JP2787279B2 - 糖リン脂質及びその調製法 - Google Patents
糖リン脂質及びその調製法Info
- Publication number
- JP2787279B2 JP2787279B2 JP6155484A JP15548494A JP2787279B2 JP 2787279 B2 JP2787279 B2 JP 2787279B2 JP 6155484 A JP6155484 A JP 6155484A JP 15548494 A JP15548494 A JP 15548494A JP 2787279 B2 JP2787279 B2 JP 2787279B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- glycophospholipid
- molecule
- sugar
- present
- ppm
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/02—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures
- C07H15/12—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to a nitrogen atom of the saccharide radical
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はグリセロリン脂質に糖分
子が結合した新規糖リン脂質およびその組調製法に関す
る。本発明による糖リン脂質は生化学試薬、医薬品食品
原料、あるいは界面活性剤として有用である。
子が結合した新規糖リン脂質およびその組調製法に関す
る。本発明による糖リン脂質は生化学試薬、医薬品食品
原料、あるいは界面活性剤として有用である。
【０００２】
【従来の技術】リン脂質は生体の中で種々の機能を果し
ている。ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノ
ールアミン、スフィンゴミエリン等のリン脂質は生体膜
の構成成分として脂質２分子膜を形成し外界から細胞膜
を保護している。そこで蛋白質の機能発現に適した環境
を作っている。また、コリン、リン、脂肪酸の供給源と
しての役割を果たし、プロスタグランジン生合成の際に
おけるアラキドン酸の貯蔵物質となっていることが知ら
れている。現在、細胞分化の調節機能も徐々に明かにな
りつつある。更に、リン脂質の中には、ＰＡＦ（血小板
活性因子）の様に、それ自身が強い生理活性を発現して
いるものも存在している。この様にリン脂質は、生体内
において、様々な重要な役割を果たしている。
ている。ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノ
ールアミン、スフィンゴミエリン等のリン脂質は生体膜
の構成成分として脂質２分子膜を形成し外界から細胞膜
を保護している。そこで蛋白質の機能発現に適した環境
を作っている。また、コリン、リン、脂肪酸の供給源と
しての役割を果たし、プロスタグランジン生合成の際に
おけるアラキドン酸の貯蔵物質となっていることが知ら
れている。現在、細胞分化の調節機能も徐々に明かにな
りつつある。更に、リン脂質の中には、ＰＡＦ（血小板
活性因子）の様に、それ自身が強い生理活性を発現して
いるものも存在している。この様にリン脂質は、生体内
において、様々な重要な役割を果たしている。
【０００３】また、糖脂質も細胞膜の構成成分となって
いるが、細胞膜外表面に存在している糖脂質は、その糖
鎖の多様性と細胞の種類により異なる糖鎖の発現パター
ンから、細胞の表面マーカーとして機能しているものと
考えられている。分化した細胞は、特定の糖脂質を細胞
表面に発現している。このことは、糖脂質が様々な細胞
機能を持っていることを示唆する。例えば、受容体とし
ての機能、膜酵素の活性調節、イオンチャンネルの調
節、膜流動性の調節、細胞分化の調節等である。
いるが、細胞膜外表面に存在している糖脂質は、その糖
鎖の多様性と細胞の種類により異なる糖鎖の発現パター
ンから、細胞の表面マーカーとして機能しているものと
考えられている。分化した細胞は、特定の糖脂質を細胞
表面に発現している。このことは、糖脂質が様々な細胞
機能を持っていることを示唆する。例えば、受容体とし
ての機能、膜酵素の活性調節、イオンチャンネルの調
節、膜流動性の調節、細胞分化の調節等である。
【０００４】糖脂質は、分子内に水溶性糖鎖と脂溶性基
の両者を含む物質の総称であるが、動物細胞においては
糖脂質は、そのほとんどがスフィンゴ型であり、グリセ
ロ型は植物か、細菌等にしか見つけだされてはいなかっ
た。最近になり、ブタ精巣におけるセミノリピド存在の
発見等、動物細胞においてもグリセロ型の糖脂質もなん
らかの生理機能を有しているといわれている。リン脂質
と糖との関連で、ホスファチジルイノシトールが分子内
のイノシトール結合糖鎖を介して蛋白質と結合し、蛋白
質を細胞膜につなぎ止めるアンカーの役割を果たしてい
る（ＧＰＩアンカー）ことが明らかになっている。この
ＧＰＩアンカーについてはトリパノゾーマ膜抗原、人赤
血球アセチルコリンエステラーゼ等種々のものについて
構造解析の報告がある。そのタンパク質は膜表面を移動
することができ、ＧＰＩは酵素的な作用、受容体として
の機能を制御していると考えられている。しかしこれま
でグリセロ型のリン脂質に糖が結合した化合物は見出さ
れていない。また、牛乳など哺乳動物の乳中に糖リン脂
質が存在するという報告はこれまでにない。
の両者を含む物質の総称であるが、動物細胞においては
糖脂質は、そのほとんどがスフィンゴ型であり、グリセ
ロ型は植物か、細菌等にしか見つけだされてはいなかっ
た。最近になり、ブタ精巣におけるセミノリピド存在の
発見等、動物細胞においてもグリセロ型の糖脂質もなん
らかの生理機能を有しているといわれている。リン脂質
と糖との関連で、ホスファチジルイノシトールが分子内
のイノシトール結合糖鎖を介して蛋白質と結合し、蛋白
質を細胞膜につなぎ止めるアンカーの役割を果たしてい
る（ＧＰＩアンカー）ことが明らかになっている。この
ＧＰＩアンカーについてはトリパノゾーマ膜抗原、人赤
血球アセチルコリンエステラーゼ等種々のものについて
構造解析の報告がある。そのタンパク質は膜表面を移動
することができ、ＧＰＩは酵素的な作用、受容体として
の機能を制御していると考えられている。しかしこれま
でグリセロ型のリン脂質に糖が結合した化合物は見出さ
れていない。また、牛乳など哺乳動物の乳中に糖リン脂
質が存在するという報告はこれまでにない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明者は牛乳を出発
原料として、単離精製した画分中に薄層クロマトグラフ
（ＴＬＣ）において、リン脂質の呈色反応と糖の呈色反
応を示す物質見いだし、これをカラムクロマトグラフィ
ーを中心とする複合脂質精製法によって精製単離を繰り
返し、リン脂質画分単離した。これらの画分の構造解析
を行った結果、従来まったく知られていない糖リン脂質
が、乳中に存在することを初めて確認した。従って本発
明は、新規な糖リン脂質にあり、特に新規なグリセロ型
リン脂質に糖が結合した糖リン脂質の提供とこの糖リン
脂質の調製方法を提供することを課題とする。
原料として、単離精製した画分中に薄層クロマトグラフ
（ＴＬＣ）において、リン脂質の呈色反応と糖の呈色反
応を示す物質見いだし、これをカラムクロマトグラフィ
ーを中心とする複合脂質精製法によって精製単離を繰り
返し、リン脂質画分単離した。これらの画分の構造解析
を行った結果、従来まったく知られていない糖リン脂質
が、乳中に存在することを初めて確認した。従って本発
明は、新規な糖リン脂質にあり、特に新規なグリセロ型
リン脂質に糖が結合した糖リン脂質の提供とこの糖リン
脂質の調製方法を提供することを課題とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明は、下記（１）〜
（１２）の物理化学的特性値を有する糖リン脂質にあ
る。 （１）プロトンＮＭＲ測定により次のプロトンピークが
検出される。４．０ｐｐｍ付近の４個のプロトンピー
ク、５．１ｐｐｍのプロトンピーク、４．２ｐｐｍのア
ノメリックプロトンピーク、０．９ｐｐｍのメチルプロ
トンピーク、１．５〜３．０ｐｐｍのプロトンピーク。 （２）フーリエ変換赤外線分析法により測定した場合３
５００ｃｍ- 、１０００ｃｍ- 、１３００ｃｍ- 、に特
徴的な吸収が存在する。 （３）ホスホリパーゼＣにより分解される。 （４）ディットマー−レスター（Ｄｉｔｔｍｅｒ−Ｌｅ
ｓｔｅｒ）試薬によりリン脂質の呈色反応を示す。 （５）β−ガラクトシダーゼによって糖を遊離する。 （６）オルシノール硫酸、ジフェニールアミン−アニリ
ン試薬により、糖の呈色反応を示す。 （７）ガラクトースを構成糖とする。 （８）ニンヒドリン試薬により発色する。 （９）分子中のエタノールアミンを定量した場合、１分
子当たりエタノールアミンが１個存在する。 （１０）分子中のグリセロールを定量した場合、１分子
当たりグリセロールが１個存在する。 （１１）分子中のリンを定量した場合、１分子当たりリ
ン酸基が１分子存在する。 （１２）塩酸メタノールで分解し、メチルエステルを分
析した場合、炭素数１２〜２０の飽和または不飽和脂肪
酸が検出される。
（１２）の物理化学的特性値を有する糖リン脂質にあ
る。 （１）プロトンＮＭＲ測定により次のプロトンピークが
検出される。４．０ｐｐｍ付近の４個のプロトンピー
ク、５．１ｐｐｍのプロトンピーク、４．２ｐｐｍのア
ノメリックプロトンピーク、０．９ｐｐｍのメチルプロ
トンピーク、１．５〜３．０ｐｐｍのプロトンピーク。 （２）フーリエ変換赤外線分析法により測定した場合３
５００ｃｍ- 、１０００ｃｍ- 、１３００ｃｍ- 、に特
徴的な吸収が存在する。 （３）ホスホリパーゼＣにより分解される。 （４）ディットマー−レスター（Ｄｉｔｔｍｅｒ−Ｌｅ
ｓｔｅｒ）試薬によりリン脂質の呈色反応を示す。 （５）β−ガラクトシダーゼによって糖を遊離する。 （６）オルシノール硫酸、ジフェニールアミン−アニリ
ン試薬により、糖の呈色反応を示す。 （７）ガラクトースを構成糖とする。 （８）ニンヒドリン試薬により発色する。 （９）分子中のエタノールアミンを定量した場合、１分
子当たりエタノールアミンが１個存在する。 （１０）分子中のグリセロールを定量した場合、１分子
当たりグリセロールが１個存在する。 （１１）分子中のリンを定量した場合、１分子当たりリ
ン酸基が１分子存在する。 （１２）塩酸メタノールで分解し、メチルエステルを分
析した場合、炭素数１２〜２０の飽和または不飽和脂肪
酸が検出される。
【０００７】さらに詳しくは、下記一般式（Ｉ）で表さ
れる糖リン脂質にある。
れる糖リン脂質にある。
【化２】 （ただしＲ1 、Ｒ2 は同一かあるいは異なる、飽和また
は不飽和の脂肪族炭化水素基を示し、ＡはＮグリコシド
結合した糖を示す。）
は不飽和の脂肪族炭化水素基を示し、ＡはＮグリコシド
結合した糖を示す。）
【０００８】特に式中、Ｒ1 Ｒ2 は、同一か、あるいは
異なる炭素数１３〜１７の飽和または不飽和の直鎖脂肪
族炭化水素基、例えばトリデカニル（Ｃ13:0）、ペンタ
デカニル（Ｃ15:0）、ペンタデセニル（Ｃ15:1）、ヘプ
タデカニル（Ｃ17:0）、ヘプタデセニル（Ｃ17:1）及び
ヘプタデセジエニル（Ｃ17:2）からなる群から選択され
る少なくとも１種の脂肪族炭化水素基であり、Ａは、例
えばガラクトース２残基が結合したものである。本発明
の糖リン脂質は、牛乳もしくは乳製品から抽出精製する
ことができる。乳製品としてはチーズホエー、バターミ
ルク等から得られた脂質画分が用いられる。例えば実施
例に示すように、チーズホエー、チーズホエー粉、バタ
ーミルク等を蛋白分解酵素で蛋白質を分解し、ついでメ
タノール、クロロホルムを順次加えて撹拌して、複合脂
質を抽出する。このような脂質画分に、クロロホルム−
メタノール混液もしくはクロロホルム−メタノール−水
混合液で抽出し、シリカゲルクロマトグラフィーにか
け、吸着される画分をクロロホルム−メタノール、クロ
ロホルム−メタノール−酢酸−水等の溶媒を移動相とし
て溶出、糖リン脂質の反応を示す画分を採取することに
よって調製することができる。このようにして得られる
糖リン脂質は通常は脂肪属炭化水素基が相違するいくつ
かの糖リン脂質の組成物の形で得られるが、本発明では
このような状態で得てもよく、あるいは場合によりさら
に精製を行ってもよい。
異なる炭素数１３〜１７の飽和または不飽和の直鎖脂肪
族炭化水素基、例えばトリデカニル（Ｃ13:0）、ペンタ
デカニル（Ｃ15:0）、ペンタデセニル（Ｃ15:1）、ヘプ
タデカニル（Ｃ17:0）、ヘプタデセニル（Ｃ17:1）及び
ヘプタデセジエニル（Ｃ17:2）からなる群から選択され
る少なくとも１種の脂肪族炭化水素基であり、Ａは、例
えばガラクトース２残基が結合したものである。本発明
の糖リン脂質は、牛乳もしくは乳製品から抽出精製する
ことができる。乳製品としてはチーズホエー、バターミ
ルク等から得られた脂質画分が用いられる。例えば実施
例に示すように、チーズホエー、チーズホエー粉、バタ
ーミルク等を蛋白分解酵素で蛋白質を分解し、ついでメ
タノール、クロロホルムを順次加えて撹拌して、複合脂
質を抽出する。このような脂質画分に、クロロホルム−
メタノール混液もしくはクロロホルム−メタノール−水
混合液で抽出し、シリカゲルクロマトグラフィーにか
け、吸着される画分をクロロホルム−メタノール、クロ
ロホルム−メタノール−酢酸−水等の溶媒を移動相とし
て溶出、糖リン脂質の反応を示す画分を採取することに
よって調製することができる。このようにして得られる
糖リン脂質は通常は脂肪属炭化水素基が相違するいくつ
かの糖リン脂質の組成物の形で得られるが、本発明では
このような状態で得てもよく、あるいは場合によりさら
に精製を行ってもよい。
【０００９】本発明の糖リン脂質の物理化学的性質につ
いて以下にさらに詳細に説明する。 （１）プロトンＮＭＲ分析 既知の方法に従い、本発明糖リン脂質をジメチルスルフ
ォキシド−重水（９８：２）に溶かしプロトン−プロト
ンの２次元によるＮＭＲを測定した。そのチャートを図
１に示す。この結果より、4.0ppm付近の４個のプロト
ン、5.1ppmの１個のプロトンが示すグリセロール特有の
化学シフト及び２次元ＮＭＲにおける相関より、グリセ
ロ脂質であることが確認された。4.2ppmのアノメリック
プロトンが観測されること、またその結合定数より、β
結合により結合する糖が１個存在することがわかる。5.
4ppmのシス２重結合水素由来のプロトンの存在、0.9ppm
のメチルプロトン、1.5〜3.0ppmの各プロトンは脂肪酸
由来のものである。また１次元のＮＭＲを図２に示す。
いて以下にさらに詳細に説明する。 （１）プロトンＮＭＲ分析 既知の方法に従い、本発明糖リン脂質をジメチルスルフ
ォキシド−重水（９８：２）に溶かしプロトン−プロト
ンの２次元によるＮＭＲを測定した。そのチャートを図
１に示す。この結果より、4.0ppm付近の４個のプロト
ン、5.1ppmの１個のプロトンが示すグリセロール特有の
化学シフト及び２次元ＮＭＲにおける相関より、グリセ
ロ脂質であることが確認された。4.2ppmのアノメリック
プロトンが観測されること、またその結合定数より、β
結合により結合する糖が１個存在することがわかる。5.
4ppmのシス２重結合水素由来のプロトンの存在、0.9ppm
のメチルプロトン、1.5〜3.0ppmの各プロトンは脂肪酸
由来のものである。また１次元のＮＭＲを図２に示す。
【００１０】（２）ホスホリパーゼＣとの反応性 本発明の糖リン脂質はホスホリパーゼＣ（ＰＬＣ）によ
り分解される。またＰＬＣにより分解されたことより、
糖リン脂質はグリセロリン脂質であることが証明でき
る。またリン脂質検出試薬であるディットマー−レスタ
ー（Ｄｉｔｔｍｅｒ−Ｌｅｓｔｅｒ）試薬による呈色反
応も、リン脂質としての反応を示す青色を示した。
り分解される。またＰＬＣにより分解されたことより、
糖リン脂質はグリセロリン脂質であることが証明でき
る。またリン脂質検出試薬であるディットマー−レスタ
ー（Ｄｉｔｔｍｅｒ−Ｌｅｓｔｅｒ）試薬による呈色反
応も、リン脂質としての反応を示す青色を示した。
【００１１】（３）ＦＴ−ＩＲ分析 フーリエ変換赤外分析法（ＦＴ−ＩＲ）によって本発明
化合物を分析した場合、３５００ｃｍ-1の水酸基に由来
する糖に特徴的な吸収、また１０００ｃｍ-1、１３００
ｃｍ-1のリン酸基由来の吸収が確認された。さらに２５
００〜２８００ｃｍ-1のリン酸基の非結合水酸基由来の
弱いブロードの吸収がみられた。これにより本発明の糖
リン脂質はリン酸基はトリエステルでは存在せずリン酸
のジエステル構造を分子内に持っていることを確認し
た。本発明の糖リン脂質のＦＴ−ＩＲ吸収パターンおよ
び対象として測定したホスファチジルエタノールアミン
（ＰＥ）のＦＴ−ＩＲ吸収パターンを図３に示した。図
に示すように標品のＰＥの吸収パターンとほぼ一致し
た。しかし、ＰＥのスペクトルに見られる1560cm-1の一
級アミン特有の吸収が本発明化合物の吸収では認められ
なかった。又アミドの吸収も認められなかった。このこ
とから糖はＮ−グリコシド結合していると予想された。
化合物を分析した場合、３５００ｃｍ-1の水酸基に由来
する糖に特徴的な吸収、また１０００ｃｍ-1、１３００
ｃｍ-1のリン酸基由来の吸収が確認された。さらに２５
００〜２８００ｃｍ-1のリン酸基の非結合水酸基由来の
弱いブロードの吸収がみられた。これにより本発明の糖
リン脂質はリン酸基はトリエステルでは存在せずリン酸
のジエステル構造を分子内に持っていることを確認し
た。本発明の糖リン脂質のＦＴ−ＩＲ吸収パターンおよ
び対象として測定したホスファチジルエタノールアミン
（ＰＥ）のＦＴ−ＩＲ吸収パターンを図３に示した。図
に示すように標品のＰＥの吸収パターンとほぼ一致し
た。しかし、ＰＥのスペクトルに見られる1560cm-1の一
級アミン特有の吸収が本発明化合物の吸収では認められ
なかった。又アミドの吸収も認められなかった。このこ
とから糖はＮ−グリコシド結合していると予想された。
【００１２】（４）糖分析 本発明の糖リン脂質は、は糖に特異的に反応するオルシ
ノール硫酸、ジフェニルアミン−アニリン試薬により呈
色を示す。さらに６Ｎ塩酸１００℃３時間処理物をトリ
メチルシリル（ＴＭＳ）誘導体化し、ＧＣ／ＭＳ分析を
行った。０．２Ｎ硫酸分解、２Ｎトリフロロ酢酸（ＴＦ
Ａ）分解１００℃処理物の薄層クロマトグラフィー（Ｔ
ＬＣ）による定性試験を行った。０．３Ｎ硫酸／９０％
酢酸８０℃１４時間処理によりアルジトールアセテート
とした後、糖のＧＣ／ＭＳ分析を行った。１Ｎ ＴＦＡ
１００℃１．５時間処理物のPulsed Amperometric Dete
ctor分析を行った。いずれの分析結果もガラクトースの
存在を示すものであった。以上の分析で全て構成糖はガ
ラクトースであることが確認された。
ノール硫酸、ジフェニルアミン−アニリン試薬により呈
色を示す。さらに６Ｎ塩酸１００℃３時間処理物をトリ
メチルシリル（ＴＭＳ）誘導体化し、ＧＣ／ＭＳ分析を
行った。０．２Ｎ硫酸分解、２Ｎトリフロロ酢酸（ＴＦ
Ａ）分解１００℃処理物の薄層クロマトグラフィー（Ｔ
ＬＣ）による定性試験を行った。０．３Ｎ硫酸／９０％
酢酸８０℃１４時間処理によりアルジトールアセテート
とした後、糖のＧＣ／ＭＳ分析を行った。１Ｎ ＴＦＡ
１００℃１．５時間処理物のPulsed Amperometric Dete
ctor分析を行った。いずれの分析結果もガラクトースの
存在を示すものであった。以上の分析で全て構成糖はガ
ラクトースであることが確認された。
【００１３】（５）グリコシダーゼとの反応 種々のグリコシダーゼによる逐次分解を試みたが、βガ
ラクトシダーゼによってのみ糖が遊離することが確認さ
れた。以上の結果と先のＮＭＲの結果とも併せて、ガラ
クトースのβ結合が存在することが確認された。またこ
のグリコシダーゼ処理で遊離されるガラクトースは本発
明の糖リン脂質１分子当たり１残基であった。以下の分
析ではガラクトース２残基がつながった形で存在してい
ることが確認されており、ガラクトース１残基はグリコ
シダーゼにより遊離されないことから、Ｏ−グリコシド
結合で結合していないことが確認された。
ラクトシダーゼによってのみ糖が遊離することが確認さ
れた。以上の結果と先のＮＭＲの結果とも併せて、ガラ
クトースのβ結合が存在することが確認された。またこ
のグリコシダーゼ処理で遊離されるガラクトースは本発
明の糖リン脂質１分子当たり１残基であった。以下の分
析ではガラクトース２残基がつながった形で存在してい
ることが確認されており、ガラクトース１残基はグリコ
シダーゼにより遊離されないことから、Ｏ−グリコシド
結合で結合していないことが確認された。
【００１４】（６）ＦＡＢ（Fast Atom Bombardment)−
ＭＳ分析 本発明の糖リン脂質をトリエタノールアミンをマトリッ
クスに用い負イオンＦＡＢ−ＭＳを行った。この結果よ
り糖と思われる１８０の分子量を持つ物質が２個つなが
ったものが分子中に存在することが確認できる。これは
糖組成からガラクトースが２個つながったものである。
また本発明の糖リン脂質の一つは、分子量が１０６７で
あることが確認できた。ＦＡＢ−ＭＳ分析スペクトルを
図４に示した。
ＭＳ分析 本発明の糖リン脂質をトリエタノールアミンをマトリッ
クスに用い負イオンＦＡＢ−ＭＳを行った。この結果よ
り糖と思われる１８０の分子量を持つ物質が２個つなが
ったものが分子中に存在することが確認できる。これは
糖組成からガラクトースが２個つながったものである。
また本発明の糖リン脂質の一つは、分子量が１０６７で
あることが確認できた。ＦＡＢ−ＭＳ分析スペクトルを
図４に示した。
【００１５】（７）ガラクトースの結合位置の確認 前記の糖の結合位置を確定するためにメチル化分析を行
った。箱守の方法により完全メチル化し、０．５Ｎ硫酸
／９０％酢酸による加水分解を行い、メチル化糖の遊離
を行った。遊離メチル化糖は還元し、アルジトールに変
換し、遊離水酸基は無水酢酸によりアセチル化した。得
られた部分メチル化糖アルジトールアセテートをＧＣ／
ＭＳ分析を行った結果を図５に示した。また部分メチル
化したヘキシトールのアセチル誘導体の標準品を同一条
件でＧＣ−ＭＳに付して測定し同定を行った。このマス
スペクトルによれば、保持時間１７．９４９分に１，５
−ジ−アセチル−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−メチル
ヘキシトールが観測された（図５−ａ）。また保持時間
２３．３６１分に１，５，６−トリ−Ｏ−アセチル−
２，３，４−トリ−Ｏ−メチルヘキシトールが観測され
た（図５−ｂ）。以上の結果から、本発明の糖リン脂質
のガラクトース２分子はβ１，６結合していることが確
認された。
った。箱守の方法により完全メチル化し、０．５Ｎ硫酸
／９０％酢酸による加水分解を行い、メチル化糖の遊離
を行った。遊離メチル化糖は還元し、アルジトールに変
換し、遊離水酸基は無水酢酸によりアセチル化した。得
られた部分メチル化糖アルジトールアセテートをＧＣ／
ＭＳ分析を行った結果を図５に示した。また部分メチル
化したヘキシトールのアセチル誘導体の標準品を同一条
件でＧＣ−ＭＳに付して測定し同定を行った。このマス
スペクトルによれば、保持時間１７．９４９分に１，５
−ジ−アセチル−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−メチル
ヘキシトールが観測された（図５−ａ）。また保持時間
２３．３６１分に１，５，６−トリ−Ｏ−アセチル−
２，３，４−トリ−Ｏ−メチルヘキシトールが観測され
た（図５−ｂ）。以上の結果から、本発明の糖リン脂質
のガラクトース２分子はβ１，６結合していることが確
認された。
【００１６】（７）エタノールアミン分析およびホスフ
ァチジルエタノールアミン骨格の確認。 本発明の糖リン脂質はニンヒドリン発色する。さらに６
Ｎ塩酸による強酸分解によりエタノールアミンが生成す
ることがＴＬＣ、ＴＭＳ誘導体のＧＣ分析に付すること
により確認できた。また強酸分解後、ジニトロフルオロ
ベンゼン試薬による比色法により、糖リン脂質中のエタ
ノールアミンの存在量を測定することができた。これに
より糖リン脂質１分子中に１個のエタノールアミンの存
在することが確認された。一方、本発明の糖リン脂質を
０．２Ｎ硫酸、または０．１Ｎ塩酸を用いて１００℃で
加水分解を行い、この分解物のＴＬＣ分析を行った。本
発明の糖リン脂質の分解物の他に、ＴＬＣ上でホスファ
チジルエタノールアミン（ＰＥ）と同じＲｆ値を示すス
ポットが検出された。このスポットはディットマー−レ
スター試薬による発色反応陽性、ニンヒドリン発色反応
陽性であって、オルシノール−硫酸発色反応陰性であっ
た。この結果、このスポットはホスファチジルエタノー
ルアミンであることが確認された。以上の結果から、本
発明の糖リン脂質にはホスファチジルエタノールアミン
が骨格として存在することが確認できた。
ァチジルエタノールアミン骨格の確認。 本発明の糖リン脂質はニンヒドリン発色する。さらに６
Ｎ塩酸による強酸分解によりエタノールアミンが生成す
ることがＴＬＣ、ＴＭＳ誘導体のＧＣ分析に付すること
により確認できた。また強酸分解後、ジニトロフルオロ
ベンゼン試薬による比色法により、糖リン脂質中のエタ
ノールアミンの存在量を測定することができた。これに
より糖リン脂質１分子中に１個のエタノールアミンの存
在することが確認された。一方、本発明の糖リン脂質を
０．２Ｎ硫酸、または０．１Ｎ塩酸を用いて１００℃で
加水分解を行い、この分解物のＴＬＣ分析を行った。本
発明の糖リン脂質の分解物の他に、ＴＬＣ上でホスファ
チジルエタノールアミン（ＰＥ）と同じＲｆ値を示すス
ポットが検出された。このスポットはディットマー−レ
スター試薬による発色反応陽性、ニンヒドリン発色反応
陽性であって、オルシノール−硫酸発色反応陰性であっ
た。この結果、このスポットはホスファチジルエタノー
ルアミンであることが確認された。以上の結果から、本
発明の糖リン脂質にはホスファチジルエタノールアミン
が骨格として存在することが確認できた。
【００１７】（８）グリセロール分析 本発明の糖リン脂質を２Ｎ塩酸１２５℃４８時間分解処
理後過ヨウ素酸ナトリウムを反応させ、生成するホルム
アルデヒドにクロモトロープ酸を反応させ得られる赤紫
物質を比色した。その結果糖リン脂質１分子中にグリセ
ロールは１個存在することが確認された。 （９）リン分析 本発明の糖リン脂質に、１０Ｎ塩酸１８０℃３時間分解
後モリブデン酸アンモニウムを作用させ、生じるリンモ
リブデン酸アンモニウムを定量した。これにより糖リン
脂質１分子中にリン酸基が１分子存在することを確認し
た。
理後過ヨウ素酸ナトリウムを反応させ、生成するホルム
アルデヒドにクロモトロープ酸を反応させ得られる赤紫
物質を比色した。その結果糖リン脂質１分子中にグリセ
ロールは１個存在することが確認された。 （９）リン分析 本発明の糖リン脂質に、１０Ｎ塩酸１８０℃３時間分解
後モリブデン酸アンモニウムを作用させ、生じるリンモ
リブデン酸アンモニウムを定量した。これにより糖リン
脂質１分子中にリン酸基が１分子存在することを確認し
た。
【００１８】（１０）脂肪酸分析 本発明の糖リン脂質はその構造中に脂肪酸を含んでい
る。５％塩酸メタノールによる分解を行い、生成した脂
肪酸メチルエステルをガスクロマトグラフィーにより測
定した場合、その脂肪酸構成は下記表１の脂肪酸を有す
ることを確認した。この脂肪酸の構成比は、一例を示し
たもので、本発明の糖リン脂質の由来によって異なって
いるが、炭素数１２〜２０の飽和または不飽和直鎖脂肪
酸が大部分である。
る。５％塩酸メタノールによる分解を行い、生成した脂
肪酸メチルエステルをガスクロマトグラフィーにより測
定した場合、その脂肪酸構成は下記表１の脂肪酸を有す
ることを確認した。この脂肪酸の構成比は、一例を示し
たもので、本発明の糖リン脂質の由来によって異なって
いるが、炭素数１２〜２０の飽和または不飽和直鎖脂肪
酸が大部分である。
【００１９】
【表１】 ──────────────────── 構成脂肪酸 ％ ──────────────────── Ｃ１４：０ １．６ Ｃ１６：０ １４．４ Ｃ１６：１ １．９ Ｃ１８：０ １７．１ Ｃ１８：１ ５２．７ Ｃ１８：２ １２．０ ────────────────────
【００２０】以上の特性を示す代表的な構造として、次
の化学式〔ＩＩ〕に示す構造の糖リン脂質を明示するこ
とができる。
の化学式〔ＩＩ〕に示す構造の糖リン脂質を明示するこ
とができる。
【００２１】
【化３】
【００２２】本発明の糖リン脂質はグリセロ型リン脂質
に糖が結合するという構造を持つ。この糖リン脂質は上
述した生理機能を有しており、さらにリン脂質に糖が結
合したことにより、これまでのリン脂質の有していない
機能に関与している可能性もある。糖リン脂質は、その
構造上の類似性よりＧＰＩアンカーもしくはその前駆体
としての機能も充分に考えられる。
に糖が結合するという構造を持つ。この糖リン脂質は上
述した生理機能を有しており、さらにリン脂質に糖が結
合したことにより、これまでのリン脂質の有していない
機能に関与している可能性もある。糖リン脂質は、その
構造上の類似性よりＧＰＩアンカーもしくはその前駆体
としての機能も充分に考えられる。
【００２３】さらに、このリン脂質は、分子内にリン酸
基を中心とした親水性を持つ部分と脂肪酸およびスフィ
ンゴ脂質の場合の塩基の疎水性部分から成り立ってい
る。その両親媒的な性質、また天然由来素材であること
より、乳化剤として食品に用いることが可能である。特
に本発明の糖リン脂質はその構造上、糖を有することか
らリン脂質としては親水性の極めて高い物質であり、水
中に効果的に分散する。さらに、本発明の糖リン脂質は
グリセロリン脂質であることより、その脂肪酸部の置
換、削除は比較的容易に行うことができる。従ってこの
操作により本発明の糖リン脂質を乳化剤として利用する
場合、そののＨＬＢ値を自由に操作することもできる。
この糖リン脂質精製物、合成物、またその組成物は乳化
剤、特にＯ／Ｗ乳化剤として有効な素材として利用可能
である。この界面活性剤としての独特の性質は、医薬分
野、食品分野のみならず化粧品分野への応用も充分に考
えられるものである。
基を中心とした親水性を持つ部分と脂肪酸およびスフィ
ンゴ脂質の場合の塩基の疎水性部分から成り立ってい
る。その両親媒的な性質、また天然由来素材であること
より、乳化剤として食品に用いることが可能である。特
に本発明の糖リン脂質はその構造上、糖を有することか
らリン脂質としては親水性の極めて高い物質であり、水
中に効果的に分散する。さらに、本発明の糖リン脂質は
グリセロリン脂質であることより、その脂肪酸部の置
換、削除は比較的容易に行うことができる。従ってこの
操作により本発明の糖リン脂質を乳化剤として利用する
場合、そののＨＬＢ値を自由に操作することもできる。
この糖リン脂質精製物、合成物、またその組成物は乳化
剤、特にＯ／Ｗ乳化剤として有効な素材として利用可能
である。この界面活性剤としての独特の性質は、医薬分
野、食品分野のみならず化粧品分野への応用も充分に考
えられるものである。
【００２４】以下に実施例を示して本発明の糖リン脂質
の調製法を具体的に説明する。
の調製法を具体的に説明する。
【実施例１】本実施例ではリン脂質を含有するチーズホ
エーから本発明の糖リン脂質を回収する方法を示す。チ
ーズホエー粉３ｋｇを温湯３０ｌに溶解し、５０℃に保
持した。そこに１０ｇの枯草菌プロテアーゼを添加しｐ
Ｈ８、温度４５℃で１５時間反応させ、タンパク質を分
解した後、９０℃で１０分加熱し、酵素を失活させた。
そこにメタノール８０ｌを加え室温で３０分撹拌し、更
にクロロホルム４０ｌを加え同様に３０分撹拌して、複
合脂質として抽出した。次に抽出液を濾過し濃縮乾固し
た後、クロロホルム−メタノール混液（２：１、ｖ／
ｖ）を５００ｍｌ加え、室温で３０分撹拌して濾過し
た。濾液にアセトン２０ｌを加え４℃で一晩静置し、白
色沈澱１１２ｇを得た。少量のクロロホルム−メタノー
ル混液に溶解し、移動相としてクロロホルム−メタノー
ル−水（９０：１０：０、８０：２０：２、７０：３
０：３、６０：４０：４）の混液を用いたシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィーの段階溶出を行った。また以上
の各精製段階のＴＬＣによる挙動を図６に示した。
エーから本発明の糖リン脂質を回収する方法を示す。チ
ーズホエー粉３ｋｇを温湯３０ｌに溶解し、５０℃に保
持した。そこに１０ｇの枯草菌プロテアーゼを添加しｐ
Ｈ８、温度４５℃で１５時間反応させ、タンパク質を分
解した後、９０℃で１０分加熱し、酵素を失活させた。
そこにメタノール８０ｌを加え室温で３０分撹拌し、更
にクロロホルム４０ｌを加え同様に３０分撹拌して、複
合脂質として抽出した。次に抽出液を濾過し濃縮乾固し
た後、クロロホルム−メタノール混液（２：１、ｖ／
ｖ）を５００ｍｌ加え、室温で３０分撹拌して濾過し
た。濾液にアセトン２０ｌを加え４℃で一晩静置し、白
色沈澱１１２ｇを得た。少量のクロロホルム−メタノー
ル混液に溶解し、移動相としてクロロホルム−メタノー
ル−水（９０：１０：０、８０：２０：２、７０：３
０：３、６０：４０：４）の混液を用いたシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィーの段階溶出を行った。また以上
の各精製段階のＴＬＣによる挙動を図６に示した。
【００２５】以降、糖リン脂質の検出はＴＬＣでの展開
後、オルシノール硫酸試薬とディットマー−レスター試
薬の同時発色スポットを糖リン脂質として判断した。こ
の段階溶出により１６．２４ｇの糖リン脂質含有画分を
得た。次に移動相としてクロロホルム−メタノール−ア
セトン−酢酸−水（１０：２：４：２：１）の混液を用
いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行った。こ
の精製段階で、オルシノール硫酸試薬とディットマー−
レスター試薬の呈色から判断すると９０％程度の純度の
糖リン脂質３．２０ｇが得られた。精製物のＴＬＣ展開
後のニンヒドリン試薬による呈色反応より、疎水性ペプ
チド成分と考えられるニンヒドリン発色物質が存在し
た。ここまでの精製物をクロロホルム−メタノール
（１：１）の混液に溶解し、ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ−２
０を用いたゲル濾過によりニンヒドリン発色物質を除去
し２．２８ｇの糖リン脂質を得た。その後、移動相とし
て、クロロホルム−メタノール−酢酸−水（６５：２
５：８：４）、クロロホルム−メタノール−水（６５：
３５：８）を移動相としてシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィーを行い、１．５４ｇの９８％純度の糖リン脂質
を得た。この物質は上記に示した糖リン脂質の特性を有
していた。
後、オルシノール硫酸試薬とディットマー−レスター試
薬の同時発色スポットを糖リン脂質として判断した。こ
の段階溶出により１６．２４ｇの糖リン脂質含有画分を
得た。次に移動相としてクロロホルム−メタノール−ア
セトン−酢酸−水（１０：２：４：２：１）の混液を用
いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行った。こ
の精製段階で、オルシノール硫酸試薬とディットマー−
レスター試薬の呈色から判断すると９０％程度の純度の
糖リン脂質３．２０ｇが得られた。精製物のＴＬＣ展開
後のニンヒドリン試薬による呈色反応より、疎水性ペプ
チド成分と考えられるニンヒドリン発色物質が存在し
た。ここまでの精製物をクロロホルム−メタノール
（１：１）の混液に溶解し、ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ−２
０を用いたゲル濾過によりニンヒドリン発色物質を除去
し２．２８ｇの糖リン脂質を得た。その後、移動相とし
て、クロロホルム−メタノール−酢酸−水（６５：２
５：８：４）、クロロホルム−メタノール−水（６５：
３５：８）を移動相としてシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィーを行い、１．５４ｇの９８％純度の糖リン脂質
を得た。この物質は上記に示した糖リン脂質の特性を有
していた。
【００２６】
【実施例２】本実施例は乳由来の複合脂質を高濃度に含
有する粉末から調製する方法を示す。特開平５−２９２
８８０号公報に開示されている方法に従って、複合脂質
を高濃度に含有する粉末を調製した。すなわち、バター
ミルクのｐＨを酸性に調節し、等電点沈殿を生じせし
め、沈殿を除去した後、限外濾過濃縮を行い、この溶液
を乾燥させて、複合脂質を高濃度に含有する粉末を調製
した。
有する粉末から調製する方法を示す。特開平５−２９２
８８０号公報に開示されている方法に従って、複合脂質
を高濃度に含有する粉末を調製した。すなわち、バター
ミルクのｐＨを酸性に調節し、等電点沈殿を生じせし
め、沈殿を除去した後、限外濾過濃縮を行い、この溶液
を乾燥させて、複合脂質を高濃度に含有する粉末を調製
した。
【００２７】この粉末１００ｇを１ｌのアセトンを加え
懸濁させ、激しく撹拌し分散させた。その後４℃にて一
晩放置した。沈澱物を濾取し続いて凍結乾燥を行い３３
ｇの白色粉末を得た。その内の一部１ｇをエタノールに
懸濁させ撹拌後濾過、エタノール不溶分を濾取した。そ
れを５ｍｌのヘキサン／エタノール／酢酸／水＝６０／
４０／５／５に溶解させ、この混液を移動層としたシリ
カゲルカラムクロマトグラフィーを行った。カラムは８
０×５００ｍｍの３本連結、樹脂には球状シリカゲル
（ＳＩＬ−１２０−Ｓ５０、ＹＭＣ）を用いた。ＵＶ２
０５ｎｍの吸収により検出を行った。ピークのディット
マー−レスター試薬及びオルシノール硫酸試薬による呈
色反応を利用し各ピークの同定を行った。分離は良好で
あり、糖リン脂質は１本のピークとして存在した。糖リ
ン脂質含有画分を回収し凍結乾燥したところ８５ｍｇの
白色粉末を得た。リン分析によりこの中のリン脂質含量
は８１％であることを確認した。リン脂質中の糖リン脂
質の含量は９２％であった。
懸濁させ、激しく撹拌し分散させた。その後４℃にて一
晩放置した。沈澱物を濾取し続いて凍結乾燥を行い３３
ｇの白色粉末を得た。その内の一部１ｇをエタノールに
懸濁させ撹拌後濾過、エタノール不溶分を濾取した。そ
れを５ｍｌのヘキサン／エタノール／酢酸／水＝６０／
４０／５／５に溶解させ、この混液を移動層としたシリ
カゲルカラムクロマトグラフィーを行った。カラムは８
０×５００ｍｍの３本連結、樹脂には球状シリカゲル
（ＳＩＬ−１２０−Ｓ５０、ＹＭＣ）を用いた。ＵＶ２
０５ｎｍの吸収により検出を行った。ピークのディット
マー−レスター試薬及びオルシノール硫酸試薬による呈
色反応を利用し各ピークの同定を行った。分離は良好で
あり、糖リン脂質は１本のピークとして存在した。糖リ
ン脂質含有画分を回収し凍結乾燥したところ８５ｍｇの
白色粉末を得た。リン分析によりこの中のリン脂質含量
は８１％であることを確認した。リン脂質中の糖リン脂
質の含量は９２％であった。
【００２８】
【発明の効果】本発明により新規な糖リン脂質が提供さ
れる。本発明の糖リン脂質は生化学試薬、医薬品食品原
料、あるいは界面活性剤等の多様な用途に供することが
できる。
れる。本発明の糖リン脂質は生化学試薬、医薬品食品原
料、あるいは界面活性剤等の多様な用途に供することが
できる。
【図１】本発明の糖リン脂質の２次元ＮＭＲパターンを
示す。
示す。
【図２】本発明の糖リン脂質のＮＭＲパターンを示す。
【図３】本発明の糖リン脂質のフーリエ変換赤外分析法
（ＦＴ−ＩＲ法）による吸収スペクトルを示す。図中の
Ａは標準物質ホスファチジルエタノールアミンの吸収ス
ペクトル、Ｂは本発明の糖リン脂質の吸収スペクトルで
ある。
（ＦＴ−ＩＲ法）による吸収スペクトルを示す。図中の
Ａは標準物質ホスファチジルエタノールアミンの吸収ス
ペクトル、Ｂは本発明の糖リン脂質の吸収スペクトルで
ある。
【図４】本発明の糖リン脂質のＦＡＢ−ＭＳスペクトル
を示す。Ｍは本発明の糖リン脂質の代表的な分子量を示
す。図中の〔Ｍ−１６２−１６２−Ｈ〕- は２糖脱離体
のスペクトルを示し、〔Ｍ−１６２−Ｈ〕- は糖脱離体
のスペクトルを示し、〔Ｍ−Ｈ〕- は１水素抜けのスペ
クトルを示す。
を示す。Ｍは本発明の糖リン脂質の代表的な分子量を示
す。図中の〔Ｍ−１６２−１６２−Ｈ〕- は２糖脱離体
のスペクトルを示し、〔Ｍ−１６２−Ｈ〕- は糖脱離体
のスペクトルを示し、〔Ｍ−Ｈ〕- は１水素抜けのスペ
クトルを示す。
【図５】本発明の糖リン脂質のＧＣ−ＭＳスペクトルを
示す。図中の（ａ）上段はＧＣ保持時間１７．９４９分
の分離物質のマススペクトルであり、下段は１，５−ジ
−アセチル−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−メチルヘキ
シトールのマススペクトルである。また図中の（ｂ）上
段はＧＣ保持時間２３．３６１分の分離物質のマススペ
クトルであり、下段は１，５，６−トリ−Ｏ−アセチル
−２，３，４−トリ−Ｏ−メチルヘキシトールのマスス
ペクトルである。
示す。図中の（ａ）上段はＧＣ保持時間１７．９４９分
の分離物質のマススペクトルであり、下段は１，５−ジ
−アセチル−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−メチルヘキ
シトールのマススペクトルである。また図中の（ｂ）上
段はＧＣ保持時間２３．３６１分の分離物質のマススペ
クトルであり、下段は１，５，６−トリ−Ｏ−アセチル
−２，３，４−トリ−Ｏ−メチルヘキシトールのマスス
ペクトルである。
【図６】本発明の糖リン脂質の薄クロマトグラフィーの
各精製段階のパターンを示す。
各精製段階のパターンを示す。
（１）Ｆｒ． フラクション （２）ＧＰＬ 本発明糖リン脂質 （３）ＳＰＭ スフィンゴミエリン （４）ＰＣ ホスファチジルコリン （５）ＬａｃＣｅｒ ラクトシルセラミド
フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C07H 15/12 C07H 1/08 C07G 3/00 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (4)
- 【請求項１】 下記物理化学的特性値を有する糖リン脂
質。 （１）プロトンＮＭＲ測定により次のプロトンピークが
検出される。４．０ｐｐｍ付近の４個のプロトンピー
ク、５．１ｐｐｍのプロトンピーク、４．２ｐｐｍのア
ノメリックプロトンピーク、０．９ｐｐｍのメチルプロ
トンピーク、１．５〜３．０ｐｐｍのプロトンピーク。 （２）フーリエ変換赤外線分析法により測定した場合３
５００ｃｍ- 、１０００ｃｍ- 、１３００ｃｍ- 、に特
徴的な吸収が存在する。 （３）ホスホリパーゼＣにより分解される。 （４）ディットマー−レスター（Ｄｉｔｔｍｅｒ−Ｌｅ
ｓｔｅｒ）試薬によりリン脂質の呈色反応を示す。 （５）β−ガラクトシダーゼによって糖を遊離する。 （６）オルシノール硫酸、ジフェニールアミン−アニリ
ン試薬により、糖の呈色反応を示す。 （７）ガラクトースを構成糖とする。 （８）ニンヒドリン試薬により発色する。 （９）分子中のエタノールアミンを定量した場合、１分
子当たりエタノールアミンが１個存在する。 （１０）分子中のグリセロールを定量した場合、１分子
当たりグリセロールが１個存在する。 （１１）分子中のリンを定量した場合、１分子当たりリ
ン酸基が１分子存在する。 （１２）塩酸メタノールで分解し、メチルエステルを分
析した場合、炭素数１２〜２０の飽和または不飽和脂肪
酸が検出される。 - 【請求項２】 構造式が下記一般式〔Ｉ〕で表される請
求項１記載の糖リン脂質。 【化１】 （ただしＲ1 、Ｒ2 は同一かあるいは異なる、飽和また
は不飽和の脂肪族炭化水素を示し、ＡはＮグリコシド結
合した糖を示す。） - 【請求項３】 Ｒ1 及びＲ2 が同一か、あるいは異なる
トリデカニル（Ｃ13:0）、ペンタデカニル（Ｃ15:0）、
ヘプタデカニル（Ｃ17:0）、ペンタデセニル
（Ｃ15:1）、ヘプタデセニル（Ｃ17:1）及びヘプタデセ
ジエニル（Ｃ17:2）よりなる群から選択される少なくと
も１種の脂肪族炭化水素基であり、Ａがガラクトース２
残基が結合したものである請求項２記載の糖リン脂質。 - 【請求項４】 牛乳もしくは乳製品を出発原料として、
その脂質画分をクロロホルム−メタノール混液もしく
は、クロロホルム−メタノール−水混液により抽出し、
抽出液をアセトン洗浄、シリカゲルクロマトグラフィー
により精製することを特徴とする糖リン脂質の調製法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6155484A JP2787279B2 (ja) | 1994-05-17 | 1994-06-15 | 糖リン脂質及びその調製法 |
| US08/440,904 US5856453A (en) | 1994-05-17 | 1995-05-15 | Glycophospholipid |
| DE69519126T DE69519126T2 (de) | 1994-05-17 | 1995-05-16 | Glycophospholipid und Verfahren zu dessen Herstellung |
| EP95107426A EP0684252B1 (en) | 1994-05-17 | 1995-05-16 | Glycophospholipid and process for preparation thereof |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6-128169 | 1994-05-17 | ||
| JP12816994 | 1994-05-17 | ||
| JP6155484A JP2787279B2 (ja) | 1994-05-17 | 1994-06-15 | 糖リン脂質及びその調製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0834793A JPH0834793A (ja) | 1996-02-06 |
| JP2787279B2 true JP2787279B2 (ja) | 1998-08-13 |
Family
ID=26463908
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6155484A Expired - Fee Related JP2787279B2 (ja) | 1994-05-17 | 1994-06-15 | 糖リン脂質及びその調製法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5856453A (ja) |
| EP (1) | EP0684252B1 (ja) |
| JP (1) | JP2787279B2 (ja) |
| DE (1) | DE69519126T2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003071875A1 (en) * | 2002-02-21 | 2003-09-04 | Land O'lakes, Inc. | Method of preparing a milk polar lipid enriched concentrate and a sphingolipid enriched concentrate |
| US11425915B2 (en) | 2018-05-02 | 2022-08-30 | Land O'lakes, Inc. | Methods of concentrating phospholipids |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4310505A (en) * | 1979-11-08 | 1982-01-12 | California Institute Of Technology | Lipid vesicles bearing carbohydrate surfaces as lymphatic directed vehicles for therapeutic and diagnostic substances |
| US4480041A (en) * | 1982-07-09 | 1984-10-30 | Collaborative Research, Inc. | Use of phosphotriester intermediates for preparation of functionalized liposomes |
| US4762822A (en) * | 1985-08-08 | 1988-08-09 | Ettinger Anna C | Reduction of gastrointestinal disease-producing organisms with sialic acid and gangliosides |
| US5183680A (en) * | 1986-05-16 | 1993-02-02 | A. Nattermann & Cie. Gmbh Corporation Of The Federal Republic Of Germany | Baking agent for leavened dough |
| ES2032529T3 (es) * | 1988-02-18 | 1993-02-16 | Unilever Nv | Una emulsion de agua y aceite termo-esterilizable. |
| WO1992001720A1 (en) * | 1990-07-24 | 1992-02-06 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Phospholipid- or lipid-combining glycosaminoglycan, production thereof, and cancer metastasis inhibitor |
| US5273841A (en) * | 1991-07-01 | 1993-12-28 | Yuasa Battery Co., Ltd. | Sulfuric acid concentration sensor and lead acid battery equipped with sulfuric acid concentration sensor |
| FR2692781B1 (fr) * | 1992-06-24 | 1995-05-05 | Sederma Sa | Nouvelles compositions cosmétiques contenant des sphingomyélines et autres lipides complexes. |
| DE4221190A1 (de) * | 1992-06-27 | 1994-01-05 | Herbert Wiegandt | Verfahren zur Isolation von Gangliosid G¶l¶¶a¶¶c¶2 |
-
1994
- 1994-06-15 JP JP6155484A patent/JP2787279B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1995
- 1995-05-15 US US08/440,904 patent/US5856453A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-05-16 EP EP95107426A patent/EP0684252B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-05-16 DE DE69519126T patent/DE69519126T2/de not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0684252B1 (en) | 2000-10-18 |
| US5856453A (en) | 1999-01-05 |
| JPH0834793A (ja) | 1996-02-06 |
| EP0684252A1 (en) | 1995-11-29 |
| DE69519126T2 (de) | 2001-03-01 |
| DE69519126D1 (de) | 2000-11-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Klenk et al. | The lipides | |
| Comfurius et al. | The enzymatic synthesis of phosphatidylserine and purification by CM-cellulose column chromatography | |
| Siebertz et al. | Characterization of lipids from chloroplast envelopes | |
| Christiansen et al. | Microvillus membrane vesicles from pig small intestine purity and lipid composition | |
| De Haas et al. | Studies on cardiolipin III. Structural identity of ox-heart cardiolipin and synthetic diphosphatidyl glycerol | |
| Kates et al. | Lipids of Serratia marcescens | |
| US5220043A (en) | Synthesis of D-erythro-sphingomyelins | |
| Simon et al. | Phospholipids of the sea anemone: Quantitative distribution; absence of carbon‐phosphorus linkages in glycerol phospholipids; structural elucidation of ceramide aminoethylphosphonate | |
| DE69729111T2 (de) | Verfahren zur herstellung von sphingolipiden und sphingolipidderivaten | |
| AU2006254376B2 (en) | Process for the preparation and isolation of phosphatides | |
| Celmer et al. | Chemistry of phosphatides and cerebrosides | |
| JPH05279379A (ja) | ガングリオシドｇｍ３組成物及びその製造法 | |
| JP2787279B2 (ja) | 糖リン脂質及びその調製法 | |
| US5100787A (en) | Method for preparing highly purified phosphatidylinositol | |
| Breimer et al. | The preparative separation of sialic acid-containing lipids from sulphate group-containing glycolipids from small intestine of different animals. Analysis by thin-layer chromatography and detection of novel species | |
| Ibbott et al. | The phospholipids in membrane ghosts from Streptococcus faecalis protoplasts | |
| US4849137A (en) | Process for producing lysophospholipids containing substantially no lysophospholipids except LPC | |
| Viswanathan et al. | Isolation of ceramide-monomethylaminoethylphosphonate from the lipids of Tetrahymena pyriformis W | |
| White et al. | Ceramide phosphorylglycerol phosphate a new sphingolipid found in bacteria | |
| Marshall et al. | The membrane lipids of Halobacterium halobium | |
| WO2003035658A1 (fr) | Procede de separation de glycolipides | |
| FR2662697A1 (fr) | Nouveau ganglioside provenant du lait et son procede d'obtention. | |
| JP3669595B2 (ja) | スフィンゴ脂質セラミドデアシラーゼ | |
| Tegtmeyer et al. | Chemical composition of the lipopolysaccharides of Rhodobacter sulfidophilus, Rhodopseudomonas acidophila, and Rhodopseudomonas blastica | |
| Matsumoto | Studies on Phospholipids III. Enzymatic Formation of Lysophosphatidylethanolamine |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090605 Year of fee payment: 11 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090605 Year of fee payment: 11 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100605 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100605 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110605 Year of fee payment: 13 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110605 Year of fee payment: 13 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120605 Year of fee payment: 14 |
|
| R371 | Transfer withdrawn |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R371 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120605 Year of fee payment: 14 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120605 Year of fee payment: 14 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |