,8 (m, 1H); 7,68 (d, 1H); 7,57 (m, 1H); 7,39 (d, 1H); 6,60 (m, 1H); 6,54 (m, 1H); 6,45 (m, 1H); 5,00 (m, 1H); 4,50 (m, 3H); 4,10 (m, 3H); 3,80 (m, 9H); 2,60 (m, 1H); 2,28 (m, 1H); 1,95 (s, 3H)

<I3>C NMR (100 MHz, D20) karbonyl- og amidinkarboner: 8 182,0; 174,4; 174,0; (rotamerer og/eller diastereomerer); 173,2; 172,9; 172,8 (rotamerer og/eller diastereomerer)

Eksempel 32

(R,S)-2-klor-5-aminofeyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab x HOAc (i) (R,S)-2-klor-5-(Boc-ammo)fenyl-CH(CH20H)-C(0)-Aze-Pab(Z)

En oppløsning av (R,S)-3-hydroksy-2-(2-klor-5-(Boc-amino)fenyl)propionsyre (0,22 g; 0,7 mmol; fra eksempel X ovenfor) i DMF (10 ml) ble avkjølt til 0°C. H-Aze-Pab x 2HC1 (0,32 g; 0,75 mmol; fra eksempel A ovenfor), TBTU (0,24 g, 0,75 mmol) og DIPEA (0,32 g, 2,5 mmol) ble tilsatt i den angitte rekkefølge, og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur i 2 dager. DMF ble inndampet og råproduktet ble renset ved flashkromatografi på en silisiumdioksydgelkolonne ved eluering med CH2Cl2:THF:MeOH (85:15:5) og dette ga (180 mg; 39 %) av undertittelproduktet.

'H NMR (300 MHz; CDC13); 5 9,45 (b, 1H); 8,23 (m, 0,5H); 7,95 (m, 0,5H); 7,65 (m, 3H); 7,20 (m, 10H); 5,15 (d, 2H); 4,85 (m, 1H); 4,5-3,6 (m, 9H); 2,40 (m, 2H); 1,45 (s, 9H).

(ii) (R,S)-2-klor-5-aminofenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel 23(ii) ovenfor fra (R,S)-2-klor-5-(Boc-amino)fenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab(Z) (170 g; 0,26 mmol; fra trinn (i) ovenfor), TFA (5,3 mg; 69 mmol) og tioanisol (1,6 g; 13 mmol) og dette ga 40 mg (32 %) av tittelproduktet.

<l>H NMR (400 MHz; D2OH; 6 7,62 (m, 1H); 7,60 (d, 1H); 7,40 (m, 1H); 7,30 (m, 1H); 7,05 (t, 1H); 6,60 (m, 2H); 4,90 (m, 1H); 4,41 (s, 1H); 3,90 (m, 3H); 3,65 (m, 1H); 3,60 (m, 1H); 2,40 (m, 1H); 2,05 (m, 1H); 1,80 (s, 3H)

Eksempel 33

( S)- og (R)-3-metylfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab x HOAc (i) (R,S)-3-metylfenyl-CH(CH20H)-C(0)-Aze-Pab(Z)

En oppløsning av (R,S)-3-hydroksy-2-(3-metylfenyl)propionsyre (0,18 g; 1 mmol; fra eksempel Y ovenfor) i DMF (10 ml) ble avkjølt til 0°C. H-Aze-Pab(Z) x 2HC1 (0,48 g, 1,1 mmol; fra eksempel A ovenfor), TBTU (0,35 g, 1,1 mmol) og DIPEA (0,52 g; 4 mmol) ble tilsatt i den angitte rekkefølge, og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur i 2 dager. DMF ble inndampet, det resulterende materialet ble oppløst i NaHCCtyvandig (300 ml), og EtOAc (100 ml) ble tilsatt. Fasene ble separert og den vandige fasen ble ekstrahert med EtOAc (4 x 75 ml). Den kombinerte organiske fasen ble vasket med NaHCO;*/ vandig (1 x 75 ml), tørket (Na2S04) og inndampet. Råproduktet (0,3 g) ble renset ved RPLC (CH3CN:NH40Ac (10 %) (40:60)) og dette ga (118 mg; 20 %) av undertittelproduktet.

LC-MS m/z 528 (M+ 1)+

<!>H NMR (500 MHz; CDC13); 5 8,25 (m, 1H); 7,77 (d, 1H); 7,40 (m, 8H); 7,12 (m, 4H); 5,25 (s, 2H); 4,93 (m, 1H); 4,50 (m, 2H); 4,10 (m, 2H); 3,70 (m, 2H); 3,60 (m, 1H); 2,60 (m, 1H); 2,35 (s, 3H)

(ii) (S)- og (R)-3-metylfenyl-CH(CH20H)-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Pd/C (5 %; 0,13 g) ble tilsatt til en oppløsning av (R,S)-3-metylfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab(Z) (114 mg; 0,22 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i EtOH (10 ml) og HOAc (17 ul) og blandingen ble hydrogenert i 3 timer ved romtemperatur og atmosfæretrykk. Den resulterende blanding ble filtrert gjennom Hyflo. Oppløsningen ble inndampet, vann ble tilsatt og blandingen ble vasket med EtOAc og oppløsningen ble frysetørket og dette ga 48 mg av et råprodukt. RPLC (CH3CN:NH4OAc (10 %) (20:80)), separerte diastereomerene: forbindelse 33A (hurtigere beveget diastereomer; 17 mg) og forbindelse 33B (langsommere beveget diastereomer; 15 mg; renhet 99,1 %).

Forbindelse 33A:

LC-MS m/z 395 (M+l)+

<]>H NMR (300 MHz; CDC13); 8 7,80 (s, 1H); 7,71 (d, 1H); 7,54 (d, 1H); 7,39 (d, 1H); 7,35 (d, 1H); 7,24 (m, 2H); 7,17 (d, 1H); 5,17 (m, 0,5H); 4,80 (m, 0,5H); 4,60 (s, 2H); 4,2-3,6 (m, 5H); 2,60 (m, 1H); 2,36 (s, 2H); 2,30 (s, 2H); 2,22 (m, 1H); 1,93 (s, 1H)

,<3>C NMR (75 MHz, D20) karbonyl- og amidinkarboner: 8 175,7; 174,6; (rotamerer); 173,5; 173,0 (rotamerer)

Eksempel 34

(S)- eller (R)-2,5-dimetylfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc (i) (R)- og (S)-2,5-dimetyIfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z)

En oppløsning av (R,S)-3-hydroksy-2-(2,5-dimetylfenyl)propionsyre (0,27 g, 1,2 mmol; fra eksempel Z ovenfor) i DMF (10 ml) ble avkjølt til 0°C. H-Pro-Pab(Z) x 2HC1 (0,75 g; 1,65 mmol; fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i internasjonal patentsøknad WO 97/0,2284), TBTU (0,53 g, 1,65 mmol) og DIPEA (0,78 g, 6 mmol) ble tilsatt i den angitte rekkefølge og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur i 2 dager. DMF ble inndampet, NaHCOa/vandig ble tilsatt og vannoppløsningen ble ekstrahert med EtOAc (3 x 30 ml). Den kombinerte organiske fasen ble vasket med NaHC03/vandig (2 x 20 ml), H20, tørket (Na2S04) og inndampet og dette ga 0,35 g (42 %) av et råprodukt. Preparativ HPLC (CH3CN:NH40Ac (10 %); (45:55 til 80:20)) separerte diastereomerene: forbindelse 34A (hurtigere beveget diastereomer; 136 mg; 32 %, renhet 97,6 %) og forbindelse 34B (langsommere beveget diastereomer; 197 mg; 47 %; renhet 98,4 %).

Forbindelse 34B:

<]>H NMR (500 MHz; CDC13); 6 7,83 (d, 2H); 7,45 (d, 2H); 7,40 (m, 1H); 7,35 (m, 4H); 7,08 (d, 1H); 6,99 (d, 1H); 5,22 (s, 2H); 4,63 (d, 1H); 4,49 (m, 2H); 4,04 (dd, 1H); 3,95 (dd, 1H); 3,61 (dd, 1H); 3,53 (dt, 1H); 2,92 (m, 1H); 2,34 (3H); 2,32 (m, 1H); 2,26 (s, 3H); 1,73 (m, 3H)

(ii) (S)- eller (R>-2,5-dimetylfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc

Til en oppløsning av (R)- eller (S)-2,5-dimetylfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z) (61 mg; 0,11 mmol; forbindelse 34B fra trinn (i) ovenfor) i EtOH (10 ml) og HOAc (10 dråper) ble tilsatt Pd/C (5 %\45 mg) og blandingen ble hydrogenert i 5 timer ved romtemperatur og atmosfæretrykk. Den resulterende blanding ble filtrert gjennom Hyflo, oppløsningen ble konsentrert, vann ble tilsatt og oppløsningen ble frysetørket og dette ga 45 mg (89 %, renhet 97,8 %) av tittelforbindelsen som et hvitt pulver.

LC-MS m/z 423 (M+l)+

<]>H NMR (500 MHz; D20); 8 7,65 (d, 2H); 7,56 (d, 1H); 7,40 (d, 2H); 7,10 (m, 2H); 7,00 (m, 2H); 4,41 (s, 2H); 4,32 (dd, 1H); 4,11 (dd, 1H); 3,91 (m, 1H); 3,64 (m, 1H);

3,55 (m, 2H); 2,98 (m, 1H); 2,26 (s, 3H); 2,18 (s, 3H); 2,05 (m, 1H); 1,80 (m, 6H); 1,65

(m, 2H)

Eksempel 35

(S)- eller (R)-4-hydroksy-3-metoks>fenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HCI

(i) (R)- og (S)-4-benzyloksy-3-metoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z)

En oppløsning av (R,S)-3-hydroksy-2-(4-benzyloksy-3-metoksyfenyl)propionsyre (0,27 g; 1,2 mmol; fra eksempel AA ovenfor) i DMF (10 ml) ble avkjølt til 0°C. H-Pro-Pab(Z) x 2HC1 (0,66 g; 1,46 mmol; fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i internasjonal patentsøknad WO 97/02284), TBTU (0,467 g; 1,46 mmol) og DIPEA (0,69 ml; 5,29 mmol) ble tilsatt i den angitte rekkefølge, og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur i 3 dager. DMF ble inndampet, NaHCOs/vandig ble tilsatt og vannoppløsningen ble ekstrahert med EtOAc (3 x 100 ml). Den kombinerte organiske fasen ble vasket med NaHCOa/vandig (1 x 20 ml), H20 og saltoppløsning, tørket (Na2SOit) og inndampet, hvilket ga 0,983 g (kvantitativt) av et råprodukt. Preparativ HPLC (CN3CN.NH4OAC(10 %) (50:50)) separerte diastereomerene: forbindelse 35A (den hurtigere bevegete diastereomeren; 136 mg; 32 %; renhet 98,5 %) og forbindelse 34B (langsommere beveget diastereomer; 163 mg; 47 %; renhet 99,2 %).

Forbindelse 35B:

'H NMR (400 MHz; CDC13); 8 7,77 (d, 2H); 7,42 (m, 4H); 7,34 (m, 9H); 6,81 (m, 2H), 6,70 (dd, 1H); 5,20 (s, 2H); 5,11 (s, 2H); 4,59 (m, 1H); 4,44 (m, 2H); 4,00 (m, 1H); 3,83 (m, 1H); 3,66 (m, 2H); 3,23 (m, 1H); 2,28 (m, 1H); 2,01 (m, 2H); 1,81 (m, 3H)

(ii) (S)- eller (R)-4-hydroksy-3-metoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HCI

Pd/C (10 %) ble tilsatt til en oppløsning av (R)- eller (S)-4-benzyloksy-3-metoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z) (1,57 mg; 0,24 mmol; forbindelse 35B fra trinn (i) ovenfor i EtOH (10 ml) og HCl/vandig (1 M; 0,5 ml) og blandingen ble hydrogenert i 4,5 timer ved romtemperatur og atmosfæretrykk. Den resulterende blandingen ble filtrert gjennom Hyflo, oppløsningen ble konsentrert, vann ble tilsatt og oppløsningen ble frysetørket hvilket ga 104 mg (90,9 %; renhet 97,4 %) av tittelforbindelsen som et hvitt pulver.

LC-MS m/z 41 (M+ 1)+

<!>H NMR (400 MHz; D20); 6 7,70 (d, 2H); 7,57 (d, 1H); 6,90 (s, 1H); 6,75 (s, 2H); 4,51 (s, 2H); 4,44 (dd, 1H); 4,07 (m, 1H); 3,95 (dd, 1H); 3,83 (s, 3H); 3,67 (dd, 1H); 3,40 (m, 1H); 3,30 (m, 1H); 2,11 (m, 1H); 1,97 (m, 2H); 1,82 (m, 1H)

<13>C NMR (100 MHz; D20) karbonyl- og amidinkarboner: 5 174,8; 173,9; 173,1; 166,3

(rotamerer)

Eksempel 36

(S)- eller (R)-3,S-diklorfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc (i) (R)- og (S)-3,5-diklorfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z)

En oppløsning av (R,S)-3-hydroksy-2-(3,5-dildorfenyl)propionsyre (0,35 g; 1,5 mmol; fra eksempel AB ovenfor) i DMF (10 ml) ble avkjølt til 0°C. H-Pro-Pab(Z) x 2HC1 (0,75 g; 1,65 mmol; fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i internasjonal patentsøknad WO 97/02284), TBTU (0,53 g; 1,65 mmol) og DIPEA (0,78 g; 6 mmol) ble tilsatt i den angitte rekkefølge, og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur natten over. DMF ble inndampet, H20 ble tilsatt, og vannoppløsningen ekstrahert med EtOAc (3 x 30 ml). Den kombinerte organiske fasen ble vasket med NaHCOs/vandig (2 x 20 ml), H20, tørket (Na2S04) og inndampet hvilket ga 0,32 g (36 %) av et råprodukt. Flashkromatografi på silisiumdioksydgel (110 g) ved bruk av en gradient fra 100 % EtOAc til EtOAc:EtOH (100:5) separerte diastereomerene: forbindelse 36A (hurtigere beveget diastereomer; 153 mg; 34 %; renhet 89,2 %) og forbindelse 36B (langsommere beveget diastereomer; 166 mg; 37 %; renhet 85,2 %).

Forbindelse 36B:

'H NMR (500 MHz; CDC13); 8 7,73 (d, 2H); 7,43 (d, 2H); 7,34 (m, 2H); 7,26 (m, 2H); 7,19 (d, 2H); 5,20 (s, 2H); 4,56 (dd, 1H); 4,40 (m, 2H); 3,91 (m, 2H); 3,72 (m, 2H); 3,60 (b, 1H); 3,27 (q, 1H); 2,22 (m, 1H); 2,03 (m, 1H); 1,94 (m, 1H); 1,89 (m, 1H); 1,75

(b, 1H)

(ii) ( S)- eller (R)-3,5-diklorfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet ovenfor i eksempel 23 (ii) fra (R)- eller (S)-3,5-diklorfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z) (130 mg; 0,22 mmol; forbindelse 26B fra trinn (i) ovenfor), anisol (35 mg; 0,33 mol) og trifluormetansulfonsyre (0,16 g; 1,1 mmol) hvilket ga 15 mg (13 %) av tittelforbindelsen.

LC-MS m/z 463,465 (M + 1)<+>

<]>H NMR (500 MHz; D20); 8 7,64 (d, 2H); 7,56 (d, 1H); 7,38 (t, 1H); 7,34 (t, 1H); 7,21 (d, 2H); 7,07 (s, 1H); 4,39 (d, 1H); 4,30 (dd, 1H); 4,00 (m, 3H); 3,68 (m, 2H); 3,50 (m, 1H); 3,26 (m, 1H); 2,10 (m, 1H); 2,08 (m, 1H); 1,81 (m, 3H); 1,73 (m, 1H)

Eksempel 37

(S)- eller (R)-23-dimetoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc (i) (R)- og (S)-2,3-dimetoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z)

En oppløsning av (R,S)-3-hydroksy-2-(2,3-dimetoksyfenyl)propionsyre (0,21 g, 0,93 mmol; fra eksempel AC ovenfor) i DMF (10 ml) ble avkjølt til 0°C. H-Pro-Pab(Z) x 2HC1 (0,46 g; 1,02 mmol; fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i internasjonal patentsøknad WO 97/02284), TBTU (0,32 g; 1,0 mmol) og DIPEA (0,48 g; 3,7 mmol) ble tilsatt i den angitte rekkefølge, og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur natten over. DMF ble inndampet, NaHCO^vandig ble tilsatt, og vannoppløsningen ble ekstrahert med EtOAc (4 x 50 ml). Den kombinerte organiske fasen ble vasket med NaHCOyvandig (2 x 20 ml), H20, tørket (Na2S04) og inndampet hvilket ga 0,34 g (62 %) av et råprodukt. Preparativ HPLC (C^CNiNrLtOAc (10 %) (40:60)) separerte diastereomer ene: forbindelse 37A (hurtigere beveget diastereomer; 70 mg; 24 %) og forbindelse 37B (langsommere beveget diastereomer; 57 mg; 21 %).

Forbindelse 37B:

LC-MS m/z 590 (M+ 1)+

(ii) (S)- eller (R)-2,3-dimetoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc

Pd/C (5 %; 44 mg) ble tilsatt til en oppløsnig av (R)- eller (S)-2,3-dimetoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z) (57 mg; 0,097 mmol; forbindelse 37B fra trinn (i) ovenfor) i EtOH (10 ml) og HOAc (15 mg), og blandingen ble hydrogenert i 4,5 timer ved romtemperatur og atmosfæretrykk. Den resulterende blandingen ble filtrert gjennom Hyflo, oppløsningen ble konsentrert, vann ble tilsatt og oppløsningen ble frysetørket hvilket ga 44 mg (88 %, renhet 97,2 %) av tittelforbindelsen som et hvitt pulver.

LC-MS m/z 455 (M+l)+

'H NMR (300 MHz; D20); 5 7,78 (d, 2H); 7,50 (d, 2H); 7,20 (m, 2H); 6,90 (d, 1H); 4,50 (s, 2H); 4,40 (m, 4H); 4,08 (m, 2H); 3,90 (s, 3H); 3,87 (s, 3H); 3,80 (m, 6H); 3,32 (m, 1H); 2,18 (m, 1H); 1,92 (m, 3H)

Eksempel 38

(S)- eller (R)-3-metoksy-5-klorfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HCI

(i) (R)- og (S)-3-metoksy-5-klorfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z)

En oppløsning av (R,S)-3-hydroksy-2-(3-metoksy-5-klorfenyl)proionsyre (0,112 g; 0,49 mmol; fra eksempel AD ovenfor) i DMF (4 ml) ble avkjølt til 0°C. H-Pro-Pab(Z) x 2HC1 (0,242 g; 0,53 mmol; fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i internasjonal patentsøknad WO 97/02284), TBTU (0,171 g, 0,53 mmol) og DIPEA (0,33 ml; 2,12 mmol) ble tilsatt i den angitte rekkefølge, og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur i 5 dager. DMF ble inndampet, H20 ble tilsatt, oppløsningens pH-verdi ble justert til 9 (NaHCOs/vandig) og vannoppløsningen ble ekstrahert med EtOAc (3 x 30 ml). Den kombinerte organiske fasen ble vasket med NaHCOs/vandig (2 x 20 ml), H20 og saltoppløsning, tørket (Na2S04) og inndampet hvilket ga 0,242 g (83 %) av et råprodukt. Preparativ HPLC (CH3CN:10 % NH4OAC(45:55)) separerte diastereomerene: forbindelse 38A, den hurtigere bevegete diastereomeren (50 mg; 33 %) og forbindelse 38B, den langsommere bevegete diastereomeren (44,8 mg; 31 %)

Forbindelse 38B:

LC-MS m/z 592, 594 (M + 1)<+>

(ii) (S)- eller (R)-3-metoksy-5-klorfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HCI

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel 23(ii) ovenfor fra (R)- eller (S)-3-metoksy-5-klorfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z) (forbindelse 38B fra trinn (i) ovenfor; 44 mg; 0,074 mmol), TF A (1,53 ml; 20 mmol) og tioanisol (0,44 ml; 3,7 mmol) hvilket ga 18 mg (49 %) av tittelproduktet, renhet 93,5 %.

<l>H NMR (500 MHz; CD3OD): 8 9,24 (b, 1H); 8,73 (b, 1H); 7,77 (d, 2H); 7,57 (d, 2H); 6,96 (t, 1H); 6,86 (m, 2H); 4,51 (s, 2H); 4,45 (dd, 1H); 4,04 (m, 1H); 3,86 (m, 1H); 3,71 (m, 1H); 3,40 (m, 1H); 2,15 (m, 1H); 1,99 (m, 2H); 1,87 (m, 1H)

Eksempel 39

( Sy eller (R)-2-metyl-5-metoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc (i) (R)- og (S)-2-metyl-5-metoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z)

En oppløsning av (R,S)-3-hydroksy-2-(2-metyl-5-metoksyfenyl)propionsyre (0,168 g; 0,8 mmol; fra eksempel AE ovenfor) i DMF (10 ml) ble avkjølt til 0°C. H-Pro-Pab(Z) x 2HC1 (0,399 g; 0,88 mmol; fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i internasjonal patentsøknad WO 97/02284), TBTU (0,283 g; 0,88 mmol), og DIPEA (0,414 g; 3,2 mmol) ble tilsatt i den angitte rekkefølge, og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur i 3 dager. DMF ble inndampet, vann ble tilsatt, og vannoppløsningen ble ekstrahert med EtOAc (3 x 30 ml). Den kombinerte organiske fasen ble tørket (Na2S04) og inndampet. Preparativ HPLC (CH3CN/10 % NH4OAC(40:60)) separerte diastereomerene: forbindelse 39A (hurtigere beveget diastereomer, 147 mg; 64 %; renhet 92,8 %) og forbindelse 39B (langsommere beveget diastereomer; 147 mg; 64 %; renhet 99,1 %)

Forbindelse 39B

LC-MS m/z 573 (M + 1)<+>

'H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 7,76 (d, 2H); 7,50 (t, 1H); 7,42 (d, 2H); 7,33 (t, 1H); 7,27 (m, 3H); 7,08 (d, 1H); 6,71 (m, 2H); 5,19 (s, 1H); 4,58 (d, 1H); 4,40 (m, 2H); 4,03 (dd, 1H); 3,97 (t, 1H); 3,70 (s, 3H); 3,58 (m, 2H); 2,95 (q, 2H); 2,22 (m, 1H); 1,99 (m, 1H); 1,78 (m, 2H)

(ii) (S)- eller (R)-2-metyl-5-metoksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc

Pd/C (5 %; 70 mg) ble tilsatt til en oppløsning av forbindelse 39B (131 mg; 0,23 mmol) i EtOH (10 ml) og HOAc (13 ml) og blandingen ble hydrogenert i 3 timer ved romtemperatur og atmosfæretrykk. Den resulterende blandingen ble filtrert gjennom Hyflo, oppløsningen ble konsentrert, vann ble tilsatt og oppløsningen ble frysetørket, og dette ga 96 mg (84 %; renhet 95,9 %) av tittelforbindelsen.

<!>H NMR (400 MHz; D20); 8 7,78 (d, 2H); 7,54 (d, 2H); 6,86 (m, 2H); 6,75 (d, 1H); 4,72 (d, 1H); 4,54 (s, 1H); 4,46 (dd, 2H); 4,25 (m, 4,05 (t, 1H); 3,77 (s, 3H); 3,70 (dd, 1H); 3,64 (m, 1H); 3,10 (m, 1H); 2,36 (s, 2H); 2,15 (m, 1H); 1,95 (m, 4H); 1,76 (m, 1H)

,<3>C-NMR (100 MHz; D20): karbonyl- og amidinkarboner 176,0; 174,3; 167,6

LC-MS m/z 439 (M + 1)<+>

Eksempel 40

(R,S)-Ph-C(Me)(CH2OMe>-C(0)-Pro-Pab(Z)

En oppløsning av (R,S)-2-metyl-2-fenyl-3-metoksypropionsyre (0,40 g; 2,1 mmol; fra eksempel AF ovenfor) i DMF (10 ml) ble avkjølt til 0°C. H-Pro-Pab(Z) x 2HC1 (0,93 g; 2,1 mmol; fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i internasjonal patentsøknad WO 97/02284)), TBTU (0,54 g; 2,1 mmol), og DIPEA (0,90 g, 7 mmol) ble tilsatt i den angitte rekkefølge og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur i 2 dager. DMF ble inndampet, NaHCOj/vandig ble tilsatt og vannoppløsningen ble ekstrahert med EtOAc (3 x 30 ml). Den kombinerte organiske fasen ble vasket med NaHCOs/vandig (2 x 20 ml), H20, tørket (Na2SO,0 og inndampet hvilket ga råproduktet som ble ytterligere renset ved flashkromatografi på silisiumdioksydgel ved eluering ved bruk av CH2Cl2THF:MeOH (90:10:2) og dette ga 0,50 g (44 % over de sluttelige 3 trinnene).

'H NMR (400 MHz; CDC13); 8 7,83 (m, 2H); 7,41 (d, 2H); 7,30 (m, 9H); 7,11 (d, lh); 5,21 (s, 2H); 4,77 (m, 1H); 4,70 (m, 1H); 4,53 (m, 1H); 4,43 (m, 1H); 4,12 (, 1H); 3,90 (d, 1H); 3,62 (t, 1H); 3,23 (s, 3H); 2,90 (m, 2H); 2,18 (m, 1H); 2,03 (m, 1H); 1,8-1,4 (m, 9H)

<13>C NMR (100 MHz; CDC13) karbonyl- og amidinkarboner: 8 174,6; 173,1; 172,2; 172,0; 167,9; 164,4 (diastereomerer og/eller rotamerer)

Eksempel 41

(R,S)-Ph-C(Me)(CH2OMe)-C(0)-Pro-Pab x HCI

Pd/C (10 %, 20 mg) ble tilsatt til en oppløsning av (R,S)-Ph-C(Me)(CH2OMe)-C(0)-Pro-Pab(Z) (190 mg; 0,34 mmol; fra eksempel 40 ovenfor) i EtOH (10 ml) og HCI/

vandig (kons; 10 dråper), og blandingen ble hydrogenert i 2 timer ved romtemperatur og atmosfæretrykk. Den resulterende blanding ble filtrert gjennom Hyflo, oppløsningen ble konsentrert, vann ble tilsatt og oppløsningen ble frysetørket, hvilket ga 160 mg (100 %; renhet 77 %) av tittelforbindelsen.

LC-MS m/z 423 (M+ 1)+

<*>H NMR (500 MHz; D20); 8 7,80 (m, 2H); 7,55 (m, 2H); 7,35 (m, 5H); 4,50 (m, 3H); 3,88 (d, 0,5H); 3,78 (m, 1H); 3,76 (d, 0,5H); 3,21 (d, 3H); 3,15 (m, 1H); 2,78 (m, 1H); 2,18 (m, 1H); 1,70 (m, 3H); 1,63 (d, 3H)

<13>C NMR (100 MHz; D20): karbonyl- og amidinkarboner: 8 176,4; 176,3; 176,1; 175,9; 167,2; 167,1 (diastereomerer og/eller rotamerer)

Eksempel 42

(S)- eller (R)-2-klor-3-metylfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab x HOAc (i) (R)- og (S)-2-klor-3-metylfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab(Z)

En oppløsning av (R,S)-3-hydroksy-2-(2-klor-3-metylfenyl)propionsyre (0,3 g; 1,4 mmol; fra eksempel AG ovenfor) i DMF (10 ml) ble avkjølt til 0°C. H-Aze-Pab(Z) x 2HC1 (0,739 g; 1,68 mmol; fra eksempel A ovenfor), TBTU 0,495 g; 1,54 mmol) og DIPEA (0,94 g, 5,6 mmol) ble tilsatt i den angitte rekkefølge, og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur i 5 dager. Reaksjonsblandingen ble konsentrert, oppløst i vann (400 ml), hvoretter pH-verdien ble justert til 9 med NaHCOs/vandig. Den resulterende blandingen ble ekstrahert med EtOAc (3 x 100 ml). Den kombinerte organiske fasen ble vasket med NaHCOa/vandig, vann og saltoppløsning, tørket

(Na2S04) og konsentrert. Råproduktet (0,636 g) ble renset ved RPLC (CH3CN: 10 % NfttOAc (40:60)), hvorved diastereomerer ble separert: forbindelse 42A (hurtigere beveget diastereomer; 127 mg; 32 %; renhet 95 %) og forbindelse 42B (langsommere beveget diastereomer; 131 mg; 33 %; renhet 85 %).

Forbindelse 42B:

LC-MS m/z 563, 564 (M + 1)<+>

'H NMR (400 MHz; CDCI3); 5 8,23 (t, 1H), 7,80 (d, 2H); 7,44 (d, 2H); 7,33 (m, 4H); 7,18 (m, 3H); 5,21 (s, 2H); 4,86 8dd, 1H); 4,50 (m, 2H); 4,28 (dd, 1H); 4,13 (m, 1H); 3,96 (dd, 1H); 3,75 (dd, 1H); 3,62 (q, 1H); 2,60 (m, 1H); 2,41 (s, 3H); 2,31 (m, 1H)

(ii) (R)- eller (S)-2-klor-3-metylfenyl-CH(CH2OH>C(0)-Aze-Pab x HOAc

Fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel 23(ii) ovenfor fra (R)- eller (S)-2-klor-3-metylfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Aze-Pab(Z) (forbindelse 42B fra trinn (i) ovenfor; 129 mg; 0,23 mmol), TFA (4,7 ml; 62 mmol) og tioanisol (1,35 ml; 11,5 mmol) og dette ga 45 mg (40,2 %) av tittelproduktet (renhet 90,4 %)

LC-MS m/z 429, 431 (M + 1)<+>

<*>H NMR (400 MHz; CDCI3); 8 7,77 (d, 2H); 7,55 (d, 2H); 7,26 (m, 2H); 7,19 (d, 1H); 4,75 (dd, 1H); 4,55 (s, 2H); 4,34 (m, 2H); 4,04 (dd, 1H); 3,88 (m, 1H); 3,70 (dd, 1H); 2,48 (m, 1H); 2,40 (s, 3H); 2,27 (m, 1H); 1,89 (s, 3H)

<13>C NMR (100 MHz; CD3OD) karbonyl- og amidinkarboner: 8 174,0; 172,9; 167,9

Eksempel 43

(S>- eller (R)-2,3-(metylendioksyfenyl-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc

Tittelforbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel 29 ovenfor fra (R,S)-3-hydroksy-2-(2,3-metylendioksyfenyl)propionsyre (0,26 g), og via (2,3-metylendioksyfenyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z), hvilken sistnevnte forbindelse ble separert (RPLC) i to diastereomerer; forbindelse 43A (hurtigere beveget diastereomer; 0,27 g; 40 %) og forbindelse 43B (langsommere beveget diastereomer; 0,18 g; 26 %). Ved fjerning av beskyttelse fra (R)- eller (S)-(2,3-metylendioksyfenyl)-CH(CH2OH)-C(0)-Pro-Pab(Z) (forbindelse 43B; 130 mg) ble 81 mg (72 %) av tittelforbindelsen fremstilt.

LC-MS m/z 439 (M + 1)<+>

Eksempel 44

Forbindelsene i eksempler 1-7,11,12,16-39,41,42 og 43 (som alle er forbindelser av formel I) ble testet i den ovenfor angitte test A og ble alle funnet å utvise en IC50TT-verdi på mindre enn 0,3 um.

Eksempel 45

Forbindelsene i eksempler 8,9,10,13,14,15 og 40 (som alle er forbindelser av formel Ia) ble testet i test A ovenfor og ble alle funnet å utvise en ICjoTT-verdi på over 1 um.

Eksempel 46

Forbindelsene i eksempler 8,9,10,13,14,15 og 40 (som alle er forbindelser av formel Ia) ble testet i test C ovenfor og ble alle funnet å utvise oral og/eller parenteral bio-tilgjengelighet i rotte som den tilsvarende aktive inhibitor av formel I.

Forkortelser

ATEN = azobisisobutyronitril

aq = vandig

Aze = azetidin-2-karboksylsyre

Boe = tert-butyloksykarbonyl

Bn = benzyl

Bu = butyl

Ch = cykloheksyl

DBU = l,8-diazabicyklo[5.4.0]undec-7-en

DCC = dicykloheksylkarbodiimid

DIPEA diisopropyletylamin

DMAP N,N-dimetylaminopyridin

DMF = dimetylformamid

DMSO dimetylsulfoksyd

EDC = l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidhydroklorid Et = etyl

EtOH = etanol

h = timer

HBTU = [N,N,N^N'-tetrametyl-0-(benzotriazo HCI = saltsyre

H-Hig= l-amidino-3-aminoetylpyrrolidin

H-Hig(Z) = 3-aminoetyl-1 -(N-benzyloksykarbonylamidino)pyrrolidin

HOAc = eddiksyre

H-Pab = l-amidino-4-aminometylbenzen

H-Pab(Z) = 4-aminometyl-l-(N-benzyloksykarbonylamidino)benzen

H-Pig = 1 -amidino-3 -aminometylpiperidin

H-Pig(Z) = 3-aminometyl-l-(N-benzyloksykarbonylamidino)piperidin

HPLC = høyytelse-væskekromatografi

Me = metyl

MeOH = metanol

MsCl = metansulfonylklorid

NBS = N-bromsuksinimid

Ph = fenyl

Pr = propyl

i-PrOH = i-propanol

RPLC = preparativ reversfase-høyytelse væskekromatografi

TBDMS = tert-butyldimetylsilyl

TB TU = [N,N,N^Nr-tetrametyl-0-(benzotriaz»l-l-yl)uroniumtefr TEA = Trietylamin

THF = Tetrahydrofuran

THP = Tetrahydropyranyl

TMS = Trimetylsilyl

p-TsOH = p-toluensulfonsyre

WSCI = vannoppløselig karbodiimid

Z = Benzyiokskarbonyl

Prefikser n, s, i og t har deres vanlige betydninger: normal, iso, sek og tertiær. Stereo-kjemien for aminosyrene er ved uteblivelse (S) hvis ikke annet er angitt.

Claims

1. Forbindelse,karakterisert vedat den har formel (I),

hvor R<1>representerer H eller Ci-6alkyl; R<2>og R<3>representerer uavhengig H eller Cm alkyl; Rx representerer et strakturelt fragment av formel (Ha),

hvor k, 1 og m uavhengig representerer 0,1 eller 2; R<4>og R<5>representerer uavhengig H, 1- eller 2-naftyl, Cm alkyl, fenyl eller metylendioksyfenyl (hvilke sistnevnte to grupper eventuelt er substituert med én eller flere av Cm alkyl (hvilken sistnevnte gruppe eventuelt er substituert med én eller flere halogensubstituenter), Cm alkoksy, halogen, hydroksy eller N(H)R<43>); R<43>representerer uavhengig H; Y representerer CH2eller (CIfetø n representerer 0,1,2,3 eller 4; og B representerer et strukturelt fragment av formel (TVa) eller (TVb),

hvor X<1>og X<2>uavhengig representerer en enkeltbinding eller CH2; eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

2. Forbindelse av formel (I), ifølge krav 1,karakterisertved at n representerer 2 og B representerer et strukturelt fragment av formel IVb, X<1>og X<2>representerer ikke begge CH2.

3. Forbindelse av formel (I), ifølge krav 1,karakterisertved at R<1>representerer H.

4. Forbindelse av formel (I), ifølge krav 1,karakterisertved at n representerer 1.

5. Forbindelse av formel (I), ifølge krav 1 eller krav 3-4,karakterisert vedat B representerer et strukturelt fragment av formel (TVa).

6. Forbindelse av formel (I), ifølge hvilket som helst av de foregående krav,karakterisert vedat fragmentet

er i S-konfigurasjonen.

7. Forbindelse av formel (I), ifølge krav 1,karakterisertved at R<4>og/eller R<5>(slik det passer) ikke representerer fenyl substituert med halogensubstituert Cm alkyl.

8. Forbindelse av formel (I), ifølge krav 1,karakterisertved at R<4>og/eller R<5>(slik det passer) ikke representerer metylendioksyfenyl.

9. Forbindelse av formel (I), ifølge krav 1,karakterisertved at R<4>og/eller R<5>(slik det passer) representerer fenyl substituert med halogensubstituert Cm alkyl.

10. Forbindelse av formel (I), ifølge krav 1,karakterisertved at R<4>og/eller R<5>(slik det passer) representerer metylendioksyfenyl.

11. Forbindelse,karakterisert vedat den har formel (Ia) hvor B<1>representerer et strukturelt fragment av formel (IVd) eller (TVe),

hvor Dl og D<2>uavhengig representerer H, OH, OR<a>, OC(0)R, OC(0)OR<c>, C(0)OR<d>, C(0)R<e>ogR8, R\R<c>, Rd og Re representerer uavhengig fenyl, benzyl, (CH2)2OC(0)CH3eller Ci-6alkyl hvilken sistnevnte gruppe eventuelt er avbrutt av oksygen; og R<1>, R<2>, R<3>, Rx, Y, n, X<1>og X<2>er som definert i krav 1, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, forutsatt at D<1>og D<2>ikke begge representerer H.

12. Forbindelse av formel (Ia), ifølge krav 11,karakterisertved at D<1>representerer H og D2 representerer OH,OCH3,OC(0)Reller C(0)OR<d>ogRog Rd er som definert i krav 11.

13. Farmasøytisk formulering,karakterisert vedat det innbefatter en forbindelse som definert i hvilket som helst av kravene 1-12, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, i blanding med en farmasøytisk akseptabel adjuvans, fortynningsmiddel eller bærer.

14. Forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1 - 12, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, for bruk som et farmasøytikum.

15. Forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1 -12, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, for bruk i behandlingen av en tilstand der inhibering av trombin er nødvendig.

16. Forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1-12, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, for bruk i behandlingen av trombose.

17. Forbindelse av formel (I) ifølge hvilket som helst av kravene 1 -12, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, for bruk som et antikoaguleringsmiddel.

18. Anvendelse av en forbindelse (I) ifølge hvilket som helst av kravene 1 - 12, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, som aktiv bestanddel i fremstillingen av et legemiddel for behandling av en tilstand der inhibering av trombin er nødvendig.

19. Anvendelse ifølge krav 18, hvor tilstanden er trombose.

20. Anvendelse ifølge krav 18, hvor tilstanden er hyperkoagulerbarhet i blod og vev.

21. Anvendelse av en forbindelse som definert i hvilket som helst av kravene 1 -12, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, som aktiv bestanddel i fremstillingen av et antikoaguleringsmiddel.

22. Anvendelse av en forbindelse som definert i hvilket som helst av kravene 11 eller 12 som en prodrug.

23. Fremgangsmåte for fremstilling av forbindelse av formel (I),karakterisert ved(a) kobling av en forbindelse av formel (V)

hvor R!, R<2>, R<3>og R" er som definert ovenfor, med en forbindelse av formel (VI)

hvor Y, n og B er som definert i krav 1; eller (b) kobling av en forbindelse av formel (VU) hvorR<1>,R<2>,R<3>, Rx og Y er som definert i krav 1, med en forbindelse av formel (Vffl) hvor n og B er som definert i krav 1.