NO305368B1 - AnalogifremgangsmÕte for fremstilling av et terapeutisk aktivt fosfolipidbundet glykosaminglykan - Google Patents
AnalogifremgangsmÕte for fremstilling av et terapeutisk aktivt fosfolipidbundet glykosaminglykan Download PDFInfo
- Publication number
- NO305368B1 NO305368B1 NO921083A NO921083A NO305368B1 NO 305368 B1 NO305368 B1 NO 305368B1 NO 921083 A NO921083 A NO 921083A NO 921083 A NO921083 A NO 921083A NO 305368 B1 NO305368 B1 NO 305368B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- group
- gag
- phospholipid
- formula
- reducing terminal
- Prior art date
Links
- -1 Glycosamine Glycan Chemical class 0.000 title claims description 109
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 69
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 44
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims abstract description 135
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 68
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims abstract description 53
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims abstract description 46
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 claims abstract description 9
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 claims description 59
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 42
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 41
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 40
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 claims description 39
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 claims description 39
- KXKPYJOVDUMHGS-OSRGNVMNSA-N chondroitin sulfate Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(O)=O)O1 KXKPYJOVDUMHGS-OSRGNVMNSA-N 0.000 claims description 35
- KXCLCNHUUKTANI-RBIYJLQWSA-N keratan Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@H]3[C@H]([C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H](O)[C@@H]3O)O)[C@H](NC(C)=O)[C@H]2O)COS(O)(=O)=O)O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@@H]1O KXCLCNHUUKTANI-RBIYJLQWSA-N 0.000 claims description 35
- 229920002567 Chondroitin Polymers 0.000 claims description 34
- DLGJWSVWTWEWBJ-HGGSSLSASA-N chondroitin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1OC1[C@H](O)[C@H](O)C=C(C(O)=O)O1 DLGJWSVWTWEWBJ-HGGSSLSASA-N 0.000 claims description 34
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims description 31
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims description 31
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims description 31
- 229920000045 Dermatan sulfate Polymers 0.000 claims description 23
- AVJBPWGFOQAPRH-FWMKGIEWSA-L dermatan sulfate Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H](OS([O-])(=O)=O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](C([O-])=O)O1 AVJBPWGFOQAPRH-FWMKGIEWSA-L 0.000 claims description 23
- 229940051593 dermatan sulfate Drugs 0.000 claims description 23
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 23
- 150000008273 hexosamines Chemical group 0.000 claims description 21
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 claims description 20
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 229920000288 Keratan sulfate Polymers 0.000 claims description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 18
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 18
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical group O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 claims description 17
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims description 17
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 15
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 15
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 14
- CBOIHMRHGLHBPB-UHFFFAOYSA-N hydroxymethyl Chemical group O[CH2] CBOIHMRHGLHBPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 14
- 101100244083 Arabidopsis thaliana PKL gene Proteins 0.000 claims description 12
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 12
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 11
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims description 10
- 101100440695 Dictyostelium discoideum corB gene Proteins 0.000 claims description 8
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 claims description 8
- 229910004727 OSO3H Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 6
- 125000005263 alkylenediamine group Chemical group 0.000 claims description 6
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 6
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 6
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000002596 lactones Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 claims description 3
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N inositol Chemical group OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- IAJILQKETJEXLJ-LECHCGJUSA-N iduronic acid Chemical group O=C[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-LECHCGJUSA-N 0.000 claims 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 54
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 32
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 15
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 abstract description 15
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 abstract description 13
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 abstract description 12
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 abstract description 10
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 6
- 239000002257 antimetastatic agent Substances 0.000 abstract description 4
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 abstract 1
- 125000000686 lactone group Chemical group 0.000 abstract 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 abstract 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 51
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 50
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 32
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 31
- 239000000047 product Substances 0.000 description 30
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 29
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 24
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 18
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 11
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 10
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 10
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 9
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 9
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 9
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 9
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 8
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 8
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 8
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 8
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 8
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 8
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 8
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 8
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 7
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 7
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 7
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 7
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 7
- ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N (3-hexadecanoyloxy-2-hydroxypropyl) 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 6
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 description 6
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 6
- IMFACGCPASFAPR-UHFFFAOYSA-N tributylamine Chemical class CCCCN(CCCC)CCCC IMFACGCPASFAPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- AEMOLEFTQBMNLQ-HNFCZKTMSA-N L-idopyranuronic acid Chemical group OC1O[C@@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-HNFCZKTMSA-N 0.000 description 5
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 5
- YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N glycerine monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(CO)CO YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N glycerol monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical class O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 4
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 4
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 4
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 239000007810 chemical reaction solvent Substances 0.000 description 4
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 4
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 4
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 3
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108010031318 Vitronectin Proteins 0.000 description 3
- 102100035140 Vitronectin Human genes 0.000 description 3
- AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N alpha-D-glucuronic acid Chemical compound O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000001030 gas--liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 108010034892 glycyl-arginyl-glycyl-aspartyl-serine Proteins 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 3
- AEMOLEFTQBMNLQ-CLQWQSTFSA-N l-iduronic acid Chemical compound O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-CLQWQSTFSA-N 0.000 description 3
- 238000007273 lactonization reaction Methods 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 3
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 3
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 3
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 238000005932 reductive alkylation reaction Methods 0.000 description 3
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 2
- RGNVSYKVCGAEHK-GUBZILKMSA-N (3s)-3-[[2-[[(2s)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]acetyl]amino]-4-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RGNVSYKVCGAEHK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LHJGJYXLEPZJPM-UHFFFAOYSA-N 2,4,5-trichlorophenol Chemical compound OC1=CC(Cl)=C(Cl)C=C1Cl LHJGJYXLEPZJPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 2
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- FZERHIULMFGESH-UHFFFAOYSA-N N-phenylacetamide Chemical compound CC(=O)NC1=CC=CC=C1 FZERHIULMFGESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 2
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N adipic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC(O)=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001447 alkali salts Chemical class 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 2
- UHUSDOQQWJGJQS-UHFFFAOYSA-N glycerol 1,2-dioctadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC UHUSDOQQWJGJQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 2
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 2
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HOGDNTQCSIKEEV-UHFFFAOYSA-N n'-hydroxybutanediamide Chemical compound NC(=O)CCC(=O)NO HOGDNTQCSIKEEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LKPFBGKZCCBZDK-UHFFFAOYSA-N n-hydroxypiperidine Chemical compound ON1CCCCC1 LKPFBGKZCCBZDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 2
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 2
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 2
- RSIJVJUOQBWMIM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfate decahydrate Chemical class O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O RSIJVJUOQBWMIM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 150000003443 succinic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 150000003900 succinic acid esters Chemical class 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- MLIWQXBKMZNZNF-KUHOPJCQSA-N (2e)-2,6-bis[(4-azidophenyl)methylidene]-4-methylcyclohexan-1-one Chemical compound O=C1\C(=C\C=2C=CC(=CC=2)N=[N+]=[N-])CC(C)CC1=CC1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1 MLIWQXBKMZNZNF-KUHOPJCQSA-N 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- BOSWPVRACYJBSJ-UHFFFAOYSA-N 1,3-di(p-tolyl)carbodiimide Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1N=C=NC1=CC=C(C)C=C1 BOSWPVRACYJBSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 1-acetyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- RTBFRGCFXZNCOE-UHFFFAOYSA-N 1-methylsulfonylpiperidin-4-one Chemical compound CS(=O)(=O)N1CCC(=O)CC1 RTBFRGCFXZNCOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GBLFCJFNRZFNIW-UHFFFAOYSA-N 3-(tert-butyliminomethylideneamino)-n,n-dimethylpropan-1-amine Chemical compound CN(C)CCCN=C=NC(C)(C)C GBLFCJFNRZFNIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FNEHAOQZWPHONV-UHFFFAOYSA-N 9h-carbazole;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.C1=CC=C2C3=CC=CC=C3NC2=C1 FNEHAOQZWPHONV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000009331 Experimental Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 239000004166 Lanolin Substances 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SUAKHGWARZSWIH-UHFFFAOYSA-N N,N‐diethylformamide Chemical compound CCN(CC)C=O SUAKHGWARZSWIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical class CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 102100029469 WD repeat and HMG-box DNA-binding protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710097421 WD repeat and HMG-box DNA-binding protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 229960001413 acetanilide Drugs 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000001361 adipic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011037 adipic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 238000005576 amination reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N anhydrous glutaric acid Natural products OC(=O)CCCC(O)=O JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 1
- RJGDLRCDCYRQOQ-UHFFFAOYSA-N anthrone Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C3=CC=CC=C3CC2=C1 RJGDLRCDCYRQOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002403 aortic endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-QZABAPFNSA-N beta-D-glucosamine Chemical compound N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-QZABAPFNSA-N 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 1
- 238000010370 cell cloning Methods 0.000 description 1
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 1
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 150000001982 diacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical group 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- HCFPRFJJTHMING-UHFFFAOYSA-N ethane-1,2-diamine;hydron;chloride Chemical compound [Cl-].NCC[NH3+] HCFPRFJJTHMING-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000019256 formaldehyde Nutrition 0.000 description 1
- 229960004279 formaldehyde Drugs 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerol group Chemical group OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003981 glycosaminyl group Chemical group 0.000 description 1
- SELIRUAKCBWGGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid;octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O SELIRUAKCBWGGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 235000019388 lanolin Nutrition 0.000 description 1
- 229940039717 lanolin Drugs 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000000865 liniment Substances 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 1
- UOXRPRZMAROFPH-IESLQMLBSA-N lysophosphatidylinositol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)COP(O)(=O)OC1[C@H](O)[C@@H](O)C(O)[C@@H](O)[C@H]1O UOXRPRZMAROFPH-IESLQMLBSA-N 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002032 methanolic fraction Substances 0.000 description 1
- 239000010446 mirabilite Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 description 1
- 150000002759 monoacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- KSVMTHKYDGMXFJ-UHFFFAOYSA-N n,n'-bis(trimethylsilyl)methanediimine Chemical compound C[Si](C)(C)N=C=N[Si](C)(C)C KSVMTHKYDGMXFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHAAFJWANJYDIS-UHFFFAOYSA-N n,n'-diethylmethanediimine Chemical compound CCN=C=NCC UHAAFJWANJYDIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CMESPBFFDMPSIY-UHFFFAOYSA-N n,n'-diphenylmethanediimine Chemical compound C1=CC=CC=C1N=C=NC1=CC=CC=C1 CMESPBFFDMPSIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QXHKSZBIXVHRNF-UHFFFAOYSA-N n-methyl-n'-propylmethanediimine Chemical compound CCCN=C=NC QXHKSZBIXVHRNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Substances [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 150000003222 pyridines Chemical class 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 238000006894 reductive elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 125000003696 stearoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 150000004044 tetrasaccharides Chemical group 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 125000005270 trialkylamine group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/543—Lipids, e.g. triglycerides; Polyamines, e.g. spermine or spermidine
- A61K47/544—Phospholipids
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører analogifremgangsmåter for fremstilling av fosfolipid- eller lipidbundne glykosaminglykaner.
Disse og andre trekk ved oppfinnelsen fremgår av patent-kravene.
Som en prosedyre for utvikling av metastase er det kjent at en kreftcelle som spres til et blodkar eller lymfebanen fester seg til en endotelcelle eller til dens ekstracellulære matriks (såkalt basismembran) og den således fastholdte kreftcelle trenger inn i den ekstracellulære matriks og utvikler en ny metastaselesjon i vevet. S. Korach et al.
(Cancer Research, 46, 3624-3629, 1986) rapporterte f.eks. at de har oppdelt kreftcellene i en høymetastasegruppe og en lavmetastasegruppe og gjennom deres kreftcellekloningsstudier har de gjennomført in vitro adhesjonstester av kreftceller til dyrkede endotelceller, og som et resultat ble det funnet at festing av kreftceller til blodkarendotelceller eller til deres ekstracellulære matrikser var nær beslektet med metastase av kreftceller fordi høymetastasegruppen av kreftceller viste en høy klebrighet mens lavmetastasecellene viste en lav klebrighet.
På den annen side vil en peptidsekvens GRGDS (Gly-Arg-Gly-Asp-Ser) av celleadhesjonsdelen i fibronektin som er en komponent i den ekstracellulære matriks, på konkurrerende måte inhibere bindingen mellom kreftceller og ekstracellulær matriks. Yamada et al. (Science, 233, 467-470, 1986) rapporterte at peptidet GRGDS inhiberte lungemetastase av B16F10-celler i mus. Disse resultater indikerer at en substans som har en celleadhesjonsinhiberende aktivitet i en liten mengde kunne anvendes som en metastaseinhibitor.
I forbindelse med den foreliggende oppfinnelse har man funnet at visse typer fosfolipid- eller lipidbundne glykosaminglykaner kan inhibere adhesjon av kreftceller til blodkar-endotelceller og deres ekstracellulære matrikser, og som et resultat kan de inhibere metastase av kreftceller.
Som vist i tabell 1 er glykosaminglykan et polysakkarid med lang kjede som omfatter gjentatte enheter av disakkarider eller tetrasakkarider inkluderende D-glukosamin eller D-galaktosamin, D-glukuronsyre, L-iduronsyre og/eller D-galaktose. Eksempler på kjente glykosaminglykaner inkluderer hyaluronsyre, chondroitin, chondroitinsulfat A, chondroitinsulfat C, chondroitinsulfat D, chondroitinsulfat E, chondroitinsulfat K, chondroitinpolysulfat, dermatansulfat, heparin, heparansulfat, keratansulfat og keratanpolysulfat. Fosfolipid- eller lipidbundet glykosaminglykan fremstilt i henhold til oppfinnelsen kan anvendes som et salt, foretrukket med et alkalimetall som natrium, kalium eller lignende, et jordalkalimetall som kalsium, magnesium eller lignende, og et amin som trialkylamin, pyridin eller lignende.
Foreliggende oppfinnelse vedrører således en analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt fosfolipidbundet glykosaminglykan med formelen hvori P<1>er et fosfolipid med en primær aminogruppe med formelen (IX)
hvor hver av R4og R5er hydrogen, -CH=CHR6eller COR7(hver av R6og R7er en C6_24alkylgruppe) og Y er -CH2<C>H2NH eller
-CH,CHNH-, og
I
COOH
(1) GAG er plassert i 4-stillingen, R<3>er plassert i 3-stillingen, R2 er en COOH-gruppe og R<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av hyaluronsyre, chondroitin, chondroitinsulfat A, C eller E, dermatansulfat eller heparin med utelukkelse av en reduserende terminal glukuronsyredel eller når GAG er en glykosaminglykanrest av dermatansulfat med utelukkelse av en reduserende terminal iduronsyredel, 2) GAG er plassert i 4-stillingen, R3 er plassert i 3-stillingen, R2 er en COOH-gruppe og R<3>er en OS03H-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av chondroitinsulfat K eller chondroitinpolysulfat med utelukkelse av en reduserende terminal glukuronsyredel, 3) GAG er plassert i 3-stillingen, R3 er plassert i 4-stillingen, R2 er en CH20H-gruppe, og R3 er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av keratansulfat med utelukkelse av en reduserende terminal galaktosedel, og4) GAG er plassert i 3-stillingen, R3 er plassert i 4-stillingen, R2 er en CH2OS03H-gruppe og R<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av keratanpolysulfat med utelukkelse av en reduserende terminal galaktosedel; eller et farmasøytisk tålbart salt derav som er kjennetegnet ved trinnene med: reduksjon og spalting av den reduserende terminale gruppe i et glykosaminglykan med formelen (I-l):
med oppnåelse av et redusert produkt med formelen (1-2) : hvoretter det reduserte produkt oksyderes for å oppnå et oksydert produkt med formelen (1-3) :
og hvoretter den således dannede aldehydgruppe i det oksyderte produkt får reagere med en primær aminogruppe i et fosfolipid, hvori GAG, R<2>og R3 i de ovennevnte formler er som angitt i det foregående, og om ønsket omdannes det oppnådde produkt til farmasøytisk tålbart salt derav.
Oppfinnelsen vedrører også en analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt fosfolipidbundet glykosaminglykan med formelen
hvori P<1>er et fosfolipid med en primær aminogruppe med formelen (IX) hvor hver av R4og R5er hydrogen, -CH=CHR6eller COR7(hver av R6og R7er en C6_24alkylgruppe) og Y er -CH2CH2NH eller og1)R<1>er en NHCOCH3-gruppe og R<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av hyaluronsyre eller chondroitin med utelukkelse av en reduserende terminal heksosamindel, 2) R<1>er en NHCOCH3-gruppe og R3 er en OS03H-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av chondroitinsulfat A eller K, chondroitinpolysulfat eller dermatansulfat med utelukkelse av en reduserende terminal heksosamindel, og3) hver av R<1>og R<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av keratansulfat eller keratanpolysulfat med utelukkelse av en reduserende terminal galaktosedel; eller et farmasøytisk tålbart salt derav, som er kjennetegnet ved trinnene med: reduksjon og spalting av den reduserende terminale gruppe i et glykosaminglykan med formelen (II-1):
med oppnåelse av et redusert produkt med formelen (II-2):
hvoretter det reduserte produkt oksyderes for å oppnå et oksydert produkt med formelen (II-3) :
og hvoretter den således dannede aldehydgruppe i det oksyderte produkt får reagere med en primær aminogruppe i et fosfolipid, hvori GAG, R<1>og R3 i de ovennevnte formler er som angitt i det foregående og R er en 0H- eller OS03H-gruppe, og om ønsket omdannes det oppnådde produkt til et farmasøytisk tålbart salt derav.
Oppfinnelsen vedrører også en analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt fosfolipidbundet glykosaminglykan med formelen hvori P<1>er et fosfolipid med en primær aminogruppe med formelen (IX)
hvor hver av R4og R5er hydrogen, -CH=CHR6eller COR7(hver av R6og R7er en C6_24alkylgruppe) og Y er -CH2<C>H2NH eller
-CH,CHNH-, og GAG er en glykosaminglykanrest av keratansulfat
I
COOH
eller keratanpolysulfat med utelukkelse av en reduserende terminal galaktosedel; eller et farmasøytisk tålbart salt derav, som er kjennetegnet ved at den omfatter trinnene med: oksydasjon av det reduserte produkt med den ovenfor angitte formel (II-2) for å oppnå et oksydert produkt med formelen (11) :
hvori GAG er som angitt i det foregående og hvoretter den således dannede aldehydgruppe i det oksyderte produkt får reagere med en primær aminogruppe i et fosfolipid, og om ønsket omdannes det oppnådde produkt til et farmasøytisk tålbart salt derav. Oppfinnelsen vedrører også en analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt fosfolipidbundet glykosaminglykan med formelen hvori P<1>er et fosfolipid med en primær aminogruppe med formelen (IX)
hvor hver av R4og R5er hydrogen, -CH=CHR6eller COR7(hver av R6og R7er en C6.24alkylgruppe) og Y er -CH2CH2NH eller
-CH,CHNH-, og
I
COOH
1) GAG er plassert i 4-stillingen, R<3>er plassert i3-stillingen, R<1>er en OH-gruppe, R<2>er en COOH-gruppe, ogR<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av hyaluronsyre, chondroitin, chondroitinsulfat A, C eller E, dermatan-sulf at, heparin eller heparansulfat med utelukkelse av en reduserende terminal glukuronsyredel eller når GAG er en glykosaminglykanrest av dermatansulfat, med utelukkelse av en reduserende terminal iduronsyredel, 2) GAG er plassert i 4-stillingen, R<3>er plassert i 3-stillingen, R<1>er en OS03H-gruppe, R<2>er en COOH-gruppe og R<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av chondroitinsulfat D med utelukkelse av en reduserende terminal glukuronsyredel eller når GAG er en glykosaminglykanrest av heparin eller heparansulfat med utelukkelse av en reduserende terminal iduronsyredel, 3) GAG er plassert i 4-stillingen, R3 er plassert i3-stillingen, R<1>er en OH-gruppe, R<2>er en COOH-gruppe ogR<3>er en OS03H-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av chondroitinsulfat K med utelukkelse av en reduserende terminal glukuronsyredel, 4) GAG er plassert i 4-stillingen, R3 er plassert i 3-stillingen, minst en av R<1>og R<3>er en OS03H-gruppe, mens den andre er en OH-gruppe, og R2 er en COOH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av chondroitinpolysulfat med utelukkelse av en reduserende terminal glukuronsyredel, 5) GAG er plassert i 3-stillingen, R3 er plassert i4-stillingen, hver avR<1>og R3 er en OH-gruppe ogR<2>er en CH2OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av keratansulfat med utelukkelse av en reduserende terminal galaktosedel, 6) GAG er plassert i 3-stillingen, R3 er plassert i4-stillingen, hver avR<1>og R3 er en OH-gruppe ogR<2>er en CH2OS03H-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av keratanpolysulfat med utelukkelse av en reduserende terminal galaktosedel , 7) GAG er plassert i 3-stillingen, R3 er plassert i4-stillingen, R<1>er enNHCOCH3-gruppe, R2 er en CH20H-gruppe ogR<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av hyaluronsyre eller chondroitin med utelukkelse av en reduserende terminal heksosamindel, 8) GAG er plassert i 3-stillingen, R3 er plassert i4-stillingen, R<1>er en NHCOCH3-gruppe, R2 er en CH2OH-gruppe ogR<3>er en OS03H-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av chondroitinsulfat A eller K, eller dermatansulfat med utelukkelse av en reduserende terminal heksosamindel, 9) GAG er plassert i 3-stillingen, R3 er plassert i 4-stillingen,R<1>er en NHCOCH3-gruppe, R2 er en CH2OS03H-gruppe ogR<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av chondroitinsulfat C eller D med utelukkelse av en reduserende terminal heksosamindel, 10) GAG er plassert i 3-stillingen, R<3>er plassert i 4-stillingen, R<1>er en NHCOCH3-gruppe, R2er en CH2OS03H-gruppe og R<3>er en OS03H-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av chondroitinsulfat E med utelukkelse av en reduserende terminal heksosamindel, 11) GAG er plassert i 3-stillingen, R<3>er plassert i4-stillingen, R<1>er en NHCOCH3-gruppe, R2 er en CH2OH-gruppe ogR<3>er en OS03H-gruppe, eller R<2>er en CH2OS03H-gruppe ogR<3>er en OH-gruppe eller en OS03H-gruppe, når GAG er en glykosaminglykanrest av chondroitinpolysulfat med utelukkelse av en reduserende terminal heksosamindel, 12) GAG er plassert i 4-stillingen, R<3>er plassert i 3-stillingen, R<1>er en NHS03H-gruppe, R2 er en CH2OS03H-gruppe og R<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av heparin med utelukkelse av en reduserende terminal heksosamindel, 13) GAG er plassert i 4-stillingen, R<3>er plassert i 3-stillingen, R<1>er en NHCOCH3-gruppe eller en NHS03H-gruppe, R<2>er en CH2OH-gruppe, og R3 er en 0S03H-gruppe, eller R<2>er en CH2OS03H-gruppe og R<3>er en OH-gruppe eller en 0S03H-gruppe, når GAG er en glykosaminglykanrest av heparansulfat med utelukkelse av en reduserende terminal heksosamindel, og 14) GAG er plassert i 4-stillingen, R<3>er plassert i 3-stUlingen, R<1>er en NHCOCH3-gruppe,R<2>er en CH2OS03H-gruppe, ogR<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av keratansulfat eller keratanpolysulfat med utelukkelse av en reduserende terminal heksosamindel,
eller et farmasøytisk tålbart salt derav, som er kjennetegnet ved at den omfatter trinnene med: oksydasjon og spalting av den reduserende terminale gruppe i et glykosaminglykan med formelen (12):
for derved å oppnå et oksydert produkt med formelen (13):
og hvoretter det fra det oksyderte produkt fremstilles et lakton med formelen (14):
og hvoretter det således fremstilte lakton får reagere med en primær aminogruppe i et fosfolipid, hvori GAG,R<1>,R<2>ogR<3>i de ovennevnte formler er som angitt i det foregående og A er et alkalimetall, og om ønsket omdannes det oppnådde produkt til et farmasøytisk tålbart salt derav. Oppfinnelsen vedrører også en analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt fosfolipid- eller lipidbundet glykosaminglykan med formelen
hvori P<2>er et fosfolipid eller et lipid med formelen (X), (XI), (XII) eller (XIII)
hvori R8er hydrogen, R9er en alkylgruppe, R10er
-CH=CHR6eller -COR7, hvori hver av R6og R7er en C6_24alkylgruppe og W er -CH2CH2N+(CH3) 3 eller en inositolrest, m er et helt tall fra 1 til 8, og { er et helt tall fra 1 til 10, og
1) GAG er plassert i 4-stillingen, R<3>er plassert i 3-stillingen, R2 er en COOH-gruppe og R<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av hyaluronsyre, chondroitin, chondroitinsulfat A, C eller E, dermatansulfat, heparin eller heparansulfat med utelukkelse av en reduserende terminal glukuronsyredel, eller når GAG er en glykosaminglykanrest av dermatansulfat med utelukkelse av en reduserende terminal iduronsyredel, 2) GAG er plassert i 4-stillingen, R3 er plassert i 3-stillingen, R2 er en COOH-gruppe og R<3>er en OS03H-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av chondroitinsulfat K eller chondroitinpolysulfat med utelukkelse av en reduserende terminal glukuronsyredel, 3) GAG er plassert i 3-stillingen, R<3>er plassert i 4-st il lingen, R2 er en CH20H-gruppe og R<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av keratansulfat med utelukkelse av en reduserende terminal galaktosedel, og 4) GAG er plassert i 3-stillingen, R<3>er plassert i4-stillingen, R<2>er en CH2OS03H-gruppe og R<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av keratanpolysulfat med utelukkelse av en reduserende terminal galaktosedel,
eller et farmasøytisk tålbart salt derav, som er kjennetegnet ved at den omfatter trinnene med: reaksjon av en aldehydforbindelse med formelen (1-3) som angitt i krav 1 med et alkylendiamin for oppnåelse av et derivat med formel (15):
hvori GAG, R<2>, R3 og m er som angitt i det foregående, og hvor et fosfolipid eller et lipid separat får reagere med en dikarboksylsyre eller et dikarboksylsyreanhydrid for å oppnå et fosfolipid- eller lipidderivat med en karboksylgruppe, og hvor en primær aminogruppe i derivatet med formel (15) får reagere med karboksylgruppen i fosfolipid- eller lipidderivatet, og om ønsket omdannes det oppnådde produkt til et farmasøytisk tålbart salt derav. Oppfinnelsen vedrører også en analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt fosfolipid- eller lipidbundet glykosaminglykan med formelen
hvoriGAG, R<1>og R<3>er som angitt i forbindelse med den ovennevnte formel (II) , og m, { og P<2>er som angitt i forbindelse med den ovennevnte formel (V),
eller et farmasøytisk tålbart salt derav,
som er kjennetegnet ved trinnene med:
reaksjon av en aldehydforbindelse med formel (II-3) som angitt i det foregående med et alkylendiamin med oppnåelse av et derivat med formel (16):
hvori GAG, R<1>, R3 og m er som angitt i det foregående, og hvor et fosfolipid eller et lipid separat får reagere med en dikarboksylsyre eller et dikarboksylsyreanhydrid for å oppnå et fosfolipid- eller lipidderivat med en karboksylgruppe, og hvoretter en primær aminogruppe i derivatet med formel (16) får reagere med karboksylgruppen i fosfolipid- eller lipidderivatet, og om ønsket omdannes det oppnådde produkt til et farmasøytisk tålbart salt derav. Oppfinnelsen vedrører også en analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt fosfolipid- eller lipidbundet glykosaminglykan med formel
hvori GAG, R<1>, R2 og R<3>er som angitt i forbindelse med den ovennevnte formel (IV) , og ra, I og P<2>er som angitt i forbindelse med den ovennevnte formel (V),
eller et farmasøytisk tålbart salt derav,
som er kjennetegnet ved trinnene med:
reaksjon av en laktonforbindelse med den ovennevnte formel (14) med et alkylendiamin for oppnåelse av et derivat med formel (17):
hvori GAG,R1,R<2>, R3 og m er som angitt i det foregående, og hvor et fosfolipid eller lipid separat får reagere med en dikarboksylsyre eller et dikarboksylsyreanhydrid for å oppnå et fosfolipid- eller lipidderivat med en karboksylgruppe, og hvorpå en primær aminogruppe i derivatet med formel (17) får reagere med karboksylgruppen i fosfolipid- eller lipidderivat et, og om ønsket omdannes det oppnådde produkt til et farmasøytisk tålbart salt derav. Endelig vedrører oppfinnelsen en analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt fosfolipidbundet glykosaminglykan med en uronsyredel med formel (VIII)
hvorP<1>er et fosfolipid med en primær aminogruppe med formel
(IX)
hvor hver av R4og R5er hydrogen, -CH=CHR6eller -COR7(hver av R6og R7er en C6.24alkylgruppe) og Y er -CH2CH2NH- eller
og R-l og R3er uavhengig en OH-gruppe
eller en OS03H-gruppe,
eller et farmasøytisk tålbart salt derav, som er kjennetegnet ved trinnene med:
reaksjon av et glykosaminglykan med en uronsyredel med formel (18)
hvori R<1>og R<3>er som angitt i det foregående,
med en primær aminogruppe i fosfolipidet i nærvær av et kondensasjonsmiddel, eller
aktivering av en karboksylgruppe i glykosaminglykanet med formel (18) hvorpå den aktiverte karboksylgruppe i glykosaminglykanet deretter får reagere med en primær aminogruppe i fosfolipidet, og om ønsket omdannes det oppnådde produkt til et farmasøytisk tålbart salt derav.
De foretrukne molekylvekter for glykosaminglykaner er angitt i tabell 1.
Fosfolipidet med en primær aminogruppe representert ved P<1>i de ovennevnte formler (I), (II), (III), (IV) og (VIII) har den ovenfor angitte formel (IX), og særlig foretrukne forbindelser med formel (IX) er dem hvori hver avR<4>og R5 er -COR<7>som heksadekanoyl eller oktadekanoyl eller hvori R<4>er en -CH=CHR<6>-gruppe ogR<5>er en -COR<7>-gruppe.
Fremgangsmåtene for fremstilling av de fosfolipid- eller lipidbundne glykosaminglykaner i samsvar med oppfinnelsen er beskrevet mer detaljert i det etterfølgende.
Begrenset: oksydasjon av reduserende terminal gruppe
I denne fremgangsmåte blir den reduserende terminale uronsyre-, galaktose- eller heksosamindel i et glykosaminglykan delvis oksydert og spaltet til å danne en aldehydgruppe, og den således dannede aldehydgruppe underkastes en reduktiv alkyleringsreaksjon med en primær aminogruppe i et fosfolipid til å gi et fosfolipidbundet glykosaminglykan. Reaksjonsskjemaet for denne fremgangsmåte er beskrevet i det etterfølgende.
(A) I det tilfellet hvor glukuron- eller iduronsyre i et reduserende terminalt sukker underkastes reaksjonen:
hvori R<3>er som angitt i det foregående og P<1>er et fosfolipid med en primær aminogruppe.
I det tilfellet hvor det som utgangsmaterial anvendeshyaluronsyre, chondroitin, chondroitinsulfat A, chondroitinsulfat C, chondroitinsulfat E, chondroitinsulfat K, chondroitinpolysulfat, dermatansulfat og heparin, representert ved formelen (1) med den reduserende terminale D-glukuronsyre eller L-iduronsyre hvori OH-gruppen er bundet til karbonatomet i 2-stillingen, fremstilles et fosfolipidbundet glykosaminglykan med formelen (I-a) i overensstemmelse med det ovennevnte reaksjonsskjema.
(B) I det tilfellet at glukosamin eller galaktosatnin i et reduserende terminalt sukker underkastes reaksjonen:
hvori R<3>er som definert i det foregående og P<1>er et fosfolipid med en primær aminogruppe.
I det tilfellet at det som utgangsmaterial anvendes hyaluronsyre, chondroitin, chondroitinsulfat A, chondroitinsulfat K, chondroitinpolysulfat og dermatansulfat, representert ved formelen (4) med glukosamin eller galaktosamin som den reduserende terminale gruppe hvori en CH2OH-gruppe er bundet til karbonatomet i 5-stillingen, dannes et fosfolipidbundet glykosaminglykan med formelen (II-a) i overensstemmelse med det ovennevnte reaksjonsskjema.
(C) I det tilfellet at galaktose i et reduserende terminalt sukker underkastes reaksjonen:
hvori R<3>er som angitt i det foregående og P<1>er et fosfolipid med en primær aminogruppe.
I det tilfellet at det anvendes keratansulfat og keratanpolysulfat som er representert ved den ovennevnte formel (7) med galaktose som det reduserende terminale sukker som utgangsmaterial, dannes et fosfolipidbundet glykosaminglykan med formler (I-b), (II-b) eller (III) i overensstemmelse med ovennevnte reaksjonsskjema.
I de ovennevnte fremgangsmåter (A), (B) og (C) blir de reduserende terminale sukkerenheter av glykosaminglykaner med formel (1), (4) og (7) først underkastet reduksjonsspalting for å oppnå de tilsvarende forbindelser (2) , (5) og (8).
Som et reduksjonsmiddel i reduksjonstrinnet kan det anvendes et alkalisalt av borhydrid som natriumborhydrid, natriumcyanoborhydrid eller lignende.
Som løsningsmiddel i den ovennevnte reduksjonsreaksjon kan det anvendes vann eller en 0,05 % boratbuffer (pH 8,3).
Reduksjonsreaksjonen kan gjennomføres ved en temperatur fra 10 til 30°C, foretrukket fra 15 til 25°C.
Mengden reduksjonsmiddel som varierer avhengig av typen strekker seg fra 5 til 50 ekvivalenter, foretrukket fra 25 til 30 ekvivalenter, pr. mol av forbindelsen (1), (4) eller (7) .
De således oppnådde forbindelser med formel (2), (5) og (8) underkastes deretter partiell oksydasjon til å danne aldehydforbindelser med formel (3), (6), (9), (10) og (11).
Som oksydasjonsmiddel i oksydasjonsreaksjonen kan det anvendes et alkalisalt av en perjodsyre som natriumperjodat, kaliumperjodat eller lignende.
Mengden oksydasjonsmiddel strekker seg fra 1 til 10 ekvivalenter, foretrukket fra 3 til 6 ekvivalenter, pr. mol av forbindelsen (2), (5) eller (8). Oksydasjonsreaksjonen kan gjennomføres ved en temperatur fra 0 til 10°C, foretrukket fra 0 til 4°C.
Hver av de således dannede aldehydforbindelser (3), (6), (9), (10) og (11) kan reageres med en primær aminogruppe av et fosfolipid i overensstemmelse med den kjente reduktive alkylering. Således oppnås de fosfolipidbundne glykosaminglykaner som er representert ved formlene (I-a), (II-a), (I-b), (II-b) og (III) .
Eksempler på fosfolipid som kan anvendes i den ovennevnte reaksjon inkluderer L-(o-fosfatidyl)etanolamin, DL-fosfatidyl-L-serin, etanolaminplasmalogen, serinplasmalogen og 1ignende.
Den reduktive alkyleringsreaksjon for fremstilling av forbindelsene med formler (I-a), (II-a), (I-b), (II-b) og (III) kan gjennomføres ved at aldehydforbindelsen (3), (6), (9) , (10) eller (11) blandes med et fosfolipid oppløst i kloroform eller lignende, i et løsningsmiddel som vann, 0,05 M fosfatbuffer (pH 7,0) eller dimetylformamid og hvor reaksjonsblandingen får reagere ved en temperatur fra 15 til 60°C, idet man samtidig eller påfølgende gjennomfører en reduksjonsreaksjon ved anvendelse av et reduksjonsmiddel som natriumcyanoborhydrid eller lignende.
Eksempler på forbindelser som fremstilles ved den begrensede oksydasjon av reduserende terminal gruppe er vist i tabell A.
Laktonisering av reduserende terminal gruppe
I denne fremgangsmåte blir den reduserende terminale uronsyre-, galaktose- eller heksosamindel i et glykosaminglykan underkastet oksydasjon for å spalte den reduserende terminale sukkerenhet og det spaltede produkt laktoniseres og reageres med en primær aminogruppe i et fosfolipid for å oppnå et fosfolipidbundet glykosaminglykan. Reaksjonsskjemaet er illustrert i det etterfølgende.
hvoriR<1>,R2 og R3 er som angitt i det foregående, P<1>er et fosfolipid med en primær aminogruppe og A er et alkalimetall.
I henhold til denne fremgangsmåte blir et glykosaminglykan med formel (12) først underkastet oksydasjon for å spalte den reduserende terminale enhet for derved å oppnå en karboksyl-forbindelse med formel (13).
Som utgangsmaterial kan det anvendes forbindelser med formel (12) inkluderende hyaluronsyre, chondroitin, chondroitin sulfat A, chondroitinsulfat C, chondroitinsulfat D, chondroitinsulfat E, chondroitinsulfat K, chondroitinpolysulfat, dermatansulfat, heparin, heparansulfat, keratansulfat og keratanpolysulfat.
Som oksydasjonsmiddel kan jod, brom eller lignende anvendes i oksydasjonstrinnet.
Mengden oksydasjonsmiddel strekker seg fra 2 til 20 ekvivalenter, foretrukket fra 5 til 15 ekvivalenter, pr. mol av forbindelsen med formel (12).
Som løsningsmiddel for anvendelse i oksydasjonsreaksjonen kan vann eller en 0,05 M fosfatbuffer (pH 7,0) anvendes.
Oksydasjonsreaksjonen kan gjennomføres ved en temperatur fra 0 til 40°C, foretrukket fra 15 til 20°C.
Den således oppnådde forbindelse med formel (13) underkastes deretter en syrebehandling til å danne en laktonforbindelse med formel (14).
En sterk sur kationbytterharpiks som Dowex 50, Amberlite IR120eller lignende kan anvendes i syrebehandlingen. Den således dannede laktonforbindelse med formel (14) får deretter reagere med et fosfolipid for å danne et fosfolipidbundet glykosaminglykan med formelen (IV) .
De samme fosfolipidforbindelser som beskrevet i den foregående oksydasjonsprosess kan anvendes i dette reaksjonstrinn. Reaksjonen av laktonforbindelsen med formel (14) med fosfolipid for fremstilling av forbindelsen med formel (IV) kan gjennomføres ved at laktonforbindelsen med formel (14) oppløses i et løsningsmiddel som vann, 0,05 M fosfatbuffer (pH 7,0) eller dimetylformamid hvorpå oppløsningen blandes med et fosfolipid som er oppløst i kloroform eller lignende, og hvoretter blandingen får reagere ved en temperatur fra 5 til 80°C, foretrukket fra 30 til 60°C. Eksempler på forbindelser som er fremstilt ved denne fremgangsmåte for laktonisering av den reduserende terminale gruppe er vist i tabell B.
Am i der ing av reduserende 'terminal gruppe
I denne fremgangsmåte får hver av aldehydforbindelsene med formler *(3) , (6) , (9) og (10) og laktonforbindelsen med formel (14) reagere med en alkylendiaminforbindelse til å gi et glykosaminglykanderivat med en primær aminogruppe i dets reduserende terminale gruppe. Det således oppnådde glykosaminglykanderivat med en primær aminogruppe får deretter reagere med et fosfolipid- eller lipidderivat med en karboksylgruppe slik at den primære aminogruppe og karboksylgruppen bindes sammen. Det dannes således et fosfolipid- eller lipidbundet glykosaminglykan. Reaksjonsskjemaet for denne fremgangsmåte er vist i det etterfølgende: hvori hver avR<1>,R<2>ogR<3>er som angitt i det foregående ogP<2>er et fosfolipid eller et lipid.
Et glykosaminglykanderivat med en primær aminogruppe i dets reduksjonsterminus, som representert ved formel (15), (16) eller (17) oppnås ved at hver at forbindelsene (3), (6), (9) og (10) fremstilles ved den ovennevnte begrensede reduserende terminale oksydasjonsprosess og forbindelsen (14) som fremstilt ved den ovennevnte reduserende terminale laktoniserings-prosess får reagere med en alkylendiaminforbindelse i nærvær av et reduksjonsmiddel.
En alkylendiaminforbindelse som kan anvendes i denne reaksjon kan velges fra forbindelser som er representert ved formelen:
hvori m er et helt tall fra 1 til 8.
Som reduksjonsmiddel kan natriumcyanoborhydrid eller lignende anvendes.
Mengden av reduksjonsmiddel strekker seg fra 10 til 100 mol pr. mol av det glykosaminglykan som skal anvendes i reaksjonssystemet.
Som reaksjonsløsningsmiddel kan vann eller en 0,05 M fosfatbuffer anvendes. Reaksjonen kan gjennomføres ved en temperatur fra 0 til 60°C, foretrukket fra 4 til 25°C.
Et fosfolipid- eller lipidderivat med en karboksylgruppe kan oppnås ved at en fosfolipid- eller lipidforbindelse med en hydroksylgruppe i sin glyserolstruktur får reagere med en dikarboksylsyre eller et dikarboksylsyreanhydrid.
Eksempler på fosfolipid- eller lipidforbindelsen som kan anvendes i denne reaksjon inkluderer monoacylglyserol, diacylglyserol, lysofosfatidylcholin, lysofosfatidylinositol, eterlipider, eterfosfolipider og lignende.
Som dikarboksylsyre kan ravsyre, glutarsyre, adipinsyre eller lignende anvendes. Som dikarboksylsyreanhydrid kan malein-syreanhydrid, ravsyreanhydrid, fumarsyreanhydrid eller lignende anvendes.
Som kondensasjonsmiddel kan l-etyl-3-(dimetylaminopropyl)kar-bodiimid, dicykloheksylkarbodiimid eller lignende anvendes. Kloroform, acetanilid, dimetylformamid eller lignende kan anvendes som reaksjonsløsningsmiddel.
Reaksjonstemperaturen kan strekke seg fra 0 til 60°C når en dikarboksylsyre anvendes i nærvær av et kondensasjonsmiddel, eller fra 20 til 80°C når et dikarboksylsyreanhydrid anvendes.
Reaksjonen mellom et glykosaminglykanderivat med en primær aminogruppe i sin reduserende terminale gruppe med et fosfolipid- eller lipidderivat med en karboksylgruppe, kan gjennomføres ved at en karboksylgruppe i fosfolipid- eller lipidderivatet først aktiveres i overensstemmelse med vel kjente metoder innen peptidkjemi hvoretter den således aktiverte forbindelse får reagere med glykosaminglykan-derivatet.
Aktivering av en karboksylgruppe i fosfolipid- eller lipidderivatet kan gjennomføres ved at karboksylgruppen omdannes til en aktiv ester ved reaksjon av fosfolipid- eller lipidderivatet med N-hydroksysuccinimid, p-nitrofenol, N-hydroksybenzotriazol, N-hydroksypiperidin, N-hydroksy-succinamid, 2,4,5-triklorfenol eller lignende i nærvær av et kondensasjonsmiddel.
Som reaksjonsløsningsmiddel kan kloroform, acetonitril, dimetylformamid eller lignende, eller en blanding derav anvendes. Som kondensasjonsmiddel kan l-etyl-3-(dimetyl-aminopropyl) karbodiimid, dicykloheksylkarbodiimid eller lignende anvendes.
Reaksjonen kan gjennomføres ved en temperatur fra 0 til 60°C.
Det således oppnådde fosfolipid- eller lipidderivat hvor karboksylgruppen er aktivert kan deretter reagere med glyko-saminglykanderivatet (15), (16) eller (17) som har en primær aminogruppe for å oppnå fosfolipid- eller lipidbundne glyko-saminglykaner (V), (VI) og (VII). Løsningsmiddelet som anvendes i denne reaksjon er kloroform, acetonitril, dimetylformamid eller en blanding derav. Reaksjonstemperaturen strekker seg fra 0 til 60°C.
Eksempler som illustrerer forbindelsene som fremstilles ved ovennevnte fremgangsmåte er vist i tabell C.
Anvendelse av et kondensasjonsmiddel
Hvert medlem av glykosaminglykanene, med utelukkelse av keratansulfat og keratanpolysulfat, inneholder D-glukuronsyre eller L-iduronsyre som uronsyredelen, og hver av disse syrer har en karboksylgruppe bundet til karbonatomet i5-stillingen.
I denne fremgangsmåte dannes et fosfolipidbundet glykosaminglykan ved at uronsyrekarboksylgruppen får reagere med en primær aminogruppe i et fosfolipid i nærvær av et kondensasjonsmiddel .
Reaksjonsskjemaet for denne fremgangsmåte er vist i det etterfølgende:
hvori hver avR1, R3 ogP<1>er som angitt i det foregående.
Forbindelser med formel (18) som skal anvendes som utgangsmaterial velges fra hyaluronsyre, chondroitin, chondroitinsulfat A, chondroitinsulfat C, chondroitinsulfat D, chondroitinsulfat E, chondroitinsulfat K, chondroitinpolysulfat, dermatansulfat, heparin og heparansulfat.
Enhver av forbindelsene som er beskrevet i den foregående illustrasjon av den begrensede reduserende terminale gruppe oksydasjonsprosess kan anvendes som et fosfolipid.
Eksempler på kondensasjonsmiddelet inkluderer dietylkarbo-diimid, diisopropylkarbodiimid, metylpropylkarbodiimid, dicykloheksylkarbodiimid, heksametylenkarbodiimid, heptan-metylenkarbodiimid, l-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl) - karbodiimid, l-cykloheksyl-3-(2-morfolinoetyl)karbodiimid-meso-p-toluensulfonat, l-t-butyl-3-(3-dimetylaminopropyl)-karbodiimid, difenylkarbodiimid, 4,4'-dinitrodifenylkarbo-diimid, di-p-tolylkarbodiimid, bis-(trimetylsilyl)karbodiimid og lignende.
Kondensasjonsmiddelet kan anvendes i en mengde fra 10 til 100 mol pr. mol av et fosfolipid eller lipid som anvendes.
Reaksjonen kan gjennomføres ved en temperatur fra 4 til 60°C, foretrukket fra 15 til 25°C, i et løsningsmiddel som dimetylformamid, kloroform eller en blanding derav.
Eksempler som illustrerer forbindelsene fremstilt ved kondensasjonsprosessen er vist i tabell D.
Aktivering av glykosaminglykan
I denne fremgangsmåte som er lignende den ovennevnte prosess med anvendelse av kondensasjonsmiddel, fremstilles fosfolipidbundet glykosaminglykan (VIII) ved at uronsyrekarboksylgruppen aktiveres hvoretter den aktiverte karboksylgruppe bindes til den primære aminogruppe i et fosfolipid.
De samme glykosaminglykanforbindelser og fosfolipidforbindelser som beskrevet i forbindelse med den foregående fremgangsmåte ved anvendelse av et kondensasjonsmiddel, kan anvendes i forbindelse med denne fremgangsmåte.
Aktivering av en karboksylgruppe i uronsyredelen i en glykos-aminglykanforbindelse kan gjennomføres på måter som er vel kjent innen peptidkjemien, f.eks. ved at karboksylgruppen omdannes til en aktiv ester ved at glykosaminglykan-forbindelsen reageres med N-hydroksysuccinimid, p-nitrofenol, N-hydroksybenzotriazol, N-hydroksypiperidin, N-hydroksy-succinamid, 2,4,5-triklorfenol eller lignende i nærvær av et kondensasjonsmiddel.
Karboksylgruppen i uronsyredelen kan underkastes reaksjonen i form av et aminsalt som tri(n-butyl)aminsalt, trietyl-aminsålt, pyridinsalt eller lignende.
Som reaksjonsløsningsmiddel kan dimetylformamid, pyridin, dimetylsulfoksyd eller lignende anvendes. Som kondensasjonsmiddel kan l-etyl-3-(di-metylaminpropyl)karbodiimid, dicykloheksylkarbodiimid eller lignende anvendes.
Reaksjonen kan gjennomføres ved en temperatur fra 0 til 60°C, foretrukket fra 4 til 20°C.
Ved å tillate at det således karboksylgruppeaktiverte glykosaminglykan reagerer med fosfolipid, oppnås fosfolipidbundet glykosaminglykan med formel (VIII).
Denne reaksjon kan gjennomføres ved at det aktiverte glykosaminglykan får reagere med et fosfolipid ved en temperatur fra 0 til 90°C, foretrukket fra 25 til 60°C, i et løsnings-middel som dimetylformamid, kloroform eller en blanding derav.
Innholdet av fosfolipid- eller lipiddelene i fosfolipid-eller lipidbundne glykosaminoglykaner fremstilt i samsvar med oppfinnelsen representert ved formel (I) til (VIII) kan strekke seg fra 0,005 til 50 %, foretrukket fra 2 til 10 %.
Separasjon og rensing av de fosfolipid- eller lipidbundne glykosaminglykaner som er oppnådd ved hjelp av de ovennevnte fremgangsmåter kan f.eks. gjennomføres på følgende måte. Den endelige reaksjonsblanding fra hver prosedyre blandes med etanol som er mettet med natriumacetat og det resulterende presipitat utfiltreres for å fjerne ureagert fosfolipid eller lipid. De således separerte presipitater underkastes hydrofob kromatografi og bæreren vaskes med en vandig løsning av et salt som ammoniumacetat, ammoniumklorid, natriumklorid eller lignende for å fjerne ureagert glykosaminglykan. Deretter elueres det fosfolipid- eller lipidbundne glykosaminglykan som er absorbert til bæreren med en vandig oppløsning av 10 til 50 % metanol.
Metastaseinhibitoren fremstilles foretrukket ved at hver av de fosfolipid- eller lipidbundne glykosaminglykaner med formel (I) til (VIII), eller et farmakologisk tålbart salt derav, blandes med faste eller flytende bærere eller fortynningsmidler for medisinsk anvendelse, dvs. tilsetningsmidler som fyllstoffer, stabilisatorer og lignende.
Da saltformen av det fosfolipid- eller lipidbundne glykosaminglykan er oppløselig i vann, er det passende å omdanne det til en injiserbar oppløsning. Mengden av aktiv bestanddel i det medisinske preparat kan variere innen området på fra 1 til 90 vekt% basert på vekten av bærere.
Den aktive forbindelse kan tilføres oralt i form av granuler, fine granuler, pulvere, tabletter, kapsler, piller eller oppløsninger, såvel som bulkpulvere, eller den kan tilføres ved intravenøs, intramuskulær eller subkutan injeksjon. Den aktive forbindelse kan også anvendes som eksterne preparater som stikkpiller, salver, kataplasma, plaster, linimenter, lotioner og lignende. Den kan også dannes til pulver for anvendelse ved injeksjon, idet pulveret oppløses i en passende væske ved anvendelse.
For fremstilling av farmasøytiske preparater som inneholder de fosfolipid- eller lipidbundne glykosaminglykaner fremstilt i samsvar med oppfinnelsen eller deres salter, kan enhver organisk eller uorganisk eller fast eller flytende bærer eller fortynningsmiddel anvendes med den betingelse at slike tilsetningsmidler er tålbare for oral, intestinal, parenteral eller topisk tilførsel. Bærere som kan anvendes i denne forbindelse inkluderer vann, gelatin, laktose, stivelse, magnesiumstearat, talkum, animalske oljer eller planteoljer, benzylalkohol, gummi, polyalkylenglykol, petroleumsharpikser, kokosnøttolje, lanolin og andre bærere for medisinsk anvendelse. I tillegg kan det anvendes stabilisatorer, fuktemidler, emulgeringsmidler, såvel som salter for å justere det osmotiske trykk eller å opprettholde en passende pH-verdi i de farmasøytiske preparater.
Når det gjelder granuler, fine granuler, pulvere, tabletter eller kapsler, kan det farmasøytiske preparat inneholde den aktive bestanddel fremstilt i samsvar med oppfinnelsen i en foretrukket mengde fra 5 til 80 vekt%, mens 1 til 3 0 vekt% er foretrukket i forbindelse med oppløsninger. Videre kan foretrukne innhold av den aktive bestanddel strekke seg fra 1 til 10 vekt% når det gjelder injeksjoner, fra 1 til 50 vekt% når det gjelder stikkpiller, og fra 0,1 til 10 vekt% når det gjelder salver, kataplasma og lignende for anvendelse ved topisk påføring.
Den kliniske dose er foretrukket i området fra 100 til 2.000 mg uttrykt som mengden av den aktive bestanddel pr. dag pr. voksen person når det gjelder oral tilførsel, skjønt dosen kan varieres avhengig av alder og symptomer. Den ovennevnte daglige dose kan foretrukket tilføres en gang pr. dag eller to eller tre ganger pr. dag ved at dosen oppdeles.
Ved anvendelse i form av injeksjoner, er den foretrukne dose i området fra 100 til 1.000 mg uttrykt som mengden av aktiv bestanddel pr. dag pr. voksen person. Ved anvendelse i form av salver, kataplasma og lignende, kan disse preparater med det ovennevnte innhold av den aktive bestanddel påføres på den angrepne del i en passende mengde.
Når det gjelder akutt giftighet av den aktive bestanddel ble dyreforsøk gjennomført på følgende måte. Fire uker gamle Sic-ddy hannmus og hunnmus ble først foret i en uke, og når hannmusene hadde oppnådd en vekt på 23 til 30 g og hunnmusene en vekt på 20 til 25 g ble HA1-PPEADP (lott nr. 300) og CS(S3)-PPEADP (lott nr. 302-2, begge PPEADPer er beskrevet senere) oppløst i fysiologisk saltvann som bestemt ved The Pharmacopoea of Japan, til en konsentrasjon på 5 % og tilført intraperitonealt til musene. Den intraperitoneale tilførsel ble gjennomført i forbindelse med dette forsøk fordi den som oftest gir dannelse av giftighetssymptomer. Ti hannmus og ti hunnmus ble anvendt i hver forsøksgruppe. Som et resultat ble det funnet av LD50-verdien i hver f orsøksgruppe var 2.000 mg/kg eller større, som viser at forbindelsen fremstilt i samsvar med oppfinnelsen sikkert kan anvendes som et legemiddel.
Kort beskrivelse av tegningene
Fig. 1-6 viser data for hydrofob kromatografi av fosfolipid- eller lipidbundne glykosaminglykaner fremstilt i henholdsvis eksempel l-(2)-l, eksempel 2-(2)-l, eksempel 2-(3), eksempel 4-(l), eksempel 5-(l) og eksempel 5-(2).
Den foreliggende oppfinnelse er beskrevet mer detaljert i de etterfølgende eksempler.
I de etterfølgende eksempler ble innholdene av fosfor, fosfolipid eller lipid og glykosaminglykan (GAG) i fosfolipid-eller lipidbundet glykosaminglykan målt på følgende måte.
Målemetode
1. Bestemmelse av GAG
(1) GAG som inneholder uronsyre: Karbazolsvovelsyrernetoden (Bitter-Muir metode) (Analytical Biochemistry, 4, 330-334, 1962) . (2) Keratansulfat- eller keratanpolysulfatholdig galaktose: Anthrone-metoden (Biochem. J., 50, 298-303, 1952).
2. Bestemmelse av fosfolipid eller lipid
(1) Fosfor: Metoden med molybdenblått (Inorganic AppliedColorimetric Analysis, vol. 4, side 130-135 (representativ utgiver, Shiro Hirano, publisert i Kyoritsu Shuppan). (2) Fettsyre: En 10 til 50 mg porsjon GAG-lipid ble
oppløst i 10 ml av en 1 N natriumhydroksydoppløsning og hydrolysert ved 100°C i en time. Den oppnådde reaksjonsblanding innstilles til sur pH med 1 N saltsyreoppløsning og ekstraheres med kloroform, og kloroformfasen vaskes med vann. Etter tørking med dehydratisert Glaubers salt fjernes løsningsmiddelet under redusert trykk. Den oppnådde rest forsegles i et rør sammen med et passende volum metanolholdig 3 % HC1 (gass), oppvarmes ved 100°C i tre timer og ekstraheres deretter tre ganger med petroleumseter. Den oppnådde petroleumseterfase vaskes tre ganger med vann for å fjerne kontaminert saltsyre. Etter tørking med Glaubers salt konsentreres det oppnådde produkt under redusert trykk og underkastes følgende gass-væskekromatografi.
Gass-væskekromatografi (GLC)
GC-15A (Shimadzu Corp.)
EKSEMPEL 1
Fremstilling av fosfolipidbundet<g>l<y>kosamin<g>lykan ved begrenset oksydasion av reduserende terminal gruppe
(1) Fremstilling av reduserende terminal gruppe-begrenset oksydert glykosaminglykan. 1) Fremstilling av reduserende terminal rest-spaltet
hyaluronsyre. En 2.000 mg porsjon hyaluronsyre (HAI, molekylvekt 10.000, fra hanekam) ble oppløst i 200 ml 0,05 M boratbuffer (pH 8,3). Etter tilsetning av 182 mg natriumborhydrid ble den oppnådde blanding inkubert ved romtemperatur i fem timer for å bevirke reaksjonen. Reaksjonsblandingen ble justert til pH 4,5 med eddiksyre og deretter blandet med etanol til å gi et presipitat. Det således oppnådde presipitat ble vasket med etanol til å gi 1.800 mg av en reduserende terminal rest-spaltet hyaluronsyre (R-HA1, lott nr. 100).2)Fremstilling av reduserende terminal gruppebegrenset oksydert hyaluronsyre.
En 1.700 mg porsjon R-HA1 (lott nr. 100) ble oppløst i 250 ml40mM imidazol (pH 6,5). Etter tilsetning av 139,96 mg natriumperjodat ved 0°C ble den oppnådde blanding inkubert ved den samme temperatur i en time for å bevirke reaksjon. Etanol ble tilsatt til reaksjonsblandingen til å danne et presipitat. Det således oppnådde presipitat ble vasket til å gi 1.600 mg reduserende terminal gruppe-begrenset oksydert hyaluronsyre (0-HA, lott nr. 2 00) .3) Fremstilling av andre reduserende terminal gruppe-begrensede oksyderte glykosaminglykaner (O-GAG).
Reduserende terminal rest-spaltet glykosaminglykaner (R-GAG) ble fremstilt i henhold til den ovennevnte prosedyre 1) under de forhold som er vist i tabell E, ved anvendelse av hver av de etterfølgende utgangsmaterialer: hyaluronsyre (HA5, molekylvekt 50.000: HA15, molekylvekt 150.000: fra hanekam), chondroitin (CH, molekylvekt 15.000: svovelsyrefjernet produkt fra chondroitinsulfat A med sur metanolløsning), chondroitinsulfat C (CS (Sl), molekylvekt 10.000: CS (S3), molekylvekt 30.000: CS (S6), molekylvekt 60.000: fra haibrusk), chondroitinsulfat A (CS (W), molekylvekt 30.000: fra haibrusk), dermatansulfat (DS, molekylvekt 15.000: fra svinehud), heparin (Hep, molekylvekt 15.000: fra tynntarmen hos svin), heparansulfat (HS, molekylvekt 15.000: fra oksenyre), og keratansulfat (KS, molekylvekt 15.000: fra oksehornhinne). De således oppnådde R-GAG prøver ble underkastet den ovennevnte prosedyre 2) under de betingelser som er vist i tabell F for fremstilling av reduserende terminal gruppe-begrenset oksyderte glykosaminglykaner (O-GAG).
(2)Fremstilling av L-(a-fosfatidyl)etanolamin-dipalmitoyl-bundet glykosaminglykan (GAG-PPEADP).1) Fremstilling av L-(a-fosfatifyl)etanolamin-dipalmi-toylbundet hyaluronsyre. 1.000 mg av lott nr. 200 0-HA ble oppløst i 100 ml 0,05 M fosfatbuffer (pH 7,0) og 69,2 ml av et kloroform/metanol løsningssystem (2:1) inneholdende L-(a-fosfatidyl)etanolamin dipalmitoyl (PPEADP) (1 mg/ml) ble tilsatt dertil. Den oppnådde blanding ble videre blandet med metanol for oppnåelse av en ensartet oppløsning, hvoretter oppløsningen ble inkubert ved 50°C i en time. Etter tilsetning av 25 mg natriumcyanoborhydrid til den oppnådde reduksjonsblanding ble inkuberingen fortsatt ved 50°C i to timer etterfulgt av konsentrering under et redusert trykk. Til konsentratet ble det tilsatt fem volumdeler eddiksyremettet etanol til å danne et presipitat og dette presipitat ble fjernet ved filtrering. Det således oppnådde presipitat ble oppløst i 0,3 M ammonium-kloridoppløsning, påført på en hydrofob kromatografikolonne (TSKgel Phenyl Toyopearl 65OM, 400 ml), vasket inngående med en 0,3 M ammoniumkloridløsning, og deretter eluert med en 30 % metanolløsning. Reaksjonsproduktet av interesse ble funnet i 30 % metanolfraksjonen, mens ureagert HAI ble funnet i de uabsorberte og vaskede fraksjoner. Fraksjonen som var eluert med 30 % metanol ble konsentrert under redusert trykk, avsaltet ved dialyse og deretter frysetørket til å gi et hvitt pulver med lott nr. 300.
Hydrofob kromatografi ble gjennomført under de følgende betingelser:
2) Fremstilling av andre fosfolidpidbundne glykosaminglykaner .
Fosfolipidbundne glykosaminglykaner ble fremstilt i overensstemmelse med den ovennevnte prosedyre (2)-l) fra O-GAG-prøvene vist i tabell F og PPEADP under betingelser som er vist i tabell G. Resultater fra analyser av de således oppnådde produkter er vist i tabell G.
EKSEMPEL 2
Fremstilling av fosfolipidbundet glykosaminglykan ved laktnni-sering av reduserende terminal gruppe
(1) Fremstilling av reduserende terminal gruppe-oksydert g1ykosaming1ykan. 1) Fremstilling av reduserende terminal gruppe-oksydert hyaluronsyre. 500 mg hyaluronsyre (HAI, molekylvekt 10.000, fra hanekam) ble oppløst i 10 ml vann, og oppløsningen ble blandet med 5 ml av en metanoloppløsning av 0,1 M jod og inkubert ved romtemperatur i seks timer for å bevirke reaksjon. Til den oppnådde reaksjonsblanding ble det tilsatt omtrent 5 ml 0,1 N kaliumhydroksyd for å avfarge frie jodmolekyler. Kalium-acetatmettet etanol ble tilsatt til den oppnådde oppløsning til å danne et presipitat og det presipiterte produkt ble samlet ved filtrering, vasket inngående med etanol og deretter tørket under redusert trykk. Således ble det oppnådd 423 mg reduserende terminal gruppe-oksydert hyaluronsyre (lott nr. 400). Reduserende sukker ble ikke påvist i produktet når dette ble undersøkt ved hjelp av Somogyi-Nelson metoden. 2) Fremstilling av reduserende terminal gruppe-1aktonisert hyaluronsyre.
400 mg av lott nr. 400 reduserende terminal gruppe-oksydert hyaluronsyre ble oppløst i 10 ml vann og oppløsningen ble ført gjennom 50 ml av en kolonne av en sterk sur ionebytterharpiks (Dowex 50(H<+>)) i løpet av en time. Det ble således oppnådd en oppløsning som inneholdt 390 mg reduserende terminus-laktonisert hyaluronsyre. Reduserende sukker ble ikke påvist i oppløsningen når denne ble undersøkt ved hjelp av Somogyi-Nelson metoden.
Den således oppnådde oppløsning ble nøytralisert med tri-n-butylamin og deretter frysetørket til å gi 400 mg av tri-n-butylaminsalt av reduserende terminus-laktonisert hyaluronsyre (lott nr. 500).3) Fremstilling av andre reduserende terminus-laktoniserte glykosaminglykaner.
Reduserende terminale gruppe-oksyderte glykosaminglykaner ble fremstilt i henhold til den ovennevnte prosedyre 1) under de betingelser som er vist i tabell H ved anvendelse av hver av de følgende utgangsmaterialer: chondroitin (CH, molekylvekt 15.000), chondroitinsulfat C (CS (Sl), molekylvekt 10.000, CS (S3), molekylvekt 30.000, og CS (S6), molekylvekt 60.000), dermatansulfat (DS, molekylvekt 15.000), heparin (Hep, molekylvekt 15.000) og heparansulfat (HS, molekyvekt (HS, molekylvekt 15.000). De således oppnådde prøver ble underkastet den ovennevnte prosedyre 2) under betingelser som vist i tabell I for fremstilling av reduserende terminal gruppe-laktoniserte glykosaminglykaner.
(2) Fremstilling av L-(a-fosfatidyl)etanolamin-dipalmitoyl-bundet glykosaminglykan (GAG-PPAEDP). 1) Fremstilling av L-(a-fosfatidyl)etanolamin-dipalmi-toylbundet hyaluronsyre. 400 mg av lott nr. 500 reduserende terminus-laktonisert hyaluronsyre ble oppløst i 200 ml dimetylformamid og 27,6 mg PPEADP oppløst i kloroform ble tilsatt. Den oppnådde blanding ble inkubert ved 70°C i to timer. Etter fjerning av kloroform fra reaksjonsblandingen ved destillasjon ble et overskuddsvolum av en vandig natriumacetatløsning tilsatt til resten for å omdanne reaksjonsproduktet til natriumsalt. Natriumacetatmettet etanol ble tilsatt dertil for å danne et presipitat og det dannede presipitat ble samlet ved filtrering. Presipitatet ble oppløst i en 0,3 M ammoniumacetat-løsning og underkastet rensing i overensstemmelse med eksempel l-(2) til å oppnå 36 mg av det ønskede produkt (lott nr. 600) .
Hydrofobt kromatogram: Vist i fig. 2.
Målebetingelsene er de samme som beskrevet over.
(2) Fremstilling av andre L-(a-fosfatidyl)etanolamin-dipalmitoylbundne glykosaminglykaner.
Disse prøver ble fremstilt fra de reduserende terminus-laktoniserte glykosaminglykaner som vist i tabell I og PPEADPi overensstemmelse med den ovennevnte prosedyre (2)-1) under de betingelse som er vist i tabell J. Resultatene av analyser av de således oppnådde produkter er vist i tabell K.
(3)Fremstilling av fosfatidylserin-stearoylpalmitoylbundet
chondroitinsulfat C.
400mg av det reduserende terminus-laktoniserte chondroitinsulfat C med lott nr. 500-2 ble oppløst i 200 ml dietyl-formamid og 9 mg fosfatidylserin-stearatpalmitat i kloroform ble tilsatt dertil. Den oppnådde blanding ble inkubert ved 7 0°C i to timer. Etter at kloroform var fjernet fra reaksjonsblandingen ved destillasjon ble et overskuddsvolum av en vandig natriumacetatløsning tilsatt til resten for å omdanne reaksjonsproduktet til natriumsalt. Natriumacetatmettet etanol ble tilsatt dertil for å danne et presipitat og det dannede presipitat ble samlet ved filtrering. Presipitatet ble oppløst i en 0,3 M ammoniumkloridløsning og deretter underkastet rensing i overensstemmelse med prosedyren i eksempel 1-(2) til å gi 20,8 mg fosfatidylserin-stearoylpalmitoylbundet chondroitinsulfat C (lott nr. 700-2) .
Hydrofobt kromatogram:
Vist i fig. 3.
Målebetingelser er som beskrevet over.
EKSEMPEL 3
Fremstilling av fosfolipid- eller lipidbundet glykosaminglykan ved aminering av reduserende terminal gruppe (1) Fremstilling av reduserende terminal gruppe-aminert glykosaminglykan. 1) Fremstilling av reduserende terminus-aminert chondroitinsulfat C (CS/S3)).
100 mg reduserende terminal gruppe-begrenset oksydert chondroitinsulfat C (lott nr. 202-2) ble oppløst i 50 ml 0,05 M fosfatbuffer (pH 7,0), og oppløsningen ble blandet med24mg etylendiaminhydroklorid. Etter at den oppnådde blanding var inkubert ved 50°C i tretti minutter ble 20 mg natriumcyanoborhydrid tilsatt reaksjonsblandingen og inkubasjonen ble fortsatt ved 50°C i to timer for fullstendig reaksjon.Natriumacetatmettet etanol ble tilsatt til den oppnådde reaksjonsblanding for å presipitere reaksjonsproduktet som deretter ble samlet ved filtrering. Presipitatet ble oppløst
i vann og absorbert på 50 ml av DEAE-ionebytterharpiks etterfulgt av gradienteluering med en 0,1 M - 1 M natriumklorid-løsning. Det reduserende terminus-aminerte chondroitinsulfat C ble eluert med 0,4 M natriumklorid, mens fritt chondroitinsulfat C ble eluert med 0,75 M natriumklorid. Fraksjonen oppnådd med 0,4 M natriumklorid ble avsaltet ved dialyse og deretter frysetørket til å gi 80 mg reduserende terminal gruppe-aminert chondroitinsulfat C (lott nr. 802-2). 2) Fremstilling av reduserende terminus-aminert heparin (Hep) . Den ovennevnte prosedyre ble gjentatt unntatt at 100 mg reduserende terminal gruppe-begrenset oksydert heparin med lott nr. 205 ble anvendt. Det ble således oppnådd 77 mg reduserende terminus-aminert heparin (lott nr. 805).
(2) Fremstilling av ravsyrederivat av lipid.
1) Fremstilling av ravsyreester av glyserolmonostearat. 10,74 g glyserolmonostearat ble oppløst i 2 00 ml benzen som inneholder 3 ml pyridin. Etter tilsetning av 6 g ravsyreanhydrid ble den oppnådde blanding behandlet med tilbakeløp i seks timer. Den oppnådde reaksjonsblanding ble konsentrert under redusert trykk og det dannede presipitat ble underkastet rekrystallisering fra aceton til å gi 8,2 g ravsyreester av glyserolmonostearat. 2) Fremstilling av aktiv ester fra ravsyreester av glyserolmonostearat med N-hydroksyravsyreimid. 8 g av esteren oppnådd i den ovennevnte prosedyre 1) ble oppløst i benzen og oppløsningen ble blandet med 2 g N-hydroksyravsyreimid og 10 g dicykloheksylkarbodiimid. Etter at den oppnådde blanding var inkubert ved romtemperatur i tyve timer ble reaksjonsblandingen konsentrert under redusert trykk for å oppnå et presipitat av reaksjonsproduktet. Presipitatet ble rekrystallisert fra et benzen/n-heksan-løsningsmiddelsystem til å gi 7,4 g av den ønskede aktive ester (lott nr. GMS-1). (3) Fremstilling av glyserolmonostearatbundet
chondroitinsulfat C. I 5 ml vann ble oppløst 80 mg av reduserende terminus-aminert chondroitinsulfat C med lott nr. £02-2. Den oppnådde oppløs-ning ble blandet med 6,95 mg av den aktive ester med lott nr. GMS-1 oppløst i dimetylformamid. Etter inkubasjon av den oppnådde blanding ved romtemperatur i tyve timer ble reaksjonsblandingen blandet med natriumacetatmettet etanol for å presipitere reaksjonsproduktet som deretter ble samlet ved filtrering. Det samlede presipitat ble oppløst i en 0,3 M ammoniumkloridoppløsning og den oppnådde løsning ble underkastet rensing på samme måte som i prosedyren i eksempel l-(2)-l) til å gi 38 mg av den ønskede forbindelsen (lott nr. 902-2) .
(4) Fremstilling av ravsyrederivat av fosfolipid.
1) Fremstilling av ravsyreester av lysolecitin.
I 200 ml kloroform ble det oppløst 495 mg lysolecitin med den
følgende formel:
Til den oppnådde oppløsning ble det tilsatt 100 mg ravsyreanhydrid og 79 mg pyridin. Etter inkubasjon av blandingen ved romtemperatur i tyve timer ble blandingen konsentrert under redusert trykk til å gi et presipitat. Det dannede presipitat ble rekrystallisert fra aceton til å gi en ravsyreester av lysolecitin. 2) Fremstilling av aktiv ester fra ravsyreester av lysolecitin med N-hydroksyravsyreimid. 288,5 mg av esteren oppnådd i det foregående ble oppløst i dimetylformamid, og løsningen ble blandet med 57,5 mg N-hydroksyravsyreimid og 103 mg dicykloheksylkarbodiimid. Etter inkubasjon av den således fremstilte blanding ved romtemperatur i tyve timer ble presipiterte materialer fjernet fra den oppnådde reaksjonsblanding til å gi en dimetylformamidoppløsning av den ønskede aktive ester. (5) Fremstilling av lysolecitinbundet glykosaminglykan.
Fremstilling av lysolecitinbundet chondroitinsulfat C.
Dimetylformamidoppløsningen av den aktive ester oppnådd i den ovennevnte prosedyre (4)-2) ble blandet med en vandig løsning av 1 g av den reduserende terminus-aminerte chondroitinsulfat C med lott nr. 802-2, og blandingen ble inkubert ved romtemperatur i tyve timer for å bevirke reaksjonen. Rensing av reaksjonsproduktet ble gjennomført ved hydrofob kromatografi i overensstemmelse med prosedyren i eksempel 1. (6) Fremstilling av glyseroldistearatbundet
chondroitinsulfat C.
En aktiv ester av en ravsyreester av glyseroldistearat ble fremstilt i henhold til den ovennevnte prosedyre (2)-2) (lott nr. GDS-2). Denne fikk reagere med reduserende terminus-aminert chondroitinsulfat C (lott nr. 802-2) oppnådd i den ovennevnte prosedyre (1)-1) i overensstemmelse med den ovennevnte prosedyre (3), med etterfølgende rensing. 27 mg av den ønskede forbindelse ble således oppnådd (lott nr. 904).
EKSEMPEL 4
Fremstilling av fosfolipidbundet glykosaminglykan ved anvendelse av kondensasjonsmiddel
(1) Fremstilling av L-(a-fosfatidyl)etanolamin-dipalmitoyl-bundet chondroitinsulfat C. 400 mg tri-n-butylaminsalt av chondroitinsulfat C (CS(S3)) ble oppløst i 100 ml dimetylformamid. Til den oppnådde oppløsning ble det tilsatt 6,92 mg PPEADP oppløst i kloroform og 38,4 mg l-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)karbodiimid-hydroklorid. Den oppnådde blanding ble inkubert ved romtemperatur i tyve timer for å bevirke reaksjonen. Etter konsentrering under redusert trykk ble et overskuddsvolum av en natriumacetatløsning tilsatt til konsentratet for å omdanne reaksjonsproduktet til natriumsalt. Etanol ble tilsatt dertil for å presipitere saltet og det således dannede presipitat ble samlet ved filtrering. Presipitatet ble oppløst i en 0,3 M ammoniumkloridløsning og deretter underkastet rensing i overensstemmelse med prosedyren i eksempel l-(2)-l). Det ble således oppnådd 63 mg av den ønskede forbindelse (lott nr. 1002-2).
Hydrofobt kromatogram:
Vist i fig. 4.
Målebetingelser er de samme som beskrevet over.
(2) Fremstilling av andre L-(a-fosfatidyl)etanolamin-
dipalmitoylbundne glykosaminglykaner (GAG-PPEADP). Fosfolipidbundne glykosaminglykaner ble fremstilt fra forskjellige glykosaminglykaner og PPEADP i overensstemmelse med den ovennevnte prosedyre (1) under de betingelser som er vist i tabell L. Resultatene fra analysene av de således oppnådde produkter er vist i tabell M.
EKSEMPEL 5
Fremstilling av fosfoli<p>idbundet alykosaminalYkan ved glykosaminglvkanakt iveringsmetoden. (1) Fremstilling av L-(a-fosfatidyl)etanolamin-dipalmitoyl-bundet chondroitinsulfat C. 400 mg tri-n-butylaminsalt av chondroitinsulfat C (CS(S3)) ble oppløst i 300 ml DMF. Til den oppnådde oppløsning ble det tilsatt 9,9 mg N-hydroksysuccinimid og 20,6 mg dicykloheksylkarbodiimid. Den oppnådde blanding ble inkubert ved romtemperatur i tyve timer. Et overskuddsvolum av en vandig natriumacetatløsning ble tilsatt til den oppnådde reaksjonsblanding for å omdanne reaksjonsproduktet til natriumsalt, etterfulgt av tilsetning av etanol for å samle dannet presipitat ved filtrering. Det således samlede presipitat ble umiddelbart oppløst i 30 ml vann, og løsningen ble blandet med 6,92 g PPEADP oppløst i kloroform. Dimetylformamid ble videre tilsatt dertil for å oppnå en ensartet løsning. Etter inkubasjon av den således oppnådde løsning ved romtemperatur i seks timer ble reaksjonsblandingen konsentrert under redusert trykk og deretter blandet med eddiksyremettet etanol til å danne et presipitat. Det således dannede presipitat ble deretter samlet ved filtrering og oppløst i en 0,3 M ammoniumacetatløsning med etterfølgende rensing i overensstemmelse med prosedyren i eksempel l-(2)-1). 29,7 mg av den ønskede forbindelse (lott nr. 1102-2) ble oppnådd.
Hydrofobt kromatogram:
Vist i fig. 5.
Målebetingelser er de samme som beskrevet over.
(2) Fremstilling av L-(a-fosfatidyl)etanolamin-dipalmitoyl-bundet chondroitinpolysulfat. 1 g tri-n-butylaminsalt (svovelinnhold 13,0 %, molekylvekt 10.000) av chondroitinpolysulfat (CSP(II)) ble oppløst i50ml dimetylformamid. Til den oppnådde oppløsning ble det tilsatt 1770 mg N-hydroksysuccinimid og 318 mg dicykloheksylkarbodiimid. Den oppnådde blanding ble inkubert over natten ved 4°C. Deretter ble det tilsatt 10 ml vann til reaksjonsblandingen og denne fikk reagere ytterligere ved romtemperatur i femten minutter. Etter at det dannede presipitat var fjernet ble den oppnådde løsning blandet med 69,2 g fosfatidyletanolamin-dipalmitoyl (PPEADP) oppløst i kloroform og blandingen fikk reagere ved romtemperatur i seks timer. Den oppnådde reaksjonsblanding ble konsentrert under et redusert trykk og deretter blandet med natriumacetatmettet etanol til å danne et presipitat. Deretter ble det dannede presipitat samlet ved filtrering og oppløst i en 0,3 M ammoniumacetatløsning, med etterfølgende rensing i overensstemmelse med prosedyren i eksempel 1- (2)-1) . Det ble således oppnådd 67 mg av den ønskede forbindelse (lott nr. 1108).
Hydrofobt kromatogram:
Vist i fig. 6.
Målebetingelser er de samme som beskrevet over.
EKSEMPEL 6
Adhesjon av BHK- celler til et fosfilipid- eller lipidbundet glykosaminalykanlaa laminert på en fibronektinbelaat indre vega i en dyrkin<g>sskål.
Hver brønn i en inkubasjonsplate med 96 brønner ble belagt med 100/il av en 5 ug/ ml oppløsning av bovint serumavledet fibronektin. Etter vasking ble hver brønn ytterligere belagt med 100 fil av hver av de fosfolipid- eller lipidbundne glykosaminglykaner oppnådd i eksemplene 1 til 5, med deres konsentrasjoner vist i tabell N.
Separat ble BHK-celler (nyreceller fra nyfødt hamster), som var dyrket i en skål med diameter 100 mm, behandlet med 5 ml av en 0,1 mg/ml trypsinoppløsning ved 37°C i fem minutter. Til de således behandlede celler ble det tilsatt 5 ml av en 1 mg/ml oppløsning av soyabønnetrypsininhibitor for å inaktivere trypsin. De således separerte celler ble deretter samlet ved sentrifugering, vasket to ganger og deretter omgjort til en eneste cellesuspensjon med densitet på lxlO<5>celler/ml.
En100/il porsjon av den således oppnådde enkle cellesuspensjon (lxlO<4>celler) ble helt i hver brønn i inkuba-sjonsplaten som var dobbeltbelagt med fibronektin og et fosfolipid- eller lipidbundet glykosaminglykan som beskrevet over. Etter inkubasjon ved 37°C i en time ble celler som ikke hadde festet seg vasket ut og de gjenværende festede celler ble fiksert med 2 % formaldehyd og observert direkte i et fasekontrastmikroskop for å telle antall festede celler.
Tabell N viser de konsentrasjonsavhengige forandringer i antall festede celler. Hver av dataene ble uttrykt som gjennomsnittsverdi av tre eller fire målinger. Feil (standard avvik) i hvert eksperiment er også vist.
Når frie glykosaminglykaner eller ubundne lipider ble anvendt i stedet for fosfolidpid- eller lipidbundne glykosaminglykaner, viste de ingen celleadhesjonsinhiberende virkning selv ved høye konsentrasjoner.
EKSEMPEL 7
Virkning av fosfoli<p>id- eller lipidbundet<g>lykosamin<g>lykan for inhibering av celleadhesjon av forskjellige dyrkede cellelinjer ved hjelp av celleadhesjonssubstans.
Fosfolipid- eller lipidbundne glykosaminglykaner oppnådd i eksempler 1 til 5 ble undersøkt for deres virkninger vedrørende inhibering av celleadhesjon av forskjellige cellelinjer ved hjelp av celleadhesjonssubstanser, ved anvendelse av BHK 21 (nyreceller fra nyfødt hamster), CEF (embryofibroblastcelle fra fjærkre), B16F10 (svært metastatisk melanomacelle fra mus), CHO (ovariecelle fra kinesisk hamster) og baEC (bovin aorta endotelcelle) som cellelinjene, og fibronektin (FN), laminin (LN), type I kollagen (Coll) og vitronektin (VN) som celleadhesjonssubstanser.
En 5/xg/ml porsjon av hvert fibronektin avledet fra bovint blodplasma, laminin fra EHS tumorcelle fra mus, type I kollagen fra rottelår og serumavledet bovint vitronektin ble belagt på en inkubasjonsplate med 96 brønner, og hvert av fosfolipid- eller lipidbundne glykosaminglykaner oppnådd i eksempel 1 til 5 ble videre belagt på samme måte som i eksempel 6. Deretter ble en 100 fil porsjon av en enkelt cellesuspensjon (lxlO<4>celler) av hver av BHK 21, CEF, B16F10, CHO og baEC cellene helt inn i hver brønn for å observere forandringer i celleadhesjonen. Som kontroll ble den samme prosedyre gjentatt med unntak av at fosfolipid-eller lipidbundet glykosaminglykan ikke ble anvendt, og den oppnådde celleadhesjon ble uttrykt som 100 %. Resultatene er vist i tabell 0.
I tabell 0 er antall relativt festede celler uttrykt semi-kvantitativt som "-" for ingen eller liten adhesjon (0 til mindre enn 10 %), "+" for 10 til mindre enn 30 %, "++n for 30 til mindre enn 50 %, "+++" for 50 til mindre enn 70 %, "++++" for 70 til mindre enn 90% og "+++++" for 90 til 100 % adhesjon.
EKSEMPEL 8
Virkning av fosfolipidbundet chondroitinsulfat C for inhibering av adhesjon av svært metastatiske kreftcel ler til ekstracellulær matriks i dyrkede endotelceller fra blodkar Endotelceller fra blodkar hos mus ble dyrket på en inkubasjonsplate med 24 brønner som var belagt med type I kollagen slik at cellene vokste sammenløpende. Et enkelt lag av cellene ble behandlet med 0,5 % Triton X-100 ved romtemperatur i tretti minutter, og de således desintegrerte fragmenter av cellelaget ble vasket med Dulbeccos PBS(+) buffer for å oppnå ekstracellulær matriks av endotelceller.
Separat ble museavledede svært metastatiske kreftceller (B16F10) som var dyrket i en skål med diameter 100 mm, behandlet med 5 ml av en trypsinløsning (0,1 mg/ml PBS(-)) ved 37°C i fem minutter. Til de således behandlede celler ble det tilsatt 5 ml av en 1 mg/ml oppløsning av soya-bønnetrypsininhibitor for å inaktivere trypsin. Deretter ble de således separerte celler samlet ved sentrifugering, vasket to ganger med en fosfatbuffer (PBS (-)) og deretter samlet i en enkelt cellesuspensjon (Hanks BSS - 20 mM HEPES, pH 7,4), med en densitet på 2xl0<5>celler/ml.
Det fosfolipidbundne chondroitinsulfat C (CS(S3)-PPEADP) med lott nr. 602-2, og 500 fil av den således fremstilte cellesuspensjon av B16F10 (lxlO<5>celler) ble overført til hver brønn i den ovennevnte inkubasjonsplate med 24 brønner som inneholdt ekstracellulær matriks og inkubert ved 37°C i en time i en inkubator som var fylt med 5 % karbondioksyd.
Supernatantfluidet i hver brønn ble forsiktig fjernet, resten ble vasket forsiktig en gang med Hanks buffer og begge de flytende porsjoner ble kombinert. Deretter ble antall celler i den kombinerte prøve telt ved anvendelse av en celleteller (Coleter Electronics) for å telle celler som ikke var festet til den ekstracellulære matriks. En bufferløsning som ikke inneholdt forbindelsen med lott nr. 602-2 (ingen tilsetning) og en buffer som inneholdt fritt chondroitinsulfat C ble anvendt som kontroller.
Adhesjonsforholdet for cellene ble beregnet ved at antall telte ikke-festede celler ble substrahert fra det totale antall celler som opprinnelig var tilsatt med divisjon av resten med totalt celler. Resultatene er vist i tabell P.
Fra de ovennevnte resultater sees det klart at det fosfolidpidbundne glykosaminglykan i henhold til den foreliggende oppfinnelse kan inhibere adhesjon av svært metastatiske kreftceller til ekstracellulære matrikser fra blodkar-endotelceller, mens fritt chondroitinsulfat C ikke kan utvise en slik effekt.
EKSEMPEL 9
F.ffekt av fosfolipidbundet chondroitinsulfat C for å inhibere metastase av svært metastatiske kreftceller.
Svært metastatiske kreftceller avledet fra mus (B16F10) dyrket i en skål med diameter 100 mm ble behandlet med 5 ml av en EDTA-oppløsning (0,02 %/PBS (-)) ved 37°C i fem minutter etterfulgt av celleseparasjon ved pipettering. Cellene ble samlet ved sentrifugering, vasket to ganger med en fosfatbuffer (PBS (-)) og deretter kombinert til en eneste cellesuspensjon med en densitet på lxlO"<6>celler/ml. En0,1ml porsjon av denne cellesuspensjon (IO<5>celler) ble blandet med 0,1 ml av en PBS oppløsning av det fosfolipidbundne glykosaminglykan (CS(S3)-PPEADP) med lott nr. 602-2 (0,1 mg, 1 mg eller 5 mg/0,1 ml) og den oppnådde blanding ble tilført til C57BL/6 mus gjennom halevenen. Toraktomi ble gjennomført to uker etter tilførselen for å telle antall melanomkolonier metastasert til lungenes overflate. Enbufferløsning som inneholdt (CS(S3)-PPEADP) forbindelse med lott nr. 602-2 (ingen tilsetning), og en buffer som inneholdt fritt chondroitinsulfat C ble anvendt som kontroller.
Tabell Q viser resultatene fra telling av kolonier som var metastasert til lungenes overflate pr. mus.
Metastaser av kreftceller ble inhibert når dosen av det fosfolipidbundne chondroitinsulfat C økte. Som det klart fremgår fra disse resultatene kan fosfolipidbundet glykosaminglykan fremstilt i henhold til oppfinnelsen inhibere metastaser av svært metastatiske kreftceller. Fritt chondroitinsulfat C inhiberer også metastasene, men denne virkning var lavere enn virkningen av fosfolipidbundet chondroitinsulfat C (p<0,001).
De fosfolipid- eller lipidbundne glykosaminglykaner eller deres salter fremstilt i henhold til oppfinnelsen som har celleadhesjonsinhiberende aktivitet og som er uten toksisitet, er nyttige som metastaseinhibitorer.
Claims (14)
1. Analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt fosfolipidbundet glykosaminglykan med formelen
hvori P<1>er et fosfolipid med en primær aminogruppe med formelen (IX)
hvor hver av R4og R5er hydrogen, -CH=CHR6eller COR7(hver av R6og R7er en C6_24alkylgruppe) og Y er -CH2<C>H2NH eller
og (1) GAG er plassert i 4-stillingen, R<3>er plassert i 3-stillingen, R<2>er en COOH-gruppe og R<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av hyaluronsyre, chondroitin, chondroitinsulfat A, C eller E, dermatansulfat eller heparin med utelukkelse av en reduserende terminal glukuronsyredel eller når GAG er en glykosaminglykanrest av dermatansulfat med utelukkelse av en reduserende terminal iduronsyredel, 2) GAG er plassert i 4-stillingen, R3 er plassert i 3-stillingen, R2 er en COOH-gruppe og R<3>er en OS03H-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av chondroitinsulfat K eller chondroitinpolysulfat med utelukkelse av en reduserende terminal glukuronsyredel,3)GAG er plassert i 3-stillingen, R3 er plassert i 4-
stillingen, R<2>er en CH2OH-gruppe, og R<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av keratansulfat med utelukkelse av en reduserende terminal galaktosedel, og 4) GAG er plassert i 3-stillingen, R<3>er plassert i4-stillingen,R<2>er en CH2OS03H-gruppe og R<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av keratanpolysulfat med utelukkelse av en reduserende terminal galaktosedel; eller et farmasøytisk tålbart salt derav,
karakterisert vedtrinnene med: reduksjon og spalting av den reduserende terminale gruppe i et glykosaminglykan med formelen (I-l) :
med oppnåelse av et redusert produkt med formelen (1-2):
hvoretter det reduserte produkt oksyderes for å oppnå et oksydert produkt med formelen (1-3) :
og hvoretter den således dannede aldehydgruppe i det oksyderte produkt får reagere med en primær aminogruppe i et fosfolipid, hvori GAG, R2 og R<3>i de ovennevnte formler er som angitt i det foregående, og om ønsket omdannes det oppnådde produkt til farmasøytisk tålbart salt derav.
2. Analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt fosfolipidbundet glykosaminglykan med formelen
hvori P<1>er et fosfolipid med en primær aminogruppe med formelen (IX)
hvor hver av R4og R5er hydrogen, -CH=CHR6eller COR7(hver av R6og R7er en C6_24alkylgruppe) og Y er -CH2CH2NH eller
og 1) R<1>er en NHCOCH3-gruppe og R<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av hyaluronsyre eller chondroitin med utelukkelse av en reduserende terminal heksosamindel, 2) R<1>er en NHCOC<H>3-gruppe ogR<3>er en OS03H-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av chondroitinsulfat A eller K, chondroitinpolysulfat eller dermatansulfat med utelukkelse av en reduserende terminal heksosamindel, og 3) hver av R<1>og R<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av keratansulfat eller keratanpolysulfat med utelukkelse av en reduserende terminal galaktosedel; eller et farmasøytisk tålbart salt derav,karakterisert vedtrinnene med: reduksjon og spalting av den reduserende terminale gruppe i et glykosaminglykan med formelen (II-l):
med oppnåelse av et redusert produkt med formelen (II-2) :
hvoretter det reduserte produkt oksyderes for å oppnå et oksydert produkt med formelen (II-3) :
og hvoretter den således dannede aldehydgruppe i det oksyderte produkt får reagere med en primær aminogruppe i et fosfolipid, hvori GAG, R<1>og R<3>i de ovennevnte formler er som angitt i det foregående og R er en 0H- eller OS03H-gruppe, og om ønsket omdannes det oppnådde produkt til et farmasøytisk tålbart salt derav. 3. Analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk
aktivt fosfolipidbundet glykosaminglykan med formelen
hvori P<1>er et fosfolipid med en primær aminogruppe med formelen (IX)
hvor hver av R4og R5er hydrogen, -CH=CHR6eller COR7(hver av R6og R7er en C6_24alkylgruppe) og Y er -CH2CH2NH eller
og GAG er en glykosaminglykanrest av keratansulfat
eller keratanpolysulfat med utelukkelse av en reduserende terminal galaktosedel; eller et farmasøytisk tålbart salt derav,
karakterisert vedat den omfatter trinnene med: oksydasjon av det reduserte produkt med formelen (II-2) som angitt i krav 2 for å oppnå et oksydert produkt med formelen (11) :
hvori GAG er som angitt i det foregående og hvoretter den således dannede aldehydgruppe i det oksyderte produkt får reagere med en primær aminogruppe i et fosfolipid, og om ønsket omdannes det oppnådde produkt til et farmasøytisk tålbart salt derav. 4. Analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk
aktivt fosfolipidbundet glykosaminglykan med formelen
hvori P<1>er et fosfolipid med en primær aminogruppe med formelen (IX)
hvor hver av R4og R5er hydrogen, -CH=CHR6eller COR7(hver av R6og R7er en C6.24alkylgruppe) og Y er -CH2CH2NH eller
og
1) GAG er plassert i 4-stillingen, R<3>er plassert i 3-stillingen, R<1>er en OH-gruppe, R<2>er en COOH-gruppe, og R<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av hyaluronsyre, chondroitin, chondroitinsulfat A, C eller E, dermatan-sulf at, heparin eller heparansulfat med utelukkelse av en reduserende terminal glukuronsyredel eller når GAG er en glykosaminglykanrest av dermatansulfat, med utelukkelse av en reduserende terminal iduronsyredel,
2) GAG er plassert i 4-stillingen, R<3>er plassert i 3-stillingen, R<1>er en OS03H-gruppe,R<2>er en COOH-gruppe og R<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av chondroitinsulfat D med utelukkelse av en reduserende terminal glukuronsyredel eller når GAG er en glykosaminglykanrest av heparin eller heparansulfat med utelukkelse av en reduserende terminal iduronsyredel,
3) GAG er plassert i 4-stillingen, R<3>er plassert i 3-stillingen, R<1>er en OH-gruppe,R<2>er en COOH-gruppe og R<3>er en OS03H-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av chondroitinsulfat K med utelukkelse av en reduserende terminal glukuronsyredel,
4) GAG er plassert i 4-stillingen, R<3>er plassert i 3-stillingen, minst en av R<1>og R<3>er en OS03H-gruppe, mens den andre er en OH-gruppe, og R<2>er en COOH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av chondroitinpolysulfat med utelukkelse av en reduserende terminal glukuronsyredel,
5) GAG er plassert i 3-stillingen, R<3>er plassert i 4-stillingen, hver avR<1>ogR<3>er en OH-gruppe og R<2>er en CH2OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av keratansulfat med utelukkelse av en reduserende terminal galaktosedel,
6) GAG er plassert i 3-stillingen, R<3>er plassert i 4-stillingen, hver avR<1>ogR<3>er en OH-gruppe og R<2>er en CH2OS03H-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av keratanpolysulfat med utelukkelse av en reduserende terminal galaktosedel ,
7) GAG er plassert i 3-stillingen, R<3>er plassert i4-stillingen, R<1>er en NHCOCH3-gruppe, R<2>er en CH2OH-gruppe ogR<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av hyaluronsyre eller chondroitin med utelukkelse av en reduserende terminal heksosamindel,
8) GAG er plassert i 3-stillingen, R<3>er plassert i 4-stillingen, R<1>er enNHCOCH3-gruppe, R<2>er en CH2OH-gruppe ogR<3>er en OS03H-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av chondroitinsulfat A eller K, eller dermatansulfat med utelukkelse av en reduserende terminal heksosamindel,
9) GAG er plassert i 3-stillingen, R<3>er plassert i 4-st il lingen, R<1>er en NHCOCH3-gruppe, R<2>er en CH2OS03H-gruppe ogR<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av chondroitinsulfat C eller D med utelukkelse av en reduserende terminal heksosamindel,
10) GAG er plassert i 3-stillingen, R<3>er plassert i4-stillingen, R<1>er en NHC0CH3-gruppe, R2er en CH2OS03H-gruppe og R<3>er en OS03H-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av chondroitinsulfat E med utelukkelse av en reduserende terminal heksosamindel,
11) GAG er plassert i 3-stillingen, R<3>er plassert i4-stillingen,R<1>er en NHC0CH3-gruppe, R<2>er en CH2OH-gruppe ogR<3>er en OS03H-gruppe, ellerR<2>er en CH2OS03H-gruppe ogR<3>er en OH-gruppe eller en OS03H-gruppe, når GAG er en glykosaminglykanrest av chondroitinpolysulfat med utelukkelse av en reduserende terminal heksosamindel,
12) GAG er plassert i 4-stillingen, R<3>er plassert i 3-stillingen,R<1>er en NHS03H-gruppe,R<2>er en CH2OS03H-gruppe og R<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av heparin med utelukkelse av en reduserende terminal heksosamindel,
13) GAG er plassert i 4-stillingen, R<3>er plassert i 3-stillingen, R<1>er en NHC0CH3-gruppe eller en NHS03H-gruppe, R<2>er en CH20H-gruppe, og R<3>er en OS03H-gruppe, eller R<2>er en CH2OS03H-gruppe og R<3>er en OH-gruppe eller en OS03H-gruppe, når GAG er en glykosaminglykanrest av heparansulfat med utelukkelse av en reduserende terminal heksosamindel, og
14) GAG er plassert i 4-stillingen, R<3>er plassert i 3-stillingen, R<1>er en NHC0CH3-gruppe, R<2>er en CH2OS03H-gruppe, og R<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av keratansulfat eller keratanpolysulfat med utelukkelse av en reduserende terminal heksosamindel,
eller et farmasøytisk tålbart salt derav,karakterisert vedat den omfatter trinnene med: oksydasjon og spalting av den reduserende terminale gruppe i et glykosaminglykan med formelen (12):
for derved å oppnå et oksydert produkt med formelen (13):
og hvoretter det fra det oksyderte produkt fremstilles et lakton med formelen (14) :
og hvoretter det således fremstilte lakton får reagere med en primær aminogruppe i et fosfolipid, hvori GAG, R<1>,R<2>ogR<3>i de ovennevnte formler er som angitt i det foregående og A er et alkalimetall, og om ønsket omdannes det oppnådde produkt til et farmasøytisk tålbart salt derav. 5. Analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk
aktivt fosfolipid- eller lipidbundet glykosaminglykan med
hvori P<2>er et fosfolipid eller et lipid med formelen (X), (XI), (XII) eller (XIII)
hvori R8er hydrogen, R9er en alkylgruppe, R10er -CH=CHR6eller -COR7, hvori hver av R6og R7er en C6_24alkylgruppe og W er -CH2CH2N+ (CH3) 3 eller en inositolrest, m er et helt tall fra 1 til 8, og { er et helt tall fra 1 til 10, og 1) GAG er plassert i 4-stillingen, R<3>er plassert i 3-stillingen, R<2>er en COOH-gruppe og R<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av hyaluronsyre, chondroitin, chondroitinsulfat A, C eller E, dermatansulfat, heparin eller heparansulfat med utelukkelse av en reduserende terminal glukuronsyredel, eller når GAG er en glykosaminglykanrest av dermatansulfat med utelukkelse av en reduserende terminal iduronsyredel,
2) GAG er plassert i 4-stillingen, R<3>er plassert i3-stillingen, R<2>er en COOH-gruppe og R<3>er en OS03H-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av chondroitinsulfat K eller chondroitinpolysulfat med utelukkelse av en reduserende terminal glukuronsyredel,
3) GAG er plassert i 3-stillingen, R<3>er plassert i4-s til lingen, R<2>er en CH20H- gruppe og R<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av keratansulfat med utelukkelse av en reduserende terminal galaktosedel, og
4) GAG er plassert i 3-stillingen, R<3>er plassert i 4-st ill ingen, R<2>er en CH2OS03H-gruppe ogR<3>er en OH-gruppe når GAG er en glykosaminglykanrest av keratanpolysulfat med utelukkelse av en reduserende terminal galaktosedel,
eller et farmasøytisk tålbart salt derav,karakterisert vedat den omfatter trinnene med: reaksjon av en aldehydforbindelse med formelen (1-3) som angitt i krav 1 med et alkylendiamin for oppnåelse av et derivat med formel (15):
hvori GAG, R<2>, R<3>og m er som angitt i det foregående, og hvor et fosfolipid eller et lipid separat får reagere med en dikarboksylsyre eller et dikarboksylsyreanhydrid for å oppnå et fosfolipid- eller lipidderivat med en karboksylgruppe, og hvor en primær aminogruppe i derivatet med formel (15) får reagere med karboksylgruppen i fosfolipid- eller lipidderivatet, og om ønsket omdannes det oppnådde produkt til et farmasøytisk tålbart salt derav. 6. Analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt fosfolipid- eller lipidbundet glykosaminglykan med
formelen
hvori GAG,R<1>og R<3>er som angitt i krav 2, og m, { og P<2>er som angitt i krav 5,
eller et farmasøytisk tålbart salt derav,karakterisert vedtrinnene med: reaksjon av en aldehydforbindelse med formel (II-3) som angitt i krav 2 med et alkylendiamin med oppnåelse av et derivat med formel (16):
hvori GAG, R<1>, R<3>og m er som angitt i det foregående, og hvor et fosfolipid eller et lipid separat får reagere med en dikarboksylsyre eller et dikarboksylsyreanhydrid for å oppnå et fosfolipid- eller lipidderivat med en karboksylgruppe, og hvoretter en primær aminogruppe i derivatet med formel (16) får reagere med karboksylgruppen i fosfolipid- eller lipidderivatet, og om ønsket omdannes det oppnådde produkt til et farmasøytisk tålbart salt derav. 7. Analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt fosfolipid- eller lipidbundet glykosaminglykan med
formel
hvori GAG,R<1>,R2 ogR<3>er som angitt i krav 4, og m, { ogP<2>er som angitt i krav 5,
eller et farmasøytisk tålbart salt derav,karakterisert vedtrinnene med: reaksjon av en laktonforbindelse med formel (14) som angitt i krav4med et alkylendiamin for oppnåelse av et derivat med formel (17): hvori GAG, R<1>, R<2>, R3 og m er som angitt i det foregående, og hvor et fosfolipid eller lipid separat får reagere med en dikarboksylsyre eller et dikarboksylsyreanhydrid for å oppnå et fosfolipid- eller lipidderivat med en karboksylgruppe, og hvorpå en primær aminogruppe i derivatet med formel (17) får reagere med karboksylgruppen i fosfolipid- eller lipidderivatet, og om ønsket omdannes det oppnådde produkt til et farmasøytisk tålbart salt derav.
8. Analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt fosfolipidbundet glykosaminglykan med en uronsyredel med formel (VIII)
hvorP<1>er et fosfolipid med en primær aminogruppe med formel (IX)
hvor hver av R4og R5er hydrogen, -CH=CHR6eller -COR7(hver av R6og R7er en C6_24alkylgruppe) og Y er -CH2<C>H2<N>H- eller
og Rx og R3er uavhengig en OH-gruppe
eller en OS03H-gruppe,
eller et farmasøytisk tålbart salt derav,karakterisert vedtrinnene med: reaksjon av et glykosaminglykan med en uronsyredel med formel (18) hvoriR<1>ogR<3>er som angitt i det foregående, med en primær aminogruppe i fosfolipidet i nærvær av et kondensasjonsmiddel, eller aktivering av en karboksylgruppe i glykosaminglykanet med formel (18) hvorpå den aktiverte karboksylgruppe i glykosaminglykanet deretter får reagere med en primær aminogruppe i fosfolipidet, og om ønsket omdannes det oppnådde produkt til et farmasøytisk tålbart salt derav.
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2193816A JP2986518B2 (ja) | 1990-07-24 | 1990-07-24 | 癌転移抑制剤 |
JP2193818A JP2986519B2 (ja) | 1990-07-24 | 1990-07-24 | 燐脂質結合グリコサミノグリカン |
JP2193817A JP2997018B2 (ja) | 1990-07-24 | 1990-07-24 | 燐脂質又は脂質結合グリコサミノグリカン |
PCT/JP1991/000995 WO1992001720A1 (en) | 1990-07-24 | 1991-07-24 | Phospholipid- or lipid-combining glycosaminoglycan, production thereof, and cancer metastasis inhibitor |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO921083D0 NO921083D0 (no) | 1992-03-19 |
NO921083L NO921083L (no) | 1992-05-21 |
NO305368B1 true NO305368B1 (no) | 1999-05-18 |
Family
ID=27326820
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO921083A NO305368B1 (no) | 1990-07-24 | 1992-03-19 | AnalogifremgangsmÕte for fremstilling av et terapeutisk aktivt fosfolipidbundet glykosaminglykan |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5464942A (no) |
EP (1) | EP0493622B1 (no) |
KR (1) | KR0181295B1 (no) |
AT (1) | ATE148713T1 (no) |
AU (1) | AU647814B2 (no) |
CA (1) | CA2067211C (no) |
DE (1) | DE69124590T2 (no) |
FI (1) | FI103279B (no) |
NO (1) | NO305368B1 (no) |
WO (1) | WO1992001720A1 (no) |
Families Citing this family (42)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3199405B2 (ja) * | 1991-08-30 | 2001-08-20 | 生化学工業株式会社 | 肝細胞球状集塊化剤及び球状集塊化肝細胞の製造方法 |
IT1260137B (it) * | 1992-04-17 | 1996-03-28 | Alfa Wassermann Spa | Glicosaminoglicani semisintetici a struttura eparinica od eparanica modificati nella posizione 2 dell'acido alfa-l-iduronico-2-0-solfato |
CA2118586A1 (en) * | 1992-07-13 | 1994-01-20 | Bernard Malfroy-Camine | Transvascular and intracellular delivery of lipidized proteins |
JP3714683B2 (ja) * | 1992-07-30 | 2005-11-09 | 生化学工業株式会社 | 抗リウマチ剤 |
JP2787279B2 (ja) * | 1994-05-17 | 1998-08-13 | 雪印乳業株式会社 | 糖リン脂質及びその調製法 |
US6228998B1 (en) * | 1994-07-22 | 2001-05-08 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Amino spacered glycosaminoglycan derivatives and their use in copolymerization with acrylamide |
FR2725622A1 (fr) * | 1994-10-14 | 1996-04-19 | Fabre Pierre Dermo Cosmetique | Ceramide greffee anti-elastase |
CA2175282A1 (en) * | 1996-04-29 | 1997-10-30 | Rudolf Edgar Falk | Use of forms of hyaluronic acid (ha) for the treatment of cancer |
AU2602200A (en) * | 1999-01-08 | 2000-07-24 | Board Of Trustees Of The University Of Arkansas, The | Synthetic, highly charged molecules and uses thereof |
JP3032824B1 (ja) * | 1999-01-28 | 2000-04-17 | 東京医科歯科大学長 | 骨誘導促進剤 |
WO2001012675A1 (fr) * | 1999-08-10 | 2001-02-22 | Seikagaku Corporation | Derives de glycosaminoglycane et leur utilisation |
US8916539B2 (en) * | 2000-01-10 | 2014-12-23 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Use of lipid conjugates in the treatment of disease |
US7393938B2 (en) * | 2000-01-10 | 2008-07-01 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Use of lipid conjugates in the treatment of diseases |
US8076312B2 (en) * | 2000-01-10 | 2011-12-13 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd | Use of lipid conjugates in the treatment of disease |
US7141552B2 (en) * | 2000-01-10 | 2006-11-28 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Use of lipid conjugates in the treatment of diseases |
US7811999B2 (en) * | 2000-01-10 | 2010-10-12 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem, Ltd. | Use of lipid conjugates in the treatment of diseases |
US20090325876A1 (en) * | 2004-09-29 | 2009-12-31 | Saul Yedgar | Use of lipid conjugates in the treatment of diseases associated with vasculature |
US7893226B2 (en) * | 2004-09-29 | 2011-02-22 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem, Ltd. | Use of lipid conjugates in the treatment of diseases |
US20060189569A1 (en) * | 2000-01-10 | 2006-08-24 | Saul Yedgar | Use of lipid conjugates in the treatment of infection |
US7772196B2 (en) * | 2000-01-10 | 2010-08-10 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Use of lipid conjugates in the treatment of diseases |
US8501701B2 (en) * | 2000-01-10 | 2013-08-06 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Use of lipid conjugates in the treatment of disease |
US7608598B2 (en) * | 2000-01-10 | 2009-10-27 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Use of lipid conjugates in the treatment of conjunctivitis |
US8304395B2 (en) * | 2000-01-10 | 2012-11-06 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Lipid conjugates in the treatment of disease |
US9040078B2 (en) * | 2000-01-10 | 2015-05-26 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Use of lipid conjugates in the treatment of diseases of the nervous system |
US7101859B2 (en) * | 2000-01-10 | 2006-09-05 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Use of lipid conjugates in the treatment of diseases |
US7259152B2 (en) | 2000-06-07 | 2007-08-21 | Alfa Wasserman, Inc. | Methods and compositions using sulodexide for the treatment of diabetic nephropathy |
US8883761B2 (en) * | 2001-01-10 | 2014-11-11 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Use of lipid conjugates in the treatment of diseases associated with vasculature |
US7280612B2 (en) * | 2003-07-25 | 2007-10-09 | Zarbana Digital Fund Llc | Digital branch calibrator for an RF transmitter |
EP1681306B1 (en) * | 2003-10-29 | 2013-02-20 | Teijin Limited | Hyaluronic acid compound, hydrogel thereof and material for treating joint |
CN104546891A (zh) * | 2005-08-03 | 2015-04-29 | 塞尔索斯治疗公司 | 脂质结合物在囊性纤维化病中的用途及其应用 |
JP4744973B2 (ja) * | 2005-08-05 | 2011-08-10 | 株式会社トプコン | 眼底カメラ |
US8475694B2 (en) | 2005-10-25 | 2013-07-02 | Zephyros, Inc. | Shaped expandable material |
US8906882B2 (en) | 2005-11-17 | 2014-12-09 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Lipid conjugates in the treatment of allergic rhinitis |
US8859524B2 (en) | 2005-11-17 | 2014-10-14 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Lipid conjugates in the treatment of chronic rhinosinusitis |
US20080183282A1 (en) * | 2006-03-09 | 2008-07-31 | Saul Yedgar | Use of lipid conjugates for the coating of stents and catheters |
CA2705785A1 (en) * | 2006-11-14 | 2008-05-22 | Saul Yedgar | Use of lipid conjugates in the treatment of diseases or disorders of the eye |
AU2007320737B2 (en) * | 2006-11-14 | 2014-04-03 | Celsus Therapeutics Plc | Contact lens compositions |
AU2010247814B2 (en) * | 2009-05-11 | 2015-08-13 | Celsus Therapeutics Plc | Lipid-polymer conjugates, their preparation and uses thereof |
GB0916205D0 (en) | 2009-09-15 | 2009-10-28 | Zephyros Inc | Improvements in or relating to cavity filling |
WO2011113892A2 (en) * | 2010-03-17 | 2011-09-22 | Ktb Tumorforschungsgesellschaft Mbh | Combined use of phospholipid and sulfate groups-carrying polysaccharides for inhibiting metastatic spread |
CA2703532C (en) * | 2010-05-10 | 2018-05-01 | Eva Turley | Topically administered, skin-penetrating glycosaminoglycan formulations suitable for use in cosmetic and pharmaceutical applications |
JP2022530253A (ja) * | 2019-04-29 | 2022-06-28 | ボシュ・アンド・ロム・インコーポレイテッド | 糖リン脂質ポリマーネットワーク及びその使用 |
Family Cites Families (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2374910A1 (fr) * | 1976-10-23 | 1978-07-21 | Choay Sa | Preparation a base d'heparine, comprenant des liposomes, procede pour l'obtenir et medicaments contenant de telles preparations |
FR2492259A1 (fr) * | 1980-10-21 | 1982-04-23 | Idinvex Sa | Formulation d'heparine |
US4362737A (en) * | 1981-04-13 | 1982-12-07 | Schaefer Rolf | Transdermal carrier materials |
US4604376A (en) * | 1982-04-21 | 1986-08-05 | Research Corporation | Enteric compounds and complexes |
US4654327A (en) * | 1982-04-21 | 1987-03-31 | Research Corp. | Quaternary ammonium complexes of heparin |
CA1226816A (en) * | 1982-12-20 | 1987-09-15 | Moses J. Folkman | Inhibition of angiogenesis |
JPS6117A (ja) * | 1984-06-11 | 1986-01-06 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | ムコ多糖系癌転移抑制剤 |
US5122450A (en) * | 1985-10-24 | 1992-06-16 | Research Corporation Limited | Biochemical reagent |
IL79255A0 (en) * | 1986-06-26 | 1986-09-30 | Hadassah Med Org | Composition for metastasis prevention |
IT1203515B (it) * | 1987-02-26 | 1989-02-15 | Indena Spa | Complessi di saponine con fosfolipidi e composizioni farmaceutiche e cosmetiche che li contengono |
WO1989008499A1 (en) * | 1988-03-17 | 1989-09-21 | Nippon Fine Chemical Co., Ltd. | Liposome |
JPH0219393A (ja) * | 1988-07-08 | 1990-01-23 | Higeta Shoyu Kk | N‐アセチルガラクトサミノオリゴ糖及びその製造方法 |
JPH0258501A (ja) * | 1988-08-25 | 1990-02-27 | Mitsubishi Gas Chem Co Inc | リポ多糖およびその用途 |
JPH03220201A (ja) * | 1988-11-18 | 1991-09-27 | Eisai Co Ltd | プロスタグランジン類と多糖類の結合体 |
-
1991
- 1991-07-24 AT AT91913108T patent/ATE148713T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-07-24 DE DE69124590T patent/DE69124590T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-07-24 WO PCT/JP1991/000995 patent/WO1992001720A1/ja active IP Right Grant
- 1991-07-24 AU AU82266/91A patent/AU647814B2/en not_active Ceased
- 1991-07-24 EP EP91913108A patent/EP0493622B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-07-24 CA CA002067211A patent/CA2067211C/en not_active Expired - Fee Related
- 1991-07-24 US US07/847,065 patent/US5464942A/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-07-24 KR KR1019920700665A patent/KR0181295B1/ko not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-02-19 FI FI920717A patent/FI103279B/fi active
- 1992-03-19 NO NO921083A patent/NO305368B1/no not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR0181295B1 (ko) | 1999-04-01 |
FI103279B1 (fi) | 1999-05-31 |
EP0493622A4 (en) | 1993-10-27 |
NO921083D0 (no) | 1992-03-19 |
US5464942A (en) | 1995-11-07 |
FI920717A0 (fi) | 1992-02-19 |
DE69124590D1 (de) | 1997-03-20 |
EP0493622A1 (en) | 1992-07-08 |
NO921083L (no) | 1992-05-21 |
EP0493622B1 (en) | 1997-02-05 |
KR920702377A (ko) | 1992-09-03 |
FI103279B (fi) | 1999-05-31 |
DE69124590T2 (de) | 1997-06-12 |
CA2067211A1 (en) | 1992-01-25 |
AU8226691A (en) | 1992-02-18 |
AU647814B2 (en) | 1994-03-31 |
CA2067211C (en) | 2004-06-15 |
WO1992001720A1 (en) | 1992-02-06 |
ATE148713T1 (de) | 1997-02-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
NO305368B1 (no) | AnalogifremgangsmÕte for fremstilling av et terapeutisk aktivt fosfolipidbundet glykosaminglykan | |
US5733892A (en) | Metastasis inhibitor composition comprising a phospholipid-linked glycosaminoglycan and method for inhibiting metastasis employing the same | |
US5470578A (en) | Antirheumatic composition | |
EP3350193B1 (en) | Carbohydrate ligands that bind to antibodies against glycoepitopes of glycosphingolipids | |
FI84074B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara gangliosidderivat. | |
US20030153512A1 (en) | Curcumin derivatives with improved water solubility compared to curcumin and medicaments containing the same | |
NO179452B (no) | Sulfaterte glukosamin-glukanoid-derivater | |
PT91249B (pt) | Processo para a preparacao de glicosaminoglicanos selectivamente o-acilados | |
US20240041918A1 (en) | Oligosaccharide Compound for Inhibiting Intrinsic Coagulation Factor X-Enzyme Complex, and Preparation Method Therefor and Uses Thereof | |
JP2986519B2 (ja) | 燐脂質結合グリコサミノグリカン | |
JP2997018B2 (ja) | 燐脂質又は脂質結合グリコサミノグリカン | |
EP1095657B1 (en) | Compositions for the regulation of cytokine activity | |
EA012587B1 (ru) | Биотинилированные гексадекасахариды, их получение и применение | |
CN108285498B (zh) | 一种抑制内源性凝血因子x酶复合物的寡糖化合物及其制备方法与用途 | |
JP2986518B2 (ja) | 癌転移抑制剤 | |
EA020485B1 (ru) | N-ацилированные октасахариды, активирующие рецепторы fgf, их получение и применение в терапии | |
EP0561523A2 (en) | Sugar compound, sialic acid-containing sugar chains' biosynthesis inhibitor, production process thereof and intermediate | |
HU198216B (en) | Process for producing sialosyl-cholesterin and pharmaceutical compositions containing them as active components | |
NZ231624A (en) | Ganglioside derivatives, medicaments | |
JPH02223525A (ja) | 血管新生阻害剤 | |
WO2012160337A1 (en) | Sulfated oligosaccharides for use in treatment of neurodegenerative diseases | |
US4425335A (en) | Ester derivatives of alkoxybenzoyldeoxyfluorouridine | |
Chernyak et al. | Synthesis of carbohydrate-amino acid conjugates related to the capsular antigen K54 from Escherichia coli O6: K54: H10 and artificial antigens therefrom | |
US5700918A (en) | Moranoline derivative | |
WO2012101605A1 (en) | Fgf receptor-activating 3-o-alkyl oligosaccharides, preparation thereof and therapeutic use thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |
Free format text: LAPSED IN JANUARY 2001 |