CZ459299A3 - Nové amidinoderiváty a jejich použitíjako inhibitorů thrombinu - Google Patents

Abstract

Jsou poskytnuty sloučeniny obecného vzorce I, ve kterémR1, Rx, Y, Ry, n aB mají významy udané v popisu, kteréjsou užitečnéjako kompetitivní inhibitory trypsinu podobných proteas,jakoje thrombin, a obzvláště při léčení stavů, při kterýchje žádoucí inhibice thrombinu (např. při trombóze), nebojako antikoagulancia.

Description

Oblast techniky

Tento vynález se týká nových farmaceuticky užitečných sloučenin, obzvláště kompetitivních inhibitorů trypsinu podobných serin proteas, obzvláště thrombinu, jejich použití jako léčiv, farmaceutických přípravků je obsahujících a syntetických postupů jejich přípravy.

Dosavadní stav techniky

Srážení krve je klíčovým procesem zahrnutým jak v hemostázi (tj. prevence ztrát krve z poškozené cévy), tak v trombóze (tj. tvorba krevní sraženiny v cévě, někdy vedoucí k jejímu uzavření).

Koagulace je výsledkem komplexních sérií enzymatických reakcí. Jedním z konečných kroků v této řadě reakcí je konverze proenzymu prothrombinu na aktivní enzym thrombin.

thrombinu je známo, že v koagulaci hraje ústřední roli. Aktivuje destičky, což vede k jejich agregaci, přeměňuje fibrinogen na monomery fibrinu, které spontánně polymerují na fibrinové polymery a aktivuje faktor XIII, který naopak spojuje polymery do sítí, aby se vytvořil nerozpustný fibrin. Thrombin navíc aktivuje faktor V a faktor VIII, což vede k pozitivní zpětné vazbě při tvorbě thrombinu z prothrombinu.

Díky inhibici agregace destiček a tvorby a zesíťování fibrinu lze u účinných inhibitorů thrombinu • · · · 9 9 9 · · · · ·· » · 9 9 9 9 · 99 · • 99999 9 9 9 9 99 9 • · · 9 99999 •999 99 99 999 ·· 99 očekávat, že budou vykazovat antitrombotickou aktivitu. Navíc by se dalo očekávat, že antitrombotická aktivita by mohla být posílena účinnou inhibici mechanismu positivní zpětné vazby.

Dosavadní poznatky

Počáteční vývoj inhibitorů thrombinu o nízké molekulární hmotnosti je popsán Cleassonem v Blood Coagul. Fibrinol., 5, 411 (1994).

Blombáck a kol., (v J. Clin. Lab. Invest., 24, suppl. 107, 59, (1969)) popsal inhibitory thrombinu založené na sekvenci aminokyselin umístěné okolo místa štěpení A-alfa řetězce fibrinogenu. Z diskutovaných sekvencí aminokyselin tito autoři navrhli jako nejúčinnější inhibitor tripeptidovou sekvenci Phe-Val-Arg (P9-P2-P1, dále označovaná jako sekvence P3-P2-P1).

Inhibitory thrombinu založené na dipetidylových derivátech s alfa,omega-aminoalkylguanidinem v pozici PÍ jsou známy z US patentu č. 4 346 078 a mezinárodní patentové přihlášky WO 93/11152. Byly také popsány podobné, strukturně příbuzné dipeptidylové deriváty. Například mezinárodní patentová přihláška WO 94/29336 zveřejňuje sloučeniny, které například mají v pozici PÍ například aminomethylbenzamidiny, cyklické aminoalkylamidiny a cyklické aminoalkylguanidiny, evropská patentová přihláška [přesná citace] 0 648 780 zveřejňuje sloučeniny, které mají v pozici PÍ například cyklické aminoalkylguanidiny.

Inhibitory thrombinu založené na peptidylových derivátech, které mají v pozici Pl také cyklické aminoalkylguanidiny (např. buď 3- nebo 4-aminomethyl-L3 •« ·· · · · · · · ♦ · ···· ··· ··· • · · · ···· · · · · • «··«>· φ φφφ ·· e • φφφ φ · · · · ···· ·· φφ φφφ ·· ··

-amidinopiperidin) jsou známy z evropských patentových přihlášek [přesná citace] 0 468 231, 0 559 046 a 0 641 779.

Inhibitory thrombinu založené na tripeptidylových derivátech s argininaldehydem v pozici Pl byly poprvé zveřejněny v evropské patentové přihlášce [přesná citace]

185 390.

V nedávné době byly popsány peptidylové deriváty založené na argininaldehydu modifikované v pozici P3. Například mezinárodní patentová přihláška WO 93/18060 zveřejňuje hydroxykyseliny, evropská patentová přihláška [přesná citace] 0 526 877 des-aminokyseliny a evropská patentová přihláška [přesná citace] 0 542 525 o-methylmandlové kyseliny v pozici P3.

Jsou také známy inhibitory serin proteas (např. thrombinu) založené na elektrofilních ketonech v· pozici Pl. Například evropská patentová přihláška [přesná citace]

195 212 zveřejňuje alfa-ketoestery a amidy, evropská patentová přihláška [přesná citace] 0 362 002 fluoralkylamidketony, evropská patentová přihláška [přesná citace] 0 364 344 alfa,beta,delta-triketosloučeníny a evropská patentová přihláška [přesná citace] 0 530 167 alfa-alkoxyketonové deriváty argininu v pozici Pl.

Jiné strukturně odlišné inhibitory trypsinu podobných serin proteas založené na derivátech kyseliny borité na C-konci argininu a jejich isothiouroniových analozích jsou známy z evropské patentové přihlášky [přesná citace] 0 293 881.

V nedávné době byly zveřejněny inhibitory thrombinu založené na peptidylových derivátech v evropské

- 4 • · · « * · 9 ♦ • · · · • · · 9 · · · • · » * ·· »· patentové přihlášce [přesná citace] 0 669 317 a mezinárodních patentových přihláškách WO 95/35309, WO 95/23609 a WO 96/25426.

Přetrvává však potřeba účinných inhibitorů trypsinu podobných serin proteas jako je thrombin. Existuje obzvláštní potřeba sloučenin, které jsou jak orálně biologicky dostupné, tak selektivní při inhibici thrombinu ve srovnání s jinými serin proteasami. U sloučenin, které vykazují kompetitivní inhibiční aktivitu vůči thrombinu lze očekávat, že budou obzvláště užitečné jako antikoagulancia a tedy užitečné při terapeutickém léčení trombózy a souvisejících poruch.

Podstata vynálezu

Podle předloženého vynálezu se poskytuje sloučenina obecného vzorce I

O

ve kterém

R¹ představuje H, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku (případně substituovanou jedním nebo více substituenty zvolenými z kyanoskupiny, halogenu, OH, C(O)OR^la nebo C (O) N (R^lb) R^lc) nebo 0R^ld,

Rld představuje H, CÍOJR¹¹, SiR¹²R¹³R¹⁴ nebo alkylovou • · ···φ ·· * · • · · · # · · *·«· · · · ···· · · · · • ····· · φ φ φ φφ φ φ · · · φ · · · · ···· ·· φφ ··· φ· ·· skupinu s 1 až β atomy uhlíku, kterážto posledně uvedená skupina je případně substituovaná nebo ukončena jedním nebo více substituenty zvolenými z OR¹⁵ nebo (CH₂)_qR¹⁶,

R¹², R¹³ a R¹⁴ nezávisle představují H, fenyl nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku,

R¹⁶ představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, fenyl, OH, C(O)OR¹⁷ nebo C(O)N(H)R¹⁸,

R¹⁸ představuje H, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo CH₂C (0) OR¹⁹,

R¹⁵ a R¹⁷ nezávisle představují H, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylové části,

R^la, R^lb, R^lc, R¹¹ a R¹⁹ nezávisle představují H nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a q představuje 0, 1 nebo 2,

R_x představuje a strukturní fragment obecného vzorce

Ha, lib nebo líc,

lla lib

11c

- 6 » · 9 · · • ·

99 9 ·· · · • · a · • · · · • · · » ·

9 9 9 ve kterém tečkované čáry nezávisle představují případné vazby,

A a B nezávisle představují 0 nebo S, CH nebo CH₂ (jak je příhodno), nebo N nebo N(R²¹) (jak je příhodno) ,

D představuje -CH₂-, O, S, N(R²²), -(CH₂)₂-, -CH=CH-,

-CH₂N(R²²)-, ~N(R²²)CH₂~, -CH=N-, -N=CH-, -ch₂o-, . -OCH₂-, -CH₂S- nebo -SCH₂~,

X₂ představuje alkylenovou skupinu se 2 až 4 atomy uhlíku, alkylenovou skupinu se 2 nebo 3 atomy uhlíku přerušenou Z, -CÍO-Z-A¹, -Z-C (O)-A¹-, -CH2-C (O)-A¹, -Z-C (0)-Z-A²-, -CH2-Z-C (0)-A²-, -Z-CH2-C (0)-A²-, -Z-CH2-S (O)^²-, -CH₂-Z-S (0)_m-A²-, -C(0)-A³, -Z-A³- nebo -A³-Z~,

X₂ představuje alkylenovou skupinu se 2 nebo 3 atomy uhlíku, -C(0)-A⁴- nebo -A⁴-C(0)-,

X₃ představuje CH nebo N,

X₄ představuje jednoduchou vazbu, 0, S, C(0), N(R²³), -CH(R²³)-, -CH (R²³)-CH (R²⁴) - nebo -C (R²³) =C (R²⁴)-,

A¹ představuje jednoduchou vazbu nebo alkylenovou skupinu s 1 nebo 2 atomy uhlíku,

A² představuje jednoduchou vazbu nebo -CH₂-,

A³ představuje alkylenovou skupinu s 1 až 3 atomy

ΦΦ

99 Λ » « ► Φ · · · • · · · * Φ ΦΦΦΦ

Φ Φ ΦΦΦ Φ · uhlíku,

A⁴ představuje C(0) nebo alkylenovou skupinu s 1 nebo 2 atomy uhlíku,

Z představuje při každém výskytu 0, S(0)_m nebo N(R²⁵), nt představuje při každém výskytu 0, 1 nebo 2,

R² a R⁴ nezávisle představuje 1 nebo více případných substituentů zvolených z alkylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku (kterážto posledně uvedená skupina je případně substituována 1 nebo více halogenovými substituenty), alkoxyskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, methylendíoxyskupiny, halogenu, hydroxyskupiny, kyanoskupiny, nitroskupiny, S0₂NH₂, C(0)R²⁶nebo N (R²⁷) R²⁸,

R³ představuje případný substituent zvolený z OH nebo alkoxylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku,

R²¹, R²², R²³, R²⁴, R²⁵, R^2S, R²⁷ a R²⁸ nezávisle představují H nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

Y představuje CH₂, (CH₂)₂, CH=CH, (CH₂)₃, CH₂CH=CH nebo

CH=CHCH₂, kteréžto posledně uvedené 3 skupiny jsou případně substituovány alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, methylenovou skupinou, oxoskupinou nebo hydroxyskupinou,

R^Y představuje H nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, ««· · · • · ·«· · ·· ·· • · * · · » • · · · · · · ·

I « * 9 9 9

9 9 9 9 9 9

9 99 99 99 představuje Ο, 1, 2, 3 nebo 4 a představuje strukturní fragment obecného vzorce Ila, lib nebo líc

R' ,31

X⁸

X¹⁰

NH,

X

lllb

NHa

NH, ve kterém lila lile

X⁵, X^s, X⁷ a X⁸ nezávisle představují CH, N nebo N-0,

X⁹ a X¹⁰ nezávisle představují jednoduchou vazbu nebo

CH₂ a představuje případný substituent zvolený z halogenu a alkylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl, za předpokladu, že

a) A a B nepředstavují oba 0 nebo S,

b) B a D nepředstavují oba 0 nebo S,

c) když R¹ představuje 0R^ld a Χχ představuje -CÍOJ-Z-A¹, -Z-CH2-S (O)m-A²-, -CH2-Z-S (0)_m-A²- nebo -Z-C (0)-Z-A²-, pak A¹ nebo A² (jak je příhodno) nepředstavují jednoduchou vazbu a • · 4 4

4 4 4 4 4 4

4 4 4444 4 44 4

444 44 4 444 44 4

444 44444

4444 44 44 444 44 4«

d) když Χ„ představuje -CH(R²³)-, pak R¹ nepředstavuje OH.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou vykazovat tautomerii. Všechny tautomerní formy a jejich směsi jsou zahrnuty do rozsahu předloženého vynálezu. Odborník v oboru dále zjistí, že ve strukturním fragmentu Ha mohou případné dvojné vazby ve spojení s jistými identitami substituentu D vytvořit kruh nesoucí A, B a D aromatického charakteru.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou také obsahovat jeden nebo více asymetrických atomů uhlíku a mohou tedy vykazovat optickou isomerii a/nebo diastereoisomerii. Všechny diastereoisomery mohou být odděleny použitím konvenčních postupů, např. chromatografií nebo frakční krystalizací. Různé stereoisomery mohou být isolovány rozddělením racemické nebo jiné směsi sloučeniny použitím konvenčních postupů, např. frakční krystalizace nebo HPLC. Alternativně mohou být požadované optické isomery připraveny reakcí příslušného opticky aktivního výchozího materiálu za podmínek, které nezpůsobí racemisaci nebo epimerisaci, nebo derivatisací, například homochirální kyselinou následovanou separací diastereoisomerních derivátů konvenčními prostředky (např. HPLC, chromatografií na oxidu křemičitém). Všechny stereoisomery jsou zahrnuty do rozsahu vynálezu.

Alkylové skupiny, které mohou representovat R¹, n la n lb nic pld d2 n 4 pil pl2 p 13 p 14 p 15 pl6 p 17 plS pl9 f i\ f f 1\ f 1\ f Γ\ f Γ\ f £\ f l\ f L\ f í\ f x\ f I\ f ±\ f X\ f

R²¹, R²², R²³, R²⁴, R²⁵, R²⁶, R²⁷, R²⁸, R³¹ a R^Y a u kterých může být Y substituováno, alkylová část alkylfenylových skupin může představovat R¹⁵ a R¹⁵, a alkoxylová skupina, která_ může představovat R², R³ a R⁴, mohou, kde je dostatečný počet atomů uhlíku, být lineární nebo rozvětvené, nasycené uebo

- 10 • · 9 9 9 999 9 9 9 · • ··< 9 9 9 9 9 9 99 · • · · · · A · · ·

9999 99 99 999 99 9 9 nenasycené, cyklické nebo acyklické. Alkylenové skupiny, které mohou představovat X_x, X₂, A¹, A³, a A⁴, mohou, kde je dostatečný počet atomů uhlíku, být lineární nebo rozvětvené, nasycené nebo nenasycené.

Halogenové skupiny, které mohou představovat R³¹ a jimiž mohou být substituovány R¹, R² a R⁴, zahrnují fluor, chlor, brom a jod.

Ve strukturních fragmentech obecných vzorců Ha, lib a líc označují tečky atom uhlíku, který je navázán na skupinu -C(O)- a na R¹ ve sloučenině obecného vzorce I (k vyloučení pochybnosti, na takto označený atom uhlíku není navázán žádný další atom H).

Vlnovky na vazbě ve fragmentech obecných vzorců lila, Illb a IIIc označují pozici vazby fragmentu.

Podle dalšího aspektu vynálezu je poskytnuta sloučenina obecného vzorce I jak je zde výše definována s dalšími výhradami spočívajícími v tom, že:

R^Y představuje H,

R²⁸ představuje H,

X₄ nepředstavuje -CH(R²³)-.

Podle dalšího aspektu vynálezu je poskytnuta sloučenina obecného vzorce I jak je zde výše definována s další výhradou spočívající v tom, že:

R^y představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

	···· · · · * · · · ··· *···· »«·· _ 1 1 _ « ···»·· ♦»♦»· · 11 · ··* ♦ · · · · ···· ·· ·♦· ·· ··
R28	představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,
	představuje -CH(R23)-.
vynálezu.	Zkratky jsou uvedeny na konci popisu tohoto

Pokud n představuje 2 a B představuje strukturní fragment obecného vzorce Illb, zahrnují výhodné sloučeniny obecného vzorce I ty sloučeniny, ve kterých X³ a X¹⁰ oba nepředstavují CH₂.

Výhodné sloučeniny obecného vzorce zahrnují sloučeniny, ve kterých:

R1	představuje OH nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku (kterážto posledně uvedená skupina je případně substituována kyanoskupinou nebo OH),
	představuje strukturní fragment obecného vzorce Ha,
pokud Rx	představuje strukturní fragment obecného vzorce Ha, pak tečkované čáry představují vazby, A a B oba představují CH a D představuje -CH=CH-,
pokud Rx	představuje strukturní fragment obecného vzorce Ha, pak Xx představuje alkylenovou skupinu se 2 nebo 3 atomy uhlíku, -OCH2- nebo -O(CH2)2-,
Y	představuje CH2, (CH2)2 nebo (CH2)3,

» ·

4

4

- 12 4 4 • 4 · 4 · 4 • 4 4

4 představuje strukturní fragment obecného vzorce lila, ve kterém X⁵, X⁶, X⁷ a X⁸ všechny představují CH.

Výhodnější sloučeniny podle vynálezu zahrnují ty sloučeniny, ve kterých představuje-li R_x strukturní fragment obecného vzorce Ha, pak X_x představuje alkylenovou skupinu se 3 atomy uhlíku nebo -O(CH₂)₂-.

Pokud R_x představuje strukturní fragment obecného vzorce Ha a R² představuje přinejmenším 1 substituent, je výhodným místem substituce atom uhlíku, který je v pozici

B.

Pokud R_x představuje strukturní fragment obecného vzorce Ha, tečkované čáry představují vazby, A a B oba představují CH a D představuje -CH=CH- (tj. kruh nesoucí R² je benzoskupina) a R² představuje přinejmenším 1 substituent, je kruh výhodně substituován buď na atomu uhlíku ve skupině -CH=CH- (pozice D), která sousedí se spojením kruhu nebo, výhodněji, na atomu uhlíku, který je v pozici B, nebo na obou těchto místech. Například představuj e-li fragment Ha tetralin-l-ylovou skupinu (tj . tečkované čáry představují vazby, A a B oba představují CH, D představuje -CH=CH- a X_x představuje nasycenou alkylenovou skupinu se 3 atomy uhlíku), jsou výhodnými pozicemi substituce pozice 5 nebo, obzvláště, 7, nebo obě tyto pozice. Tomu odpovídá, že pokud fragment Ha představuje chroman-4-ylovou skupinu (tj. tečkované čáry představují vazby, A a B oba představují CH, D představuje -CH=CH- a Xi představuje -O(CH₂)₂~), jsou výhodnými pozicemi substituce pozice 8 nebo, obzvláště, 6, nebo obě tyto pozice.

- 13 • 9 9999 » ·· 99 9999 99 99 »«· · 9 9 · 9 9 9 • · 9 9 9999 9 99 9

I 999 9® · ·9· ·· ® • · 9 9 9999 » * · 9 *9 999 99 99

Sloučeniny obecného vzorce I, ve které fragment je v S konfigraci, jsou výhodné. Vlnovky na vazbách ve výše uvedeném fragmentu označují pozice vazeb fragmentu.

Výhodné sloučeniny obecného vzorce I zahrnují sloučeniny z příkladů zde dále popsaných.

Příprava

Podle vynálezu je poskytnut také postup přípravy sloučenin obecného vzorce I, který zahrnuje:

i) kondenzaci sloučeniny obecného vzorce IV,

O

ve kterém

R¹ a R_x mají význam zde definovaný výše, se sloučeninou obecného vzorce V,

N-(CH₂)„-B

R^y

- 14 • · · · · • · ·· ··· ·· ·· ve kterém

R^y, Y, n a B mají význam zde definovaný výše, nebo ii) spojení sloučeniny obecného vzorce VI,

O

ve kterém

R¹, R_x a Y mají význam zde definovaný výše, se sloučeninou obecného vzorce VII,

H (R^y) N-(CH₂) _n-B VII ve kterém

R^y, n a B mají význam zde definovaný výše, například za přítomnosti kondenzačního činidla (např. oxalylchloridu v DMF, EDC, DCC, HBTU, HATU nebo TBTU), příslušné báze (např. pyridinu, 2,4,6-trimethylpiridinu, DMAP, TEA nebo DIPEA) a vhodného organického rozpouštědla (např. dichlormethanu, acetonitrilu nebo DMF).

Sloučeniny obecného vzorce IV jsou komerčně dostupné, jsou dobře známy v literatuře nebo jsou dostupné při použití známých a/nebo standardních postupů.

• 9 » 9 9 9

9 9 • 999

- 15 99 >«9 9

9999 99 • 9 9«

9 9 9

9 9 9

9 9 9

9 9 9

9 9

Například sloučeniny obecného vzorce IV, ve kterém R¹ představuje OH, mohou být připraveny reakcí sloučeniny obecného vzorce VIII,

R_x=0 VIII ve kterém

R_x má význam zde definovaný výše, s

a) KCN, například při 20 °C za přítomnosti hydrogensiřičitanu sodného ve vodě, následovanou hydrolýzou za přítomnosti vodného roztoku kyseliny (např. HC1) , například při 20 °C za přítomnosti vhodného roztpouštědla (např. alkoholu a/nebo vody),

b) CHC1₃ za přítomnosti vodného roztoku báze (např. NaOH),

c) TMSCN, například při 20 °C za přítomnosti vhodného organického rozpouštědla (např. CH₂C1₂), následovanou hydrolýzou za přítomnosti kyseliny (např. HC1 nebo H₂SO₄) , například při 20 °C (např. podle nebo analogicky s postupem popsaným Biggem a kol., v J. Med. Chem., 36, 1977 (1993)), následovanou alkalickou hydrolýzou, aby se získala volná kyselina.

Sloučeniny obecného vzorce IV, ve kterém R¹ představuje H, mohou být připraveny z odpovídajících sloučenin obecného vzorce IV, vé kterém R¹ představuje OH (nebo nižší alkylester kyseliny), například eliminací vody, následovanou hydrogenací výsledného alkenu použitím postupů, které jsou odborníkovi v oboru dobře známy, následovanou, pokud je to nezbytné, hydrolýzou, aby se ·· »« «« ···»» ·· *««· · · · · 9 9 * • φ φ 9 9 999 · 4 · * /0 φ 999 9 · 9 9 9 9 · 9 « “ iO - 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9999 ·· ♦* ··* ·« *· získala volná kyselina.

Sloučeniny obecného vzorce IV, ve kterém. R¹ představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, mohou být připraveny z odpovídajících sloučenin obecného vzorce IV, ve kterém R¹ představuje H (nebo nižší alkylester kyseliny), například reakcí s příslušným alkylhalogenidem použitím postupů, které jsou odborníkovi v oboru dobře známy, následovanou, pokud je to nezbytné, hydrolýzou, aby se získala volná kyselina.

Sloučeniny obecného vzorce IV, ve kterém R¹ představuje 0R^ld a R^ld představuje C(O)R^U, SiR¹²R¹³R¹⁴ nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, mohou být připraveny acylací, silylaci nebo alkylací (jak je příhodno) odpovídající sloučeniny obecného vzorce IV, ve kterém R¹ představuje OH (nebo nižší alkylester kyseliny) za podmínek, které jsou odborníkovi v oboru dobře známy, následovanou, pokud je to nezbytné, hydrolýzou, aby se získala volná kyselina.

Sloučeniny obecného vzorce V mohou být připraveny reakcí sloučeniny obecného vzorce IX

ve kterém

Y má význam zde definovaný výše, se sloučeninou obecného vzorce VII, jak je zde definována výše, například za takových podmínek, jaké jsou zde popsány výše pro syntézu sloučenin obecného vzorce I.

• · φφφφ

- 17 • · · · · φ · φ · φ φ φφφφ φ φφφφφ φ φ φ φφφ φ φφφφ φφ φφ φφφ

Sloučeniny obecných vzorců V a VII, ve kterých R^y představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, mohou být připraveny reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce V nebo obecného vzorce VII, jak je příhodno, ve kterém R^Y představuje H, se sloučeninou obecného vzorce IXa,

Rdial

IXa ve kterém

Hal představuje halogen (např. Cl, Br nebo I) a

R^y má význam zde definovaný výše, například za podmínek, které jsou odborníkovi v oboru dobře známy.

Sloučeniny obecného vzorce VI jsou snadno dostupné použitím známých postupů. Například sloučeniny obecného vzorce VI mohou být připraveny reakcí sloučeniny obecného vzorce IV, jak je zde výše definována, se sloučeninou obecného vzorce IX, ja je zde výše definována, například za podmínek, jako jsou podmínky zde výše popsané pro syntézu sloučenin obecného vzorce I.

Sloučeniny obecného vzorce VIII jsou komerčně dostupné, jsou v literatuře dobře známy nebo mohou být připraveny podle známých postupů. Například sloučeniny obecného vzorce VIII mohou být připraveny následovně:

a) Sloučeniny obecného vzorce VII, ve kterém R_x představuje strukturní fragment obecného vzorce Ha, ve kterém • · • · · · · ·

- 18 tečkované čáry představují vazby, A a B oba představují CH a D představuje -CH=CH-, X₃ představuje alkylenovou skupinu se 2 až 4 atomy uhlíku, -Z-A³- nebo -C(O)-A³-, kde

A³ má význam zde definovaný výše, a R³ není přítomen, mohou být připraveny cyklizací sloučeniny obecného vzorce X,

ve kterém

X_la představuje alkylenovou skupinu se 2 až 4 atomy uhlíku, -Z-A³- nebo -C(O)-A³-, a

Z, A³ a R² mají význam zde definovaný výše, za použití příslušného acylačního činidla, například při 100 °C za přítomnosti polyfosforečné kyseliny nebo za použití PC1₅ při zpětném toku následovaném A1C1₃.

Sloučeniny obecného vzorce X, kde X_la představuje alkylenovou skupinu se 3 atomy uhlíku nebo -C(0)-A³-, kde A³ představuje alkylenovou skupinu se 2 atomy uhlíku, mohou být připraveny podle známých postupů, například reakcí anhydridu kyseliny jantarové s odpovídajícím fenyllithiem a, pro sloučeniny obecného vzorce X, kde X_la představuj e alkylenovou skupinu se 3 atomy uhlíku, selektivní redukcí výsledného ketonu, za podmínek, které jsou odborníkovi v oboru dobře známy. Sloučeniny obecného vzorce X, kde X_la představuje -Z-A³- a A³ představuje alkylenovou skupinu se 2 nebo 3 atomy uhlíku, mohou být připraveny jak je zde popsáno dále.

- 19 b) Sloučeniny obecného vzorce VII, kde R_x představuje strukturní fragment obecného vzorce Ha, ve kterém tečkované čáry představují vazby, A a B oba představují CH a D představuje -CH=CH-, X_x představuje alkylenovou skupinu se 2 až 4 atomy uhlíku nebo -C(O)-A³-, kde A³ má význam zde definovaný výše, a R³ není přítomen, mohou být připraveny cyklizací sloučeniny obecného vzorce XI,

ve kterém

R představuje alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku a

X_la a R² mají význam zde definovaný výše, například při 20 °C za přítomnosti vhodné báze (např. alkoxidu alkalického kovu) a příslušného organického rozpouštědla (např. nižšího alkylalkoholu), následovanou hydrolýzou a dekarboxylací. Sloučeniny obecného vzorce XI mohou být připraveny podle známých postupů. Například sloučeniny obecného vzorce XI, kde X_la představuje alkylenovou skupinu se 3 atomy uhlíku nebo -C(0)-A³-, kde A³ představuje alkylenovou skupinu se 3 atomy uhlíku, mohou být připraveny reakcí anhydridu kyseliny jantarové se sloučeninou obecného vzorce XII,

- 20 • ·

ve kterém

R’ představuje alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku a

R a R² mají význam zde definovaný výše a pro sloučeniny obecného vzorce XI, kde X_la představuje alkylenovou skupinu se 3 atomy uhlíku, selektivní redukcí výsledného ketonu, následovanou transformacemi funkčních skupin amidu a kyseliny na esterové skupiny, za podmínek, které jsou odborníkovi v oboru dobře známy.

c) Sloučeniny obecného vzorce VIII, kde R_x představuje strukturní fragment obecného vzorce Ha, ve kterém tečkované čáry představují vazby, A a B oba představuji CH a D představuje -CH=CH-, X_x představuje -Z-A³-, kde A³ představuje alkylenovou skupinu se 2 atomy uhlíku a Z představuje 0 nebo S a R³ není přítomen, mohou být připraveny cyklizací sloučeniny obecného vzorce XIII,

ve kterém

-219 9 9· ·

Hal a R² mají význam zde definovaný výše, například při 20 °C za přítomnosti vodného-ethanolického roztoku NaOH. Pro odpovídající sloučeniny obecného vzorce VIII, kde X_x představuje -Z-A³- a Z představuje S(0)_m, kde m je 1 nebo 2, by tyto výše zmíněné cyklizace měly být prováděny oxidační reakcí na cyklizovaném produktu zahrnujícím atom síry, například použitím kyseliny m-chlorperbenzoové.

d) Sloučeniny obecného vzorce VIII, kde R_x představuje strukturní fragment obecného vzorce Ha, ve kterém tečkované čáry představují vazby, A a B oba představují CH a D představuje -CH=CH-, X_x představuje -Z-A³-, kde A³ představuje alkylenovou skupinu se 2 atomy uhlíku nebo -Z-C(O)-A¹-, kde A¹ představuje alkylenovou skupinu s 1 atomem uhlíku a R³ není přítomen, mohou být připraveny cyklizací sloučeniny obecného vzorce XIV,

ve kterém

R² a Z mají význam zde definovaný výše, buď se:

1) pro sloučeniny obecného vzorce VIII, ve kterém X_x

OO * · * · ···· · ·· 4

- zz - · ······ ·····<

* · · · ····· ···· ·· ·· ··· ·· ·· představuje -Z-A³-, kde A³ představuje alkylenovou skupinu se 2 atomy uhlíku, sloučeninou obecného vzorce XV,

H₂C=CH-C0₂R XV ve kterém

R má význam zde definovaný výše, například při 20 °C za přítomnosti vhodné báze (např. triethylaminu nebo ethoxidu sodného) a příhodného organického rozpouštědla (např. ethanolu nebo DMF), nebo se

2) sloučeninou obecného vzorce XVI,

Iř-G-CÍVCOaR

XVI ve kterém

L¹ představuje vhodnou odštěpitelnou skupinu (jako je Cl, Br, I, mesylat nebo tosylat),

G představuje CH₂ nebo C(O) a

R má význam zde definovaný výšeo, například při 20 °C za přítomnosti vhodné báze (např. triethylaminu) a příhodného organického rozpouštědla (např. THF), následovanou cyklizací za příhodných podmínek (např. podmínek popsaných zde výše).

e) Sloučeniny obecného vzorce VIII, kde R_x představuje • A

- 23 • ·

• · • · strukturní fragment obecného vzorce Ha, ve kterém kruh nesoucí A, B a D je karbocyklický aromatický nebo heterocyklický aromatický kruh, jak je zde výše definován v souvislosti se sloučeninami obecného vzorce I, Xi představuje -CH₂-Z-alkylenová skupina s 1 nebo 2 atomy uhlíku-, kde Z jej jak je zde výše definováno a R³ je nepřítomen, mohou být připraveny reakcí sloučeniny obecného vzorce XVII,

R:

ZH

XVIi ve kterém kruh nesoucí A^a, B^a a D^a je karbocyklický aromatický nebo heterocyklický aromatický kruh, jak je zde definován výše v souvislosti se sloučeninami obecného vzorce I, a

Z a R² mají význam zde definovaný výše se sloučeninou obecného vzorce XVIII

L¹-Alk-CO₂H

XVIII ve kterém

Alk představuje alkylenovou skupinu s 1 nebo 2 atomy uhlíku a

- 24 • · · ·· «

L¹ má význam zde definovaný výše, například při 20 °C za. přítomnosti vhodné báze (např. methoxidu sodného) a příhodného organického rozpouštědla (např. THF).

f) Sloučeniny obecného vzorce VIII, kde R_x představuje strukturní fragment obecných vzorců lib, líc nebo Ha, v kterémžto posledně uvedeném případě kruh nesoucí A, B a D je karbocyklický aromatický nebo heterocyklický aromatický kruh, jak je zde definováno výše v souvislosti se sloučeninami obecného vzorce I, a, v případech, kdy R_x představuje strukturní fragment obecných vzorců Ha nebo lib, R³ je nepřítomen, mohou být připraveny cyklizací sloučeniny obecného vzorce XX,

R_xa-CO₂H XX ve kterém

R_xa představuje strukturní fragment obecných vzorců

- 25 ·* ΦΦΦΦ • ΦΦΦ ΦΦΦ φ · · · • · · · · ΦΦΦ · φ φ · • ΦΦΦ · Φ φ ΦΦΦ φ» 9 · · Φ Φ ΦΦ · ve kterých v XXa kruh nesoucí A^a, B^a a D^a je karbocyklický aromatický nebo heterocyklický aromatický kruh, jak je zde definováno výše v souvislosti se sloučeninami obecného vzorce I, a

R², R⁴, X_x, X₂, X₃ a X₄ mají význam zde definovaný výše, za přítomnosti polyfosforečné kyseliny, například při 100 °C. Tečky sousedící s atomy uhlíku ve fragmentech obecných vzorců XXa, XXb a XXc označují body připojení fragmentů na skupinu CO₂H sloučeniny obecného vzorce XX. Sloučeniny obecného vzorce XX mohou být připraveny hydrolýzou odpovídající sloučeniny obecného vzorce XXI,

R_xa-CO₂R

XXI ve kterém

R_xa a R . mají význam zde definovaný výše (a ve kterém CO₂H ve fragmentech obecných vzorců XXa, XXb a XXc v R_xa může také být nahrazena CO₂R), například za redukčních podmínek, které jsou odborníkovi v oboru dobře známy.

g) Sloučeniny obecného vzorce VIII, kde R_x představuje strukturní fragment obecného vzorce Ha, ve kterém kruh

nesoucí A, B a D je karbocyklický aromatický nebo . heterocyklický aromatický kruh, jak je zde výše definován v souvislosti se sloučeninami obecného vzorce I, X_x představuje -0-CH₂- a R³ je nepřítomen, mohou být připraveny reakcí sloučeniny obecného vzorce XXII,

XXII

C(O)R ve kterém kruh nesoucí A^a, B^a a D^a je karbocyklický aromatický nebo heterocyklický aromatický kruh, jak je zde definován výše v souvislosti se sloučeninami obecného vzorce I, a

R², Hal a R mají význam zde definovaný výše, s diazomethanem, například při 20 °C za přítomnosti vhodného organického rozpouštědla (např. diethyletheru) .

h) Sloučeniny obecného vzorce VIII, kde R_x představuje strukturní fragment obecného vzorce Ha, ve kterém tečkované čáry představují vazby, A a B oba představují CH a D představuje -CH=CH-, X_x představuje -C(0)-0-CH₂- a R³ není přítomen, mohou být připraveny cyklizací sloučeniny obecného vzorce XXIII, • · · • . ·

·· ·♦ ···· ·· ·· ♦

• · · · » ♦ · • · · • · · • · · • · ·

R

CHN.

‘2

XXIII ve kterém

R² a R mají význam zde definovaný výše, například při -20 °C za přítomnosti kyseliny sírové a příhodného organického rozpouštědla (např. methanolu). Sloučeniny obecného vzorce XXIII mohou být připraveny reakcí odpovídajčího halogenidu kyseliny s diazomethanem, například při 20 °C za přítomnosti vhodného organického rozpouštědla (např. diethyletheru).

i) Sloučeniny obecného vzorce VIII, ve kterém R_x představuje strukturní fragment obecného vzorce Ha nebo líc, ve kterém X₃ zahrnuje N(R²⁵) nebo X4 představuje N (R²³) (jak je příhodno) a R²³ a R²⁵ (jak je příhodno) představují alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, mohou být připraveny reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce VIII, ve kterém Xx zahrnuje nebo X₄ představuje (jak je příhodno) NH, se sloučeninou obecného vzorce XXV,

R^a-Hal

XXV ve kterém tt ·· » · * 9

9 9

999 >

• · •99· 99

- 28 99 «999 • 9 «

9 999 •9 9 •9 <

·· 999

99 « 9 9 « • 9 9 « • 9 9 9 9 • 9 9 9

9«

R^a představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a

Hal má význam zde definovaný výše.

například za podmínek, které jsou odborníkovi v oboru dobře známy.

j) Sloučeniny obecného vzorce VII, ve kterém R_x představuje strukturní fragment obecného vzorce Ha, ve kterém tečkované čáry představují vazby, A a B oba představují CH a D představuje -CH=CH-, X₄ představuje -C (0)-N (H)-CH₂- a R³ není přítomen, mohou být připraveny cyklizací sloučeniny obecného vzorce XXVI, ve kterém

R² je jak je zde definován výše, za použití příhodného katalytického systému (např. Pd/C) za přítomnosti vhodného organického rozpouštědla (např. methanolu).. Sloučeniny obecného vzorce XXVI mohou být připraveny cyklizací odpovídající sloučeniny obecného vzorce XXVII, _n

XXVII

- 29 ♦ 9 » · 9 » 9 9 • 9 9 9 9

99 9

9 9 9 • 9 9 · φ ·

9999 φ 9 φ « • 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9

9 9 9 ύ 9 9 ve kterém

R² má význam zde definovaný výše, například při 20 °C za přítomnosti dýmavé HCl a chloridu cínatého.

k) Selektivní oxidací sloučeniny obecného vzorce XXX,

H-R_x-H XXX ve kterém

R_x má význam zde definovaný výše, například za přítomnosti vhodného oxidačního činidla (např. CrO₃ nebo KMnOJ a příhodného rozpouštědla (např. vody) .

1) Selektivní oxidací sloučeniny obecného vzorce XXXI,

H-R_X-OH (XXXI ve kterém

R_x má význam zde definovaný výše, například za přítomnosti vhodného oxidačního činidla (např.

·· ·φ • · · · • · · φ · ·· • « β·· · 9 9

- 30 • * • · · · · · • · · · · • ··· · · · • ♦ « · · • · 9 9 9

99 9 9

ΜηΟ₂) a příhodného rozpouštědla (např. CH₂C1₂)

m) Hydrolýzou oximu obecného vzorce XXXII,

K=N-0H

XXXII ve kterém

R_x má význam zde definovaný výše, například zahříváním za přítomnosti kyseliny (např. HCl) a příhodného organického rozpouštědla. Sloučeniny obecného vzorce XXXII mohou být připraveny reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce XXX, jak je zde výše definován, s propylnitritem, například za přítomnosti HCl v ethanolu.

n) Sloučeniny obecného vzorce VIII, ve kterém R_x představuje strukturní fragment obecného vzorce Ha a X_x představuje -CH₂-CH=CH-, mohou být připraveny eliminací sloučeniny obecného vzorce XXXIII,

O

XXXIII ve kterém

L₂ představuje vhodnou odštěpitelnou skupinu (např.

Br nebo SePh) a tečkované čáry, A, B, D, R² a R³ mají význam zde definovaný

4

4 * ·

4 « • 444 «

4444 44

- 31 za příhodných reakčních podmínek, například za přítomnosti vodného ethanolického roztoku NaOH nebo peroxidu vodíku a příhodného organického rozpouštědla (např. THF).

·» 4 4444 44 44 • 4 · » · · • ·44 4 4 4 4 • · * 4 4 4 4 • · 4 4 4 4 ·· 444 4 4 44 výše,

o) Sloučeniny obecného vzorce VIII, ve kterém R_x představuje strukturní fragment obecného vzorce lib a X₂ představuje -C(O)-A⁴- a A⁴ má význam zde definovaný výše, mohou být připraveny cyklizací sloučeniny obecného vzorce

XXXIV, ve kterém

XXXIV

R^b představuje H, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo Hal a

R², R³, A⁴, X₃ a Hal mají význam zde definovaný výše, například za přítomnosti polyfosforečné kyseliny, jak je popsáno výše nebo, v případě, kde R^b představuje Hal, za přítomnosti A1C1₃, v nitromethanu při například 20 °C.

p) Sloučeniny obecného vzorce VIII, ve kterém R_x představuje strukturní fragment obecného vzorce lib a X₂ představuje -A⁴-C(O)~ a A⁴ představuje alkylenovou skupinu s 1 nebo 2 atomy uhlíku, mohou být připraveny cyklizací sloučeniny obecného vzorce XXXV,

ve kterém

A^4a představuje alkylenovou skupinu s 1 nebo 2 atomy uhlíku a

Hal, R², R³ a X₃ mají význam zde definovaný výše.

Sloučeniny obecných vzorců VII, IX, IXa, XII, XIII, XIV, XV, XVI, XVII, XVIII, XXI, XXII, XXV, XXVII,

XXX, XXXI, XXXIII, XXIV a XXV jsou buď komerčně dostupné, nebo dobře známé v literatuře nebo jsou dostupné za použití známých postupů, včetně postupů, které jsou stejné nebo analogické s těmi, které jsou zde popsány.

Substituenty na aromatickém a/nebo nearomati ckém, karbocyklickém a/nebo heterocyklickém kruhu (kruzích) ve sloučeninách obecných vzorců I, IV, V, VI, VII, VIII, X,

XI, XII, XIII, XIV, XVII, XX, XXI, XXII, XXIII, XXVI,

XXVII, XXX, XXXI, XXXII, XXXIII, XXXIV a XXV mohou být převedeny za použití postupů odborníkovi v oboru známých. Například nitroskupina může být redukována na aminoskupinu, hydroxyskupina může být alkylována, aby se zLskal alkoxyskupina, alkoxyskupina může být hydrolyzována na hydroxyskupinu, alkeny mohou být hydrogenovány na alkany, halogeny mohou být hydrogenovány na H, atd.

• · • · · • · · • · · · « • ·

- 33 9 9 9 99 9

9 9

9 999

9 9 9

9 9

9 999

99 • · · · • * · O • · » 9

9 9 · • · 9 9

Sloučeniny obecného vzorce I mohou být isolovány z jejich reakčních směsí použitím konvenčních postupů.

Odborník v oboru zjistí, že v postupech popsaných výše mohou funkční skupiny meziproduktů vyžadovat ochranu chránícími skupinami.

Funkční skupiny, které je žádoucí chránit, zahrnují hydroxyskupinu, aminoskupinu a karboxylovou kyselinu. Vhodné chránící skupiny pro hydroxyskupinu zahrnují trialkylsilylovou nebo diaralkylsilylovou skupinu (např. terč.-butyldimethylsilyl, terč.-butyldifenylsilyl nebo trimethylsilyl) a tetrahydropyranyl. Vhodné chránící skupiny pro karbyxylovou kyseliny zahrnují alkylester s 1 až 6 atomy uhlíku nebo benzylester. Vhodné chránící skupiny pro aminoskupinu, amidinoskupinu a guanidinoskupinu zahrnují terč.-butyloxykarbonyl, benzyloxykarbonyl nebo 2-trimethylsilylethoxykarbonyl (Teoc) . Atomy dusíku v amidino- a guanidinoskupině mohou být také chráněny hydroxy- nebo alkoxyskupínou a mohou být chráněny buď na jednom nebo na dvou místech.

Zavedení a odstranění chránících skupin na funkční skupiny může probíhat před nebo po kondenzaci nebo po jakékoli jiné reakci ve výše zmíněných schématech.

Obzvláště platí, že sloučeniny obecného vzorce I mohou být připraveny postupem zahrnujícím kondenzaci N-acylované aminokyseliny nebo N-chráněné aminokyseliny. Pokud se použije N-chráněná aminokyselina, acylová skupina může být zavedena po kondenzaci. Odstranění chránící skupiny z atomu dusíku může potom být provedeno standardními postupy.

9 « · · · • · » • · · · ·

- 34 • · « · • · · · • · · • ··· • · ···· ·· • · · * • · · *

9 · 9 9 • · · 9

9 99

Chránící skupiny mohou být odstraněny v souladu s ¹ postupy, které jsou odborníkovi v oboru dobře známy a jak je dále popsáno.

Jisté chráněné deriváty (které mohou být také označovány jako meziprodukty) sloučenin obecného vzorce I, které mohou být připraveny před konečným krokem odstranění chránící skupiny, aby se vytvořily sloučeniny obecného vzorce I, jsou nové.

Podle dalšího aspektu vynálezu je poskytnuta sloučenina obecného vzorce Ia,

Ia ve kterém

B¹ představuje strukturní fragment obecného vzorce Illd, Hle nebo Illf

-u- '1.

x? .k'°

Dlhr^NHD2 DIN^^NHD² D1N^íí?^nhd2

Illd lile ve kterých • 9

· • · · *

- 35 D¹ a D² nezávisle představují H, OH, OR^a, OC(O)R^b,

OC(O)OR^C, C(O)OR^d, C(O)R^e, kde R^a představuje fenyl, benzyl, alkylovou skupinu s 1 až 7 atomy uhlíku (kterážto posledně jmenovaná skupina je případně přerušena atomem kyslíku nebo je případně substituována halogenem) nebo -C (R^f) (R^g) -OC (O) R^h,

R^b představuje alkylovou skupinu s 1 až 17 atomy uhlíku (kterážto posledně uvedená skupina je případně substituována alkoxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, acyloxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, aminoskupinou nebo halogenem), alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 7 atomy uhlíku, fenyl, naftyl nebo alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylové části (kterýchžto posledně jmenovaných 5 skupin může být případně substituováno alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku nebo halogenem), nebo -[CÍR¹) (R^j) ] _m0C (O) R^k,

R^c představuje alkylovou skupinu s 1 až 17 atomy uhlíku, fenyl, 2-naftyl (kteréžto poslední 3 jmenované skupiny je případně substituována alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku,

Si (R^aa) (R³¹³) (R^ao) nebo halogenem) ,

-[C(R”) (Rⁿ) ]_nOC(O)R^p nebo -CH^Ar¹,

R^d představuje 2-naftyl, fenyl, alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylové části (kteréžto 3 posledně jmenované skupiny mohou být ·

• 444

- 36 - ♦···♦····♦ 4 ι

-'t? 4 44« 4 4 4 α

4444 44 «· «·· , , případně substituovány alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, nitroskupinou, Si (R^ba) (R^bb) (R^bc) nebo halogenem), alkylovou skupinu s 1 až 12 atomy uhlíku (kterážto posledně jmenovaná skupina je případně substituována alkoxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, acyloxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku nebo halogenem), -C[(R^q) (R^r) ]POC (0) R^s nebo -CH2-Ar²,

R^e představuje fenyl, benzyl, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku (kterážto posledně jmenovaná skupina je případně přerušena atomem kyslíku) nebo - [C(R^b) (R^u) ]_rOC(O)R^v, _Raa, _Rab, _Rac, _Rb_a, _Rbb _{a R}b_{c nez}ávisle představují alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo fenyl,

R^f, R⁹, R¹, R^j, R^m, Rⁿ, R^g, R^r, R^fc a R^u nezávisle představují H nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku,

R^h, R^k, R^p, R^s a R^v nezávisle představují alkylovou skupinu s 1 až 17 atomy uhlíku (kterážto posledně jmenovaná skupina je případně substituována alkoxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, acyloxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku nebo halogenem), alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 7 atomy uhlíku, fenyl, naftyl nebo alkylfenyl s 1 až 3 atomy uhlíku (kterýchžto 5 posledně uvedených skupin je případně substituováno alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku nebo halogenem) ,

I · · · • · • · · · · · · • ···· « · β « ·· · · · · * · · • · · »999 • · · ·· · · 9 9

Ar¹ a Ar² nezávisle představují strukturní fragment

m a r nezávisle představují 3 nebo 4, nap nezávisle představují 1, 2 nebo 3, a

R¹, R_x, Y, R^Y, η, X⁵, X⁶, X⁷, X⁸, X⁹, X¹⁰ a R³¹ mají význam zde definovaný výše, nebo její farmaceuticky přijatelnou solí, za předpokladu, že D¹ a D² nepředstavují oba H.

Alkylové skupiny, které mohou představovat R^a, R^aa, R^, R^ac, R^b, R^ba, R^bb, R¹, R^c, R^d, R^e, R^f, R⁵, R\ R¹, R^j, R^k, R^ra, Rⁿ, R^p, R^q, R^r, R^s, R^b, R^u a R^v a jimiž mohou být substituovány R^b, R°, R^d, R^h, R^k, R^p, R^s a R^v, cykloalkylové skupiny, které mohou představovat R^b, R^h, R^k, R^p, R^s a R^v, . alkylová část alkylfenylových skupin s 1 až 3 atomy uhlíku, kterou mohou představovat R^b, R^d, R^h, R^k, R^p, R^s a R^v, alkoxyskupiny, které mohou představovat R^b, R^h, R^k, R^p, R^s a R^v, a alkoxy- a acyloxyskupiny jimiž mohou být substituovány R^b, R^d, R^h, R^k, R^p, R^s a R^v, mohou, tam, kde je k tomu dostatečný počet atomů uhlíku, být lineární nebo rozvětvené a mohou být nasycené nebo nenasycené.

Halogenové skupiny, jimiž mohou být R^a, R^b, R^c,

R^d, R^h, R^k, R^p, R^s a R^v substituovány, zahrnují fluor, chlor,

- 38 ··♦ ♦ · brom a jod.

Vlnovky na vazbách ve fragmentech obecných vzorců Illd, Hle nebo Illf označují pozici vazby fragmentu.

Výhodné sloučeniny obecného vzorce Ia zahrnují ty sloučeniny, ve kterých D¹ představuje H a D² představuje OH, OCH₃, OC(O)R^b nebo C(O)OR^d, kde R^b a R^d mají význam zde definovaný výše.

Sloučeniny obecného vzorce Ia mohou být také připraveny přímo ze sloučenin obecného vzorce I podle postupů odborníkovi v oboru dobře známých.

Například sloučeniny obecného vzorce Ia, ve kterém D¹ a D² představují C(O)OR^d, mohou být připraveny reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce I se sloučeninou obecného vzorce XXXVa,

L³-C(O)OR^d XXXVa ve kterém

L³ představuje odštěpitelnou skupinu, jako je Hal nebo p-nitrofenoxyskupina, a

Hal a R^d mají význam zde definovaný výše, například při 0 °C za přítomnosti vhodné báze (např. NaOH) a příhodného organického rozpouštědla (např. THF).

- 39 Sloučeniny obecného vzorce Ia mohou také být připraveny přímo z jiných sloučenin obecného vzorce Ia podle postupů odborníkovi v oboru dobře známých.

Sloučeniny obecného vzorce Ia, ve kterém D¹ nebo D² představuje OH, mohou být připraveny reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce Ia, ve kterém D¹ nebo D² (jak je příhodno) představuje COOR^d a R^d má význam zde definovaný výše, s hydroxylaminem (nebo jeho hydrohalogenidovou solí), například při 40 °C za přítomnosti vhodné báze (např. TEA) a příhodného organického rozpouštědla (např. THF).

Sloučeniny obecného vzorce Ia, ve kterém D¹ nebo D² představuje OC(O)OR^C, a R^c má význam zde definovaný výše, mohou být připraveny reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce Ia, ve kterém D¹ nebo D² (jak je příhodno) představuje OH, se sloučeninou obecného vzorce XXXVI,

L³C(O)OR^C XXXVI ve kterém

L³ a R^c mají význam zde definovaný výše, například při' teplotě místnosti za přítomnosti vhodné báze (např. TEA, pyridinu nebo DMAP) a příhodného organického rozpouštědla.

Sloučeniny obecného vzorce Ia, ve kterém D¹ nebo D² představuje OC(O)OR^b, a R^b má význam zde definovaný výše, mohou být připraveny reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce Ia, ve kterém D¹ nebo D² (jak je příhodno)

- 40 • ··· · » φ >·· φφ • · φφ • · φ » · · • · · » · · 4

ΦΦ «Φ představuje OH, se sloučeninou obecného vzorce XXXVIa,

R^bC(O)L⁴ XXXVIa ve kterém

L⁴ představuje odštěpitelnou skupinu, jako je OH,

Hal nebo R^bC(O)O, a

Hal a R^d mají význam zde definovaný výše, například při teplotě místnosti nebo nižší za přítomnosti vhodné báze (např. TEA, pyridinu nebo DMAP) a příhodného organického rozpouštědla (např. CH₂C1₂) .

Sloučeniny obecného vzorce Ia, ve kterém B¹ představuje strukturní fragment obecného vzorce Illd (ve kterém X⁵, X⁶, X⁷ a X⁸ všechny představují CH) nebo Illf, ve kterých, v obou případech, D¹ představuje H a D² představuje OH nebo OR^a, kde R^a má význam zde definovaný výšeo, mohou alternativně být připraveny reakcí sloučeniny obecného vzorce XXXVII,

XXXVII (CH₂)_n-B^a-^CN • « • ·· ·

• ···

- 41 ·· • · · · • · · • ··· ···· ·· ·· ··· ve kterém

B^a představuje fenyl-1,4-en nebo cyklohexyl-1,4-en a

R¹, R_x, Y, R^Y a n mají význam zde definovaný výše, se sloučeninou obecného vzorce XXXVIII,

H₂NOR^al XXXVIII ve kterém

R^al představuje H nebo R^a a

R^a má význam zde definovaný výše, například při teplotách v rozmezí 40 až 60 °C, za přítomnosti vhodné báze (e.g. TEA) a příhodného organického rozpouštědla (e.g. THF, CH₃CN, DMF nebo DMSO). Sloučeniny obecného vzorce la, ve kterém D¹ nebo D² představuje OH nebo OR^a, mohou být alternativně připraveny analogickým způsobem reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce la, ve kterém D¹ nebo D² (jak je příhodno) představují OC(O)R^b, a R^b má význam zde definovaný výše, se sloučeninou obecného vzorce XXXVIII, jak je definována výše.

Sloučeniny obecného vzorce XXXVII mohou být připraveny podle postupů kondenzace peptidů, například způsobem analogickým postupům popsaným zde výše pro sloučeniny obecného vzorce I. Sloučeniny obecných vzorců XXXVa, XXXVI, XXXVIa a XXXVIII jsou komerčně dostupné, jsou v literatuře dobře známy nebo jsou dostupné za použití známých postupů.

9 999

9 9 •9 ·

999

- 42 • · 99 • 9 9 9

9 9

999 9 • 9 ••99 9»

99 • 9 9 9 • 9 9 9

9 · ·

9 9 9

99

Podle dalšího aspektu tohoto vynálezu je poskytnuta sloučenina obecného vzorce la jak je definována výše s tím rozdílem, že:

R^b a R^c nezávisle představují alkylovou skupinu s 1 až 17 atomy uhlíku, fenyl nebo 2-naftyl (všechny z nich jsou případně substituovány alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku nebo halogenem),

R^d představuje 2-naftyl, fenyl, alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylové části (kteréžto 3 posledně uvedené skupiny jsou případně substituovány alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo halogenem),

CH(R^f) (CH (R⁹) ) _p0C (0) R^h (kde R^f a R⁹ nezávisle představují H nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, R^h představuje 2-naftyl, fenyl, alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 8 atomy uhlíku (kterážto posledně uvedená skupina je případně substituována halogenem, alkoxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku nebo acyloxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku) a p představuje 0 nebo 1) nebo alkylovou skupinu s 1 až 12 atomy uhlíku (kterážto posledně uvedená skupina je případně substituována alkoxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, acyloxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku nebo halogenem),

R^a a R^e nezávisle představují fenyl, benzyl, (CH₂) ₂0C (0) CH₃ nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, kterážto posledně uvedená skupina je případně přerušena atomem kyslíku, nebo její farmaceuticky přijatelné soli.

«♦ ··*«

♦ 9

- 43 *···

Odborník v oboru zjistí, že, aby se získaly sloučeniny obecného vzorce I nebo obecného vzorce la, alternativním a, při určitých příležitostech, vhodnějším způsobem, mohou být jednotlivé kroky postupu zde výše zmíněné prováděny v odlišném pořadí a/nebo mohou být jednotlivé reakce prováděny v jiných stadiích celkového postupu (tj. substituenty mohou být ve spojitosti s určitou reakcí přidávány k a/nebo chemické přeměny prováděny na jiných meziproduktech než jsou zde výše zmíněny). To může negovat nebo nutně vyžadovat potřebu chránících skupin. Podobně řád a typ zahrnuté chemické reakce bude diktovat potřebu a typ chránících skupin stejně jako pořadí kroků k uskutečnění syntézy.

Použití chránících skupin je plně popsáno v Protective Groups v Organic Chemistry, kterou vydal J. W.

F. McOmie, Plenům Press (1973) a Protective Groups in Organic Synthesis, 2. vydání, T. W. Greene a P. G. M.

Wutz, Wiley-Interscience (1991).

Chráněné deriváty sloučenin obecného vzorce I (např. sloučeniny obecného vzorce la) mohou být chemicky převedeny na sloučeniny obecného vzorce I použitím standardních postupů odstranění chránící skupiny (např. hydrogenace), například jak je zde popsáno dále.

Odborník v oboru také zjistí, že ačkoli takové chráněné deriváty sloučenin obecného vzorce I (např. sloučeniny obecného vzorce la) nemohou mít farmakologickou aktivitu jako takové, mohou být podány parenterálně nebo orálně a poté v těle metabolizovány, aby se vytvořily sloučeniny obecného vzorce I, které jsou farmakologicky aktivní. Takové deriváty mohou být tedy popsány jako prekurzory léčiva. Všechny prekurzory léčiv sloučenin φ · • · φ φφφ

- 44 Φ · • · · • · · > Φ· · φφ • · · • φ φ obecného vzorce I jsou zahrnuta do rozsahu tohoto vynálezu.

Chráněné deriváty sloučenin obecného vzorce I, které jsou obzvláště užitečné jako prekurzory léčiv, zahrnují sloučeniny obecného vzorce la.

Sloučeniny obecného vzorce I, jejich farmaceuticky přijatelné soli, tautomery a stereoisomery, stejně jako jejich prekurzory léčiv (včetně sloučenin obecného vzorce la, které jsou prekurzory léčiv sloučenin obecného vzorce I), jsou zde dále hromadně uváděny jako sloučeniny podle tohoto vynálezu.

Lékařské a farmaceutické použití

Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou užitečné, protože mají farmakologickou aktivitu. Jsou proto indikovány jako farmaceutika.

Podle dalšího aspektu tohoto vynálezu jsou tedy poskytnuty sloučeniny podle tohoto vynálezu pro použití jako farmaceutika.

Obzvláště jsou sloučeniny podle tohoto vynálezu mocnými inhibitory thrombinu buď jako takové nebo, v případě prekurzorů léčiv, po podání, například jak je ukázáno v testech popsaných níže.

U sloučenin podle předloženého vynálezu se tedy předpokládá, že budou užitečné při těch stavech, kde j e vyžadována inhibice thrombinu.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsoia. tedy indikovány při léčení a/nebo profylaxi trombózy a

- 45 • · • · • ··· • · ···· ·· • ·

9« ·· ··· hyperkoagulability v krvi a tkáních živočichů včetně člověka.

Je známo, že hyperkoagulabilita může vést k tromboembolickým onemocněním. Stavy spojené s hyperkoagulabilitou a tromboembolickými nemocemi, které mohou být zmíněny, zahrnují dědičnou nebo získanou aktivovanou resistenci na protein C, jako je mutace faktoru V (faktor V Leiden), a dědičné nebo získané deficience antithrombinu III, proteinu C, proteinu S a kofaktoru heparinu II. Jiné stavy, o nichž je známo, že jsou spojeny s hyperkoagulabilitou a tromboembolickým onemocněním zahrnují cirkulující antifosfolipidové protilátky (Lupus antikoagulant), homocysteinemii, heprainem navozenou trombocytopenii a poruchy fibrinolýzy. Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou tedy indikovány pro terapeutické a/nebo profylaktické použití při těchto stavech.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou dále indikovány při léčení stavů, kde se vyskytují nežádoucí nadměrné hladiny thrombinu bez známek hyperkoagulability, například při neurodegenerativních onemocnění jako je Alzheimerova nemoc.

Obzvláštní chorobné stavy, které mohou být zmíněny, zahrnují terapeutické a/nebo profylaktické podávání při venózní trombóze a plicní embolii, arteriální trombóze (např. infarktu myokardu, nestabilní angíně, mrtvici založené na trombóze a periferní arteriální trombóze) a systemické embolii, obyčejně z atria během, arteriální fibrilace nebo z levé komory po transmuráln.ím infarktu myokardu.

U sloučenin podle předloženého vynálezu se navíc

ΦΦ

- 46 ΦΦΦ φ

φ · φ· «ΦΦΦ φ φ φ • ΦΦΦ· • · φ φ « φ φ • Φ ΦΦΦ • Φ ΦΦ • φ φ φ

ΦΦΦΦ • · φ φ • · φ ·

ΦΦ ΦΦ očekává, že budou užitečné při profylaxi reokluze (tj. trombózy) po trombolýze, perkutánní transluminální angioplastice (PTA) a zavedení koronárního bypassu, prevenci retrombózy po mikrochirurgických zákrocích a zákrocích na cévách obecně.

Další indikace zahrnují terapeutické a/nebo profylaktické použití při diseminované intravaskulární koagulaci způsobené bakteriemi, mnohočetným traumatem, intoxikací nebo jakýmkoli jiným mechanismem, antikoagulační léčbě, kdy je krev v kontaktu s cizími povrchy v těle, jako jsou cévní štěpy, cévní stenty, cévní katetry, mechanické a biologické prostetické chlopně nebo jakýkoli jiné prostředek zdravotnické techniky a při antikoagulační léčbě, kdy je krev v kontaktu s prostředky zdravotnické techniky mimo tělo, jako při kardiovaskulárním chirurgickém zákroku při použití mimotělního oběhu nebo při hemodialýze.

Vedle jeho účinků na proces koagulace je o thrombinu známo, že aktivuje velký počet buněk (jako jsou neutrofily, fibroblasty, endoteliální buňky a buňky hladkých svalů). Sloučeniny podle předloženého vynálezu tedy mohou být užitečné pro terapeutické a/nebo profylaktické použití při idiopatickém syndromu dechové tísně a při syndromu dechové tísně dospělých, plicní fibróze po léčení ozářením nebo chemoterapií, septickém šoku, septikémii, zánětlivých odpovědích, které zahrnují, čímž ovšem jejich výčet není omezen, edém aktuní nebo chronickou atherosklerózu, jako je choroba srdečních arterií, choroba mozkových arterií, choroba periferních arterií, poškození po reperfuzi a restenóza po perkutánní transluminální angioplastice (PTA).

Sloučeniny podle předloženého vynálezu, které • * · © · ·««♦

- 47 ··« • · e » » «·♦ • · · r • * · ·» ©«· ·♦ r· • » · • · e • « · • · · ·· inhibují trypsin a/nebo thrombin mohou také být užitečné při léčbě pankreatitidy.

Podle dalšího aspektu předloženého vynálezu je poskytnut způsob léčení stavu, kde je vyžadována inhibice thrombinu, kterýžto způsob zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle předloženého vynálezu osobě trpící takovým stavem nebo osobě na něj citlivé.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu budou normálně podávány orálně, intravenózně, subkutánně, bukálně, rektálně, dermálně, nasálně, tracheálně, bronchiálně, jakoukoli jinou parenterální cestou nebo cestou inhalace, ve formě farmaceutických přípravků zahrnujících aktivní sloučeninu buď jako volnou bázi nebo farmaceuticky přijatelnou netoxickou adiční sůl s organickou nebo anorganickou kyselinou ve farmaceuticky přijatelné dávkovači formě. V závislosti na poruše a pacientovi, který má být léčen a cestě podání, mohou být přípravky podávány v různých dávkách.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být také kombinovány a/nebo podávány společně s jakoukoli antitrombotickou látkou s odlišným mechanismem účinku, jako jsou protidestičkové látky kyselina acetylosalicylová, tiklopidin, klopidrogel, inhibitory receptoru thromboxanu a/nebo inhibitory syntetasy thromboxanu, antagonisté receptoru fibrinogenu, mimetika prostacyklinu a inhibitory fosfodiesterasy a antagonisté ADP-recepzoru (P₂T) .

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být dále kombinovány a/nebo podávány společně s trombolytiky, jako jsou aktivátor tkáňového plašminogenu (přirozený, rekombinantní nebo modifikovaný), streptokináza, urokináza, • · · ·

- 48 prourokináza, anisoylovaný aktivační komplex plasminogen-streptokináza (APSAC), aktivátory plasminogenu ze zvířecích slinných žláz apod., při léčení trombotických nemocí, obzvláště infarktu myokardu.

Podle dalšího aspektu předloženého vynálezu je tedy poskytnut farmaceutický přípravek zahrnující sloučeninu podle předloženého vynálezu ve směsi s farmaceuticky přijatelným adjuvanciem, ředidlem nebo nosičem.

Vhodné denní dávky sloučenin podle předloženého vynálezu při terapeutickém použití u lidí jsou okolo 0,001 až 100 mg/kg tělesné hmotnosti při perorálním podání a 0,001 až 50 mg/kg tělesné hmotnosti při parenterálním podání.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mají tu výhodu, že mohou být účinnější, méně toxické, déle působící, mohou mít širší pole účinnosti, mohou být silněji působící, mohou vést k méně nežádoucím vedlejším účinkům, mohou být snadněji absorbovány než sloučeniny dosud v oboru známé, nebo je mohou předčít jinými užitečnými farmakologickými vlastnostmi.

Biologické testy

Test A

Stanovení thrombinového srážecího času (TT)

Roztok inhibitoru (25 μΐ) se 3 minuty inkúbuje s plasmou (25 μΐ). Potom se přidá lidský thrombin (T 67 69, Sigma Chem Co) v pufrovaném roztoku, pH 7,4 (25 μΐ) a čas

- 49 •9 9 · 9 99 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 • 9 9999 9 99 9

99999 · · · · ·· · • · · 9 · ···· • · · · · · · * · « · « » « · srážení se měří na automatickém přístroji (KC 10, Amelung).

Čas srážení v sekundách se vynese proti koncentraci inhibitoru a IC₅₀ TT se stanoví interpolací.

IC₅₀ TT je koncentrace inhibitoru v testu, která zdvojnásobí thrombinový čas srážení pro lidskou plasmu.

Test B

Určení inhibice thrombinu pomocí chromogenního robotizovaného stanovení

Síla inhibice thrombinu se měří pomocí metody chromogenního substrátu v robotizovaném mikroplotnovém přístroji Plato 3300 (Rosys AG, CH-8634 Hombrechtikon, Švýcarsko), za použití mikrotitrážních poloobjemových ploten s 96 jamkami (Costar, Cambridge, MA USA, Cat. No 3690). Zásobní roztoky testované látky v DMSO (72 μΐ), 1 mmol/litr se sériově naředí 1:3 (24+48 μΐ) DMSO, aby se získaly různé koncentrace, které se jako vzorky při stanovení analyzují. 2 μΐ testovacího vzorku se naředí 124 μΐ pufru pro stanovení a přidá se 12 μΐ roztoku chromogenního substrátu (S-2366, Chromogenix, Molndal, Švédsko) v pufru pro stanovení a konečně 12 μΐ roztoku alfa-thrombinu (lidský alfa-thrombin, Sigma Chemical Co.) oba v pufru pro stanovení a vzorky se zamíchají. Konečné koncentrace stanovení byly: testovaná látka 0,00068 až 13,3 pmol/litr, S-2366 0,30 mmol/litr, alfa-thrombin 0,020 NIHU/ml. Ve srovnání se slepým roztokem bez inhibitoru se pro vypočítání procenta inhibice testovaných vzorků použije zvýšení lineární absorbance během 40 minut inkubace při 37 °C. Robotická hodnota IC₅₀, odpovídající koncentraci inhibitoru, která způsobí 50% inhibici aktivity thrombinu,

- 50 f · ···· se vypočítá z křivky log dávky proti % inhibice.

Test C

Stanovení inhibiční konstanty Kj. pro lidský thrombin

Stanovení K_± se provedou za použití metody chromogenního substrátu provedené při 37 °C na centrifugálním anylyzátoru Cobas Bio (Roche, Basilej, Švýcarsko). Zbytková enzymová aktivita po inkubaci lidského alfa-thrombinu s různými koncentracemi testované sloučeniny se stanoví při 3 různých koncentracíxh substrátu a měří se jako změna optické absorbance při 405 nm.

Roztok testovaných sloučenin (100 μΐ, normálně v pufru nebo fyziologickém roztoku obsahujícím BSA 10 g/litr) se smíchají s 200 μΐ lidského alfa-thrombinu (Sigma Chemical Co.) v pufru pro stanovení (0,05 mol/litr Tris-HCl pH 7,4, iontová síla 0,15 upravená pomocí NaCl) obsahujícím BSA (10 g/litr) a analyzuje se jako vzorky v přístroji Cobas Bio. K 320 μΐ substrátu S-2238 (Chromogenix AB, Molndal, Švédsko) v pufru pro stanovení se přidá 60 μΐ vzorku spolu s 20 μΐ vody a monitoruje se změna absorbance (změna A/min). Konečné koncentrace S-2238 byly 16, 24 a 50 pmol/litr a thrombinu 0,125 NIHU/ml.

K sestrojení Dixonových křivek, tj. diagramů koncentrace inhibitoru proti 1/(změna A/min), se použije míra reakce v rovnovážném stavu. Pro reversibilní, kompetitivní inhibitory, datové body pro různé koncentrace substrátů typicky tvoří přímé čáry, které se kříží při x = Ki.

Test D ► · · · 4 • · • ···

- 51 • · · · • · « · • · * · · • · · · • · · ·

Stanovení času aktivovaného částečného tromboplastinu (APTT)

APTT se stanoví ve shromážděné lidské plasmě ošetřené citrátem pomocí činidla PTT Automated 5 vyrobeným firmou Stago. K plasmě se přidají inhibitory (10 μΐ roztoku inhibitoru na 90 μΐ plasmy) a inkubuje se 3 minuty s činidlem APTT, potom se přidá 100 μΐ roztoku chloridu vápenatého (0,025 M) a APTT se stanoví ve směsi použitím anylyzátoru koagulace KC10 (Amelung) podle pokynů výrobce činidla. Čas srážení v sekundách se vynese proti koncentraci inhibitoru v plasmě a IC₅₀ APTT se stanoví interpolací.

IC₅₀ APTT je definována jako koncentrace inhibitoru v lidské plasmě, která zdvojnásobí čas aktivovaného částečného tromboplastinu.

Test E

Stanovení thrombinového času ex vivo

Inhibice thrombinu po orálním podání sloučenin obecného vzorce I a Ia rozpuštěných ve směsi ethanol:Solutol™:voda (5:5:90) se vyšetří na krysách při vědomí, které se 1 nebo 2 dny před experimentem vybaví katetrem pro odebírání vzorků krve z krkavice. V den experimentu se ve stanovených časech po podání sloučeniny odeberou vzorky krve do plastických zkumavek obsahujících 1 díl roztoku citrátu sodného (0,13 mol na litr) a 9 dílů krve. Zkumavky se odstředí, aby se získala plasma chudá na destičky. Plasma se použije ke stanovení thrombinového času jak je popsáno níže.

- 52 • * ♦ · • · » · • · · • · · · · • · • · · · · ·

100 μΐ citrátem ošetřené krysí plasmy se naředí 100 μΐ 0,9% roztoku chloridu sodného a přidáním lidského thrombinu (T 6769, Sigma Chem. Co., USA) ve 100 μΐ pufrového roztoku, pH 7,4, se započne koagulace. Čas srážení se měří v automatickém přístroji (KC 10, Amelung, Německo).

Tam, kde se podává sloučenina obecného vzorce la, odhadnou se koncentrace příslušného aktivního inhibitoru thrombinu obecného vzorce I v krysí plasmě pomocí standardních křivek vztahujících thrombinový čas ve shromážděné citrátem ošetřené krysí plasmě ke známým koncentracím odpovídajícího aktivního inhibitoru thrombinu rozpuštěného v roztoku chloridu sodného.

Plocha pod křivkou po orálním a/nebo parenterálním podání odpovídajícího prekurzoru léčiva obecného vzorce la se vypočítá (AUCpd) za použití trapezoidálního pravidla a extrapolace dat k nekonečnu, přičemž se vychází z odhadu plasmatických koncentrací aktivního inhibitoru thrombinu obecného vzorce I (což předpokládá, že prodloužení thrombinového času je zapříčiněno výše zmíněnou sloučeninou).

Biologická dostupnost aktivního inhibitoru obecného vzorce I po orálním nebo parenterálním podání prekurzoru léčiva obecného vzorce la se vypočítá jak je uvedeno níže:

[(AUCpd/dávka)/(AUCaktivní,parenterální/dávka]xlOO kde AUCaktivní,parenterální představuje AUC získanou po parenterálním podání odpovídajícího aktivního inhibitoru • · • · *

- 53 thrombinu obecného vzorce I krysám při vědomí, jak je popsáno výše.

Test F

Stanovení thrombinového času v moči ex vivo

Množství aktivního inhibitoru thrombinu obecného vzoce I, které se vyloučí do moči po orálním nebo parenterálním podání sloučenin podle tohoto vynálezu, rozpuštěné ve směsi ethanol:Solutol™:voda (5:5:90) se odhadne stanovením thrombinového času v moči ex vivo (za předpokladu, že prodloužení thrombinového času je zapříčiněno výše zmíněnou sloučeninou).

Krysy při vědomí se na 24 hodin po orálním podání sloučenin podle tohoto vynálezu umístí do metabolických klecí, které umožní oddělené sbírání moči a výkalů. Thrombinový čas se stanoví z nasbírané moči, jak je popsáno níže.

Shromážděná normální lidská citrátem ošetřená plasma (100 μΐ) se 1 minutu inkubuje s koncentrovanou krysí močí nebo s jejími roztoky ve fyziologickém roztoku. Koagulace plasmy se potom zahájí podáním lidského thrombinu (T 6769, Sigma Chem. Co.) v pufrovaném roztoku (pH 7,4, 100 μΐ). Čas srážení se měří v automatickém přístroji (KC 10, Amelung).

Koncentrace aktivního inhibitoru thrombinu obecného vzorce I v krysí moči se odhadnou za použití standardních křivek vztahujících thrombinový čas ve shromážděné normální citrátem ošetřené lidské plasmě ke známým koncentracím výše zmíněného aktivního inhibitoru ► φφφφ φ Φ φφφφ

- 54 • φ φφ • φ φ φ • φ · φ • · · · • φ · · ·· ·· thrombinu rozpuštěnému v koncentrované krysí moči (nebo jejích roztocích ve fyziologickém roztoku). Násobením celkové tvorby moči u krysy za období 24 hodin odhadnutou střední koncentrací výše zmíněného aktivního inhibitoru v moči se může vypočítat množství aktivního inhibitoru vyloučeného do moči (AMOUNTpd).

Biologická dostupnost aktivního inhibitoru thrombinu obecného vzorce I po orálním nebo parenterálním podání prekurzoru léčiva se vypočítá jak je uvedeno níže:

[(AMOUNTpd/dávka)/ (AMOUNTaktivní,parenterální/dávka]xlOO kde AMOUNTaktivní,parenterální představuje množství vyloučené do moči po parenterálním podání odpovídajícího aktivního inhibitoru thrombinu obecného vzorce I krysám při vědomí, jak je popsáno výše.

Vynález je ilustrován pomocí následujících příkladů. Aminokyseliny Pro a Aze jsou definovány jako S-isomery, pokud není specifikováno jinak. Příklady se získají jako diastereoisomery, pokud není specifikováno j inak.

Příklady provedení vynálezu

Obecné experimetální postupy

Hmotnostní spektra byla zaznamenána na troj itém čtyřpólovém hmotnostním spektrometru Finnigan MAT TSQ 700 vybaveném elektrosprayovým rozhraním (FAB-MS) a na hmotnostním spektrometru VG Platform II vybaveném elektrosprayovým rozhraním (LC-MS) . Měření ⁷H NMR a ¹³C NMR byla prováděna na spektrometrech BRUKER ACP 300 a Varian UNITY • · · • · · ··

- 55 • · · · · plus 400, 500 a 600 pracujících při frekvencích Ή 300,13, 399, 96, 499, 82 nebo 599, 94 MHz, a při frekvencích ¹³C 75, 46, 100,58, 125,69 nebo 150,88 MHz. Blesková chromatografie byla prováděna na silikagelu (rozměr částice 0,067 až 0,038 mm). Preparativní RPLC byla prováděna na sloupcích s reverzní fází (250 mm, 20 nebo 50 mm, 5 až 7 μΜ fáze Chromasil C8) s průtokem 10 až 50 ml/min za použití UV detektoru (270 až 280 nm).

Příklad 1 (S) nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Pro-Pab (i) Methylester kyseliny l-hydroxy-7-methoxytetralin-1-ylkarboxylové

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připraví podle způsobu, který popsal C.F.Bigge a kol. (J. Med. Chem. 36, 1977 (1993)), za použití 7-methoxytetralonu (1,0 g,

5,67 mmol) a methanolu místo ethanolu. Výtěžek: 1,22 g (90 %) .

¹H-NMR (300 MHz, CDC1₃) : delta 7,05 (d, 1H) , 6,80 (d, 1H) ,

6,65 (s, 1H) , 3,80 (s, 3H) , 3,75 (s, 3H) , 2,85-2, 65 (m,

2H), 2,25-1,90 (m, 4H).

(ii) Kyselina l-hydroxy-7-methoxytetralin-l-ylkarboxylová

Methylester kyseliny l-hydroxy-7-methoxytetralin-l-ylkarboxylové (1,16 g, 4,9 mmol, z kroku (i) výše) se rozpustí v THF (10 ml) a k výslednému roztoku se přidá hydroxid lithný (0,41 g, 9,8 mmol) následovaný vodou (4 ml). Reakční směs se při teplotě místnosti míchá 3 hodiny, THF se odpaří a vodná fáze se promyje methylenchloridem.

·· ·· ····

• · · • · · ·· ·♦· *· ·· • · · · • · · · • · · ♦ · • · · · ·· ··

Reakční směs se okyselí pomocí HC1 (2M) a potom se nasytí NaCl (pevný). Po extrakci CH₂C1₂ se organická fáze vysuší a odpaří. Výtěžek: 765 mg (70 %).

LC-MS (m/z) 221 (Μ - 1)',

Ή-ΝΜΡ (400 MHz, CDC1₃) : delta 7,07 (d, 1H) , 6, 82 (dd, 1H) ,

6,77 (d, 1H) , 3,76 (s, 3H) , 2,83-2,71 (m, 2H) , 2,32-2,21 (m, 1H), 2,12-1,88 (m, 3H).

(iii) (R)- a (S)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny l-hydroxy-7-methoxytetralin-1-ylkarboxylové (222 mg, 1,0 mmol, z kroku (ii) výše), H-Pro-Pab(Z) (499 mg, 1,1 mmol, připravený podle postupu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 97/02284) a TBTU (353 mg, 1,1 mmol) v DMF (10 ml) se ochladí na 0 °C a přidá se DIPEA (517 mg, 4,0 mmol). Reakční směs se 4 dny míchá při teplotě místnosti a potom se přidají stejná množství H-ProPab(Z), TBTU a DIPEA při 0 °C. Po 3 dnech se reakční směs odpaří a rozpustí ve směsi voda:EtOAc, 1:1. Vodná fáze se extrahuje EtOAc a spojená organická fáze se vysuší (Na₂SO₄) a odpaří. Produkt se vyčistí za použití bleskové chromatografie (EtOAc:EtOH, 100:0 až 95:5). Dalším čištěním za použití preparativní RPLC (CH₃CN:O,1M octan. amonný, 40:60) se oddělí diastereomery: sloučenina 1A (rychleji se pohybující diastereomer, 10 mg, 1,7 %) a sloučenina 1B (pomaleji se pohybující diastereomer, 10 mg, 1,7 %). Výtěžek: 20 mg (3,4 %).

Sloučenina 1A:

^-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 7,82 (d, 2H) , 7,44 (d, 2H) , 7,38-7,29 (m, 4H) , 7,05 (d, 2H) , 6,80 (dd, 1H) , 6,54 (d,

1H), 5,21 (s, 2H) 4, 68-4, 63 (dd, 1H) , 4,45 (m, 2H) , 3,71

9999 • · • 9 • 9

- 57 • · 99 • 9 9 · • 9 9 • ··· • 9 ···· 99

(s, 3H) , 3,12 (m, 1H) , 2,83 (m, 1H) , 2,68-2,53 (m, 2H) , 2,22-2,13 (m, 2H), 2, 05-1,84 (m, 7H), 1, 59-1, 50 (m, 1H) .

Sloučenina 1B:

Hí-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 7,82 (d, 2H), 7,43 (d, 2H), 7,37-7,28 (m, 4H) , 7,02 (d, 2H) , 6,77 (dd, 1H) , 6,57 (d,

1H) , 5,20 (s, 2H) 4,58-4,51 (m, 2H) , 4,42 (m, 1H) , 3,62 (s, 3H) , 3,12-3,04 (m, 1H) , 2,83 (široký d, 1H) , 2,68-2,58 (m, 1H), 2,55-2,47 (m, 1H) , 2,13-1,79 (m, 7H), 1,76-1,65 (m, 1H) .

(iv) (S)- nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Pro-Pab

Pd/C (5%, 10 mg) se přidá k roztoku (R)- nebo (S)-l-hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Pro-Pab(Z) (10 mg, 0,017 mmol, sloučenina 1A z kroku (iii) výše) v EtOH (5 ml) a HOAc (1 μΐ, 0,017 mmol) a směs se hydrogenuje 3 hodiny při teplotě místnosti a atmosférickém tlaku.

Výsledná směs se zflitruje přes rozsivkovou zeminu, roztok se odpaří, přidá se voda a roztok se lyofilizuje, výtěžek 10 mg (98%, čistota 92,2 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílý prášek.

LC-MS (m/z) 451 (M + 1)⁺, ^XH-NMR (400 MHz, CD₃OD) : delta 7,75 (d, 2H) , 7,57 (d, 2H) ,

7,08	(d, 1H),	6, 83	(dd, 1H),	6,60 (d,	1H), 4,63-	-4,40 (m,
3H) ,	3,69 (s,	3H) ,	3,43-3,35	(m, 1H),	2,88-2,67	(m, 3H),
2,23-	-2,11 (m,	2H) ,	2,20-1,77	(m, 8H),	1,63-1,51	(m, 1H).

Příklad 2 (R)- nebo (S)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)- 58 ··· • · • · ···· ·* ···· • · • · · · ·· ·* ·· • ♦ · 9 • · · « • · · · · • · · · ·· ··

-Pro-Pab

Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví podle postupu popsaného v příkladu 1 (iv) výše z (R)- nebo (S)-l-hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(0)-Pro-Pab(Z) (10 mg, 0,017 mmol, sloučenina 1B z příkladu 1 (iii) výše). Výtěžek: 10 mg (98%, čistota 80,4 %).

LC-MS (m/z) 451 (Μ + 1 )⁺, ¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD) delta 7,78 (d, 2H) , 7,63 (d, 2H) , 7,04 (d, 1H) , 6,78 (dd, 1H) , 6,75 (d, 1H) , 4, 67-4,48 (m, 3H), 3,68 (s, 3H), 3,30-3,23 (m, 1H), 2,86-2,61 (m, 3H), 2,23-1,71 (m, 11H).

Příklad 3 (S) — nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) (S)- a (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(Z)

K ledově studenému roztoku kyseliny 1-hydroxy-7-methoxytetralin-l-ylkarboxylové (0,345 g, 1,55 mmol, viz příklad 1 (ii) výše) v DMF (10 ml) se přidá TBTU (0,58-4 g,

1,7 mmol), následovaný DIPEA (0,200 g, 1,55 mmol). Po 15 minutách míchání při 0 °C se přidá H-Aze-Pab(Z) x 2HC1 (0,750 g, 1,7 mmol, připravený podle postupu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 97/02284) a DIPEA (0,603 g, 4,65 mmol) a směs se 4 dny míchá při teplotě místnosti.

DMF se odpaří a výsledný materiál se rozdělí mezi vodu a EtOAc. Organická vrstva se oddělí, vodná fáze se extrahuje 3-krát EtOAc a spojená organická vrstva se vysuší (Na₂SO₄) a odpaří. Produkt, bílý prášek, se dále čistí za použití RPLC *

♦ 4

- 59 4··« • 4 • « « ·

444 • 4 4444 • 4 4 • · 444 •4 4 • · 4 • 4 444 ·* 44 * 4 4 • 4 4 4 • 4 4 ·

4 4 4

44 (CH₃CN:O,1M octan amonný, 46:54), výtěžek 122 mg rychleji se pohybující frakce (sloučenina 3A) a %) pomaleji se pohybující frakce (sloučenina 3B) (28 %) mg (14

Sloučenina 3A:

LC-MS (m/z) 571 (M + 1)⁺, ¹H-NMR (400 MHz, (CDC1₃) : (komplexní v důsledku rotamerů) : delta 8,22 (t, 0,5H, rotamer), 7,94 (t, 0,5H, rotamer), 7,83 (t, 1H), 7,45-7,3 (m, 9H), 7,4 (t, 1H), 6,80 (m, 1H), 4,93 (m, 1H) , 4,55 (m, 5H) , 3,76 (s, 3H) , 3,0 (m, 2H) , 2,8 (m, 2H) , 2,6 (m, 2H) , 2,5 (m, 1H) , 2,38 (m, 1H) , 2,25 (m, 1H), 2,0-1,8 (m, 9H).

(ii) (S)- nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Připraví se podle postupu popsaného v příkladu 1 (iv) z (S) - nebo (R)-l-hydroxy-7-methoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,058g, 0,1 mmol, sloučenina 3A z

kroku mg) v	(i) výše), EtOH (5 ml	HOAc (5,8 μΐ, 0,1 mmol), a Pd/C (5%,	50
). Výtěžek 15 mg	(59 %) .
LC-MS	(m/z) 437	(M + 1)+,
Ή-ΝΜ®	. (400 MHz,	D2O) : delta	7	, 65	(d, 2H), 7,47 (d, 2H	) ,
7,16	(d, 1H), 6,	90 (d, 1H),	6,	71	(d, 1H), 4,91 (dd, 1H	) ,
4,40	(m, 1H), 4,	15 (m, 1H),	3,	94	(m, 1H), 3,60 (s, 3H)	f
2,75	(m, 3H), 2,	53 (m, 1H),	2,	1 (	m, 2H), 2,0-1,75 (m,	7H)
13C-NMR (100 MHz,	CDC13) : delta	182, 5, 178,3, 174, 0.

Příklad 4 (R)- nebo (S)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab

>

· ’ * · »9 · * · · 9 · » * »· (i) 4-(Aminomethoxyiminomethyl)benzylamin (H-Pab(OMe))

Oxid platinový (200 mg) se přidá k roztoku 4-(aminomethoxyiminomethyl)benzylazidu (10 g, 0,049 mol, připraveného podle postupu popsaného v WO 94/29336) ve 200 ml ethanolu. Směs se hydrogenuje za atmosférického tlaku 8 hodin, zfiltruje skrz Hyllo a odpaří se. Surový produkt se použije přímo v následujícím kroku.

¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD) : delta 7,60 (d, 2H) , 7,37 (d, 2H) , 3,81 (s, 3H), 3,80 (s, 2H).

(ii) Boc-Aze-Pab(OMe)

DIPEA (17,5 mL, 105 mmol) se přidá k ledově studenému roztoku Boc-Aze-OH (9,7 g, 48 mmol), H-Pab(OMe) (9,4 g, 52 mmol, z kroku (i) výše) a TBTU ( 18,5 g, 58 mmol) v DMF (100 ml), a směs se při teplotě místnosti míchá přes noc. Výsledná směs se vlije do vody (50 ml), pH se upraví na asi 9 a směs se 3-krát extrahuje EtOAc. Spojená organická vrstva se promyje vodným roztokem NaHCO₃, vodou a roztokem chloridu sodného, vysuší se (Na₂SO₄) a odpaří. Surový produkt se vyčistí za použití bleskové chromatografie (Si-gel, EtOAc). Výtěžek: 11,9 g (69 %) .

^H-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 7,60 (d, 2H) , 7,31 (d, 2H) ,

4,78 (široký, 2H), 4,69 (m, 1H), 4,50 (široký, 2H) , 3,92 (s+m, 4H), 3,79 (m, 1H), 2,46 (široký, 2H) , 1,42 (s, 9Ή) .

(iii) H-Aze-Pab(OMe) x 2HC1

Roztok Boc-Aze-Pab(OMe) (9,4 g, 26 mmol, z kroku (ii) výše) v EtOAc (250 ml) se nasytí HC1(plyn). K výsledné emulsi se přidá EtOH (absolutní, 125 ml) a směs se na 10 « · • · · ·

- 61 minut vystaví působení ultrazvuku. EtOAc se přidává dokud se roztok nezakalí, počemž produkt uvedený v podtitulu brzy krystalizuje. Výtěžek: 6,7 g (77 %).

• · ΦΦ * * · · • · · * · · · • φ ··· ΦΦ < φ · · • ♦ · * ♦ · φ · ♦ · · φ • · ί*

LC-MS (m/z) 2 63 (M + 1)⁺,

Ή-NMR (400 MHz, CD₃0D) : delta 7,74 (d, 2H) , 7,58 (d, 2H) , 5,13 (t, 1H) , 4,57 (m, 2H) , 4,15 (m, 2H) , 3,97 (s+m, 4H) , 2,87 (m, 1H) , 2,57 (m, 1H) , ¹³C-NMR (75 MHz, (CDC1₃) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 168,9, 168,8, 161,9.

(iv) l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(OMe)

H-Aze-Pab(OMe) (0,587 g, 1,85 mmol, z kroku (iii) výše), TBTU (0,594 g, 1,85 mmol) a DIPEA (0,87 g,

6,73 mmol) se v tomto pořadí přidají k ledově studenému roztoku kyseliny l-hydroxy-7-methoxytetralin-l-ylkarboxylové (0,374 g, 1,68 mmol, viz příklad 1 (ii) výše) v CH₃CN. Výsledná směs se 6 dní míchá při teplotě místnosti. Roztok se odpaří a surový materiál se vyčistí za použití preparativní HPLC (CH₃CN:0,lM octan amonný, 25:75), kterýžto postup oddělí diastereomery, výtěžek 122 mg (31,2 %) rychleji se pohybujícího diastereomerů (sloučenina 4A) a 120 mg (30,7 %) pomaleji se pohybujícího diastereomerů (sloučenina 4B).

Sloučenina 4B:

LC-MS (m/z) 4 66 (M + 1)⁺, ¹H-NMR (500 MHz, CDC1₃) : delta 8,08 (t, 1H) , 7,63 (d, 2H) ,

7,35 (d, 2H) , 7,02 (d, 1H) , 6,80 (dd, 1H) , 6,57 (d, IH), 4,90 (dd, IH), 4,79 (široký, 2H), 4,53 (m, 2H), 3,91 (s,

3H), 3,65 (s+m, 4H), 2,97 (q, IH), 2,81 (široký d, IH),

2,59 (m, IH), 2,49 (m, IH) , 2,3 8 (m, IH) , 2,03-1, 8 5 (m,

- 62 4H) .

(v) (R)- nebo (S)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab

Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví podle postupu popsaného v příkladu 1(iv) uvedeném výše z l-hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-AzePab(OMe) (20 mg, 0,043 mmol, sloučenina 4B z kroku (iv) výše),

AcOH (3 mg, 0,05 mmol) a Pd/C (10%, 20 mg) v EtOH (5 ml). Výtěžek 19 mg (89 %).

LC-MS (m/z) 436 (M + 1)⁺,

•H-NMR (	400 MHz, D2O) : delta	7,79	(d,	2H) ,	7,55	(m,	2H) ,
7,20 (d	, 1H), 6,95 (m, 1H) ,	6,79	(d,	1H) ,	4,92	(dd,	1H) ,
4,58 (m	, 2H), 4,18 (m, 2H),	3, 77	(s,	3H) ,	3, 63	(m,	2H), 2,8
(m, 3H)	, 2,6 (m, 2H), 2,1 (:	m, 4H)	, i,	9 (m,	2H) ,

¹³C-NMR (75 MHz, CDC1₃) : (karbonylový a/nebo amidinový atom uhlíku) delta 177,9, 173,8, 167,6.

Příklad 5 l-Hydroxy-5-methoxytetralin-l-yl-(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Methylester kyseliny l-hydroxy-5-methoxytetralin-1-ylkarboxylové

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připraví podle postupu, který popsal Bigge a kol. (J. Med. Chem., 36, 1977 (1993)), z 5-methoxytetralonu (1,0 g, 5,67 mmol), Me₃SiCN (0,619 g, 6,24 mmol) a Znl₂ (8 mg, kat.). Výtěžek 1,11 g (83 %).

¹H-NMR (500 MHz, CDC1₃) : delta 7,16 (m, 1H) , 6,91 (d, 1H) ,

- 63 6,76 (t, 1Η), 6,45 (široký, 1H), 5,97 (široký, 1H), 3,815 (s, 2H), 3,81 (s, 3H), 2,88 (m, 1H) , 2,56 (m, 2H), 2,14 (m,

2H), 1,95 (m, 2H).

(ii) Kyselina l-hydroxy-5-methoxytetralin-l-ylkarboxylová

Připraví se podle postupu popsaného v příkladu 1 krok (ii) uvedeném výše z methylesteru kyseliny 1-hydroxy-5-methoxytetralin-l-ylkarboxylové (1,11 g, 4,7 mmol, z kroku (i) výše) a LiOH.H₂O (0, 395 g, 9,4 mmol). Výtěžek 460 mg (36 %) .

^-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 7,18 (m, 1H) , 6,86 (d, 1H) ,

6,79 (d, 1H), 3,82 (s, 3H), 2,86 (dt, 1H), 2,58 (m, 1H), 2,20 (m, 1H), 2,10-1,85 (m, 4H).

(iii) l-Hydroxy-5-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(Z)

TBTU (0,528 g, 1,64 mmol) se přidá k ledově studenému roztoku kyseliny l-hydroxy-5-methoxytetralin-1-ylkarboxylové (0,332 g, 1,49 mmol, z kroku (ii) výše) v CH₃CN (15 ml) . Směs se 2 hodiny míchá při 0 °C a přidají se Η-Aze-Pab(Z)x 2HC1 (0,656 g, 1,49 mmol) a DIPEA (0,599 g, 3,1 mmol). Výsledná směs se při teplotě místnosti míchá přes noc a roztok se odpaří. Surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:0,lM octan amonný,

40:60). Výtěžek 140 mg (16 %).

LC-MS (m/z) 571 (M + 1)⁺, ^-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 7,82 (dd, 2H) , 7,43 (d, 2H) ,

7,33	(t, 2H),	7,27	(m, 3H) ,	6, 73	(m, 2H),	5,20	(s, 2H) ,
4,89	(m, 1H),	4, 60-	-4,40 (m,	2H) ,	3,80 (s,	3H) ,	3,62 (η,
1H) ,	2,94 (m,	2H) ,	2,34 (m,	2H) ,	1,95-1,8	(m,	4H) ,

- 64 ¹³C-NMR (100 MHz, CDC1₃) : (karbonylový a/nebo amidinový atom. uhlíku) delta 184,2, 179, 0, 178, 6, 172, 3, 171, 6, 168,9.

(iv) l-Hydroxy-5-methoxytetralin-l-yl-C~OI-Aze-Pab x HOAc

Připraví se podle postupu popsaného v příkladu l(iv) z l-hydroxy-5-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(Z) (47 mg, 0,082 mmol, z kroku (iii) výše), AcOH (5 mg, 0,082 mmol) a Pd/C (5%, 20 mg) v EtOH (5 ml). Výtěžek 37 mg (100 %) .

LC-MS (m/z) 437 (M + 1)⁺,

Hí-NMR (400 MHz, D₂O) : delta 7,76 (dd, 2H) , 7,54 (dd, 2H) , 7,27 (m, 1H), 7,01 (t, 1H) , 6,90 (dd, 1H) , 4,91 (dd, 1H) , 4,5 (m, 1H) , 4,20 (m, 1H) , 3,87 (s, 3H) , 3,63 (m, 1H) , 2,90 (m, 1H) , 2,7-2,4 (m, 2H) , 2,24 (m, 1H) , ¹³C-NMR (100 MHz, CDC1₃) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 181,5, 177,5, 177,2, 173,1, 173,0, 166,7.

Příklad 6 l-Hydroxy-5, 7-dimethyltetralin-l-yl-C (0) -Aze-Pab x HOAc (i) Methylester kyseliny l-hydroxy-5,7-dimethyltetralin-1-ylkarboxylové

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připraví podle postupu, který popsal Bigge a kol·., (J. Med. Chem., 36, 1977 (1993)) z 5,7-dimethyltetralonu (1,0 g, 5,74 mmol), Me₃SiCN (0, 626 g, 6,31 mg) a Znl₂ (8 mg, kat.). Výtěžek 1,24 g (92 %).

♦**· ·*·. ,··. ···· .. ..

• · · · · · · · · ·· * * ····· φ · · ϊ * * * • · · ?’♦··· ·· ·« .. ...* ·..·*..·

1H-NMR (4 00 MHz, CDC13)	: delta 6,	94 (s, 1H), 6,	81	(s, 1H),
3,77 (s, 3H) , 2,82 (t,	1H) ,	2, 73	(m, 1H), 2,60	(m,	3H) ,
2,25 (s, 3H), 2,21 (s,	3H) ,	2, 00	(m, 3H) .

(ii) Kyselina l-hydroxy-5,7-dimethyltetralin-l-ylkarboxylová

Připraví se podle postupu popsaného v příkladu 1 (ii) z methylesteru kyseliny l-hydroxy-5,7-dimethyltetralin-l-ylkarboxylové (1,24 g, 5,27 mmol, z kroku (i) výše) a LiOH.H₂O (0, 443 mg, 10,6 mmol). Výtěžek 0, 629 g (50 %) .

LC-MS (m/z) 437 (M - 1)', ¹H-NMR (400 MHz,,CDCl₃): delta 6,97 (s, 1H) , 6,92 (s, 1H) , 2,72 (m, 1H), 2,60 (m, 1H), 2,27 (s, 3H), 2,22 (s, 3H),

2,06 (m, 2H) , 1,95 (m, 2H) (iii) l-Hydroxy-5,7-dimethyltetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(OMe)

Připraví se podle postupu popsaného v příkladu 4 (iv) popsaného výše z kyseliny l-hydroxy-5,7-dimethyltetralin-l-ylkarboxylové (0,20 g, 0,91 mmol, z kroku (ii) výše), Η-Aze-Pab(OMe) x 1,5HC1 (0,317 g, 1,0 mmol, viz příklad 4 (iii) výše), TBTU (0,321 g, 1,0 mmol) a DIPEA (0,469 g, 3,63 mmol). Roztok se odpaří a odparek se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:0,lM octan amonný, 30:70) . Frakce, o něž je zájem, se odpaří a potom extrahují (3x) EtOAc. Spojená organická vrstva se vysuší (Na₂SO₄) a odpaří. Suchý produkt se rozpustí v malém množství směsi voda/CH₃CN a lyofilizuje. Výtěžek 40 mg (9,5 %).

LC-MS (m/z) 463 (M + 1)⁺, i-H-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta (komplexní v důsledku

- 66 diastereomerů/rotamerů) 8,19 (široký t, 0,5H, rotamer),

7.91 (široký t, 0,5H, rotamer), 7,61 (dd, 2H), 7,35 (d,

1H) , 7,28 (d, 1H) , 6,93 (s, 0,5H, rotamer), 6,91 (s, 0,5H, rotamer), 6,80 (s, 0,5H, rotamer), 6,70 (s, 0,5H, rotamer),

4.91 (m, 2H) , 4,79 (široký, 2H) , 4,50 (m, 3H) , 3,91 (d,

3H) , 3,74 (m, 0,5H, rotamer), 3,61 (m, 0,5H, rotamer), 2,78 (široký d, 1H), 2,57 (m, 1H), 2,38 (m, 2H), 2,26 (m, 2H), 2,19 (d, 6H) , 1,95 (m, 3H), ¹³C-NMR (100 MHz, CDC1₃) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 179, 2, 178, 9, 171, 6, 171,4.

(iv) l-Hydroxy-5,7-dimethyltetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Připraví se podle postupu popsaného v příkladu 1 (iv) uvedeném výše z l-hydroxy-5,7-dimethyltetralin-l-yl-

-C(0)-Aze-Pab.(OMe) HOAc (2,6 mg, 0,043 mg (94 %) .	(20 mg, 0,043 mmol, z kroku (iii) výše),
mmol) a Pd/C	(10%	, 10 mg) .	Výtěžek 20
LC-MS (m/z) 435 (M	+ IP,
^-NMR (400 MHz, D,O) : delta 7,79	(dd,	1H), 7,70	' (d, 1H),
7,53 (m, 2H) , 7,07	(d, 1H) , 6,92	(s,	1H) , 4,91	(m, 1H) ,
4,17 (m, 1H) , 3,76	(m, 0,5H, rotamer)	, 3,60 (m,	0, 5H,
rotamer), 2,80 (d,	1H), 2,55 (m,	2H) ,	2,23 (s,	3H), 2,07
(m, 2H), 1,95 (s, 6H),

¹³C-NMR (100 MHz, D₂0) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 177,9, 173,3.

Příklad 7 l-Hydroxy-7-aminotetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc • ··

- 67 (i) Methylester kyseliny l-hydroxy-7-nitrotetralin-l-ylkarboxylové

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připraví podle postupu, který popsal Bigge a kol.(J. Med. Chem., 36, 1977 (1993)) z 7-nitrotetralonu (2,0 g, 10,5 mmol), Me₃SiCN (1,14 g, 11,5 mg) a Znl₂, (8 mg, kat.). Výtěžek 2,87 g (100 %) (ve 3 krocích).

Hi-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 8,16 (dd, 1H), 8,04 (m, 1H) , 7,36 (dd, 1H) , 3,73 (s, 3H) , 2,92 (m, 2H) , 2,30 (m, 1H) ,

2, 00 (m, 3H) .

(ii) Kyselina l-hydroxy-7-nitrotetralin-l-ylkarboxylová

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připraví podle postupu popsaného v příkladu 1 (ii) uvedeném výše z methylesteru kyseliny l-hydroxy-7-nitrotetralin-l-ylkarboxylové (2,0 g, 8,3 mmol, z kroku (i) výše) a LiOH.H₂O (0,7 g, 16,6 mmol). Výtěžek 1,72 g (88 %).

LC-MS (m/z) 236 (M + 1)⁺, ^XH-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 8,10 (dd, 1H) , 8,05 (m, 1H) , 7,30 (d, 1H) , 2,92 (m, 2H) , 2,30 (m, 1H) , 2,15-1,85 (m,

3H) .

(iii) l-Hydroxy-7-nitrotetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(Z)

HATU (0,352 g, 0,93 mmol) a DIPEA (0,200 g, 1,55 mmol) se přidají k ledově studenému roztoku kyseliny l-hydroxy-7-nitrotetralin-l-ylkarboxylové (0,200 g, 0,84 mmol, z kroku (ii) výše) v DMF (5 ml). Po 15 minutách míchání při 0 °C se přidá roztok H-Aze-Pab(Z) x 2HC1 (0,408 • ·· • · • * 9 ·· ·· * ♦ « * · a

- 68 g, 0,93 mmol) a 2,4,6-trimethylpyridinu (0,409 g, 3,37 mmol) v 5 ml DMF o teplotě 0 °C a směs se při teplotě místnosti míchá přes noc. DMF se odpaří a surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:0,lM octan amonný, 40:60). Produkt se dále čistí z použití HPLC (CH₃CN:O,1M octan amonný, 46:54). Výtěžek 214 mg (44 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

LC-MS (m/z) 58 6 (M + 1)⁺, ^-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 8,1 (m, 2H) , 7,77 (d, 1H) , 7,71 (d, 1H), 7,40 (d, 2H), 7,32 (t, 2H), 7,27 (m, 2H),

7,18 (d, 1H), 4,88 (m, 1H), 4,54 (m, 0,5H, rotamer), 4,45 (dd, 0,5H, rotamer), 4,34 (m, 1H) , 3,94 (m, 0,5H, rotamer), 3,82 (m, 0,5H, rotamer), 3,17 (m, 1H), 2,90 (t,

1H) , 2,73 (m, 1H), 2, 45-2,20 (m, 2H), 2, 05-1, 85 (m, 5H) .

(iv) l-Hydroxy-7-aminotetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví podle postupu popsaného v příkladu 1 (iv) uvedeném výše z l-hydroxy-7-nitrotetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,064 g,

0,11 mmol, z kroku (iii) výše), HOAc (6,3 μΐ, 0,11 mmol), a Pd/C (32 mg). Tuhý surový produkt se rozpustí ve vodě a vodný roztok se lyofilizuje, aby se získalo 40 mg (76 %) .

LC-MS (m/z) 422 (M + 1)⁺, ^•H-NMR (400 MHz, D₂O) : delta 7,75 (m, 2H) , 7,53 (dd, 2H) , 7,07 (d, 1H) , 6,82 (široký t, 1H) , 6,67 (široký, 1H) , 4,93 (m, 1H), 4,6-4,4 (m, 2H), 4,29 (m, 0,5H, rotamer), 4,18 (m, 1H) , 3, 7 (m, 1H), 2,8-2,5 (3H) .

¹³C-NMR (100 MHz, CDC1₃) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 178,4, 178,1, 173,9, 173,8, 167,5.

- 69 Příklad 8

1-Hydroxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Methylester kyseliny 1-hydroxytetralin-l-ylkarboxylové

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připraví podle postupu, který popsal Bigge a kol. (J. Med. Chem., 36, 1977 (1993)) z tetralonu (2,0 g, 13,7 mmol), Me₃SiCN (1,49 g, 15 mmol) a Znl₃ (8 mg, kat.). Výtěžek 2,5 g (88 (ii) Kyselina 1-hydroxytetralin-l-ylkarboxylová

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připraví podle postupu popsaného v příkladu 1 (ii) uvedném výše z methylesteru kyseliny 1-hydroxytetralin-l-ylkarboxylové (2,5 g, 12,1 mmol, z kroku (i) výše) a LiOH.H₂O (1,02 g,

24,2 mmol) . Výtěžek 400 mg (17 %) .

dí-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 7,18 (m, 4H) , 2,92 (t, 0,5H, rotamer), 2,78 (m, 2H), 2,61 (t, 0,5H, rotamer), 2,22 (m,

1H) , 2,1-1,8 (m, 4H) .

(iii) 1-Hydroxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připaví podle postupu popsaného v příkladu 5 (iii) uvedeném výše z kyseliny 1-hydroxytetralin-l-ylkarboxylové (0,284 g, 1,50 mmol, z kroku (ii) výše), TBTU (0,531 g, 1,65 mmol), H-AzePab(Z) x 2HC1 (0, 660 g, 1,50 mmol) a DIPEA (0, 602 g, 3,1 mmol). Surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:O,1M octan amonný, 40:60). Výtěžek 70 mg (8,6 %) .

»··φ

- 70 LC-MS (m/z) 542 (Μ + 1)⁺, ^-NMR (400 MHz, D₂0) : (komplexní kvůli diastereomerům/rotamerům) delta 8,15 (t, 0,5H, rotamer), 7,97 (t,

0,5H, rotamer), 7,81 (dd, 2H), 7,43 (dd, 2H), 7,30 (m, 5H),

7,19 (m, 2H), 7,12 (m, 2H), 4,88 (m, 1H), 4,47 (m, 2H),

3,79 (m, 0,5H, rotamer), 2,89 (m, 2H) , 2,66 (m, 1H), 2,50 (m, 0,5H, rotamer), 2,35 (m, 1H), 2,19 (m, 0,5H, rotamer), 1, 95 (m, 5H) , ¹³C-NMR (100 MHz, CDC1₃) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku, komplexní v důsledku diastereomerů/rotamerů) delta 177,7, 177,4, 171,1, 170,5, 170,3, 167,7, 164,4.

(iv) 1-Hydroxytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví podle postupu popsaného v příkladu 1 (iv) uvedeném výše z 1-hydroxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(Z) (70 mg, 0,13 mmol, z kroku (iii) výše), AcOH (5 mg, 0,13 mmol) a Pd/C (5%, 35 mg) v EtOH (5 ml) . Výtěžek 61 mg (100 %) .

LC-MS (m/z) 407 (M + 1)⁺,

Hí-NMR (400 MHz, CD₃OD) delta 7,74 (dd, 2H) , 7,55 (dd, 2H) , 7,29 (d, 1H), 7,15 m, 3H) , 4,59 (m, 1H) , 4,46 (m, 1H) , 4,25 (m, 1H) , 4,08 (m, 1H) , 3,69 (m, 1H) , 2,80 (m, 2H) , 2,46 (m, 1H), 2,3-2,15 (m, 2H) , ¹³C-NMR (100 MHz, CD₃OD) (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 180,1, 178,0, 177,8, 173,2, 168,2.

Příklad 9

7-Methoxytetralin-I-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc *«

- 71 *··· • ·· ·· • · 9 • 9 9

9 9 • · · *· 1 (i) Methylester kyseliny 7-methoxy-3,4-dihydronaftalen-1-ylkarboxylové

Roztok methylesteru kyseliny l-hydroxy-7-methoxytetralin-l-ylkarboxylové (0,5 g, 2,1 mmol, viz příklad 1 (i) výše) v toluenu (5 ml) se přidá k roztoku p-TsOH (0,6 g, 3,2 mmol) v toluenu (10 ml), který je při zpětném toku, a výsledná směs se 45 minut udržuje při zpětném toku. Po ochlazení se reakční směs naředí etherem, promyje vodou a vodným roztokem NaHCO₃, vysuší Na₂SO₄ a odpaří. Výtěžek 392 mg (85 %) .

^-NMR (500 MHz, CDC1₃) : delta 7,46 (d, 1H) , 7,19 (t, 1H) , 7,06 (d, 1H) , 6,75 (dd, 1H) , 3,84 (s, 3H) , 3,83 (s, 3H) ,

2, 69 (t, 2H), 2,38 (m, 2H) .

(ii) Kyselina 7-methoxy-3,4-dihydronaftalen-l-ylkarboxylová

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připraví podle postupu popsaného v příkladu 1 (ii) uvedeném výše z methylesteru kyseliny 7-methoxy-3,4-dihydronaftalen-1-ylkarboxylové (0,39 g, 1,79 mmol, z kroku (i) výše) a LiOH.H₂O (0,15 g, 3,57 mmol). Výtěžek 148 mg (40 %) .

LC-MS (m/z) 203 (M + 1)⁺, ^-NMR (500 MHz, CDC1₃) : delta 7,56 (d, 1H) , 7,44 (t, 1H) , 7,09 (d, 1H), 6,77 (dd, 1H), 3,82 (s, 3H), 2,72 (t, 2H),

2, 44 (m, 2H) .

(iii) 7-Methoxy-3,4-dihydronaftalen-l-yl-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připraví • 9 ···

- 72 ·· 99 ···« podle postupu popsaného v příklad 3(i) uvedeném výše z kyseliny 7-methoxy-3,4-dihydronaftalen-l-ylkarboxylové (0,145 g, 0,71 mmol, z kroku (ii) výše), H-Aze-Pab(Z) x 2HC1 (0,343 g, 0,78 mmol), TBTU (0,251 g, 0,78 mmol) a DIPEA (0,364 g, 2,84 mmol). Surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:0,lM octan amonný, 54:46). Výsledný roztok se odpaří a vodná vrstva se 3-krát extrahuje EtOAc. Spojená organická vrstva se vysuší (Na₂SO₄) a odpaří, výtěžek je 121 mg (31 %).

LC-MS (m/z) 553 (M + 1)⁺, ¹H-NMR (500 MHz, CDC1₃) : delta 8,25 (t, 1H) , 7,82 (d, 2H) ,

7,43	(d, 2H),	7,37-7,27	(m,	5H) ,	7, 06	(d,	ΙΗ) ,	6, 81	(d,
1H) ,	6,72 (dd,	1H) , 6,35	(t,	1H),	, 5,20	(s,	> 2H),	, 5,03	(dd,
1H) ,	4,52 (m,	2H) , 3,93	(m,	2H) ,	2, 71	(t,	2H) ,	2, 35

(m, 2H) .

(iv) 7-Methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví podle postupu popsaného v příkladu 1 (iv) uvedeném výše z 7-methoxy-3,4-dihydronaftalen-l-yl-C(O)-AzePab(Z) (88 mg,

0,16 mmol), AcOH (9 mg, 0,16 mmol) a Pd/C (10%, 44 mg). Výtěžek 56 mg (73 %), směs diastereomerů 60:40.

LC-MS (m/z) 421 (M + 1)⁺,

Ή-	-NMR (5	00 MH,	z, D2O	): delta	7	,78	(t,	1H),	7, 65	(d, 1H),
7,	55	(dd,	1H) ,	7,49	(d, 1H)	, 7	,42	(d,	2H) ,	7,36	(d, 2H),
7,	16	(m,	1H) ,	7, 05	(d, 1H),	6,	84	(dd,	1H) ,	6, 73	(dd, 1H),
6,	06	(d,	1H) ,	5,18	(dd, 1H)	, 4	,96	(m,	1H) ,	4,12	(m, 2H),
3,	92	(m,	2H) ,	3, 82	(d, 1H),	3,	62	(m,	3H) , 2	, 7 (m	, 6H), 2,4
(m	-/	2H) ,	2,05	(m, 2:	H), 1,9	(m,	1H	), 1	,2 (m,	2H) ,	1,5 (m,

1H) , ·♦ ., • ♦ Φ 1 • · I ♦ φ

- 73 • ••· φ« φφφφ φ φ • φφφ • φ φ · ·· Φφφ ¹³C-NMR (100 MHz, D₂O) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 182,3, 179,3, 179,1, 178,8, 173,7, 173,4, 173,0, 166,3.

Příklad 10 (R) - a (S)-7-Methoxy-l-methyltetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab (i) Methylester kyseliny 7-methoxytetralin-l-ylkarboxylové

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připaví podle postupu popsaného v příkladu 1 (iv) uvedeném výše z methylesteru kyseliny 7-methoxy-3,4-dihydronaftalen-1-ylkarboxylové (3,3 g, 15 mmol, viz příklad 9 (i) výše) a Pd/C (10%, 0,5 g). Výsledná směs se zflitruje skrz Hyflo a odpaří. Surový produkt se vyčistí za použití bleskové chromatografie (Si-gel, heptane:EtOAc, 4:1). Výtěžek 2,4 g (72 %) .

^-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 7,04 (d, 1H) , 6,77 (dd, 1H) , 6,72 (d, 1H) , 3,82 (t, 1H) , 3,78 (s, 3H) , 3,73 (s, 3H) ,

2,75 (m, 3H) , 2,14 (m, 1H) , 1,99 (m, 2H) , 1,77 (m, 1H) .

(ii) Methylester kyseliny 7-methoxy-l-methyltetralin-1-ylkarboxylové

Methylester kyseliny 7-methoxytetralin-1-ylkarboxylové (0,4 g, 1,8 mmol, z kroku (i) výše) a Mel (0,13 ml, 2,0 mmol) se přidají k suspenzi NaH (55% v oleji, 87 mg, 2,0 mmol) v DMF (5 ml) a směs se přes noc míchá při teplotě místnosti. Výsledná směs se vlije do vody a vodná směs se 3-krát extrahuje směsí EtOAc:toluen. Spojená organická vrstva se promyje vodou, vysuší (Na₂SO₄) a odpaří. Bleskovou chromatografií (Si-gel, heptan:EtOAc, 4:1) se získá 0,18 g (42 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

- 74 ^XH-NMR (500 MHz, CDC1₃) : delta 7,04 (d, 1H) , 6,76 (m, 2H),

3,79 (s, 3H),3,69 (s, 3H) , 2,76 (m, 2H) , 2,32 (m, 1H) , 1,91 (m, 1H), 1,83 (m, 2H), l,75(m, 1H), 1,58 (s, 3H) .

(iii) Kyselina 7-methoxy-l-methyltetralin-l-ylkarboxylová

Směs methylesteru kyseliny 7-methoxy-l-methyltetralin-l-ylkarboxylové (0,67 g, 2,9 mmol, z kroku (ii) výše) a KOH (4 g) ve směsi EtOH:H,O, 1:1, 50 ml, se míchá přes noc. Výsledná směs se naředí vodou a extrahuje etherem. Vodná vrstva se okyselí (HC1) a 3-krát extrahuje etherem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, vysuší (Na₂SO₄) a odpaří. Výtěžek 0,58 g (81 %) .

Hl-NMR (300 MHz, CDC1₃) : delta 7,02 (d, 1H) , 6,85 (d, 1H) , 6,75 (dd, 1H), 3,77 (s, 3 Η), 2,75 (m, 2H), 2,32 (m, 1H), 1,91 (m, 1H), 1,82 (m, 1H) , 1,75 (m, 2H) , 1,55 (s, 3H) .

(iv) 7-Methoxy-l-methyltetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připaví podle postupu popsaného v příkladu 3 (i) uvedeném výše z kyseliny 7-methoxy-l-methyltetralin-l-ylkarboxylové (0,14 g, 0,64 mmol, z kroku (iii) výše), TBTU (0,31 g, 0,97 mmol), HAze-Pab(Z) (0,42 g, 0,97 mmol) a DIPEA (0,50 g,

0, 67 mmol) . Surový produkt se vyčistí za použití bleskové chromatografie (Si-gel, EtOAc). Výtěžek 0,26 mg (72 %) .

Hí-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 8,40 (široký, 0,5H, rotamer), 8,27 (široký, 0,5H, rotamer), 7, 90 (d, 2H) , 4,84 (d, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,4-7,25 (m, 5H) , 7,00 (t, 1H), 6,75 (dd, 0,5H, rotamer), 6,71 (dd, 0,5H, rotamer), 6,62 (d, 0,5H, rotamer), 6,50 (d, 0,5H, rotamer), 5,22(s, 2H), 4,87 *· ···· ► · · •9 99

99

- 75 ·· ·· • ♦ · « • ♦ · « • · · « * · · · ·· 99

(dd,	1H)	, 4,	65-4,40 (m, 2H)	, 3,78	(s,	3H)	, 3,69	(s,	3H) ,
3, 60	(m,	1H)	, 2,78 (m, 2H) ,	2, 65	(m,	1H) ,	2, 45	(m,	1H) ,
2,20	(m,	1H)	, 1,90 (m, 3H),	1,75	(m,	3H) ,	1, 50	(s,	3H) .

(v) (R)- a (S)-7-Methoxy-l-methyltetralin-l-yl-C(O) -Aze-Pab

Sloučeniny pojmenované v záhlaví se připraví podle postupu popsaného v příkladu 1 (iv) uvedeném výše z 7-methoxy-l-methyltetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Z) (0,10 g,

0,18 mmol, z kroku (iv) výše) a Pd/C (10 %) v EtOH (10 ml). Surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:0,lM octan amonný, 30:70 až 32,5:67,5), čímž se získají dva diastereomery. Jednotlivé roztoky obsahující diastereomery se odpaří. Lyofilizací roztoků se obdrží sloučenina obsažená v nejrychlejší frakci (sloučenina 10 A, 30 mg, 69 %) a nejpomalejší frakci (sloučenina 10 B, 28 mg, 64 %) .

Sloučenina 10 A (dále označovaná jako (R) nebo (S)):

LC-MS (m/z) 435 (M + 1)⁺, ^-NMR (400 MHz, D₂O) : delta 7,74 (d, 2H) , 7,49 (d, 2H) ,

7,10

(d,

1H) ,

6,

85

(dd,

1H)

, 6, 66

(d,

1H)

, 4,.53

(q<

1H) ,

3, 85

(m,

1H) ,

3,

77

(s,

3H) ,

2, 98

(m,

1H) ,

2, 70

(m,

2H) ,

2,28

(m,

1H) ,

2,

03

(m,

2H) ,

1,95

(s,

3H) ,

1, 88

(m,

1H) ,

1,72

(m,

1H) ,

1,

44

(s,

3H) ,

¹³C-NMR (100 MHz, CDC1₃) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 180,8, 174,1, 167,6, 158,5.

Sloučenina 10 B (dále označovaná jako (S) nebo (R)):

LC-MS (m/z) 435 (M + 1)⁺,

Hí-NMR (400 MHz, D₂0) : delta 7,75 (d, 2H) , 7,50 (d, 2H) ,

- 76 7,06 (d, 1H) , 6,80 (široký d, 1H) , 6,68 (široký, 1H) , 4,52 (q, 2H), 3,75 (m, 4H), 2,88 (m, 1H), 2,68 (m, 2H) , 2,37 (m, 1H) , 1,90 (s, 3H) , 2,0-1,6 (m, 4H) , 1,41 (s, 3H) , ¹³C-NMR (100 MHz, CDC1,) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 180,9, 174,0, 167,5, 158,4.

Příklad 11

4-Hydroxy-6-methoxychroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab x OAc (i) Methylester kyseliny 4-hydroxy-6-methoxychroman-4-ylkarboxylové

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připraví podle postupu, který popsal Bigge a kol. (J. Med. Chem., 36, 1977 (1993)) z 6-methoxychroman-4-onu (1,29 g, 7,23 mmol), Me₃SiCN (0,79 g, 8,0 mmol) a Zni, (20 mg, kat.). Výtěžek 1,11 g (64 %) .

¹H-NMR (500 MHz, CD₃OD) delta 6,80 (dd, 1H) , 6,73 (d, 1H) , 6,72 (s, 1H), 4,28 (m, 1H), 4,14 (dt, 2H), 3,74 (s,3H), 3,70 (s, 3H), 2,47 (m, 1H), 2,02 (m, 1H).

(ii) Kyselina 4-hydroxy-6-methoxychroman-4-ylkarboxylová

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připraví podle postupu popsaného v příkladu 1 (ii) uvedeném výše z methylesteru kyseliny 4-hydroxy-6-methoxychroman-4-ylkarboxylové (1,09 g, 4,58 mmol, z kroku (i) výše) a LiOH.H₂O (0,39 g, 9,2 mmol). Výtěžek 0,71 g (69 %) .

LC-MS (m/z) 223 (M + 1)⁺, ^H-NMR (300 MHz, CD₃OD) delta 6,81 (m, 1H) , 6,77 (m, 1H) , ·· «· • · · • · · •» · • · « ··

•.

• .·· *

• ·

- 77 ·· • · ·» «

·»·»

6, 74 2,50 (ία, 1Η) , 4,31 (m, 1Η) , 4,14 (m, 1H) , 2,03 (ία, 1H) .

(m, 1H),

3,71 (s, 3H), (iii) 4-Hydroxy-6-methoxychroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připraví podle postupu popsaného v příkladu 3(i) uvedeném výše z kyseliny 4-hydroxy-6-methoxychroman-4-ylkarboxylové (0,104 g, 0,464 mmol, z kroku (ii) výše), TBTU (0,29 g, 0,90 mmol), DMF (8 ml), DIPEA (80 μΐ + 320 μΐ, 0,46 mmol + 1,84 mmol) a H-Aze-Pab(Z) (0,4 g, 0,91 mmol). Surový produkt, 0,27 g žlutého viskózního oleje, se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:O,1M octan amonný, 40:60), dotčené frakce se odpaří a extrahují EtOAc. Výtěžek 0,089 g (33 %).

LC-MS (m/z) 573 (M + 1)⁺, (iv) 4-Hydroxy-6-methoxychroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví podle postupu popsaného v příkladu 1 (iv) uvedeném výše z 4-hydroxy-6-methoxychroman-4-yl-C(O)-AzePab(Z) (0,089 g,

0,155 mmol, z kroku (iii) výše), AcOH (0,25 μΐ , 0,44 mmol) a Pd/C (5%, 0, 089 g) . Výtěžek 55,5 mg (72 %) .

LC-MS (m/z) 439 (M + 1)⁺, ^-NMR (300 MHz, (CD₃OD) : (komplexní kvůli diastereomerii/rotamerii) delta 7,7-7,5 (m, 2H) , 7,5-7,3 (m, 2H), 6,75-6,55 (m, 3H), 4,8 (m, 1H, částečně zakryt HDO),

4,5-3,5 (m, 9H, jeho 3,74(s) a 3,69 (s), 2,7-1,7 (m, 7H, jeho 1,95, s, 3H), ¹³C-NMR (75 MHz, CDC1₃) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 176,4, 173,1, 168,1.

• » · « · ···» • ·

- 78 ··· ** · ***, } · *·· · · • * · ·· ·*♦ ·· #· • ί) 9 * · » * · ··

Příklad 12 (S)- a (R)-l-Hydroxy-4-methoxyindan-l-yl-C(O)-Aze-Pab (i) 4-Methoxy-l-indanon

Cs₂CO₃ (7 g, 21,5 mmol) následovaný CH₃I (10 g, mmol) se přidají k roztoku 4-hydroxy-l-indanonu (5,0 g, 34 mmol) v THF (30 ml) a směs se 60 hodin míchá při teplotě místnosti. Reakční směs se zfiltruje a odpaří a surový produkt se vyčistí za použití bleskové chromatografie (Si0₂, methylenchlorid), aby se získalo 3,1 g (56 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

(ii) Ethylester kyseliny l-hydroxy-4-methoxyindan-1-ylkarboxylové

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připraví podle postupu, který popsal Bigge a kol. (J. Med. Chem.,

36, 1977 (1993)) z 4-methoxy-l-indanonu (2,2 g, 13,5 mmol, z kroku (i) výše), Me₃SiCN (2,0 g, 20 mmol), a Znl₂ (200 mg, 0,62 mmol, kat.). Výtěžek 0,9 g (28 %) .

^-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 7,21 (t, 1H), 6,85 (d, 1H) , 6,79 (d, 1H) , 4,20 (m, 2H) , 3,85 (s, 3H) , 3,07 (m, 3H) ,

2,97 (m, 1H) , 2,67 (m, 1H) , 2,27 (m, 1H) , 1,20 (t, 3H) .

(iii) Kyselina l-hydroxy-4-methoxyindan-l-ylkarboxylová

NaOH (19 M, 1,0 ml) se přidá k roztoku ethylesteru kyseliny l-hydroxy-4methoxyindan-l-ylkarboxylové (0,90 g, 3,8 mmol, z kroku (ii) výše) v EtOH (20 ml) a roztok se 30 minut míchá. Přidá se roztok chloridu

- 79 sodného (40 ml) a směs se promyje EtOAc, opatrně se okyselí na pH 2 (HC1, 2M) a vodný roztok se extrahuje EtOAc.

Organická vrstva se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší (Na₂SO₄) a odpaří, čímž se získá 0,70 g (88 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

^-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 7,23 (t, IH) , 6,89 (d, IH) , 6,81 (d, IH), 3,85 (s, 3H), 3,0 (m, 2H) , 2,77 (m, IH), 2,3 (m, IH) .

(iv) l-Hvdroxy-4-methoxyindan-l-yl-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připaví podle postupu popsaného v příkladu 4(iv) uvedeném výše z kyseliny l-hydroxy-4-methoxyindan-l-ylkarboxylové (350 mg, 1,68 mmol, z kroku (iii) výše), methylenchloridu (25 ml), Η-Aze-Pab(Z) (750 mg, 1,7 mmol), TBTU (600 mg, 1,8 mmol) a

DIPEA (770 mg, 1,8 mmol). Směs se odpaří a odparek se vyčistí za použití bleskové chromatografie (Si-gel, aceton:EtOAc), čímž se získá 350 mg (37,5 %).

Ή-ΝΜΗ (400 MHz, CDC1₃) : (komplexní kvůli diastereomerům/rotamerům) delta 8,05 (t, 0,5H, rotamer), 7,95 (t,

0, 5H,	rotamer), 7,82 (dd,	2H), 7,45	(d, 2H), 7,35 (m, 5
7,20	(m,	IH) ,	6, 82	(m,	2H)	, 4,92	(m,	IH), 4,48 (m, 2H) ,
3,84	(s,	3H) ,	3, 66	(m,	2H)	, 3,30	(m,	IH), 2,95 (m, IH),
2,55	(m,	IH) ,	2,46	(m,	IH)	, 2,30	(m	, IH) .

(v) (S)— a (R)-l-Hydroxy-4-methoxyindan-l-yl-C(O)-Aze-Pab

Mravenčan amonný (1,0 g, 16 mmol) a Pd/C (5%, 200 mg) se přidají k roztoku l-hydroxy-4-methoxyindan-l-yl-C(O)-Aze-Pab(Z) (340 mg, 0,61 mmol, z kroku (iv) výše) v MeOH (30 ml). Přidá se kyselina mravenčí (200

- 80 mg, 4,4 mmol) a směs se 30 minut míchá. Reakční směs se zfiltruje skrz Hyflo a roztok se odpaří. Surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:0,lM octan amonný, 15:85). Dotčené frakce se shromáždí a odpaří a vodný roztok se lyofilizuje, přičemž se získá rychleji se pohybující frakce (sloučenina 12A, 50 mg, 34 %) a pomaleji se pohybující frakce (sloučenina 12B, 5 mg, 3,4 %) .

Sloučenina

12A (dále označovaná jako (R) nebo (S)):

LC-MS (m/z) 423 (M + 1)⁺, jfí-NMR (400 MHz, CD₃OD) : (komplexní v důsledku rotamerie) delta 7, rotamer) rotamer) (d, 1H, (d, 1H, (m, 2H), rotamer) 1H) , 2,5 (d, 2H, menší rotamer), 7,70 (d, 2H, větší , 7,60 (d, 2H, menší rotamer), 7,48 (d, 1H, větší

, 7,20	(t, 1H)	, 6,95	(d, 1H,	větší	rotamer), 6,87
menší	rotamer)	, 6,84	(d, 1H,	větší	rotamer), 6,83
menší	rotamer)	, 4,82	(m, 1H)	, 4,5	(m, 1H), 4,6-4,4
4,11	(m, 1H,	větší	rotamer)	, 4,00	(m, 1H, menší
, 3, 82	(s, 3H)	, 3,0	(m, 1H),	2,9 (m, 1H) , 2,65 (m,

(m, 1H) , 2,3-2,0 (m, 2H) , ¹³C-NMR (100 MHz, CD₃OD) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 180,3, 176,4, 173,0, 167,9.

Sloučenina 12B (dále označována jako (S) nebo (R)):

LC-MS (m/z) 423 (M + 1)⁺ ^-NMR (400 MHz, CD₃0D) : (komplexní v důsledku rotamerie) delta 7,8-7,7 (m, 2H) , 7,54 (d, 2H) , 7,23 (m, 1H) , 6,97 (m, 1H) , 6,9-6,8 (m, 1H) , 4,80 (m, 1H) , 4,6-4,4 (m, 2H) , 4,25 (m, 1H) , 4,1-3,9 (m, 1H) , 3,82 (s, 3H) , 3,0-2,85 (m, 2H) , 2,8-2,5 (m, 2H) , 2,3-2,1 (m, 2H) , 1,90 (s, 3H) ..

Příklad 13 * · · · φ

4 • 4 · · • 4 ·

· ·

• 444 • ·

- 81 ··· ·· l-Hydroxy-5-methoxytetralin-l-yl-C (O) -Aze-Pab (OH)

Roztok hydroxylaminu x HCl (39 mg, 0,56 mmol) a TEA (0,26 ml, 1,86 mmol) v THF (10 ml) se při 40 °C na 1 hodinu vystaví působení ultrazvuku, počemž se přidá l-hydroxy-5-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(Z) (53 mg,

0,093 mmol, viz příklad 5 (iii) výše) rozpuštěný v malém množství THF a směs se 3 dny míchá při 40 °C. Směs se odpaří a produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:O,1M octan amonný, 30:70). Dotčené frakce se odpaří a odparek se lyofilizuje. Výtěžek 29 mg (70 %) .

LC-MS (m/z) 453 (M + 1)⁺, ¹H-NMR (400 MHz, (CD₃OD) : (komplexní kvůli diastereomerům/rotamerům) delta 7,58 (m, 2H), 7,33 (dd, 2H), 7,16 (m, 1H), 7,85 (m, 2H), 4,78 (dd, 2H), 4,44 (m, 2H), 4,2-4,0 (m, 2H) , 3,80 (s, 3H), 3,58 (m, 0,5H, rotamer), 3,47(m,

0,5H, rotamer), 2,91 (široký d, 1H), 2,44 (m, 2H), 2,34 (m, 1H) , 2,19 (m, 1H), 2,08 (m, 2H), 1,98 (široký, 2H), 1,89 (široký, 2H), ¹³C-NMR (100 MHz, (CDC1₃) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 178,0, 177,8, 172,9, 158,4, 158,2, 155,3.

Příklad 14 (S)- nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-(0)-Aze-Pab(OH)

Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví podle postupu popsaného v příkladu 13 uvedeném výše z

- 82 hydroxylaminu x HC1 (48 mg, 0,69 mmol), TEA (0,32 ml, 2,31 mmol) a (S)- nebo (R)-l-hydroxy-7-methoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Z) (66 mg, 0,12 mmol, sloučenina 3A z příkladu 3 (i) výše). Směs se odpaří a surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:O,1M octan amonný, 28:72), čímž se získá 17 mg (31 %). Čistota 94,5%, poměr diastereomerů 87:13.

LC	-MS	(m/z)	453 (M	+ i:	p,
XH-	-NMR (·	400 MHz, CD	3OD)	delta	5,	75 (d, 2H)	, 7,	37 (m, 3H) ,
7,	04	(d,	1H)	, 6,81	(m,	1H) ,	4, 82	(m, 1H),	4, 44	(m, 2H) ,
4,	28	(m,	1H)	, 4,08	(m,	1H) ,	3, 72	(s, 3H),	3, 64	(m, 1H) ,
2,	72	(m,	3H)	, 2,40	(m,	1H) ,	2,22	(m, 1H),	2, 12	(m,s 2H),
1,	95	(m,	2H)	, 1,88	(m,	3H),

¹³C-NMR (100 MHz, CDC1₃) : atomy uhlíku): delta 177 (karbonylové a/nebo amidinové 6, 172, 6, 159,4.

Příklad 15

4-Hydroxy-6-methoxychroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab(OH)

Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví podle postupu popsaného v příkladu 13 uvedeném z hydroxylaminu x HC1 (74 mg, 1,06 mmol), TEA (0,50 ml, 3,6 mmol) a 4-hydroxy-6-methoxychroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab(Z) (92 mg, 0,16 mmol, viz příklad 11 (iii) výše). Surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:0,lM octan amonný, 28:72), přičemž se získá 55 mg (75 %) . Poměr diastereomerů 53:47.

Ή-ΝΜΡ (400 MHz, CDC1₃) : (komplexní v důsledku diastereomerie/rotamerie) delta 7,65-7,5 (m, 2H), 7,4-7,3 (m, 2H),

- 83 6.85- 6,65 (m, 3H), 4,81 (m, 1H, částečně zakryt HDO), 4,5-3,9 (m, 5H) , 3,9-3,6 (m, 4H) , 2,8-1,9 (m, 4H) , ¹³C-NMR (100 MHz, CDC1₃) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 176,5, 176,2, 172,8, 155,2.

Příklad 16

4-Hydroxy-6-methoxychroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab(OMe)

Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví podle postupu popsaného v příkladu 3(i) uvedeném výše z kyseliny 4-hydroxy-6-methoxychroman-4-ylkarboxylové (95 mg, 0,42 mmol, viz příklad 11 (ii) výše), TBTU (0,26 g, 0,81 mmol), DMF (5 ml), Η-Aze-Pab(OMe) x HCI (0,256 g, 0,81 mmol, viz příklad 4 (iii) výše) a DIPEA (75 + 300 μΐ, 0,42 + 1,68 mmol). Surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:O,1M octan amonný, 30:70), přičemž se získá 67 mg (37 %).

¹H-NMR (400 MHz, CDC1₃) : (komplexní v důsledku diastereomerie/rotamerie) delta 7,65-7,5 (m, 2H), 7,4-7,3 (m, 2H),

6.85- 6,7 (m, 3H) , 4,80 (m, 1H, zakryt HDO), 4,5-4,0 (m,

5H) , 3,81 (s, 3H) , 3,75-3, 65 (m, 4H) , 2,8-1,9 (m, 4H) , ¹³C-NMR (100 MHz, CDC1₃) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku, komplexní v důsledku diastereomerie/rotamerie) delta 177,8, 176, 5, 176, 1, 172,8, 172, 6, 155,2, 155,0

Příklad 17 (S)- nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)Aze-Pab (C (O) OCH₂CC1₃) * ·*’.:··· .·· .. .· ··; . : : ···. . _: : : :

...... : :: :

·· ·<

Vodný roztok NaOH (2M, 0,78 ml) a potom 2,2,2-trichlorethylchlorformat (21 μΐ, 0,155 mmol) se přidají k ledově studenému roztoku (S)- nebo (R)-1-hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc (70 mg, 0,14 mmol, viz příklad 3 výše) v THF (3 ml) a směs se 3 hodiny míchá. Reakční směs se naředí vodou a výsledná směs se 4-krát extrahuje methylenchloridem. Spojená organická fáze se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší (Na₂SO₄) a odpaří. Výtěžek 79,8 mg (92,5 %).

LC-MS (m/z) 613 (M + 1)⁺,

H-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 9,42 (široký, 1H) , 7,98 (t,

7,	83	(d,	2H), 7,30	(široký, 1H), 7,29	(d, 2H), 7,06
1H)	Z	6, 84	(dd, 1H),	6,67 (d, 1H), 4,92	(dd, 1H) , 4,86
2H)	z	4,48	(m, 2H), 4	,12 (s, 1H), 3,86	(m, 1H), 3,75 (s,
3,	08	(m,	1H), 2,81	(d široký, 1H), 2,	58 (m, 2H) , 2,27
1H)	Z	1,95	(m, 3H),

¹³C-NMR (100 MHz, CDC1₃) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 178,7, 171,5, 170,1, 164,0.

Příklad 18 (S)- nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab (C (0) 0CH₂CH₃)

Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví podle postupu popsaného v příkladu 17 výše z (S)- nebo (R)-l-hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc (52 mg, 0,10 mmol, viz příklad 3 výše), NaOH (vodný roztok, 2M, 0,58 ml) a ethylchlorformat (9,4 μΐ, 0,089 mmol). Surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:0,lM octan amonný, 30:70). Výtěžek 29 mg (69 %) .

• .···.;··· ···· ·· · · · ϊ ·· ·

..... ..·· ·

- 85 - . ·*

LC-MS (m/z) 509 (Μ + 1)⁺,

1H-NM	[R (400 MH	iz, l	CDC13) :	delt	;a 9,55 (širok	Ύζ 1H),	7,	96 (t,
1H) ,	7,85	(d,	2H)	,	(d,	2H), 7,06 (d,	1H), 6,	83	( dd,
1H) ,	6, 68	(d,	1H)	, 4,94	(dd,	1H), 4,52 (m,	3H), 4	z 24	(q<
2H) ,	3, 84	(m,	1H)	Z 3,77	(s,	3H), 3,04 (m,	1H), 2,	82	(m,
1H) ,	2, 62	(m,	2H)	, 2,27	(m,	1H), 2,0-1,85	(m, 5H)	, i	,37 (t,

3H) , ¹³C-NMR (100 MHz, CDC1₃) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 178,9, 171,4, 159,6.

Příklad 19

7-Methoxy-l-allyltetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Kyselina 7-methoxy-l-allyltetralin-l-ylkarboxylová

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připaví podle postupu popsaného v příkladu 10 (ii) uvedeného výše z methylesteru kyseliny 7-methoxytetralin-l-ylkarboxylové (0,80 g, 3,6 mmol, viz příklad 10 (i) výše), NaH (55% v oleji, 0,23 mg, 5,4 mmol) a allylbromidu (0,65 g, 5,4 mmol), počemž se surový produkt hydrolyzuje přímo podle postupu popsaného v příkladu 10 (iii) uvedeného výše pomocí KOH (3 g) ve směsi EtOH:H₂O (40 ml, 1:1). Výtěžek 0,39 g (44 %) .

Hí-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 7,00 (d, 1H) , 6,93 (d, 1H) , 6,72 (dd, 1H) , 5,64 (m, 1H) , 5,05 (m, 2H) , 3,75 (s, 3H) ,

2, 85-2, 60 (m, 4H) , 2,20 (m, 2H) , 1, 95-1, 70 (m, 3H) .

(ii) Boc-Aze-Pab x HCOOH

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připraví • ··»· • · • · ··

Ϊ · · 4 • · · · ; · · · • · · · ·♦ ·· .·· ·· • · · · • ··· · ···· ..·

- 86 podle postupu popsaného v příkladu 12 (v) uvedeném výše z mravenčanu amonného (3,0 g, 50 mmol), Pd/C (5%, 1,0 g) , Boc-Aze-Pab (Z) (4,7 g, 10 mmol, viz mezinárodní patentovou přihlášku WO 94/29336) a kyseliny mravenčí (1,0 g, 22 mmol) v 50 ml MeOH. Surový produkt se suspenduje v CH₂C1₂ (50 ml), zfiltruje a promyje dalším CH₂C1₂. Tuhý materiál se vysuší a použije v následujícím kroku bez dalšího čištění.

(iii) Boc-Aze-Pab (Teoc)

Teoc-p-nitrofenylkarbonat (3,5 g, 12,3 mmol) se přidá k roztoku Boc-Aze-Pab x HCOOH (3,7 g, 10 mmol, z kroku (ii) výše) v THF (100 ml), po čemž se během 2 minut přidá roztok K₂CO₃ (1,8 g, 13 mmol) ve vodě (20 ml) . Výsledný roztok se 3 dny míchá, odpaří a odparek se vyjme EtOAc (150 ml) a NaOH (vodný roztok, 0,5M, 50 ml).

Organická vrstva se promyje roztokem chloridu sodného (2 x 50 ml), vysuší (Na₂SO₄) a odpaří. Surový produkt se vyčistí za použití bleskové chromatografie (Si-gel, methylenchlorid:aceton, 4:1). Výtěžek 4,6 g (96 %) .

Hi-NMR (500 MHz, CDC1₃) : delta 7,86 (d, 2H) , 7,39 (d, 2H) , 4,72 (široký t, 1H) , 4,53 (široký, 2H) , 3,93 (q, 1H) , 3,81 (q, 1H) , 2,48 (široký, 2H) , 1,43 (s, 9H) .

(iv) Η-Aze-Pab(Teoc) x HC1

Roztok Boc-Aze-Pab(Teoc) (4,6 g, 9,6 mmol, z kroku (ii) výše) v methylenchloridu (150 ml) se nasytí suchým HC1. Roztok se udržuje při teplotě místnosti 10 minut v uzavřené lahvi, potom se odpaří. Výtěžek 4,2 g (97 ^-NMR (400 MHz, CD₃OD) : delta 7,80 (d, 2H) , 7,60 (d, 2H) , ···

- 87 ·· ···· • 4 • 444

5,10 (t,. 1H), 4,60 (s, 2H), 4,15 (q, 1H) , 3,97 (q, 1H) , 2,86 (m, 1H) , 2,57 (m, 1H) .

(v) 7-Methoxy-l-allyltetralin-l-yl-C (O) -Aze-Pab (Teoc)

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připaví podle postupu popsaného v příkladu 3 (i) uvedeného výše z kyseliny 7-methoxy-l-allyltetralin-l-ylkarboxylové (0,30 g, 1,2 mmol, z kroku (i) výše), TBTU (0,43 g, 1,3 mmol), Η-Aze-Pab(Teoc) (0,60 g, 1,3 mmol, z kroku (iv) výše) a DIPEA (0,69 g, 5,4 mmol). Surový produkt se vyčistí za použití bleskové chromatografie (Si-gel, EtOAc). Výtěžek 0,41 mg (56 %).

^-NMR (500 MHz, (CDC1₃) : (komplexní v důsledku diastereomerie/rotamerie) delta 8,35 (široký, 0,5H), 8,20 (široký t, 0,5H), 7,90 (d, 1H) , 7,85 (d, 1H) , 7,90 (d, 1H) , 7,35 (d, 1H) , 7,01 (t, 1H) , 6,75 (m, 1H) , 6,65 (d, 0,5H), 6,53 (d, 0,5H), 5, 80-5, 65 (m, 1H) , 5,02 (dd, 1H) , 4,96 (m, 1H) , 4,87 (dd, 1H) , 4,61 (m, 1H) , 4,43 (dt, 1H) , 4,25 (m, 2H) ,. 3,70 (m+s, 3H), 3,54 (m, 0,5H), 2,95-2,40 (m, 6H), 2,23 (m, 1H), 2,13 (m, 1H) , 1,98 (m, 2H) , 1,80 (m, 2H) , 1,13 (m, 2H) ,

0,13 (d, 9H) .

(vi) 7-Methoxy-l-allyltetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Roztok Bu₄NF (1M v THF, 0,66 ml) se přidá k roztoku 7-methoxy-l-allyltetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,36 g, 0,60 mmol, z kroku (v) výše) v THF (40 ml) a roztok se 24 hodin míchá při 60 °C. Surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:O,1M octan amonný, 50:50) a lyofilizuje. Výtěžek 0,22 g (71 %) .

^-NMR (500 MHz, CDC1₃) : delta 7,77 (dd, 2H) , 7,52 (t, 2H) , ·· ···· • · • ··· ··· · · • * ··

- 88 ·· ·«· : · · <

• · · <

·· ·.

7,13 (t, 5,02 (m, (m, 1H), (široký,

1H), 6,87 (dt, 1H), 6,77 (dd, 1H), 5,71 (m, 1H),

2H), 4,53 (široký, 1H), 3,85-3,65 (m, 4H), 3,02 2,70 (široký, 4H), 2,40-2,20 (m, 1H), 2,05-1,70 8H, jeho 1,92, s) ¹³C-NMR (100 MHz, D₂O) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 179,1, 173,7, 167,3, 158,5,

LC-MS (m/z) 459 (Μ - 1)’.

Příklad 20 (S)— nebo (R)-l-Hydroxy-7-chlortetralin-l-yl-C(0)-Pro-Pab (i) 7-Amino-l-tetralon

Mravenčan amonný (2 g) , Pd/C (5%, lg) a kyselina mravenčí (0,5 g, kat.) se v tomto pořadí přidají k roztoku 7-nitro-l-tetralonu (1,95 g, 10 mmol) v methanolu (50 ml), a směs se 30 minut míchá. Roztok se zfiltruje a filtrát se odpaří. Odparek se smočí methylenchloridem (50 + 25 ml), a směs se zfiltruje a odpaří. Výtěžek 1,4 g (88 %).

^XH-NMR (500 MHz, CDC1₃) : delta 7,32 (d, 1H) , 7,03 (d, 1H) , 6,83 (dd, 1H),3,7O (široký, 2H) , 2,85 (t, 2H) , 2,61 (t,

2H), 2,10 (m, 2H).

(ii) 7-Chlor-l-tetralon

NaNO₂ (0,7 g, 10 mmol) rozpuštěný ve vodě (10 ml) se za míchání během 5 minut přidá k ledově studenému roztoku 7-amino-l-tetralonu (1,4 g, 8,8 mmol, z kroku (i) výše) v koncentrované HC1 (vodný roztok). Výsledný studený roztok se potom pomalu přidá k ledově studenému roztoku v · ·« »···

- 89 • · · • · · • ··: ···« ,» • · • · * • · · ·· ·..

···

CuCl (1,5 g, 15 mmol) v koncentrované HC1 (vodný roztok), výsledný roztok se potom 2 hodiny míchá při teplotě místnosti a 30 minut při 60 °C. Suspenze se ochladí ledem a výsledná sraženina se odfiltruje za podtlaku, promyje vodou a vysuší na vzduchu. Výtěžek 1,50 g (94 %) .

Ή-NMR (500 MHz, CDC1₃) : delta 8,00 (d, 1H) , 7,41 (dd, 1H) , 7,20 (d, 1H),2,95 (t, 2H), 2,66 (m, 2H), 2,14 (m, 2H).

(iii) Ethylester kyseliny 7-chlor-l-hydroxytetralin-l-karboxylové

Připraví se podle postupu, který je popsán v C.F.Bigge a kol., v J. Med. Chem., 36, 1977 (1993) za použití 7-chlor-l-tetralonu (Γ, 5 g, 8,3 mmol, z kroku (ii) výše), Me₃Si-CN (1,0 g, 10 mmol) a Znl₂ (0,3 g) . Výtěžek 0,8 g (36 %) .

¹H-NMR (600 MHz, CDC1₃) : delta 7,72 (s, 1H) , 7,25 (d, 1H) , 7,17 (d, 1H), 7,09 (dd, 1H) , 4,35-4,20 (m, 2H) , 2,80 (m,

2H) , 2,35 (m, 1H), 2,12-1,92 (m, 3H), 1,25 (m, 3H) .

(iv) Kyselina 7-chlor-l-hydroxytetralin-l-karboxylová

NaOH (10M, 1 ml) se přidá k roztoku ethylesteru kyseliny 7-chlor-l-hydroxytetralin-l-karboxylové (0,8 g,

3,1 mmol, z kroku (iii) výše) v DMSO (20 ml) a směs se 3 hodiny zahřívá na 100 °C. Výsledná směs se naředí drceným ledem (40 g) a roztokem chloridu sodného (40 ml) a směs se extrahuje EtOAc. Vodná vrstva se okyselí na pH 2 pomocí 2M HC1 a extrahuje EtOAc (2 x 40 ml). Spojená organická vrstva se vysuší (Na₂SO₄) a odpaří. Výtěžek 0,22 mg (30 %) .

^H-NMR (500 MHz, CDC1₃) : delta 7,25 (d, 1H) , 7,20 (d, 1H) • · · · ··· * ·

- 90 7,09 (d, 1H),2,8O (m, 2H), 2,27 (m, 1H) , 2,17-2,00 (m, 2H) ,

1,98 (m, 1H).

(v) 7-Chlor-l-hydroxytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Z)

HATU (400 mg, 1,05 mmol) se přidá k roztoku kyseliny 7-chlor-l-hydroxytetralin-l-karboxylové (-220 mg, asi 1 mmol, z kroku (iv) výše) v DMF (50 ml) a po krátkém míchání se po kapkách přidá roztok H-Aze-Pab(Z) x 2HC1 (450 mg, 1,02 mmol) a 2,4,6-trimethylpyridinu (425 mg, 3,5 mmol) v DMF (10 ml). Po celonočním míchání se výsledná směs naředí vodným roztokem NaCl (15%, 100 ml) a extrahuje se EtOAc (2 x 50 ml). Organická vrstva se promyje roztokem chloridu sodného (20 ml), vysuší (Na₂SO₄) a odpaří. Odparek se vyčistí použitím bleskové chromatografie (Si-gel,

EtOAc). Výtěžek 300 mg (52 %).

dl-NMR (400 MHz, CDC1₃) : (komplexní kvůli diastereomerii a/nebo rotamerii) delta 7,89 (d, 1H), 7,82 (d, 1H), 7,42

(d, 2H),	7,40-7,30	(m,	6H) ,	7,18 (m, 1H), 7,06 (d, 1H),
5,20 (s,	2H) , 4,93	(m,	1H) ,	4, 60-4, 40 (m, 3H) , 3,83 (m,
0,5H), 3,	72 (m, 0,	5H) ,	3,07	(m, 1H), 2,7-2,5 (m, 3H), 2,40
(m, 1H),	2,03-1,80	(m,	5H) .

(vi) 7-Chlor-l-hydroxytetraiin-l-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Anisol (65 mg, 0,6 mmol) a kyselina trifluormethansulfonová (400 mg, 2,6 mmol) se v tomto pořadí přidají k roztoku 7-chlor-l-hydroxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(Z) (300 mg, 0,52 mmol, z kroku (v) výše) v methylenchloridu (20 ml) a roztok se 10 minut míchá při teplotě místnosti. Přidá se voda (20 ml) a organická fáze se oddělí odstraní, počemž se pH vodné fáze upraví na 4 až 5 nasyceným vodným roztokem NaHCO₃. Roztok se částečně

- 91 odpaří a surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:voda, 10:90 až 90:10). Dotčené frakce se

částečně odpaří	a přidá	se pár	kapek	HOAc	(konc.) a	roztok
se lyofilizuje.	Výtěžek	40 mg	(15 %)	•
Ή-NMR (500 MHz,	CD3OD) :	delta	7, 78	(dd,	2H), 7,59	(m, 2H),
7,30 (d, 1H), 7,	22 (d,	1H), 7,	15 (d,	1H) ,	4,65-4,35	(m,
3H), 4,20-3,90 (	>, 1H),	2,85-2	,70(m,	1H) ,	2, 55 (m,	1H),

2,35-1, 95 (m, 9H) , ¹³C-NMR (100 MHz, CDC1₃) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 177,0, 172,8, 167,9.

Příklad 21 l-n-Propyl-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Malé množství Pd/C (10 %) se přidá k roztoku l-allyl-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc (80 mg, 0,15 mmol, viz příklad 19 výše) v EtOH (5 ml) a směs se 2 hodiny hydrogenuje při teplotě a tlaku v místnosti. Směs se zfiltruje přesrozsivkovou zeminu a výsledný roztok se odpaří. Lyofilizací z vody se získá 68 mg (85 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví.

Ή-NMR (400 MHz, CDCl,): delta 7,77 (t, 2H) , 7,52 (t, 2H) , 7,12 (t, 1H), 6,87 (m, 1H), 6,75 (d, 1H), 4,75 (m, 1H, částečně zakryto), 4,54 (s, 2H) , 3,77 (m, 4H), 3,66 (m,

1H) , 3,10 (m, 1H) , 2,70 (široký, 2H) , 2,30 (m, 1H) , 2,1-1,6 (m, 10H, z něho 1,91, s, 3H), 1,25 (m, 1H), 1,10 (m, 1H), 0,83 (q, 3H),

LC-MS (m/z) 463 (M + 1)

- 92 :: : .··.:···

....... ; ··’ : ;:

··· ..· ·· : · · ·· ... ·_#

Příklad 22

6-Chlor-4-hydroxychroman-4-yl-C (O) -Aze-Pab x HOAc (i) Methylester kyseliny 6-chlor-4-hydroxychroman-4-ylkarboxylové

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připraví podle postupu, který popsal Bigge a kol. (J. Med. Chem.,

36, 1977 a násl. (1993)) z 6-chlorchromanonu (2,45 g, 13,4 mmol), Me₃SiCN (1,51 g, 15,2 mmol) a Znl_£. (40 mg, kat.). Výtěžek 0,58 g ( 18 %).

i_H-NMR (300 MHz, CDC1₃) : delta 7,17 (d, ΙΗ) , 7,08 (d, 1H) , 6,82 (d, 1H), 4,41 (m, 1H), 4,37 (m, 1H), 2,47 (m, 1H) ,

2, 09 (m, 1H) .

(ii) Kyselina 6-chlor-4-hvdroxychroman-4-ylkarboxylová

LiOH.H,O (0,19 g, 4,6 mmol) a voda (4 ml) se přidají k roztoku methylesteru kyseliny 6-chlor-4-hydroxychroman-4-ylkarboxylové (0,56 g, 2,3 mmol, z kroku (i) výše) v THF (6 ml). Reakční směs se 3 hodiny míchá při teplotě místnosti, THF se odpaří a vodný roztok se promyje metthylenchloridem. Reakční směs se okyselí pomocí HC1 (2M) a extrahuje se ethylacetátem. Organická vrstva se vysuší (Na₂SO₄) a odpaří, přičemž se získá a pomalu krystalizující olej. Výtěžek: 490 mg (93 %) .

LC-MS (m/z) 228 (Μ - 1)“.

(iii) 6-Chlor-4-hydroxychroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc)

Roztok kyseliny 6-chlor-4-hydroxychroman• ·

- 93 -4-ylkarboxylové (222 mg, 1,00 mmol, z kroku (ii) výše) a

HATU (370 mg, 0,97 mmol) v DMF (5 ml) se 1,5 hodiny míchá při teplotě místnosti a přidá se směs Η-Aze-Pab (Teoc) x HC1 (440 mg, 0,98 mmol, viz příklad 19 (iv) výše) a

2,4, 6-trimethylpyridinu (0,48 g, 3,9 mmol) v DMF (5 ml) při 0 °C. Po 3 hodinách míchání při 0 °C se reakční směs odpaří a surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:O,1M octan amonný 55:45). Dotčené frakce se částečně odpaří a extrahují methylenchloridem. Organická vrstva se vysuší (Na₂SOJ a odpaří, přičemž se získá 350 mg (67 %) směsi diastereomerů.

H-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 7,31 (m, 1H) , 7,19 (dt, 1H) , 7,09 (d, 0,5H), 7,00 (d, 0,5H), 6,88 (dd, 1H) , 4,93 (m,

1H) , 4,80 (široký, 0,5H), 4,61 (dd, 1H), 4,53-4,43 (m, 2H), 4,36 (m, 1H), 4,15 (t, 1H), 3,89 (m, 0,5H), 3,74 (m, 0,5H), 3,09 (m, 1H), 2, 46-2,28 (m, 1H) , 2,21 (m, 1H) , 1,96 (m,

1H) , 0,06 (s, 9H) , ¹³C-NMR (100 MHz, (CDC1₃) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 176,9, 171,5, 171,3, 169,8, 155,4, 155,2,

LC-MS (m/z) 58 8 (M + 1)⁺.

(iv) 6-Chlor-4-hydroxychroman-4-yl-C(Ol-Aze-Pab x HOAc

Bu„NF (l,0M v THF, 0,35 ml) se přidá k roztoku 6-chlor-4hydroxychroman-4-yl-C (O)-Aze-Pab (Teoc) (190 mg, 0,32 mmol, z kroku (iii) výše) v THF (20 ml) při teplotě 0 °C. Roztok se 2 dny míchá při 40 °C. Roztok se odpaří a surový materiál se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:0,lM octan amonný, 25:75). Výtěžek 115 mg (71 %) .

- 94 Ή-NMR (400 MHz, CD₃OD) : delta 7,73 (m, 2H) , 7,55 (m, 2H) ,

7,28	(dd,	• 1H),	, 7,15 (m,	1H),	, 6,79 (m, 1H)	, 4,60	(m, 1H) ,
4,47	(m,	2H) ,	4,33 (m,	1H) ,	4,15 (m, 2H),	2,8-2,	46 (m, 1H),
2, 38	(m,	1H) ,	2,23 (m,	1H) ,	2,06 (m, 1H) ,	1, 90	(s, 3H) ,·

¹³C-NMR (100 MHz, CDC1₃) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 175,9,175,6, 174,4, 173,1, 173,0,

LC-MS (m/z) 444 (M + 1)⁺.

Příklad 23

4-Hvdroxychroman-4-l-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Pd/C (5%, 25 mg) se přidá k roztoku 6-chlor-4-hydroxychroman-4yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc (14,7 mg, 0,029 mmol, viz příklad 22 výše) v EtOH (5 ml) a směs se 1 den hydrogenuje při teplotě a tlaku místnosti. Směs se zfiltruje skrz rozsivkovou zeminu a surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:0,lM octan amonný 25:75). Dotčené frakce se odpaří. Lyofilizací s získají 4 mg (30 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví.

Ή-NMR (400 MHz, CD₃OD) : delta 7,79 (m, 2H) , 7,56 (m, 2H) , 7,4-7,2 (m, 2H), 7,00 (m, 2H) , 4,96 (dd, 1H) , 4,5-4,3 (m, 2H), 4,20 (m, 2H), 3,88 (m, 1H), 2,8-2,4 (m, 2H), 2,27 (m, 1H), 2,17 (m, 1H), 2,07 (s, 3H), ¹³C-NMR (100 MHz, CDC1₃) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 173,7, 167,7,

LC-MS (m/z) 409 (M + 1)⁺.

- 95 • · · Σ ♦ · ♦ * ··· · ϊ ; ···

...... \,· : · ·· ···

Příklad 24

6, 8-Dichlor-4-hydroxychroman-4-yl-C(Ο)-Aze-Pab χ HOAc (i) Methylester kyseliny 6,8-dichlor-4-hydroxychroman-4-ylkarboxylové

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připraví podle postupu, který popsal Bigge a kol. (J. Med. Chem.,

36, 1977 a násl. (1993)) z 6,8-dichlorchromanonu (1,36 g, 6,27 mmol), Me₃SiCN (0,68 g, 6,9 mmol) a Znl₂ (20 mg, kat.). Výtěžek 0,52 g (30 %).

^XH-NMR (300 MHz, CDC1₃) : delta 7,30 (s, 1H) , 7,00 (s, 1H) , 4,53 (m, 1H) , 4,33 (m, 1H) , 3,83 (s, 3H) , 2,47 (m, 1H) ,

2,12 (m, 1H).

(ii) Kyselina 6,8-dichlor-4-hydroxychroman-4-ylkarboxylová

LiOH.H,O (0,15 g, 3,6 mmol) a voda (2 ml) se přidají k roztoku methylesteru kyseliny 6,8-dichlor-4-hydroxychroman-4-ylkarboxylové (0,50 g, 1,8 mmol, z kroku (i) výše) v THF (5 ml). Výsledná směs se 30 minut míchá při teplotě místnsoti, THF se odpaří a vodná fáze se promyje methylenchloridem. Reakční směs se okyselí pomocí HC1 (2M) a extrahuje se methylenchloridem. Organická vrstva se vysuší (Na₂SO₄) a odpaří, přičemž se získá sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví. Výtěžek: 390 mg (83 %) .

LC-MS (m/z) 2 62 (M-l)’.

(iii) 6,8-Dichlor-4-hydroxychroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc)

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připraví ····

Μ • ♦ · •99 • 9 • 9 • 9 • 9 podle postupu posaného v příkladu 22 (iii) uvedeném výše z kyseliny 6,8-dichlor-4-hydroxychroman-4-ylkarboxylové (100 mg, 0,38 mmol, z kroku (ii) výše), HATU (160 mg, 0,42 mmol), Η-Aze-Pab(Teoc) x HCI, (190 mg, 0,42 mmol, viz příklad 19 (iv) výše) a 2,4,6-trimethylpyridinu (0,19 g, 1,6 mmol) . Surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:0,lmM octan amonný, 55:45). Dotčené frakce se částečně odpaří a extrahují methylenchloridem. Organická vrstva se vysuší (Na₂SO₄) a odpaří, přičemž se získá 206 mg (87 %) směsi diastereomerů.

LC-MS (m/z) 623 ( (M + 1)\ iv) 6, 8-Dichlor-4-hydroxychroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví podle postupu popsaného v příkladu 19 (vi) uvedeném výše z 6, 8-dichlor-4-hydroxychroman-4-yl-C(O)-AzePab(Teoc) (150 mg, 0,24 mmol, z kroku (iii) výše) a Bu₄NF (0,10 g, 0,32 mmol) . Surový materiál se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:0,lM octan amonný 30:70). Výtěžek 45 mg (35 %) .

^H-NMR (400 MHz, CD₃OD) : delta 7,73 (m, 2H) , 7,54 (m, 2H) ,

7,32	(m, 2H) , 7,23	(d,	1H) ,	4, 65	-4,	40	(m, 4H),	4,	30 (m,
2H) ,	4,17-3,97 (m,	1H) ,	2, 8-	-2,5	(m,	ih;	l, 2,40	(m,	1H) ,
2,35-	-2,20 (m, 1H) ,	2, 15	(m,	2H) ,	1,	95	(s, 3H),

¹³C-NMR (100 MHz,- CDC1₃) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 175,4, 174,0, 174,3, 173,0, 168,1,

LC-MS (m/z) 477 (M + 1)⁺.

Příklad 25

- 97 6-Fluor-4-hydroxychroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Methylester kyseliny 6-fluor-4-hydroxychroman-4-ylkarboxylové

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připraví podle postupu, který popsal Bigge a kol. (J. Med. Chem., 36. 1977 a násl. (1993)) z 6-fluorchromanonu (2,53 g, 15,2 mmol), Me₃SiCN (1,66 g, 16,7 mmol) a Znl₂ (3 mg, kat.). Výtěžek 2,51 g (73 %).

¹H-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 6,93 (m, 1H) , 6,82 (m, ZH) , 4,34 (m, 1H), 4,23 (dt, 1H), 3,81 (s, 3H) , 2,47 (m, 1H),

2, 10 (m, 1H) .

(ii) Kyselina 6-fluor-4-hydroxychroman-4-ylkarboxylová

Roztok LiOH.H₂O (0,95 g, 22,6 mmol) v vodě (30 ml) se přidá k roztoku methylesteru kyseliny 6-fluor-4-hydroxychroman-4-ylkarboxylové (2,47 g, 10,9 mmol, z kroku (i) výše) v THF (10 ml). Reakční směs se 2 dny míchá při teplotě místnosti, THF se odpaří a vodná fáze se okyselí HC1 (2M) a extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se vysuší (Na₂SO₄) a odpaří, přičemž se získá sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví. Výtěžek: 1,41 g (61 %) ·

LC-MS (m/z) 211 (Μ - 1)’.

(iii) 6-Fluor-4-hydroxychroman-4-yl-C(O) -Aze-Pab(Z)

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připaví podle postupu popsaného v příkladu 22 (iii) uvedeného výše z kyseliny 6-fluor-4-hydroxychroman-4-ylkarboxylové (250

- 98 ·· ···· ··· • · mg, 1,18 mmol, z kroku (ii) výše), HATU (500 mg, 1,32 mmol), H-Aze-Pab(Z) x HCl (570 mg, 1,3 mmol, připraveného podle postupu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 97/02284) a 2,4,6-trimethylpyridinu (0,70 g, 5,3 mmol). Surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:0,lM octan amonný, 55:45). Dotčené frakce se částečně odpaří a extrahují methylenchloridem. Organická vrstva se vysuší (Na₂SO₄) a odpaří, přičemž se získá 290 mg (40 %) směsi diastereomerů.

FAB-MS (m/z) 561 ( (M + 1)⁺.

iv) 6-Fluor-4-hydroxychroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

HOAc (80 pL) a Pd/C (5%, 93 mg) se přidají k roztoku 6-fluor-4-hydroxychroman-4-yl-C(O) -Aze-Pab(Z) (140 mg, 0,25 mmol, z kroku (iii) výše) v EtOH (10 ml) a směs se 4 hodiny hydrogenuje při teplotě a tlaku místnosti. Směs se zfiltruje přes rozsivkovou zeminu. Roztok se odpaří a surový materiál se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:O,1M octan amonný, 20:80). Výtěžek 72 mg (59 %) .

^-NMR (400 MHz, D₂O) : delta 7,78 (dd, 1H) , 7,73 (d, 1H) ,

7,55 (m, 2H) , 7,18-6,96 (m, 3H) , 4,96 (dd, 1H) , 4,58 (s,

1H) , 4,50-4,35 (m, 2H) , 4,19 (m, 2H) , 2,63 (m, 1H) , 2,45 (m, 1H), 2,35-2,12 (m, 2H), 1,98 (s, 3H) , ¹³C-NMR (100 MHz, D₂O) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 176, 1, 175, 9, 174, 7, 173,7, 167, 6.

Příklad 26

4-Hydroxy-6-methylchroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc ····

- 99 (i) Methylester kyseliny 4-hydroxy-6-methylchroman-4-ylkarboxylové

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připraví podle postupu, který popsal Bigge a kol. (J. Med. Chem.,

36, 1977 a násl. (1993)) z 6-methylchromanonu (3,11 g, 19,2 mmol), Me₃SiCN (2,1 g, 21,2 mmol) a Znl₂ (20 mg, kat.). Výtěžek 2,80 g (62 %) .

¹H-NMR (300 MHz, CDC1₃) : delta 7,01 (dd, 1H) , 6,89 (d, 1H) , 6,77 (d, 1H), 4,37 (dt, 1H), 4,32-4,20 (m, 3H), 2,49 (m,

2H), 2,34 (s, 3H), 2,08 (m, 1H), 1,24 (t, 3H) .

(ií) Kyselina 4-Hydroxy-6-methylchroman-4-ylkarboxylová

Roztok LiOH.H₂O (0,78 g, 18,6 mmol) ve vodě (15 ml) se přidá k roztoku methylesteru kyseliny 4-hydroxy-6-methylchroman-4-ylkarboxylové (2,2 g, 9,3 mmol, z kroku (i) výše) v THF (10 ml). Reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti, THF se odpaří a vodná fáze se promyje etherem. Výsledný roztok se okyselí HCl (2M) a extrahuje etherem. Organická vrstva se vysuší (Na₂SO₄) a odpaří, přičemž se získá sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví. Výtěžek: 1,21 mg (62 %).

^-NMR (300 MHz, CD₃OD) : delta 7,06 (d, 1H) , 6,98 (d, 1H) , 6,69 (d, 1H) , 4,32 (m, 1H) , 4,17 (m, 1H) , 2,50 (m, 1H) ,

2,21 (s, 3H) , 2,03 (m, 1H) ,

LC-MS (m/z) 207 (Μ - 1)’.

(iii) 4-Hydroxy-6-methylchroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připraví ♦ · · • · · • ··«

Μ ····

-100podle postupu popsaného v příkladu 22 (iii) uvedeného výše z kyseliny 4-hydroxy-6-methylchroman-4-ylkarbox.ylové (310 mg, 1,49 mmol, z kroku (ii) výše), HATU (620 mg, 1,63 mmol), H-Aze-Pab(Z) (790 mg, 2,2 mmol, připraveného podle postupu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 97/02284) a 2,4,6-trimethylpyridinu (0,37 g, 3,0 mmol). Surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:O,1M octan amonný, 45:55). Dotčené frakce se částečně odpaří a extrahují methylenchloridem. Organická vrstva se vysuší (Na₂SO₄) a odpaří, přičemž se získá 675 mg (81 %) směsi diastereomerů.

LC-MS (m/z) 557 (M + 1)⁺.

(iv) 4-Hydroxy-6-iaethylchroman-4-yl-C (O)-Aze-Pab x HOAc

HOAc (80 μΐ) a Pd/C (5%, 150 mg) se přidají k roztoku 4-hydroxy-6-methylchroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab(Z) (240 mg, 0,43 mmol, z kroku (iii) výše) rozpuštěnému v EtOH (10 ml) a směs se přes noc hydrogenuje při teplotě a tlaku místnosti. Směs se zfiltrúje přes rozsivkovou zeminu. Lyofilizací se získá sloučenina pojmenovaná v záhlaví s

výtěžkem	159 mg (76 %)	-
Ή-ΝΜΕ (5'	00 MHz, CD3OD)	: delta 7,	72 (	dd,	2H), 7,	53	(dd, 2H),
7,08 (d,	1H) , 7,00 (d,	1H), 6,71	(d,	1H)	, 4,84	(m,	částečně
zakryto),	4,60 (m, 1H)	/ 4,46 (m,	1H)	, 4,	29 (m,	2H)	/ 4,14
(t, 1H),	2,40 (m, 2H),	2,26-2,10	(m,	3H)	, 2,00	(m,	1H),
1/90 (s,	3H) ,

¹³C-NMR (100 MHz, CD₃OD) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 176,6, 174,5, 173,1, 168,1,

LC-MS (m/z) 423 (M + 1)⁺.

• · · • ·ΦΦ ••·φ

-101' ·φφ φ

• φφ

Příklad 27

8-Chlor-4-hydroxy-6-methoxychroman-4-yl-C(Ο)-Aze-Pab χ HOAc (i) Ethyl-[3-(2-chlor-4-methoxyfenoxy)propionat]

Sodík (0,055 g, 2,4 mmol) a ethanol (1,5 ml) se přidají k tavenině 2-chlor-4-methoxyfenolu (5,20 g, 32,8 mmol) . Když se veškerý sodík rozpustí, přidá se ethylakrylat (4,1 g, 41 mmol) a směs se 7 dní zahřívá na 105 °C. Směs se potom ochladí na teplotu místnosti a rozdělí se mezi ether a vodu. Směs se okyselí HC1 (2M, vodný) a extrahuje se 3-krát etherem. Spojená organická vrstva se promyje vodným roztokem NaOH (2M) , vysuší (CaCl₂) a odpaří. Surový produkt (2,7 g) se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:0,lM octan amonný, 60:40). Výtěžek 1,90 g (22 (ii) Kyselina 3-(2-chlor-4-methoxyfenoxy)propionová

Roztok LiOH.H₂O (0,67 g, 16 mmol) ve vodě (20 ml) se přidá k roztoku ethyl-[3-(2-chlor-4-methoxyfenoxy) propionatu] (1,90 g, 7,3 mmol, z kroku (i) výše) v THF (10 ml). Reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti, THF se odpaří a vodná fáze se promyje etherem. Výsledný roztok se okyselí HC1 (2M) a extrahuje etherem. Organická vrstva se vysuší (Na₂SO₄) a odpaří, přičemž se získá 0,90 g (54 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

LC-MS (m/z) 229 (M - 1)'.

(iii) 8-Chlor-6-methoxychroman-4-on ····

-102····

Chlorid fosforečný (1,3 g, 6,2 mmol) se přidá k suspensi kyseliny 3-(2-chlor-4-methoxyfenoxy)propionové (0,85 g, 3,7 mmol, z kroku (ii) výše) v benzenu (10 ml). Výsledný čirý roztok se rychle zahřeje k varu a potom se ochladí v ledové lázni. Po částech se přidá chlorid hlinitý (1,5 g, 11 mmol) a když je veškerý přidán, přidá se ledová voda. Extrakcí etherem, promytím organické vrstvy vodným roztokem NaHCO₃ a NaOH (2M) , vysušením (Na₂SO₄) a odpařením se získá 0,73 g (93 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

^-NMR (300 MHz, CDC1₃) : delta 7,27 (d, 1H) , 7,19 (d, 2H) , 4,59 (t, 2H) , 3,80 (s, 3H) , 2,81 (t, 2H) .

(iv) Amid kyseliny 8-chlor-4-hydroxy-6-methoxychroman-4-ylkarboxylové

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se získá během pokusu připravit odpovídající methylester podle postupu, který popsal Bigge a kol. (J. Med. Chem., 36, 1977 a násl. (1993)) z 8-chlor-6-methoxychromanonu (0,73 g, 3,4 mmol, z kroku (iii) výše), Me₃SiCN (0,94 g, 7,6 mmol) a Znl₂ (50 mg, kat.). Surový produkt sestává z menšího množství odpovídajícího methylesteru a většího množství amidu. Amid se vyčistí preparativní RPLC (CH₃CN:0,lM octan amonný,

30:70 až 70:30). Výtěžek 0,39 g (44 %).

LC-MS (m/z) 256 (M - 1)’.

(v) Kyselina 8-chlor-4-hydroxy-6-methoxychroman-4-ylkarboxylová

KOH (1,2 g, 21 mmol) a voda (25 ml) se přidají k roztoku amidu kyseliny 4-hydroxy-8-chlor-6-methoxy-103chroman-4-ylkarboxylové (0,39 g, 1,5 mmol, z kroku (iv) výše) v i-PrOH (25 mL). Reakční směs se přes noc udržuje při zpětném toku, i-PrOH se odpaří a vodný roztok se promyje etherem. Reakční směs se okyselí HCl (2M) a extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se vysuší (Na₂SO₄) a odpaří. Výtěžek: 0,38 mg (97 %) .

LC-MS (m/z) 257 (Μ - 1)'.

(vi) 8-Chlor-4-hydroxy-6-methoxychroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab(Teoc)

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připaví podle postupu popsaného v příkladu 22(iii) uvedeného výše z kyse1iny 4-hydroxy-8-chlor-6-methoxychroman-4-ylkarboxylové (260 mg, 1,00 mmol, z kroku (v) výše), HATU (420 mg, 1,1 mmol), H-Aze-Pab (Teoc) x HCl (490 mg, 1,1 mmol, viz příklad 19(iv) výše) a 2,4,6-trimethylpyridinu (600 mg, 4,5 mmol). Surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:O,1M octan amonný, 55:45). Dotčené frakce se částečně odpaří a extrahují methylenchloridem. Organická vrstva se vysuší (Na₂SO₄) a odpaří, přičemž se získá 340 mg (55 %) směsi diastereomerů.

LC-MS (m/z) 617 ((M + 1)V (vii) 8-Chlor-4-hydroxy-6-methoxychroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví podle postupu popsaného v příkladu 19 (vi) uvedeného výše za použití 4-hydroxy-8-chlor-6-methoxychroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc) (150 mg, 0,24 mmol, z kroku (vi) výše) a Bu₄NF (l,0M v THF, 0,32 ml). Surový materiál se vyčistí • * · · · ·

-104za použití preparativní RPLC (CH₃CN:O,1M octan amonný,

20:80)	. Výtěžek 113 mg	(87 %) .
TH-NMR	(400 MHz, CD3OD) :	delta 7,	69	(d, 2H)	, 7,54 (d, 2H),
6,90 (	d, 1H), 6,85 (d,	1H), 4,57	(m	., 3H),	4,48-4,30 (m,
4H) , 4	,17 (m, 2H) , 4,00	(m, 1H),	2,	8-2,5	(m, 2H), 2,40 (m,
2H) , 2	,26 (m, 1H) , 2,15	(m, 2H),	2,	06 (d,	1H) ,
LC-MS	(m/z) 473 (Μ - 1)

Příklad 28

6-Chlor-4-hydroxy-8-methylchroman-4-yl-C (0) -Aze-Pab x HOAc (i) Ethyl-[3-(4-chlor-2-methylfenoxy)propionát]

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připaví podle postupu popsaného v příkladu 27 (i) uvedeného výše z 4-chlor-2-methylfenolu (4,99 g, 35,0 mmol), sodíku (0,055 g, 2,4 mmol), ethanolu (1,5 ml) a ethylakrylatu (4,1 g, 41 mmol) . Surový produkt (1,98 g, 23 %) se bez dalšího čištění použije v dalším kroku.

(ii) Kyselina 3-(4-chlor-2-methylfenoxy)propionová

Roztok LiOH.H₂O (0,50 g, 12 mmol) ve vodě (10 ml) se přidá k roztoku ethyl-[3-(4-chlor-2-methylfenoxy)propionatu] (1,98 g, 8,15 mmol, z kroku (i) výše) v THF (20 ml) . Reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti, THF se odpaří a vodná fáze se promyje etherem. Výsledný roztok se okyselí HC1(2M), potom se tuhý materiál vysráží. Produkt se zfiltruje a vysuší na vzduchu, přičemž se získá 0,62 g (35 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

• · • 9 99 • 99 β

-105LC-MS (m/z) 213 (Μ - 1)'.

(iii) 6-Chlor-8-methylchroman-4-on

Chlorid fosforečný (0,95 g, 4,6 mmol) se přidá k suspensi kyseliny 3- (4-chlor-2-methylfenoxy)propionové (0,59 g, 2,7 mmol, z kroku (ii) výše) v benzenu (10 ml). Výsledný čirý roztok se rychle zahřeje k varu a potom se ochladí v ledové lázni. Po částech se přidá chlorid hlinitý (1,0 g, 7,5 mmol) a po ukončení přidávání se přidá ledová voda. Extrakcí etherem, promytím organické vrstvy vodným roztokem NaHCO₃ a NaOH (2M), vysušením (Na₂SO₄) a odpařením se získá 0,27 g (50 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

¹H-NMR (500 MHz, CDC1₃) : delta 7,70 (d, 1H) , 7,29 (d, 2H) , 4,56 (t, 2H) , 2,79 (t, 2H) , 2,22 (s, 3H) .

(iv) Amid kyseliny 6-chlor-4-hydroxy-8-methylchroman-4-ylkarboxylové

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připraví podle postupu popsaného v příkladu 27 (iv) uvedeném výše, za použití postupu, který popsal Bigge a kol.. (J. Med. Chem., 36, 1977 a násl. (1993)) z 6-chlor-8-methylchromanonu (0,27 g, 1,37 mmol, z kroku (iii) výše), Me₃SiCN (0,29 g, 1,52 mmol) a Znl₂ (46 mg, kat.). Surový produkt sestává z menšího množství odpovídajího ethylesteru a většího množství amidu. Amid se vyčistí preparativní RPLC (CH₃CN:0,lM octan amonný, 30:70 až 70:30). Výtěžek: 0,17 g (50 %) .

LC-MS (m/z) 240 (Μ - 1)'.

(v) Kyselina 6-chlor-4-hydroxy-8-methylchroman-4-yl···· ···

- 106karboxylová

KOH (1,25 g, 22,3 mmol) a voda (20 ml) se přidají k roztoku amidu kyseliny 4-hydroxy-6-chlor-8-methylchroman-4-ylkarboxylové (0,17 g, 0,69 mmol, z kroku (iv) výše) v i-PrOH (20 ml). Reakční směs se přes noc zahřívá ke zpětnému toku, i-PrOH se odpaří a vodný roztok se promyje etherem. Reakční směs se okyselí HC1 (2M) a extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se vysuší (Na₂SO₄) a odpaří. Výtěžek: 0,13 g (78 %) .

(vi) 6-Chlor-4-hydroxy-8-methylchroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab(Teoc)

Roztok kyseliny 6-chlor-4-hydroxy-8methylchroman-4-ylkarboxylové (130 mg, 0,54 mmol, z kroku (v) výše) a HATU (220 mg, 0,59 mmol) v DMF (5 ml) se 1,5 hodiny míchá při 0 °C a přidá se směs H-AzePab (Teoc) x HC1 (270 mg, 0,59 mmol, viz příklad 19 (iv) výše) a

2, 4,6-trimethylpyridinu (320 ml, 2,4 mmol) v DMF (3 ml) při teplotě 0 °C. Po 3 hodinách míchání při 0 °C se reakční směs odpaří a surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:O,1M octan amonný, 55:45). Dotčené frakce se částečně odpaří a extrahují methylenchloridem. Organická vrstva se vysuší (Na₂SO₄) a odpaří, přičemž se získá 79 mg (24 %) směsi diastereomerů.

LC-MS (m/z) 601 (M - 1)'.

(vii) 6-Chlor-4-hydroxy-8-methylchroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Bu₄NF (l,0M v THF, 0,20 ml) se přidá k roztoku 6-chlor-4-hydroxy-8-methylchroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab(Teoc) ♦ · · ·

- 107(79 mg, 0,13 mmol, z kroku (vi) výše) v THF (5 ml) při teplotě 0 °C. Roztok se při 60 °C míchá přes noc a následně se odpaří. Surový materiál se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:O,1M octan amonný, 20:80).

Výtěžek 37 mg (54 %) .

^XH-NMR (400 MHz, CD₃OD) : delta 7,72 (m, 2H) , 7,54 (m, 2H) , 7,15-6,98 (m, 2H) , 4,60 (m, 1H) , 4,5-4,3 (m, 3H) , 4,25-4,10 (m, 2H), 4,03 (m, 1H), 2,80-2,45 (m, 1H), 2,37 (m, 1H),

2,26 (m, 1H) , 2,14 (s, 3H) , 2,05 (d, 1H) , 1,92 (s, 3H) ,

LC-MS (m/z) 473 (M - 1)’.

Příklad 29 (S) - nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(O-C(O)-i-Pr)

Anhydrid kyseliny 2-methylpropanové (7,3 mg, 46 μκιοί) se přidá k ledově studenému roztoku (S)- nebo (R) -l-hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(OH) (20 mg, 44 μκιοί, viz příklad 14 výše) a Et₃N (4,9 mg, 49 μκιοί) v methylenchloridu (1 ml) a směs se přes noc míchá při teplotě místnosti. Směs se naředí dalším nožstvím methylenchloridu, 3-krát se promyje vodou a 1-krát roztokem chloridu sodného, vysuší se (Na₂SO₄) a odpaří. Surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:0,lM octan amonný, 40:60) a dotčené frakce se odpaří.

Lyofilizací se získá 13 mg (56 %) Sloučeniny pojmenované v záhlaví.

¹H-NMR (300 MHz, CDC1₃) : delta 7,90 (m, 1H) , 7,65 (d, 2H) , 7,29 (d, 2H) , 7,05 (d, 1H), 6,83 (dd, 1H) , 6,67 (d, 1H) , 5,13 (široký, 2H) , 4,93 (dd, 1H) , 4,48 (m, 3H) , 3,84 (m, ·* *444

4 • 4 4 4 • 4 ·«

-1081H), 3,76 (s, 3H), 3,03 (m, 1H), 2,85-2,70 (m, 2H) , 2,5-2,7 (m, 2H), 2,25 (m, 1H), 2, 00-1, 93 (m, 4H) , 1,29 (d, 6H), • · 4 4 «. · • 4 **·· «4 ¹³C-NMR (75 MHz, CDC1₃) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 177,7,174,3, 170,3,

LC-MS (m/z) 523 (M + 1)⁺.

Příklad 30 (S)- nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(O-C(O)-Et)

Anhydrid kyseliny propanové (9,5 mg, 73 pmol) se přidá k ledově studenému roztoku (S)- nebo (R)-l-hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(OH) (30 mg, 66 pmol, viz příklad 14 výše) a Et₃N (7,4 mg, 73 μπιοί) v methylenchloridu (1 ml). Směs se přes noc míchá při teplotě místnosti. Surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:O,1M octan amonný, 30:70 až 40:60) a dotčené frakce se odpaří. Lyofilizací se získá 19 mg (56 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví.

Ή-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 7,93 (t, 1H) , 7,67 (d, 2H) , 7,32 (d, 2H), 7,06 (d, 1H), 6,83 (dd, 1H) , 6,68 (d, 1H) ,

5,12 (široký, 2H) , 4,93 (dd, 1H) , 4,50 (m, 2H) , 3,84 (m,

1H) , 3,76 (s, 3H), 3,03 (m, 1H), 2, 67-2,50 (m, 2H) , 2,5-2,7 (m, 4H), 2,26 (m, 1H), 1,92 (m, 4Ή), 1,26 (t, 3H), ¹³C-NMR (100 MHz, CDC1₃) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 178,8, 173,1, 171,4,

LC-MS (m/z) 509 (M + 1)⁺.

·· ···· • · ·

- 109 * · · • · *··· « ·· til

*. · · , ** Μ

Příklad 31 (S) — nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(O-C(O)-Ch)

Chlorid kyseliny cyklohexankarboxylové (7,3 mg, 46 pmol) se přidá k ledově studenému roztoku (S)- nebo (R) -l-hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(OH) (30 mg, 66 pmol, viz příklad 14 výše) a Et₃N (7 mg, 73 pmol) v methylenchloridu (1 ml). Směs se přes noc míchá při teplotě místnosti. Směs se naředí dalším množstvím methylenchloridu a směs se 3-krát promyje vodou a 1-krát roztokem chloridu sodného, vysuší se (Na₃SOJ a odpaří. Surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:O,1M octan amonný, 40:60) a dotčené frakce se odpaří. Lyofilizací se získá 18 mg (50 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví.

^-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 7,91 (t, 1H) , 7,67 (d, 2H) , 7,30 (d, 2H) , 7,06 (d, 1H) , 6,83 (m, 1H) , 6,67 (d, 1H) ,

5,09 (široký, 2H) , 4,93 (dd, 1H) , 4,50 (m, 3H) , 3,83 (m,

1H) , 3,76 (s, 3H) , 3,02 (q, 1H) , 2, 68-2, 45 (m, 3H) , 2,26 (m, 1H), 2,1-1,9 (m, 6H), 1,83 (m, 2H), 1,70 (m, 1H), 1,59 (m, 2H), 1,32 (m, 3H), ¹³C-NMR (100 MHz, CDC1₃) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 178,7, 174,2, 171,4,

LC-MS (m/z) 563 (M + 1)⁺.

Příklad 32 (S) - nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(O-allyl)

-110*”♦·”♦ ,*·.:·♦· .·· ·· .*· · · · ... : · · » .· ··:·: : :·^: ·· :

···· «. ,.·..,· ·.,··„· (i) (S)- nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(Teoc)

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připaví podle postupu popsaného v příkladu 22 (iii) uvedeného výše z kyseliny l-hydroxy-7-methoxytetralin-l-ylkarboxylové (0,44 g, 2,0 mmol, viz příklad 1 (ii) výše), HATU (0,80 g, 2,1 mmol), Η-Aze-Pab(Teoc) x HCl, (1,17 g, 2,6 mmol, viz příklad 19 (iv) výše) a 2,4,6-trimethylpyridinu (1,2 g, 10 mmol) . Surový produkt (1,73 g) se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:0,lM octan amonný, 55:45 až 45:55). Dotčené frakce se částečně odpaří a extrahují methylenchloridem. Organická vrstva se vysuší (Na₂SO₄) a odpaří, přičemž se získá 0,32 g (28 %) směsi diastereomerů. Preparativní RPLC (CH₃CN:0,lM octan amonný, 46:54) se získají 2 diastereomery: sloučenina 32A (rychleji se pohybující diastereomer, 0,16 g, 28 %) a sloučenina 32B (pomaleji se pohybující diastereomer, 0,16 g, 28 %) .

Sloučenina 32A:

^-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 7,96 (t, IH) , 7,86 (dd, 2H) , 7,36 (dd, 2H) , 7,07 (d, IH) , 6,87 (dd, IH) , 6,68 (d, IH) , 4,95 (dd, IH), 4,54 (m, 3H), 4,26 (m, 2H), 3,84 (m, IH), 3,78 (s, 3H), 3,04 (q, IH), 2,83 (d, IH), 2,63 (m,2H), 2,28 (m, IH), 2,02-1,85 (m, 4H), 1,15 (dt, 2H), 0,08 (s, 9H),

LC-MS (m/z) 581 (M + 1)⁺.

(ii) (S) — nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(0) -Aze-Pab(Teoc)(O-allyl)

O-Allylhydroxylamin x HCl (57 mg, 0,52 mmol) se *”· ♦ * · φ« ·«

- 111 • Φφ φ φ ·· ·· ♦ » » 4 • · · « • · · « ’ · ♦ ·

ΦΦ φφ přidá k roztoku (S)— nebo (R)-l-hydroxy-7-methoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Teoc) (50 mg, 86 μκιοί, sloučenina 32A z kroku (i) výše) v THF (3 ml) a směs se přes noc míchá při 60 °C. Roztok se odpaří a surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:O,1M octan amonný, 55:45 až 60:40) . Dotčené frakce se odpaří a zbývající směs se extrahuje methylenchloridem. Organická vrstva se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší (Na₂SO₄) a odpaří, přičemž se získá 28 mg (51 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

Ή-NMR (400 MHz, CDC13)	: delta 7,81 (t, 1H), 7,59 (s, 1H)
7,48	(d,	2H) , 7,30(d,	2H) , 7,06 (d, 1H) , 6,83 (dd, 1H) ,
6, 69	(d,	1H) , 6,04	(m,	1H), 5,35 (m, 1H), 5,27 (d, 1H) ,
4, 92	(dd,	1H) , 4,66	(dd, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,16 (m, 2H),
3, 81	(m,	1H) , 3,78	(s,	3H), 2,97 (q, 1H), 2,82 (d, 1H),
2, 60	(m,	2H) , 2,26	(m,	1H) , 2, 05-1, 85 (m, 4H) , 0,98 (m,
2H) ,	0, 03	(s, 9H) .

(iii) (S) — nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(O-allyl)

Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví podle postupu popsaného v příkladu 19 (vi) z (S)- nebo (R) -l-hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)Aze-Pab(Teoc)(O-allyl) (28 mg, 44 μπιοί, z kroku (ii) výše) v CH₃CN (2 ml) a Bu₄NF (1M v THF, 0,1 ml, 0,1 mmol) . Surový produkt (21,3 mg) se vyčistí použitím bleskové chromatografie (Sigel, ethylacetát), přičemž se získá 10 mg (46 %).

di-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 7,88 (t, 1H) , 7,62 (d, 2H) ,

7,	30	(d,	2H) ,	7, 06	(d,	1H) ,	6, 83	(dd,	1H) ,	, 6, 68	(d, 1H),
6,	09	(m,	1H) ,	5, 35	(m,	1H) ,	5,23	(m,	1H) ,	4,93	(dd, 1H),
4,	84	(s,	3H) ,	4, 68	(m,	1H) ,	4,50	(m,	2H) ,	3, 82	(m, 1H) ,
3,	77	(s,	3H) ,	3, 01	(m,	1H) ,	2,82	(d,	1H) ,	2, 62	(m, 2H),

- 1122,26 (m, 1H) , 2,0-1,8 (m, 4H) , ¹³C-NMR (100 MHz, CDC1₃) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 178,8, 171,2, 159,6,

LC-MS: (m/z) 493 (M + 1)⁺.

Příklad 33 (S) — nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(O-Bzl) (i) (S)- nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab (Teoc) (O-Bzl)

O-Benzylhydroxylamin x HC1 (82 mg, 0,52 mmol) se přidá k roztoku (S)- nebo (R)-l-hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(Teoc) (50 mg, 86 μιαοί, viz příklad 32 (i) výše) v THF (3 ml) a směs se přes noc míchá při 60 °C. Roztok se odpaří a surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:O,1M octan amonný, 60:40 až 70:30). Dotčené frakce se odpaří a zbývající směs se extrahuje methylenchloridem. Organická vrstva se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší (Na₃SO₄) a odpaří, přičemž se získá 41 mg (70 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

^-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 7,81 (t, 1H) , 7,60 (s, 1H) ,

7,	47	(d,	2H) ,	7, 40	(m,	5H) ,	7,30	(d,	2H) ,	7, 06	(d, 1H),
6,	83	(dd,	1H) ,	, 6,69	(d,	1H)	, 5,18	(s,	- 2H) ,	r 4,92	(dd, 1H),
4,	51	(m,	2H) ,	4,15	(m,	2H) ,	3, 81	(m,	1H) ,	3,77	(s, 3H),
2,	81	(d,	1H) ,	2, 60	(m,	2H) ,	2,25	(m,	1H) ,	2, 1-1	,8 (m, 4H)
o,	96	(m,	2H) ,	0, 02	(s,	9H) ,

LC-MS (m/z) 687 (M + 1)⁺.

• ·· • · · • · · ··· • ·· »* ···· ► · · * · ·· ·

- *· «♦ • * * a • · « i • · · 1 • ·« · • * ♦·

-113(ii) (S)- nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(O-Bzl)

Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví podle postupu popsaného v příkladu 19 (vi) uvedeného výše z (S) — nebo (R)-l-hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc)(OBzl) (28 mg, 44 μιηοΐ, z kroku (i) výše) a Bu₄NF (1 M v THF, 0,1 ml, 0,1 mmol) . Surový produkt (21 mg) se vyčistí za použití bleskové chromatografie (Si-gel, ethylacetát). Výtěžek: 10 mg (35 %).

^XH-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 7,88 (t, 1H) , 7,61 (d, 2H) ,

7,45 (d, 2H), 7,40-7,35 (m, 5H), 7,06 (d, 1H), 6,83 (dd,

1H) , 6,68 (d, 1H), 5,15 (s, 2H), 4,92 (dd, 1H), 4,85 (široký, 2H), 4,50 (široký+m, 3H), 3,83 (m, 1H), 3,77 (s, 3H) , 3,02 (m, 1H), 2,82 (d, 1H), 2,62 (m, 2H), 2,26 (m,

1H) , 2,0-1,8 (m, 4H), ¹³C-NMR (100 MHz, CDC1₃) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 178,8, 171,3, 159,6,

LC-MS (m/z) 543 (M + 1)⁺.

Příklad 34 (S) — nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O) -Aze-Pab(CO-O-methallyl) (i) p-Nitrofenylmethallylkarbonat

Pyridin (1,21 g, 15 mmol) se přidá k ledově studenému roztoku methallylalkoholu (1,0 g, 14 mmol) a • · • φ

Φ Φ

Φ φ

♦ φφ ·

Φ ♦♦·

Φ

ΦΦΦ

Φ •

·« « » Φ

- 114p-nitrofenylchlorformiatu (3,07 g, 15 mmol) v methylenchloridu (40 ml) a výsledná směs se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti, potom se roztok promyje KHS0₄ (3x) a roztokem chloridu sodného, vysuší (Na₂SO₄) a odpaří, aby se získalo 2,9 g (88 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

^-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 8,29 (d, 2H) , 7,40 (d, 2H) , 5,12 (s, 1H) , 5,06 (s, 1H), 4,70 (s, 2H) , 1,85 (s, 3H) .

(ii) (S)- nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(CO-O-methallyl)

Vodný roztok NaOH (2M, 0,35 ml, 0,7 mmol) se přidá k ledově studenému roztoku (S)- nebo (R)-1-hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C (O) -Aze-Pab x HOAc (32 mg, 64 pmol, viz příklad 3 výše) v THF (3 ml), počemž se přidá p-nitrofenylmethallylkarbonat (17 mg, 71 pmol, z kroku (i) výše) a roztok se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti. Surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:O,1M octan amonný, 40:60). Dotčené reakční směsi se odpaří a vodný roztok se extrahuje methylenchloridem. Organická vrstva se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší (Na₂SO₄) a odpaří. Produkt se rozpustí ve směsi CH₃CN/voda a lyofilizuje, aby se získaly 23 mg (67 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví.

^•H-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 7,97 (t, 1H) , 7,83 (d, 2H) ,

7,	33	(d,	2H) ,	7,	06	(d,	1H) ,	6,	83	(dd,	1H)	, 6,67	(d,	1H) ,
5,	06	(s,	2H) ,	4,	93	(m,	2H) ,	4,	60	(s,	2H) ,	4,51	(m,	2H) ,
3,	84	(m,	1H) ,	3,	76	(s,	3H) ,	3,	05	(m,	1H) ,	2, 82	(d,	1H) ,
2,	60	(m,	2H) ,	2,	27	(m,	1H) ,	2,	0-1	, 85	(m,	4H), 1	, 83	(s, 3H),

¹³C-NMR (100 MHz, CDC1₃) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 178,8, 171,4, 159,6, * 9 «

I» • •99 ··· • * 9 * * · 9 9 ί * · ’ · 9 *· 99 ·* ♦ ♦ • « <

• * 4 • · ' • · «

- 115LC-MS (m/z) 535 (M + 1)⁺.

Příklad 35 l-Hydroxy-7-aminotetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(OH) (i) l-Hydroxy-7-nitrotetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc)

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připaví podle postupu popsaného v příkladu 22 (iii) uvedeného výše z kyseliny l-hydroxy-7-nitrotetralin-l-ylkarboxylové (200 mg, 0,84 mmol, viz příklad 7 (ii) výše), HATU (353 mg, 0,93 mmol), Η-Aze-Pab(Teoc) (417 mg, 0,93 mmol, viz příklad 19 (iv) výše) a 2,4,6-trimethylpyridinu (409 mg, 3,37 mmol). Surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:O,1M octan amonný, 50:50). Dotčené frakce se odpaří a lyofilizují, aby se získalo 226 mg (45 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

^-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 8,04 (m, 2H) , 7,84 (d, 2H) , 7,77 (d, 1H) , 7,29 (m, 2H) , 4,93 (m, 1H) _z 4, 65-4,50 (m, 1H) , 4,40 (dd, 1H) , 3,96 (m, 1H) , 3,82 (m, 5H) , 3,15 (m, 1H) , 2,95 (m, 1H), 2,75 (m, 1H), 2,52 (m, 1H), 2,44-2,25 (m, 1H) , 2,1-1,9 (m, 5H) , 0,05 (s, 9H) ,

LC-MS (m/z) 596 ( M + 1)⁺.

(ii) l-Hydroxy-7-aminotetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc)

Směs l-hydroxy-7-nitrotetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(Teoc) (48 mg, 81 pmol, z kroku (i) výše), kyseliny octové (5 mg, 81 pmol) a Pd/C (5%, 24 mg) se 3 hodiny hydrogenuje při teplotě a tlaku místnosti. Výsledná • * 9

9 * 9 • ·

-116směs se zfiltruje přes rozsivkovou zeminu a odpaří, aby se získalo 37 mg (85 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví.

··♦* ♦* f 9 9 *9 · * * ί • · ί ^-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 7,86 (dd, 2H) , 7,42 (d, 1H) , 7,33 (d, 1H) , 6,89 (dd, 1H) , 6,58 (dd, 1H)·, 6,47 (široký, 0,5H), 6,23 (široký, 0,5H), 4,91 (m, 1H) , 4, 68-4, 52 (m,

1H) , 4,5-4,4 (m, 1H), 4,23 (m, 2H), 3,85 (m, 1H) , 3,69 (m, 1H), 3,2-3,0 (m, 1H), 2,74 (d, 1H), 2,65-2,45 (m, 2H), 2,4-2,2 (m, 1H), 2,0-1,8 (m, 5H), 0,05 (s, 9H),

LC-MS (m/z) 566 (M + 1)⁺.

(iii) l-Hydroxy-7-aminotetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(OH)

Směs hydroxylaminu x HCl (29 mg, 41 mmol) a TEA (140 mg, 1,38 mmol) v THF (10 ml) se při 4 0 °C na 1 hodinu vystaví působení ultrazvuku. Přidá se roztok 1-hydroxy-7-aminotetralin-l-yl-C (0) -Aze-Pab.(Teoc) (140 mg, 1,38 mmol, z kroku (ii) výše) v THF (5 ml) a.směs se 3 dny míchá při 40 °C. Výsledná směs se odpaří a surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:O,1M octan amonný, 30:70). Odpařením a lyofilizací roztoku se získá 20 mg (65 %) produktu pojmenovaného v záhlaví.

^-NMR (400 MHz, CDClj : delta 8,26 (široký, 0,5H), 8,03 (široký, 0,5H), 7,57 (dd, 2H), 7,39 (d, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,91 (dd, 1H) , 6, 65-6, 55 (m, 1H) , 4,98 (m, 3H) , 4,65-4,30 (m+široký, 4H) , 3,88 (m, 0,5H), 3,69 (m, 0,5H), 3,14 (m,

1H), 2,77 (d, 1H), 2, 65-2,50 (m, 2H), 2,45-2, 25 (m, 1H) , 2,10 (s, 2H) , 2, 00-1,85 (m, 4H) , ¹³C-NMR (100 MHz, CD₃OD) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 178,2, 172,9, 155,2, ♦♦ ·* * * Φ · • Φ · • ··· ♦ * φ * · ·

9

999

-117··♦·

ΦΦ

LC-MS (m/z) 438 (Μ + 1)⁺.

Příklad 36 (S)- nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(O-Val) (i) (S)- nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(0) -Aze-Pab(O-Val(Boc))

EDC x HC1 (16 mg, 83 μιαοί) se přidá k ledově studenému roztoku (S)- nebo (R)-l-hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C (0) -Aze-Pab (OH) (30 mg, 66 jimol, viz příklad 14 výše), Boc-Val-OH (18 mg, 83 pmol) a DMAP (24 mg, 0,20 mmol) v DMF (3 ml) a roztok se míchá přes noc. Výsledná směs se vlije do vody (200 ml) a extrahuje se 3-krát EtOAc. Spojené organické fáze se promyjí roztokem ředěné kyseliny citrónové a roztokem chloridu sodného, vysuší (Na₂SO₄) a odpaří. Surový produkt (41 mg) se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN: 0,1M octan amonný, 40:60). Výtěžek 13 mg (30 %).

¹H-NMR (500 MHz, CDC1₃) : delta 7,94 (široký t, 1H) , 7,68

(d, 2H)	, Ί	, 33	(d,	2H),7,	08	(d, 1H), 6,85 (dd,	1H) ,	6,	69 (d,
1H), 5,	30	(široký,	2H) ,	5,1	8 (široký d, 1H), 4	,95	(m,	1H) ,
4,60-4,	55	(m,	3H) ,	4,48	(dd	, 1H), 4,32 (m, 1H)	, 3,	86	(m,
1H), 3,	79	(s,	3H) ,	3, 05	(m,	1H), 2,83 (m, 1H) ,	2,7	-2,	55 (m,
2H), 2,	28	(m,	1H) ,	2,22	(m,	1H) , 2,05-1,85 (m,	5H)	, 1	,48
(s, 9H)	, 1	, 08	(d,	3H), 1	l, 04	(d, 3H),

LC-MS (m/z) 652 (M + 1)⁺.

(ii) (S)- nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(O-Val)

- 118 Ledově studený roztok l-hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C (O)-Aze-Pab (Ο-Val (Boc) ) (12 mg, 18 μιηοΐ, z kroku (i) výše) v EtOAc nasyceném HCl (5 ml) se 80 minut míchá, počemž se roztok odpaří, rozpustí ve vodě a přes noc lyofilizuje, aby se získalo 11 mg (96 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví.

^-NMR (400 MHz, D,O) : delta 7,66 (d, 1H, menší), 7,59 (d, 2H, větší), 7,45-7,35 (m, 2H), 7,2-7,1 (m, 1H), 6,95-6,85 (m, 1H) , 6, 75-6, 65 (m, 1H) , 5,25 (m, 1H, menší), 4,89 (m,

1H, větší), 4,6-4,3	(m, 3H) ,	4,21	(m,	1H), 4,14	(m, 1H,
větší), 3,87 (m, 1H,	větší),	3, 81	(s,	3H, menší)	, 3,63 (s,
3H, větší), 2,8-1,7	(m, 9H),	1,11	(d,	6H),

¹³C-NMR (100 MHz, D₂O) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 178,3, 173,8, 169,1, 161,4,

LC-MS (m/z) 552 (M + 1)⁺.

Příklad 37 (S) - nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-C(O)-Aze-(Me)Pab (i) Methyl-4-kyanbenzylidenimin

Roztok p-kyanbenzaldehydu (13,1 g, 0,1 mol), methylaminu (3,1 g, 0,1 mol) a p-TsOH (50 mg, kat.) v toluenu (150 ml) se přes noc míchá při teplotě místnosti, počemž se promyje vodným roztokem NaHCO₃ (2x) a roztokem chloridu sodného, vysuší (Na₂SO₄) a odpaří. Výtěžek 14,4 g (100 %) .

► ♦ « «

-1198,2 (s, 1H),

7,78 (d, 2H), ♦ ♦99

9 999 9 ·* ·99<

♦ 99 ♦ · ·♦· * · 4 ♦ · I * · 99 9

Ή-ΝΜΒ. (300 MHz, CDC1₃) : delta 7, 68 (d, 2Η), 3,54 (s, 3Η) .

(ii) Methyl-4-kyanbenzylamin

NaBH„ (4,54 g, 0,42 mol) se po částech přidá k ledově studenému roztoku methyl-4-kyanbenzylideniminu (14,4 g, 0,1 mol, z kroku (i) výše) v EtOH. Roztok se přes noc míchá při teplotě místnosti a výsledný roztok se zalije HCI (2M, vodná), promyje se etherem (2x), alkalizuje se vodným roztokem NaOH (2M) na pH 10 a extrahuje se EtOAc (3x). Organický roztok se promyje vodou a roztokem chloridu sodného, vysuší (Na₂SO₄) a odpaří. Výtěžek 11,4 g (78 %) .

dí-NMR (300 MHz, CDC1₃) : delta 7,92 (d, 2H) , 7,76 (d, 2H) , 4,82 (s+široký, 5H), 4,40 (s, 2H).

(iii) Boc-Aze-N(Me)-Bzl-4-CN

EDO x HCI ( 14,5 g, 76 mmol) se po částech přidá k ledově studenému roztoku methyl-4-kyanbenzylaminu (11,4 g, 78 mmol), Boc-Aze(OH) (15,4 g, 78 mmol) a DMAP (10,5 g, 82 mmol) v CH₃CN (500 ml) , počemž se směs přes noc míchá při teplotě místnosti. Výsledná směs se rozdělí mezi EtOAc a vodu, vodná fáze se extrahuje EtOAc (3x 100 ml) a spojená organická vrstva se promyje NaHSO₄ (2x), vodou (2x) a roztokem chloridu sodného (lx) , vysuší (Na₂SO₄) a odpaří. Výtěžek surového produktu je 23,2 g (90 %). Malé množství (6,17 g, 18,7 mmol) se vyčistí za použití bleskové chromatografie (Si-gel, EtOAc). Výtěžek 4,0 g (65 %).

^XH-NMR (400 MHz, CDC1₃) : (komplexní v důsledku rotamerů) delta 7,66 (d, 2H, menší), 7,60 (d, 2H, větší), 7,38 (d,

2H, větší), 7,31 (d, 2H, menší), 5,01 (dd, 1H), 4,9-4,7

-120*♦ ·· • · 9 9 • · · • ·99 • ♦•99 99 ** 9**φ • 9 .9 • · 9 99 • · 9 • · 9 ♦* 999 (široký, 1H), 1H) , 3,00 (s, 1H), 1,43 (s,

4,6-4,45 (široký, 1H) , 4,07 (m, 1H), 3,90 (m, 3H, menší), 2,96 (s, 3H, větší), 2,46 (m,

3H) .

(iv) Aze-N(Me)-Bzl-4-CN x HCl

Roztok Boc-Aze-N(Me)-Bzl-4-CN (4,0 g, 12 mmol, z kroku (iii) výše) v EtOAc (nasycený HCl, 50 ml) se 15 minut míchá, počemž se roztok odpaří. Výtěžek 3,1 g (kvant.)

Ή-NMR (400 MHz, D₂0) : delta 7,80 (m, 2H) , 7,45 (m, 2H) , 5,6-5,45 (m, 1H) , 4,72 (s, 2H) , 4,3-4,1 (m, 1H) , 4,08-3,95 (m, 1H), 2,94 (s, 3H), 2,8-2,55 (m, 1H).

(v) (S) — nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-Aze-N(Me)-Bzl-4-CN

Roztok Aze-N(Me)-Bzl-4-CN x HCl (0,56 g, 2,1 mmol, z kroku (iv) výše) a 2,4,6-trimethylpyridinu (0,51 g, 4,2 mmol) v DMF (3 ml) se přidá k ledově studenému roztoku kyseliny l-hydroxy-7-methoxytetralin-l-ylkarboxylové (0,44 g, 2,0 mmol, viz příklad 1 (ii) výše) a HATU (0,80 g, 2,1 mmol) v DMF (3 ml) a směs se přes noc míchá při teplotě místnosti. Výsledná směs se vlije do vody (0,5 litru) a extrahuje EtOAc (3x). Organický roztok se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší (Na₂SO₄) a odpaří.. Surový produkt (1,06 g) se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:0,lM octan amonný, 32,5:67,5), přičemž se získají dva diastereoisomery, rychlejší diastereoisomer (sloučenina 37A, výtěžek 215 mg (50 %)), a pomalejší diastereoisomer (sloučenina 37B, výtěžek 205 mg (48 %) ) .

Sloučenina 37A

-121 ^XH-NMR (400 MHz, CDC1₃) : (komplexní v důsledku rotamerie) delta 7,74 (d, 2H, menší), 7,66 (d, 2H, větší), 7,42 (d, 2H, menší), 7,39 (d, 2H, větší), 7,07 (m, 1H), 6,87-6,81 (m, 1H), 6,80 (d, 2H, větší), 6,75 (d, 2H, menší), 5,22 (dd, 1H, větší), 5,02 (dd, 2H, menší), 4,71 (dd, 2H), 4,60 (m, 1H), 3,98 (m, 1H), 3,81 (s, 3H, větší), 3,78 (s, 3H, menší), 3,05-2,05 (m, 4H, z něj 3,05, s, 3H, menší a 3,01, s, 3H, větší), 2,92-2,82 (m, 1H), 2,67 (m, 1H), 2,40 (m, 1H, menší), 2,25-2,07 (m, 3H), 1,98 (m, 2H).

(vi) (S)~ nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-Aze-N (Me) -Bzl-4-C (NH₂) NOH

Roztok (S)- nebo (R)-l-hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-Aze-N(Me)-Bzl-4-CN (0,18 g, 0,42 mmol, sloučenina 37A z kroku (v) výše), hydroxylaminu x HCl (88 mg, 1,3 mmol) a TEA (0,18 ml, 1,3 mmol) v absolutním ethanolu (3 ml) se 36 hodin míchá při teplotě místnosti, potom se surový produkt vyčistí za použití bleskové chromatografie (methylenchlorid:methanol (90:10)). Spojené dotčené frakce se odpaří. Výtěžek 0,18 g (91 %) .

^H-NMR (400 MHz, CDC1₃) : (komplexní kvůli rotamerii) delta 7,67 (d, 2H, menší), 7,60 (d, 2H, větší), 7,28 (m, 2H, částečně zakryto CHC1₃) , 7,04 (dd, 1H) , 6, 85-6, 72 (m, 2H) , 5,65 (široký, 2H, větší), 5,33 (široký, 2H, menší), 5,20 (dd, 1H, větší), 5,06 (dd, 1H, menší), 4,75-4,45 (m, 3H),

3, 95	(m,	1H), 3,78	(s,	3H, větší), 3,75	(s,	3H,	menší),
3,00	(s,	3H, menší)	, 2,	94 (d, 3H, větší)	, 2,	9-2	,75 (m, 1H),
2, 65	(m,	1H) , 2,40	(m,	2H, větší), 2, 10	(m,	3H)	, 1,95 (m,

2H) ,

LC-MS (m/z) 467 ( (M + 1)⁺.

• · • · • ♦ · • ♦ ♦ ♦ · * ·

-122··· • · • · ·» ⁽vii) (S) — nebo (R)-l-Hydroxy-7-methoxytetralin-l-yl-Aze-N(Me)-Bzl-4C (NH,)NH x HOAc

Směs (S)- nebo (R)-l-hydroxy-7-methoxytetralin-1-yl-Aze-N (Me)-Bzl-4-C (NH₂) NOH (60 mg, 0,13 mmol, z kroku (vi) výše), HOAc (15 mg, 0,26 mmol) a Pd/C (10%, 27 mg) v ethanolu se 2 dny chromatografuje, počemž se směs zfiltrúje přes rozsivkovou zeminu. Výsledný roztok se odpaří a surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:O,1M octan amonný, 10:90 až 20:80). Dotčené frakce se částečně odpaří a přes noc lyofilizují. Výtěžek 18 mg (27 %).

¹H-NMR (400 MHz, D₂O) : (komplexní v důsledku rotamerie) delta 7,83-7,73 (m, 1H), 7,68 (d, 1H), 7,50 (t, 1H), 7,43 (d, 1H) , 7,17 (d, 1H) , 6,93 (m, 1H) , 6,82 (d, 1H) , 5,40 (dd, 1H), 4,85 (d, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,58 (d, 1H), 4,4-4,0 (m, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,10 (s, 3H), 2,9-2,6 (m, 3H), 2,25-2,05 (m, 4H), 2,0-1,7 (m, 4H), ¹³C-NMR (100 MHz, D₂O) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) (komplexní v důsledku rotamerie) delta 178,6,

177,6, 173,8, 173,3, 173,1, 167,5, 158,5, 158,4, 158,2, «

LC-MS (m/z) 451 (M + 1)⁺.

Příklad 38

9-Hydroxyfluoren-9-yl-C(O)η-Aze-Pab x HOAc (i) 9-Hydroxyfluoren-9-yl-C(O)-Aze-Pab (Z)

Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se připaví podle postupu popsaného v příkladu 3(i) uvedeného výše z kyseliny 9-hydroxyfluoren-9-ylkarboxylové (230 mg, 1,0

• · • · • · * · mmol), TBTU (350 mg, 1,1 mmol), H-Aze-Pab(Z) x HC1 (500 mg, 1,25 mmol, připraveného podle postupu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 97/02284) a DIPEA (0,52 g, 4,0 mmol) . Surový produkt se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:0,l M octan amonný, 50:50).

Dotčené frakce se částečně odpaří a extrahují EtOAc (3x). Organická vrstva se vysuší (Na₂SO₄) a odpaří, přičemž se získá 266 mg (46 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

^•H-NMR (400 MHz, CDC1₃) : delta 7,92 (d, 3H) , 7,66 (dd, 2H) , 7,5-7,2 (m, 11H), 5,25 (s, 3H) , 4,85 (dd, 1H) , 4,52 (m,

2H) , 2,83 (t, 2H), 2,33 (m, 1H), 2,12 (m, 1H),

LC-MS (m/z) 575 (M + I)⁺.

(ii) 9-Hydroxyfluoren-9-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Pd/C (5

O.

O r

100 mg) a HOAc (9 μΐ) se přidají ke směsi 9-hydroxyfluoren-9-yl-C(O)-Aze-Pab(Z) (70 mg, 0,12 mmol, z kroku (i) výše) v EtOH (10 ml). Směs se 6 hodin hydrogenuje při teplotě a tlaku místnosti. Směs se zfiltruje přes rozsivkovou zeminu, odpaří a rozpustí ve vodě, počemž se vodný roztok lyofilizuje. Výtěžek 53 mg (88 %) · ^XH-NMR (400 MHz, D₂O) : delta 7,9-7,65 (m, 4H) , 7, 60-7, 35 (m, 8H) , 4,51 (s, 1H), 4,05 (m, 2H), 3,25 (t, 1H), 2,49 (m, 0,5H, rotamer)', 2,28 (m, 0,5H, rotamer) , 1,98-1, 84 (m, 7H, uvnitř tohoto intervalu:- 1,95, s, 3H), ¹³C-NMR (100 MHz, D₂O) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) delta 173, 4, 173, 0, 172, 6, 167, 0,

FAB-MS (m/z) 441 (M + 1)⁺.

·* ·*·Ι ► » ·

- 124 ••4« ·· ·« ¹ ♦ · 4 • · · • 444 • 4

Příklad 39

Sloučeniny pojmenované v záhlaví příkladů 1 až 12, 19 až 28, 37 a 38 (což jsou všechno sloučeniny obecného vzorce I) po zkoušení v testu A uvedeném výše vykázaly hodnotu IC₅₀ TT menší než 0,3 μΜ.

Příklad 40

Sloučeniny pojmenované v záhlaví příkladů 13 až 18 a 29 až 36 (což jsou všechno sloučeniny obecného vzorce Ia) po zkoušení v testu A uvedeném výše vykázaly hodnotu IC₅₀ TT větší než 1 μΜ.

Příklad 41

Sloučeniny pojmenované v záhlaví příkladů 13 až 18 a 29 až 36 (což jsou všechno sloučeniny obecného vzorce Ia) po zkoušení v testu E uvedeném výše vykázaly orální a/nebo parenterální biologicklou dostupnost u krysy stejnou jako odpovídající aktivní inhibitor obecného vzorce I.

Zkratky

Ac = acyl

AcOH = kyselina octová

Aze = azetidin-2-karboxylat

AzeOH = kyselina azetidin-2-karboxylová » 9 • 9

9 ♦··« • · • ··· • 9 ♦ 9 ·♦·

- 125DCC = dicyklohexylkarbodiimid

DIPEA = diisopropylethylamin

DMAP = N,N-dimethylaminopyridin

DMF = dimethylformamid

DMSO = dimethylsulfoxid

EDO - 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidhydrochlorid

Et = ethyl

Et₂O = diethylether

EtOAc = ethylacetát

EtOH = ethanol

HATU = O-(azabenzotriazol-l-yl)-Ν,Ν,Ν',N’-tetramethyluroniumhexafluorfosfát

HBTU = [N,N,Ν',N’-tetramethyl-O-(benzotriazol-l-yl)uroniumhexafluorfosfát]

HC1(plyn) = plynný chlorovodík

HOAc = kyselina octová

LC = kapalinová chromatografie

Me - methyl

9 • 9 ·

• · · 9 • ··: ·♦·· ·.

*· ·*·· * 9 • 999

-126MeOH = methanol

Pab-H = para-amidinobenzylamino

H-Pab-H = para-amidinobenzylamin

QF = tetrabutylamoniumfluorid (Bu₄NF)

RPLC = preparativní vysokoúčinná kapalinová chromatografie s reverzní fází

TBTU = [N,N,Ν’,Ν'-tetramethyl-O-(benzotriazol-l-yl)uronium tetrafluorborat]

TEA = triethylamin

Teoc = 2-(trimethylsilyl)ethoxykarbonyl

THF - tetrahydrofuran

TLC = chromatografie na tenké vrstvě

Val = L-valin

Z = benzyloxykarbonyl

Prefixy n, s, i a terč. mají své obvyklé významy: normální, iso, sekundární a terciární.

Claims (26)

1. PATENTOVÉ NÁROKY ·· ··· _ · · ♦

   1. Sloučenina obecného vzorce I (CH₂)_n-B

   Ry ve kterém

   R¹ představuje H, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku (případně substituovanou jedním nebo více substituenty zvolenými z kyanoskupiny, halogenu, OH, C(O)OR^la nebo C (0) N (R^lb) R^lc) nebo 0R^ld,

   R^ld představuje H, C(O)R^U, SiR¹²R¹³R¹⁴ nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, kterážto posledně uvedená skupina je případně substituovaná nebo ukončena jedním nebo více substituenty zvolenými z OR¹⁵ nebo (CH₂)_qR¹⁶,

   R¹², R¹³ a R¹⁴ nezávisle představují H, fenyl nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku,

   R^1S představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, fenyl, OH, C(O)OR¹⁷ nebo C(0)N(H)R¹⁸,

   R¹⁸ představuje H, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo CH₂C(O)OR¹⁹,

   R¹⁵ a R¹⁷ nezávisle představují H, alkylovou skupinu s 1 až ·· * · 9 t ·· · · *· ··*· • · • 4 ··

   - 128 _ ·· ·· * · · · • · ΐ · ‘tj:..:

   6 atomy uhlíku nebo alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylové části,

   R^la, R¹*¹, R^lc, R¹¹ a R¹⁹ nezávisle představují H nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a q představuje 0, 1 nebo 2,

   R„ představuje a strukturní fragment obecného vzorce Ha, lib nebo líc, ve kterém tečkované čáry nezávisle představují případné vazby,

   A a B nezávisle představují O nebo S, CH nebo CH₂ (jak je příhodno) , nebo N nebo N(R²¹) (jak je příhodno) ,

   D představuje -CH₂-, O, S, N(R²²), -(CH₂)₂-, -CH=CH-,

   -CH₂N(R²²)-, -N(R²²)CH₂-, -CH=N-, -N=CH-, -ch₂o-, -OCH₂-, -CH,S- nebo -SCH₂~,

   Xi představuje alkylenovou skupinu se 2 až 4 atomy uhlíku, alkylenovou skupinu se 2 nebo 3 atomy uhlíku přerušenou Z, -CÍOJ-Z-A¹, -Z-CÍO-A¹-, -CH2-C (O)-A¹, -Z-C (O)-Z-A²-, -CH2-Z-C (O) -A²-, -Z-CH2-C(0) -A²-, -Z-CH^-S (O)r(A²-, -CH₂-Z-S (0)_m-A²-, -C(O)-A³, -Z-A³- nebo -A³-Z-, ·· BB • · Β Β

   Β ·

   Β ••ΒΒ

   -129*· ΒΒΒΒ ·· Β* ·«<* _Λ ·· ΒΒ • · · · • · · · • Β · · • · · · ·· ·<

   Χ₂ představuje alkylenovou skupinu se 2 nebo 3 atomy uhlíku, -C(O)-A⁴- nebo -A⁴-C(O)-,

   X₃ představuje CH nebo N,

   X₄ představuje jednoduchou vazbu, 0, S, C(0), N(R²³), -CH(R²³)-, -CH(R²³)-CH(R²⁴) - nebo -C (R²³) =C (R²⁴)

   A¹ představuje jednoduchou vazbu nebo alkylenovou skupinu s 1 nebo 2 atomy uhlíku,

   A² představuje jednoduchou vazbu nebo -CH₂-,

   A³ představuje alkylenovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku,

   A⁴ představuje C(0) nebo alkylenovou skupinu s 1 nebo 2 atomy uhlíku,

   Z představuje při každém výskytu 0, S(0)_m nebo N(R²⁵) , m představuje při každém výskytu 0, 1 nebo 2,

   R² a R⁴ nezávisle představuje 1 nebo více případných substituentů zvolených z alkylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku (kterážto posledně uvedená skupina je případně substituována 1 nebo více halogenovými substituenty), alkoxyskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, methylendioxyskupiny, halogenu, hydroxyskupiny, kyanoskupiny, nitroskupiny, SO₂NH₂, C(O)R²⁶ nebo N(R²⁷)R²⁸, • · · ·

   -130·· · 6 ·

   R³ představuje případný substituent zvolený z OH nebo alkoxylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku,

   R²¹, R²², R²³, R²⁴, R²⁵, R²⁶, R²⁷ a R²³ nezávisle představují H nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

   Y představuje CH₂, (CH₂)₂, CH=CH, (CH₂)₃, CH₂CH=CH nebo

   CH=CHCH₂, kteréžto posledně uvedené 3 skupiny jsou případně substituovány alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, methylenovou skupinou, oxoskupinou nebo hydroxyskupinou,

   R^y představuje H nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, n představuje 0, 1, 2, 3 nebo 4 a představuje strukturní fragment obecného vzorce Ila, lib nebo líc ,31 v7

   X⁸ hix^nh, lila ve kterém

   X⁵, X⁶, X⁷ a X⁸ nezávisle představují CH, N nebo N-0,

   X⁹ a X¹⁰ nezávisle představují jednoduchou vazbu nebo CH₂ a

   - 131 R³¹ představuje případný substituent zvolený z halogenu a alkylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl, za předpokladu, že

   a) A a B nepředstavují oba 0 nebo S,

   b) B a D nepředstavují oba O nebo S,

   c) když R¹ představuje 0R^ld a Xi představuje -(Ζ(Ο)-Ζ-Α¹, -Z-CH2-S (O)m-A²-, -CH2-Z-S (0)_m-A²- nebo -Z-C (O)-Z-A^{2 *}-, pak A¹ nebo A² (jak je příhodno) nepředstavují jednoduchou vazbu a

   d) když X₄ představuje -CH(R²³)-, pak R¹ nepředstavuje OH.
2. 2. Sloučenina obecného vzorce I, podle nároku 1, ve kterém když n představuje 2 a B představuje strukturní fragment obecného vzorce Illb, pak X⁹ a X¹⁰ oba nepředstavují CH₂.
3. 3. Sloučenina obecného vzorce I, podle nároku 1 nebo 2, ve kterém R¹ představuje OH nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku (kterážto posledně uvedená skupina je případně substituována kyanoskupinou nebo OH).
4. 4. Sloučenina obecného vzorce I, podle některého z předcházejících nároků, ve kterém R_x představuje strukturní fragment obecného vzorce Ha.
5. 5. Sloučenina obecného vzorce I, podle některého z předcházej ích nároků, ve kterém když R_x představuje strukturní φφφφ • · φ φφφ · φ

   - 132 - φφ fragment obecného vzorce Ila, pak tečkované čáry představují vazby, A a B oba představují CH a D představuje -CH=CH-.
6. 6. Sloučenina obecného vzorce I, podle některého z předcházejících nároků, ve kterém když R_x představuje strukturní fragment obecného vzorce Ila, pak X_r představuje alkylen se 2 nebo 3 atomy uhlíku, -O(CH,)- nebo -O(CH₂)₂-.
7. 7. Sloučenina obecného vzorce I, podle nároku 6, ve kterém X₂ představuje alkylenovou skupinu se 3 atomy uhlíku nebo -O(CH₂)₂-.
8. 8. Sloučenina obecného vzorce I, podle některého z předchozích nároků, ve kterém Y představuje CH₂, (CH₂)₂ nebo (CHJ ₃.
9. 9. Sloučenina obecného vzorce I, podle některého z nároků 1 nebo 3 až 8, ve kterém když B představuje strukturní fragment obecného vzorce lila, pak X⁵, X⁶, X⁷ a X® všechny představují CH.
10. 10. Sloučenina obecného vzorce I, podle některého z předcházejících nároků, ve kterém když R_x představuje strukturní fragment obecného vzorce Ila a R² představuje alespoň jeden substituent, pak je bodem substituce je ten atom uhlíku, který je v pozici B.
11. 11. Sloučenina obecného vzorce I, jak je definován v některém z předcházejících nároků, ve kterém když R_x představuje strukturní fragment obecného vzorce Ila, tečkované čáry představují vazby, A a B oba představují CH, D představuje -CH=CH- a R² představuje alespoň jeden substituent, pak je kruh substituován buď na atomu uhlíku ve skupině -CH=CH- (pozice D), který sousedí s napojením • 4 4 4 4

    4 4

    44 «

    - 133 kruhu, nebo na atomu uhlíku, který je v pozici B, nebo na obou těchto místech.
12. 12. Sloučenina obecného vzorce I, podle některého z předcházejících nároků, ve kterém fragment je v S-konfiguraci.
13. 13. Farmaceutický přípravek vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle některého z nároků 1 až 12, nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl, ve směsi s farmaceuticky přijatelným adjuvanciem, ředidlem nebo nosičem.
14. 14. Sloučenina podle některého z nároků 1 až 12, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, pro použití jako léčiva.
15. 15. Sloučenina podle některého z nároků 1 až 12, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, pro použití při léčení stavu, kde je žádoucí inhibice thrombinu.
16. 16. Sloučenina podle některého z nároků 1 až 12, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, pro použití při léčení trombózy.
17. 17. Sloučenina podle některého z nároků 1 až 12, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, pro použití jako antikoagulancia.
18. 18. Sloučenina podle některého z nároků 1 až 12, nebo její • ··· • · » · · · · ·

    -134farmaceuticky přijatelná sůl, jako aktivní složka při výrobě léčiva pro léčení stavu, kde je žádoucí inhibice thrombinu.
19. 19. Použití podle nároku 18, kde stavem je trombóza.
20. 20. Použití sloučeniny podle některého z nároků 1 až 12, nebo její farmaceutiky přijatelné soli, jako aktivní složky při výrobě antikoagulancia.
21. 21. Způsob léčení stavu, při kterém je žádoucí inhibice thrombinu, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle některého z nároků 1 až 12, nebo její farmaceutiky přijatelné soli, osobě trpící takovým stavem nebo na takový stav náchylné.
22. 22. Způsob podle nároku 21, vyznačující se tím, že stavem je trombóza.
23. 23. Způsob podle nároku 21, vyznačující se tím, že stavem je hyperkoagulabilita v krvi a tkáních.
24. 24. Způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce I, v yznačující se tím, že zahrnuje:

    a) kondenzační reakci zahrnující:

    i) kondenzaci sloučeniny obecného vzorce IV,

    O

    OH

    IV • 9 9 9 · 9

    9 ·

    1359 9 9 · 9 9

    99 9 9 · · · ·

    9 99999 9 « ► 9 · · « »9 9 99 ·· 9·9 ve kterém

    R¹ a R_x mají význam definovaný v nároku 1, se sloučeninou obecného vzorce V,

    O' N-(»y.-B

    Fř ve kterém

    R^y, Y, n a B mají význam definovaný v nároku 1, nebo ii) kondenzaci sloučeniny obecného vzorce VI,

    O

    II

    VI ve kterém

    R¹, R_x a Y mají význam definovaný v nároku 1, se slučeninou obecného vzorce VII,

    H(R^y) N-(CH₂)_n-B

    VII ve kterém » · · 9 ···

    -136

    9 · · • · · 9

    9999 99 99 ··«

    9 9

    9 9 9 9

    9 9 9 9 • · 9 9

    9 9 9 9

    99 99

    R^y, n a B mají význam definovaný v nároku 1,

    b) odstranění chránící skupiny ze sloučeniny obecného vzorce la, podle nároku 25.
25. 25. Sloučenina obecného vzorce la, ia

    CT^N—(CH₂)„-B¹

    B* ve kterém

    B¹ představuje strukturní fragment obecného vzorce Illd, Hle nebo Illf ,31 ^_χ8

    X? .x¹'

    DlNr^NHD² lile

    DlhT ^NHD²

    DlhT^NHD²

    Illd

    Illf ve kterých

    D¹ a D² nezávisle představují H, OH, 0R^a, OC(O)R^b, OC(O)OR^C, C(O)OR^d, C(O)R^e, kde R^a představuje fenyl, benzyl, alkylovou skupinu s 1 až 7 atomy uhlíku (kterážto posledně jmenovaná skupina je případně přerušena atomem ·· ·· 99 ···· 99 «« • · · · 999 999· • · · 9 9 999 · 9 9 9

    9 999 99 9 999 99 9 • 9 9 9 >9999

    -137kyslíku nebo je případně substituována halogenem) nebo -C(R^f) (R^g)-OC (O) R^h,

    R^b představuje alkylovou skupinu s 1 až 17 atomy uhlíku (kterážto posledně uvedená skupina je případně substituována alkoxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, acyloxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, aminoskupinou nebo halogenem), alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 7 atomy uhlíku, fenyl, naftyl nebo alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylové části (kterýchžto posledně jmenovaných 5 skupin může být případně substituováno alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku nebo halogenem), nebo - [C (R¹) (R^j) ] _m0C (0) R^k,

    R^c představuje alkylovou skupinu s 1 až 17 atomy uhlíku, fenyl, 2-naftyl (kteréžto poslední 3 jmenované skupiny jsou případně substituovány alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku,

    Si(R^aa) (R³“³) (R^ac) nebo halogenem),

    -[C(R^m) (Rⁿ) ]nOC(O)R^p nebo -CH2-Ar¹,

    R^d představuje 2-naftyl, fenyl, alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylové části (kteréžto 3 posledně jmenované skupiny mohou být případně substituovány alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, nitroskupinou, Si (R^ta) (R^bb) (R¹³⁰) nebo halogenem), alkylovou skupinu s 1 až 12 atomy uhlíku (kterážto posledně jmenovaná skupina je případně substituována alkoxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, acyloxyskupinou s 1 až 6 atomy

    -138Φ· Φ· • · φ φ · • φ · φ φ φφφ φ φ φ φ · · φ •ΦΦ· ·Φ ··

    ΦΦ ···· • » • · · ·

    Φ· Φ· • · φ φ • φ · · φ · · φ φ φ · · φφ φφ uhlíku nebo halogenem), -C [ (R^q) (R^r) ] POC (Ο) R^s nebo -CH2-Ar²,

    R^e představuje fenyl, benzyl, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku (kterážto posledně jmenovaná skupina je případně přerušena atomem kyslíku) nebo - [C (R^fc) (R^u) ] _r0C (0) R^v,

    R^aa, R^ab, R^ac, R^to, R^bb a R^bo nezávisle představují alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo fenyl,

    R^f, R⁹, R\ R³, R”, Rⁿ, R⁹, R^r, R^b a R^u nezávisle představují H nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku,

    R^h, R^k, R^p, R^s a R^v nezávisle představují alkylovou skupinu s 1 až 17 atomy uhlíku (kterážto posledně jmenovaná skupina je případně substituována alkoxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, acyloxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku nebo halogenem), alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 7 atomy uhlíku, fenyl, naftyl nebo alkylfenyl s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylové části(kterýchžto 5 posledně uvedených skupin je případně substituováno alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku nebo halogenem),

    Ar¹ a Ar² nezávisle představují strukturní fragment

    99 9999

    9 9

    9 9

    -139·· •9 · • · · 9 ··· •9 99

    9 9 •999 m a r nezávisle představují 3 nebo 4, nap nezávisle představují 1, 2 nebo 3, a

    R¹, R_x, Y, R^Y, η, X⁵, X⁶, X⁷, X⁸, X⁹, X¹⁰ a R³¹ mají význam zde definovaný výše, nebo její farmaceuticky přijatelnou solí, za předpokladu, že D¹ a D² nepředstavují oba H.
26. 26. Sloučenina obecného vzorce la, podle nároku 25, ve kterém D¹ představuje H a D² představuje OH, OCH₃, 0C(0) R^b nebo C(O)OR^d, kde R^b a R^d mají význam definovaný v nároku