JPS6137752A - 高度不飽和長鎖脂肪酸またはそのエステルの分離精製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は高度不飽和長鎖脂肪酸またはそのエステルの分
離精製法１ζ関する。さらに詳しくは、本発明はエイコ
サペンタエン酸（以下、ＥＰムと記す。）、ドコサヘキ
サエン酸（以下、Ｄ旦ムと記す。）などの高度不飽和長
鎖脂肪酸またはその低級アルキルエステルを含有する長
鎖脂肪酸またはその低級アルキルエステルの混合物から
該高度不飽和長鎖脂肪酸またはその低級アルキルエステ
ルを液体クロマトグラフィーにより分離精製する方法に
関する。

従来の技術 近年、ＥＰム、ＤＨムなどの高度不飽和長銀脂肪酸また
はそのある種のエステル、アミドなどがたとえば血栓症
予防・治療剤、コレステロール低下剤、脂質改善剤ある
いは健康食品などの有効成分として有用であることが注
目され、かかる高度不飽和長鎖脂肪酸味たはそのエステ
ルをこれを含む長鎖脂肪酸またはそのエステル混合物か
ら分離精製する方法が種々提案されている。ＥＰＡ。

ＤＨＡなどの高度不飽和長鎖脂肪酸は海産動物の油脂た
とえばイワシ、サバ、ニシン、サンマなどの休演、タラ
の肝油などに他の長鎖脂肪酸（炭素数約１２〜２４の直
鎖の飽和および不飽和の脂肪酸）とともにグリセリドの
形で含まれており、遊離の脂肪酸またはその低級アルキ
ルエステルの混合物としたのち分離精製されている。こ
の分離精製のためにクロマトグラフィーを用いることは
公知であり、下記の方法が提案されている。

系溶離液を用いる方法（特開昭５４−８４５１９号λ（
ｉ）　Ｏｓ−−アルキル基をシリカに化学結合させた逆
相分配型充填剤とテトラヒドロフランーー級アルカノー
ル（またはアセトニトリル）　−水（′！ｉたは酢酸水
溶液）系溶離液を用いる方法（特開昭５６−１１５７３
６号）。

（＃ｉ）上記の逆相分配型充填剤と１セトンーメチルア
ルフールー水系溶離液を用いる方法（特開昭５８−８８
３５９号）。

（ｆｆ）シリカゲル系または合成高分子系逆相分配クロ
マト用担体とくにオクタデシル基をシラノール結合によ
り保持しているシリカゲル系担体またはオクタデシル基
もしくはステアリル基をエステル結合により保持してい
る合成高分子系担体と水−低級アルコールー脂肪族ケト
ン（または酢酸エチル、アセトニトリルあるいはそれら
の混合物）系溶離液を用いる方法（特開昭５８−１０９
４４４号）。

発明が解決しようとする問題 前記（ｉｌの方法は繰り返し運転操作中に分離能が著し
く低下すること、銀の溶出によって製品が汚染されるこ
となどの欠点があり、また前記（ｉｌ、（ｉｌｌおよび
（ｉｖｌの方法では水を必須成分として含有する溶離液
を使用するので担持量が少なく、１回あたりの処理量が
少ないこと、流出液の濃縮、溶離液の回収・再使用Ｉζ
あたってより多くのエネルギーおよび煩雑な操作を必要
とすること、高純度製品の回収率が必ずしも満足しうる
水準にはないことなどの問題点がある。

しかして、本発明の目的は上記のごとき問題点が改善さ
れた高度不飽和長鎖脂肪酸またはその低級アルキルエス
テルの分離精製法を提供することにある。

問題点を解決するための手段 本発明によれば、上記の目的は、高度不飽和長鎖脂肪酸
またはその低級アル牛ルエステルを含有する長鎖脂肪酸
またはその低級アルキルエステルの混合物から該高度不
飽和長鎖脂肪酸またはその低級アルキルエステルを液体
クロマトグラフィーにより分離精製するに際し、モノビ
ニル芳香族モノマー単位とポリビニル芳香族七ツマ一単
位とを含む芳香族ビニル化合物系共重合体からなるカラ
ム充填剤を用いることを特徴とする高度不飽和長鎖脂肪
酸またはそのエステルの分離精製法によって達成される
。

上記芳香族ビニル化合物系共重合体からなるカラム充填
剤（以下、本発明に従うカラム充填剤と記す。）を用い
て液体クロマトグラフィーを行う場合には、水を含有し
ない溶離液を用いて目的とする分離精製を効果的に実施
することが可能であり、充填剤の繰り返し使用が可能で
あり、充填剤から溶出する成分によって製品を汚染する
ことがなく、さらに充填剤の単位体積あたりの処理量が
大きいなどの利点があり、しかも特筆すべき利点として
該カラム充填剤よりも極性が小さい溶媒を溶離液として
用いることも可能であるため、該カラム充填剤よりも極
性が小さい溶媒を溶離液とする液体クロマトグラフィー
処理（以下、これを順相クロマトグラフィーと記す。）
と該カラム充填剤よりも極性が大きい溶媒を溶離液とす
る液体クロマトグラフィー処理（以下、これを逆相クロ
マトグラフィーと記す。）とを任意の順序で組み合わせ
て実施することにより特に高純度の製品を高格 い回収率で・・・・・ることかできる。

本発明に用いるカラム充填剤はモノビニル芳香族モノマ
ーたとえばスチレン、ビニルトルエン、α−メチルスチ
レン、エチルベンゼンなどの１種またはそれ以上とポリ
ビニル芳香族モノマーたとえばジビニルベンゼン、トリ
ビニルベンゼンなどの１種またはそれ以上とを含むモノ
マー混合物を重合開始剤の存在下に懸濁重合することに
より得られる。その際、モノビニル芳香族モノマーとポ
リビニル芳香族モノマーは得られる充填剤ゲルの機械的
強度と分離性能の点から重量比６５：５５〜９０：１０
、好ましくは６５：３５〜８０　：２０の割合で用いら
れる。とくに好適なモノマー混合物の例としてスチレン
４０〜５０重量％、エチルベンゼン２５〜３０重量％お
よびジビニルベンゼン２５〜３０重量％からなる混合物
が言及される。

才た、該芳香族化合物系共重合体は上記モノマーと共重
合可能な他のモノマーたとえばアクリル酸、アクリル酸
エステル、メタクリル酸、メタクリル酸エステル、アク
リロニトリル、メタクリロニトリル、ビニルピリジン、
ビニルイミダゾール、ビニルピロリドンなどの１種また
はそれ以上から導かれるモノマー単位を本発明に従うカ
ラム充填剤の性能に対して実害を及ぼさない範囲で含ん
でいてもよい。該カラム充填剤を製造するための懸濁重
合はそれ自体公知の方法および条件を用いて行うことが
できる。たとえば、特開昭５５−８４５０５号公報に記
載の重合法に従って合成されたスチレン−ジビニルベン
ゼン共重合体ゲルで排除限界分子量約３０００のものが
好ましい。さらにクロロキルムを溶離液としてカラムに
充填し、ベンゼンを試料として求めた理論段数が２００
００段以上となる共重合体ゲルが好適である。

本発明に従う液体クロマトグラフィーにおいては、溶離
液として本発明に従うカラム充填剤よりも極性が大きい
溶媒および該カラム充填剤よりも極性が小さい溶媒のい
ずれも使用可能であり、前者（極性が大きい溶媒）の例
としてはアセトン、メチルエチルケトンなどの低級アル
キルケトン類、メタノール、エタノール、ｎ−プロパツ
ール、２−ブロパノールなどの低級アルカノール類、ア
セトニトリル、およびこれらの溶媒を２種またはそれ以
上混合したものなどが挙げられ、なかでもアセトンとメ
タノールの混合溶媒が好適であり、後者（極性が小さい
溶媒）の例としてはｎ−ペンタン、ｎ−へキサン、ｎ−
へブタン、ｎ−オクタン、イソオクタン、シクロヘキサ
ンなどの炭素数的５〜８の鎖状または環状飽和炭化水素
類、イソプロピルエーテル、エチルエーテルなどの低級
アルキルエーテル類などが挙げられ、なかでもイソオク
タンが好適である。本発明に従うカラム充填剤よりも十
分に極性が小さい有機溶媒たとえばイソオクタンならび
に該カラム充填剤よりも十分に極性が大きい有機溶媒た
とえばアセトニトリル（誘電率ε卸℃＝３７．５）、メ
タノール（相℃＝　３５．２　）などは長鎖脂肪酸また
はその低級アルキルエステルの混合物をその不飽和度に
よって分別することに役立ち、！た、本発明に従うカラ
ム充填剤よりも極性が大きく溶解度パラメーターδ（ｃ
ａｌ／ｖ）’も大なる有機溶媒たとえばメタノール（δ
＝１４．５）エタノール（ｉ２ｏ℃＝　２７．０　、δ
＝　１２．７　）、アセトニトリル（δ−１１，７）は
長鎖脂肪酸またはその低級アルキルエステルの混合物を
その炭素数によって分別することに役立つことが見い出
された。

しかして、本発明の好ましい実施態様においては、本発
明に従うカラム充填剤よりも極性が十分に小さい有機溶
媒を溶離液とする順相クロマトグラフィーと該カラム充
填剤よりも極性が十分に大きい有機溶媒を溶離液とする
逆相クロマトグラフィーとを任意の順序、好適にはこの
記載の順序で組み合わせて実施する。これにより、高度
不飽和長鎖脂肪酸またはその低級アルキルエステルをト
くニ高い純度で得ることが可能である。

本発明に従う液体クロマトグラフィーは公知の高速液体
クロマトグラフを使用し、通常の操作方法によって行う
ことができる。すなわち、本発明（ζ従うカラム充填剤
を充填した高速液体クロマトグラフィー用カラムに原料
の長鎖脂肪酸またはそ７）低級アルキルエステルの混合
物を注入し、これに前記のごとき溶離液を通液し、目的
とする高度不飽和長鎖脂肪酸またはその低級アルキルエ
ステルを主成分とする１またはそれ以上の溶出画分を分
取すればよい。用いる溶離液は予め窒素、アルゴンなど
の不活性ガス雰囲気中で加熱還流して溶存酸素を除去し
たのち使用することが製品の過酸化物価を高めないため
に望ましい。同様の趣旨で溶離液が過酸化物を含有する
場合には該過酸化物を除去したのち使用することが望ま
しい。

本発明に従う液体クロマトグラフィーに供する高度不飽
和長鎖脂肪酸またはその低級アルキルエステルを含有す
る長鎖脂肪酸またはその低級アルキルエステルの混合物
としては、たとえば炭素数が１８〜３０とくに好適には
２０〜２４でありかつ炭素−炭素間二重結合を３個以上
とくに好適には５〜７個有する高度不飽和脂肪酸肪酸冨
たはその低級アルキルエステルの２種またはそれ以上の
混合物あるいは上記のごとき高度不飽和長鎖脂肪酸！た
はその低級アルキルエステルを１種またはそれ以上含有
しさらにたとえば炭素数１２〜５０程度の飽和または低
度不飽和の長鎖脂肪酸またはその低級アルキルエステル
を１種またはそれ以上含有する任意の混合物を使用する
ことができる。

かかる混合物の代表例として前述のごとき海産動物もし
くは海藻、単細胞藻類などの海産植物の油脂を加水分解
して得られる脂肪酸混合物または該脂肪酸混合物のエス
テル化もしくは上記油脂のエステル交換反応処理などに
より得られる脂肪酸の低級アルキルエステル混合物（好
ましくはメチルエステル、エチルエステルなど）が挙げ
られる。

また、これらの脂肪酸混合物あるいは脂肪酸エステル混
合物を抽出、蒸留その他の適当な手段により処理して高
度不飽和脂肪酸またはその低級アルキルエステルの濃度
を高めたものを使用してもよい。とくに尿素処理によっ
て飽和脂肪酸、低度不飽和脂肪酸またはそれらの低級ア
ルキルエステルの含量を予め十分に低下させておくと好
都合である。

実施例 以下、本発明を実施例および参考例により詳しく説明す
る。なお、以下の記載において％は特に説明を付さない
限り重量％を意味する。また、実施例１〜４における液
体クロマトグラフィーにょる分取は装置として日本分光
株製ＴＲＩＲＯＴＡＢ　−ｎ型、試料注入器としてレオ
ダイン７１２５型、および検出器としてウエータースＲ
−４０１型示差屈折計を使用して行なった。

およびジイソプロピルパーオキシジカーボネート２．０
ｇより成る均一混合液を加えた。

フラスコを氷冷しつつラボラトリ−ダイスパーサ−（日
本精密工業製ヒスコロンＮ３−５００、約２０，０００
　ｒ、ｐｍ　）を用いて撹拌し、懸濁液を得た。

８０℃±１℃の湯浴中ζζフラスコを入れ、１．５０Ｏ
ｒ、ｐ、ｍで撹拌しつつ１０時間反応を行なった。得ら
れた共重合体ゲルを炉別し、熱水、アセトンの順で充分
洗浄したのちアセトン中に分散させて沈降速度の差を利
用して分級し、平均粒径約７μ展の共重合体ゲル５０ｇ
を得た。

参考例２ 参考例１に従って調製した共重合体ゲル１８０ｇに溶離
液として用いる溶媒９００ｍＪを加え、超音波撹拌して
均一なスラリーを得た。

内径２０ｍ、長さ５０１！ＩＩＩのプレカラムと内径２
０１１ｍ、長さ６００１ｍの本カラム（いずれもステン
レス製）を接続した。内容積１０００ｍｌのステンレス
製充填器にスラリーを注ぎ、スラリー溶媒と同一の溶媒
を送液した。順次流速を増しながら充填し、最終圧力を
８０　ｋｙ’にｄとした。

各種溶離液を用いて作製した分収用大口径カラムについ
てベンゼンを試料として求めた理論段数を表１に示す。

表　　　　１ イソオクタン　　　　　　　　　　　　　　　　　　５
，５００クロロホルム　　　　　　　　　　　　　　　
　　２６，０００アセトン／メタノール　１：１（体積
比）　　　　　１４，０００実施例１ イワシ油１０ｊにベンゼンｌＧｍ１を加えて溶解させた
のち２％塩酸−メタノール溶液１００ｍ１を加え、６５
℃で１．５時間加熱還流し、イワシ油のメチルエステル
１０ｇを得た。ガスクロマトグラフィーによるメチルエ
ステル化後の脂肪酸組成の分析値はΣＰム１４．３％、
ＤＩｉム１２．１％であった。分析条件は次に示す通り
である。

装　置：日立１６３型 検出器：ＦＩＤ カラム：　ＦＦＡＰガラスキャピラリーカラム０．９ｍ
×５’Ｉｎ カラム温度：１８０℃→２００℃　１０’Ｃ／分昇温 気化室温度＝２５０℃ 参考例１および２に従って作製したアセトンとメタノー
ルの体積比１：１の混合物を溶離液とする内径２０ｍ、
長さ６００ｍ１１の分取カラムに上記イワシ油メチルエ
ステルｚｏｏｇを注入した。カラムからの溶出液を再び
カラム上端に導くリサイクル法を用いて、第２サイクル
目でＥＰムメチルエステル画分を分取した。この時のク
ロマトグラムを第１図に示す。第１図中、１の画分がＥ
Ｐムメチルエステル画分である。得られたＥＰムメチル
エステル画分の重量は２７．７１１ｇ、ＥＦＡメチル（
含有率４５．２％）であった。同様の操作を５回行なっ
て合計１６６萼のＥＰムメチルエステル画分を得た。

次に上記のＥＰムメチルエステル画分１６６即をイソオ
クタンを溶離液とする内径２０１ｍ、長さ６００閣のカ
ラム（参考例１に従って調製した共重合体ゲルを充填さ
れている）に注入し、第２図に示すクロマトグラムのご
とく分別した。第２図中２本の点線で挾まれた部分（画
分１）を分取することにより］１ｉＦＡメチルエステル
を９３．０％含有する両分を４５．７１６得た。主たる
不純物はＤＭＡメチルエステル（含有率１．７％）であ
り、また上記２種のクロマトグラフィーによるＥＰムメ
チルエステルの回収率は２５．７％であった。

実施例２ 実施例１と同じイワシ油メチルエステル２００萼をイソ
オクタンを溶離液とする内径２０１１１１１１、長さ６
００１１１のカラム（参考例１に従って調製した共重合
体ゲルが充填されている）に注入し、第３図に示すクロ
マトグラムのごとく分別した。その結果、第６図中釜点
線で挾まれた画、分１および２としてそれぞれＩＦムメ
チルエステル画分６３．２％（ＸＰムメチルエステル含
有率５８．１％）およびＤＨＡメチルエステル画分１９
．２　Ｈ（Ｄ　Ｈムメチルエステル含有率７８．４％）
を得た。同様の操作を５回繰り返した。

次に上記操作で得られたＥＦＡメチルエステル画分１６
５．８　ｇをアセトンとメタノールの１＝１共重合体ゲ
ルを充填されている）に注入し、リサイクル法で第３サ
イクル目に純度９８．０９１６のＥＰムメチルエステル
７５．１％を得た（回収率５０．５％）。

この分別精製時の第１〜３サイクルにおける各クロマト
グラムを第４図（ａ）、（ｂ）および（０１に示す。第
４図（ａｌおよびｔｂ）において点線で挾まれた部分（
画分１ａおよび１ｂ）をそれぞれカラムにリサイクルし
、第４図（（＋１において点線で挾まれた部分（画分１
０）を分取した。

また、上記操作で得られたＤＲＡメチルエステル画分９
５．８．９をアセトンとメタノールの体積比１：１混合
物を溶離液とした上記と同様のカラムに注入し、リサイ
クル法で第２サイクル目に純度９７．９％のＤＨＡメチ
ルエステル２３．０■を得た（回収率１８．６％）。こ
のときの第１および第２サイクル目の各クロマトグラム
を第５図＋１ｈ）および（ｂ）に示す。第５図（ａ）中
の点線で挾まれた部分（画分２ａ）をカラムにリサイク
ルし、第５図（ｂ）中の点線で挾丈れた部分（画分２ｂ
）を分取した。

実施例３ 実施例１と同様のイワシ油メチルエステル１０ｇをメタ
ノール１００ｍに溶かし、２ａｇの尿素を加えて加熱溶
解したのち２８℃で４時間放置した。生成した沈澱を炉
別後１００−の水を加え、石油エーテル３００ｍ１で抽
出した。得られた脂質のＥＰＡメチルエステル含有率は
５５％であった。

この試料２００１Ｈをアセトンとメタノールの体積比１
：１混合物を溶離液とするカラム（充填剤は実施例１に
おけるそれと同様である）に注入し、リサイクル法で第
６図（＆）およびｆｂ）に示するクロマトグラムのごと
く分別した。第２サイクル目に第６図（ｂ）の点線で挾
まれた部分をＥＦＡメチルエステル画分として−２５，
４１９得た。この両分のＥＰＡメチルエステル含有率は
８０９％、回収率は３１，１％であり、主たる不純物は
０１６：１．０１８　：　２．０１８：３の不飽和脂肪
酸エステルであった。

次に上記ＢＰＡメチルエステル画分（７６，１ｇ、）を
イソオクタンを溶離液とするカラム（充填剤は上記と同
様である）に注入し、第７図に示すクロマトグラムの点
線で挾まれた部分に相当する両分を分取し、純度９９．
３％のＥＰＡメチルエステル３．４７■を得た。

実施例４ 実施例１と同様のイワシ油メチルエステル２００■をア
セトンとエタノールの体積比１：９混合物を溶離液とす
るカラム（実施例１と同様の充填剤を充填されている）
を用いて第８図に示すクロマトグラムのごとく分別した
。その結果、第８図中釜点線で挾まれた画分１および２
としてそれぞれＥＰＡメチルエステル画分３２．７■（
ＥＦＡメチルエステル含有率７４．６％）およびＤｆｉ
Ａメチルニスｆ　Ｊｌ／　画分２４．６　Ｈ（Ｄ　Ｈム
メチルエステル含有率６３．２％）を得た。同様の操作
を５回繰り返した。

上記により得られたＥＰＡメチルエステル画分１６５．
５ｇをイソオクタンを溶離液とするカラム（充填剤は上
記と同様である）に注入し、第９図に示すクロマトグラ
ムのごとく分別した。第９図中の点線で挾まれた部分全
分取することによりＥＰムメチルエステル含有率９６．
８％の両分５４．６■を得た。また上記により得られた
ＤＨＡメチルエステル画分１２２．９１９を同じくイソ
オクタンを溶離液とす、る同様のカラムに注入して第１
０図に示すクロマトグラムのごとく分別し、同図面中の
点線で挾まれた部分を分取することによりＤＭＡメチル
エステル含有率８６．４％の両分４５．ＢＩＨを得た。

上記２回のクロマトグラフィー分別による回収率はＥＰ
ムメチルエステルでは５７．５％、ＤＨＡメチルエステ
ルでは５１゜５優であった。

実施例５ 実施例１と同様のイワシ油メチルエステルを、アセトニ
トリルを溶離液とする内径１０１１１、長さ５００１１
＋１の分析用高速液体クロマトグラフィーカラム（参考
例１に従って調製した共重合体ゲルが充填されている。

）に注入し、第１１図に示すクロマトグラムを得た。Ｅ
ＰＡメチルエステル画分（第１１図中点線で挾まれた部
分）の純度は８５％であった。

発明の効果 本発明方法によれば高度不飽和長鎖脂肪酸またはその低
級アルキルエステルを含む長鎖脂肪酸またはその低級ア
ルキルエステル混合物から該高度不飽和脂肪酸またはそ
の低級アルキルエステルを高純度かつ毘い回収率で分離
精製することが可能であり、しかして本発明は用いる充
填剤が工業的に容易に入手し得るものであることと相俟
って高品質の高度不飽和長鎖脂肪酸またはその低級アル
キルエステルを比較的安価に得ることを可能とし、その
工業的意義は大きい。

【図面の簡単な説明】

添付図面第１図、第２図、第３図、第４図、第５図、第
６図、第７図、第８図、第９図、第１０図および第１１
図はいずれも実施例において得られたクロマトグラムで
ある。 庵也量（ｍ　ｌ 溶出量（ｍ） 遵↓量（ｍＡ’１ 溶北量（ｍｉｌ１ 第５図 第６図 舟出ｔ　　（ｍｉｌ 隼部量（ｍｌ） 連出ｔ　＋ｍｌ＋ 第１１図 手続補正書（自発） 特願昭５９−１６１３７４号 ２、発明の名称 高度不飽和含鎖脂肪酸またはそのエステルの分離精製法 ３補正をする者 事件との関係　　特許出願人 倉敷市酒ｔ’１ｔ１６２１番地 （１０８）株式会社　り　ラ　し 倉敷市酒津青江山２０４５の１ 株式会社　　り　　ラ　　し　　内 ６、補正の内容 （１）　　明細書第７頁第５行、第７頁第１５〜１６行
および第１３頁第１２行の「エチルベンゼン」ヲ「エチ
ルビニルベンゼン」に訂正する。 （２）　明細書第９頁最下行の［δ（ｃａｌ／ｄ］”Ｓ
を［δ（（ｃａｌ／ｗＪ）〕」に訂正スル。 （８）明細書第１３頁第５行の「レオダイン７１２５型
」を「レオダイン社（米国）製７１２５型」に訂正する
。 （４）明細書第１３頁第６〜７行の「ウエータースＲ−
４０１！１１示差屈折計」を「ウォータース社（米国）
製Ｒ−４０１１１示差屈折計ｊに訂正する。 （６）　　明細書第１３頁第１１行の「ジビニルベンゼ
ン」ヲ「シビニルペンゼｙとエチルビニルベンゼンの混
合物」に訂正する。 （６）明細書第１５頁下から第１１行の「２ｓ塩酸−メ
タノール溶液」をｒ　２％）（α−メタノール溶液」に
訂正する。 （７）明細書第１５頁下から第２行のｒＯ，９ｓｍＸ３
ｍＪをｒ　Ｑ、　９　關Ｘ　３０　ｍ　Ｊに訂正する。 （８）明細書Ｍ１７頁第５行のｒ４３．７■」をｒ４３
．７η」Ｋ訂正する。 （９）明細書第１９真下から第３行の「８０９％」を「
８０．９チ」に訂正する。 （至）第１図および第２図を別紙のとおシ訂正する。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）高度不飽和長鎖脂肪酸またはその低級アルキルエ
   ステルを含有する長鎖脂肪酸またはその低級アルキルエ
   ステルの混合物から該高度不飽和長鎖脂肪酸またはその
   低級アルキルエステルを液体クロマトグラフィーにより
   分離精製するに際し、モノビニル芳香族モノマー単位と
   ポリビニル芳香族モノマー単位とを含む芳香族ビニル化
   合物系共重合体からなるカラム充填剤を用いることを特
   徴とする高度不飽和長鎖脂肪酸またはそのエステルの分
   離精製法。
2. （２）該カラム充填剤よりも極性が小さい溶媒を溶離液
   とする液体クロマトグラフィー処理と該カラム充填剤よ
   りも極性が大きい溶媒を溶離液とする液体クロマトグラ
   フィー処理とを任意の順序で組み合わせて行う特許請求
   の範囲第１項記載の分離精製法。
3. （３）高度不飽和長鎖脂肪酸またはそのエステルがエイ
   コサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸またはそれらの
   低級アルキルエステルである特許請求の範囲第１項また
   は第２項記載の分離精製法。