JPH08218091A - 高純度の高度不飽和脂肪酸およびその誘導体の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 本発明は、魚油、海産物の油脂、肝油、など
の動植物および微生物油脂からエイコサペンタエン酸、
ドコサヘキサエン酸またはその誘導体の高純度品を大量
にかつ安価に製造する方法に関する。 【構成】 高度不飽和脂肪酸および／またはその誘導体
などの混合物を蒸留法、尿素付加法、液体クロマトグラ
フィー法、硝酸銀法、あるいはこれらの方法の組み合わ
せにより分画し高濃度に予備濃縮、分離した後、その分
画により得たエイコサペンタエン酸とドコサヘキサエン
酸とそれらの誘導体とその他の高度不飽和脂肪酸類とそ
の誘導体とのうち、少なくとも二種以上含んだ中間濃縮
混合物を原料として、連続式液体クロマト処理を行うこ
とにより、エイコサペンタエン酸とドコサヘキサエン酸
とこれら両者の誘導体とのうち、少なくとも一種以上を
高純度に分離するようにした製造方法である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、魚油、海産物の油脂、
肝油、などの動植物及び微生物油脂（以下、水産物油脂
等という）からエイコサペンタエン酸（Ｃ20:5 nー3）
（以下、ＥＰＡと略す）或はドコサヘキサエン酸（C22:
6 nー3)( 以下、ＤＨＡと略す）またはその誘導体の高純
度品を大量にかつ安価に製造する方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】ＥＰＡやＤＨＡには、血小板の擬集抑制
作用、血漿中のコレステロールや中性脂肪を低下させる
作用、抗アレルギー作用等多くの生理作用が報告され、
医薬品としてこれらまたはこれらの誘導体の高純度品を
工業的に大量にかつ安価に製造する方法の開発が望まれ
ている。

【０００３】しかしながら、通常の水産物油脂等には、
パルミチン酸（C16:0)、ステアリン酸（C18:0 ）を初め
とする飽和脂肪酸、オレイン酸（C18:1 ）、リノール酸
（C18:2 ）、リノレン酸（C18:3 ）などの不飽和度の低
い不飽和脂肪酸、さらにＥＰＡやＤＨＡを初めとするア
ラキドン酸（C20:4 nー6 ）やドコサペンタエン酸（Ｃ2
2:5）などの高度不飽和脂肪酸（以下ＰＵＦＡと略す）
も存在するため、ＥＰＡやＤＨＡまたはその誘導体を高
純度に工業的に製造するためには、技術的にもコスト的
にも容易ではなかった。

【０００４】従来からＥＰＡ、ＤＨＡまたはその誘導体
の濃縮、分離による高純度化は、蒸留法、尿素付加法、
液体クロマトグラフィー法、硝酸銀法など、あるいはこ
れらの方法の組み合わせによる方法によって行われてき
た。

【０００５】蒸留法は、脂肪酸の沸点の差を利用して分
離する方法で、常圧下で沸点まで加熱する常圧蒸留法、
減圧下で蒸留する減圧蒸留法などがある。脂肪酸または
その誘導体を常圧下で沸点まで加熱すると分解したり、
不純物の熱分解で、無色であるはずの留液が無色になら
ない場合が多いが、減圧下では不純物との沸点差が大き
くなり濃縮が容易になる。特に、液体を高真空中で加熱
し、その真空度における平均自由工程以下のところに冷
却面をおくと、蒸発した液体は蒸発より凝縮までの空間
で、他の分子と衝突することなく回収される。この原理
を用いて成分の濃縮、分離を行うものが分子蒸留法であ
る。分子蒸留装置には一般的に遠心薄膜式のものと流下
膜式のものが知られている。また、液体を高真空中で加
熱、蒸発させ、その蒸気を精留塔に導くことにより成分
の濃縮、分離を更に効率良く行なうことができる。これ
が真空精留法である。これらの蒸留法は油脂や各種ビタ
ミン類の蒸留に好適である。

【０００６】尿素付加法は、尿素が飽和脂肪酸（例えば
パルミチン酸、ステアリン酸など）や不飽和度の低い不
飽和脂肪酸と選択的に結合する性質を利用し、その結果
としてＰＵＦＡまたはその誘導体を濃縮する方法であ
る。しかし、実際にはＥＰＡ、ＤＨＡまたはその誘導体
をそれほど高純度化するまでに至らない。この従来の尿
素付加法を改良したものに「固体尿素付加法」（特開昭
５７−１６４１９６号）がある。従来の尿素付加法は、
アルコールの尿素飽和溶液を用いるため、ＰＵＦＡのよ
うに尿素と付加体を形成しない物質を得る場合、溶液側
にアルコール、尿素、ＰＵＦＡが混合物として存在し、
この中からＰＵＦＡあるいはその誘導体を回収するに
は、アルコール除去後、水洗浄あるいは抽出という工程
が必要になり、収率の低下と操作の煩雑さを招く。ま
た、従来の尿素付加法では尿素付加体から尿素を回収す
る際に、複雑な工程を経なければならないが、この工程
を簡略化しようとするのが「固体尿素付加法」である。
本分離法で用いる溶媒は、脂肪酸混合物を溶解し、尿素
と付加体を作らないで、固体尿素と均一なスラリーを作
る炭素数５〜８の脂肪酸あるいは脂環式炭化水素であ
り、尿素付加体の洗浄及び尿素付加体の解離にも同一溶
媒を用いる。

【０００７】液体クロマトグラフィー法は、使用するカ
ラム吸着剤に対する脂肪酸の親和力の差によりＰＵＦＡ
またはその誘導体を分画して高純度化する方法である。
特に、高純度のＥＰＡとＤＨＡまたはその誘導体を濃
縮、分離するのに効果的な方法として、既存の銀イオン
・クロマトグラフィー法が知られているが、その方法
は、硝酸銀含浸シリカゲルカラムの再生が困難であり、
且つ高純度のＥＰＡおよびＤＨＡまたはその誘導体を得
るのに長時間を要する欠点を有している。そこで提案さ
れたのが、「改良クロマトグラフィー法」（特開昭５６
−１１５７３６号）である。この方法は、効果的なカラ
ム充填剤と溶離液を見出し、改良したものである。ここ
で見出されたカラム充填剤は８〜２８個の炭素原子を有
するアルキル基をシリカゲルに化学結合させたものであ
る。一方、溶離液は、テトラヒドロフラン−低級アルコ
ール−酢酸水溶液系である。このような充填剤と溶離液
を用いることにより、銀イオン・クロマトグラフィー法
の場合よりＥＰＡとＤＨＡまたはその誘導体を非常に短
時間に得られるようになった。

【０００８】硝酸銀法は、銀イオンがＰＵＦＡと錯体を
形成する性質を利用したものであり、比較的容易にＥＰ
Ａ、ＤＨＡまたその誘導体を高純度化することが可能で
ある。具体的な方法としては、上述した硝酸銀含浸シリ
カゲルカラムクロマトグラフィーのように、硝酸銀を固
相に吸着、固定して利用する方法や、特開平４−１５９
６９８号や特開平４−１５４８９６号で示されているよ
うに、硝酸銀の濃厚水溶液と原料油との間の液・液分配
（抽出）により、硝酸銀を液相として利用する方法が考
案されている。

【０００９】更に、従来法を組み合わせて高純度化を試
みることも行われている。例えば、真空蒸留法と尿素付
加法の組み合わせである（特開昭５７−１８７３９７
号、特開昭５７−１４９４００号）。前者の特開昭５７
−１８７３９７号は尿素付加−真空蒸留法であり、水産
物油脂等から得られる脂肪酸混合物を先ず、尿素処理し
て、飽和脂肪酸や不飽和度の低い不飽和脂肪酸の大部分
を除去して真空蒸留を容易にすることを特徴とする分離
法である。しかし、水産物油脂等はＥＰＡやＤＨＡより
も沸点の低い飽和脂肪酸及び不飽和度の低い不飽和脂肪
酸を多量に含むため、これらの成分を前留として留去す
るには長時間を要し、且つ熱重合等の変性を起こすおそ
れがある。また、ＥＰＡやＤＨＡまたはその誘導体のみ
を単独で高純度に分離することは不可能である。

【００１０】後者の特開昭５７−１４９４００号は、真
空蒸留−尿素付加法である。これは、前記、尿素付加−
真空蒸留法の場合、原料脂肪酸混合物を直ちに尿素処理
に付するため、原料に対して尿素を１．５倍、アルコー
ルを１０倍使用する必要がある。そのため、装置が大き
くなり、生成した大量の廃棄物の再生処理が困難である
といった難点がある。そこで、真空蒸留した後、尿素処
理しようという真空蒸留−尿素付加法が提案された。こ
の方法によれば、尿素及び反応溶媒の使用量が少なくな
るだけでなく、尿素付加体精製における精製効率の低下
を抑制でき、且つ尿素付加体の濾過結晶に目的物質が付
着することによる収率低下も避けることが出来る。更
に、使用した反応溶媒の回収および尿素の再利用に際し
て大量使用の回避、並びにその回収再利用のための設備
が小型簡略化出来る利点がある。

【００１１】

【発明が解決しようとする課題】以上、最近のＥＰＡ、
ＤＨＡまたはその誘導体の濃縮、分離法について挙げて
きたが、いずれも一応それなりの効果を挙げてはいる
が、その回収効率と高純度化と経済性の両立といった点
で、まだ充分満足できる方法には至っていない。

【００１２】つまり、前記蒸留法は、水産物油脂等に含
まれている多種の脂肪酸からＥＰＡやＤＨＡ等の有効成
分を濃縮、分離するための技術として実用化している
が、炭素数の似た脂肪酸（例えば、ＥＰＡとＤＨＡの分
離）はそれらの沸点が近いため困難であり、さらに不飽
和度（二重結合の数）だけが異なる脂肪酸（例えばＥＰ
Ａとアラキドン酸、ＤＨＡとドコサペンタエン酸）の分
離はいっそう困難となる。したがって、多種類の脂肪酸
またはその誘導体の混合物である原料からＥＰＡやＤＨ
Ａまたはその誘導体を蒸留法によって高純度化すること
は容易ではない。これら蒸留法は処理量、処理温度、原
料或は製品の前処理或は後処理に要する溶媒や処理時
間、エネルギーコストに関する問題があり、原料が安価
であるにもかかわらず、製品は非常に高価なものになっ
ている。

【００１３】また、従来の尿素付加法では尿素付加体か
ら尿素を回収する際に、複雑な工程を経なければならな
い。また、実際にはＥＰＡやＤＨＡまたはその誘導体を
それほど高純度化するまでに至らない。

【００１４】更に、液体クロマトグラフィー法によれ
ば、ＥＰＡ、ＤＨＡまたはその誘導体を比較的容易に高
純度化できるが、従来より行われているバッチ式の方法
では、原料の供給が連続的に行なえず、さらにカラム吸
着剤から溶出、分画するまで溶離液を流し続ける必要が
あるため、溶離液の使用量が供給する原料の量に対して
膨大となる。さらに、カラム吸着剤の量の割には原料の
処理量が少ないため、量産化するには、大規模な設備装
置と大量の溶離液、カラム吸着剤が必要となり、製造費
は莫大なものとなる。このように液体クロマトグラフィ
ー法は、大変コストがかかる手法であり、製品の製造コ
ストはかなり高価になり工業化するには不適である。

【００１５】更にまた、硝酸銀法は、比較的容易にＥＰ
Ａ、ＤＨＡまたはその誘導体を高純度化することが可能
であるが、高価な硝酸銀が大量に必要であり、工業的な
製造方法とは言い難い。

【００１６】更にまた、蒸留法と尿素付加法の組み合わ
せについては、比較的安価に効率良くＥＰＡ、ＤＨＡま
たはその誘導体が得られ、特開昭５７−１４９４００号
に記載されているように、この方法によりＥＰＡエステ
ル純度８２％、ＤＨＡエステル純度８７％まで濃縮する
ことが可能である。しかしこの純度では医薬品としての
純度を満足できない。

【００１７】ところが、最近、液体クロマトグラフィー
の原理を応用し、液体クロマトグラフィー操作を連続化
した連続式液体クロマト処理の考え方とその装置が普及
してきた。この連続式液体クロマトグラフィーは、従来
のバッチ式液体クロマトグラフィーに比較して連続的
に原料がクロマトグラフィーカラムに供給出来ること、
使用する溶離液の量を飛躍的に減らせること、更に
カラムから製品をかなり高濃度（製品は溶離液に溶解し
た状態で取り出されるが、そのときの固形物含量が高い
という意味。したがって脱溶離液操作の負荷が軽減され
る。）で取り出せること、などの利点により従来からの
分離性能をほぼ保持したまま製品の生産性の向上と製造
コストの大幅な低減が図れる方法である。

【００１８】そこで本発明者らはＥＰＡ、ＤＨＡまたは
その誘導体の高純度化に、従来の方法と、この連続式液
体クロマトグラフィー法との組み合わせを用いることに
よって、ＥＰＡ、ＤＨＡまたはその誘導体を効率良く高
純度化でき、しかも製造コストを大幅に低減できること
を見い出した。

【００１９】

【課題を解決するための手段】特許を受けようとする第
１発明は、ＰＵＦＡおよび／またはその誘導体などの混
合物を蒸留法、尿素付加法、液体クロマトグラフィー
法、硝酸銀法、あるいはこれらの二種以上の方法の組み
合わせにより分画し高濃度に予備濃縮、分離した後、そ
の分画により得たＥＰＡとＤＨＡとこれら両者の誘導体
とその他のＰＵＦＡ類とその誘導体とのうち、少なくと
も二種以上含んだ中間濃縮混合物を原料として、連続式
液体クロマト処理を行うことによりＥＰＡとＤＨＡとこ
れら両者の誘導体とのうち、少なくとも一種以上を高純
度に分離するようにしたことを特徴とする高純度のＰＵ
ＦＡおよびその誘導体の製造方法である。

【００２０】特許を受けようとする第２発明は、連続的
液体クロマト処理が擬似移動床式クロマトグラフィーで
目的成分の分離をすることを特徴とする第１発明の製造
方法である。

【００２１】特許を受けようとする第３発明は、ＰＵＦ
Ａおよび／またはその誘導体の混合物を蒸留法、尿素付
加法、液体クロマトグラフィー法、硝酸銀法、あるいは
これらの二種以上の方法の組み合わせにより分画し高濃
度に予備濃縮、分離した後、その分画により得たＥＰＡ
とその誘導体とその他のＰＵＦＡとのうち、少なくとも
二種以上含んだ中間濃縮混合物を原料として、擬似移動
床式クロマトグラフィーで処理を行うことにより、ＥＰ
Ａとその誘導体のうち、すくなくとも一種以上を高純度
に分離するようにしたことを特徴とする高純度のＰＵＦ
Ａおよびその誘導体の製造方法である。

【００２２】特許を受けようとする第４発明は、ＰＵＦ
Ａおよび／またはその誘導体などの混合物を蒸留法、尿
素付加法、液体クロマトグラフィー法、硝酸銀法、ある
いはこれらの二種以上の方法の組み合わせにより分画し
高濃度に予備濃縮、分離した後、その分画により得たＤ
ＨＡとその誘導体とその他のＰＵＦＡ類とのうち、少な
くとも二種以上含んだ中間濃縮混合物を原料として、擬
似移動床式クロマトグラフィーで処理を行うことによ
り、ＤＨＡとその誘導体のうち、少なくとも一種以上を
高純度に分離するようにしたことを特徴とする高純度の
ＰＵＦＡおよびその誘導体の製造方法である。

【００２３】本願発明の原料であるＰＵＦＡおよび／ま
たはその誘導体などの混合物というのは、ＰＵＦＡの混
合物、その誘導体の混合物、ＰＵＦＡとその誘導体の混
合物のいずれの態様の混合物であっても良い意味であ
る。

【００２４】本発明の対象となるＥＰＡ、ＤＨＡあるい
はその誘導体製造の原料はＰＵＦＡを多く含む油脂が望
ましく、たとえばイワシ、サバ、カツオ、マグロ等の魚
類やオキアミ、エビ、カニ等の甲殻類、ノリ、ワカメ等
の藻類などから抽出、調製した水産物油脂が代表的であ
るが原料はこれらに限られるものではない。

【００２５】この抽出油脂をケン化或いは誘導体化し遊
離脂肪酸或いは脂肪酸誘導体とする。ケン化法としては
リパーゼを用いた酵素法、水酸化ナトリウム、水酸化カ
リウム等のアルカリ水溶液やアルカリ性アルコールを用
いたアルカリケン化法など任意の方法で行うことができ
る。

【００２６】ＥＰＡとＤＨＡの誘導体としては、通常エ
チルエステル、メチルエステル、アミン、アミドなどが
挙げられるが、これらに限られるものではない。

【００２７】得られた遊離脂肪酸或いは脂肪酸誘導体を
予備濃縮することにより、中間濃縮混合物が得られる。
予備濃縮法として、蒸留法、尿素付加法、液体クロマト
グラフィー法、硝酸銀法など、従来行われているいかな
る方法を用いることもできるが、製造コストの点から蒸
留法、或いは尿素付加法を用いることが好ましい。

【００２８】中間濃縮混合物というのは、最終的に得よ
うとしている目的成分が、原料より高濃度に含まれてい
る状態に濃縮された混合物のことを言う。第１発明、第
２発明の場合、この予備濃縮を行うことにより、ＥＰＡ
とＤＨＡとこれら両者の誘導体とその他のＰＵＦＡとそ
の誘導体とのうち、少なくとも二種以上含んだ中間濃縮
混合物が得られるようにする。第３発明の場合、この予
備濃縮を行うことにより、その分画により得たＥＰＡと
その誘導体とその他のＰＵＦＡ類とその誘導体とのう
ち、少なくとも二種以上含んだ中間濃縮混合物が得られ
るようにする。第４発明の場合、この予備濃縮を行うこ
とにより、その分画により得たＤＨＡとその誘導体とそ
の他のＰＵＦＡ類とその誘導体とのうち、少なくとも二
種以上含んだ中間濃縮混合物が得られるようにする。

【００２９】次いで、中間濃縮混合物を連続式液体クロ
マトグラフィーで処理することにより、高純度の目的成
分が分離して得られるようにする。分離して得られる高
純度の目的成分というのは、次のようなものである。第
１発明、第２発明は、中間濃縮混合物を連続式液体クロ
マト処理することにより、ＥＰＡとＤＨＡとこれら両者
の誘導体とのうち、少なくとも一種以上を高純度に分離
した製品を得る。第３発明は、中間濃縮混合物を連続式
液体クロマトグラフィーで処理することにより、ＥＰＡ
とその誘導体のうち、少なくとも一種以上を高純度に分
離した製品を得る。第４発明は、中間濃縮混合物を連続
式液体クロマトグラフィーで処理することにより、ＤＨ
Ａとその誘導体のうち、少なくとも一種以上を高純度に
分離した製品を得る。

【００３０】次に、連続式液体クロマトグラフィーにつ
いて詳しく説明する。連続式液体クロマトグラフィーと
しては、現在、擬似移動床式クロマトグラフィーの原理
に基づいた装置が代表的である。先ほどの連続式液体ク
ロマトグラフィーのところでも述べたが、擬似移動床式
クロマトグラフィーは、原料を連続的に供給しながらカ
ラム吸着剤の層に形成される各画分の分布を定常状態に
保つことにより目的成分であるＥＰＡ、ＤＨＡまたはそ
の誘導体を連続的に取り出すことができる。そのため従
来のバッチ式液体クロマトグラフィーに比べ飛躍的に原
料の処理量が増し、また、溶離液の使用量も飛躍的に減
少させることが出来る。尚、擬似移動床式クロマトグラ
フィー装置としては、一度の分離操作で２画分に分ける
方式の擬似移動床式分離装置でも、一度の分離操作で３
つ以上に分画する方式の擬似移動床式多成分分離装置で
もよい。また、最近開発された２成分分離モードと３成
分分離モードを切り換え可能な擬似移動床式小型分取装
置であっても良い。

【００３１】カラム吸着剤（充填剤）としては、シリカ
ゲル、化学修飾シリカゲル（例えばＯＤＳシリカゲ
ル）、硝酸銀含浸シリカゲル、ポリマーゲルなどが使用
でき、溶離液としては、ヘキサン、メタノール、水、ア
セトン、アセトニトリルなどが使用でき、一般に液体ク
ロマトグラフィーに使用されている充填剤と溶離液の組
み合わせが可能である。

【００３２】以上の操作により、例えばマグロ油エチル
エステルを原料としてＤＨＡエチルエステルを高純度化
する場合、まず遠心薄膜式蒸留機を用いてＤＨＡエチル
エステルを純度６０％位まで予備濃縮し、さらに連続式
液体クロマトグラフィーで処理することにより通常純度
９５％以上の任意の濃度まで高純度化することが可能で
ある。これを従来のバッチ式の液体クロマト装置を用い
た場合と比較すると、その原料の処理量は単位時間当た
り３倍以上に向上し、さらに溶離液の使用量は１／３０
以下に減らすことが可能になり、従来のバッチ式液体ク
ロマトグラフィーによる製造の問題点を完全に解決する
ことが出来る。

【００３３】尚、第１発明、第２発明によりＥＰＡおよ
びＤＨＡ以外のＰＵＦＡ（例えばアラキドン酸、ドコサ
ペンタエン酸など）とその誘導体の高純度化も可能であ
る。

【００３４】

【実施例】以下、本発明の実施例について説明する。

【００３５】＜実施例１＞マグロ油のエチルエステル
（ＤＨＡエチルエステル２４．６％含有）を遠心薄膜式
分子蒸留機により下記の条件で蒸留した。 ｛条件｝ 原料（マグロ油のエチルエステル）；１０ｋｇ 真空度； ０．００４torr 蒸留温度；１３０℃、１５０℃、１６０℃ 送液量；６リットル／ｈｒ 以上の操作により、下記の表１のように予備濃縮した中
間濃縮物３画分を得た。

【００３６】

【表１】

【００３７】この画分３の中間濃縮物１００g を擬似移
動床式クロマトグラフィー装置にて連続的に処理した。
当該擬似移動床式クロマトグラフィー装置の条件は以下
の通りである。 ｛条件｝ 充填剤：化学修飾シリカゲル（ＯＤＳシリカゲル） 溶離液：メタノール 溶離液量：１時間当たり充填剤１リットル当り２６０ｍリットル
(0.26 リットル/ リットルーR/h) 中間濃縮物の供給量：１時間当たり充填剤1 リットル当たり
１０m リットル(0.01 リットル/ リットルー R/h) カラム：２０mmΦ×500mmHのカラム８本 その結果、純度９５．３％のＤＨＡエチルエステル４７
ｇ（ＤＨＡエチルエステルの総回収率３３％）を８時間
で得ることができた。

【００３８】以上の結果を従来のバッチ式液体クロマト
グラフィー法と比較すると、例えば中間濃縮物（上記画
分３を使用した場合）１kgを処理する場合、処理時間は
２５０時間から８０時間へと約１／３に、溶離液量は１
２００リットルから２６リットルへと約１／４６になり、高純度
のＤＨＡエチルエステルを従来より低コストで迅速に
（少ない溶離液量で）製造出来ることが明らかになっ
た。

【００３９】＜実施例２＞メタノール３０リットルに尿素１
０kgを８０℃にて加熱溶解し、その中にイワシ油のエチ
ルエステル１０kgを加え、還流しながら５℃／hrの割合
で室温まで冷却した。冷却後、結晶とメタノールを分別
し、メタノール層をヘキサン抽出、水洗、脱水・脱溶媒
した。以上の尿素付加による予備濃縮によって中間濃縮
物である純度４０％のＥＰＡエチルエステルを１．５kg
得ることができた。この中間濃縮物１００ｇを擬似移動
床式クロマトグラフィーにて連続的に処理した。当該擬
似移動床式クロマト装置の条件は以下の通りである。 ｛条件｝ 充填剤：化学修飾シリカゲル（ＯＤＳシリカゲル） 溶離液：メタノール：水（90:10 v/v ） 溶離液量：１時間当たり充填剤１リットル当たり２６０ｍリッ
トル(0.26 リットル/ リットルーR/h) 中間濃縮物の供給量：１時間当たり充填剤１リットル当たり
１０ｍリットル(0.01 リットル/ リットルーR /h) カラム：２０mmΦ×５００mmH のカラム８本 その結果、純度９６．０％のＥＰＡエチルエステルを２
９ｇを得ることが出来た。またその時のＥＰＡエチルエ
ステルの総回収率は３０％であった。

【００４０】本実施例の溶離液使用量は、従来のバッチ
式液体クロマトグラフィー法と比較して１／４８となっ
た。また、ＥＰＡエチルエステルの生産量については従
来のバッチ式液体クロマトグラフィー法と比較し単位時
間当たり約４．３倍に増加した。

【００４１】＜実施例３＞カツオ油のメチルエステル
（ＤＨＡメチルエステル２７％）を遠心薄膜式分子蒸留
機により下記の条件にて蒸留した。 ｛条件｝ 原料（カツオ油のメチルエステル）；１０kg 真空度；０．００４torr 蒸留温度；１３０℃、１５０℃、１６０℃ 送液量；６リットル／hr 以上の操作により、下記の表２のように中間濃縮物３画
分を得た。

【００４２】

【表２】

【００４３】この画分３の中間濃縮物１００g を擬似移
動床式クロマトグラフィー装置にて連続的に処理した。
当該擬似移動床式クロマトグラフィー装置の条件は以下
の通りである。 ｛条件｝ 充填剤：化学修飾シリカゲル（ＯＤＳシリカゲル） 溶離液：エタノール 溶離液量：１時間当たり充填剤１リットル当たり２６０ｍリッ
トル(0.26 リットル/ リットルーR/h) 中間濃縮物の供給量：１時間当たり充填剤１リットル当たり
１０ｍリットル(0.01 リットル/ リットルーR/h) カラム：２０mmΦ×５００mmH のカラム１２本 その結果、純度９６．０％のＤＨＡメチルエステルを４
７g 得ることが出来た。また、その時のＤＨＡメチルエ
ステルの総回収率は３３％であった。

【００４４】本実施例の溶離液使用量は、従来のバッチ
式液体クロマトグラフィー法と比較し１／４６に減少し
た。また、ＤＨＡメチルエステルの生産量は従来のバッ
チ式液体クロマトグラフィー法と比較し、単位時間当た
り約３．２倍に増加した。

【００４５】＜実施例４＞オキアミ抽出油のエチルエス
テル（ＥＰＡエチルエステル１７．８％、ＤＨＡエチル
エステル８．８％）を精留装置により下記の条件にて蒸
留した。 ｛条件｝ 原料；（オキアミ抽出油エチルエステル）；１kg 真空度；０．０１torr 蒸留温度；１９０℃、１９５℃、２００℃ 送液量；５０ｍリットル/min 以上の操作を５回繰り返し、下記の表３のように濃縮中
間物３画分を得た。

【００４６】

【表３】

【００４７】次に、画分２、画分３を擬似移動床式クロ
マト装置にて連続的に処理した。擬似移動床式クロマト
装置の条件は以下の通りである。 ｛条件｝ 充填剤：化学修飾シリカゲル（ＯＤＳシリカゲル） 溶離液：メタノール 溶離液量：１時間当たり充填剤１リットル当たり２６０ｍリッ
トル(0.26 リットル/ リットルーR/h) 中間濃縮物の供給量：１時間当たり充填剤１リットル当たり
５ｍリットル(0.005リットル/リットルーR/h） カラム：２０mmΦ×５００mmH のカラム１２本 その結果、純度９８．０％のＥＰＡエチルエステル４５
０ｇ（ＥＰＡエチルエステル総回収率４９．６％）と、
純度９９．０％のＤＨＡエチルエステル１９８ｇ（ＤＨ
Ａエチルエステルの総回収率４５．０％）とを得ること
が出来た。

【００４８】＜実施例５＞イワシ油（遊離脂肪酸）１kg
と４０％硝酸銀溶液１リットルを混合撹拌し、ｎ−ヘキサン
１リットルで３回抽出を繰り返し不用な脂肪酸を除去した
後、水５リットルで洗浄してｎ−ヘキサン層を分離、濃縮す
ることにより、ＥＰＡ５０％、ＤＨＡ３０％の中間濃縮
物を得た。この画分を擬似移動床式クロマトグラフィー
装置にて連続的に処理した。当該擬似移動床式クロマト
グラフィー装置での条件は以下の通りである。

【００４９】｛条件｝ 充填剤：シリカゲル 溶離液：ｎ−ヘキサン 溶離液量：１時間当たり充填剤１リットル当たり３００ｍリッ
トル(0.3リットル/ リットルーR/h) 中間濃縮物の供給量：１時間当たり充填剤１リットル当たり
２０ｍリットル(0.02 リットル/ リットルーR/h) カラム：２０mmΦ×５００mmH のカラム１２本 その結果、遊離脂肪酸として純度９５．０％のＥＰＡと
純度９２．０％のＤＨＡを得ることが出来た。

【００５０】＜実施例６＞カツオ油のエタノールアミン
誘導体を実施例２と同様の方法にて尿素付加することに
より、ＤＨＡエタノールアミンを４０％に濃縮した。こ
の中間濃縮物を、疑似移動床式クロマトグラフィー装置
にて連続的に処理した。擬似移動床式クロマトグラフィ
ー装置の条件は以下の通りである。 条件 充填剤：硝酸銀含有シリカゲル 溶離液：シクロヘキサン／nーヘキサン（１５：８５v/v) 溶離液量：１時間当たり充填剤１リットル当たり２００ｍリッ
トル(0.2リットル/ リットルーR/h) 中間濃縮物の供給量：１時間当たり充填剤１リットル当たり
５ｍリットル（0.005 リットル/ リットルーR/h) カラム：２０mmΦ×５００mmH のカラム１２本 その結果、純度９９．６％のＤＨＡエタノールアミンを
得ることが出来た。

【００５１】

【発明の効果】本発明によれば水産物油脂等から得られ
る脂肪酸および／またはその誘導体を蒸留法などの方法
で予備濃縮して中間濃縮混合物となし、次に当該中間濃
縮混合物を連続式液体クロマトグラフィーで処理するこ
とにより、高純度のＥＰＡ、ＤＨＡまたはその誘導体を
安価に効率良く製造することが出来る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 佐 藤 康 平 埼玉県戸田市川岸１丁目４番９号オルガノ 株式会社総合研究所内 (72)発明者 国 枝 逹 也 東京都文京区本郷５丁目５番16号 オルガ ノ株式会社内

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 高度不飽和脂肪酸および／またはその誘
   導体の混合物を蒸留法、尿素付加法、液体クロマトグラ
   フィー法、硝酸銀法、あるいはこれらの二種以上の方法
   の組み合わせにより分画し高濃度に予備濃縮、分離した
   後、その分画により得たエイコサペンタエン酸とドコサ
   ヘキサエン酸とこれら両者の誘導体とその他の高度不飽
   和脂肪酸類とその誘導体とのうち、少なくとも二種以上
   含んだ中間濃縮混合物を原料として、連続式液体クロマ
   ト処理を行うことによりエイコサペンタエン酸とドコサ
   ヘキサエン酸とこれら両者の誘導体とのうち、少なくと
   も一種以上を高純度に分離するようにしたことを特徴と
   する高純度の高度不飽和脂肪酸およびその誘導体の製造
   方法。
2. 【請求項２】 連続式液体クロマト処理が擬似移動床式
   クロマトグラフィーで目的成分の分離をすることを特徴
   とする請求項１記載の製造方法。
3. 【請求項３】 高度不飽和脂肪酸および／またはその誘
   導体の混合物を蒸留法、尿素付加法、液体クロマトグラ
   フィー法、硝酸銀法、あるいはこれらの二種以上の方法
   の組み合わせにより分画し高濃度に予備濃縮、分離した
   後、その分画により得たエイコサペンタエン酸とその誘
   導体とその他の高度不飽和脂肪酸類とその誘導体とのう
   ち、少なくとも二種以上含んだ中間濃縮混合物を原料と
   して、擬似移動床式クロマトグラフィーで処理を行うこ
   とにより、エイコサペンタエン酸とその誘導体のうち、
   少なくとも一種以上を高純度に分離するようにしたこと
   を特徴とする高純度の高度不飽和脂肪酸およびその誘導
   体の製造方法。
4. 【請求項４】 高度不飽和脂肪酸および／またはその誘
   導体の混合物を蒸留法、尿素付加法、液体クロマトグラ
   フィー法、硝酸銀法、あるいはこれらの二種以上の方法
   の組み合わせにより分画し高濃度に予備濃縮、分離した
   後、その分画により得たドコサヘキサエン酸とその誘導
   体とその他の高度不飽和脂肪酸類とその誘導体とのう
   ち、少なくとも二種以上含んだ中間濃縮混合物を原料と
   して擬似移動床式クロマトグラフィーで処理を行うこと
   により、ドコサヘキサエン酸とその誘導体のうち、少な
   くとも一種以上を高純度に分離するようにしたことを特
   徴とする高純度の高度不飽和脂肪酸およびその誘導体の
   製造方法。