JP2022538558A

JP2022538558A - ペルシーの抽出物

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Publication number: JP2022538558A
Application number: JP2021576369A
Authority: JP
Inventors: カーステンシームス; クリスチャンダルホフ; ミヒャエルフェウシータラ; ルーカスユーレンブロック; ヨッヘンシュトゥルーベ
Original assignee: アナリティコンディスカバリーゲーエムベーハー
Priority date: 2019-06-25
Filing date: 2020-06-24
Publication date: 2022-09-05
Also published as: EP3756474B1; WO2020260376A1; EP3756474A1; US20220361541A1

Abstract

提案されているのは、ペルシーの抽出物、特に、少なくとも９０重量％のアボカドポリオール、好ましくは少なくとも９５重量％のアボカドを含み、以下の工程に従って入手可能または入手したペルシーアメリカーナ（アボカド果実）である。｛ａ｝ペルシーのソースを提供する。｛ｂ｝ペルシーのソースを、有機溶媒を使用する抽出工程にかけて、最初の抽出物を得る。｛ｃ｝第１の抽出物を鹸化して、第２の抽出物を得る。｛ｄ｝カルシウム石鹸を沈殿させるために、カルシウム源を前記第２の抽出物に加える。｛ｅ｝工程｛ｄ｝の生成物を分離工程にかけて、第３の抽出物および前記沈殿したカルシウム塩を得る。任意で、｛ｆ｝前記第３の抽出物を精製にかける。

Description

本発明は、植物抽出物、特にアボカデンに富むペルシーアメリカーナの抽出物の領域、そのような抽出物を得るためのプロセス、およびこれらの抽出物を味覚投薬に使用することを指す。

アボカド果実｛ペルシーアメリカーナ｝は、製薬、食品、化粧品、および農薬用途で興味深い活性を持つアルキルポリオールを含む。アボカドの主なポリオールは、アボカデン、アボカジン、およびそれらのアセテートである。

アボカデン

アボカジン

アボカデンおよび関連するポリオールは、異なる食品、製薬および化粧品用途における興味深い化合物である。本発明は、濃縮抽出物および純粋なアボカドポリオールを製造するための効率的かつ費用効果の高い方法を説明する。一部の用途では、純粋な化合物を分離するために、アボカドの食用部分であるフルーツパルプの使用が推奨される。これまでのところ、アボカド果肉からアボカドを分離するための効率的な方法は開示されていない。

アボカドポリオールは、以下の文献に示されるように、様々な有用な用途を示す。
?ＵＳ２０１０００３４９４４Ａ｛ＩＦＦ｝およびＷＯ２０１４１２４２１４Ａ１｛ＧＥＮＥＲＡＬＭＩＬＬＳ｝：味覚調節剤および塩味増強剤としてのアボカデン。
・ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔｓ（１９９８）、６１（６）、ｐ７８１－７８５：ペルシーアメリカーナの未熟果実の細胞毒性および殺虫成分。
・植物化学（１９９１）、３１（１）、ｐ９３－６、抗真菌活性。

アボカドポリオールの単離は、通常、有機溶媒での抽出、続いて溶媒分配、そして最後に順相または逆相の方法を使用するクロマトグラフィー分離によって行われる（例えば、ＩｓｒａｅｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９６９）、７（１）、ｐ１７３－６｝。しかしながら、特に大量の脂肪酸誘導体の分離（例えば、モノグリセリド、ジグリセリド、およびトリグリセリド｝およびクロマトグラフィー法によるアボカデンポリオールは、困難で高価である。

特許文献１：米国特許第９，４１６，３３３
特許文献２：米国公開公報２０１５／０１７５９３３
特許文献３：米国特許第６，５８２，６８８
特許文献１では、アボカドピットから抽出されたアボカド油は、アボカドタイプから２％未満のアボカドポリオールを含む油を生成することが開示されている。

特許文献２では、酢酸ブチルを用いてアボカド種子からアボカドポリオールを抽出すると、最大３０％のアボカドポリオールを含む抽出物が得られることが開示されている。この抽出物をさらに精製して、ヘキサンからの再結晶化により、純度９５％を超えるアボカドポリオールを得ることができる。種子は通常、果肉よりも大量のアボカドポリオールを含んでいる。本公開特許は、アボカドの種子のみの使用について説明しており、アボカドの果肉の使用については言及していない。

特許文献３では、圧搾油の鹸化とそれに続く蒸留により、２５％のアボカドポリオールを含むフラクションが得られる旨を開示している。主に、ポリオールの代わりにフラン環を有する熱分解生成物が得られる。

発明の目的

したがって、本発明の目的は、改善されたプロセスを提供すること、または少なくとも５０重量％、好ましくは少なくとも９０重量％のアボカドポリオール｛アボカデン、アボカジンおよびそれらのエステル｝、特に少なくとも９５重量％、好ましくは少なくとも９８重量％のアボカデンを含む抽出物を獲得することである。

本発明の第１の目的は、ペルシーの抽出物、特に、少なくとも９０重量％のアボカドポリオール、好ましくは少なくとも９５重量％のアボカドを含む、入手可能または次のプロセスで入手可能なペルシーアメリカーナ（アボカド果実）を指す。
｛ａ｝ペルシーのソースを提供する。
｛ｂ｝ペルシーの前記ソースを、好ましくは有機溶媒を使用して抽出工程にかけ、第１の抽出物を獲得する。
｛ｃ｝第１の抽出物を鹸化して、第２の抽出物を獲得する。
｛ｄ｝カルシウム源を前記第２の抽出物に加え、カルシウム石鹸を沈殿させる。
｛ｅ｝工程｛ｄ｝の生成物を分離工程にかけて、第３の抽出物および前記沈殿したカルシウム塩を獲得する。任意選択で
｛ｆ｝前記第３の抽出物をさらに精製する。

本発明の第２の目的は、ペルシーーナの抽出物、特に、少なくとも９０重量％のアボカドポリオール、好ましくは少なくとも９５重量％のアボカデンを含む、ペルシーアメリカーナ（アボカド果実）の抽出物を得るため、次の手順を含む各プロセスに関する。
｛ａ｝ペルシーのソースを提供する。
｛ｂ｝ペルシーの前記ソースを、好ましくは有機溶媒を使用して抽出工程にかけ、第１の抽出物を獲得する。
｛ｃ｝第１の抽出物を鹸化して、第２の抽出物を得る。
｛ｄ｝カルシウム源を前記第２の抽出物に加え、カルシウム石鹸を沈殿させる。
｛ｅ｝工程｛ｄ｝の生成物を分離工程にかけて、第３の抽出物および前記沈殿したカルシウム塩を得る。任意選択で、
｛ｆ｝前記第３の抽出物をさらに精製する。

ポリオールは、ポリオールアセテートおよび脂肪酸のグリセリドを加水分解するＫＯＨによって抽出される。カルシウム塩を加えると、脂肪酸Ｃａ石鹸とアボカドポリオールとの沈殿物が生成される。アボカドポリオールは、例えば酢酸エチルによって沈殿物から選択的に抽出することができる。再結晶化により、アボカデンとアボカジンとの混合物が少なくとも９０重量％の純度で得られる。したがって、少なくとも９０重量％のアボカドポリオールを含むフラクションは、クロマトグラフィーの工程なしで調製することができる。アボカデンとアボカジンとのさらなる分離は、逆相クロマトグラフィーまたはさらなる再結晶化によって可能である。

従来技術（例えば、米国公開公報２０１５０１７５９３３）からの推奨とは対照的に、酢酸エチルによる抽出および再結晶化は、８０％を超える純度を有するアボカデンポリオールの混合物をもたらした。驚くべきことに、例えば酢酸エチルまたは水などの他の溶媒を使用することにより、抽出および再結晶化プロセスにおいてヘキサンまたは他の有毒な溶媒を低減するか、または完全に回避することが可能であることが見出された。

本発明によるプロセスは、３つのセクションからなる：
・抽出
・鹸化と分離
・精製。

精製は、高純度のアボカデンを得ることを目的とする場合に必要とされる、プロセスの任意のセクションである。
抽出

本発明による抽出物は、それ自体が知られている方法、すなわち、例えば植物またはその一部またはアボカドのピットの水性、アルコール性または水性／アルコール性抽出によって調製することができる。特に好ましいのは、そこから得られるアボカド果実または果肉である。

適切な抽出プロセスは、浸軟（マセレーション）、再浸軟、消化、攪拌浸軟、渦抽出、超音波抽出、向流抽出、浸透（パーコレーション）、再浸透、蒸発｛減圧下での抽出｝、透析、連続還流下での固／液抽出などの任意の従来の抽出プロセスである。浸透（パーコレーション）は工業用途に有利である。専門家に知られている任意のサイズ縮小方法、例えば凍結粉砕を使用することができる。抽出プロセスに好ましい溶媒は、有機溶媒、水（好ましくは、温度が８０℃を超え、より具体的には９５℃を超える熱水、または有機溶媒と水との混合物、より具体的には、水分含有量が高い低分子量アルコール）である。ｎ－ペンタン、ｎ－ヘキサン、酢酸エチル、酢酸ブチルおよびそれらの混合物による抽出が特に好ましい。

果実または果肉を例えば第１の工程で例えばｎ－ヘキサンで抽出し、残りを第２の工程で例えば酢酸エチルで抽出することを意味する二重抽出を実施することもまた好ましい。次いで、抽出物が組み合わされ、さらに処理される。

別の方法として、抽出は、水または、水酸化ナトリウムもしくは水酸化カリウムなどのアルカリ源の量を含むエタノールなどの低級アルコールを用いて実施することができる。この場合、抽出と次の工程の鹸化が同時に行われる。

抽出プロセスは、一般に、約２０℃から約１００℃で、好ましくは約５０℃から約７０℃で実施される。１つの好ましい実施形態では、抽出プロセスは、抽出物の成分の酸化を回避するために不活性ガス雰囲気中で実施される。これは、抽出が４０℃を超える温度で実行される場合に特に役立つ。抽出時間は、出発原料、抽出プロセス、抽出温度、溶媒と原料の比率などに応じて専門家が選択する。
鹸化

本発明の工程において、抽出物からの脂肪酸成分の除去は不可欠であり、最も重要な機能である。この目的のために、すべての脂肪酸が鹸化されて可溶性アルカリ石鹸が生成され、第２の工程で不溶性カルシウム石鹸として沈殿する。最後の工程で、石鹸は抽出物から分離される。本プロセスのセクションでは、約５０～約９０重量％のアボカドポリオールからなる抽出物が得られる。抽出物をさらに精製して、９８重量％を超える純度のアボカデンを得ることができる。

上記のように、溶媒として水またはエタノールなどの低級アルコールを使用して抽出を行う場合、アルカリ源を加えることができ、同時に鹸化を達成することができる。

したがって、本発明の別の実施形態は、ペルシー、特に、少なくとも９０重量％のアボカドポリオール、好ましくは少なくとも９５重量％のアボカデンを含むペルシーアメリカーナ（アボカド果実）の抽出物を得るための代替プロセスは、以下の工程を含む。
｛ａ｝ペルシーのソースを提供する。
｛ｂ｝第１の抽出物を得るため、例えば水性またはエタノール性ＫＯＨなどの水性またはアルコール性アルカリ性化合物のソースを使用して、ペルシーの前記ソースを抽出および鹸化の組み合わせにかける。
｛ｃ｝カルシウム源を前記第１の抽出物に加え、カルシウム石鹸を沈殿させる。
｛ｄ｝工程｛ｃ｝の生成物を分離工程にかけて、第３の抽出物と前記沈殿したカルシウム塩を得る。また任意選択で
｛ｅ｝前記第３の抽出物をさらに精製する。

抽出および鹸化が別個の工程である場合、通常の作業は、第１の抽出物を任意選択で水溶液またはアルコール溶液としてアルカリ性水酸化物のソースで処理し、可溶性アルカリ石鹸に移された第２の抽出物を得ることである。適切な鹸化剤は、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムの水溶液またはエタノール溶液である。作業は、典型的には、約５０℃～約９０℃の範囲の温度で、１２～２０時間、好ましくは１５～１６時間の期間にわたって行われる。

鹸化が完了し、全てまたはほとんど全ての脂肪酸がそれらの可溶性アルカリ塩に変換されたら、混合物をカルシウム塩で処理して、カルシウム石鹸として抽出物中に存在する前記可溶性アルカリ石鹸を沈殿させる。適切な沈殿剤は、可溶性カルシウム塩であり、好ましくは塩化カルシウムの溶液である。沈殿が完了したら、蒸発または蒸留によってアルコール溶媒を除去することは任意の工程である。

沈殿後、カルシウム石鹸は、濾過するのが容易ではないガム様物質を形成する。別の方法では、ろ過または遠心分離によって石鹸から液相（第３の抽出物を形成する）を分離することが有利である。前記第３の抽出物は、第４の抽出物を提供する別の抽出物によってさらに精製することができる。通常、この抽出工程は、酢酸エチルまたは酢酸ブチルを使用して実行される。

別の好ましい代替案は、一工程の鹸化および抽出のために水酸化カリウム水溶液を使用することである。この場合、塩化カルシウム溶液で沈殿させると、アモルファスの灰色の沈殿物が得られ、加圧濾過によって分離が可能になり、第３の抽出物が直接得られる。

他方、カルシウム石鹸ガムはまだ湿っていて、いくらかの活性物質を含んでいる。したがって、それは、好ましくは圧力下で濾過されて、多かれ少なかれ乾燥石鹸および第４の抽出物と組み合わされる母液が得られる。
精製

アボカデンの含有量が高い抽出物の場合は、以下のいずれか望まれる。
｛ｉ｝前記第３の抽出物、または
｛ｉｉ｝さらに１工程または２工程の精製、より具体的にはクロマトグラフィー精製手順に従った、第４抽出物と母液との組み合わせたもの。

第１の精製工程は、脱水およびその後の結晶化または例えば酢酸エチルなどの適切な溶媒からの再結晶化を含み得る。

ＭＰＬＣ。代替の第１またはその後の第２の精製工程は、中圧液体クロマトグラフィーであり得る。ＭＰＬＣは、吸着剤への化合物の異なる吸着に基づいて物質を分離することができる。化合物はさまざまな速度でカラム内を移動し、フラクションに分離することができる。多くの異なる吸着剤｛順相、逆相、またはその他｝をさまざまな溶媒で使用できるため、この手法は広く適用できる。この手法は、マイクログラムからキログラムまでのスケールで使用できる。ＭＰＬＣの主な利点は、プロセスで使用される固定相のコストが比較的低く、廃棄可能であることである。後者は、リサイクルによる相互コンタミネーションと固定相の劣化を防ぐ。カラムクロマトグラフィーは、重力を使用して溶媒を移動するか、圧縮ガスを使用して溶媒をカラムに押し込むことで実行できる。

ＭＰＬＣを実施するために、固体吸収剤を円筒形のガラスまたはプラスチックチューブに詰めることによってカラムを調製する。サイズは、分離される化合物の量によって異なる。チューブのベースには、固相を所定の位置に保持するためのフィルター、綿またはグラスウールのプラグ、またはガラスフリットが含まれている。溶媒リザーバーは、カラムの上部に取り付けることができる。

カラムを調製するために、一般に２つの方法、乾式法および湿式法が使用される。乾式法の場合、まずカラムに乾燥固定相粉末を充填し、次いで移動相を添加する。移動相は、完全に湿るまでカラムに流し込まれ、この点から決して乾くことがない。湿式法では、固定相粉末を含む溶離液のスラリーを調製し、注意深くカラムに注ぐ。シリカの上部は平らである必要があり、シリカの上部は砂の層で保護できる。溶離液がゆっくりとカラムを通り、有機物を前進させる。

個々の成分は、固定相によって異なるように保持され、溶離液とともにカラムを異なる速度で流れる間、互いに分離しする。カラムの末端で、一回に１つずつ溶出する。クロマトグラフィープロセス全体で、溶離液は一連のフラクションに収集される。フラクションは、フラクションコレクターを使用して自動的に収集できる。クロマトグラフィーの生産性は、一度に複数のカラムを実行することで向上させることができる。この場合、マルチストリームコレクターが使用される。溶離液の流れの組成を監視し、各フラクションの溶解化合物、すなわち分析クロマトグラフィー、ＵＶ吸収スペクトル、または蛍光によって分析できる。着色された化合物｛またはＵＶランプの補助を受けた蛍光化合物｝は、ガラス壁を通して動く帯として見ることができる。

カラムクロマトグラフィーにおける固定相または吸着剤は固体である。カラムクロマトグラフィーの最も一般的な固定相はシリカゲルであり、次に一般的なのはアルミナである。セルロース粉末は、過去によく使用されてきた。イオン交換クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー｛ＲＰ｝、アフィニティークロマトグラフィー、または拡張吸着流動床｛ＥＢＡ｝を実行するために、さまざまな固定相を利用できる。ＥＢＡでは流動床が使用されるが、固定相は通常、細かく粉砕された粉末またはゲルであるか、および／または表面の増加に対してミクロポーラスである。カラムに適用できる分析対象物混合物の固定相重量と乾燥重量の間には重要な比率がある。シリカカラムクロマトグラフィーの場合、この比率は、分析対象物の成分が互いにどれだけ接近しているかに応じて、２０：１から１００：１の範囲内にある。

移動相または溶離液は、化合物をカラム内で移動させるために使用される溶媒または溶媒の混合物である。クロマトグラフィーを実行する時間と溶離液の量とを最小限に抑えるために、対象化合物のリテンションファクター値が約０．２～０．３になるように選択する。溶離液は、さまざまな化合物を効果的に分離できるように選択されている。溶離液は小規模な事前テストで最適化され、多くの場合、同じ固定相で薄層クロマトグラフィー｛ＴＬＣ｝を使用する。

それぞれの特定の分離に対して最適な流量が存在する。溶離液の流速が速いと、カラムの分析に必要な時間が最小限に抑えられ、拡散が最小限に抑えられ、分離が向上する。ただし、分析物が固定相と移動相との間で平衡化するのに有限の時間が必要なため、最大流量は制限される｛ファンデームテル（Van Deemter）の式を使用して計算される｝。単純な実験用カラムは重力流によって実行される。このようなカラムの流量は、新しい溶離液を満たしたカラムを固定相の上部まで伸ばすことで増加させるか、タップコントロールで減少させることができる。より速い流量は、ポンプを使用するか、圧縮ガス（例：空気、窒素、またはアルゴン｝を使用することによって達成でき、溶媒をカラム｛フラッシュカラムクロマトグラフィー｝に押し込む。固定相の粒子サイズは、一般に、重力カラムクロマトグラフィーよりもフラッシュカラムクロマトグラフィーの方が細かくなる。たとえば、前者の手法で最も広く使用されているシリカゲルグレードの１つは、メッシュ２３０～４００｛４０～６３μｍ｝であるが、後者の手法では通常、メッシュ７０～２３０｛６３～２００μｍ｝のシリカゲルが必要である。

好ましくは、アボカデンに富むフラクションは、ｎ－ヘキサン－酢酸エチル３０：７０および純粋な酢酸エチルで溶出される固定相としてシリカゲルを使用するＭＰＬＣから得られる。

ＨＰＬＣ。
ＭＰＬＣから得られたフラクションは、少なくとも９重量％のアボカデンの含有量を示している。アボカデンをさらに濃縮するために、フラクションをＨＰＬＣにかける。高速液体クロマトグラフィー｛以前は高圧液体クロマトグラフィーと呼ばれていた｝は、混合物中の各成分を分離、識別、および定量化するために使用される分析化学の手法である。ポンプを使用して、サンプル混合物を含む加圧液体溶媒を、固体吸着剤で満たされたカラムに通す。サンプル中の各成分は吸着剤とわずかに異なる相互作用をし、異なる成分に対して異なる流量を引き起こし、成分がカラムから流出するときに成分の分離を引き起こす。

通常の液体クロマトグラフィーは通常、移動相をカラムに通過させるために重力に依存しているのに対し、ＨＰＬＣは、操作圧力は大幅に高くなる{５０－３５０ｂａｒ}ので、従来の｛「低圧」｝液体クロマトグラフィーとは区別される。分析用ＨＰＬＣで分離されるサンプル量が少ないため、一般的なカラムの寸法は直径２．１～４．６ｍｍ、長さ３０～２５０ｍｍである。また、ＨＰＬＣカラムは、より小さな吸着剤粒子｛平均粒子サイズで２～５０μｍ｝で作られている。これにより、混合物を分離する際に、ＨＰＬＣに優れた分解能｛化合物を区別する能力｝が与えられ、一般的なクロマトグラフィー技術になる。

分離および分析されるサンプル混合物は、個別の少量（通常はマイクロリットル）で、カラムを通って浸透する移動相の流れに導入される。サンプルの成分は、吸着剤との特定の物理的相互作用の関数であるさまざまな速度でカラム内を移動する｛固定相とも呼ばれる｝。各成分の速度は、その化学的性質、固定相｛カラム｝の性質、および移動相の組成に依存する。特定の分析対象物が｛カラムから出てくる｝溶出する時間は、その保持時間と呼ばれる。特定の条件下で測定されたリテンションタイムは、特定の分析対象物の識別特性である。

粒子サイズが異なり、それらの表面の性質が異なる吸着剤で満たされた、多くの異なるタイプのカラムが利用可能である｛「表面化学」｝。より小さな粒子サイズの充填剤を使用するには、より高い操作圧力｛“ｂａｃｋｐｒｅｓｓｕｒｅ”｝を使用する必要があり、通常、クロマトグラフィーの分離能｛カラムから出てくる連続した分析対象物間のピーク分離の程度｝が向上する。吸着剤粒子は、本質的に疎水性または極性である可能性がある。

使用される一般的な移動相には、水と様々な有機溶媒との任意の混和性の組み合わせが含まれる（最も一般的なのは、アセトニトリルおよびメタノールである）。一部のＨＰＬＣ技術では、水を含まない移動相を使用する｛以下の順相クロマトグラフィーを参照｝。移動相の組成は、クロマトグラフィー分析中、一定に保つか{"アイソクラティック溶出モード"}または変化させる{"グラジエント溶出モード"}ことができる。アイソクラティック溶出は、通常、固定相への親和性が大きく異なるサンプル成分の分離に効果的である。グラジエント溶出では、移動相の組成は通常、低い溶出強度から高い溶出強度まで変化する。移動相の溶出強度は分析対象物の保持時間に反映され、溶出強度が高いと溶出が速くなる｛＝保持時間が短くなる｝。逆相クロマトグラフィーの一般的なグラジエントプロファイルは、５％アセトニトリル｛水または水性バッファー中｝で始まり、５～２５分かけて９５％アセトニトリルまで直線的に進行する。一定の移動相組成の期間は、任意の勾配プロファイルの一部である可能性がある。たとえば、移動相の組成を５％アセトニトリルで１～３分間一定に保ち、その後９５％アセトニトリルまで直線的に変化させることができる。

移動相｛溶離液とも呼ばれる｝の選択された組成は、様々なサンプル成分｛”分析物”｝と固定相｛例えば、逆相ＨＰＬＣにおける疎水性相互作用｝との間の相互作用の強度に依存する。固定相と移動相への親和性に応じて、分析対象物は、カラムで行われる分離プロセス中に２つの間で分配される。この分割プロセスは、液液抽出中に発生するプロセスと似ているが、段階的ではなく連続的である。この例では、水／アセトニトリルグラジエントを使用すると、移動相がアセトニトリルでより濃縮され｛つまり、より高い溶出強度の移動相で｝、より疎水性の高い成分が｛カラムから外れる｝遅く溶出する。

移動相成分、添加剤（塩または酸など）および勾配条件の選択は、カラムおよびサンプル成分の性質に依存する。多くの場合、適切な分離が得られるＨＰＬＣメソッドを見つけるために、サンプルを使用して一連の試行が実行される。

好ましくは、ＨＰＬＣは、分取用ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８カラム｛２５０ｘ５０ｍｍ、１０μｍ｝で、溶離液として水１００％｛Ａ｝とメタノール１００％｛Ｂ｝を使用し、８０ｍＬ／ｍｉｎの流速で実施された。別の方法では、メタノールをエタノールに置き換えることができる。溶媒システムは７２～９８％のＢ線形である。このシステムは、蒸発光散乱検出器｛ＥＬＳＤ｝とフォトダイオード検出器｛ＰＤＡ｝とを２５０ｎｍに設定して操作した。達成されたのは、少なくとも９５重量％、通常は９８重量％以上のアボカデンからなるフラクションである。

本発明の別の目的は、以下の工程を含む、経口組成物の塩味を調節および／または増強するための方法を指す。
｛ｉ｝請求項１または請求項２のプロセスに従ってペルシーの抽出物を提供する。
｛ｉｉ｝経口摂取を目的とした組成物に、作業量の前記抽出物を加える。

本発明はまた、経口組成物の塩味を調節および／または増強するための、請求項１に記載、または請求項２に記載のプロセスに記載の抽出物の使用に関する。「作業量」とは、経口摂取用の製品の塩味の印象を調節または影響または増加させるのに適した量を意味し、例えば、経口組成物の重量に基づいて計算すると、０．０００１～０．１、好ましくは０．００１～０．０１重量％である。通常、これらの製品は食品、特にスナックを表す。

抽出物はまた、例えば、抗真菌活性剤として有用である。

５ｋｇの新鮮なアボカドを種子、果皮および果肉に分離した。果肉１６００ｇを細かく切り、凍結乾燥して２２０ｇの乾燥物を得た。

ペルシーアメリカーナの凍結乾燥果肉１００ｇを成形し、２ｘ３５０ｍＬのｎ－ヘキサンおよび２ｘ３５０ｍＬの酢酸エチルで連続的に抽出して、１９．３２ｇの｛抽出物１Ａ｝および粗抽出物４．３０ｇの｛抽出物１Ｂ｝をそれぞれ得た。これらの２つの抽出物は、ＴＬＣプロファイリングに基づいて組み合わされ、抽出物１と呼ばれる。

２３ｇの抽出物１を水酸化カリウムのエチルアルコール溶液｛９．２ｇ／２３０ｍＬ｝に溶解し、５時間｛８０°Ｃ｝還流して抽出物２を得た。次に蒸留水１４０ｍＬとＣａＣＯ３６３ｇとをそれぞれ添加し、さらに加熱して４時間還流した。その後、高温の混合物を室温で３０℃に冷却し、減圧下での蒸発により過剰のエタノールを減少させた。カルシウム石鹸の形成を最適化するために、さらに蒸留水を混合物に加えた。

カルシウム石鹸はガムのように沈殿し、濾過するのが困難であった。したがって、抽出物２の固液混合物を遠心分離によって分離した。この分離から、抽出物３を形成する水相をさらに酢酸エチル｛３ｘ６５０ｍＬ｝で抽出して、抽出物４と呼ばれる濃縮アボカデンを得た。遠心分離から得られたガムを３５０ｍＬの酢酸エチルで粉砕し、次に吸引により濾過して、より多くの抽出物４｛”母液”｝およびカルシウム石鹸または炭酸カルシウムでコーティングされたカルシウム石鹸からなる残留粉末を得た。

次の調査のために、全体的なプロセスを薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって監視した。アボカデンの本物のサンプルとＣＨＣｌ３－ＭｅＯＨ｛９４：０６｝の溶媒システムで実行する。

抽出物４｛１１．１０ｇ｝を順相ＭＰＬＣ｛ｎ－ヘキサン－酢酸エチル３０：７０および純粋な酢酸エチルで溶出するシリカゲル｝で分画して、フラクションＡ１｛０．３９ｇ｝、フラクションＡ２｛４．１０ｇ｝およびフラクションＡ３｛１．３５ｇ｝の３つの濃縮アボカデンフラクションを得た。これらのフラクションの定量分析と１ＨＮＭＲプロファイルは、それぞれがアボカデンと関連代謝物の混合物であることを示す。したがって、これらのフラクションをＨＰＬＣによりさらに精製した。

前記フラクションのＨＰＬＣ分離は、分取クロマシル（Ｋｒｏｍａｓｉｌ）Ｃ１８カラム｛２５０×５０ｍｍ、１０μｍ｝で、溶離液として水１００％｛Ａ｝およびメタノール１００％｛Ｂ｝を使用して、８０ｍＬ／分で実施された。溶媒系は７２－９８％Ｂ線形であった。このシステムは、蒸発光散乱検出器｛ＥＬＳＤ｝とフォトダイオード検出器｛ＰＤＡ｝とを２５０ｎｍに設定して操作し、９８％を超える純粋なアボカデンの抽出物を約１．２００ｍｇ生成した。

この実施例は、以下の工程を含むプロセスを示す。
・水酸化カリウム水溶液による抽出
・沈殿
・ろ過
・洗浄
・アルコール抽出
・濃縮／乾燥
・酢酸エチルへの可溶化
・結晶化
・逆相クロマトグラフィーによる精製

６００ｇの新鮮なアボカドパルプを、１００℃でわずかに１０００ｍｌの２．５ＭＫＯＨで抽出し、激しく攪拌しながら１５時間ぶつかったり泡立ったりしないように過圧する。２０°Ｃに冷却した後、１，９００ｍｌの１ＭＣａＣｌ２溶液を加えた。沈殿物を２バールの圧力を使用する濾過によって収集し、沈殿物を４０００ｍｌの水を使用して洗浄した。残った沈殿物を２０℃で２，０００ｍｌのエタノールで抽出し、アボカドポリオール、主にアボカデンとアボカデンを含む濃縮抽出物を得た。濃縮された抽出物を乾固させ、酢酸エチルに可溶化した。酢酸エチルの量を５０ｇ／ｌのアボカデンの濃度に調整した。得られた透明な溶液をゆっくりと｛１℃／分｝で０℃まで冷却した。沈殿は約５°Ｃで始まった。５０ｇ／ｌの濃度の２３ｍｌの溶液で、１．０１ｇのアボカデンを含む２．４ｇの沈殿物が得られた（ＨＰＬＣによる）。

この実施例は、以下の工程を含むプロセスを示す。
・水酸化カリウム水溶液による抽出
・沈殿
・ろ過
・洗浄
・酢酸エチル抽出
・濃縮／乾燥
・酢酸エチルへの可溶化
・結晶化
・逆相クロマトグラフィーによる精製

６００ｇの新鮮なアボカドパルプを、１００℃で１０００ｍｌの２．５ＭＫＯＨおよびわずかな過圧で抽出して、激しく攪拌しながら１５時間ぶつかったり泡立ったりしないようにした。２０°Ｃまで冷却した後、１９００ｍｌの１ＭＣａＣｌ２溶液を加えた。沈殿物を２バールの圧力を使用した濾過によって収集し、沈殿物を４０００ｍｌの水を使用して洗浄した。残った沈殿物を２０℃で２，０００ｍｌの酢酸エチルで抽出し、アボカドポリオール、主にアボカデンとアボカデンを含む濃縮抽出物を得た。濃縮抽出物を真空下で濃縮すると、５０ｇ／ｌのアボカデンを含む濃縮抽出物が得られた。酢酸エチルの量を５０ｇ／ｌのアボカデンの濃度に調整した。この透明な溶液をゆっくりと｛１°Ｃ／分｝０°Ｃまで冷却した。沈殿は約５°Ｃで始まった。５０ｇ／ｌの濃度の２３ｍｌの溶液で、０．５２ｇのアボカデンを含む１．２ｇの沈殿物が得られた（ＨＰＬＣによる）。

この例は、以下の工程を含むプロセスを示す。
・水酸化カリウム水溶液による抽出
・沈殿
・ろ過
・洗浄
・アルコール抽出
・濃度の調整
・逆相クロマトグラフィーによる精製

激しく攪拌しながら１５時間ぶつかったり泡立ったりしないようにして、６００個の新鮮なアボカドパルプを１０００ｍｌの２．５ＭＫＯＨで１００℃およびわずかな過圧で抽出した。２０°Ｃまで冷却した後、１９００ｍｌの１ＭＣａＣｌ２溶液を加えた。沈殿物を２バールの圧力を使用した濾過によって収集し、沈殿物を４０００ｍｌの水を使用して洗浄した。残った沈殿物を２０°Ｃで１，６００ｍｌのエタノールで抽出し、アボカドポリオール、主にアボカデンとアボカデンを含む濃縮抽出物を得た。濃縮抽出物を真空下で濃縮して、２０ｇ／Ｌのアボカデンを含む５０ｍＬの濃縮抽出物を得た。水を使用してアボカデンの濃度を１０ｇ／Ｌに調整し、ＲＰ－ＨＰＬＣで分離して１．０８ｇの生成物を得た。

Claims

次の工程で得られる、特にペルシーアメリカーナ（アボカド果実）が、少なくとも９０重量％のアボカドポリオール、好ましくは少なくとも９５重量％のアボカドを含む、ペルシーの抽出物であって、
｛ａ｝ペルシーのソースを提供し、
｛ｂ｝ペルシーの前記ソースを好ましくは有機溶媒を使用して抽出工程に供し、第１の抽出物を得、
｛ｃ｝前記第１の抽出物を鹸化して、第２の抽出物を得、
｛ｄ｝カルシウム石鹸を沈殿させるために、カルシウム源を前記第２の抽出物に加え、
｛ｅ｝工程｛ｄ｝の生成物を分離工程にかけて、第３の抽出物および前記沈殿したカルシウム塩を得、任意で、
｛ｆ｝前記第３の抽出物をさらに精製する、
工程に従って取得される抽出物。
特にペルシーアメリカーナ（アボカド果実）が、少なくとも９０重量％のアボカドポリオール、好ましくは少なくとも９５重量％のアボカドを含む、ペルシーの抽出物を取得するプロセスであって、
｛ａ｝ペルシーのソースを提供する工程、
｛ｂ｝ペルシーの前記ソースを、好ましくは有機溶媒を使用して抽出工程に供して、第１の抽出物を得る工程、
｛ｃ｝第１の抽出物を鹸化して、第２の抽出物を得る工程、
｛ｄ｝カルシウム石鹸を沈殿させるために、カルシウム源を前記第２の抽出物に加える工程、
｛ｅ｝工程｛ｄ｝の生成物を分離工程にかけて、第３の抽出物および前記沈殿したカルシウム塩を得る工程、及び、任意で、
｛ｆ｝前記第３の抽出物をさらに精製する工程を含むプロセス。
特にペルシーアメリカーナ（アボカド果実）が、少なくとも９０重量％のアボカドポリオール、好ましくは少なくとも９５重量％のアボカドを含む、ペルシーの抽出物を取得するプロセスであって、
｛ａ｝ペルシーのソースを提供する工程、
｛ｂ｝第１の抽出物を得るため、水性またはアルコール性アルカリ性化合物のソースを使用して、上記ペルシーのソースを抽出と鹸化との組み合わせにかける工程、
｛ｃ｝カルシウム石鹸を沈殿させるために、前記第１の抽出物にカルシウム源を加える工程、
｛ｄ｝工程（ｃ）の生成物を分離工程にかけて、第３の抽出物と前記沈殿したカルシウム塩を得る工程、及び任意で
｛ｅ｝前記第３の抽出物をさらに精製する
工程、を含むプロセス。
前記ペルシーのソースが、アボカド果実または前記アボカド果実から得られた果肉のいずれかである、請求項２または３に記載のプロセス。
前記第１の抽出物を得るための抽出が、エタノール、ｎ－ヘプタン、ｎ－ヘキサン、シクロヘキサン、酢酸エチル、酢酸ブチル、アセトン、メチルエチルケトンおよびそれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの有機溶媒を使用して実行される、請求項２に記載のプロセス。
前記第１の抽出物が、任意選択で、水溶液またはアルコール溶液としてアルカリ性水酸化物のソースで処理されて第２の抽出物が得られ、前記第２の抽出物中に存在する脂肪酸がそれらの可溶性アルカリ性石鹸に移される、請求項２に記載のプロセス。
前記第２の抽出物が、鹸化が行われた後、カルシウム塩で処理され、前記抽出物中に存在する前記可溶性アルカリ石鹸がカルシウム石鹸として沈殿される、請求項２に記載のプロセス。
前記カルシウム石鹸が、濾過または遠心分離によって第３の抽出物を形成する液体残留物から分離される、請求項２に記載のプロセス。
前記第３の抽出物が、第４の抽出物を得るために、少なくとも１つの有機溶媒を使用する別の抽出工程に供される、請求項８に記載のプロセス。
前記カルシウム石鹸が、依然としていくらかの液体と関連しており、濾過工程に供されて、純粋なカルシウム石鹸および母液が得られる、請求項８に記載のプロセス。
前記第４の抽出物および前記母液が組み合わされ、任意選択でさらなる精製に供される、請求項９および１０に記載のプロセス。
｛ｉ｝前記第３の抽出物、または
｛ｉｉ｝抽出物と母液とを組み合わせたもの
が、ＭＰＬＣによる最初の精製工程にかけられ、アボカデンに富む少なくとも１つのフラクションが得られる、請求項２に記載のプロセス。
少なくとも９５重量％のアボカデンからなる少なくとも１つのフラクションを得るため、前記アボカデンに富む少なくとも１つのフラクションがＨＰＬＣに供される、請求項１２に記載のプロセス。
｛ｉ｝請求項１または請求項２のプロセスに従ってペルシーの抽出物を提供する工程、
｛ｉｉ｝経口摂取を目的とした組成物に、作業量の前記抽出物を加える工程、
を含む、経口組成物の塩味を調節および／または増強するための方法。
経口組成物の塩味を調節および／または増強する、請求項１または請求項２のプロセスによる抽出物の使用。