JP7196153B2 - 工業用大麻のタイプからのカンナビノイドの製造方法 - Google Patents

Description

本発明は、植物マトリックスからのカンナビノイドの抽出の分野に関し、特に、（－）－カンナビジオール（ＣＢＤ）を抽出し、大麻タイプから純度の高い結晶の形態で得ることに言及する。

カンナビノイドまたはカンナビノールは、天然起源の化学物質であり、テルペノフェノールとして生化学的に分類される。それらは、カンナビノイド受容体と相互作用する能力によって結合された化合物である。

カンナビノイドという用語は、一般に、カンナビス・サティバ（Ｃａｎｎａｂｉｓ ｓａｔｉｖａ）中に存在する化合物のファミリーであると同定されている。

現在までに、このような化合物の約７０が同定されており、その中で最も重要なものは次のものである：
テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ、Δ９－ＴＨＣ）、カンナビジオール（ＣＢＤ）、テトラヒドロカンナビバリン（ＴＨＣＶ）、カンナビノール（ＣＢＮ）、カンナビクロメン（ＣＢＣ）、カンナビシクロール（ＣＢＬ）、カンナビエルソイン（ＣＢＥ）、カンナビジェロール（ＣＢＧ）、カンナビノジオール（ＣＢＮＤ）、カンナビトリオール（ＣＢＴ）、カンナビバリン（ＣＢＶ）、カンナビジバリン（ＣＢＤＶ）、カンナビクロメバリン（ＣＢＣＶ）、カンナビジェロバリン（ＣＢＧＶ）、カンナビジェロールモノエチルエーテル（ＣＢＧＭ）。

最近、標準化されたカンナビノイド含有量（ＴＨＣ ｅ ＣＢＤ）を有する、カンナビス・サティバから抽出された薬物であるＳａｔｉｖｅｘが、市販されている。

カンナビノイドは、それらのカルボキシル誘導体、カンナビノイドカルボン酸の形態でカンナビス・サティバ大麻植物中に見出され、そこからいわゆる「中性カンナビノイド」が脱炭酸、すなわちＣＯ_２除去によって誘導される。従って、例えば、カンナビジオール（ＣＢＤ）は、カンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）脱炭酸によって形成される。

（－）－カンナビジオール（ＣＢＤ）は、その酸性形態（ＣＢＤＡ）および脱炭酸された形態（ＣＢＤ）の両方で植物中に見出すことができる。バイオマスの内側の一方または他方の形態のカンナビノイドの多かれ少なかれの存在は、植物成長条件、したがって環境パラメータ、ならびに後続の処理および貯蔵局面に使用される条件の両方に依存し得る。工業用大麻の処理プロセスでは、バイオマスは、実際に、加熱により、脱炭酸形態（ＣＢＤ）のカンナビノイド（ＣＢＤＡ）の酸形態の脱炭酸をもたらすことができる乾燥局面を受けることができる。この脱炭酸プロセスは、バイオマスがその使用前に長時間貯蔵される場合、低温（Ｒ．Ｔ．）でさえも起こり得る。

最新技術で知られている中性カンナビノイド、特にＣＢＤの単離プロセス（例えば、特許文献１に記載されているものを参照されたい）は、かなり面倒であることが判明し、工業的規模で容易に使用できるプロセスで高純度でそれらを得ることは必ずしも可能ではない。

米国特許第２０１５／００３８５６７号明細書

本発明の目的は、工業用大麻タイプのＣＢＤまたは他の中性カンナビノイドから純度の高い結晶形態で製造する方法を提供することである。

発明の概要
本発明は、ＣＢＤ製造または他の中性カンナビノイドのための方法によって上記の問題を解決し、前記方法は：
ｉ）ＣＢＤおよび／もしくはＣＢＤＡを含む、または前記別の中性カンナビノイド、またはカルボン酸の形態のバイオマスを、０℃から溶媒の還流温度までの温度で少なくとも１０分間抽出溶媒と接触させて、バイオマス除去後に抽出溶液を得；前記抽出溶媒は、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、メチルシクロヘキサン、アセトン、プロパノール、エタノール、メタノール、酢酸エチル、トルエン、塩化メチレン、およびこれらの混合物からなる群から選択されるステップ
を含み；
プロセス（Ａ）に従って継続して：
ｉｉ－ａ）前記抽出溶液を水性アルコール溶液と接触させ、ｐＨを７．５～１２．５に調整し、適切なアルカリ性溶液を用いて、相分離後、第１の水性アルコール相および第１の有機相を得；抽出溶媒が水混和性溶媒である場合、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、メチルシクロヘキサン、およびそれらの混合物からなる群から選択される第１の水不混和性溶媒も添加するステップ；
ｉｉｉ－ａ）第１の水性アルコール相を、第２の水不混和性溶媒およびｐＨを２．０～６．５にするために適する酸溶液と接触させて、第２の有機相と第２の水性アルコール相を得；前記第２の水不混和性溶媒は、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、メチルシクロヘキサン、およびその混合物からなる群から選択されるステップ；
ｉｖ－ａ）第２の有機相を濃縮し、得られた油を６５℃～１８０℃の温度で少なくとも１０分間加熱して、ＣＢＤＡのＣＢＤへの脱炭酸を得るステップ
を含み；
または、プロセス（Ｂ）に従って継続して：
ｉｉ－ｂ）抽出溶液を抽出油が得られるまで濃縮し、抽出油を２０℃未満の温度で少なくとも１０分間アルコールと接触させて、抽出物およびワックスの懸濁液を得、前記アルコールは、メタノール、エタノール、プロパノール、およびそれらの混合物からなる群から選択されるステップ；
ｉｉｉ－ｂ）懸濁液を濾過し、濃縮して、ワックスを含まない抽出油を得、ワックスを含まない抽出油を有機水不混和性有機溶媒および水性アルコール溶液と接触させて、ワックスおよびピッチを含まない抽出物および水性アルコール性相含有ピッチを含有する有機相を得るステップ；
ｉｖ－ｂ）前記ワックスおよびピッチを含まない抽出物を含有する前記有機相を濃縮し、適切な溶離剤相を使用してシリカゲルクロマトグラフィーに供し、ＣＢＤまたは前記別の中性カンナビノイドを含有する画分を収集するステップ
を含み；
ｖ）ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、メチルシクロヘキサン、およびそれらの混合物からなる群から選択される第３の水不混和性溶媒から、ＣＢＤまたは前記別の中性カンナビノイドを結晶化させるステップ
で終了する。

驚くべきことに、本発明に記載される（－）－カンナビジオール（ＣＢＤ）抽出および単離方法は、本明細書中でプロセスＡおよびプロセスＢとして定義される２つのプロセスのいずれか１つを通して、任意の比率の酸性形態（ＣＢＤＡ）および脱炭酸されたもの（ＣＢＤ）を有する「バイオマス」に適用され得ることが見出された。

その特定の単純さのために、プロセスＡは、より限定的な規則に従う医薬分野における処理のために示されることに留意されたい。

ＣＢＤの回収に加えて、プロセスＢは、他のカンナビノイド（例えば、ＣＢＧ、ＣＢＮなど）を得ることにも適用される。

本発明によれば、ペンタン、ヘキサン、ヘプタンおよびオクタン溶媒は、ｎ－ペンタン、ｎ－ヘキサン、ｎ－ヘプタン、ｎ－オクタンまたはそれらの異性体混合物として意図される。

好ましくは、本発明によれば、使用される原料（すなわち、バイオマス）は、工業用大麻（種Ｃａｎｎａｂｉｓ Ｓａｔｉｖａ；亜種Ｓａｔｉｖａ）である。別法として、かつ同様に好ましくは、例えば：Ａｎｔａｌ、Ａｒｍａｎｃａ、Ｂｅｎｉｋｏ、Ｂｉａｌｏｂｒｚｅｓｋｉｅ、Ｃａｎｎａｋｏｍｐ、Ｃａｒｍａ、Ｃａｒｍａｇｎｏｌａ、Ｃａｒｍａｌｅｏｎｔｅ、Ｃｈａｍａｅｌｅｏｎ、Ｃｏｄｉｍｏｒｏ、ＣＳ、Ｄａｃｉａ Ｓａｃｕｉｅｎｉ、Ｄｅｌｔａ－Ｉｌｏｓａ、Ｄｅｌｔａ－４０５、Ｄｅｎｉｓｅ、Ｄｉａｎａ、Ｄｉｏｉｃａ ８８、Ｅｌｅｔｔａ Ｃａｍｐａｎａ、Ｅｐｓｉｌｏｎ ６８、Ｆｅｄｏｒａ １７、Ｆｅｌｉｎａ ３２、Ｆｅｒｉｍｏｎ、Ｆｉｂｒａｎｏｖａ、Ｆｉｂｒｏｌ、Ｆｉｎｏｌａ、Ｆｕｔｕｒａ ７５、Ｉｖｏｒｙ、ＫＣ Ｂｏｎｕｓｚ、ＫＣ Ｄｏｒａ、ＫＣ Ｖｉｒｔｕｓ、ＫＣ Ｚｕｚｕｎａ、Ｋｏｍｐｏｌｔｉ、ＫｏｍｐｏｌｔｉＨｉｂｒｉｄ ＴＣ、Ｌｉｐｋｏ、Ｌｏｖｒｉｎ １１０、Ｍａｒｃｅｌｌｏ、Ｍａｒｋａｎｔ、Ｍｏｎｉｃａ、Ｒａｊａｎ、Ｒａｔｚａ、Ｓａｎｔｈｉｃａ ２３、Ｓａｎｔｈｉｃａ ２７、Ｓａｎｔｈｉｃａ ７０、ＳｅｃｕｉｅｎｉＪｕｂｉｌｅｕ、Ｓｉｌｖａｎａ、Ｓｚａｒｖａｓｉ、Ｔｉｂｏｒｓｚａｌｌａｓｉ、Ｔｉｓｚａ、Ｔｙｇｒａ、Ｕｎｉｋｏ Ｂ、Ｕｓｏ－３１、Ｗｉｅｌｋｏｐｏｌｋｉｅ、Ｗｏｊｋｏ、Ｚｅｎｉｔのタイプの工業用大麻を使用することができる。

バイオマスは、好ましくは、本発明の方法による溶媒抽出に供される前に微粉化される。

プロセスＡ：
好ましくは、ＣＢＤＡおよびＣＢＤ抽出は、大麻を、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、メチルシクロヘキサンおよびそれらの混合物からなる群から好都合に選択される溶媒と接触させて保持することによって行われ、より好ましくは、抽出溶媒としてヘキサン（ｎ－ヘキサンまたは異性体混合物）が使用される。

プロセスＡによる抽出は、好ましくは、０℃～３５℃、より好ましくは１０℃～２５℃の温度で少なくとも１０分間行われる。

本発明の方法Ａによれば、酸形態（ＣＢＤＡ）は、アルコールがエタノール、メタノール、好ましくはメタノールからなる群から都合よく選択される水性アルコール溶液の添加によって、脱炭酸形態（ＣＢＤ）および不純物から分離される。分離は、撹拌下で、好適なアルカリ性溶液、好ましくは３０％ＮａＯＨ溶液を添加することによって行われ、ｐＨを７．５～１２．５、より好ましくは８．０～８．５、さらにより好ましくは８．２～８．３にする。ｐＨ８．２～８．３は、水性アルコール相において、出発バイオマス中にかなりの量であっても、時に存在するオメガ－３またはオメガ－６などの脂肪酸も抽出できないようにするために特に有利であることが観察されている。

第１の水性アルコール相を回収し、撹拌しながら第２の多少無極性の水不混和性溶媒、好ましくはヘキサン（ｎ－ヘキサンまたは異性体混合物）を添加し、酸溶液、好ましくは酢酸溶液を使用して、ｐＨを６．５～２．０、好ましくは４．５～５．５、さらにより好ましくは４．８～５．２にすることによって、ＣＢＤＡを抽出する。

第２の有機相を油に濃縮し、それに含まれるＣＢＤＡを脱炭酸してＣＢＤにし、油を６５℃～１８０℃の温度に少なくとも１０分間保持する。

次に、ＣＢＤを結晶化させる。

Ｂプロセス
ＣＢＤＡおよびＣＢＤ抽出は、大麻を、アセトン、プロパノール、エタノール、メタノール、酢酸エチル、トルエン、ｎ－ヘキサンまたは異性体のヘキサン混合物からなる群から好ましくは選択される溶媒；より好ましくはメタノールと、溶媒の還流温度で少なくとも１０分間接触して保持することによって行われる。必要であれば、ＣＢＤＡがＣＢＤに完全に脱炭酸されるまで、懸濁液を撹拌下に保持する。

懸濁液は、さらに６０時間以上還流に維持することができる。

バイオマスを濾過または遠心分離によって分離し、ＣＢＤを含有する溶液を油まで濃縮する。

抽出溶液中に存在するワックスは、アルコールの添加によって除去され、好ましくはメタノールが使用され、温度を２０℃未満、好ましくは４÷１０℃、さらにより好ましくは４℃に少なくとも１０分間維持する。懸濁液を濾過し、ワックスを含まない溶液を濃縮して油にする。

ピッチは、撹拌下で、トルエン、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタンおよびそれらの混合物からなる群の適切に選択された溶媒を添加することによって油から除去され、好ましくはヘキサン（ｎ－ヘキサンまたは異性体の混合物）が使用され、アルコールがエタノールおよびメタノールからなる群から適切に選択される水性アルコール溶液が使用され、好ましくはメタノールが使用される。

ヘキサン相を油に濃縮し、溶離相として、好ましくはヘキサン（ｎ－ヘキサンまたは異性体の混合物）と酢酸エチルとの混合物を、好ましくは２０：１～５：１、さらにより好ましくは１０：１の比で使用するシリカゲルカラムに装填する。

精製されたＣＢＤを含む画分を一緒にプールし、油中で濃縮し、それに含まれるＣＢＤを結晶化させる。

結晶化
ＣＢＤの結晶化は、それがプロセスＡからであろうとプロセスＢからであろうと、撹拌下で、油重量と比較して０．３÷３体積、好ましくは０．５÷１、さらにより好ましくは０．６体積の溶媒を添加することによって起こる。溶媒は、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタンおよびメチルシクロヘキサン、好ましくはヘキサンまたはヘプタン（もしくはそれらの異性体の混合物）またはメチルシクロヘキサンからなる群から、３０℃未満の温度で少なくとも１０分間、好都合に選択され、結晶化溶媒として使用される。結晶化は、任意選択で、最小量の結晶ＣＢＤの添加によって誘発される。

この結晶化ステップは、任意選択で、油重量に対して０．３÷３体積、好ましくは０．５÷２．５、なおより好ましくは２体積の溶媒を撹拌下で添加することによって、さらにより高い純度を有する生成物を得るために、２回繰り返され得る。

本発明の有利な態様は、ｉｉ－ｂからｉｖ－ｂまでのプロセスステップを、プロセスＡのステップｉｉ－ａから得られる第１の有機相に適用して、その中に含まれるＣＢＤまたは他の中性カンナビノイドを回収することができるので、プロセスＡおよびＢを統合することができることである。

本発明は、以下の実施形態に照らしてより良く理解されるであろう。

図１は、ＣＢＤＡとＣＢＤとの間の異なる比率および関連するＲＴを有する２つの大麻抽出物のＨＰＬＣ出力記録を示す。

実験の部
材料および方法
ＨＰＬＣ
カラム＝Ｔｈｅｒｍｏ Ａｃｃｕｃｏｒｅ Ｃ１８（１００×４．６ｍｍ；２．６μｍ）。
温度＝５０℃。
溶離相＝勾配－水（Ｈ３ＰＯ４ ０．０５％）／アセトニトリル。
検出器＝ＵＶ（２００～２１０ｎｍ）。
ＲＴ（ＣＢＤＡ）＝約４分
ＲＴ（ＣＢＤ）＝約５分

実施例１：その酸性形態（ＣＢＤＡ）の抽出および分離によって、約７０／３０のＣＢＤＡ／ＣＢＤ比を有する大麻からＣＢＤを得ること（プロセスＡ）（試験Ｑ２０７Ｄ／３９４およびＱ２０７Ｄ／３９６）。
バイオマスからのヘキサン抽出（試験Ｑ２０７Ｄ／３９４）：
２０℃の温度で４時間撹拌しながら、撹拌軸を備えた２５０リットルのスチールジャケット付き反応器に、ヘキサン１３２Ｋｇおよび微粉化大麻４０ｋｇを導入した。

この後、懸濁液を反応器から排出し、真空下で２アリコートで濾過した。各アリコート中のフィルターによって保持されたバイオマスを、１０リットルのヘキサンで洗浄した。

濾過した溶液を反応器に再装填し、真空下、３５℃未満の温度で、可能な最小体積で濃縮した。５０８．６４ｇのＣＢＤＡ＋１２５．７ｇのＣＢＤを含有する７．４８ｋｇの濃縮溶液が得られた（ＨＰＬＣ分析によって得られた値）。

濃縮された溶液は、次の局面のために３０℃未満の温度に保持されている。

ＣＢＤＡのＣＢＤからの分離（試験Ｑ２０７Ｄ／３９６）：
撹拌機シャフトを備えた３リットルの４つ口ガラスフラスコ中に、濃縮溶液１００１．０ｇ（ＣＢＤＡ７７．７ｇ＋ＣＢＤ１６．８ｇを含む）、メタノール５４０ｍｌ、脱イオン水８１０ｍｌおよび重亜硫酸ナトリウム５ｇを導入した。３０％ＮａＯＨ溶液（約１２５ｍｌ）を添加することにより、撹拌下でｐＨを１２．０に補正した。全体を、下部のメタノール－水性相（１）から上部のヘキサン相（１）を分離するための分液漏斗に移した。

分液漏斗を取り外し、２相を分離して保持し、上部ヘキサン相（１）を４つ口フラスコに戻し、撹拌しながら、１６０ｍｌのメタノール、２４０ｍｌの脱イオン水および５ｇの重亜硫酸ナトリウムを導入した。３０％ＮａＯＨ溶液を添加することによってｐＨを１２．５に調整した。

全体を、下部のメタノール－水性相（２）から上部のヘキサン相（２）を分離するための分液漏斗に移した。

２つのメタノール－水性相（１）および（２）を４つ口フラスコにプールし、４００ｍｌのヘキサンをそれに添加した。氷酢酸の添加により撹拌下でｐＨを５．５に低下させ、全体を分液漏斗に移して、上部のヘキサン相（３）を下部のメタノール－水性相（３）から分離させた。

ヘキサン相（２）を４つ口フラスコに移し、等量の脱塩水をそれに加えた。氷酢酸を添加することによって撹拌下でｐＨを５．５に低下させ、全体を分液漏斗に移し、上部のヘキサン相（４）を下部の水相（４）から分離した。

結果（ＨＰＬＣ分析）：

ヘキサン相（３）に含まれるＣＢＤＡの脱カルボキシル化：
ヘキサン相（３）を、蒸留ヘキサンを回収するための撹拌シャフトおよび凝縮器を備えた５００ｍｌの４つ口フラスコに入れ、１２０℃の温度で加熱されたグリセリン浴中で約７時間撹拌下で脱炭酸に供した。油に濃縮された溶液をＲ．Ｔ．に冷却し、１５０ｍｌのヘキサンで希釈し、真空下で化石粉のパネル上で濾過した。

次いで、濾過した溶液を、４５℃の温度でロータリーエバポレーターによって再濃縮し、７７．７ｇの油（６５．９ｇのＣＢＤを含有する）を得た。

ＣＢＤの結晶化：
７７．７ｇの油を、撹拌シャフトを備えた２５０ｍｌの４つ口ガラスフラスコに移し、７７ｍｌのヘキサンをそれに加えた。全体を４℃の冷室で３時間撹拌した。この後、結晶性固体をＧｏｕｃｈ（Ｇ３）上で濾過し（常に４℃の冷室中で）、各冷ヘキサンの２つの２５ｍｌアリコートで洗浄した。９８．９％のＨＰＬＣ純度を有する４６．５ｇの結晶が得られた。

結晶化の母液からのＣＢＤの回収：
前の結晶化ステップから得られた母液を、４５℃の温度でロータリーエバポレーターによって濃縮し、３１ｇの油を得、これを、４℃の冷室内で１００ｍｌの４つ口フラスコ（撹拌シャフトを備えた）に移した。１５ｍｌのヘキサンを、油に添加した。全体を６時間撹拌し続けた。この後、結晶性固体をＧｏｕｃｈ（Ｇ３）上で濾過し（常に４℃の冷室中で）、冷ヘキサン５ｍｌずつの３つのアリコートで洗浄した。６．０ｇの結晶が、９７．９％のＨＰＬＣ純度で得られた。

実施例２：クロマトグラフィー（プロセスＢ）による第１のヘキサン相（プロセスＡ）中に存在するＣＢＤおよびＣＢＤＡの回収 試験Ｎ°Ｑ２０７Ｆ／５９４
ワックス除去：
１．９８ｇのＣＢＤおよび０．４８ｇのＣＢＤＡを含有する方法（Ａ）に従って得られた第１のヘキサン相８７．７ｇを、真空下、５０℃の温度でロータリーエバポレーターによって油に濃縮した。５０ｍｌのメタノールを油に添加し、全体を一晩－２０℃に移した。

懸濁液をＧｏｕｃｈ（Ｇ３）濾過漏斗上で真空下で濾過し、フィルターによって保持されたワックスを冷メタノールの２つの５０ｍｌアリコートで洗浄した。濾過した生成物を、真空下、５０℃の温度でロータリーエバポレーターによって濃縮し、１．６０ｇのＣＢＤおよび０．３１ｇのＣＢＤＡを含有する８．１ｇの油を得た。

シリカゲルクロマトグラフィー：
１００ｇのシリカゲルをガラスカラム（Φ５ｃｍ×ｈ２０ｃｍ）に充填し、２５０ｍＬの移動相（ヘキサン－酢酸エチル１０：１）で平衡化した。

約８ｍｌの移動相で希釈した後、先の工程からの８．１ｇの油をカラムに装填した。溶出は落下によって行われ、それぞれ２２ｇの１２の画分が収集された。含まれるｎ°４～ｎ°１２の画分について、ＨＰＬＣ分析を行って、ＣＢＤ含有量および相対純度を検証した。

結果：

１．４１ｇの総ＣＢＤ含有量を有するｎ°４～ｎ°９の画分のプール（純度の高い画分）および０．１３８ｇの総ＣＢＤ含有量を有するｎ°１０～ｎ°１２の画分プール（平均純度までの画分）を得た。

実施例３：ＣＢＤＡ／ＣＢＤ比が約９０／１０の大麻から、その酸形態（ＣＢＤＡ）の抽出および分離によって、実験室規模でＣＢＤを得ること（プロセスＡ）（試験Ｑ２０７Ｅ／５１５）。
バイオマスからのヘキサン抽出：
２ｋｇの微粉化大麻および１０リットルのヘキサン（異性体の混合物）を、撹拌シャフトを備えた１５リットルのガラスフラスコに導入する。全体を室温で４時間撹拌し続けた。この後、懸濁液を、フィルター上のバイオマスを６リットルのヘキサンで洗浄することによって、真空下でブフナー漏斗によって濾紙上で濾過した。濾過した生成物を、ロータリーエバポレーターによって、真空下、３０℃の温度で８６０ｍｌの体積まで濃縮した。

ＣＢＤからのＣＢＤＡの分離：
２１．２３ｇのＣＢＤＡおよび１．８ｇのＣＢＤ（ＨＰＬＣ分析から得られた値）を含有する濾過溶液を、撹拌シャフトを備えた３リットルの４つ口ガラスフラスコに導入し、それに４７８ｍｌのメタノールおよび３６０ｍｌの脱塩水を添加した。

激しく撹拌しながら、約７ｍｌの３０％ＮａＯＨ溶液を添加することにより、ｐＨを８．２に上昇させた。

全体を、下部のメタノール－水性相（１）から上部のヘキサン相（１）を分離するための分液漏斗に移した。

メタノール－水性相（１）を４口フラスコに戻し、７４０ｍｌのヘキサン（異性体の混合物）を撹拌しながら添加した。約２０ｍｌの氷酢酸を添加することによってｐＨを５．０に調整した。

全体を、下部のメタノール－水性相（２）から上部のヘキサン相（２）を分離するための分液漏斗に移した。

ヘキサン相（２）に含まれるＣＢＤＡの脱カルボキシル化：
ヘキサン相（２）を、蒸留ヘキサンを回収するための撹拌シャフトおよび凝縮器を備えた１リットルの４つ口フラスコに入れ、１２０℃の温度で加熱したグリセリン浴中で約４時間撹拌しながら脱カルボキシル化に供した。

ＣＢＤの結晶化：
ＣＢＤを含有する溶液を、真空下、５０℃の温度でロータリーエバポレーターによって濃縮し、１４．５ｍｌのヘキサン（異性体の混合物）で希釈した２４．３ｇの油を得、４℃の冷室に一晩置いた。この後、懸濁液をＧｏｕｃｈ（Ｇ３）で濾過し、結晶を６ｍｌの冷ヘキサンで洗浄した。１０．１ｇの湿潤結晶ＣＢＤが９９．６％の純度で得られ、４２．２ｇの母液が３．８８ｇのＣＢＤを含有していた。

実施例４：パイロットスケールで、約９０／１０のＣＢＤ／ＣＢＤ比を有する大麻から、その酸性形態（ＣＢＤＡ）の抽出および分離によってＣＢＤを得ること（プロセスＡ）（生成物Ｐ５６／３８／０４７）。
バイオマスからのヘキサン抽出：
１５０ｋｇの微粉化大麻および７００リットルのヘキサン（異性体の混合物）を、撹拌システムを備えたスチールドライヤーフィルターに導入した。全体を室温で１時間撹拌し続けた。この時間の後、撹拌を停止し、懸濁液を窒素圧で濾過した。ＣＢＤＡを含有する濾過された生成物は、槽に集められた。フィルターによって保持されたバイオマスを、全体を室温で１時間撹拌下に維持しながら、それぞれヘキサンの２つの４５０リットルアリコートで洗浄し、濾液を窒素圧によって収集槽に毎回排出した。

排出されたバイオマスは、乾燥フィルターから排出され、そこでは、さらに１５０ｋｇの新鮮な微粉化大麻が、第２の抽出のために装填されている。

前濃縮：
それぞれ１５０ｋｇの大麻の２回の抽出から得られた濾過溶液を、撹拌システムおよび凝縮器を備えたジャケット付きスチール反応器にプールし、真空下、３０℃の温度で約１８０リットルの体積まで濃縮した。

ＣＢＤからのＣＢＤＡの分離：
予め濃縮した溶液１８０リットルを、２５０リットルのスチールジャケット付き反応器に装填し、撹拌機軸および凝縮器を装備し、真空下、１６～２０℃の温度で約１３０リットルの最終容量で濃縮した。５４リットルの飲料水を５７リットルのメタノールと共に反応器に装填した。撹拌しながら、３０％水酸化ナトリウム溶液を添加することによってｐＨを８．２にした。全てを６０分間静止状態に保持した。２つの相を別々に排出し、水性アルコール相を反応器に再充填し、７６．６ｋｇのヘキサン（異性体の混合物）をそれに添加した。３．７５リットルの氷酢酸を添加することにより、ｐＨを撹拌下で５．０にし、全体を１時間静置した。

下部の水性アルコール相（１１５Ｋｇ）を廃棄のためにタンクに排出し、一方、上部のヘキサン相を真空下で約５０℃の温度で濃縮し、約２７Ｋｇの最終重量を得て、その後の脱炭酸局面のために回収した。

ヘキサン相（２）に含まれるＣＢＤＡの脱カルボキシル化：
（ＨＰＬＣ分析からの）１４．４８ＫｇのＣＢＤＡを含有する先のステップからの４つのヘキサン相を、２５０リットルのスチールジャケット付き反応器にプールし、撹拌シャフトを備え、５０℃の温度で油まで濃縮した。４時間撹拌しながら温度を約１２０℃にした。この後、１３．６Ｋｇのヘキサン（異性体の混合物）を反応器に添加し、３０．３ｋｇの溶液を次の結晶化ステップのために排出した。

ＣＢＤの第１の結晶化：
３０．３Ｋｇの前の工程からのＣＢＤ溶液を、ブフナー濾過漏斗によって真空下で紙上で濾過し、撹拌シャフトを備えた２５リットルのガラス反応器に装填した。溶液を真空下、５０℃の温度で油に濃縮し、３５℃に冷却した後、６ｋｇのヘキサン（ｎ－ヘキサン）を添加した。溶液を２０℃に冷却し、２０ｇの結晶ＣＢＤを添加することによって結晶化を誘発した。

３０分後、１２時間撹拌しながら温度を４℃にした。

懸濁液をブフナー濾過漏斗により真空下で紙上で濾過し、結晶を６リットルの冷ヘキサン（ｎ－ヘキサン）で洗浄した。８．１６Ｋｇの湿潤結晶ＣＢＤは、０．３３％のＬＯＤ、９８．６％の純度、および２．９６ＫｇのＣＢＤを含有する１２．６５Ｋｇの母液で得られた。

ＣＢＤの第２の結晶化：
８．１６Ｋｇの前の工程から来る結晶ＣＢＤを、撹拌シャフトを備えた２５リットルのガラス反応器に装填し、完全に溶解するまで撹拌しながら３５℃で８．４８Ｋｇのヘキサン（ｎ－ヘキサン）に結合させた。下降傾斜を行うことによって温度を４℃にし、１２時間維持した。

懸濁液をブフナー濾過漏斗により真空下で紙上で濾過し、結晶を６．７リットルの冷ヘキサン（ｎ－ヘキサン）で洗浄した。６．９４Ｋｇの純度９９．４％の湿潤結晶および６２５ｇのＣＢＤを含有する母液１１．９Ｋｇが得られた。

実施例５：工業的規模でシリカゲルクロマトグラフィーによりＣＢＤを得ること（プロセスＢ）。
バイオマスからのＣＢＤのメタノール抽出（ＦＤＬ ＃ ２７２８ＰＦ ０１ ０１参照）：
６０００リットルのスチール製反応器に、ジャケット付きで撹拌シャフトを備えたメタノール３５００ｋｇを導入し、撹拌下で１０００ｋｇの微粉化バイオマスを導入した。温度を還流温度で６３～６７℃にした。全体を、ＣＢＤＡのパーセンテージがＣＢＤに対して７％以下になるまで（約６０時間）、撹拌下に保持した。反応器の内部温度を１５÷２５℃に低下させた後、懸濁液を、４５０÷５００ｒｐｍで２０÷２５分間キャンバス上で遠心分離することによって濾過し、バイオマスを約２０ｋｇのメタノールで２５÷３０分間３回洗浄した。ワックス成分を除去するために、濾過した溶液を反応器に再充填し、撹拌可能な油状残留物が得られるまで５０℃の温度で真空下で濃縮し、これに３００リットルのメタノールを添加した。反応器温度を、真空下で還流下で３０分間蒸留することによって６３～６７℃にした。この後、温度を－５÷－１０℃に下げ、懸濁液を約１２時間ゆっくり撹拌し続け、その最後に温度を５÷１０℃に上げた。２２Ｋｇの化石粉を撹拌下で添加し、懸濁液を、４５０÷５００ｒｐｍで６０分間、キャンバス上での遠心分離によって濾過し、それぞれ３５÷４０分間、約４０ｋｇの冷メタノール（５÷１０℃）で３回洗浄した。

ピッチの削除（ＦＤＬ ＃ ２７２８ＰＦ ０２ ０１参照）：
濾過した溶液を反応器に戻し、撹拌可能な油状残留物が得られるまで５０℃の温度で真空下で濃縮し、これに４００リットルのメタノールを添加した。反応器温度を、真空下で還流下で３０分間蒸留することによって６３～６７℃にした。この後、温度を１５÷２５℃に下げ、ヘキサン１５０ｋｇおよび脱塩水１５０リットルを反応器に装填した。混合物を１５÷２５℃の温度で３０分間撹拌し続け、さらに３０分間静置して、上部のヘキサン相（１）から下部のメタノール－水性相（１）を分離させた。メタノール－水相（１）を、７５ｋｇのヘキサンも導入した第２の反応器に移した。混合物を１５÷２５℃の温度で３０分間撹拌し続け、さらに３０分間静置して、上部のヘキサン相（２）から下部のメタノール－水性相（２）を分離させた。水性メタノール相（２）は、ヘキサン相（１）が導入された反応器から排出された。このようにしてプールした２つのヘキサン相を、真空下、５０℃の温度で濃縮し、４３ｋｇの濃縮溶液を得た。濃縮生成物のサンプルを、ＣＢＤ含有量の判定のために採取した。

結果：
乾燥重量＝４３．９ｋｇ
ＣＢＤの総含有量＝１６，０ｋｇ
ＣＢＤ／乾燥重量比×１００＝３６，４％

シリカゲルクロマトグラフィー（ＦＬＤ ＃ ２７２８ＰＦ ０３Ａ ０１参照）：
スチール塔（Φ８０ｃｍ×ｈ２００ｃｍ）に４００ｋｇのシリカゲルを充填し、１０００リットルの移動相（ヘキサン－酢酸エチル１０：１）を用いて２５０÷３００リットル／時の流量で等カレント（equicurrent）でバランスさせた。

４３．９Ｋｇの抽出物ピッチ非含有をヘキサン（異性体の混合物）で総重量５４ｋｇまで希釈し、カラムに装填した。溶出は、移動相（ヘキサン－酢酸エチル１０：１）を用いて、２５０÷３００リットル／時の流量で等カレントで行った。ＣＢＤ含有量および相対純度を検証するためにＨＰＬＣ分析を行った１００Ｋｇの１１画分をそれぞれ収集した。

結果

８６．６％～９１．７％の範囲のＨＰＬＣ純度を有する画分（純度の高い画分プール）を、次の結晶化ステップのためにプールした。８１．１％～８４．７％の純度を有する画分をプールし（中純度の画分プール）、他のクロマトグラフィーからの中純度の他の画分と合わせた後、カラム上で再び精製した。

ＣＢＤの第１の結晶化（ＦＤＬ ＃ ２７２８ＰＦ ０１ ０２参照）：
シリカゲルでの２つの異なる精製から得られ、２５．２７ＫｇのＣＢＤを含む高純度画分の６９．５Ｋｇのプールを収集し、キャンバス上で真空濾過し、２５０リットルのスチールジャケット付き反応器に装填し、撹拌機シャフトを装備し、４５℃の温度で真空下で油に濃縮した。濃縮の終了時に、温度を７０℃に上げ、撹拌を３時間維持した。この後、温度を３０℃に下げ、１８リットルのヘキサン（異性体の混合物）を添加した。温度を１５÷２１℃に下げ、２０ｇのＣＢＤ結晶を添加することによって結晶化を誘発した。温度をさらに４℃に下げ、全体を１２時間撹拌し続けた。懸濁液を反応器から排出し、合計１２．６リットルの冷ヘキサンで結晶を３回洗浄することにより、キャンバス上での真空濾過により「生」ＣＢＤ結晶を回収した。２０Ｋｇの湿潤結晶ＣＢＤ（ＨＰＬＣ純度９９．２２％）が得られ、ＬＯＤは７．９％であり、乾燥生成物１８．４Ｋｇおよび結晶化母液３２Ｋｇに相当する。

結晶化母液からのＣＢＤの回収（ＦＤＬ ＃ ２７２８ＰＦ ０１ ０２参照）：
２３Ｋｇの結晶化母液を、ガラスジャケット付き２５リットル反応器中で濃縮し、真空撹拌シャフトを５０℃の温度で１９リットルの体積まで装備した。５リットルのヘキサン（異性体の混合物）を添加し、温度を４℃にした後、一晩撹拌しながら４℃に維持しながら、７ｇの結晶ＣＢＤを添加することによって結晶化を誘発した。懸濁液を真空下で紙上で濾過し、結晶を２リットルの冷ヘキサン（異性体の混合物）で洗浄した。

３．２ｋｇの湿潤結晶が得られた（ＨＰＬＣ純度９５．９４％）。

実施例６：メチルシクロヘキサン中でのＣＢＤの結晶化（試験Ｑ２０７Ｆ／５７６Ｂ）。
実施例４による方法Ａによって得られたＣＢＤ結晶２５ｇを、室温で、撹拌下で、２５０ｍｌのヘキサン（異性体の混合物）と共に、マグネチックスターラーバーを備えた５００ｍｌのガラスフラスコ中で溶解し、一晩静置した。この溶液を、０．８μｍの多孔度を有するガラス繊維フィルター上で真空下で２回濾過し、５０℃の温度でロータリーエバポレーターによって油に濃縮した。

５０ｍｌのメチルシクロヘキサンを油に添加し、全体を４℃の温度で一晩撹拌した。

懸濁液をＧｏｕｃｈ（Ｇ３）フィルター漏斗上で真空下で濾過し、結晶を２０ｍｌの冷メチルシクロヘキサンで洗浄した。

９９．０５％のＨＰＬＣ純度を有する１６．９ｇの湿潤結晶および２４ｇの母液が、得られた。

実施例７：ヘプタン中でのＣＢＤの結晶化（試験Ｑ２０７Ｆ／５８４）。
実施例４による方法Ａによって得られた２２．１ｇの結晶ＣＢＤを、３８℃の温度で撹拌しながら、４５ｍｌのヘプタンと共に、マグネチックスターラーバーを備えた１００ｍｌのガラスフラスコ中で溶解させた。溶液を４℃にし、結晶ＣＢＤスパチュラチップを添加することによって結晶化を誘発し、その間全体を磁気撹拌棒によって一晩撹拌し続けた。

懸濁液をＧｏｕｃｈ（Ｇ３）フィルター漏斗上で真空下で濾過し、結晶を冷ヘプタンの２つの１０ｍｌアリコートで洗浄した。

２０．１ｇの湿潤結晶が、９９．２％のＨＰＬＣ純度および３６．４ｇの母液で得られた。

Claims (11)

1. カンナビジオール（ＣＢＤ）または別の中性カンナビノイドの製造方法であって、前記方法は：
   ｉ）ＣＢＤおよび／もしくはＣＢＤＡを含むバイオマス、または前記別の中性カンナビノイドを含むバイオマス、または前記別の中性カンナビノイドのカルボン酸の形態で含むバイオマスを、０℃と溶媒の還流温度との間の温度で少なくとも１０分間抽出溶媒と接触させて、バイオマス除去後に抽出溶液を得；前記抽出溶媒は、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、メチルシクロヘキサン、アセトン、プロパノール、エタノール、メタノール、酢酸エチル、トルエン、塩化メチレン、およびこれらの混合物からなる群から選択されるステップ
   を含み；
   プロセス（Ａ）に従って継続して：
   ｉｉ－ａ）前記抽出溶液を水性アルコール溶液と接触させ、ｐＨを７．５～１２．５に調整し、適切なアルカリ性溶液を用いて、相分離後、第１の水性アルコール相および第１の有機相を得；抽出溶媒が水混和性溶媒である場合、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、メチルシクロヘキサン、およびそれらの混合物からなる群から選択される第１の水不混和性溶媒も添加するステップ；
   ｉｉｉ－ａ）前記第１の水性アルコール相を、第２の水不混和性溶媒およびｐＨを２．０～６．５にするために適応された酸溶液と接触させて、第２の有機相と第２の水性アルコール相を得；前記第２の水不混和性溶媒は、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、メチルシクロヘキサン、およびその混合物からなる群から選択されるステップ；
   ｉｖ－ａ）前記第２の有機相を濃縮し、得られた油を６５℃～１８０℃の温度で少なくとも１０分間加熱して、ＣＢＤＡのＣＢＤへの脱炭酸を得るステップ
   を含み；
   または、第２のプロセス（Ｂ）に従って継続して：
   ｉｉ－ｂ）前記抽出溶液を濃縮して抽出油を得、前記抽出油を２０℃未満の温度で少なくとも１０分間アルコールと接触させて、抽出物およびワックスの懸濁液を得、前記アルコールは、メタノール、エタノール、プロパノール、およびそれらの混合物からなる群から選択されるステップ；
   ｉｉｉ－ｂ）前記懸濁液を濾過し、濃縮して、ワックスを含まない抽出油を得、前記ワックスを含まない抽出油を有機水不混和性溶媒および水性アルコール溶液と接触させて、ワックスおよびピッチを含まない抽出物および水性アルコール性ピッチ含有相を含有する有機相を得るステップ；
   ｉｖ－ｂ）前記ワックスおよびピッチを含まない抽出物を含有する前記有機相を濃縮し、適切な溶離剤相を使用してシリカゲルクロマトグラフィーに供し、ＣＢＤまたは前記別の中性カンナビノイドを含有する画分を収集するステップ
   を含み；
   ｖ）ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、メチルシクロヘキサン、およびそれらの混合物からなる群から選択される第３の水不混和性溶媒から、ＣＢＤまたは前記別の中性カンナビノイドを結晶化させるステップ
   で終了する方法。
2. 前記バイオマスが、Ｃａｎｎａｂｉｓ Ｓａｔｉｖａ、Ａｎｔａｌ、Ａｒｍａｎｃａ、Ｂｅｎｉｋｏ、Ｂｉａｌｏｂｒｚｅｓｋｉｅ、Ｃａｎｎａｋｏｍｐ、Ｃａｒｍａ、Ｃａｒｍａｇｎｏｌａ、Ｃａｒｍａｌｅｏｎｔｅ、Ｃｈａｍａｅｌｅｏｎ、Ｃｏｄｉｍｏｒｏ、ＣＳ、Ｄａｃｉａ Ｓａｃｕｉｅｎｉ、Ｄｅｌｔａ－Ｉｌｏｓａ、Ｄｅｌｔａ－４０５、Ｄｅｎｉｓｅ、Ｄｉａｎａ、Ｄｉｏｉｃａ ８８、Ｅｌｅｔｔａ Ｃａｍｐａｎａ、Ｅｐｓｉｌｏｎ ６８、Ｆｅｄｏｒａ １７、Ｆｅｌｉｎａ ３２、Ｆｅｒｉｍｏｎ、Ｆｉｂｒａｎｏｖａ、Ｆｉｂｒｏｌ、Ｆｉｎｏｌａ、Ｆｕｔｕｒａ ７５、Ｉｖｏｒｙ、ＫＣ Ｂｏｎｕｓｚ、ＫＣ Ｄｏｒａ、ＫＣ Ｖｉｒｔｕｓ、ＫＣ Ｚｕｚｕｎａ、Ｋｏｍｐｏｌｔｉ、ＫｏｍｐｏｌｔｉＨｉｂｒｉｄ ＴＣ、Ｌｉｐｋｏ、Ｌｏｖｒｉｎ １１０、Ｍａｒｃｅｌｌｏ、Ｍａｒｋａｎｔ、Ｍｏｎｉｃａ、Ｒａｊａｎ、Ｒａｔｚａ、Ｓａｎｔｈｉｃａ ２３、Ｓａｎｔｈｉｃａ ２７、Ｓａｎｔｈｉｃａ ７０、ＳｅｃｕｉｅｎｉＪｕｂｉｌｅｕ、Ｓｉｌｖａｎａ、Ｓｚａｒｖａｓｉ、Ｔｉｂｏｒｓｚａｌｌａｓｉ、Ｔｉｓｚａ、Ｔｙｇｒａ、Ｕｎｉｋｏ Ｂ、Ｕｓｏ－３１、Ｗｉｅｌｋｏｐｏｌｋｉｅ、Ｗｏｊｋｏ、Ｚｅｎｉｔからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
3. 前記バイオマスが、溶媒抽出に供される前に微粉化される、請求項１または２に記載の方法。
4. 前記プロセス（Ａ）を実施する方法であって、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、メチルシクロヘキサン、およびそれらの混合物からなる群から選択される抽出溶媒と大麻を接触させて保持しながら、前記ステップ（ｉ）の抽出を実施し；前記抽出は０℃～３５℃の温度で少なくとも１０分間行われる、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
5. 前記プロセス（Ａ）を実施する方法であって、前記ステップ（ｉｉ－ａ）の水性アルコール溶液は、前記アルコールがエタノール、メタノールからなる群から選択され、適切なアルカリ性溶液を添加することによって前記ｐＨを、８．０～８．５に調節するようになっている、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
6. 前記プロセス（Ａ）を実施する方法であって、前記ステップ（ｉｉｉ－ａ）のｐＨは、酢酸溶液を添加することによって、４．５～５．５に調整される、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
7. 前記プロセス（Ａ）を実施する方法であって、ステップ（ｉｉ－ａ）の終了時に得られた前記第１の有機相を前記プロセス（Ｂ）の前記ステップ（ｉｉ－ｂ）～（ｉｖ－ｂ）に供し、次いでこのようにして得られた前記ＣＢＤを結晶化に供する、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
8. 前記プロセス（Ｂ）を実施する方法であって、ステップ（ｉ）での前記抽出を、前記大麻をアセトン、プロパノール、エタノール、メタノール、酢酸エチル、トルエン、ｎ－ヘキサンまたは異性体のヘキサン混合物からなる群から選択される抽出溶媒と接触させて保持しながら、溶媒還流温度で少なくとも１０分間実施する、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
9. 前記プロセス（Ｂ）を実施する方法であって、ステップ（ｉｉ－ｂ）において、前記使用したアルコールがメタノールであり、一方温度を４÷１０℃に少なくとも１０分間保持する、請求項１～３および８のいずれか一項に記載の方法。
10. 前記プロセス（Ｂ）を実施する方法であって、ステップ（ｉｉｉ－ｂ）において、前記ピッチが、トルエン、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、およびそれらの混合物からなる群から選択される溶媒；ならびにアルコールがエタノールおよびメタノールからなる群から選択される水性アルコール溶液を撹拌下で添加することによって、前記ワックスを含まない抽出油から除去される、請求項１～３および８～９のいずれか一項に記載の方法。
11. ステップ（ｉｖ－ｂ）において、前記溶離剤相が、２０：１～５：１の比のヘキサン（ｎ－ヘキサンｏ異性体混合物）および酢酸エチル混合物である、請求項１～３および８～１０のいずれか一項に記載の方法。

Images