NO300504B1

NO300504B1 - Forbindelse og terapeutisk preparat omfattende denne

Info

Publication number: NO300504B1
Application number: NO920257A
Authority: NO
Inventors: Rainer Metternich
Original assignee: Sandoz Ag
Priority date: 1992-01-20
Filing date: 1992-01-20
Publication date: 1997-06-09
Also published as: NO920257L; NO920257D0

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører inhibitorer av serinproteaser som trombin, faktor Xa, kallikrein og plasmin såvel som andre serinproteaser som prolylendopeptidase og lg AI protease. Trombin som er det siste enzymet i koagulasjons-systemet, spalter oppløselig fibrinogen til fibrin som deretter fornettes og danner en uoppløselig gel som danner matrirksen for en trombe. Når et blodkar ødelegges er den ovennevnte prosedyre nødvendig for å stoppe blødningen.

Under normale forhold er der ingen målbar mengde trombin tilstede i plasma. Økning av trombinkonsentrasjonen kan resultere i dannelse av koagler som kan føre til tromboem-bolisykdom, en av de mest vanlig alvorlige medisinske pro-blemer i vår tid.

Trombin bidrar til hemostatisk kontroll ved hjelp av en rekke biologiske reaksjoner. I tillegg til sin primære funksjon, omdannelsen av fibrinogen til fibrin, aktiverer trombin faktor XIII som er ansvarlig for fornetning av fibrin. Trombin virker også ved hjelp av en positiv feed-back mekanisme som involverer aktiveringen av faktorene V og VIII, som begge er nødvendig for dets egen dannelse fra protrombin. Trombin har en annen viktig rolle: dets binding til plater initierer platefrigivelse og aggregering som er ansvarlig for primær hemostase.

Reaksjonene av trombin er ytterligere kontrollert ved naturlige inhibitorer i plasma. Den viktigste av disse er anti-trombin III og heparin. Disse to forbindelser er isolert og anvendes terapeutisk og profylaktisk ved tilstander med ubalanse i den hemostatiske mekanisme og med risiko for protrombinaktivering.

Syntetiske trombininhibitorer med oral aktivitet vil være anvendbare som alternativer til den parenterale tilførsel av disse naturlige inhibitorer. Forskning innen dette området har resultert i syntese av gode inhibitorer av trombin in vitro, men til nå er der ingen virkelig god kandidat for oral terapeutisk anvendelse. Ved å etterligne aminosyresekvenser i fibrinogen, det viktige naturlige substrat for trombin, er det dannet en rekke gode korte peptidsubstrater for trombin. Disse peptidsubstrater er også omdannet til inhibitorer av enzymet. De kromogene substrater D-Phe-Pro-Arg-pNa og D-Phe-Pip-Arg-PNA etterligner således sekvensen før bindingen som splittes ved trombin. De tilsvarende reversible og irreversible inhibitorer, D-Phe-Pro-Arginal og D-Phe~Pro-Arg-CH2Cl viser inhibering in vitro i området 10"<8>M.

Klormetylketoner er generelt alt for ikke-spesifikt reaktive til å være ideelle for terapeutisk anvendelse, og peptidalde-hydet som er eksemplifisert over har en nokså lav LD50-verdi.

Faktor Xa er det koagulasjonsenzym som er ansvarlig for dannelsen av trombin ved begrenset proteolyse av dets zymogen, protrombin. På en vekt til vekt basis er Xa minst 10 ganger mere trombogent in vivo enn trombin. Dette skyldes det faktum at faktor Xa er ett trinn over trombin i det for-sterkende kaskadesystem, slik at ett faktor Xa-molekyl kan danne en rekke trombinmolekyler fra dets forløper. Dens styrke kan også skyldes den nokså sakte fjerning av faktor Xa i kroppen. I motsetning til faktor Xa blir trombin raskt fjernet fra det sirkulerende blod til steder med høy affinitet på karveggen. Den sentrale stilling av faktor Xa i forbindelsespunktet for de intrinsiske og ekstrinsiske spor bør gjøre den til et passende mål for modulering av hemo-s tasemekani smen.

Kallikrein er dannet fra prekallikrein ved innvirkning av faktor XII når det er lokalisert på en negativt ladet over-flate. Kallikrein kan i sin tur spalte faktor XII til faktor Xlla og derved danne et resiprokt aktiveringssystem. Faktor Xlla er det første enzym i den intrinsiske del av koagula-sjonssystemet. Betydningen av kontaktsystemet er antagelig som en overflateavledet forsvarsmekanisme, og en bred aktive-ring av systemet sees normalt ved sjokk eller disseminert intravaskulær koagulasjon (DIC). Kallikreins rolle på dette trinn er å spalte kininogen med høy molekylvekt og med frigivelse av vasodilatoren bradykinin. Bradykinin gir også økt vaskulær permeabilitet, smerte og migrering av neutrofile leukocytter. Inhibitorer av kinindannelse har blitt vist til å være fordelaktige i visse typer av inflammasjon, inkluderende artritt og pankreatitt, og kan også anvendes i behandling av astma. Den eneste substans som har oppnådd klinisk signifikans som en kallikreininhibitor, er aprotinin (Trasylol). Aprotinin er et polypeptid med molekylvekt 6.500 og danner et stabilt kompleks med proteaser med en bindings-konstant på 10"<10> til 10"<13> M.

Fibrinolyse er den prosessen som gir enzymatisk oppløsning av fibrinogen og fibrinklumper. Plasma inneholder et protein, plasminogen, som under innvirkning av forskjellige aktiva-torer omdannes til plasmin, et proteolytisk enzym, hvis aktivitet ligner den for trypsin. Plasmin nedbryter fibrinogen og fibrin til fibrin/fibrinogen nedbrytningsprodukter.

Under normale forhold er fibrinolysesystemet i balanse med koagulasjonssysternet. Små tromber dannet i blodstrømmen kan oppløses enzymatisk og sirkulasjonen gjennom karene kan gjenopprettes ved aktiveringen av det fibrinolytiske system i kroppen. Dersom den fibrinolytiske aktivitet er for høy, kan dette forårsake eller forlenge blødning. Aktiviteten kan inhiberes ved hjelp av naturlige inhibitorer i blodet.

Prolylendopeptidase spalter peptidbindinger på karboksylsiden av prolinrester i en peptidkjede. Det er en serinprotease som raskt nedbryter en rekke neuropeptider inkluderende substans P, neurotensin, tyrotropin-frigivende hormon og luteniserende hormon-frigivende hormon og som er forbundet med cellens evne til å danne interleukin 2 (IL-2). Enzymet inhiberes med benzyloksykarbonyl-prolylprolinal med en Ki på 14 riM. Til tross for det faktum at omtrent ingenting er kjent om den fysiologiske rolle til prolyl-endopeptidase, kan det spille en dominerende rolle i forbindelse med regule-ringen av de biologiske aktiviteter av forskjellige neuropeptider.

Ig A proteinase-katalysert spalting av lg A, den dominerende form for antistoff som omfatter det viktigste forsvar mot infeksjon, separerer Fc fra antigen-bindings Fab-regionene i molekylet. Slik spalting ville kunne forventes til å svekke eller oppheve dets antimikrobielle aktivitet. Alle Ig A proteinaser som er identifisert spalter således etter en prolinrest innen hengselregionen i human Ig A. Peptid prolylborsyrer inhiberer Ig A 1 proteinaser fra Neisseria gonorrhea og Hemophilus influenzae noe som indikerer at disse enzymer tilhører serinprotease-familien av proteolytiske enzymer.

Den sammensatte rolle som trombin spiller i en rekke fysiologiske prosesser som er forbundet med patologiske for-styrrelser som cancer, inflammasjon og neuronal aktivitet, foreslår en potensiell anvendelse av trombininhibitorer ved en rekke indikasjoner som ikke strengt tatt er relatert til det kardiovaskulære system.

En rekke tumorceller er blitt vist til å utløse prokoagu-lerende aktivitet assosiert med trombindannelsen. Som en følge av dette skjer lokal fibrinavsetning og koagulasjon som menes å være viktig for tumorens vekst. I tillegg, på grunn av virkningen på endotelceller, kan trombin forenkle ekstra-vasering av tumorceller under metastase. Således kan trombininhibitorer vise seg å være fordelaktig ikke bare i be-handlingen av visse typer cancer, men også i forbindelse med hyperkoaguleringsevnen som ofte observeres hos pasienter i løpet av terapi med kjemoterapeutiske midler.

Trombinaktivering av endotelceller induserer en rekke pro-inflammatoriske forandringer som syntese og frigivelse av interleukin-1, prostaglandiner og plateaktiveringsfaktor. I tillegg induserer trombin eksponeringen av GMP-140 og CD63, to adhesivmolekyler som er ansvarlig for adhesjon av leukocytter til endoteloverflaten. Trombin øker også den vasku-lære permeabilitet hos proteiner, en mekanisme som involverer neutrofiler, og spalter interleukin-8 forløperproteinet, et peptid som antas å være involvert i forbindelse med respira-sjonsforstyrrelser, revmatoid artritt og ulcerøs kolitt.

Dets involvering i alle disse pro-inflammatoriske prosesser gjør trombin til et potensielt mål for den terapeutiske behandling, med trombininhibitorer av inflammasjonsrelaterte patologiske tilstander.

Aktiviteten av proteasen nexin-1, en modulator for nerveut-vikling og en spesifikk naturlig trombinantagonist, er mar-kert og spesielt nedsatt hos pasienter med Alzheimers sykdom. Dette sammen med observasjonen om at trombinlignende aktivitet var økt i hjerner med Alzheimers sykdom, foreslår at trombininhibitorer kan ha et potensiale for begrensning eller reversering av neuronale patologiske forandringer assosiert med trombin-hyperaktivitet.

Borsyrer er studert som inhibitorer for forskjellige serin-esteraser og proteaser. Den første borsyreholdig aminosyre-analog som ble anvendt som en proteaseinhibitor var borsyre-analogen av N-acetyl-L-fenylalanin, som ble anvendt som en inhibitor av chymotrypsin og subtilisin. Peptidborsyrer er blitt anvendt som inhibitorer av chymotrypsin, subtilisin og elastaser.

Interaksjonen mellom borsyrer og proteaser i biologiske systemer er kjent og forskjellige enkle borsyrer er blitt vist til å være tilstrekkelig ikke-giftige for anvendelse i mennesker. Peptidborsyre-inhibitorer av elastase er nylig blitt anvendt i dyreforsøk i forbindelse med emfysem. Til forskjell fra peptidklormetylketonene, ble det ikke rappor-tert om giftighet ved biologisk effektive dosenivåer.

EP patentsøknad 293 881 beskriver fremstillingen av peptider som omfatter C-terminale borsyrederivater av lysin, ornitin og arginin og deres anvendelse som inhibitorer av trypsin-lignende serinproteaser. De andre aminosyrene i peptidene er alle enten D- eller L-formene av de 20 naturlig forekommende aminosyrer.

Det er nå funnet at forbindelser med overlegne egenskaper som inhibitorer av trypsinlignende serinproteaser, oppnås når peptidet inneholder minst en unaturlig a-aminosyre med en hydrofob sidekjede.

Foreliggende oppfinnelse vedrører således en forbindelse som er kjennetegnet ved at den har formel I

hvor W er hydrogen eller en N-beskyttende gruppe,

Y er en sekvens på to aminosyrer hvorav den N-terminale aminosyre er en unaturlig aminosyre med formel II

hvor R11 er en gruppe med formel (c) eller (d)

og den andre aminosyren er L prolin,

Qi og Q2 representerer sammen en gruppe med formel (a)

R5 er en gruppe -A-X hvor

A er -(CH2)Z- hvor z er 2, 3, 4 eller 5, og X er -NH2 eller -NH-C(NH)-NH2, og hvor det asymmetriske karbonatom merket med <*> kan ha D-eller L-konfigurasjon, eller representere enhver blanding av disse.

Den N-beskyttende gruppe W har foretrukket formelen H(CH2CH20)p- hvori p = 3-30, R6CO-, R70C0- eller R8S02- hvori R6 er C1_6 alkyl, R7 er C1_6 alkyl, fenyl, benzyl eller naftyl, og R8 er f enyl, naftyl eller <C>1_6 alkylfenyl, hvor R7OCO-er foretrukket. De mest foretrukne beskyttende grupper er dem med formel R7'0C0- hvori R7' er tert-butyl (betegnet Boe) og hvori R7' er benzyl (betegnet Z) .

De mest foretrukne forbindelser er forbindelsen med formel

III

forbindelsen med formel IV og forbindelsen med formel V

Et peptid menes å ha en affinitet for det aktive setet i trypsin-lignende proteaser dersom det spesielle peptid har en verdi på IO"<3> M eller mindre for dissosiasjonskonstanten.

Forbindelsene med formel I hvori X er -NH-C(NH)-NH2 kan fremstilles ved at en forbindelse med formel I hvori X er -NH2 reageres med cyanamid i et organisk løsningsmiddel under sterkt sure betingelser. Forbindelsene hvori X er -NH2 kan i sin tur fremstilles ved hydrogenering av en forbindelse med formel I hvori X er -N3. Hydrogeneringen kan gjennomføres under standard betingelser ved anvendelse av f.eks. en Pd/C-katalysator.

Forbindelsene hvor X er -N3 kan fremstilles ved at en forbindelse med formel VI

hvori W, Y, Qx og Q2 er som angitt over og R12 er -A-Br hvori A er som angitt over, reageres med natriumazid i et polart aprotisk løsningsmiddel som dimetylsulfoksyd. Mellomproduktene med formel VI kan oppnås ved at en forbindelse med formel VII hvori Q- l og Q2 er som angitt over og R13 er -A-Br hvori A er som angitt over, reageres med LiN[Si (CH3)3]2, etterfulgt av hydrolyse med 3 molekvivalenter syre og kopling med et be-skyttet peptid med formel VIII

hvori W og Y er som angitt over.

Reaksjonen gjennomføres foretrukket i et tørt aprotisk polart løsningsmiddel som f.eks. tetrahydrofuran og ved en temperatur mellom -78'C og værelsestemperatur.

Mellomproduktene med formel VII kan oppnås ved hjelp av metoden etter Matteson et al, Organometallics 3 1284-8

(1984) .

Det beskyttede peptid med formel VIII kan fremstilles ved metoder som er vanlig anvendte innen peptidkjemien, med ut-gangspunkt i den ønskede unaturlige aminosyre. Slike aminosyrer er enten kommersielt tilgjengelige (f.eks. aminosyren hvori R1X er gruppen c) eller kan fremstilles ved hjelp av metoder som er analoge med dem som er beskrevet i littera-turen, f.eks. Angew. Chem. 93, 793 (1981) ogJ. Am. Chem. Soc. 109, 6881 (1987).

Forbindelsene med formel I kan anvendes som inhibitorer av trypsin-lignende proteaser og kan anvendes in vitro for diagnostiske og mekaniske studier av disse enzymer. På grunn av deres inhiberende virkning er de videre indikert for anvendelse i forebygging eller behandling av sykdommer forår-saket av et overskudd av et enzym i et regulerende system, f.eks. for å regulere koagulasjonen av fibrinolysesystemet.

Oppfinnelsen vedrører således også et terapeutisk preparat som er kjennetegnet ved at det inneholder en for-

bindelse ifølge oppfinnelsen i kombinasjon med et farma-søytisk tålbart hjelpestoff og/eller fortynningsmiddel.

De forbindelser i henhold til oppfinnelsen som er trombin-eller faktor Xa-inhibitorer har anti-trombogene egenskaper og kan anvendes når et anti-trombogent middel er nødvendig. Disse forbindelser kan generelt tilføres oralt eller parente-ralt til en vert for å oppnå en anti-trombogen virkning. I tilfellet med større pattedyr som mennesker kan forbindelsene tilføres alene eller samme med farmasøytiske bærere eller fortynningsmidler i en dose fra 0,02 til 15 mg/kg kroppsvekt og foretrukket fra 1 til 10 mg/kg kroppsvekt for å oppnå den anti-trombogene virkning, og de kan tilføres i form av en enkel dose eller i flere doser eller som en sammensetning med forlenget virkningstid. Når det skal etableres en blodkrets utenfor kroppen hos en pasient kan 0,1-1 mg/kg tilføres intravenøst. For anvendelse sammen med fullblod kan fra 1 - 10 mg pr liter blod forhindre koagulasjon. Farmasøytiske fortynningsmidler er velkjente og inkluderer sukkere, stivelser og vann som kan anvendes for fremstilling av tab-letter, kapsler, injiserbare oppløsninger og lignende. Forbindelsene i henhold til oppfinnelsen kan tilsettes til blod for å forhindre koagulasjon av blodet i beholdere anvendt for samling eller fordeling av blod, og i forbindelse med rør eller implanterbare apparater som kommer i kontakt med blod.

Fordelene med forbindelsene i henhold til oppfinnelsen inkluderer oral aktivitet, rask inntreden av aktivitet og lav giftighet. I tillegg kan disse forbindelsene ha særlig anvendelighet ved behandling av individer som er hypersensi-tive for forbindelser som heparin.

Betydningen av en rekke symboler er som følger:

Z = benzyloksykarbonyl

Boe = t-butyloksykarbonyl

Ac = acetyl

MeOH = metylalkohol

EtOAc = etylacetat

DCC = disykloheksylkarbodiimid

HONSu = N-hydroksysuccinimid

OPin = pinandiol

THF = tetrahydrofuran

n-Bu = n-butyl

Np = p-nitrofenyl

TLC = tynnsjiktkromatografi

Bzl = benzyl

Baa = -NH-CH-(CH2CH2CH2Br)B-

TMSal = trimetylsilylalanin

Adal = adamantylalanin

Naphal = 2-naftylalanin

BoroOrn = -NH-CH-(CH2CH2CH2NH2) B-

BoroArg = -NH-CH- [CH2CH2CH2NHC (NH) NH2 ] B-

Adgly = 1-adamantylglysin

BoroPro = analog av prolin hvori -COOH gruppen er OPin

erstattet med B-OPin

BoroLys = -NH-CH-(CH2-CH2-CH2-CH2-NH2) B-

BoroHArg = -NH-CH-(CH2CH2CH2CH2NHC (NH) NH2 ) B-

BoroMpg = -NH-CH-(CH2CH2CH2-OCH3) B-

p-OH-Me-Phal = p-hydroksymetyl-fenylalanin p-TBDPS-O-Me-Phal = p-tert.butyl-difenylsilyloksy-metylfenylalanin

De kinetiske parameter<e><K>i( Kon og Koff bestemmes ved inhibering av den enzymkatalyserte hydrolyse av et peptid-arg-pNa. Denne hydrolyse gir p-nitroanilin og den tidsavhengige frigivelse, som kvantifiseres ved den optiske tetthet målt ved 405 nm, og bestemmer hastighetene av inhiberte og ikke-inhiberte reaksjoner.

Kinetiske målinger gjennomføres på en plate med 96-mikro-brønner sammen med ,en kinetisk måler i form av en enkel celle. Aktivt-sete titrert humant trombin oppløses i 0,1 M fosfatbuffer, pH 7,4 inneholdende 0,1 M NaCl og 0,1 % bovint serumalbumin til en stamløsning inneholdende 400 nM aktivt enzym. For det kromogene forsøk oppløses denne oppløsningen i samme buffer til 0,4 nM. Substratet, 2AcOH-H-D-syklo-heksyl-ala-arg-pNA oppløses i den samme buffer til en konsen-trasjon på 0,5 mM. Inhibitorer oppløses først i kromofor/- etanol 1:1 og fortynnes deretter med destillert vann til en 1 mM stamløsning. Videre fortynning gjennomføres med fosfatbufferen beskrevet i det foregående.

Forsøk initieres ved å tilsetning av 100 |ll enzymoppløsning til en blanding inneholdende 100 |il inhibitor og 50 fil av en substratoppløsning. Frigivelse av p-nitroanilin fra hydrolysen av peptidyl-p-nitroanilid-substratene følges i 30 min. til 1 time ved at økningen i optisk tetthet ved 405 nm måles. De oppsamlede data anvendes for å beregne de kinetiske para-metere i nærvær og i fravær av inhibitoren. Skjønt andre virkningsmekanismer ikke utelukkes, er karakteriseringen av denne gruppen trombininhibitor begrenset til to hovedmekan-ismer som er observert, nemlig hurtig reversibel og sakte fastbindende konkurrerende inhibering. Kinetiske konstanter for de inhibitorer som viser hurtig reversibel bindings-mekanisme, nemlig hurtig binding (initial hastighet v0 for kontroll > v0 med inhibitor) ved It » Et ( total inhibitorkonsentrasjon/total enzymkonsentrasjon) beregnes ved lineær regresjon fra plot av l/v mot inhibitorkonsentrasjon [I]. K±-verdien beregnes fra den horisontale avskjæring Ki app ved ligning (1)

Dersom interaksjonen med enzymet er sakte (V0 er ikke på-virket av inhibitoren) og fast (Kx nær eller mindre enn Et) slik at den inhiberte likevektshastigheten bare sakte oppnås, er utviklingskurven for pNA-dannelse beskrevet ved hvor P er mengden dannet pNA ved tiden 'f, V0 er den ini-tiale hastighet, Vs er hastigheten ved likevekt og kobs en tilsynelatende global reaksjonshastighet som en funksjon av Et, It, Kiapp, og den observerte andre ordens hastighets-konstant (k'on) for interaksjonen mellom inhibitor og enzym. Data fra målinger av sakte fastbindende inhibering tilpasses til ligning (2) ved en ikke-lineær regresjonsanalyse som gir estimater av kobs. Verdier for k'on, koff og Ki#app oppnås deretter fra et plot kobs mot [I] . Verdien for koff er gitt ved den vertikale avskjæring, mens verdiene k'on og K.j_ beregnes fra de skrå og horisontale avskjæringer ved anvendelse av ligning (1).

Referanseeksempel 1

Boc-TMSal-Pro-NH-CH [ (CH2 ) 3N3 ] BOPin

A. Boc-D-TMSal-OH

D-TMSal etylester (21,5 g, 113,7 mMol) fremstilt i henhold til prosedyren som er gitt i Angew, Chem. 93, 793 (1981)

oppløses i CH2C12 og en oppløsning av et overskudd av Boc20 i CH2C12 tilsettes. Etter 15 timer ved romtemperatur tilsettes 500 ml iskald 0,25 N saltsyre. Det organiske lag vaskes med 5 % NaHC03 og saltvann, tørkes over Na2S04 og konsentreres i vakuum.

Råmaterialet (fargeløs olje) anvendes direkte i forsåpnings-trinnet. Det oppløses i metanol, avkjøles til 0'C, blandes med 510 ml 1 N NaOH og omrøres ved 0°C i 3 timer. Etter surgjøring til pH 1 med 1 N HC1 ekstraheres blandingen flere ganger med eter. De organiske lag kombineres, vaskes med saltvann, tørkes over Na2S04 og konsentreres i vakuum. Produktet (29,7 g olje) anvendes i det neste trinn uten ytterligere rensing.

B. Boc-D-TMSal-Pro-ONSu

Boc-D-TMSal-OH (29,7 g, 113,7 mMol) og p-nitrofenol (19,0 g, 136,3 mMol) oppløses i EtOAc. Etter avkjøling til 0'C tilsettes DCC (23,4 g, 113,6 mMol) og blandingen omrøres i 1 time ved 0'C og deretter i 15 timer ved romtemperatur. Presipitatet avfiltreres og vaskes med EtOAc og filtratet konsentreres i vakuum. Den oppnådde olje renses ved flashkromatografi (9:1 heksan/EtOAc) til å gi det ønskede Boc-D-TMSal-ONp som hvite krystaller.

Boc-D-TMSal-ONp (51,6 g, 113,7 mMol) oppløses i THF og en vandig oppløsning av ekvimolare mengder prolin og Et3N tilsettes. Etter 20 timer ved romtemperatur fjernes THF i vakuum og den vandigé rest fortynnes med vann og ekstraheres deretter flere ganger med EtOAc. pH i det vandige lag justeres til 3 ved tilsetning av 10 % sitronsyre. Det oppnådde oljeaktige produkt ekstraheres flere ganger med EtOAc. De kombinerte organiske lag vaskes med saltvann, tørkes over Na2S04 og konsentreres i vakuum. Den fargeløse olje rekrystalliseres fra eter/heksan til å gi dipeptidet Boc-D-TMSal-Pro-OH som en hvit krystallinsk forbindelse, smp: 176°C.

Det oppnådde dipeptid (26,0 g, 72,5 mMol) oppløses i EtOAc. Etter avkjøling til 0°C tilsettes HONSu (9,8 g, 85,5 mMol) og DCC (14,9 g, 72,3 mMol). Blandingen omrøres i 3 timer ved 0'C og deretter i ytterligere 15 timer ved romtemperatur. Blandingen avkjøles igjen til 0°C, dicykloheksylurea avfiltreres og vaskes flere ganger med EtOAc. Filtratet vaskes med vandig 0, 1 M Na2C03 og deretter med vandig 2 % KHS04.

Etter tørking over Na2S04 og konsentrering i vakuum oppnås Boc-D-TMSal-Pro-ONSu som et hvitt skum.

C) Boc-D-TMSal-Pro-Baa-OPin

Denne prosedyre er en 3-trinns prosedyre som gjennomføres i en og samme beholder og som omfatter in situ dannelsen av et chiralt a-(bistrimetylsilyl)amidoborat, hydrolysen av de to trimetylsilyl-gruppene og koblingen av det således dannede a-aminoborat med den aktive esteren (Boc-D-TMSal-Pro-ONSu) fremstilt i trinn B. Hele reaksjonssekvensen gjennomføres under en argonatmosf ære. Det chirale oc-klorborat ((+)-pinandiol-(S)-l-klor-4-brom-butan-l-borat) (1,75 g, 5,0 mMol) oppløses i 2,5 ml THF og tilsettes til en foravkjølt (-78"C) oppløsning av litiumheksametyldisilazan (5 ml av en 1,0 M oppløsning i heksan, 5,0 mMol). Etter omrøring i 3 0 min. ved -7 8"C oppvarmes oppløsningen over natten til romtemperatur. Etter avkjøling på nytt til -78'C tilsettes 3 molekvivalenter HC1 i dioksan. Blandingen oppvarmes til romtemperatur og omrøres i 2 timer ved denne temperatur. Etter avkjøling på nytt til -20"C tilsettes en oppløsning av den aktive esteren fra trinn B (2,28 g, 5,0 mMol) i 6 ml CH2C12 med etter-følgende tilsetning av 1,39 ml (10,0 mMol) trietylamin.

Blandingen omrøres i 1 time ved -13'C, oppvarmes til romtemperatur og omrøres i 2 timer ved denne temperatur. Blandingen filtreres, filtratet konsentreres i vakuum og resten fortynnes med eter og vaskes med 2 N HC1, 5 % NaHC03 og saltvann. Det organiske lag tørkes over Na2S04 og konsentreres i vakuum. Resten krystalliserte ved henstand til å gi det ønskede chirale peptidborat som en hvit krystallinsk forbindelse .

D) Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[ (CH2)3N3]B-OPin

Boc-D-TMSal-Pro-Baa-OPin, produktet fra trinn C (804 mg,

1,2 mMol) oppløses i 13 ml DMSO og natriumazid (156 mg,

2,4 mMol) tilsettes. Blandingen omrøres i 3 timer ved romtemperatur. Eter/isvann tilsettes og hvite krystaller presipiterer umiddelbart fra blandingen. Det hvite presipitat avfiltreres og vaskes med eter til å gi 0,6 av azidet som en hvit krystallinsk forbindelse.

Eksempel 1

Boc- D- TMSal- Pro- BoroOrn- OPin

Azidet fra ref. eks. 1 (569 mg, 0,9 mMol) oppløses i 25 ml EtOAc og hydrogeneres i nærvær av 0,5 g 10 % Pd/C. Etter 2,5 timer fjernes katalysatoren og oppløsningen konsentreres i vakuum til å gi et hvitt skum som rekrystalliseres fra EtoaC/eter til å gi det ønskede produkt som en hvit krystallinsk forbindelse, smp: 200 - 202 "C, [0c]D<20> = -11,6" (c = 0,5 1 MeOH).

Eksempel 2

Boc- D- TMSal- Pro- BoroArg- OPin ( benzensulfonat) Boc-D-TMSal-Pro-boroOrn-OPin fra eks. 1 (250 mg, 0,412 mMol) oppløses i 2 ml etanol. Benzensulfonsyre (65,2 mg, 0,412 mMol) tilsettes. Etter omrøring i 15 min. ved romtemperatur tilsettes cyanamid (86,6 mg, 2,06 mMol) og blandingen oppvarmes med tilbakeløp. Utviklingen av reaksjonen måles ved RP-TLC hvori forsvinningen av ninhydrin-flekken for amin-utgangsmaterialet og tilsynekomsten av Sakaguchi-stripen for produktet observeres. Etter 7 døgn kan amin ikke lenger påvises og oppløsningen konsentreres i vakuum. Resten opp-løses i MeOH og kromatograferes på en 5 x 55 cm Sephadex LH-2 0 kolonne med MeOH.

Det ønskede produkt oppnås som et hvitt skum,

[Cc]D<20> = -45,3" (c = 1 i CH2C12).

Referanseeksempel 2

Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH ( (CH2) 3N3) B-OPin

A) (+)-pinandiol-(S)-l-klor-5-brompentan-l-borat-4-brom-l-buten (20,8 ml, 203,3 mMol) reageres med katekolboran (24,4 g, 203,3 mMol) ved 100'C i 16 timer. Det urene produkt destilleres i vakuum til å gi 4-brombutan-l-borat som en hvit krystallinsk forbindelse. (+)-pinandiol (27,7 g, 163 mMol) oppløses i THF og det ovenfor syntetiserte 3-brombutan-l-borat (41,6 g, 163 mMol) tilsettes. Etter 1 time ved romtemperatur fjernes THF i vakuum og resten renses ved flashkromatografi (90:10 heksan/EtOAc) til å gi (+)-pinandiol-4-brombutan-1-borat som en fargeløs olje.

Det ønskede (+)-pinandiol-(S)-l-klor-5-brompentan-l-borat fremstilles i henhold til prosedyren som er gitt i Organometallics 3, 1284 (1984). Derfor avkjøles metylenklorid (9,8 ml) i THF til -100"C og n-butyllitium (71,6 ml, 1,6 M oppløs-ning, 114,5 mMol) tilsettes i løpet av 20 min. Etter 15 min. ved -100°C tilsettes en kald (-78'C) oppløsning av (+)-pinandiol-5-brompentan-l-borat (32,8 g, 104,1 mMol) i THF. Etter ytterligere 1 time ved -100'C tilsettes vannfri ZnCl2 (7,1 g, 52,0 mMol) i THF. Etter ytterligere 15 min. ved -100"C oppvarmes reaksjonsblandingen til romtemperatur og omrøres i 2 timer ved denne temperatur. Oppløsningsmidlet fjernes i vakuum, resten fortynnes med heksan/vann og ekstraheres flere ganger med heksan. Etter tørking over Na2S04 og fjerning av løsningsmidlet i vakuum, oppnås (+)-pinandiol-(S)-l-klor-5-brompentan-1-borat som en gul olje som anvendes direkte i det neste trinn uten ytterligere rensing.

B) Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH( (CH2)4Br)B-OPin

En oppløsning av LiN(SiMe3)2 (65,2 ml 1,0 M oppløsning,

65,2 mMol) i THF avkjøles til -78'C. cc-klorboratet fra trinn A) (23,7 g, 65,2 mMol) i THF tilsettes. Etter omrøring i 1 time ved -78'C omrøres blandingen i 15 timer ved romtemperatur .

Etter denne perioden avkjøles reaksjonsblandingen til -78'C, HC1 (29,8 ml 6,56 N oppløsning, 196 mMol) i dioksan tilsettes, oppløsningen omrøres i 45 min. ved -78"C og deretter i 2 timer ved romtemperatur. Blandingen avkjøles til -15"C, Boc-TMSal-Pro-ONSu (29,7 g, 65,2 mMol) fra eks. 1 i CH2C12 tilsettes før trietylamin (18,1 ml, 130,4 mMol) tilsettes for å starte koplingsreaksjonen. Etter omrøring ved -15°C i 1 time omrøres blandingen i 2 timer ved romtemperatur. Blandingen filtreres over Hyflo og konsentreres i vakuum. Resten fortynnes med eter/vann og ekstraheres flere ganger med eter. Etter tørking over Na2S04 og konsentrering i vakuum oppnås ønsket Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH ( (CH2)4Br)B-OPin etter krystallisering fra eter/heksan som en hvit krystallinsk forbindelse, smp: 74"C.

C) Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH( (CH2)4N3)B-OPin

Produktet fra trinn B) (33,3 g, 48,6 mMol) oppløses i DMSO og natriumazid (6,3 g, 97,2 mMol) tilsettes. Blandingen omrøres i 6 timer ved romtemperatur. Eter/isvann tilsettes og blandingen ekstraheres flere ganger med eter. Etter tørking over Na2S04 og konsentrering i vakuum rekrystalliseres den oppnådde olje til å gi Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH ( (CH2) 4N3 ) B-Pin som en hvit krystallinsk forbindelse,

smp: 69-70'C, aD = -74,4° (c=l,0 i MeOH).

Eksempel 3

Boe- D- TMSal- Pro- BoroLys- OPin

Azidet fra ref.eks. 2 (22,0 g, 34,0 mMol) oppløses i EtOAc og hydrogeneres i nærvær av 4,0 g 10 % Pd/C. Etter 9 timer fjernes katalysatoren og oppløsningen konsentreres i vakuum. Det oppnådde skum oppløses i EtOAc og krystalliseres til å gi ønsket Boc-D-TMSal-Pro-BoroLys-OPin som hvite krystaller, smp: 128-129°C, (XD = -59,6* (c = l,0 i MeOH).

Eksempel 4

Boc- D- TMSal- Pro- BoroHArq- OPin ( benzensulfonat) Benzensulfonatet av Boc-D-TMSal-Pro-BoroLys-OPin fra eks. 3 (800 mg, 1,03 mMol) oppløses i etanol. Cyanamid (210 mg, 5,0 mMol) tilsettes og blandingen oppvarmes med tilbakeløp. Utviklingen av reaksjonen måles ved hjelp av RP-TLC hvor forsvinningen av ninhydrin-flekken for amin-utgangsmaterialet og tilstedeværelsen av Sakaguchi-streken for produktet observeres. Etter 7 døgn■kan amin ikke lenger påvises og opp-løsningen konsentreres i vakuum. Resten oppløses i MeOH og kromatograferes på en 5 x 55 cm Sephadex LH-20 kolonne med MeOH.

Det ønskede produkt oppnås som et hvitt skum, aD = -40,8'

(c=0,5 i CH2C12) .

Eksempler 5- 10

Ved metoder som er analoge med dem som er beskrevet i eksem-plene 1-6, ble det oppnådd forbindelser med formel:

hvori <R>4, <R>5', Rn, Qx<+> Q2 og AA har betydningene som vist i den etterfølgende tabell I.

Referanseeksempel 3

Boc- D- TMSal- Pro- BoroMpq- OPin

A) (+)-pinandiol-(S)-l-klor-4-metoksybutan-l-borat-3-metoksy-l-propen (6,0 g, 83,3 mMol) reageres med katekolboran (10,0 g, 83,3 mMol) ved 100"C i 24 timer. Råprodukt destilleres i vakuum til å gi 3-metoksypropan-l-borat som en farge-løs olje. (+)-pinandiol (10,6 g, 62,5 mMol) oppløses i THF og det ovennevnte syntetiserte 3-metoksypropan-l-borat (12,0 g, 62,5 mMol) tilsettes. Etter 1 time ved romtemperatur fjernes THF i vakuum og resten renses ved flashkromatografi (80:20 heksan/EtOAc) til å gi (+)-pinandiol-3-metoksypropan-1-borat som en fargeløs olje.

Det ønskede (+)-pinandiol-(S)-l-klor-4-metoksybutan-l-borat fremstilles i henhold til prosedyren som er gitt i Organometallics 3, 1284 (1984). Metylenklorid (2,2 ml) i THF avkjøles til -100°C og n-butyllitium (13,8 ml 1,6 M oppløs-ning, 22,0 mMol) tilsettes i løpet av 20 min. Etter 15 min. ved -100"C tilsettes en oppløsning av (+)-pinandiol-3-metoksypropan-1-borat (5,04 g, 20 mMol) i THF etterfulgt av vannfri ZnCl2 (1,42 g, 10,0 mMol). Etter ytterligere 15 min. ved

-100'C oppvarmes reaksjonsblandingen til romtemperatur og

omrøres i 2 timer ved denne temperatur. Løsningsmidlet fjernes i vakuum, resten fortynnes med eter og vaskes med vann. Det organiske lag tørkes over Na2S04 og konsentreres til å gi en olje som renses ved flashkromatografi (9:1 heksan/EtOAc) til å gi det ønskede (+)-pinandiol-(S)-1-klor-4-metoksybutan-l-borat som en fargeløs olje.

B) Boc- D- TMSal- Pro- BoroMpg- OPin

En oppløsning av LiN(SiMe3)2 (5 ml 1,0 M oppløsning,

5,0 mMol) i THF avkjøles til -78 'C. (X-klorboratet fra trinn A) (1,53 g, 5,0 mMol) i THF tilsettes. Etter omrøring i 1 time ved -78°C omrøres blandingen i 15 timer ved romtemperatur. Etter denne periode avkjøles reaksjonsblandingen til

-78°C, HC1 (2,7 ml 5,65 N oppløsning, 15,0 mMol) i dioksan tilsettes, oppløsningen omrøres i 30 min. ved -78°C og deretter i 2 timer ved romtemperatur. Blandingen avkjøles til -15*C, Boc-TMSal-Pro-ONSu (2,28 g 5,0 mMol) fra ref.eks. 1 i CH2C12 tilsettes før trietylamin (1,39 ml, 10,9 mMol) tilsettes for å starte koblingsreaksjonen. Etter omrøring ved -15 "C i 1 time omrøres blandingen i 2 timer ved romtemperatur. Blandingen filtreres over Hyflo og konsentreres i vakuum. Resten fortynnes med EtOAc og vaskes med 0,2 N HC1, 5 % NaHC03 og til slutt med saltvann. Etter at opp-løsningsmidlet er fjernet oppnås en olje som renses ved flashkromatografi (EtOAc) til å gi Boc-D-TMSal-Pro-BoroMpg-OPin som et hvitt skum, aD = -48,8" (c=0,25 i CH2C12) .

Referanseeksempel 4

Boc- D-( p-( TBDPS- O) metyl) Phal- Pro- BoroOrn- OPin

A) Boc-D-(p-((1,1-dimetyletyl)difenylsilyl)oksy)metylfenyl-alanin

For selektivt å redusere azidogruppen i substratet tilsettes tiofenol (7,27 g, 66,0 mMol) til suspensjon av SnCl2 (3,12 g, 16,5 mMol) i CH2C12. Trietylamin (6,8 ml, 49,5 mMol) tilsettes og det oppnås en gul oppløsning. Boc-anhydrid (4,8 g, 22,0 mMol) tilsettes før (3 (2S), 4S-3-(2-azido-3-(p-((1,1-dimetyl)difenylsilyl)oksymetyl)fenyl-l-oksopropyl)-4(fenyl-metyl)-2-oksazolidinon (%de>95, 6,8 g, 11,0 mMol), fremstilt i henhold til prosedyren gitt i J. Am. Chem. Soc. 109 6881

(1987), tilsettes som en oppløsning i CH2C12. Etter omrøring i 2,5 timer ved romtemperatur fortynnes blandingen med EtOAc/2 N NaOH og filtreres over Hyflo. Det organiske lag vaskes med 2 % vandig NaHS04, 5 % vandig NaHC03 og til slutt med saltvann. Etter tørking over Na2S04 og konsentrering i vakuum renses den oppnådde gule olje ved flashkromatografi til å gi (3(2S),4S)-3-(2-(((tert.-butyloksy)karbonyl)-amino)-3-(p-(((1,1-dimetyletyl)difenylsilyl)oksy)metyl)fenyl-1-oksopropyl)-4-(fenylmetyl)-2-oksazolidinon som et hvitt skum. Denne forbindelse (2,0 g, 2,88 mMol) oppløses i THF/- vann og hydrolyseres med in situ dannet LiOOH (5,76 mMol) ved 0'C. Etter 1,75 timer ved 0'C tilsettes Na2S03 (1,25 g, 9,9 mMol) i vann. THF fjernes i vakuum, pH i resten justeres til 1-2 og blandingen ekstraheres 3 ganger med EtOAc. De kombinerte organiske lag vaskes med vann, tørket over Na2S04 og konsentreres i vakuum. Etter krystallisering fra heksan/eter oppnås oksazolidinonet som hvite krystaller. Filtratet konsentreres i vakuum til å gi den ønskede tittelforbindelse som et hvitt skum.

B) Boc-D-(p(((1,1-dimetyletyl)difenylsilyl)oksy)-metyl)-fenylalanin-Pro-ONSu

DCC (0,59 g, 2,88 mMol) tilsettes til en blanding av tittelforbindelsen fra trinn A) (1,6 g, 2,88 mMol) og p-nitrofenol (0,43 g, 3,12 mMol) i EtOAc ved 0'C. Reaksjonsblandingen omrøres i 16 timer ved romtemperatur. Etter avkjøling til 0'C avfiltreres presipitatet og vaskes med kald EtOAc. Filtratet konsentreres i vakuum. Den oppnådde olje (Boc-D-(p-TBDPS-O-Me)-Phal-ONp) anvendes i det neste trinn uten ytterligere rensing.

(Boc-D-(p-TBDPS-O-Me)-Phal-ONp) (2,2 g, 2,88 mMol) oppløses i THF og en vandig oppløsning av L-prolin (365 mg, 3,17 mMol) og Et3N (0,88 ml, 6,33 mMol) tilsettes. Etter 15 timer ved romtemperatur fjernes THF i vakuum. pH justeres til 3 ved tilsetning av 10 % sitronsyre. Det oppnådde oljeaktige produkt ekstraheres flere ganger med EtOAc. De kombinerte organiske lag vaskes med saltvann, tørkes over Na2S04 og konsentreres i vakuum. Den fargeløse olje renses ved flashk-

romatografi (9:1 CH2Cl2/EtOH for å eluere p-nitrofenol, deretter 80:20 CH2Cl2/EtOH) til å gi Boc-D-(p-TBDPS-O-Me)-Phal-Pro-OH som et hvitt skum. Dette dipeptid (1,3 g, 2,06 mMol) oppløses i EtOAc. Etter avkjøling til 0'C tilsettes HONSu (220 mg, 2,47 mMol) og DCC (330 mg, 2,06 mMol). Blandingen avkjøles på nytt til 0"C, dicykloheksylurea avfiltreres og vaskes flere ganger med kald EtOAc. Filtratet vaskes med vandig 0,1 M Na2C03, 8 % NaHS04 og deretter med saltvann. Etter tørking over Na2S04 og konsentrering i vakuum oppnås tittelforbindelsen Boc-D-(p-TBDPS-O-Me)-Phal-Pro-ONSu som et hvitt skum.

C) Boc-D-(p-TBDPS-O-Me)-Phal-Pro-Baa-OPin

Tittelforbindelsen oppnås ved hjelp av den 3-trinns prosedyren i en og samme beholder som er analog med den som er beskrevet for syntesen av Boc-D-TMSal-Pro-Baa-OPin i ref. eks. l/C. Mellomproduktet oc-aminoborat, som er et resultat fra reaksjonen av det chirale cc-klorborat (( + )-pinandiol-(S)-l-klor-4-brombutan-l-borat) (659 mg, 2,0 mMol) med LiN-(SiMe3)2 (2,0 mMol) og hydrolyse med HCl, reageres med den aktive ester fra trinn B) (1,45 g, 2,0 mMol) i nærvær av Et3N (4,0 mMol) til tittelforbindelsen som renses ved flashkromatografi (1:1 heksan/EtOAc).

D) Boc-D-(p-TBDPS-O-Me)-Phal-Pro-BoroOrn-OPin

Produktet fra trinn C) (680 mg, 0,72 mMol) oppløses i DMSO og natriumazid (94 mg, 1,44 mMol) tilsettes. Blandingen omrøres i 4 timer ved romtemperatur. Eter/isvann tilsettes og hvite krystaller presipiteres umiddelbart ut av blandingen. Det hvite presipitat avfiltreres og vaskes med vann til å gi Boc-D- (p-TBDPS-O-Me) -Phal-Pro-NH-CH ( (CH2) 3N3) B-OPin som en hvit krystallinsk forbindelse. Dette azid (272 mg, 0,3 mMol) oppløses i EtOAc og hydrogeneres i nærvær av en Lindlarkata-lysator. Etter 8 timer fjernes katalysatoren og oppløsningen konsentreres i vakuum. Råproduktet renses ved flashkromato-graf i (EtOAc, deretter EtOH) til å gi den ønskede tittelforbindelse som et hvitt skum, (XD = -32,4° (c = 0,25 i MeOH).

Referanseeksempel 5

Boc- D-( p- OH- Me)- Phal- Pro- BoroOrn- OPin

Borornitinet fra ref. eks. 4 (132 mg, 0,15 mMol) oppløses i THF og reageres med n-Bu4NF (0,3 ml 1,1 M oppløsning, 0,3 mMol). Etter 45 min. ved romtemperatur tilsettes isvann og den oppnådde blanding ekstraheres flere ganger med EtOAc. De kombi-nerte organiske lag tørkes over Na2S04 og konsentreres i vakuum. Den oppnådde olje renses ved kromatografi (EtOAc deretter EtOH) til å gi den ønskede tittelforbindelse som et hvitt skum, aD = -34,0' (c=0,l i MeOH).

Referanseeksempel 6

Boc- D- TMSal- Adqly- boroPro- OPin

A. L-l-Adamantylglysin

(3-(2S),4S)-3-(2-azido-2-adamant-l-yl-l-oksoetyl)-4-(fenyl-metyl)-2-oksazolidon (% de > 95, 9,86 g, 25,0 mMol), fremstilt i henhold til prosedyren som angitt i J. Am. Chem. Soc. 109, 6881 (1987), oppløses i 320 ml av en blanding av THF/H20 (3:1), avkjølt til 0'C, blandes med 4 ekvivalenter hydrogen-oksyd og 2,0 ekvivalenter LiOH. Den oppnådde blanding om-røres ved 0'C inntil substratet er oppbrukt (30 min), og peroksydet (perkarboksylat) undertrykkes ved 0°C med 10 % overskudd av 1,5 N vandig Na2S03. Etter buf f erbehandling med vandig NaHC03 (pH 9-10) ekstraheres blandingen flere ganger med EtOAc for å fjerne oksazolidinonchiral-hjelperen. Produktkarboksylsyren isoleres ved EtOAc ekstraksjon av den surgjorte (pH 1-2) vandige fase, tørkes over Na2S04 og konsentreres i vakuum. Den ønskede (S)-azidoadamant-l-yl-eddik-syre isoleres som hvite krystaller (5,29 g) og anvendes i det neste trinn uten ytterligere rensing. 2(S)-azidoadamant-1-yl-eddiksyre (5,29 g, 22,5 mMol) oppløses i 110 ml EtOH og 11,3 ml 2 N HC1 og hydrogeneres i nærvær av 0,7 g 10 % Pd/C. Etter 2,5 timer fjernes katalysatoren og oppløsningen konsentreres i vakuum til å gi den ønskede aminosyre som hydro-kloridsaltet. Det oppnådde hydroklorid suspenderes i 40 ml H20 og behandles med 1,9 g fast NaHC03. Den oppnådde aminosyre avfiltreres og vaskes flere ganger med vann. Etter tørking i vakuum oppnås L-l-adamantylglysin som en hvit krystallinsk forbindelse, [oc]D<20> = + 3,0<*> (c = 1,0 i MeOH).

B. Boc-D-TMSal-Adgly-ONSu

Boc-D-TMSal-ONp (7,71 g, 20,2 mMol) fra ref. eks. 1 oppløses i THF og en vandig oppløsning av ekvimolare mengder 1-adamantylglysin og Et3N tilsettes. Etter 20 timer ved romtemperatur fjernes THF i vakuum og den vandige rest fortynnes med 150 ml 0,1 N HC1 og ekstraheres deretter flere ganger med EtOAc. De kombinerte organiske lag vaskes med saltvann, tørkes over Na2S04 og konsentreres i vakuum. Det oljeaktige produkt kromatograferes på silikagel (CH2C12) til å gi dipeptidet Boc-D-TMSal-Adgly-OH som en olje. Boc-D-TMSal-Adgly-OH (6,9 g, 15,2 mMol) oppløses i 80 ml EtOAc. Etter avkjøling til 0"C tilsettes HONSu (2,1 g, 18,0 mMol) og DCC (3,1 g, 15,2 mMol). Blandingen omrøres i 3 timer ved 0'C og deretter i ytterligere 15 timer ved romtemperatur. Blandingen av-kjøles på nytt til 0'C, disykloheksylurea avfiltreres og vaskes med EtOAc. Filtratet vaskes med vandig 0,1 M NaHC03 og deretter med vandig 2 % KHS04. Etter tørking over Na2S04 og konsentrering i vakuum, oppnås Boc-D-TMSal-Adgly-ONSu (7,2 g) som et hvitt skum.

C. Boc-D-TMSal-Adgly-boroPro-OPin

Tittelforbindelsen oppnås ved anvendelse av den analoge tre-trinns prosedyren i en og samme beholder som beskrevet for syntesen av Boc-D-TMSal-Pro-Baa-OPin i ref. eks. l/C. På grunn av den lave aktiviteten for den sterisk hindrede aktive ester fra trinn B (2,7 g, 5,0 mMol), vil mellomproduktet a-aminoborat, som resulterer fra reaksjonen av de chirale oc-klorborat ((+)-pinandiol-(S)-l-klor-4-brombutan-l-borat)

(1,7 g, 5,0 mMol) med litiumheksametyldisilazan (5,0 mMol) og hydrolyse med HC1, syklisere til borprolinderivatet som deretter reagerer med den aktive ester fra trinn B til å gi det uventede Boc-D-TMSal-Adgly-boroPro-OPin som hoved-produktet. Flashkromatografi (2:1 heksan/EtOAc) av råproduktet gir tittelforbindelsen (0,48 g) som et hvitt skum som renses ytterligere ved rekrystallisering fra eter/heksan til å gi det ønskede produkt Boc-D-TMSal-Adgly-boroPro-OPin som en hvit krystallinsk forbindelse.

smp: 187-188'C [Ct]D<20> = +2,8° (c= 1,0 i CH2<C>12).

Claims

1. Forbindelse, karakt, erisert ved at den har formel I hvor W er hydrogen eller en N-beskyttende gruppe,• Y er en sekvens på to aminosyrer hvorav den N-terminale aminosyre er en unaturlig aminosyre med formel II hvor R11 er en gruppe med formel (c) eller (d) og den andre aminosyren er L prolin, Qi og Q2 representerer sammen en gruppe med formel (a) R5 er en gruppe -A-X hvor A er -(CH2)Z- hvor z er 2, 3, 4 eller 5, og X er -NH2 eller -NH-C(NH)-NH2, og hvor det asymmetriske karbonatom merket med <*> kan ha D-eller L-konfigurasjon, eller representere enhver blanding av disse.

2. Forbindelse som angitt i krav 1, karakterisert ved at W er H (CH2CH20) -, R6CO-, R7OCO- eller R8S02-, hvor: p =3-30, R6 = C^g alkyl, R7 = C1_6 alkyl, fenyl, benzyl eller naftyl, og R8 = fenyl, naftyl eller C1_5 alkylfenyl.

3. Forbindelse som angitt i krav 1, karakterisert ved at den har formel III:

4. Forbindelse som angitt i krav 1, karakterisert ved at den har formel IV

5. Forbindelse som angitt i krav 1, karakterisert ved at den har formel V

6. Terapeutisk preparat, karakterisert ved at det inneholder en forbindelse som angitt i krav 1 i kombinasjon med et farma-søytisk tålbart hjelpestoff og/eller fortynningsmiddel.