NO321273B1

NO321273B1 - Fremgangsmate for selektiv separering og rensing av eikosapentaen- og dokosaheksaensyrer eller deres estere

Info

Publication number: NO321273B1
Application number: NO20003335A
Authority: NO
Inventors: Satoshi Kiyohara; Shiro Fujita
Original assignee: Nisshin Pharma Inc
Priority date: 1999-06-28
Filing date: 2000-06-26
Publication date: 2006-04-10
Also published as: DE60002952D1; EP1065196A1; CA2311974A1; EP1065196B1; DK1065196T3; NO20003335L; ATE241584T1; US6313330B1; NO20003335D0; DE60002952T2

Description

Den foreliggénde oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte for selektiv separering og rensing av eikosapentaensyre og dokosaheksaensyre eller deres estere fra en blanding som omfatter en høyumettet- fettsyre eller derivatet derav.

Man kjenner høyumettede fettsyrer eller derivatene derav slik som esterne derav som. stammer fra fiskeoljer slik som oljer fra sardiner, makrellfisker, tunfisk eller lignende. Særlig eikosapentaensyre (EPA) og dokosaheksaensyre (DHA) og deres estere er blitt anvendt innen områdene helsekost og legemidler på grunn av deres farmakologiske virkninger.

De kjente fremgangsmåter for rensing av disse unettede fettsyrer eller .derivatene derav er en urea-addisjonsprosess,'

en presisjons-destillasjonsprosess, en kromatografiprosess,

en superkritisk fluid-ekstraksjonsprosess, og lignende. Disse tidligere prosesser har imidlertid individuelle problemer med hensyn til å rense en blanding som omfatter høyumettede fettsyrer eller deres derivater som stammer fra fiskeoljer, til høy renhet, uten modifikasjon, i stor mengde og ved lave omkostninger. I urea-addisjonsprosessen har den resulterende blanding omfattende høyumettede fettsyrer eller deres estere en lav grad av renhet. I presisjons-destillasjonsprosessen forekommer polymerisering og isomerisering med. lett modifikasjon av produktet og det er vanskelig å fjerne eikosatetraensyre (ETA) eller dens estere som ikke er ønskelige ved anvendelse som legemidler og næringsmidler. Videre er de kro-matografiske prosesser og superkritisk fluid-ekstraksjons-prosesser ikke egnet for- separasjon og rensing i industriell målestokk.

Japansk patent Kokai 9-151390 omhandler en fremgangsmåte

•for rensing av en høyumettet fettsyre og derivatet derav som omfatter at en blanding av høyumettede fettsyrer eller deres derivater bringes i kontakt med en bærer som bærer et sølv-salt, og med etterfølgende separasjon og ekstraksjon ved at bæreren bringes i kontakt med et løsningsmiddel. Det er beskrevet deri at silikagel, zeolitt, kaolin, aktiv kaolin, perlitt og kombinasjonen derav anvendes som en bærer. Denne publikasjonen gir imidlertid ingen henvisninger til bruken av diatoméjord og effekten oppnådd derved. Videre gir denne kjente prosess begrensninger ved at mengden bærer for sølv-saltet bør være 19 vektdeler uttrykt i sølv i forhold til 45

- 55 vektdeler av bæreren, og videre at mengden av blandingen av høyumettede fettsyrer eller deres derivater som skal bringes i kontakt med den sølvsalt-bærende bærer bør være 15 vektdeler. Avviket fra slike begrensninger resulterer i en nedsatt grad av rensing. Skjønt den kjente prosess kan separere og rense en høyumettet fettsyrekomponent til høy renhet, er der en rekke problemer i forbindelse med at en fremgangsmåte for fremstilling av den sølv-bærende bærer er komplisert og at en ekstraksjonsoperasjon som inkluderer gjentatt omrøring og filtrering er vanskelig.

Der har vært et ønske om en praktisk prosess for selektiv separasjon og rensing av ønsket EPA og DHA fra fiskeoljer inneholdende forskjellige høyumettede fettsyrer og deres derivater.

Den foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte for separering og rensing av EPA og DHA til høy renhet, som har et økt vektforhold mellom et sølvsalt og en bærer i forhold til .den tidligere kjente fremgangsmåte og som således utviser en høy prosesseringsevne, og som eliminerer innlemmelse av en sølvforbindelse.

Formålet med oppfinnelsen kan oppnås ved anvendelse av en diatoméjord som en bærer for å bære et sølvsalt, med fylling av bæreren i en kolonne, strømning av et vandig medium som inneholder sølvsaltet gjennom kolonnen for enkelt å fremstille en sølvsaltbærende bærer, og deretter strømning av et spesifikt utviklingsløsningsmiddel gjennom kolonnen.

Den foreliggende oppfinnelse tilveiebringer en fremgangsmåte for selektiv separering og rensing av eikosapentaensyre og dokosaheksensyre eller deres estere fra en blanding som omfatter en høyumettet fettsyre eller derivatet derav, som omfatter trinnene med: strømning av et vandig medium inneholdende ét sølvsalt gjennom en kolonne fylt med en bærer for å bære sølv r saltet på bæreren, strømning av en løsningsmiddeloppløsning av en blanding inneholdende den høyumettede fettsyren eller derivatet derav gjennom bæreren som bærer sølvsaltet i kolonnen, og strømning av et utviklingsløsningsmiddel gjennom kolonnen,

som er kjennetegnet ved at bæreren er en diatoméjord.

Den foreliggende oppfinnelse ifølge det ovennevnte kan effektivt separere og rense EPA og DHA fra blandingen inneholdende høyumettede fettsyrer eller derivatene derav som stammer fra fiskeoljer, og kan videre inhibere en effusjon av et sølv, idet man således forhindrer reduksjon i separa-sjons evne og innlemmelsen av sølv i et separert og renset produkt. Dessuten kan den foreliggende fremgangsmåte redusere innholdet av eikosatetraensyre (o>6 ETA) , som ikke er ønskelig i forbindelse med helsekost og legemidler, til så lavt som mulig.

Råmaterialene, en blanding omfattende høyumettede fettsyrer eller deres derivater som anvendes for. rensing i den foreliggende oppfinnelse kan inkludere, men er ikke hegrenset til, dem som stammer fra fiskeoljer slik som oljer fra sardiner, makrellfisker, tunfisk eller lignende, som inneholder høyumettede fettsyrer, f.eks. ETA, EPA eller DHA, esterderivater av disse umettede fettsyrer eller blandingene derav. Sammensetningen av råmaterialene kan variere når de stammer fra fiskeoljer. Således kan graden av separasjon eller rensing av EPA og DHA eller deres estere variere avhengig av sammensetningen av råmaterialet. Selv om flere prosent eller mere ETA er inneholdt i råmaterialet, kan den foreliggende fremgangsmåte selektivt separere og rense EPA og DHA og kan videre redusere innholdet av ETA til et spesifisert lavt nivå.

Den foreliggende oppfinnelse er kjennetegnet ved anvendelse av diatoméjord som bæreren for å bære sølvsaltet. Diatoméjorden er et fossil av en éncelleplante som er en type vannplante som propagerer både i områder med ferskvann og "vexation"-vann. En av grunnene til den selektive bruk av diatoméjord er at diatoméjordens evne til å inneholde vann er omtrent det dobbelte av evnen til andre materialer når sølvsaltet bæres på diatoméjorden i form av en oppløsning oppløst i det vandige medium. Som henvisning er evnen til å inneholde vann sammenlignet i det etterfølgende ved anvendelse av et porevolum per vektenhet (oljeabsorbsjon, ml/g).

Diatoméjorden kan vanligvis anvendes i sin ikke-kalsinerte eller kalsinerte form, men den kalsinerte jord ér foretrukket. Den kalsinerte diatoméjord kan fremstilles ved å knuse en rå-diatoméjord, tørke det knuste produkt, underkaste dette for gjentagende maling og klassifikasjonsoperasjoner for å fjerne forurensninger, kalsinering av det klassifiserte produktet ved høy temperatur og videre underkaste dette for gjentatte malings- og klassifiseringsoperasjoner for å just-ere partikkelstørrelsen. Det er foretrukket at diatoméjorden har en porestørrelse på 0,1 til 10 /tm, et spesifikt overflateareal på 0,5 - 50 m<2>/g og et porevolum på 1 - 10 ml/g for å øke evnen til å inneholde en vandig sølvsaltoppløsning og for å sikre god kontakt med høyumettede fettsyrer eller deres derivater som behandles. Det er mer foretrukket at diatoméjorden har en bulkdensitet på 0,1 - 0,3 g/ml, under hensyntaken til kolonnestørrelsen. Diatoméjorden som kan anvendes i den foreliggende oppfinnelse er kommersielt tilgjengelig, men er ikke begrenset til en spesifikk type, og et typisk eksempel derpå er "Extrelut 13076" som er tilgjengelig fra Merck Co.., Ltd.

Som sølvsaltene som skal bæres på diatoméjorden kan hvilke som helst sølvsalter anvendes dersom de kan danne et kompleks på diatoméjorden med blandingen omfattende høyumettede fettsyrer eller deres derivater. Sølvnitrat anvendes mest foretrukket, under hensyntaken til dets enkle bearbeiding og lette tilgjengelighet såvel som dets lettvinte utvinning og gjenbruk.

Det er ønskelig at mengden av sølvsaltene som bæres på diatoméjorden er høyst 65 vekt% med hensyn til sølv, foretrukket fra mere enn 55 vekt% til høyst 65 vekt%, basert på vekten av diatoméjorden, under hensyntaken til nedregule-ringen av kolonnen og den høye driftskapasitet.

Generelt, idet mengden av sølvsaltene som bæres på en for-håndsbestemt mengde av diatoméjorden øker, kan mengden av det behandlede råmaterialet, dvs. mengden av blandingen omfattende høyumettede fettsyrer eller deres derivater som behandles, økes. Fra et slikt synspunkt, kan mengden av sølvsaltet som bæres i forbindelse med den foreliggende oppfinnelse økes til maksimum 65 vekt%, som resulterer i en fordel som omfatter at mengden av råmateriale som behandles kan økes i omfattende grad.

Som en metode for å bære et sølvsalt på en bærer, omhandler Japansk patent Kokai 9-151390 en metode med å neddyppe

bæreren i en vandig oppløsning av sølvsaltet etterfulgt av tørking. Ved denne metode er det imidlertid vanskelig å kontrollere vanninnholdet. I motsetning til dette har den foreliggende oppfinnelse den fordel at bæring av sølvsaltet

på diatoméjorden lett kan oppnås ved simpelthen å la det vandige medium som inneholder'sølvsaltet, (f.eks. 50 % vandig oppløsning av sølvsaltet) strømme gjennom diatoméjorden som

er fylt i tørr form i kolonnen, f.eks. fylt i den vesentlig samme vektmengde som sølvsaltet. Det vandige medium som anvendes for sølvsaltet er vann, metanol, aceton e.l., men vann er foretrukket.

I henhold til fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kan kolonnen som er fylt med diatoméjord som bærer sølvsaltet fremstilles ved å fylle diatoméjorden i kolonnen og la det vandige medium som inneholder sølvsaltet strømme gjennom kolonnen for å opp-. nå diatoméjord som bærer sølvsaltet. Deretter blir en løs-ning smidde lopp løsning av blandingen omfattende høyumettede fettsyrer eller deres derivater som skal separeres og renses brakt i kontakt med diatoméjorden for å danne et kompleks med sølvsaltet (sølvion). Deretter utvikles kolonnen med en liten mengde av et spesifikt løsningsmiddel for selektivt å separere og rense EPA, DHA eller deres estere. Et repre-sentativt eksempel på løsningsmiddeloppløsningen av den nevnte blanding er heksanoppløsningen. De løsningsmidler som anvendes for fremstilling av nevnte oppløsning kan være identiske med utviklings-løsningsmidlene.

I forbindelse med den foreliggende oppfinnelse kan en kolonne anvendes flere ganger, og løsningsmiddeloppløsningen av blandingen som omfatter høyumettede fettsyrer eller deres derivater som skal separeres og renses kan bringes i kontakt med diatoméjorden etter at kolonnen som er fylt med diatoméjorden som bærer sølvsaltet først er blitt underkastet deplasering med heksan.

Som utviklingsløsningsmidler som kan anvendes i forbindelse med den foreliggende oppfinnelse for separering og rensing av det ønskede produkt, kan hvilke som helst løsningsmidler anvendes dersom de kan utvise høy selektivitet og ekstrak-sjonsevne med en liten mengde løsningsmiddel og kan inhibere en lekkasje av sølvsaltet, men pentan, heksan, heptan, toluen, xylen, metanol, isopropylalkohol, etylacetat eller blandingen derav er særlig foretrukne. Den type og mengde av løsningsmidler som anvendes kan passende bestemmes for å tilveiebringe optimale betingelser.

Med hensyn til ekstråksjonens selektivitet, kan ekstraktene med ulike sammensetninger oppnås ved å betjene polariteten til det utviklende løsningsmiddel. I de mest foretrukne utførelsesformer av den foreliggende oppfinnelse kan man gjennomføre en eluering ved først å anvende heksart og deretter toluen inneholdende 0,5 volum% metanol som det utviklende løsningsmiddel.

I forbindelse med den foreliggende oppfinnelse utføres ekstraksjonen ved en omgivelsestemperatur, foretrukket ved en temperatur på fra 0 °C til 3 0 °C. Dette kan tilveiebringe en stabilisert ekstrakt som har en mindre mulighet for endring ved en termisk isomerisering e.l. Ved ekstrahering erstattes atmosfæren foretrukket med en inert gass som nitrogen, argon eller lignende for å forhindre at blandingen som omfatter høyumettede fettsyrer eller deres estere utsettes for oksyda-sjon eller lignende.

I forbindelse med den foreliggende oppfinnelse er porevolumet til diatoméjorden 1-10 ml/g, noe som indikerer at mengden av det vandige medium som er inneholdt per gram av diatoméjord er fra 1 - 10 ml. Når sølv for eksempel bæres i form av en vandig sølvnitratoppløsning, danner sølvnitratet sin mettede oppløsning med vann i omtrent halv mengde basert på vekten av sølvnitrat. Følgelig anvendes kun 50 % av porevolumet til diatoméjorden selv når sølvnitrat med samme vekten som diatoméjorden er inneholdt i form av den vandige oppløsningen. Dette kan inhibere en effusjon av sølv. Det vil si at dobbelte mengder av diatoméjorden basert på det vandige medium i den vandige sølvnitratoppløsning kan anvendes, som gir ingen effusjon av sølvsaltet fra kolonnen når ekstraksjonen gjennomføres med et organisk løsningsmiddel som heksan eller lignende.

Oppfinnelsen skal videre illustreres ved hjelp av de etter-følgende eksempler og sammenligningseksempler.

Eksempel 1

En glasskolonne (2 0 mm innvendig diameter x 300 mm lengde) ble tørr-fylt med 20 g diatoméjord ("Extrelut 13 076" tilgjengelig fra Merck Co., Ltd.) med en porestørrelse på 4000 nm, et spesifikt over flateareal på 1,.01 m<2>/g, et porevolum på 1,2 ml/g og en bulkdensitet på 0,24 g/ml. En vandig oppløsning av 20 g sølvnitrat i 10 ml vann får strømme gjennom kolonnen fylt med diatoméjorden. Kolonnen fikk stå i

3 0 minutter for å oppnå at sølvsaltet bæres på diatoméjorden. Deretter får heksan strømme gjennom kolonnen for å utføre kolonne-deplasering med heksan. 10 g av et råmateriale, en etylesterblanding av en høyumettet fettsyre med den sammensetning som er vist i tabell 1 ble oppløst i 10 ml heksan for å fremstille en heksanoppløsning. Denne oppløsningen får strømme gjennom kolonnen. Kolonnen ble først utviklet med 90 ml heksan ved en lineær hastighet på 0,5 til 5,0 cm/min, et eluat ble samlet fra kolonnen og løsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk for å konsentrere eluatet, noe som gav 5,76 g (utbytte 57,6 %) av den første effluentfraksjonen. Deretter ble kolonnen utviklet med 290 ml av et toluenblandet løsningsmiddel inneholdende 0,5 volum% metanol ved en lineær hastighet på 0,5 til 5,0 cm/min, et eluat ble samlet fra kolonnen og løsnings-midlet ble fjernet under redusert trykk for å konsentrere eluatet, noe som gav 3,62 g (utbytte 3 6,2 %) av den andre effluentfraksjonen.

Kolonnen ble videre utviklet med 100 ml av et toluenblandet løsningsmiddel inneholdende 0,5 volum% metanol ved en lineær hastighet på 0,5 til 5,0 cm/min, et eluat ble samlet fra kolonnen, løsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk for å konsentrere eluatet, noe som gav 0,65 g (utbytte 6,5 %) av den tredje effluentfraksjonen. De oppnådde rensede etylestere av fettsyrer ble analysert ved hjelp av gasskrornato-grafi, med oppnåelse av de etterfølgende resultater vist i tabell 1.

Den gasskromatograf som anvendes for analysen var modell 263 - 560 produsert av Hitachi Co., Ltd. Kolonnebetingelsene er vist i det etterfølgende.

Pakket kolonne: Silar-10C Uniport, HP 80/100, 3 mm I.D.x2 m

Strømningshastighet: innstilt for å gi en EPA-retensjonstid på omtrent 20 minutter.

De ovennevnte resultater viser klart at ETA (a>6, <a3) inneholdt i råmaterialet før rensing var redusert omfattende. Videre fremgår det klart at etylesterne av EPA og DHA ble selektivt renset.

Eksempel. 2

En glasskolonne (2 0 mm innvendig diameter x 300 mm lengde) ble tørr-fylt med 20 g diatoméjord ("Extrelut 13 076" til- ' gjengelig fra Merck Co., Ltd.) med en porestørrelsé på 4000 nm, et spesifikt overflateareal på 1,01 m<2>/g, et porevolum på 1,2 ml/g og en bulkdensitet på 0,24 g/ml. En vandig oppløs-ning av 20 g sølvnitrat i 10 ml vann fikk strømme gjennom kolonnen fylt med diatoméjorden. Kolonnen fikk stå i 30 minutter for å oppnå bæring av sølvsaltet på diatoméjorden. Deretter fikk heksan strømme gjennom kolonnen for å utføre kolonne-deplasering med heksan.

10 g av et råmateriale, en etylesterblanding av en høyumettet fettsyre med den sammensetning som er vist i tabell 2 ble oppløst i 10 ml heksan for fremstilling av en heksanoppløs-ning. Denne oppløsning fikk strømme gjennom kolonnen. Kolonnen ble først utviklet ved hjelp av 90 ml heksan ved

en lineær hastighet på 0,5 til 5,0 cm/min, et eluat ble samlet fra kolonnen og løsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk for å konsentrere eluatet, noe som gav 6,76 g (utbytte 67,6 %) av den første effluentfraksjonen. Deretter ble kolonnen utviklet med 2 90 ml av et toluenblandet løs-ningsmiddel inneholdende 0,5 volum% metanol ved en lineær hastighet på 0,5 til 5,0 cm/min, et eluat ble samlet fra kolonnen og løsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk for å konsentrere eluatet, noe som gav 2,96 g (utbytte 29,6 %) av den andre effluentfraksjonen.

De oppnådde rensede etylestere av fettsyrer ble analysert ved hjelp av gasskromatografi med oppnåelse av de etterfølgende resultater som vist i tabell 2.

De ovennevnte resultater viser klart at selv om råmaterialet inneholdt EPA med høy renhet, var ETA (u6, «3) inneholdt deri før rensing redusert i omfattende grad. Videre fremgår det klart etylesteren av EPA ble selektivt renset i en utstrek-ning på 98 % eller mer, som tilfredsstiller et. nivå for lege-middel.

Eksempel 3 og sammenligninaseksempel 1

i) For eksempel 3 ble tre glasskolonner (20 mm innvendig diameter x 3 00 mm lengde) hver tørr-fylt med 20 g diatoméjord ("Extrelut 13076" tilgjengelig fra Merck Co., Ltd.) med en porestørrelse på 4 000 nm, et spesifikt overflateareal på 1,01 m<2>/g, et porevolum på 1,2 ml/g og en bulkdensitet på 0,24 g/ml. Deretter ble 14,20 g, 17,31 g og 20,42 g sølvnitrat oppløst i henholdsvis 7,1 ml, 8,7 ml og 10,2 ml vann for å fremstille vandige oppløsninger av sølvnitrat. Hver vandige oppløsning av sølvnitrat fikk strømme gjennom hver kolonne fylt med diatoméjorden. Kolonnene fikk stå

i 30 minutter for å oppnå bæring av sølvsaltet på diatoméjorden. I dette tilfellet var sølvnitratet som bæres av diatoméjorden i hver kolonne henholdsvis 45%, 55% og 65% uttrykt i sølv basert på vekten av diatoméjorden. Heksan fikk deretter strømme gjennom kolonnen for å utføre kolonne-deplasering med heksan.

ii) For sammenligningseksempel 1 ble tre glasskolonner

(20 mm innvendig diameter x 300 mm lengde) hver tørr-fylt med 20 g silikagel ("Silica gel 60 107734, tilgjengelig fra Merck CO., Ltd.) med en partikkelstørrelse på 0,063 - 0,2 mm. Deretter ble 14,20 g, 17,31 g og 20,42 g sølvnitrat oppløst

i henholdsvis 7,1 ml, 8,7 ml og 10,2 ml vann for å fremstille vandige oppløsninger av sølvnitrat. Hver vandige oppløsning av sølvnitrat fikk strømme gjennom hver kolonne fylt med silikagel. Kolonnene fikk deretter stå i 30 minutter for å oppnå at sølvsaltet bæres på silikagel. I dette tilfellet var sølvnitratet som båret på silikagelen i hver kolonne henholdsvis 45 %, 55 % og 65 % uttrykt i sølv basert på vekten av silikagelen. Deretter fikk heksan strømme gjennom kolonnen for å utføre kolonne-deplasering med heksan.

iii) 7,1 g, 8,7 g og 10,2 g av et råmateriale, en étylester-blanding av en høyumettet fettsyre med den sammensetning som er vist i tabell 1, ble oppløst i henholdsvis 7,1 ml, 8,7 ml og 10,2 ml heksan for å fremstille heksanoppløsninger. Hver heksanoppløsning fikk strømme gjennom hver kolonne. Kolonnene ble først utviklet med henholdsvis 63,9 ml, 78,3 ml og

91,8 ml heksan ved en lineær hastighet på 0,5 til 5,0 cm/min, et eluat fra kolonnen ble samlet og løsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk for å konsentrere eluatet, noe som gav de første effluentfraksjoner. Deretter ble kolonnene utviklet med 206 ml, 252 ml og 296 ml av et toluenblandet løsningsmiddel inneholdende 0,5 volum% metanol ved en lineær hastighet på 0,5 til 5,0 cm/min, et eluat fra kolonnen ble samlet og løsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk for å konsentrere eluatet, noe som gav de andre effluentfraksjoner .

Videre ble kolonnene utviklet med 71 ml, 87 ml og 102 ml

av et toluenblandet løsningsmiddel inneholdende 0,5 volum% metanol ved en lineær hastighet på 0,5 til 5,0 cm/min, et eluat fra kolonnen ble samlet og løsningsmidlet.ble fjernet under redusert trykk for å konsentrere eluatet, noe som gav de tredje effluentfraksjoner.

De rensede etylestere av fettsyrer oppnådd i de andre effluentfraksjoner ble analysert ved hjelp av gasskromatografi og de oppnådde resultater er vist i tabell 3. Som vist i tabell 3, selv om mengden sølvsalt som bæres varieres, utviste diatoméjorden som en bærer en noe høyere evne til å separere ETA (w6, w3) enn silikagelen. Hår en mettet natriumkloridoppløsning ble tilsatt til effluenten, ble effluenten fra den silikagelfylte kolonne blakket, hvor-med det ble bekreftet av sølvklorid ble dannet. Ingen endring ble imidlertid observert i effluenten fra den diatomé-jordfylte kolonne. I tilfellet av silikagelen, var mengden sølvsalt som bæres utover 45 % uttrykt i sølv, basert på vekten av bæreren, utover grensene til silikagelens evne til å holde sølvsaltet derpå, hvorved det ble bekreftet at sølv-saltet strømmet ut fra kolonnen. Ut fra dette resultatet mener man at den tidligere kjente prosess med anvendelse av silikagel som bæreren vil kreve et ytterligere trinn for separasjon av sølv, da et sølvion vil være innlemmet i effluenten etter rensing ved hjelp av kolonnen, og at kolonnens separasjonsevne var redusert på grunn av en redusert mengde sølvion inne i kolonnen.

Eksempel 4

En glasskolonne (90 mm innvendig diameter x 3 00 mm lengde) ble tørr-fylt med 500 g diatoméjord ("Extrelut 13076" tilgjengelig fra Merck Co., Ltd.) med en porestørrelse på 4000 nm, et spesifikt over flateareal på 1,01 m<2>/g, et porevolum på 1,2 ml/g og en bulkdensitet på 0,24 g/ml. En vandig oppløs-ning av 500 g sølvnitrat i 2 50 ml vann fikk strømme gjennom kolonnen fylt med diatoméjord. Kolonnen fikk deretter stå i 30 minutter for at diatoméjorden skal bære sølvsaltet. Deretter fikk heksan strømme gjennom kolonnen for å utføre kolonne-deplasering med heksan.

250 g av et råmateriale, en etylesterblanding av en høyumet-tet fettsyre med den sammensetning som er vist i tabell 4, ble oppløst i 250 ml heksan for å fremstille en heksanopp-løsning. Denne oppløsning ble strømmet gjennom kolonnen. Kolonnen ble først utviklet med 2250 ml heksan ved en lineær hastighet på 0,5 til 5,0 cm/min, og et eluat ble samlet fra kolonnen, og løsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk for å konsentrere eluatet, noe som gav 157,18 g (utbytte

62,87 %) av den første effluentfraksjonen. Deretter ble kolonnen utviklet med 7250 ml av et toluenblandet løsnings-middel inneholdende 0,5 volum% metanol ved en lineær hastighet på 0,5 til 5,0 cm/min, et eluat ble samlet fra kolonnen og løsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk for å konsentrere eluatet, noe som gir 84,93 g (utbytte 33,97 %) av den andre effluentfraksjonen.

Videre ble kolonnen utviklet med 2500 ml av et toluenblandet løsningsmiddel inneholdende 0,5 volum* metanol ved en lineær hastighet på 0,5 til 5,0 cm/min, et eluat ble samlet fra kolonnen og løsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk for å konsentrere eluatet, noe som gav 2,59 g (utbytte 1,04 %) av den tredje effluentfraksjonen. De oppnådde rensede etylestere av fettsyrer ble analysert ved hjelp av gasskromatografi og de etterfølgende resultater som vist i tabell 4 ble oppnådd.

Selv om kolonnestørreIsen økte, utviste den foreliggende prosess høy EPA- og DHA-selektivitet som i eksempel 1, og tilveiebrakte reproduserbarhet av eksempel 1 med hensyn - til kolonnelasting, mengden utviklingsløsningsmidler og utbytte av resulterende rensede fettsyrer.

Eksempel 5

En glasskolonne (60 mm innvendig diameter x 495 mm lengde) ble tørr-fylt med 400 g diatoméjord ("Extrelut 13 076" tilgjengelig fra Merck Co., Ltd.) med en porestørrelse på 4000 nm, et spesifikt overflateareal på 1,01 m<2>/g, et porevolum på 1,2 ml/g og en bulkdensitet på 0,24 g/ml. En vandig oppløsning av 400 g sølvnitrat i 2 00 ml vann fikk strømme gjennom kolonnen fylt med diatoméjorden. Kolonnen fikk stå

i 30 minutter for at diatoméjorden skulle bære sølvsaltet. Deretter fikk heksan strømme gjennom kolonnen for å utføre kolonne-deplasering med heksan.

200 g av et råmateriale, en etylesterblanding av høyumettet fettsyre med den sammensetning som er vist i tabell 5 ble oppløst i 200 ml heksan for å fremstille en heksanoppløsning. Denne oppløsning fikk strømme gjennom kolonnen. Kolonnen ble først utviklet ved hjelp av 2000 ml heksan ved en lineær hastighet på 0,5 til 5,0 cm/min, et eluat ble samlet fra kolonnen og løsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk for å konsentrere eluatet, noe som gav 114,5 g (utbytte 57,25 %) av den første effluentfraksjonen. Deretter ble kolonnen utviklet med 2000 ml av et toluenblandet løsnings-middel inneholdende 0,5 volum% metanol ved en lineær hastighet på 0,5 til 5,0 cm/min, et eluat ble samlet fra kolonnen og løsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk for å konsentrere eluatet, med oppnåelse av 29,3 g (utbytte 14,65 %) av den andre effluentfraksjonen.

Kolonnen ble deretter utviklet med 2500 ml av et toluenblandet løsningsmiddel inneholdende 0,5 volum% metanol ved en lineær hastighet på 0,5 til 5,0 cm/min, et eluat fra kolonnen ble samlet og løsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk for å konsentrere eluatet, med oppnåelse av 36,19 g (utbytte 18,10 %) av den tredje effluentfraksjonen. De oppnådde rensede etylestere av fettsyrer ble analysert ved hjelp av gasskromatografi og med oppnåelse av de etterfølgende resultater som vist i tabell 5.

Som vist i tabell 5 utviste den foreliggende fremgangsmåte høy DHA-selektivitet når den høyumettede fettsyren med et høyt innhold av DHA ble anvendt som et råmateriale, og den kunne gi en fettsyre som inneholdt DHA med høy renhet på 99 % eller høyere.

Eksempel 6

Separasjon og rensing ble utført under de samme betingelser som i eksempel 1, men hvor det toluenblandede løsningsmidlet som inneholder 0,5 volum% metanol ble erstattet med løsnings-midlene vist i tabell 6.

De rensede etylestere av fettsyrer oppnådd i den andre effluentfraksjonen ble analysert ved hjelp av gasskromatografi og med oppnåelse av de etterfølgende resultater som vist i tabell 6. De ovennevnte resultater viser klart at ETA (&>6, &>3) inneholdt i råmaterialet før rensing var redusert i omfattende grad og sammensetningen av effluent-fettsyrene varierte også avhengig av typene av utviklingsløsningsmidler fordi løs-ningsmidlenes polaritet varierte. De mest passende løsnings-middel typer og kombinasjoner derav kan bestemmes ut fra den oppnådde sammensetning og utbytte av fettsyrene e.l. i overensstemmelse med formålet.

Industriell anvendbarhet

Fremgangsmåten for separasjon og rensing av høyumettede fettsyrer eller deres derivater ifølge den foreliggende oppfinnelse er kjennetegnet ved anvendelse av diatoméjord som en bærer som har et stort porevolum, foretrukket en porestørrel-se på 0,1 - 10 fim, et spesifikt overflateareal på 0,5 - 50 m<2>/g, et porevolum på 1 - 10 ml/g og en bulkdensitet på 0,1 - 0,3 g/ml, som bærer en spesifisert mengde sølv (eller sølv-salt) inne i porene til diatoméjorden, og hvor råmaterialet som skal behandles, dvs. blandingen omfattende den høyumet-tede syren eller esterne derav, danner et kompleks med et sølvion, og videre med anvendelse av diatoméjorden som bærer sølv i kolonnen, men ikke på en batch-vis måte, og med sekvensiell strømning av små spesifiserte mengder løsnings-midler gjennom kolonnen for derved å oppnå selektiv separasjon og rensing av EPA og DHA eller esterne derav.

Den foreliggende oppfinnelse i overensstemmelse med det ovennevnte kan på en enkel måte fremstille en bærer som bærer et sølvsalt, og som kan separere og rense EPA og DHA eller esterne derav til høy renhet. Videre kan mengden løsnings-middel som anvendes i separasjonsoperasjonen reduseres, og tiden som kreves for separasjon kan reduseres. Dette kan gi omfattende reduksjon i de løpende kostnader når separasjonen utføres i industriell målestokk. Videre kan effusjon av sølv inhiberes og innlemmelsen av sølv inn i et separert og renset produkt kan forhindres.

Claims

1. Fremgangsmåte for selektiv separering og rensing av eikosapehtaen- og dokosaheksaensyrer eller deres estere fra en blanding som omfatter en høyumettet fettsyre eller derivatet derav som omfatter trinnene med: strømning av et vandig medium inneholdende et sølvsalt gjennom en kolonne fylt med en bærer for å bære sølvsaltet på bæreren, strømning av en løsningsmiddeloppløsning av en blanding inneholdende den høyumettede fettsyren eller derivatet derav gjennom bæreren som bærer sølvsaltet i kolonnen, og strømning av et utviklingsløsningsmiddel gjennom kolonnen, karakterisert ved at bæreren er en diatoméjord.

2. Fremgangsmåte som angitt i krav 1, hvori diatoméj orden har en porestørrelse på 0,1 - 10 ( im, et spesifikt overflateareal på 0,5 - 50 m<2>/g og et porevolum på 1 - 10 ml/g.

3. Fremgangsmåte som angitt i krav 1, hvori sølvsaltet som bæres er høyst 65 vekt% uttrykt i sølv, basert på vekten av di at omé jorden.

4. Fremgangsmåte som angitt i krav 1, hvori utviklings-løsningsmidlet er pentan, heksan, heptan, toluen, xylen, metanol, isopropylalkohol, etylacetat eller blandinger derav.

5. Fremgangsmåte som angitt i krav 1, hvori den høyumettede fettsyren eller derivatet derav stammer fra en fiskeolje.