CN1226895A - 新的氨基酸衍生物及其作为凝血酶抑制剂的用途 - Google Patents

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Abstract

提供了式(Ⅰ)化合物,其中R1、R2、R3、Rx、Y、n和B具有在说明书中给出的意义,所述化合物可以用作胰蛋白酶样蛋白酶如凝血酶的竞争性抑制剂,以及它们在治疗凝血酶需要抑制的疾病(如血栓形成)和作为抗凝药物的用途。

Description

新的氨基酸衍生物及其作为凝血酶抑制剂的用途
本发明领域
本发明涉及新的药用化合物，具体涉及胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶特别是凝血酶的竞争性抑制剂，它们作为药物的用途，含有它们的药用组合物以及生产它们的合成途径。
背景
血液凝固是涉及淤血(即阻止血液从受损血管流失)和血栓形成(即在血管中形成血液凝块，有时导致血管阻塞)二者的极其重要的过程。
凝固是一系列复杂的酶反应的结果。这一系列反应的最终步骤之一是酶原前凝血酶转化为活性的酶-凝血酶。
已知凝血酶在凝固过程中起着一种核心的作用。它激活血小板、引起血小板聚集，使纤维蛋白原转化为纤维蛋白单体，后者自发地聚合成纤维蛋白聚合体，并且激活凝血因子Ⅷ，该因子依次使所述聚合体交联形成不溶性的纤维蛋白。而且凝血酶激活因子Ⅴ和因子Ⅷ，引起由凝血酶原生成凝血酶的“正反馈”发生。
通过抑制血小板聚集以及凝血酶的形成和交联，有效的凝血酶抑制剂有望表现出抗凝活性。此外，期望通过有效抑制正反馈机制来增强抗凝活性。
先有技术
Claesson在Blood Coagul.Fibrinol((1994)5,411.)中描述了早期开发的凝血酶的低分子量抑制剂。
Blomback等(在J.Clin.Lab.Invest.24,Suppl.107,59,(1969))报道基于位于纤维蛋白原Aα链的裂解位点附近的氨基酸序列的凝血酶抑制剂。这些作者提出，在讨论的氨基酸序列中，三肽序列Phe-Val-Arg(P9-P2-P1，此后称P3-P2-P1序列)将是最有效的抑制剂。
从美国专利号4346078和国际专利申请WO 93/11152中得知，以在P1-位置上具有α,ω-氨基烷基胍的二肽基衍生物为基础的凝血酶抑制剂。同样地，结构相关的二肽基衍生物也有报道。例如，国际专利申请WO 94/29336公开了在P1-位置上具有如氨基甲基苄脒、环氨基烷基脒和环氨基烷基胍的化合物；欧洲专利申请0648780公开了在P1-位置上具有如环氨基烷基胍的化合物。
从欧洲专利申请0468231、0559046和0641779中得知，以在P1-位置上也具有环氨基烷基胍(例如，3-氨基甲基-1-脒基哌啶，或者4-氨基甲基-1-脒基哌啶)的肽基衍生物为基础的凝血酶抑制剂。
欧洲专利申请0185390首次公开了基于在P1-位置上具有精氨醛的三肽基衍生物的凝血酶抑制剂。
最近报道了在P3-位被修饰的基于精氨醛的肽基衍生物。例如，国际专利申请WO 93/18060公开了在P3-位上的羟基酸，欧洲专利申请0526877公开了P3-位上的脱氨氨基酸(des-amino acids)，欧洲专利申请0542525公开了P3-位上的邻甲基扁桃酸。
基于P1-位上亲电子酮的丝氨酸蛋白酶(例如凝血酶)抑制剂也已经知道。例如，欧洲专利申请0195212公开了在P1-位上的精氨酸的肽基α-酮基酯和酰胺衍生物，欧洲专利申请0362002公开了在P1-位上的精氨酸的氟代烷基酰胺酮衍生物，欧洲专利申请0364344公开了在P1-位上的精氨酸的α,β,δ-三酮基化合物衍生物以及欧洲专利申请0530167公开了在P1-位上的精氨酸的α-烷氧基酮衍生物。
从欧洲专利申请0293881得知其它结构不同的以精氨酸及其异硫脲鎓(isothiouronium)类似物的C-末端硼酸(boronic acid)衍生物为基础的胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶抑制剂。
最近欧洲专利申请0669317和国际专利申请WO 95/35309、WO95/23609和WO 94/29336公开了基于肽基衍生物的凝血酶抑制剂。
然而，仍存在着对有效的胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶(如凝血酶)抑制剂的需求。特别是对这样一些化合物的需求，即所述化合物具有优于其它丝氨酸蛋白酶的抑制凝血酶的口服生物可利用性和选择性。对凝血酶显示出竞争性抑制活性的化合物有望用作(特别是)抗凝剂，因而用于血栓形成及有关疾病的治疗中。
本发明的公开
根据本发明提供了式Ⅰ化合物或其药学上可接受的盐：
Figure A9719686400131
其中
R1代表H、C(O)R11、SiR12R13R14或C1-6烷基，后一基团任选由一个或多个选自OR15或(CH2)qR16的取代基取代或作为末端基团；
R12、R13和R14独立代表H、苯基或C1-6烷基；
R16代表C1-4烷基、苯基、OH、C(O)OR17或C(ON(H)R18；
R18代表H、C1-4烷基或CH2C(O)OR19；
R15和R17独立代表H、C1-6烷基或C7-9烷基苯基；
R11和R19独立代表H或C1-4烷基；和
q代表0、1或2；
R2和R3独立代表H、C1-4烷基、环己基或苯基；
Rx代表式Ⅱa、Ⅱb或Ⅱc的结构片段，其中
k、l和m独立代表0、1、2、3或4；
R4和R5独立代表H、Si(Me)3、1-或2-萘基、多环烃基、CHR41R42或C1-4烷基(其中后一基团任选由一个或多个氟原子取代)，或C3-8环烷基苯基、亚甲二氧基苯基、苯并二噁烷基、苯并呋喃基、二氢苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、香豆冉酮基、香豆素基或二氢香豆素基(其中后十二个基团任选由一个或多个C1-4烷基(其中后一基团任选由一个或多个卤素取代基取代)、C1-4烷氧基、卤代、羟基、氰基、硝基、SO2NH2、C(O)OH或N(H)R43取代)；
R41和R42独立代表环己基或苯基；
R6和R7独立代表H、C1-4烷基、C3-8环烷基、苯基(其中后一个基团任选由一个或多个C1-4烷基(其中后一基团任选由一个或多个卤素取代基取代)、C1-4烷氧基、卤代、羟基、氰基、硝基、SO2NH2、C(O)OH或N(H)R44取代)或与它们所连接的碳原子一起形成C3-8环烷基环；
R43和R44独立代表H或C(O)R45；及
R45代表H、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
Y代表CH2、(CH2)2、CH=CH、(CH2)3、CH2CH=CH或CH=CHCH2，其中后三个基团任选由C1-4烷基、亚甲基、氧代或羟基取代；
n代表0、1、2、3或4；
B代表式Ⅳa、Ⅳb或Ⅳc的结构片段
Figure A9719686400151
其中
X1和X2独立代表单键或CH2。
式Ⅰ化合物可以表现出互变异构现象。所有的互变异构形式及其混合物均包括在本发明范围内。
式Ⅰ化合物也可含有一个或多个不对称碳原子，因而可表现出旋光和/或非对映异构现象。使用常规技术如层析或分步结晶可以分离所有的非对映异构体。通过使用常规技术，如分步结晶或HPLC技术分离所述化合物的外消旋体或其它混合物可以分离各种立体异构体。另外，在不引起外消旋作用或差向异构作用的条件下，通过适当的旋光活性原料，或通过例如同手性酸的衍生作用、然后再通过常规方法(如HPLC、硅胶层析)分离非对映的衍生物可以制备所需的旋光异构体。所有的立体异构体均包括在本发明的范围内。
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19和R45可以代表的烷基，烷基取代的R4、R5和Y；R45可以代表的烷氧基，烷氧基取代的R4和R5；R2、R3、R4、R5、R6、R7、R41和R42可以代表的环烷基；R15和R17可代表的烷基苯基均可以是直链的或者支链的，可以是饱和的或者未饱和的。
R4、R5、R6和R7可以被卤素取代，R4、R5、R6和R7上的取代基可被卤素取代，所述卤素包括氟、氯和溴。
式Ⅱa、Ⅱb或Ⅱc的片段中碳原子邻近的点表示该片段与式Ⅰ化合物的接点。
式Ⅳa、Ⅳb或Ⅳc的片段中碳原子上的波浪线表示该片段的键的位置。
缩略语列在本说明书末尾。
根据本发明的另一个方面，提供了如上所述的式Ⅰ化合物，条件是：
(a)当Rx代表式Ⅱa的结构片段时，则R4和/或R5(适当时)不代表：
(ⅰ)由卤素-取代的C1-6烷基取代的苯基；
(ⅱ)亚甲二氧基苯基、苯并二噁烷基、苯并呋喃基、二氢苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、香豆冉酮基、香豆素基或二氢香豆素基；
(b)当Rx代表式Ⅱc的结构片段时，则R6和/或R7(适当时)代表未取代的苯基。
根据本发明的另一个方面，提供了如上所述的式Ⅰ化合物，其中：
(a)当Rx代表式Ⅱ的结构片段时，则R4和/或R5(适当时)代表：
(ⅰ)由卤素-取代的C1-6烷基取代的苯基；
(ⅱ)亚甲二氧基苯基、苯并二噁烷基、苯并呋喃基、二氢苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、香豆冉酮基、香豆素基或二氢香豆素基；
(b)当Rx代表式Ⅱc的结构片段时，则R6和/或R7(适当时)代表取代的苯基。
当n代表2,B代表式Ⅳb的结构片段时，优选的式Ⅰ化合物包括其中X1和X2二者不都代表CH2。
优选的式Ⅰ化合物包括其中基团为下列的化合物：
R1代表任选取代的C1-6烷基或(特别是)H；
Rx代表式Ⅱa的结构片段；
Y代表CH2或(CH2)2；n代表1；B代表式Ⅳa的结构片段。优选其片段是S-构型的式Ⅰ化合物
Figure A9719686400171
以上片段中氮原子和碳原子上的波浪线表示所述片段的键的位置。
优选的式Ⅰ化合物包括实施例1-、11、12、16-39、41、42、43的化合物和(R,S)-Ph-C(Me)(CH2OMe)-C(O)-Aze-Pab。
制备
根据本发明也提供了制备式Ⅰ化合物的方法，它包括：
(a)使式Ⅴ化合物，
Figure A9719686400172
其中R1、R2、R3和Rx如前定义，与式Ⅵ化合物偶合，
Figure A9719686400173
其中Y、n和B如前定义；或
(b)使式Ⅶ化合物，其中R1、R2、R3、Rx和Y如前定义，与式Ⅷ化合物偶合，
           H2N-(CH2)n-B    Ⅷ其中n和B如前定义，例如，偶合可以在偶合体系(如在DMF、EDC、DCC、HBTU或TBTU中用草酰氯)、适当的碱(如吡啶、DMAP、TEA或DIPEA)和适当的有机溶剂(如二氯甲烷、乙腈或DMF)的存在下进行。
式Ⅴ化合物可通过商业获得，从文献中得知或采用已知技术获得。例如，在室温下，在适当的碱(如氢氧化锂)和适当的溶剂(如THF和/或水)存在下，通过水解式Ⅸ化合物，其中R为C1-6烷基或C1-3烷基苯基，R1、R2、R3和Rx如前定义，来制备式Ⅴ化合物。
式Ⅵ化合物可以通过使式Ⅹ化合物其中Y如前定义，与如前定义的式Ⅷ化合物，例如在如上述合成式Ⅰ化合物的条件下反应而制备。
采用已知技术可以很容易获得式Ⅶ化合物。例如，通过使如前定义的式Ⅴ化合物与如前定义的式Ⅹ化合物，例如在如上述合成式Ⅰ化合物的条件下反应，可制备式Ⅶ化合物。
例如，在低于室温下(如在-70℃至-5℃之间)，在适当的还原剂(如硼氢化钠)和适当的有机溶剂(如MeOH或EtOH)存在下，通过还原式Ⅺ化合物，
Figure A9719686400192
其中R、Rx和R2如前定义，可以制备其中R1和R3均为H的式Ⅸ化合物。
在本领域技术人员熟知的条件下，在适当的有机溶剂(如THF)存在下，通过使如前定义的式Ⅺ化合物与式Ⅻ有机金属试剂
             R3aM    Ⅻ其中R3a代表C1-4烷基、环己基或苯基，M代表Li或MgHal而Hal代表氯、溴或碘，反应可以制备式Ⅸ化合物，其中R1代表H,R3代表C1-4烷基、环己基或苯基。
在本领域技术人员熟知的条件下，通过使式ⅩⅢ化合物
        RO-C(O)-C(Rx)H2    ⅩⅢ其中R和Rx如前定义，与式ⅩⅣ化合物
        R2-C(O)-R3         ⅩⅣ其中R2和R3如前定义，反应也可以制备其中R1代表H的式Ⅸ化合物。
在适当的有机溶剂(如THF)中，在适当的还原剂(如甲硼烷)存在下，通过还原式ⅩⅤ化合物
Figure A9719686400201
其中Rxa代表如前定义的式Ⅱa的结构片段，其中k和l均不代表0,R如前定义，可以制备式Ⅸ化合物，其中R1、R2和R3均代表H,Rx代表如前定义的式Ⅱa的结构片段，其中k和l均不代表0。
从J.Org.Chem.54,3831(1989)可以得知或者按照与其所述相似的方法制备式Ⅺ化合物。
式ⅩⅤ化合物可见于文献中，或采用已知的技术，例如使适当的丙二酸衍生物与式ⅩⅥ烷化剂
         RxaL               ⅩⅥ其中L为离去基团(如卤代(氯、溴、碘)或甲苯磺酰基)，Rxa如前定义，例如在适当的碱(如氢化钠或乙醇钠)存在下，在适当的有机溶剂中反应而制备。
式Ⅷ、Ⅹ、Ⅻ、ⅩⅢ、ⅩⅣ和ⅩⅥ化合物可从商业获得，或从文献中得知或采用已知技术获得。
采用标准技术可以对式Ⅰ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅺ、ⅩⅢ、ⅩⅤ和ⅩⅥ含有的取代基，特别是苯基进行互变。
采用常规技术可将式Ⅰ化合物从其反应混合物中分离出来。
本领域技术人员应理解，在上述过程中，中间体化合物的功能基团可能需要通过保护基团加以保护。
需要保护的功能基团包括羟基、氨基和羧酸。羟基的适当的保护基团包括三烷基硅烷基或二芳烷基硅烷基(如叔-丁基二甲基硅烷基、叔-丁基二苯基硅烷基和三甲基硅烷基)和四氢吡喃基。羧酸的适当的保护基团包括C1-6烷基或苄基酯。氨基、脒基和胍基的适当的保护基团包括叔-丁氧基羰基或苄氧基羰基。脒基和胍基氮可以被单保护或双保护。
功能基团的保护和去保护可以在偶合之前或偶合之后进行。
具体讲，式Ⅰ化合物可以通过包括N-酰化的氨基酸或N-保护的氨基酸的偶合在内的方法制备。当使用N-保护的氨基酸时，可以在偶合后引入酰基，然后采用标准方法进行氮原子的去保护。
根据本领域技术人员熟知的，或此后描述的技术，可以除去保护基团。
式Ⅰ化合物的某些保护的衍生物为新的化合物，它们可以在最后的去保护阶段之前被制备以形成式Ⅰ化合物。
根据本发明的另一个方面，提供了式Ⅰa化合物或其药学上可接受的盐，
Figure A9719686400211
其中B1代表式Ⅳd、Ⅳe或Ⅳf的结构片段
Figure A9719686400221
其中D1和D2独立代表H、OH、ORa、OC(O)Rb、OC(O)ORc、C(O)ORd、C(O)Re,Ra、Rb、Rd、Rd和Re独立代表苯基、苄基、(CH2)2OC(O)CH3或C1-6烷基，后一基团任选由氧间断；及R1、R2、R3、Rx、Y、n、X1和X2如前定义，条件是D1和D2不能二者都代表H。
Ra、Rb、Rc、Rd和Re可代表的烷基基团可以是线性的或支链的，并可以是饱和的或未饱和的。
式Ⅳd、Ⅳe或Ⅳf的片段中碳原子上的波浪线表示该片段的键的位置。
优选的式Ⅰa化合物包括其中D1代表H和D2代表OH、OCH3、OC(O)Rb或C(O)ORd(其中Rb和Rd如前定义)的那些化合物。
优选的式Ⅰa化合物包括实施例8、9、10、13、14、15、40的化合物和(R,S)-Ph-C(Me)(CH2OMe)-C(O)-Pro-Pab(Z)。
式Ⅰa化合物也可根据本领域技术人员熟知的技术直接由式Ⅰ化合物制备。例如，于40℃、在适当的碱(如TEA)存在下，在适当的有机溶剂(如TEF)中，使相应的式Ⅰa化合物(其中D1或D2(适当时)代表COORd,Rd如前定义)与羟胺(或其氢卤酸盐)反应，可以制备其中D1或D2代表OH的式Ⅰa化合物。
另外，式Ⅰa化合物也可根据本领域技术人员熟知的技术通过其它保护的式Ⅰa衍生物来制备。例如，于室温下、在适当的碱(如TEA、吡啶或DMAP)存在下，在适当的有机溶剂中，使相应的式Ⅰa化合物(其中D1或D2(适当时)代表OH)与式ⅩⅦ
      RcC(O)-O-C(O)Rc        ⅩⅦ(其中Rc如前定义)反应可以制备其中D1或D2代表CO(O)ORc和Rc如前定义的式Ⅰa化合物。
例如，于40-60℃、在适当的碱(如TEA)存在下，在适当的有机溶剂(如THF、CH3CN、DMF或DMSO)中，通过使式ⅩⅧ化合物
Figure A9719686400231
其中Ba代表1,4-亚苯基或1,4-亚环己基，而R1、R2、R3、Rx、Y和n如前定义，与式ⅩⅨ化合物
      H2NORa1               ⅩⅨ其中Ra1代表H或Ra而Ra如前定义，反应可以制备式Ⅰa化合物，其中B1代表式Ⅳd或Ⅳf的结构片段，D1代表H和D2代表OH或ORa(其中Ra如前定义)。
根据肽偶合技术，例如与前述制备式Ⅰ化合物的方法类似的方式可以制备式ⅩⅧ化合物。式ⅩⅦ和ⅩⅨ化合物是商业可得的，是文献中熟知的，或用已知技术获得。
J W McOmie编辑的“Protective Groups in Organic Chemistry”(Plenum Press(1973))和“Protective Groups in Organic Synthesis”(2ndedition,T W Greene&P G M Wutz,Wiley-Interscience(1991))对保护基团的使用作了充分的描述。
本领域技术人员也应理解，虽然式Ⅰ化合物的被保护的衍生物可能本身并不具有药理活性，但它们经胃肠外或口服给药后，会在体内形成具有药理活性的本发明化合物。因而此类衍生物可被称作“药物前体”。式Ⅰ化合物的所有药物前体均包括在本发明范围内。
特别用作药物前体的式Ⅰ化合物的被保护的衍生物包括式Ⅰa化合物。
式Ⅰ化合物、其药学上可接受的盐、互变异构体和立体异构体，及其药物前体(包括为式Ⅰ化合物的药物前体的式Ⅰa化合物)此后统称为“本发明的化合物”。
医药用途
本发明的化合物是有用的，因为它们具有药理活性。因而它们被称作药物。
因此，根据本发明的另一个方面提供了用作药物的本发明化合物。
特别是，本发明的化合物无论是以其本身或是作为药物前体给药，均为有效的凝血酶抑制剂，如在下述试验中所证明的那样。
因而期望本发明的化合物可用于需要抑制凝血酶的那些疾病。
因此本发明的化合物适用于治疗或预防动物包括人的血液和组织中的血栓形成和高凝固性。
已知高凝固性可导致血栓栓塞性疾病。可以提及的与高凝固性和血栓栓塞性疾病有关的疾病包括活化蛋白C的抗性，如因子Ⅴ-突变(因子Ⅴ Leiden)、及抗凝血酶Ⅲ、蛋白C、蛋白S、肝素辅因子Ⅱ的先天性或获得性缺乏。已知与高凝固性和血栓栓塞性疾病有关的其它疾病包括循环抗磷脂抗体(Lupus抗凝剂)、高胱氨酸血症(homocysteinemi)、肝素诱导的血小板减少和纤维蛋白溶解缺陷。因而本发明化合物适应于这些疾病的治疗和/或预防性治疗。
本发明化合物还适应于治疗这些病症，在这些病症中出现不需要的过量的凝血酶而无凝固性过高的体征，例如神经退化性疾病如Alzheimer氏病。
可以提及的特殊疾病状态包括治疗和/预防性治疗下列疾病：静脉血栓形成和肺血栓栓塞，动脉血栓形成(如心肌梗塞、不稳定性心绞痛、基于血栓形成的中风和外周动脉血栓形成)和动脉原纤维形成期间常常来自心房的系统性栓塞，或透壁心肌梗塞后来自左心室系统性血栓栓塞。
而且，本发明化合物还有望用于预防血栓溶解、经皮透腔血管成形术(PTA)和冠状动脉分流术后的再闭塞；防止通常因显微手术和血管手术引起的血栓再形成。
其它的适应症包括预防和/或治疗因细菌、多发性创伤、中毒或任何其它机制引起的播散性血管内凝血；血液在体内与异物表面如血管移植物、血管移植片固定模、血管导管、机械和生物修复的瓣膜或任何其它的医学装置接触时抗凝剂治疗；血液与体外医学装置如心血管手术期间使用的心-肺机或血液透析装置接触时的抗凝剂治疗。
除了凝血酶对凝固过程的作用外，已知它还激活大量的细胞(如中性白细胞、成纤维细胞、内皮细胞和平滑肌细胞)。因此，本发明化合物也可用于治疗和/或预防治疗自发的和成人呼吸窘迫综合征、放疗或化疗后的肺纤维化、败血症性休克、败血病、炎症性反应，这包括(但不限于)水肿、急性或慢性动脉粥样硬化如冠状动脉病、脑动脉病、外周动脉病、再灌注损害和经皮透腔血管成形术(PTA)后的再狭窄。
抑制胰蛋白酶和/或凝血酶的本发明化合物也可用于治疗胰腺炎。
根据本发明的另一个方面，提供治疗其中凝血酶需要抑制的疾病的方法，该方法包括对患有此类疾病或对此类疾病易感的人群给予治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐。
本发明化合物通常可以药用制剂的形式经口、静脉、皮下、颊下、直肠、皮肤、鼻内、气管、支气管、经任何其它的胃肠外途径或通过吸入给予，该制剂包括在药学上可接受的剂型中的作为自由碱，或者作为药学上可接受的无毒有机酸或无机酸的加成盐的活性成分。根据接受治疗的疾病和病人及给药途径，可以给予不同剂量的所述组合物。
本发明化合物可以与任何具有不同作用机理的抗凝剂例如抗血小板药乙酰水杨酸、噻氯匹定、clopidogrel、血栓烷受体和/或合成酶抑制剂、纤维蛋白原受体拮抗剂、拟前列环素、磷酸二酯酶抑制剂和ADP-受体(P2T)拮抗剂联合和/或共同给予。
本发明化合物可以与溶栓剂如组织纤维蛋白溶酶原激活剂(天然的，重组的或修饰的)、链激酶、尿激酶、尿激酶原、甲氧苯甲酰纤维蛋白溶酶原-链激酶激活剂配合物(APSAC)、动物涎腺纤维蛋白溶酶原激活剂等联合和/或共同给予以治疗血栓形成病，特别是心肌梗塞。
根据本发明的另一个方面，提供包括本发明化合物与药学上可接受的辅助剂、稀释剂或载体混合的药用制剂。
本发明化合物在人的治疗中口服给予的适宜的日剂量约为0.001-100mg/kg体重，胃肠外给予约为0.001-50mg/kg体重。
与现有已知化合物相比，本发明化合物具有更有效、较少副作用、作用时间长、活性范围广更有效力、较少产生副作用，且更容易吸收的优点，或者它们可能具有其它有用的药学特性的优点。
生物学试验
试验A
凝血酶凝固时间(TT)测定
将人凝血酶(T6769,Sigma Chem Co)在缓冲液(pH7.4,100μl)和抑制剂溶液(100μl)中孵育1分钟。然后加入混合的正常含枸橼酸盐的人血浆100μl并在自动装置(KC10,Amelung)上测量凝固时间。
根据凝固时间(秒)对抑制浓度绘图，用内插法确定IC50TT。
在本试验中，IC50TT是在人血浆凝血酶凝固时间两倍处的抑制浓度。
试验B
用生色自动分析(robotic assay)测定凝血酶抑制
根据生色底物方法，在Plato 3300自动微滴定板处理器(Rosys AG,CH-8634 Hombrechtikon,Switzerland)，用96-孔、半体积的微滴定板(Costar,Cambridge,MA,USA；Cat No 3690)测定溶血酶抑制剂效价。将实验物质在DMSO(72μl)中的储备液(1mmol/L)用DMSO系列稀释1∶3(24+48μl)获得10种不同的浓度，以便在测定中作为样品进行分析。用124μl测试缓冲液稀释2μl实验样品，加入在测试缓冲液中的12μl生色底物溶液(S-2366,Chromogenix,Mlndal,Sweden)，最后加入在测试缓冲液中的12μlα-凝血酶溶液，(人α-凝血酶，Sigma Chemical Co.)，并将样品混合。最终的测试浓度是：试验物质0.00068-13.3μmol/L,S-2366 0.30mmol/L,α-凝血酶0.020NIHU/ml。于37℃孵育40分钟时的线性吸收增量被用于计算试验物质(与无抑制剂的空白对照比较)抑制百分率。IC50-自动值，即对应引起凝血酶活性50％抑制的抑制剂浓度，由log剂量与％抑制曲线来计算。
试验C
人凝血酶抑制常数Ki确定
采用生色底物方法，于37℃在Cobas Bio离心分析仪(Roche,Basel,Switzerland)上进行以获得Ki确定值。在三种不同的底物浓度下，人α-凝血酶与各种浓度的试验物质孵育后测定残留酶活性并测定405nm处光吸收变化。
将试验化合物溶液(100μl；通常在含有BSA 10g/L的缓冲液或盐水中)与200μl 人α-凝血酶(Sigma Chemical Co)在含有BSA(10g/L)的测试缓冲液(0.05mol/L Tris-HCl pH7.4，氯化钠调节离子强度0.15)中混合，并在Cobas Bio上作为样品来分析。将60μl样品与20μl水一起加入到在测试缓冲液中的320μl底物S-2238(Chromogenix,Mlndal,Sweden)中，并监测吸收度的改变(ΔA/min)。S-2238的最终浓度是16、24和50μmol/L，而凝血酶是0.125 NIH U/ml。
稳态反应率用于绘制Dixon图，即抑制剂浓度对1/(ΔA/min)的图。可逆性竞争抑制剂对于不同底物浓度的数据点通常形成截距为X=-Ki的直线。
实验D
激活的部分组织促凝血酶原激酶时间(APTT)的测定
在备用的正常含枸橼酸盐的血浆中，用Stago生产的试剂PTTAutomated 5测定APTT。将所述抑制剂加入该血浆(10μl抑制剂溶液对90μl血浆)中，随后加入所述试剂和氯化钙溶液，根据试剂生产厂商的说明书，采用血凝分析仪KC10(Amelung)测定该混合物中的APTT。根据凝固时间(秒)对在血浆中的抑制剂浓度绘图，通过内推法确定IC50APTT。
IC50APTT定义为在两倍激活的部分组织促凝血酶原激酶时间处的人血浆中的抑制剂浓度。
实验E
体外凝血酶时间的测定
在实验的前一天或前两天，对清醒的大鼠的颈动脉插入取血样的导管，并在口服或胃肠外给予溶解于乙醇∶SolutolTM∶水(5∶5∶90)式Ⅰ和Ⅰa化合物后测定凝血酶的抑制。在将所述化合物加入含有1份枸橼酸钠溶液(0.13mol/L)和9份血的塑料试管中后，于实验的当天定时抽取血样。离心该管以获得含较少血小板的血浆。按照以下所述，用该血浆测定凝血酶时间。
用盐水溶液(0.9％,100μl)稀释含枸橼酸盐的鼠血浆(100μl),通过加入在缓冲溶液(pH7.4,100μl)中的人凝血酶(T6769,Sigma Chem Co,USA)开始凝固血浆。用自动装置(KC10,Amelumg,Germany)测量凝固时间。
给予式Ⅰa化合物时，通过使用与储备的含枸橼酸盐的鼠血浆的凝血酶时间对溶解在盐水中的相应的“活性”凝血酶抑制剂的已知浓度有关的标准曲线，来估算适宜的活性凝血酶抑制剂在鼠血浆中的浓度。
根据估算的式Ⅰ活性凝血酶抑制剂(假定凝血酶时间延长是由上述化合物引起)在大鼠中的血浆浓度，用梯形法则和外推数据至无穷来计算口服和/或胃肠外给予式Ⅰa的相应的药物前体后曲线下的面积(AUCpd)。
按照下式计算口服或胃肠外给予式Ⅰa的药物前体后活性的式Ⅰ凝血酶抑制剂的生物利用度：
[(AUCpd/剂量)/(AUC活性的、胃肠外/剂量)]×100其中(AUC活性的、胃肠外)代表如上所述的经胃肠外给予清醒大鼠以式Ⅰ的相应的活性凝血酶抑制剂后的AUC。
试验F
在体外尿中凝血酶时间的测定
口服或胃肠外给予本发明化合物(溶于乙醇∶SolutolutolTM∶水(5∶5∶90))后由尿排泄的式(Ⅰ)凝血酶抑制剂的量，通过测定在体外尿中的凝血酶时间来测算(假定凝血酶时间延长是由上述化合物引起)。
口服给予本发明化合物后，将清醒鼠置于代谢笼24小时，分开收集尿和粪便。如下所述测定收集的尿中的凝血酶时间。
将正常的含枸橼酸盐的人血浆(100μl)与浓缩的鼠尿或其盐水稀释液一起孵育1分钟。然后通过加入在缓冲液(pH 7.4；100μl)中的人凝血酶(T6769,Sigma Chem Company)使血浆开始凝固。在自动装置(KC10；Amelung)上测定凝固时间。
使用在正常的含枸橼酸盐的人血浆中的凝血酶时间对溶解于浓缩鼠尿(或其盐水稀释液)中的已知浓度的上述活性凝血酶抑制剂的标准曲线，测算鼠尿中的活性式(Ⅰ)凝血酶抑制剂浓度。用在尿中估算的上述活性抑制剂的平均浓度乘以24小时产生的鼠尿总量，可以计算尿中排泄活性抑制剂的量(AMOUNTpd)。
按照下式计算口服或胃肠外给予式Ⅰa的药物前体后活性的式Ⅰ凝血酶抑制剂的生物利用度：
[(AMOUNTpd/剂量)/(AMOUNT活性的、胃肠外/剂量)]×100
其中(AMOUNT活性的，胃肠外)代表如上所述的经胃肠外给予清醒大鼠以式Ⅰ的相应的活性凝血酶抑制剂后尿中的排泄量。
通过以下实施例说明本发明
实施例
一般试验方法
用装备有电喷界面的Finnigan MAT TSQ 700三相四极质谱仪(FAB-MS)和装备有电喷界面的VG PlatformⅡ质谱仪(LC-MS)记录质谱。在BRUKER ACP 300和Varian UNITY plus 400、500和600光谱仪上进行1H NMR和13C NMR测定，1H的操作频率分别为300.13、399.96、499.82和599.94MHz，而13C则分别为75.46、100.58、125.69和150.88MHz。采用UV检测器(270-290nm)，以10-50ml/min的流速在反相柱(250mm,20或50mm；5-7μM相ChromasilC8)进行制备性HPLC。
原料的制备
实施例A
H-Aze-Pab(Z)
(ⅰ)Boc-Aze-OH
于室温搅拌下，将碳酸氢二叔丁酯(di-tert-butyl dicarbonate)(13.75g；63mmol)加入L-氮杂-2-环丁烷羧酸(H-Aze-OH；5.777g；57mmol)和碳酸钠(6.04g；57mmol)在水(50ml)和THF(100ml)的混合物中。60小时后真空除去THF，用水稀释该混合物，然后用2M硫酸氢钾酸化。用二氯甲烷提取，再经干燥(硫酸镁)并蒸发溶剂得到残留物，使该残留物从二氯甲烷：己烷中结晶得到10.87g(95％)无色晶体。1H NMR(300MHz；CDCl3):δ4.85-4.7(br s,1H),4.0-3.75(m,2H),2.65(m,2H),1.4(s,9H)。
(ⅱ)Boc-Aze-Pab(Z)
在室温下，将EDC(13.5g；70mmol)加入Boc-Aze-OH(10.87g；54mmol；得自上述步骤(ⅰ))、H-Pab(Z)×HCl(18.31g；57mmol；根据国际专利申请WO 94/29336所述方法制备)和DMAP(9.9g；81mmol)在乙腈(270ml)的混合物中。16小时后真空蒸发溶剂，并用乙酸乙酯代替。用水和枸橼酸水溶液洗涤该混合物。干燥(硫酸镁)有机层，真空蒸发溶剂得到残留物，该残留物从二氯甲烷、甲苯、二异丙醚和石油醚中结晶得到17.83g Boc-Aze-Pab(Z)。1H NMR(300MHz；CDCl3):δ7.85-7.75(d,1H),7.45-7.2(m,7H),5.2(s,2H),4.7(t,1),4.6-4.4(m,2H),3.95-3.8(“q”,1H),3.8-3.7(q,1H),2.5-2.3(m,2H),1.4(s,9H)。
(ⅲ)H-Aze-Pab(Z)
使Boc-Aze-Pab(Z)(2.44g；5.2mmol)溶于三氟乙酸(10ml)和二氯甲烷(10ml)的混合液中。30分钟后真空除去溶剂和三氟乙酸，使残留物溶于二氯甲烷中。用碳酸钠/水溶液(10％)洗涤有机相，干燥(碳酸钾)。真空除去溶剂得到残留物，该残留物从二氯甲烷中结晶得到为无色晶体1.095g(57％)H-Aze-Pab(Z)。1H NMR(300MHz；CD3OD):δ 7.85-7.75(d,2H),7.45-7.25(m,7H),5.2(s,2H),4.5(s,2H),4.3(d,1H),3.65(q,1H),3.4-3.3(m,1H),2.7-2.5(m,1H),2.4-2.2(m,1H)。
实施例B
H-Pic-Pab(Z)×2HCl
(ⅰ)Boc-Pic-OH
根据M.Bodanszky和A.Bodanszky(“The Practice of PeptideSynthesis”,Springer-Verlag(1984))的方法制备，但用THF代替二氧六环作为溶剂。
1H NMR(300MHz；CDCl3):δ5.0-4.8(br d,1H),4.0(br s,1H),3.0(br s,1H),2.20(d,1H),1.65(m,2H),1.5-1.3(s+m,13H)。
(ⅱ)Boc-Pic-Pab(Z)
使Boc-Pic-OH(2.02g；8.8mmol；得自上述步骤(ⅰ))、H-Pab(Z)×1HCl(2.36g；7.4mmol；根据国际专利申请WO 94/29336所述方法制备)和3.9g(32mmol)DMAP溶于二氯甲烷(40ml)中。冷却该混合物至0℃并加入1.99g(10.4mmol)EDC。在室温下搅拌该反应混合物3天。将该混合物倒入0.2M硫酸氢钾溶液中，并用二氯甲烷提取两次。干燥(硫酸钠)有机层并蒸发。粗品经硅胶快速层析，用乙酸乙酯∶甲苯7∶3作为洗脱剂得到1.59g(44％)产物。FAB-MS m/z495(M+1)+ 1H NMR(400MHz；CDCl3):δ7.83(d,2H),7.43(d,2H),7.36-7.11(m,5H),6.52(bs,NH),5.20(s,2H),4.81-4.72(m,1H),4.61-4.34(m,2H),4.10-3.90(m,1H),2.79-2.64(m,1H),2.36-2.25(m,1H),1.7-1.3(m,14H)。
(ⅲ)H-Pic-Pab(Z)×2HCl
使Boc-Pic-Pab(Z)(1.59g；3.25mmol；得自以上步骤(ⅱ))溶于100ml用HCl饱和的乙酸乙酯中。半小时后，蒸发该反应混合物得到定量产量的标题产物。FAB-MS m/z395(M+1)+ 1H NMR(300MHz；D2O):δ7.82(d,2H),7.63-7.41(m,7H),5.47(s,2H),4.69-4.49(AB-系统位于δ4.59,2H),4.03(dd,lH),3.52(bd,1H),3.10(dt,lH),2.29(dd,1H),2.08-1.61(m,5H)。
实施例C
H-Aze-Pig(Z)×2HCl
(ⅰ)Boc-Aze-Pig(Z)
在室温下，使Boc-Aze-OH(1.03；5.12mmol；得自上述实施例A(ⅰ))溶于乙腈(50ml)中，并将DMAP(1.57g,12.8mmol)加入该生成的溶液中。然后加入在DMF(20ml)和EDC(1.47g；7.68mmol)中的H-Pig(Z)×2HCl(1.86g,5.12mmol；根据国际专利申请WO 94/29336所述方法制备)，于室温下搅拌该反应混合物20小时。随后浓缩该反应混合物，用二氯甲烷(100ml)稀释，用水(2×30ml)洗涤。干燥(硫酸镁)有机层并蒸发。粗品产物(3.77g)经硅胶柱快速层析纯化，用二氯甲烷∶甲醇(95∶5)洗脱，得到1.24g(51％)标题化合物。1H NMR(400MHz；CDCl3):δ7.27-7.43(m,5H),5.12(s,2H),4.60-4.67(t,1H),4.16-4.26(d,2H),3.86-3.95(m,1H),3.74-3.82(m,1H),3.11-3.30(m,2H),2.78-2.89(m,2H),2.33-2.52(bs,2H),1.71-1.83(m,3H),1.44(s,9H),1.15-1.29(m,2H)。
(ⅱ)H-Aze-Pig(Z)×2HCl
于室温下,将在用HCl饱和的乙酸乙酯(75ml)中的Boc-Aze-Pig(Z)(1.2g；2.53mmol；得自以上步骤(ⅰ))搅拌1小时。蒸发该反应混合物，用水稀释并用甲苯提取。冻干水层得到1.085g(96％)标题化合物。1H NMR(500MHz；CD3OD):δ7.32-7.46(m,5H),5.28(s,2H),4.99-5.05(t,1H),4.08-4.16(m,1H),3.91-3.99(m,3H),3.13-3.25(m,4H),2.79-2.88(m,1H),2.47-2.57(m,1H),1.82-1.96(m,3H),1.26-1.40(m,2H)。
实施例D
(R,S)-Ph-CH(CH2OTBDMS)-C(O)-Pro-OH
(ⅰ)(R,S)-Ph-CH(CH2OTBDMS)-C(O)OTBDMS
使(R,S)-托品酸(6.6g；0.040mol)溶于DMF(20ml)中。加入咪唑(13.0g；0.192mol)和TBDMS-Cl(14.4g；0.096mol)，于室温下搅拌该反应混合物4天。加入水(0.5L)并用乙醚提取三次。用枸橼酸水溶液(10％)、水、碳酸氢钠水溶液和水洗涤合并的有机层并蒸发。粗品产物可不经进一步纯化而用于下一步骤。1H NMR(500MHz；CDCl3):δ7.17-7.40(m,5H),4.16-4.23(m,1H),3.77-3.87(m,2H),0.88-0.92(m,18H),0.02-0.29(m,12H)。
(ⅱ)(R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(O)OH
将(R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(O)OTBDMS(16.0g；0.040mol；来自步骤(ⅰ))、碳酸钾(14.0g；0.10mol)、MeOH(400ml)和水(150ml)的混合物于室温下搅拌过夜。浓缩后用乙醚提取水层。用枸橼酸调节pH，用乙醚再次提取提取水层三次。用水洗涤合并的有机层，干燥并蒸发得到9.7g(87％)标题化合物。1H NMR(300MHz；CDCl3):δ7.20-7.40(m,5H),4.05-4.20(m,1H)，3.75-3.90(m,2H),0.85(s,9H),0.00-0.10(m,6H)。
(ⅲ)(R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(O)-Pro-OBn
于室温下，将EDC(游离碱；1.45ml；8.4mmol)加入(R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(O)OH(2.01g；7.2mmol；来自以上步骤(ⅱ))、脯氨酸苄酯盐酸盐(1.85g；7.6mmol)和DMAP(1.41g；11.5mmol)在乙腈(20ml)的混合物中。18小时后真空除去溶剂，粗品产物经硅胶柱快速层析，用乙酸乙酯∶甲苯(2∶1)作为洗脱剂，得到2.7g(80％)产物。
(ⅳ)(R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(O)-Pro-OH
将(R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(O)-Pro-OBn(2.6g；5.56mmol；来自以上步骤(ⅲ))溶于乙醇(100ml)中，加入Pd/C(10％；0.29g)。使该混合物于常压下氢化3小时。过滤后蒸发该溶液。标题化合物的产量为1.7g(81％)。1H NMR(300MHz；CDCl3):δ7.15-7.40(m,5H),4.45-4.65(m,1H),4.15-4.30(m,1H),3.85-3.95(m,1H),3.55-3.80(m,2H),3.25-3.40(m,1H),2.30-2.40(m,1H),1.75-2.10(m,3H),0.75-0.90(m,9H),-0.20-0.05(m,6H)。13C NMR(75.5MHz；CDCl3)脒和羰基碳：174.00,172.63。
实施例E
(R,S)-3-羟基-2-(3-甲氧基苯基)-丙酸
(ⅰ)(R,S)-3-羟基-2-(3-甲氧基苯基)-丙酸乙酯
于-70℃，将硼氢化钠(2当量)加入3-氧代-2-(3-甲氧基苯基)-丙酸乙酯(0.067g；0.3mmol；根据J.Org.Chem.54,3831(1989)所述方法制备)的乙醇溶液中。于-70℃搅拌2小时，于-5℃搅拌4小时后，加入水，浓缩该反应混合物并用乙酸乙酯提取。用盐水洗涤有机相，干燥(硫酸镁)并浓缩得到标题化合物。
(ⅱ)(R,S)-3-羟基-2-(3-甲氧基苯基)-丙酸
将来自以上步骤(ⅰ)的(R,S)-3-羟基-2-(3-甲氧基苯基)-丙酸乙酯溶于THF∶水(1∶1)中。加入氢氧化锂×水(2当量)，并于室温下搅拌该反应混合物1小时。浓缩该反应混合物，用二氯甲烷提取。干燥(硫酸镁)有机相，并浓缩得到3-羟基-2-(3-甲氧基苯基)-丙酸，它可不经进一步纯化而用于下一步骤。LC-MS m/z195(M-1)- 1H NMR(400MHz；CD3OD):δ6.73-6.79(m,1H),6.34-6.46(m,3H),3.57-3.66(m,1H),3.30(s,3H),3.22-3.29(m,2H)。
实施例F
(R,S)-3-羟基-2-(3,4-二甲氧基苯基)-丙酸
根据以上实施例E所述方法，用3-氧代-2-(3,4-二甲氧基苯基)-丙酸乙酯作为原料制备。LC-MS m/z225(M-1)- 1H NMR(400MHz；CD3OD):δ6.84-6.95(m,3H),4.01-4.10(m,1H),3.81(s,3-H),3.79(s,3H),3.65-3.73(m,2H)。
实施例G
(R,S)-3-羟基-2-(2-萘基)-丙酸
根据以上实施例E所述方法，用3-氧代-2-(2-萘基)-丙酸乙酯作为原料制备。LC-MS m/z215(M-1)- 1H NMR(400MHz；CD3OD):δ7.77-7.85(m,4H),7.41-7.50(m,3H),4.14-4.22(m,1H),3.89-3.95(s,1H),3.80-3.87(m,1H)。
实施例H
(R,S)-3-羟基-2-(3,5-二甲基苯基)丙酸
根据以上实施例E所述方法，用3-氧代-2-(3,5-二甲基苯基)丙酸乙酯作为原料制备。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ6.94(s,1H),6.89(s,2H),4.13(dd,1H),3.80(m,2H),3.3(s,6H)。
实施例I
(R,S)-3-羟基-2-(3-三氟甲基苯基)丙酸
根据以上实施例E所述方法，用3-氧代-2-(3-三氟甲基苯基)丙酸乙酯作为原料制备。
LC-MS m/z233(M-1)-
实施例J
(R,S)-3-羟基-2-(3-羟基苯基)丙酸
根据以上实施例E所述方法，用3-氧代-2-(3-羟基苯基)丙酸乙酯作为原料制备。
LC-MS m/z181(M-1)-
实施例K
(R,S)-3-羟基-2-(3-氟代苯基)丙酸
根据以上实施例E所述方法，用3-氧代-2-(3-氟代苯基)丙酸乙酯作为原料制备。
LC-MS m/z183(M-1)-；FAB-MS m/z185(M+1)+
实施例L
(R,S)-3-羟基-2-(3-氯代苯基)丙酸
根据以上实施例E所述方法，用3-氧代-2-(3-氯代苯基)丙酸乙酯作为原料制备。1H NMR(300MHz；CDCl3):δ7.34-7.30(m,3H),7.21(dt,1H),5.67(b,2H),4.15(dd,1H),3.87(m,2H)。
实施例M
(R,S)-3-羟基-2-(3,5-双(三氟甲基)苯基)丙酸
根据以上实施例E所述方法，用3-氧代-2-(3,5-双(三氟甲基)苯基)丙酸乙酯作为原料制备。
LC-MS m/z183(M-1)-
实施例N
3-羟基-2-(3-甲氧基-5-甲基苯基)-丙酸
(ⅰ)3-溴甲基-5-甲基苯甲醚
将3,5-甲基苯甲醚(13.6g；0.1mol)、NBS(17.8g,0.1mol)和AIBN(1.1g；6.7mmol)在四氯化碳中的混合物回流2小时。冷却生成的混合物，过滤并蒸发。粗品产物(含有约20％的原料)可用于下一步骤。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ6.82(s,1H),6.77(s,1H),6.68(s,1H),4.47(s,2H),3.82(s,3H),2.37(s,3H)。
(ⅱ)3-甲氧基-5-甲基苯乙腈
将NaCN(8.2g；0.16mol)加入3-溴代甲基-5-甲基苯甲醚(17g；0.008mol；来自以上步骤(ⅰ))的DMSO(25ml)溶液中。该混合物在加入氰化物后温度升高，用1小时使之冷却至室温。然后加入乙腈(25ml)，使该混合物回流1小时。浓缩该反应混合物，加入水(200ml)，用乙醚提取生成的溶液三次。用水洗涤合并的有机相，干燥(硫酸钠)并浓缩得到9g(70％)黄色油状的副标题化合物，它可不经进一步纯化而使用。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ6.74(s,1H),6.67(2s,2H),3.79(s,3H),3.68(s,2H),2.33(s,3H)。
(ⅲ)3-甲氧基-5-甲基苯乙酸
搅拌下、于120℃、在高压釜中，将3-甲氧基-5-甲基苯乙腈(9g；0.06mol；来自以上步骤(ⅱ))和氢氧化钾(17g；0.3mol)在150ml水∶iPrOH(2∶1)的溶液加热过夜，然后在室温下放置两天。浓缩反应混合物并用乙醚提取。酸化该水相并用乙醚提取两次。用水洗涤合并的有机相，干燥(硫酸钠)并蒸发为残留物，使残留物溶于乙醇中，用活性炭处理，过滤并蒸发得到黄色晶体的副标题化合物(8,1g；80％)。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ6.68(s,1H),6.63(s,2H),3.78(s,3H),3.58(s,2H),2.31(s,3H)。
(ⅳ)3-甲氧基-5-甲基苯乙酸乙酯
将浓硫酸加入3-甲氧基-5-甲基苯乙酸(8.1g；0.045mol；得自以上步骤(ⅲ))的乙醇(100ml)溶液中，使该溶液静置40小时。浓缩该反应混合物，使粗产物在水和乙醚中分配。用碳酸氢钠水溶液和水洗涤有机层，干燥(硫酸钠)并蒸发得到8.0g(85％)棕色油状的副标题化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ6.71(s,1H),6.65(s,1H),6.64(s,1H),4.16(q,2H),3.79(s,3H),3.55(s,2H),2.23(s,3H),1.27(t,3H)。
(ⅴ)3-氧代-2-(3-甲氧基-5-甲基苯基)丙酸乙酯
将钠(0.39g；17mmol)分小块加入3-甲氧基-5-甲基苯乙酸乙酯(3.0g；14mmol；得自以上步骤(ⅳ))和甲酸乙酯(1.9g；26mmol)在乙醚(75ml)的溶液中。冷却该溶液至0℃，然后加入乙醇(abs；0.24ml)。向生成的淤浆加入乙醚(100ml)、乙醇(5ml)和水直至淤浆溶解。收集水相，酸化至pH 2(HCl/aq)并用乙醚提取。用碳酸氢钠水溶液洗涤该有机相，干燥(硫酸钠)并蒸发得到2g(59％)的副标题化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ12.12(d,0.5H),7.31(d,0.5H),6.62(bs,2H),4.26(q,2H),3.80(s,3H),2.35(s,3H),1.33(t,3H)。
(ⅵ)3-羟基-2-(3-甲氧基-5-甲基苯基)丙酸乙酯
使3-氧代-2-(3-甲氧基-5-甲基苯基)丙酸乙酯(1.9g；8.2mmol；得自以上步骤(ⅴ))的甲醇(50ml)的搅拌溶液冷却至-15℃。分批加入硼氢化钠(0.61g；16mmol)。于-15℃至-5℃搅拌该混合物3小时。然后加入水，浓缩生成的混合物。用乙酸乙酯提取水相，用水洗涤有机相，干燥(硫酸钠)并蒸发得到2.0g(59％)副标题化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ6.65(s,1H),6.63(s,1H),6.58(s,1H),4.3-4.05(m,3H),3.8(m,5H),2.30(s,3H),1.32(t,3H)。
(ⅷ)3-羟基-2-(3-甲氧基-5-甲基苯基)丙酸
于室温下，将3-羟基-2-(3-甲氧基-5-甲基苯基)丙酸乙酯(1.7g；7.1mmol；得自以上步骤(ⅵ))和氢氧化钠(7.0g,180mmol)在200ml甲醇∶水(1∶1)的溶液搅拌2小时。浓缩该反应混合物，用乙醚洗涤，酸化。用乙醚提取生成的混合物两次，用水洗涤合并的有机层，干燥(硫酸钠)并蒸发得到1.47g(98％)。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ6.70(s,1H),6.66(s,1H),6.65(s,1H),4.12(dd,1H),3.85-3.75(m,2H),3.75(s,3H),2.32(s,3H)。
实施例O
(R,S)-3-羟基-2-(2,5-二甲氧基苯基)-丙酸
根据以上实施例E所述方法，用3-氧代-2-(2,5-二甲氧基苯基)丙酸乙酯作为原料制备。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ6.89(d,1H),6.85(d,1H),6.78(dd,1H),4.86(宽峰，2H),4.14(dd,1H),3.98(dd,1H),3.78(s,3H),2.72(s,3H),3.67(dd,1H)。
实施例P
(R,S)-3-羟基-2-(3,5-二甲氧基苯基)-丙酸
根据以上实施例E所述方法，用3-氧代-2-(3,5-二甲氧基苯基)丙酸乙酯作为原料制备。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ6.44(s,2H),6.40(s,1H),4.13(dd,1H),3.85-3.75(m,2H),3.75(s,6H)。
实施例Q
(R,S)-3-羟基-2-(3,4-亚甲二氧基苯基)丙酸
根据以上实施例E所述方法，用3-氧代-2-(3,4-亚甲二氧基苯基)丙酸乙酯作为原料制备。
1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ6.78(s,1H),6.73(s,2H),5.95(s,2H),4.08(dd,1H),3.78(m,2H)。
实施例R
(R,S)-3-羟基-2-(1-萘基)丙酸
根据以上实施例E所述方法，用3-氧代-2-(1-萘基)丙酸乙酯作为原料制备。
LC-MS m/z215(M-1)-
实施例S
(R,S)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OTBDMS)COOH
(ⅰ)(R,S)-甲氧基苯基-CH(CH2OTBDMS)COOTBDMS
将咪唑(6.7g；97.8mmol)和TBDMS-Cl(7.4g；48.9mmol)加入(R,S)-3-羟基-2-(3-甲氧基苯基)丙酸(4g；20.4mmol；得自以上实施例E(ⅱ))的DMF(20ml)溶液中。于室温下搅拌该反应混合物3天。然后加入水(0.5L)，用乙醚提取该混合物三次。用枸橼酸(10％)、水、碳酸氢钠水溶液和水洗涤合并的有机相，干燥(硫酸钠)并蒸发。粗品(8.53g；98％的黄色油状物)可不经进一步纯化而用于下一步骤。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.22(t,1H),6.90(d,1H),6.88(m,1H),6.81(m,1H),4.16(t,1H),3.80(s,3H),3.82-3.72(m,2H),0.88(s,6H),0.87(s,6H),0.22(d,6H),0.02(d,6H)。
(ⅱ)(R,S)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OTBDMS)COOH
于室温下，将(R,S)-甲氧基苯基-CH(CH2OTBDMS)COOTBDMS(8.0g；18.8mmol)、碳酸钾(6.25g；45.2mmol)、甲醇(120ml)和水(40ml)的混合物搅拌过夜。浓缩后用乙醚洗涤水层。用枸橼酸酸化并用乙醚提取三次。用水洗涤合并的有机相，干燥(硫酸钠)并蒸发得到5.0g(87％)的黄色油状的副标题化合物。1H-NMR(400MHz；CD3OD):δ7.21(t,1H),6.89(s+d,2H),6.82(m,1H),4.86(b,2H),4.13(dd,1H),3.76(s,3H),3.8-3.7(m,2H),0.86(s,9H),0.02(d,6H)。
实施例T
(R,S)-3-羟基-2-(3-Boc-氨基苯基)丙酸
(ⅰ)3-氨基苯乙酸乙酯
将间-氨基苯甲酸(3.0g；19.8mm0l)和浓硫酸(2ml)的乙醇(abs.；20ml)溶液于75℃加热3天。浓缩该溶液，加入碳酸钠水溶液并用乙醚(80ml)提取该混合物。用盐水洗涤有机层，干燥(硫酸钠)并浓缩得到2.9g(82％)的副标题化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.10(t,1H),6.77(d,1H),6.62(t,1H),6.58(m,1H),4.15(q,2H),3.65(b,2H),3.52(s,2H),1.25(t,3H)。
(ⅱ)3-(Boc-氨基)苯乙酸乙酯
于室温下，将3-氨基苯乙酸乙酯(1.9g；11mmol；得自以上步骤(ⅰ))和Boc2O(2.3g；11mmol)的THF(50ml)溶液搅拌过夜。浓缩该反应混合物，加入盐酸水溶液。用乙醚提取混合物水溶液，用水洗涤有机层，干燥(硫酸钠)并浓缩得到2.5g(84％)的副标题化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.33(s,1H),7.24(dd,2H),6.96(m,1H),6.50(b,1H),4.15(q,2H),3.58(s,2H),1.53(s,9H),1.26(t,3H)。
(ⅲ)2-((3-Boc-氨基)苯基)-3-氧代-丙酸乙酯
将钠(0.34g；15mmol)分小块加入3-(Boc-氨基)苯乙酸乙酯(2.4g；8.6mmol；得自以上步骤(ⅱ))和甲酸乙酯(1.1g；15mmol)在无水乙醚(60ml)的溶液中。将该溶液置冰浴上冷却，其后加入乙醇(abs；0.15ml)。于室温下搅拌该反应混合物3天。将乙醚∶乙醇(50∶5ml)加入到生成的灰色淤浆中，搅拌该溶液一段时间，加水至形成澄清的黄色溶液。分离各相，用水提取有机相一次。用3％盐酸水溶液酸化该水相至pH2，此时形成沉淀。加入一小部分盐水并用乙醚提取该化合物水溶液。用碳酸氢钠水溶液(10％)洗涤该有机相，干燥(硫酸钠)并蒸发。分离出澄清的带棕色油状的副标题化合物，该物质具有足够的纯度可供使用而不需进一步纯化。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.4(m,3H),7.0(m,1H),6.6(b,1H),4.3(m,2H),1.5(s,9H),1.3(m,3H)。
(ⅳ)(R,S)-3-羟基-2-(3-Boc-氨基苯基)丙酸
根据以上实施例E所述方法，用2-((3-Boc-氨基)苯基)-3-氧代-丙酸乙酯(得自以上步骤(ⅲ))作为原料制备。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.25(m,3H),6.95(d,1H),6.55(b,1H),4.15(m,2H),1.50(s,9H),1.20(t,3H)。
实施例U
(R,S)-3-羟基-2-(3-(Boc-甲基氨基)苯基)丙酸
(ⅰ)3-(甲酰氨基)苯乙酸乙酯
用Dean-Stark trap使3-氨基苯乙酸乙酯(3.0g；0.017mol；得自以上实施例T(ⅰ))和甲酸(1.5g；0.034mol)在二异丙醚(150ml)中的溶液回流过夜。将该溶液浓缩至干，并溶于乙醚中，用稀盐酸洗涤以除去残留的原料。干燥(硫酸钠)并浓缩得到副标题化合物(3.1g；89％)。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ8.65(d,1H),8.40(b,1H),7.45(m,1H),7.25(m,1H),7.05(m,2H),4.15(m,2H),3.55(s,2H),1.30(m,3H)。
(ⅱ)3-(甲基氨基)苯乙酸乙酯
将甲硼烷-二甲硫配合物(2M在THF中；20ml)溶液加入3-(甲酰氨基)苯乙酸乙酯(4.1g；0.02ml；得自以上步骤(ⅰ))在THF(干燥；100ml)的冰冷溶液中，并搅拌该反应混合物1小时。将生成的溶液倾入稀盐酸中，并将该混合物静置15分钟，其后用乙醚洗涤以除去未反应的原料。使该水溶液调至碱性(碳酸氢钠)，用乙醚提取(三次)。用水洗涤合并的有机相，干燥(硫酸钠)并蒸发得到3.0g(78％)副标题化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.10(t,1H),6.60(d,1H),6.50(m,2H),4.10(q,2H),3.50(s,2H),2.80(s,3H),1.20(t,3H)。
(ⅲ)3-(N-Boc-甲氨基)苯乙酸乙酯
于室温下，将3-(甲氨基)苯乙酸乙酯(3.0g；0.016mol；得自以上步骤(ⅱ))和Boc2O(3.4g；0.016mol)的THF(100ml)溶液搅拌12天。浓缩生成的溶液得到副标题化合物(4.9g；定量)。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.35(d,1H),7.10(m,3H),4.15(q,2H),3.60(s,2H),3.25(s,3H),1.45 s,9H),1.25(t,3H)。
(ⅳ)2-((N-Boc-甲氨基)苯基)-3-氧代-丙酸乙酯
根据上述实施例T(ⅲ)所述方法制备，由3-(N-Boc-甲氨基)苯乙酸乙酯(2.0g；6.8mmol；得自以上步骤(ⅲ))得到1.6g(73％)副标题化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ12.1 5(d,0.5H),7.74(s,0.5H),7.25(m,4H),4.2(m,2H),3.26(s,3H),1.46(s,9H),1.29(m,3H)。
(ⅴ)(R,S)-3-羟基-2-(3-Boc-氨基苯基)丙酸
根据以上实施例E所述方法，用2-((N-Boc-甲氨基)苯基)-3-氧代-丙酸乙酯(得自以上步骤(ⅳ))作为原料制备。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.25(m,1H),7.15(m,3H),7.05(d,1H),4.05(m,1H),3.80(m,2H),1.40(s,9H)。
实施例V
(R,S)-3-羟基-2-(3-氯代-5-甲基苯基)丙酸
(ⅰ)3-氯代-5-甲基苄基溴
将5-氯代-间-二甲苯(14.06g；0.1mol)、NBS(17.8g；0.1mol)和AIBN(1.1g；6.7mmol)的四氯化碳溶液回流两小时。冷却生成的混合物，过滤除去形成的固体物质。浓缩得到副标题化合物(17.9g；80％)。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.20(s,1H),7.11(s,1H),7.09(s,1H),4.41(s,2H),2.34(s,3H)。
(ⅱ)3-氯代-5-甲基苯乙腈
制备在DMSO(25ml)中的3-氯代-5-甲基苄基溴(17.6g；0.8mol；得自以上步骤(ⅰ))和NaCN(8.2g；0.16mol)的溶液。将生成的温热的混合物稍稍冷却，然后于室温下搅拌1小时。接着加入乙腈(25ml)，并回流该混合物1小时。冷却后，加入水(200ml)。用乙醚提取生成的溶液三次。合并的有机相用水洗涤三次，干燥(硫酸钠)并蒸发得到16.6g(80％)粗制的副标题化合物，它可不经进一步纯化而用于下一步骤。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.14(s,1H),7.12(s,1H),7.04(s,1H),3.69(s,2H),2.35(s,3H)。
(ⅲ)3-氯代-5-甲基苯乙酸
在搅拌下，将3-氯代-5-甲基苯乙腈(13.3g；得自以上步骤(ⅱ))和氢氧化钾(17g；0.3mol)在150ml水∶异丙醇(2∶1)的混合物于120℃、在高压釜加热过夜，然后在室温下放置两天。蒸发异丙醇，并将残留物酸化(6M HCl)至pH2，用乙醚提取三次。合并的有机层用水洗涤两次，干燥(硫酸钠)并蒸发得到副标题化合物(10.4g；70％)。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.09(s,2H),6.97(s,1H),3.57(s,2H),2.18(s,3H)。FAB-MS m/z366(M-1)-
(ⅳ)3-氯代-5-甲基苯乙酸乙酯
将3-氯代-5-甲基苯乙酸(5.0g；27.09mmol；得自以上步骤(ⅲ))和浓硫酸(0.1ml)在乙醇(25ml)中的溶液回流过夜。浓缩该溶液，使生成的溶液在碳酸钠溶液(75ml)中碱化(digerated)。用乙醚(2×75ml)提取后，合并的有机相用盐水洗涤，干燥(硫酸钠)并蒸发得到4.92g(85％)副标题化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.07(s,1H),7.08(s,1H),6.97(s,1H),4.15(q,2H),3.54(s,2H),2.31(s,3H),1.25(t,3H)。
(ⅴ)3-氧代-2-(3-氯代-5-甲基苯基)丙酸乙酯
按照类似于以上实施例N(ⅴ)所述的方法，由3-氯代-5-甲基苯乙酸乙酯(4.89g；23mmol；得自以上步骤(ⅳ))、甲酸乙酯(3.3g；41.4mmol)和钠(0.63g；27.6mmol，分小块加入)在干燥乙醚(50ml)中制备得到3.4g(61％)澄清油状的副标题化合物，该物质放置后缓慢结晶。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ12.2(b,lH),7.28(s,1H),7.09(s,1H),7.07(s,lH),6.94(s,lH),4.30(q,2H),2.33(s,3H),1.30(t,3H)。FAB-MS m/z238,240(M-1)-
(ⅵ)(R,S)-3-羟基-2-(3-氯代-5-甲基苯基)丙酸
根据以上实施例E所述方法，用3-氧代-2-(3-氯代-5-甲基苯基)-丙酸乙酯(得自以上步骤(ⅴ))作为原料制备。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.12(s,1H),7.10(s,1H),6.98(s,1H),4.12(m,1H),3.82(m,2H),2.30(s,3H)。
实施例W
(R,S)-3-羟基-2-(3,5-二甲氧基苯基)丙酸
(ⅰ)3,5-二甲氧基苯乙酸乙酯
将3,5-二甲氧基苯乙酸(2.0g；10mmol)和浓硫酸(0.2ml)在乙醇(50ml)中的溶液回流过夜，浓缩该溶液，使生成的物质溶于氢氧化钠水溶液(1M)中。用乙醚(2×75ml)提取后，合并的有机相用盐水洗涤，干燥(硫酸钠)并蒸发得到2.0g(88％)副标题化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ6.46(d,2H),6.38(t,1H),4.17(q,2H),3.71(s,6H),3.55(s,2H),1.27(t,3H)。
(ⅱ)2-(3,5-二甲氧基苯基)-3-氧代-丙酸乙酯
根据J.Org.Chem.54,3831(1989)所述的方法，由3,5-二甲氧基苯乙酸乙酯(2.0g；8.9mmol；得自以上步骤(ⅰ))制备得到3.4g(61％)澄清油状的副标题化合物，经放置后缓慢结晶。该物质具有足够的纯度，可不需进一步提纯而用于下一步骤。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.25(m,1H)；6.40(m,3H)；4.27(q,2H)；3.75(s,6H)；1.30(t,3H)。
(ⅲ)(R,S)-3-羟基-2-(3,5-二甲氧基苯基)丙酸
根据以上实施例E所述方法，用3-氧代-2-(3,5-二甲氧基苯基)丙酸乙酯(得自以上步骤(ⅱ))作为原料制备。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ6.44(s,2H)；6.39(s,1H)；4.12(m,1H)；3.76(m,8H)。
实施例X
(R,S)-3-羟基-2-(2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基)丙酸
(ⅰ)2-氯代-5-(Boc-氨基)苄基醇
向5-氨基-2-氯代苯甲酸(9.0g；33mmol)在THF∶DMF(200ml；1∶1)中的冰冷溶液加入TEA(4.0g；40mmol)，接着加入氯代甲酸异丁酯(5.4g40mmol；滴加)。然后再搅拌该混合物30分钟，过滤除去形成的白色沉淀，使滤液冷却至-15℃，加入硼氢化钠(3.8g；100mmol)和水(20ml)。15分钟后，加入水(200ml)并于室温下搅拌该溶液1小时。蒸发后，使残留物溶于甲醇中。过滤和浓缩得到粗产物，经快速层析(硅胶，二氯甲烷∶甲醇(9∶1))纯化得到7.4g(87％)副标题化合物。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.48(s,1H)；7.27(m,2H)；6.58(s,1H)；4.74(d,2H)；1.52(s,9H)。
(ⅱ)2-氯代-5-(Boc-氨基)苄基甲磺酸酯
向2-氯代-5-(Boc-氨基)苄醇(7.4g；29mmol；得自以上步骤(ⅰ))的二氯甲烷(100ml)中的冰冷溶液加入TEA(2.9g；29mmol)，接着加入MsCl(3.3g；29mmol；滴加)。搅拌2小时后，将生成的混合物倾入水中。分离有机层，用水洗涤，干燥(硫酸钠)和浓缩得到10g(100％)副标题化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.50(m,1H)；7.40(m,1H)；7.32(s,1H)；6.55(b,1H)；5.27(s,2H)；3.05(s,3H)；1.50(s,9H)。
(ⅲ)(2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基)乙腈
向搅拌的2-氯代-5-(Boc-氨基)苄基甲磺酸酯(得自以上步骤(ⅱ))的DMSO(100ml)溶液加入NaCN(2.9g；60mmol)，于室温下搅拌该溶液过夜。将混合物倾入水(300ml)中，并用乙醚(4×50ml)提取水样悬浮液。用水洗涤合并的有机层，干燥(硫酸钠)和浓缩。经快速(硅胶；庚烷∶乙酸乙酯(8∶2))层析后，得到5.2g(65％)副标题化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.52(d,1H)；7.35(m,2H)；6.50(b,1H)；3.80(s,2H)；1.50(s,9H)。
(ⅳ)(2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基)乙酸
向(2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基)乙腈(5.2g；20mmol；得自以上步骤(ⅲ))水∶异丙醇(37ml；2∶1)的溶液加入氢氧化钾(5g；89mmol)，并使该溶液回流过夜。然后浓缩该混合物，加入水∶THF(50ml；1∶1)和Boc2O，搅拌该混合物过夜。蒸发THF，用乙醚(1×50ml)洗涤水相，用稀盐酸酸化，用乙酸乙酯(3×30ml)提取。合并的有机层用水洗涤，干燥(硫酸钠)并浓缩得到2.8g(50％)副标题化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.40(b,1H)；7.26(s,1H)；7.21(d,1H)；6.55 (b,1H)；3.77(s,2H)；1.50(s,9H)。
(ⅴ)(2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基)乙酸乙酯
向(2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基)乙酸(2.8g；9.8mmol；得自以上步骤(ⅳ))丙酮(100ml)的溶液加入碳酸钾(2.1g；15mmol)。然后加入EtI(70.6g；150mmol)，同时搅拌和回流该反应混合物。浓缩该混合物并使生成的混合物在乙醚和水(1∶1；60ml)中分配。分离有机层，用乙醚(30ml)提取水层一次。合并的有机层用水洗涤，干燥(硫酸钠)并浓缩得到3.0g(98％)副标题化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.35(b,1H)；7.25(s,1H)；7.20(d,1H)；6.52(b,1H)；4.15(q,2H)；3.70(s,2H)；1.50(s,9H)；1.25(t,3H)。
(ⅵ)2-(2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基)-3-氧代-丙酸乙酯
根据J.Org.Chem.54,3831(1989)所述的方法，由(2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基)乙酸乙酯(3.0g；9.6mmol；得自以上步骤(ⅴ))制备得到1.6g(49％)澄清棕色油状的副标题化合物，该物质具有足够的纯度以供使用，而不需进一步提纯。1H-NMR(300MHz；MeOD):δ8.98(b,0.5H)；7.89(s,0.5H)；7.25(m,3H)；4.88(s,2H)；4.15(q,2H)；1.45(s,9H)；1.20(t,3H)。
(ⅶ)(R,S)-3-羟基-2-(2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基)丙酸
根据以上实施例E所述方法，用2-(2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基)-3-氧代-丙酸乙酯(得自以上步骤(ⅵ))作为原料制备。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.25(m,4H)；6.70 (b,1H)；4.37(m,1H)；4.15(b,1H)；4.05(t,1H)；3.90(d,1H)；1.50(s,9H)。
实施例Y
(R,S)-3-羟基-2-(3-甲基苯基)丙酸
(ⅰ)2-(3-甲基苯基)-3-氧代-丙酸乙酯
根据J.Org.Chem.54,3831(1989)所述的方法，由3-甲基苯乙酸乙酯(3.0g；17mmol)制备得到2.5g(72％)副标题化合物，该物质具有足够的纯度以供使用，而不需进一步提纯。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.25(m,2H)；7.05(m,3H)；4.30(q,2H)；2.40(q,2H)；1.30(t,3H)。
(ⅱ)(R,S)-3-羟基-2-(3-甲基苯基)丙酸
根据以上实施例E所述方法，由3-氧代-2-(3-甲基苯基)丙酸乙酯(得自以上步骤(ⅰ))制备得到1.6g(80％)标题化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.20(m,1H)；7.05(m,3H)；4.12(t,1H)；3.80(m,2H)；2.32(s,3H)。
实施例Z
(R,S)-3-羟基-2-(2,5-二甲基苯基)丙酸
(ⅰ)(2,5-二甲基苯基)乙酸乙酯
将(2,5-二甲基苯基)乙酸(3.0g；18.3mmol)和浓硫酸(0.1ml)在乙醇(40ml)中的溶液回流6天。浓缩该溶液，加入乙醚(40ml)，用碳酸钠溶液(2×25ml)和水(1×25ml)洗涤生成的混合物。干燥(硫酸钠)有机相并蒸发得到2.94g(84％)澄清无色液体的副标题化合物。纯度97％。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.08(d,1H)；7.02(d,1H)；7.00(s,1H)；4.17(q,2H)；3.61(s,2H)；2.33(s,3H)；2.29(s,3H)；1.28(t,3H)。
(ⅱ)2-(2,5-二甲基苯基)-3-氧代-丙酸乙酯
根据J.Org.Chem.54,3831(1989)所述的方法，由(2,5-二甲基苯乙酸乙酯(2.92g；15mmol；得自以上步骤(ⅰ))开始制备得到2.89g(86％)棕黄色油状的副标题化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ12.00(d,1H)；7.10(m,2H)；6.92(s,1H)；4.25(b,2H)；2.33(s,3H)；2.18(s,3H)；1.25(t,3H)。
(ⅲ)(R,S)-3-羟基-2-(2,5-二甲基苯基)丙酸
根据以上实施例E所述方法，由3-氧代-2-(2,5-二甲基苯基)丙酸乙酯(2.87g；13mmol；得自以上步骤(ⅱ))制备得到1.37g(55％)白色粉末状的标题化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.10(d,1H)；7.01(d,1H)；7.00(s,1H)；4.14(m,2H)；3.73(q,1H)；2.37(s,3H)；2.29(s,3H)。
实施例AA
2-(4-苄氧基-3-甲氧基苯基)-3-羟基-丙酸
(ⅰ)4-苄氧基-3-甲氧基苯乙酸苄酯
将碳酸铯(17.88g；54.9mmol)加入在乙腈中的高香草酸(2.0g；11mmol)中，其后用10分钟滴加BnBr(4.3g；24.15mmol)。使该混合物回流过夜，通过Hyflo过滤并浓缩。使生成的混合物溶于乙酸乙酯(100ml)，加入水(30ml)，分离水层。用枸橼酸溶液(5％；1×20ml)和盐水洗涤有机相，干燥(硫酸钠)并蒸发得到4.25g(定量)副标题化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.43(d,2H)；7.34(m,8H)；6.82(d,2H)；6.74(dd,1H)；5.33(s,4H)；3.84(s,3H)；3.59(s,2H)。
(ⅱ)2-(4-苄氧基-3-甲氧基苯基)-3-氧代-丙酸乙酯
根据J.Org.Chem.54,3831(1989)所述的方法，由4-苄氧基-3-甲氧基苯乙酸乙酯(4.12g；11.4mmol；得自以上步骤(ⅰ))制备，得到1.4g(31.5％)副标题化合物。LC-MS m/z327(M-1)-1 1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ12.03(d,1H)；7.44(d,2H)；7.30(m,5H)；6.85(d,2H)；6.72(dd,1H)；5.15(s,2H)；4.27(q,2H)；3.88(s,3H)；1.30(t,3H)。
(ⅲ)2-(4-苄氧基-3-甲氧基苯基)-3-羟基-丙酸乙酯
将2-(4-苄氧基-3-甲氧基苯基)-3-氧代-丙酸乙酯(1.356g；3.47mmol；得自以上步骤(ⅱ))的甲醇∶二氯甲烷(3∶1,20ml)的溶液冷却至-15--5℃,分批加入硼氢化钠(0.264g；6.95mmol)。搅拌该冷却的反应混合物。其后使之达到室温。加入水，部分浓缩该混合物。用乙酸乙酯(2×25ml)提取后，用盐水洗涤有机相，干燥(硫酸钠)并蒸发，得到1.32g(97.1％)副标题化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.42(d,2H)；7.32(m,4H)；6.82(m,2H)；6.74(dd,1H)；5.13(s,2H)；4.15(m,3H)；3.88(s,3H)；3.78(m,2H)；1.23(t,3H)。
(ⅳ)2-(4-苄氧基-3-甲氧基苯基)-3-羟基-丙酸
向2-(4-苄氧基-3-甲氧基苯基)-3-羟基-丙酸乙酯(1.29g；3.29mmol；得自以上步骤(ⅲ))的THF(12.5ml)溶液加入氢氧化锂(0.273g；6.75mmol)的水(5ml)溶液，并于室温下搅拌该混合物2.5小时。部分浓缩生成的混合物，加入水(25ml)，用2份二氯甲烷洗涤该混合物，用盐酸水溶液(2M)酸化，用3份二氯甲烷提取，用盐水洗涤合并的有机层，干燥(硫酸钠)并蒸发得到10.55g(定量)黄色粉末。纯度83.2％。1H-NMR(400MHz；MeOH):δ7.41(d,2H)；7.32(m,4H)；6.94(d,2H)；6.82(dd,1H)；5.06(s,2H)；4.04(m,1H)；3.83(s,3H)；3.70(m,2H)。
实施例AB
(R,S)-3-羟基-2-(3,5-二氯苯基)丙酸
(ⅰ)3,5-二氯苄醇
根据以上实施例X(ⅰ)所述方法，由3,5-二氯苯甲酸(15.3g；80mmol)、TEA(8.9g；88mmol)、氯代甲酸异丁酯(12g；88mmol)和硼氢化钠(9.0g；240mmol)制备，得到10.5g(74％)副标题化物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.27(t,1H)；7.28(d,2H)；4.68(s,2H)。
(ⅱ)3,5-二氯苯乙腈
根据以上实施例X(ⅱ)和X(ⅲ)所述方法，由3,5-二氯苄醇(10.3g；58mmol；得自以上步骤(ⅰ))、TEA(6.5g；64mmol)和MsCl(7.0g；61mmol)制备得到9.6g(89％)副标题化物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.37(m,3H)；3.74(s,2H)。
(ⅲ)3,5-二氯苯乙酸
根据以上实施例X(ⅳ)所述方法，由3,5-二氯苯乙腈(9.6g；52mmol；得自以上步骤(ⅱ))和氢氧化钾(12.3g；220mmol)制备得到7.6g(72％)副标题化物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.31(t,1H)；7.20(d,2H)；3.63(s,2H)。
(ⅳ)3,5-二氯苯乙酸乙酯
根据以上实施例T(ⅱ)所述方法，由3,5-二氯苯乙酸(7.5g；37mmol；得自以上步骤(ⅲ))和浓硫酸(0.1ml)制备得到3.0g(35％)副标题化物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.28(t,1H)；7.1 8(d,2H)；4.17(q,2H)；3.56(s,2H)；1.27(t,3H)。(ⅴ)2-(3,5-(二氯苯基)-3-氧代丙酸乙酯
根据以上J.Org.Chem.54,3831(1989)所述的方法，由(3,5-二氯苯乙酸乙酯(3.0g；12.9mmol；得自以上步骤(ⅳ))制备得到澄清油状的副标题化合物(3.0g；89％)，该物质可不经进一步纯化而用于下一步骤。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ12.20(d,1H)；7.29(t,1H)；7.23(d,2H)；4.32(q,2H)；1.33(t,3H)。
(ⅵ)(R,S)-3-羟基-2-(3,5-二氯苯基)丙酸
根据以上实施例E所述方法，用2-(3,5-二氯苯基)-3-氧代-丙酸乙酯(得自以上步骤(ⅴ))制备。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.34(t,1H)；7.24(d,2H)；4.12(dd,1H)；3.91(dd,1H)；3.84(dd,1H)。
实施例AC
(R,S)-3-羟基-2-(2,3-二甲氧基苯基)丙酸
(ⅰ)2,3-二甲氧基苯乙酸乙酯
向2,3-二甲氧基苯基乙酸(2.52g；12.8mmol)的乙醇(abs.；20ml)溶液加入硫酸(30μl)，使该溶液回流20小时。浓缩生成的溶液，使之溶于乙醚中，用碳酸氢钠水溶液(2×30ml)和盐水洗涤醚溶液，干燥(硫酸镁)并浓缩，得到副标题化物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ6.99(m,1H)；6.83(m,2H)；4.16(q,2H)；3.85(s,3H)；3.82(s,3H)；3.65(s,2H)；1.25(t,3H)。
(ⅱ)2-(2,3-二甲氧基苯基)-3-氧代-丙酸乙酯
根据以上J.Org.Chem.54,3831(1989)所述的方法，由2,3-二甲氧基苯乙酸乙酯(2.14g；9.5mmol；得自以上步骤(ⅰ))制备得到澄清黄绿色油状的副标题化合物(1.53g；64％)，该物质具有足够的纯度，可不经进一步纯化而用于下一步骤。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ12.00(d,1H)；7.19(d,1H)；7.05(m,2H)；6.91(m,2H)；6.74(dd,1H)；4.24(q,2H)；3.87(s,3H)；3.74(s,3H)；1.24(t,3H)。
(ⅲ)(R,S)-3-羟基-2-(2,3-二甲氧基苯基)丙酸
根据以上实施例E所述方法，由2-(2,3-二甲氧基苯基)-3-氧代-丙酸乙酯(得自以上步骤(ⅱ))制备。LC-MS m/z225(M-1)-1 1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.05(t,1H)；6.87(dd,1H)；6.82(dd,1H)；4.15(m,3H)；3.85(s,6H)；3.75(m,1H)。
实施例AD
(R,S)-3-羟基-2-(3-甲氧基-5-氯代苯基)-丙酸
(ⅰ)3-甲氧基-5-氯代苯甲醛
将3,5-二氯苯甲醚(1.1g；6.8mmol)分批加入在THF(干燥，20ml)的中镁屑(0.20g；8.2mmol)。在第一次加入后，加入EtBr(0.1ml)以启动反应。在全部加入后，于60℃搅拌该反应混合物过夜，其后将该混合物冷却至0℃，加入DMF。搅拌1小时后，将该混合物倾入盐酸水溶液中，浓缩，用醚(3×50ml)提取。用水洗涤合并的有机相，干燥(硫酸钠)和浓缩，得到2.35g副标题化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ9.91(s,1H)；7.43(t,1H)；7.28(t,1H)；7.15(t,1H)；3.87(s,3H)。
(ⅱ)3-甲氧基-5-氯代苯基乙醛
根据P.Weierstahl等在Liebigs Ann.1389,(1995)所述方法，由3-甲氧基-5-氯代苯甲醛(2.35g；13.8mmol；来自以上步骤(ⅰ))开始制备，得到2.0g(约54％)副标题化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ9.71(t,1H)；6.84(t,1H)；6.81(t,1H)；6.64(t,1H)；3.79(s,3H)；3.62(s,2H)。
(ⅲ)(3-甲氧基-5-氯代苯基)乙酸
根据S.E.de Laszlo和P.G.Willard在J.Am.Chem.Soc.107,199(1985)所述方法，由3-甲氧基-5-氯代苯基乙醛(102mg；0.55mmol；来自以上步骤(ⅱ))制备，得到37mg(33.6％)副标题化合物。LC-MS m/z199(M-1)- 1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ6.82(t,1H)；6.75(t,1H)；6.62(t,1H)；3.72(s,3H)；3.50(s,2H)。
(ⅳ)(3-甲氧基-5-氯代苯基)乙酸乙酯
使3-甲氧基-5-氯代苯基)乙酸(0.983g；4.9mmol；得自以上步骤(ⅲ))和浓硫酸(0.1ml)在乙醇(25ml)中的溶液回流过夜。浓缩生成的混合物，加入碳酸钠水溶液(75ml)。用乙醚(2×75ml)提取该混合物，用盐水洗涤合并的有机层，干燥(硫酸钠)并浓缩得到0.989g(88.3％)棕色油状的副标题化合物。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ6.88(t,1H)；6.81(t,1H)；6.72(t,1H)；4.16(q,2H)；3.79(s,3H)；3.54(s,2H)；1.26(t,4H)。
(ⅴ)2-(3-甲氧基-5-氯代苯基)3-氧代-丙酸乙酯
根据J.Org.Chem.54,3831(1989)所述的方法，由(3-甲氧基-5-氯代苯基)乙酸乙酯(0.989g；4.33mmol；得自以上步骤(ⅳ))开始制备得到0.347g(31.3％)副标题化合物，该物质具有足够的纯度以供使用，而不需进一步提纯。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ12.15(b,1H)；7.31(s,1H)；6.86(t,1H)；6.82(t,1H)；6.70(t,1H)；4.30(q,2H)；3.80(s,3H)；1.31(t,3H)。
(ⅵ)(R,S)-3-羟基-2-(3-甲氧基-5-氯代苯基)丙酸
根据以上实施例E所述方法，用2-(3-甲氧基-5-氯代苯基)-3-氧代-丙酸乙酯(得自以上步骤(ⅴ))作为原料制备。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ6.89(t,1H)；6.84(t,1H)；6.74(t,1H)；4.12(dd,1H)；3.83(m,2H)；3.79(s,3H)。
实施例AE
(R,S)-3-羟基-2-(2-甲基-5-甲氧基苯基)-丙酸
(ⅰ)2-(2-溴代-5-甲氧基苯基-1,3-二氧戊环
向2-溴代-5-甲氧基苯甲醛(5.0g；23.2mmol)的甲苯(300ml)溶液加入乙二醇(2.16g,34.2mmol)和p-TsOH(20mg)，其后使该混合物回流12小时。使生成的混合物冷却至室温，用碳酸氢钠水溶液洗涤，干燥(硫酸钠)并浓缩得到产量5.918g(98％)的副标题化合物。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.44(d,1H)；7.16(d,1H)；6.78(dd,1H)；6.04(s,1H)；4.12(m,4H)；3.80(s,3H)。
(ⅱ)2-(2-甲基-5-甲氧基苯基)-1,3-二氧戊环
在氮气环境下，将2-(2-溴代-5-甲氧基苯基)-1,3-二氧戊环(5.44g；21mmol；得自以上步骤(ⅰ))的THF(干燥，60ml)溶液冷却至-78℃，通过注射器滴加正-丁基锂(1.4M；19.5ml)。加入完毕后，于-78℃搅拌该溶液35分钟，其后加入MeI(13.41g；94.5mmol)。缓慢搅拌生成的混合物使达到室温，然后用氯化铵水溶液使之骤冷并用乙醚提取。有机相经干燥(硫酸钠)并浓缩，得到4.25g(定量)棕色油状的副标题化合物。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.12(d,1H)；7.08(d,1H)；6.81(dd,1H)；5.93(s,1H)；4.10(m,4H)；3.80(s,3H)；2.35(s,3H)。
(ⅲ)2-甲基-5-甲氧基苯甲醛
于室温下，将2-(2-甲基-5-甲氧基苯基)-1,3-二氧戊环(4.2g；21.6mmol；来自以上步骤(ⅱ))在THF(60ml)和盐酸水溶液(5％；30ml)的混合液搅拌过夜，浓缩该溶液并用乙醚提取。干燥(硫酸钠)并蒸发有机相得到2.956g(91％)深棕色液体的副标题化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ10.28(s,1H)；7.33(d,1H)；7.16(d,1H)；7.04(dd,1H)；3.84(s,3H)；2.60(s,3H)。
(ⅳ)(2-甲基-5-甲氧基)乙酸乙酯
根据以上实施例AD(ⅱ)至AD(ⅳ)所述方法，由2-甲基-5-甲氧基苯甲醛(得自以上步骤(ⅲ))制备，得到1.18g(三步共30％)副标题化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.08(d,1H)；6.77(d,1H)；6.73(dd,1H)；4.16(q,2H)；3.78(s,3H)；3.59(s,2H)；2.24(s,2H)；1.26(t,3H)。
(ⅴ)2-(2-甲基-5-甲氧基苯基)-3-氧代-丙酸乙酯
根据J.Org.Chem.54,3831(1989)所述的方法，由2-甲基-5-甲氧基乙酸乙酯(1.16g；5.57mmol；得自以上步骤(ⅳ))开始制备，得到0.745g(57％)副标题化合物，该物质具有足够的纯度以供使用，而不需进一步提纯。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ11.97(d,1H)；7.14(d,1H)；7.10(d,1H)；6.67(dd,1H)；4.24(q,2H)；3.78(s,3H)；2.14(s,2H)；1.23(t,3H)。
(ⅵ)(R,S)-3-羟基2-(2-甲基-5-甲氧基苯基)丙酸
根据以上实施例E所述方法，用2-(2-甲基-5-甲氧基苯基)-3-氧代-丙酸乙酯(得自以上步骤(ⅴ))作为原料制备。1H-NMR(400MHz；MeOD):δ7.09(d,1H)；6.84(d,1H)；6.72(dd,1H)；4.03(m,2H)；3.73(s,3H)；3.64(dd,1H)；2.32(s,2H)。
实施例AF
(ⅰ)托品酸甲酯
向在甲苯∶二氯甲烷(150ml；2∶1)中的托品酸(5.0g,30mmol)溶液加入DBU(4.6g；30mmol)，接着加入MeI(4.3g；30mmol)。将该混合物搅拌过夜，加入水并分离各相。用乙醚提取水相，用碳酸氢钠水溶液、乙酸水溶液和水洗涤合并的有机相，干燥(硫酸钠)并浓缩得到0.95g(18％)副标题化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.25(m,5H)；4.25(m,1H)；3.88(m,2H)；3.73(s,3H)。
(ⅱ)2-甲基-2-苯基-3-甲氧基丙酸甲酯
将氢化钠(0.87g；20mmol)加入在DMF(10ml)中的托品酸甲酯(0.9g；5.0mmol；得自以上步骤(ⅰ))的冷溶液中，搅拌生成的混合物15分钟，其后加入MeI(2.8g；20mmol)，于室温下搅拌该混合物过夜。将该混合物倾入(200ml)中，用乙醚(4×25ml)提取生成的悬浮液。用水洗涤合并的有机相，干燥(硫酸钠)并浓缩得到0.70g(约65％)粗产物，它可不经进一步纯化而用于下一步骤。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.25(m,5H)；4.00(d,1H)；3.67(s,3H)；3.60(d,1H)；3.35(s,3H)；1.67(s,3H)。
(ⅲ)(R,S)-2-甲基-2-苯基-3-甲氧基丙酸
将氢氧化钠水溶液(2M；50ml)加入2-甲基-2-苯基-3-甲氧基丙酸甲酯(0.7g；3.4mmol；得自以上步骤(ⅱ))的甲醇(50ml)溶液中，搅拌该混合物2小时。用盐酸水溶液酸化该混合物，用乙醚(3×50ml)提取。用水洗涤合并的有机相，干燥(硫酸钠)并浓缩，得到0.40g(约61％)副标题化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.35(m,5H)；4.00(d,1H)；3.60(d,1H)；3.40(s,3H)；1.66(s,3H)。
实施例AG
(R,S)-3-羟基-2-(2-氯代-3-甲基苯基)丙酸
(ⅰ)2-氯代-3-甲基苯甲酸
将亚硝酸钠(14.0g；0.2mol)加入2-氨基-3-甲基苯甲酸(30.2g；0.2mol)的水(200ml)和氢氧化钠水溶液(30％；24ml)的混合液中。使该溶液冷却至0℃，并在搅拌下滴加至盐酸(87.6ml)和冰(100g)的混合物中。搅拌数分钟后，将生成的溶液加入浓盐酸(23％；100g)、氯化亚铜(20g；0.2mol)和水(40ml)的冰冷混合物中。于室温下搅拌该溶液30分钟，再于100℃搅拌30分钟，冷却，过滤分离生成的沉淀物，用水洗，干燥过夜，得到27.4g(80.3％)白色晶状物质。LC-MS m/z169,171(M-1)- 1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.79(d,1H)；7.43(d,1H)；7.25(t,1H)；2.46(s,3H)。
(ⅱ)2-氯代-3-甲基苄醇
根据以上实施例X(ⅰ)所述方法，由2-氯代-3-甲基苯甲酸(13.65g；0.08mol；得自以上步骤(ⅰ))制备，得到11.38g(90.8％)白色结晶的副标题化物。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.32(d,1H)；7.31(d,1H)；7.18(dd,1H)；4.78(d,2H)；2.40(s,3H)。
(ⅲ)2-氯代-3-甲基苯乙腈
根据以上实施例X(ⅱ)和X(ⅲ)所述方法，由2-氯代-3-甲基苄醇(11.3g；72.15mmol；得自以上步骤(ⅱ))制备，得到11.4g(93％)红棕色固体的副标题化物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.35(d,1H)；7.24(t,1H)；7.21(d,1H)；3.84(s,2H)；2.41(s,3H)。
(ⅳ)2-氯代-3-甲基苯乙酸乙酯
根据以上实施例T(ⅱ)所述方法，由2-氯代-3-甲基苯乙腈(5.28g；32mmol；得自以上步骤(ⅲ))制备，得到6.3g(88.2％)副标题化物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.12(d,2H)；7.16(dd,1H)；4.17(q,2H)；3.77(s,2H)；2.39(s,3H)；1.26(t,3H)。
(ⅴ)2-(2-氯代-3-甲基苯基)-3-氧代-丙酸乙酯
根据J.Org.Chem.54,3831(1989)所述的方法，由2-氯代-3-甲基苯乙酸乙酯(6.28g；29.53mmol；得自以上步骤(ⅳ))制备得到5.418g(76.2％)副标题化合物，该物质具有足够的纯度，可不需进一步提纯而用于下一步骤。LC-MS m/z239,241(M-1)- 1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ11.96(b,1H)；7.21(d,lH)；7.14(m,1H)；7.03(d,1H)；4.25(m,2H)；2.41(s,3H)；1.23(t,3H)。
(ⅵ)(R,S)-3-羟基-2-(2-氯代-3-甲基苯基)-丙酸
根据以上实施例E所述方法，由2-(2-氯代-3-甲基苯基)-3-氧代-丙酸乙酯(5.39g；22.39mmol；得自以上步骤(ⅴ))制备，得到4.03g(79.8％)副标题化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.25(d,1H)；7.21(m,1H)；7.16(d,1H)；4.36(dd,1H)；4.02(dd,1H)；3.74(dd,1H)；2.38(s,3H)。
本发明化合物
实施例1
(R)-和(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HCl
(ⅰ)(R)-和(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)
将(R,S)-托品酸(0.25g,1.5mmol)、H-Aze-Pab(Z)×2HCl(0.73g；1.7mmol；得自以上实施例A)和TBTU(0.53g；1.7mmol)在10mlDMF中的混合物于冰浴上冷却。加入DIPEA(0.78g；6.0mmol)，于室温下搅拌该反应混合物48小时。随后浓缩该反应混合物，用400ml水稀释(用碳酸氢钠调节pH至8)，并用乙酸乙酯(3×75ml)提取。用碳酸氢钠水溶液(3×50ml)和水(1×50ml)洗涤合并的有机层，干燥(硫酸钠)并蒸发。粗品(0.59g)经硅胶柱(120g)快速层析纯化，用二氯甲烷(300ml)、二氯甲烷∶THF(500ml；3∶1)和THF(1750ml)洗脱。收集20ml的各组分。浓缩组分41-54得到150mg化合物1A(非对映体比率＞99∶1)。浓缩组分70-90得到化合物2B(非对映体比率为89∶11)。化合物1A1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ8.27(m,1H),7.67(d,2H),7.38(d,2H),7.3-7.1(m,10H),5.49(d,1H),5.15(s,2H),4.73(m,1H),4.4-4.2(m,2H),4.10(m,1H),4.02(m,1H),3.71(m,1H),3.63(m,2H),2,34(m,1H),2.23(m,1H)。13C NMR(100MHz；CDCl3)脒和羰基碳：173.7,171.0,168.5,164.4。化合物1B1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ8.27(m,1H，次要的非对映体/旋转异构体)，8.14(m,1H，主要的非对映体/旋转异构体)，7.9-7.7(m,2H),7.5-7.1(m,12H),5.56(d,1H),5.22(s,2H，主要的非对映体/旋转异构体)，5.20(s,2H，次要的非对映体/旋转异构体)，4.89(m,1H，主要的非对映体/旋转异构体)，4.82(m,1H，次要的非对映体/旋转异构体)，4.6-4.3(m,2H),4.2-4.0(m,2H),3.8-3.6(m,3H),2.48(m,1H),2.38(m,1H)13C-NMR(100MHz；CDCl3)，脒和羰基碳：174.8,170.8,168.0,164.7
(ⅱ)(R)-或(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HCl
将化合物1A(100mg；0.19mmol；得自以上步骤(ⅰ))溶于10ml乙醇中并加入5％Pd/C(52mg)。在常压下氢化该化合物5小时。过滤和蒸发后，使该产物溶于5ml水中，加入190μl盐酸(1M)。冻干后获得白色粉末状标题化合物。产量为60mg(74％)，非对映体比率99∶1。1H-NMR(400MHz；D2O)δ8.75(m,1H，主要的旋转异构体)，8.59(m,1H，次要的旋转异构体)，7.69(d,2H，主要的旋转异构体)，7.63(d,2H,次要的旋转异构体)，7.5-7.0(m,7H),5.10(m,1H；来自相同质子的信号与HDO-信号迭加)，4.47(bs,1H),4.27(m,1H，主要的旋转异构体)，4.17(1H，次要的旋转异构体)，4.1-3.6(m,5H),2.67(m,1H，次要的旋转异构体)，2.40(m,1H，主要的旋转异构体)，2.3-2.1(m,1H)。13C NMR(75MHz；D2O)，脒和羰基碳(旋转异构体)：177.4,176.4,175.3,174.8,160.0,157.6。
(ⅲ)(S)-或(R)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HCl
根据实施例1(ⅱ)的方法，由50mg(0.097mmol)化合物1B(得自以上步骤(ⅰ))制备标题化合物。产量为32mg(79％)，非对映体比率83∶17。1H-NMR(400MHz；D2O):δ7.8-7.0(m,9H),5.10(m,1H，次要的非对映体/旋转异构体)，4.83(m,1H，主要的非对映体/旋转异构体)，4.6-4.2(m,3H),4.1-3.4(m,4H),2.54(m,1H，主要的非对映体/旋转异构体)，2.39(m,1H，次要的非对映体/旋转异构体)，2.2-2.1(m,1H)13C NMR(75MHz；D2O)，脒和羰基碳：176.6,174.9,168.9
实施例2
(R)-和(S)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc
(ⅰ)(R)-和(S)-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)
将H-Aze-Pab(Z)×2HCl(0.387g；0.88mmol；得自以上实施例A)加入(R,S)-3-羟基-2-(3-甲氧基苯基)-丙酸(0.157g；0.8mmol；来自以上实施例E)的DMF(10ml)溶液中，并使该混合物于冰浴上冷却。加入TBTU(0.283g；0.88mmol)和DIPEA(0.414g；3.20mmol)，并于室温下搅拌该反应混合物48小时。随后蒸发该反应混合物，使残留物溶于水(100ml)中，随后用乙酸乙酯(3×25ml)提取。用碳酸氢钠水溶液(3×25ml)和水(25ml)洗涤合并的有机层，干燥(硫酸钠)并蒸发。粗品经硅胶柱快速层析纯化，用二氯甲烷∶甲醇(98∶2)、乙酸乙酯、乙酸乙酯∶乙醇(95∶5)、乙酸乙酯∶乙醇(9∶1)和乙酸乙酯∶乙醇(85∶15)洗脱。浓缩某些部分得到177mg化合物2A(非对映体比率88∶12)。浓缩其它部分得到164mg化合物2B(非对映体比率为88∶12)。化合物2A1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ8.20-8.27(m,NH),7.79-7.85(m,2H),7.18-7.48(m,8H),6.70-6.88(m,3H),5.20-5.24(m,2H),4.84-4.99(m,1H),4.34-4.64(m,2H),3.98-4.16(m,2H),3.56-3.82(m,6H),2.26-2.70(m,2H)。化合物2B1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ8.14-8.21(m,NH),7.78-7.88(m,2H),7.1 8-7.48(m,8H),6.70-6.87(m,3H),5.20-5.24(m,2H),4.86-5.00(m,1H),4.34-4.64(m,2H),4.00-4.16(m,2H),3.58-3.82(m,6H),2.39-2.69(m,2H)。
(ⅱ)(R)-或(S)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc
向化合物2A(0.164g；0.30mmol；得自以上步骤(ⅰ))的乙醇(7ml)溶液加入乙酸(0.018g；0.30mmol)和Pd/C(5％；0.08g)。在常压下氢化该化合物4小时。通过硅藻土过滤该反应混合物并浓缩滤液。使粗产物溶于水中并冻干得到128mg(91％)标题化合物，非对映体比率88∶12。LC-MS m/z411(M+1)+ 1H-NMR(500MHz；D2O):δ7.67-7.85(m,2H),7.25-7.62(m,3H),6.89-7.04(m,2H),6.74-6.83(m,1H),5.16-5.22(m,1H),4.24-4.66(m,2H),3.97-4.19(m,3H),3.64-3.94(m,5H),2.18-2.82(m,2H)。
(ⅲ)(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc
向化合物2B(0.142g；0.26mmol；得自以上步骤(ⅰ))的乙醇(7ml)溶液加入乙酸(0.016g；0.26mmol)和Pd/C(5％；0.07g)。在常压下氢化该化合物4小时。通过硅藻土过滤该反应混合物并浓缩滤液。使粗产物溶于水中并冻干得到113mg(92％)标题化合物，非对映体比率88∶12。LC-MS m/z411(M+1)+ 1H-NMR(500MHz；D2O):δ7.26-7.86(m,5H),6.88-7.04(m,2H),6.75-6.83(m,1H),4.91-4.96(m,1H),4.26-4.68(m,3H),3.96-4.18(m,2H),3.64-3.94(m,5H),2.18-2.70(m,2H)。
实施例3
(R,S)-3,4-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc
(ⅰ)(R,S)-3,4-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)
将(R,S)-3-羟基-2-(3,4-二甲氧基苯基)-丙酸(0.23g,1.0mmol；得自以上实施例F)、H-Aze-Pab(Z)×2HCl(0.48g；1.1mmol；得自以上实施例A)和TBTU(0.35g；1.1mmol)在DMF(10ml)中的混合物于冰浴上冷却。加入DIPEA(0.52g；4.0mmol)，于室温下搅拌该反应混合物4天。随后浓缩该反应混合物，残留物用乙酸乙酯∶水(1∶2；300ml)稀释，用碳酸氢钠水溶液调节pH至9，接着用乙酸乙酯(3×100ml)提取。用碳酸氢钠水溶液(3×100ml)和水(3×125ml)洗涤合并的有机层，干燥(硫酸钠)并蒸发。粗品(0.43g)经硅胶柱(50g)快速层析纯化，用乙酸乙酯(200ml)、乙酸乙酯∶乙醇(95∶5；200ml)、乙酸乙酯∶乙醇(9∶1；200ml)和乙酸乙酯∶乙醇(85∶15；200ml)洗脱。产量为244mg(42％)标题化合物，非对映体比率52∶48。FAB-MS m/z575(M+1)+ 1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ8.18-8.26(m,1H),8.00-8.08(m,1H),7.76-7.84(d,1H),7.63-7.68(d,1H),7.25-7.47(m,6H),7.02-7.07(d,1H),6.64-6.84(m,3H),5.20(s,2H),4.82-5.00(m,1H),4.40-4.79(m,2H),3.98-4.24(m,2H),3.84-3.87(m,6H),3.53-3.82(m,3H),2.26-2.69(m,2H)。
(ⅱ)(R,S)-3,4-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc
将(R,S)-3,4-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)(0.095g；0.17mmol；得自以上步骤(ⅰ))、乙酸(0.010g；0.17mmol)和Pd/C(5％,0.087g)加入乙醇(10ml)中。在常压下氢化该化合物5小时。过滤该反应混合物并蒸发滤液。使残留物溶于水中并冻干获得70mg(85％)白色粉末状标题化合物，非对映体比率52∶42。LC-MS m/z441(M+1)+ 1H-NMR(400MHz；D2O):δ7.29-7.85(m,4H),6.85-7.09(m,2H),6.71-6.81(m,1H),4.90-5.19(m,1H),4.31-4.65(m,2H),3.95-4.28(m,3H),3.62-3.90(m,8H),2.1 5-2.84(m,2H)。
实施例4
(R)-和(S)-2-萘基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc
(ⅰ)(R)-和(S)-2-萘基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)
将H-Aze-Pab(Z)×2HCl(0.483g；1.1mmol；得自以上实施例A)的DMF(10ml)于冰浴上冷却。加入(R,S)-3-羟基-2-(2-萘基)-丙酸(0.216g,1.0mmol；得自以上实施例G)、TBTU(0.353g；1.1mmol)和DIPEA(0.517g；4.0ml)，并于室温下搅拌该反应混合物3天。随后蒸发该反应混合物，使残留物溶于乙酸乙酯∶水的混合液中，接着用乙酸乙酯(2×75ml)提取。用碳酸氢钠水溶液(3×30ml)和水(25ml)洗涤合并的有机层，干燥(硫酸钠)并蒸发。粗品经硅胶柱快速层析纯化，用乙酸乙酯、乙酸乙酯∶乙醇(95∶5)、乙酸乙酯∶乙醇(9∶1)洗脱。浓缩某些部分得到204mg(36％)化合物4A(非对映体比率95∶5)。浓缩其它部分得到219mg(39％)化合物4B(非对映体比率为90∶10)。化合物4ALC-MS m/z565(M+1)+ 1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ8.23-8.31(t,NH),7.20-7.88(m,16H),5.22(s,2H),4.85-4.92(m,1H),4.44-4.64(m,2H),4.07-4.24(m,2H),3.64-3.92(m,3H),2.21-2.70(m,2H)。化合物4BLC-MS m/z565(M+1)+,587(M+Na)+ 1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ8.13-8.21(t,NH),7.20-7.90(m,16H),5.24(s,2H),4.95-5.02(m,1H),4.31-4.65(m,2H),4.09-4.24(m,2H),3.62-3.92(m,3H),2.38-2.76(m,2H)。
(ⅱ)(R)-或(S)-2-萘基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc
将乙酸(0.019g；0.31mmol)和Pd/C(5％,0.09g)加入化合物4A(0.175g；0.31mmol；得自以上步骤(ⅰ))的乙醇(7ml)溶液中。在常压下氢化该化合物4小时，然后通过硅藻土过滤并浓缩滤液，使粗产物溶于水中，并冻干得到136mg(89％)标题化合物，非对映体比率95∶5。LC-MS m/z431(M+1)+ 1H-NMR(500MHz；D2O):δ7.05-8.00(m,11H),5.14-5.22(m,1H),3.60-4.58(m,8H),2.12-2.81(m,2H)。
(ⅲ)(R)-或(S)-2-萘基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc
将乙酸(0.021g；0.34mmol)和Pd/C(5％,0.09g)加入化合物4B(0.194g；0.34mmol；得自以上步骤(ⅰ))的乙醇(7ml)溶液中。在常压下氢化该化合物4小时,然后通过硅藻土过滤并浓缩滤液，使粗产物溶于水中并冻干得到151mg(90％)标题化合物，非对映体比率90∶10。LC-MS m/z431(M+1)+ 1H-NMR(500MHz；D2O):δ7.00-8.00(m,11H),4.92-4.99(m,1H),3.60-4.62(m,8H),2.12-2.83(m,2H)。
实施例5
(R)-或(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pig×HOAc
(ⅰ)(R)-和(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pig(Z)
将(R,S)-托品酸(0.132g,0.8mmol)、H-Aze-Pig(Z)×2HCl(0.393g；0.88mmol；得自以上实施例C)和TBTU(0.283g；0.88mmol)在DMF(10ml)中的混合物于冰浴上冷却。加入DIPEA(0.414g；3.20mmol)，于室温下搅拌该反应混合物48小时。随后浓缩该反应混合物，用水(175ml，用碳酸氢钠调节pH至8)稀释，并用乙酸乙酯(3×50ml)提取。用碳酸氢钠水溶液(3×25ml)和水(25ml)洗涤合并的有机层，干燥(硫酸钠)并蒸发。粗品(0.895g)经硅胶柱快速层析纯化，用二氯甲烷、二氯甲烷∶THF(4∶1,1∶1,1∶4)和二氯甲烷∶甲醇(95∶5,9∶1)洗脱。浓缩某些部分得到117mg化合物(非对映体比率＞99∶1)。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.88-7.95(bt,NH),7.21-7.41(m,10H),7.09(bs,NH),5.11(s,2H),4.78-4.80(m,1H),4.00-4.38(m,4H),3.58-3.76(m,3H),3.12-3.34(m,2H),2.76-2.97(m,3H),2.46-2.66(m,1H),2.22-2.35(m,1H),1.66-1.78(m,2H),1.22-1.38(m,2H)。(其它的部分经浓缩后得到156mg上面化合物的差向异构体，非对映体比率87∶13)
(ⅱ)(S)-或(R)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pig×HOAc
将(R)-或(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pig(Z)(0.117g；0.22mmol；得自以上步骤(ⅰ)的特征化合物)、乙酸(0.013g；0.22mmol)和Pd/C(5％,0.06g)加入乙醇(5ml)中，并在常压下氢化该化合物2.5小时。通过硅藻土过滤反应混合物，蒸发滤液，使残留物溶于水中，冻干得到92mg(93％)标题化合物，非对映体比率＞99∶1。1H-NMR(400MHz；D2O；因非对映体/旋转异构体存在出现复杂多峰)：δ7.14-7.41(m,5H),4.60-5.06(m,1H),3.64-4.09(m,7H),2.78-3.19(m,4H),2.58-2.71(m,1H),2.34-2.45(m,1H),2.03-2.20(m,1H),0.98-1.77(m,4H)。13C NMR(100.5MHz；D2O)脒和羰基信号175.95,172.69,155.85。
实施例6
(R,S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Pro-(R,S)-Hig×HOAc
(ⅰ)(R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(O)-Pro-(R,S)-Hig(Z)
将EDC×HCl(0.24g；1.25mmol)加入到(R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(O)-Pro-OH(0.3 8g,1.0mmol；得自以上实施例D)、(R,S)-H-Hig-Z×2HCl(0.36g；1.0mmol；通过使Boc-(R,S)-Hig(Z)(见国际专利申请WO94/29336)与氯化氢气体(g)在乙酸乙酯中反应，接着蒸发至干来制备)和DMAP(0.49g；4.0mmol)在乙腈(10ml)的混合物中，并于室温下搅拌该反应混合物4天。蒸发该反应混合物，使残留物溶于水(300ml；调节pH至9)中。用乙酸乙酯(3×150ml)提取。用碳酸氢钠水溶液(2×25ml)和水(3×150ml)洗涤合并的有机层，干燥(硫酸钠)并蒸发得到0.48g副标题化合物，它可不经进一步纯化而用于下一步骤。
(ⅱ)(R,S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Pro-(R,S)-Hig(Z)
于0℃，将(R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(O)-Pro-(R,S)-Hig(Z)(0.265g；0.41mmol；得自以上步骤(ⅰ))在TFA(6.5ml,10％二氯甲烷溶液)中搅拌30分钟。用碳酸钾水溶液将该化合物的pH调至9，随后用二氯甲烷(3×75ml)提取。用水洗涤合并的有机层，干燥(硫酸钠)并蒸发。粗品(0.24g)经硅胶柱(50g)快速层析纯化，用二氯甲烷(200ml)、二氯甲烷∶乙醇(95∶5；200ml)和二氯甲烷∶乙醇(9∶1；400ml)洗脱。产量为109mg(50％)的标题化合物。LC-MS m/z536(M+1)+ 1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.17-7.45(m,10H),5.06-5.15(m,2H),4.46-4.62(m,1H),3.97-4.21(m,2H),3.08-3.91(m,8H),2.80-2.98(m,1H),1.35-2.30(m,9H)。13C NMR(100.5MHz；CDCl3)脒和羰基信号：172.72,171.74,163.77,159.14。
(ⅲ)(R,S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Pro-(R,S)-Hig×HOAc
将(R,S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Pro-Hig-Z(0.11mg；0.21mmol；得自以上步骤(ⅱ))、Pd/C(5％,0.06g)和乙酸(0.012g；0.21mmol)在乙醇(10ml)中的化合物在常压下氢化4小时。过滤该反应混合物，并蒸发滤液。使粗产物溶于水中并冻干得到78mg(82％)标题化合物。LC-MS m/z402(M+1)+ 1H-NMR(400MHz；D2O):δ7.15-7.45(m,5H),4.20-4.38(m,1H),3.89-4.14(m,2H),3.67-3.81(m,2H),2.70-3.64(m,7H),1.40-2.37(m,9H)。13C NMR(75.5MHz；D2O)脒和羰基信号：174.90,173.48,154.84。
实施例7
(R)-和(S)-2,5-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc
(ⅰ)(R)-和(S)-2,5-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)
将H-Aze-Pab(Z)×2HCl(0.387g；0.88mmol)的DMF(10ml)液于冰浴上冷却。加入3-羟基-2-(2,5-二甲氧基苯基)-丙酸(0.181g,0.8mmol)、TBTU(0.283g；0.88mmol)和DIPEA(0.414g；3.20mmol)并于室温下搅拌该反应混合物4天。随后蒸发该反应混合物，使残留物溶于水∶乙酸乙酯(2∶1；150ml)中，接着用乙酸乙酯(3×25ml)提取。用碳酸氢钠水溶液(3×25ml)和水(25ml)洗涤合并的有机层，干燥(硫酸钠)并蒸发。粗品(0.43g)经硅胶柱快速层析纯化，用乙酸乙酯、乙酸乙酯∶乙醇(99∶1)、乙酸乙酯∶乙醇(97∶3)和乙酸乙酯∶乙醇(95∶5)洗脱。浓缩某些部分得到165mg化合物7A(非对映体比率＞99∶1)。浓缩其它部分得到185mg化合物7B(非对映体比率为93∶7)。化合物7ALC-MS m/z575(M+1)+,597(M+Na)+ 1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ8.26-8.36(m,NH),7.80-7.87(d,2H),7.24-7.48(m,7H),6.76-6.85(m,3H),5.22(s,2H),4.83-4.90(m,1H),4.43-4.59(m,2H),3.92-4.18(m,3H),3.80(s,3H),3.75(s,3H),3.58-3.72(m,2H),2.25-2.72(m,2H)。化合物7BLC-MS m/z575(M+1)+,597(M+Na)+ 1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ8.11-8.19(m,NH),7.79-7.88(m,2H),7.24-7.48(m,7H),6.68-6.84(m,3H),5.22(s,2H),4.91-4.98(m,1H),4.36-4.67(m,2H),3.99-4.22(m,3H),3.48-3.82(m,8H),2.38-2.95(m,2H)。
(ⅱ)(R)-或(S)-2,5-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc
将化合物7A(0.141g；0.25mmol；得自以上步骤(ⅰ))溶于乙醇(7ml)中。加入乙酸(0.015g；0.25mmol)和Pd/C(5％,0.07g)，并在常压下氢化该混合物3小时。通过硅藻土过滤该反应混合物并蒸发滤液，使残留物溶于水中，并冻干获得113mg(90％)白色粉末状标题化合物，非对映体比率＞99∶1。LC-MS m/z441(M+1)+ 1H-NMR(400MHz；D2O):δ7.34-7.84(m,4H),6.82-7.14(m,3H),5.06-5.13(m,1H),3.72-4.37(m,13H),2.11-2.86(m,2H)。
(ⅲ)(R)-或(S)-2,5-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc
将化合物5B(0.164g；0.286mmol；得自以上步骤(ⅰ))溶于乙醇(7ml)中。加入乙酸(0.017g；0.286mmol)和Pd/C(5％,0.08g)，并在常压下氢化该化合物3小时。通过硅藻土过滤该反应混合物并蒸发滤液，使残留物溶于水中并冻干获得130mg(91％)标题化合物，非对映体比率93∶7。LC-MS m/z441(M+1)+ 1H-NMR(400MHz；D2O):δ7.34-7.86(m,4H),6.78-7.10(m,3H),4.89-4.96(m,1H),3.70-4.68(m,13H),2.16-2.73(m,2H)。
实施例8
(R,S)-Ph-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OH
(ⅰ)(R,S)-Ph-CH(CH2OTBDMS)-C(O)-Pro-Pab(Z)
将(R,S)-Ph-CH(CH2OTBDMS)-C(O)-Pro-OH(0.753g,2.0mmol，见以上实施例D)、H-Pab(Z)×HCl(0.681g；2.1mmol)、DMAP(0.366g；3.0mmol)和EDC(500μl；2.7mmol)在乙腈(7ml)中的混合物于室温下搅拌3天。蒸发该反应混合物，残留物经硅胶柱快速层析纯化，用乙酸乙酯∶甲苯(2∶1)和THF∶甲苯(3∶7)洗脱。标题化合物的产量为345mg(27％)。FAB-MS m/z643(M+1)+ 1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ6.85-7.85(m,14H),5.15(s,2H),3.15-4.80(m,8H),1.60-2.30(m,4H),0.65-0.90(m,9H),-0.80-0.05(m,6H)。
(ⅱ)(R,S)-Ph-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)
将(R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(O)-Pro-Pab(Z)(0.345g；0.54mmol；得自以上步骤(ⅰ))加入三氟乙酸(2ml)在二氯甲烷(8ml)的混合物中。将该反应混合物于室温下搅拌4小时。用二氯甲烷稀释该化合物并用碳酸氢钠水溶液将pH调至7。干燥(硫酸镁)并蒸发有机层。残留物经制备的RPLC得到111mg(39％)副标题化合物。FAB-MS m/z529(M+1)+；LC-MS m/z527(M-1)-；529(M+1)+,551(M+Na)+ 1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.10-7.86(m,14H),5.18-5.25(m,2H),3.05-4.69(m,8H),1.66-2.28(m,4H)。
(ⅲ)(R,S)-Ph-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OH
将(R,S)-Ph-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(0.111g；0.21mmol；得自以上步骤(ⅱ))加入盐酸羟胺(0.206g；3.0mmol)和三乙胺(1.3ml；9.3mmol)在乙醇(4ml)的混合物中，并将该混合物于室温下搅拌4天。粗产物经制备的RPLC得到50mg(23％)标题化合物。LC-MSm/z411(M+1)+；433(M+Na)+
实施例9
(R)-或(S)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab-OH
将盐酸羟胺(0.083g；1.2mmol)和TEA(0.405g；4.0mmol)在11mlTHF中的溶液超声处理35分钟。加入(R)-或(S)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)(来自以上实施例2(ⅰ)的化合物2A；0.109g；0.2mmol；)，于40℃搅拌该混合物过夜。蒸发溶剂，粗品经硅胶柱快速层析纯化，用二氯甲烷∶IPA:HOAc(100∶0∶0-->90∶10∶0-->80∶20∶0梯度洗脱，接着经HPLC(乙腈∶乙酸胺(0.1M)(32.5∶67.5))纯化。冻干后，获得38mg(44％)的白色粉末。LC-MS m/z427(M+1)+
实施例10
(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)C(O)-Pro-Pab(Z)
于0℃，将H-Pro-Pab(Z)(0.5g；1.1mmol；国际专利申请WO97/02284所述方法制备)，接着将TBTU(0.353g；1.1mmol)，然后将DIPEA(0.517g；4.0mmol)加入(R,S)-3-羟基-2-(3-甲氧基苯基)-丙酸(0.196g；1mmol；来自以上实施例E(ⅱ))的DMF(10ml)溶液中。于室温下搅拌4天后，浓缩该反应混合物，并经RPLC(乙腈∶H4NOAc(1M)(40∶60))纯化。浓缩各部分并用乙酸乙酯提取4次。然后干燥(硫酸钠)合并的有机相，并蒸发得到非对映体的粗混合物。将该混合物(0.84g)经RPLC(乙腈∶H4NOAc(1M)34∶66)层析，分离出两种异构体：化合物10A(0.352g；83％；即移动快的非对映体；经HPLC纯度为90.5％)和化合物10B(0∶311g；74％；即移动慢的非对映体；经HPLC纯度为96.9％)。化合物10B1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.83(d,2H)；7.46(dd,2H)；7.4-7.3(m,8H)；6.84(dd+s,3H)；5.23(s,2H)；4.62(dd,1H)；4.49(ddd,2H)；4.03(dd,1H)；3.88(dd,1H)；3.80(s,2H)；3.73(dd,2H)；3.63(m,1H)；3.2(m,1H)；2.3(m,1H)；2.1-2.0(m,2H)；1.82(m,3H)；1.74(b,3H)。
实施例11
(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc
将Pd/C(5％；10mg)加入(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(得自以上实施例10的化合物10B；10mg；0.018mmol)在10ml乙醇的酸化(HOAc；2.7mg；0.045mmol)溶液中。于室温下氢化(1 atm.)该反应混合物3.5小时。过滤该溶液，蒸发并溶于20ml乙腈∶水(50∶50)中。冻干该溶液得到10mg(100％)白色粉末的标题化合物。LC-MS m/z425(M+1)+
实施例12
(R,S)-3-氨基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc
(ⅰ)(R,S)-(3-Boc-氨基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)
将(R,S)-3-羟基-2-(3-Boc-氨基苯基)丙酸(0.146g；0.8mmol；得自以上实施例T)的DMF(10ml)冷却至0℃中的溶液。按下列顺序加入H-Pro-Pab(Z)×HCl(0.339；0.88mmol)、TBTU(0.283g；0.88mmol)和DIPEA(0.414g；3.20mmol)，并于室温下搅拌该反应混合物4天。随后蒸发DMF，残留物经制备的RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)；42∶58)纯化。蒸发乙腈，将水溶液冻干得到副标题化合物(187mg；43％)。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ9.48(b,1H)；7.73(d,1H)；7.43(t,1H)；7.34(m,5H)；7.20(d,1H)；6.85(d,1H)；6.80(d,1H)；5.21(d,2H)；4.62(m,1H)；4.40(m,2H)；4.02(m,1H)；3.87(m,1H)；3.75(m,1H)；3.70(dd,1H)；3.65(m,1H)；3.50(m,1H)；3.23(m,1H)；2.25(m,1H)；1.87(m,4H)；1.79(m,1H)；1.47(d,9H)。
(ⅱ)(R,S)-(3-Boc-氨基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc
将Pd/C(10％；10mg)加入(R,S)-(3-Boc-氨基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(270mg；0.42mmol；得自以上步骤(ⅰ))在10ml乙醇和HOAc(10滴)的溶液中。于室温下氢化(1atm.)该反应混合物2小时。通过Hyflo过滤生成的混合物。蒸发溶液，加入水并冻干该溶液得到214mg(100％)白色泡沫物的副标题化合物。1H-NMR(400MHz；D2O):δ7.75(d,1H)；7.70(d,1H)；7.50(d,1H)；7.35(d,2H)；7.25(m,2H)；7.05(m,1H)；4.50(m,2H)；4.10(m,2H)；3.90(m,2H)；1.45(d,9H)。
(ⅲ)(R,S)-3-氨基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc
于室温下，将(R,S)-(3-Boc-氨基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(172mg；0.42mmol)的HCl(6M；10ml)溶液搅拌2小时，将该产物冻干获得153mg(76％；94.2％纯度)白色的标题化合物。1H-NMR(500MHz；D2O):δ7.33(m,2H)；7.16(t,1H)；7.02(m,5H)；4.07(m,3H)；3.84(q,1H)；3.68(m,1H)；3.44(m,1H)；3.24(m,1H)；2.96(m,1H)；1.83(m,1H)；1.50(m,3H)13C NMR(100MHz；D2O)174.6,174.3(旋转异构体和/或非对映体)172.1,171.9(旋转异构体和/或非对映体)；166.1。
实施例13
(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OH
将盐酸羟胺(149mg；2.15mmol)和TEA(725mg；7.16mmol)在11mlTHF中的溶液超声处理35分钟。加入(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(来自以上实施例10的化合物10B；200mg；0.36mmol；)，于40℃搅拌该混合物过夜。蒸发溶剂，粗品先经硅胶柱快速层析纯化，用二氯甲烷∶IPA:HOAc(100∶0∶0-->90∶10∶0-->80∶20∶2)梯度洗脱，然后经RPLC(乙腈∶乙酸铵(0.1M)32.5∶67.5)纯化。冻干获得119mg(75％)白色粉末的标题化合物。LC-MS m/z441(M+1)+ 1H-NMR(400MHz；CD3OD):δ7.64(d,2H)；7.38(d,2H)；7.27(t,1H)；6.93(m,2H)；6.87(m,1H)；4.47(s,3H)；4.14(dd,1H)；4.03(dd,1H)；3.80(s,1H)；3.72(dd,1H)；3.38(dt,1H)；2.12(m,1H)；2.00(m,3H)；1.48(m,1H)13C NMR(CD3OD)脒和羰基碳：174.7；173.4；161.5。
实施例14
(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-PTo-Pab-OC(O)Et
(ⅰ)(R)和(S)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OTBTMS)-C(O)-Pro-Pab(Z)
将(R,S)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OTBDMS)COOH(3g；9.66mmol；得自以上实施例S)的DMF(100ml)溶液于冰水中冷却，并加入H-Pro-Pab(Z)(4.8g；10.63mmol；根据国际专利申请WO 97/02284所述方法制备)，TBTU(3.4g；10.63mg)，接着加入DIPEA(5.0g；38.65mmol)。于室温下搅拌该混合物5天。浓缩该溶液并将残留物溶于400ml水和200ml乙酸乙酯的混合液中。分离有机层，用乙酸乙酯(3×50ml)提取水相。用碳酸氢钠水溶液(10％)洗涤合并的有机层两次，用水洗涤一次，干燥(硫酸钠)并蒸发。粗品(6.25g棕色固体)经硅胶柱(乙酸乙酯∶乙醇(95∶5))快速层析纯化，得到4.27g粘稠的棕色油状物。该物质经RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)(70∶30))进一步纯化得到两种非对映体，化合物14A(1.49g；即移动快的异构体)和化合物14B(1.0g；即移动慢的异构体)。LC-MS m/z672.6(M+1)+(外消旋物)
(ⅱ)(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OTBTMS)-C(O)-Pro-Pab-OH
将羟基胺×盐酸(0.43g；6.2mmol)和TEA(2.1g；20.8mmol)在THF(50ml)中的溶液超声处理2小时，其后加入化合物14B(0.70g；1.04mmol；来自以上步骤(ⅱ))。于56℃搅拌该溶液过夜。蒸发后，该产物经RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)(65∶35))纯化得到0.396g(69％)白色粉末的副标题化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.89(bt,1H)；7.49(d,2H)；7.25(d,2H)；6.90(s+d,2H)；6.83(m,1H)；4.93(b,2H)；4.66(m,2H)；4.24(t,1H)；4.20(d,1H)；3.88(dd,1H)；3.81(s,3H)；3.74(m,2H)；3.34(m,1H)；2.38(m,1H)；2.10(m,1H)；1.82(m,2H)；0.83(s,9H),-0.05(d,6H)。
(ⅲ)(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OTBTMS)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)Et
将(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OTBTMS)-C(O)-Pro-Pab-OH(130mg；0.23mmol；得自以上步骤(ⅱ))、丙酸酐(1g；7.7mmol)和DMAP(9mg；0.07mmol)的混合物于室温下搅拌35分钟.然后蒸发生成的混合物而得到黄色油状物，经RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)(70∶30))纯化得到75mg(52％)副标题化合物(纯度：99.6％)。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.66(d,2H)；7.62(t,1H)；7.33(d,2H)；6.90(d+s,3H)；6.82(m,1H)；5.04(b,2H)；4.63(t,1H)；4.59(d,1H)；4.30(dd,1H)；4.23(t,1H)；3.88(dd,1H)；3.80(s,3H)；3.7(m,2H)；3.32(m,1H)；2.55(q,2H)；2.43(m,1H)；2.02(m,1H)；1.85(m,1H)；1.75(m,1H)；1.26(t,3H)；0.82(s,9H)；-0.05(d,6H)。
(ⅳ)(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)Et
将TFA(0.2ml)加入(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OTBTMS)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)Et(75mg；0.12mmol；得自以上步骤(ⅲ))在二氯甲烷的冰冷溶液中。于0℃搅拌该溶液35分钟，用固体碳酸钠使该溶液呈碱性并用二氯甲烷提取。收集有机相，洗涤(水)、干燥(硫酸钠)并蒸发，得到60mg粗品。经RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)(42∶58))纯化并冻干，获得41mg(67％)白色粉末的标题化合物。LC-MS m/z497(M+1)+ 1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.66(d,2H)；7.34(d,2H)；6.83(dd,3H)；5.11(b,2H)；4.63(dd,1H)；4.48(ddd,2H)；4.03(dd,1H)；3.88(dd,1H)；3.80(s,3H)；3.73(dd,1H)；3.64(m,1H)；3.19(m,1H)；2.54(q,2H)；2.35(m,1H)；2.06(m,1H)；1.82(m,2H)；1.27(t,3H)。
实施例15
(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)CH3
(ⅰ)(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OTBTMS)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)CH3
将(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OTBTMS)-C(O)-Pro-Pab-OH(130mg；0.23mmol；得自以上实施例14(ⅱ))、乙酸酐(1ml；10mmol)和DMAP(9mg；0.07mmol)的混合物于室温下搅拌90分钟。蒸发后使粗品经RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)(60∶40))纯化，得到78mg(57％)副标题化合物。LC-MS m/z598(M+1)+
(ⅱ)(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)CH3
将0.2ml TFA加入(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OTBTMS)-C(O)-Pro-Pab-(OC(O)CH3)(125mg；0.21mmol；得自以上步骤(ⅰ))在二氯甲烷(2.5ml)的溶液中，并于室温下搅拌该混合物40分钟，其后用碳酸钠水溶液使该溶液呈碱性，并用二氯甲烷提取。用水洗涤有机层一次，干燥(硫酸钠)并蒸发，得到60mg粗品。经RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)(60∶40))纯化并冻干，获得36mg(36％)白色粉末的标题化合物。LC-MS m/z484(M+1)+
实施例16
(R)-或(S)-3-(甲氨基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×2HCl
(ⅰ)(R,S)-((3-Boc-甲氨基)苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)
将(R,S)-3-羟基-2-(3-Boc-氨基苯基)丙酸(0.28g,0.95mmol；来自以上实施例U)的DMF(10ml)溶液冷却至0℃。按顺序加入H-Pro-Pab(Z)×HCl(0.46；0.88mmol)、TBTU(0.32g；1.0mmol)和DIPEA(0.44g；3.4mmol)，并于室温下搅拌该反应混合物4天。随后蒸发DMF，残留物经制备的HPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)；42∶58)纯化。蒸发乙腈，将水溶液冻干得到副标题化合物(220mg；43％)。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.28(d,1H)；7.75(d,1H)；7.42(m,2H)；7.33(m,3H)；7.28(m,3H)；7.23(m,1H)；7.12(d,2H)；5.20(d,2H)；4.60(m,1H)；4.40(m,2H)；4.03(m,1H)；3.90(m,1H)；3.72(m,1H)；3.50(m,1H)；3.14(s,3H)；2.25(m,1H)；1.85(m,4H)；1.43(s,9H)。
(ⅱ)(R)-和(S)-((3-Boc-甲氨基)苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab
将Pd/C(10％；10mg)加入(R,S)-((3-Boc-甲氨基)苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(270mg；0.42mmol；得自以上步骤(ⅰ))在10ml乙醇和HOAc(10滴)的溶液中。于室温下氢化(1atm.)该反应混合物2小时。通过Hyflo过滤生成的混合物。蒸发溶液，加入水并冻干该溶液得到214mg(100％)白色泡沫物的副标题化合物。粗品经RPLC(乙腈∶NH4OAc(0.1M)；32∶68)纯化，分离出非对映异构体。蒸发乙腈并冻干水溶液得到化合物16A(即移动快的异构体)和化合物16B(即移动慢的异构体)。化合物16A1H-NMR(300MHz；D2O):δ7.8(d,2H)；7.4(d,2H)；7.2(m,4H)；4.6(m,2H)；4.3(d,1H)；4.15(m,2H)；3.85(m,2H)；3.55(m,1H)；2.95(s,2H)；2.3(m,1H)；2.0(d,5H)；1.4(d,9H)。化合物16B1H-NMR(300MHz；D2O):δ7.8(d,2H)；7.5(d,2H)；7.3(m,4H)；4.5(m,2H)；4.4(d,1H)；4.1(m,2H)；3.8(m,2H)；3.4(m,1H)；3.2(s,2H)；2.2(m,1H)；2.0(d,5H)；1.4(d,9H)。
(ⅲ)(R)-或(S)-(3-甲氨基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl于室温下，将(R)-或(S)-(3-Boc-甲氨基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(来自以上步骤(ⅱ)的化合物16B；172mg；0.42mmol)的盐酸(6M；10ml)溶液搅拌2小时，并将该产物冻干获得153mg(76％；94.2％纯度)白色的标题化合物。FAB-MS m/z424(M+1)+ 1H-NMR(400MHz；D2O):δ8.77(t,1H)；7.80(d,2H)；7.72(d,1H)；7.63(t,1H)；7.54(d,2H)；7.50(m,2H)；4.55(m,2H)；4.46(m,2H)；4.46(dd,1H)；4.27(t,1H)；4.12(m,2H)；3.88(m,2H)；3.66(dd,1H)；3.42(m,1H)；3.13(s,3H)；2.22(m,1H)；2.00(m,2H)；1.90(m,1H)13C NMR(100MHz；D2O)174.6,171.9,166.6。
实施例17
(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl
(ⅰ)(S)-托品酸
根据G Fodor等在Acta Chem.Hung.28,407(1961)中所述方法，用(1R:2R)-(-)-1-对-硝基苯基-2-氨基丙-1,3-二醇(7.85g；47mmol)使外消旋托品酸(10g；47mmol)溶解，获得0.25g(5％)标题化合物。[α]D 20=-77℃；c=0.5(H2O)(Lit:-72℃)。
(ⅱ)(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)
制备(S)-托品酸(234mg；1.4mmol；得自以上步骤(ⅰ))、H-Pro-Pab(Z)(884mg；1.95mmol；根据国际专利申请WO 97/02284所述方法制备)和TEA(1ml；7mmol)的溶液，并冷却至0℃。随后加入HBTU(570mg；1.5mmol)并搅拌溶液过夜。此后蒸发溶剂，粗品经RPLC纯化得到0.50g(68％)副标题化合物。LC-MS m/z527(M-1)-
(ⅲ)(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)
于室温下，用Pd/C(10％；161mg)使(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(220mg；0.42mmol；得自以上步骤(ⅰ))的乙醇(25ml)溶液在常压下氢化18小时。通过Hyflo过滤生成的溶液并蒸发。使形成的固体溶于水中，加入1ml 2M盐酸水溶液，并冻干该溶液，得到白色固体的标题化合物(132mg,80％)。LC-MS m/z394.5(M+1)+
实施例18
(R,S)-3,5-二甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc
(ⅰ)(R,S)-3,5-二甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)
于0℃冷却(R,S)-3-羟基-2-(3,5-二甲基苯基)-丙酸(0.155g,0.8mmol；得自以上实施例H)在DMF(10ml)中的溶液。加入H-Aze-Pab(Z)×2HCl(0.387g；0.88mmol；得自以上实施例A)，接着加入TBTU(0.283g；0.88mmol)，然后加入DIPEA(0.414g；3.2mmol)，于室温下搅拌该溶液4天。随后浓缩该溶液，生成的混合物经RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)；40:60)蒸发乙腈并用乙酸乙酯提取水相。干燥(硫酸钠)有机相并蒸发至干燥。分离出为白色固体的副标题化合物(270mg；62％)。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ8.27(bt,0.5H)；8.15(bt,0.5H)；7.80(d,2H)；7.44(m,2H)；7.34(d,2H)；7.30(d,2H)；6.91(d,1H)；6.85(s,1H)；6.65(s,1H)；5.20(d,2H)；4.90(m,1H)；4.6-4.4(m,2H)；4.1-4.0(m,2H)；3.8-3.5(m,3H)；2.58(m,1H)；2.29(s,3H)；2.21(s,3H)。
(ⅱ)(R,S)-3,5-二甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc
将乙酸(24μl)和Pd/C(5％,0.115g)加入(R,S)-3,5-二甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)(0.229g；0.42mmol；得自以上步骤(ⅰ))的乙醇(10ml)溶液中。在常压下氢化该溶液2.5小时。通过Hyflo过滤该混合物，浓缩生成的溶液，并使之溶于最少量的水中，冻干获得0.174g(88％；纯度93.6％)白色固体的标题化合物。LC-MS m/z409(M+1)+
实施例19
(S)-或(R)-3-(三氟甲基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl
(ⅰ)(R)-和(S)-3-(三氟甲基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)
将(R,S)-3-羟基-2-(3-三氟甲基苯基)丙酸(0.25g,1.07mmol；来自以上实施例I)、H-Pro-Pab(Z)(0.532g；1.17mmol；根据国际专利申请WO 97/02284所述方法制备)和TBTU(0.377g；1.7mmol)的DMF(10ml)溶液于0℃冷却，加入DIPEA(0.72g；4.27mmol)。于室温下搅拌生成的混合物40小时。浓缩该反应混合物，加入水(400ml)，将pH调至9(碳酸氢钠水溶液)。用乙酸乙酯(3×100ml)提取生成的混合物。用盐水洗涤合并的有机层，干燥(硫酸钠)并蒸发。经HPLC(乙腈∶NH4OAc(0.1M)；45∶55)纯化得到两种非对映体，化合物19A(87mg；0.15mmol；经HPLC纯度94.4％；即移动快的非对映体)和化合物19B(120mg；0.20mmol；经HPLC纯度91％；即移动慢的非对映体)。LC-MS m/z597(M+1)+(两种非对映体)
(ⅱ)(S)-或(R)-3-(三氟甲基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl
将Pd/C(10％)加入(R)-或(S)-3-(三氟甲基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(118mg；0.20mmol；得自以上步骤(ⅰ)的化合物19B)的乙醇(10ml)和盐酸水溶液(1M；0.4ml)中。于室温、常压下使该混合物氢化3小时。通过Hyflo过滤生成的混合物并蒸发溶液。加入水并冻干该溶液，得到66mg(66.9％)白色固体的标题化合物(纯度：94.5％(HPLC))。LC-MS m/z463(M+1)+
实施例20
(R,S)-3-羟基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc
(ⅰ)(R,S)-3-羟基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)
将(R,S)-3-羟基-2-(3-羟基苯基)-丙酸(0.146g；0.8mmol；得自以上实施例J)的DMF(10ml)溶液于0℃冷却。加入H-Aze-Pab(Z)×HCl(0.399g；0.88mmol；得自以上实施例A)、TBTU(0.283g；0.88mmol)和DIPEA(0.414g；3.2mmol)，于室温下搅拌该溶液4天。浓缩该反应混合物，残留物经RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)；42∶58)纯化。蒸发乙腈，将水溶液冻干。分离到为白色固体的副标题化合物(187mg；43％)。1H-NMR(500MHz；CD3OD):δ7.82(d,2H)；7.41(m,3H)；7.34(m,2H)；7.25(d,1H)；7.13(t,1H)；6.78(s+d,2H)；6.66(d,1H)；5.18(b,2H)；4.5(m,2H)；4.07(m,1H)；3.93(m,1H)；3.79(m,1H)；3.65(m,1H)；3.5-3.3(m,2H)；3.30(s,1H),2.2-2.0(m,2H)；1.95(m,3H)；1.81(m,1H)。
(ⅱ)(R,S)-3-羟基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc
将乙酸(18μl)和Pd/C(5％)加入(R,S)-3-羟基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(0.173g；0.32mmol；得自以上步骤(ⅰ))的乙醇(10ml)溶液中。于室温、常压下氢化该溶液3小时。通过Hyflo过滤该混合物，浓缩生成的溶液，并使之溶于最少量的水中，冻干获得0.133g(89％；纯度94.2％)的蓬松白色晶状物。
LC-MS m/z411(M+1)+
实施例21
(R)-或(S)-((3-氯-5-甲基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl
(ⅰ)(R)-和(S)-((3-氯-5-甲基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)
将(R,S)-3-羟基-2-(3-氯-5-甲基苯基)丙酸(0.30g,1.4mmol；来自以上实施例V)的DMF(10ml)溶液冷却至0℃。按顺序加入H-Pro-Pab(Z)×HCl(0.70g；1.54mmol)、TBTU(0.99g；1.5mmol)和DIPEA(0.94g；5.5mmol)，并于室温下搅拌该反应混合物4天。随后蒸发DMF，将生成的混合物倾入水(400ml)中，用碳酸氢钠水溶液(10％)调节pH至9。用乙酸乙酯(3×100ml)提取混合物水溶液。用碳酸氢钠水溶液(10％)、水、盐水洗涤合并的有机相，干燥(硫酸钠)并蒸发。粗品(0.674g)经RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)；45∶55)纯化，分离到两种非对映体。蒸发乙腈，用乙酸乙酯提取水溶液。用水洗涤有机层，干燥(硫酸钠)并浓缩得到化合物21A(125mg；31％；即移动快的非对映体)和化合物21B(102mg；25％；即移动慢的非对映体)。化合物21BFAB-MS(m/z)577,579(M+1)+ 1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.76(d,2H)；7.43(m,2H)；7.30(m,5H)；7.07(d,2H)；6.95(s,1H)；5.20(s,2H)；4.58(dd,1H)；4.42(m,2H)；3.97(t,1H)；3.85(dd,1H)；3.68(m,2H)；3.23(m,1H)；2.30(s,3H)；2.25(m,1H)；2.03(m,1H)；1.85(m,4H)。
(ⅱ)(R)-或(S)-(3-氯-5-甲基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl
将苯硫基甲烷(1.04g；8.83mmol)加入(R)-或(S)-((3-氯-5-甲基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(得自以上步骤(ⅰ)的化合物21B；0.102g；0.18mmol)在3.7ml TFA的溶液中。于室温下搅拌该反应混合物3小时。使生成的混合物溶于水中，用乙醚洗涤该水溶液两次，并冻干生成的溶液。粗品经制备的HPLC(乙腈∶NH4OAc(0.1M)；35∶65)纯化。蒸发乙腈并冻干该溶液，得到50mg(59％)白色粉末状标题化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ9.23(b,2H)；8.74(b,2H)；7.78(d,2H)；7.57(d,2H)；7.18(s,1H)；7.12(m,2H)；4.52(s,2H)；4.52(s,2H)；4.46(dd,1H)；4.06(m,2H)；3.89(m,1H)；3.72(m,1H)；3.39(m,1H)；2.32(s,3H)；2.15(m,1H)；1.98(m,2H)；1.87(m,1H)。13C NMR(100MHz；CD3OD)174.9,173.1,168.3。
实施例22
(S)-或(R)-3-氟代苯基-CH(CH2OH)C(O)-Pro-Pab×HCl
(ⅰ)(R)-和(S)-3-氟代苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)
将(R,S)-3-羟基-2-(3-氟代苯基)丙酸(0.2g,1.09mmol；来自以上实施例K)、H-Pro-Pab(Z)(0.542g；1.19mmol；根据国际专利申请WO97/02284所述方法制备)和TBTU(0.383g；1.19mmol)的DMF(10ml)溶液于0℃冷却，加入DIPEA(0.73g；4.34mmol)。于室温下搅拌生成的混合物22小时。浓缩该反应混合物，加入水(400ml)，将pH调至9(碳酸氢钠水溶液)。用碳酸氢钠水溶液、水、然后用盐水洗涤合并的有机相，干燥(硫酸钠)并蒸发。然后用EtOAc(3×100ml)提取产生的混合物。经RPLC(乙腈∶NH4OAc(0.1M)；45∶55)得到两种非对映体，化合物22A(85mg；0.16mmol；经HPLC纯度90％；即移动快的非对映体)和化合物22B(95mg；0.17mmol；经HPLC纯度91％；即移动慢的非对映体)。LC-MS m/z547(M+1)+(两种非对映体)
(ⅱ)(S)-或(R)-3-氟代苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl
将Pd/C(10％)加入化合物22B(85mg；0.16mmol；得自以上步骤(ⅰ))的乙醇(10ml)和盐酸水溶液(1M；0.4ml)中，于室温、常压下使该混合物氢化3小时。通过Hyflo过滤生成的混合物并蒸发溶液。加入水并冻干该溶液，得到62.9mg(90.1％)白色固体(纯度：93.3％(HPLC))。LC-MS m/z413(M+1)+
实施例23
(S)-和(R)-3-氯代苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc
(ⅰ)(R,S)-3-氯代苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)
将(R,S)-3-羟基-2-(3-氯代苯基)-丙酸(0.30g,1.5mmol；来自以上实施例L)、H-Pro-Pab(Z)(0.77g；1.7mmol；根据国际专利申请WO97/02284所述方法制备)、TBTU(0.55g；1.7mmol)和DIPEA(0.41g；3.2mmol)的DMF(20ml)溶液搅拌2天。用甲苯∶乙酸乙酯(1∶1；300ml)提取生成的混合物，收集有机层，用碳酸氢钠水溶液和水洗涤，干燥(硫酸钠)并蒸发。经快速层析(硅胶；二氯甲烷∶THF(7∶3))得到0.50g(59％)副标题化合物。LAB-MS m/z562.4,564.5(M+1)+
(ⅱ)(S)-和(R)-(3-氯代苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc
将三氟甲磺酸(0.2g；1.3mmol)加入(R,S)-3-氯代苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(0.15g；0.27mmol；得自以上步骤(ⅰ))的二氯甲烷和苯甲醚(43mg；0.40mmol)溶液中。搅拌生成的混合物1小时，随后浓缩。然后加入水，用碳酸氢钠水溶液将pH调至约9用乙醚洗涤水相并冻干得到粗产物。经RPLC分离到两种非对映体，化合物23A(11mg；19％；经HPLC纯度81.7％；即移动快的非对映体)和化合物23B(11mg；19％；经HPLC纯度90.0％；即移动慢的非对映体)。化合物23ALC-MS m/z428.4(M+1)+化合物23BFAB-MSm/z431(M+1)+实施例24
(R,S)-3,5-二甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc
(ⅰ)(R,S)-(3,5-二甲基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)
将(R,S)-3-羟基-2-(3,5-二甲基苯基)-丙酸(0.155g,0.8mmol；得自以上实施例H)在DMF(10ml)中的溶液冷却至0℃。加入(按顺序)H-Pro-Pab(Z)×2HCl(0.399g；0.88mmol；根据国际专利申请WO 97/02284所述方法制备)、TBTU(0.283g；0.88mmol)和DIPEA(0.414g；3.2mmol)，于室温下搅拌该溶液5天。随后浓缩该反应混合物，残留物经RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)；40∶60)纯化。蒸发乙腈并用乙酸乙酯提取水相。干燥(硫酸钠)有机相并蒸发至干燥。分离出淡黄色固体的副标题化合物(300mg；67％)。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.83(d,2H)；7.45(m,2H)；7.32(m,6H)；6.88(s,1H)；6.84(s,1H)；6.78(s,1H)；5.21(d,2H)；4.75-4.30(m,3H)；4.04(m,1H)；3.83(m,1H)；3.74(dt,1H)；3.63(m,1H)；3.47(m,1H)；3.19(m,1H)；2.28(s,3H)；2.16(s,3H)；1.95-1.75(m,3H)。
(ⅱ)(R,S)-(3,5-二甲基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc
将乙酸(29μl)和Pd/C(5％,0.140g)加入(R,S)-(3,5-二甲基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(0.280g；0.50mmol；得自以上步骤(ⅰ))的乙醇(10ml)溶液中。于室温、常压下氢化该溶液2.5小时。通过Hyflo过滤该混合物，浓缩生成的溶液，并使之溶于最少量的水中，冻干获得0.174g(88％；纯度92.1％)白色晶状物。LC-MS m/z423(M+1)+ 13C NMR(100MHz；D2O)(羰基和脒碳，非对映体/或旋转异构体)174.93,173.17,173.02,166.55,166.40。
实施例25
(S)-或(R)-3,5-双(三氟甲基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl
(ⅰ)(R)-和(S)-2-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)将3-羟基-2-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-丙酸(284mg,0.94mmol；来自以上实施例M)、H-Pro-Pab(Z)×2HCl(468mg；1.03mmol；根据国际专利申请WO 97/02284所述方法制备)和TBTU(332mg；1.03mmol)的DMF(10ml)溶液冷却至0℃，加入DIPEA(485mg；3.76mmol)。于室温下搅拌该反应混合物60小时。将该溶液倾入水(400ml)中，将pH调至9(碳酸氢钠水溶液)。用3×100ml乙酸乙酯提取该溶液。用碳酸氢钠水溶液、水和用盐水洗涤合并的有机相，干燥(硫酸钠)并蒸发。经制备的HPLC(乙腈∶NH4OAc(0.1M)；55∶45)分离到两种非对映体，化合物25A(161g；0.24mmol；经HPLC纯度86.9％；即移动快的非对映体)和化合物25B(241mg；0.36mmol；经HPLC纯度90.9％；即移动慢的非对映体)。化合物25B1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.80(s,3H)；7.67(d,2H)；7.56(t,1H)；7.41(dd,2H)；7.39-7.28(m,3H)；7.21(d,1H)；5.19(s,2H)；4.57(dd,1H)；4.33(m,2H)；4.12(m,1H)；3.96(t,1H)；3.84(m,1H)；3.77(dd,1H)；3.36(dd,1H)；2.17(m,1H)；2.10-1.87(m,4H)。
(ⅱ)(S)-或(R)-3,5-双(三氟甲基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab
将Pd/C(10％)加入化合物25B(235mg；0.35mmol；得自以上步骤(ⅰ))的乙醇(10ml)和盐酸水溶液(1M；0.7ml)中。于室温、常压下使该混合物氢化3小时。过滤反应混合物并浓缩。加入水并冻干生成的溶液，得到174mg(83.3％)白色泡沫状的标题化合物(纯度：92.7％(HPLC))。LC-MS m/z531(M+1)+
实施例26
(R,S)-3-甲氧基-5-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl
(ⅰ)(R,S)-(3-甲氧基-5-甲基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)
将3-羟基-2-(3-甲氧基-5-甲基苯基)-丙酸(0.19g,0.9mmol；来自以上实施例N)、H-Aze-Pab(Z)×2HCl(0.35g；0.99mmol；来自以上实施例A)和TBTU(0.32g；0.99mmol)在二氯甲烷中的混合物于冰浴中冷却。加入DIPEA(0.47g；3.7mmol)。于室温下搅拌该反应混合物过夜，随后蒸发二氯甲烷，粗品混合物经快速层析(二氯甲烷∶THF∶甲醇(11∶2∶1)；Si-gel)。将收集的部分溶于水中，用乙酸乙酯提取稍微浑浊的水溶液。干燥(硫酸钠)有机层，并蒸发得到0.18g(35％)副标题化合物。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ9.5(b,1H)；7.77(dd,2H)；7.43(m,2H)；7.37-7.21(m,6H)；6.63(d,1H)；6.59(m,1H)；5.20(d,2H)；4.67(d,0.5H)；4.58(dd,0.5H)；4.40(m,2H)；4.07(dd,0.5H)；4.00(dd,0.5H)；3.82(m,1H)；3.75(s,3H)；3.69(m,2H)；3.48(m,1H)；3.21(m,1H)；2.28(s,3H)；2.05-1.94(m,1H)；1.95-1.75(m,3H)。
(ⅱ)(R,S)-(3-甲氧基-5-甲基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl
将(R,S)-(3-甲氧基-5-甲基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(100mg；0.17mmol；得自以上步骤(ⅰ))、浓盐酸水溶液(10滴)和Pd/C(10％)在乙醇中的混合物于室温、常压下使该混合物氢化2小时。用Hyflo过滤生成的混合物并浓缩。并使之溶于极少量的水中。冻干得到75mg(90％)标题化合物(纯度：92％(HPLC))。LC-MS m/z440(M+1)+
实施例27
(R,S)-(2,5-二甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc
(ⅰ)(R,S)-(2,5-二甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)
于0℃冷却(R,S)-3-羟基-2-(2,5-二甲氧基苯基)-丙酸(0.23g；1.0mmol；得自以上实施例O)的DMF(10ml)溶液。(按顺序)加入H-Pro-Pab(Z)×2HCl(0.500g；1.1mmol；根据国际专利申请WO 97/02284所述方法制备)、TBTU(0.353g；1.1mmol)和DIPEA(0.517g；4.0mmol)，并于室温下搅拌3天。蒸发DMF，生成的混合物经RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)；40∶60)纯化。蒸发乙腈，用乙酸乙酯提取水相。干燥(硫酸钠)有机相并蒸发至干燥。分离出淡粉红色的副标题化合物(400mg；68％)。1H NMR(500MHz；CDCl3):δ7.19(d,3H)；7.43(dd,1H)；7.43(dt,1H)；7.30(d,1H)；6.82-6.72(m,4H)；6.68(d,1H)；5.20(d,3H)；4.70-4.57(m,1H)；4.52-4.30(m,5H)；3.96(m,1H)；3.72(s,3H)；3.70(m,1H)；3.60(s,3H)；3.65-3.45(m,2H)；3.18-3.02(m,1H)；2.29(m,1H)；2.04-1.96(m,1H)；1.95-1.74(m,4H)
(ⅱ)(R,S)-(2,5-二甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc
将乙酸(36μl)和Pd/C(5％,0.190g)加入(R,S)-(2,5-二甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(0.375g；0.64mmol；得自以上步骤(ⅰ))的乙醇(10ml)溶液中。于室温、常压下氢化该溶液3.5小时。通过Hyflo过滤该混合物，浓缩生成的溶液，并使之溶于最少量的水中，冻干获得0.174g(88％；纯度92.1％)的白色晶状物。LC-MS m/z455(M+1)+
实施例28
(R,S)-(3,5-二甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl
(ⅰ)(R,S)-(3,5-二甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)
将(R,S)-3-羟基-2-(3,5-二甲氧基苯基)-丙酸(0.18g；0.8mmol；来自以上实施例P)、H-Pro-Pab(Z)×2HCl(0.40g；0.88mmol；根据国际专利申请WO 97/02284所述方法制备)和TBTU(0.28g；0.88mmol)的10mlDMF溶液于冰浴上冷却，加入DIPEA(0.39g；3.0mm0l)。于室温下搅拌该混合物过夜，其后浓缩生成的混合物。粗品经快速层析(二氯甲烷∶THF∶甲醇(10∶3∶1)；Si-gel)。将水加入收集的部分，用乙酸乙酯提取生成的混合物。干燥(硫酸钠)有机层并蒸发得到0.32g(68％)副标题化合物。13H NMR(500MHz；CDCl3):δ7.76(t,1H)；7.43(dd,1H)；7.73-7.20(m,6H)；6.40(d,2H)；5.20(d,2H)；4.65-4.56(m,2H)；4.48-4.32(m,2H)；4.09-3.98(m,4H)；3.82(m,2H)；3.75(s,3H)；3.66(s,3H)；3.52-3.45(m,1H)；3.28-3.21(m,1H)；2.30-2.18(m,1H)；2.04-1.76(m,5H).
(ⅱ)(R,S)-(3,5-二甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl
将浓盐酸(10滴)和Pd/C(10％)加入(R,S)-(3,5-二甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(0.16g；0.27mmol；得自以上步骤(ⅰ))的乙醇(10ml)溶液中。于室温、常压下氢化该溶液2小时。通过Hyflo过滤生成的混合物，蒸发至干燥获得0.14g(100％)的标题化合物(纯度94.2％(HPLC))。FAB-MS m/z455(M+1)+
实施例29
(R,S)-3,4-(亚甲二氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl
(ⅰ)(R,S)-(3,4-亚甲二氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)
将(R,S)-3-羟基-2-(3,4-亚甲二氧基苯基)-丙酸(0.21g；1.0mmol；来自以上实施例Q)、H-Pro-Pab(Z)×2HCl(0.50g；1.1mmol；根据国际专利申请WO 97/02284所述方法制备)、TBTU(0.35g；1.1mmol)和DIPEA(0.47g；3.7mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液搅拌7天。蒸发生成的混合物，粗品经快速层析(二氯甲烷∶THF(7∶3))纯化。浓缩合并的目的组分，将粗品产物溶于EtOAc中。用水洗涤该溶液，干燥(硫酸钠)并蒸发得到0.28g(49％)副标题化合物。1H NMR(300MHz；CDCl3):δ7.79(d,1H)；7.72(d,1H)；7.42(m,2H)；7.36-7.25(m,4H)；7.22(dd,2H)；6.76-7.57(m,3H)；5.91(s,2H)；5.87(dd,1H)；5.19(d,2H)；4.62-4.52(m,1H)；4.45-4.30(m,1H)；4.00-3.90(m,1H)；3.84-3.74(m,1H)；3.64(m,1H)；3.22(m,1H)；2.28-2.23(m,1H)；2.23-2.15(m,1H)；2.03-1.75(s,4H).
(ⅱ)(R,S)-3,4-亚甲二氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl
将6滴浓盐酸和Pd/C(10％)加入(R,S)-(3,4-亚甲二氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(90mg；0.16mmol；得自以上步骤(ⅰ))的乙醇(10ml)溶液中。于室温、常压下氢化该混合物2小时。通过Hyflo过滤生成的混合物，蒸发至干燥获得69mg(92％)的标题化合物。FAB-MS m/z439(M+1)+ 13C NMR(100 MHz；CDCl3)(羰基和脒碳；因旋转异构体和/或非对映体存在出现复杂多峰)：174.96,174.79,173.04,166.58,172.99,166.45
实施例30
(S)-或(R)-3-(1-萘基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab
(ⅰ)(R)-和(S)-3-(1-萘基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)
于0℃冷却(R,S)-3-羟基-2-(1-萘基)-丙酸(0.3g,1.39mmol；得自以上实施例R)、H-Pro-Pab(Z)(0.692g；1.53mmol；根据国际专利申请WO 97/02284所述方法制备)和TBTU(0.490g；1.53mmol)的DMF(10ml)溶液，加入DIPEA(0.93g；5.55mmol)。于室温下搅拌生成的混合物60小时。蒸发部分DMF，将残留物倾入400ml水中。使pH调至9(碳酸氢钠水溶液)，用3×100ml乙酸乙酯提取该溶液。用碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤合并的有机相，经制备的HPLC(乙腈∶NH4OAc(0.1M)；45∶55)分离出两种非对映体：化合物30A(262mg；0.45mmol；经HPLC纯度92.4％；即移动快的非对映体)和化合物30B(199mg；0.34mmol；经HPLC纯度99.9％；即移动慢的非对映体)。LC-MS m/z580(M+1)+(两种非对映体)
(ⅱ)(S)-或(R)-3-(1-萘基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl
将Pd/C(10％)加入化合物30B(190mg；0.16mmol；得自以上步骤(ⅰ))的乙醇(10ml)和盐酸水溶液(1M；0.66ml)的溶液中。在室温、常压下氢化该化合物3小时，通过Hyflo过滤生成的混合物并蒸发滤液。加入水，并冻干该溶液得到157mg(99.4％)的白色泡沫物(纯度99.8％(HPLC))。LC-MS m/z445(M+1)+
实施例31
(R,S)-(3,5-二甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc
(ⅰ)(R,S)-3,5-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)
将(R,S)-3-羟基-2-(3,5-二甲氧基苯基)-丙酸(0.27g；1.2mmol；得自以上实施例W)的DMF(10ml)溶液冷却至0℃。按顺序加入H-Aze-Pab(Z)×2HCl(0.57g；1.3mmol；来自以上实施例A)、TBTU(0.42g；1.3mmol)和DIPEA(0.54g；4.2mmol)，并于室温下搅拌2天。蒸发DMF，粗品经硅胶柱快速层析纯化，用二氯甲烷∶THF∶甲醇(80∶30∶5))洗脱，得到230mg(34％)副标题化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ8.20(d,1H)；7.75(t,2H)；7.40(t,2H)；7.30(m,5H)；6.40(s,1H)；6.37(m,1H)；6.30(s,1H)；5.20(d,2H)；4.85(m,1H)；4.40(m,2H)；4.05(m,2H)；3.75(s,6H)；3.65(s,3H)；2.55(m,1H)；2.35(m,1H)
(ⅱ)(R,S)-3,5-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc
将Pd/C(10％)加入(R,S)-3,5-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)(270mg；0.42mmol；得自以上步骤(ⅰ))的乙醇(10ml)和乙酸乙酯(10滴)的溶液中，于室温、常压下氢化该混合物2小时。通过Hyflo过滤生成的混合物。蒸发该溶液，加入水并冻干该溶液得到170mg(89％)的标题化合物。FAB-MS m/z441(M+1)+ 1H-NMR(400MHz；D2O):δ7.8(m,1H)；7.68(d,1H)；7.57(m,1H)；7.39(d,1H)；6.60(m,1H)；6.54(m,1H)；6.45(m,1H)；5.00(m,1H)；4.50(m,3H)；4.10(m,3H)；3.80(m,9H)；2.60(m,1H)；2.28(m,1H)；1.95(s,3H)13C NMR(100MHz；D2O)羰基和脒碳：δ182.0；174.4；174.0；(旋转异构体和/或非对映体)；173.2；172.9；172.8(旋转异构体和/或非对映体)
实施例32
(R,S)-2-氯代-5-氨基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc
(ⅰ)(R,S)-2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)
将(R,S)-3-羟基-2-(2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基)丙酸(0.22g；0.7mmol；得自以上实施例X)的DMF(10ml)溶液冷却至0℃。按顺序加入H-Aze-Pab(Z)×2HCl(0.32g；0.75mmol；来自以上实施例A)、TBTU(0.24g；0.75mmol)和DIPEA(0.32g；2.5mmol)，并于室温下搅拌2天。蒸发DMF，粗品经硅胶柱快速层析纯化，用二氯甲烷∶THF∶甲醇(85∶15∶5))洗脱得到(180mg；39％)副标题化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ9.45(b,1 H)；8.23(m,0.5H)；7.95(m,0.5H)；7.65(m,3H)；7.20(m,10H)；5.15(d,2H)；4.85(m,1H)；4.5-3.6(m,9H)；2.40(m,2H)；1.45(s,9H)
(ⅱ)(R,S)-2-氯代-5-氨基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc
根据以上实施例23(ⅱ)所述方法，由(R,S)-2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)(170mg；0.26mmol；来自以上步骤(ⅰ))、TEA(5.3ml；69mmol)和苯硫基甲烷(thioanisol)(1.6g；13mmol)制备得到40mg(32％)标题化合物。1H-NMR(400MHz；D2O):δ7.62(m,1H)；7.60(d,1H)；7.40(m,1H)；7.30(m,1H)；7.05(t,1H)；6.60(m,2H)；4.90(m,1H)；4.41(s,1H)；3.90(m,3H)；3.65(m,1H)；3.60(m,1H)；2.40(m,1H)；2.05(m,1H)；1.80(s,3H)
实施例33
(S)-和(R)-3-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab-HOAc
(ⅰ)(R,S)-3-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)
将(R,S)-3-羟基-2-(3-甲基苯基)丙酸(0.18g,1mmol；来自以上实施例Y)的DMF(10ml)溶液冷却至0℃。按顺序加入H-Aze-Pab(Z)×2HCl(0.48g；1.1mmol；来自以上实施例A)、TBTU(0.35g；1.1mmol)和DIPEA(0.52g；4mmol)，并于室温下搅拌该溶液2天。蒸发DMF，使生成的物质溶于用碳酸氢钠水溶液(300ml)中，加入乙酸乙酯(100ml)。分离各相，用乙酸乙酯(4×75ml)提取水相。用碳酸氢钠水溶液(1×75ml)洗涤合并的有机相，干燥(硫酸钠)并蒸发。粗品(0.3g)经RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)；40∶60)纯化得到(118mg；20％)副标题化合物。LC-MS m/z528(M+1)+ 1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ8.25(m,1H)；7.77(d,1H)；7.40(m,8H)；7.12(m,4H)；5.25(s,2H)；4.93(m,1H)；4.50(m,2H)；4.10(m,2H)；3.70(m,2H)；3.60(m,1H)；2.60(m,1H)；2.35(s,3H)
(ⅱ)(S)-和(R)-3-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc
将Pd/C(5％；0.13g)加入(R,S)-3-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)(114mg；0.22mmol；得自以上步骤(ⅰ))在乙醇(10ml)和HOAc(17μl)的溶液中。于室温、常压下氢化该混合物3小时。通过Hyflo过滤生成的混合物。蒸发溶液，加入水，用乙酸乙酯洗涤该混合物，冻干该溶液得到48mg粗品。经RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)(20∶80))纯化，分离出非对映体：化合物33A(即移动快的非对映体；17mg)和化合物33B(即移动慢的非对映体；15mg；纯度99.1％)。实施例33ALC-MS m/z395(M+1)+ 1H-NMR(400MHz；D2O):δ7.80(d,1H)；7.71(d,1H)；7.54(d,1H)；7.39(d,1H)；7.35(d,1H)；7.24(m,2H)；7.17(d,1H)；5.17(m,0.5H)；4.80(m,0.5H)；4.60(s,2H)；4.2-3.6(m,5H)；2.60(m,1H)；2.36(s,2H)；2.30(s,2H)；2.22(m,1H)；1.93(s,3H)13C NMR(75 MHz；D2O)羰基和脒碳：δ175.7；174.6；(旋转异构体)；173.5；173.0(旋转异构体)
实施例34
(S)-或(R)-2,5-二甲基苯基-CH-(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc
(ⅰ)(R)-和(S)-2,5-二甲基苯基-CH-(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)
将(R,S)-3-羟基-2-(2,5-二甲基苯基)丙酸(0.27g,1.2mmol；得自以上实施例Z)在DMF(10ml)中的溶液冷却至0℃。按顺序加入H-Pro-Pab(Z)×2HCl(0.75g；1.65mmol；根据国际专利申请WO 97/02284所述方法制备)、TBTU(0.53g；1.65mmol)和DIPEA(0.78g；6mmol)，于室温下搅拌该溶液2天。蒸发DMF，加入碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯(3×30ml)提取该水溶液。用碳酸氢钠水溶液(2×20ml)和水洗涤合并的有机相，干燥(硫酸钠)并蒸发，得到0.35g(42％)粗品。经制备的HPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)；(45∶55至80∶20))分离出非对映异构体：化合物34A(即移动快的非对映体；136mg；32％；纯度97.6％)和化合物34B(即移动慢的非对映体；197mg；47％；纯度98.4％)。化合物34B1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.83(d,2H)；7.45(d,2H)；7.40(m,1H)；7.35(m,4H)；7.08(d,1H)；6.99(d,1H)；5.22(s,2H)；4.63(d,1H)；4.49(m,2H)；4.04(dd,1H)；3.95(dd,1H)；3.61(dd,1H)；3.53(dt,1H)；2.92(m,1H)；2.34(3H)；2.32(m,1H)；2.26(s,3H),1.73(m,3H)。
(ⅱ)(S)-或(R)-2,5-二甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc
将Pd/C(5％,45mg)加入(R)-或(S)-2,5-二甲基苯基-CH-(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(61mg；0.11mmol；得自以上步骤(ⅰ)的混合物34B)的乙醇(10ml)和HOAc(10滴)的溶液中，在室温、常压下氢化该溶液5小时。通过Hyflo过滤生成的混合物，浓缩该溶液，加入水并冻干获得45mg(89％；纯度97.8％)白色粉末的标题化合物。LC-MS m/z423(M+1)+ 1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.65(d,2H)；7.56(d,1 H)；7.40(d,2H)；7.10(m,2H)；7.00(m,2H)；4.41(s,2H)；4.32(dd,1H)；4.11(dd,1H)；3.91(m,1H)；3.64(m,1H)；3.55(m,2H)；2.98(m,1H)；2.26(s,3H)；2.18(s,3H)；2.05(m,1H)；1.80(m,6H)；1.65(m,2H)
实施例35
(S)-或(R)-4-羟基-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl
(ⅰ)(R)-和(S)-4-苄氧基-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)
将(R,S)-3-羟基-2-(4-苄氧基-3-甲氧基苯基)丙酸(0.27g,1.2mmol；来自以上实施例AA)的DMF(10ml)溶液冷却至0℃。按顺序加入H-Pro-Pab(Z)×2HCl(0.66g；1.46mmol；根据国际专利申请WO 97/02284所述方法制备)、TBTU(0.467g；1.46mmol)和DIPEA(0.69ml；5.29mmol)，并于室温下搅拌该溶液3天。蒸发DMF，加入碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯(3×100ml)提取水溶液。用碳酸氢钠水溶液(1×20ml)、水、盐水洗涤合并的有机相，干燥(硫酸钠)并蒸发，得到0.983g(定量)粗品。经制备的HPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)(50∶50))纯化分离到非对映体：化合物35A(移动快的非对映体；136mg；32％；纯度98.5％)和化合物34B(移动慢的非对映体；163mg；47％；纯度99.2％)。化合物35B1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.77(d,2H)；7.42(m,4H)；7.34(m,9H)；6.81(m,2H)；6.70(dd,1H)；5.20(s,2H)；5.11(s,2H)；4.59(m,1H)；4.44(m,2H)；4.00(m,1H)；3.83(m,1H)；3.66(m,2H)；3.23(m,1H)；2.28(m,1H)；2.01(m,2H)；1.81(m,3H)。
(ⅱ)(S)-或(R)-4-羟基-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl
将Pd/C(10％)加入(R)-或(S)-4-苄氧基-3-甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(157mg；0.24mmol；得自以上步骤(ⅰ)的化合物35B)的乙醇(10ml)和盐酸水溶液(1M；0.5ml)的溶液中，并在室温、常压下氢化该混合物4.5小时。通过Hyflo过滤生成的混合物，浓缩该溶液，加入水并冻干该溶液获得104mg(90.9％；纯度97.4％)白色粉末的标题化合物。LC-MS m/z441(M+1)+ 1H-NMR(400MHz；D2O):δ7.70(d,2H)；7.57(d,2H)；6.90(s,1 H)；6.75(s,2H)；4.51(s,2H)；4.44(dd,1H)；4.07(m,1H)；3.95(dd,2H)；3.83(s,3H)；3.67(dd,2H)；3.40(m,1H)；3.30(m,1H)；2.11(m,1H)；1.97(m,2H)；1.82(m,1H)13C-NMR(100MHz；D2O)羰基和脒碳：δ174.8；173.9；173.1；166.3；(旋转异构体)
实施例36
(S)-或(R)-3,5-二氯苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc
(ⅰ)(R)-和(S)-3,5-二氯苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)
将(R,S)-3-羟基-2-(3,5-二氯苯基)丙酸(0.35g,1.5mmol；得自以上实施例AB)在DMF(10ml)中的溶液冷却至0℃。按顺序加入H-Pro-Pab(Z)×2HCl(0.75g；1.65mmol；根据国际专利申请WO 97/02284所述方法制备)、TBTU(0.53g；1.65mmol)和DIPEA(0.78g；6mmol)，并于室温下搅拌该溶液过夜。蒸发DMF，加入水，用乙酸乙酯(3×30ml)提取该水溶液。用碳酸氢钠水溶液(2×20ml)、水洗涤合并的有机相，干燥(硫酸钠)并蒸发，得到0.32g(36％)粗品。经硅胶柱(110g)快速层析，用100％乙酸乙酯至乙酸乙酯∶乙醇(100∶5)梯度洗脱分离非对映体：化合物36A(移动快的非对映体；153mg；34％；纯度89.2％)和化合物36B(移动慢的非对映体；166mg；37％；纯度85.2％)。化合物36B1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.73(d,2H)；7.43(d,2H)；7.34(m,2H)；7.26(m,2H)；7.19(d,2H)；5.20(s,2H)；4.56(dd,1H)；4.40(m,2H)；3.91(m,2H)；3.72(m,2H)；3.60(b,1H)；3.27(q,1H)；2.22(m,1H)；2.03(m,1H)；1.94(m,1H)；1.89(m,1H)；1.75(b,1H)。
(ⅱ)(S)-或(R)-3,5-二氯苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc
根据以上实施例23(ⅱ)所述方法，由(R)-或(S)-3,5-二氯苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(130mg；0.22mmol；来自以上步骤(ⅰ)的化合物26B)、苯甲醚(35mg；0.33mmol)和三氟甲磺酸(0.16g；1.1mmol)制备得到15mg(13％)标题化合物。LC-MS m/z463,465(M+1)+ 1H-NMR(500MHz；D2O):δ7.64(d,2H)；7.56(d,1H)；7.38(t,1H)；7.34(t,1H)；7.21(d,2H)；7.07(s,1H)；4.39(d,1H)；4.30(dd,1H)；4.00(m,3H)；3.68(m,2H)；3.50(m,1H)；3.26(m,1H)；2.10(m,1H)；2.08(m,1H)；1.81(m,3H)；1.73(m,1H)
实施例37
(S)-或(R)-2,3-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc
(ⅰ)(R)和(S)-2,3-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)
将(R,S)-3-羟基-2-(2,3-二甲氧基苯基)丙酸(0.21g；0.93mmol；得自以上实施例AC)的DMF(10ml)溶液冷却至0℃。按顺序加入H-Pro-Pab(Z)×2HCl(0.46g；1.02mmol；根据国际专利申请WO 97/02284所述方法制备)、TBTU(0.32g；1.0mmol)和DIPEA(0.48g；3.7mmol)，于室温下搅拌该溶液过夜。蒸发DMF，加入碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯(4×50ml)提取该水溶液。用碳酸氢钠水溶液(2×20ml)、水洗涤合并的有机相，干燥(硫酸钠)并蒸发，得到0.34g(62％)粗品。经制备的HPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)(40∶60))分离到非对映体：化合物37A(移动快的非对映体；70mg；24％)和化合物37B(移动慢的非对映体；57mg；21％)。化合物37BLC-MS m/z590(M+1)+
(ⅱ)(S)-或(R)-2,3-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc
将Pd/C(5％；44mg)加入(R)或(S)-2,3-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(57mg；0.097mmol；得自以上步骤(ⅰ)的化合物37B)的乙醇(10ml)和HOAc(15mg)的溶液中，并在室温、常压下氢化该混合物4.5小时。通过Hyflo过滤生成的混合物，浓缩该溶液，加入水并冻干该溶液，得到44mg(88％；纯度97.2％)白色粉末的标题化合物。LC-MS m/z455(M+1)+ 1H-NMR(300MHz；D2O):δ7.78(d,2H)；7.50(d,2H)；7.20(m,2H)；6.90(d,1H)；4.50(s,2H)；4.40(m,4H)；4.08(m,2H)；3.90(s,3H)；3.87(s,3H)；3.80(m,6H)；3.32(m,1H)；2.18(m,1H)；1.92(m,3H)
实施例38
(S)-或(R)-3-甲氧基-5-氯代苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl
(ⅰ)(R)-和(S)-3-甲氧基-5-氯代苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)
将(R,S)-3-羟基-2-(3-甲氧基-5-氯代苯基)丙酸(0.112g；0.49mmol；得自以上实施例AD)的DMF(4ml)溶液冷却至0℃。按顺序加入H-Pro-Pab(Z)×2HCl(0.242g；0.53mmol；根据国际专利申请WO97/02284所述方法制备)、TBTU(0.171g；0.53mmol)和DIPEA(0.33ml；2.12mmol)，于室温下搅拌该溶液5天。蒸发DMF，加入水，将该溶液的pH调至9(碳酸氢钠水溶液)，并用乙酸乙酯(3×30ml)提取该水溶液。用碳酸氢钠水溶液(2×20ml)、水和盐水洗涤合并的有机相，干燥(硫酸钠)并蒸发，得到0.242g(83％)粗品。经制备的HPLC(乙腈∶10％NH4OAc(45∶55))分离到非对映体：化合物38A，即移动快的非对映(50mg；33％)和化合物38B，即移动慢的非对映体(44.8mg；31％)。化合物38BLC-MS m/z 592,594(M+1)+
(ⅱ)(S)-或(R)-3-甲氧基-5-氯代苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl
根据以上实施例23(ⅱ)所述方法，由(R)-或(S)-3-甲氧基-5-氯代苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(来自以上步骤(ⅰ)的化合物38B；44mg；0.074mmol)、TFA(1.53ml；20mmol)和苯硫基甲烷(0.44ml；3.7mmol)制备得到18mg(49％)标题化合物，纯度93.5％。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ9.24(b,1H)；8.73(b,1H)；7.77(d,2H)；7.57(d,2H)；6.96(t,1H)；6.86(m,2H)；4.51(s,2H)；4.45(dd,1H)；4.04(m,2H)；3.86(m,1H)；3.71(m,1H)；3.40(m,1H)；2.15(m,1H)；1.99(m,2H)；1.87(m,1H)
实施例39
(S)-或(R)-2-甲基-5-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc
(ⅰ)(R)-和(S)-2-甲基-5-甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)
将(R,S)-3-羟基-2-(2-甲基-5-甲氧基苯基)丙酸(0.168g,0.8mmol；来自以上实施例AE)的DMF(10ml)溶液冷却至0℃。按所述顺序加入H-Pro-Pab(Z)×2HCl(0.399g；0.88mmol；根据国际专利申请WO97/02284所述方法制备)、TBTU(0.283g；0.88mmol)和DIPEA(0.414g；3.2mmol)，并于室温下搅拌该溶液3天。蒸发DMF，加入水，用乙酸乙酯(3×30ml)提取该水溶液。干燥(硫酸钠)合并的有机相并蒸发。经制备的HPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)；(40∶60))纯化分离到非对映体：化合物39A(移动快的非对映体；147mg；64％；纯度92.8％)和化合物39B(移动慢的非对映体；147mg；64％；纯度99.1％)。化合物39BLC-MS m/z573(M+1)+ 1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.76(d,2H)；7.50(t,1H)；7.42(d,2H)；7.33(t,1H)；7.27(m,3H)；7.08(d,1H)；6.71(m,2H)；5.19(s,1H)；4.58(d,1H)；4.40(m,2H)；4.03(dd,1H)；3.97(t,1H)；3.70(s,3H)；3.58(m,2H)；2.95(q,2H)；2.28(s,2H)；2.22(m,1H)；1.99(m,1H)；1.78(m,2H)。
(ⅱ)(S)-或(R)-2-甲基-5-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc
将Pd/C(5％；70mg)加入化合物39B(131mgl；0.23mmol)的乙醇(10ml)和HOAc(13ml)的溶液中，并在室温、常压下氢化该混合物3小时。通过Hyflo过滤生成的混合物，浓缩该溶液，加入水并冻干该溶液获得96mg(84％；纯度95.9％)标题化合物。1H-NMR(400MHz；D2O):δ7.78(d,2H)；7.54(d,2H)；6.68(m,2H)；6.75(d,1H)；4.72(d,1H)；4.54(s,1H)；4.46(dd,2H)；4.25(m,4.05(t,1H)；3.77(s,3H)；3.70(dd,1H)；3.64(m,1H)；3.10(m,1H)；2.36(s,2H)；2.15(m,1H)；1.95(m,4H)；1.76(m,1H)13C-NMR(100MHz；D2O)羰基和脒碳：176.0；174.3；167.6；LC-MS m/z439(M+1)+
实施例40
(R,S)-Ph-C(Me)(CH2OMe)-C(O)-Aze-Pab(z)
将(R,S)-2-甲基-2-苯基-3-甲氧基丙酸(0.40g,2.1mmol；来自以上实施例AF)的DMF(10ml)溶液冷却至0℃。按所述顺序加入H-Pro-Pab(Z)×2HCl(0.93g；2.1mmol；根据国际专利申请WO97/02284所述方法制备)、TBTU(0.64g；2.1mmol)和DIPEA(0.90g；7mmol)，并于室温下搅拌该溶液2天。蒸发DMF，加入碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯(3×30ml)提取该水溶液。用碳酸氢钠水溶液(2×20ml)、水洗涤合并的有机相，干燥(硫酸钠)并蒸发，得到粗品，经硅胶柱快速层析，用二氯甲烷∶THF∶甲醇(90∶10∶2)洗脱得到0.50g(44％(最后三步总收率))。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.83(m,2H)；7.41(d,2H)；7.30(m,9H)；7.11(d,1H)；5.21(s,2H)；4.77(m,1H)；4.70(m,1H)；4.53(m,1H)；4.43(m,1H)；4.12(d,1H)；3.90(d,1H)；3.62(t,1H)；3.23(s,3H)；2.90(m,2H)；2.18(m,1H)；2.03(m,1H)；1.8-1.4(m,9H)13C-NMR(100MHz；CDCl3)羰基和脒碳：δ174.6；173.1；172.2；172.0；167.9；164.4(非对映体和/或旋转异构体)。
实施例41
(R,S)-Ph-C(Me)(CH2OMe)-C(O)-Aze-Pab×HCl
将Pd/C(10％；20mg)加入(R,S)-Ph-C(Me)(CH2OMe)-C(O)-Aze-Pab(Z)(190mg；0.34mmol；得自上述实施例40)的乙醇(10ml)和浓盐酸水溶液(10滴)的溶液中，并在室温、常压下氢化该混合物2小时。通过Hyflo过滤生成的混合物，浓缩该溶液，加入水并冻干该溶液获得160mg(100％；纯度77％)标题化合物。LC-MS m/z423(M+1)+ 1H-NMR(500MHz；D2O):δ7.80(m,2H)；7.55(m,2H)；7.35(m,5H)；4.50(m,3H)；3.88(d,0.5H)；3.78(m,1H)；3.76(d,0.5H)；3.21(d,3H)；3.15(m,1H)；2.78(m,1H)；2.18(m,1H)；1.70(m,3H)；1.63(d,3H)13C-NMR(100MHz；D2O)羰基和脒碳：176.4；176.3；176.1；175.9；167.1(非对映体和/或旋转异构体)
实施例42
(S)-或(R)-2-氯代-3-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab-HOAc
(ⅰ)(R)-和(S)-2-氯代-3-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)
将(R,S)-3-羟基-2-(2-氯代-3-甲基苯基)丙酸(0.3g,1.4mmol；来自以上实施例AG)的DMF(10ml)溶液冷却至0℃。按顺序加入H-Aze-Pab(Z)×2HCl(0.739g；1.68mmol；来自以上实施例A)、TBTU(0.495g；1.54mmol)和DIPEA(0.94g；5.6mmol)，并于室温下搅拌该溶液5天。浓缩反应混合物，并使之溶于水(400ml)中，其后用碳酸氢钠水溶液将pH调至9。用乙酸乙酯(3×100ml)提取生成的混合物。用碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤合并的有机相，干燥(硫酸钠)并浓缩。粗品(0.636g)经RPLC(乙腈∶10％NH4OAc(40∶60))纯化，其后分离出非对映体：化合物42A(即移动快的非对映体；127mg；32％；纯度95％)和化合物42B(即移动慢的非对映体；131mg；33％；纯度85％)。化合物42BLC-MS m/z563,564(M+1)+ 1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ8.23(t,1H)；7.80(d,2H)；7.44(d,2H)；7.33(m,4H)；7.18(m,3H)；5.21(s,2H)；4.86(dd,1H)；4.50(m,2H)；4.28(dd,1H)；4.13(m,1H)；3.96(dd,1H)；3.75(dd,1H)；3.62(q,1H)；2.60(m,1H)；2.41(s,3H)；2.31(m,1H)
(ⅱ)(S)-或(R)-2-氯代-3-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab-HOAc
根据以上实施例23(ⅱ)所述方法，由(R)-或(S)-2-氯代-3-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)(来自以上步骤(ⅰ)的化合物42B；129mg；0.23mmol)、TFA(4.7ml；62mmol)和苯硫基甲烷(1.35ml；11.5mmol)制备得到45mg(40.2％)标题化合物(纯度90.4％)。LC-MS m/z429,431(M+1)+ 1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.77(d,2H)；7.55(d,2H)；7.26(m,2H)；7.19(d,1H)；4.75(dd,1H)；4.55(s,2H)；4.34(m,2H)；4.04(dd,1H)；3.88(m,1H)；3.70(dd,1H)；2.48(m,1H)；2.40(s,3H)；2.27(m,1H)；1.89(s,3H)13C NMR(100MHz；CD3OD)羰基和脒碳：174.0；172.9；167.9
实施例43
(S)-或(R)-2,3-(亚甲二氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc
根据以上实施例29所述方法，由(R,S)-3-羟基-2-(2,3-亚甲二氧基苯基)-丙酸(0.26g)作为原料，并通过(2,3-亚甲二氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)制备，从后者分离(RPLC)出两种非对映体：化合物43A(即移动快的非对映体；0.27g；40％)和化合物43B(即移动慢的非对映体；0.18g；26％)。使(R)-或(S)-(2,3-亚甲二氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(化合物43B；130mg,81mg(72％))去保护制备标题化合物。LC-MS m/z439(M+1)+
实施例44
用以上试验A测试实施例1-7、11、12、16-39、41、42和43的化合物(均为式Ⅰ化合物)，发现所有的化合物显示IC50TT值小于0.3μM。
实施例45
用以上试验A测试实施例8、9、10、13、14、15和40的化合物(均为式Ⅰa化合物)，发现所有的化合物显示出IC50TT值小于1μM。
实施例46
用以上试验C测试实施例8、9、10、13、14、15和40的化合物(均为式Ⅰa化合物)，发现所有的化合物在大鼠中均显示出如相应的式Ⅰ活性抑制剂口服/或胃肠外的生物利用度。
缩略语AIBN=      偶氮双异丁腈aq=        水溶液Aze=       氮杂-2-环丁烷羧酸Boc=       叔-丁氧基羰基Bn=        苄基Bu=        丁基Ch=        环己基DBU=       1,8-二碳杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯DCC=       二环己基碳二亚胺DIPEA=     二异丙基乙胺DMAP=      N,N-二甲基氨基吡啶DMF=       二甲基甲酰胺DMSO=      二甲基亚砜EDC=       1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐Et=        乙基EtOH=      乙醇h=         小时HBTU=      [N,N,N’,N’-四甲基-O-(苯并三唑-1-基)uronium六氟磷
       酸盐]HCl=       盐酸H-Hig=     1-脒基-3-氨基乙基吡咯烷H-Hig(Z)=  3-氨基乙基-1-(N-苄氧基羰基脒基)吡咯烷HOAc=      乙酸H-Pab=     1-脒基-4-氨基甲基苯H-Pab(Z)=  4-氨基甲基-1-(N-苄氧基羰基脒基)苯H-Pig=     1-脒基-3-氨基甲基哌啶H-Pig(Z)=  3-氨基甲基-1-(N-苄氧基羰基脒基)哌啶HPLC=      高效液体色谱Me=        甲基MeOH=      甲醇MsCl=      甲磺酰氯NBS=       N-溴代琥珀酰亚胺Ph=        苯基Pr=        丙基i-PrOH=    异丙醇RPLC=      制备的反相高效液相色谱TBDMS=     叔-丁基二甲基硅烷基TBTU=      [N,N,N’,N’-四甲基-O-(苯并三唑-1-基)uronium四氟硼酸
       盐TEA=       三乙胺THF=       四氢呋喃THP=       四氢吡喃基TMS=       三甲基硅烷基p-TsOH=    对-甲苯磺酸WSCI=    水溶性碳二亚胺Z=       苄氧基羰基
前缀n、s、i和t有其通常的意义：正、异、仲和叔。氨基酸的立体化学不包括(by default)(S)型，除非另外指明。

Claims (32)

1．式Ⅰ化合物或其药学上可接受的盐，
Figure A9719686400021
其中
R1代表H、C(O)R11、SiR12R13R14或C1-6烷基，后一基团任选由一个或多个选自OR15或(CH2)qR16的取代基取代或作为末端基团；
R12、R13和R14独立代表H、苯基或C1-6烷基；
R16代表C1-4烷基、苯基、OH、C(O)OR17或C(O)N(H)R18；
R18代表H、C1-4烷基或CH2C(O)OR19；
R15和R17独立代表H、C1-6烷基或C7-9烷基苯基；
R11和R19独立代表H或C1-4烷基；和
q代表0、1或2；
R2和R3独立代表H、C1-4烷基、环己基或苯基；
Rx代表式Ⅱa、Ⅱb或Ⅱc的结构片段，其中k、l和m独立代表0、1、2、3或4；
R4和R5独立代表H、Si(Me)3、1-或2-萘基、多环烃基、CHR41R42或C1-4烷基(其中后一基团任选被一个或多个氟原子取代)，或C3-8环烷基苯基、亚甲二氧基苯基、苯并二噁烷基、苯并呋喃基、二氢苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、香豆冉酮基、香豆素基或二氢香豆素基(其中后十二个基团任选由一个或多个C1-4烷基(其中后一基团任选由一个或多个卤素取代基取代)、C1-4烷氧基、卤代、羟基、氰基、硝基、SO2NH2、C(O)OH或N(H)R43取代)；
R41和R42独立代表环己基或苯基；
R6和R7独立代表H、C1-4烷基、C3-8环烷基、苯基(其中后一个基团任选由一个或多个C1-4烷基(其中后一基团任选由一个或多个卤素取代基取代)、C1-4烷氧基、卤代、羟基、氰基、硝基、SO2NH2、C(O)OH或N(H)R44取代)或与它们所连接的碳原子一起形成C3-8环烷基环；
R43和R44独立代表H或C(O)R45；及
R45代表H、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
Y代表CH2、(CH2)2、CH=CH、(CH2)3、CH2CH=CH或CH=CHCH2、其中后三个基团任选由C1-4烷基、亚甲基、氧代或羟基取代；
n代表0、1、2、3或4；
B代表式Ⅳa、Ⅳb或Ⅳc的结构片段其中
X1和X2独立代表单键或CH2。
2．权利要求1定义的式Ⅰ化合物，其中n代表2,B代表式Ⅳb的结构片段，X1和X2不能都代表CH2。
3．权利要求1或权利要求2定义的式Ⅰ化合物，其中R1任选代表取代的C1-6烷基或H。
4．权利要求3定义的式Ⅰ化合物，其中R1代表H。
5．上述权利要求中任一项定义的式Ⅰ化合物，其中Rx代表式Ⅱa的结构片段。
6．上述权利要求中任一项定义的式Ⅰ化合物，其中Y代表CH2或(CH2)2。
7．权利要求1或权利要求3-6中任一项定义的式Ⅰ化合物，其中n代表1。
8．权利要求1或权利要求3-7中任一项定义的式Ⅰ化合物，其中B代表式Ⅳa的结构片段。
9．上述权利要求中任一项定义的式Ⅰ化合物，其中结构片段
Figure A9719686400041
S-构型。
10．权利要求1化合物为下列化合物或其药学上可接受的盐：(R)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(S)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(R,S)-3,4-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(R)-2-萘基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(S)-2-萘基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(R)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pig；(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pig；(R,S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Pro-(R,S)-Hig；(R)-2,5-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(S)-2,5-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(S)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R,S)-3-氨基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R)-3-(甲氨基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-3-(甲氨基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R,S)-3,5-二甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(S)-3-(三氟甲基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R)-3-(三氟甲基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R,S)-3-羟基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R)-((3-氯代-5-甲基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-((3-氯代-5-甲基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-3-氟代苯基-CH(CH2OH)CO-Pro-Pab；(R)-3-氟代苯基-CH(CH2OH)CO-Pro-Pab；(S)-3-氯代苯基-CH(CH2OH)C(O)-Pro-Pab；(R)-3-氯代苯基-CH(CH2OH)C(O)-Pro-Pab；(R,S)-3,5-二甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-3,5-双(三氟甲基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R)-3,5-双(三氟甲基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R,S)-3-甲氧基-5-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R,S)-(2,5-二甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R,S)-(3,5-二甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R,S)-3,4-(亚甲二氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-3-(2-萘基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R)-3-(2-萘基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R,S)-3,5-二甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(R,S)-2氯代-5-氨基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(R)-3-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(S)-3-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(R)-2,5-二甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-2,5-二甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R)-3-甲氧基-4-羟基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-3-甲氧基-4-羟基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R)-3,5-二氯苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-3,5-二氯苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R)-2,3-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-2,3-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R)-3-甲氧基-5-氯代苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-3-甲氧基-5-氯代苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R)-2-甲基-5-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-2-甲基-5-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R,S)-Ph-C(Me)(CH2OMe)-C(O)-Pro-Pab(R)-2-氯代-3-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(S)-2-氯代-3-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(R)-2,3-(亚甲二氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-2,3-(亚甲二氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；或(R,S)-Ph-C(Me)(CH2OMe)-C(O)-Aze-Pab。
11．权利要求1定义的式Ⅰ化合物，条件是当Rx代表式Ⅱa的结构片段时，则R4和/或R5(适当时)不代表由卤素-取代的C1-6烷基取代的苯基。
12．权利要求1定义的式Ⅰ化合物，条件是当Rx代表式Ⅱa的结构片段时，则R4和/或R5(适当时)不代表亚甲二氧基苯基、苯并二噁烷基、苯并呋喃基、二氢苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、香豆冉酮基、香豆素基或二氢香豆素基。
13．权利要求1定义的式Ⅰ化合物，条件是当Rx代表式Ⅱc的结构片段时，则R6和/或R7(适当时)代表未取代的苯基。
14．权利要求1定义的式Ⅰ化合物，条件是当Rx代表式Ⅱa的结构片段时，则R4和/或R5(适当时)代表由卤素-取代的C1-6烷基取代的苯基。
15．权利要求1定义的式Ⅰ化合物，条件是当Rx代表式Ⅱa的结构片段时，则R4和/或R5(适当时)代表亚甲二氧基苯基、苯并二噁烷基、苯并呋喃基、二氢苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、香豆冉酮基、香豆素基或二氢香豆素基。
16．权利要求1定义的式Ⅰ化合物，条件是当Rx代表式Ⅱc的结构片段时，则R6和/或R7(适当时)代表取代的苯基。
17．式Ⅰa化合物或其药学上可接受的盐，
Figure A9719686400071
其中B1代表式Ⅳd、Ⅳe或Ⅳf的结构片段
Figure A9719686400081
其中D1和D2独立代表H、OH、ORa、OC(O)Rb、OC(O)ORc、C(O)ORd、C(O)Re而Ra、Rb、Rc、Rd和Re独立代表苯基、苄基、(CH2)2OC(O)CH3或C1-6烷基，后一基团任选由氧间断；及R1、R2、R3、Rx、Y、n、X1和X2如权利要求定义，条件是D1和D2不能二者都代表H。
18．权利要求17定义的式Ⅰa化合物，其中D1代表H,D2代表OH、OCH3、C(O)ORb或C(O)ORd且Rb和Rd如权利要求17所定义。
19．权利要求17的化合物为下列化合物或其药学上可接受的盐：(R,S)-Ph-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OH；(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab-OH；(S)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab-OH；(S)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)CO-Pro-Pab(Z)；(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)CO-Pro-Pab(Z)；(S)-3-甲氧基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OH；(R)-3-甲氧基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OH；(S)-3-甲氧基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)Et；(R)-3-甲氧基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)Et；(S)-3-甲氧基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)CH3；(R)-3-甲氧基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)CH3；(R,S)-3-Ph-C(Me)(CH2OMe)-C(O)-Pro-Pab(Z)；或(R,S)-甲基苯基-CH(CH2OAc)-C(O)-Pro-Pab-OMe。
20．包括权利要求1-19中任一项所定义的化合物或其药学上可接受的盐并与药学上可接受的辅助剂、稀释剂或载体混合的药用制剂。
21．用作药物的权利要求1-19中任一项所定义的化合物或其药学上可接受的盐。
22．权利要求1-19中任一项所定义的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗需要抑制凝血酶的病症。
23．权利要求1-19中任一项所定义的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗血栓形成。
24．权利要求1-19中任一项所定义的化合物或其药学上可接受的盐用作抗凝剂。
25．权利要求1-19中任一项所定义的化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分在生产治疗凝血酶需要抑制的病症的药物中的用途。
26．权利要求25所要求的用途，其中所述病症是血栓形成。
27．权利要求1-19中任一项所定义的化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分在生产抗凝剂中的用途。
28．治疗凝血酶需要抑制的病症的方法，该方法包括对患有或易感此种病症的人群给予治疗有效量的权利要求1-19中任一项所定义的化合物或其药学上可接受的盐。
29．权利要求28的方法，其中所述病症是血栓形成。
30．权利要求28的方法，其中所述病症是血液和组织的高凝固性。
31．权利要求17、18或19中任一项所定义的化合物作为药物前体的用途。
32．制备式Ⅰ化合物的方法，它包括：
(a)使式Ⅴ化合物，其中R1、R2、R3和Rx如权利要求1所定义，与式Ⅵ化合物偶合，
Figure A9719686400102
其中Y、n和B如权利要求1所定义；或
(b)使式Ⅶ化合物，其中R1、R2、R3、Rx和Y如权利要求1所定义，与式Ⅷ化合物偶合，
           H2N-(CH2)n-B    Ⅷ其中n和B如权利要求1所定义。
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