KR0181295B1 - 인지질 또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸, 이의 제조방법 및 암 전이 억제제 - Google Patents

인지질 또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸, 이의 제조방법 및 암 전이 억제제 Download PDF

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야마타니 와타루
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Abstract

본 발명은 혈관 내피 세포 및 세포의 매트릭스에 대한 암세포의 부착을 억제하는 뛰어난 작용을 지녀 전이를 억제하는 약리학적 효과를 발휘하는 것으로 기대되는, 인지질 또는 지질에 글리코스아미노글리칸을 결합시켜 제조된 화합물에 관한 것이다. 이러한 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸은 예를들어, 글리코스아미노글리칸의 환원 말단 그룹을 계열 및 산화시키고, 형성된 유도체의 알데하이드 그룹 또는 락톤 화합물 또는 글리코스아미노글리칸 쇄의 카복실 그룹을 인지질의 1급 아미노 그룹과 반응시키거나, 글리코스아미노글리칸 유도체의 1급 아미노 그룹을 인지질 또는 지질의 카복실 그룹과 반응시켜 글리코스아미노글리칸 유도체를 인지질 또는 지질에 결합시켜 제조할 수 있다. 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노 글리칸은 무독성이므로 전이 억제제로서 유용하다.

Description

[발명의 명칭]
인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸, 이의 제조방법 및 암 전이 억제제
[발명의 분야]
본 발명은 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸, 이의 제조방법 및 암 전이 억제제에 관한 것이다.
[발명의 배경]
전이 발생의 과정으로서, 혈관 또는 림프관으로 잘못 들어간 암세포가 내피세포 또는 이의 세포의 매트릭스(소위 기초막)에 부착됨으로써 부착된 암세포가 세포의 매트릭스에 침투하여 조직에 새로운 전이 병변을 발생시킨다. 예를 들면, 문헌[참조 : S Korach et al., Cancer Research, 46, 3624-3629, 1986]에서는 암세포를 고전이 그룹과 저전이 그룹으로 나누었으며 암세포 클로닝 연구를 통해 암세포의 배양된 내피 세포에 대한 시험관내 부착 시험을 수행하여 암세포의 혈관 내피 세포 또는 이의 세포의 매트릭스로의 부착은 고전이 그룹 암세포가 높은 부착력을 나타내는 반면, 저전이 세포는 낮은 부착력을 나타내기 때문에 암세포의 전이와 밀접한 관계가 있다고 발표하였다.
한편, 세포의 매트릭스의 성분인 피브로넥틴의 세포 부착 잔기의 펩타이드 서열GRGDS(Gly-Arg-Gly-Asp-Ser)는 암세포와 세포의 매트릭스 간의 결합을 경쟁적으로 억제한다. 문헌[참조 : Yamada et al., Science, 233, 467-470, 1986]에서는 펩타이드 GRGDS가 마우스에 있어서 B16F10 세포의 폐전이를 억제한다고 발표하였다. 이러한 결과는 소량의 세포 부착 억제 활성을 갖는 물질을 전이 억제제로서 사용할 수 있다는 것을 보여준다.
본 발명은 특정 유형의 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸이 암세포의 혈관 내피 세포 및 이의 세포의 매트릭스로의 부착을 억제할 수 있어서, 암세포의 전이를 억제할 수 있다는 발견에 기초하여 이루어졌다.
[발명의 설명]
본 발명은 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸, 이의 제조방법 및 상기 화합물 또는 이의 염을 함유하는 전이 억제제에 관한 것이다.
표 1에서 보듯이, 글리코스아미노글리칸은 D-글리코스아민 또는 D-갈락토스아민, D-글루쿠론산, L-이두론산 및/또는 D-갈락토스를 포함하는 이당류 또는 사당류의 반복 단위로 이루어지는 장쇄 다당류이다. 공지된 글리코스아미노글리칸의 예에는 하이알루론산, 콘드로이틴, 콘드로이틴 설페이트 A, 콘드로이틴 설페이트 C, 콘드로이틴 설페이트 D, 콘드로이틴 설페이트 E, 콘드로이틴 설페이트 K, 콘드로이틴 폴리설페이트, 더마탄 설페이트, 헤파린, 헤파란 설페이트, 케라탄 설페이트 및 케라탄 폴리설페이트가 포함된다.
GlcNAc : N-아세틸 -D- 글루코스아민
GalNAc : N-아세틸 -D- 갈락토스아민
GlcNS : D-글루코스아민 N-설페이트
GlcUA : D-글루쿠론산
IduUA : L-이두론산
Gal : D-갈락토스
S : O-설페이트
본 발명의 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노 글리칸은 바람직하게는 나트륨, 칼륨 등과 같은 알칼리 금속, 칼슘, 마그네슘 등과 같은 알칼리 토금속 및 트리알킬아민, 피리딘 등과 같은 아민과의 염으로서 사용될 수 있다.
다음은 본 발명의 인지질-또는 지질-결합된 글리코스 아미노글리칸의 예이다.
하기 일반식(Ⅰ)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염 :
상기식에서, p1은 1급 아미노 그룹을 갖는 인지질이며,
(1) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 하이알루론산, 콘드로이틴, 콘드로이틴 설페이트 A, C 또는 E, 더마탄 설페이트 또는 헤파린의 글리코스아미노글리칸 잔기이거나 GAG가 환원 말단 이두론산 잔기를 제외한 더마탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하고, R3는 3-위치에 위치하며, R2는 COOH 그룹이고, R3는 OH그룹이며, (2) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 K 또는 콘드로이틴 폴리설페이트의 글리코스 아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하고, R3는 3-위치에 위치하며, R2는 COOH 그룹이고, R3는 OSO3H 그룹이며, (3) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하고, R3는 4-위치에 위치하며, R2는 CH2OH 그룹이고, R3는 OH 그룹이며, (4) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하고, R3는 4-위치에 위치하며, R2는 CH2OSO3H 그룹이고, R3는 OH 그룹이다.
하기 일반식(Ⅱ)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염 :
상기식에서, P1은 1급 아미노 그룹을 갖는 인지질이며, (1) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 하이알루론산 또는 콘드로이틴의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, R1은 NHCOCH3그룹이고, R3는 OH 그룹이며, (2) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 A 또는 K, 콘드로이틴 폴리설페이트 또는 더마탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, R1은 NHCOCH3그룹이고, R3는 OSO3H 그룹이며, (3) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 설페이트 또는 케라탄 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, R1및 R3는 각각 OH 그룹이다.
하기 일반식(Ⅲ)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염 :
상기식에서, P1은 1급 아미노 그룹을 갖는 인지질이고, GAG는 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 설페이트 또는 케라탄 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기이다.
하기 일반식(Ⅳ)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염 :
상기식에서, P1은 1급 아미노 그룹을 갖는 인지질이고, (1) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 하이알루론산, 콘드로이틴, 콘드로이틴 설페이트 A, C 또는 E, 더마탄 설페이트, 헤파린 또는 헤파란 설페이트의 글리코스 아미노글리칸 잔기이거나 GAG가 환원 말단 이두론산 잔기를 제외한 더마탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하며, R3는 3-위치에 위치하고, R1은 OH 그룹이며, R2는 COOH 그룹이고, R3는 OH 그룹이며, (2) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 D의 글리코스아미노글리칸 잔기이거나 GAG가 환원 말단 이두론산 잔기를 제외한 헤파린 또는 헤파란 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하고, R3는 3-위치에 위치하며, R1은 OSO3H 그룹이고, R2는 COOH 그룹이며, R3는 OH 그룹이고, (3) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 K의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하며, R3는 3-위치하고, R1는 OH 그룹이며, R2는 COOH 그룹이고, R3는 OSO3H 그룹이며, (4) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 콘드로이틴 폴리 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하고, R3는 3-위치에 위치하며, R1및 R3중의 하나 이상은 OSO3H 그룹이고, 다른 하나는 OH 그룹이며, R2는 COOH 그룹이고, (5) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R1및 R3는 각각 OH 그룹이며, R2는 CH2OH 그룹이고, (6) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 폴리 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R1및 R3는 각각 OH 그룹이며, R2는 CH2OSO3H 그룹이고, (7) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 하이알루론산 또는 콘드로이틴의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R2는 NHCOCH3그룹이며, R2는 CH2OH 그룹이고, R3는 OH 그룹이며, (8) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 A 또는 K 또는 더마탄 설페이트의 글리코스 아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하고, R3는 4-위치에 위치하며, R1은 NHCOCH3그룹이고, R2는 CH2OH 그룹이며, R3는 OSO3H 그룹이고, (9) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 C 또는 D의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R1은 NHCOCH3그룹이며, R2는 CH2OSO3H 그룹이고, R3는 OH 그룹이며, (10) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 E의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하고, R3는 4-위치에 위치하며, R1은 NHCOCH3그룹이고, R2는 CH2OSO3H 그룹이며, R3는 OSO3H 그룹이고, (11) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 콘드로이틴 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R1은 NHCOCH3그룹이며, R2는 CH2OH 그룹이고, R3는 OSO3H 그룹이거나, R2는 CH2OSO3H 그룹이며, R3는 OH 그룹 또는 OSO3H 그룹이고, (12) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 헤파린의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하며, R3는 3-위치에 위치하고, R1은 NHSO3H 그룹이며, R2는 CH2OSO3H 그룹이고, R3는 OH 그룹이며, (13) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 헤파란 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하고, R3는 3-위치에 위치하며, R1은 NHCOCH3그룹 또는 NHSO3H 그룹이며, R3가 OSO3H 그룹인 경우, R2는 CH2OH 그룹이거나, R3가 OH 그룹 또는 OSO3H 그룹인 경우, R2는 CH2OSO3H 그룹이며, (14) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 케라탄 설페이트 또는 케라탄 폴리설페이트의 글리코스아미노 글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하고, R3는 3-위치에 위치하며, R1은 NHCOCH3그룹이고, R2는 CH2OSO3H 그룹이며, R3는 OH 그룹이다.
하기 일반식(Ⅴ)의 인지질-또는 지질-결합된 글리코스 아미노글리칸 또는 이의 염 :
상기식에서, P2는 인지질 또는 지질이고, m은 1 내지 8의 정수이며, l은 1내지 10의 정수이고, (1) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 하이알루론산, 콘드로이틴, 콘드로이틴 설페이트 A, C 또는 E, 더마탄 설페이트, 헤파린 또는 헤파란 설페이트의 글리코스 아미노글리칸 잔기이거나 GAG가 환원 말단 이두론산 잔기를 제외한 더마탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하며, R3는 3-위치에 위치하고, R2는 COOH 그룹이며, R3는 OH 그룹이고, (2) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 K 또는 콘드로이틴 폴리설페이트의 글리코스 아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하며, R3는 3-위치에 위치하고, R2는 COOH 그룹이며, R3는 OSO3H 그룹이고, (3) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R2는 CH2OH 그룹이며, R3는 OH 그룹이고, (4) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 폴리 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R2는 CH2OSO3H 그룹이며, R3는 OH 그룹이다.
하기 일반식(Ⅵ)의 인지질-또는 지질-결합된 글리코스 아미노글리칸 또는 이의 염 :
상기식에서, GAG, R1및 R3는 일반식(Ⅱ)에서 정의한 바와 동일하고, m, l 및 P2는 일반식(Ⅴ)에서 정의한 바와 동일하다.
하기 일반식(Ⅶ)의 인지질-또는 지질-결합된 글리코스 아미노글리칸 또는 이의 염 :
상기식에서, GAG, R1, R2및 R3는 일반식(Ⅳ)에서 정의한 바와 동일하고, m, l 및 P2는 일반식(Ⅴ)에서 정의한 바와 동일하다.
하기 일반식(Ⅷ)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염 :
상기식에서, P1은 1급 아미노 그룹을 갖는 인지질이고, n은 글리코스아미노글리칸 중에 함유된 카복실 그룹의 수 이하인 정수이며, (1) GAG가 하이알루론산, 콘드로이틴, 콘드로이틴 설페이트 A, C 또는 E 또는 더마탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 쇄인 경우, R1및 R3는 각각 OH 그룹이고, (2) GAG가 콘드로이틴 설페이트 D의 글리코스아미노글리칸 쇄인 경우, R1은 OSO3H 그룹이며, R3는 OH 그룹이고, (3) GAG가 콘드로이틴 설페이트 K의 글리코스아미노글리칸 쇄인 경우, R1은 OH 그룹이며, R3는 OSO3H 그룹이고, (4) GAG가 콘드로이틴 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 쇄인 경우, R1및 R3중의 하나 이상인 OSO3H 그룹이며, 다른 하나는 OH 그룹이고, (5) GAG가 헤파린 또는 헤파란 설페이트의 글리코스아미노글리칸 쇄인 경우, R1은 OH 그룹 또는 OSO3H 그룹이며, R3는 OH 그룹이다.
글리코스아미노글리칸의 바람직한 분자량은 표1에 기재되어 있다.
상기 일반식(Ⅰ), (Ⅱ), (Ⅲ), (Ⅳ) 및 (Ⅷ)에서 P1으로 나타낸 1급 아미노 그룹을 갖는 인지질은 하기 일반식(Ⅸ)의 화합물이다 :
상기식에서, R4및 R5는 각각 수소, -CH=CHR6또는 -COR7이고, 여기서, R6및 R7은 각각 C6-24알킬 그룹이며, Y는 -CH2CH2NH- 또는 --이다.
특히 바람직한 화합물은 R4및 R5중의 하나가 -COR7그룹 (예 : 헥사데카노일 또는 옥타데카노일)이거나, R4가 -CH=CHR6그룹이고 R5가 -COR7그룹인 화합물이다.
상기 일반식(Ⅴ), (Ⅵ) 및 (Ⅶ)에서 P2로 나타낸 인지질 또는 지질은 하기 일반식(Ⅹ), (XI), (XII) 및 (XIII)의 화합물이다 :
상기식에서, R8은 수소이고, R9은 알킬 그룹이며, R10는 -CH=CHR6또는 -COR7이고, 여기서, R6및 R7은 상기 정의한 바와 동일하며, W는 -CH2CH2N+(CH3)3또는 이노시틀 잔기이다.
R8및 R9중의 하나가 -COR7그룹(예 : 헥사데카노일 또는 옥타데카노일)이거나, R8이 수소이고 R9가 -COR7그룹인 일반식(Ⅹ) 또는 (XI)의 지질 또는 R10이 -COR7그룹인 일반식(XII) 및 (XIII)의 인지질이 특히 바람직하다.
본 발명에 따라, 상기 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸을 하기 기술된 방법에 따라 제조한다.
일반식(Ⅰ-1)의 글리코스아미노글리칸의 환원 말단 그룹을 환원 및 개열시켜 일반식(Ⅰ-2)의 환원된 생성물을 수득하는 단계, 환원된 생성물을 산화시켜 일반식(Ⅰ-3)의 산화된 생성물을 수득하는 단계 및 산화된 생성물의 알데하이드 그룹을 인지질의 1급 아미노 그룹과 반응시키는 단계를 포함하여, 일반식(Ⅰ)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 제조하는 방법.
상기식에서, GAG, R2및 R3는 일반식(Ⅰ)에서 정의한 바와 동일하다.
일반식(Ⅱ-1)의 글리코스아미노글리칸의 환원 말단 그룹을 환원 및 개열시켜 일반식(Ⅱ-2)의 환원된 생성물을 수득하는 단계, 환원된 생성물을 산화시켜 일반식(Ⅱ-3)의 산화된 생성물을 수득하는 단계 및 산화된 생성물의 알데하이드 그룹을 인지질의 1급 아미노 그룹과 반응시키는 단계를 포함하여, 일반식(Ⅱ)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 제조하는 방법.
상기식에서, GAG, R1및 R3는 일반식(Ⅱ)에서 정의한 바와 동일하고, R은 OH 또는 OSO3H 그룹이다.
일반식(Ⅱ-2)의 환원된 생성물을 산화시켜 일반식(11)의 산화된 생성물을 수득하는 단계 및 산화된 생성물의 알데하이드 그룹을 인지질의 1급 아미노 그룹과 반응시키는 단계를 포함하여 일반식(Ⅲ)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 제조하는 방법.
상기식에서, GAG는 일반식(III)에서 정의한 바와 동일하다.
일반식(12)의 글리코스아미노글리칸의 환원 말단 그룹을 산화 및 개열시켜 일반식(13)의 산화된 생성물을 수득하는 단계, 산화된 생성물을 락톤화시켜 일반식(14)의 락톤을 수득하는 단계 및 수득된 락톤을 인지질의 1급 아미노 그룹과 반응시키는 단계를 포함하여, 일반식(Ⅳ)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 제조하는 방법.
상기식에서, GAR, R1, R2, R3는 일반식(Ⅳ)에서 정의한 바와 동일하고, A는 알칼리 금속이다.
일반식(Ⅰ-3)의 알데하이드 화합물을 알킬렌 디아민과 반응시켜 일반식(15)의 유도체를 수득하는 단계, 인지질 또는 지질을 디카복실산 또는 디카복실산 무수물과 반응시켜 카복실그룹을 갖는 인지질 또는 지질 유도체를 수득하는 단계 및 일반식(15)의 유도체의 1급 아미노 그룹을 인지질 또는 지질 유도체의 카복실 그룹과 반응시키는 단계를 포함하여, 일반식(Ⅴ)의 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 제조하는 방법.
상기식에서, GAR, R2, R3및 m은 일반식(Ⅴ)에서 정의한 바와 동일하다.
일반식(Ⅱ-3)의 알데하이드 화합물을 알킬렌 디아민과 반응시켜 일반식(16)의 유도체를 수득하는 단계, 인지질 또는 지질을 디카복실산 또는 디카복실산 무수물과 반응시켜 카복실 그룹을 갖는 인지질 또는 지질 유도체를 수득하는 단계 및 일반식(16)의 유도체의 1급 아미노 그룹을 인지질 또는 지질 유도체의 카복실 그룹과 반응시키는 단계를 포함하여, 일반식(Ⅵ)의 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 제조하는 방법.
상기식에서, GAR, R1, R3및 m은 일반식(Ⅵ)에서 정의한 바와 동일하다.
일반식(14)의 락톤 화합물을 알킬렌 디아민과 반응시켜 일반식(17)의 유도체를 수득하는 단계, 인지질 또는 지질을 디카복실산 또는 디카복실산 무수물과 반응시켜 카복실 그룹을 갖는 인지질 또는 지질 유도체를 수득하는 단계 및 일반식(17)의 유도체의 1급 아미노 그룹을 인지질 또는 지질 유도체의 카복실 그룹과 반응시키는 단계를 포함하여, 일반식(Ⅶ)의 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 제조하는 방법.
상기식에서, GAG, R1, R2, R3및 m은 일반식(Ⅶ)에서 정의한 바와 동일하다.
인지질의 1급 아미노 그룹을 축합제의 존재하에, 일반식(18)의 글리코스아미노글리칸의 카복실 그룹과 반응시킴을 포함하여, 일반식(Ⅷ)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 제조하는 방법.
상기식에서, GAG, R1, R3및 n은 일반식(Ⅷ)에서 정의한 바와 동일하다.
일반식(18)의 글리코스아미노글리칸의 카복실 그룹을 활성화시키는 단계 및 활성화된 카복실 그룹을 인지질의 1급 아미노 그룹과 반응시키는 단계를 포함하여, 일반식(Ⅷ)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 제조하는 방법.
본 발명의 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸을 제조하는 방법을 이하 상세히 기술한다.
[환원 말단 그룹의 제한된 산화]
이러한 방법에서는, 글리코스아미노글리칸의 환원 말단 우론산, 갈락토스 또는 헥소스아민 잔기를 부분 산화시키고 개열시켜 알데하이드 그룹을 형성시키고, 형성된 알데하이드 그룹을 인지질의 1급 아미노 그룹을 사용하여 환원 알킬화시켜 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸을 수득한다. 이러한 방법의 반응 도식은 다음과 같다.
(A) 환원 말단 당 중의 글루쿠론산 또는 이두론산을 반응 시키는 경우 :
상기식에서, R3는 상기 정의한 바와 동일하고, P1은 1급 아미노 그룹을 갖는 인지질이다.
출발 물질로서 OH 그룹이 2-위치의 탄소원자에 결합되어 있는 환원 말단 D-글루쿠론산 또는 L-이두론산을 갖는 일반식(1)의 하이알루론산, 콘드로이틴, 콘드로이틴 설페이트 A, 콘드로이틴 설페이트 C, 콘드로이틴 설페이트 E, 콘드로이틴 설페이트 K, 콘드로이틴 폴리설페이트, 더마탄 설페이트 및 헤파린을 사용하는 경우, 상기 반응 도식에 따라 일반식(Ⅰ-a)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸이 생성된다.
(B) 환원 말단 당 중의 글루코스아민 또는 갈락토스아민을 반응시키는 경우 :
상기식에서, R3는 상기 정의한 바와 동일하고, P1은 1급 아미노 그룹을 갖는 인지질이다.
출발 물질로서, CH2OH 그룹이 5- 위치의 탄소원자에 결합되어 있는 환원 말단 그룹으로서 글루코스아민 또는 갈락토스아민을 갖는 일반식(4)의 하이알루론산, 콘드로이틴, 콘드로이틴 설페이트 A, 콘드로이틴 설페이트 K, 콘드로이틴 폴리 설페이트 및 더마탄 설페이트를 사용하는 경우, 상기 반응도식에 따라 일반식(Ⅱ-a)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸이 생성된다.
(C) 환원 말단 당 중의 갈락토스를 반응시키는 경우 :
상기식에서, R3는 상기 정의한 바와 동일하고, P1은 1급 아미노 그룹을 갖는 인지질이다. 출발 물질로서, 환원 말단 당으로서 갈락토스를 갖는 일반식(7)의 케라탄 설페이트 및 케라탄 폴리설페이트를 사용하는 경우, 상기 반응도식에 따라 일반식(Ⅰ-b), (Ⅱ-b) 또는 (Ⅲ)의 인지질-결합딘 글리코스아미노글리칸이 생성된다.
상기 방법 (A), (B) 및 (C)에서, 일반식(1), (4) 및 (7)의 글리코스아미노글리칸의 환원 말단 당 잔기를 먼저 환원개열시켜 상응하는 화합물 (2), (5) 및 (8)을 수득한다.
환원 단계에서 사용할 수 있는 유용한 환원제에는 수소화 붕소나트륨, 수소화시아노붕소나트륨 등과 같은 수소화붕소의 알칼리 염이 있다.
상기 환원 반응에 사용할 수 있는 용매로서, 물 또는 0.05% 붕산염 완충액(pH 8.3)을 사용할 수 있다.
환원 반응은 10 내지 30℃, 바람직하게는 15 내지 25℃의 온도에서 수행할 수 있다.
환원제의 양은, 종류에 따라 다르지만, 화합물(1), (4) 또는 (7) 1몰당 5 내지 50몰, 바람직하게는 25 내지 30몰이다.
이렇게 수득한 일반식(2), (5) 및 (8)의 화합물을 부분 산화시켜 일반식(3), (6), (9), (10) 및 (11)의 알데하이드 화합물을 형성시킨다.
산화 반응에 사용할 수 있는 유용한 산화제에는 과요오드산나트륨, 과요오드산칼륨 등과 같은 과요오드산의 알칼리 염이 있다.
산화제의 양은 화합물(2), (5) 또는 (8)의 1몰당 1 내지 10몰, 바람직하게는 3 내지 6몰이다. 산화 반응은 0 내지 10℃, 바람직하게는 0 내지 4℃의 온도에서 수행할 수 있다.
형성된 알데하이드 화합물(3), (6), (9), (10) 및 (11)은 각각 공지된 환원 알킬화 반응에 따라 인지질의 1급 아미노 그룹과 반응시킬 수 있다. 이렇게 하여, 일반식(Ⅰ-a), (Ⅱ-a), (Ⅰ-b), (Ⅱ-b) 및 (Ⅲ)의 본 발명의 인지질-결합된 글리코스 아미노글리칸이 수득된다.
상기 반응에 사용되는 인지질의 예에는 L-(α-포스파티딜)에탄올아민, DL-포스파티딜-L-세린, 에탄올아민 플라즈 말로겐, 세린 플라스말로겐 등이 포함된다.
일반식(Ⅰ-a), (Ⅱ-a), (Ⅰ-b), (Ⅱ-b) 및 (Ⅲ)의 화합물을 제조하기 위한 환원 알킬화 반응은 물, 0.05M 인산염 완충액(pH 7.0) 또는 디메틸포름아미드와 같은 용매 중에서 알데하이드 화합물 (3), (6), (9), (10) 또는 (11)을 클로로포름 중에 용해되어 있는 인지질과 균질 혼합하고, 혼합물을 15 내지 60℃의 온도에서 반응시키는 동시에 또는 반응시킨 후에 수소화 시아노붕소나트륨 등과 같은 환원제를 사용하여 환원 반응을 수행하여 수행할 수 있다.
제한된 환원 말단 그룹 산화에 의해 생성된 화합물의 예는 표 2에 기재되어 있다.
[환원 말단 그룹의 락톤화]
이러한 방법에서, 글리코스아미노글리칸의 환원 말단 우론산, 갈락토스 또는 헥소스아민 잔기를 산화시켜 환원 말단 당 잔기를 개열시키고, 개열된 생성물을 락톤화시킨 다음, 인지질의 1급 아미노 그룹과 반응시켜 인지질-결합된 글리코스 아미노글리칸을 수득한다. 이러한 반응 도식은 다음과 같다.
상기식에서, R1, R2및 R3는 각각 상기 정의한 바와 동일하고, P1은 1급 아미노 그룹을 갖는 인지질이며, A는 알칼리 금속이다.
상기 방법에 따라, 일반식(12)의 글리코스아미노글리칸을 먼저 산화시켜 이의 환원 말단 잔기를 개열시켜, 일반식(13)의 카복실 화합물을 수득한다.
출발 물질로 사용할 수 있는 화합물은 하이알루론산, 콘드로이틴, 콘드로이틴 설페이트 A, 콘드로이틴 설페이트 C, 콘드로이틴 설페이트 D, 콘드로이틴 설페이트 E, 콘드로이틴 설페이트 K, 콘드로이틴 폴리설페이트, 더마탄 설페이트, 헤파린, 헤파란 설페이트, 케라탄 설페이트 및 케라탄 폴리 설페이트를 포함하는 상기 일반식(12)의 화합물이다.
산화 단계에 사용되는 산화제로서, 요오드, 브롬 등을 사용할 수 있다.
산화제의 양은 일반식(12)의 화합물 1몰당 2 내지 20몰, 바람직하게는 5 내지 15몰이다.
산화 단계에 사용되는 용매로서, 물 또는 0.05M 인산염 완충액(pH 7.0)을 사용할 수 있다.
산화 반응은 0 내지 40℃, 바람직하게는 15 내지 20℃의 온도에서 수행할 수 있다.
그런 다음 이렇게 수득한 일반식(13)의 화합물을 산 처리하여 일반식(14)의 락톤 화합물을 형성시킨다.
Dowex 50, Amberlite IR 120 등과 같은 강산성 양이온 교환 수지를 산 처리에 사용할 수 있다.
이렇게 형성된 일반식(14)의 락톤 화합물을 인지질과 반응시켜 본 발명의 일반식(Ⅳ)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸을 생성시킨다.
상기 제한된 환원 말단 그룹 산화 방법에서 기술된 인지질 화합물과 동일한 인지질 화합물을 이러한 반응 단계에 사용할 수 있다.
일반식(14)의 락톤 화합물과 일반식(Ⅳ)의 화합물의 제조를 위한 인지질과의 반응은 물, 0.05M 인산염 완충액(pH 7.0) 또는 디메틸포름아미드와 같은 용매에 일반식(14)의 락톤화합물을 용해시키고, 용액을 클로로포름 등에 용해시킨 인지질과 균질 혼합한 다음, 혼합물을 5 내지 80℃, 바람직하게는 30 내지 60℃의 온도에서 반응시켜 수행할 수 있다.
환원 말단 그룹 락톤화 방법에 의해 제조된 화합물의 예는 표 3에 기재되어 있다.
[환원 말단 그룹의 아민화]
이러한 방법에서는, 일반식(3), (6), (9) 및 (10)의 알데하이드 화합물 및 일반식(14)의 락톤 화합물을 각각 알킬렌디아민 화합물과 반응시켜 이의 환원 말단 그룹에 1급 아미노 그룹을 갖는 글리코스아미노글리칸 유도체를 수득한다. 이렇게 수득한 1급 아미노 그룹을 갖는 글리코스아미노글리칸 유도체를 카복실 그룹을 갖는 인지질 또는 지질 유도체와 반응시켜 1급 아미노 그룹과 카복실 그룹이 함께 결합되도록 한다. 이렇게 하여, 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸이 생성된다. 이러한 방법의 반응 도식은 다음과 같다.
상기식에서, R1, R2및 R3는 각각 상기 정의한 바와 동일하고, P2는 인지질 또는 지질이다.
일반식(15), (16) 또는 (17)에서와 같이 환원 말단에 1급 아미노 그룹을 갖는 글리코스아미노글리칸 유도체는 상기 제한된 환원 말단 산화 방법에 의해 제조한 화합물(3), (6), (9) 및 (10) 및 상기 환원 말단 락톤화 방법에 의해 제조한 화합물(14)를 각각 환원제의 존재하에 알킬렌디아민 화합물과 반응시켜 수득한다.
이러한 반응에 사용할 수 있는 알킬렌디아민 화합물은 일반식 NH2-(CH2)m-NH2의 화합물(여기서, m은 1 내지 8의 정수이다)중에서 선택할 수 있다.
환원제로서, 수소화시아노붕소나트륨 등을 사용할 수 있다.
환원제의 양은 반응 시스템에 사용되는 글리코스아미노글리칸 1몰당 10 내지 100몰이다.
반응 용매로서, 물 또는 0.5M 인산염 완충액을 사용할 수 있다.
반응은 0 내지 60℃, 바람직하게는 4 내지 25℃의 온도에서 수행할 수 있다.
카복실 그룹을 갖는 인지질 또는 지질 유도체는 이의 글리세롤 구조내에 하이드록실 그룹을 갖는 인지질 또는 지질 화합물을 디카복실산 또는 디카복실산 무수물과 반응시켜 수득할 수 있다.
이러한 반응에 사용되는 인지질 또는 지질 화합물의 예에는 모노아실글리세롤, 디아실글리세롤, 라이소포스파티딜콜린, 라이소포스파티딜이노시톨, 에테르 지질, 에테르 인지질 등이 포함된다.
디카복실산으로서, 석신산, 글루타르산, 아디프산 등을 사용할 수 있다.
디카복실산 무수물로서, 말레산 무수물, 석신산 무수물, 푸마르산 무수물 등을 사용할 수 있다.
축합제로서 사용가능한 것은 1-에틸-3-(디메틸아미노프로필)카보디이미드, 디사이클로헥실카보디이미드 등이다.
클로로포름, 아세트아닐리드, 디메틸포름아미드 등은 반응 용매로서 사용할 수 있다.
반응온도는 디카복실산을 축합제의 존재하에 사용하는 경우 0 내지 60℃의 범위내이고, 디카복실산 무수물을 사용하는 경우 20 내지 80℃의 범위내이다.
환원 말단 그룹에 1급 아미노 그룹을 갖는 글리코스 아미노글리칸 유도체와 카복실 그룹을 갖는 인지질 또는 지질 유도체와의 반응은 우선 펩타이드 화학 분야에서 널리 공지된 방법을 사용하여 인지질 또는 지질 유도체내의 카복실 그룹을 활성화시킨 후, 이렇게 활성화된 화합물을 글리코스아미노글리칸 유도체와 반응시킴으로써 수행할 수 있다.
인지질 또는 지질 유도체내의 카복실 그룹의 활성화는, 인지질 또는 지질 유도체를 축합제의 존재하에 N-하이드록시석신이미드, P-니트로페놀, N-하이드록시벤조트리아졸, N-하이드록시피페리딘, N-하이드록시석신아미드, 2,4,5-트리클로로페놀 등과 반응시켜 카복실 그룹을 활성 에스테르로 전환시킴으로써 수행할 수 있다.
반응 용매로서 유용한 것에는 클로로포름, 아세토니트릴, 디메틸포름아미드 또는 이들의 혼합물 등이 있다. 축합제로서 유용한 것에는 1-에틸-3(디메틸아미노프로필)카보디이미드, 디사이클로헥실카보디이미디 등이 있다.
반응은 0 내지 60℃의 온도에서 수행할 수 있다.
그 다음, 이렇게 하여 수득된, 카복실 그룹이 활성화된 인지질 또는 지질 유도체를 1급 아미노 그룹을 갖는 글리코스 아미노글리칸 유도체(15), (16) 또는 (17)과 반응시켜 인지질 또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸 (Ⅴ), (Ⅵ) 및 (Ⅶ)를 수득한다. 상기 반응에 사용된 용매는 클로로포름, 아세토 니트릴, 디메틸포름아미드 또는 이들의 혼합물이다. 반응 온도는 0 내지 60℃이다.
상기한 환원 말단 그룹 아민화 방법에 의해 생성된 화합물을 표4에 예시하였다:
[축합제의 적용]
케라탄 설페이트 및 케라탄 폴리설페이트를 제외한 각각의 글리코스아미노글리칸은 D-글루쿠론산 또는 L-이두론산을 우론산 잔기로서 함유하며, 상기한 각각의 산은 이의 5-위치의 탄소원자에 결합된 카복실 그룹을 갖는다.
이러한 방법에 있어서는, 우론산 카복실 그룹을 축합제의 존재하에 인지질의 1급 아미노 그룹과 반응시킴으로써 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸을 제조한다.
이러한 방법의 반응도식은 하기와 같다 :
상기식에서, R1, R3, n 및 P1은 각각 상기한 바와 같다.
출발 물질로서 사용되는 일반식(18)의 화합물은 하이알루론산, 콘드로이틴, 콘드로이틴 설페이트 A, 콘드로이틴 설페이트 C, 콘드로이틴 설페이트 D, 콘드로이틴 설페이트 E, 콘드로이틴 설페이트 K, 콘드로이틴 폴리설페이트, 더마탄 설페이트, 헤파린 및 헤파란 설페이트 중에서 선택된다.
제한된 환원 말단 그룹 산화 방법에 대해 상기한 모든 화합물을 인지질로서 사용할 수 있다.
축합제의 예에는 디에틸카보디이미드, 디이소프로필 카보디이미드, 메틸프로킬카보디이미드, 디사이클로헥실카보디 이미드, 헥사메틸렌카보디이미드, 헵탄메틸렌카보디이미드, 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드, 1-사이클로헥실-3-(2-모르폴리노에틸)카보디이미드-메조-p-톨루엔설포네이트, 1-3급-부틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드, 디페닐 카보디이미드, 4,4′-디니트로디페닐카보디이미드, 디-p-톨릴카보디이미드, 비스-(트리메틸실릴)카보디이미드 등이 포함된다.
축합제는 사용되는 인지질 또는 지질 1몰당 10 내지 100몰의 양으로 사용할 수 있다.
반응은 디메틸포름아미드, 클로로포름 또는 이들의 혼합물과 같은 용매중에서 4 내지 60℃, 바람직하게는 15 내지 25℃의 온도에서 수행할 수 있다.
축합 방법에 의해 제조된 화합물을 표5에 예시하였다 :
[글리코스아미노글리칸의 활성화]
이러한 방법에 있어서는, 상기한 축합제-적용 방법의 경우와 유사하게, 우론산 카복실 그룹을 활성화시킨 후, 활성화된 카복실 그룹을 인지질 중의 1급 아미노 그룹에 결합시킴으로써 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸(Ⅷ)을 제조한다.
상기한 축합제-적용 방법에서 기술한 바와 동일한 글리코스아미노글리칸 화합물 및 인지질 화합물을 이러한 방법에서도 사용할 수 있다.
글리코스아미노글리칸 화합물의 우론산 잔기중의 카복실 그룹의 활성화 방법은 펩타이드 화학 분야에 널리 공지된 방법을 사용하여 수행하는데, 예를 들면, 글리코스아미노글리칸 화합물을 축합제의 존재하에 N-하이드록시석신이미드, p-니트로페놀, N-하이드록시벤조트리아졸, N-하이드록시피페리딘, N-하이드록시석신아미드, 2,4,5-트리클로로페놀 등과 반응시킴으로써 카복실 그룹을 활성 에스테르로 전환시킨다.
우론산 잔기의 카복실 그룹은 트리(n-부틸)아민 염, 트리 에틸아민 염, 피리딘 염과 같은 아민 염의 형태로 반응에 적용될 수 있다.
반응 용매로서, 디메틸포름아미드, 피리딘, 디메틸설폭사이드 등을 사용할 수 있다. 축합제로서 유용한 것에는 1-에틸-3-(디메틸아미노 프로필)카보디이미드, 디사이클로헥실카보디이미드 등이 있다.
반응은 0 내지 60℃, 바람직하게는 4 내지 20℃의 온도에서 수행할 수 있다.
카복실 그룹-활성화된 글리코스아미노글리칸을 인지질과 반응시킴으로써, 일반식(Ⅷ)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸을 수득한다.
상기 반응은, 활성화된 글리코스아미노글리칸을 디메틸 포름아미드, 클로로포름 또는 이들의 혼합물과 같은 용매중에서 0 내지 90℃, 바람직하게는 25 내지 60℃의 온도하에 인지질과 반응시킴으로 수행할 수 있다.
본 발명의 일반식(Ⅰ) 내지 (Ⅷ)의 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸의 인지질 또는 지질 부분의 함량은 0.005 내지 50%, 바람직하게는 2 내지 10%의 범위내일 수 있다.
상기한 각종 방법에 의해 수득된 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸의 분리 및 정제는 예를 들면 하기와 같은 방법으로 수행할 수 있다. 각각의 방법에 있어서의 최종 반응액을 나트륨 아세테이트로 포화시킨 에탄올과 혼합하고 생성된 침전물을 여과시켜 반응하지 않은 인지질 또는 지질을 제거한다. 이렇게 분리된 침전물을 소수성 크로마토그래피에 적용시키고, 담체를 암모늄 아세테이트, 염화암모늄, 염화나트륨 등과 같은 염의 수용액으로 세척하여 반응하지 않은 글로코스아미노글리칸을 제거한다. 그 후, 담체에 흡수된 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸을 10 내지 50% 메탄올 수용액으로 용출시킨다.
본 발명의 암 전이 억제제는 각각의 일반식(Ⅰ) 내지 (Ⅷ)의 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 약리학적으로 허용되는 이의 염을 의약용 고체 또는 액체 담체 또는 희석체, 즉 충전제, 안정화제 등과 같은 첨가제와 혼합함으로써 제조하는 것이 바람직할 수 있다.
인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸의 염 형태는 물에 가용성이기 때문에, 이를 주사용 액제로 제형화 시키는 것도 적합하다. 의약 제제중의 활성 성분의 양은 담체의 중량을 기준으로 하여 1 내지 90중량% 범위내에서 변화시킬 수 있다.
활성화 화합물은 입제, 미립제, 산제, 정제, 캡슐제, 환제 또는 액제, 및 괴상 산제의 형태로 경구투여하거나, 정맥내, 근육내 또는 피하내 주사로 투여할 수 있다. 활성화 화합물은 또한 좌제, 연고제, 카타플라스마제, 플라스터제, 찰제, 로션제 등과 같은 외용제제로서 사용할 수도 있다. 또한, 사용시 적합한 용액에 용해시키는 주사용 산제로 제조할 수도 있다.
본 발명의 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 함유하는 약제학적 제제에 있어서, 경구, 장, 비경구 또는 국소 투여용으로 허용가능한 모든 유기 또는 무기 및 고체 또는 액체 담체 또는 희석제를 사용할 수 있다. 본 발명에서 사용되는 담체에는 물, 젤라틴, 락토오즈, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 활석, 동물성 및 식물성 오일, 벤질 알콜, 고무, 폴리알킬렌 글리콜, 석유 수지, 코코넛 오일, 라놀린 및 의약용 기타 담체가 포함된다. 또한, 안정화제, 습윤제, 유화제, 및 약제학적 제제의 삼투압을 조정하거나 적합한 pH치를 유지시키기 위한 염을 가할 수도 있다. 입제, 미립제, 산제, 정제 또는 캡슐제의 경우에 있어서, 약제학적 제제는 본 발명의 활성성분을 바람직하게는 5 내지 80중량%의 양으로 함유할 수 있으며, 액제의 경우에 있어서는 바람직하게는 1 내지 30중량%의 양으로 함유할 수 있다. 또한, 활성 성분의 바람직한 함량은 주사제의 경우에는 1 내지 10중량%, 좌제의 경우에는 1 내지 50중량%, 국소 투여시 사용하기 위한 연고제, 카타플라스마제 등의 경우에는 0.1 내지 10중량% 범위내일 수 있다.
임상적 투여량은 경구 투여의 경우 성인에 대해 활성성분의 양을 1일 100 내지 2,000㎎ 범위로 하는 것이 바람직하나, 상기 투여량은 연령 및 증상에 따라 변할 수 있다.
바람직하게는, 상기한 1일 투여량은 하루에 한번 또는 상기 투여량을 하루에 2 또는 3회로 분할해서 투여할 수 있다.
주사제로서 사용하는 경우, 바람직한 투여량은 성인에 대해 활성성분의 양을 1일 100 내지 1,000㎎의 범위로 할 수 있다. 연고제, 카타플라스마제 등으로서 사용하는 경우, 상기한 함량의 활성 성분을 함유하는 제제를 환부에 적당량 적용시킬 수 있다.
활성 성분의 급성 독성에 대한 동물시험을 하기 방법으로 수행한다. 생후 4주된 암수 Sic-ddy 마우스를 1주일 동안 예비사육하여, 숫컷의 체중이 23 내지 30g, 암컷의 체중이 20 내지 25g이 되게 성장시켰을때, HA1-PPEADP(롯트 번호 300) 및 CS(S3)-PPEADP(롯트 번호 302-2; PPEADP에 대해서는 후술될 것이다)를 5% 농도로 지정된 생리식염수(Pharmacopoea of Japan)에 용해시키고, 마우스에게 복강내 투여한다., 복강내 투여는 독성 증상의 가장 광범위한 발생이 유발되기 때문에 이러한 시험에 적용할 수 있다. 10마리의 숫컷과 10 마리의 암컷을 각 시험 그룹으로 사용한다. 결과적으로, 각 시험 플롯의 LD50치는 2,000mg/kg 이상인 것으로 밝혀져, 본 발명의 화합물이 약제로서 사용하기에 안전한 것으로 밝혀졌다.
[도면의 간단한 설명]
제1도 내지 제6도는 각각 실시예 1-(2)-1) 실시예 2-(2)-1), 실시예 2-(3), 실시예 4-(1), 실시예 5-(1) 및 실시예 5-(2)에서 생성된 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸의 소수성 크로마토그래피에 대한 데이터를 도시한 것이다.
[바람직한 발명의 실시양태]
본 발명은 하기 실시예를 참고로 하여 상세히 후술될 것이나, 이로서 본 발명의 범주를 제한하려는 것은 아니다.
하기 실시예에 있어서, 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸 중의 인, 인지질 또는 지질 및 글리코스아미노글리칸(GAG)의 함량은 하기 방법으로 측정한다.
[측정방법]
1. GAG의 측정
(1) 우론산을 함유하는 GAG : 카바졸 황산 방법(Bitter∼Muir 방법)[참조 : Analytical Biochemistry, 4, 330-334, 1962].
(2) 갈락토스를 함유하는 케라탄 설페이트 또는 케라탄 폴리설페이트 : 안트론(Anthrone)방법[참조 : Biochem J., 50, 298-303, 1952].
2. 인지질 또는 지질의 측정
(1) 인 : 몰리브덴 블루 방법[참조 : Inorganic Applied Colorimetric Analysis, vol. 4, pp. 130-135, 저자 Shiro Hirano, 출판 Kyoritsu Shuppan].
(2) 지방산 : GAG-지질 10 내지 50mg 분획을 1N 수산화나트륨 용액 10ml에 용해시키고, 100℃에서 1시간 동안 가수분해시킨다. 생성된 반응 혼합물의 pH를 1N 염산 용액을 사용하여 산성으로 조정하고 클로로포름으로 추출한 후, 클로로포름상을 물로 세척한다. 탈수된 Glauber 염을 사용하여 건조시킨 후, 용매를 감압하에서 제거한다. 생성된 잔사를 3% HCl(기체)을 함유하는 적당한 용적의 메탄올과 함께 튜브 중에서 밀봉시키고, 100℃에서 3시간 동안 가열시킨 후, 석유 에테르로 3회 추출시킨다. 생성된 석유 에테르 상을 물로 3회 세척하여 오염된 염산을 제거한다. Glauber 염을 사용하여 건조시킨 후, 생성물을 감압하에서 농축시키고 하기 기체-액체 크로마토그래피를 수행한다.
기체-액체 크로마토그래피(GLC)
GC-15A (Shimadzu Corp.)
적하재료 : PEG-HT 5% Uniport HP 60/80
(Gasukuro Kogyo Inc.)
조작 조건 : 기화실, 350℃
컬럼 온도 : 190 내지 200℃
컬럼 : 3Ø ×2m
유동 속도 : N245ml/분
[실시예1]
환원 말단 그룹의 제한된 산화에 의한 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸의 제조
(1) 환원 말단 그룹-제한 산화된 글리코스아미노글리칸의 제조
1)환원 말단 잔기-개열된 하이알루론산의 제조
하이알루론산[HA1; MW, 10,000; 맨드라미(cockscomb)에서 추출] 2,000mg 분획을 0.05M 붕산염 완충액(pH 8.3) 200ml에 용해시킨다. 수소화붕소나트륨 182mg을 가한 후, 생성된 혼합물을 실온에서 5시간 동안 항온처리함으로써 반응시킨다. 반응 혼합물의 pH를 아세트산을 사용하여 4.5로 조정한 후, 에탄올과 혼합하여 침전물을 형성시킨다. 이렇게 형성된 침전물을 에탄올로 세척하여 환원 말단 잔기-개열된 하이알루론산(R-HA1 : 롯트 번호 100) 1,800mg을 수득한다.
2)환원 말단 그룹-제한 산화된 하이알루론산의 제조
R-HA1(롯트 번호 100) 1,700mg 분획을 40mM 이미다졸(pH 6.5) 250ml에 용해시킨다. 과요오드산나트륨 139.96mg을 0℃에서 가한 후, 생성된 혼합물을 동일한 온도에서 1시간 동안 항온처리함으로써 반응시킨다. 에탄올을 반응 혼합물에 가하면 침전물이 형성된다. 이렇게 생성된 침전물을 에탄올로 세척하여 환원 말단 그룹-제한 산화된 하이알루론산(O-HA; 롯트 번호 200) 1,600mg을 수득한다.
3) 기타 환원 말단 그룹-제한 산화된 글리코스아미노글리칸(O-GAG)의 제조
각각의 출발물질로서, 하이알루론산(HA5; MW, 50,000: HA15; MW, 150,000: 맨드라미에서 추출), 콘드로이틴(CH: MW, 15,000: 산성 메탄올 용액을 사용하여 콘드로이틴 설페이트 A로부터 황산을 제거한 생성물), 콘드로이틴 설페이트 C[CS (S1); MW, 10,000: CS(S3); MW, 30,000: CS(S6); MW, 60,000: 상어 연골에서 추출], 콘드로이틴 설페이트 A[CS (W); MW, 30,000: 상어 연골에서 추출], 더마탄 설페이트(DS: MW, 15,000; 돼지 피부에서 추출), 헤파린(Hep; MW, 15,000; 돼지 소장에서 추출), 헤파란 설페이트(HS; MW, 15,000; 소 신장에서 추출) 및 케라탄 설페이트(KS; MW, 15,000; 소 각막에서 추출)를 사용하여, 표 6에 나타낸 조건하에서 상기한 공정 1)에 따라 환원 말단 잔기-개열된 글리코스아미노글리칸(R- GAG)을 제조한다. 이렇게 수득된 R-GAG 샘플을, 표 7에 나타낸 조건하에서 상기한 공정2)에 따라 반응시켜 환원 말단 그룹-제한 산화된 글리코스아미노글리칸(O-GAG)을 제조한다:
(2) L-(α포스파티딜)에탄올아민 디팔미토일-결합된 글리코스아미노글리칸(GAG-PPEADP)의 제조
1) L-(α-포스파티딜)에탄올아민 디팔미토일-결합된 하이알루론산의 제조
롯트 번호가 200인 O-HA 1,000mg을 0.05M 인산염 완충액(pH 7.0) 100ml에 용해시키고, 여기에 L-(α-포스파티딜)에탄올아민 디팔미토일(PPEADP)(1mg/ml)을 함유하는 클로로포름/메탄올 용매 시스템(2:1) 69.2ml를 가한다. 생성된 혼합물을 메탄올과 혼합하여 혼합물을 균질한 용액으로 만들고, 용액을 50℃에서 1시간 동안 항온처리한다. 생성된 반응 혼합물에 수소화시아노붕소나트륨 25mg을 가하고, 50℃에서 2시간 동안 계속 항온 처리한 후, 감압하에서 농축시킨다. 농축물에, 5배 용적의 아세트산-포화된 에탄올을 가하여 침전물을 형성시키고, 침전물을 여과에 의해 회수한다. 이렇게 수득된 침전물을 0.3M 염화암모늄 용액에 용해시키고, 소수성 크로마토그래피 컬럼(TSK gel Pheny1 Toyopear1 650M; 400ml)에 적용시킨 후, 0.3M 염화암모늄 용액을 사용하여 철저히 세척하고, 30% 메탄올 수용액으로 용출시킨다. 목적하는 반응 생성물은 30% 메탄올 분획중에서 발견되며, 반응하지 않은 HA1은 흡수되지 않아 세척된 분획 중에서 발견된다. 30% 메탄올-용출된 분획을 감압하에서 농축시키고, 투석에 의해 탈염시킨 후, 동결건조시켜 롯트 번호가 300인 백색 분말을 수득한다.
수득량 : 40mg
PPEADP 함량 : 6.21%
하이알루론산 함량 : 62.12%
소수성 크로마토그램 : 제1도에 나타냄
소수성 크로마토그래피는 하기 조건하에서 수행한다.
칼럼 : TSK gel Pheny1 5 PW(7.5Φ×7.5cm)
용매 : 0-5분, 0.3M 염화암모늄 용액
5-50분, 30% 메탄올 용액
유동속도 : 0.5ml/분
압력 : 7kg/0.5㎠
분획 용적 : 1ml/튜브
검출 : OD220nm
샘플 : 100㎕(0.3M 염화암모늄 중의 1mg/ml 용액)
2) 기타 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸의 제조
표 7에 나타낸 O-GAG 샘플 및 PPEADP로부터 표8에 나타낸 조건하에서 상기한 공정(2)-1)에 따라 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸을 제조한다. 이렇게 수득된 생성물의 분석 결과를 표8에 나타내었다 :
[실시예2]
환원 말단 그룹의 락톤화에 의한 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸의 제조
(1)환원 말단 그룹-산화된 글리코스아미노글리칸의 제조
1) 환원 말단 그룹-산화된 하이알루론산의 제조
하이알루론산(HA1; MW, 10,000; 맨드라미에서 추출) 500mg을 물 10ml에 용해시키고, 용액을 0.1M 요오드의 메탄올 용액 5ml와 혼합하고, 실온에서 6시간 동안 항온처리함으로써 반응시킨다. 생성된 반응 혼합물을 0.1N 수산화칼륨 약 5ml에 가하여 유리 요오드 분자를 탈색시킨다. 칼륨 아세테이트-포화된 에탄올을 생성된 용액에 가하여 침전물을 형성시키고, 침전된 생성물을 여과에 의해 수거하고, 에탄올로 철저히 세척한 후, 감압하에서 건조시킨다. 환원 말단 그룹-산화된 하이알루론산(롯트 번호 400) 423mg이 수득된다. Somogyi-Nelson 방법으로 검사하는 경우, 생성물중에서 환원당은 검출되지 않는다.
2) 환원 말단 그룹-락톤화된 하이알루론산의 제조
환원 말단 그룹-산화된 하이알루론산(롯트 번호 400) 400mg을 물 10ml에 용해시키고, 용액을 강산성 이온 교환 수지[Dowex 50(H )] 컬럼 50ml를 통해 1시간에 걸쳐 통과시킨다. 환원 말단 그룹-락톤화된 하이알루론산 390mg을 함유하는 용액이 수득된다. Somogyi-Nelson 방법으로 검사하는 경우, 용액중에서 환원당은 검출되지 않는다.
이렇게 생성된 용액을 트리-n-부틸아민을 사용하여 중화시키고, 계속해서 동결건조시켜, 환원 말단 그룹-락톤화된 하이알루론산의 트리-n-부틸아민 염(롯트 번호 500) 400mg을 수득한다.
3) 기타 환원 말단 그룹-락톤화된 글리코스아미노글리칸의 제조
각각의 출발물질로서, 콘드로이틴(CH; MW, 15,000), 콘드로이틴 설페이트 C[CS(S1); MW, 10,000: CS(S3); MW, 30,000; 및 CS(S6); MW, 60,000], 더마탄 설페이트(DS; MW, 15,000), 헤파린(Hep; MW, 15,000) 및 헤파란 설페이트(HS; MW, 15,000)를 사용하여 표 9에 나타낸 조건하에서 상기한 공정 1)에 따라 환원 말단 그룹-산화된 글리코스아미노글리칸을 제조한다. 이렇게 수득된 샘플을 표 10에 나타낸 조건하에서 상기한 공정 2)에 적용시켜 환원 말단 그룹-락톤화된 글리코스아미노글리칸을 수득한다 :
* Somgyi-Nelson: Somogyi-Nelson 방법에 의해 검출되는 환원당의 존재(+) 또는 부재(-)를 나타냄.
* Somgyi-Nelson: Somogyi-Nelson 방법에 의해 검출되는 환원 당의 존재(+) 또는 부재(-)를 나타냄.
(2) L-(α-포스파티딜)에탄올아민 디팔미토일-결합된 글리코스아미노글리칸(GAG-PPEADP)의 제조
1) L-(α-포스파티딜)에탄올아민 디팔미토일-결합된 하이알루론산의 제조
환원 말단 그룹-락톤화된 하이알루론산(롯트 번호 500) 400mg을 디메틸포름아미드 200ml에 용해시키고 여기에 클로로포름중에 용해된 PPEADP 27.6mg을 가한다. 생성된 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 항온처리한다. 증류에 의해 반응 혼합물로부터 클로로포름을 제거한 후, 잔사에 과 용적의 나트륨 아세테이트 수용액을 가하여 반응 생성물을 나트륨 염으로 만든다. 여기에 나트륨 아세테이트-포화된 에탄올을 가하여 침전물을 형성시키고, 이렇게 형성된 침전물을 여과에 의해 수거한다. 침전물을 0.3M 암모늄 아세테이트 용액에 용해시키고, 실시예 1-(2)의 공정에 따라 정제하여 목적 생성물(롯트 번호 600) 36mg을 수득한다.
인 함량 : 0.30%
PPEADP 함량 : 6.44%
하이알루론산 함량 : 82.37%
소수성 크로마토그램:
제2도에 도시측정 조건은 상기한 바와 같다.
(2) 기타 L-(α-포스파티딜)에탄올아민 디팔미토일-결합된 글리코스아미노글리칸의 제조
이들 샘플을, 표 10에 나타낸 환원 말단 그룹-락톤화된 글리코스아미노글리칸 및 PPEADP 로부터 표 11에 나타낸 조건하에서 상기한 공정 (2)-1에 따라 제조한다. 이렇게 수득된 생성물의 분석 결과를 표 12에 나타내었다 :
(3) 포스파티딜세린 스테아로일팔미토일-결합된 콘드로이틴 설페이트 C의 제조
환원 말단 그룹-락톤화된 콘드로이틴 설페이트 C(롯트번호 500-2) 400mg을 디에틸포름아미드 200ml에 용해시키고, 여기에 클로로포름 중의 포스파티딜세린 스테아레이트 팔미테이트 9mg을 가한다. 생성된 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 항온처리한다. 증류에 의해 반응 혼합물로부터 클로로포름을 제거한 후, 잔사에 과 용적의 나트륨 아세테이트 수용액을 가하여 반응 생성물을 나트륨 염으로 만든다. 여기에 나트륨 아세테이트-포화된 에탄올을 가하여 침전물을 형성시키고, 이렇게 형성된 침전물을 여과에 의해 수거한다. 침전물을 0.3M염화암모늄 용액에 용해시키고, 실시예 1-(2)의 공정에 따라 정제하여, 포스파티딜세린 스테아로일팔미토일-결합된 콘드로이틴 설페이트 C(롯트 번호 700-2) 20.8mg을 수득한다.
인 함량 : 0.10%
콘드로이틴 설페이트 C 함량 : 86.15%
소수성 크로마토그램 :
제3도에 도시 측정조건은 상기한 바와 같다.
[실시예 3]
환원 말단 그룹의 아민화에 의한 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸의 제조
(1) 환원 말단 그룹-아민화된 글리코스아미노글리칸의 제조
1) 환원 말단 그룹-아민화된 콘드로이틴 설페이트 c[CS(S3)]의 제조
환원 말단 그룹-제한 산화된 콘드로이틴 설페이트 C(롯트번호 202-2) 100mg을 0.05M 인산염 완충액(pH 7.0) 50ml에 용해시키고, 용액을 에틸렌디아민 하이드로클로라이드 24mg과 혼합한다. 생성된 혼합말을 50℃에서 30분 동안 항온처리한 후, 수소화시아노붕소나트륨 20mg을 반응 혼합물에 가하고, 50℃에서 2시간 동안계속 항온처리하여 반응을 완료시킨다. 생성된 반응 혼합물에 나트륨 아세테이트-포화된 에탄올을 가하여 반응 생성물을 침전시킨 후 여과에 의해 수거한다. 침전물을 물에 용해시키고, DEAE-이온 교환 수지 50ml에 흡수시킨 후, 0.1 내지 1M 염화나트륨 수용액으로 경사 용출시킨다. 환원 말단 그룹-아민화된 콘드로이틴 설페이트 C를 0.4M 염화나트륨으로 용출시키면서, 유리 콘드로이틴 설페이트 C를 0.75M 염화나트륨으로 용출시킨다. 0.4M 염화나트륨 분획을 투석에 의해 탈염시킨 후, 동결건조시켜 환원 말단 그룹-아민화된 콘드로이틴 설페이트 C(롯트번호 802-2) 80mg을 수득한다.
2) 환원 말단 그룹-아민화된 헤파린 (Hep)의 제조
환원 말단 그룹-제한 산화된 헤파린 (롯트번호 205) 100mg을 사용하는 것을 제외하고는 상기한 공정을 반복수행한다. 그리하여, 환원 말단 그룹-아민화된 헤파린 (롯트 번호 805) 77mg을 수득한다.
(2) 지질의 석신산 유도체의 제조
1) 글리세롤 모노스테아레이트의 석신산 에스테르의 제조
글리세를 모노스테아레이트 10.74g을 피리딘 3ml를 함유하는 벤젠 200ml에 용해시킨다. 석신산 무수물 6g을 가한후, 생성된 혼합물을 6시간 동안 환류시킨다. 생성된 반응 혼합물을 감압하에서 농축시키고, 이렇게 형성된 침전물을 아세톤으로부터 재결정화시켜 글리세롤 모노스테아레이트의 석신산 에스테르 8.2g을 수득한다.
2) N-하이드록시석신산 이미드와 글리세롤 모노스테아레이트의 석신산 에스테르로부터의 활성 에스테르의 제조
상기한 공정 1)에서 수득된 에스테르 8g을 벤젠에 용해시키고, 용액을 N-하이드록시석신산 이미드 2g 및 디사이클로 헥실카보디이미드 10g과 혼합한다. 생성된 혼합물을 실온에서 20시간 동안 항온처리한 후, 반응 혼합물을 갑압하에서 농축시켜 반응 생성물의 침전물을 수득한다. 침전물을 벤젠/n-헥산 용매시스템으로부터 재결정화시켜 목적하는 활성 에스테르(롯트 번호 GMS-1) 7.4g을 수득한다.
(3) 글리세롤 모노스테아레이트-결합된 콘드로이틴 설페이트 C의 제조
환원 말단 그룹-아민화된 콘드로이틴 설페이트 C(롯트번호 802-2) 80mg를 물 5ml에 용해시킨다. 생성된 용액을 디메틸포름아미드에 용해된 활성 에스테르(롯트 번호 GMS-1) 6.95mg과 혼합한다. 생성된 혼합물을 실온에서 20시간 동안 항온처리하고, 반응 혼합물을 나트륨 아세테이트-포화된 에탄올과 혼합하여 반응 생성물을 침전시킨 후, 여과에 의해 수거한다. 이렇게 수거된 침전물을 0.3M 염화암모늄 수용액에 용해시키고, 생성된 용액을 실시예 1-(2)-1)의 공정과 동일한 공정으로 정제하여 목적 화합물(롯트 번호 902-2) 38mg을 수득한다.
스테아르산 함량 : 0.86%
콘드로이틴 설페이트 C 함량 : 98.2%
(4) 인지질의 석신산 유도체의 제조
1) 라이소레시틴의 석신산 에스테르의 제조
구조식의 라이소레시틴 495mg을 클로로포름 200ml에 용해시킨다.
생성된 용액에 석신산 무수물 100mg 및 피리딘 79mg을 가한다.
혼합물을 실온에서 20시간 동안 항온처리한 후, 반응 혼합물을 감압하에서 농축시켜 침전물을 형성시킨다. 이렇게 형성된 침전물을 아세톤으로부터 재결정화시켜 라이소레시틴의 석신산 에스테르를 수득한다.
2) N-하이드록석신산 이미드와 라이소레시틴의 석신산 에스테르로부터의 활성 에스테르의 제조
상기에서 수득된 에스테르 288.5mg을 디메틸포름아미드에 용해시키고, 용액을 N-하이드록시석신산 이미드 57.5mg 및 디사이클로헥실카보디이미드 103mg과 혼합한다. 이렇게 제조된 혼합물을 실온에서 20시간 동안 항온처리한 후, 생성된 반응 혼합물로부터 침전된 물질을 제거하여 목적하는 활성 에스테르의 디메포름아미드 용액을 수득한다.
(5) 라이소레시틴-결합된 글리코스아미노글리칸의 제조
5) 라이소레시틴-결합된 콘드로이틴 설페이트 C의 제조
상기한 공정 (4)-2)에서 수득된 활성 에스테르의 디메틸 포름아미드 용액을 환원 말단 그룹-아민화된 콘드로이틴
설페이트 C(롯트 번호 802-2) 1g의 수용액과 혼합하고, 혼합물을 실온에서 20시간 동안 항온처리하여 반응을 수행한다. 반응 생성물을 실시예 1의 공정에 따라 소수성 크로마토그래피시킴으로써 정제한다.
수득량 : 0.52%
인 함량 : 0.105%
라이소레시틴 함량 : 1.96%
콘드로이틴 설페이트 함량 : 98.04%
황 함량 : 5.78%
(6) 글리세롤 디스테아레이트-결합된 콘드로이틴 설페이트 C의 제조
글리세롤 디스테아레이트의 석신산 에스테르의 활성 에스테르(롯트 번호 GDS-2)를 상기한 공정 (2)-2)에 따라 제조한다.
이를, 상기한 공정 (3)에 따라, 상기한 공정 (1)-1)에서 수득한 환원 말단 그룹-아민화된 콘드로이틴 설페이트 C(롯트 번호 802-2)와 반응시킨 후, 정제한다. 목적 화합물(롯트 번호 904) 27mg을 수득한다.
[실시예 4]
축합제를 사용한 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸의 제조
(1) L-( α-포스파티딜)에탄올아민 디팔미토일-결합된 콘드로이틴 설페이트 C의 제조
콘트로이틴 설페이트 C[CS (S3)의 트리-n-부틸아민 염400mg을 디메틸포름아미드 100ml에 용해시킨다. 생성원 용액에 클로로포름에 용해된 PPEADP 6.92mg 및 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드 38.4mg을 가한다. 생성된 혼합물을 실온에서 20시간 동안 항온처리하여 반응을 수행한다. 감압하에서 농축시킨 후, 농축물에 과 용적의 나트륨 아세테이트 수용액을 가하여 반응생성물을 나트륨 염으로 만든다. 여기에 에탄올을 가하여 염을 침전시키고, 이렇게 형성된 침전물을 여과에 의해 수거한다. 침전물을 0.3M 염화암모늄 용액에 용해시킨 후, 실시예 1-(2)-1)의 공정에 따라 정제한다. 목적 화합물(롯트 번호 1002-2) 63mg를 수득한다.
인 함량 : 0.099%
PPEADP 함량 : 2.25%
콘드로이틴 설페이트 C 함량 : 96.61%
소수성 크로마토그램 :
제 4도에 도시 측정 조건은 상기한 바와 같다.
(2) 기타 L-( α-포스파티딜)에탄올아민 디팔미토일-결합된 글리코스아미노글리칸 (GAG-PPWADP)의 제조
인지질-결합된 글리코스아미노글리칸을 표 13에 나타낸 조건하에서 상기한 공정(1)에 따라 다양한 글리코스아미노글리칸 및 PPEADP로부터 제조한다. 이렇게 수득된 생성물의 분석 결과를 표 14에 나타내었다 :
*1: 트리-n-부틸아민 염
[실시예 5]
글리코스아미노글리칸-활성화 방법에 의한 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸의 제조
(1) L-( α-포스파티딜)에탄올아민 디팔미토일-결합된 콘드로이틴 설페이트 C의 제조
콘트로이틴 설페이트 C[CS (S3)의 트리-n-부틸아민 염400mg을 DMF 300ml에 용해시키고, 생성된 용액에서 N-하이드록시석신이미드 9.9mg 및 디사이클로헥실카보디이미드 20.6mg 가한다. 생성된 혼합물을 20시간 동안 실온에서 항온 처리하고, 과 용적의 나트륨을 아세테이트 수용액을 생성된 반응용액에 가하여 반응 생성물을 나트륨 염으로 만든후, 에탄올을 가하고 형성된 침전물을 여과에 의해 수거한다. 이렇게 수거된 침전물을 즉히 물 30ml에 용해시키고, 용액을 클로로포름에 용해된 PPEADP 6.92g과 혼합한다. 여기에 디메틸포름아미드를 추가로 가하여 균일한 용액을 수득한다. 이렇게 수득된 용액을 6시간 동안 실온에서 항온처리한후, 반응 혼합물을 감압하에 농축시키고, 아세트산-포화된 에탄올과 혼합하여 침전물을 형성한다. 이어서, 이렇게 형성된 침전물을 여과에 의해 수거하고, 0.3M 암모늄 아세테이트 용액에 용해시킨 후, 실시예 1-(2)-1)의 공정에 따라 정제한다. 이렇게하여, 목적 화합물(롯트 번호 1102-2) 29.7mg을 수득한다.
인 함량 : 0.100%
PPEADP 함량 : 2.16%
콘드로이틴 설페이트 C 함량 : 96.68%
소수성 크로마토그램 :
제 5도에 도시측정 조건은 상기한 바와 같다
(2) L-( α-포스파티딜)에탄올아민 디팔미토일-결합된 콘드로이틴 폴리설페이트의 제조
콘드로이틴 폴리설페이트 [CSP (II)]의 트리-n-부틸아민염 (황 함량, 13.0%; 분자량, 10,000) 1g을 디메틸포롬아미드 50ml에 용해시킨다. 생성된 용액에 N-하이드록시석신이미드 1770mg 및 디사이클로헥실카보디이미드 318mg을 가한다. 생성된 혼합물을 4℃에서 밤새 항온처리한다. 물 10ml을 반응 혼합물에 가하고, 혼합물을 15분 동안 실온에서 추가로 반응시킨다. 형성된 침전물을 제거시킨 후, 생성된 용액을 클로로포름에 용해된 포스파티딜 에탄올아민 디팔미토일(PPEADP) 69.2g과 혼합하고, 혼합물을 6시간 동안 실온에서 반응시킨다.
생성된 반응 혼합물을 감압하에 농축시키고, 나트륨 아세테이트-포화된 에탄올과 혼합하여 침전물을 형성한다. 이어서, 이렇게 -형성된 침전물을 여과에 의해 수거하고, 0.3M 암모늄 아세테이트 용액에 용해시킨 후, 실시예 1-(2)-1)의 공정에 따라 정제한다.
이렇게하여, 목적 화합물 (롯트 번호 1108)67mg을 수득한다.
인 함량 : 0.291%
PPEADP 함량 : 6.5%
콘드로이틴 폴리설페이트 함량 : 92.8%
황 함량 : 12.05%
소수성 크로마토그램 :
제6도에 도시측정 조건은 상기한 바와 같다
[실시예 6]
배양 접시에 피브로넥틴-피복된 내벽상에 적층된 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸 층에 대한 BHK세포의 부착
96-웰 배양 평판의 각 웰을 소 혈청-유도된 피브로넥틴의 5μg/ml 용액 100μ1로 피복시킨다. 세척후, 각각의 웰을 표N에 나타낸 농도로, 실시예 1내지 5에서 수득된 각각의 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸 100μ1로 추가로 피복 시킨다.
이와는 별도로, 100mm 직경의 접시에서 배양된 BHK 세포 (갖태어난 햄스터 신장 세포)를 5분동안 37℃에서 0.1mg/ml트립신 용액 5ml로 처리한다. 이렇게 처리된 세포에 대두트립신 억제제의 1mg/ml용액 5ml을 가하여 트립신을 불활성화 시킨다. 이어서, 이렇게 분리된 세포를 원심분리에 의해 수거하고, 2회 세척한후, 1×105개의 세포/ml의 밀도로 단일 세포현탁액으로 만든다.
이렇게-수득된 단일 세포 현탁액(1×104개의 세포) 100μ1 분획을 상기한 바와 같이 피브로넥틴 및 인지질- 또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸으로 이중-피복된 배양 평판의 각 웰에 붓는다. 1시간 동안 37℃에서 배양한후, 부착하지 않은 세포를 세척해내고, 남아있는 부착 세포를 2% 포름알데하이드로 고정시킨 후, 부착 세포의 수를 역상 현미경으로 직접 센다.
표 15은 부착 세포수의 농도-의존적 변화를 나타낸다. 각각의 데이타은 3회 또는 4회 측정한 값의 평균값이며, 각 실험에서의 오차(표준 편차)또한 나타내었다.
유리 글리코스아미노글리칸 또는 결합되지 않은 지질을 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸 대신 사용하는 경우, 고농도에서도 세포 부착-억제 효과를 나타내지 않았다.
[실시예 7]
세포 부착 물질에 의한 다양한 배양된 세포주의 세포 부착을 억제하기 위한 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸의 효과
실시예 1 내지 5에서 수득된 인지질- 또는 지질- 결합된 글리코스아미노글리칸에 대해, 세포주로서 BHK 21(갓 태어난 햄스터 신장 세포), CEF (조류 배 섬유아세포), B16F10 (고전이 마우스 흑색종 세포), CHO (차이니즈 햄스터 난소 세포) 및 baEC (소 대동맥 내피 세포) 및 세포 부착 물질로서 피브로넥틴 (FN), 라미닌(LN), 콜라겐 제 1형(Co1I) 및 비트로넥틴(VN)를 사용하여 세포 부착 물질에 의한 다양한 세포주의 세포 부착을 억제하는 효과를 시험한다.
소 혈장으로부터 유도된 피브로넥틴, 마우스 EHS 종양 세포로부터 유도된 라미닌, 랫드 대퇴로부터 유도된 콜라겐 제 1형 및 소혈청-유도된 비트로넥틴 각각 5μg/ml 분획을 96-웰 배양 평판상에 피복하고, 실시예 1 내지 5에서 수득된 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸 각각을 실시예 6에서와 동일한 방법으로 추가로 피복시킨다. 이어서, BHK 21, CEF B16F10, CHO 및 baEC 세포 각각의 단일 세포 현탁액 (1×104개의 세포) 100μ1 분획을 각각의 웰에 부어 세포 부착의 변화를 관측한다. 대조군으로서, 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸을 사용하지 않는 것만 제외하고는 동일한 공정을 반복하고, 이때 생성된 세포 부착을 100%로 나타낸다. 결과가 표 16에 나타나 있다.
표 16에서, 상대적 부착 세포수를 -(부착되지 않거나 거의 부착되지 않음: 0 내지 10% 미만 부착됨), +(10내지 30% 미만 부착됨), ++(30내지 50% 미만 부착됨), +++(50내지 70% 미만 부착됨), ++++(70내지 90% 미만부착됨) 및 +++++(90 내지 100% 부착됨)로 반-정량적으로 나타내었다.
[실시예 8]
혈관 내피 배양 세포의 세포의 매트릭스에 대한 고전이 암세포의 부착을 억제하기 위한 인지일-결합된 콘드로이틴 설페이트 C의 효과
마우스 혈관 내피 세포를 콜라겐 제1형으로 피복시킨 24-웰 배양 평판에서 배양하여 세포를 유착 성장시킨다. 세포 단일층을 30분동안 실온에서 0.5% Triton X-100으로 처리하고, 세포 층의 붕해된 단편들을 Dulbecco PBS(+) 완충액으로 세척하여 내피 세포의 세포의 매트릭스를 수득한다.
이와는 별도로, 직경이 100mm인 접시에서 배양된 마우스-유도된 고전이 암세포(B16F10)을 5분 동안 37℃에서 트립신 용액[0.1mg/ml PBS(-)] 5ml로 처리하고, 이렇게 -처리된 세포에 대두 트립신 억제제의 1mg/ml 용액 5ml을 가하여 트립신을 불활성화시킨다. 이어서, 이렇게 -분리된 세포를 원심분리에 의해 수거하고, 인산염 완충액 [PBS(-)]으로 2회 세척한후, 2 ×105개의 세포/ml의 밀도로 단일 세포 현탁액(Hank BSS-20mM HEPES, pH 7.4)으로 만든다.
롯트 번호가 602-2인 인지질-결합된 콘드로이틴 설페이트 C [CS(S3)-PPEADP] 및 이렇게-제조된 B16F10의 단일 세포 현탁액 (1 × 105개의 세포) 500μl를 상술한 세포의 매트릭스-함유 24-웰배양 평판의 각 웰에 옮기고, 5% 이산화탄소로 충전된 배양기에서 1시간 동안 37℃ 에서 정적으로 배양한다.
각 웰에서의 상등액을 조심스럽게 취하고, 잔사를 Hank 완충액으로 조심스럽게 1회 세척한 후, 두 액체 분획을 합한다.
이어서, 합한 샘플중 세포수를 세포 계수기(Coleter Electronics)로 세어 세포의 매트릭스에 부착하지 않은 세포수를 센다. 롯트 번호가 602-2인 화합물을 함유하지 않은 (첨가하지 않은 ) 완충 용액 및 유리 콘드로이틴 설페이트 C를 함유하는 완충액을 대조군으로 사용한다.
세포의 부착율을 초기에 가해진 총 세포로부터 측정된 부착되지 않은 세포수를 빼고 이를 총 세포수로 나누어 계산한다. 결과가 표 17에 나타나 있다.
상기 결과로부터 명백한 바와 같이, 본 발명의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸은 혈관 내피 세포의 세포의 매트릭스로의 고전이 암세포의 부착을 억제할 수 있으며, 반면에 유리 콘드로이틴 설페이트 C 는 이러한 효과를 나타내지 않는다.
[실시예 9]
고전이 암세포의 전이를 억제하기 위한 인지질-결합된 콘드로이틴 설페이트 C의 효과
직경이 100mm인 접시에서 배양된 마우스-유도된 고전이 암세포(B16F10)를 5분 동안 37℃에서 EATA 용액[0.02%/PBS(-)]5ml로 처리하고, 피펫팅에 의해 세포를 분리한다. 세포를 원심분리에 의해 수거하고, 인산염 완충액[PBS(-)]로 2회 세척한후, 1 × 10 개의 세포/ml의 밀도로 단일세포 현탁액을 만든다. 이 세포 현탁액(10 개의 세포) 0.1ml 분획을 롯트 번호가 602-2인 [CS(S3))-PPEADP) 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸(0.1mg, 1mg 또는 5mg/0.1ml)의 PBS 용액 0.1ml과 혼합하고, 생성된 혼합물을 꼬리 정맥을 통해 C57BL/6 마우스에게 투여한다. 투여2주후 개흉술을 수행하여 허파의 표면에 전이된 흑색종 콜로니의 수를 센다. 롯트 번호가 602-2인 [CS(S3)-PPEADP] 화합물을 함유하지 않는(첨가하지 않은) 완충액 및 유리 콘드로이틴 설페이트 C를 함유하는 완충액을 대조군으로 사용한다.
표 18는 마우스당 허파의 표면에 전이된 콜로니의 수를 측정한 결과를 나타낸다.
암세포의 전이는 인지질-결합된 콘드로이틴 설페이트 C의 투여량이 증가함에 따라 억제된다. 이들 결과로부터 명백한 바와 같이, 본 발명의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸은 고전이 암 세포의 전이를 억제할 수 있다. 유리 콘드로이틴 설페이트 C도 전이를 억제하였으나, 이의 효과는 인지질-결합된 콘드로이틴 설페이트 C의 효과보다 열등하다(p 0.001).
[산업상의 이용성]
부착-억제 활성을 갖고 독성이 없는, 본 발명의 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염은 전이 억제제로서 유용하다.

Claims (26)

  1. 하기 일반식(I)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염.
    상기식에서, P1은 1급 아미노 그룹을 갖는 인지질이며, (1) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 하이알루론산, 콘드로이틴, 콘드로이틴 설페이트 A, C 또는 E, 더마탄 설페이트 또는 헤파린의 글리코스아미노글리칸 잔기이거나 GAG가 환원 말단 이두론산 잔기를 제외한 더마탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하고, R3는 3-위치에 위치하며, R2는 COOH그룹이고, R3는 OH 그룹이며, (2) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 K 또는 콘드로이틴 폴리설페이트의 글리코스 아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하고, R3는 3-위치에 위치하며, R2는 COOH그룹이고, R3는 OSO3H 그룹이며, (3) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하고, R3는 4-위치에 위치하며,R2는 CH2OH그룹이고, R3는 OH 그룹이며, (4) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하고,R3는 4-위치에 위치하며, R2는 CH2OSO3H 그룹이고, R3는 OH 그룹이다.
  2. 하기 일반식(II)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염.
    상기식에서, P1은 1급 아미노 그룹을 갖는 인지질이며, (1) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 하이알루론산 또는 콘드로이틴의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, R1은 NHCOCH3그룹이고, R3는 OH 그룹이며, (2) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 A 또는 K, 콘드로이틴 폴리설페이트 또는 더마탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, R1은 NHCOCH3그룹이고, R3는 OSO3H그룹이며, (3) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 설페이트 또는 케라탄 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, R1및 R3는 각각 OH 그룹이다.
  3. 하기 일반식(III)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염.
    상기식에서, P1은 1급 아미노 그룹을 갖는 인지질이고, GAG는 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 설페이트 또는 케라탄 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기이다.
  4. 하기 일반식 (IV)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염.
    상기식에서, p1은 1급 아미노 그룹을 갖는 인지질이고, (1) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 하이알루론산, 콘드로이틴, 콘드로이틴 설페이트 A, C 또는 E, 더마탄 설페이트, 헤파린 또는 헤파란 설페이트의 글리코스 아미노글리칸 잔기이거나 GAG가 환원 말단 이두론산 잔기로서 제외한 더마탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하며, R3는 3-위치에 위치하고, R1은 OH 그룹이며, R2는 COOH 그룹이고, R3는 OH 그룹이며, (2) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 D의 글리코스아미노글리칸 잔기이거나 GAG가 환원 말단 이두론산 잔기를 제외한 헤파린 또는 헤파란 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하고, R3는 3-위치에 위치하며, R1는 OSO3H 그룹이고, R2는 COOH 그룹이며, R3는 OH 그룹이고, (3) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기 제외한 콘드로이틴 설페이트 K의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4위치에 위치하며, R3는 3-위치하고, R1는 OH 그룹이며, R2는 COOH 그룹이고, R3는 OSO3H 그룹이며, (4) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 콘드로이틴 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우야, GAG는 4-위치에 위치하고, R3는 3-위치에 위치하며, R1및 R3중의 하나 이상은 OSO3H 그룹이고, 다른 하나는 OH그룹이며, R2는 COOH 그룹이고, (5) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R1및 R3는 각각 OH 그룹이며, R2는 CH2OH그룹이고, (6) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R1및 R3는 각각 OH 그룹이며, R2는 CH2OSO3H 그룹이고, (7) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기 제외한 하이알루론산 또는 콘드로이틴의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R1은 NHCOCH3그룹이며, R2는 CH2OH 그룹이고, R3는 OH그룹이며, (8) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기 제외한 콘드로이틴 설페이트 A 또는 K 또는 더마탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하고, R3는 4-위치에 위치하며, R1은 NHCOCH3그룹이고, R2는 CH2OH그룹이며 R3는 OSO3H 그룹이고, (9) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 C 또는 D의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R1은 NHCOCH3그룹이며, R2가 CH2OSO3H 그룹이고, R3는 OH그룹이며, (10) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 E의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하고, R3는 4-위치에 위치하며, R1은 NHCOCH3그룹이고, R2는 CH2OSO3H 그룹이며, R3는 OSO3H 그룹이고, (11) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 콘드로이틴 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R1은 NHCOCH3그룹이며, R2는 CH2OH 그룹이고,R3는 OSO3H 그룹이거나, R2는 CH2OSO3H 그룹이며, R3은 OH 그룹 또는 OSO3H그룹이고, (12) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 헤파린의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치 하고, R3는 3-위치에 위치하며, R1는 NHSO3H 그룹이고, R2는 CH2OSO3H 그룹이며, R3는 OH 그룹이고, (13) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 헤파란 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하며, R3는 3-위치에 위치하고, R1는 NHCOCH3그룹 또는 NHSO3H 그룹이며, R2는 CH2OH 그룹이고, R3는 OSO3H 그룹이거나, R2는 CH2OSO3H 그룹이며, R3는 OH 그룹 또는 OSO3H 그룹이고, (14) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기 제외한 케라탄 설페이트 또는 케라탄 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하며, R3는 3-위치에 위치하고, R1는 NHCOCH3그룹이며, R2는 CH2OSO3H그룹이고, R3은 OH 그룹이다.
  5. 하기 일반식(V)의 인지질- 또는 지질- 결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염.
    상기식에서, P2는 인지질 또는 지질이고, m은 1내지 8의 정수이며, ℓ은 1내지 10의 정수이고, (1) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 하이알루론산, 콘드로이틴, 콘드로이틴 설페이트 A, C 또는 E, 더마탄 설페이트, 헤파린 또는 헤파란 설페이트의 글리코스 아미노글리칸 잔기이거나 GAG가 환원 말단, 이두론산 잔기를 제외한 더마탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하며, R3는 3-위치에 위치하고, R2는 COOH그룹이며, R3는 OH그룹이고, (2) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 K 또는 콘드로이틴 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하며, R3는 3-위치에 위치하고, R2는 COOH 그룹이며, R3는 OSO3H 그룹이고, (3) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R2는 CH2OH그룹이며, R3은 OH그룹이고, (4) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R2는 CH2OSO3H그룹이며, R3는 OH그룹이다.
  6. 하기 일반식(VI)의 인지질- 또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염.
    상기식에서, P2는 인지질 또는 지질이며, m는 1 내지 8의 정수이고, ℓ은 1 내지 10의 정수이며, (1) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 하이알루론산 또는 콘드로이틴의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, R1은 NHCOCH3그룹이고, R3은 OH그룹이며, (2) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 A 또는 K, 콘드로이틴 폴리설페이트 또는 더마탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, R1은 NHCOCH3그룹이고 R3는 OSO3H그룹이며, (3) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 설페이트 또는 케라탄 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, R1및 R3는 각각 OH그룹이다.
  7. 하기 일반식(VII)의 인지질- 또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염.
    상기식에서, P2는 인지질 또는 지질이고, m은 1 내지 8의 정수이며,ℓ은 1내지 10의 정수이고, (1) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 하이알루론산, 콘드로이틴, 콘드로이틴 설페이트 A, C 또는 E, 더마탄 설페이트, 헤파린 또는 헤파란 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기이거나 GAG가 환원 말단 이두론산 잔기를 제외한 더마탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하며, R3는 3-위치에 위치하고, R1은 OH그룹이며, R2는 COOH그룹이고, R3는 OH그룹이며, (2) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 D의 글리코스아미노글리칸 잔기이거나 GAG가 환원 말단 이두론산 잔기를 제외한 헤파린 또는 헤파란 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하고, R3는 3-위치에 위치하며, R1는 OSO3H그룹이고, R2는 COOH그룹이며, R3는 OH그룹이고, (3) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 K의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하며, R3는 3-위치하고, R1는 OH그룹이며, R2는 COOH그룹이고, R3는 OSO3H그룹이며, (4) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 콘드로이틴 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하고, R3는 3-위치에 위치하며 R1및 R3중의 하나 이상은 OSO3H그룹이고, 다른 하나는 OH그룹이며, R2는 COOH그룹이고, (5) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R1및 R3는 각각 OH그룹이며, R2는 CH2OH그룹이고, (6) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R1및 R3는 각각 OH그룹이며, R2는 CH2OSO3H그룹이고, (7) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 하이알루론산 또는 콘드로이틴의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R1은 NHCOCH3그룹이며, R2는 CH2OH그룹이고, R3는 OH그룹이며, (8) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 A 또는 K 또는 더마탄 설페이트의 글리코스 아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하고, R3는 4-위치에 위치하며, R1은 NHCOCH3그룹이고, R2는 CH2OH 그룹이며, R3는 OSO3H그룹이고, (9) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 C 또는 D의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3은 4-위치에 위치하고, R1은 NHCOCH3그룹이며, R2가 CH2OSO3H 그룹이고, R3는 OH그룹이며, (10) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 E의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하고, R3는 4-위치에 위치하며, R1은 NHCOCH3그룹이고, R2는 CH2OSO3H 그룹이며, R3는 OSO3H그룹이고, (11) GAG가 환원 말단 헥소스아민을 잔기를 제외한 콘드로이틴 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R1은 NHCOCH3그룹이며, R2는 CH2OH그룹이고, R3는 OSO3H그룹이거나, R2는 CH2OSO3H그룹이며, R3는 OH그룹 또는 OSO3H그룹이고, (12) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 헤파린의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하고, R3는 3-위치에 위치하며, R1은 NHSO3H그룹이고, R2는 CH2OSO3H그룹이며, R3는 OH그룹이고, (13) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 헤파란 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하며, R3는 3-위치에 위치하고, R1은 NHCOCH3그룹 또는 NHSO3H그룹이며, R2는 CH2OH그룹이고, R3는 OSO3H그룹이거나, R2는 CH2OSO3H그룹이며, R3는 OH그룹 또는 OSO3H그룹이고, (14) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 케라탄 설페이트 또는 케라탄 폴리설페이트의 글리코스아미노 글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하며, R3는 3-위치에 위치하고, R1는 NHCOCH3그룹이며, R2는 CH2OSO3H그룹이고, R3는 OH그룹이다.
  8. 하기 일반식(VIII)의 인지질- 결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염.
    상기식에서, P1은 1급 아미노 그룹을 갖는 인지질이고, n은 글리코스아미노글리칸 중에 함유된 카복실 그룹의 수 이하인 정수이며, (1) GAG가 하이알루론산, 콘드로이틴, 콘드로이틴 설페이트 A, C 또는 E 또는 더마탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 쇄인 경우, R1및 R3는 각각 OH그룹이고, (2) GAG가 콘드로이틴 설페이트 D의 글리코스아미노글리칸 쇄인 경우, R1은 OSO3H그룹이며, R3는 OH 그룹이고, (3) GAG가 콘드로이틴 설페이트 K의 글리코스아미노글리칸 쇄인 경우, R1은 OH그룹이며, R3는 OSO3H그룹이고, (4) GAG가 콘드로이틴 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 쇄인 경우, R1및 R3중의 하나 이상은 OSO3H그룹이며, 다른 하나는 OH그룹이고, (5) GAG가 헤파린 또는 헤파란 설페이트의 글리코스아미노글리칸 쇄인 경우, R1은 OH그룹 또는 OSO3H그룹이며, R3는 OH그룹이다.
  9. 하기 일반식(I-1)의 글리코스아미노글리칸의 환원 말단 그룹을 환원 및 개열시켜 하기 일반식 (I-2)의 환원된 생성물을 수득하는 단계, 환원된 생성물을 산화시켜 하기 일반식 (I-3)의 산화된 생성물을 수득하는 단계 및 산화된 생성물의 알데하이드 그룹을 인지질의 1급 아미노 그룹과 반응시키는 단계를 포함하여, 제1항의 일반식(I)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 제조하는 방법.
    상기식에서, P1은 1급 아미노 그룹을 갖는 인지질이며, (1) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 하이알루론산, 콘드로이틴, 콘드로이틴 설페이트 A, C 또는 E, 더마탄 설페이트 또는 헤파린의 글리코스아미노글리칸 잔기 이거나 GAG가 환원 말단 이두론산 잔기를 제외한 더마탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하고, R3는 3-위치에 위치하며, R2는 COOH그룹이고, R3은 OH그룹이며, (2) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 K 또는 콘드로이틴 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하고, R3는 3-위치에 위치하며, R2는 COOH그룹이고, R3는 OSO3H그룹이며, (3) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하고, R3는 4-위치에 위치하며, R2는 CH2OH그룹이고, R3는 OH그룹이며, (4) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하고, R3는 4-위치에 위치하며, R2는 CH2OSO3H그룹이고, R3는 OH그룹이다.
  10. 하기 일반식(II-1)의 글리코스아미노글리칸의 환원 말단 그룹을 환원 및 개열시켜 하기 일반식 (II-2)의 환원된 생성물을 수득하는 단계,환원된 생성물을 산화시켜 하기 일반식 (II-3)의 산화된 생성물을 수득하는 단계 및 산화된 생성물의 알데하이드 그룹을 인지질의 1급 아미노 그룹과 반응시키는 단계를 포함하여, 제2항의 일반식(II)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 제조하는 방법.
    P1은 1급 아미노 그룹을 갖는 인지질이며, (1) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 하이알루론산 또는 콘드로이틴의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, R1은 NHCOCH3그룹이고, R3는 OH그룹이며, (2) GAG가 환원말단 헥소스아민 잔기를 제외한 콘드로이틴설페이트 A 또는 K, 콘드로이틴 폴리설페이트 또는 더마탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, R1은 NHCOCH3그룹이고, R3는 OSO3H그룹이며, (3) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 설페이트 또는 케라탄 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, R1및 R3는 각각 OH그룹이고, R은 OH 또는 OSO3H그룹이다.
  11. 하기 일반식(II-2)의 환원된 생성물을 산화시켜 하기 일반식 (11)의 산화된 생성물을 수득하는 단계 및 산화된 생성물의 알데하이드 그룹을 인지질 1급 아미노 그룹과 반응시키는 단계를 포함하여, 제3항의 일반식(III)의 인지질- 결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 제조하는 방법.
    상기식에서, P1은 1급 아미노 그룹을 갖는 인지질이고, GAG는 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 설페이트 또는 케라탄 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기이고, R1및 R2는 각각 OH그룹이다.
  12. 하기 일반식(12)의 글리코스아미노글리칸의 환원 말단 그룹을 산화 및 개열시켜 하기 일반식 (13)의 산화된 생성물을 수득하는 단계, 산화된 생성물로부터 하기 일반식 (14)의 락톤을 수득하는 단계 및 수득된 락톤을 인지질의 1급 아미노 그룹과 반응시키는 단계를 포함하여, 제4항의 일반식 (IV)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 제조하는 방법.
    상기식에서, P1은 1급 아미노 그룹을 갖는 인지질이고, (1) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 하이알루론산, 콘드로이틴, 콘드로이틴 설페이트 A, C 또는 E, 더마탄설페이트, 헤파린 또는 헤파란 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기이거나 GAG가 환원 말단 이두론산 잔기를 제외한 더마탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하며, R3는 3-위치에 위치하고, R1은 OH그룹이며, R2는 COOH그룹이고, R3는 OH그룹이며, (2) GAG가 환원 말단 글루쿠론산로서 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 D의 글리코스아미노글리칸 잔기이거나 GAG가 환원 말단 이두론산 잔기를 제외한 헤파린 또는 헤파란 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하고, R3는 3-위치에 위치하며, R1은 OSO3H그룹이고, R2는 COOH그룹이며, R3는 OH그룹이고, (3) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 K의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하며, R3는 3-위치에 위치하고, R1는 OH그룹이며, R2는 COOH그룹이고, R3은 OSO3H그룹이며, (4) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 콘드로이틴 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하고, R3은 3-위치에 위치하며, R1및 R3중의 하나 이상은 OSO3H그룹이고, 다른 하나는 OH그룹이며, R2는 COOH그룹이고, (5) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R1및 R3는 각각 OH그룹이며, R2는 CH2OH그룹이고, (6) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R1및 R3는 각각 OH그룹이며, R2는 CH2OSO3H그룹이고, (7) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 하이알루론산 또는 콘드로이틴의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R1은 NHCOCH3그룹이며, R2는 CH2OH그룹이고, R3는 OH 그룹이며, (8) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 A 또는 K 또는 더마탄 설페이트의 글리코스 아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하고, R3는 4-위치에 위치하며, R1은 NHCOCH3그룹이고, R2는 CH2OH 그룹이며, R3는 OSO3H그룹이고, (9) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 C 또는 D의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R1은 NHCOCH3그룹이며, R2가 CH2OSO3H그룹이고, R3는 OH그룹이며, (10) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 E의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하고, R3는 4-위치에 위치하며, R1은 NHCOCH3그룹이고, R2는 CH2OSO3H그룹이며, R3는 OSO3H그룹이고, (11) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 콘드로이틴 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R1은 NHCOCH3그룹이며, R2는 CH2OH그룹이고, R3는 OSO3H그룹이거나, R2는 CH2OSO3H그룹이며, R3는 OH그룹 또는 OSO3H그룹이고, (12) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 헤파린의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하고, R3는 3-위치에 위치하며, R1는 NHSO3H그룹이고, R2는 CH2OSO3H그룹이며, R3는 OH 그룹이고, (13) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 헤파란설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하며, R3는 3-위치에 위치하고, R1은 NHCOCH3그룹 또는 NHSO3H그룹이며, R2는 CH2OH 그룹이고, R3는 OSO3H 그룹이거나, R2는 CH2OSO3H그룹이며, R3는 OH그룹 또는 OSO3H 그룹이고, (14) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 케라탄 설페이트 또는 케라탄 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하며, R3는 3-위치에 위치하고, R1는 NHCOCH3그룹이며, R2는 CH2OSO3H그룹이고, R3는 OH그룹이고, A는 알칼리 금속이다.
  13. 하기 일반식 (I-3)의 알데하이드 화합물을 알킬렌디아민과 반응시켜 하기 일반식 (15)의 유도체를 수득하는 단계, 인지질 또는 지질을 디카복실산 또는 디카복실산 무수물과 반응시켜 카복실 그룹을 갖는 인지질 또는 인지질 유도체를 수득하는 단계및 일반식 (15)의 유도체의 1급 아미노 그룹을 인지질 또는 지질 유도체의 카복실 그룹과 반응시키는 단계를 포함하여, 제5항의 일반식(V)의 인지질 또는 지질 - 결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 제조하는 방법.
    상기식에서, P2는 인지질 또는 지질이고, m은 1내지 8의 정수이며, ℓ은 1내지 10의 정수이고, (1) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 하이알루론산, 콘드로이틴, 콘드로이틴 설페이트 A, C 또는 E, 더마탄 설페이트, 헤파린 또는 헤파란 설페이트의 글리코스 아미노글리칸 잔기이거나 GAG가 환원 말단 이두론산 잔기를 제외한 더마탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하며, R3는 3-위치에 위치하고, R2는 COOH그룹이며, R3는 OH그룹이고, (2) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 콘드로이킨 설페이트 K 또는 콘드로이틴 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하며, R3는 3-위치에 위치하고, R2는 COOH그룹이며, R3는 OSOOH그룹이고, (3) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R2는 CH2OH그룹이며, R3는 OH그룹이고, (4) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R2는 CH2OSO3H그룹이며, R3는 OH그룹이다.
  14. 하기 일반식(II-3)의 알레하이드 화합물을 알킬렌디아민과 반응시켜 하기 일반식(16)의 유도체를 수득하는 단계, 인지질 또는 지질을 디카복실산 또는 디카복실산 무수물과 반응시켜 카복실 그룹을 갖는 인지질 또는 지질 유도체를 수득하는 단계 및 일반식(16)의 유도체의 1급 아미노 그룹을 인지질 또는 지질 유도체의 카복실 그룹과 반응시키는 단계를 포함하여, 제6항의 일반식(VI)의 인지질- 또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 제조하는 방법.
    상기식에서, P2는 인지질 또는 지질이며, m은 1내지 8의 정수이고, ℓ은 1내지 10의 정수이며, (1) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 하이알루론산 또는 콘드로이틴의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, R1은 NHCOCH3그룹이고, R3는 OH그룹이며, (2) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 A 또는 K, 콘드로이틴 폴리설페이트 또는 더마탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, R1은 NHCOCH3그룹이고, R3은 OSO3H 그룹이며, (3) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 설페이트 또는 케라탄 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, R1및 R3는 각각 OH 그룹이다.
  15. 하기 일반식(14)의 락톤 화합물을 알킬렌디아민과 반응시켜 하기 일반식(17)의 유도체를 수득하는 단계, 인지질 또는 지질을 디카복실산 또는 디카복실산 무수물과 반응시켜 카복실 그룹을 갖는 인지질 또는 지질 유도체를 수득하는 단계 및 일반식(17)의 유도체의 1급 아미노 그룹을 인지질 또는 지질 유도체의 카복실 그룹과 반응시키는 단계를 포함하여, 제7항의 일반식(VII)의 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 제조하는 방법.
    상기식에서, P2는 인지질 또는 지질이고, m은 1 내지 8의 정수이며, ℓ은 1 내지 10의 정수이고, (1) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 하이알루론산, 콘드로이틴, 콘드로이틴 설페이트 A, C 또는 E, 더마탄 설페이트, 헤파린 또는 헤파란 설페이트의 글리코스 아미노글리칸 잔기이거나 GAG가 환원 말단 이두론산 잔기를 제외한 더마탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하며, R3는 3-위치에 위치하고, R1은 OH 그룹이며, R2는 COOH그룹이고, R3는 OH그룹이며, (2)GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 D의 글리코스아미노글리칸 잔기이거나 GAG가 환원 말단 이두론산 잔기를 제외한 헤파린 또는 헤파란설페이트의 글리코스아미노산글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하고 , R3는 3-위치에 위치하며, R1은 OSO3H 그룹이고, R2는 COOH 그룹이며, R3는 OH 그룹이고, (3) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 K의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하며, R1는 OH 그룹이며, R2는 COOH 그룹이고, R3는 OSO3H 그룹이며, (4) GAG가 환원 말단 글루쿠론산 잔기를 제외한 콘드로이틴 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하고 , R3는 3-위치에 위치하며, R1및 R3중의 하나 이상은 OSO3H 그룹이고, 다른 하나는 OH 그룹이며, R2는 COOH 그룹이고, (5) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R1및 R3는 각각 OH 그룹이며, R2는 CH2OH 그룹이고, (6) GAG가 환원 말단 갈락토스 잔기를 제외한 케라탄 폴리 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기의 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R1및 R3는 각각 OH 그룹이며, R2는 CH2OSO3H 그룹이고, (7) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 하이알루론산 또는 콘드로이틴의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R1은 NHCOCH3그룹이며, R2는 CH2OH 그룹이고, R3는 OH 그룹이며, (8) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 콘드로이틴설페이트 A 또는 K 또는 더마탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG 는 3-위치에 위치하고, R3는 4-위치에 위치하며, R1는 NHCOCH3그룹이고, R2는 CH2OH 그룹이며, R3는 OSO3H 그룹이고, (9) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 콘드로이틴 설페이트 C 또는 D의 글로코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R1은 NHCOCH3그룹이며, R2가 CH2OSO3H 그룹이고, R3는 OH 그룹이며 (10) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 콘드로이틴설페이트 E의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하고, R3는 4-위치에 위치하며, R1은 NHCOCH3그룹이고, R2는 CH2OSO3H 그룹이며, R3는 OSO3H 그룹이고, (11) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 콘드로이틴 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 3-위치에 위치하며, R3는 4-위치에 위치하고, R1은 NHCOCH3그룹이며, R2는 CH2OH 그룹이고, R3는 OSO3H 그룹이거나, R2는 CH2OSO3H 그룹이며, R3는 OH 그룹 또는 OSO3H 그룹이고, (12) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 헤파린의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하고, R3는 3-위치에 위치하며, R1은 NHSO3HH 그룹이고, R2는CH2OSO3H 그룹이며, R3는 OH 그룹이고 (13) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 헤파란 설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하며, R3는 3-위치에 위치하고, R1은 NHCOCH3그룹 또는 NHSO3H 그룹이며, R2는 CH2OH 그룹이고, R3는 OSO3H 그룹이거나, R2는 CH2OSO3H 그룹이며, R3는 OH 그룹 또는 OSO3H 그룹이고, (14) GAG가 환원 말단 헥소스아민 잔기를 제외한 케라탄 설페이트 또는 케라탄 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 잔기인 경우, GAG는 4-위치에 위치하며, R3는 3-위치에 위치하고, R1은 NHCOCH3그룹이며, R2는 CH2OSO3H 그룹이고, R3는 OH 그룹이다.
  16. 인지질의 1급 아미노 그룹을 축합제의 존재하에, 하기 일반식 (18)의 글리코스아미노글리칸의 카복실 그룹과 반응시킴을 포함하여, 제8항의 일반식(Ⅷ)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 제조하는 방법.
    상기식에서, p1은 1급 아미노 그룹을 갖는 인지질이고, n은 글리코스아미노글리칸 중에 함유된 카복실 그룹의 수 이하인 정수이며, (1) GAG가 하이알루론산, 콘드로이틴, 콘드로이틴 설페이트 A,C 또는 E 또는 더마탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 쇄인 경우, R1및 R3는 각각 OH 그룹이고, (2) GAG가 콘드로이틴 설페이트 D의 글리코스아미노글리칸 쇄인 경우, R1은 OSO3H 그룹이며, R3는 OH 그룹이고, (3) GAG가 콘드로이틴 설페이트 K의 글리코스아미노글리칸 쇄인 경우, R1은 OH 그룹이며, R3는 OSO3H 그룹이고, (4) GAG가 콘드로이틴 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 쇄인 경우, R1및 R3중의 하나 이상은 OSO3H 그룹이며, 다른 하나는 OH 그룹이고, (5) GAG가 헤파린 또는 헤파란 설페이트의 글리코스아미노글리칸 쇄인 경우, R1은 OH그룹 또는 OSO3H 그룹이며, R3는 OH 그룹이다.
  17. 하기 일반식(18)의 글리코스아미노글리칸의 카복실 그룹을 활성화시키는 단계 및 활성화된 카복실 그룹을 인지질은 1급 아미노 그룹과 반응시키는 단계를 포함하여, 제8항의 일반식 (Ⅷ)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 제조하는 방법.
    상기식에서, P1은 1급 아미노 그룹을 갖는 인지질이고, n은 글리코스아미노글리칸 중에 함유된 카복실 그룹의 수 이하인 정수이며, (1) GAG가 하이알루론산, 콘드로이틴, 콘드로이틴 설페이트 A, C 또는 E 또는 더마탄 설페이트의 글리코스아미노글리칸 쇄인 경우, R1및 R3는 각각 OH 그룹이고 , (2) GAG가 콘드로이틴 설페이트 D의 글리코스아미노글리칸 쇄인 경우, R1은 OSO3H 그룹이며, R3는 OH 그룹이고, (3) GAG가 콘드로이틴 설페이트 K의 글리코스아미노글리칸 쇄인 경우, R1은 OH 그룹이며, R3는 OSO3H 그룹이고, (4) GAG가 콘드로이틴 폴리설페이트의 글리코스아미노글리칸 쇄인 경우, R1및 R3중의 하나 이상은 OSO3H 그룹이며, 다른 하나는 OH 그룹이고, (5) GAG가 헤파린 또는 헤파란 설페이트의 글리코스아미노글리칸 쇄인 경우, R1은 OH 그룹 또는 OSO3H 그룹이며, R3는 OH 그룹이다.
  18. 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 함유하는 전이 억제제.
  19. 제1항의 일반식(Ⅰ)의 인지질 -결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 함유하는 전이 억제제.
  20. 제2항의 일반식(Ⅱ)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 함유하는 전이 억제제.
  21. 제3항의 일반식(Ⅲ)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 함유하는 전이 억제제.
  22. 제4항의 일반식(Ⅳ)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 함유하는 전이 억제제.
  23. 제5항의 일반식(Ⅴ)의 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 함유하는 전이 억제제.
  24. 제6항의 일반식(Ⅵ)의 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 함유하는 전이 억제제.
  25. 제7항의 일반식(Ⅶ)의 인지질-또는 지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 함유하는 전이 억제제.
  26. 제8항의 일반식(Ⅷ)의 인지질-결합된 글리코스아미노글리칸 또는 이의 염을 함유하는 전이 억제제.
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